Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Генетическая идентификация мутаций состава токоферолов в семенах подсолнечника

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Автореферат диссертации по теме "Генетическая идентификация мутаций состава токоферолов в семенах подсолнечника"

На правах рукописи

ГТеретягина Татьяна Михайловна

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ МУТАЦИЙ СОСТАВА ТОКОФЕРОЛОВ В СЕМЕНАХ ПОДСОЛНЕЧНИКА

Специальность 06.01.05 - селекция и семеноводство

003064746

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации па соискание ученой степени кандидата биологических наук

Краснодар - 2007

Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийском научно-исследовательском институте масличных культур им. B.C. Пустовойта Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИМК Россельхозакадемии) в период с 2003 - 2007гг..

Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент

Демурин Яков Николаевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

Скажем ник Михаил Александрович

кандидат биологических наук Есаулова Любовь Владимировна

Ведущая организация - Кубанский Государственный

Университет

Защита состоится 30 мая 2007 г. в 9 часов 30 минут на заседании Диссертационного совета Д 006.026.01 Всероссийского научно-исследовательского института риса по адресу: 350921, г. Краснодар, п/о Белозерное.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института риса.

Автореферат разослан 26 апреля 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

Гончарова Ю.К.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из важных проблем улучшения качества масла подсолнечника является повышение его устойчивости к окислению с целью предотвращения накопления токсичных веществ, образующихся при деструкции липидов

Разработка генетических основ селекции на увеличение окислительной стабильности масла учитывает, что этот признак определяется многими факторами различной природы К числу наиболее значимых эндогенных факторов, наряду с составом жирных кислот, относится наличие естественных антиоксидантов, препятствующих процессу свободнорадикального окисления липидов Токоферолы (витамин Е) являются группой жирорастворимых веществ, препятствующих окислению и синтезируемых растительными организмами

Увеличение содержания сильных в антиоксидантном отношении форм токоферолов селекционными методами представляет собой перспективное направление в улучшении качества масла семян подсолнечника

Известны четыре основные формы токоферолов - а, р, у и 5, в ряду которых увеличивается антиокислительная активность Обычный генотип подсолнечника характеризуется преобладающим содержанием а-формы в составе токоферолов около 95% Генетический контроль признака осуществляется двумя генами ТрИ1 и ТрИ2 Рецессивные аллели этих генов вызывают в гомозиготе повышенное содержание Р и у-токоферолов соответственно Мутантная дигомозигота приводит к повышеному накоплению 8-формы

Установлено, что мутация tphl обладает стабильным фенотипическим проявлением в различных генотипических средах, тогда как экспрессивность мутации ¡рк2 существенно зависит от генотипической среды

Различная экспрессивность мутации 1рН2 выражается в варьировании содержания у-формы в токоферольном комплексе от 20 до 95% Уменьшение экспрессивности мутации 1рИ2 приводит у двойной рецессивной гомозиготы к одновременному появлению всех четырех форм токоферолов в одном фенотипе.

Испанские ученые создали новые мутантные линии с наследственно измененным токоферольными профилями в семенах подсолнечника.

Генетическая идентификация полученных в разных странах мутаций состава токоферолов, а также изучение стабильности проявления этого признака в различных генотипических средах является актуальной селекционно-генетической задачей.

Цель и задачи исследований. Цель работы - провести генетическую идентификацию мутаций состава токоферола в семенах подсолнечника

Для этого необходимо решение следующих задач.

1 Провести функциональный и рекомбинационный тест на аллелизм известных мутаций состава токоферолов грЫ и 1рк2 с вновь обнаруженными генотипическими изменениями

2 Изучить наследование экспрессивности фк2 в различных генотипических средах.

3 Создать генетическую коллекцию константных линий с различной экспрессивностью мутаций состава токоферолов

4 Исследовать экспрессивность мутаций в различных органах растения

5. Провести тест на сцепление ¡рк! и Iрк2 с геном устойчивости к имидазолиноновым гербицидам.

6. Оценить влияние состава токоферолов на окислительную стабильность масел.

7 Разработать эффективный способ гибридизации подсолнечника

Научная новизна исследования.

1 Впервые установлена аллельность известных мутаций состава токоферолов в семенах tphl и 1рк2 вновь обнаруженным генотипическим вариациям испанских линий Т589 и Т2100 соответственно

2. На основе гибридологического анализа доказано аддитивное действие генов, контролирующих варьирующую экспрессивность мутации 1рИ2 в различных генотипических средах

3 Выраженность мутации 1рк2 не проявляется в корне, гипокотиле, листе и пыльце, тогда как варьирующая экспрессивность двойной рецессивной гомозиготы идентифицируется только в корне и гипокотиле

4 Обнаружено независимое наследование мутаций состава токоферолов и гена, контролирующего устойчивость к имидазолиноновым гербицидам.

Практическая ценность результатов.

Созданная генетическая коллекция линий подсолнечника с различным составом токоферолов, включающая аналоги селекционных линий, содержит доноры для селекции на качество масла Линия-восстановитель фертилыюсти пыльцы ВК588 с повышенным содержанием у-токоферола в семенах включена в селекционные программы создания гибридов подсолнечника как отцовская форма Установлено влияние генотипической среды на варьирующую экспрессивность мутации 1рк2, изменяющую состав токоферолов и оксистабильность масла. Разработан способ получения гибридов подсолнечника на основе фотопериодической мужской самостерильности в условиях камер и теплиц фитотрона Основные положения, выносимые на защиту.

- Характеристика генетической коллекции константных линий подсолнечника с идентифицированными мутациями состава токоферолов 1рМ и tph2,

- Аддитивный генетический контроль различной экспрессивности мутации 1рк2

Апробация работы и публикация результатов исследования.

Результаты работы докладывались на международной научной конференции молодых ученых и специалистов "Актуальные вопросы селекции, технологии и переработки масличных культур", 28-30 марта 2005 г Краснодар, ВНИИМК, на международных конференциях по подсолнечнику - X РАО 2005 (Нови Сад, Сербия), 81ЖВЮ 2003 (Севилья, Испания) и 2006 (Генгенбах, Германия), на ежегодных отчетно-плановых сессиях ВНИИМК в 2003-2006 гг Работа получила грантовую поддержку регионального конкурса РФФИ с 2006 г (№ 06-04-96633)

По материалам диссертации опубликовано шесть научных статей Кроме того, получены два авторских свидетельства на селекционное достижение и изобретение

Обьем и структура работы. Диссертация изложена на 90 страницах машинописного текста и состоит из введения, 5 глав, выводов, рекомендаций для селекционной практики, списка

литературы, 9 приложений, включает 31 таблицу и 10 рисунков. Список библиографических источников содержит 152 наименований, в том числе 54 - иностранных

Материалы и методы

Исследования проводили на центральной экспериментальной базе (ЦЭБ) ВНИИ масличных культур им ВС Пустовойта (ВНИИМК), г Краснодар в лаборатории генетики в 2003-2007 гг

Почвы опытных полей представлены сверхмощным, слабогумусным, выщелоченным черноземом характеризующегося гумусным горизонтом, достигающим 150-180 см Содержание гумуса в верхних горизонтах колеблется от 4 до 6 %, а на глубине 150-200 см-0,1-1,0%

Средняя сумма осадков за год в зоне Краснодара составляет 643 мм, в летние месяцы их выпадает около 180 мм

Температура воздуха летних месяцев в годы проведения экспериментов была оптимальна для подсолнечника и составляла 25,7°С

Материалом исследований служили формы культурного подсолнечника- сорта селекции ВНИИМК Мастер и Фаворит, мутантные инбредные линии генетической коллекции ВНИИМК с измененным составом токоферолов - ЛГ15 (tphltphl), ЛГ17 {tph2tph2), ЛГ24 {tphltphl, tph2tph2), ЛГ25 \tph2tph2, OlOl), BK&76(tphllphl, tph2tph2, OlOt), селекционные родительские формы - BK464, BK639, BK678, BK580, BK541, BK 175, ВК571, ВК653, ВК591, мутантные испанские образцы с измененным профилем токоферолов - Т589 и Т2100, линия генетической коллекции Департамента сельского хозяйства США, обладающая устойчивость к группе имидозолиноновых гербицидов - НА425

Растения выращивались как в полевых опытах на делянках при расстановке 70 х 35 см, так и в камерах фитотрона Самоопыление и гибридизацию проводили общепринятыми методами

Состав токоферолов определяли тонкослойной хроматографией с окрашиванием по методу Эммери-Энгеля, т е по продуктам, которые образуются при восстановлении токоферолами трехвалентного хлористого железа и последующего взаимодействия двухвалентного атома железа с а, а- дипиридилом

Общее содержание токоферолов в масле определяли колориметрическим способом

Оценку состава жирных кислот в масле проводили в виде их метиловых эфиров с помощью газожидкостной хроматографии Для этого использовался хроматограф Хром-5 с пламенно ионизационным детектором и интегратором

Содержание свободных жирных кислот в масле, характеризуемое величиной кислотного числа, определяли стандартным титриметрическим способом

Окисление масел проводили на приборе Rancimat 743 при 120°С, который управлялся персональным компьютером Оценочный алгоритм программы определяет точку перегиба кривой и индукционный период автоматически

Проверка соответствия экспериментальных расщеплений в F2 теоретическим моделям проводилась с помощью %2 критерия Пирсона Полученные результаты обрабатывали с использованием компьютерной программы STATISTICA 6 0 (основные описательные статистики) и программы Excel

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Тест на аллелизм мутаций состава токоферолов

