Функциональная морфология рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи в условиях аллоксанового диабета и коррекции его [А]-токоферолом.

Григорьева, Мария Вениаминовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Функциональная морфология рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи в условиях аллоксанового диабета и коррекции его [А]-токоферолом.
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Функциональная морфология рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи в условиях аллоксанового диабета и коррекции его [А]-токоферолом."

На правах рукописи

Григорьева Мария Вениаминовна

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ МОРФОЛОГИЯ РЫХЛОЙ ВОЛОКНИСТОЙ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ КОЖИ В УСЛОВИЯХ АЛЛОКСАНОВОГО ДИАБЕТА И КОРРЕКЦИИ ЕГО а-ТОКОФЕРОЛОМ

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

003482670

Москва-2009

003482670

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Новгородский государственный университет имени Ярослава Мудрого»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Прошина Лидия Григорьевна

Официальные оппоненты:

Заслуженный деятель науки, академик РАЕН,

доктор медицинских наук, профессор Швалсв Вадим Николаевич

Член-корреспондент РАЕН

доктор медицинских наук, профессор Дубовая Татьяна Клеониковна Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Московская медицинская академия имени И.С. Сеченова»

Защита состоится г в 1_1_ часов на заседании диссертационного

совета Д 212.203.08 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, Д. 6.

Автореферат разослан 2009г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент

О. Б. Саврова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Сахарный диабет - одна из ведущих проблем современной медицины. Большая социальная значимость диабета состоит в том, что это заболевание приводит к ранней инвалидизации и летальности (Дедов И. И. и соавт., 2005; Van Damme Н. et al., 2001). Основным условием развития сахарного диабета I типа является инсулиновая недостаточность (Флеров М. А. и соавт., 2003; Дедов И. И. и соавт., 2005; Dias A. S. et al., 2005; Toshihiko Osawa et al., 2005; Jeffrey I. Mechanick., 2006; Nir T. et al., 2007; Teta M. et al, 2007). Гипоинсулинемия приводит к выраженным нарушениям обмена веществ, что вызывает структурные и функциональные нарушения на всех уровнях целостной системы организма, в частности, на тканевом и клеточном. В связи с этим внимание исследователей обращено на реактивные изменения рыхлой волокнистой соединительной ткани в условиях нарушения углеводного обмена (Балдаруева Г. В., 1988; Подгребальный А. Н., 2005). Эта ткань вместе с кровью и лимфой образует, как известно, внутреннюю среду организма, характеризующуюся в норме относительным постоянством клеточного состава и физико-химических показателей. В ней протекают метаболические и трофические процессы, обеспечивающие нормальную жизнедеятельность органов и организма в целом (Юрина Н. А. и соавт., 1990).

Под влиянием тех или иных повреждающих воздействий, в рыхлой волокнистой соединительной ткани происходят структурные перестройки, направленные на сохранение динамического равновесия тканевой системы (Виноградов В. В. и соавт., 1980; Серов В. В., Шехтер А. Б., 1981; Воробьева Н. Ф., 2007; 2008; Правоторов Г. В., 2008; Омельяненко Н. П., Слуцкий Л. И., 2009; Kielty С. М., 2002; Ramirez F. 2004; Bhide V. М. et al., 2005; Kinga A. Powers et al., 2006; Salamon A., 2007; Wong T. et al., 2007; Daley W. P., 2008; Glares T. et al., 2009).

В процессе адаптации к экстремальным воздействиям ведущая роль принадлежит гормональной регуляции обменных процессов и физиологических функций (АкмаевИ. Г. и соавт., 1993). Изучение чувствительности отдельных компонентов соединительной ткани к гормональным воздействиям представляет самостоятельный интерес, а также связано с актуальной проблемой поиска механизмов регуляции ее системных реакций (Ahmadi К. et al., 2005). В литературе имеются сведения о влиянии на функции клеток соединительной ткани гормонов надпочечника, щитовидной железы (Радостина А. И., 1988; Прошина JI. Г., 1987; Юрина Н. А., 1990). Однако, действие инсулина на состав популяции клеток соединительной ткани изучено недостаточно, мало сведений о влиянии измененного обмена углеводов на структурные и функциональные особенности макрофагальной системы. Отсутствуют количественные цитохимические данные об изменениях метаболической активности основных клеточных элементов соединительной ткани под влиянием нарушения углеводного обмена, вызванного сахарным диабетом.

По данным ряда авторов, диабет характеризуется нарушением как углеводного, так и липидного обмена, что приводит к увеличению содержания токсических продуктов ПОЛ в крови и тканях (Корчин В. И., 1992; Косенко Е. А. и соавт., 1999; Колесник Ю. М. и соавт., 2004; Дедов И. И. и соавт., 2005; Szkudelski Т., 2001; Jeffrey I., 2006; Ann. N. Y., 2005). Повышение ПОЛ сопровождается снижением активности эндогенных «антиперекисных» ферментных систем и дефицитом

Г\

антиоксидантов (Ухина Т. В. и соавт., 1993; Архипенко Ю. В. и еоавт., 2004; Zamora R. et al., 1997; Lin.W. et al., 2000; Maeda Y. et al., 2000). Наибольшего внимания среди значительного арсенала антиоксидантов (синтетических и природных), заслуживает альфа-токоферол, как естественный для организма и отличающийся относительно невысокой стоимостью (Волкова Н. А., 2003; Гаврилова J1. В., 2003; Макарова М. Ю., 2003; Смирнов JI. Д. и соавт., 2003; Lin W. et al., 2000; Haidara M. A., 2009). Роль 1 структурных элементов рыхлой волокнистой соединительной ткани в адаптивных реакциях организма при нарушениях гомеостаза, вызванных диабетом, изучена недостаточно, а имеющиеся сведения иногда противоречивы. Вышеизложенное послужило предпосылкой к изучению целесообразности применения альфа-токоферола в качестве препарата, позволяющего корректировать ответную реакцию структурных компонентов соединительной ткани на диабет с целью повышения адаптивных возможностей организма к нарушению обмена веществ и окислительно-восстановительного гомеостаза.

Цель исследования

Изучить функциональную морфологию структурных компонентов соединительной ткани кожи в условиях экспериментального аллоксанового диабета и введения а-токоферола.

Задачи исследования:

1. Изучить показатели процессов ПОЛ в плазме крови и в поджелудочной железе и активность ферментов антиоксидантной системы защиты организма в условиях аллоксанового диабета, диабета на фоне а-токоферола.

2. Исследовать структурную организацию рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи (клеток и межклеточного вещества) в условиях экспериментального аллоксанового диабета.

3. Выявить и сопоставить динамику структурной организации и метаболической активности клеток рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи крыс линии Вистар при введении а-токоферола, при аллоксановом диабете и коррекции его антиоксидантом (а-токоферол).

4. Провести анализ динамики состояния периферической крови (лейкоцитарной формулы, содержания общих липидов) при экспериментальных воздействиях (аллоксановый диабет и диабет на фоне а-токоферола).

5. Сопоставить динамику липидного обмена, а так же степень участия в нем макрофагов СТ кожи при диабете и коррекции его а-токоферолом.

6. Сопоставить динамику компонентов межклеточного вещества рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи при аллоксановом диабете и коррекции его а-токоферолом.

Научная новизна диссертации. Впервые изучена морфология компонентов рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи при экспериментальном аллоксановом диабете и введении а-токоферола. Впервые сопоставлены изменения клеток и межклеточного вещества, а так же показана динамика метаболической активности структурных компонентов рыхлой волокнистой соединительной ткани

кожи (клеток, основного аморфного вещества и волокон) при экспериментальном диабете и его коррекции а-токоферолом. Впервые сопоставлена динамика липидного обмена с накоплением токсических продуктов ПОЛ и проанализирована степень участия клеток соединительной ткани кожи при экспериментальном диабете и диабете на фоне а-токоферола. Впервые проведен сравнительный анализ структуры эндокринного аппарата поджелудочной железы при аллоксановом диабете и коррекции его а-токоферолом.

Теоретическая и практическая значимость работы. Комплекс морфологических, морфометрических, биохимических и гистохимических параметров, полученных в ходе работы может быть использован в экспериментальных исследованиях, где предметом изучения является соединительная ткань, ее клеточные элементы и межклеточное вещество.

Материалы позитивного влияния антиоксидантов и, в частности, а-токоферола на эффекторные звенья тканевого гомеостаза (макрофаги, моноциты, лимфоциты) могут быть приняты во внимание при комплексной терапии сахарного диабета. Результаты экспериментальных исследований, проведенных на молекулярном, клеточном и тканевом уровне позволили установить, что перестройка макрофагов, фибробластов, тучных клеток, структур межклеточного вещества соединительной ткани кожи носит защитно-приспособительный характер. Реакция соединительнотканных компонентов тесно связана с гормональным фоном (содержанием инсулина) и зависима от состояния эндокринного аппарата при диабете, что может быть использовано при разработке положений функциональной морфологии соединительной ткани в разделах «соединительные ткани», «клеточные взаимодействия в адаптивных реакциях», «эндокринная система» фундаментальной и прикладной гистологии.

Положение о стимулирующем влиянии а-токоферола на развертывание защитно-компенсаторных механизмов клеточных элементов соединительной ткани, в частности, макрофагов-моноцитов, имеет существенную практическую значимость использования природного антиоксиданта в комплексном лечении сахарного диабета.

В эндокринологии, в разделах, посвященных изучению патологии поджелудочной железы следует принять во внимание положительный эффект а-токоферола как на эндокринный аппарат поджелудочной железы, так и на элементы соединительной ткани кожи.

Внедрение результатов работы в практику. Полученные материалы по функциональной морфологии СТ могут быть использованы в учебном процессе лекционного курса и практических занятий медицинских ВУЗов и факультетов университетов кафедрами гистологии, физиологии, патофизиологии и патологической анатомии, о чем имеются акты внедрения.

Данные биохимии окислительно-восстановительного и углеводного гомеостаза могут быть востребованы в научно-исследовательских лабораториях, изучающих вопросы состояния системы ПОЛ-АОЗ, атак же углеводный обмен.

полученных параметров клеток и межклеточного вещества соединительной ткани в процессах адаптации.

Результаты работы могут бьггь использованы при обосновании и назначении антиоксидантов в комплексной терапии диабета.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 165 страницах машинописного текста, состоит из введения, 4-х глав, включающих обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования и их обсуждение, выводов, указателя литературы. Диссертация содержит 65 рисунков, 17 таблиц. В работе использовано 155 отечественных и 140 иностранных источников литературы.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Структурные элементы рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи вовлекаются в защитно-компенсаторные реакции организма при повышении ПОЛ. Альфа-токоферол стабилизирует систему ПОЛ-АОЗ при диабете, снижает уровень токсических метаболитов ПОЛ, что усиливает защитно-компенсаторные возможности структур соединительной ткани.

2. Аллоксановый диабет вызывает прирост процентного числа макрофагов соединительной ткани кожи на 10 сутки развития экспериментального диабета, а так же снижение численности фибробластов и тучных клеток. Увеличение численной плотности макрофагов происходит с повышением их метаболической активности. Последующий прирост макрофагов сопровождается увеличением ядерно-цитоплазматического индекса и снижением их метаболического профиля. Увеличение численности макрофагов осуществляется в основном за счет клеток моноцитарного происхождения. Корригирующее воздействие а-токоферола на окислительно-восстановительный гомеостаз проявляется позитивной реакцией структурных компонентов соединительной ткани кожи, так как протекает в условиях снижения уровня токсических метаболитов ПОЛ.

3. Диабет приводит к увеличению содержания моноцитов периферической крови на 10 сутки с последующим их падением на 14 сутки, а так же снижению численности иммунокомпетентных клеток - лимфоцитов. Превентивное и последующее введение а-токоферола поддерживает высокий уровень моноцитов и лимфоцитов на протяжении всего эксперимента по сравнению с диабетической группой животных.

4. Экспериментальный аллоксановый диабет вызывает увеличение общих липидов крови, содержание которых снижается при введении а-токоферола. Сравнительный анализ участия структур соединительной ткани в коррекции нарушенного липидного обмена при диабете позволяет выделить макрофаги, активность которых проявляется в динамике их численной плотности, содержания липидов в цитоплазме и метаболической реакции липолитических ферментов. Введение а-токоферола на фоне диабета оптимизирует функционирование макрофагов, что способствует приближению показателей липидного обмена к контрольным значениям.

5. Экспериментальный аллоксановый диабет увеличивает содержание волокнистых компонентов в составе СТ кожи. Введение а-токоферола в условиях экспериментального диабета приводит к снижению уровня волокон сосочкового слоя дермы кожи на фоне прироста матрикса межклеточного вещества соединительной ткани.

6. Альфа-токоферол влияет на соотношение и метаболическую активность клеток СТ кожи, что проявляется повышением содержания макрофагов и снижением фибробластов и тучных клеток. Альфа-токоферол активирует пентозофосфатный путь метаболизма макрофагов и фибробластов.

Введение а-токоферола - экзогенного антиоксиданта представляется целесообразным в комплексной терапии диабета, а так же уместно для повышения резистентности организма в условиях нарушенного углеводного, липидного обменов и окислительно-восстановительного гомеостаза.

Основные результаты диссертационного исследования докладывались и обсуждались на: XIII международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» - Москва, 12-15 апреля 2006, секция фундаментальная медицина; VIII конгрессе международной ассоциации морфологов - Орел, 15-17 сентября 2006; VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и Образование в XXI веке» - Москва, 23-26 ноября 2006; 6-й Всероссийской научной конференции «Бабухинские чтения в Орле» - Орел, 28-29 марта, 2007; конференции посвященной 100-летию Л.И. Фалина - Москва 17-18 мая, 2007; II международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения - 2007» - С,- Петербург 5-7 декабря, 2007; XII научно-практической конференции сотрудников и студентов ИМО НовГУ. - В. Новгород, апрель, 2008; IX конгрессе МАМ (Международной ассоциации морфологов). - г. Бухара, республика Узбекистан 14-17 мая, 2008; IX Международной научно-практической конференции «Здоровье и Образование в XXI веке» - Москва, 27-30 ноября 2008; 7-й Всероссийской научной конференции «Бабухинские чтения в Орле» - Орел, 4- 5 июня, 2009; VI Всероссийском съезде АГЭ-Саратов, 23-25 сентября 2009.

Апробация работы осуществлена на расширенном совместном заседании кафедр морфологии человека, общей патологии, биологии и биологической химии, микробиологии и заседании проблемной комиссии института медицинского образования Новгородского государственного университета имени Ярослава Мудрого.

По материалам диссертации опубликована 21 научная работа, в том числе 6 публикаций в журналах, включенных в «Перечень ВАК РФ», 7 - в материалах научных конференций с международным участием. Все материалы, представленные в диссертации и опубликованные в печати, собраны и проанализированы лично автором.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы. Экспериментальная работа проведена на белых крысах-самцах линии Вистар с исходной массой 180-220 г. Исследовали 4 группы животных (в количестве 205 шт.):

1. Группа интактных животных - содержались на стандартном рационе вивария при свободном доступе к воде.

2. Группа животных с пониженным уровнем инсулина в крови. Модель гипоинсулинемии воспроизводилась путем введения аллоксана 40 míi/кг (фирма «Lachema», Чехия) (Корчин В. И., 1992; Абикенова Ф. С., 1999; Колесник Ю. М. и соавт., 2004; Szkudelski Т., 2001).

3. Группа животных с введением а-токоферола (фирма «Serva») в дозе 50 мг/кг массы (Дорошкевич Н. А. и соавт., 1989; Кайнова Г. М. и соавт. 1990; Прошина Л. Г., 2004). Альфа-токоферол вводили перорально.

4. Группа животных с гипоинсулинемией на фоне антиоксиданта (а-токоферол).

Клеточные элементы рыхлой соединительной ткани кожи исследовали на тотальных пленочных препаратах, приготовленных из полнослойных кусочков кожи спины крыс после 20-24-часовой фиксации в 12% растворе нейтрального формалина. Препараты окрашивали железным гематоксилином Вейгерта. Для идентификации тучных клеток использовали окраску толуидиновым синим. Под световым микроскопом определяли процентное число макрофагов, фибробластов, тучных и других клеток CT кожи, а так же относительное число макрофагов на 1000 фибробластов - макрофаг-фибробластический индекс (МФИ). Морфометрические исследования соединительнотканных компонентов (в том числе ультраструктуры клеток) и эндокринного аппарата ПЖ проводили согласно основным принципам стереологии с учетом репрезентативности изучаемых признаков, в соответствии с литературными источниками (Стефанов С. Б., 1974; Быков В. JI., 1979; Автандилов Г. Г., 1990; Weibel Е. R., 1969).

Для оценки метаболической активности клеток была исследована активность следующих ферментов: лактатдегидрогеназы (ЛДГ); бета-оксибутират-дегидрогеназы (ОБДГ); глкжозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г-6-ФДГ); неспецифической эстеразы (НЭ) по Э. Пирсу (1962); кислой фосфатазы (КФ) по Лойда З.и соавт. (1982). Для оценки общей метаболической активности клеток соединительной ткани (фибробластов и макрофагов) высчитывали их метаболический профиль (МП). Для этого определяли среднюю суммарную активность всех исследуемых ферментов кроме КФ. Активность ферментов определяли по оптической плотности участков цитоплазмы, измеряемой на микроскопе ЛЮМАМ И-2 с фотометрической насадкой ФМЭЛ-1.

