Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Генетическая стабильность производственного штамма 205 вируса клещевого энцефалита в процессе длительного пассирования

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Генетическая стабильность производственного штамма 205 вируса клещевого энцефалита в процессе длительного пассирования"

РОССИЙСКАЯ» СУДА/-'С: ЪСННАЯ БИБЛИОТЕКА

Томский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток НПО «Вир ион»

на правах рукописи

Карпова Мария Ростиславовна

УДК 576.858.25

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ СТАБИЛЬНОСТЬ ПРОИЗВОДСТВЕННОГО ШТАММА 205 ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА В ПРОЦЕССЕ ДЛИТЕЛЬНОГО ПАССИРОВАНИЯ

03.00.06 - вирусология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Томск - 1992

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В 1992 году исполнилось 55 лет с момента открытия отечественными учёными на Дальнем Востоке нового для медицины тяжёлого вирусного инфекционного заболевания - клещевого энцефалита. В настоящее время очаги этой инфекции найдены во многих географических зонах России, странах СНГ, Европы, Азии и Америки. Несмотря на интенсивность изучения данного заболевания, разработку и использование новых лечебно-профилактических и диагностических препаратов, клещевой энцефалит по-прежнему представляет серьёзную проблему для органов здравоохранения, так как уровень заболеваемости имеет постоянную тенденцию к росту.

В борьбе с клещевым энцефалитом ведущим мероприятием является эффективная вакцинопрофилактика. Выпускаемая в настоящее время инактивированная сорбированная культураль-ная вакцина готовится из 2-х штаммов: 205 (НПОВирион», г.Томск) и «Софьин» (ИПВЭ РАМН, г. Москва).

Преимуществом штамма 205 являются более выраженные иммуногенные и антигенные свойства по сравнению со штаммом Софьин, а так же высокая репродуктивная активность в клеточных культурах и организме восприимчивых животных [М.СВо-робьёваД981; ЛАВерета, М.С.Воробьёва,1990]. Штамм 205 подробно охарактеризован по ряду генетических маркёров [М.С.Воробьёва, 1981,1984; М.НРасщепкинаД984; ИДКотыхов, 1989,1990]. Вместе с тем, совершенно неизучена стабильность вакцинного штамма 205 в процессе длительного пассирования в лабораторно-произ-водственных условиях. Обладание данной информацией позволит более детально проводить обязательный ежегодный контроль штамма 205 и более длительно пассировать посевной вирус при приготовлении вакцины, что даст возможность более продолжительное время использовать штамм в качестве производственного.

Цель работы - получение детальной характеристики стабильности биологических и антигенных свойств производственного штамма 205 вируса клещевого энцефалита с помощью комплекса генетических маркёров в процессе серийного пассирования.

Основные задачи исследования. В соответствии с поставленной целью в задачи исследования входило:

1 Получить варианты производственного штамма 205 вируса КЭ, прошедшие разное количество пассажей через мозг белых мышей линии BALB/с.

2. Охарактеризовать исходную популяцию производственного штамма и его вариантов в тестах in vivo и in vitro.

3. Изучить антигенные взаимосвязи производственного штамма и его вариантов с другими штаммами вирусов, входящих в группу клещевого энцефалита.

4. Оценить чувствительность различных линий инбредных мышей и сирийских хомячков к исходному производственному штамму 205 и его пассажным вариантам.

5. На основе полученных пассажных уровней вируса приготовить экспериментальные серии вакцины и оценить ее иммуноген-ные и антигенные свойства.

Научная новизна и практическая значимость.Впервые изучена генетическая стабильность основных свойств производственного штамма 205 вируса КЭ в процессе серийного пассирования. Показана стабильность штамма по признакам терморезистентности, чувствительность к детергентам, бляшкообразованию, нейровирулентности для мышей при интрацеребральном и внут-рибрюшинном инфицировании в течении 20 внутримозговых пассажей на мышах линии BALB/c.

Изучена зависимость нейровирулентных свойств производственного штамма 205 и его пассажных уровней от генотипа лабораторных животных.

Впервые получены данные по возможности использования мышей линии A/Sn в качестве модели для изучения ВКЭ. Выявлена ста-бильностьнейровирулентных свойств производственного штамма 205 в отношении мышей линий BALB/с, A/Sn и C57BL/6 при серийном пассировании.