Из Института полевых культур г Кордоба, Испания в 2003 г были получены две инбредные линии подсолнечника с вновь обнаруженными спонтанными моногенными рецессивными мутациями контролирующие состав токоферолов в семенах (табл 1) Фенотип этих мутаций представлен повышенным содержанием до 50% (5-формы (линия Т589) и преобладающим количеством до 100% у-формы в токоферольном комплексе (линия Т2100)

Таблица 1 - Состав токоферолов испанских мутантных линий подсолнечника Т589 и Т2100

___ЦЭБ ВНИИМК, 2003 г

Линия Состав токоферолов, %

а Р Y 5

Т589 50 50 0 0

Т2100 0 0 100 0

Таблица 2 - Состав токоферолов мутантных линий подсолнечника ВНИИМК

__ЦЭБ ВНИИМК, 2003 г.

Линия, генотип Состав токоферолов, %

а Р У 5

Норма, ТрМТрМ Трк2ТрИ2 95 2 3 0

ВК571, гркПрк! 50 50 0 0

ВК175, 1рИ21рИ2 5 0 95 0

ВК876А, (ркПрМ 1рк2грк2 0 0 60 40

Для генетической идентификации использовались линии коллекции ВНИИМК с известным генотипом по мутациям определяющих состав токоферолов ВК571 (1рМ\ ВК175 (1рк2) и ВК876А ЦрМ, (рк2) (табл 2)

Все семена р! в скрещивании линий Т589 и Т2100 с тестерами в качестве как материнской, так и отцовской форм показали соответствующий каждой линии мутантный фенотип (табл 3 и 4) Следовательно, функциональный тест на аллелизм указывает на идентичность сравниваемых рецессивных мутаций

Для двух скрещиваний Т589хВК571 и Т2100хВК175 в 2004 г получено ¥2- Отсутствие семян с нормальным фенотипом в этих семьях, т.е однородное мутантное потомство в каждой популяции без рекомбинаций, является дополнительным доказательством аллельности изучаемых генов

Таблица 3 - Тест на аллелизм мутации состава токоферолов

линии Т589

___ЦЭБ ВНИИМК, 2003-2004 гг

Поколение Число семян Фенотип Генотип

Т589 10 Мутантный, р-т ¡ркИрк! ТрИ2Трк2

ВК571 10 Мутантный, р-т 1рННрМ ТрИ2ТрИ2

10 Мутантный, Р-т 1рИИрИ1 ТрИ2Трк2

Рг 35 Мутантный, Р-т 1рИирк! ТрИ2Трк2

ВК876А 10 Мутантный, 6-т фкНрИ! 1рк21рк2

Т589 10 Мутантный, Р-т грМрМ ТрИ2ТрИ2

И, 10 Мутантный, р-т (рИЬрН! ТрЪ21рИ2

Таким образом, генетическая идентификация вновь полученных мутаций состава токоферолов в испанских линиях Т589 и Т2100 с использованием функционального в и рекомбинационного в Рч тестов показала аллельность этих наследственных изменений известным мутациям tphl и (рк2, соответственно

Таблица 4 - Тест на аллелизм мутации состава токоферолов линии Т2100

ЦЭБ ВНИИМК, 2003-2004 гг

Поколение Число семян Фенотип Генотип

Т2100 10 Мутантный, у-т ТрЫТрк! 1рк21рИ2

ВК175 10 Мутантный, у-т ТрМТрЫ 1рЬ21рЪ2

и, 10 Мутантный, у-т ТрЫТрк11рк21рЬ2

37 Мутантный, у-т ТрЫТрМ 1рН2(рИ2

ВК876А 10 Мутантный 5-т ¡рИИрМ грк21рЪ2

Т2100 10 Мутантный, у-т ТрМТрЫ 1рк2(рк2

Р| 10 Мутантный, у-т ТркЫрМ 1рЪ2грк2

2. Гибридологический анализ экспрессивности мутации Ёрк2 в различных генотипических средах

Изучение различной экспрессивности мутации 1рИ2 как отдельно, так и в сочетании с мутацией Ср/г/ в двойной гомозиготе включало отбор константных генотипов с различным количеством содержания у- токоферола и проведение гибридологического анализа

На основе индивидуального отбора с оценкой по самоопыленному потомству продолжено ведущееся в лаборатории генетики создание двух сублиний ВК175, гомозиготных по мутации ¿рЬ2 Максимальная экспрессивность этой мутации, или " + " вариант, характеризуется почти 100% содержанием у-формы в токоферольном комплексе Минимальная экспрессивность, или " -" вариант, отличается снижением содержания у-формы, в среднем, до 34% и увеличением доли а-формы до 66% (табл 5) Тем не

менее, этот фен остается мутантным, т к нормальное содержание а-токоферола превышает 95%

Таблица 5 - д Результаты дизруптивного отбора по содержанию у-токоферола у линии ВК175 ¡£>/г2

ЦЭБ ВНИИМК, 2004 г

Сублиния № корзинки Состав токоферолов, хср, (лимиты), %

а У

I 0 100

" + " вариант, 2 11 (0-40) 89 (60-100)

шах 3 12 (0-40) 88 (60-100)

4 33 (5-60) 67 (40-95)

1 46 (30-70) 54 (30-70)

" - " вариант, 2 46 (30-60) 54 (40-70)

min 3 55 (40-70) 45 (30-60)

4 66 (30-90) 34 (10-70)

Также на основе индивидуального отбора с оценкой по самоопыленному потомству продолжено создание двух сублиний ВК876, гомозиготных по мутациям tphl и tph2 одновременно Максимальная экспрессивность мутации tph2, или " + " вариант, характеризуется на фоне дирецессива, в среднем, около 72% у-формы, 28% 8-формы при отсутствии а- и ß-токоферолов Минимальная экспрессивность, или " - " вариант, обладает пониженным содержанием у- формы до 27% при увеличении доли 8 -формы до 36% и появлении а- и ß-токоферолов до 11 и 26%, соответственно Следовательно, мутантный фен с минимальной экспрессивностью содержит все четыре формы токоферолов в значительных количествах и качественно отличается от фена с максимальной экспрессивностью, содержащего только две формы -у и - 5 (табл 6)

Отобранные растения сублиний ВК175 и ВК876 с различной величиной экспрессивности мутации tph2 были включены в систему скрещиваний в камере фитотрона весной 2005 г Семена Fi от скрещивания сублиний ВК175 (min х max) и сублиний ВК876 (max х mm) получены с использованием разработанного метода гибридизации на основе фотопериодической мужской самостерильности (ФМС)

Таблица 6 - Результаты дизруптивного отбора по содержанию у-токоферола у линии ВК876 1рЬИрН2

ЦЭБ ВНИИМК, 2004 г

Сублиния № корзинки Состав токоферолов, хср, (лимиты), %

а ß У б

" + "вариант, шах 1 2 3 4 о о о о о о о о 72 (60-80) 66 (50-80) 57 (50-70) 54 (50-70) 28 (20-40) 34 (20-50) 43 (30-50) 46 (30-50)

1 4 (0-/0) 4 (0-10) 52 (50-60) 41 (30-50)

" - " вариант, 2 4 (0-15) 8 (0-50) 41 (10-50) 47 (30-60)

min 3 3 (0-10) 8 (0-60) 38 (10-50) 51 (20-60)

4 11 (0-20) 26 (0-40) 27 (10-50) 36 (30-50)

В предлагаемом способе получения гибридов Р[ выход ФМС-растений после 24-ти часового фотопериодического воздействия на самофертильные растения составил 100%,гибридность - 100% при полном отсутствии самоопыления материнских растений Причиной появления экологической ФМС является отсутствие выхода пыльников из венчика трубчатых цветков за счет нарушения роста тычиночных нитей

Сублинии ВК175 с минимальной и максимальной экспрессивностью мутации 1рН2 достоверно различались содержанием у-токоферола 26 и 69%, соответственно Наследование признака в Р, отмечено по эффекту частичного доминирования среднем значении 45%. При этом степень доминирования Ь/с1 равнялась -0,12 В Р2 наблюдалось континуальное варьирование без дискретных фенотипических классов и очень высоким СУ, равном 95%, что наряду с относительно небольшим объемом выборки не позволяет обоснованно установить число и взаимодействие сегрегирующих генов (табл 7) Кроме того, три величины - среднее значение признака в Р| 45%, в Р2 42% и арифметическое среднее между родителями (ш) 48% достоверно не различались между собой Это указывает на аддитивность действия генов, контролирующих различие в содержании у-токоферола между сублиниями ВК175

Таблица 7 - Наследование содержания у~токоферола при различной экспрессивности мутации tph2 в скрещивании сублиний

ВК175

____ ЦЭБ ВНИИМК, 2005 г

Поколение Содержание у-токоферола, % о °хср СУ,% Количество, шт

Хер лимиты корзинок семян

Р-тт 26 10-60 1,7 72 3 120

Р-тах 69 20-100 2,6 48 4 160

Р, 45 10-100 2,8 77 4 160

42 10-100 2,9 95 6 190

НСР05 8

Сублинии ВК876 с минимальной и максимальной экспрессивностью мутации также достоверно различались

содержанием у-токоферола 30 и 66%, соответственно При этом минимальная экспрессивность характеризовалась наличием всех четырех форм токоферолов, а максимальная - только двух, у и 5 В р! наблюдался частичный тип наследования при среднем значении 50%. При этом степень доминирования Ы& равнялась 0,11. В ¥2 наблюдалось континуальное варьирование без дискретных фенотипических классов и высоким СУ, равном 68%, что наряду с относительно небольшим объемом выборки не позволяет обоснованно установить число и взаимодействие сегрегирующих генов (табл 8). Кроме того, три величины - среднее значение признака в Р( 50%, в ¥2 47% и арифметическое среднее между родителями (т) 48% достоверно не различались между собой Это указывает, также как и для сублиний ВК175, на аддитивное действие генов, контролирующих различие в содержании у-токоферола между сублиниями ВК876