Ультраструктура макрофагов оценивалась в кусочках рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи на тотальных пленочных препаратах. Образцы препаратов для электронной микроскопии фиксировали 1,5% глютаровым альдегидом (0,1 М фосфатный буфер, pH = 7,4). Постфиксацию производили в 1,5% четырехокиси осмия. Электронно-микроскопическое исследование проводили на микроскопе JEM 100СХ. Для оценки функциональной активности макрофагов, а так же их участия в липидном обмене определяли объемную плотность лизосом (VvL) и объемную плотность липидных включений (iLip), а так же подсчитывали количество клеток, содержащих липидные включения (nLip).

На гистологических срезах кожи, приготовленных по общепринятым методикам и окрашенных гематоксилином-эозином, оценивали процентное соотношение клеток и межклеточного вещества рыхлой волокнистой соединительной ткани сосочкового слоя дермы. Морфологическое исследование проводилось с помощью светооптических методов. Светооптически препараты изучались на микроскопе МБИ-15. Съемку производили с помощью малоформатной цветной камеры (CCD) - видеоокуляра «ORBITOL - MVE 50», а так же со светового биологического микроскопа XS-90 цифровой камерой Olympus модель Е-510, объектив ZD - 35 при увеличении xl.

Диеновые конъюгаты (ДК) в плазме крови выявляли по методу Гаврилова В. Б. и Мишкорудной М. И. (1983), в гомогенатах поджелудочной железы - по Стальной И. Д. (1977). ТБК-активные продукты (малоновый диальдегид (МДА)) - по метод Гаврилова В. Б. и соавторов (1987) в модификации Коробейниковой Э. Н. (1989 Активность супероксиддисмутазы (СОД) определяли в поджелудочной железе, используя систему ксантин-ксантиноксидаза для генерирования супероксидног

анион-радикала (Beauchamp С., Fridovich I, 1971). Активность глутатионпероксидазы (ГП) - по методу Paglia D. Е., Valentine W. (1967) в модификации Ланкина В. 3. и Гуревича С. М. (1976). Активность глутатионредуктазы (ГР) выявляли по скорости убыли НАДФН вследствие восстановления окисленного глутатиона в процессе инкубации при 30°С (Pinto Е. R., Bartley W., 1969).

Для подтверждения развития экспериментального диабета исследовали гистологические препараты хвостового отдела поджелудочной железы, окрашенные гематоксилином и эозином, а так же альдегид - фуксином. Определяли содержание глюкозы в сыворотке крови глюкозооксидантным методом. Радиоиммунным методом проводили определение иммуно-реактивного инсулина (ИРИ) в плазме крови. Оценивали глюкозо-инсулиновый индекс (ГИИ) - отношение концентрации глюкозы в ммоль/л к концентрации ИРИ в мкЕд/мл. В плазме крови оценивали содержание общих липидов (ОЛ) с помощью стандартного набора Био Тест фирмы «Lachema» (Чехия). Учитывали динамику массы животных в ходе эксперимента. Определяли процент летальности.

В мазках крови (фиксация метанолом, окраска азур-эозином по Романовскому-Гимза) проводили подсчет лейкоцитарной формулы.

Обработку результатов проводили с помощью компьютерных программ Microsoft Exsel 2002, Statistica 6. Достоверность различий сравниваемых величин определяли с помощью t-критерия Стьюдента. При р<0,05 различия между средними считались достоверными. Характер корреляционной связи оценивали как: слабый при г < 0,5; средний (от 0,5 до 0,7); сильный (от 0,7 до 0,9) или тесный (от 0,9 до 1).

Результаты и их обсуждение. Установленное нами процентное содержание клеток соединительной ткани у интактных животных в основных своих проявлениях согласуется с результатами исследований других авторов (Виноградов В.. В. 1977; 1989; Балдаруева Т. В., 1988; Прошина Л. Г., 1983, 1999; Воробьева Н. Ф., 2007; 2008). По данным наших исследований в клеточной популяции CT кожи преобладают фибробласты и макрофаги, небольшой процент приходится на тучные и другие клетки. У интактных животных активность всех исследуемых нами ферментов: ОБДГ, НЭ, ЛДГ, Г-6-ФДГ была значительно выше в макрофагах по сравнению с фибробластами. Метаболический профиль (МП) макрофагов составил 30,2±0,3 усл. ед., фибробластов -17,2±0,6 усл. ед. Причем, наиболее выражена активность ферментов: НЭ - 37,5±0,3 усл. ед.; ЛДГ - 32,6±0,3 усл. ед.; Г-6-ФДГ - 27,8±0,4 усл. ед. Уровень именно этих ферментов, связанных с основным путем окисления, является наиболее информативным показателем общего метаболизма клетки, показателем степени ее функциональной активности (Воробьева Н. Ф., 2007). В наших исследованиях соотношение ЛДГ/Г-6-ФДГ у интактных животных составило 1,2 в макрофагах и 1,1 в фибробластах, что подтверждает ведущую роль гликолиза для этих клеток. Исследование у интактных животных активности КФ, как маркерного для клеток макрофагального ряда, показало невысокое его значение по сравнению с другими ферментами. Ультраструктурная организация макрофагов согласуется с описаниями других исследователей (Kapp Я., 1978; Правоторов Г. В., 1979; Новиков В. Д., 2004). В цитоплазме выявляются хорошо развитые ЭПС, вакуолярно-лизосомальный аппарат, митохондрии. Обращает внимание рельефно-выраженная поверхность клеток с различным количеством цитоплазматических выростов. Реакция на активность пероксидазы отрицательная.

Состояние ПОЛ уравновешивается работой антиоксидантных ферментов. Соотношение клеток и межклеточного вещества характеризуется преобладанием последнего и согласуется с данными Серова В. В., Шехтера А. Б. (1981), Юриной Н. А., Радостиной А. И. (1990). Особенности структурной организации поджелудочной железы интактных животных согласуются с описаниями других исследователей (Колесник Ю. М. и соавт., 2004; Обухова Л. А. и соавт., 2006; Пальчикова Н. А. и соавт., 2006; Bouwens L. et al., 2005; Cabrera Over et al., 2006).

Введение аллоксана приводило к развитию диабета у экспериментальных животных. Уровень содержания глюкозы в крови у крыс, получавших диабетогенный препарат, в наших исследованиях составил на 10 сутки - 19,4±0,2 ммоль/л на 14 и 21 сутки - 18,20±1,01 ммоль/л. Глюкозо-инсулиновый индекс (ГИИ) существенно превышал единицу, так как уровень ИРИ не поднимался выше 2,37 мкЕд/мл. Летальность животных на протяжении эксперимента составляла от 31% до 38%. Потеря массы имела колебания от 2,3±0,3% на 10 сутки до 8,9±0,6% на 21 сутки после введения аллоксана. Такая картина экспериментального аллоксанового диабета согласуется в основных своих положениях с данными Колесника Ю. М. и соавторов (2004), Обуховой Л. А. (2006), Пальчиковой Н. А. (2007). Введение аллоксана приводило к разрушению В-клеток панкреатических островков. При исследовании препаратов поджелудочной железы обнаружено повреждение эндокринной части, что проявилось деструктивными изменениями, деформациями и появлением зон некроза в островках Лангерганса, значительным уменьшением их количества (в 1,6 раза), а так же объемной плотности (в 2,9 раза). Реакция на инсулин-содержащие В-клетки отсутствовала, что указывало на угнетение диабетогенным агентом биосинтеза гормона.

Развитие аллоксанового диабета у экспериментальных животных приводило к увеличению процессов ПОЛ. Уровень первичных продуктов - диеновых конъюгатов возрастает в тканях поджелудочной железы (в 1,6 раза) - (рис.1) и в плазме крови (в 2,3 раза) к 10-ым суткам развития диабета. На 14 сутки удерживался на этом уровне в тканях, но снижался в плазме крови. Вторичные продукты (малоновый диальдегид) продолжали сохранять высокий уровень в крови - 8,29±0,17 нмоль/мл плазмы (против 3,82±0,12 нмоль/мл плазмы - у интактных) и тканях поджелудочной железы (203,7±0,35 нмоль/г ткани против 113,4±0,4 нмоль/г ткани соответственно) до конца эксперимента.

Аллоксановый диабет привел к истощению антиоксидантного фонда, что проявилось падением активности антиоксидантных ферментов в тканях поджелудочной железы, в частности, СОД, ГП, ГР. СОД, как ведущий фермент антирадикальной защиты, к 21 суткам экспериментального диабета снижается в 1,6 раза по сравнению с интактными животными. Активность глутатион-пероксидазы (ГП) и глутадион-редуктазы (ГР) уже к 10 суткам исследования снижаются в 2,5 и 2,3 раза соответственно. К 14 и 21 суткам следует их дальнейшее снижение. Подобная динамика антиоксидантных ферментов была описана в тканях печени и почках (Абрамченко В. В., 2001; Архипенко Ю. В., 2004; Maeda Н., 2000).

Аллоксановый диабет вызвал структурно-функциональные изменения соединительной ткани кожи. На 10 сутки отмечали подъём количества макрофагов СТ (на 10%), снижение числа фибробластов (на 3%) и значительное уменьшение количества тучных клеток (на 50%) относительно интактных животных. Максимальное

увеличение процентного содержания макрофагов (на 37%) и снижение фибробластов (на 19%) было отмечено на 14 сутки эксперимента. Соответственно этому возрастает в 1,7 раза МФИ.

g 15

5 10

й-

Интактн. Алл 10 Алл 14 Алл 21

Г~~1ДК в тканях ПЖ • Глюкоза

Рис. 1. Динамика уровня глюкозы в плазме крови и накопления диеновых конъюгатов в тканях поджелудочной железы крыс на фоне экспериментального аллоксанового диабета. (M±s); * - р<0,05 - относительно интактных

Изучение лейкоцитарной формулы крови крыс линии Вистар продемонстрировало достоверное увеличение в 2 раза процентного числа моноцитов на 10 сутки развития экспериментального диабета по сравнению с интактными животными. Мы отмечали сильную положительную корреляцию между процентным содержанием макрофагов СТ кожи и моноцитами крови (г=0,77) на 10 сутки данного эксперимента (рис. 2). Постепенное снижение моноцитов до значений интактных крыс отмечали только к 21 суткам исследования. В процессе развития экспериментального диабета выявлены синхронные изменения содержания макрофагов СТ и моноцитов крови.

Scatterplot: моноциты% vs. макрофвги% (Casewise MD de! et ion) мзкрофвги% = 19,722 + 1,1643 " моноциты% Corrélation: г = ,76917

I ' о 95% confidence |

Рис. 2. Положительная корреляционная зависимость между процентными содержаниями макрофагов соединительной ткани кожи и моноцитов крови крыс на фоне экспериментального аллоксанового диабета, 10 сутки. Уравнение регрессии: у= 19,722+1,1643х

Объемная плотность ядер макрофагов составляла 16,0±0,2 усл. ед. на протяжении всего исследования. Постепенное снижение объемной плотности цитоплазмы макрофагов было прослежено на 10 и 14 сутки экспериментального диабета. Максимальное ее уменьшение (в 1,9 раза) относительно интактных животных приходилось на 21 сутки после введения аллоксана. Таким образом, происходило снижение размеров макрофагов и увеличение ЯЦИ. На 21 сутки развития экспериментального диабета ядерно-цитоплазматический индекс возрастает в 1,9 раза, что указывает на резкое снижение функциональных возможностей макрофагов. Такая динамика ЯЦИ может быть обусловлена:

- во-первых, увеличением в СТ числа молодых, более мелких клеток с бобовидной формой ядра, дифференцирующихся из прекурсоров. Это предположение подтверждает установленный нами факт выраженного моноцитоза в крови животных с аллоксановым диабетом;

- во-вторых, частичным уменьшением объема клетки за счет обезвоживания межклеточного вещества СТ на фоне продолжающейся гипергликемии, вызванной диабетом.

Результаты нашей работы по анализу полнослойных препаратов кусочков кожи крысы продемонстрировали уплотнение сосочкового слоя дермы, снижение его толщины увеличение доли волокон в 1,3 раза к концу исследования (21 сутки). Объем матрикса на 14 и 21 сутки развития аллоксанового диабета снижается в 2 раза относительно значений у интактных крыс.

Образование и накопление первичных продуктов ПОЛ, выявленное на 10 сутки введения аллоксана в наших опытах, вероятно, интенсифицировало функции клеток СТ. В этот период развития экспериментального аллоксанового диабета мы отмечали повышение активности практически всех исследуемых ферментов, как в макрофагах, так и в фибробластах. В макрофагах активность ОБДГ возросла в 1,3 раза, ЛДГ - в 1,2 раза, НЭ - в 1,3 раза, Г-6-ФДГ в 1,2 раза по сравнению с интактными. Значительно возросла активность КФ (в 2,2 раза), которая составляла 40,6±0,29 усл. ед. Кислая фосфатаза (КФ) относится к гидролазам лизосом, поэтому можно предположить о возбуждении лизосомальных мембран макрофагов СТ на фоне развития данного патологического процесса. Наряду с увеличением процентного содержания макрофагов повышается метаболическая активность, обеспечивающая их ведущие функции. Высокий уровень КФ (увеличение в 2,2 раза) можно объяснить активацией макрофагов в ответ на изменения обмена веществ под влиянием диабета, а так же повышением на 10 сутки проницаемости лизосомальных мембран и выходом ферментов в цитоплазму. Выраженность КФ на 14 сутки составила 28,7±0,3 усл. ед., что еще превышало значения у интактных. Однако, на 21 сутки её активность падает и составляет 14,4±0,2 усл. ед. Можно предположить, что в этот период в результате повышения проницаемости плазматической мембраны за счет её деструкции происходит выход ферментов в межклеточную среду.

Развитие экспериментального аллоксанового диабета приводит к постепенному снижению активности всех исследуемых ферментов. На 21 сутки эксперимента все показатели оказались ниже значений интактных животных. Метаболический профиль макрофагов интактных животных составил 30,2±0,3 усл. ед., а у диабетических, на фоне увеличения ЯЦИ, - 26,3±0,2 усл. ед.

Развитие аллоксанового диабета вызвало внутриклеточную перестройку макрофагов СТ кожи. В их цитоплазме выявляются деструктивно измененные митохондрии (укорочение, исчезновение крист), повышение объемной плотности лизосом (в 1,3 раз), появление липидных включений и постепенное увеличение числа клеток их содержащих от 7,9±0,4% на 10 сутки, до 44,5±1,2% на 21 сутки. Последние находятся в прямой зависимости от общего содержания липидов в плазме крови (нарастают от 6,6+0,09 г/л на 10 сутки до 8,20+0,15 г/л на 21 сутки против 2,01 ±0,08 г/л у интактных крыс), т. е. возникшего потока липидов вследствие нарушения их метаболизма, вызванного усилением процессов ПОЛ и развитием диабета, что ие противоречит данным Севергиной Э. С. (2002), ТоБЫЫко Оэаша и соавторов (2005). Увеличение содержания липидов в крови, очевидно, сопровождается их фагоцитозом и утилизацией макрофагами. Отмечено появление макрофагов с пероксидазной активностью вокруг липидных включений. Данные ультраструктурного анализа согласуются с показателями цитохимической активности лииолитического фермента ОБДГ, которая возрастает на 26%.

Существенным оказалось снижение процентного содержания фибробластов с 71,4+0,9% у интактных до 57,9±1,3% на 14 сутки аллоксанового диабета. Снижение содержания тучных клеток на 10 сутки эксперимента до 0,50+0,05% можно объяснить их регистрируемой дегрануляцией. Дальнейшее увеличение их количества на 14 сутки до 2,01±0,08% может происходить в результате активных миграций тканевых базофилов в ответ на патофизиологические изменения: гипоинсулинемию, гипергликемию, увеличение продуктов перекисного окисления в крови и тканях. Таким образом, состояние организма (и в том числе структур СТ) при диабете, можно рассматривать, как экстремальное, а перераспределение тучных клеток между тканями, как важный компонент отраженной реакции, вызванной накоплением в них метаболитов ПОЛ.

Анализ лейкоцитарной формулы в мазках периферической крови у диабетических животных выявил достоверное снижение числа лимфоцитов до 62,0±0,9% на 10-ые и до 63,5±1,1% на 21 сутки (интактные - 68,5±0,9%), а так же повышение числа нейтрофилов до 30,1 ±1,2% относительно интактной группы -26,1+1,1%.

Таким образом, экспериментальный аллоксановый диабет по результатам наших исследований можно рассматривать, как сильный стрессорный фактор, приводящий к нарушению углеводного и липидного обменов, а так же окислительно-восстановительного гомеостаза (повышение ПОЛ, снижение АОЗ). Накопление продуктов ПОЛ (ДК и МДА) на фоне истощения активности ферментов антирадикальной защиты (СОД, ГП, ГР) служит, очевидно, одной из причин, запускающих цепь адаптивно-защитных реакций организма, что проявляется характерными морфологическими и функциональными изменениями структурных элементов соединительной ткани.