Исследована патогенность производственного штамма 205 и его пассажных уровней для сирийских хомячков. Установлено, что пассирование вируса повышает его вирулентные свойства при

интрацеребральном заражении животных, начиная с 10 1ШССЯЖЭ,.

Изучены патогенетические механизмы инфекции у сирийских хомячков при заражении их вариантами штамма 205. Данные результаты включены в разработанный ГНИИСК им. JLATapace-вича рабочий документ по требованиям к стандартизации и аттестации штаммов флавивирусов, предназначенных для производства вакцин и диагностических препаратов.

Проведено изучение антигенных свойств производственного штамма 205 и его вариантов при помощи моноклональных антител. Для этой цели в эксперименте были подобраны условия и компоненты для тест-системы ИФА. Обнаружены изменения связывания MICA к нескольким эпитопам белков Е и NS3 со штаммом 205 после проведения 20 последовательных пассажей в мозгу мышей.

Получена инактивированная вакцина из вариантов производственного штамма ВКЭ и дана оценки её антигенных и иммуноген-ных свойств.

Результаты исследования носят экспериментальный характер, но могут быть использованы для контроля стабильности свойств штаммов вируса, применяемых для приготовления вакцины клещевого энцефалита.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Стабильность генетических свойств штамма205 ВКЭ (mNic+, mNip+,II+,T50+,S+, увствительности к дезоксихолату натрия) в процессе длительного пассирования в мозгу мышей линии BALB/c.

2. Изменение антигенной структуры штамма 205 в результате пассирования.

3. Новые биологические модели (линия мышей A/Sn и перевиваемая линия клеток почки Macaca Rhesus LLCMK-2) для экспериментальных исследований вируса клещевого энцефалита.

4. Антигенные и иммуногенные свойства экспериментальной вакцины, приготовленной из вируса, прошедшего 20 внутри-мозговых пассажей на мышах линии BALB/c.

Апробация диссертации. Материалы диссертации доложены и обсуждены на итоговых конференциях молодых ученых Си-

бирского Государственного медицинского Университета за 1990 -1992 годы. В завершённом виде диссертационная работа апробирована на заседании Экспертного Совета Томского НИИ вакцин и сывороток НПОВирион» в июне 1992 года.

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 4 научных статьи.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, списка литературы, включающего 226 работ. Экспериментальные данные иллюстрированы 13 рисунками и 24 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы. В экспериментах были использованы 2 штамма вируса КЭ: производственный штамм 205 и тест-штамм Абсеттаров. Штаммы были любезно предоставлены музеем живых культур цеха вакцинных препаратов НПО «Вирион».

Кроме того, изучались варианты штамма 205/М10 и 205/М20, полученные в результате проведения соответственно 10 и 20 пассажей вируса через мозг мышей линии BALB/с.

Инфекционную активность вируса определяли титрованием на инбредных мышах линии BALB/c, A/Sn, C57BL/6 и сирийских хомячках по методике АКШубладзе и СЛГайдамович [1954].

Патогенетические характеристики инфекции у сирийских хомячков, заражённых вариантами штамма 205 ВКЭ, изучали в реакциях РТГА, ИФА, бляшкообразования. Данные эксперименты выполнялись на базе лаборатории арбовирусных инфекций, реккетсиозов и СПИД ГНИИСК им. ЛАТарасевича (рук. лаборатории д.м.н., профессор М.С.Воробьёва) совместно с сотрудниками лаборатории к.б.н. ШЬЛадыженской и к.б.н. М.Н.Расщепкиной.

Патоморфологическое изучение ЦНС сирийских хомячков, инфицированных вариантами штамма 205 ВКЭ, изучали путём микроскопирования парафиновых срезов, окрашенных по Нис-слю. Этот фрагмент работы выполнялся совместно с сотрудником ГНИИСК им. ЛАТарасевича к.б.н. АИЛигиринским.

Для изучения негативных колоний вируса применяли метод RDulbecco и M.Vogt[1954] в модификации для клеток СПЭВ, пред-

ложенной НБЛогиновой [1965]. Определение чувствительности вируса к детергентам и к повышенной температуре проводили по методике А.К.Шубладзе и С.ЯГайдамович [1954].