Таким образом, варьирующая экспрессивность мутации (рк2 в различных генотипических средах контролируется аддитивной генетической системой. Более тщательное изучение этой системы предполагает использование методов работы с количественными признаками, основанными на большом количестве измерений

Таблица 8 - Наследование содержания у--токоферола при различной экспрессивности мутации 1рк2 в дигомозиготе с мутацией tphl в скрещивании сублиний ВК876

ЦЭБ ВНИИМК, 2005 г

Поколение Содержание у- токоферола, % с °хср CV,% Количество, шт

лимиты корзинок семян

Р-шт 30 0-70 2,4 72 2 80

Р-шах 66 50-80 1,5 20 2 80

F, 50 20-80 2,0 51 4 160

F2 47 0-80 2,9 68 3 120

HCPos 7

5. Генетическая коллекция линий по составу токоферолов в

семенах

Генетическая коллекция идентифицированных аллелей признака состава токоферолов в семенах подсолнечника представлена 20 линиями различного происхождения

Семь линий характеризуются гомозиготным состоянием мутации tphl в различных генотипических средах (табл 9) Эта мутация стабильна в фенотипическом проявлении при варьировании содержания p-токоферола от 50 до 62%.

Десять линий содержат гомозиготу по мутации tph2 (табл 10). При этом содержание у-токоферола существенно варьирует от 21 до 100% в зависимости от генотипической среды Две линии I5BC5BK639íp/?2 и ВК175 представлены сублиниями с максимальной и минимальной экспрессивностью, полученными в результате дизруптивного отбора "+" и "-" вариантов в пределах каждой линии Линия подсолнечника ВК588 с измененным качеством масла семян в 2005 г была внесена в Госреестр охраняемых селекционных достижений РФ

Таблица 9 - Линии генетической коллекции подсолнечника, гомозиготные по мутации tphl

___ ЦЭБ ВНИИМК, 2005 г

Генотип Состав токо< »еролов, %

а Р У 5

ЛГ15 45 55 0 0

ВК661рМ 50 50 0 0

ВК678 50 50 0 0

ВК571 50 50 0 0

№0,(3-8 х ШГ2\)грк1 38 62 0 0

15ВС4ВК591 !рк1 48 52 0 0

Т589 50 50 0 0

НСР05 15

Таблица 10 - Линии генетической коллекции подсолнечника, гомозиготные по мутации tph2

_______ЦЭБ ВНИИМК, 2005 г

Генотип Состав токо< >еролов, %

а Р У 5

ЛГ17 10 0 90 0

ВК66/рй2 70 0 30 0

ВК588 50 0 50 0

15ВС!(Ь98 х ЛГ24)(рА2 42 0 58 0

15ВС,(73х ЛГ24)/рй2 36 0 64 0

15ВС4ВК591^й2 2 0 98 0

15ВС5ВК653|Г/>/г2 21 0 79 0

Т2110 0 0 100 0

15ВС5ВК639;р/г2 11 42 0 0 89 58 0 0

ВК175 7 79 0 0 93 21 0 0

НСР05 15

Три линии гомозиготны одновременно по обеим мутациям 1рк1 и ¡рк2 при существенной изменчивости содержания всех форм токоферолов (табл. 11). В частности, содержание у-токоферола варьирует от 18 до 77% в зависимости от генотипической среды Сублиния ВК876 с максимальной экспрессивностью мутации 1рк2 характеризуется наличием только двух форм - у и 3, тогда как сублиния с минимальной экспрессивностью - наличием четырех форм а, р, у и 5 в сопоставимых количествах

Таблица 11 - Линии генетической коллекции подсолнечника, гомозиготные по мутации 1рИ1 фк2

ЦЭБ ВНИИМК, 2005 г.

Генотип Состав токо< »еролов, %

а Р У 8

15ВС4ВК464<р/г/ 1рЪ2 15ВС4ВК591?р/г/ фЬ2 42 18 30 0 18 77 10 5

ВК8761рЫ /рЬ2 0 24 0 25 64 34 36 17

НСР05 15

Изучение проявления экспрессивности мутации 1рк2 в различных частях растения проводилось с шестью линиями

Две сублинии ВК639 существенно различались составом токоферолов в семенах Максимальная экспрессивность характеризовалась 90% содержанием у-формы, тогда как минимальная - 50% В сублиниях двойной мутантной гомозиготы ВК876 максимальное проявление соответствовало наличию только двух форм токоферолов - у и 5, а минимальное - всех четырех Линия ВК541/рй2 обладала предельной выраженностью мутации около 100% у-токоферола Состав токоферолов семян нормальной линии ВК541 представлен только а-формой

Мутация tph2 проявилась по отношению к нормальному генотипу во всех изученных частях растения - корне, гипокотиле, листьях и пыльце

Однако сублинии ВК639, гомозиготные только по мутации (рЬ2 и различающиеся составом токоферолов в семенах, не показали достоверных отличий по экспрессивности ни в одной из изученных частей растения Так разница между содержанием у-формы у сублиний с максимальной и минимальной экспрессивностью не превышала 10% при НСР05 = 15

Сублинии ВК876, гомозиготные по двум мутациям tphl и Срк2, сохранили различия в экспрессивности в корне и гипокотиле (табл 12), заключающиеся как в изменении содержания у-токоферола на количественном уровне, так и наличии или отсутствии р-формы Однако эти сублинии не показали достоверных отличий при сравнении токоферольных профилей в листьях и пыльце.

Таблица 12 - Состав токоферолов гипокотиля подсолнечника

ЦЭБ ВНИИМК, 2006 г

Генотип Состав токос )еролов, %

а Р У 6

ВК639 1рИ2 шах ВК6391рЬ2 шт 30 30 0 0 70 70 0 0

ВК8761рМ, 1рЪ2 шах ВК876 грМ, 1рЪ2 тш 0 15 0 25 60 40 40 20

ВК5411рк2 ВК541 0 100 0 0 80 0 20 0

НСР 5

Таким образом, различная величины экспрессивности мутации /р/г.2 в семенах не проявляется в корне, гипокотиле, листе и пыльце Варьирующая экспрессивность двойной рецессивной гомозиготы по мутациям tphl и 1рк2 идентифицируется в корне и гипокотиле и не определяется в листе и пыльце. Следовательно, лист и пыльца не могут быть использованы в качестве теста для отбора генотипов с максимальной экспрессивностью мутаций состава токоферолов в семенах.

Тест на сцепление мутаций 1рк1 и 1рк2 с геном устойчивости к имидазолининовым гербицидам проведен с линией НА425, обладающей гербицидоустойчивостью, контролируемой одним полудоминантным геном 1тг1 В Р2 и Р3 наблюдали независимое наследование генов состава токоферолов и гербицидоустойчивости, что позволит создать селекционный материал, сочетающий признаки качества масла с резистентностью растений к имидазолининам

Семь экспериментальных масел, полученных из семян различных генотипов подсолнечника при свободном цветении, были использованы в изучении оксистабильности на приборе Яапста! 743 при 120°С Обычный сорт Мастер являлся контролем

Для каждого масла было оценено четыре параметра- состав жирных кислот и состав токоферолов, общее содержение токоферолов, кислотное число и оксистабильность.

Семь линий характеризовались повышенным содержанием олеиновой кислоты более 60%, три из которых были высокоолеиновыми выше 85% Содержание у-токоферола варьировало от отсутствия у контроля до 87% у ВК54Ш/, 1рИ2

Общее содержание токоферолов в масле изменялось от 883 до 1002 мг/кг, а кислотное число - от 0,4 до 1,9 мг/г

Оксистабильность изученных масел, измеряемая длительностью индукционного периода, существенно варьировала от 2,9 часа у сорта Мастер до 31,1 у линии ВК54 Ю1,1рк2 (рис )

Три высокоолеиновых масла показали наивысшее значение оксистабильности, что согласуется с многочисленными данными других авторов о первостепенной роли степени ненасыщенности жирных кислот в скорости их окисления. Высокоолеиновое масло линии ВК54Ю/, относящееся как и контрольное к а-токоферольному типу, обладало в 7 раз увеличенной оксиситабильностью по отношению к линолевому сорту Мастер Высокоолеиновые масла линий ВК%160ЦрИ],1рк2тах и ЪК54\01,1рЬ2, относящиеся к у-токоферольному типу, увеличили индукционный период в 10 и 11 раз (рис )

Возрастание доли у-токоферола с 50 до 65% на повышенно олеиновом фоне у сублиний ВК63901,фИ2тт и ВК.639ОЦрИ2тах соответственно увеличило оксистабильность с 6,0 до 7,7 часа, т е. в 1,3 раза Тогда как возрастание доли у-токоферола с 13 до 35 и 87% на высокоолеиновом фоне у линий ВК54Ш/, ВК&760Црк1 ,(рИ2тах и ВК54\OUtph2 соответственно увеличило индукционный период с 19,0 до 28,8 и 31,1 часа, те в 1,5 и 1,6 раза.