На начальных стадиях развития экспериментальной модели диабета происходила активация и мобилизация функциональных возможностей клеточных элементов СТ кожи с целью обеспечения резистентности организма к патологическому процессу и его адаптация к возникшим условиям. На поздних сроках отмечено резкое угнетение их метаболической активности к середине и, особенно, к концу эксперимента. 21 сутки развития аллоксанового диабета определяются, как тяжелая степень патологического процесса. Потеря массы составила 8,9+0,6%. Уровень глюкозы в крови поднимался до

18,3±0,3 ммоль/л, что в 4,3 раза выше значений у интактных крыс (4,29±0,44 ммоль/л), ИРИ - 2,37±0,17 мкЕд/мл, глюкозо-инсулиновый индекс оставался существенно выше единицы. Видимо, к этому периоду происходит снижение внутриклеточных запасов глюкозы. Численность макрофагов превышает их уровень у интактных животных в 1,2 раза, однако, происходит функциональное истощение этих клеток. Об этом свидетельствует: увеличение ядерно-цитоплазматического индекса макрофагов в 1,9 раза; снижение их метаболического профиля (на 13%), перестройка ультраструктурной организации с явлениями деструкции митохондрий (разрушение и исчезновение крист, значительное просветление матрикса) и кумуляцией в цитоплазме липидных включений с активностью пероксидазы вокруг них. Функциональная недостаточность макрофагов, возможно, компенсируется увеличением их численности. Развитие экспериментального аллоксанового диабета приводит к снижению и срыву адаптивных возможностей макрофагов СТ кожи на 21 сутки эксперимента.

Введение а-токоферола (а-ТФл) оказало влияние на клеточный состав СТ кожи. С 6-ых суток до 9-ых происходит постепенное снижение содержания фибробластов от 71,4±0,9% (у интактных) до 65,0±1,3%. Одновременно с этим отмечалось нарастание процентного содержания макрофагов от 26,9±0,8% до 33,5±1,4%. Заметно изменилось количество тучных клеток. На 9 сутки исследования их количество сократилось почти в 1,4 раза. К концу исследования (20-ые сутки) процентное содержание фибробластов, макрофагов и тучных клеток приближается к исходным показателям. Можно предположить, что изменение численности разных клеток на фоне введения а-ТФл является частным проявлением реакции СТ кожи на изменения метаболического гомеостаза.

Увеличение доли макрофагов можно объяснить стимуляцией а-ТФл моноцитопоэза в красном костном мозге. Такое предположение подтверждается анализом показателей лейкоцитарной формулы. На 9 сутки эксперимента моноциты составили 7,3±0,3% по отношению к интактным животным (5,1 ±0,4%).

Соответственно изменениям процентного соотношения клеток СТ меняется и МФИ. Его максимальное значение 510±25% приходятся на 9 сутки исследования. Последующее введение препарата не закрепляет повышенный уровень макрофагов, а параллельно с количеством моноцитов крови возвращает к стационарному уровню. Это можно объяснить процессом адаптации и уравновешиванием физиологических механизмов организма к данному воздействию к 20-ым суткам исследования. Колебания численности макрофагов СТ в ответ на введение а-ТФл демонстрируют высокую мобильность этих клеток в ответ на изменение метаболического обмена.

Метаболический обмен СТ кожи демонстрирует повышение активности ферментов макрофагов и фибробластов. В макрофагах манифестируют ферменты, связанные с энергетическим обеспечением клетки. Максимальную активность ферментов НЭ, ОБДГ, ЛДГ, Г-6-ФДГ отмечали на 14 сутки введения антиоксиданта. Метаболический профиль макрофагов в этот период исследования увеличился до 34,8±0,3 усл. ед. (интакгные - 30,2±0,3 усл. ед.). Активность КФ - маркерного фермента лизосом постепенно снижается, что указывает на процесс стабилизации лизосомальных мембран (учитывая внутрилизосомальную локализацию КФ) и снижение их проницаемости на фоне поступления а-ТФл. При введении препарата коэффициент отношения ЛДГ/Г-6-ФДГ снижается у макрофагов с 1,2 (интактные) до 0,9, у фибробластов от 1,1 до 0,8 на 14 сутки эксперимента. Анализ этих относительных

величин позволяет говорить о снижении процессов гликолиза в макрофагах и фибробластах СТ, характерных интактным животным. В этот период эксперимента в клетках начинают преобладать процессы, свойственные пентозофосфатному шунту. Их маркером служит активность Г-6-ФДГ (Журавлева Т. Б. и соавт., 1978; Лойда 3. и соавт., 1982). Уже на 6 сутки получения антиоксиданта животными отмечали повышение активности данного фермента, как в макрофагах, так и в фибробластах.

Увеличение активности липолитического фермента ОБДГ в макрофагах на 18% по сравнению с интактными животными можно объяснить необходимостью утилизации липидных включений в цитоплазме этих клеток. Прослежена сильная корреляционная зависимость объемной плотности липидных включений в цитоплазме с активностью липолитических ферментов макрофагов (г=-0,82) (рис. 3). Альфа-токоферол привел к повышению числа макрофагов, содержащих липидные включения (в 3 раза) на фоне снижения содержания общих липидов в плазме крови на 20% к 14 суткам эксперимента.

Scatteiplot ОБДГ w. ILip (Casewise MD deletion) ¡Up = .86260 - .0292 * ОБДГ Correlation: г - -,8269

0.35 —'-■-■-.----.---'---

0,30 о о

0,25

0.20 •• О 'J О

0,15 '

' 0,10 ОЭ О О О ~ O -..06" ...

0 05 О -О О О

О О

0,00 -'-1-'--L--1-'—^-'—^-

22 23 24 25 20 27 28_29 30

ОВДГ |' о 95% confidence j

Рис. 3. Линия регрессии зависимости переменной активности ОБДГ в макрофагах соединительной ткани кожи крыс, получавших а-токоферол (9 и 14 сутки) от объемной плотности липидных включений в их цитоплазме. Уравнение регрессии: у=0,86- 0,03х

Снижение процентного содержания фибробластов сопровождалось повышением их функциональной активности. К концу эксперимента метаболический профиль исследуемых ферментов этих клеток превышал значения интактных крыс на 17% преимущественно за счет ферментов Г-ФДГ, НЭ, ЛДГ. Возможно, а-ТФл оказал стимулирующее воздействие на работу фибробластов, направленную на синтез компонентов аморфного вещества. Объем матрикса по результатам наших морфометрических исследований полнослойных кусочков кожи преобладает над объемом волокон и выше, чем у интактных животных в 1,3 раза.

Введение а-ТФл привело к увеличению численной плотности панкреатических островков на 5% к 20-ым суткам эксперимента, что указывает на возможное участие данного антиоксиданта в запуске механизмов неогенеза островков, что согласуется с результатами исследований (Корчин В. И., 1992), которые демонстрировали

стимулирующее влияние синтетических антиоксидантов: пробукола и никотинамида на клеточные элементы эндокринного аппарата поджелудочной железы.

Введение а-ТФл на фоне экспериментального диабета отражается на внешнем виде животных. Происходит частичное исчезновение симптомов диабета: менее выражен дефицит массы крыс, снижается процент гибели животных (на 29%) по сравнению с диабетическими. Отмечена положительная динамика структурной организации поджелудочной железы у диабетических животных на фоне введения сх-ТФл: меньше выражены деструктивные изменения островков Лангерганса, их количественное содержание больше (в 1,2 раза) в расчете на единицу площади органа, а так же выше (в 1,3 раза) объемная плотность эндокринной части. Уровень глюкозы в плазме крови диабетических крыс на фоне введения а-ТФл составляет от 12,00±0,31 до 13,49±0,48 ммоль/л, что в 1,6 раза ниже животных с аллоксановым диабетом.

Введение а-ТФл повлияло на состояние системы ПОЛ-АОЗ. Накопление МДА в ! плазме крови и в тканях поджелудочной железы в 1,7 раза ниже чем у диабетических животных без введения а-ТФл (рис. 4). Уровень ДК снижается в 1,6 раза в плазме крови и в 1,4 раза в ткани поджелудочной железы. Это свидетельствует о стабилизации а-ТФл процессов перекисного окисления липидов, вызванных экспериментальным диабетом.

Рис. 4. Динамика накопления малонового диальдегида (МДА) в плазме крови крыс линии Вистар на фоне аллоксанового диабета и диабета при введении а-токоферола. (M±s); * - р<0,05 - относительно интактных; + - р<0,05 - относительно группы с аллоксановым диабетом

С другой стороны, а-ТФл оказал благоприятное влияние у диабетических животных на состояние антиоксидантной системы защиты организма. Альфа-токоферол выполняет роль ловушки свободных радикалов, а также разрушает перекисные соединения, накапливающиеся в ходе развития диабета (Абрамченко В. В., 2001). Анализ уровня активности ферментов СОД, ГП, ГР показал достоверно высокие их значения в сравнении с данными показателями у крыс с аллоксановым диабетом без введения а-ТФл. Сопоставление активности антиоксидантных ферментов в диабетической группе животных с группой, получавших протектор показало, что их

значения все же не достигают показателей интактных животных, что, очевидно, связано с достаточно глубокими расстройствами компенсаторно-приспособительных механизмов при диабете.

При развитии аллоксанового диабета на фоне превентивного и последующего введения а-ТФл клетки СТ кожи крыс претерпевают изменения. Наблюдалось увеличение процентного содержания макрофагов (рис. 5), но их количественные параметры максимально демонстрировали себя к концу исследования (21 сутки) и составляли 33,9±1,1%, по отношению к экспериментальной группе с аллоксановым диабетом, у которых максимальное количество данных клеток отмечено уже на 14 сутки (36,8+1,4%). Количество фибробластов оказалось ниже их содержания в СТ у диабетических крыс. Результатом таких изменений стала динамика МФИ. У диабетических животных на фоне а-ТФл он составлял на 14 сутки 595±25, а на 21 сутки - 462+29, что на 8% и 7% ниже соответствующих показателей у животных с аллоксановым диабетом без антиоксиданта. Содержание тучных клеток нарастало в 2 раза во все периоды наблюдения, по сравнению с группой диабетических крыс. Клетки с явлениями дегрануляции встречались редко.

Морфометрические показатели макрофагов СТ кожи, а именно объемная плотность их цитоплазмы у диабетических животных на фоне введения а-ТФл так же имеет тенденцию к снижению. ЯЦИ увеличивается, как у диабетических крыс с а-ТФл, так и без препарата, однако к концу экспериментов (21 сутки), у первых этот прирост на 16% ниже, чем у вторых. Отличалась и временная характеристика развития этой реакции. Сопоставимые показатели ЯЦИ у животных с диабетом на фоне а-ТФл возникали позднее, со сдвигом на 7 суток (рис. 5).

Развитие аллоксанового диабета на фоне введения а-ТФл привело к активации всех исследуемых ферментов макрофагов на 10 сутки, аналогично диабетическим животным, что можно расценивать как защитно-компенсаторную реакцию и мобилизацию функциональных возможностей клеточных элементов. Однако, в отличие от диабетических животных к 14 суткам исследования уровень активности энзимов остается высоким (МП макрофагов в 1,6 раза выше), что объясняется стимулирующим влиянием препарата на клетки СТ кожи или более длительным сохранением их потенций (рис. 5).

Обращает на себя внимание динамика активности ЛДГ, величина которой у диабетических животных на фоне препарата ниже, чем у крыс с аллоксановым диабетом к концу эксперимента (21 сутки). Такая же тенденция имела место при сравнении диабетических животных с интактными. Однако, соотношение ферментов ЛДГ/Г-6-ФДГ в сравниваемых экспериментальных группах было различным (меньше «единицы» - при диабете С а-ТФл и выше «единицы» без его введения). Возможно, а-ТФл способствовал переходу с гликолиза на пентозофосфатный путь утилизации глюкозы клетками СТ животных с диабетом, что согласуется в основных положениях с описаниями механизма действия данного антиоксиданта (Гаврилова Л. В., 2001; Макарова М. Ю„ 2003; Антонова К. В., 2008).

Следует обратить внимание на то, что в макрофагах диабетических животных, на фоне введения а-ТФл высоких значений достигает активность фермента ОБДГ. Большинство энзимов к концу эксперимента исчерпывают свой потенциал и их активность опускается ниже значений интактных крыс, однако значения ОБДГ даже на 21 сутки исследования оставались в 1,4 раза выше, чем у последних. Можно предположить, что а-ТФл участвует в поддержании процесса утилизации макрофагами

СТ избытка липидных компонентов плазмы, в том числе продуктов ПОЛ. Наши предположения подтверждаются снижением содержания общих липидов плазмы крови, которое мы наблюдали в ходе исследования. У диабетических животных с превентивным и последующим введением антиоксиданта уровень общих липидов в 1,5 раза ниже чем у диабетических крыс без получения а-токоферола. Вышеизложенное находит свое подкрепление морфометрическим анализом ультраструктуры макрофагов СТ. Объемная плотность липидных включений в цитоплазме макрофагов и число клеток их содержащих уменьшались (в 2 раза и в 1,8 раза соответственно) по сравнению с диабетом без коррекции состояния а-ТФл. В макрофагах СТ кожи диабетических крыс с превентивным введением ос-ТФл реакция на активность пероксидазы была отрицательной, что, возможно, связано с достаточной (для реализации функций) общей активностью антиоксидантных ферментов (крови и тканей ПЖ). Особенности ультраструктуры в сравниваемых группах проявились в состоянии митохондриального аппарата. Деструктивно измененные митохондрии у диабетических крыс на фоне коррекции препаратом встречались крайне редко.

интактн. алл 10 алл14 алл21 интакгн. аллЮ алл14 алл21

аТФл аТФл аТФл

L^J макрофаги_ Ml I макрофагов Jk Я1ДИ

Рис. 5. Динамика численной плотности макрофагов СТ крыс, их метаболического профиля (МП) и ЯЦИ при аллоксановом диабете и диабете на фоне введения а-токоферола. (M±s); * - р<0,05 - относительно интактных; + - р<0,05 - относительно группы с аллоксановым диабетом

Активность энзима КФ в макрофагах СТ животных с диабетом на фоне а-ТФл меньше (в 1,4 раза) на 10 сутки по сравнению с диабетическими животными. Постепенное снижение уровня КФ в цитоплазме макрофагов на 14 и 21 сутки нашего исследования позволяет высказать предположение о стабилизации мембран макрофагов СТ а-токоферолом у диабетических животных.

В периферической крови диабетических животных, получавших а-ТФл отмечено снижение процентного содержания нейтрофилов и увеличение содержания лимфоцитов на 10 и 14 сутки относительно диабетических крыс. Подобную ситуацию мы наблюдали и у животных, получающих только а-ТФл: нейтрофилы

демонстрировали достоверное снижение, а лимфоциты несколько превышали значения у интактных животных. Содержание моноцитов возрастало на 18% на 14 сутки эксперимента. Можно предположить, что а-ТФл оказал позитивное влияние на клетки, контролирующие защитные и иммунологические функции в организме.

У животных с диабетом на фоне введения а-ТФл достоверных изменений соотношения клеток и межклеточного вещества не отмечено, однако параметры вклада объемной доли волокон и матрикса у сравниваемых групп различны. Доля волокон СТ животных с протектором на 14 сутки ниже на 11% по сравнению с их содержанием у диабетических животных без коррекции. Объемная доля матрикса в этих же условиях выше на 48%. Известно, что раздражение и стимуляция фибробластов при диабете (Подгребальный А. Н. и соавт., 2005) приводит к избыточному синтезу волокон и, в том числе, коллагена. Возможно, в условиях насыщения организма экзогенным антиоксидантом происходит утилизация насыщенных токсическими продуктами метаболизма (ПОЛ) волокон, а наработка основного аморфного вещества происходит с целью их обновления. Введение а-ТФл, по результатам наших исследований, оптимизирует морфофункциональные параметры фибробластов (при снижении процентного содержания на 5% происходит повышение их метаболического профиля на 14%), способствует разрушению альтерированного коллагена и синтезу нового. Вышеизложенное находит подтверждение анализом соотношения компонентов межклеточного вещества.

Результаты наших исследований показали, что в ответ на развитие аллоксанового диабета у крыс линии Вистар происходят существенные изменения морфофункционального состояния соединительной ткани кожи. В ответной реакции, в первую очередь, задействованы макрофаги, как наиболее мобильные структуры, способные моментально включаться в развитие различных патологических процессов. В защитно-адаптивные реакции так же активно вовлекаются фибробласты и тканевые базофилы. Все исследованные клеточные элементы в состоянии напряжения (аллоксановый диабет) включаются в работу по восстановлению гомеостаза. Функционируют они, несомненно, в кооперации, и суммарный результат их деятельности зависит от базового состояния соединительной ткани организма в целом.

Результаты экспериментальной работы продемонстрировали, что ответная реакция клеток СТ кожи у диабетических крыс с превентивным и последующим введением а-ТФл более эффективная, так как при меньшем вовлечении клеточных элементов функциональная активность задействованных структур и, в частности, макрофагов и фибробластов превышает таковую у животных с экспериментальным диабетом. Возможно, а-ТФл активно встраивается во внутриклеточные метаболические процессы и оказывает свое позитивное влияние на основные патогенетические звенья реакций развивающегося диабета. Сведения, полученные в ходе исследований, подтвердили зависимость эффективного функционирования структурных элементов соединительной ткани кожи от параметров внутренней среды. Оптимизация состояния системы ПОЛ-АОЗ введением а-ТФл способствует снижению экстремального статуса экспериментальных животных с диабетом. Адекватность выбора а-ТФл, как препарата с антиоксидантным действием, имеет в работе морфологическое подтверждение и обосновывает целесообразность его применения с целью профилактики и в комплексной терапии диабета.