Антигенные свойства вариантов штамма 205 изучались на кроликах, иммунизированных двукратно подкожно по 1,0 мл вирусной суспензии мозга мышей. Сыворотки изучали с помощью методик РБН и ИФА.

Антигенные связи штаммов определяли в ИФА и ИФ при помощи панели моноклональных антител. МКА были получены сотрудниками НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН и НИИПВЭ РАМН и любезно предоставлены нам. Данный раздел работы выполнялся на базе лаборатории клеточной инженерии НИИ вирусологии им. ДНИвановского (зав. лабораторией ААКущ) совместно с сотрудником данного института к.м.н. Е.Э.Мельниковой.

Иммуногенные свойства опытных серий инактивированной является эффективная вакцинопрофилактика. Выпускаемая в настоящее время инактивированная сорбированная культураль-ная вакцина готовится из 2-х штаммов: 205 (НПОВирион», г.Томск) и «Софьин» (ИПВЭ РАМН, г. Москва).

Результаты и их обсуждение. Первый этап исследований был посвящён изучению стабильности основных генетических маркёров ВКЭ при серийном пассировании его через мозг мышей ВАЬВ/ с при интрацеребральном и внутрибрюшинном введениях, терморезистентности, чувствительности к детергентам. Как исходный вирус, так и пассажные варианты, обладали следующими характеристиками: 1С-ь, П+, Т50+ и были чувствительны к дезоксихо-лату натрия.

Нами была подробно изучена способность вариантов штамма 205 образования бляшки под агаром в культуре клеток СПЭВ. Все три варианта штамма 205 ВКЭ образовывали крупные, прозрачные бляшки с ровными краями. Бляшки появились на 3-4 сутки после заражения, их диаметр составил 1,5-2,0 мм. К 7-м суткам размер бляшек увеличивался и составлял 3-7 мм. Титры вируса колебались около 10,01^БОЕ/мл, что практически равнялось титрам при введении вируса в мозг мышам. Штамм 205 и его варианты обладали высокими вирулентными свойствами как для чувствительных животных, так и для культур клеток.

Для выявления предполагаемой разнородности изучаемых вариантов штамма 205 ВКЭ мы рассматривали их вирулентность по общепринятым показателям: титр вируса при интрацеребраль-ном и подкожном введении мышам, индекс инвазивности. Для этого мы выбрали три линии инбредных мышей (ВАЬВ/с, А/Бп и С57ВЬ/6).

ТАБЛИЦА 1

Зависимость стабильности нейровирулентных свойств штамма 205 от генотипа инфицированного животного

Линия масса, ШТАММ титры вируса ^ Ш50/мл индекс ин-

мышеи вфаммах в мозг подкожно вазивности

ВАЬВ/С 10-12 205 205/М10 205/М20 10,3+0,1 9,5+0,0 10,3+0,3 9,3+0,2 7,6+0,0 7,9+0,3 1,1+0,2 1,9±0,0 2,4+0,0

18-20 205 205/М10 205/М20 10,3+0,1 10,3+0,3 10,5+0,5 7,9+0,7 8,6+0,0 7,6+0,5 2,4±0,7 1,7±0,3 2,9+0,0

А/Бп 10-12 205 205/М10 205/М20 10,2+0,4 10,0+0,0 10,3+0,3 8,9+0,1 8,4+0,8 8,1+0,5 1,3+0,5 1,7+0,8 2,2+0,3

18-20 205 205/М10 205/М20 10,5 11,0+0,5 10,5+0,0 8,5+0,2 8,6±0,5 9,1+0,5 2,2 2,2±0,3 1,4+0,5

С57В1./6 10-12 205 205/М10 205/М20 10,5+0,3 10,0+0,0 10,3+0,3 8,6+0,3 8,1+0,5 8,4+0,8 1,9±0,1 1,9±0,5 1,9±0,5

18-20 205 205/М10 205/М20 10,5+0,3 10,5+1,0 10,8+0,3 8,7±0,5 8,4+0,8 8,9+0,8 1,8+0,7 2,2+0,3 1,9±0,5

Известно, что инбредные мыши, благодаря генетической внут-рилинейной однородности и межлинейной вариабельности, являются стандартной моделью и эксперименты на них отличаются большой достоверностью. Отмечена взаимосвязь генотипа животного и биологической характеристики исследуемых штаммов, в том числе и вируса клещевого энцефалита [ШШогодина с со-авт.,1964; ЭАБорсук, 1975].