Мастер ВК639 01 ВК876 01 ВК639 01 ВК54Ю1 ВК876 О! ВК54Ю1 1рИ2 гтап 1рЬ11рИ2 1рИ2 тах 1рИИрЬ2 1рИ2

тт тах

Рисунок - Окистабильность экспериментальных масел различных генотипов подсолнечника, Иапсн"па1-тест, 120°С

Таким образом, увеличение содержания у-токоферола с 50 до 65% на среднеолеиновом фоне повысило индукционный период в 1,3, а с 13 до 87% на высокоолеиновом фоне - в 1,6 раза Следовательно, варьирующая экспрессивность мутации ¡£>Й2, приводящая к различиям в накоплении у-токоферола, должна учитываться в селекции на качество масла

ВЫВОДЫ

1. Функциональный и рекомбинационный тест показал аллельность известных мутаций состава токоферолов tphl и (рИ2 вновь обнаруженным в испанских линий Т589 и Т2100, соответственно

2. На основе внутрилинейного дизруптивного отбора "+" и "-" вариантов созданы константные сублинии с максимальной и минимальной экспрессивностью мутации tph2 в семенах на генотипической среде ВК175 (рИ2 и ВК876 tphl (рк2

3 Максимальная экспрессивность мутации ¡?р/г2 в генотипе ВК175 сопровождается накоплением 93% у-формы в составе токоферолов, а минимальная - 21%. Сублинии ВК876 с минимальной и максимальной экспрессивностью мутации 1рИ2 также достоверно различались содержанием у-токоферола 30 и 66%, соответственно При этом минимальная экспрессивность характеризовалась наличием всех четырех форм токоферолов, а максимальная - только двух - у и 5.

4 Гибридологический анализ при скрещивании полученных сублиний с максимальной и минимальной выраженностью признака между собой показал, что наследование различной экспрессивности мутации ¿рк2 в Р| носит частичный тип наследования. В Р2 наблюдалось континуальное варьирование без дискретных фенотипических классов. Среднее значение признака в Рь в Рг и арифметическое среднее между родителями достоверно не различались между собой Это указывает на аддитивное действие генов, контролирующих различие в содержании у-токоферола между соответствующими сублиниями для каждого из генотипов ВК175 и ВК876

5. Создана генетическая коллекция подсолнечника по признаку состава токоферолов, состоящая из 20 линий

различного происхождения, включающая гомозиготы по мутациям ¡£/г/ (7 образцов,), 1рк2 (10) и дигомозиготу (3) Содержание р-токоферола для линий с мутацией /р/г/ относительно стабильно и изменяется от 50 до 62% Содержание у-токоферола у генотипов с различной экспрессивностью мутации ¡рк2 в разных генотипических средах варьирует более существенно от 18 до 100%.

6 Селекционная линия-восстановитель фертильности пыльцы ВК588 характеризуется повышенным содержанием около 50% у-формы в составе токоферолов.

7 Различная экспрессивность мутации 1рк2 в семенах не проявляется в корне, гипокотиле, листе и пыльце. Варьирующая экспрессивность двойной рецессивной гомозиготы идентифицируется только в корне и гипокотиле по увеличенному содержанию у-токоферола и наличию Р-формы. Следовательно, лист и пыльца не могут быть использованы в качестве теста для отбора генотипов с максимальной экспрессивностью мутаций состава токоферолов в семенах

8 Обнаружено независимое наследование генов состава токоферолов и гена 1тг1, контролирующего устойчивость к имидазолининовым гербицидам В Р3 отобраны рекомбинантные генотипы, сочетающие признаки измененного состава токоферолов и гербицидоустойчивости

9 Изучение оксистабильности экспериментальных масел семян различных генотипов показало, что увеличение содержания у-токоферола с 50 до 65% на среднеолеиновом фоне повысило индукционный период в 1,3, а увеличение его содержания с 13 до 87% на высокоолеиновом фоне - в 1,6 раза При этом высокоолеиновое у-токоферольное масло обладало увеличенной в 11 раз оксистабильностью по отношению к нормальному

10 Использование фотопериодической мужской самостерильности позволяет получать гибриды подсолнечника в условиях 24 светового дня во время цветения в камере фитотрона

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ

1 Использовать генетическую коллекцию линий подсолнечника, включая аналоги селекционных линий, с различным составом токоферолов в качестве доноров в селекции на качество масла. 2. Рекомендуем использовать запатентованную линию-восстановитель фертильности пыльцы ВК588 с повышенным содержанием у-токоферола в семенах в селекционных программах при создании гибридов подсолнечника как отцовскую форму.

3 Учитывать влияние генотипической среды на варьирующую экспрессивность мутации /£>/г2, изменяющую состав токоферолов и оксистабильность масла

4 Использовать запатентованный способ получения гибридов подсолнечника на основе фотопериодической мужской самостерильности в условиях камер и теплиц фитотрона

Основные положения диссертации изложены в следующих

работах:

1 Демурин Я.Н., Гронин В В, Перетягана Т М Проблема сохранения и изучения биологического разнообразия на генетическом уровне у культурного подсолнечника - Сборник материалов Международной научно-практической конференции «Приоритет России XXI века- от биосферы и техносферы к ноосфере», Пенза, 2003-С 55-57

2 Перетягана Т М Тест на аллелизм мутаций состава токоферолов в семенах подсолнечника // Сборник докладов 3-й международной конференции молодых ученых и специалистов "Актуальные вопросы селекции , технологии и переработки масличных культур" 28-30 марта 2005 г, Краснодар, ВНИИМК, 2005 -С.47-49

3. Демурин Я Н, Перетягина Т М, Борисенко О М Фотопериодическая мужская самостерильность в гибридизации подсолнечника // Масличные культуры (НТБ ВНИИМК), Краснодар.- 2005, Вып №2 (133) - С 12-18 (издание реферируемое)

4 Патент РФ на селекционное достижение №2845 Подсолнечник ВК588, заявка №9553110 с датой приоритета 21 04 2004, зарегистрировано 28 09 2005 (АС №41439, заявка №9553110 с датой приоритета 21.04 2004, авторы Перетягина Т.М, Бочкарев H И , Бочковой АД и др )

5 Демурин Я Н., Перетягина Т M, Борисенко О.М , Ветер И И Способ получения гибридов растений Заявка на изобретение №2005135841, дата приоритета 17 11 2005, решение о выдаче патента 9 01 2007

6 DemunnYa N , Efimenko S G., Peretyagma T M Genetic identification of tocopherol mutations in sunflower // Helta - 2004 -V27, №40.-P.l 13-116

7 Demurin Ya N , Borisenko О M , Peretyagma T M, Perstenyeva A A Gene linkage test for Imr with Ol, Tphl and Tph2 mutations in sunflower // Helia - 2006 - V 29, №44 - P 41-46

8 Demurin YaN, Peretyagma TM Expressivity of tocopherol mutations in sunflower // Helia - 2006 - V29 - №45 - P

ПЕРЕТЯГИНА Татьяна Михайловна

ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ МУТАЦИЙ СОСТАВА ТОКОФЕРОЛОВ В СЕМЕНАХ ПОДСОЛНЕЧНИКА

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 23 04 07 Формат 60x84¡y,6 Уел печ л. 1,39 Бумага Maestro Печать трафаретная Тираж 110 экз Заказ № 7118

Тираж изготовлен в типографии ООО «Просвещение-Юг»

с оригинал-макета заказчика 350059 г Краснодар, ул Селезнева, 2 Тел/факс: 239-68-31

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Перетягина, Татьяна Михайловна

ВВЕДЕНИЕ.

1 СОСТАВ ТОКОФЕРОЛОВ СЕМЯН КАК СЕЛЕКЦИОННЫЙ ПРИЗНАК обзор литературы)

1.1 Биохимия токоферолов.

1.2 Генетика токоферолов у растений.

1.3 Селекционное использование мутаций состава токоферолов у подсолнечника.

1.4 Способы гибридизации подсолнечника.

2 УСЛОВИЯ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3 ТЕСТ НА АЛЛЕЛИЗМ МУТАЦИЙ СОСТАВА ТОКОФЕРОЛОВ.

4 ГИБРИДОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЭКСПРЕССИВНОСТИ МУТАЦИИ 1рк2 В РАЗЛИЧНЫХ ГЕНОТИПИЧЕСКИХ СРЕДАХ

4.1 Характеристика родительских форм.

4.2 Получение гибридов Б].

4.3 Наследование состава токоферолов в р! и Р2.

5 ГЕНЕТИЧЕСКАЯ КОЛЛЕКЦИЯ ЛИНИЙ ПО СОСТАВУ ТОКОФЕРОЛОВ В СЕМЕНАХ

5.1 Константные линии с различной экспрессивностью мутаций состава токоферолов.

5.2 Идентификация экспрессивности мутации (рк2 в различных частях растения.

5.3 Тест на сцепление мутаций 1рк1 и 1рк2 с геном устойчивости к имидазолиноновым гербицидам.

5.4 Окислительная стабильность экспериментальных масел.

ВЫВОДЫ.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Генетическая идентификация мутаций состава токоферолов в семенах подсолнечника"

Одной из важных проблем улучшения качества масла является повышение его устойчивости к окислению с целью предотвращения накопления токсичных продуктов прогоркания при его хранении и использовании.

Разработка генетических основ селекции на увеличение окислительной стабильности масла учитывает, что этот признак определяется многими факторами различной природы. К числу наиболее значимых эндогенных факторов, наряду с составом жирных кислот, относится наличие естественных антиоксидантов, препятствующих процессу свободнорадикального окисления липидов. Токоферолы (витамин Е) являются группой жирорастворимых веществ, препятствующих окислению и синтезируемых исключительно растительными организмами.

Увеличение содержания сильных в антиоксидантном отношении форм токоферолов селекционными методами представляет собой перспективное направление в улучшении качества масла семян подсолнечника.

Генетическая идентификация вновь полученных мутаций состава токоферолов, а также изучение стабильности проявления этого признака в различных генотипических средах является актуальной селекционной задачей.