ВЫВОДЫ

1. Аллоксановый диабет вызывает перестройку функциональной морфологии клеток рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи. На 14 сутки развития экспериментального диабета происходит снижение количества фибробластов (на 19%). Повышение процента макрофагов (на 37%) происходит в основном за счет клеток-предшественников (моноцитов) и сопровождается увеличением их ядерно-цитоплазматического индекса (в 1,9 раза). Динамика содержания тучных клеток при введении аллоксана носит непостоянный характер: их численность снижается на ранних сроках диабета (в 1,5 раза) и увеличивается на 14 сутки исследования (в 2 раза). В условиях диабета происходит интегрированное вовлечение фибробластов, макрофагов, тучных клеток в компенсаторно-защитные реакции, как ответ на изменения параметров системы ПОЛ - АОЗ.

2. Накопление первичных продуктов пероксидации (ДК) в ранние сроки экспериментального диабета (10 сутки) интенсифицирует функции макрофагов СТ кожи (метаболический профиль повышается на 20%). Кумуляция вторичных продуктов ПОЛ - МДА на 14 и, особенно, на 21 сутки вызывает резкое угнетение метаболической активности клеток, что проявляется в снижении метаболического профиля макрофагов на 13% и фибробластов - на 37%.

3. Диабет с превентивным и последующим введением а-токоферола протекает с менее выраженным окислительным стрессом. Содержание ДК в плазме крови уменьшается на 40%, МДА - на 38%. Альфа-токоферол у диабетических крыс поддерживает высокую численность макрофагов до конца эксперимента (21 сутки) с метаболическим профилем, превышающим на 24% таковой у животных с диабетом. Количество фибробластов снижается (на 5%) с повышением их метаболического профиля на 26%. У фибробластов и макрофагов превалирует пентозофосфатный путь метаболизма (соотношение ЛДГ/Г-6-ФДГ становится < 1). Содержание тучных клеток увеличивается в 2 раза во все периоды исследования.

4. Экспериментальный диабет приводит к увеличению содержания моноцитов крови на 10 сутки (в . 2 раза) с последующим постепенным их падением, а так же снижению численности иммунокомпетентных клеток (лимфоцитов - на 7%). Коррекция диабета а-токоферолом вызывает повышение числа лимфоцитов и моноцитов (на 10% и 20% соответственно) при снижении доли нейтрофилов (на 8%), что способствует усилению резистентности организма в условиях диабета.

5. Макрофаги соединительной ткани кожи активно реагируют на увеличение уровня общих липидов (в 3 раза) в плазме крови на 10 сутки, вызванного ПОЛ и диабетом. Их реакция выражается появлением клеток накапливающих липидные включения с пероксидазной активностью вокруг них, а так же повышением на 25% активности липолитического фермента ОБДГ.

6. Диабет на фоне а-токоферола протекает с повышенным функционированием ферментативных звеньев антиоксидантной защиты. Увеличивается активность СОД и глутатион-зависимых ферментов, что сопровождается снижением уровня общих липидов в плазме крови (на 36%), объемной плотности липидных включений (на 51%) и числа макрофагов их содержащих (на 46%) по сравнению с диабетическими животными.

7. Объемная плотность волокон СТ ткани кожи диабетических животных увеличивается (32%) на фоне снижения доли матрикса (53%). Введение а-токоферола в

условиях экспериментального диабета приводит к снижению доли волокон сосочкового слоя дермы кожи (11%) и приросту матрикса межклеточного вещества соединительной ткани (48%).

8. Альфа-токоферол влияет на соотношение клеток СТ кожи, что проявляется в повышении количества макрофагов (на 11%), снижении фибробластов (на 5%) и тучных клеток (на 30%), повышении метаболического профиля клеток, активации пентозофосфатного нуги обмена.

9. Адекватность выбора а-токоферола, как препарата с антиоксидантным действием, подтверждается морфологическим исследованием, которое обосновывает целесообразность его применения с целью коррекции состояния в комплексной терапии диабета.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Комплекс морфологических, морфометрических, биохимических и гистохимических параметров, полученных в ходе работы, может быть использован в экспериментальных исследованиях, где предметом изучения является соединительная ткань, ее клеточные элементы и межклеточное вещество, а так же эндокринная патология, связанная с нарушением работы поджелудочной железы.

2. В эндокринологии в разделах, посвященных изучению патологии поджелудочной железы следует учитывать положительный эффект а-токоферола как на ее эндокринный аппарат, так и на элементы соединительной ткани кожи. Результаты работы могут быть использованы при обосновании и назначении антиоксиданта в комплексной терапии диабета.

3. Теоретические аспекты, выводы, количественные параметры по функциональной морфологии СТ и поджелудочной железы могут быть востребованы в учебном процессе лекционного курса и практических занятий медицинских ВУЗов и факультетов университетов кафедрами гистологии, физиологии, патофизиологии и патологической анатомии.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Григорьева, М. В. Функциональная морфология макрофагической системы при гормональном дисбалансе / М. В. Григорьева, Л. Г. Прошина // Вестник НовГУ. Серия, Медицинские науки. - 2005. - № 32. - С. 92-95

2. Григорьева, М. В. Состояние соединительной ткани при нарушении функции поджелудочной железы / М. В. Григорьева, Н. П. Божко, Л. Г. Прошина // Вестник НовГУ. Серия, Медицинские науки. - 2006. - № 35. - С. 45-47.

3. Григорьева, М. В. Морфология соединительной ткани при гормональном дисбалансе / М. В. Григорьева, Н. П. Божко, Л. Г. Прошина // Клиническая медицина. Вопросы клиники, диагностики, профилактики и лечения : межвуз. сб. стран СНГ. Т. 12 / Новгород, гос. ун-т им. Ярослава Мудрого, Казах, нац. мед. ун-т им. С. Д. Асфендиярова. - Великий Новгород ; Алматы. - 2006. - С. 185-189.

4. Григорьева, М. В. Структурные и метаболические изменения клеток соединительной ткани при экспериментальных воздействиях / М. В. Григорьева, Н. П. Божко // Материалы XIII Международной конференции студентов, аспирантов и

молодых ученых «Ломоносов-2006», 12-15 апр. 2006 г. - Т. 4 : Биоинженерия и биоинформатика. Математика и механика. Философия. Фундаментальное материаловедение. Фундаментальная медицина / Моск. гос. ун-т им. М. В. Ломоносова. -М., 2006.-С. 495.

5. Функциональная морфология соединительной ткани при экспериментальных и экстремальных воздействиях / Н. П. Божко, М. В. Григорьева, Л. Г. Прошина, Ю. М. Либо. // Научные труды VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке», 23-26 ноября 2006 г., г. Москва / Рос. Гос. ун-т дружбы народов. - М., 2006. - С. 79-80.

6. Григорьева, М. В. Функциональная морфология соединительной ткани при экспериментальном сахарном диабете / М. В. Григорьева, Н. П. Божко, Ю. М. Либо // Морфология. - 2006. - № 4. - С. 40-41.

7. Божко, Н. П. Реакция клеточных элементов соединительной ткани на фоне экзогенного введения инсулина и альфа-токоферола / Н. П. Божко, М. В. Григорьева, Л. Г. Прошина // Бабухинские чтения в Орле, 28-29 марта 2007 г. : материалы 6-й Всерос. науч. конф. - М., 2007. - Вып. 25. - С. 39-40.

8. Григорьева, М. В. Цитохимическая характеристика соединительной ткани при экстремальных и экспериментальных воздействиях / М. В. Григорьева, Н. П. Божко, Л. Г.Прошина // Актуальный проблемы современной медицины : респ. межвуз. науч.-практ. сб. - Т. 8, ч. 2. / Новгород, гос. ун-т им. Ярослав Мудрого, Ин-т мед. образования. - Великий Новгород, 2006. - С. 165-168.

9. Григорьева, М. В. Структурные изменения соединительной ткани при гиперинсулинемии и введении антиоксидантов / М. В. Григорьева, Л. Г. Прошина // Актуальные проблемы современной медицины : респ. межвуз. науч.-практ. сб. - Т. 9, ч. 1 / Новгород, гос. ун-т им. Ярослава Мудрого, Ин-т мед. образования. - Великий Новгород, 2007. - С. 313-315.

10. Морфологические и биохимические изменения подкожной рыхлой волокнистой соединительной ткани у крыс линии \%1аг при экспериментальных воздействиях / Л. Г. Прошина, М. В. Григорьева, Н. П. Божко, Ю. М. Либо // Естествознание и гуманизм : сб. науч. тр. - Томск, 2007. - Т. 4, № 2 : современный мир, природа и человек. - С. 33-34.

11. Проблема адаптации соединительной ткани при экспериментальной патологии / М. В. Григорьева, Н. П. Божко, Л. Г. Прошина, Ю. М. Либо II Клиническая медицина. Вопросы клиники, диагностики, профилактики и лечения : межвуз. сб. стран СНГ. Т. 14 / Новгород, гос. ун-т им. Ярослава Мудрого, Казах, нац. мед. ун-т им. С. Д. Асфендиярова. - Великий Новгород; Алматы, 2007. - С. 15-18.

12. Структурная перестройка соединительной ткани при экспериментальном аллоксановом диабете и введении витамина Е / Л. Г. Прошина, Н. П. Божко, М. В. Григорьева, Ю. М. Либо // Морфология. - 2007. - № 3. - С. 87.

13. Федорова, Н. П. Морфология адаптивных реакций соединительной ткани в экстремальных условиях / Н. П. Федорова, М. В. Григорьева, Ю. М. Либо // Санкт-Петербургские научные чтения : материалы II Междунар. молодежного мед. конгресса, 5-7 дек. 2007 г., г. Санкт-Петербург / Санкт-Петерб. гос. мед. ун-т им. И. П. Павлова. -СПб., 2007. - С. 119-120.

14. Влияние а-токоферола на метаболизм клеток соединительной ткани / М. В. Григорьева, Н. П. Федорова, Л. Г. Прошина, Ю. М. Либо // Морфология. - 2008. -№ 2. - С. 36.

15. Прошина, Л. Г. Ультраструктурная организация макрофагов соединительной ткани при экспериментальных воздействиях / Л. Г. Прошина, М. В. Григорьева, Н. П. Федорова // Актуальные проблемы современной медицины : материалы 15 науч. конф. Ин-та мед. образования НовГУ. - Т. 10, ч. 1 / Новгород, гос. ун-т им. Ярослава Мудрого, Ин-т мед. образования. - Великий Новгород, 2008. - С. 74-78.

16. Федорова, Н. П. Гистохимия соединительной ткани и роль макрофагов в защитно-компенсаторных реакциях организма при экспериментальных воздействиях / II. П. Федорова, М. В. Григорьева, Л. Г. Прошина // Клиническая медицина. Вопросы клиники, диагностики, профилактики и лечения : межвуз. сб. стран СНГ. Т .16 / Новгород. Гос. ун-т им. Ярослава Мудрого [и др.]. - Великий Новгород ; Алматы , 2008. - С. 35-39.

17. Федорова, Н. П. Соединительная ткань при гипоинсулинемии и обезвоживании организма / Н. П. Федорова, М. В. Григорьева, Л. Г. Прошина // Научные труды IX международного конгресса Здоровье и образование в XXI веке. Влияние космической . погоды на биологические системы в свете учения А. Л. Чижевского, 27-30 ноября 2008. - М., 2008. - С.168-169.

18. Функциональная морфология соединительной ткани кожи и поджелудочной железы при экспериментальных воздействиях / М.В. Григорьева, Н. П. Федорова, Л. Г. Прошина, Ю. М. Либо // Клиническая медицина. Вопросы клиники, диагностики, профилактики и лечения : межвуз. сб. стран СНГ. Т .17 / Новгород. Гос. ун-т им. Ярослава Мудрого [и др.]. - Великий Новгород ; Алматы , 2009 - Т.П. -С.165-169.

19. Григорьева М. В. Функциональная морфология соединительной ткани кожи в условиях аллоксанового диабета и введения а-токоферола / М. В. Григорьева // Актуальные проблемы современной медицины : Республ. межвуз. научно-практ. сб. -Т. 11./ Новгород, гос. ун-т им. Ярослава Мудрого, Ин-т мед. образования. - Великий Новгород, 2009. - С. 42 - 45.

20. Григорьева М. В. Реакция тучных клеток соединительной ткани кожи на экспериментальные воздействия / М. В. Григорьева, Н. П. Федорова // Бабухинские чтения в Орле, 4-5 июня 2009 г.: материалы 7-й Всерос. науч. конф. - М., 2009. - Вып. 29.-С. 122-124.

21. Григорьева М. В. Метаболические особенности соединительной ткани и роль макрофагов в защитно-приспособительных реакциях организма при экспериментальных воздействиях / М. В. Григорьева, Н. П. Федорова, Ю. М. Либо // Морфология. - 2009. - № 4. - С. 43.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Г-6-ФДГ - Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа

ГП - Глутатионпероксидаза

ГР - Глутатионредуктаза

ДК - Диеновые конъюгаты

ИРИ - Иммуно-реактивный инсулин

КФ - Кислая фосфатаза

ЛДГ - Лактатдегидрогеназа

МДА - Малоновый диальдегид

МП - Метаболический профиль

МФИ - Макрофаг-фибробластический индекс

НЭ - Неспецифическая эстераза

ОБДГ - Оксибутиратдегидрогеназа

ПОЛ - Перекисное окисление липидов

СОД - Супероксидцисмутаза

СТ - Соединительная ткань

Тк - Тучная клетка

ЯЦИ - Ядерно-цитоплазматический индекс

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ МОРФОЛОГИЯ РЫХЛОЙ ВОЛОКНИСТОЙ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ КОЖИ В УСЛОВИЯХ АЛЛОКСАНОВОГО ДИАБЕТА И КОРРЕКЦИИ ЕГО а-ТОКОФЕРОЛОМ Григорьева Мария Вениаминовна (Россия)

В диссертации проведен анализ функциональной морфологии соединительной ткани кожи на фоне аллоксанового диабета и коррекции его а-токоферолом. Использование комплекса морфологических, цитохимических, биохимических методов исследования позволило рассмотреть возможность повышения резистентности организма к экстремальному состоянию, вызванному экспериментальным диабетом и окислительным стрессом, путем введения природного антиоксиданта а-токоферола.

Морфометрический анализ структурных компонентов соединительной ткани кожи, цитохимия и ультраструктурная характеристика клеточных элементов свидетельствует о позитивном влиянии а-токоферола на восстановление нарушенного диабетом окислительно-восстановительного гомеостаза. Диабет на фоне а-токоферола протекает с повышенным функционированием клеточных элементов, восстановлением соотношения компонентов межклеточного вещества соединительной ткани на фоне активации ферментативных и неферментативных звеньев антиоксидантной защиты.

THE FUNCTIONAL MORPHOLOGY OF SKIN LOOSE FIBROUS CONNECTIVE TISSUE IN ALLOXAN DIABETES AND ITS CORRECTION WITH a-TOKOFEROL Grigorieva Maria Veniaminovna (Russia)

In the thesis the analysis of functional morphology of dermal connective tissue was performed at the background of alloxan diabetes and its correction with a-tokoferol. The usage of combined morphologic, cytochemical and biochemical examination methods allowed to regard the possibility to increase the body resistance to the extreme condition produced by experimental diabetes and oxidation stress by means of introduction of natural antioxidant a-tokoferol.

Morphometric analysis of structural components of skin connective tissue, cytochemistry and ultrastructural characteristics of cellular elements give evidence of the positive influence of a-tokoferol on the restoration of oxidation-reduction homeostasis impaired by diabetes. In diabetes at the background of a-tokoferol there is an increased functioning of cellular elements, reduction of the correlation of the components of connective tissue intercellular substance at the background of activation of enzymatic and non-enzymatic links of antioxidation protection.

Изд. лиц. JIP № 020815 от 21.09.98. Подписано в печать 22.10.2009. Бумага офсетная. Формат 60x84 1/16. Гарнитура Times New Roman. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 68 Издательско-полиграфический центр Новгородского государственного университета им. Ярослава Мудрого. 173003, Великий Новгород, ул. Б. Санкт-Петербургская, 41.

Отпечатано в ИПЦ НовГУ. 173003, Великий Новгород, ул. Б. Санкт-Петербургская, 41. -

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Григорьева, Мария Вениаминовна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1. Функциональная морфология соединительной ткани при экспериментальных воздействиях и патологии.

1.1. Межклеточное вещество рыхлой волокнистой соединительной ткани.

1.2. Клетки рыхлой волокнистой соединительной ткани.

1.2.1. Фибробласты.:.

1.2.2. Тучные клетки.

1.2.3. Макрофаги.

2. Соединительная ткань при диабете.

2.1. Структурно-функциональные особенности соединительной 24 ткани и состояние перекисного окисления липидов при диабете.

2.2. Структурно-функциональные особенности соединительной ткани и состояние антиоксидантной системы при диабете.

2.3. Особенности структуры и функции эндокринной части поджелудочной железы при диабете.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

Глава 31 Результаты исследования.

3.1. Функциональная морфология рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи и периферической крови интактных белых крыс линии Вистар.1.

3.2. Функциональная морфология рыхлой волокнистой соединительной» ткани кожи и периферической> крови на фоне экспериментального аллоксанового диабета.