Мы выбрали по-возможности линии мышей, координально отличающиеся друг от друга по ряду свойств. Кроме того, мы использовали две категории массы -10-12 и 18-20 г. Животных заражали в мозг и подкожно вариантами штамма 205 и изучали ней-ровирулентность в зависимости от линии мышей, массы тела и уровня пассажа вируса. В таблице 1 сведены полученные данные по чувствительности трёх линий к вариантам вируса.

Никаких достоверных различий между вариантами вируса мы не обнаружили, все изученные линии мышей оказались высокочувствительными как к исходному штамму, так и к его пассажным вариантам.

В последние годы широкое распространение в качестве модели для изучения нейровирулентности ВКЭ и дифференциации его штаммов получили сирийские хомячки. По данным М.Н.Расщеп-киной и М.С.Воробьёвой [1991], штамм 205 оказался практически апатогенен для сирийских хомячков, несмотря на высокую пато-генность его для белых мышей. М.С.Воробьёва [1984] связывала чувствительность сирийских хомячков с количеством предварительных пассажей вируса на мышах. Изучая ряд штаммов вируса КЭ, она обнаружила низкую патогенность для сирийских хомячков штаммов, выделенных из природы, и высокую - для штаммов, прошедших неустановленное количество пассажей в лабораторных условиях. Учитывая вышеизложенное, мы были вправе ожидать повышение нейровирулентности 205 штамма для сирийских хомячков в процессе пассирования.

Заражая серийских хомячков в мозг исходным штаммом 205 и его вариантами 205/М10 и 205/М20, мы получили достоверное (р<0,02) повышение нейровирулентности к 10 пассажу вируса и дальнейшую стабилизацию признака. Титры вируса возросли с 3,1 ±0,6 ^1Л)50/мл до 7,5±0,3 ^Ы)50/мл. В таблице 2 приведены особенности течения инфекции у сирийских хомячков в зависимости от уровня пассажа вируса.

ТАБЛИЦА2

Особенности течения инфекции у сирийских хомячков при внутримозговом заражении вариантами штамма 205

ШТАММ КЛИНИЧЕСКАЯ КАРТИНА титры вируса, ^ШБО/мл

инкуб, период продол болезни ИСХОД ЗАБОЛЕВАНИЯ

гибель хронизация выздоровление

205 7,1+1,2 1,8+0,9 75% 0% 25% 3,1+0,6

205/М10 7,9+2,0 9,5+6,1 78% 16% 6% 7,5+0,7

205/М20 7,2+0,7 7,8+7,5 80% 17% 3% 7,5+0,3

Варианты штамма 205 различались в отношении вызываемой ими клинической картины инфекции. При заражении сирийских хомячков исходным вариантом вируса клиника развивалась постепенно и начиналась с общих симптомов. Тяжёлые распространённые параличи не встречались. Продолжительность болезни составляла всего 2-3 дня, 25% заболевших хомячков выздоровели. При заражении вариантами 205/М10 и 205/М20 заболевание характеризовалось специфической картиной клещевого энцефалита. Клиника сопровождалась парезами, параличами, нарушением координации движений, заканчивалась чаще всего тетрапа-раличами и гибелью животных. Однако у части животных наблюдалась хронизация инфекционного процесса. Случаи выздоровления значительно сократились (до 3%). Продолжительность болезни превышала таковую у хомячков, заражённых исходным штаммом 205, и составляла 7-15 дней.

Известно, что в механизме нейровирулентности существенную роль играют патогенетические характеристики штаммов, которые влияют на исход инфекции. В связи с этим, нами было проведено изучение некоторых патогенетических особенностей вариантов штамма 205 в сравнении с исходным вирусом при внутри-мозговом инфицировании сирийских хомячков в дозе 6-81^ШЬБ50. Основными критериями оценки патогенеза являлись динамика и степень вирусемии и антигенемии, динамика репродукции вируса и вирусного антигена в мозгу инфицированных животных, морфо-

логические изменения в ДНС и динамика накопления антигемаг-глютининов.

Варианты штамма 205 характеризовались умеренной вирусе-мией, активной антигенемией, высоким темпом накопления вируса и вирусного антигена в мозгу и умеренной выработкой антиге-магглютининов. Кроме того, наблюдалась тенденция усиления специфических патоморфологических изменений в ЦНС к 20 пассажу вируса.