Цель и задачи исследований. Цель работы - провести генетическую идентификацию мутаций состава токоферола в семенах подсолнечника. Для этого необходимо решение следующих задач:

1. Провести функциональный и рекомбинационный тест на аллелизм известных мутаций состава токоферолов tphl и ¡рк2 с вновь обнаруженными генотипическими изменениями.

2. Изучить наследование степени экспрессивности 1рк2 в различных генотипических средах.

3. Создать генетическую коллекцию константных линий с различной степенью экспрессивности мутаций состава токоферолов.

4. Исследовать экспрессивность мутаций в различных органах растения.

5. Провести тест на сцепление /рк1 и 1рИ2 с геном устойчивости к имидазолиноновым гербицидам.

6. Оценить влияние состава токоферолов на окислительную стабильность масел.

7. Разработать эффективный способ гибридизации подсолнечника. Научная новизна исследования.

1. Впервые установлена аллельность известных мутаций состава токоферолов в семенах #?/?./ и 1рН2 вновь обнаруженным генотипическим вариациям испанских линий Т589 и Т2100 соответственно.

2. На основе гибридологического анализа доказано аддитивное действие генов, контролирующих варьирующую экспрессивность мутации 1рк2 в различных генотипических средах.

3. Степень выраженности мутации tph2 не проявляется в корне, гипокотиле, листе и пыльце, тогда как варьирующая экспрессивность двойной рецессивной гомозиготы идентифицируется только в корне и гипокотиле.

4. Обнаружено независимое наследование мутаций состава токоферолов и гена, контролирующего устойчивость к имидазолиноновым гербицидам. Практическая ценность результатов.

Созданная генетическая коллекция образцов подсолнечника с различным составом токоферолов, включающая аналоги селекционных линий, содержит доноры для селекции на качество масла. Линия-восстановитель фертильности пыльцы ВК588 с повышенным содержанием у-токоферола в семенах включена в селекционные программы создания гибридов подсолнечника как отцовская форма. Установлено влияние генотипической среды на варьирующую экспрессивность мутации изменяющую состав токоферолов и оксистабильность масла. Разработан способ получения гибридов подсолнечника на основе фотопериодической мужской самостерильности в условиях камер и теплиц фитотрона.

Основные положения, выносимые на защиту.

Характеристика генетической коллекции константных линий подсолнечника с идентифицированными мутациями состава токоферолов tphl и 1рИ2.

Аддитивный генетический контроль различной экспрессивности мутации 1рк2.

Апробация работы и публикация результатов исследования.

Результаты работы докладывались на международной научной конференции молодых ученых и специалистов "Актуальные вопросы селекции, технологии и переработки масличных культур", 28-30 марта 2005 г. Краснодар, ВНИИМК; на международных конференциях по подсолнечнику - X РАО 2005 (Нови Сад, Сербия), 8ШВЮ 2003 (Севилья, Испания) и 2006 (Генгенбах, Германия); на ежегодных отчетно-плановых сессиях ВНИИМК в 2003-2006 гг. Работа получила грантовую поддержку регионального конкурса РФФИ с 2006 г. (№ 06-04-96633).

По материалам диссертации опубликовано шесть научных статей. Кроме того, получены два авторских свидетельства: на селекционное достижение и изобретение.

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Перетягина, Татьяна Михайловна

выводы

1. Функциональный и рекомбинационный тест показал аллельность известных мутаций состава токоферолов /рЛУ и tph2 вновь обнаруженным мутациям испанских линий Т589 и Т2100, соответственно.

2. На основе внутрилинейного дизруптивного отбора "+" и "-" вариантов созданы константные сублинии с максимальной и минимальной экспрессивностью мутации /р/?2 в семенах на генотипической среде ВК175 грк2 и ВК876 1рИ11рк2.

3. Максимальная экспрессивность мутации /рк2 в генотипе ВК175 сопровождается накоплением 93% у-формы в составе токоферолов, а минимальная - 21%. Сублинии ВК876 с минимальной и максимальной экспрессивностью мутации 1рИ2 также достоверно различались содержанием у-токоферола 30 и 66%, соответственно. При этом минимальная экспрессивность характеризовалась наличием всех четырех форм токоферолов, а максимальная - только двух - у и 5.

4. Гибридологический анализ при скрещивании полученных сублиний с максимальной и минимальной выраженностью признака между собой показал, что наследование различной экспрессивности мутации 1рк2 в Б] эффект частичного доминирования. В ¥2 наблюдалось континуальное варьирование без дискретных фенотипических классов. Среднее значение признака в Рь в Бг и арифметическое среднее между родителями достоверно не различались между собой, что указывает на аддитивное действие генов, контролирующих различие в содержании у-токоферола между соответствующими сублиниями для каждого из генотипов ВК175 и ВК876.

5. Создана генетическая коллекция подсолнечника по признаку состава токоферолов, состоящая из 20 линий различного происхождения, включающая гомозиготы по мутациям 1рк1 (7 образцов), tph2 (10) и дигомозиготу (3). Содержание ß-токоферола для линий с мутацией tphl относительно стабильно и изменяется от 50 до 62%. Содержание у-токоферола у генотипов с различной экспрессивностью мутации tph2 в различных генотипических средах варьирует более существенно от 18 до 100%.

Селекционная линия-восстановитель фертильности пыльцы ВК588 характеризуется повышенным содержанием около 50% у-формы в составе токоферолов.

Различная экспрессивность мутации tph2 в семенах не проявляется в корне, гипокотиле, листе и пыльце. Варьирующая экспрессивность двойной рецессивной гомозиготы идентифицируется только в корне и гипокотиле по увеличенному содержанию у-токоферола и наличию ß-формы. Следовательно, лист и пыльца не могут быть использованы для отбора генотипов с максимальной экспрессивностью мутаций состава токоферолов в семенах.

Обнаружено независимое наследование генов состава токоферолов и гена Imrl, контролирующего устойчивость к имидазолининовым гербицидам. В F3 отобраны рекомбинантные генотипы, сочетающие признаки измененного состава токоферолов и гербицидоустойчивости.

Изучение оксистабильности экспериментальных масел семян различных генотипов показало, что увеличение количества у-токоферола с 50 до 65% на среднеолеиновом фоне повысило индукционный период в 1,3, а увеличение его содержания с 13 до 87% на высокоолеиновом фоне - в 1,6 раза. При этом высокоолеиновое у-токоферольное масло обладало увеличенной в 11 раз оксистабильностью по отношению к нормальному.

Использование фотопериодической мужской самостерильности позволяет получать гибриды подсолнечника в условиях 24 светового дня во время цветения в камере фитотрона.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ

Использовать генетическую коллекцию образцов подсолнечника, включая аналоги селекционных линий, с различным составом токоферолов в качестве доноров в селекции на качество масла.

Включить запатентованную линию-восстановитель фертильности пыльцы ВК588 с повышенным содержанием у-токоферола в семенах в селекционные программы создания гибридов подсолнечника как отцовскую форму.

Учитывать влияние генотипической среды на варьирующую экспрессивность мутации tph2, изменяющую состав токоферолов и оксистабильность масла.

Использовать запатентованный способ получения гибридов подсолнечника на основе фотопериодической мужской самостерильности в условиях камер и теплиц фитотрона.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Перетягина, Татьяна Михайловна, Краснодар

1. Абрамова, Ж.И. Человек и противоокислительные вещества. / Ж.И. Абрамова, Г.И. Оксенгендлер // Л.: Наука, 1985. -230 с.

2. Анащенко A.B. Изучение мужской стерильности у подсолнечника.-Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции.- Л., ВИР, 1972, т.46, вып.З.- С.120-131.

3. Анащенко A.B. Мужская стерильность модификационного характера у подсолнечника.- Сельскохозяйственная биология,- 1968.- том III, №4.- С.544-549.

4. Аристархова, С.А. К вопросу об ингибирующей активности токоферола / С.А Аристархова, Н.Г. Храпова // Биоантиокислители и регуляция окислительных процессов в клетке. М.: 1972. - С. 9.

5. Березовский, В.М. Химия витаминов./ В.М Березовский; М.: Пищепромиздат, 1973.- 632 с.

6. Бочкарев, Н.И. Мужская стерильность/ Н.И. Бочкарев, Л.Г. Цухло // Биология, селекция и возделывание подсолнечника. -М.: Агропромиздат, 1991. -С. 49-52.

7. Бриггс, Ф. Научные основы селекции растений / Ф.Бриггс, П.Ноулз, -М.: Колос, 1972. -166-17 с.

8. Бурлакова, Е.Б. Роль витамина в регуляции интенсивности окислительных процессов в липидах мембран /Е.Б. Буралакова, Н.Г.Храпова // Актуальные проблемы витаминологии.М.: -1978. Т. 1. - С 27 -29.

9. Вендт, В.П. О специфичности некоторых колориметрических методов определения витамина Е / В.П. Вендт, И.Г. Дрокова // Витамины. -Киев, 1958. -Т.-З. С. 75-85.

10. Вудс, Р. Биохимическая генетика / Р.Вудс; М.: Мир, 1982. -128 с.

11. Гвоздева С.Н. Особенности роста и формирования продуктивности подсолнечника в условиях регулируемой внешней среды. Дис. на соиск. учен, степ, канд.с/х наук, Краснодар, 1980.- 141с.

12. Гольденберг, В.И. Окислительное старение жировых основ и механизм действия антиоксидантов / В.И. Гольденберг, А.И.Тенцова, Е.К. Пилько//Химико-фармацевтический журнал. 1978. - № 12, С. 121-125.

