Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Функционирование репродуктивной системы самцов крыс под влиянием электромагнитного излучения миллиметрового диапазона

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Функционирование репродуктивной системы самцов крыс под влиянием электромагнитного излучения миллиметрового диапазона"

На правах рукописи

Кузнецова Марина Геннадьевна

ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ САМЦОВ КРЫС ПОД ВЛИЯНИЕМ ЭЛЕКТРОМАГНИТНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ МИЛЛИМЕТРОВОГО ДИАПАЗОНА

03.00.13 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Астрахань-2007 2 4 [¿ДЙ 2007

003060029

Работа выполнена на кафедре общей и биоорганической химии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских, профессор

Николаев Александр Аркадьевич

Консультант:

доктор биологических наук

Сердюков Василий Гаврилович

Официальные оппоненты.

доктор биологических наук, профессор

Губарева Любовь Ивановна доктор медицинских наук, доцент Тризно Николай Николаевич

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет Росздрава»

Защита состоится «24» мая 2007 г в «12е2» на заседании диссертационного совета ДМ 212 009.01 по защите диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук при Астраханском государственном университете, по адресу: 414000, Астрахань, пл Шаумяна, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Астраханского государственного университета по адресу 414056, Астрахань, ул Татищева, 20а

Автореферат разослан «24» мая 2007г

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Факторы окружающей среды способны оказывать разнообразное влияние на состояние здоровья. И в первую очередь это относится к факторам воздействия физической природы, таким как электромагнитное излучение, которые способны воздействовать на все живое на Земле, включая человека, приводя к тем или иным биологическим эффектам [Девятков Н.Д и др , 1999; Кузьмичев В.Е. и др., 2001, Бецкий О В., 2003]. Весьма перспективными в этом отношении оказались исследования биологических эффектов электромагнитного излучения миллиметрового диапазона. При воздействии на биологический объект электромагнитного излучения высокой мощности или значительной продолжительности на первый план выходит неспецифическое тепловое воздействие, но значительно больший интерес вызывает низкоинтенсивное электромагнитное излучение способное вызывать ряд специфических биологических феноменов [Лебедева Н. Н и др , 2000, Бецкий О. В. и др., 2001; Петросян В И и др, 2003; Grundler W et al, 2005].

Первая научная публикация, посвященная необычным эффектам воздействия низкоинтенсивных (менее 10 мВт/см2) электромагнитных волн миллиметрового диапазона на биологические объекты сделана в 1966 г С того времени стало известно о влияние миллиметровых волн на микроорганизмы и клеточные культуры (изменение плазмидной и хромосомной антибиотико-резистентности, изменении пролиферативной активности и др.), на функциональное состояние организма в целом [Гельвич Э А. и др., 1999, Гапеев А. Б. и др , 2000, Тамбиев А. X. и др., 2001; Голант М. Б и др., 2002; Смолянская А 3. и др., 2006]

В настоящее время низкоинтенсивное электромагнитное излучение миллиметрового диапазона широко используется в различных областях практической медицины (для улучшения реологического состояния крови, стимуляции репаративных процессов, в комплексной противовоспалительной терапии и т д) [Пославский М. В и др , 1998; Моисеев В. Н и др , 1999, Семенова С. В., 2000, Пуляева Е. Л. и др., 2002, Тарасова О В., 2003]

Однако данных о влиянии низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на репродуктив-

ную систему млекопитающих, а в частности на сперму, крайне мало Имеющиеся данные носят противоречивый характер и в ряде случаев вызывают сомнения из-за отсутствия адекватных контрольных серий при проведении экспериментальных исследований

Цель исследования. Изучить влияние низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на морфо-функциональное состояние органов репродуктивной системы самцов крыс.

Задачи исследования.

1. Провести исследование морфо-функциональных характеристик семенников и эпидидимисов крыс в норме.

2 Разработать критерии оценки действия электромагнитного излучения на морфо-функциональное состояние органов репродуктивной системы самцов крыс

3 Провести детальное исследование влияния низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на фертильность крыс.

4 Изучить действие электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на ферментативную активность акрозина.

5 Изучить хроническое влияние низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на функциональную активность биосинтеза тестостерона, через определение активности основного фермента биосинтеза тестостерона - Д5-Зр-гидроксистероиддегидрогеназы.

6. Определить звенья сперматогенеза наиболее чувствительные к воздействию низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона.

Научная новизна. Впервые дана характеристика последствий воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на морфо-функциональное состояние органов репродуктивной системы самцов крыс, Выявлены наиболее чувствительные звенья сперматогенеза, первыми реагирующие на воздействие низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона. Показан двухфазный характер биологического воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона. Исследована динамика ферментативной активности акрозина а

также функциональные изменения, протекающие в семенниках крыс после подобного воздействия и оказывающие влияние на репродуктивную функцию.

Научно-практическая значимость работы. Дана характеристика биологических эффектов низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона и показаны основные механизмы реализации этих эффектов. Показано неблагоприятное воздействие длительного низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на репродуктивную систему крыс-самцов

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались1 на 4-й конференции «Мужское здоровье и долголетие», Москва, 2006; Faily Health in the XXI Centuri, Tayland, 2006, на итоговых научных конференциях Астраханской государственной медицинской академии, Астрахань, 2003 г.; 2004 г.; international scientific-practical «New technology in medicine and biology», Bangkok, 2007; на 5-й конференции «Мужское здоровье и долголетие», Москва, 2007

Публикации: По теме диссертации опубликованы 6 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 122 страницах, содержит 25 таблиц и 14 рисунков Она состоит из введения; четырех глав, включающих обзор литературы, описание методов исследования, изложения фактического материала и обсуждения полученных результатов; выводов; указателя использованной литературы Библиографический указатель содержит 162 отечественных и 22 на иностранных источников

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами нашего исследования были суспензия эпидиди-мисов и семенников интактных беспородных белых крыс и крыс, подвергавшихся воздействию низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона.

В экспериментальной части работы использовались беспородные белые крысы. Все животные соответствовали показателям биологической нормы [Трахтенберг, Р и др, 1978] Возраст

крыс составлял 6-7 месяцев (половозрелые особи) [Zanato V. F et al, 1994 ]._Масса тела крыс была 180-240 г

Забор семенников и эпидидимисов у крыс проводили под эфирным наркозом (экспериментальные исследования проводились в строгом соответствии с Хельсинской декларацией о гуманном отношении к животным)

Хроническому воздействию низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона животные из опытных групп подвергались в течение 70 дней по 20 мин ежедневно в затравочной камере, изготовленной из материалов не-экранирующих электромагнитное излучение.

Для создания электромагнитного поля был использован генератор монохроматических электромагнитных волн «Явь-1-7,1». Излучаемая длина волны X = 7,1 мм, частота f = 42,194 ГГц, плотность мощности Р = 0,1 мВт см~2 была выбрана как рекомендованная для клинического и экспериментального использования. Указанная плотность мощности, как известно, не обладает тепловым эффектом, а, следовательно, возможное биологическое действие при плотности мощности 0,1 мВт см-2 является специфическим.

Состояние сперматогенеза у самцов оценивали по методу В.П Маминой и ДИ. Семенова каждые 7 дней в течение 70 дней воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона Исследование суспензии эпи-дидимиса (учитывались общее количество, морфологические и кинетические характеристики, жизнеспособные и мертвые формы эпидидимальных сперматозоидов) проводили с использованием счетной камеры Горяева по общепринятым методикам

Активность Д5-ЗР-гидроксистероиддегидрогеназы (ГСД) [Резнжов О.Г., 1989], определяли в гомогенате семенников через каждые 7 дней в течение 70 дней облучения и 30 дней после окончания воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона.