3.3. Функциональная морфология рыхлой волокнистой соединительной тканиг кожи и периферической крови при введении альфа-токоферола.

3.4. Функциональная морфология рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи и периферической крови в ходе развития экспериментального аллоксанового диабета на фоне введения альфа-токоферола.

Глава 4. Обсуждение результатов исследования. 106 '

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Функциональная морфология рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи в условиях аллоксанового диабета и коррекции его [А]-токоферолом."

Актуальность

Сахарный, диабет - одна из ведущих проблем современной клинической! медицины. Большая социальная значимость диабета состоит в том, что это заболевание приводит к ранней инвалидизации и летальности (Дедов И. И. и соавт., 2005; Van Damme Н. et al., 2001). Основным условием развития сахарного диабета I типа является инсулиновая недостаточность (Флеров М. А. и соавт., 2003; Дедов И: И. и соавт., 2005; Dias A. S. et al., 2005; Toshihiko Osawa et al., 2005; Jeffrey I. Mechanick., 2006; Nir T. et al., 2007; Teta M. et al., 2007). Гипоинсулинемия приводит к выраженным нарушениям обмена веществ, что вызывает структурные и функциональные нарушения- на всех уровнях целостной* системы организма, в частности, на тканевом и клеточном. В связи с этим внимание исследователей1 обращено на реактивные изменения рыхлой волокнистой соединительной ткани в условиях нарушения углеводного обмена (Балдаруева Г. В., 1988; Подгребальный А. Н., 2005). Эта ткань вместе с кровью и лимфой образует, как известно, внутреннюю среду организма, характеризующуюся в норме относительным постоянством клеточного состава и физико-химических показателей. В ней протекают метаболические и трофические процессы, обеспечивающие нормальную жизнедеятельность органов и организма в целом*(ЮринаН; А. и соавт., 1990):

Под влиянием тех или иных повреждающих воздействий в рыхлой волокнистой соединительной ткани происходят структурные перестройки, направленные на сохранение динамического равновесия тканевой системы (Виноградов В. В. и соавт., 1980; Серов В. В., Шехтер А. Б., 1981; Воробьева Н. Ф., 2007; 2008; Правоторов Г. В:, 2008; Омельяненко Н. П., Слуцкий Л. И:, 2009; Kielty С. М., 2002; Ramirez F., 2004; Bhide V. М. et al., 2005; Kinga A. Powers et al., 2006; Salamon-A., 2007; Wong T. et al., 2007; Daley W. P., 2008; Glaros T. et al., 2009). В процессе адаптации к экстремальным воздействиям ведущая' роль принадлежит гормональной регуляции обменных процессов и физиологических функций (Акмаев И. Г. и соавт., 1993). Изучение чувствительности отдельных компонентов соединительной ткани (СТ) к гормональным воздействиям представляет самостоятельный интерес, а также связано с актуальной проблемой поиска механизмов регуляции ее системных реакций (Ahmadi К. et al., 2005). В литературе имеются сведения о влиянии на функции клеток СТ гормонов надпочечника, щитовидной железы (Радостина А. И., 1988, Прошина JL Г., 1987; Юрина Н.А., 1990). Однако, действие инсулина на состав-популяции клеток СТ изучено недостаточно, мало сведений о влиянии измененного обмена углеводов на структурные и функциональные особенности макрофагальной системы. Отсутствуют количественные цитохимические данные об изменениях метаболической активности основных клеточных элементов СТ под влиянием нарушения углеводного обмена, вызванного сахарным диабетом.

По' данным ряда авторов, диабет характеризуется нарушением как углеводного, так и липидного обмена, что приводит к увеличению содержания токсических продуктов ПОЛ в. крови и тканях (Корчиш В. И., 1992; Косенко Е. А. и- соавт., 1999; Колесник Ю: М. и соавт., 2004; Дедов И. И. и соавт., 2005; Szkudelski Т., 2001; Jeffrey I., 2006; Ann. N. Y., 2005). Повышение ПОЛ сопровождается снижением активности эндогенных «антиперекисных» ферментных систем и дефицитом* антиоксидантов (УхинаТ. В. и соавт., 1993; Архипенко Ю. В. и соавт., 2004; Zamora R. et al., 1997; Lin.W. et al., 2000; Maeda Y. et al., 2000). Наибольшего внимания среди значительного арсенала антиоксидантов* (синтетических и природных), заслуживает альфа-токоферол, как естественный для организма и отличающийся относительно невысокой стоимостью (Волкова Н: А., 2003; Раврилова.Л! В1., 2003; Макарова М. Ю., 2003; Смирнов Л. Д. и соавт., 2003; Lin W. et al., 2000; Haidara M. A., 2009). Роль структурных элементов рыхлой волокнистой >г соединительной ткани в адаптивных реакциях организма при нарушениях гомеостаза, вызванных диабетом, изучена недостаточно, а имеющиеся сведения* иногда противоречивы. Вышеизложенное послужило предпосылкой к изучению целесообразности применения альфа-токоферола в качестве препарата, позволяющего корректировать ответную реакцию структурных компонентов соединительной ткани, на, диабет с целью повышения адаптивных возможностей организма к нарушению обмена веществ и окислительно-восстановительного гомеостаза.

Цель исследования

Задачи1 исследования

1. Изучить показатели процессов ИОЛ в плазме крови и в поджелудочной железе и активность ферментов* антиоксидантной системы защиты организма в условиях аллоксанового диабета, диабета на фоне а-токоферола.

2. Исследовать структурную организацию рыхлой- волокнистой соединительной ткани- кожи (клеток и межклеточного вещества) в условиях экспериментального аллоксанового диабета.

3. Выявить и сопоставить динамику структурной организации w метаболической активности клеток рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи крыс линии Вистар при введении а-токоферола, при аллоксановом диабете и коррекции его антиоксидантом (а-токоферол).

4. Провести анализ динамики состояния периферической крови (лейкоцитарной. формулы, содержания общих липидов) при экспериментальных воздействиях (аллоксановый диабет и диабета на фоне а-токоферола).

5. Сопоставить динамику липидного обмена, а так же степень участия в нем макрофагов^ СТ кожи при диабете и коррекции его а-токоферолом.

6. Сопоставить динамику компонентов межклеточного* вещества рыхлoiisволокнистой соединительной ткани кожи при аллоксановом диабете и коррекции его а-токоферолом.

Научная новизна

Впервые изучена морфология компонентов; рыхлой1 волокнистой соединительной ткани кожи при^экспериментальном аллоксановом диабете и введении а-токоферола. Впервые сопоставлены изменения, клеток и межклеточного1 вещества; а так же показана динамика; метаболической активности, структурных компонентов! рыхлой волокнистой соединительной, ткани кожи (клеток,, основного аморфного вещества; и волокон)? при экспериментальном диабете и его коррекции? а-токоферолом: Впервые сопоставлена динамика5 липидногб: обмена с накоплением токсических продуктов ПОЛ и проанализирована степень участия; клеток соединительной ткани кожи при экспериментальном диабете и диабете на фоне сх-токоферола. Впервые нроведен сравнительный анализ структуры эндокринного аппарата поджелудочной железы; при аллоксановом диабете и коррекции его а-токоферолом.

Теоретическая и практическая значимость работы

Комплекс морфологических,, морфометрических, биохимических и гистохимических параметров, полученных в ходе исследования:, может быть использован в экспериментальных исследованиях,, где предметом: изучения является,: соединительная ткань, ее: клеточные: элементы и межклеточное вещество.

Материалы позитивного влияния'антиоксидантов1 и, в-частности, а-токоферола на эффекторные звенья тканевого- гомеостаза (макрофаги, моноциты, лимфоциты) могут быть-приняты во внимание при комплексной терапии сахарного диабета. Результаты экспериментальных исследований, проведенных на молекулярном, клеточном и тканевом уровне: позволили установить, что перестройка макрофагов, фибробластов, тучных клеток, структур межклеточного вещества соединительной ткани кожи носит защитно-приспособительный характер. Реакция соединительнотканных компонентов тесно связана* с гормональным фоном (содержанием инсулина) и зависима от состояния эндокринного аппарата при диабете, что может быть использовано при разработке положений функциональной морфологии соединительной- ткани в разделах «соединительные ткани», «клеточные взаимодействия в адаптивных реакциях», «эндокринная'' система» фундаментальной?и прикладной гистологии.

Положение о стимулирующем влиянии а-токоферола на развертывание защитно-компенсаторных механизмов клеточных элементов соединительной ткани,, в частности* макрофагов-моноцитов,, имеет существенную практическую значимость использования природного антиоксиданта- в комплексном лечении,сахарного диабета.

В эндокринологии в' разделах, посвященных изучению патологии поджелудочной железы следует принять во внимание положительный эффект а-токоферола, как на эндокринный, аппарат поджелудочной железы, так и на элементы соединительной ткани кожи.

Внедрение результатов работьгв практику.

Полученные материалы по функциональной морфологии СТ кожи могут быть использованы в. учебном процессе лекционного курса и практических занятий медицинских ВУЗов и факультетов* университетов кафедрами гистологии, физиологии, патофизиологии и патологической анатомии, о чем имеются акты внедрения.

Данные биохимии окислительно-восстановительного и углеводного гомеостаза могут быть востребованы в, научно-исследовательских лабораториях, изучающих вопросы состояния системы П0Л-АОЗ, а так же углеводный обмен.

Морфометрические характеристики структур соединительной ткани интактных животных, в условиях экспериментального аллоксанового диабета и диабета на фоне введения а-токоферола могут быть использованы для сравнительного анализа полученных параметров клеток и межклеточного вещества соединительной ткани в процессах адаптации.

Результаты работы могут быть использованы при обосновании и назначении антиоксидантов в комплексной терапии диабета.

Апробация работы

Основные результаты диссертационного исследования докладывались и обсуждались на: XIII международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» - Москва, 12-15 апреля 2006, секция фундаментальная медицина; VIII конгрессе международной ассоциации морфологов, Орел, 15-17 сентября 2006; VII Международной научно-практической конференции «Здоровье и Образование в XXI веке» — Москва, 23—26 ноября 2006; 6-й Всероссийской научной конференции «Бабухинские чтения в Орле» - Орел, 28-29 марта, 2007; конференции посвященной 100-летию Л.И. Фалина - Москва 17-18 мая, 2007; II международном молодежном медицинском конгрессе «Санкт-Петербургские научные чтения - 2007» — С.-Петербург 5-7 декабря, 2007; XII научно-практической конференции сотрудников и студентов ИМО НовГУ. — В. Новгород, апрель, 2008; IX конгрессе МАМ (Международной ассоциации морфологов) -г.Бухара, республика Узбекистан 14-17 мая, 2008; IX Международной научно-практической конференции «Здоровье и Образование в XXI веке» — Москва, 27-30 ноября 2008; 7-й Всероссийской научной конференции «Бабухинские чтения в Орле» - Орел, 4—5 июня, 2009; VI Всероссийском съезде АГЭ - Саратов, 23-25 сентября 2009.

Апробация' работы осуществлена на расширенном совместном заседании кафедр морфологии человека, общей патологии, биологии и биологической химии, микробиологии и заседании проблемной комиссии института медицинского образования Новгородского государственного университета имени Ярослава Мудрого.

По материалам диссертации опубликована 21 научная работа, в том числе, 6 публикаций в журналах, включенных в «Перечень ВАК РФ», 7 — в материалах научных конференций с международным участием.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Структурные элементы рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи вовлекаются в защитно-компенсаторные реакции организма при повышении ПОЛ. Альфа-токоферол стабилизирует систему ПОЛ-АОЗ при диабете, снижает уровень, токсических метаболитов ПОЛ, что усиливает защитно-компенсаторные возможности структур соединительной ткани.

2. Аллоксановый, диабет вызывает прирост процентного числа макрофагов соединительной ткани- кожи на 10 сутки развития экспериментального диабета, а так же снижение численности фибробластов и тучных клеток. Увеличение численной плотности макрофагов происходит с повышением их метаболической активности. Последующий прирост макрофагов сопровождается увеличением ядерно-цитоплазматического индекса и снижением1 их метаболического профиля. Увеличение численности макрофагов осуществляетсяs в основном за счет клеток моноцитарного происхождениям Корригирующее воздействие а-токоферола на окислительно-восстановительный гомеостаз проявляется позитивной реакцией структурных компонентов соединительной ткани кожи, так как протекает в условиях снижения-уровня токсических метаболитов ПОЛ*.

3. Диабет приводит к увеличению содержания моноцитов периферической крови на 10'сутки с последующим их падением на 14 сутки, а так же снижению численности иммунокомпетентных клеток - лимфоцитов. Превентивное и последующее введение а:токоферола поддерживает высокий уровень моноцитов^ и лимфоцитов на протяжении всего эксперимента по сравнению с диабетической группой-животных.

4. Экспериментальный аллоксановый диабет вызывает увеличение общих липидов крови, содержание которых снижается при введении а-токоферола. Сравнительный анализ участия структур соединительной ткани в коррекции, нарушенного липидного обмена при диабете позволяет выделить макрофаги, активность которых проявляется в динамике их численной плотности, содержания липидов в цитоплазме и метаболической реакции липолитических ферментов. Введение а-токоферола на фоне диабета оптимизирует функционирование макрофагов, что способствует приближению показателей:.липидного обмена к контрольным значениям:

6. Альфа-токоферол влияет на соотношение и метаболическую активность клеток СТ кожи, что? проявляется, повышением содержания макрофагов и снижением фибробластов и тучных клеток. Альфа-токоферол активирует пентозофосфатный путь метаболизма: макрофагов и фибробластов.

Введение а-токоферола - экзогенного, антиоксиданта представляется целесообразным^ в комплексной- терапии- диабета, а так же уместно для повышения, резистентности организма в условиях нарушенного углеводного, липидного обменов и окислительно-восстановительного гомеостаза:

Объем и структура диссертации

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Григорьева, Мария Вениаминовна

ВЫВОДЫ

2. Накопление первичных продуктов пероксидации (ДК) в ранние сроки экспериментального диабета (10 сутки) интенсифицирует функции макрофагов ОТ кожи (метаболический профиль повышается* на 20%): Кумуляция вторичных продуктов ПОЛ - МДА на 14 и, особенно, на 21 сутки вызывает резкое угнетение метаболической активности клеток, что проявляется в снижении метаболического профиля макрофагов на 13% и фибробластов - на 37%.

3. Диабет с превентивным и последующим введением а-токоферола протекает с менее выраженным окислительным стрессом. Содержание ДК в плазме крови уменьшается на 40%, МДА - на 38%. Альфа-токоферол у диабетических крыс поддерживает высокую численность макрофагов до конца эксперимента (21 сутки) с метаболическим профилем, превышающим на 24% таковой у животных с диабетом. Количество фибробластов ч снижается (на 5%) с повышением их метаболического профиля на 26%. У фибробластов и макрофагов превалирует пентозофосфатный путь метаболизма (соотношение ЛДГ7Г-6-ФДГ становится < 1). Содержание тучных клеток увеличивается в 2 раза во все периоды исследования.

4. Экспериментальный диабет приводит к увеличению содержания моноцитов крови на 10 сутки (в 2 раза) с последующим постепенным их падением, а так же снижению численности иммунокомпетентных клеток (лимфоцитов - на 7%); Коррекция, диабета а-токоферолом вызывает повышение числа лимфоцитов и моноцитовь (на-10% и 20% соответственно), при снижении доли нейтрофилов (на 8%), что способствует усилению резистентности организма;в;уеловиях:диабета;,

5. Макрофаги; соединительной; ткани кожи активно1 реагируют на увеличение уровня общих липидов (в 3 раза) в плазме крови- на. 10 сутки, вызванного- ПОЛ и диабетом. Их реакция выражается появлением клеток, накапливающих липидные включения? с пероксидазной активностью вокруг них, а так же повышением на 25% активности липолитического фермента ОБДГ.

6. Диабет на фоне а-токоферола протекает с повышенным функционированием) ферментативных звеньев антиоксидантной; защиты. Увеличивается; активность СОД и глутатион-зависимых ферментов; что сопровождается снижением уровня общих липидов в плазме крови (на 36%), объемной плотности липидных включенийг(на 51%) и числа макрофагов их содержащих (на-46%) по сравнению с диабетическими животными:

7. Объемная плотность волокон; СТ ткани кожи диабетических животных увеличивается (32%) на фоне снижения доли матрикса (53%). Введение а-токоферола в условиях экспериментального диабета- приводит к снижению доли волокон сосочкового слоя дермы кожи (11%) и приросту матрикса межклеточного вещества соединительной ткани (48%).

8. Альфа-токоферол влияет на соотношение клеток СТ кожи, что проявляется: в повышении количества- макрофагов (на 11%), снижении фибробластов; (на. 5%) иг тучных, клеток (на 30%), повышении, метаболического профиля! клеток,, активации пентозофосфатного пути; обмена.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Григорьева, Мария Вениаминовна, Москва

1. Директива Совета 86/609/ЕЕС от 24.11.86 по согласованию законов, правил и административных распоряжений стран-участниц в отношении защиты животных, используемых для экспериментальных и других научных целей.

2. Европейская конвенция о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях (ETS N 123) (Страсбург, 18 марта 1986 года) // http://www.lawmix.ru/abro.php?id=l 1036.