13. Горбачева, Р.Г. Изучение токоферолов семян конопли различных экологических типов / Р.Г. Горбачева // Бюл. ВИР. 1976. - №59. - С. 43-46.

14. Гринберг, Ф.Л. Эфиры DL-a-токоферола / Ф.Л.Гринферг, Г.М. Лущевская, Б.Г.Савинов // Витамины. Киев: 1958. С.50-59.

15. Гудвин, Т. Введение в биохимию растений./ Т.Гудвин, Э.Мерсер -Т.2- М.: Мир, 1986.-312 с.

16. Гундаев, А.И. Основные принципы селекции подсолнечника / А.И.Гундаев; Генетические основы селекции растений. М.: Наука, 1971. - С. 417-465.

17. Дарвин Ч. Действие перекрестного опыления и самоопыления в растительном мире.- М.-Л.: ОГИЗ-СЕЛЬХОЗГИЗ, 1939.- 339с.

18. Демурин Я.Н., Бочковой А.Д., Матиенко А.Ф., Ткаченко П.И., Савченко В.Д., Попов П.С. Гибрид подсолнечника Краснодарский 917 // Авторское свидетельство № 6237.- 1994.- заявка № 9301453 с датой приоритета 26.11.92.

19. Демурин, Я.Н. Влияние мутаций по составу жирных кислот и токоферолов на качество масла семян подсолнечника / Я.Н.Демурин // Наука Кубани, Краснодар.- 2002, №1.- С. 53-58.

20. Демурин, Я.Н. Генетический анализ и селекционное использование признаков состава жирных кислот и токоферолов в семенах подсолнечника / Демурин Яков Николаевич: автореф. дис. . доктора биол. наук Санкт-Перербург, 1999.

21. Демурин, Я.Н. Генетический анализ состава токоферолов в семенах подсолнечника / Я.Н.Демурин // Науч. технич.бюл. ВИР/ Ленинград, 1986.-Вып.165.- С.49-51.

22. Демурин, Я.Н. Генетический анализ состава токоферолов в семенах подсолнечника / Я.Н.Демурин // Тезисы докладов 2-го Всесоюзного совещания по Генетике развития/ Ташкент, 1990.- Т.1.- С.48-49.

23. Демурин, Я.Н., Попов П.С., Левуцкая А.Н. Устойчивость масла к гидролитическому распаду в семенах подсолнечника/ Я.Н. Демурин., П.С. Попов, А.Н. Левуцкая// Наука Кубани, Краснодар.- 2003, №1.- С. 83-87.

24. Демурин, Я.Н. Исследования по генетике подсолнечника./ Я.Н.Демурин, Н.И.Бочкарев // История научных исследований во ВНИИМКе за 90 лет.- «Сельские зори». Краснодар, 2003.- С. 193-198.

25. Демурин, Я.Н. Параметры фенотипического варьирования общего содержания токоферолов в отдельных семенах подсолнечника / Я.Н.Демурин // Науч. технич.бюл. ВНИИМК/ Краснодар.- 1984.-Вып.84.- С.51-54.

26. Демурин, Я.Н. Состав жирных кислот и токоферолов в каллусе из семян мутантных линий подсолнечника / Я.Н.Демурин, П.С.Попов, Т.С.Антонова, У.К.Упадхьяя. // Науч. технич.бюл. ВНИИМК/ Краснодар.-1990.-Вып.4.- С.26-29.

27. Демурин, Я.Н. Способ получения изогенной линии по рецессивному признаку семени у растений / Я.Н.Демурин, Н.И.Бочкарев // Авторское свидетельство № 1431094,- 1988

28. Демурин, Я.Н. Фенотипическая изменчивость и корреляция содержания токоферолов с некоторыми биохимическими признаками семян подсолнечника / Я.Н.Демурин // Науч. технич.бюл. ВНИИМК/ Краснодар.-1986.-Вып.И (93).- С.21-24.

29. Демурин,Я.Н. Взаимодействие генов, контролирующих состав токоферолов семян у подсолнечника / Я.Н.Демурин, П.С.Попов, У.К.Упадхьяя. // Растениеводство, генетика и селекция технических культур. ВИР, Ленинград.-1991.- С.101-104.

30. Джуемин Х.Е. Способ получения гибридов растений. Патент РФ № 2210884 публ. 27.08.2003 по заявке № 97120996/13 от 20.05.1996.

31. Доспехов, Б.А Методика полевого опыта / Б.А.Доспехов //М.: Колос, 1968.-224 с.

32. Дублянская, Н.Ф. Содержание линолевой кислоты и токоферолов в маслах различных сортов подсолнечника / Н.Ф. Дублянская // Вест, сельскохоз. науки. 1960. - №6 - С.123-126.

33. Дублянская, Н.Ф. Состав масла селекционных сортов подсолнечника / Н.Ф. Дублянская // Кр. Отчет НИР ВНИИЖ за 1961 1962 г.г.- Краснодар. 1964. -С 26 - 34 с.

34. Дублянская, Н.Ф.Химический состав подсолнечника / Н.Ф. Дублянская // Подсолнечник. М.: - 1975. - 40-50 с.

35. Дьяков А.Б. Адаптация к климату и почвам.- В кн.: Биология, селекция и возделывание подсолнечника.- М.: Агропромиздат, 1991.- С. 16-18.

36. Евстеева, Н.М. Окислительная стабильность коммерческих растительных масел / Н.М. Евстеева // Масложировая промышленность. 2006.- №5. С. 14-17.

37. Ерин, А.Н. О локализации а-токоферола в хлоропластах // А.Н. Ерин, А.Я. Кормановский, И.И. Иванов // Биофизика. 1984. - Т.29. №2. -С.327-328.

38. Ефименко, С.Г. Изменчивость содержания у- токоферола в семенах аналогов линии подсолнечника по гену tph2 / С.Г. Ефименко // Науч.-технич. бюл. ВНИИМК/Краснодар.- 1999.-Вып.120,- С.8-10.

39. Ефименко, С.Г. Использование мутаций состава токоферолов и жирных кислот в селекции подсолнечника на качество масла / Ефименко Сергей Григорьевич: автореф. дис. . канд. биол. наук. Краснодар, 2003. -19с.

40. Ефименко, С.Г. Мутационный анализ и селекционное использование особенностей биосинтеза токоферола у подсолнечника / С.Г.

41. Ефименко, И.С.Образцов //Научно-технический бюл. ВНИИМК / Краснодар, 2001. вып.124.-С. 25-30.

42. Иванов, И.И. Витамин Е, биологическая роль в связи с антиоксидантным свойствами / И.И.Иванов, М.Н. Мерзляк, Б.Н.Тарусов // Сб. Биоантиокислители. Труды МОИП. М: Наука, 1975. - С. 30-52.

43. Иванов, H.H. Биохимические основы селекции растений / Н.Н Иванов // Теоретические основы селекции растений. M.-JL: 1935.- Т.1.С. 9911016.

44. Клюка, В.И. Технология репродуцирования подсолнечника в вегетационных теплицах для ускорения селекции / В.И.Клюка, Т.Е. Гусева, С.Н. Гвоздева // Селекция и семеноводство масличных культур / Сб. науч. работ. Краснодар, 1980. -С 74-78.

45. Колотникова, А.И. Витамины Е / И.И. Колотникова, Е.П.Глушанков // Витамины: Химия, биохимия и физиологическая роль. Л.: ЛГУ, 1976. С. 5466.

46. Кретович, В.Л. Биохимия растений / В.Л.Кретович // М.: Высшая школа, 1980.-445 с.

47. Кричман, Е.С. Антиоксиданты для масложировой промышленности/ Е.С. Кричман// Масложировая промышленность. 2006. -№3,-С 26-28.

48. Кудряшов, Б.А. Биологические основы учения о витаминах / Б.А. Кудряшов // М. Советская наука, 1948. - 543 с.

49. Кудряшов, Б.А.Витами Е и механизм его действия / Б.А. Кудряшов // МГУ, 1940. Вып. 32. - С. 39-44.

50. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф.Лакин М.: Высшая школа, 1980. -249 с.

51. Лебедев С.И. Физиология растений.- М.: Изд-во Колос, 1982,- 463с.

52. Лисицын, А.Н. Особенности технологических свойств отечественных сортов и гибридов семян подсолнечника современной селекции

53. А.Н. Лисицын, С.Ф.Быкова, Е.К.Давиденко, и др. // Масложировая промышленность 2006. - №4. - С 8-10.

54. Лисицын, А.Н. Подсолнечник: структурно морфологическая оценка сортов и гибридов/ А.Н. Лисицын, С.Ф.Быкова, Е.К.Давиденко, и др. // Масложировая промышленность. - 2006. №2 - С 8-10.

55. Лобачев, Ю.В. Создание генетической коллекции подсолнечника / Ю.В. Лобачев. В.Ф. Пимахин, В.М. Лекарев и др. // Репродуктивная биология. Генетика и селекция. Саратов, 2002. - С. 102-106.

56. Лобашов, М.Е. Генетика / М.Е.Лобашов// Л.: Изд. ЛГУ - 1967.457 с.

57. Мазер, К. Биометрическая генетика / К.Мазер, Дж.Джинкс, М.: Мир, 1985. 87-94 с.

58. Малышева, А.Г. Устойчивость масла различных сортов к окислению/ А.Г.Малышева // Сборник работ по масличным культурам. -Майкоп. -1966. Вып.№4. - С. 52-54

59. Маркелова, С.Н. Антиоксидантные комплексы семян подсолнечника / С.Н. Маркелова //Науч.-технич. бюллетень. ВНИИМК. -Краснодар, 2001. Вып. 124 - С. 181-183.

60. Морозова, Т.Б. О роли а-токоферола в процессе окисления подсолнечного масла / Т.Б. Морозова // Труды ВНИИЖ. Л.: 1977. - Вып. XXXIII.-С. 31-35.

61. Надиров, Н.К. Токоферолы и их использование в медицине и сельском хозяйстве / Н.К.Надиров // М.: Наука, 1991. - 336 с.

62. Нечаев, А.П. Липиды зерна /А.П.Нечаев, ЖЛ.Сандлер // М.: Колос. -1975.- 160 с.

63. Никитчин, Д.И. Общая химия и биохимия семян подсолнечника / Д.И. Никитчин // Подсолнечник. Пологи. - 2002. - С 95.

64. Орлова, H.H. Генетический анализ / Н.Н.Орлова, Москва, 1991. -318 с.

65. Партешко, В.Г. Исследование свободнорадикального окисления токоферола / В.Г. Партешко, А.Г. Старенький // ДАН СССР, 1979. Т. 245, №4. -С. 855-857.

66. Перестова, Т.С. Строение растений / Т.С. Перестова, Л.Г.Цухло// Биология селекция и возделывание подсолнечника , под ред.Пенчукова. -М.: Агропромиздат. -1991. С. 5-7.

67. Плотников В.А. Способ размножения линий подсолнечника с ядерной мужской стерильностью. A.C. СССР №1529484 по заявке № 4395259/30-13 от 20.01.88.

68. Попов П.С. О наследуемости витамина Е у подсолнечника / П.С. Попов, В.Н.Кожевникова // Селекция и семеноводство. 1982. -№10. -С.22-24.

69. Попов, П.С. Генетика признаков качества масла / П.С.Попов, Я.Н.Демурин // Биология, селекция и возделывание подсолнечника, под ред. В.М. Пенчукова. М.: Агропромиздат.-1991. С.57-61

70. Попов, П.С. Генетический анализ состава токоферолов и жирных кислот в семенах подсолнечника / П.С. Попов, А.Б. Дьяков, A.A. Бородулина, и др. // Генетика.- 1988.- T.XXIV. №3. - С.518-527.

71. Попов, П.С. Методы определения сопутствующих жиру веществ в семенах / П.С.Попов // Методические указания по определению биохимических показателей качества масла и семян масличных культур/ Краснодар. - 1986. -С. 37-41.

72. Попов, П.С. Новые типы масла из семян подсолнечника / П.С. Попов, Я.Н. Демурин, З.Е. Рукина, и др. // Технические культуры 1992. - №3. -С.13-16.

73. Попов, П.С. Соединения, сопутствующие жиру и белку в семенах подсолнечника и других масличных культур / П.С.Попов, Н.С.Осик // Вопросы биохимии масличных культур в связи с задачами селекции /Сб. науч. работ. -Краснодар. 1981. -С. 43-59.

74. Попов, П.С. Химический состав растений / П.С.Попов, Л.Н.Харченко, Я.Н. Демурин / Биология, селекция и возделывание подсолнечника, под ред. В.М. Пенчукова М. Агропромиздат. - 1991.- С.28-34.

75. Попов, П.С.Генетический анализ состава токоферолов и жирных кислот в семенах подсолнечника / П.С.Попов, А.Б.Дьяков, А.А.Бородулина, и др. // Генетика. 1988. - Т. XXIV. - № 3 - С. 518-527.

76. Пустовойт, B.C. Избранные труды / В.С.Пустовойт М.: Агропромиздат. - 1990. - 367 с.

77. Рамазанова, И.Г. Применение этилена для стимуляции прорастания свежеубранных семян подсолнечника / И.Г Рамазанова // Науч. технич.бюл. ВНИИМК. Краснодар. - 1986. - Вып. 3 (94). - С. 29-32.

78. Ржехин, В.П. Руководство по методам исследования, технологическому контролю и учету производства в масложировой промышленности / В.П. Ржехин, А.Г. Сергеева;-Ленинград, 1967. Т. 1.-С. 887.

79. Ржехин, В.П. Требования масложировой промышленности к качеству растительных масел для пищевых целей / В.П. Ржехин // Бюл. НТИ по масличным культурам Краснодар. - 1969. - С. 22 - 27.

80. Сациперов Ф.А. Опыт скрещивания двух форм подсолнечника (Helianthus annuus L. х Н. argophyllus A. Gray).- Труды по прикладной ботанике,- Петроград, 1916, № 9.- С.207-247.

81. Семенова, Л.И. Определение состава токоферолов фотоденситометрическим способом / Л.И Семенова, Д.И Кузнецов // Масложировая промышленность. 1984. - №5. - С. 17-18.

82. Серебровский, A.C. Генетический анализ / А.С.Серебровский. М.: Наука. - 1970. - 342 с.

83. Синская E.H. Исследование биологии развития и физиологии масличных и эфиромасличных культур.- В кн.: Масличные и эфиромасличные культуры.- М.: Изд-во с/х литературы, 1963.- С.225-234.

84. Система генетического изучения исходного материала для селекции растений. Мет. указания. - Л.: Издательство ВНИИР. - 1984. - С. 60-62.

85. Смирнов, М.И. Распределение витамина Е в природе / М.И. Смирнов // Витамины. Москва: Медицина, 1974, С. 127-128.

86. Тихомирова, М.М. Генетический анализ / М.М. Тихомирова Л.: ЛГУ, 1990.-280 с.

87. Уманская, А.Н. Определение токоферолов растительных масел тонкослойной хроматографией / А.Н. Уманская, H.H. Сафронова, Н.К.Надиров и др. // Прикладная биохимия и микробиология. 1973. Т.9. - №3. - С.468 - 470.

88. Харченко, Л.Н. Вопросы биохимии масличных культур в связи с задачами селекции./ Л.Н. Харченко // Сб. науч. работ ВНИИМК.- 1981.- С. 1628.

89. Харченко; JI.H. Определение жирнокислотного состава растительных масел методом газожидкостной хроматографии / Л.Н. Харченко // Масложировая промышленность. 1968. - № 12. - С. 12-14.

90. Хафизов, Р.Х. Химия витамина Е и его биологических производных / Р.Х. Хафизов, Н.К. Надиров, Р.Ф. Сакаева // Витамины. Киев, 1975. -Вып. 8.- С.7-22.

91. Химическая энциклопедия. М.: Советская энциклопедия, 1990. -671 с.

92. Шатерников, В.А. Витамин Е/ В.А. Шатерников // Витамины. М., 1974.-С. 87-89.

93. Швецова, В.П. Варьирование содержания токоферолов в масле семян самоопыленных линий подсолнечника / В.П.Швецова // Науч. технич.бюл. ВНИИМК. Краснодар. - 1983.-Вып. 82. - С. 42-44

94. Эммануэль, Н.М. Торможение процессов окисления жиров./ Н.М Эммануэль, Ю.Н. Лясковска; М.: Пищепромиздат, 1961,- 359 с.

95. Beringer Н. Effekt of temperature on the synthesis of essential fatty acids and vitamin E in oil crops // Fertilizer use and production of carbohydrates and lipids. Bern. - 1978. - P.123-133.

96. Beringer, H. Plastid development and tocochromanol accumulation in oil seeds / H.Beringer, F.Nothdurft // Advances in the biochemistry and physiology of plant lipids. Proc. Symp. Amsterdam. - 1979. - P.133-137.

97. Camara, B. Demonstration and solubilization of S-adenosylmethyonine: a-tocopherol methyltransferase from Capsicum chromoplasts / B.Camara, A.D'Harlingue // Plant Cell Reports. 1985. - V.4, № 1. - P.31-32.

98. Carpenter, A.P. Determination of tocopherols in vegetable oils / A.P. Carpenter // Journal of the American Oil Chemists' Society (JAOCS). 1979. - V.56.- P.668-671.

99. Combs, S.B. Varietal differences in the vitamin E content of corn / S.B. Combs, G.F Combs // J. Agr. Food Chem. 1985.-V.33, № 5.- P.815-817.

100. Cort, W.M. Anthioxidant activity of tocopherols, ascorbyl palmitate and ascorbic acid and their mode of action / W.M. Cort // JAOCS. 1974. - V.51, № 7.-P.321-323.

101. Demurin, Ya. Genetic modification of sunflower seed oil (a revue) / Ya. Demurin, Dr. Skoric // Proc. First Balkan Symp. Breeding Cultivation Wheat Sunflower Legume Crops, IWS, 1995 Albena, Bulgaria. 1995. - P.55-58.

102. Demurin, Ya. Genetic variability of tocopherol composition in sunflower seeds as a basis of breeding for improved oil quality / Ya. Demurin, Dr. Skoric, Dj. Karlovic // Plant Breeding. 1996.- V.l 15.-P.33-36.

103. Demurin, Ya. Genetic variability of tocopherol composition in sunflower seeds/ Ya. Demurin. // Helia. 1993.-V.16, №18. - P.59-62.

104. Demurin, Ya. Tocopherol genetics in sunflower breeding for oil quality / Ya. Demurin, D. Skoric, P. Popov, S. Efimenko // Proc. EUCARPIA Symp. Breeding Oil Protein Crops, Albena, Bulgaria. 1994. - P. 193-196.

105. Demurin,Ya.N. Genetic variability of tocopherol composition in sunflower seeds/ Ya.N. Demurin// Helia 1993. - V. 16. - № 18. - 59 - 62 c.

106. Dolde, D. Tocopherols in breeding lines and effects of plant, fatty acid composition, and temperature during development / D. Dolde, C. Vlahakis, J. Hazebroek // J. Am. Oil Chem. Soc. 1999. - V 76. -P. 349-355.

107. Furuya, T. Production of tocopherols by cell culture of safflower / T.Furuya, T.Yoshikawa, T.Kimura, H.Kaneko // Phytochemistry. 1987.-V.26 (10). -P. 2741-2747.

108. Galliher, H.L. Genetic variability of alpha-tocopherol and gamma- in corn embryos / H.L. Galliher, D.E Alexander., E.J Weber // Crop Sci.- 1985.- V.25, № 3.- P.547-549.

109. Grams, G.M. Distribution of tocopherols within the corn kernel / G.M.Grams, C.W. Blessin, G.E Inglett//JAOCS 1970,- V.47,№ 9.- P.337-339.

110. Harting, D.C. Vitamin E content of vegetable oils and fats / D.C. Harting, E.J. Drury // The J. ofNutrition. 1963. - V. 816, № 4.- P.335-341.

111. Hass, C.G. Three non-allelic epistatically interacting methyltransferase mutations produce novel tocopherol (vitamin E) profiles in sunflower / C.G.Hass, S.Tang, S.Leonard, M.G Traber., J.F.Miller, S.J Knapp. // Theor. Appl. Genet. -2006- 113:767-782.

112. Haumann, B.F. Health implication of lipid oxidation/ B.F. Haumann // INFORM of JAOCS (INFORM). 1993. - V.4, №7. - P.800-810.

113. Hove, E.L. Note on the linoleic acid tocopherol relationspip in fats and oils / E.L. Hove, Ph.L. Harris // JAOCS. -1951. - V. 28, № 9. - P.405-406.

114. Janiszowska, W. Changes in the levels of prenylquinones and tocopherols in Calendula officinalis during vegetation / W. Janiszowska, J.Rygier // Phisiologia plantarum. 1985. - V. 63, Fasc. 4. - P.425-430.

115. Jung, M.Y. Effects of processing steps on the contents of minor compounds oxidation of soybean oil / M.Y.Jung, S.H.Yoon, D.B Min // JAOCS. -1989.-V.66, №1.-P. 118-120.

116. Kamal Eldin, A. A multivariate study of the correlation between tocopherols composition content and fatty acid composition in vegetable oils / A. Kamal - Eldin, R.Andersson // J. Am. Oil Chem. Soc. - 1997. - V 74. -P. 375-380.

117. Kamal Eldin, A. The Chemistry and Antioxidant Properties of Tocopherols and Tocotrienols /A. Kamal - Eldin, L. Appelqvist // Lipids. - 1996,-V.31, №7. - P.671-693.

118. Kayden. H. Absorption, lipoprotein transport and regulation of plasma concentrations of vitamin E in humans / H. Kayden, M Traber.// J.Lipid Res. 1993.-V.34.- P.343-354.

119. Knox, J.P. Singlet oxigen and plants / J.P. Knox, A.D. Dodge // Phytochemistry. 1985. - V. 24, № 5. - P.889-898.

120. Kurnik, E. Tocopherol content in sunflower varieties / E. Kurnik // Bull. Agric. Res. Inst. Iregszemce. 1967. - V. 7, № 1. - P. 7-12.

121. Kurnik, E. Zuchtung von Sonnenblumen (Helianthus Annuus) unter Berücksichtigung von Olmenge und olqualitat / E. Kurnik // Qualitas Plantarum et Materiae Vegetabilies. 1966. - Bd. 13, № 1-4. - S. 157-170.

122. Loskutov, A. Isozymes, tocopherols and fatty acids as seed biochemical markers of genetic purity in sunflower / A. Loskutov, Ya. Demurin, I. Obraztsov, N. Bochkarev, S.Turkav, S. Efimenko // Helia.-1994. V.17, №.21 .-P. 5-10.

123. Marquard, R. The influence of temperature and photoperiod on fat content, fatty acid composition and tocopherols of rapeseed (Brassica napus) and mustard species / R. Marquard // Agrochimica. 1985. - V. 29, № 2-4. - P. 145-153.

124. Marshall. P.S. Biosynthesis of tocopherols a re-examination of the biosynthesis and metabolism of 2-methyl 6-phytyl 1,4-benzoquinol / P.S. Marshall, S.R Morris, D.R Threlfal // Phytochemistry. 1985. - V. 24, № 8. - P. 1705-1711.

125. Muller-Mulot, V.W. Schnellmethode zur quantitativen Bestimmung individueller Tocopherole in Olen und Fetten / V.W. Muller-Mulot, G.Rohrer, R Medweth // Fette, Seifen Anstrichmittel. 1976. - Bd. 78, № 7. - S. 257-262.

126. Parkhurst, R.M. The effect of various concentrations of tocopherols and tocopherol mixtures on the oxidative stability of a sample of lard / R.M. Parkhurst, W.A. Skinner, P.A Sturm. // JAOCS. 1968. - V. 45, № 10.- P.641-642.

127. Pongracz, G. Tocopherole antioxidantien der natur / G.Pongracz, H.Weiser, D Marzinger // Fat Sei. Thechnol. - 1995. - V.97, №3. - P.90-104.

128. Rocheford, T. Enhancemet of vitamin E levels in corn / TR. Rocheford, JC Wong, CO. Egesel, RJ. Lambert // J. Am. Coll Nutr. -2002. V.21. - P. 191S-198S.

129. Sattler, SE Vitamin E is essential for seed longevity and for preventing lipid peroxidation during germination / SE. Sattler, LU. Gillilanda, M. Polland, et al. // Plant Cell. 2004. V. 16. - P. 1419-1432.

130. Schulz, H. Veränderung des Tocochromanolmusters einiger Pflanzenöle (Sojabohne, Lupine Sonnenblume und Weizen) wahrend Keimund und Wachstum / H.Schulz, G. Lausch, W. Feldheim // Zeitschrift for Naturforschung.- 1985.- Bd. 40 C,№ 11/12.-P.760-766.

131. Shahidi, F Nontriacylglycerol constituents of fats, oils / F. Shahidi, V.K.S. Shukla // INFORM. 1996. - V.7, №11. - P.1227-1231.

132. Sheppard, AJ. Analysis and distribution of vitamin E in vegetable oils and disease / AJ. Sheppard, JAT Pennington, JL. Weihrauch; New York: Marcel-Dekker, 1993,- 9-31 p.

133. Sherwin, E.R. Antioxidants for food fats and oils / E.R Sherwin // JAOCS. 1972. - V. 49, № 8. - P.468-471.

134. Shintani, DK Elevating the vitamin E content of plants through metabolic engineering / DK Shintani, D.DellaPenna // Science. 1998. - V 282. P. 2098-2100.

135. Shintani, DK The role of 2-methyl-6-phytylbenzoguinone methyltransferase in determining tocopherol composition in Synechocystis sp.PCC6803 / DK Shintani, Z. Cheng, D.DellaPenna //FEBS Lett. V.511. P. 1-5/

136. Skoric, Dr. Development of hybrids with various oil quality / Dr. Skoric, Ya. Demurin, Jocic S. // Proc. 14th International Sunflower Conference, Beijing/Shenyang, 12-20 June 1996, China. 1996. - P.54-59.

137. Soll, J. 2-methyl-6-phytylquinol and 2,3-dimethyl 5- phytylquinol as precursors of tocopherol synthesis in spinach chloroplasts / J. Soll, G. Schultz // Phytochemistry.- 1980.- V. 19, № 2,- P. 215-218.

138. Velasco, L. Development of sunflower germplasm with high delta-tocopherol content / L. Velasco, B. Perez-Vich, J.M Fernandez-Martinez. // Helia. -2004.-27 (40): 99-106.

139. Velasco, L. Novel variation for the tocopherol profile in a sunflower created by mutagenesis and recombination / L. Velasco, B. Perez-Vich, J.M Fernandez-Martinez. // Plant Breed. -2004. V. 123. - P. 490-492.

140. Velasco, L. Registration of T589 and T2100 sunflower germplasms with modified tocopherol profiles / L. Velasco, J. Dominguez, J.M Fernandez-Martinez. // Crop Sci. 2004a. - V.44. - P.362-363.

141. Velasco. L. Identification and genetic characterization of new sources of beta- and gamma-tocopherol in sunflower germplasm / L. Velasco, J.M. Fernandez-Martinez / Helia. 2003. - 26 (38): 17-23.

142. Vera-Ruiz, E.M. Comparative genetic study of two sources of beta-tocopherol in sunflower / E.M. Vera-Ruiz, B Perez-Vich., J.M. Fernandez-Martinez, Velasco L. // Helia. 2005. - 28 (42): 1-8.

143. Warner, R. Analysis of Tocopherols and Phytosterols in Vegetable Oils by HPLC with Evaporative Light- Scattering Detection / R. Warner, T.L. Mounts // JAOCS.- 1990.- V. 67, № 11.- P.827-831.

144. Wong, JC. QTL associated with accumulation of tocopherols in maize / JC. Wong, RJ. Lambert, Y. Tadmor, RJ. Lambert // Crop Sci. 2003. - V.43. -P.2257-2266.

145. ПО ЗАЯВКЕ №9553110 С ДАТОЙ ПРИОРИТЕТА 21.04.2004 Заявитель(и)гну внии масличных культур им. в.с.пустовойта pacxh

146. Автор(ы) : ПЕРЕТЯГИНА ТАТЬЯНА МИХАЙЛОВНАбочкарев н.и., бочковой а.д., гончаров c.b., демурин я.н., ефименко с.к., ефименко с.г., савченко в.д.

147. Зарегистрировано в Государственном реестре охраняемых селекционных достижений-зйясга-r'ij.1. Председателе^ .1. Шмаль3*к. 05-2099. МТ Гознака.