Для измерения активности ГСД применяли спектрофотомет-рический метод Рубина в модификации Голдмана. Активность свободного акрозина (ЕС 3 4 21.10) определяли по расщеплению ВАЕЕ по методу W В Schill. Общую активность акрозина опре-

деляли после быстрого оттаивания (при температуре 23 °С в течение 30 минут) сперматозоидов, предварительно замороженных до - 196°С (в жидком азоте). Проферментную активность рассчитывали по формуле- ПА=ОА-СА, где ПА - профермент-ная активность акрозина, ОА - общая активность акрозина, СА - свободная активность акрозина. Активность акрозина выражали в международных единицах на 1 миллион сперматозоидов (мкМЕ/106 сп)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Беспородные белые 5-6 месячные крысы с массой тела 180240 г, содержавшиеся на стандартной диете, были разделены на две группы контрольную (К) и опытную (О). В группу-К вошло 57 животных (42 самки и 15 самцов), в группу-0 вошло 110 животных (46 самок и 64 самцов)

Группа-0 в течение 70 дней по 20 мин ежедневно подвергалась воздействию низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона. После окончания затравки проводили спаривание животных в течение 20 дней:

19 самок-К с 7 самцами-К (1 группа),

22 самки-0 с 8 самцами-К (2 группа),

23 самки-К с 8 самцами-О (3 группа),

24 самки-О с 9 самцами-О (4 группа).

Полученные нами данные свидетельствуют, что в целом хроническое воздействие низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона неблагоприятно сказывается на функциональном состоянии репродуктивной системы крыс, что подтверждается ухудшением генеративных показателей в группах-2, -3 по сравнению с группой-1 и субфертильно-стью в группе-4. Снижение среднего числа плодов у крыс груп-пы-3 обусловлено ухудшением оплодотворяющей способности эякулята после хронического воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона Суб-фертильность может проявляться в нарушении нормального функционирования ферментативных систем спермоплазмы и (или) в нарушении интерполимерного комплексообразования

белками спермоплазмы, Под влиянием низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона происходит изменение устойчивости мембран сперматозоидов Прямым подтверждением этому служит значительное увеличение количества мертворожденных и уменьшение выживших в течение 10 дней постнатального периода. Можно констатировать наличие отдаленных последствий воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на крыс-самцов

Таблица 1

Показатели репродуктивной функции крыс после хронического воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона

Показатели репродуктивного здоровья Группы экспериментальных животных

Группа-1 (самки п=19, самцы п=7) Группа-2 (самки п=22, самцы п=8) Группа-3 (самки п=23, самцы п=8) Группа-4 (самки п=24, самцы п=9)

Среднее число плодов 8,6±0,85 7,75±0,82 6,25±0,45 4,25±0,85

Мертворожденные, % 2,8±0,3 8,8±1,1 11,4±0,95 29,4±0,95

Выжившие, % 76,5±4,2 67,0±4,75 55,3±1,2 35,3±1,2

Сам по себе факт резкого снижения плодовитости показывает отрицательное влияние низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на репродуктивную систему самцов крыс

Наряду с этим возможно отрицательное воздействие низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового

диапазона на процесс сперматогенеза, на молекулярную структуру сперматозоидов и на метаболические пути биосинтеза основного тестикулярного гормона - тестостерона.

Разработка критериев оценки действия электромагнитного излучения на морфо-функциональное состояние органов репродуктивной системы самцов крыс основывается на оценке динамики количественных характеристик клеток сперматогенеза.

Многоступенчатый и длительный процесс трансформации стволовых клеток в сперматозоиды делает его уязвимым для повреждающего действия экзо- и эндогенных факторов, в том числе, и низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона.

160 п

^ 60 ■

40 ■

20 ■

0 -1-1-1-1-1-1

7дн 14дн 21дн 28дн 56 дн 70 дн

• сперматогонии 1 ■"сперматоциты 0~сперматиды "^^сперматозоиды

Рис. 1. Динамика численности клеток сперматогенеза в семеннике крыс в ходе воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения

Анализ состояния сперматогенеза у крыс из контрольной группы (п=15) показал, что общее количество сперматогенных клеток в семеннике составляет в среднем 5223+460 млн. (Рис. 1).

Для разных типов сперматоргенных клеток было характерно определенное достаточно устойчивое процентное соотношение, сперматогонии составлялют в среднем 22,5±2,0%, сперматоциты 20,7+2,1%, сперматиды 21,6±2,3%, сперматозоиды 35,2±2,7%.

Показатели состояния эпидидимальных сперматозоидов у крыс контрольной группы составили- общее количество сперматозоидов 1438±161 млн , морфологически дефективных сперматозоидов 1,2±0,2%, подвижных сперматозоидов 87,8±6,0%, мертвых сперматозоидов 4,95±0,88% Первая и вторая неделя облучения стимулируют образование сперматогоний (почти на 40% выше нормы) и сперматоцитов, компенсаторно снижается относительная концентрация сперматид и сперматозоидов

Известно, что сперматогенез подразделяют условно на три этапа [Райцина С С., 1995] 1-й этап — сперматоцитогенез, характеризуется размножением сперматогоний, 2-й этап - мейоз, приводящий к редукции хромосом вдвое и образованию из сперматоцитов сперматид, 3-й этап - спермиогенез, характеризуется превращением сперматид в сперматозоиды

Поскольку в каждый конкретный момент времени представлены все формы сперматогенеза, допустимо считать, что наиболее показательными и уязвимыми являются этапы митоза сперматогоний Деление сперматогоний типа ао приводит к образованию сперматогоний типа Затем следует 6 митозов, что приводит к последовательному образованию сперматогоний типа &г, а3, сц, промежуточного типа и типа в Деление сперматогоний типа в приводит к образованию сперматоцитов 1 порядка, что знаменует переход к следующему этапу сперматогенеза -мейозу [Рузен-Ранге Э., 1999]. Это согласуется с нашими наблюдениями об увеличении относительного содержания сперматоцитов спустя неделю после «всплеска» концентрации сперматогоний

Подтверждением наибольшей чувствительности этапа генерации сперматогоний к воздействию низкоинтенсивного электромагнитного излучения является и тот факт, что этот тип сперматогенных клеток практически единственный демонстрирует отрицательную динамику со второй недели облучения Воздействие мм-волн на генетический аппарат уже известно для

и

бактериальных клеток [Бриль Г.Е., Панина Н.П., 2000]. Мм-вол-ны при мощности 1,0 мВт/см2 могут оказывать ряд эффектов на генетический аппарат клеток, что было продемонстрировано на политенных хромосомах клеток Chironomus plumosns. Выяснилось, что морфофункциональные изменения проявляются в изменении индексов генетической активности, в образовании пуфов de novo в некоторых районах хромосом [Шуб Г.М., 2004].