3. Абрамченко, В. В. Антиоксиданты и антигипоксанты в акушерстве : (оксидативный- стресс в акушерстве и его терапия антиоксидантами и антигипоксантами) / В. В. Абрамченко. — СПб. : Изд- во ДЕАН, 2001. — 400 с.

4. Автандилов, Г. Г. Медицинская морфометрия / Г. Г. Автандилов. — М. : Медицина, 1990. 383 с.

5. Акмаев, И. Г. Современные представления о нейро-иммунно-эндокринных механизмах регуляции гомеостатических функций / И. Г. Акмаев // Российские ведомости. 1999. - № 1-2. — С. 44-48.

6. Арташян, О. С. Изучение функциональной активности тучных клеток при иммобилизационном стрессе / О. С. Арташян, Б. Г. Юшков, Е. А. Мухлынина // Цитология. 2006. - Т. 48, № 8. - С. 665-668.

7. Архипенко, Ю. В. Адаптация к гипоксии: новые подходы / Ю. В. Архипенко, Т. Г. Сазонтова // III Всерос. конгресс по патофизиологии : материалы. М., 2004. - С. 148.

8. П.Афанасьев, Ю. И. Структура и функции макрофагов / Ю. И. Афанасьев, В. И. Ноздрин, М. 3. Бахшинян // Успехи современной биологии. 1982. — № 2. — С. 421-432.

9. Балаболкин, М. И. Диабетология / М. И. Балаболкин. М. : Мед. лит., 2000.-671 с.

10. Балдаруева, Г. В. Морфофункциональные особенности гистиоцитовподкожной соединительной ткани при экспериментальной гиперинсулинемии / Г. В. Балдаруева, Н. Ф. Воробьева, Н. Г. Сафонова // Бюллетень Сиб. отд. Акад. мед. наук СССР. 1988. - № 1. - С. 86-90.

11. Баранов, В. Г. Экспериментальный сахарный диабет. Роль в клинической диабетологии / В. Г. Баранов, И. М. Соколоверова, Э. Г. Гаспарян и др.. JI. : Наука, 1983. - 240 с.

12. Бахшинян, М. 3. Макрофаги при стрессорных состояниях организма / М. 3. Башинян, Т. А. Белоусова // Морфология. 1998. - Т. 113, № 3. -С.23-24.

13. Бондарь, И. А. Антиоксидант дибикор в лечении сосудистых осложнений сахарного диабета 2-го типа / И. А. Бондарь, О. Ю. Шабельникова, А. Р. Алина // Проблемы эндокринологии. — 2009. т. 55. - №2. - с.41-45.

14. Бизюкин, А. В. Изучение окислительного метаболизма фагоцитов с использованием флуоресцентного индикатора, гидроэтидина / А. В. Бизюкин, С. К. Соодаева. // Химико-фармацевтический журнал. —1995.-№4.-С. 13-18.

15. Бугаева, И. О. Изменение фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов поД| влиянием, лазерного излучения / И. О: Бугаева, Н: В. Богомолова // Морфология. 2004. - Т. 126, № 4. - С. 25.

16. Быков, В. JI. Стереологический. анализ щитовидной железы. Обзор-методов // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. — 1979. — Т. 76, VXX7.-C. 98-106.

17. Быков, В. JI. Секреторные механизмы и-секреторные продукты тучных клеток / В. Л. Быков //Морфология. -1999! Т. 115, №2. - С. 64-72.

18. Бышевский, А. Ш. К механизму связи перекисного окисления липидов и гемостаза // Медико-биологический вестник им. Я. Д. Витебского: —1996.-Т. 2, №6.-С. 20-2К

19. Ванин, А. Ф Образование оксида азота в активированных макрофагах / А. Ф Ванин, Г. Б. Меньшиков, П. И. Мордвинцев // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1991. - № 6. — С. 588-590.

20. Введение в количественную гистохимию ферментов / под ред. Т. Б. Журавлевой и Pi А. Прочуханова. М. : Медицина, 1978. —245 с.

21. Виноградов, В. В. Липидный метаболизм^ макрофагов морфофизиологический аспект / В: В. Виноградов, В. Г. Правоторов // Бюллетень СО РАМН. 1992. - № 11 - С. 89-95.

22. Виноградов, В*. В. Системные реакции соединительной- ткани / В. В. Виноградов, Н. Ф. Воробьева // Бюллетень СО РАМН! 1992. -№ 2. - С. 96-98.

23. Владимиров, Ю. А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю. А. Владимиров, А. И. Арчаков. — М. : Наука, 1972. — С. 236 с.

24. Владимиров, Ю. А. Свободные радикалы в живых системах / Ю. А. Владимиров, О; А. Азизуева, Л. И. Деев и др. ; ВИНИТИ // Итоги науки и техники, Сер. Биофизика. 1991. - Т. 29. — С. 9-19, 3335, 168-172.

25. Владимиров, Ю. А. Свободные радикалы и антиоксиданты / Ю. А. Владимиров // Вестник РАМН. 1998. - № 7. - С. 43-51.

26. Волкова; Н. А. Влияние некоторых антиоксидантов на функциональную активность эритроцитов больных сахарным' диабетом / Н. А. Волкова // Сборник тезисов 2-го съезда Рос. науч. общ. фармакологов. М., 2003. - С. 102.

27. Воробьева, Н. Ф. Особенности гистиоцитарной реакции после предварительного приема с пищей цеолитов в процессе онтогенеза при перегревании и< сухоядении / Н. Ф. Воробьева // Патология, физиология ^экспериментальная терапия. 2008. - № 2. - С. 23-25

28. Воробьева, Н. Ф. Реакция крови и подкожной рыхлой соединительной-ткани белых крыс при общем перегревании организма и при перегревании на фоне введения природных цеолитов / Н!. Ф. Воробьеваг

29. Бюллетень СО РАМН. 2007. - № 1(123). - С. 76,-79.

30. Воскресенский, О. Н. Витамины-антиоксиданты и системность биологического ингибирования перекисного окисления липидов и биополимеров / О. Н. Воскресенский // Биофизические' и физико-химические исследования в витаминологии.» — М'., 1981. — С. 6-9.

31. Гаврилов; В. Г. Анализ методов определения перекисного > окисления липидов' в сыворотке крови по тесту с тиобарбитуровой кислотой / В. Г. Гаврилов, А. Р. Гаврилова, Jl. М. Мажуль // Вопр. мед.химии. -1987. Т.ЗЗ, №1. - С.118-122.

32. Гайер, Г. Электронная' гистохимия / Г. Гайер // М. : Мир — 1974. — 485 с.

33. Головченко, В. М. К вопросу о влиянии инсулина на функциональное состояние тучных клеток : тучные клетки соединительной ткани /

34. В; М. Головченко, С. В. Мелешин // Вопросы иммунологии ревматизма : материалы симпозиума III Всесоюз. совещания по соединительной ткани.-Новосибирск, 1968; — С. 58-61.

35. Голод, Е. Ф. Роль кислородных,радикалов в»нарушениях метаболизма в почках больных острым и хроническим пиелонефритом / Е. Ф. Голод,, В; И. Кирпатовский // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 2006. .-№ li. - G: 23-27.

36. Горизонтов, П. Д. Стресс и система крови- / 11. Д1. Горизонтов, О. И. Белоусова, М. И. «Федотова. М.:Медицина, 1983. - 240

37. Дзодзикова, Mi Э Тканевые базофилы. молочной железы при раке молочной железы до и после*лечения:;/М: Э Дзодзикова; Т. Т. Березов; В; А. Шахламов, К. Д. Салбиев, A. BI Туриев, В; ML Габараева // Вестник РУДН. 2005. - № 1 (29). - С. 102-1071

38. Душкин, М. И. Макрофаги и атеросклероз : патофизиологические и терапевтические аспекты / М. И. Душкин // Бюллетень СО РАМН. -2006. № 2 (120). - С. 47-55

39. Елисеев, В. Г. Соединительная ткань. Гистофизиологические очерки / В. Г. Елисеев.-М. : Медгиз, 1961. -416 с.

40. Елисеева, Е. В. Регуляция функционального состояния тучных клеток медиастинальной плевры препаратами адренергического действия / Е. В. Елисеева // Морфология. 2001. - Т. 119, № 3. - С. 75-80.

41. Земсков, В. М. Активация фагоцитов моноклональными антителами анти-1САМ-3 / В. М. Земсков, Ю. Т. Волков, Е. Д. Торина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1996. — Т. 121, № 2. С. 447-449.

42. Зубова, С. Г. Роль молекул адгезии в процессе распознавания чужеродных и трансформированных клеток макрофагами млекопитающих // С. Г. Зубова, В. Б. Окулов // Успехи современной биологии. 2001. - Т. 121, № 1. - С. 59-66.

43. Зуфаров, К. А. Возрастная динамика популяции и плотности тучных клеток в слизистой оболочке бронхов у человека! / К. А. Зуфаров, 3. Ш. Садыкова, М. А. Юлдашев,,Ф. X. Азизова-// Морфология. 2002. -Т. 121, № 1.-С. 78-80.

44. Ильинская, А. Н. Компонент бактериального пептидогликана, как фактор созревания макрофагов/ А. Н. Ильинская, JI. В. Пичугина, Н. С. Олиферук // Иммунология. 2005. - № 1. - С. 12-15.

45. Ингибитор каспаз Z-VAD-FMK потенцирует индуцируемый тепловымшоком апоптоз и синтез HSP70 в макрофагах / И. Ю. Малышев,

46. М. Г. Пшенникова, М. В. Шимкович, Е. В. Малышева // Бюллетень1экспериментальной биологии и медицины. 2004. - Т. 13 8, № 9. - С. 261-263.

47. Инсулиновая резистентность и роль гормонов жировой ткани в развитии сахарного диабета: Пособие для врачей. Дедов И. И., Балаболкин М. И., Мамаева Г. Г., Клебанова Е. М., Креминская В. М. М.:ЭНЦ, 2005: 88 с.

48. Кетлинский, С. А. Эндогенные иммуномодуляторы / С. А. Кетлинский, А. С. Симбирцев, А. А. Воробьев. — СПб. : Гиппократ, 1992. — 256 с.

49. Киселева, Е. П. Влияние' гиперлипидемии« на функциональную активность перитонеальных макрофагов у мышей СВА и C57BI/6 / Е. П. Киселева, В. П. Пузырева, Р. П. Огурцов // Бюллетень экспериментальнойkбиологии И'медицины. — 2002. Т. 134, № 9. — С. 334-337.

50. Киселева, Е. П. Влияние лактата на функциональную активность макрофагов в: норме' и при опухолевом росте / Е. П. Киселева, В. П. Пузырева, Р. П. Огурцов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2006. - Т. 141, № 1. - С. 72175.

51. Клебанов, Г. И.' Клеточный» механизм1 праймингаг. и активации фагоцитов / Г. И. Клебанов, Ю. А. Владимиров // Успехи-современной биологии. 1999. - № 5. - С. 462-475.

52. Климов, А. Н. Обмен липидов и липопротеидов и его- нарушение / А. Н. Климов, Н. Г. Никульчева. СПб. : Питер Ком, 1999. - 512 с.

53. Клиническая цитохимия / Н. А. Локтев и др. ; под ред. А. В. Ягоды, Н.1 А. Локтева ; Ставроп. гос. мед. акад. Ставрополь : СтМГА, 2005. — 488 с.

54. Колесник, Ю. М. Панкреатичные островки : некоторые аспекты морфологии физиологические и процесса деструкции при сахарном диабете I типа / Ю. М. Колесник, М. А. Орловский // Проблемы эндокринологии. 2004. - Т. 60, № 2. - С. 3-10.

55. Коробейникова, Э. Н. Модификация определения продуктов перекисного окисления липидов в реакции с тиобарбитуровой кислотой // Лабораторное дело. 1989, №7. - С. 8-10.

56. Ланкин, В. 3. Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. — М.: Медицина, 1981. 95 с.

57. Лили, Р. Д. Патологическая техника-и практическая гистохимия : пер. с англ. / Р. Д. Лилли. М. : Мир, 1969. - 645 с.

58. Лойда, 3. Гистохимия ферментов : лабораторные методы : пер. с англ. / 3. Лойда, Р. Госсрау, Т. Шиблер // Лабораторные методы. М. : Мир, 1982.-270 с.

59. Луговская, С. А. Структура и функции моноцитов и макрофагов : (обзор литературы) / С. А. Луговская // Клиническая лабораторная диагностика. 1997. - № 9. - С. 10-16.

60. Луппа, X. Основы гистохимии / X. Луппа ; пер. с нем. И. Б. Бухвалова, Е. Д. Вальтер. М. : Мир, 1980. - 343 с.

61. Макарова, М. Ю. Оценка кардиопротекторного действия некоторых препаратов с антиоксидантной активностью при сочетанииэкспериментального диабета с физической нагрузкой : автореф. дисс.канд. мед. наук : 14.00.25 / М. Ю. Макарова ; Морд. гос. ун-т им.i

62. Н. П. Огарёва. Саранск, 2003. — 17 с.

63. Марков, X. М. Оксидантный стресс и дисфункция эндотелия / X. М. Марков // Патологическая^ физиология и экспериментальная терапия. 2005. - № 4. - С. 5-9.

64. Маянский, А. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А. Н. Маянский, Д. Н. Маянский. Новосибирск : Наука, 1989. - 344 с.

65. Маянский, Д. Н. Хроническое воспаление / Д. Н. Маянский. М. : Медицина, 1991. - 272 с.

66. Меньшикова, Е. Б. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты / Е. Б. Меньшикова, В. 3. Ланкин, Н. К. Зенков,I

67. И. А. Бондарь, Н. Ф. Круговых, В. А. Труфакин. М.: Фирма «Слово», 2006.-556 с.

68. Мусина, Л. А. Ультраструктура макрофагов, выявляемых при имплантации аллогенного биоматериала аллоплант / Л. А. Мусина, С. А. Муслимов, А. И. Лебедева и др. // Морфология. 2006. — Т. 129, № 1.-С. 53-56.

69. Нагорнев, В. А. Атерогенез : (аспекты патологии) / В. Л. Нагорнев,

70. В. X. Анастиади; Е. Т. Зота ; Гос. ун-т медицины и фармации им: Николая Тестемицану. СПб, 2001. — 330 с.

71. Нагорнев, В. А. Эволюция взглядов на роль макрофагов в атерогенезе : от Н. Н. Аничкова до наших дней1 / В. А. Нагорнев, С. В. Мальцев,

72. A. II. Васканьянц // Архив патологии. 2003 - Т. 65, № 2. - С. 8-12.

73. Надев, А. Г1. Система мононуклеарных. фагоцитов; в постнатальном периоде у мышей, перенесших! внутриутробное' кандидозное инфицирование, при экспериментальном; туберкулезе /, А. П. Надеев,

74. B. А. Шкурупий, С. В! Позднякова; и; др. II Бюллетень экспериментальной, биологии и-медицины:. 2006. - Т. 141, № 1. - С. 103-106.

75. Нелаева, А. А. Состояние перекисного окисления липидов в мембранах тромбоцитов у больных- ИЗСД при- кетоацидозе и, коррекция витаминами-антиоксидантами / А. А. Нелаева, И. А. Трошина // Сахарный диабет. -1999. № 3(4). - С. 32-41.

76. Новиков, В. Д. Макрофаги и лимфоциты — клетки гематогенного происхождения в соединительной ткани / В:. Д. Новиков, Г. В! Правоторов, В: А. Труфакин // Морфология. 2004: — Т. 126,.№ 4. -С. 92.

77. Новиков, Bi Д: Словарь по; гистологии / В! Д^ Новиков, Г. В. Правоторов, В. А. Труфакин ; Новосиб. мед. ин-т. Новосибирск : ИМИ, 1998.-149 с.

78. Новиков, В. Е. Фармакология и биохимия гипоксии / В. Е. Новиков, Н. П. Катунина // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. 2002. - Т. 1. — С. 73-87.

79. Один, В. И. Аутоиммунный сахарный диабет / В. И. Один ; под. ред. А. А. Новика. СПб. : ВМедА, 2003. - 344 с.I

80. Олиферук, Н. С. Оценка фагоцитарной и бактерицидной активностинейтрофилов, макрофагов и незрелых дендритных клеток / Н. С. Олиферук, А. Н. Ильинская, Б. В. Пинегин // Иммунология. -2005. -№ 1.-С. 10-12.

81. Омельяненко Н: П. Соединительная ткань Т.1 (гистофизиология иIбиохимия) / Н. П. Омельяненко, JI. И. Слуцкий // 2009. М: Авт. Тир. -380 с.

82. Осипов, А. Н. Активные формы кислорода и их роль в организме / А. Н. Осипов, О. А. Азизова, Ю. В. Владимиров // Успехи биологической химии. 1990! - Т. 31. - С. 180-208.

83. Пальцев, М. А. Межклеточные взаимодействия * / М. А. Пальцев,

84. A. А Иванов. М. : Медицина, 1995. - 224 с.

85. Пальчикова, Н. А. Влияние перфторана на чувствительность животных к диабетогенному действию аллоксана и течение экспериментального диабета / Н. А. Пальчикова, О. И. Кузьминова,

86. B. Г. Селятицкая // Бюллетень СО РАМН. 2006. - №3 (121). - С. 113116.

87. Пальчикова, Н. А. Количественная оценка чувствительности экспериментальных животных к диабетогенному действию аллоксана /

88. Н. А. Пальчикова, В. Г. Селятицкая, Ю. П. Шорин // Проблемы эндокринологии. 1987. - № 4. — С. 65-68.