Изменение вирулентности в сторону её увеличения при пассировании всех штаммов через организм высокочувствительной модели - белых мышей, можно рассматривать как направленный селективный отбор высокопатогенных клонов популяции или адаптивный сдвиг вирусной популяции в наиболее благоприятных жизненных условиях, однако возможны и структурные изменения вируса.

В процессе изучения патогенетических механизмов инфекции мы наблюдали обратную зависимость значений вирусемии и анти-генемии. Вирус в крови обнаруживался с 1-х дней после заражне-ния и титры его постепенно снижались к 7-му дню - началу клинических проявлений и на 7-е же сутки приходится пик содержания антигена в крови, вто время как на 1-е сутки он в крови не обнаруживался.

Для изучения возможных изменений антигенной структуры вируса в процессе пассирования в мозгу мышей мы исследовали варианты при помощи моноклональных антител (МКА) в реакции иммунофлюоресценции (ИФ) и в ИФА. Дополнительной характеристикой вариантов штамма 205 являлись антигенные взаимосвязи их с другими штаммами вирусов комплекса клещевого энцефалита.

Мы использовали панель МКА к двум белкам ВКЭ: поверхностному гликопротеину Е и неструктурному белку NS3, позволившую выявить различия вариантов штамма 205 ВКЭ по нескольким эпитопам обоих белков (рис.1). При изучении связывания МКА к гликопротеину Е со штаммом 205 ВКЭ и его вариантом 205/М20 обнаружилось снижение активности по отношению к МКА G11 и В2. По данным конкурентного ИФАэти МКА реагируют с неперекрывающимися эпитопама Таким образом, можно предположить изменения в процессе пассирования 2-х различных эпитопов белка Е.

При изучении связывания МКАк неструктурному белку NS3 с вариантами 205 штамма ВКЭ мы получили снижение активности МКА 3-2 и 6-4 с вариатом 205/М20, что позволяет предположить изменения соответствующих эпитопов белка NS3 в процессе пассирования вируса.

Изучая антигенные взаимосвязи между штаммами 205 и Софь-ин обнаружились различия в связывании МКА практически со всеми изученными эпитопами обоих белков. Только 1 эпитоп гли-копротеина Е, связывающийся с МКА 9-4, оказался полностью идентичен у двух вирусов. По остальным же эпитопам белка Е и NS3 наблюдалась редукция связывания различной степени.

При сравнении антигенных структур штамма 205 ВКЭ и ТР-21 вируса Лангат были выявлены различия связывания с МКА к белку Е. Наши исследования подтвердили данные Е.Н.Заводчико-вой [1991] об отсутствии у вируса Лангат эпитопа, реагирующего с МКА 46-8.

В отношении других МКА к белку Е обнаружилась та или иная степень редукции связывания, причём с МКА G11 и В2 более, чем в 1000 раз, что связано с разной видовой принадлежностью ТР-21 и штамма 205 и может объяснить различие их генетических свойств, определяемых структурой основного иммуногена - гликопротеи-наЕ.

Таким образом, применяя достаточно полную панель MRA к белкам ВКЭ, можно дифференцировать не только видовые и штаммовые различия, но и варианты одного и того же штамма. Можно предположить, что полученные нами изменения генетических свойств вируса в процессе пассирования связаны с мутацией генов, кодирующих синтез как раз тек эпитопов, по которым были выявлены различия при помощи МКА

Изучая антигенные взаимосвязи вирусов КЭ в реакции ИФ мы обнаружили различия в репродуктивной активности штаммов на клеточной культуре почки макаки резус LLCMK-2. Через 24 часа в препаратах, инфицированных штаммом ТР-21 вируса Лангат, светилось 1-5% клеток, штаммом Софьин ВКЭ -10-15%, а при инфицировании штаммом 205 и его вариантом 205/М20 - до 90% клеток. Последнее имеет большое значение, так как штамм 205 является производственным и используется для приготовления вакцины КЭ.