Излучение в диапазоне миллиметровых волн способно оказывать воздействие и на культуры клеток многоклеточных организмов. Экспериментально было показано, что низкоинтенсивное миллиметровое излучение (плотность потока мощности 0,5 мВт/см2) оказывает стимулирующее действие на культуры лимфоцитов и фибробластов человека активируя пролиферацию клеток [Говалло В.И., Барер Ф С , 1991]

Рис.2. Общее количество эпидидимальных сперматозоидов в % от контроля в ходе воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона

Стимулирующее влияние низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на сперматоген-ные клетки в первые две недели облучения согласуется с приведенными данными (рис 2), но практически нет исследований касающихся хронического воздействия низкоинтенсивного

электромагнитного излучения миллиметрового диапазона. Длительное воздействие низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона оказывает противоположное действие, истощая ресурс пролиферации

Морфологический и статистический анализ состояния эпи-дидимальных сперматозоидов до и после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона показал (рис 2), умеренно стимулирующее влияние облучения в первые две недели и отчетливое снижение числа эпи-димальных сперматозоидов к концу срока облучения на 40%

400 -1 350 -300 -

100 -50 -

0 -I—-—I—-—I—-—|—-—I—-—I

7дн 14дн 28 дн 56 дн 70дн

Рис. З.Рост числа дефективных сперматозоидов в ходе воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона

Рост числа дефективных сперматозоидов в ходе воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона имеет характер практически линейной зависимости от сроков облучения (рис.3.) Особенно показателен в этом отношении индекс тератозооспермии. Если индекс терато-зооспермии в контрольной группе составлял в среднем 1,13±0,07, то через 70 дней воздействия низкоинтенсивного

электромагнитного излучения миллиметрового диапазона индекс тератозооспермии в среднем составлял уже 2,72±0,21 Индекс тератозооспермии является по мнению ведущих российских андрологов (Акопян А С , 2007) интегративным морфологическим показателем снижения репродуктивной функции

При оценке состояния эпидидимальных сперматозоидов после окончания воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона, выявленные морфологические нарушения быстро исчезали и к 14 дню после окончания воздействия почти не отличались от контрольной группы

70 -60 -50 ■ 40 -30 -20 -10 -0 -

контроль 28 дн по 70 дн по

□ % активно подвижных

Рис 4. Подвижность сперматозоидов после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона.

Двигательные характеристики сперматозоидов являются более лабильными, поэтому можно было ожидать их значительного изменения после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона (рис 4) Тем более, что известно регулирующее действие КВЧ-полей на функциональное состояние клеток Однако, как показали наши

исследования, уменьшение числа активноподвижных сперматозоидов достоверно происходит только после 4 недель облучения Причем, простой статистический анализ (см. линию тренда рис 4 ) позволяет предположить суммирующий характер воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на двигательные характеристики эпидиди-мальных сперматозоидов крыс В этом случае, изменению функциональной характеристики (подвижность сперматозои-дов)предшествует накопление мелких дефектов функции сперматозоидов, суммирование которых и приводит к видимым и существенным нарушениям функции

После окончания воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона, обнаружено, что процент активно подвижных сперматозоидов уже к 7 дню (первый день контроля последствий воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона) практически восстанавливается и составил по нашим данным 67,4+3,07% Однако, восстановление скоростных характеристик происходит значительно медленнее и не линейно. Если к 7 дню средняя скорость сперматозоидов составляет 2,95±0,15 мм\мин, то к 14 дню она падает до 1,86±0,35 мм\мин и только к 21 дню достигает 3,85±0,65 мм\мин.

Подобный «волнообразный» характер восстановления динамических характеристик сперматозоидов, можно объяснить, постепенным созреванием клеток сперматогенеза, находившихся в момент облучения на разных стадиях этого процесса Полученные данные косвенно свидетельствуют о различной чувствительности различных клеток сперматогенеза к воздействию низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона, и, исходя из теории биологического действия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона, о различном состоянии мембран этих клеток

Состояние мембран сперматозоидов тесно связано функционирование одной из фундаментальных систем, обеспечивающих реализацию сперматозоидами прокреативной функции - системой акросомального фермента акрозина

В ряде работ предлагается определение ферментативной активности акрозина в качестве диагностического теста при фер-тилизации сперматозоидов in vitro [Menkveld R., Rhemrev J. P., 1996] Однако данных о функционировании системы акрозина при воздействии низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона в доступной нам литературе нет.

Таблица 2

Ферментативная активность акрозина в ходе воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона

Время прошедшее после начала облучения Ферментативная активность

Активность свободного акрозина, мкМЕ/106сп Общая активность акрозина, мкМЕ/106 сп Проферментная активность акрозина мкМЕ/10 СП

Контроль п=25 1,34±0,07 5,16±0,15 3,82±0,12

7 дней п=14 1,45±0,1 5,65±0,25 4,20±0,12

14 дней п=10 1,55±0,1 6,12±0,15 4,57±0,12

28 дней п=11 2,10±0,05 6,68±0,4 4,58±0,18

56 дней п=15 1,45±0,15 5,10±0,18 3,65±0,15

70 дней п=17 1,55±0,1 4,35±0,15 2,8±0,2

Определение активности акрозина (ЕС 3.4.21.10) проводили по методу W.B. Schill В контрольной группе активность свободного акрозина составила в среднем 1,34±0,07 мкМЕ/106 сп, общая активность акрозина составила в среднем 5,16±0,15 мкМЕ/106 сп , а проферментная активность акрозина была равна в среднем 3,82±0,12 мкМЕ/106 сп (Табл.2)

Исследование образцов эпидидимальных сперматозоидов после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона дало интересные результаты. Активность общего акрозина до 28 дня облучения возрастала и увеличилась на 20% по сравнению с контрольной группой, а затем стала снижаться и к концу облучения и составляла в среднем 77 % по сравнению с контрольной группой. (Табл. 2). Активность свободного акрозина по сравнению с контролем достигла максимальной также к 28 дню облучения, но снижаясь к 70 дню не уменьшилась ниже контрольных значений, а превысила их на 15%.

Проферментная активность акрозина после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона в целом повторяла динамику общей активности, но с более резкими колебаниями (табл. 2). В тоже время, проведенный нами, расчет коэффициента «проакрозин/свободный акро-зин» показал, что первые 14 суток воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона значение коэффициента по сравнению с контролем незначительно увеличивается (на 4%), после 28 суток значение коэффициента резко убывает в среднем на 24%, и достигает к 70 суткам значения 1,81±0,2 или около 64% от контроля.

При оценке ферментативной активности акрозина эпидидимальных сперматозоидов после окончания воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона, обнаружено, что ферментативная активность акрозина восстанавливался к 14 суткам после окончания облучения, достигая значения 5,72±0,4 мкМЕ/10бсп, что выше контрольных значений почти на 10% Полное соответствие контролю уровень ферментативной активности демонстрирует только на 21 сутки Коэффициент «проакрозин/свободный акрозин» имеет более сложную динамику На первой неделе после окончания облучения коэффициент восстанавливается наибольшими темпами (40%) и достигает 90% нормы. Затем отмечается регресс на 15% и к 21 дню коэффициент вновь растет, даже выше нормы (на 10%), и только к 28 дню практически соответствует контролю (табл. 3).

Таблица 3

Коэффициент «проакрозин/евободный акрозин» после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона различной продолжительности

Характеристика функционального статуса системы акрозина Коэффициент «проакрозин/евободный акрозин»

Контроль (до воздействия) 2,85±0,11

После 7 суток облучения 2,90±0,15

После 14 суток облучения 2,94±0,12

После 28 суток облучения 2,18±0,16

После 56 суток облучения 2,52±0,15

После 70 суток облучения 1,81 ±0,2

Примечание в таблице значение р<0,05

Полученные нами данные свидетельствуют, что после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона сначала происходит увеличение коэффициента, показывающего отношение проферментной активности акрозина к активности свободного акрозина, а затем интенсивное его падение.

Другими словами непродолжительное воздействие низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона предотвращает преждевременную активацию акрозина, что является благоприятным фактором, способствующим эффективной реализации оплодотворяющей способности сперматозоидов Вероятно, рост проферментной активности акрозина, за счет снижения активности свободного акрозина происходит благодаря стабилизации акросомальной мембраны спермато-

зоидов под влиянием низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона.

Длительное воздействие низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона оказывает противоположное действие дестабилизируя мембраны сперматозоидов.

Определение тестостеронпродуцирующей активности семенников, то есть функционального состояния клеток Лейдига], проводили на основании Активности Д5-ЗР-гидроксистероидде-гидрогеназы (ГСД)

Активность тестикулярного фермента биосинтеза тестостерона — Д5-ЗР-гидроксистероиддегидрогеназа у крыс контрольной группы составила в среднем 237,4±28,1 ОУЕ

Динамика специфической активности ГСД в целом повторяла динамику общей активности.