89. Панин, Л. Е. Системные представления о гомеостазе / Л. Е. Панин // Бюллетень СО РАМН. 2007. - № 5 (127). - С. 10-15.

90. Панков, Ю. А. Достижения в исследованиях молекулярной генетики сахарного диабета / Ю: А. Панков // Биомедицинская химия. — 2005. — Т. 51, №2.-С. 93-98.

91. Пащенков, М. Основные свойства дендритных клеток / М. Пащенков, Б. Пинегин* // Иммунология. 2001. - № 4. — С. 7-16.

92. Перцов, С. С. Перекисное окисление липидов и антиоксидантные ферменты мозга крыс при остром эмоциональном стрессе / С. С. Перцов, Т. С. Балашова, А. С. Сосновский // Бюллетень экспериментальной биологии и-медицины. — 1995. — Т. 120, № 9: — С. 244-247.

93. Пилушкин, П. К. Изменение энергетического обмена и повреждения нервных клеток у крыс при. многократном введении высоких доз инсулина / П. К. Пилушкин, А. Д1 Ноздрачев, П: П. Потапов // Проблемы эндокринологии. 2006: — Т. 52, № 1. - С. 28-31.

94. Пирс, Э. Гистохимия. Теоретическая и прикладная. — М., 1962. —1963с.

95. Плецитый; К. Д: Активные метаболиты витамина Д как.регуляторы процесса пролиферации и дифференцировки клеток моноцитарно-макрофагального ряда : (обзор) / К. Д. Плецитый // Вопросы медицинской химии. 1990. - № 5. - С. 2-4.

96. Подколзин; А. А. Система антиоксидантной защиты организма и старение / А. А. Подколзин, А. Г. Мегреладзе, В. И. Донцов и др. // Профилактика старения. 2000. - № 3. С. 18-22.

97. Попова; Е. I I. Регуляция фосфоинозитид-специфичной фосфолипазы С / Е. Н; Попова, О. Ю. Плетюшкина, JI. Ю. Щепкина // Биохимия. — 2002. № 2. - С. 265-270.

98. Правоторов, Г. В. Гистофизиология органных макрофагов : (сравнительный анализ резистентных макрофагов и. динамика их активности)? / F. В. Правоторов; В: Д. Новиков ; Новосибирск, мед. институт. Новосибирск, 1996. - 154 с.

99. Правоторов, F. В; Изменение ультраструктуры гистиоцитов подкожной соединительной ткани при обезвоживании и, голодании / Г. В. Правоторов // Бюллетень экспериментальной- биологии и медицины. 1979. - Т. 87, № 4. - С. 366-369.

100. Правоторов, Г. В. Липидная инфильтрация резидентных макрофагов . как свидетельство активации их клиринговой функции /

101. F. В. Правоторов7/ Морфология. 2008; - №3: - С.92.

102. Прошина, JI. Г. Влияние экзогенного гормона на клеточные элементы соединительной ткани / JI. Г. Прошина, В. В. Виноградов, Н. Ф. Воробьева // Бюллетень СО АМН СССР. 1987. - № 3. - С. 8285.

103. Прошина, JL Г. Стимулирующее влияние антиоксидантной терапии на систему мононуклеарных фагоцитов / JI. Г. Прошина, В. В. Прошин // Клиническая медицина Великий Новгород-Алматы. - 2004. - С. 68 -71.

104. Радостина, А. И. Ультраструктура макрофагов развивающейся, дермы и-очага воспаления у крыс / А. И. Радостина // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. — 1988. — Т. 95, № 8. — С. 61-67.

105. Севергина, Э. С. Инсулинзависимый сахарный диабет взгляд морфолога / Э. С. Севергина // Издательство: Видар-М, 20021 - 1*53 с.

106. Семенов, В. В. Взаимодействие1 щитовидной» железы и надпочечников при введении аллоксана / В. В. Семенов, В. В. Харина, М. В. Семенова // Российские морфологические ведомости. — 1999. № 1-2.-С.132

107. Серов, В. В. Соединительная ткань : (функциональная морфология и общая патология) / В. В. Серов, А. Б. Шехтер. М: : Медицина, 1981. -312 с.

108. Смирнова, И. О. Тучные клетки при фотоповреждении кожи и ассоциированном с ним базально-клеточном раке / И. О. Смирнова, И. М. Кветной, Н. М. Аничков, О. Н. Смирнова, И. В. Антонова // Архив патологии. 2005. - Т. 67, № 5. - С. 26-28.

109. Снигур Г. JT. Структурные изменения в панкреатических островках при экспериментальном сахарном диабете на фоне введения биологической активной добавки на основе Гимнемы лесной /i Г. JT. Снигур, М. П. Самохина, В>. Б. Писарев, А. А. Спасов,

110. А. Е. Буланов // Морфология. 2008. - №1. - с.60-64с

111. Стальная, И. Д. Метод определения диеновой конъюгацииSненасыщенных высших жирных кислот // Современные методы в f биохимии. М., 1977. - С. 63-64.

112. Стефанов, С. Б. Окулярная вставка для полных стереологических измерений' микроскопических объектов // Цитология. Л.: Наука, 1974.- Т. XVI, № 11. - С. 1439-1440.

113. Терехина, Н. А. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантнаяiсистема!: теория, клиническое применение, методы / Н. А. Терехина,

114. Ю. А. Петрович. Пермь, 1992. - 43 с.

115. Титович, Е. В. Профилактика сахарного диабета: прошлое, настоящее и будущее / Е. В. Титович // Проблемы эндокринологии. -2009. т.55. - №2. - С. 3-9.

116. Тотолян, А. А. Клетки иммунной системы : учеб. пособие / А. А. Тотолян, И. С. Фрейдлен. СПб. : Наука, 1999.

117. Ухина, Т. В. Влияние эстрадиола на перекисное окисление липидов в коже / Т. В. Ухина, Г. Ж. Калмагамбетова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1993. - Т. 118, №. 4. — С.362-364.

118. Учитель, И. Я. Макрофаги в иммунитете / И. Я. Учитель М.: Медицина. - 1978. - с. 121

119. Г42. Флеров, М. А. Перекисное окисление белков плазмы крови больных сахарным диабетом типа 1 / М. А. Флеров, Н. Н. Смирнова, 3. В. Светлова // Проблемы эндокринологии. — 2003. — Т. 49, № 4. — С. 3-4.

120. Фрейдлин, И. С. Иммунная система и^ее дефекты : руководство для врачей / И. С. Фрейдлен. СПб. : НТФФ Полисан, 1998. - 103 с.

121. Фрейдлин, И. С. Ключевая позиция макрофагов в цитокиновой , регуляторной сети / И. С. Фрейдлин // Иммунология. — 1995. — № 3. — С.4448.

122. Фрейдлин, И. С. Система мононуклеарных фагоцитов / И. С. Фрейдлин. -М. : Медицина, 1984. 272 с.

123. Хаитов, Р. М. Иммунология : учебник / Р. М Хаитов, Г. А. Игнатьева, И. Г. Сидорович. М. : Медицина, 2000. - 432 с.

124. Хантов, Р. М. Некоторые избранные проблемы функциональной активности макрофагов / Р. М. Хантов, В. М. Земсков // Журнал микробиологии. 1995. - № 3. - С. 27-32.

125. Хрущев, Н. Г. Гистогенез соединительной ткани / Н. Г. Хрущев // М. : Наука. 1976.- 118 с.

126. Чкадуа, Г. Адаптирование методики культивирования* дендритных клеток человека из моноцитов периферической крови для клинического применения / Г. Чкадуа, Т. Заботина, А. Буркова и др. // Российский биотерапевтический журнал. 2002. - № 3. — С. 56-62.

127. Чумаченко, П. В. Моноциты / макрофаги и липидоз интимы аорты человека при атеросклерозе / П. В. Чумаченко, Н. М. Черпаченко, В. С. Жданов // Архив патологии. 1995. - Т. 57, №-3. - С. 40-44.

128. Шпак, С. И. Альвеолярные макрофаги при воздействии ксенобиотиков / С. И. Шпак, Ю. И. Шрамко // Морфология. 2000. — Т. 118, №6.-С. 66-68.

129. Юшков, Б. Г. Сосуды костного мозга и регуляция кроветворения / Б. Г. Юшков, В. Г. Климин, А. И. Кузьмин ; Рос. акад: наук.Ур.- отд-ние. Екатеринбург : НИСО УрО РАН. - 148 с.

130. Adams, D. О. Phagocitic Cells : cytotoxic Activities of Macrophages / D. O. Adams, T. A. Hamilton // Inflammation1: basic Principles and clinical correlates / eds. by J. I. Gallin et al.. New York, 1988. - P. 471-492.

131. Ahmadi, К. Macrophage may responses to androgen via its receptor / K. Ahmadi, A. B. McCruden // Medical Science Monitor. — 2005. 19-12(1), Dec.-P. 15-20.

132. Anand, K. Hypoxia causes an increase in phagocytosis by macrophages in a HIF-1 a-dependent manner / K. Anand, С. C. Gribar, Jun Li, J. W. Kohler est. // Journal of Leukocyte Biology. 2007. — Vol. 82. — P.1257-1265.

133. Ann, N. Y. Protective Role of Antioxidative Food Factors in Oxidative Stress Caused by Hyperglycemia / N. Y. Ann // Academic Science.-2005.-Vol. 1043.-P. 440-451.

134. Appelberg, R. Macrophage nutriprive antimicrobial mechanisms / R. Appelberg // Journal of Leukocyte Biology. 2006. - Vol. 79, Jun. — P. 1117-1128.

135. Aviram, M. Macrophage-mediated oxidation of extracellular low density lipoprotein requires an initial binding of the lipoprotein to its receptor / M. Aviram, M. Rosenblat // Journal Lipid Resources. — 1994. -Vol. 35, №'3. -P.385-398.

136. Beauchamp, C. Superoxide dismutase: improved assays andapplicable to acrylamide gels / C. Beauchamp, I. Fridovich // Analyt. Biochem. 1971. -V. 44, №1. - P. 267-287.

137. Bender, A. T. Selective up-regulation of PDE1B2 upon monocyte-to-macrophage differentiation / A. T. Bender, C. L. Ostenson, E. H. Wang and J. A: Beavo. // Proceeding of the National Academy of Sciences. 2005. -Vol. 102, Jan.-P. 497-502.

138. Berthiaume, E. P. Molecular size-fractionation during endocytosisi in macrophages / E. P. Berthiaume, C. Medina, JI A. Swanson // The Journal of Cell Biology. 1995. - Vol. 129; № 4. - P. 989-998.

139. Bhide, V. M. Collagen phagocytosis by fibroblasts is regulated by Decorin / V. M. Bhide, C. A: Laschinger, P. D. Arora, W. Lee, L. Hakkinen, H. Larjava, J. Sodek, C. A. McCulloch // J. Biol. Chem. 2005. - Vol. 280. -P. 23103-23113

140. Blanc, M. C. Arginine and glutamine availability and macrophage functions in the obese insulin-resistant / M. C. Blanc, Z. Rat, C. Moinard, A. Beziel // The Journal of Cell Physiology. 2005. - Vol. 202(1), Jan. - P. 153-159.

141. Bock, T. Increased islet volume but unchangedislet number in ob/ob mice / Т. Bock, B. Pakkenberg, K. Uschard // Diabetes. 2003. - Vol. 52, №7.-P. 1716-1722.

142. Bona, С. Textbook of immunology / C. Bona, F. Bonilla. -Amsterdam, 1996. 406 p.

143. Bonner-Weir, S. New sources of pancreatic beta-cells / S. Bonner-Weir, G. C. Weir //Nature Biotechnology. 2005. - Vol. 23. - P. 857-861.

144. Bonner-Weir, S. A second pathway for regeneration of adult endocrine pancreas : a possible recapitulation of embryonic development / S. Bonner-Weir, L. A. Baxter, G. T. Schuppin, F. E. Smith // Diabetes. -1993.-Vol. 42, № 12. -P: 1715-1720.

145. Bouwens, L. Extra insular beta-cells associated with ductules are frequent in adult human pancreas / L. Bouwens; D.G. Pipeleers // Diabetologia. - 1998. - №4. - P.629-633.

146. Bouwens, L. Regulation of pancreatic beta-cell mass / L. Bouwens, I. Rooman // Physiology Revue. 2005. - Vol. 85, № 4. - P. 1255-1270.

147. Cano, D. A. Regulated P-Cell Regeneration ,in the Adult. Mouse Pancreas / D. A. Cano, I. C. Rulifson, P. W. Heiser, L. B. Swigart, S. Pelengaris, G. Mike, G. I. Evan, J. A. Bluestone, M. Hebrok // Diabetes. 2008. - Vol-. 57, Apr. - P. 958-966.

148. Cantor, J. Recruitment and'Activation of Macrophages by Pathogenic CD4 T Cells in Type 1 Diabetes : evidence for involvement of CCR8 and CCL1 / J. Cantor, K. Haskins // The Journal of Immunology. 2007. - Vol. 179.-P. 5760-5767.

149. Carvalho, V. F. Mast cell changes in experimental diabetes : focus on-attenuation of allergic events / V. F. Carvalho, E. O. Barreto, R. S. Cordeiro, V. Lagente; M. A: Martins, P. M. Silva // Memorias do Instituto Oswaldo

150. Cruz. -Riode Janero, 2005.- Vol. 100, N4,March. P. 121-125.

151. Conner, E. M. Inflammation, free radicals and antioxidant /

152. E. M. Conner, M.B. Grisham // Nutrition. 1996. - № 4. - P. 274-277.

153. Daley, W. P. Extracellular matrix dynamics in development- and' regenerative medicine / W. P. Daley, S. B. Peters, M. Larsen // Journal of Cell Science. 2008. - Vol. 121, N 3, February. - P. 255-264.

154. Daugherty, A. Cytokine regulation of macrophage functions in atherogenesis / A. Daugherty, R. Nancy, D. L. Rateri // The Journal Lipid Resource.-2005.- №46, Sep.-P. 1812-1822.

155. Dorsch, M. PK1/EG-VEGF induces monocyte differentiation and activation / M. Dorsch; Y. Qiu, Dl Soler, F. Nita, Duong Thao, G. Andrew, S. O'Neil, L. Jose, С. C. Fraser, // Journal of Leukocyte Biology. 2005. -Vol! 78, Aug.-P. 426-434.

156. Fujiwara, Ns Macrophages in inflammation / N. Fujiwara, K. Kobayashi // Curr Drug Targets Inflamm Allergy. 2005. - Vol. 4(3). - P. 281 - 286.

157. Furth, R. van. Cell biology of mononuclear phagocytes / R. Furth R. van. // Hemopoietic growth factors and mononuclear phagocytes. -Leiden, 1993.-P. 1-9.

158. Galli, S. J. Mast cells: versatile regulators of inflammation, tissue remodeling, host defense and homeostasis / S. J. Galli, M.Tsai // J Dermatol Sci.-2008-Volt 49(1).-P. 7-19.

159. Glaros, T. Macrophages and fibroblasts during inflammation, tissue damage and organ injury / Glaros T, Larsen M, Li L. // Front Biosci. 2009- Jan 1; 14 P. 3988-3993.

160. Glaros, T. Macrophages and fibroblasts during inflammation, tissue damage and organ injury / T. Glaros, M. Larsen, L. Li // Front Biosci. -2009. Vol. 1(14). - P. 3988 - 3993.

161. Gordon, S. Macrophage heterogeneity and tissue lipids / S. Gordon // J. Clin Invest. 2007. - Vol.117(1). - P. 89 - 93.

162. Gordon, S. Molecular immunobiology of macrophages: recent progress / S. Gordon, S. Clarke, D. Greaves, A. Doile // Current Opinion in Immunology. 1995. - Vol. 7. - P. 24-33.

163. Grant, D. Nuclear Receptor Atlas : Macrophage Activation / D. Grant, A. Barish, M. Downes, W. A. Alaynick // Molecular Endocrinology. 2005.- Vol. 19, Oct. P. 2466 - 2477.

164. Hasko, G. Shaping of monocyte and macrophage function by adenosine receptors / G. Hasko, P. Pacher, E. A. Deitch, E. S. Vizi // Pharmacol Ther.- 2007. Vol. 113(2). - P. 264-75.

165. He, H. Modulation of Macrophage Activation by Amniotic Membrane Powder / H. He, W. Li, S.-Y. Chen, Y.-T. Chen, S. C. Tseng //

166. Global Investment Ophthalmology : Visual Science. 2007. - Vol. 48, May.-P. 5217.

167. Higuchi, Y. Chromosomal DMA fragmentation in apoptosis and necrosis induced by oxidative stress / Y. Higuchi // Biochemical Pharmacology. 2003. - Vol. 66. - P. 1527-1535.

168. Hogg, N. Inhibition of macrophage dependent low density lipoprotein oxidation by nitric oxide donors / N. Hogg, A. Struck, S. P. Gose, N. Santanam, J. Joseph // Journal of Lipid Resources. — 1995. — Vol. 36, №8. -P. 1756-1762.

169. Iin, F. Secretory leukocyte" protease inhibitor a macrophage product induced by and'antagonistic to bacrial lipopolysaccaride / F. Iin, C. Nathan, D. Radzioch, A. Ding // Cell. 1997. - Vol. 88; № 3. - P. 417-426.