ВКЭ Лангат

205 205/М20 Софьин ТР-21

46-8 □ □ □ ■

9-4 □ □ □ □

5-С-5 □ □ В В

□ а У в

в2 □ н в в

3-2 □ □ в □

13-5 □ □ □ □

6-4 □ □ в □

1-4 □ □ в □

Рис.1 Взаимодействие моноклонапьных антител с различными штаммами ВКЭ и Лангат в ИФ и ИФА

□ □

В

в

активность, идентичная штамму 205

снижение активности в 10-100 раз по сравнению со штаммом 205

снижение активности в 100-1000 раз по сравнению со штаммом 205

снижение активности в > 1000 раз по сравнению со штаммом 205

отсутствие активности

-12В заключительной части нашей работы были изучены антигенные и иммуногенные свойства вариантов штамма 205.

При двукратной иммунизации кроликов антитела обнаруживались в РБН, начиная с 14 дня после 1-ой инъекции и в ИФА - с 7 дня. Различий в динамике накопления антител между штаммами не установлено. Антитела опред елялисьдо 26 дня после 2-й инъекции (срок наблюдений) и достигали титров 1000 в РБН и 10 в ИФА

Были приготовлены экспериментальные серии вакцины из исходного штамма 205 и его варианта 205/М20 и изучены по лабораторным тестам в сравнении с комерческим препаратом. Обе вакцины показали высокие иммуногенные характеристики (индекс резистентности - 7,5; МИД50 - 0,0012) и ничем не отличались от комерчеекой серии.

ВЫВОДЫ

1. Впервые изучена стабильность производственного штамма 205 вируса клещевого энцефалита в процессе серийных пассажей через мозг мышей линии BALB/c, сформулированы представления об изменении антигенной структуры штамма 205 в процессе пассирования, установлены новые биологические модели, высокочувствительные к вирусу клещевого энцефалита.

2. При изучении диапазона изменчивости штамма 205 вируса клещевого энцефалита в условиях пассирования через мозг мышейнеустановленоизменений S-признака и показателей Nmic, Nmip, II, Т50, чувствительности к детергентам. Однако, выявлено нарастание нейровирулентности штамма для сирийских хомячков до уровня 10 пассажа с дальнейшей стабилизацией этого признака,что дало основание Государственному НИИ стандартизации и контроля биологических препаратов им. ЛАТарасевича рекомендовать этих животных для контроля стабильности флавивирусов.

3. Установлены высокая чувствительность в отношении вируса клещевого энцефалита неисследованной ранее линии мышей A/Sn, а также высокий репродуктивный потенциал вируса в культуре перевиваемой линии клеток почки Macaca RhesusLLCMK-2. Данные биологическиемоделирекоменду-

ютея для экспериментальных исследований с вирусом клещевого энцефалита.

4. Выявлены изменения антигенной структуры штамма 205 в процессе внутримозговых пассажей на мышах линии ВАЬВ/с, возможно связаные с мутацией генов, кодирующих синтез тех эпигопов, по которым были выявлены различия

5. Важным в практическом отношении итогом является получение высокоактивной, сравнимой по специфическим параметрам с производственной, экспериментальной вакцины клещевого энцефалита из вируса, прошедшего 20 пассажей, что указывает на стабильность антигенной и иммуногенной активности производственного штамма 205 вируса клещевого энцефалита.

Основные работы, опубликованные по диссертации:

1. Карпова МР.( Котыхов И.В., Огреба В.И. Чувствительность некоторых генетически чистых линий мышей к вирусу клещевого энцефалита// В кн.: Методические и методологические вопросы генетики.-Томск, 1990.-С.220-222.

2. Карпова МР. Характеристика некоторых генетических маркёров штамма 205 вируса клещевого энцефалита в ходе длительного пассирования через мозг белых мышей // Актуальные вопросы медицинской биотехнологии: Материалы конференции, посвящённой 85-летию ТомНИИВС НПО «Вири-он».-Томск,1991.-С.17-18

3. Карпова М.Р., Огреба В.И. Изучение стабильности патогенных свойств штамма 205 вируса клещевого энцефалита, пассированного длительное время в мозгу белых мышей // Там же, С.19-21

4. Карпова М.Р., Расщепкина М.Н., Воробьёва М.С. Изменение патогенных характеристик производственного штамма 205 вируса клещевого энцефалита в процессе пассирования в мозгу белых мышей //В кн: Медикобиологические аспекты нейро-1уморальной регуляциа-Томск, 1992.-0.1!'