Выявленые изменения в семенниках общей активности Д5-Зр-гидроксистероиддегидрогеназы в течение 70 дней воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона носили недостоверный характер и, можно считать, что низкоинтенсивное электромагнитное излучение миллиметрового диапазона практически не влияет на тестосте-ронпродуцирующую активность семенников

Используя ряд тестов функционального состояния сперматозоидов мы оценили динамику влияния низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на их резистентность к факторам окружающей среды, что, как известно (Артифексов С.Б _и др , 2007) коррелирует с оплодотворяющей способностью

В частности, была проведена оценка резистентности сперматозоидов к гипертоническому раствору хлорида натрия по Милованову

По полученным нами данным, воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона приводило при экспозиции не более двух недель к повышению резистентности сперматозоидов к хлориду натрия (тест Мило-ванова) на 800 УЕ или почти на 18%. Более продолжительное воздействие низкоинтенсивного электромагнитного излучения

миллиметрового диапазона приводит к снижению резистентности до 75% исходной к 70 суткам облучения.

После окончания воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона восстановление исходных показателей резистентности происходит довольно быстро - на 7 сутки после окончания облучения этот показатель соответствует контролю

Таблица 4

Функциональные показатели сперматозоидов до и после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона

Функцио нальные показатели спе-рмато зоидов Контроль (п=15) Время прошедшее после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона

7 дней (п=9) 14 дней (п=9) 21 день (п=9) 28 дней (п=9) 56 дней (п=11) 70 дней (п=12)

Резисте нтность к хлориду натрия по Миловано-ву, УЕ 4500,0 ±900,0 4800,0 ±980,0 5300,0 ±910,0 4300,0 ±930,0 3900,0 ±950,0 3650,0 ±980,0 3400,0 ±980,0

После воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона в тесте на резистентность сперматозоидов к уксусной кислоте (по методу Джоела) было отмечено существенное изменение резистентности

Если до 10 минут инкубации различия и в контроле и в опыте были не значительные, то уже после 20-30 минут инкубации различия становились статистически значимыми.

Подвижность сперматозоидов в образцах, подвергавшихся воздействию низкоинтенсивного электромагнитного поля мил-

лиметрового диапазона, сохранялась первые две недели практически пропорционально контролю (рис 5^

Начиная с 21 дня процент подвижных сперматозоидов после 20 минут инкубации значительно снижается (на 60-85% по сравнению с контролем). Снижение резистентности носит нелинейный характер и колеблется по срокам - например на 56 день этот показатель заметно хуже чем на 70 день. Тем не менее четко прослеживается общая тенденция опережающего снижения количества подвижных форм после воздействия электромагнитного излучения миллиметрового диапазона.

80

Рис,5 Резистентность сперматозоидов к уксусной кислоте (по методу Джоела) после воздействия электромагнитного излучения миллиметрового диапазона

Результаты этих функциональных проб подтверждают активирующее влияние краткосрочного (не более 15 дней) облучения низкоинтенсивным электромагнитным полем миллиметрового диапазона на репродуктивную систему самцов крыс, которое было показано морфологическим и биохимическим исследованием семенников крыс.

Основываясь на предположении, что основным механизмом влияния низкоинтенсивного излучения миллиметрового диапазона является механизм поддержания в мембране клеток акусто-

электрических колебаний (колебаний Фрелиха), можно выдвинуть следующее объяснение.

Наблюдающееся в течении первых недель облучения повышение резистентности сперматозоидов, снижение доли свободного акрозина, активация синтеза сперматогенных клеток является следствием усиления акустоэлектрических колебаний в мембране клеток, которые вступают в резонансное взаимодействие с микроволновым излучением. Но, длительное воздействие монотонного излучения может вызвать уменьшение амплитуды собственных колебаний мембран клеток, спектр излучения которых меняется на разных фазах биологического цикла (Де-вятков НД, 1991) Эти колебания возникли в процессе эволюции живой клетки и являются одним из главных механизмов поддержания процессов жизнедеятельности Клетка с клеткой «разговаривает» на языке колебаний в миллиметровом диапазоне длин волн.

И механизм синхронизации или регенеративного усиления может быть нарушен воздействием внешнего низкоинтенсивного излучения миллиметрового диапазона, что приводит к нарушению процессов жизнедеятельности сперматозоидов.

ВЫВОДЫ

1. Низкоинтенсивное электромагнитное излучение миллиметрового диапазона вызывает дисбаланс профиля сперматогенных клеток самцов крыс и наиболее уязвимыми являются этапы митоза сперматогоний

2 Продолжительность облучения крыс является ведущим фактором влияния низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на репродуктивную систему. Облучение в течении не более 15 дней оказывает стимулирующее влияние на сперматогенез и на функциональные и биохимические характеристики сперматозоидов.

3 Уменьшение числа активноподвижных сперматозоидов достоверно происходит только после 4 недель облучения Анализ динамики этих изменений позволяет предположить суммирующий характер воздействия низкоинтенсивного электромаг-

нитного излучения миллиметрового диапазона на двигательные характеристики эпидидимальных сперматозоидов крыс.

4. Длительное воздействие низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона вызывает преждевременную активацию акрозина, уменьшая коэффициент «проакрозин/свободный акрозин» в среднем на 40 %.

5. На основании изменения в семенниках общей активности Д5-ЗР-гидроксистероиддегидрогеназы низкоинтенсивное электромагнитное излучение миллиметрового диапазона практически не влияет на тестостеронпродуцирующую активность семенников.

6 Функциональная устойчивость сперматозоидов крыс к факторам внешней среды (тесты Милованова и Джоэла) после двух недель облучения низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона достоверно повышается, а при дальнейшем облучении значительно снижается.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ В ПРАКТИКУ

Результаты исследования используются в научных исследованиях и практической работе, кафедры общей и биоорганической химии и кафедры фармацевтической химии Астраханской государственной медицинской академии; Центра планирования семьи и репродукции человека г.Астрахани. Результаты диссертационной работы используются в качестве учебного материала для студентов, интернов и ординаторов Астраханской государственной медицинской академии.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Эффекты КВЧ-облучения спермы // Успехи современного естествознания - 2004 - №3. - С 22-23. (соавт Николаев А. А , Сухова И.В ).

2. Влияние микроволнового излучения низкой интенсивно-

сти на функциональные показатели сперматозоидов самцов

крыс.// Успехи современного естествознания. - 2007. - №4. -

С. 143-144 (соавт Николаев А А)

3. Продукция ингибина злокачественными опухолями простаты //Материалы 4-й конференции «Мужское здоровье и долголетие» - Москва- 2006 С.164-165 (соавт. Николаев А. А.).

4 Пептид семенной плазмы вызывающий активацию акро-зина \\ Proceedings of international scientific interdisciplinaiy workshop Thailand, Bangkok, 2006, p 51

5. Influence of microwave radiation of low intensity on reproductive function of male rats \\ Proceedings of international scientific-practical «New technology in medicine and biology » Bangkok 2007- p.34-35

6.Ферментативная активность акрозина эпидидимальных сперматозоидов крыс после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона // Естественные науки. Журнал фундаментальных и прикладных исследований- 2007 -№5- с.67-74.

■ 1 \ -

Тираж 100 экз Подписано в печать 23 04 2007 Заказ № 2207

Издательство Астраханской государственной медицинской академии, 414000, г Астрахань, ул Бакинская, 121

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кузнецова, Марина Геннадьевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. БИОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ЭЛЕКТРОМАГНИТНЫХ ВОЛН МИЛЛИМЕТРОВОГО ДИАПАЗОНА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

ГЛАВА 2.МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.2.Функциональные, морфологические,физико-химические и токсикологические методы исследования.

2.3. Методы регистрации ферментативной активности

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1.Влияние на фертильность низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона.

3.2. Анализ состояния сперматогенеза у крыс под влиянием низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона

3.3.Морфологические показатели эпидидимальных сперматозоидов после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона

3.4. Двигательные характеристики сперматозоидов после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона

3.5. Ферментативная активность акрозина после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона.

3.6. Ферментативная активность Л5-зр-гидроксистеро-иддегидрогеназы после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона.

3.7. Функциональные показатели сперматозоидов после воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона.

ГЛАВА 4 . ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Функционирование репродуктивной системы самцов крыс под влиянием электромагнитного излучения миллиметрового диапазона"

Факторы окружающей среды способны оказывать разнообразное влияние на состояние здоровья человека.

И в первую очередь это относится к факторам воздействия физической природы, таким как электромагнитное излучение, которые способны воздействовать на все живое на Земле, включая человека, приводя к тем или иным биологическим эффектам (38,62,17).

Весьма перспективными в этом отношении оказались исследования биологических эффектов электромагнитного излучения миллиметрового диапазона.

При воздействии на биологический объект электромагнитного излучения высокой мощности или значительной продолжительности на первый план выходит неспецифическое тепловое воздействие, но значительно больший интерес вызывает низкоинтенсивное электромагнитное излучение способное вызывать целый ряд специфических биологических феноменов(65,21,78,134).

Первая научная публикацияf посвященная необычным эффектам воздействия низкоинтенсивных (менее 10 мВт/см2) электромагнитных волн миллиметрового диапазона на биологические объекты, была сделана в 1966 г.(Цит.по 38)

С того времени стало известно о влияние миллиметровых волн на микроорганизмы и клеточные культуры (изменение плазмидной и хромосомной антибиотикорезистентности, изменении пролиферативной активности и др.): на функциональное состояние организма в целом(30, 34, 106, 101) .

В настоящее время низкоинтенсивное электромагнитное излучение миллиметрового диапазона широко используется в различных областях практической медицины (для улучшения реологического состояния крови, стимуляции репаративных процессов, в комплексной 1 противовоспалительной терапии и т. д. ) (83, 93, 85,107) .

Однако данных о влиянии низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на репродуктивную систему млекопитающих, а в частности на сперму, крайне мало. Имеющиеся данные носят противоречивый характер и в ряде случаев вызывают сомнения из-за отсутствия адекватных контрольных серий при проведении экспериментальных исследований. Цель исследования

Изучить влияние низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на морфо-функциональное состояние органов репродуктивной системы самцов крыс

Основные задачи исследования

1.Провести исследование морфо-функциональных характеристик семенников и эпидидимисов крыс в норме (общее количество клеток ряда сперматогенеза, концентрация сперматогоний, концентрация сперматоцитов, концентрация сперматид, концентрация сперматозоидов, соотношение между разными типами сперматогенных клеток, морфологию сперматозоидов; для эпидидимиса дополнительно - содержание активно подвижных, слабо подвижных, неподвижных сперматозоидов, скорость сперматозоидов, длительность сохранения двигательной активности, количество мертвых сперматозоидов, наличие явления агглютинации, агрегации сперматозоидов).

2.Разработать критерии оценки действия электромагнитного излучения на морфо-функциональное состояние органов репродуктивной системы самцов крыс.

3. Провести детальное исследование влияния низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на фертильность крыс.

4. Изучить действие электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на ферментативную активность акрозина.

5.Изучить - хроническое влияние низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на функциональную активность биосинтеза тестостерона, через определение активности основного фермента биосинтеза тестостерона - А5-3(3-гидроксистероиддегидрогеназы.

6.Определить звенья сперматогенеза наиболее чувствительные к воздействию низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона.

Научная новизна

Впервые дана характеристика последствий воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на морфо-функциональное состояние органов репродуктивной системы самцов крыс. Выявлены наиболее чувствительные звенья сперматогенеза,J первыми реагирующие на воздействие низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона. Исследована динамика ферментативной активности акрозина а также функциональные изменения, протекающие в семенниках крыс после подобного воздействия и оказывающие влияние на репродуктивную функцию.

Практическое значение работы

Дана характеристика биологических эффектов низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона и показаны основные механизмы реализации этих эффектов. Показано неблагоприятное воздействие длительного низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на репродуктивную систему крыс-самцов.

Внедрение результатов работы в практику

Полученные результаты используются в практической работе Центра планирования семьи и репродукции человека г. Астрахани при выявлении факторов риска развития субфертильности и инфертильности у мужчин и при выборе оптимальных комплексных схем лечения выявленных нарушений оплодотворяющей способности эякулята.

Результаты диссертационной работы используются в качестве учебного материала для студентов, интернов и ординаторов Астраханской государственной медицинской академии.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Обнаружено отрицательное влияние длительного воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на мужскую репродуктивную функцию у самцов крыс.

2. Установлены звенья сперматогенеза, поражающиеся при длительном контакте с низкоинтенсивным электромагнитным излучением миллиметрового диапазона.

3. Обнаружено, что длительное воздействие низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона приводит к преждевременной активации акрозина эпидидимальных сперматозоидов самцов крыс.

4. Показано, что длительное воздействие низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона приводит к снижению функциональной устойчивости эпидидимальных сперматозоидов

Апробация результатов

Результаты работы представлены и доложены на:

- 4-й конференции «Мужское здоровье и долголетие» -(Москва- 2006);

- FAMILY HEALTH IN THE XXI CENTURY(Bankok, Tayland

2006г.);

- Итоговых научных конференциях Астраханской государственной медицинской академии (Астрахань, 2003 г., 2004 г. ) ;

- International scientific-practical « New technology in medicine and biology.» (Bangkok

2007.);

- 5-й конференции «Мужское здоровье и долголетие» -(Москва- 2007)

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Кузнецова, Марина Геннадьевна

выводы

1. Длительное низкоинтенсивное электромагнитное излучение миллиметрового диапазона вызывает резкое снижение общего числа сперматогенных клеток самцов крыс более чем в 2,4 раза.

2.Дисбаланс профиля сперматогенных клеток самцов крыс, вызванный длительным низкоинтенсивным электромагнитным излучением миллиметрового диапазона характеризуется резким подъемом концентрации сперматогоний, а затем преобладанием сперматоцитов.

3. На основании анализа динамики концентрации сперматогенных клеток под влиянием низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона впервые установлено, что наиболее уязвимыми являются этапы митоза сперматогоний.

4. Продолжительность облучения крыс является ведущим фактором влияния низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на репродуктивную систему. Облучение в течении не более 15 дней оказывает стимулирующее влияние на сперматогенез, на функциональную устойчивость сперматозоидов крыс к факторам внешней среды двигательные и биохимические характеристики сперматозоидов.

Длительное воздействие низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона вызывает преждевременную активацию акрозина, уменьшая коэффициент проакрозин/свободный акрозин» в среднем на 4 0 %. На основании измерения в семенниках общей активности Д5-3(3-гидроксистероиддегидрогеназы низкоинтенсивное электромагнитное излучение миллиметрового диапазона практически не влияет на тестостеронпродуцирующую активность семенников.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Можно сделать следующий главный вывод: физиологический (биофизический) механизм воздействия низкоинтенсивного электромагнитного излучения в миллиметровом диапазоне длин волн на биологические объекты носит многофакторный (комплексный,) характер.

Основные физиологические механизмы воздействия низкоинтенсивных миллиметровых волн сводятся к следующим феноменам:

- возбуждение акустоэлектрических колебаний в плазматических мембранах клетки (колебания Фрёлиха);

- капиллярный эффект (капилляр в прямоугольном волноводе);

- механизм гидратации белка под действием миллиметрового излучения;

- механизм формирования «памяти воды»;

- механизм появления «прозрачности воды» на резонансных частотах водных кластеров;

- «геометрические» резонансы;

- микротепловой «массаж» кожи при облучении прямоугольным рупором.

Однако хотелось бы сделать акцент на ключевой идее (хотя и не лишенной дискуссионности): основным (универсальным) является механизм поддержания в мембране клеток акустоэлектрических колебаний (колебаний Фрёлиха). Эти колебания возникли в процессе эволюции живой клетки и являются одним из главных механизмов поддержания процессов жизнедеятельности. Клетка с клеткой «разговаривает» на языке колебаний в миллиметровом диапазоне длин волн.

Нарушению процессов жизнедеятельности сопутствует уменьшение амплитуды колебаний. Воздействие на клетку полями в этом диапазоне частот приводит к коррекции, восстановлению собственных колебаний (по механизму синхронизации или регенеративного усиления).

Все другие механизмы являются дополнительными, они «автоматически» сопровождают основной механизм, помогая восстанавливать жизнедеятельность на уровне целого организма.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами нашего исследования были суспензия эпидидимисов и семенников интактных беспородных белых крыс и крыс, подвергавшихся воздействию низкоинтенсивного электромагнитного излучения миллиметрового диапазона.

В экспериментальной части работы использовались беспородные белые крысы. Все животные соответствовали показателям биологической нормы [81, 82].Возраст крыс составлял 6-7 месяцев (половозрелые особи [149]).Масса тела крыс была 180-240 г.

Забор семенников и эпидидимисов у крыс проводили под эфирным наркозом (экспериментальные исследования проводились в строгом соответствии с Хельсинской декларацией о гуманном отношении к животным) .

В таблице 2 представлен перечень использованных в работе экспериментальных животных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кузнецова, Марина Геннадьевна, Астрахань

1. Акопян А. С. Тератозооспермии основной фактор мужского бесплодия. / А. С. Акопян, М.В. Корякин, Н.С. Далантаева. // Труды «Мужское здоровье и долголетие».- М., 2 007 Вып. 5. -С. 9-14

2. Анищенко В. С. Стохастический резонанс как индуцированный шумом эффект увеличения степени порядка //УФК. 1999. - Т.169, №1. -С. 7-47.

3. Анохин JI. В. Медико-социальные последствия бесплодия. //Здравоохранение РФ. 1994. №1. - С.21-23.

4. Артифексов С. Б. / С. Б. Артифексов, А. А. Артифексова, И.В. Седышева, Е.В. Овчинникова, A.M. Демченко. Показатели спермограммы и фертильность. // Труды «Мужское здоровье и долголетие».- М., 2 007 Вып. 5. - С. 18-24.

5. Артифексов С. Б. Андрологические аспекты бесплодного брака. //Акушерство и гинекология 1996. - №2. - С.46-48.

6. Бабичев В. Н. Нейроэыдокринология репродуктивной системы. // Проблемы эндокринологии 1998. - №1. - С.3-12.

7. Базарнова М. А., Евсеев А. П., Пекус Е. Н. и др. Исследование эякулята. //Лабораторное дело. 1986. - №5. - С.267-270.

8. Беляков Е. В. Высокодобротный резонанс в волноводе с сильно поглощающим диэлектриком. // Электронная техника Сер.1. «Электроника СВЧ». - М., 1987. - Вып.7. - С.51-53.

9. Бенюмович М. С. Определение числа клеток в счетной камере с учетом свойств распределения Пуассона. //Клиническая лабораторная диагностика. 1997. - №6. - С.11-11.

10. Базарнова М.А., Юнда И. Ф. Бесплодие в супружестве. / Базарнова М.А.,И. Ф. Юнда. -Киев, 1990.

11. Бепперелл Р. Дж. Бесплодный брак: пер. с англ. /Р. Дж. Бепперелл, Б. Хадсон, К. Вуд. -М., 1998.

12. Бецкий О. В. Путвинский А. В.Биологические эффекты ММ-излучения низкой интенсивности. //Известия ВУЗов. Радиоэлектроника. Электронные приборы СВЧ. -198 6- № 3 с.43-49

13. Бецкий О. В. Влияние радиоэлектроники на биологические объекты. / О. В. Бецкий М., 1993 .

14. Бецкий О. В. Механизм первичной рецепции низкоинтенсивных миллиметровых волн у человека. // Миллиметровые волны в медицине и биологии: мат. симпозиума. М., 2002. -С.135-137.

15. Бецкий О. В. Вода и электромагнитные волны // Биомедицинская радиоэлектроника. М., 1998.- №2. С. 3-6.

16. Бецкий О. В. Современные представления о механизмах воздействия низкоинтенсивных миллиметровых волн на биологические объекты. / О. В. Бецкий, Н. Н. Лебедева. //Миллиметровые волны в медицине и биологии: мат. симпозиума. М., 1999. - С.130-133.

17. Бецкий О. В. Стохастический резонанс и проблема воздействия слабых сигналов на биологические объекты // Миллиметровые волны в биологии и медицине. 2002. - №3. - С. 311.

18. Бецкий О. В. Новые свойства воды в слабых электромагнитных полях //Биомедицинские технологии и радиоэлектроника. 2 006. - №2. - С. 74-80.23 .Боголюбов В. М. Общая физиотерапия. / В. М. Боголюбов, Г. Н. Пономаренко. М., 1999. -480 с.

19. Боровская Т. Г. Экспериментальная клиническая фармакология; справ.: в 5 9 т. / Т. Г. Боровская М., 1996.

20. Бриль Г. Е. Действие электромагнитного излучения миллиметрового диапазона на хромосомы клеток кожи экспериментальных животных // Электроника СВЧ. 2 005. - №7. -С.97-103 .

21. Виленская Р. П. Индукция синтеза колицина с помощью миллиметрового излучения // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2005.- №4. С. 52-54.

22. Гапеев А. Б. Сафронова В.Г., Чемерис Н.К., ФесенкоЕ.Е. Модификация активности перитонеальных нейтрофилов при воздействии миллиметровых волн в ближней и дальней зонах //Миллиметровые волны в биологии и медицине.- 2000. №1. - С. 3-7.

23. Гапеев А. Б. Особенности действия модулированного излучения крайне высоких частот на клетки животных: автореф. дис. канд. физ.-мат. наук. Пущино: ИБК РАН, 1999. - 29 с.

24. Гапочка Л. Д. Воздействие электромагнитного излучения КВЧ- и СВЧ-диапазона на жидкую воду // Вестник МГУ сер. Физика, Астрономия. 1994. №4. - С. 17-22.

25. Гапочка Л. Д. Механизмы функционирования водных биосенсоров электромагнитного излучения // Биомедицинская радиоэлектроника.- 2004. №3. - С.48-55.

26. Голант М. Б. О механизме синхронизации культуры дрожжевых клеток КВЧ-излучением // Биофизика. 2002. - №3. - С.490-495.

27. Девятков Н. Д. Применение низкоинтенсивных электромагнитных миллиметровых волн в медицине // Миллиметровые волны в медицине и биологии: мат. симп. М., 2000. - С.6-8.

28. Дедов В. И. Ультраструктура клеток Сертоли и Лейдига у крыс в норме и в условияхшдлительного внутреннего облучения. // Цитология. 1990. - №10. - С. 1153-1157.

29. А А. Жукова Т. А., Чаяло П. П. , Чайка М. В. О механизмах действия микроволновой резонансной терапии при лечении больных язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки // Клиническая медицина. 1994. - №4. - С.12-15.

30. Запорожан В. Н. Медико-биологические аспекты миллиметрового излучения. / В. Н. Запорожан, Т. Б. Реброва, О. В. Хаит и др. Сборник. -М.: ИРЭ АН СССР, 1991. С. 21-34.

31. Иванов Ю. В. Цитологические критерии состояния сперматогенеза в токсиколого-гигиенических исследованиях. // Гигиена и санитария 1999. - №4. - С.52-55.

32. Ильина С. А. О возможной роли воды в передаче воздействия излучения ММ-диапазона на биообъекты // Биофизика. 2001. - № 4. - с. 513-518.

33. Казакова Л. Г. Анализ клеточного состава крови у крыс при низкоинтенсивном крайне высокочастотном электромагнитном облучении // Physics of the Alive. 1999. - Vol.7, №1. -P.114-117.

34. Корякин M. В. Структурный анализ причин мужского бесплодия / Молекулярные исследования мужской субфертильности / М. В. Корякин, А. С. Акопян, А. А. Николаев. Астрахань, 2000. - С. 19-40.

35. Ковалев А. А., Пресняков С. В., Якунин В. В. Взаимодействие различных КВЧ-волн нетепловой интенсивности в организме человека // Миллиметровые волны в биологии и медицине. -2002. №3. - С.12-23.

36. Комарова JI. К., Егорова Г. ИБайкина JI. А. Применение миллиметровых волн низкой интенсивности при язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки // Вопросы курортологии. -1993. №5. - С. 28-30.

37. Коновалов О. Е. Методические подходы к изучению бесплодных браков. // Здравоохранение РФ. 1985. - №7. - С. 18-20.

38. Коренева Л. Г.,Гайдук В.И. О принципиальной возможности резонансного воздействия сверхвысокочастотных колебаний на гемоглобин. // Доклады АН СССР. -1990. с .4 63-4 68.

39. Котровская Т. И. Сенсорные реакции человека при действии слабого электромагнитного стимула // Миллиметровые волны в биологии и медицине. 1994. - №3. - С. 32-38.

40. Котровская Т. И. Восприятие человеком электромагнитных полей в зависимости от его индивидуальных особенностей: автореф. дис. . канд. биол. наук. Москва: ИВНД и НФ РАН, 1996. - 39 с.

41. Кузнецов А. П., Липатова Я. А. Лабораторные критерии фертильности эякулята // Клиническая лабораторная диагностика. 1998. - № 5.1. С.11-15.

42. Биомедицинская радиоэлектроника-2006-№4с.121-124

43. Лебедева Н. Н. Реакции центральной нервной системы человека на электромагнитные поля с различными биотропными параметрами: автореф. дис. . д-ра биол. наук. М. : ИВНД и НФ РАН, 1992. - 27 с.

44. Луцкий Д. Л. Морфологическое исследование эякулята. / Д. Л. Луцкий, А. А. Николаев. -Астрахань, 1999.

45. Луцкий Д. Л. Корреляция биохимических и физико-химических свойств спермы и морфо-функциональных характеристик сперматозоидов. / Молекулярные исследования мужской субфертильности. / Д. Л. Луцкий, А. А. Николаев. Астрахань, 2000. - С.41-58.

46. Луцкий Д. Л., Николаев А. А. Исследование межмолекулярных и молекулярно-клеточных взаимодействий в эякулированной сперме// Проблемы репродукции -2004 -№ 4 с.73-75

47. Мамина В. П., Семенов Д. И. Метод определения количества сперматогенных клеток семенника в клеточной суспензии. // Цитология. 197 6. -№ 7. - С. 913-915.

48. Саркисов Д. С. Микроскопическая техника. / Д. С. Саркисова, Ю. Л. Перов. М., 1996.

49. Николаев А. А. Биологическое и биохимическое исследование эякулята. / Д. JT. Луцкий, А. А. Николаев. Астрахань, 1999.

50. Николаев А. А. Биохимическое и иммунохимическое изучение белков семенной плазмы человека: автореф. дис. . д-ра мед. наук. Астрахань, 1994. - 31 с.

51. Петров И. Ю. Стимуляция процессов жизнедеятельности в растениях микроволновым излучением //Миллиметровые волны нетепловой интенсивности в медицине: мат. симп. М., 1991. - С. 97-98.

52. Петросян В. И. Взаимодействие физических и биологических объектов с электромагнитным излучением КВЧ-диапазона. / В. И. Петросян, Ю. В. Гуляев, Э. А. Житенева и др. // Радиотехника и электроника. М., 1999. Вып.1. - С.127-134.

53. Петросян В. И. Физика взаимодействия ММ-волн с биологическими объектами // Миллиметровыеволны в медицине и биологии: мат. симп. М., 2000. - С.140-143.

54. Плетнев С. Д. Применение электромагнитных волн мм-диапазона в клинической медицине // Миллиметровые волны в медицине и биологии: мат. симп. М., 2000. - С.9-10.

55. Пигель Т. Б. Показатели биологической нормы лабораторных животных (крыс) /Т. Б. Пигель, А. В. Харабаджахьян, Н. А. Новодворжкиной. -Ростов-на-Дону, 1998.

56. Показатели биологической нормы у лабораторных животных в токсикологическом эксперименте. /И. М. Трахтенберг, Р. Е. Сова, В. О. Шефтель, Ф. А. Оникиенко. М., 198 8.

57. Пославский М. В. КВЧ-терапия при различных вариантах течения язвенной болезни желудка // Миллиметровые волны в медицине и биологии: мат. симп. М., 1998. - С. 63-64.

58. Пресман А. С. Электромагнитные поля и живая природа. / А. С. Пресман- М. : Наука, 1968. -28 с.

59. Пуляева Е. Л., Ветохина С. В. КВЧ-терапия при лечении генитального герписа // Миллиметровые волны в биологии и медицине. 2002. -№ 4. -С. 55-56.

60. Райцина С. С. Сперматогенез и структурные основы его регуляции. / С. С. Райцина М., 1995 .87 . Резиков О. Г., Демченко В. М., Нищименко О.

61. B. // Ф1зл.ологический журнал 1976. - № 5.1. C. 616-621.

62. Рузен-Ранге Э. Сперматогенез у животных: пер.с англ. / Э. Рузен-Ранге- М., 1999. 8 9. Руденко Т. Л. Физиотерапия. / Т. Л. Руденко-Ростов-на-Дону, 2000. 352 с.

63. Риктинский О. Л. Руководство по андрологии /О.Л. Риктинский. Л., 1990.

64. Синицын Н. И. г Петросян В. И., Ёлкин В. А. и др. Особая роль системы «миллиметровые волны- водная среда» в природе // Биомедицинская радиоэлектроника. 1999. - № 1. - С. 3-21.

65. Ситько С. П. Введение в квантовую медицину. / С. П. Ситько, JI. Н. Мкртчян Киев: Паттерн, 2004. - 147 с.

66. Смирнов Р. В. Влияние ослабленного магнитного поля Земли на клеточный состав эпителио-сперматогенного слоя яичек крыс//Андрология и генитальная хирургия -2004.

67. Смолянская А. 3. Резонансные явления при действии электромагнитных волн миллиметрового диапазона на биологические объекты; справ// УФН-2003-т.10-№2-с.232-23 6.

68. Смолянская А. 3. Действие электромагнитного излучения ММ диапазона на функциональную активность некоторых генетических элементов бактериальных клеток // Микробиологический вестник 2006. - Т.43, №.3. - С.79-84.

69. Субботина Т. И. Влияние высокочастотных электромагнитных излучений на репродуктивнуюфункцию; справ.: в 1 т / Т. И. Субботина, В. Н. Ткаченко, А. А. Яшин- М., 20 02.

70. Тамбиев А. X. Стимулирующее действие электромагнитного излучения миллиметрового диапазона низкой интенсивности на ростмикроводорослей // Вестник Московскогоуниверситета. 1990. - № 1. - С.15-19.

71. Тамбиев А. X. Изменение ростовых характеристик при воздействии на микроводоросли электромагнитного излучения миллиметрового диапазона низкой интенсивности // Вестник Московского университета. 1990.- № 2. С. 23-28.

72. Тамбиев А. X. г Кирикова Н. Н. Перспективы применения электромагнитного излучения миллиметрового диапазона в фотобиотехнологии // Миллиметровые волны в биологии и медицине.- 1992. № 1. - С. 35-39.

73. Тамбиев А. X. Изменение фотосинтетической активности микроводорослей под влиянием электромагнитного излучения. /А. X. Тамбиев, Н. Н. Кирикова, О. М. Лапшин // Физиология растений. М., 2002. - Вып.5. - С.12-17.

74. Тарасова О. В. Изменение состояния системы гемостаза у больных атопическим дерматитом под влиянием ЭМИ ММД нетепловой интенсивности: автореф. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 1997. - 25 с.

75. Ухов Ю. И. Морфометрические методы в оценке функционального состояния семенников. // Арх. анат., гистол. и эмбриол. 1983. - № 3. - С. 66-73.

76. Черкасов И. С. Биомедицинские эффекты миллиметровых волн / / Офтальмологический журнал. 1998. - № 3. - С.187-190.

77. Чернавский Д. С. О нейрофизиологическом механизме КВЧ-пунктурной терапии / / Препринт. М.: ФИАН, 1991. - №150. - С. 23-31

78. Чернавский Д. С. г Карп В. П., Родштат И. -В. Нейрокомпьютинг и реальные нейросети спинального и церебрального уровней // Биомедицинская радиоэлектроника. 1999. - № 2. - С. 27-32.

79. Шуб Г. М. Действие миллиметровых волн нетеплового диапазона на обменные процессы бактерий в экспериментах in vitro и in vivo: автореф. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 2004. - 34 с.

80. Яшин А. А. Модели энергетических процессов в клетках организма при КВЧ облучении,использующие эффект стохастического резонанса // Вестник новых медицинских технологий. -2005. № 2. - С. 18-24.

81. Abey W. R. Frecuency and power window in tissue interaction with weak electromagnetic fields // Proc. IEEE. 2000. - Vol.79, №1. -P.119.

82. Adamopoulos D. A. , Pappa A., Nicopoulou S. et al. Seminal volume and total sperm number trends in men attending subfertility clinics in the greater Athens area during the period 1977-1997. // Hum. Reprod. 1999. - №9. -P.1936-1941.

83. Apostoli P. Critical aspects of male fertility in the assessment of exposure to lead // Scand. J. Work. Environ. Health. 2003. - Vol.25. -P.40-43.

84. Ban Y., Komatsu Т., Kemi M. et al. Testicular spermatid and epididymal sperm head counts as an indicator for reproductive toxicity in rats. // Exp. Anim. 1995. -Vol.44, №4. - P.315-322.

85. Baccetti В., Burrini A. G., Collodel G. et al. Immunocytochemistry and sperm pathology. // J. Submicrosc. Cytol. Pathol. 1988. -№1. - P.209-224.

86. Carreau S. La cellule de Sertoli. Aspects fonctionnels compares chez le rat, le pore etl'homme. // Ann. Endocrinol. Paris. 19 94. -Vol.55, №6. - P.203-220.

87. Chavarrla M. E. El factor masculino. II. El espermatozoide. Estructura у funcionamiento. // Ginecol. Obstet. Мех. 2006. - №85. -P.413-421.

88. Chavarria M. E., Reyes A., Rosado A. El factor masculino. III. Importancia, diagnostico у perspectivas. // Ginecol. Obstet. Мех. 2006. - №86. - P.422-429.

89. Chapin R. E. The reproductive toxicity of boric acid. // Environ. Health. Perspect. -1994. Vol.102, Suppl.7. - P.87-91.

90. Chowdhury A. R. Spermatogenic and steroidogenic impairment after chromium treatment in rats. // Indian. J. Exp. Biol. -2005. Vol.33, №7. - P.480-484.

91. De~Franca L. R. Morphometry of rat germ cells during spermatogenesis. // Anat. Rec. -1995. Vol.241, №2. - P.181-204.

92. Francavilla S.r Bruno В., Poccia G. et al. Fluorescence microscopic detection of acrosin in different morphologic types of human spermatozoa // Andrologia. 1998. - №4. -P.344-350.

93. Frohlich H. Bose condensation of strongly excited longitudinal electric modes // Phys. Lett. 19 68. - №26A. - P.402.

94. Garcia-Diez L. C.r Esteban-Ruiz P. F., Villar E. et al. Enzyme and hormonal markers in the differential diagnosis of human azoospermia // Arch. Androl. 1992. - №3. -P.181-194.

95. Gorban E. N. , Tronko N. D., Pasteur I. P. el al. The influence of electromagnetic ultrahigh-frequency radiation on absorption of iodine by the organic culture of thyroidgland // Physics of the Alive. 1996. - V.4, №1. - P.133-136.

96. Grundler W. , Keilmann F. Sharp resonances in yeast grows prove nonthermal sensitivity to microwaves // Physical Review Lett. 2005. Vol.72, №6. - P.1214-1216.

97. Gusrin J. F. Enzyme comparative study of spermatozoa and seminal plasma in normal and subfertile man // Arch. Androl. 1997. - №3. - P.251-257.

98. Harrison S. Sperm acrosome status and sperm antibodies in infertility see comments. //N

99. J. Urol. 1998. - №5. - P.1554-1558.

100. Jorgensen N. , Auger J., Giwercman A. et al. Semen analysis performed by different laboratory teams: an intervariation study // Int. J. Androl. 1997. - №4. - P.201-208.

101. Jegou B. Paracrin control of epididimal function.//Fert.Steril 2007 -v97-N 3-p.l42-149

102. Kaneto M. Epididymal sperm motion as a parameter of male reproductive toxicity: sperm motion, fertility, and histopathology in ethinylestradiol-treated rats. // Reprod. Toxicol. 1999. -Vol.13, №4. - P.279-289.

103. Khizhnyak E. P. Ziskin M. C. Temperature Oscillations in Liquid Media Caused by Continuous (Nonmodulated) Millimeter Wavelength Electromagnetic Irradiation //

104. Bioelectromagnetics. 2006. - Vol.27. P.223-229.

105. Khurgin Yu. I. Millimeter Absorption Spectroscopy of Agues Systems // Relaxation Phenomena in Condensed Matter / Ed. W. Coffey. Toronto, 2004. - P.483-543.

106. Kim E. D. Male subfertility: diagnostic and therapeutic advances // Br. J. Urol. 1997. - №4. - P.633-641.

107. Menkveld R. Acrosomal morphology as a novel criterion for male fertility diagnosis: relation with acrosin activity, morphology (strict criteria) , and fertilization in vitro // Fertil. Steril. 1996. - Vol.65, №3. P.637-644 .

108. Novaks textbook of gynecology / Ed. H. W. Jones III, A. C. Wentz, L. S. Burnett. 16th ed. - Baltimore, 1999.

109. Pogany G. С. A Quick Basic computer model of spermatogenesis. // Comput. Biol. Med. -1990. Vol.20, №3. - P.175-183.

110. Vogt P. H. Molecular basis of male (in)fertility // Int. J. Androl. 1997. -Suppl.3. - P.2-10.

111. Zanato V. F.r Martins M. P., Anselmo-Franci J. A. et al. Sexual development of male Wistar rats. // Braz. J. Med. Biol. Res. -1994. Vol.27, №5. - P.1273-1280.