170. Jennifer, F. A. S. Annexin A2 is a soluble mediator of macrophage activation / F. A. S. Jennifer, U. Klantri, G. M: Feldman // Journal of Leukocyte Biology. 2007. - Vol. 82'. - P. 1174-1184.

171. Jingyan, L. Macrophage Metalloelastase Accelerates the Progression of Atherosclerosis in Transgenic Rabbits / L. Jingyan, Liu Enqi, Yu Ying // Circulation. 2006. - Vol. 113, Apr. - P. 1993-2001.

172. Kanda, N. 17Beta-estradiol enhances the production of nerve growth factor in THP-1-derived macrophages or peripheral blood monocyte-derived macrophages. / N. Kanda, S. Watanabe // Journal Invest Dermatology. -2003.-Vol. 121(4), Oct.-P. 771-780.

173. Khandani, A. Microtubules regulate PI-3K activity and recruitment to the phagocytic cup during Fc receptor-mediated phagocytosis in nonelicited macrophages / A. Khandani, E. Eng, J. Jongstra-Bilen, A. D. Schreiber,

174. D. Douda, P. Samavarchi-Tehrani, R. E. Harrison // Journal of Leukocyte Biology. 2007. - Vol. 82, Aug. - P. 417-428.

175. Kielty, С. M. Elastic fibres / С.' M. Kielty, M. J. Sherratt, C. A. Shuttleworth // Journal of Cell Science. 2002. - Vol. 115, N 14, Jul.-P. 2817-2828

176. Kiss, A. L. Early endocytotic steps in elicited macrophages : Omega-shaped plasma membrane vesicles at their cell surface / A. L. Kiss, A. Kittel // Cell Biology International: 1995. - Vol. 19, № 6. - P. 527-538.

177. Knight, J. A. Review : free radicals, antioxidant and the immune system / J. A. Knight // Annual Clinical Laboratory Science. 2000 - Vol. 30.-P. 145-158

178. Kobayasi, T. Ultrastructure of human mast cell'granules / T. Kobayasi, K.Miltgard, G. Asboe-Hansen // J. Ultrastruct. Res. 1986. - 23. - P. 153165.

179. Kolb, H. Nitric oxide in autoimmune disease : cytitoxic or regulatory mediator? / H. Kolb, V. Kolb-Bachofen // Immunology Today. 1998. -Vol. 19.-P. 556-562.

180. Kopp, P. The Kinesin KIF1C and Microtubule Plus Ends Regulate Podosome Dynamics in Macrophages. / P. Kopp, L. Reiner, A. Martin // Molecular Biology of the Cell. 2006. - Vol. 17, Jun. - P. 2811-2823:

181. Kramer, P. R. 17 beta-estradiol regulates cytokine release through modulation- of CD 16 expression in monocytes and monocyte-derived macrophages / P. R. Kramer, S. F. Kramer, G. Guan // Arthritis Rheum. — 2004. Vol. 50(6), Jun. - P. 1967-1975.

182. Labat-Robert, J. Aging of the extracellular matrix and its pathology /

183. J. Labat-Robert, L. Robert // Experimental Gerontology. — 1988. — Vol. 23, № l.-P. 5-18.

184. Langermans, J. A. Antimicrobial functions of mononuclear phagocytes / J. A. Langermans, W. L. Hazenbos, R. Furth van // Journal Immunology Methods. 1994. - Vol. 174. - P. 185-194.

185. Lee, C. S. Regeneration of pancreatic islets after partial pancreatectomy in mice does not involve the reaction of neurogenin-3 / C. S. Lee, D. De Leon, К. H. Kaestner, D: A. Staffers // Diabetes. 2006. -Vol. 55, №2.-P. 269-272.

186. Leichner, A. Stem/progenitor cells derived from adult tissues : potential for the treatment of diabetes mellitus / A. Leichner, J. F. Habener // American Journal Physiology Endocrinology Metabolism. 2003. — Vol. 284, №2.-P. 259-266.

187. Levine, F. No pancreatic endocrine stem cells? / F. Levine, M. Mercola // New England Journal Medicine. 2004. - Vol. 351, № 10. -P. 1024-1026.

188. Li, L. Mast cell and immune inhibitory receptors / L. Li, Z. Yao //

189. Cellular & Molecular Immunology. 2004. - № 1(6). - P. 408-415.

190. Liang, C. P. Increased CD36 protein as a response to defective insulinsignaling in macrophages / C. P. Liang, S. Han, H. Okamoto, R. Carnemolla, I. Tabas, D. Accili, A. R. Tall // Journal Clinical Investment. 2004. - Vol. 113(5), Mar.-P. 764-773.

191. Lin, W. Study on Strand breaks induced by sodium nitroprussiade, a nitris oxide donor, in vivo and in vitro / W. Lin, X. Wei, H. Xue, M. Kelimi est. // Mutation Research. 2000. - Vol: 466, № 2. - P. 187-195.

192. Ling, Li. Adipocyte-derived Lipoprotein Lipase Induces Macrophage Activation and1 Monocyte Adhesion : role of Fatty Acids / Li Ling, R. Genevieve // Obesity. 2007. - Vol. 15, Nov. - P. 2595-2604.

193. Mason, Т. C. The clinical'importance of leucocyte and endothelial cell adhesion molecules / Т. C. Mason, D. O. Haskard // Vascular Medical Revue. 1994. - Vol. 5. P. 249-275.

194. Maury a, M. R; Systems biology of macrophages / M. R. Maurya, G. Benner, S^Pradervand; G. Glass, S. Subramaniam;// Adv Exp Med Biol. 2007. - Vol. 598. - P. 62-79.

195. Mechanick, I. J. Metabolic Mechanisms of Stress Hyperglycemia /

196. J. Mechanick // JPEN : Journal of Parenteral and EnteraL Nutrition. -2006. Vol. 30, Mar/Apr. - P. 157-163.

197. Meier, J. J. Increased vulnerability of newly forming beta cells to cytokine-induced cell death / J. J. Meier, R. A. Ritzel, K. Maedler, T. Gurlo, P. C. Batler // Diabetology. 2006. - Vol. 49, № 6. - P. 83-89.

198. Meier, J. J. Sustained beta cell apoptosis in patients with long standing type 1 diabetes Indirect evidence for islet regeneration? / J. J. Meier, A. Bhushan, A.E. Butler, R. A. Rizza, P. C. Butler // Diabetology. 2005. -Vol. 48, № 11.-P. 2221-2228.

199. Meuret, G. Origin, ontogeny, and kinetics of mononuclear phagocytes / G. Meuret // Advanced experimental Medical Biology. 1976. - Vol. 73A. -P. 71-81®.

200. Mukherjee, B'. Lipid preoxidation, glutathione levels and changes in glutathione-related enzyme activities in streptozotocin-induced-diabetic rats / B: Mukherjee, J. R. Mukherjee, M. Chatterjee // Immunology CelLBiology. 1994. - Vol. 72. - P. 109L1T4

201. Murphy, P. A. Chemokine receptors: structure, function and role in microbial pathogenesis / P. A. Murphy // Cytokine-and'Growth Factor Reviews. 1996. - Vol. 7. - P. 47-64.

202. Nakamura, H. Redox regulation of cellular activation / H. Nakamura, K. Nakamura, J. Yodoi // Annual Review of Immunology. 1997. - Vol 15. -P.'351-369.

203. Nau, G. Human macrophage activaition programs induced bybacterial pathogens / G. Nau, J. Richmond, A. Schbesinger // The Proceeding of the National Academy of Sciences USA. 2002. - Vol. 99, № 3. - P. 15031508.

204. Nickols В., Bainton D. Ultrastructure and cytochemistry of mononuclear phagocytes // Mononuclear phagocytes in immunity, infectionand pathology. /Eds. Furth R. van.- Oxford London-Edinburgh: Blackw. Ci. Publ, 1975.- P.17-55.

205. Nienartowicz, A. Mast cells in neoangiogenesis / A. Nienartowicz, M. E. Sobaniec-Lotowska, E. Jarocka-Cyrta, D. Lemancewicz // Medical

206. Science Monitor. 2006. - 12(3). - P. 53-56.

207. Nir, T. Recovery from diabetes in mice by beta cell regeneration /

208. T. Nir, D.A. Melton, Y. Dor // The Journal Clinical Investigation. 2007. -Vol. 117. — P.2553-2561.

209. Osawa, T. Protective Role of Antioxidative Food Factors in Oxidative Stress Caused by Hyperglycemia/ T. Osawa, Kato Yoji // The New York Academy of Sciences. 2005. - Vol. 1043, Jum - P. 440-451.

210. Portero-Otin, M. Advanced glycation and product precursors impair epidermal growth factor receptor signaling / M. Portero-Otin, R. Pamplona, M. J. Bellmunt et al. // Diabetes. 2002. - Vol. 51, № 5, May.-P. 1535-1542.

211. Qin, C. Elevated Plasma Membrane Cholesterol Content Alters Macrophage Signaling and Function / C. Qin, N. Tomokazu, I. Grosheva // Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 2006. - Vol. 26, Feb. -P. 372-378.

212. Ramirez, F. Fibrillin microfibrils : multipurpose extracellular networks in organismal physiology / F. Ramirez, L. Y. Sakai, H. C. Dietz, D. B. Rifkin // Physiological Genomics. 2004. - № 19(2); Oct 4. - P. 151-154.

213. Reville, K. Lipoxin A4 Redistributes Myosin IIA and Cdc42 in Macrophages : Implications for Phagocytosis of Apoptotic Leukocyte / K. Reville, J. K. Crean, S. Vivers // The Journal of Immunology. 2006. — Vol. 176, Feb.-P. 1878-1888.

214. Reynolds, E. S. The use of lead citrate at high pH as an electronopaque stain electron microscopy / E. S. Reynolds // J.Cell Biol— 1963— V.17 — P.208-212.

215. Robert, F. J. Lipid Peroxidation Induces Cholesterol Domain Formation in Model Membranes / F. J. Robert, R. P. Mason // Journal of Biology Chemistry. 2005. - Vol. 280. - P. 39380-39387.

216. Rouser, C. Glutathione metabolism in resting and phagocytizing peritoneal macrophages / C. Rouser, H. Scott, O. W. Griffith // Journal of Biological Chemistry. -1982. V.275, № 4. - P. 2002-2008.

217. Salamon, A. Role of fibroblasts in physiologic, reparative and patologic processes / A. Salamon, E. Toldy // Orvosi Hetilap. 2007. —148(36).-P. 1683-1690

218. Saraswathi, V. The role of lipolysis in mediating the proinflammatory effects of very low density lipoproteins in mouse peritoneal macrophages / V. Saraswathi, A. H. Hasty // Journal of Lipid Research. 2006. - Vol. 47, Jul.-P. 1406-1415.

219. Schuitemaker, H. Macrophages ingest and are activated by bacterial DNA / H. Schuitemaker, N. A. Kootstra, R. A. Fouchier, B. Hooibrink, F. Miedema // The Journal of Immunology. 1996. - Vol. 157. - P. 21162122

220. Semenkova, G. N. Ability of phagocytes to generate reactive oxygen species in children with pollinosis / G. N. Semenkova, A. I. Kovalenka,

221. A. A. Krukau, V. F. Zhernozek, E. N. Smirnova // Physica Medica. -2005. Vol. 20. - P. 132-134.

222. Sies, H. Oxidative Stress II : Oxidants and antioxidants / H. Sies // American Journalof Medic. 1991. - Vol. 91. - P. 31.

223. Snyderman, R. Structure and function of monocytes and macrophages / R. Snyderman, M. C. Pike // Arthritis and allied conditions / ed. D. McCarty. New York, 1989. - P. 306-335.

224. Spolarics, Z. Role of Glutathione catalase in H2O2 detoxification in LPS-activated hepatic endothelial and Kupffer cells / Z. Spolarics, J. X. Wu // American Journal of Physiology. 1997. - Vol. 273, №. 6. - Pt. 1. - P. 1304-1311.

225. Steinman, R. The endocytic activity of dendritic cells / R. Steinman, J. Swanson // Journal of Experimental Medicine. 1995. - Vol. 182. - P. 283288.

226. Sturge, J. Mannose receptor regulation of macrophage cell migration / J. Sturge, S. K. Todd, G. Kogianni, A. McCarthy, С. M. Isacke // Journal of Leukocyte Biology. 2007. - Vol. 82, Sep. - P. 585-593.

227. Suzuki, H. Induction of apoptosis in myocardial infraction and its possible relationship to nitric oxide synthase in macrophages / H. Suzuki, S. M. Wildhirt, R. R. Dudek // Tissue & cell. 1996. - Vol. 28. - P. 89-97.

228. Szkudelski, Т. The Mechanism of Alloxan and Streptozotocin Action in В Cells of the Rat Pancreas / T. Szkudelski; Depatment of Animal Physiology and Biochemistry, University of Agriculture, Poznan, Poland //

229. Physiology Research. 2001. - Vol. 50, № 6. - P. 537-546.

230. Tahanovich, A. D. Cytocines reactive oxygen species produced byalveolar macrophages in sarcoidosis / A. D. Tahanovich, I. L. Katovich, G. N. Semenkova, G. L. Borodina, G. N. Tamashcina // European Respiratory Journal. 2001. - Vol. 18. - P. 68.

231. Taniyama, Y. Reactive Oxygen Species in the Vasculatuve : Molecular and Culluar Mechanisms / Y. Taniyama, К. K. Griendling // Hypertension. -2003. Vol. 42, № 6, Dec. - P. 1075-1081.

232. Teta, M. Growth and regeneration of adult' beta cells does not involve specialized progenitors / M. Teta, M. M. Rankin, S. Y. Long, G. M. Stein, J'. A. Kushner // Developmental Cell. 2007. -Vol. 12. - P. 817-826.

233. Turchyn, L. R. Phenotypic and functional analysis of murine resident and induced peritoneal macrophages / L. R. Turchyn, T. J. Baginski, R. R. Renkiewicz, C. A. Lesch, J. L. Mobley // Comp Med. 2007. -Vol. 57(6). - P. 574-580.

234. Turyna, B. The influence of in vivo stimulation of functional activity of rat macrophages / B. Turyna // Folia Histochem. Cytobiology. 1994. -Vol. 32, №2.-P. 101-105.

235. Um, H. D. Fas mediates apoptosis in human Monocytes by a reactive oxygen intermediate — dependant way / H. D. Um, J. M. Orenstein, S. M. Wahl // The Journal of Immunology. 1996. - Vol. 156. - P. 34693477.

236. Van Dam P. S. Nerve function and oxidative stress in diabetic and vitamin E-deficient rats / P. S.Van Dam, B. S. Van Asbeck, B. Bravenboer, J. F. Van Oirschot, W. H. Gispen // Free Radiccal Biology and Medicine. -1998.-Vol. 24.-P. 18-26.

237. Van Damme, H. Amputations in diabetic patients: a plea for footsparing surgery / H. Van Damme, M. Rorive, В. M. Martens De Noorthout, et al. // ActaChir. Belg.-2001.- Vol. 101. Sup. 3. - P. 123-129.

238. Vesey, D. A. Role of protein kinase С and oxidative stress in interlenkin-ip-induced human proximal tubule cell injury and fibrogenesis / D. A. Vesey, C. Cheung, L. Cuttle et al. // The Journal of Laboratory and

239. Clinical Medicine. 2002. - Vol. 140, № 5. - P. 342-350.

240. Vinik, A. Detervinants of pancreatic islets cell mass: a balancybetween neogenesis and senescence /apoptosis/ / A.Vinik, G.Pittenger., R. Rafaeloff et al. // Diabetes. Rev. 1996. - v.4. - №2. - P. 379-382.

241. Wong, T. The role of fibroblasts in tissue engineering and regeneration / T. Wong, J. A. McGrath, H. Navsaria // J. Dermatol. 2007. - Vol. 156(6). -P. 1149- 1155.

242. Xiaoyu, Hu. Crosstalk among Jak-STAT, Toll-like receptor, and ITAM-dependent pathways in acrophage activation. / Hu Xiaoyu, Chen1. С165

243. Janice, Wang Lu // Journal of Leukocyte Biology. 2007. - Vol. 82, Aug.-P. 237- 243.

244. Yoshimura, T. Secretion by human fibroblasts of Monocytes chemoattractant protein-1, the product gene JE / T. Yoshimura, R. J. Leonard // The Journal of Immunology. 1990. - Vol. 144, № 6. - P. 2377- 2383.

245. Yoshinori, N. A Thematic Series on Lipid Signaling : Prologue / N. Yoshinori // The Journal of Biochemistry. 2002. - Vol. 131. - P. 283284.

246. Zamora, R. Feed-back inhibition of oxidative stress by oxidized lipid/amino acid reaction product / R. Zamora, M. Alaiz, F. J. Hidalgo // Biochemistry. 1997. - Vol. 36, № 50. - P. 15765-15771.

247. Zhang, S. Effect of melatonin on the generation of nitric oxide in murine macrophages. / S. Zhang, W. Li, Q. Gao, T. Wei // European Journal of Pharmacology. 2004. - 501(1-3), Oct. - P. 25-30.

Информация о работе

Григорьева, Мария Вениаминовна
кандидата медицинских наук
Москва, 2009
ВАК 03.00.25

Диссертация

Функциональная морфология рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи в условиях аллоксанового диабета и коррекции его [А]-токоферолом. - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы