Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Функциональная морфология макрофагов при регенерации тканей, индуцированной аллогенными биоматериалами

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Функциональная морфология макрофагов при регенерации тканей, индуцированной аллогенными биоматериалами"

Мусина Ляля Ахияровна

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ МОРФОЛОГИЯ МАКРОФАГОВ ПРИ РЕГЕНЕРАЦИИ ТКАНЕЙ, ИНДУЦИРОВАННОЙ АЛЛОГЕННЫМИ БИОМАТЕРИАЛАМИ

03.00.25 — гистология, цитология и клеточная биология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Саранск - 2007

003055397

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию Российской Федерации» (г. Уфа)

Научный консультант: Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор Муслимов Сагит Асхатович

Доктор биологических наук, профессор Киселева Руфина Евгеньевна

Доктор медицинских наук, профессор Зайцев Валерий Борисович

Доктор медицинских наук, профессор Ноздрии Владимир Иванович

Ведущее учреждение: Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург

Защита диссертации состоится » 2007 г. в /о^ч&с. на

заседании диссертационного совета Д' 212.117.01 в Мордовском государственном университете им. Н.П.Огарева по адресу: 430000 Россия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» по адресу: 430000, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

Автореферат разослан « / Ь » 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор

Балашов Владимир Павлович

1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Изучение проблем воспаления и репаративной регенерации является одной из фундаментальных задач биологии и медицины. В последние годы существенно изменились представления о механизмах регуляции репаративных процессов, знание которых открывает перспективы для разработки научных основ стимуляции и управления процессом регенерации (Озерская О.С., 2001; Fausto N., 2000; Fu X. et al., 2005). Результаты многочисленных исследований позволяют сделать вывод о том, что в воспалении и регенерации поврежденных тканей ведущую роль играют макрофаги, которые, секретируя различные цитокины, регулируют скорость размножения и характер дифференцировки клеток (Маянский Д.Н., 1991; Шехтер А.Б., Серов В.В., 1991; Sobiczwska Е., Szmigielski S., 1997; Sutherland J. et al., 2005). Установлено, что при вялотекущем заживлении ран и фиброзе количество и активность макрофагов значительно снижаются и повышается экспрессия трансформирующего фактора роста TGF-P1, что способствует быстрому развитию фибропластических процессов (Шехтер А.Б., Серов В.В., 1991; Lin R.Y. et al., 1995; Santana A., Saxena В., 1995; Rodemann H.P. et al. 1996).

В настоящее время для восстановления тканей все шире используются аллогенные биоматериалы, применение которых, основанное на их резорбции и замещении, позволяет избежать рубцевания и достичь полноценной регенерации тканей (Мулдашев Э.Р., 1994; Нигматуллин Р.Т., 1996; Муслимов С.А., 2000). Анализ процесса замещения биоматериалов в различных тканях, в том числе и в паренхиме печени, показал, что в первую очередь в зону имплантации биоматериала мигрируют макрофаги, осуществляющие лизис и резорбцию коллагеновых волокон биоматериала (Мусина Л.А., 1999; Муслимов С. А., 2000). Однако остаются нераскрытыми как механизмы реализации функциональной активности макрофагов и их субпопуляций, так и ключевые факторы, влияющие на их дифференцировку. Ответы на эти вопросы позволили бы найти патогенетические подходы к разработке научных основ стимуляции и управления процессами восстановления, а исходя из этого, к разработке новых методов стимуляции регенерации различных тканей.

Целью настоящего исследования является определение роли макрофагов в регенерации тканей, индуцированной аллогенными биоматериалами.

Задачи исследования:

1. Изучить динамику дифференциации и фенотипические особенности макрофагов в соединительной ткани после имплантации аллогенного биоматериала.

2. Установить фенотипические особенности макрофагов в соединительной ткани после имплантации ксеногенного биоматериала.

3. Изучить сравнительную динамику экспрессии макрофагами цитокинов ТОТ-а и ТвР-Ы при имплантации аллогенного и ксеногенного биоматериалов.

4. Изучить зависимость между функциональной активностью макрофагов и характером дифференциации клеток фибробластического ряда в соединительной ткани после введения аллогенного и ксеногенного биоматериалов.

5.Провести гистохимическую идентификацию гликозамингликанов в соединительной ткани при имплантации аллогенного и ксеногенного биоматериалов.

6. Изучить морфо-функциональные особенности звездчатых макрофагоцитов при регенерации печени, стимулированной диспергированным биоматериалом Аллоплант.

Научная новизна исследований

Установлены основные факторы, стимулирующие и регулирующие репаративную регенерацию тканей при имплантации аллогенных биоматериалов. Раскрыты особенности дифференциации макрофагов в соединительной ткани после имплантации алло- и ксеногенных биоматериалов. Выявлена зависимость между степенью функциональной активности макрофагов и динамикой и исходом регенераторного процесса в соединительной ткани после имплантации аллогенных и ксеногенных биоматериалов. Выявлено, что полное созревание и неспецифическая активация макрофагов после стимуляции аллогенным биоматериалом способствует восстановлению характера нарушенных при патологии межклеточных взаимодействий, и процесс регенерации тканей проходит по закономерностям близким к процессам физиологической регенерации и постнатального гистогенеза. Впервые раскрыты особенности дифференциации клеток фибробластического ряда в соединительной ткани в зависимости от степени функциональной активности макрофагов, стимулированных алло- и ксеногенным биоматериалами. Выявлено, что одним из важных факторов, способствующих регенерации соединительной ткани по типу репаративного процесса в эмбриональной ткани, является гиалуроновая кислота, в значительном количестве выявляющаяся в зоне имплантации аллогенного биоматериала в результате функционирования зрелых макрофагов. Установлено, что возобновление популяции звездчатых макрофагоцитов в цирротически измененной печени после введения в нее аллогенного диспергированного биоматериала способствует инволюции соединительной ткани и регенерации гепатоцитов. Выявлено, что восстановление морфо-функциональных характеристик макрофагов тканей десны больных пародонтитом после введения диспергированного

биоматериала Аллоплант способствует полноценной регенерации соединительнотканной пластинки и эпителия слизистой десны.

Научно-практическая значимость

Полученные результаты исследования явились теоретической основой разработки научных принципов регуляции репаративной регенерации при многих дегенеративно-дистрофических заболеваниях. Обоснована возможность применения аллогенного биоматериала для коррекции дегенеративно-дистрофических заболеваний соединительной и эпителиальной тканей. На основе полученных результатов проведены клинические испытания и освоен выпуск стимуляторов регенерации для лечения пародонтита, цирроза печени, язвы желудка, лейкоплакии вульвы, простатита.

Основные положения, выносимые на защиту

1. При стимуляции регенерации тканей аллогенными биоматериалами происходит фенотипическое созревание макрофагов и оптимизация их регуляторного влияния на дифференциацию и функциональную активность других клеточных популяций, что препятствует фиброзу и способствует формированию структурно адекватного регенерата.

2. При резорбции аллогенного биоматериала происходит дифференциация макрофагов на фагоцитарные и секреторные «матриксформирующие» субпопуляции; при применении ксеногенного биоматериала не происходит его резорбции, и макрофаги трансформируются в эпителиоидные клетки и гигантские клетки инородных тел, что приводит к хронизации воспаления и формированию грубоволокнистой соединительной ткани, отграничивающей очаг имплантации.

3. Возобновление популяции звездчатых макрофагоцитов после введения в цирротически измененную паренхиму печени аллогенного диспергированного биоматериала способствует инволюции соединительной ткани и регенерации гепатоцитов.

Внедрение результатов исследования

Разработанные на основе настоящего исследования методы хирургического лечения внедрены в клиническую практику в ФГУ Всероссийский центр глазной и пластической хирургии, Республиканской клинической больнице им. Г.Г.Куватова, городской клинической больнице №6, №22, стоматологической поликлинике № 2 г. Уфы.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены: на IV Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Нижний Новгород, 1998); Всероссийской

научной конференции анатомов, гистологов и эмбриологов «Закономерности морфогенеза и регуляция тканевых процессов в нормальных, экспериментальных и патологических условиях (Тюмень, 1998); Республиканской научно-практической конференции «Актуальные проблемы хирургии и морфологии» (Уфа, 1998); VII научно-практической конференции Екатеринбургского Центра МНТК "Микрохирургия глаза" (Екатеринбург, 1999); V Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Ульяновск, 2000); международной конференции «Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза человека в норме и при воздействии антропогенных факторов. Экология и здоровье населения. Актуальные проблемы биологии и медицины» (Астрахань, 2000); на VI Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Уфа, 2002); 11 международной конференции Европейской ассоциации тканевых банков (Братислава, Словакия, 2002); Всероссийской научной конференции «Реактивность и пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях» (Оренбург, 2003); 12 международном конгрессе Европейской ассоциации тканевых банков (Брюгге, Бельгия, 2003); VII Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Казань, 2004); Межрегиональной конференции «Актуальные вопросы патологии» (Уфа, 2004); 13 Международном конгрессе Европейской Ассоциации тканевых банков (Прага, Чехия, 2004); 4-ом Азиатско-Тихооекеанском Международном конгрессе анатомов (Кушадаси, Турция, 2005); Всероссийской научной конференции «Вопросы морфологии» (Уфа, 2006).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 46 печатных работ, получено авторское свидетельство на изобретение (№ 1568303), получен 1 патент (№ 2189257 от 20.09.02 г.).

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 514 источников (187 -отечественных авторов; 327 - зарубежных авторов). Работа изложена на 269 страницах машинописною текста, иллюстрировано 132 рисунками (микрофотографии и графики) и 4 таблицами.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Подкожная имплантация биоматериалов. Эксперимент проведен на 292 крысах породы Вистар обоего пола массой от 0,18 до 0,2 кг. В качестве аллогенного биоматериала использовался разработанный во Всероссийском центре глазной и пластической хирургии (г.Уфа, руководитель - профессор Э.Р.Мулдашев) диспергированный биоматериал (АДБ), приготовленный из сухожилий крыс и обработанный по технологии Аллоплант® (Мулдашев Э.Р., 1994). В составе биоматериала превалируют коллаген, протеогликаны, гликозамингликаны (Хасанов P.A., 1999). Низкая антигенная активность препаратов серии Аллоплант обусловлена специальной обработкой - дозированной элиминацией гликозамингликанов из состава коллагеновых волокон и удалением клеточных элементов (Мулдашев Э.Р., 1994). Ксеногенный биоматериал для крыс (КДБ) был изготовлен по названной технологии из сухожилий человека. Биоматериалы, разведенные физиологическим раствором, вводили подкожно инъекционно в область основания хвоста в количестве 125 мг (Хасанов P.A., 1999). Крысам контрольной группы вводился физиологический раствор. Эксперименты проводили с соблюдением «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных». Животных выводили из опыта ингаляционной передозировкой паров эфира. На исследование забирали кусочки тканей из места введения биоматериалов в сроки 2,4, 7, 14,30 суток, 6 месяцев.'

Для гистологического исследования кусочки тканей фиксировали в 10% нейтральном формалине, после обезвоживания в серии спиртов возрастающей концентрации заливали в парафин по общепринятой методике. Срезы готовили на микротоме LEICA RM 2145 (Германия) и окрашивали гематоксилином и эозином, по методам Ван-Гизон, по Футу. Процентное соотношение макрофагов на парафиновых срезах считали на 2000 клеток. Материал подвергался электронно-микроскопическому исследованию (см. ниже).

Для выявления общего количества гликозаминогликанов (ГАГ) проводили окрашивание парафиновых срезов по методу Хейла (реакция связывания коллоидного железа). Идентификацию ГАГ проводили при окраске препаратов апьциановым синим (pH 2,5 и 1,0) по Луппа (1980) и при разной молярности р-ра MgC12 по Скотгу и Дорлингу (Кононский А.И., 1976). Для дифференциации сульфатированных и несульфатированных ГАГ использовали метод блокирования сульфатных групп воздействием метанола. В контроле использовали 1% р-р тестикулярной гиалуронидазы на физиологическом р-ре. Использовали метод Р.И.Еникеева и РД.Нигматуллина «Способ количественного анализа ГАГ» (Рац.пред. № 1052, выданное Башкирским госуд.мединститутом 20.01.88 г.) с использованием поляризационного микроскопа Amplival Pol.U. с микроспектрофотометрической приставкой CAY-10 (JIOMO). Анализ проводили с применением однолучевого метода (Агроскин Л.С., Папаян Г.В., 1977). Данные рассчитывали по формуле l/Io=N,

где Т - величина пропускания света, I - величина прошедшего через препарат монохроматического света, 1о - исходная величина монохроматического света.

Иммуногистохимические исследования проводили на серийных парафиновых срезах толщиной 5 мкм. Использовали непрямой стрептавидин-биотиновый метод с применением моноклональных антител к TGF-bl - трансформирующему фактору роста-bl, TNF-a- фактору некроза опухолей, PCNA - Proliferative Cells Nuclear Antigen, виментину -маркеру клеток мезенхимального происхождения (фирмы Santa Cruz Biotechnology). Определяли процентное соотношение положительно окрашивающихся клеток (эндогенная экспрессия TGF-bl и TNF-a). Для анализа экзогенных цитокинов, определяющихся во внеклеточном матриксе, применяли полуколичественный метод (в крестах) при увеличении микроскопа Х160.

Экспериментальный цирроз печени. Эксперимент проведен на 62 кроликах обоего пола породы Шиншилла" массой 2,5-3,0 кг с соблюдением «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных». Патология печени была получена путем подкожного введения 50%-ного тетрахлорметана (четыреххлористого углерода) в течение 3 месяцев (Рубецкой Л.С., Короткина Р.Н., 1962). Через 3 месяца интоксикации тетрахлорметаном гистологически 39 кроликам поставлен диагноз: цирроз печени и 2 кроликам - хронический активный гепатит с переходом в цирроз. Кроликов с циррозом разделили на 2 группы. Операцию лапаротомии проводили под наркозом (тиопентал натрия ЗОмг/кг + 5% кетамина гидрохлорид - 1мл - внутримышечно). Животным I контрольной группы (20 кроликов) после визуального осмотра печени и биопсии зашивали рану. Животным II группы (21 кролик) после осмотра печени и биопсии, в каждую долю безигольным инъектором вводили по 0,1-0,2 мл суспензии А ДБ на физиологическом р-ре, после чего рану зашивали. III группу (контрольную) составили 21 интактных кролика. Животных всех групп выводили из опыта на 2, 7, 14, 30, 90, 180 сутки после операции. При вскрытии брюшной полости образцы ткани для исследований брали во всех случаях из середины и края левой латеральной доли печени.

Для гистологического исследования кусочки печени фиксировали в 10%-ном нейтральном формалине, обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, по Ван-Гизону, по Маллори, проводили ШИК-реакцию на гликоген с использованием ферментативного контроля (амилаза слюны), для идентификации и подсчета фагоцитирующих звездчатых макрофагоцитов (ЗМФ) окрашивали срезы азурП-эозином (Волкова О.В., Елецкий Ю.К., 1982). Фагоцитирующие макрофаги в каждом препарате считали при увеличении XI00 в 20 полях зрения, общее количество исследованных полей зрения на препаратах составило 200 от животных каждого срока. Подсчитывали среднее количество клеток на условное поле

зрение. Подсчет двуядерных гепатоцитов и площади ядер гепатоцитов проводили на срезах, окрашенных гематоксилином и эозином. Процентное соотношение двуядерных считали на 2000 просчитанных клеток. Измерение средней площади ядер гепатоцитов производили при увеличении Х160 с помощью аппаратно-программного комплекса анализа изображений Bioskan-2 (Канако, Белоруссия). Производилось измерение ядер 200 гепатоцитов у каждого животного. Материал подвергался электронно-микроскопическому исследованию. Регенерацию печени оценивали по индексу пролиферации гепатоцитов (ИП), экспрессирующих PCNA (ядерный антиген пролиферирующих клеток) (фирмы Santa Cruz Biotechnology). ИП высчитывали по формуле - ИП=кол-во меченых клеток/общее кол-во стеток. Для выявления апоптозных клеток использовали моноклональные антитела к FAS-L той же фирмы. Достоверность определяли по t-критерию Стьюдета (Стрелков Р.Б., 1986). Уровень экспрессии TGF-p определяли путем измерения относительной площади специфического окрашивания на гистологических срезах печени с помощью аппаратно-программного комплекса анализа изображений Биоскан-2 (Канако, Белорусь).

Исследование биопсийного материала пациентов. Исследовано 83 биоптата мягких тканей десны человека, взятых у лиц мужского и женского пола в возрасте от 23 до 60 лет (с их добровольного согласия). Из них, 52 было взято у больных пародонтитом различных степеней тяжести и 31 -после лечения аплогенным биоматериалом. Метод введения АДБ: однократно, инъекционно в область переходной складки верхней и нижней челюстей. Забор тканей десен проводился в различные сроки (через 3, 7, 14 дней, 1,6, 10, 12 месяцев) в области межзубных сосочков.

Была изучена биопсия печени, взятая у пациента С. с диагнозом «макронодулярный цирроз печени» через 1,5 года после лечения аллогенным биоматериалом. Биопсийный материал фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином и по методу Ван-Гизон. Биопсийный материал частично подвергался иммуногистохимическому и электронно-микроскопическому исследованию.

Для электронномикроскопического исследования кусочки тканей фиксировали в 2,5% р-ре глютарапьдегида, приготовленном на какодилатном или фосфатном буфере Миллонига (рН 7,2-7,4) с последующей дофиксацией в 1% растворе 0s04 на соответствующем буфере. Для выявления ГАГ в 2,5% р-р глютарапьдегида добавляли 1% альциановый синий (по Бенке и Зеландеру). Материал обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заливали в эпон-812 по общепринятой методике Б. Уикли (1975). Полутонкие срезы толщиной 1 мкм окрашивали их толуидиновым синим на 2,5%-ном растворе безводной соды и на них выбирали участки для электронно-микроскопического исследования. Срезы готовили на ультратоме LKB-III 8800 (Швеция). Ультратонкие срезы контрастировали 2% водным раствором уранилацетата,

цитратом свинца по Рейнольдсу (Уикли Б., 1975) и изучали в трансмиссионных микроскопах JEM-7A и JEM-CX П (Япония) при увеличениях от 4000 до 35000.

Обработку цифровых данных производили с использованием пакета статистического анализа программного обеспечения Microsoft Excel с вычислением средних значений, доверительных интервалов и сравнением средних значений с использованием t-критерия Стьюдента (Стрелков Р.В., 1986).

Микроскопические исследования проводились с использованием световых микроскопов JENAVAL и АХЮ IMAGER-Z1 фирмы «CARL ZEISS» (Германия). Препараты фотографировали фотоаппаратом NICON D-100 (Япония). Всего изготовлено и изучено 3269 гистологических препаратов (в том числе и 661 с применением гистохимических реакций), 320 полутонких среза, 267 блоков для ультратонких срезов, проведены 602 иммуногистохимические реакции.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Морфо-функциональная характеристика макрофагов соединительной ткани кожи крыс интактной и контрольной групп

Макрофаги соединительной ткани кожи крыс - гистиоциты округлой или амебовидной формы с длинными вытянутыми отростками и удлиненные ядра с извилистыми неровными краями. Эухроматин в ядре распределяется равномерно, гетерохроматин выявляется по периферии кариолеммы в виде тонкого ободка. В цитоплазме определяется разное количество первичных и вторичных лизосом, фаголизосом, множество микропиноцитозных пузырьков, вакуолей, немногочисленные короткие цепочки гранулярного эндоплазматического ретикулума (ГЭР) и единичные небольшие комплексы Гольджи. У крыс контрольной группы в зоне введения физиологического раствора большинство макрофагов по ультраструктуре не отличались от таковых интактных крыс. Иногда выявлялись отростчатые клетки фагоцитарного типа, цитоплазма которых содержала большое количество вакуолей средних и мелких размеров со светлым или темным содержимым и небольшие фаголизосомы, мелкие митохондрии с темным матриксом и параллельно расположенными кристами, умеренно развитый пластинчатый комплекс Гольджи, немногочисленные короткие каналы ГЭР. Микропиноцитоз был выражен в сроки 2 и 4 суток. Цитолемма образовывала длинные тонкие выросты и инвагинации, участвующие в захвате субстрата и образовании фагосом. Количество макрофагов через 2 суток составляло 10,13%±1,2 от общего числа клеток, через 4 суток - 9,29%±1,1, 7 суток - 8,22%±0,9, 14 суток -9,22%±0,8, через 30 суток - 7,12%±0,9 и спустя 6 - месяцев 6,97%±1,1 (рис.1). При иммуногистохимическом исследовании тканей обнаружено, что цитокины TGF-bl и TNF-a у крыс контрольной группы экспрессируются очень слабо, лишь в виде следов. Причем, TNF-a через 2 суток экспрессируют лишь 2,05%±0,02 клеток, a TGF-bl - через 4 суток экспрессируют 3,01%±0,01 клеток.

3.2. Морфо-функциональные особенности созревания и дифференциации макрофагов, выявленных в зоне введения аллогенного биоматериала

В зоне подкожного введения АДБ макрофаги выявляются на всех стадиях дифференциации: от юных моноцитоидных - до зрелых активных форм, подразделяющихся в свою очередь на фагоцитирующие и секреторные типы. Макрофагами осуществляется лизис и резорбция частиц имплантированного аллогенного биоматериала, представляющего собой соединительнотканный внеклеточный матрикс (Хасанов Р.А., 1999; Muldashev E.R. et al., 1994). Матриксные металлопротеиназы (MMPs) активизированных макрофагов способны лизировать почти все компоненты внеклеточного матрикса соединительной ткани: коллаген, фибронектин, ламинин, протеогликаны и др. (Woessner Jr. J.F., 1991; Andersen T.L. et al., 2004; Scabilloni J.F. et al., 2005; Bergin P.J. et al., 2005; Eerola L.M. et al., 2005; Sluijter J.P. et al., 2006), a продукты распада коллагена и протеогликаны соединительной ткани являются хемоаттрактантами для моноцитов-макрофагов (Хилькин A.M. с соавт., 1976; Diegelmann R.F. et al., 1988). На 2 сутки после имплантации в окружающих биоматериал тканях выявлялись признаки интенсивной миграции из сосудистого русла моноцитов крови, которые дифференцировались в юные макрофаги моноцитоидного типа около 8-11 мкм в диаметре. Ядра бобовидной, иногда овальной формы с равномерно распределенным эухроматином в кариоплазме содержали одно или два ядрышка. В цитоплазме клеток определялось небольшое количество органелл: редкие округлые светлые митохондрии, немногочисленные удлиненные каналы ГЭР, лизосомы разных размеров с темным и светлым однородным содержимым, слабо развитый комплекс Гольджи, множество свободных рибосом и полисом. Цитолемма у некоторых макрофагов формировала короткие утолщенные выросты и инвагинации, участвующие в захвате частиц биоматериала и образовании фагоцитарных вакуолей. В перифокальной зоне концентрация мононуклеарных фагоцитов была выше, чем в глубоких слоях имплантата. При подсчете макрофагов из расчета на сто клеток их количество в данный срок эксперимента составляло в среднем 16,85%±6,5 (р<0,05 в сравнении с контролем) (рис.1). Через 4 суток количество клеток в месте имплантации АДБ увеличивалось до 56,15%±18,0 (р<0,05). Наряду с возрастанием в тканях числа юных макрофагов проявлялись ультраструктурные признаки усиления их белоксинтезирующей и фагоцитарной активности, свидетельствующие о фенотипическом созревании и дифференциации клеток. Цитоплазма содержала множество первичных и вторичных лизосом, выраженный ГЭР, развитый пластинчатый комплекс Гольджи, большое количество свободных и связанных с мембранами рибосом, мелкие округлые митохондрии с затемненным матриксом. Фагоцитарные макрофаги множеством длинных и коротких отростков обхватывали частицы биоматериала. Ядра теряли округлость формы, края их

становились более изрезанными. Ядро содержало одно или два ядрышка. Ядерный материал большей частью был представлен в виде эухроматина, а конденсированный гетерохроматин располагался тонким ободком по внутренней стороне кариолеммы.

" : > 1 1

2 О уток 4 суток 7 суток 1Д суток ДО суток 6 М1С

— • Аллотр«нспл»нтация

-Ко»нотр»нспл«нт«ция

'Контроль I

Рис. I. Количество макрофагов в зоне введения АДБ и КДБ и в контроле. *Различия значимы при р<0,05 (в сравнении с контролем).

Об усилении коллагенолитической активности макрофагов свидетельствовали изменения тинкториальных свойств частиц АДБ. Выявлялись признаки их набухания, гомогенизации и лизиса. При проведении реакции Хейла фрагменты АДБ, граничащие с макрофагами, окрашивались в ярко-голубой цвет, что свидетельствовало об интенсивном выходе ГАГ из состава биоматериала. Коллагеновые волокна биоматериала подвергались дезорганизации вплоть до отдельных тонких фибрилл с отсутствием поперечной исчерченности и до гомогенных частиц, которые фагоцитировались зрелыми макрофагами. Наряду с фагоцитами в этот срок эксперимента обнаруживались клетки секреторного типа с множеством вакуолей и редкими лизосомами в цитоплазме. На 7 сутки количество макрофагов составило 37,3%±10,4 (р<0,05).

На 4-7 сутки выявлялись секреторные макрофаги с некоторыми особенностями в ультраструктуре. Крупные клетки (более 20 мкм) эллипсоидной или слегка вытянутой формы с множеством толстых и тонких цитоплазматических отростков - псевдоподий, микроворсинок, коротких крыловидных складок, имели признаки выраженной функциональной активности и повышенного внутриклеточного транспорта метаболитов в виде многочисленных вакуолей, окаймленных одиночной мембраной, с хлопьевидным, мелкозернистым или плотным содержимым и множества пиноцитозных пузырьков в цитоплазме. Мелкие вакуоли сливались друг с другом, образуя большие. От развитого пластинчатого комплекса Гольджи, выявляющегося в клетках в количестве 3-5 диктиосом, отшнуровывались многочисленные пузырьки и везикулы. Обнаруживались короткие цистерны ГЭР, крупные и мелкие митохондрии округлой или удлиненной формы с параллельно ориентированными кристами и плотным

матриксом. В цитозоле были рассеяны многочисленные свободные рибосомы, полисомы, редкие светлые и темные лизосомы небольших размеров. Выявлялись признаки активного как эндо- так и экзоцитоза. Некоторые ламеллоподии заканчивались ампулообразными расширениями, в которых обнаруживались группы мелких везикул, окаймленных одиночной мембраной. Клеточная поверхность макрофагов образовывала множество длинных тонких выростов, некоторые посредством нексусов контактировали с активными формами фибробластов. Макрофаги имели эозинофильную цитоплазму, по методу Хейла она положительно окрашивалась на ГАГ в интенсивный голубой цвет. Иммуногистохимически в цитоплазме определялся виментин - маркер клеток мезенхимального происхождения. На мезенхимальное происхождение указывают и выявленные нами переходные клеточные формы между ними и МСК. Предполагаемые предшественники имели такие же крупные размеры и подобные гисто- и иммуногистохимические характеристики, но функциональная активность у них была менее выражена. В их цитоплазме отсутствовали вакуоли, было больше свободных рибосом и полисом, присутствовало несколько хорошо выраженных комплексов Гольджи с вытянутыми мембранными структурами и многочисленными пузырьками около них. Ультраструктура описанных нами секреторных макрофагов очень схожа с таковой плацентарных макрофагов (клетки Кащенко-Гофбауэра), выполняющих важную роль в росте и дифференциации клеток и стромы ворсин хориона при беременности, т. е. в физиологических условиях (Шатилова И. Г., 1999; Castellucci М. et al„ 1980; Khan S. et al., 2000; Anteby E.Y. et al., 2005). Установленное нами мезенхимальное происхождение выявленных макрофагов также сближает их - существуют данные, что камбиальным элементом для плацентарных макрофагов служат мезенхимальные клетки стромы ранних ворсин хориона (Шатилова И.Г. с соавт., 1997; Castellucci М., Zacchea D., 1989; Demir R. et al., 1989). J.M.Barker и W.Th.Daems (1981) полагают, что в отличие от моноцитов и макрофагов воспалительных экссудатов, фиксированные макрофаги воспроизводятся in situ и имеют малодифференцированных мезенхимных предшественников в тканях. Фибробласты и выявленные секреторные макрофаги в соединительной ткани кожи, в отличие от происходящих из моноцитов крови фагоцитарных макрофагов, по всей вероятности имеют единого предшественника -мезенхимную стволовую клетку (Шарифуллина С.З. с соавт., 2004; Badiavas E.V. et al., 2003; Fathke С. et al., 2004).

Морфофункциональная характеристика описанных нами секреторных макрофагов позволяет предположить, что они интенсивно синтезируют (или ресинтезируют) гликозаминогликановый или протеогликановый компонент новообразующихся коллагеновых волокон, а также определяют тип синтезируемого коллагена в зоне имплантации, так как именно с ними формировали межклеточные контакты активные фибробласты (Серов В. В., Шехтер А. Б., 1981; Шатилова И. Г., 1999; Castellucci М. et al., 1980; Khan S.

е1 а1., 2000; Ап1еЬу Е.У. а1., 2005). Вышеперечисленные морфо-функциональные особенности и предполагаемая физиологическая роль выявленных макрофагов в зоне имплантации аллогенного биоматериала дают нам основание для выделения их в отдельную субпопуляцию «матриксформирующих» макрофагов.

На 14 сутки при некотором снижении общего количества клеток в месте введения АДБ выявлялись макрофаги со структурой, характеризующей функционально активные зрелые формы, как фагоцитарного, так и секреторного типа. Общее количество макрофагов составляло 25,65%±17,5 ( р<0,05). Через месяц в месте введения частиц АДБ у крыс не выявлено, структура рыхлой соединительной ткани соответствовала норме, а из популяции макрофагов в тканях выявлялись лишь гистиоциты с типичной для них ультраструктурой. Количество мононуклеарных фагоцитов составило 20,55%±4,8 (р<0,05), а через 6 месяцев численность гистиоцитов составляла 7,6%±2,5.

3.3. Результаты иммуногистохимических и гистохимических исследований тканей в зоне имплантации аллогенного биоматериала

Иммуногистохимические исследования. Через 2 суток после введения индуктор фиброза цитокин ТОР-Ы в тканях вокруг частиц практически не определяется и экспрессируют его лишь 3,11%±0,12 клеток (р<0,05), а фактор некроза опухолей - ТТМГ- а обнаруживается в 20,01%±0,2 (при р<0,05) макрофагов (рис.2).

Рис.2. Экспрессия цитокинов клетками TGFbl и TNFa в зоне введения аллогенного и ксеногенного биоматериалов (%).*Различия значимы при р<0,05 (в сравнении с данными до введения биоматериалов).

На 4 сутки TGF-bl в соединительной ткани в зоне введения АДБ обнаруживается в 7,12%±0,01 клеток (при р<0,05). Интенсивно выявляется TNF-a, как внутриклеточно (40,03 %±0,11 при р<0,05), так и внеклеточно. Через 7 суток - эндогенная экспрессия TGF-bl проявляется довольно слабо и составляет 12,31%±0,32 (р<0,05) от общего количества клеток. Экспрессия цитокина TNF- а несколько ослабляется по сравнению с

предыдущим сроком эксперимента (30,12% ±0,1 при р<0,05). Через 2 недели - количество экспрессирующих ТвР-Ы клеток в тканях увеличивается до 16,01±0,21(р<0,05). Цитокин выявляется как внутриклеточно в макрофагах и фибробластах, так и в соединительнотканном матриксе. Клетки, экспрессирующие Т№-а выявляются в количестве 15,06±0,01% (при р<0,05 относительно контрольной группы). Спустя 30 суток возле новообразованных коллагеновых волокон определяется 17,11%±1,01 (р<0,05) клеток, экспрессирующих ТСР-Ы. Т№-а в тканях в данный срок обнаруживается в 10,27%±1,2 (р<0,05) клетках. Через 6 месяцев в соединительной ткани крыс цитокины ТСР-Ы и ТОТ-а не выявляются.

При определении клеток мезенхимального происхождения с применением моноклональных антител к виментину на препаратах пометались следующие клетки: МСК, все клетки фибробластического ряда, начиная от малодифференцированных мезенхимных клеток и заканчивая зрелыми формами, секреторные макрофаги и их предполагаемые предшественники. При определении пролиферирующих клеток с применением моноклональных антител к PCNA метились ядра фибробластоподобных клеток и фибробластов в начальные сроки имплантации биоматериала (2-14 сутки).

Гистохимическая идентификация гликозамингликанов. Уже на 2-4 сутки в зоне имплантации АДБ при окраске по методу Хейла фрагменты биоматериала, подвергающиеся лизису и резорбции макрофагами, по краям окрашивались в ярко-голубой цвет. С 4 суток с возрастанием клеточности в зоне введения наблюдались изменения тинкториальных свойств частиц биоматериала. После обработки материала альциановым синим ГАГ в виде зернистого осадка выявлялись непосредственно на фибриллах. Спустя 7 суток реакция Хейла была интенсивнее, и ГАГ определялись не только по периферии частиц ДАБ, но и в центре. Грануляционная ткань также ярко окрашивалась по Хейлу. Альцианоположительные гранулы ГАГ определялись между фибриллами новообразованных волокон. На 14 - 21 сутки количество частиц биоматериала несколько уменьшалось. Наряду с активной резорбцией их макрофагами в очаге имплантации происходило формирование зрелой грануляционной ткани, интенсивно окрашивающейся по Хейлу. Через 30 суток под кожей у крыс на месте частиц АДБ определялся тонкий пленчатый рыхлый регенерат, умеренно окрашивающийся по Хейлу на ГАГ и почти не отличающийся по структуре от окружающей ткани.

Видовая идентификация ГАГ при окраске альциановым синим показала, что при рН 2,5 начиная с 4-х и почти до 21 суток наблюдается снижение величины пропускания монохроматического света Т через препарат, связанное с повышением общего содержания ГАГ (рис.3). При рН 2,5 после метилирования срезов кривая величин пропускания света Т на диаграмме почти повторяла кривую общего содержания ГАГ, свидетельствуя о

повышенном содержании в ткани гиалуроновой кислоты (ГК). При окраске альциановым синим в 0,2 М р-ре MgCU, выявляющем сульфатированные ГАГ, с 4-х и до 21 суток наблюдалось повышение величины пропускания света Т, что говорило об уменьшении сульфатированных ГАГ в процессе резорбции частиц ДАБ. При окраске в 0,6 М р-ре MgCl2 после обработки среза гиалуронидазой было выявлено, что большую часть сульфатированных ГАГ составлял дерматан-сульфат, содержание которого к 30 суткам несколько повышалось (наблюдалось снижение величины пропускания света Т). При окраске в 0,8 М и 1,0 р-рах MgCl2 величина пропускания света Т была все время высокой, что свидетельствовало об отсутствии или ничтожно малом количестве кератан-сульфата.

Выявленное нами в зоне замещения аллогенного биоматериала присутствие значительного количества ГАГ является одним из важных аспектов полноценной регенерации соединительной ткани. Известно, что кроме выполнения функции связывания коллагеновых фибрилл гликозаминогликаны, активно влияя на пролиферацию клеток и синтез фибробластами коллагена, участвуют в воспалительных реакциях и репаративных процессах (Mast В.A. et al., 1992; Mast В.A. et al., 1993; Muldashev E.R. et al., 1994; Jenkins R.H. et al., 2004). Проведенные нами гистохимические исследования соединительной ткани в зоне имплантации аллогенного биоматериала показали количественное преобладание гиалуроновой кислоты (ГК), которая, по нашему предположению, вероятно, частично накапливается в результате интенсивного лизиса макрофагами частиц аллогенного биоматериала и частично - в результате синтеза и экзосекреции ее «матриксформирующими» макрофагами.

-*-рН 2.5 -•-pH 2,5 с

метилированием

— pH 1,0+0,2М р-р

---pH 1,1Ж1,вМ р-р

- **— pH 1,0+0,6М р-р с

гиалуронидазой —•— pH 1.0+0.8М р-р

—pH 1,0+1,ОМ р-р

Рис. 3. Изменение величины пропускания Т-монохроматического света через препараты при имплантации АДБ (окраска альциановым синим).

Известно, что ГК содержится в большом количестве в эмбриональной ткани, характеризующейся отсутствием процессов классического воспаления и образования рубцовой ткани при ее повреждении (Krümmel Т.М. et al., 1987; DePalma R.L. et al., 1989; Frantz F.W. et al.,1992; Alaish S.M. et al.,1994; Kennedy C.I. et al., 2000). Установлено, что именно ГК

запрещает скопление тромбоцитов и выпуск тромбоцитарного фактора роста PDGF, с которого обычно начинается каскад воспалительных реакций, в том числе и экспрессия клетками индуктора фиброза трансформирующего фактора роста TGF-beta (Haynes J.H., 1994; Olutoye О.О., 1996; 1997; Campbell J.S. et al., 2005). В силу этого в регенерации участвует очень малое количество фибробластов и коллаген при этом не депонируется. Предполагается, что ответ на рану в эмбриональной ткани может быть процессом более близко напоминающим «истинную» регенерацию или рост, а не репарацию с образованием рубца (Krümmel Т.М, Michna В.А., 1988; Mast В.А. et al., 1991; Alaish S.M. et al, 1994). Выявленные нами особенности регенераторного процесса соединительной ткани при имплантации аллогенного биоматериала - присутствие «матриксформирующих» макрофагов мезенхимального происхождения; большое количество гиалуроновой кислоты в зоне замещения биоматериала; слабо выраженная воспалительная реакция; низкая экспрессия клетками индуктора фиброза - трансформирующего фактора роста; умеренно выраженная пролиферативная реакция клеток фибробластического ряда приводящая к образованию структурно полноценного регенерата, позволили нам провести аналогию с репаративной регенерацией в эмбриональной ткани, где заживление раны идет с полноценным восстановлением стромы (Krümmel Т.М, 1988; DePalma R.L, 1989; Mast В.А, 1991; Alaish S.M, 1994).

3.4. Дифференциация клеток фибробластического рядя в соединительной ткани при стимуляции макрофагов аллогенным биоматериалом

На 2-4 сутки кроме небольшого количества сегментоядерных лейкоцитов, юных и зрелых макрофагов, единичных лимфоцитов, фиброцитов в тканевом ложе, представленном рыхлой волокнистой соединительной тканью - фасциальной прослойкой, большей частью вокруг сосудов, выявлялись немногочисленные мезенхимальные клетки (МК). Иммуногистохимически они метились на наличие в цитоплазме белка промежуточных филаментов - виментина (маркера клеток мезенхимального происхождения). МК были представлены мелкими звездчатыми формами (7-10 мкм) с несколькими отростками различной длины. Ядерно-цитоплазматическое соотношение было в пользу ядра. Ядро, богатое эухроматином, содержало 1-2 плотных ядрышка. В тонком светлом ободке цитоплазмы изредка выявлялись мелкие единичные митохондрии, слабовыраженный аппарат Гольджи, немного коротких каналов ГЭР и многочисленные свободные рибосомы. Ультраструктурные характеристики выявленных МК совпадают с данными других исследователей, изучавших мезенхимальные стволовые клетки (МСК) кожи в культуре (Шарифуллина С.З. с соавт, 2004; Badiavas E.V. et al, 2003; Fathke С. et al, 2004). При иммунофенотипировании клеток с использованием FITC-меченых моноклональных антител против СД45

антигена крыс и РЕ-меченых моноклональных антител против Thy-1 (CD90) антигена крыс в суспензии, полученной путем вымывания из алло-и ксеноимплантантов, извлеченных из организма крыс, Н.Н.Курчатовой с соавторами (2005) было установлено, что в очаг имплантации биоматериалов происходит миграция СД45-С090+ клеток, которые рассматриваются как стволовые клетки мезенхимального происхождения (Ростовская М.С. с соавт., 2004; Tsai M.S. et al., 2004). Также в зоне имплантации АДБ выявлялись крупные фибробластоподобные клетки -предшественники юных фибробластов. На гистологических срезах они были представлены несколько вытянутыми отростчатыми светлыми клетками с большим округлым или вытянутым также светлым ядром с одним или двумя крупными ядрышками. Ультраструктурно в цитоплазме определялось множество свободных рибосом и полисом, слабовыраженный аппарат Гольджи, немногочисленные короткие каналы ГЭР. Кроме того, изредка встречались зрелые активные фибробласты, более мелкие, веретеновидной формы, с большим количеством умеренно расширенных каналов ГЭР в цитоплазме. Они формировали контакты с секреторными макрофагами или располагались вблизи них. Рядом с фибробластами выявлялось небольшое количество тонких фибрилл новообразованных коллагеновых волокон.

Спустя 7 суток наряду с фибробластоподобными клетками определялись юные и зрелые фибробласты. Юные фибробласты были двух типов. Первый тип - это округлые клетки с крупным овальным ядром с конденсированным по периферии гетерохроматином, содержащим одно или два ядрышка. В узкой цитоплазме выявлялось небольшое количество коротких цистерн ГЭР, множество свободных рибосом и полисом, редкие мелкие лизосомы с нежноволокнистым и мелкозернистым содержимым, везикулы, в которых были видны агрегаты параллельно ориентированных нитей, а также гранулы гликогена. Цитоскелет был представлен немногочисленными микрофиламентами и микротрубочками, расположенными в непосредственной близости от ядра. Второй тип юных фибробластов - это овальные или несколько удлиненные клетки с более широкой и темной электроноплотной цитоплазмой, которая содержала хорошо выраженную ГЭР с умеренно расширенными параллельными вытянутыми цистернами, пластинчатый комплекс Гольджи, удлиненные митохондрии с темным матриксом. Соотношение ядра к цитоплазме чаще всего было больше 1.

Зрелые фибробласты представляли преимущественно мелкие (от 10 до 15 мкм в длину), веретеновидной формы с небольшим вытянутым ядром клетки. Наличие в цитоплазме развитых умеренно расширенных каналов ГЭР, удлиненных каналов пластинчатого комплекса Гольджи, свободных рибосом и полисом в их цитоплазме позволяет данные фибробласты отнести к коллагенобластам I типа (Серов В. В., Шехтер А. Б., 1981). Выявленные многочисленные макрофагально-фибробластические контакты

между ними и секреторными «матриксформирующими» макрофагами свидетельствовали об их взаимодействиях (Серов В.В., Шехтер А.Б., 1981; Mimura T. et al., 2004; Fitzgerald S.M. et al., 2004). Ориентиром или «матрицей» для фибриллогенеза, как известно, служит рельеф клеточной поверхности, который обеспечивает направленную сборку коллагеновых фибрилл (Серов В. В., Шехтер А. Б., 1981). Вдоль относительно прямой наружной клеточной плазмалеммы фибробластов определялись ровные коллагеновые фибриллы с четкой поперечной исчерченностью, равномерно формирующиеся в «правильные» пучки. В тканевом ложе выявлялись начальные признаки формирования грануляционной ткани со специфическими особенностями. Между деградирующими частицами АДБ обнаруживались фуксинофильные новообразованные коллагеновые волокна, в которых на ультраструктурном уровне определялось наличие четкой регулярной поперечной исчерченности. Местами формирование новообразованных коллагеновых фибрилл шло по ходу распадающихся фибрилл биоматериала. Выявлялись редкие новообразованные кровеносные сосуды мелкого калибра с удлиненными веретеновидными эндотелиальными клетками. Вокруг частиц биоматериала выявлялся относительно узкий клеточный вал макрофагально-фибробластического происхождения.

Через 14 суток наряду с активной резорбцией частиц биоматериала макрофагами продолжалось формирование соединительной ткани в очаге имплантации. Обнаруживались зрелые коллагеновые волокна, о чем свидетельствовали выраженная фуксинофилия и темно-коричневая окраска по Футу (коллаген I типа). В образовавшемся регенерате определялась макрофагально-фибробластическая инфильтрация с преобладанием фибробластов, которые выявлялись в виде упорядоченных однонаправленных отдельных клеток среди новообразованных коллагеновых фибрилл и имели уплощенную форму и широкие плоские цитоплазматические отростки. В цитоплазме у них обнаруживались крупные удлиненные митохондрии, умеренно расширенные, довольно развитые каналы ГЭР, несколько пластинчатых комплексов Гольджи, множество пиноцитозных пузырьков на внутренней стороне плазмолеммы, свидетельствующих о высокой функциональной деятельности клеток. У редко встречающихся, относительно небольших размеров, миофибробластов большая часть цитоплазмы была заполнена тонкими актиновыми филаментами, располагающимися параллельно друг другу, а каналы ГЭР занимали небольшую площадь их цитоплазмы, что свидетельствовало об их слабой синтетической активности.

В дальние сроки (30 суток) под кожей у крыс на месте частиц аплогенного биоматериала определялся тонкий пленчатый рыхлый регенерат. Продолжалась ремодуляция новообразованной соединительной ткани в более зрелую. В состав клеточного инфильтрата входили преимущественно клетки фибробластического ряда: фибробласты, фиброкласгы, немногочисленные

миофибробласты. Наряду с ними определялось небольшое количество гистиоцитов. Фибробласты были с признаками умеренной функциональной активности. Они имели веретеновидную или овальную форму, хорошо развитые узкие каналы ГЭР, в просвете которых выявлялось мелкозернистое или гомогенное просветленное содержимое. Возле этих клеток обнаруживались тонкие разрозненные коллагеновые фибриллы. Фиброкласты отличались менее развитым ГЭР, наличием в цитозоле небольшого количества мелких лизосом, вакуолей с кусочками поперечно исчерченных волокон. Цитоплазматическая мембрана клеток образовывала короткие инвагинации и псевдоподии, участвующие в захвате волокнистых структур. Новообразованные коллагеновые волокна представляли собой плотные оформленные пучки, окрашивающиеся по Ван-Гизону в интенсивный розовый цвет. Они располагались под углом относительно друг друга и содержали умеренное количество аморфного основного вещества. При электронномикроскопическом исследовании фибриллы коллагеновых волокон имели регулярную поперечную исчерченность. В новообразованной соединительной ткани выявлялись признаки урежения капиллярной сети. Признаков застоя и сладжирования форменных элементов крови в них обнаружено не было. Подобное строение указывало на формирование регенерата соединительной ткани с полноценной гистоархитектоникой. Через 6 месяцев после введения крысам АДБ ни визуально, ни гистологически регенерат в тканевом ложе не определялся. Структура тканевого ложа была полностью схожа с таковой контрольных животных.

Таким образом, при замещении частиц АДБ во все сроки эксперимента в инфильтрате выявляется умеренное количество МК и дифференцирующихся из них клеток фибробластического дифферона. Низкая клеточная плотность в зоне имплантации биоматериала объясняется присутствием значительного количества свободных ГАГ, снижающих пролиферативную клеточную активность, в том числе и клеток фибробластического ряда (Yamagata М. et al., 1989; Muldashev E.R. et al., 1994). Миофибробласты при имплантации АДБ встречались редко. Ввиду того, что каналы ГЭР занимали небольшую площадь их цитоплазмы, можно было говорить об их относительно низкой функциональной активности. Все это указывало на отсутствие выраженной контракции соединительной ткани в зоне введения биоматериала. При имплантации аллогенного биоматериала дифференциация МК в фибробласты, синтезирующие зрелый коллаген I типа, по-видимости, является следствием секреции зрелыми макрофагами цитокина TNF-a, оказывающего прямое супрессорное действие на экспрессию индуктора фиброза TGF-pi (Abraham D.J., Shiwen X., 2000). При наличии в зоне имплантации большого количества ГАГ - второго важного компонента соединительной ткани, новообразованные коллагеновые фибриллы постепенно упаковываются в упорядоченные пучки волокон формируя регенерат с полноценной фиброархитектоникой (Серов В.В., ШехтерА.Б„ 1981).

3.5. Структурно-функциональная характеристика макрофагов, выявленных в зоне подкожного введения ксеногенного биоматериала

Динамика численности макрофагов, инициированная введением ксеногенного биоматериала, резко отличалась от реакции на аллогенный биоматериал. Процентное соотношение моноцитов/макрофагов к общему количеству клеток после ксеноимплантации было значительно меньше. Подсчет клеток показал, что количество макрофагов через 2 и 4 суток в среднем составляет 22,05%±6,6 и 21,85%±7,1 соответственно (р<0,05) (рис.1). На 7 сутки эксперимента оно составляло 17,35%±10,8 (р<0,05), на 14 сутки - 30,0%±5,9 (р<0,05). Спустя 30 суток численность макрофагов находилась в пределах 11,5%±4,7 (р<0,05). Через 6 месяцев наряду со снижением общего количества клеток в месте введения ксеногенного биоматериала пропорционально уменьшалось и количество фагоцитирующих клеток доходило до 4,8%±2,7 (р<0,05).

Хотя на 14 сутки и выявлялось небольшое увеличение численности макрофагов, результаты ультраструктурного исследования показали, что качественный состав клеток инфильтрата был совершенно иной, чем при применении аплогенного биоматериала: происходило накопление функционально ослабленных макрофагов. Существует точка зрения, рассматривающая именно в дефиците макрофагов причину незавершенного фагоцитоза и, как следствие, пролонгирования воспаления, принимающего затяжной вялотекущий характер (Кутина С.Н, Маянский Д.Н, 1981; Маянский Д.Н, 1991; Девис П, 1998). При имплантации КДБ мононуклеарные фагоциты выявлялись с признаками функционального истощения: перегруженная фагосомами и остаточными тельцами цитоплазма, сглаженность цитомембраны, округлая форма клеток, признаки снижения биосинтетических функций ядра, разрушение или недоразвитие органелл, задействованных в энергетическом обмене и секреторной деятельности. При поглощении макрофагами инертного или трудно лизирующегося материала теряется их подвижность, ослабляется как секреторная так и фагоцитарная функция (Маянский Д.Н, 1981; Розанова И.Б., 1999; Шехтер А.Б, Розанова И.Б, 1999; Davies P. et al, 1982). На снижение функций макрофагов указывало также отсутствие выраженных морфологических признаков лизиса и деструкции коллагеновых волокон имплантированного КДБ. Его частицы долго оставались целыми, в дальнейшем подвергаясь лишь слабому разрушению. На 7 -14 сутки вокруг них выявлялись скопления эпителиоидных клеток, гигантские клетки инородных тел и клетки Пирогова-Лангханса, свидетельствующие о развитии гранулематозного воспаления (Серов В.В, Пауков B.C., 1995; Шехтер А.Б, Розанова И.Б, 1999; Turk J.L, Narayanan R.B, 1981; Mackiewicz Z. et al, 2005). Гранулемы являются признаком дисрегенерации и приводят к хронизации воспалительного процесса (Маянский Д.Н, 1991; Серов В.В, Пауков B.C., 1995; Шехтер А.Б, Розанова И.Б, 1999; Андреева Л.Д. с соавт, 1999; Turk J.L, Narayanan R.B, 1981).

При подкожной ксеноимплантации дефицит макрофагов и их фагоцитарная и секреторная несостоятельность в процесс по восстановлению структурно-функциональной целостности ткани привлекает другие клеточные популяции, как то Т-, B-лимфоциты, большое количество мезенхимальных клеток. Лимфоцитарная инфильтрация вокруг частиц КДБ, выявляющаяся уже в начальные сроки после введения, указывает на повышенную антигенность биоматериала и развитие иммунной реакции (Johnson K.L. et al., 1999). Экспрессирующие лимфокины лимфоциты вносят значительный вклад в развитие фибропластической реакции: ускоряют дифференцировку фибробластов и усиливают синтез коллагена (Бабаева А.Г., 1985; Бобро Л.И., 1990; Johnson K.L., Ziff М., 1976; Postlethwaite А.Е., 1995; Johnson K.L. et al., 1999). Наличие лимфо-макрофагальных комплексов в ткани свидетельствует об иммунной воспалительной реакции, протекающей по типу гиперчувствительности замедленного типа (Маянский Д.Н., 1991; Ройт А., 2000; Adams D.O., 1983). Такой ход событий в конечном итоге приводит к формированию грубоволокнистой соединительной (рубцовой) ткани, что и было выявлено нами при применении ксеногенного биоматериала.

3.6. Результаты иммуногистохимических и гистохимических исследований тканей в зоне имплантации ксеногенного биоматериала

Экспрессия клетками цитокинов TGF-bl и TNF-a при подкожной имплантации крысам КДБ представлена на рис.2. Если через 2 суток в соединительной ткани после введения ксеногенного биоматериала клеток, экспрессирующих трансформирующий фактор роста TGF-bl выявлялось в количестве 20,01%±0,1 (р<0,05), то на протяжении 4-7 суток данный цитокин довольно интенсивно экспрессировался и клетками мезенхимного ряда, и лейкоцитами и локализовался внутри клеток и в толще соединительнотканного матрикса. Количество положительно окрашивающихся клеток составляло 28,09±0,21 и 35,14%±1,01 (р<0,05) соответственно. Спустя 14 суток секреция TGF-bl шла на убыль (34,11°/Ш),11при р<0,05) и к 6 месяцам он слабо выявлялся у 21,02 %±0,01 клеток (р<0,05). Иммуногистохимически цитокин фактор некроза опухолей TNF-a через 2 суток на препаратах определялся в виде следов и обнаруживался у 2,11%±0,2 клеток (р<0,05). К 4 суткам после введения биоматериала количество клеток с экспрессией цитокина увеличивалось до 18,43%±1,1 (р<0,05). После 7 суток экспрессия TNF-a постепенно снижалась (15,01%±0,2 (р<0,05) и через 30 суток он почти не выявлялся (8,12 %±0,04 при р<0,05).

При имплантации ДКБ во все сроки эксперимента процессы резорбции биоматериала макрофагами были слабо выражены, и реакция по Хейлу в частицах биоматериала была отрицательной. Только широкая соединительно-тканная капсула, образовавшаяся вокруг частиц уже на 7 сутки, давала слабое положительное окрашивание на сульфатированные

ГАГ. На 14-21 сутки после имплантации сохранившиеся частицы КДБ также не окрашивание!, по Хейлу, что свидетельствовало об отсутствии процесса их деструкции и выхода из них свободных ГАГ. Вокруг частиц слабо окрашивались сульфатированные гликозаминогликаны. В дальнейшем происходило замещение частиц ДКБ фиброзной тканью, преобразующейся в рубец, в котором реакция на выявление свободных ГАГ также была отрицательной. Через 6 месяцев в месте имплантации под кожей определялся хорошо выраженный рубец. Идентификационный анализ с применением микроспектрофотометрии зоны имплантации при окраске альциановым синим при разных значениях рН показывал или отсутствие, или очень незначительное содержание ГАГ.

3.7. Дифференциация плеток фибробластического ряда в соединительной ткани после имплантации ксеногенного биоматериала

В ранние сроки наблюдения (2 суток) после подкожного введения крысам частицы КДБ наряду с гранулярными лейкоцитами: эозинофилами и нейтрофилами, макрофагами и лимфоцитами, тучными клетками инфильтрировались многочисленными фибробластоподобными клетками. Иммуногистохимически они метились на наличие в цитоплазме белка промежуточных филаментов - виментина (маркера клеток мезенхимального происхождения). На ультраструктурном уровне среди них выявлялись МК с типичным для них строением (Шарифуллина С.З. с соавт., 2004; ВасНауаБ Е.У. е1 а1., 2003; РаМе С. е1 а1., 2004). Фибробластоподобные клетки представляли крупные отростчатые клетки с большим округлым или вытянутым светлым ядром с одним или двумя крупными ядрышками. Их цитоплазма содержала множество свободных рибосом и полисом, слабовыраженный аппарат Гольджи, немногочисленные короткие каналы ГЭР. Иногда выявлялись и пучки тонких микрофиламентов. Описанные клетки мы отнесли к предшественникам миофибробластов, которые уже начали появляться в данный срок эксперимента. Вследствие выраженной секреции макрофагами противовоспалительного цитокина ТСР-|31 при имплантации ксеногенного биоматериала большинство привлекаемых в зону имплантации МК дифференцировались в миофибробласты (ОеБтоиПеге А. ег а1., 1993; БсИшт-СгаГГ А. ег а1., 1994; Бепт б. ег а1., 1998; ВасНс1 С. ег а1., 2000; ВеэтоиПеге А. е! а1., 2005; Сисогапи I. е1 а!., 2005), и только небольшая часть - в фибробласты, представленные очень крупными клетками. Последние характеризовались неправильной извилистой формой, наличием широкой цитоплазмы с большим количеством резко расширенных каналов ГЭР, свидетельствующих об усиленном синтезе коллагена. В.В.Серов и А.Б.Шехтер (1981) относят данные фибробласты к коллагенобластам II типа. На 4 сутки миофибробласты определялись в значительном количестве. По структуре и функциональной активности они резко отличались от таковых, выявленных при имплантации АДБ. Ультраструктурные признаки миофибробластических клеток в зоне

введения КДБ: крупные размеры; наличие длинных извилистых отростков; выраженная извилистость, иногда даже ворсинчатость клеточной поверхности; большое количество рибосом и полисом в цитоплазме; сильно расширенные развитые каналы ГЭР; преобладание зухроматина в кариоплазме; глубокие инвагинации кариолеммы внутрь ядра; наличие очень крупных 1-3 ядрышка в кариоплазме, свидетельствовали об усиленной функциональной активности как ядерных, так и цитоплазматических компонентов. Посредством отростков миофибробласты между собой формировали множественные типичные для них щелевые контакты - нексусы. Значительную часть цитоплазмы занимали контрактильные структуры, особенно много было их по периферии цитоплазмы.

Ультраструктурная характеристика описанных нами миофибробластов в зоне имплантации ксеногенного биоматериала совпадает с данными других исследователей, изучавших миофибробласты обычных и патологических рубцов (Серов В. В., Шехтер А. Б., 1981; Badid С. et al., 2000; Amadeu Т.Р. et al., 2003; Eyden В., 2003; Desmouliere A. et al., 2005). Вдоль неровной поверхности миофибробластов выявлялось множество беспорядочно ориентированных новообразованных тонких фибрилл коллагеновых волокон, которые вследствие интенсивного ускоренного синтеза не успевали собраться в упорядоченные пучки. Выраженная извилистость клеточной поверхности миофибробластов также благоприятствовала беспорядочной ориентации новообразованных фибрилл (Серов В. В., Шехтер А. Б., 1981; Goldberg B.D., 1974, 1982). При окраске по Футу фибриллы обнаруживались в виде тонких аргирофильных волокон черного цвета, что свидетельствовало о синтезе миофибробластами незрелого коллагена III типа, выявляющегося обычно в рубцах (Шехтер А.Б., Розанова И.Б., 1999; Gabbiani G. et al., 1976, Podobed O.V. et al., 1996). Общепризнано, что миофибробласты играют ключевую роль в контракции соединительной ткани, которая имеет место при заживлении раны и развитии рубцовой ткани (Серов В. В., Шехтер А. Б., 1981; Shin D., Minn K.W., 2004; Desmouliere A. et al., 2005). Силы механического натяжения, которое они создают, имеют регулирующее влияние на направление роста клеток, биосинтез коллагена и ориентацию волокнистых элементов, а в конечном итоге на архитектонику ткани (Шехтер А, Б. с соавторами, 1977; Desmouliere A. et al., 2005). Образованию на месте имплантированного КДБ рубцового регенерата, состоящего из плотно организованной соединительной ткани типа фиброзной с небольшим содержанием основного вещества между пучками коллагеновых волокон, способствовало также и низкое содержание ГАГ ввиду слабого лизиса макрофагами ксеногенного биоматериала и вероятно ввиду отсутствия «матриксформирующих» макрофагов.

3.8. Морфо-функционгльные особенности макрофагов и морфологические изменения тканей десны при пародонтите

Исследования биопсий мягких тканей десны пациентов с пародонтитом выявили признаки хронического воспалительного процесса. В соединительнотканной пластинке десны обнаруживались признаки деструкции коллагеновых волокон в виде мукоидного набухания (пикринофилия при окраске препаратов по Ван-Гизону). В сосочковом слое дермы выявлялись расширенные капилляры с признаками стаза эритроцитов. При средней степени на фоне инфильтрации сегментоядерными лейкоцитами преобладала лимфо-макрофагальная, а при тяжелой - преимущественно лимфо-плазмоцитарная инфильтрация. На ультраструктурном уровне коллагеновые волокна теряли фибриллярную структуру. При тяжелой степени заболевания обнаруживались фрагментация и гомогенизация коллагеновых волокон в большей части стромы, исчезновение поперечной исчерченности сохранившихся фибрилл. С другой стороны, при окраске гистологических препаратов по Маллори иногда выявлялись тонкие новообразованные коллагеновые волокна с хаотичной архитектоникой. У пациентов с хронической формой заболевания определялся выраженный фиброз стромы, при котором признаки воспалительной клеточной инфильтрации ослабевали. В толще соединительнотканной пластинки десны выявлялись клетки с поврежденной плазмолеммой. Фибробласты имели хорошо выраженную эндоплазматическую сеть с резко расширенными каналами. В просветах ГЭР определялось мелкозернистое содержимое. Подобное строение клеток указывало на усиление коллагенсинтетической функции и позволяло отнести их к коллагенобластам II типа. Базальная мембрана на границе соединительнотканной основы и эпителия слизистой оболочки либо не определялась совсем, либо имелись лишь ее небольшие фрагменты с размытыми нечеткими контурами, что создавало предпосылки для нерегулируемого роста эпителия - акантоза. При тяжелой степени пародонтита патологические изменения в эпителии были сильно выраженными. Иммуногистохимические исследования (экспрессия РСИА) пролиферирующие эпителиоциты выявили не только в базальном слое, но и в шиповатом, что свидетельствовало о нарушении процессов физиологической регенерации.

Полиморфные макрофаги выявлялись в небольшом количестве. Среди них некоторые клетки были с признаками фагоцитоза. Большей частью встречались очень крупные макрофаги с широким ободком цитоплазмы и округлым ядром с конденсированным хроматином вдоль кариолеммы и в виде глыбок в кариоплазме. Цитоплазма их содержала множество остаточных телец, фаголизосом и пластинчатых структур. Макрофаги с перегруженной цитоплазмой почти не образовывали эктоплазматических выростов и их поверхность казалась сглаженной. Они часто объединялись в симпласты - гигантские клетки инородных тел. Встречались и

малодифференцированпые незрелые формы гистиоцитов со светлой цитоплазмой. Среди малочисленных органелл выделялись мелкие лизосомы с темным содержимым, окаймленные одиночной мембраной, а также свободные рибосомы.

Им му н о ги стох и м и1 ;еск и в соединительной ткани выявлялась экспрессия TGF-ßl, выраженность которого коррелировала со степенью тяжести пародонтита. Если при легкой степени тяжести пародонтита цитокин определялся у 12,01%±0,01 клеток (р<0,05), то с прогрессированием болезни и развитием воспалительных процессов количество положительно окрашивающихся клеток при средней степени составляло 24,54%± Iii (р<0.05), при сред не-тяжел ой 35,21 %±0,12 (р<0,05), а при тяжелой 40,12%±1,12 (р<0,05) (рис.4).

тяжелая средне- средняя легкая тяжелая степень тяжести заболевания

Рис.4. Количество кле-ок, эспрессирующих цитокины TGF-ßl и TNF-a при разной степени тяжести пародонтита. 4Различия значимы при р<0,05 (в сраинении с легкой степенью заболевания).

При тяжелой степени заболевания TGF-ßl обнаруживался как внутри клеток, так и во внеклеточном матриксе. Цитотоксический фактор TNF-a при легкой степени пародонтита экспрессировался у 5,11%±1,12 клеток (р<0,05), при средней степени тяжести - 10,22%±1,4 (р<0,05), при средне-тяжелой - 25%±1,12 (р<0,05). А при тяжелой степени пародонтита при развитии фиброзных процессов клеток, секретирующих TNF-a было меньше (22,01%±1,3 при р<0,05). Дефицит мононуклеарных фагоцитов и их ферментативная несостоятельность усугубляет течение заболевания и способствует хроничации воспаления и развитию аутоиммунного механизма повреждения тканей пародонта (Жяконис И.М., 1986; Глебская A.B., 2002). При развившейся патологии «дирижерами клеточного ансамбля» становятся лимфоциты, они повышают митотическую активность фиброблэстов и индуцируют гиперсекрецию коллагеновых фибрилл (Бобро Л.И, 1990; Шехтер А.Б., Серов В.В., 1991). Заживление тканей десны при пародонтите заканчивается склерозом собственной пластинки. Признаки фиброза в ней усиливались соответственно тяжести заболевания. Об этом свидетельствовала и динамика экспрессии TGF-ßl,

выявленная в соединительнотканной пластинке слизистой. Повышение экспрессии TGF-ßl обычно коррелирует с развитием фиброза (LeRoy Е.С. et al, 1990; Miyazono К, Heldin С.Н., 1993; Rodemann H.P. et al, 1996). При продолжительном пребывании в месте повреждения TGF-ßl, являясь промотором фиброгенеза (Diamond J.R, 1995; Rodemann H.P. et al, 1996; Demols A. et al, 2002), содействует иммунодепрессии макрофагов путем дезактивации их фагоцитарной функции (Зубова С. Г. с соавт, 1996). Цитолитические возможности макрофагов в тканях слизистой десен при пародонтите проявлялись слабо - TNF-a секретировался или в малом количестве, или не выявлялся вовсе. Низкая экспрессия цитокина способствовала несовершенному фагоцитозу макрофагами, направленного против инфекционных агентов и аутоимунных комплексов (Фрейдлин И.С, 1995; Nathan C.F., Koot R.K, 1977; Okulov V.B. et al, 1992).

3.9. Функциональная морфология макрофагов и регенерация тканей десны при применении яллогенного биоматериала

После введения АДБ в ткани десны уже через 7-10 суток в соединительнотканной пластинке слизистой снижалась степень воспалительной инфильтрации лейкоцитами, лимфоцитами, фибробластами. Увеличивалось количество макрофагов. Выявлялись юные макрофаги по структуре близкие к моноцитам крови. Они характеризовались округлой формой, бобовидным или овальным плотным ядром с одним или двумя ядрышками. Хроматин в ядре был равномерно распределен. Некоторые клетки имели короткие выросты цитоплазмы, инвагинации и псевдоподии. Отношение ядра к цитоплазме приближалось к единице. Цитоплазма моноцитоидных макрофагов была относительно бедна органоидами. Встречались мелкие лизосомы, единичные митохондрии и большое количество свободных рибосом. Помимо юных макрофагов присутствовали и зрелые клетки фагоцитарного и секреторного типов. Профессиональные фагоциты содержали почковидное или глубоко расчлененное ядро, занимающее эксцентричное положение, имели ворсинчатую поверхность за счет длинных многочисленных цитоплазматических выростов. Цитоплазма гистиоцитов имела более плотный вид, чем у моноцитов из-за большого количества органелл. Хорошо развитый ГЭР состоял из удлиненных цистерн с многочисленными рибосомами. Пластинчатый комплекс Гольджи был представлен плоскими цистернами и мелкими пузырьками. Возле цитоплазматической мембраны располагалось множество вакуолей с гомогенным содержимым, фаголизосомы и фагосомы с остаточными тельцами. Такое строение свидетельствовало об усилении фагоцитарной и биосинтетической функции клеток. Зрелые макрофаги контактировали с фибробластами, синтезирующими тонкие фибриллы коллагеновых волокон. В строме десен после введения АДБ наряду с вышеописанными макрофагами были обнаружены нетипичные для нормы секреторные макрофаги. Они отличались крупными размерами, овальной или удлиненной формой. В

вытянутом ядре выявлялись крупные ядрышки, прилегающие к кариолемме. Периферические участки цитоплазмы были заполнены многочисленными крупными вакуолями с гомогенным светлым и мелкозернистым содержимым. Выявлялись овальные крупные удлиненные митохондрии с параллельными кристами, короткие каналы ГЭР с четкими рибосомами и вытянутые цистерны комплекса Гольджи. Цитоплазматическая мембрана образовывала многочисленные ворсинки, некоторые из которых ампульнообразно расширялись за счет содержащихся в них мелких везикул. Среди клеток фибробластического ряда в основном преобладали активные коллагенобласты I типа. Коллагенобласты имели светлую цитоплазму с умеренно расширенными цистернами гладкого и гранулярного эндоплазматического ретикулума. В просвете каналов ГЭР некоторых клеток обнаруживались секреторные пузырьки с гомогенным содержимым. Выявлялись макрофагально-фибробластические контакты. Изредка определялись фиброкласты и миофибробласты с тонкими миофибриллами в цитоплазме. Фиброкласты определялись по наличию в цитоплазме фаголизосом с фрагментами коллагеновых фибрилл.

После введения АДБ в десну уже на 7 сутки четко определялись контуры базальной мембраны между эпителиальным слоем и подслизистой основой ткани десны. В многослойном плоском эпителии уменьшался отек клеток и межклеточных пространств. Десквамация клеток рогового слоя была заметно снижена или исчезала вовсе. При электронномикроскопическом исследовании в эпителиальных клетках шиповатого и зернистого слоев выявлялось увеличение количества пучков тоно- и микрофиламентов. Цитоплазма клеток базального слоя содержала большое количество свободных рибосом, развитую сеть гранулярного эндоплазматического ретикулума, комплекс Гольджи. Экспрессия РСЫА в эпителии определялась только в клетках базального слоя. Причем количество данных клеток, находящихся в и Б фазах клеточного цикла было значительно снижено по сравнению с эпителием десен до введения АДБ. Через 14 суток в сосочковом слое соединительнотканной основы десны обнаруживались новообразованные кровеносные сосуды с веретеновидными эндотелиальными клетками, ультраструктура которых явно указывала на усиление секреторной деятельности и интенсификацию трансэндотелиального обмена. Вдоль цитоплазматической мембраны выявлялось большое количество пиноцитозных пузырьков. Плазмалемма эндотелиоцитов образовывала ворсинки направленные в просвет сосуда, что увеличивало площадь соприкосновения клеток с жидкой средой. Признаки восстановления сосудистого русла свидетельствовали об улучшении трофики и метаболизма в тканях пародонта (об этом также можно было судить по исчезновению признаков гидропической, белковой и жировой дистрофии клеток). Известно, что макрофаги, помимо факторов миграции фибробластов, различных ростовых факторов, выделяют факторы ангиогенеза (Маянский Д.Н., 1981).

Через месяц после введения АДБ архитектоника и структура многослойного плоского эпителия полностью восстанавливались. Кардинальное отличие процесса регенерации эпителия после введения АДБ от патологических эпителиальных разрастаний заключается в том, что регенерация происходит исключительно за счет пролиферации эпителиоцитов базального слоя. Т.е., можно говорить о восстановлении физиологического характера регенерации эпителия, который характеризуется пролиферативной активностью именно клеток камбиального базального слоя (Улумбеков Э.Г. Челышев Ю.А, 1998; Быков В.Л., 1999; Баженов Д.В.. 2001), О полноценности регенерации эпителия можно было судить также по восстановлению межэпителиальных мостиков, сужению межклеточных пространств и появлению зерен кератогиалина в цитоплазме клеток, которые исчезали при патологии. В соединительнотканной основе слизистой десны очаги воспалительной инфильтрации не обнаруживались. Клеточный состав представляли преимущественно клетки фибробластического ряда: фибробласты и фиброциты. Выявлялись признаки урежения кровеносной сети. При серебрении препаратов по Футу в сосочковом слое выявлялись тонкие коллатеновые волокна, окрашивающиеся й желтовато-коричневый цвет, что указывало об их зрелости. В более глубоких слоях стромы определялись плотно упакованные, расположенные под углом относительно друг друга, фуксинофильные пучки коллагеновых волокон.

Повышение уровня экспрессии TNF-a в ткани служило подтверждением усиления макрофагами фагоцитарной активности (Pober J.S., Contran R.S., 1990; Войтенков Б.О., Окулов В.Б., 1995). Снижение уровня экспрессии TGF-p 1 в тканях пародонта подтверждало исчезновение Рубцовых изменений в соединительнотканной пластинке (рис.5).

2 / 1Л 21 30 1BD

Рис.5. Содержание ТОРЫ и Т№а в строме десны после введения АДБ (тяжелая степень пародонтита). * Различия значимы при р<0,05 (в сравнении с количеством до введения АДБ).

Если через 2 суток еще отмечалось повышенная экспрессия TGF-ßl (39,90%±4,6 клеток при р<0,05), то уже спустя 7 дней, количество клеток, экспрессирующих TGF-ßl на срезах выявлялось в количестве 28,7%±1,9 (р<0,05). Через 14 суток цитокин выявлялся в 17,3%±2,9 (р<0,05), а через 21 день в 6,1%+0,03 (р<0,05) клетках. Спустя 30 суток эта величина составляла 4,1%±1,03 клеток при р<0,05). Противоположная картина наблюдалась при исследовании TNF-a в тканях десен после введения АДБ. Наиболее выраженная его экспрессия при тяжелой степени заболевания соответствовала развившейся в очаге поражения стадии макрофагальной инфильтрации и наблюдалась в сроки 2 суток у 12,20%±0,4 (р<0,05), 7 суток-40,11%±5,01 (р<0,05), через 14суток-31,50%±2,01 (р<0,05) клеток. По мере развития стадии фибробластической инфильтрации в пораженных тканях через 21 день экспрессия TNF-a выявлялась в 22,90%±2,04 клетках (р<0,05), а через 30 суток - 5,00% ±0,05 (р<0,05) (рис.5). Динамика интенсивности проявленных регенеративных потенций совпала с динамикой численности инфильтрирующих макрофагов, выявляемых как в месте введения биоматериала, так и в окружающих тканях.

Через 6 месяцев после введения АДБ в соединительнотканном матриксе оставались большей частью клетки фибробластического ряда. Плотные оформленные пучки коллагеновых волокон содержали умеренное количество основного вещества и при окраске по Ван-Гизон приобретали фуксинофильные свойства, свидетельствующие о полном восстановлении фибриллярной структуры. При исследовании десен после лечения с применением АДБ у больных при пародонтите различных степеней тяжести через 8-10 месяцев наблюдалось сохранение структуры, архитектоники и тинкториальных свойств тканей. В тканях отсутствовала воспалительная инфильтрация, выявлялись базофилия базального слоя многослойного плоского ороговевающего эпителия (при окраске гематоксилином и эозином). Факторы, экстрагируемые из АДБ и освобождающиеся при его деструкции, способствуют полноценному созреванию и активации макрофагов (Муслимов С.А., 2000), а также восстановлению местных ауторегуляторных механизмов. Вероятно, с помощью стимулирующих факторов после резорбции АДБ макрофагами происходит ауторегуляция активности системы мононуклеарных фагоцитов даже на относительно отдаленном расстоянии от места локализации введенного аллогенного биоматериала (Фрейдлин И.С., 1984,1995).

Таким образом, результаты исследования биопсий, полученных в клинике от пациентов с пародонтитом, подтверждают данные экспериментальных исследований о том, что в полноценной регенерации тканей, стимулированной аллогенным биоматериалом, главным регулирующим фактором являются макрофаги. В патологически измененных тканях десны после введения АДБ на фоне усиленной миграции макрофагов, их созревания и дифференциации происходит формирование нормального клеточного микроокружения. Выявленные

клеточные кооперации способствуют адекватному коллагеногенезу и восстановлению М и кро ш* ркуляц и и в соединительнотканной пластинке, регенерации базальной мембраны и эпителиального пласта, то есть восстановлению стрсмально-клеточных взаимоотношений и восстановлению межтканевых связей (между соединительнотканной пластинкой и эпителием слизистой десны).

3.10. Структурно-функциональные изменения звездчатых макрофагоцитов печени при экспериментальном циррозе

Исследования показали, что в цирротически измененной печени кроликов количество активных ЗМФ резко уменьшается, по сравнению с показателями в группе интактных животных. Так если в III группе интактных кроликов оно составляло - 5,К2±0,16 клеток, то 1 группе животных через три месяца отравления тетрахлорматаном количество фагоцитирующих макрофагов было 2,34±0,10 (р<0,001) клеток на условное поле зрения (рис.6). После прекращения воздействия на животных тетрахлорметана через 2, 7, 14, 30, 90 и 180 суток количество макрофагоцитов в паренхиме печени кроликов 1 контрольной группы составляло соответственно 1,45±0,13; 2,1±0,12; 2,7±0,16; 1,9±0,09; 3,1±0,15; 2,04±0,11 на поле зрение в то время как в печени интактных кроликов III контрольной группы - от 3,82±0,14 до 5,02±0,14. Все различия были достоверны при р<0,001 (в сравнении с Ш контрольной группой).

л*

12 I 10

Г: В

£ е

[ _ C3I группа_■!! группа _QUI группа_ j

Рис.6. Количество ЗМФ (в поле зрения Х100) при циррозе печени и после введения АДБ. * Различия значимы при р<0.001 (в сравнении с III контрольной группой). ** Различия значимы при р<0.001 (в сравнении с [ контрольной группой}. При токсическом воздействии на живой организм ЗМФ печени, обладая большой фагоцитарной активностью, как клиринговые клетки первыми подвергаются деструктивным изменениям (Cuskey R.S., Cuskey P.A., 1990; Bogers W. et al., 1992; Lovdal Т., Berg T„ 2001; Nobes M.S. et. al„ 2002; Naito M. et. al„ 2004). При электронно-микроскопическом изучении цирротически измененной печени кроликов преобладающее большинство печеночных макрофагор имело морфологические признаки выраженного

до 2 tyre к л* ч»мкв

7 суток 14 суток ДО суток во суток 100

СУТ0К

функционального истощения в виде деструкции внутриклеточных органелл и накопления остаточных телец в темной цитоплазме. ЗМФ были округлой формы, раздутые, часто гипертрофированные, в то время как макрофаги печени кроликов интактной группы имели отростчато-звездчатую несколько вытянутую форму. Цитолемма у патологически измененных клеток сглаживалась, отростки и псевдоподии отсутствовали. В цитоплазме органеллы не определялись, она была перегружена остаточными тельцами, различными вакуолями и уплотнена, выглядела электроноплотной. В некоторых макрофагах в цитоплазме выявялись пластинчатые структуры -производные разрушенных мембран органелл клетки. В отдельных клетках идентифицировались многочисленные липофусциновые гранулы в виде неоднородных по структуре включений. Их содержимое включало липидные капельки и разнообразные частицы и пластинки высокой электронной плотности. Ядра клеток уплотнялись, часто отмечалась фрагментация ядерного хроматина. Вблизи пучков коллагеновых волокон также изредка встречались неактивные формы ЗМФ со светлым ядром и относительно светлой цитоплазмой из-за присутствия в цитоплазме многочисленных светлых вакуолей. Определялись сильно набухшие или вакуолизированные митохондрии, миелиноподобные структуры, различные пузырьки, темные электроноплотные округлые включения. Первичные лизосомальные гранулы отсутствовали. Клеточная плазмолемма частично разрушалась. Вероятно, такие клетки были в начальной стадии деструкции. О снижении функциональной активности ЗМФ свидетельствовали и косвенные признаки. Вблизи вышеописанных макрофагов не выявлено признаков выраженного лизиса и резорбции макрофагами коллагеновых пучков соединительной ткани, фибриллы в пучках коллагеновых волокон были четко очерчены, хорошо просматривалась поперечная исчерченность. Другой тип выявляющихся в цирротически измененной печени кроликов ЗМФ по ультраструктурным особенностям можно было охарактеризовать как активно фагоцитирующие макрофаги. Как показали количественные исследования, они встречались очень редко и имели признаки выраженной функциональной активности, выражающейся в наличии многочисленных извилистых длинных и коротких отростков и присутствия в цитоплазме множества первичных лизосом, фагосом и остаточных телец. Ядра клеток были относительно крупные, вытянутые, с небольшими инвагинациями и с крупными скоплениями гетерохроматина на кариолемме. Иногда в кариоплазме определялось 1-2 небольших ядрышка.

У животных контрольной I группы через 2, 7, 14, 30, 90 и 180 суток после прекращения воздействия тетрахлорметана количество и структура ЗМФ печени не восстанавливались.. Ультраструктурные особенности их организации в названные сроки эксперимента ничем не отличались от таковой у кроликов, выведенных из опыта сразу же после прекращения отравления. Большей частью определялись макрофаги с признаками функционального истощения с электронноплотными ядрами и осмиофильной цитоплазмой, перегруженной фаголизосомами и

остаточными тельцами. На гистологических препаратах они выявлялись в основном по краю толстых цирротических соединительнотканных прослоек в паренхиме печени или же в самой паренхиме.

Иммуногистохимические исследования показали, что индуктор фиброза трансформирующий фактор роста ТОР-Ье1а1 определяется на значительной площади срезов цирротически измененной паренхимы печени (рис.7). Через месяц после прекращения токсического воздействия в печени кроликов контрольной группы площадь специфического окрашивания ТСР-Ье1а1 на препаратах уменьшалась незначительно.

Л4еут. 21оут.

öl группа

вОеут. Л20сут. 1ВОсут.

I группа

И

Рис.7. Площадь специфического окрашивания на срезе трансформирующего фактора роста TGF-betal при экспериментальном циррозе и после введения АДБ.

3.11. Патоморфологические изменения гепатоцитов и других клеток печени при циррозе

Звездчатые макрофагоциты, секретируя различные ферменты, цитокины и другие вещества, модифицируют функции стромы и паренхимы печени и влияют на повреждение и регенерацию при развитии острых и хронических патологий (Маянский Д.Н., 1984, 1985; Вишневская Е.К., 1996; Ioannidis I., Groot H., 1993; Olynyk J.K. et al, 1994; Wang J.H.et al., 1995; Knolle P.A. et al., 1997; Armbrust T. et al., 2002; Prins H.A. et al, 2005; Xidakis C. et al, 2005; Lalaniel-N. et al, 2005). При исследовании цирротически измененной печени кроликов выявлены выраженные признаки дистрофии гепатоцитов различного характера, их некроза и замещения участков с некротизированными гепатоцитами тяжами соединительной ткани. Фиброзные прослойки различной толщины с более или менее развитой сосудистой сетью и лимфогистиоцитарными инфильтратами прорастали в основном по периферии долек по типу аннулярного цирроза, или же пронизывали паренхиму диффузно от портальных трактов внутрь печеночных долек в различных направлениях. «Ложные» дольки разных размеров состояли из полиморфных гепатоцитов, беспорядочно расположенных, полностью лишенных типичного

трабекулярного построения, характерного для нормальной структуры печени. Цитоплазма большинства печеночных клеток была мелко- или крупновакуолизированной, часто с мелкими или крупными жировыми включениями. Гранулы гликогена в цитоплазме гепатоцитов отсутствовали, Шик-реакция была отрицательной. Ядра в клетках были различной величины, с неравномерным содержанием и распределением хроматина, часто в виде диффузного распыления в кариоплазме. Во многих ядрах ядрышки не определялись, или они уменьшались в размерах. В случае диффузного прорастания соединительной ткани в паренхиму гепатоциты также теряли трабекулярность строения. Они были полиморфны, с разной степенью выраженности дистрофических процессов от легкого набухания митохондрий до почти полного опустошения цитоплазмы клеток. Соединительная ткань наиболее интенсивно разрасталась вокруг портальных трактов, которые выделялись венозным полнокровием и холестазом. Наряду с дистрофией, некрозом, фибропластическими процессами и перестройкой печеночных долек, наблюдались признаки слабовыраженной регенераторной активности гепатоцитов. Она выражалась в гипертрофии гепатоцитов и наличии небольшого количества двуядерных клеток при диффузном прорастании паренхимы соединительной тканью, и единичных регенераторных гепатом - при образовании ложных долек.

Межклеточные пространства гепатоцитов были видоизменены и расширены, в них определялись коллагеновые фибриллы. Видимо как следствие снижения коллагеназной активности функционально истощенных ЗМФ - главных источников коллагеназы в печени (Рывняк В.В. с соавт., 1996; Roykind М., Kerschenobich О., 1981; Okazaki I., Maruyma К., 1985), синусоиды и пространства Диссе заполняли коллагеновые фибриллы. В перисинусоидальных пространствах происходило отложение аморфных масс, которые формировали базальную мембрану в синусоидах, а эндотелиальные клетки подвергались деструкции. Среди коллагеновых фибрилл выявлялось большое количество фибробластов и миофибробластов с признаками функциональной активности, макрофагов, активных клеток Ито с большими «тающими» липидными каплями в цитоплазме и расширенными каналами ГЭР, лимфоцитов, плазматических клеток. Уцелевшие эндотелиальные клетки уплотнялись, вакуолизировались и имели вид узких полос, в них невозможно было отдифференцировать органеллы. Ядра дефрагментировались или были однородно осмиофильными, разбухшими. В таких эндотелиоцитах редко выявлялись пиноцитозные пузырьки - показатели трансэндотелиального обмена.

Итогом нарушения баланса между синтезом и распадом коллагена в результате функционального ослабления ЗМФ является формирование толстых соединительнотканных прослоек в паренхиме печени (Okazaki I., Maruyma К., 1985; Herbst Н., 1992), которые мы и наблюдали у

эксаериментальных животных. Грубые тяжи разделяли паренхиму на «ложные» дольки и нарушали нормальную структуру органа. Полученные нами результаты согласуются с данными других исследователей, которые также установили, что дирротическая трансформация печени является результатом развития фибропластических процессов, вышедших из под контроля звездчатых мак зофагоцитов (ЗМФ) е результате уменьшения их количества и снижения коллагенолитической активности (Маянский Д.Н. с соавт., 1988; Hamazaki К. st al., 1994; Shiratori Y. et al, 1996).

Относительное количество двуядерных гепатоцитов значительно уменьшалось как сразу после прекращения интоксикации тетрахлорметаном, так и спустя 2, 7, 14, 30, 90 и 180 суток. Количество их сразу после прекращения интоксикации составляло 5,3±0,7% (у интактных кроликов III группы - 21,>±0,3), через 2 суток после прекращения действия CCI4 - 7,7^0,6% (111 группа - 20,7±0,4%), через 7 суток - 4,6±0,5% (III группа-22,1 ±0,3%), через 14 суток - 7,3±0,5% (III группа - 21,7±0,2%), 30 суток - 6,5±0,5% (III группа - 22,0±0,7%), 90 суток - 4,9±0,6% (111 группа -2 !,1±0,6%) и через 180 суток оно составило 8,5±0,9% (Ш группа -23,1±0,3%). Все значения достоверны при р<0,001 (при сравнении с контрольной интактноЙ группой).

Иммуногистохимическое выявление гепатоцитов, экспрессирующих PCNA (ядерный антиген п рол и ф е р и ру ю щ и х клеток) показало, что индекс пролиферации гепатоцитов (ИП) в цирротичеекп измененной печени также резко снижается (рис.8),

щ

!

i

*

1

1—11 ■ ■ ' : 11 j

Рис.8, Относительное количество гепатоцитов, экеп ресс иру ющ И X PCNA (%') при циррозе печени г после введения в нее А ДБ, * Различия значимы при р<().01(и сравнении с III конгрольной группой),

В различные сроки после прекращения интоксикации от 2 суток до в месяцев ИП в I группе варьировал от 0,05 до 0,06, в то время как ИП гепатоцитов в печени ишактных кроликов Ш группы варьировал от 0,19 до 0.24- Измерение размеров ядер гепатоцитов у кроликов I группы показало,

что их средняя площадь сразу после прекращения действия токсического фактора достоверно составляло 113,4±l,9mkm2 (р<0,001 при сравнении с контрольной интактной группой). В различные сроки после прекращения интоксикации от 2 суток до 6 месяцев площадь ядер гепатоцитов уменьшалась от 121,6±l,8mkm2 (р<0,001) до 87,7±l,3mkm2 (р<0,001), в то время как средняя площадь ядер гепатоцитов в печени интактных кроликов III группы варьировала от 59,9±l,0mkm2 до 63,7±0,70mkm2. Размеры ядер гепатоцитов обусловлены различной степенью их полиплоидизации, т.е. различным содержанием ДНК (Рябинина З.А., Бенюш З.А., 1973). Усиление процессов полиплоидизации в печени при воздействии СС14 которое мы наблюдали, достигается путем значительных изменений в соотношении количества гепатоцитов разных классов плоидности (Завадская Е.Э., 1989; Сакута Г.А., Кудрявцев Б.Н., 1996). При этом в печени млекопитающих обычно отмечается падение относительного числа 2с- и (2сх2)-гепатоцитов и появление высокоплоидных гепатоцитов, не характерных для нормального органа (Бродский В.Я., Урываева И.В., 1981). В нормальной печени взрослых крыс рост и физиологическая регенерация осуществляется в основном за счет пролиферации гепатоцитов, а не за счет их полиплоидизации (Сакута Г.А., Кудрявцев Б.Н.,1996).

Прекращение гепатотоксического воздействия на печень ослабляло некротические и воспалительные процессы в паренхиме, но не приводило к восстановлению ее структуры. Склероз печеночных синусоидов, сопровождающий их капилляризацию при циррозе, полностью нарушая важнейшую клеточную кооперацию между гепатоцитом, ЗМФ, эндотелиоцитом и другими клетками печени, не может способствовать нормальному гомеостазу в ткани. Поэтому нельзя ожидать, что репаративная регенерация в цирротически измененной печени без восстановления фенотипической популяции макрофагов печени, главных источников коллагеназы и регуляторов клеточного микроокружения, закончится восстановлением структуры органа.

3.12. Восстановление популяции звездчатых макрофагоцитов печени при стимуляции аллогенным биоматериалом

Уже через 2 суток после введения АДБ в паренхиму цирротически измененной печени биоматериал активно резорбировался макрофагами. Из ближайших сосудов наблюдался выход моноцитов крови, которые дифференцировались в юные моноцитоидные макрофаги с первичными лизосомами и большим количеством рибосом и полисом в цитоплазме и активные зрелые макрофаги. Последние во множестве определялись в синусоидах, вдоль коллагеновых волокон соединительнотканных прослоек печени. Это были отростчатые клетки крупных размеров, содержащие в цитоплазме большое количество лизосом и фаголизосом, вакуолей, остаточных телец. Одним из нескольких факторов, предопределяющих ход процессов, возникающих в паренхиме цирротически измененной печени

после его введения АДБ, является низкая антигенность биоматериала (Muldashev E.R., 1998). Моноциты, элиминирующие из сосудов, не «находя» антигенных детерминант биоматериала, в синусоидах окружающей ткани созревают в фагоцитирующие макрофаги, полноценно выполняющие свои функции (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983; van Furth R., 1980). Очевидно, что АДБ, продукты его деструкции и резорбции обладают стимулирующим влиянием на макрофаги. Об этом свидетельствует резкое увеличение количества макрофагов и повышение их функциональной активности, а также прогрессивное усиление инволютивных процессов соединительной ткани в печени после введения биоматериала. Подсчет количества ЗМФ в печени кроликов опытной группы показал резкое повышение их числа уже через 2 суток после введения АДБ в паренхиму (15,98±0,18 при р<0,001) (рис.6). Этот уровень почти не менялся в течение месяца, и снизился вдвое только к 90 суткам (8,55±0,17 при р<0,001), а через 180 суток количество активных макрофагов было примерно одинаковым с таковым показателем животных интактной группы (4,32±0,14 при р<0,001). Обращало на себя внимание диффузное распределение моноцитов и макрофагов в паренхиме печени, а не скопление в гранулемы. Макрофаги, характеризующиеся значительным полиморфизмом, выявлялись на всех дальнейших этапах исследований. Иногда обнаруживались клетки с большим количеством липидных включений в цитоплазме в виде округлых липидных капель или разнородных включений липофусцина. Встречались юные макрофаги, содержащие в цитоплазме только первичные лизосомы и большое количество полисом и мембраносвязанных рибосом. Ядра у клеток были крупные, округлые, иногда с довольно крупными ядрышками.

Большей частью определялись макрофаги крупных размеров с увеличенным числом и размерами псевдоподий, содержащих в цитоплазме большое количество вторичных лизосом и фаголизосом, множество вакуолей с различным содержимым, остаточные тельца. Ядра их были с крупными ядрышками и глыбками гетерохроматина на внутренней ядерной мембране. Особенности ультраструктуры макрофагов позволяли отнести их к активно фагоцитирующим. О повышении функциональной активности макрофагов свидетельствовали и косвенные признаки. Уже на 7-14 сутки после введения АДБ в паренхиму цирротически измененной печени в соединительнотканных прослойках наблюдались структурные изменения, выражающиеся в дезорганизации внеклеточного матрикса и разрушении фибробластов. Определялось набухание и пикринофилия отдельных волокон соединительной ткани. На ультраструктурном уровне выявлялось изменение строения коллагеновых волокон, потеря ими поперечной исчерченности. Фибриллы были разных диаметров, с размытыми контурами, между ними выявлялся хлопьевидный материал, вероятно, продукты их лизиса. Эти аморфные массы активно резорбировались макрофагами. Деструкция коллагеновых волокон особенно была выражена вблизи макрофагов. Коллагеновые фибриллы в пространстве Диссе также

были с размытыми контурами и в виде хлопьевидного материала. В синусоидах определялись вакуолизированные фибробласты с разрушающейся плазматической мембраной.

Через 30 суток после введения АДБ в цирротически измененную печень кроликов электронно-микроскопически продолжали выявляться признаки повышенной функциональной активности макрофагов, в том числе - прогрессирующий распад коллагеновых волокон: разрыхление, дезинтеграция, потеря поперечной исчерченности, снижение контраста, фрагментация и лизис коллагеновых волокон. На гистологических препаратах обнаруживалось выраженное истончение

соединительнотканных прослоек между печеночными дольками и вокруг портальных трактов. Количество фибробластов и коллагеновых фибрилл в синусоидах заметно уменьшалось. В эндотелиоцитах, как свидетельство улучшения трансэндотелиального обмена, отмечалось увеличение количества пиноцитозных пузырьков и появление фенестр в отростках. Фиксированные ЗМФ с типичной структурой стали встречаться к 90 суткам, когда в большинстве перисинуидальных пространств Диссе и в синусоидах коллагеновые фибриллы не выявлялись и восстанавливалась структура синусоидных капилляров. Это были выступающие в просвет синусоида удлиненные клетки с крупными ядрами и умеренным количеством псевдоподий. В цитоплазме определялись кольчатые структуры, образованные ГЭР, свободные рибосомы, полисомы, множество пузырьков и везикул, первичных лизосом. Особенности ультраструктуры позволяли отнести их к ЗМФ - зрелым фиксированным макрофагам печени.

Иммуногистохимические исследования показали, что маркер фиброза трансформирующий фактор роста ТОР-Ье1а1 уже через 30 дней после введения аллогенного биоматериала в печень экспрессируется лишь на незначительной площади срезов паренхимы печени, а в дальнейшем не определяется вовсе (рис.7).

3.13. Регенерация гепатоцитов и восстановление структуры паренхимы печени после стимуляции ЗМФ аллогенным биоматериалом

После введения частиц АДБ в паренхиму цирротически измененной печени кроликов уже через 2 суток наряду с признаками дистрофии клеток и фибропластических процессов наблюдали выраженные признаки регенераторной активности гепатоцитов в виде увеличения количества двуядерных клеток. Проведенные исследования показали, что пролиферативная активность гепатоцитов возрастает прямо пропорционально количеству активных макрофагов. Этот факт свидетельствует в пользу опосредованной стимуляции пролиферации дифференцированных гепатоцитов через активированные макрофаги (Маянский Д.Н, Щербаков В.И, 1980; Маянский Д.Н, 1981; НашагаИ К. е1 а1, 1994; БЫгаЮп У. е1 а1, 1996; 0§ига У. е1 а1, 2001). Относительное

количество двуядерных гепатоцитов в паренхиме цирротически измененной печени кроликов II группы после введения АДБ имело тенденцию прогрессивного увеличения до 30 суток включительно, оно увеличивалось от 5,30±0,4% до 63,7±0,9%. К 90 суткам это количество составляло 39,6±0,7%, а через 180 суток несколько уменьшалось -24,7±0,3% (значения достоверны при р<0,001 по сравнению с контрольной I группой кроликов). Средняя площадь ядер гепатоцитов до введения биоматериала в печень составляла - 109,6±l,lmkm2, после введения в сроки 2, 7, 14, 30, 90 и 180 суток она составила 107,2 ±l,7mkm2, 85,6±0,9mkm2, 74,6±l,0mkm2, 66,7±0,6mkm2, 67,5±0,9mkm2, 61,4±0,5mkm2 соответственно (значения достоверны при р<0,001 в сравнении с I контрольной группой), что свидетельствовало об уменьшении количества полиплоидных гепатоцитов. Гепатоциты имели крупные ядра с одним или двумя ядрышками, богатые гранулярным веществом, хроматин концентрировался вдоль ядерной мембраны в виде фестонов. В цитоплазме выявлялись развитые удлиненные цистерны ГЭР и округлые митохондрии, хотя указанная сеть была мелковакуолярно расширена, заполнена содержимым средней электронной плотности и умеренно дегранулирована. Она плотными слоями располагалась вокруг ядра.

Через 7 суток после введения АДБ в печень кроликов об усилении процессов регенерации свидетельствовало увеличение числа гепатоцитов, экспрессирующих PCNA. ИП возрастал до 0,35±0,04 (рис.8). Спустя 14 суток среди беспорядочно расположенных гепатоцитов выявлялись зоны с рядами пролиферирующих гепатоцитов, отличающихся малыми размерами и хорошо окрашиваемым ядром и цитоплазмой. Электронно-микроскопические исследования выявили гиперплазию ГЭР и митохондрий в этих клетках. По мере усиления регенерации гепатоцитов исчезали участки жировой дистрофии паренхимы и соединительнотканные тяжи. Приток зрелых функционально активных макрофагов вероятно создавал условия для нормализации стромально-паренхиматозных взаимоотношений в печени (Shiratori Y., 1996; Kim Т.Н. et al., 1997).

Двуядерные гепатоциты и гепатоциты, ядра которых экспрессировали PCNA, обнаруживались преимущественно в печеночных дольках вокруг портальных трактов. PCNA экспрессировали и отдельные клетки эпителия желчных протоков. Через 30 суток после введения АДБ в паренхиму печени у кроликов II группы на гистологических срезах печени частицы биоматериала не обнаруживались. В этот срок определялась наибольшая пролиферативная активность гепатоцитов - ИП составил 0,72±0,03. При заметном истончении фиброзных прослоек между печеночными дольками и вокруг портальных трактов уже прослеживалась тенденция восстановления структуры паренхимы печени с образованием балок, хотя полиморфизм гепатоцитов в некоторых участках еще сохранялся, а общая структура паренхимы имела признаки атипичности, дольки были

неодинаковых размеров с одной или двумя эксцентрично расположеными центральными венами.

На 90 сутки после введения АДБ в печень кроликов на гистологических препаратах печени продолжали выявляться признаки регенерации гепатоцитов и восстановления структуры паренхимы. Соединительнотканные прослойки между дольками почти полностью исчезали, а те, которые еще сохранялись, были сильно истончены, что едва определялись. Отличительной особенностью этого периода являлась регенерационная гиперплазия печеночных клеток: интенсивно размножающиеся гепатоциты теснили друг друга от портальных трактов в сторону центральных вен, где они подвергались дегенерации. Вокруг портального тракта выявлялись клетки с плотной, зернистой, интенсивно окрашивающейся цитоплазмой. В направлении к периферии зернистость цитоплазмы уменьшалась, клетки становились светлыми и безъядерными. Вокруг центральных вен располагались зоны, содержащие светлые гепатоциты с признаками деструкции и фигурами апоптоза, которые были представлены резко очерченными уплотнениями ядерного хроматина, прижатыми к внутренней ядерной мембране. Ядро распадалось на дискретные фрагменты, а цитоплазматические протуберанцы разделялись плазматической мембраной. Окруженные мембраной апоптозные тельца были различного размера, плотно упакованные органеллы в них выглядели интактными. При применении антитела к FAS-L, связывание которого с рецепторными молекулами FAS вызывает агрегацию последних, впоследствии приводящих к апоптозу - программированной клеточной смерти (Ройт А. с соавт., 2000), экспрессия определялась также в зоне вокруг центральных вен. Иммуногистохимические исследования при изучении экспрессии гепатоцитами PCNA подтвердили, что при стимуляции ЗМФ аллогенным биоматериалом после истончения цирротических соединительнотканных прослоек в паренхиме печени процесс пролиферации гепатоцитов происходит за счет дифференцированных клеток вокруг портальных трактов. Аналогичный процесс зафиксирован исследователями в нормальной печени при росте паренхимы, когда рост паренхимы происходит за счет деления дифференцированных гепатоцитов вокруг портальных трактов (Романов Ю.А., Савченко Т.В., 1986; Geisler А. et al., 1994; Volk A., Michalopoulos G., 1995), а вокруг центральных вен гепатоциты подвергаются процессу апоптоза, который является интегральной частью цикла клеточного обновления и участвует в поддержании стационарного состояния тканей (Kerr J.F. R. et al., 1972; Bursch W.C. et al., 1990). Такой тип клеточной гибели является физиологическим процессом и происходит постоянно при нормальной регуляции жизнедеятельности клеток и тканей. К 90 суткам после введения в печень АДБ нормализовались межклеточные контакты гепатоцитов и структура желчных капилляров. На васкулярном полюсе микроворсинки гепатоцитов тесно контактировали с перисинусоидальной поверхностью эндотелиоцитов. В цитоплазме эндотелиоцитов выявлялись

пиноцитозные везикулы разных размеров, митохондрии, рибосомы. В длинных отростках клеток определялись многочисленные фенестры. В отдаленные сроки (180 суток) вокруг портальных трактов и центральных вен обнаруживались полностью сформированные печеночные балки с типичной структурой составляющих их гепатоцитов. Определялись четко выраженные синусоиды с синусоидными клетками. Местами сохранялись морфологические признаки некоторой атипичности паренхимы, проявляющиеся в эксцентричном расположении центральных вен или их присутствия в дольке в количестве двух. Однако цирротические ложные дольки полностью исчезали, также как и соединительнотканные прослойки, замещающие погибшие гепатоциты. Ультраструктура клеток цирротически измененной печени кроликов не отличалась от структуры клеток печени интактных кроликов.

3.14. Регенерация цирротически измененной печени человека после стимуляции диспергированным биоматериалом Аллоплант

Результаты гистологического исследования биопсии пациента с циррозом печени подтверждают данные о стимулирующем влиянии аллогенного биоматериала на макрофаги печени. Так, у больного С. через 1,5 года после введения в печень стимулятора регенерации (аллогенный диспергированный биоматериал), хотя и патогистологический диагноз «макронодулярный цирроз печени» не был полностью снят, были обнаружены регенераторные признаки в виде множественных очагов регенерации с 2-х ядерными клетками и с характерными для пролиферирующих мелких гепатоцитов светлыми округлыми ядрами с 1-2 ядрышками. Ядра пролиферирирующих гепатоцитов экспрессировали PCNA. В расширенных синусоидах выявлялись звездчатые ретикулоэндотелиоциты в виде крупных амебообразной формы клеток с эозинофильной или светлой цитоплазмой и крупными бобовидными или веретенообразными базофильными ядрами. Крупные размеры клеток и распластывание многочисленными отростками почти по всей ширине синусоида указывали на их повышенную функциональную активность. В отдельных участках мелкие гепатоциты с равномерно интенсивно окрашенной розовой цитоплазмой уже составляли типичные для нормы балочные структуры. Относительное большое количество ядер гепатоцитов экспрессировало PCNA. Выявленная морфологическая картина свидетельствовала об активации звездчатых ретикулоэндотелиоцитов и стимуляции регенераторного процесса гепатоцитов.

Таким образом, результаты наших исследований показали, что введение диспергированного аллогенного биоматериала в цирротически измененную печень способствует восстановлению главного звена в нарушенной цепочке механизма ауторегуляции тканевого гомеостаза печени - фенотипа и количества звездчатых макрофагоцитов за счет привлечения предшественников - моноцитов крови, их созревания и

выраженной стимуляции. Поэтому процесс регенерации гепатоцитов (в виде их пролиферации) приобретает физиологические очертания в отличие от других методов стимуляции регенерации, когда репаративные процессы осуществляются за счет гипертрофии клеток и органа, приводящих к быстрому, но временному улучшению функциональных показателей, но не восстановлению строения паренхимы (Солопаев Б.П. с соавт., 1985; Ахунджанов Б.А., 1991; Сакута Г.А., Кудрявцев Б.Н., 2005; Hwang T.L. et al., 1995; Hashimoto M., Watanabe G., 1999; Ogura Y., 2001), или полиплоидизации гепатоцитов, которая ускоряет «старение» тканей (Заварзин А. А., 1967). Приток «зрелой» функционально активной популяции макрофагов создает условия для нормализации стромально-паренхиматозных взаимоотношений в печени. Одновременно протекающие в паренхиме печени процессы усиленной резорбции соединительной ткани макрофагами и регенерации гепатоцитов в конечном итоге приводят к восстановлению структуры органа. Вероятно, неспецифическая стимуляция макрофагов аллогенным биоматериалом запускает ауторегуляцию системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ), которая была нарушена в цирротически измененной печени вследствие уменьшения численности ЗМФ и ослабления их активности. Результатом стимулирующего действия на СМФ является возобновление фенотипической популяции ЗМФ, главных регуляторов тканевого гомеостаза в печени.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

При регенерации тканей, индуцированной биоматериалами, в межклеточных и стромально-клеточных взаимодействиях основную регулирующую роль играют макрофаги. Характер течения воспалительного процесса и последующих за ним процессов регенерации или дисрегенерации в соединительной ткани (в зависимости от вида имплантированного биоматериала) определяет разная выраженность макрофагальной стадии, отличающаяся количественным и качественным составом макрофагов и их активностью. Имплантация аллогенного биоматериала вызывает активацию только первичного звена иммунитета -макрофагов. При этом создаются условия для полного созревания разных субпопуляций макрофагов, в том числе и «матриксформирующих», отличающихся выраженной секреторной активностью и экзоцитозом. Являясь главным фактором, влияющим на процессы синтеза коллагена фибробластами и структурного оформления регенерата, макрофаги в условиях полноценного микроокружения (продукты деградации биоматериала - коллаген, протеогликаны, гликопротеины, гликозаминогликаны и отсутствие лимфоцитов в инфильтрате) с помощью цитокинов оказывают регуляторное влияние на дифференциацию и функциональную активность других клеточных популяций, препятствуя фиброзу и способствуя формированию структурно адекватного регенерата. Полученные нами данные позволяют выдвинуть гипотезу о существовании двухкомпонентного механизма формирования новообразованной

соединительной ткани на месте имплантации биоматериала Аллоплант. Согласно ей коллагеновые фибриллы синтезируются фибробластами, а гликозаминогликановый или протеогликановый компонент -«матриксформирующими» макрофагами. При применении нерезорбирующегося ксеногенного биоматериала в отсутствии «матриксформирующих» макрофагов привлеченные в очаг имплантации мезенхимальные клетки дифференцируется в миофибробласты, в избыточном количестве синтезирующие коллаген характерный для рубца, а также способствующие его контракции.

Неспецифическая активация макрофагов аллогенным биоматериалом мобилизует специализированные и прогениторные клетки. Восстановление характерных для нормального тканевого гомеостаза клеточных коопераций, управляемых макрофагами, способствует восстановлению не только стромально-клеточных, но и межтканевых связей (взаимоотношения между соединительнотканной пластинкой и эпителием слизистой, стромально-паренхиматозные взаимоотношения в паренхиматозных органах). Вероятно, различные факторы, выделяющиеся при стимуляции макрофагов, воздействуют на региональные и кроветворные ствоповые клетки и стимулируют частичную рекапитуляцию эмбриогенеза. Регенерирующие клетки реципиента восстанавливают нарушенный молекулярный и клеточный гомеостаз, приводящий к возобновлению тканей, структура которых очень близка к таковой тканей реципиента.

Таким образом, фенотипическое созревание и неспецифичная активация макрофагов при использовании аллогенных биоматериалов способствуют восстановлению нарушенных при патологии клеточных механизмов управления регенерацией тканей, ведущих к их полноценной репарации, протекающей на основе закономерностей физиологической регенерации и постнатального гистогенеза.

ВЫВОДЫ

1. Стимуляция регенерации тканей аллогенными биоматериалами обеспечивает фенотипическое созревание макрофагов и оптимизацию их регуляторного влияния на дифференциацию и функциональную активность других клеточных популяций, что способствует формированию структурно адекватного регенерата.

2. Повышенная экспрессия макрофагами фактора некроза опухолей-альфа при низком уровне экспрессии трансформирующего фактора роста-бета1 в соединительной ткани в зоне введения аллогенного биоматериала способствует дифференциации фибробластов с умеренной продукцией коллагена.

3.При введении ксеногенного биоматериала не происходит его резорбции; макрофаги трансформируются в эпителиоидные клетки и гигантские клетки инородных тел, что приводит к хронизации процесса

воспаления и формированию гру5оволокнистой соединительной ткани, отграничивающей зону имплантации.

4. Выраженная экспрессия трансформирующего фактора роста-бета1 и низкий уровень экспрессии фактора некроза опухолей-альфа в соединительной ткани при имплантации ксеногенного биоматериала приводит к дифференциации миофибробластов и фибробластов с избыточной продукцией коллагена и фиброзу.

5. Одним из основных факторов полноценной регенерации соединительной ткани, стимулированной аллогенным биоматериалом, является созревание «матриксформирующих» макрофагов с выраженной секреторной активностью, связанной с экзоцитозом гликозамингликанового компонента новообразованной соединительной ткани.

6. Регенерация соединительной ткани, инициированная стимуляцией макрофагов аллогенным биоматериалом, сопровождается повышенным содержанием в регенерате гиалуроновой кислоты, что обеспечивает полноценное восстановление структуры ткани.

7. Возобновление популяции звездчатых макрофагоцитов в цирротически измененной печени после введения в нее аллогенного диспергированного биоматериала способствует инволюции соединительной ткани и регенерации гепатоцитов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Нигматуллин Р.Т., Мулдашев Э.Р., Захваткина К.А., Мусина Л.А. Структурные и гистохимические преобразования аллотрансплантатов, применяемых в офтальмохирургии // В сб. «Актуальные проблемы физиологии, биохимии и фармакологии функциональных систем». - Уфа, 1985.-С.139-141.

2.Муслимов С.А., Захваткина К.А., Мусина Л.А. Стимуляция регенерации печени с помощью аллогенных биоматериалов. Мат. Межд. конф. «Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза в норме и при воздействии антропогенных факторов. Проблемы экологии в медицине», - Астрахань, 1996. - С. 130.

3. Мулдашев Э.Р., Родионов О.В., Мусина Л.А., Галимова В.У., Султанов Р.З., Муслимов С.А. Морфологическая оценка операции реваскуляризации хориоидеи на модели экспериментального гемофтальма. Матер. Всерос. научно-практ. конф. «Брошевские чтения». - Самара, 1997. -С.227-230.

4. Мусина Л.А. Восстановление ультраструктуры цирротически измененной печени при введении биоматериала Аллоплант. Сб. науч. тр. «Фундаментальные и прикладные аспекты современной морфологии». -Санкт-Петербург, 1997. - Т.2. - С.4-6."

5.Муслимов С.А., Мулдашев Э.Р., Галимова В.У., Мусина Л.А., Мустафин М.М., Родионов О.В. Ультраструктурные изменения в сетчатке

глаза при экспериментальном гемофтальме и его хирургической коррекции. Сб. науч. тр. « Фундаментальные и прикладные аспекты современной морфологии». Санкт-Петербург, 1997. - Т.2. - С.6-8.

6. Мусина Л.А., Мингазов P.C., Муслимов С.А., Захваткина К. А.. Морфологические изменения в цирротически измененной печени при введении диспергированного биоматериала Аллоплант. Мат. Всерос. науч. конф. «Закономерности морфогенеза и регуляция тканевых процессов в нормальных, экспериментальных и патологических условиях». - Тюмень, 1998.-С.78.

7. Мусина Л.А., Мингазов P.C., Муслимов С.А., Захваткина К.А.. Морфологическая оценка коррекции цирроза печени с применением биоматериала Аллоплант// Морфология. - 1998. - Т.113, N3. - С.83.

8.Киреев B.JI., Мусина Л.А., Муслимов С.А., Шумкин A.M. Аллогенный резорбируемый внеклеточный матрикс: влияние на активность гепатоцитов и звездчатых ретикулоэндотелиоцитов печени. Материалы Респ. научно-практ. конф. «Актуальные проблемы хирургии и морфологии». - Уфа, 1998. - С.132-134.

9. Muldashev E.R., Sibiiyak S.V., Muslimov S.A., Kurchatova N.N., Musina L.A., Khasanov R.A., Kireev V.L.. Pulverulent Alloplant as a new bioimmunomodulator. Archives of Pharmacology. 125th. Anniversary. Supplement 2 to XHIth International Congress of Pharmacology. - München, Germany, 1998. - V.358, N1.-P.729.

10. Муслимов С.А., Надольская C.H., Мусина Л.А., Киреев В.Л. Функциональная морфология стромальных меланоцитов радужки глаза // Российские морфологические ведомости. - 1999, № 1-2, - С.104-105.

11. Muldashev Е. R., Muslimov S. A., Nigmatullin R. Т., Kiiko Y. I., Galimova V. U., Salikhov A. Y., Selsky N. E., Bulatov R. Т., Musina L. A. Basic research conducted on Alloplant biomaterials // European Journal of Ophthalmology.- 1999. - Vol. 9, № 1. - P.8-13.

12. Муслимов С.А., Мусина Л.А. Внутриклеточная регенерация нейронов сетчатки и пигментного эпителия при использовании биоматериалов Аллоплант в реваскуляризирующих операциях // Матер. VII съезда офтальмологов России. Часть 1. Москва, 2000. - С.466.

13. Мустафин А.Х., Мусина Л.А., Чингизова Г.Н. Стимуляция регенераторных процессов в печени при ее резекции в эксперименте // Здравоохранение Башкортостана, 2000. - №1-2. - С.45-50.

14. Мулдашев Э.Р., Муслимов С.А.. Нигматуллин Р.Т., Мусина Л.А. Биологические основы применения биоматериалов Аллоплант в офтальмологии // Мат. научно-практ. конф,- Абакан, 2000. - С.105-110.

15. Муслимов С,А., Мусина Л.А. Восстановление ультраструктуры нейронов сетчатки глаза при применении диспергированного биоматериала Аллоплант // Мат. III межд. симп. «Современные проблемы нейробиологии. Исследования висцеральных систем и их регуляции в возрастном аспекте». - Саранск, 2001. -С.115-116.

16. Мусина JI.А., Мингазов P.C., Аристова А.И. Роль звездчатых ретикулоэидотелиоцитов в патогенезе цирроза печени и ее регенерации, стимулированной введением биоматериала Аллоплант // Мат. 5 межрег. научно-практ. конф. патологоанатомов Урала и Западной Сибири «Актуальные вопросы патологической анатомии» - Челябинск.- 2001.- С. 104-106.

17. Хунафин С.Н, Кулавский В.А, Мусина Л.А. Профилактика брюшных спаек // Здравоохранение Башкортостана, 2001. - Т.6, № 1. ■ С.49-52.

18. Галимова В.У, Мусина Л.А. Трансплантация аллогенных биоматериалов в эксперименте при фотодегенерации // Сб. науч.тр. «Офтальмология на рубеже». - Санкт-Петербург, 2001. - С. 303-304.

19. Галимов И.И, Мусина Л.А. Возможности профилактики печеночной недостаточности при резекции печени // Вятский рад.вестник, 2002. - №1. - С.25-26.

20. Салихов А.Ю, Муслимов С.А, Мусина Л.А. Динамика морфологических изменений биоматериала Аллоплант после хирургического лечения рака век И Морфология, 2002. - № 2-3. - С. 138.

21. Muslimov S.A., Muldashev E.R, Musina L.A., Khasanov R.A.. The morphological basis of the dispersed alloplant biomaterial application in the hepatic cirrhosis treatment // 11th International Conference on Tissue Banking and EATB Annual Meeting «Past, Present and Future of Tissue Banking». -SUZA, Bratislava, Slovak Republic,2002. - P.78.

22. Аристова А. И, Мусина Л.А., Булгакова А. И, Гизатуллина Э.Р. Регенерация тканей десны при коррекции пародонтита биоматериалом «Аллоплант» // Электронный журнал «Регенеративная хирургия».www.Alloplant.ru.-Уфа.- 2002.

23. Нартайлаков М.А, Мулдашев Э.Р, Мингазов P.C., Муслимов С.А, Сафин И.А, Мусина Л.А., Ахиярова Г.Р. Регенеративная хирургия при хронических активных гепатитах и циррозах печени // Мат. Всерос. конфер. Хирургов - Тюмень, 2003. - С. 196-198.

24. Нартайлаков М.А, Мулдашев Э.Р, Мингазов P.C., Нигматуллин Р.Т, Муслимов С.А, Мустафин А.Х, Соколов В.П, Мусина Л.А. Достижения и перспективы хирургии печени и желчных путей // Вестник Академии наук РБ. - Уфа, 2003. - Т.8, № 3. - С.38-45.

25. Аристова А.И, Муслимов С.А, Мусина Л.А. Морфофункциональные изменения макрофагов в условиях применения диспергированного биоматериала Аллоплант и ксеногенного биоматериала в эксперименте у крыс // Сб. науч. тр. «Актуальные проблемы морфологии». / Под редакцией проф. Н.С.Горбунова. - Красноярск, 2003.-С. 12-13.

26. Муслимов С. А, Мусина Л.А., 'Аристова А.И. Ультраструктурные особенности субпопуляции макрофагов, выявленных при имплантации биоматериала «Аллоплант». Мат. док. Всерос. науч. конф. «Реактивность и

пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях» // Морфология. - Оренбург, 2003. - №5. - С.64.

27. Мусина JI.A., Султанов Р.З., Мулдашева И.Э., Нураева А.Б., Салихов Э.А. Морфологическая характеристика и особенности замещения биоматериалов «Аллоплант» при пластике посттравматических дефектов орбиты // Мат. XIV Российской научно-практ. конф. «Новые технологии микрохирургии глаза». - Оренбург, 2003. - С. 176-179.

28. Muslimov S.A., Muldashev E.R., Nigmatullin R.T., Musina L.A. Alloplant: Principles of allogenic tissue selection, treatment and surgery application // Absracts 12th international congress of the European association of tissue banking. - Brugge, Belgium. - 2003. - P.78.

29. Лебедева А.И., Муслимов C.A., Мусина JI.A. Динамика экспрессии цитокинов TGFpi и TNF-a после введения алло- и ксеногенного биоматериалов // Морфология. - 2004. - Т.126. - № 4. - С.70.

30. Мусина Л.А., Муслимов С.А., Лебедева А.И., Зыков О.В. Роль макрофагов в регенерации соединительной ткани при имплантации биоматериалов // «Актуальные вопросы патологии». - Здравоохранение Башкортостана. - 2004. - № 4. - С. 146-149.

31. Биоматериалы Аллоплант для регенеративной хирургии // Методические рекомендации. - Москва - Уфа. - 2004.40 с.

32. Янгиров И.В., Мингазов Р.С., Мусина Л.А. Стимуляция регенерации печени при ее диффузных заболеваниях // Сб. мат. Республиканской научн. конф. «Вопросы теоретической и практической медицины». - Уфа. -2005. - С.136.

33. Muldashev E.R., Muslimov S.A., Musina L.A., Nigmatullin R.T., Lebedeva A.I., Shangina O.R., Khasanov R.A. et al. The role of macrophages in the tissues regeneration stimulated by the biomateriais // Cell Tissue Bank. - 2005. - Vol.6, N2,- P.99-107.

34. Musina L., Muslimov S., Lebedeva A. Ultrastructure of the macrophages revealed in Alloplant biomaterial implantation // Absracts 4-th Asian-Pacific International Congress of Anatomists. - Kusadasi, Turkey, 2005. -P.215.

35. Шангина O.P., Мусина Л.А. Экспериментальная пересадка радиационно стерилизованных биоматериалов // Сб. науч. тр.: «Биомедицинские технологии. Репродукция тканей и биопротезирование». -М., 2006,-Вып. 24. - С. 111-115.

36. Мусина Л. А., Муслимов С. А., Лебедева А. И., Волгарева Е. А. Ультраструктура макрофагов, выявляемых при имплантации аллогенного биоматериала Аллоплант // Морфология. - 2006. - №1. С.53-56.

37. Мусина Л.А. Роль звездчатых макрофагоцитов в регенерации цирротически измененной печени при стимуляции аллогенным биоматериалом // Технологии живых систем. - М: «Радиотехника». - 2006. -Т.3,№2.-С. 64-70.

38. Мусина Jl.А. Дифференциация стволовых мезенхимальных клеток при подкожной имплантации различных биоматериалов // Морфологические ведомости. - 2006. - № 1-2. - С.113-116.

39. Мусина JI.A., Муслимов С.А., Лебедева А.И., Хасанов P.A. Идентификация гликозамингликанов в соединительной ткани при имплантации различных биоматериалов // Морфологические ведомости. -2006. - №1-2, приложение № 1. - С.194-196.

40. Муслимова С.Ю., Мусина Л.А., Волгарева Е.А. Динамика морфологических изменений в яичнике при имплантации биоматериала Аллоплант® (экспериментальное исследование) // Морфологические ведомости. - 2006. - №1-2, приложение № 1. - С. 196-197.

41. Нартайлаков М.А., Мингазов P.C., Янгиров И.В., Муслимов С.А., Мусина Л.А., Батанов А.Н. Влияние фетальных тканей печени и биоматериала Аллоплант на регенеративные процессы при экспериментальном циррозе печени // Морфологические ведомости. - 2006. -№1-2, приложение № 1. - С.208-213.

42. Мусина Л.А., Лебедева А.И., Муслимов С.А., Гизатуллина Э.Р. Морфофункциональные изменения макрофагов при пародонтите и его коррекции аллогенным биоматериалом // Морфология. - 2006. - Т. 129, № 4. - С.88.

43. Мусина Л.А., Лебедева А.И., Муслимов С.А. Влияние имплантированных алло- и ксеногенных биоматериалов на клетки Лангерганса кожи // Морфология. - 2006. -Т. 129. - № 4. - С.88.

44. Муслимова С.Ю., Мусина Л.А. Регенерация стромы яичника при имплантации биоматериала Аллоплант (экспериментальное исследование) // Морфология. - 2006. - Т. 129, № 4. - С.88.

45. Мусина Л.А. Морфо-функциональные аспекты регуляции регенерации тканей при применении биоматериалов Аллоплант // Морфологические ведомости. Приложение к журналу ВНОАГЭ. Ежегодник Российской ассоциации клинических анатомов. «Клиническая анатомия и экспериментальная хирургия». - Оренбург, 2006. - Вып.6. -С.86-91.

46. Мусина Л.А., Шангина O.P., Мулдашева И.Э., Султанов Р.З. Структурные преобразования аллотрансплантатов при пластике посттравматических дефектов орбиты. Вестник ОГУ. - Оренбург, 2006. -№11. -С.222-223.

Изобретения, патенты

КМулдашев Э.Р., Сельский Н.Е., Булатов Р.Т., Салихов А.Ю., Малоярославцев В.Д., Мусина Л.А. Авторское свидетельство № 1568303 на изобретение «Аллотрансплантат для опорно-контурной пластики».

2.Мулдашев Э.Р., Муслимов С.А., Галимова В.У., Нигматуллин Р.Т., Шангина O.P., Мусина Л.А. и др. Патент «Биоматериалы Аллоплант для регенерационной хирургии» № 2189257 от 20 сентября 2002 г.

Мусина Ляля Ахияровна

Функциональная морфология макрофагов при регенерации тканей, индуцированной аллогенными биоматериалами

03.00.25 - гистология, цитология и клеточная биология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Подписано в печать 25.01.2007. Бумага офсетная. Формат 60х8 4VI6. Объем 3,1 печ. листа. Гарнитура Times. Тираж 150 экз. Заказ № 119

Типография ИП Шмаков Р. Б. 450006, г. Уфа, ул. Цюрупы, 149.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Мусина, Ляля Ахияровна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Регенерация и дисрегенерация.

1.1.1. Стимуляция регенерации тканей как биологическая проблема.

1.1.2. Влияние биоматериалов на регенерацию тканей. Участие и роль макрофагов в резорбции и замещении биоматериалов.

1.2. Система мононуклеарных фагоцитов.

1.2.1. Морфофункциональные особенности различных субпопуляций мононуклеарных фагоцитов.

1.2.2. Происхождение макрофагов.

1.2.3. Роль макрофагов в воспалении и регенерации.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 3. РОЛЬ МАКРОФАГОВ В РЕГЕНЕРАЦИИ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ ПОСЛЕ ИМПЛАНТАЦИИ АЛЛОГЕННЫХ БИОМАТЕРИАЛОВ.

3.1. Морфофункциональная характеристика макрофагов соединительной ткани кожи крыс интактной и контрольной групп.

3.2. Регенерация соединительной ткани после имплантации биоматериала Аллоплант.

3.2.1. Морфофункциональные особенности созревания и дифференциации макрофагов, выявленных в зоне введения аллогенного биоматериала.

3.2.2. Результаты иммуногистохимических и гистохимических исследований тканей в зоне имплантации аллогенного биоматериала.

3.2.3. Дифференциация клеток фибробластического ряда в соединительной ткани при стимуляции макрофагов аллогенным биоматериалом.

ГЛАВА 4. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ МАКРОФАГОВ СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ КОЖИ ПРИ ИМПЛАНТАЦИИ КСЕНОГЕННОГО БИОМАТЕРИАЛА.

4.1. Динамика морфологических изменений в соединительной ткани после имплантации ксеногенного биоматериала.

4.1.1. Структурно-функциональная характеристика макрофагов, выявленных в зоне подкожного введения ксеногенного биоматериала.

4.1.2. Результаты иммуногистохимических и гистохимических исследований тканей в зоне имплантации ксеногенного биоматериала.

4.1.3 Дифференциация клеток фибробластического ряда в соединительной ткани после имплантации ксеногенного биоматериала.

ГЛАВА 5. РОЛЬ ЗВЕЗДЧАТЫХ МАКРОФАГОЦИТОВ

В РЕГЕНЕРАЦИИ ЦИРРОТИЧЕСКИ ИЗМЕНЕННОЙ ПЕЧЕНИ,

ИНДУЦИРОВАННОЙ АЛЛОГЕННЫМ БИОМАТЕРИАЛОМ.

5. 1. Морфофункциональная характеристика клеток печени при экспериментальном циррозе.

5.1.1. Структурно-функциональные изменения звездчатых макрофагоцитов печени.

5.1.2. Патоморфологические изменения гепатоцитов и других клеток печени при экспериментальном циррозе.

5.2. Регенерация цирротически измененной печени после введения биоматериала Аллоплант.

5.2.1. Восстановление популяции звездчатых макрофагоцитов печени при стимуляции аллогенным биоматериалом. Инволюция цирротической соединительной ткани.

5.2.2. Регенерация гепатоцитов и восстановление структуры печени после стимуляции звездчатых макрофагоцитов аллогенным биоматериалом.

ГЛАВА 6. РЕЗУЛЬТАТЫ КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ.

6.1. Морфо-функциональные особенности макрофагов и морфологические изменения тканей десны при пародонтите.

6.2. Функциональная морфология макрофагов и регенерация тканей десны при применении аллогенного биоматериала.

6.3. Регенерация цирротически измененной печени человека после стимуляции диспергированным биоматериалом Аллоплант.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Функциональная морфология макрофагов при регенерации тканей, индуцированной аллогенными биоматериалами"

Изучение проблем воспаления и репаративной регенерации является одной из фундаментальных задач биологии и медицины. Известно, что в процессе восстановления или регенерации тканей живого организма (морфогенезе), ярко проявляется единство воспаления, регенерации и фиброза, которые являются неразрывными компонентами целостной тканевой реакции на повреждение (Шехтер А.Б., Серов В.В., 1991; Border W.A., Noble N.A., 1992; Diegelmann R.F., Evans M.C., 2004). Срыв гомеостатических механизмов ауторегуляции (межклеточные и межтканевые взаимодействия, гуморальный, иммунный, нейротрофический) ведет к нарушению и извращению стереотипной динамики процесса. Процесс теряет адаптивный характер и переходит в «дисрегенерацию» (Шехтер А.Б., Серов В.В., 1991). Так воспаление с последующими дегенеративно-дистрофическими изменениями в тканях часто приводит к хронизации патологического процесса или формированию грубо-волокнистого (рубцового) регенерата, являющегося причиной нарушения функций ткани и органа и даже малигнизации очага поражения (Струков А.И. с соавт., 1990; Федоров Д.Н. с соавт., 2002; Salamon A. et al., 1976; Shiratori Y., 1996).

В последние годы существенно изменились представления о механизмах регуляции репаративных процессов, знание которых открывает перспективы для разработки научных основ стимуляции и управления процессом регенерации (Озерская О.С., 2001; Fausto N., 2000; Fu X. et al., 2005). Результаты многочисленных исследований позволяют сделать вывод о том, что в воспалении и регенерации поврежденных тканей ведущую роль играют макрофаги. Макрофаги, секретируя различные цитокины, регулируют скорость размножения и характер дифференцировки клеток (Маянский, 1991; Шехтер А.Б., Серов В.В., 1991; Sobiczwska Е., Szmigielski S., 1997; Sutherland J. et al., 2005). Установлено, что при вялотекущем заживлении ран и фиброзе количество и активность макрофагов значительно снижаются и повышается экспрессия трансформирующего фактора роста TGF-pi, что способствует быстрому развитию фибропластических процессов (Шехтер А.Б., Серов В.В., 1991; Lin R.Y. et al., 1995; Santana A., Saxena В., 1995; Rodemann H.P. et al. 1996).

В настоящее время для восстановления тканей все шире используются аллогенные биоматериалы, применение которых, основанное на их резорбции и замещении, позволяет избежать рубцевания и достичь полноценной регенерации тканей (Мулдашев Э.Р., 1994; Нигматуллин Р.Т., 1996; Муслимов С.А., 2000). Выявлено, что основной эффект применения биоматериалов заключается в стимуляции регенерации тканей и дифференциации клеточных элементов с ингибицией развития рубца и, отчасти, его инволюцией (Муслимов С.А., 2000). Анализ процесса замещения биоматериалов в различных тканях, в том числе и в паренхиме печени, показал, что в первую очередь в зону имплантации биоматериала мигрируют макрофаги, осуществляющие лизис и резорбцию коллагеновых волокон биоматериала (Мусина JI.A., 1999; Муслимов С.А., 2000). Однако остаются нераскрытыми как механизмы реализации функциональной активности макрофагов и их субпопуляций, так и ключевые факторы, влияющие на их дифференцировку. Ответы на эти вопросы позволили бы найти патогенетические подходы к разработке научных основ стимуляции и управления процессами восстановления, а исходя из этого, к разработке новых методов стимуляции регенерации различных тканей.

Целью настоящего исследования является определение роли макрофагов в регенерации тканей, индуцированной аллогенными биоматериалами.

Задачи исследования: 1. Изучить динамику дифференциации и фенотипические особенности макрофагов в соединительной ткани после имплантации аллогенного биоматериала.

2. Установить фенотипические особенности макрофагов в соединительной ткани после имплантации ксеногенного биоматериала.

3. Изучить сравнительную динамику экспрессии макрофагами цитокинов TNF-a и TGF-bl при имплантации аллогенного и ксеногенного биоматериалов.

4. Изучить зависимость между функциональной активностью макрофагов и характером дифференциации клеток фибробластического ряда в соединительной ткани после введения аллогенного и ксеногенного биоматериалов.

5. Провести гистохимическую идентификацию гликозамингликанов в соединительной ткани при имплантации аллогенного и ксеногенного биоматериалов.

6. Изучить морфо-функциональные особенности звездчатых макрофагоцитов при регенерации печени, стимулированной диспергированным биоматериалом Аллоплант.

Научная новизна исследований. Установлены основные факторы, стимулирующие и регулирующие репаративную регенерацию тканей при имплантации аллогенных биоматериалов. Раскрыты особенности дифференциации макрофагов в соединительной ткани после имплантации алло- и ксеногенных биоматериалов. Выявлена зависимость между степенью функциональной активности макрофагов и динамикой и исходом регенераторного процесса в соединительной ткани после имплантации аллогенных и ксеногенных биоматериалов. Выявлено, что полное созревание и неспецифическая активация макрофагов после стимуляции аллогенным биоматериалом способствует восстановлению характера нарушенных при патологии межклеточных взаимодействий, и процесс регенерации тканей проходит по закономерностям близким к процессам физиологической регенерации и постнатального гистогенеза. Впервые раскрыты особенности дифференциации клеток фибробластического ряда в соединительной ткани в зависимости от степени функциональной активности макрофагов, стимулированных алло- и ксеногенным биоматериалами. Выявлено, что одним из важных факторов, способствующих регенерации соединительной ткани по типу репаративного процесса в эмбриональной ткани, является гиалуроновая кислота, в значительном количестве выявляющаяся в зоне имплантации аллогенного биоматериала в результате функционирования зрелых макрофагов. Установлено, что возобновление популяции звездчатых макрофагоцитов в цирротически измененной печени после введения в нее аллогенного диспергированного биоматериала способствует инволюции соединительной ткани и регенерации гепатоцитов. Выявлено, что восстановление морфо-функциональных характеристик макрофагов тканей десны больных пародонтитом после введения диспергированного биоматериала Аллоплант способствует полноценной регенерации соединительнотканной пластинки и эпителия слизистой десны.

Научно-практическая значимость. Полученные результаты исследования явились теоретической основой разработки научных принципов регуляции репаративной регенерации при многих дегенеративно-дистрофических заболеваниях. Обоснована возможность применения аллогенного биоматериала для коррекции дегенеративно-дистрофических заболеваний соединительной и эпителиальной тканей. На основе полученных результатов проведены клинические испытания и освоен выпуск стимуляторов регенерации для лечения пародонтита, цирроза печени, язвы желудка, лейкоплакии вульвы, простатита.

Реализация результатов исследования. Разработанные на основе настоящего исследования методы хирургического лечения внедрены в клиническую практику в ФГУ Всероссийский центр глазной и пластической хирургии, Республиканской клинической больнице им. Г.Г. Куватова, клинической больнице № 6,22, стоматологической поликлинике № 2 г. Уфы.

Положения, выносимые на защиту

1. При стимуляции регенерации тканей аллогенными биоматериалами происходит фенотипическое созревание макрофагов и оптимизация их регуляторного влияния на дифференциацию и функциональную активность других клеточных популяций, что препятствует фиброзу и способствует формированию структурно адекватного регенерата.

2. При резорбции аллогенного биоматериала происходит дифференциация макрофагов на фагоцитарные и секреторные «матриксформирующие» субпопуляции; при применении ксеногенного биоматериала не происходит его резорбции, и макрофаги трансформируются в эпителиоидные клетки и гигантские клетки инородных тел, что приводит к хронизации воспаления и формированию грубоволокнистой соединительной ткани, отграничивающей очаг имплантации.

3. Возобновление популяции звездчатых макрофагоцитов после введения в цирротически измененную паренхиму печени аллогенного диспергированного биоматериала способствует инволюции соединительной ткани и регенерации гепатоцитов.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены: на IV Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Нижний Новгород, 1998); Всероссийской научной конференции анатомов, гистологов и эмбриологов «Закономерности морфогенеза и регуляция тканевых процессов в нормальных, экспериментальных и патологических условиях (Тюмень, 1998); Республиканской научно-практической конференции «Актуальные проблемы хирургии и морфологии» (Уфа, 1998); VII научно-практической конференции Екатеринбургского Центра МНТК "Микрохирургия глаза" (Екатеринбург, 1999); V Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Ульяновск, 2000); на VII съезде офтальмологов России (Москва, 2000); международной конференции «Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза человека в норме и при воздействии антропогенных факторов. Экология и здоровье населения. Актуальные проблемы биологии и медицины» (Астрахань, 2000); VI Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Уфа, 2002); 11 международной конференции Европейской ассоциации тканевых банков (Братислава, Словакия, 2002); Всероссийской научной конференции «Реактивность и пластичность гистологических структур в нормальных, экспериментальных и патологических условиях» (Оренбург, 2003); 12 международном конгрессе Европейской ассоциации тканевых банков (Брюгге, Бельгия, 2003); VII Конгрессе Международной Ассоциации морфологов (Казань, 2004); Межрегиональной конференции «Актуальные вопросы патологии» (Уфа,

2004); 13 Международном конгрессе Европейской Ассоциации тканевых банков (Прага, Чехия, 2004); Республиканской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2005); IV Азиатско-Тихооекеанском Международном конгрессе анатомов (Кушадаси, Турция,

2005); на Всероссийской научной конференции «Вопросы морфологии» (Уфа, 2006).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 46 печатных работ, получено авторское свидетельство на изобретение (№ 1568303), получен 1 патент (№ 2189257 от 20.09.02 г.).

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Мусина, Ляля Ахияровна

213 ВЫВОДЫ

1. Стимуляция регенерации тканей аллогенными биоматериалами обеспечивает фенотипическое созревание макрофагов и оптимизацию их регуляторного влияния на дифференциацию и функциональную активность других клеточных популяций, что способствует формированию структурно адекватного регенерата.

2. Повышенная экспрессия макрофагами фактора некроза опухолей-альфа при низком уровне экспрессии трансформирующего фактора роста-бета в соединительной ткани в зоне введения аллогенного биоматериала способствует дифференциации фибробластов с умеренной продукцией коллагена.

3. При введении ксеногенного биоматериала не происходит его резорбции; макрофаги трансформируются в эпителиоидные клетки и гигантские клетки инородных тел, что приводит к хронизации процесса воспаления и формированию грубоволокнистой соединительной ткани, отграничивающей зону имплантации.

4. Выраженная экспрессия трансформирующего фактора роста-бета и низкий уровень экспрессии фактора некроза опухолей-альфа в соединительной ткани при имплантации ксеногенного биоматериала приводит к дифференциации миофибробластов и фибробластов с избыточной продукцией коллагена и фиброзу.

5. Одним из основных факторов полноценной регенерации соединительной ткани, стимулированной аллогенным биоматериалом, является созревание «матриксформирующих» макрофагов с выраженной секреторной активностью, связанной с экзоцитозом гликозамингликанового компонента новообразованной соединительной ткани.

6. Регенерация соединительной ткани, инициированная стимуляцией макрофагов аллогенным биоматериалом, сопровождается повышенным содержанием в регенерате гиалуроновой кислоты, что обеспечивает полноценное восстановление структуры ткани. 7. Возобновление популяции звездчатых макрофагоцитов в цирротически измененной печени после введения в нее аллогенного диспергированного биоматериала способствует инволюции соединительной ткани и регенерации гепатоцитов.

215

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Мусина, Ляля Ахияровна, Уфа

1. Агроскин, Л.С. Цитофотометрия / Агроскин Л.С., Папаян Г.В. Л.: Наука, 1977.-295 с.

2. Анализ экспрессии генов, содержащих последовательности LeR-1 и VeR-1 в эмбриогенезе, при регенерации и в интактных тканях у тритонов / Ю.В. Маркитантова, К.А. Лукьянов, В.И. Миташов, С.А. Лукьянов // Онтогенез. 1997. - Т. 28, № 4. - С. 289-297.

3. Архипов, С.А. Сравнительное цитоморфологическое исследование эпителиоидных клеток и макрофагов in vitro / С.А. Архипов // Успехи современного естествознания. 2004. - № 8. - С. 27-30.

4. Бабаева, А.Г. Иммунологические механизмы регуляции восстановительных процессов. -М.: Медицина, 1972. 157 с.

5. Бабаева, А.Г. Регенерация и система иммуногенеза. М.: Медицина, 1985.-256 с.

6. Баженов, Д.В. Пищевод. Руководство по гистологии. В 2 т. Т.Н. -СПб.: СпецЛит, 2001. 735 с.

7. Серов, В.В. Воспаление. Руководство для врачей / В.В. Серов, B.C. Пауков. М.: Медицина, 1995. - 640 с.

8. Биосинтез и секреция коллагена в нормальных и трансформированных вирусом SV-40 фибробластах эмбриона человека / А.Е. Берман, Г.Е. Морозевич, Т.А. Оборотова, В.И. Мазуров // Биохимия. 1987. - Т. 52, № 3. - С. 493-502.

9. Ю.Бобро, Л.И. Фибробласты и их значение в тканевых реакциях / Л.И. Бобро //Арх. патологии. 1990. - Т. 52, вып. 12. - С. 65-68.

10. П.Булатов, Р.Т. К вопросу о структурной перестройке различных аллотрансплантатов для склеропластики в эксперименте / Р.Т. Булатов // Вестник ОГУ. 2005. - Спец. вып.: сентябрь. - С. 20-22.

11. З.Быков, B.JI. Цитология и общая гистология (функциональная морфология клеток и тканей человека). СПб.: СОТИС, 1999. - 520 с.

12. Вит, В.В. Строение зрительной системы человека. Одесса: Астропринт, 2003. - 655 с.

13. Вишневская, Е.К. Влияние стимулирования клеток Купфера продигиозаном на развитие перисинусоидального фиброза при экспериментальном гипервитаминозе А / Е.К. Вишневская // Морфология. 1996. - № 5. - С. 91-95.

14. Влияние полиоксидония и тамерита на регенераторные процессы в тканях с различной восстановительной способностью / В.А. Черешнев, Б. Юшков, И.Г. Данилова и др. // Иммунология. 2005. -№4.-С. 199.

15. Влияние фибробластов, коллагена и ламинина на процесс заживления ран, образовавшихся после срезания расщепленных кожных лоскутов у крыс / М.И. Блинова, Б.А. Парамонов, JI.B. Кухарева и др. // Бюл. эксперим. биол. и мед. 1997. - № 8. - С. 229-232.

16. Войтенков, Б.О. Основные характеристики макрофага как клетки -эффектора / Б.О. Войтенков, В.Б. Окулов // Вопросы онкологии. -1995.-№3.-С. 59-64.

17. Воронцова, М.А. Физиологическая регенерация / М.А. Воронцова, Л.Д. Лиознер. М, 1955. - 408 с.

18. Воспаление, иммунитет и гиперчувствительность: пер. с англ. / под ред. Г.З. Мовэт. М.: Медицина, 1975. - 560 с.

19. Выделение мезенхимальных стволовых клеток из кожи человека и их характеристика / С.З. Шарифуллина, Н.И. Чупикова, М.С. Ростовская и др. // Цитология. 2004. - Т. 46, № 10. - С. 948.

20. Выделение мезенхимальных стволовых клеток из плаценты человека и их характеристика / М.С. Ростовская, С.З. Шарифуллина, Н.И. Чупикова, А.С. Теляшин // Стволовые клетки, регенерация, клеточная терапия: матер, межд. симп. М., 2004. - С. 937.

21. Гольдберг, Е.Д. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции кроветворения при цитостатических миелосупрессиях / Е.Д. Гольдберг, A.M. Дыгай, В.В. Жданов. Томск: Scientific and Technical Translations, 1999. - 128 с.

22. Григорьева, Т.А. Митотическая активность эндотелия капилляров мягкой мозговой оболочки крыс в постнатальном онтогенезе. Т.А. Григорьева, P.JI. Айзман, К.А. Шошенко // Рос.физиол.ж.ур. 2005. -Т. 91, №10. - С.1138-48.

23. Григорян, Э.Н. Обнаружение внутренних источников регенерации нейральной сетчатки после ее отслойки у тритонов. II. Радиоавтографическое исследование / Э.Н. Григорян, В.А. Поплинская // Известия РАН. Сер. биология. 1999. - № 5. - С. 583591.

24. Губа, О.А. Применение биоматериалов «Аллоплант» в хирургическом лечении вентральных грыж: автореф. дис. . канд. мед. наук. Уфа, 1998.- 19 с.

25. Давыдовский, И.В. Общая патология человека. М.: Медицина, 1969. -611 с.

26. Данилов, Р.К. Гистогенез и регенерация тканей / Р.К. Данилов, Б.А. Григорян, И.А. Одинцова//Морфология. 1996. - № 1. - С. 110-111.

27. Девис, П. Мононуклеарные фагоциты / П. Девис // Руководство по иммунофармакологии: пер. с англ. / под ред. М.М. Дейла, Дж.К. Формена. М.: Медицина, 1998. - С. 68-76.

28. Дейл, М.М. Введение в иммунопатологию и патологию защитных механизмов организма / М.М. Дейл, Дж.К. Формен // Руководство по иммунофармакологии: пер. с англ. / под ред. М.М. Дейла, Дж.К. Формена.-М.: Медицина, 1998.-С. 1-15.

29. Джексон, Д. / Пародонтоз // Т.В. Никитина. М.: Медицина, 1982. - С. 6-7.

30. Ермоленко, В.М. Эритропоэтин: биологические свойства и применение в клинике / В.М. Ермоленко, А.Ю. Николаев // Тер. архив,- 1990.-№ 11.-С. 141-145.

31. Жданова, Т.Ф. Стимуляция внутриклеточной регенерации гепатоцитов хорионическим гонадотропином (морфометрич.исследование) / Т.Ф. Жданова, И.М. Солопаева, Г.В. Малюгин // Заболевания органов пищеварения: сб. науч. тр. М., 1980.-№ 12/3.-С. 55-61.

32. Жяконис, И.М. Иммунологические аспекты гингивита и пародонтита: автореф. дис. д-ра мед. наук. М., 1986. - 44 с.

33. Казихинуров, А.А. Трансуретальная резекция при склерозе предстательной железы и мочевого пузыря с применением аллотрансплантата-ингибитора рубца: автореф. дис. . канд. мед. наук. М., 2002.-31 с.

34. Карр, Я. Макрофаги. Обзор ультраструктуры и функции: пер. с англ. -М.: Медицина, 1978. 188 с.

35. Кетлинский, С.А. Цитокины мононуклеарных фагоцитов в регуляции реакции воспаления и иммунитета / С.А. Кетлинский, Н.М. Калинина // Иммунология. 1995. - № 3. - С. 30-44.

36. Кетлинский, С.А. Эндогенные иммуномодуляторы / С.А. Кетлинский, А.С. Симбирцев, А.А. Воробьев. СПб.: Гиппократ, 1992. - 256 с.

37. Клинико-экспериментальные аспекты трансплантации аллогенного сухожилия при грыжах живота / А.А. Кузин, О.А. Губа, С.А. Муслимов, P.M. Хафизов // 3 Всерос. научн. практ. конф.: тез. докл. -Уфа, 1998.-С. 218-219.

38. Клинико-экспериментальные параллели применения биоматериалов Аллоплант при грыжах живота / В.Г. Сахаутдинов, О.А. Губа, P.M. Хафизов, А.А. Кузин // Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции. Ростов н/Д., 1998. - С.78.

39. Клишов, А.А. Гистогенез и регенерация тканей. JL: Медицина, 1984. -232 с.

40. Коваленко, П.П. Основы трансплантологии. Ростов: изд-во Ростовского университета, 1975. - 179 с.

41. Коллаген и его применение в медицине / A.M. Хилькин, А.Б. Шехтер, Л.П. Истранов и др.. М., Медицина, 1976. - 256 с.

42. Кононский, А.И. Гистохимия. Киев: Выща шк., 1976. - 280 с.

43. Конструктивный синергизм экспрессирующихся регуляторных генов в проццессе развития и регенерации глаза и мышц / В.И. Миташов, С. Кусулакос, Р.Д. Зиновьева и др. // Известия РАН. Сер. биология. -2001.-№3.-С. 245-259.

44. Короткова, Г.П. Принципы целостности. Л.: изд-во ЛГУ, 1968. - 162 с.

45. Короткова, Г.П. Происхождение и эволюция онтогенеза. Л.: изд-во ЛГУ, 1979. - 294 с.

46. Короткова, Г.П. Регенерация животных. СПб.: изд-во СПБГУ, 1997. - 479 с.

47. Крекшина, В.Е. Пародонтоз. М.: Медицина, 1983. - 160 с.

48. Кутина, С.Н. Особенности развития цирроза печени крыс при стимуляции печеночных макрофагов / С.Н. Кутина, Д.И. Маянский // Бюлл. экспер. биологии и медицины. 1981. - Т. 95, № 9. - С. 366-370.

49. Лавров, В.А. Фибронектин как составная часть раневого экссудата и его значение в заживлении раны / В.А. Лавров, Т.Л. Заец // Бюл. эксперим. биолоигии и медицины. 1998. - № 3. - С. 355-357.

50. Ланге, М.А. О происхождении фибробластов и макрофагов грануляционной ткани кожных ран / М.А. Ланге, Т.В. Васильева, Т.В. Мичурина // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1979. - Т. 77, № 7. - С. 22-28.

51. Лиознер, Л.Д. Регенерация органов у млекопитающих. М., 1960. -392 с.

52. Лиознер, Л.Д. Основные проблемы учения о регенерации. М.: Наука, 1975.- 103 с.

53. Лиознер, Л.Д. Регенерация и развитие. М.: Наука, 1982. - 167 с.

54. Лопаткина, Т.Н. Алкогольная болезнь печени / Т.Н. Лопаткина // Новый мед. журнал. 1995. - № 1. - С. 16-18.

55. Луговская, С.А. Структура и функции моноцитов и макрофагов (обзор литературы) / С.А. Луговская // Клиническая лабораторная диагностика. 1997. - № 9. - С. 10-16.

56. Лукина, Е.А. Функциональная активность макрофагальной системы у больных гистиоцитозами: автореф. дис. . д-ра мед. наук. М., 1996.- 24 с.

57. Луппа X. Основы гистохимии, пер. с нем. / под ред. Н.Т.Райхлина. -М.: Мир, 1980. 343 с.

58. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск: Наука, 1989. - 344 с.

59. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск: Наука, 1983. - 256 с.

60. Маянский, Д.Н. Зависимость мононуклеарной инфильтрации печени от пролиферации гепатоцитов / Д.Н. Маянский, В.И. Щербаков, Т.Г. Комлягина // Бюлл. экспер. биологии и медицины. 1984. - № 5. - С. 620-624.

61. Маянский, Д.Н. Зависимость репаративной регенерации печени от функционального состояния клеток Купфера / Д.Н. Маянский, В.И. Щербаков // Современные проблемы общей патологии в аспекте адаптации. Новосибирск, 1980. - С. 65-71.

62. Маянский, Д.Н. Клетка Купфера и система мононуклеарных фагоцитов. Новосибирск: Наука, 1981. - 169 с.

63. Маянский, Д.Н. Клетки Купфера и патология печени / Д.Н. Маянский // Патология, физиология и экспериментальная терапия. 1985. - № 5.- С. 80-86.

64. Маянский, Д.Н. Роль макрофагов в патогенезе заболеваний печени / Д.Н. Маянский // Успехи гепатологии. 1984. - Вып. XI. - С. 67-82.

65. Маянский, Д.Н. Роль макрофагов в репаративных процессах / Д.Н. Маянский // Механизмы патологических реакций. Томск, 1981. - С. 56-62.

66. Маянский, Д.Н. Система 1а-антигенов. Генетика, структура, функция / Д.Н. Маянский, Л.П. Алексеев М.: Медицина, 1987 - 176 с.

67. Маянский, Д.Н. Хроническое воспаление. М.: Медицина, 1991. - 272 с.

68. Миграция мезенхимальных стволовых клеток в биоматериалы ALLOPLANT: предварительные данные / Н.Н. Курчатова, С.В. Сибиряк, Р.А. Хасанов и др. // Иммунология Урала: матер. IV конф. иммунологов Урала. Уфа, 2005. - Вып.1, № 4. - С. 17-18.

69. Миннебаев, М.М. Аллергическая альтерация организма сопровождается нарушением липидного состава лимфы / М.М. Миннебаев, Л.Г. Захарова, Ф.И. Мухутдинова // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2001. - № 7. - С. 52-54.

70. Митотическая активность альвеолярных макрофагов при неспецифической диффузной легочной патологии / Л.К. Романова, Т.Б. Младковская, М.С. Покровская и др. // Бюлл. экспер. биологии и медицины. 1988. - Т. 105, № 1. - С. 74-77.

71. Морлей, Дж. Лимфокины / Дж. Морлей, Дж.М. Хансон, В.М. Румьянек // Руководство по иммунофармакологии: пер. с англ. / под ред. М.М. Дейла, Дж.К. Формена. -М.: Медицина, 1998. С. 149-160.

72. Морфологическая и иммуногистохимическая характеристика репаративных процессов в длительно не заживающих ранах / Д.Н. Федоров, А.Н. Ивашкин, В.В. Шинин и др. // Архив патологии. -2002. -№ 1.-С. 8-11.

73. Морфологические особенности приживления синтетических трансплантатов после склеропластики в эксперименте / Л.Д. Андреева, Е.П. Тарутта, Е.Н. Иомдина и др. // Вестник офтальмологии. 1999. - № 3. - С. 15-18.

74. Мулдашев, Э.Р. Теоретические и прикладные аспекты создания аллотрансплантатов серии "Аллоплант" для пластической хирургии лица: автореф. дис. д-ра мед. наук. СПб., 1994. - 40 с.

75. Муслимов, С.А. Микроциркуляторное русло конъюнктивы глазного яблока в норме и при экспериментальной аллопластике: автореф. дис. . канд. мед. наук. Ярославль, 1984. - 20 с.

76. Муслимов, С.А. Морфологические аспекты регенеративной хирургии. Уфа: Башкортостан, 2000. - 168 с.

77. Муслимов, С.А. Регенерация тканей вульвы после лечения лейкоплакии и крауроза биоматериалом Аллоплант / С.А. Муслимов, А.И. Аристова, А.Х. Валеева // Тезисы к конгрессу «Мать и дитя». -М., 2002.-С. 54.

78. Мяделец, О.Д. Морфология клеток Лангерганса эпидермиса человека при общесоматических заболеваниях / О.Д. Мяделец, В.В. Полчанинова, И.И. Федоренко // Проблемы теоретической медицины и фармации. Витебск, 1997. - С. 5-8.

79. Некоторые пути подбора новых аллотрансплантатов для офтальмохирургии / Э.Р. Мулдашев, А.Г. Габбасов, Р.Т. Нигматуллин и др. // Актуальные вопросы пересадки органов и тканей: тр. 2-го МОЛГМИ им. Н.И. Пирогова. М., 1978. - Т. 113, вып. 23. - С. 21-22.

80. Непомнящих, Л.М. Морфогенез важнейших общепатологических процессов в сердце. Новосибирск: Наука, 1991. - 352 с.

81. Непомнящих, Л.М. Регенераторно-пластическая недостаточность сердца: морфологические основы и молекулярные механизмы / Л.М. Непомнящих, Е.Л. Лушникова, Д.Е. Семенов. М.: изд-во РАМН, 2003.-255 с.

82. Нигматуллин, Р.Т. Морфологические аспекты пересадки соединительнотканных аллотрансплантатов: автореф. дис. . д-ра мед. наук. Новосибирск, 1996. - 40 с.

83. Новые экспериментальные данные о регенерации нормальной и патологически измененной печени / Б.П. Солопаев, И.Ф. Колпащикова, JI.C. Палигина и др. // Актуальные вопросы гастроэнтерологии: сб.тр. М., 1981. - № 13. - С. 48-58.

84. Окулов, В.Б. Роль макрофагов в опухолевом росте / В.Б. Окулов, Б.О. Войтенков // Вопросы онкологии. 1990. - Т. 36, № 10. - С. 1172-1177.

85. Пальцев, М.А. Межклеточные взаимодействия / М.А. Пальцев, А.А. Иванов. М.: Медицина, 1995. - 224 с.

86. Паркер, Ч.В. Медиаторы: высвобождение и функции / Ч.В. Паркер // Иммунология. М.: Мир, 1989. - Т. 3. - С. 185-206.

87. Патология кожи / В.Г. Акимов, В.И. Альбанов, И.И. Богатырева и др.; под ред. В.Н. Мордовцева, Г.М. Цветковой. М.: Медицина, 1993.-336 с.

88. Пауков, B.C. Роль нейтрофилов и макрофагов в локализации гноеродной инфекции / B.C. Пауков // Арх. патологии. 1986. - Вып. 3.-С. 30 - 38.

89. Перова, М.Д. Биологические механизмы репаративной регенерации тканей пародонта / М.Д. Перова // Новое в стоматологии. -2001.-№8. -С. 62-69.

90. Персина, И.С. Клетки Лангерганса структура, функция, роль в патологии / И.С. Персина // Арх. патологии. - 1985. - № 2. - С. 86-92.

91. Пигаревская, В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства. М.: Медицина, 1978. - 128 с.

92. Плеханова, Н.Г. К вопросу о взаимодействии нейтрофилов и макрофагов в системе антиинфекционной защиты / Н.Г. Плеханова, Л.М. Исачкова//Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 1997. - № 5. - С. 70-73.

93. Подобед, О.В, Сравнительное исследование коллагена гипертрофических и келоидных рубцов / О.В. Подобед, Н.Н. Прозоровский, Е.А. Козлов и др. // Вопр. Мед. хим. 1996. - Vol. 42, № 3. - Р. 240-245.

94. Полежаев, Л.В. Утрата и восстановление регенерационной способности органов и тканей у животных. М.: Наука, 1968. - 326 с.

95. Полежаев, Л.В. Регенерация. М.: Знание, 1977. - 64 с.

96. Полежаев, Л.В. Факторы регенерации нерегенерирующих органов и тканей / Л.В. Полежаев // Вестн. РАН. 2000. - Вып. 70. -С. 597-603.

97. Полосухин, В.В. Ультраструктурная гетерогенность фагоцитов легких при остром и хроническом воспалении / В.В. Полосухин // Цитология. 1996. - № 6. - С. 578-589.

98. Применение аллопланта в лечении длительно незаживающих язв желудка и двенадцатиперстной кишки / Ш.А. Зарипов, И.Г. Рахматуллин, Р.Т. Ибрагимов и др. // Новые технологии в хирургии. Уфа; Кумертау, 1996. - С. 167-169.

99. Процессы регенерации у растений и животных, их место в онтогенезе и эволюции // Успехи соврем, биологии. 1979. - Т. 88, вып. 3. - С. 428-444.

100. Розанова, И.Б. Биодеструкция имплантатов / И.Б. Розанова // Биосовместимость / под ред. В.И. Севастьянова. М., 1999. - С. 212245.

101. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. М.: Мир, 2000.- 581 с.

102. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в постлучевой регенерации гемопоэза / В.И. Агафонов, A.M. Дыгай, В.П. Шахов и др. // Радиационная биология. Радиоэкология. 1994. - Т. 34, вып. 1. -С. 111-116.

103. Роль фактора некроза опухоли (альфа) в регуляции внеклеточного матрикса и пролиферации мезангиальных клеток при нефротоксическом нефрите / А.А. Иванов, О.П. Гладских, С.Ю. Богомазова и др. // Арх. патологии. 1998. - № 1. - С. 27-30.

104. Романов, Ю.А. Топографическое распределение делящихся гепатоцитов в дольке регенерирующей печени в период максимальной митотической активности / Ю.А. Романов, Т.В. Савченко // Бюлл. экспер. биологии и медицины. 1986. - № 11. - С. 597-598.

105. Рывняк, В.В. Внутриклеточная и внеклеточная активность катепсина D в печени при циррозе и его инволюции / В.В. Рывняк,

106. B.C. Гудумак, E.C. Оня // Бюлл. экспер. биологии и медицины. 1990. - № 2. - С. 199-200.

107. Рывняк, В.В. Электронно-гистохимическое выявление внутриклеточной и внеклеточной локализации катепсина D в печени / В.В. Рывняк, В.С.Гудумак, Е.С. Оня // Бюл. экспер. биологии и медицины. 1990. - № 2. - С. 200-203.

108. Сакута, Г.А. Клеточные механизмы регенерации цирротически измененной печени: автореф. дис. . канд. биол. наук. СПб., 1997. -18 с.

109. Салихов, А.Ю. Динамика морфологических изменений биоматериала Аллоплант после хирургического лечения рака век / А.Ю. Салихов, С.А. Муслимов, JI.A. Мусина // Морфология. 2002. -№2-3.-С. 138.

110. Сапин, М.Р. Иммунная система человека / М.Р. Сапин, J1.E. Этинген. М.: Медицина, 1996. - 304 с.

111. Саркисов, Д.С. О формах регенераторной реакции / Д.С. Саркисов // Эксперим. хирургия и анестезиология. 1962. - № 2. - С. 3-7.

112. Саркисов, Д.С. Очерки по структурным основам гомеостаза. М.: Медицина, 1977.-351с.

113. Саркисов, Д.С. Регенерация и ее клиническое значение. М.: Медицина, 1979.-284 с.

114. Саркисов, Д.С. Электронная микроскопия деструктивных и регенераторных внутриклеточных процессов / Д.С. Саркисов, Б.В. Втюрин. М.: Медицина, 1967. - 224 с.

115. Саркисов, Д.С. Пути восстановления цирротически измененной печени / Д.С. Саркисов, JI.C. Рубецкой. М., 1965. - 139 с.

116. Саркисов, Д.С. Обновление структур организма / Д.С. Саркисов, Л.И. Аруин // Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций / под ред. Д.С. Саркисова. М.: Медицина, 1987.-С. 20-36.

117. Саркисов, Д.С. / Д.С. Саркисов, В.П. Туманов // Общая патология человека: в 2 т. / под ред. А.И. Струкова и др.. М., 1990. - Т. 2. - С. 199-322.

118. Секреция фактора некроза опухоли-а и интерлейкина-1 плацентарными макрофагами in vitro при различных исходах беременности / О.В. Павлов, С.А. Сельков, А.В. Селютин и др. //

119. Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 1999. - Т. 127, № 7. - С. 97100.

120. Сельский, Н.Е. Контурная пластика лица комбинированными аллотрансплантатами: автореф. дис. . канд. мед. наук. СПб., 1992. - 16 с.

121. Сельский, Н.Е. Устранение дефектов и деформаций лица комбинированными аллотрансплантатами серии «Аллоплант»: автореф. дис. д-ра мед. наук. СПб., 2000. - 24 с.

122. Серов, В.В. Воспаление. Руководство для врачей / В.В. Серов, B.C. Пауков. М: Медицина, 1995. - 640 с.

123. Серов, В.В. Курс лекций по патологической анатомии / В.В. Серов, М.А. Пальцев. М.: Медицина, 1998. - 640 с.

124. Серов, В.В. Соединительная ткань / В.В. Серов, А.Б. Шехтер. -М.: Медицина, 1981.-312 с.

125. Сидорова, В.Ф. Об особенностях восстановления и постнатального роста некоторых внутренних органов позвоночных / В.Ф. Сидорова // Успехи современной биологии. 1964. - Т. 57, вып. 2. - С. 283-299.

126. Сидорова, В.Ф. Регенерация печени у млекопитающих. Л.: Медицина, 1966. - 205 с.

127. Сидорова, В.Ф. Постнатальный рост и восстановление внутренних органов у позвоночных. М.: Наука, 1969. - 200 с.

128. Синтез и экспрессия трансформирующего фактора роста бета активированными макрофагами / С.Г. Зубова, А.О. Данилов, В.Б. Окулов и др. // Вопросы онкологии. 1996. - Т. 42, № 5. - С. 80-85.

129. Соколов, В.П. Комплексное лечение трофических язв нижних конечностей с использованием стимулятора регенерации "Аллоплант" и энергии лазерного излучения: автореф. дис. . канд. мед. наук. -Уфа, 1998.- 17 с.

130. Солопаев, Б.П. Регенерация нормальной и патологически измененной печени / Б.П. Солопаев // Экспериментальные основы регенерации терапии болезней печени. Горький: Волго-Вятское кн. изд-во, 1980.-240 с.

131. Солопаева, И.М. Хорионический гонадотропин в биологии и медицине. Н.Новгород: Изд-во ННГУ им. Н.И. Лобачевского, 2000. -192 с.

132. Стейси, М. Углеводы живых тканей / М. Стейси, С. Баркер. М., 1965.-324 с.

133. Стимулятор регенерации "Аллоплант" в лечении язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки / И.А. Сафин, М.А. Нартайлаков, Ш.А. Зарипов и др. // Современные методы диагностики и лечения в эндоскопии. Уфа, 1997. - С. 75-76.

134. Стимуляция репаративных процессов препаратами модифицированного хитозана / В.Х. Габитов, Ф.Р. Ниязова, Э.К. Апсатаров и др. // Морфология. 2000. - № 3. - С. 33-34.

135. Страка, М. Пародонтология 2000. Этиопатогенез пародонтальных заболеваний / М. Страка // Новое в стоматологии. -2001.-№8.-С. 9-18.

136. Струков, А.И. Воспаление / А.И. Струков // Общая патология человека: в 2 т. / под ред. А.И. Струкова, В.В. Серова, Д.С. Саркисова. М.: Медицина, 1982. - Т. 2. - С. 271-328.

137. Струков, А.И. Гранулематозное воспаление и гранулематозные болезни / А.И. Струков, О.Я. Кауфман. М.: Медицина, 1989. - 182 с.

138. Тутельян, В.А. К вопросу о механизме образования вторичных лизосом. Роль ферментов и изоферментов лизосомальных мембран / В.А. Тутельян // Структура и функции лизосом. М, 1976. - С. 147148.

139. Улумбеков, Э.Г. Гистология (введение в патологию) / Э.Г. Улумбеков, Ю.А. Челышев. М.: ГЕОТАР МЕДИЦИНА, 1998. - 960 с.

140. Ультраструктура моноцитов крови у детей с неходжкинскими лимфомами, леченных молграмостимом / В.В. Афанасьева, А.К. Бутенко, И.Ю. Глуховская и др. // Онкология. 2000. - Т. 2, № 3. - С. 175-178.

141. Учитель, И.Я. Роль дизосом макрофагов в естесственном и специфическом иммунитете и его регуляции / И.Я. Учитель, Э.Л. Хасман // Структура и функции лизосом. М, 1976. - С. 148-150.

142. Факторы прогрессирования гломерулонефрита у детей / Т.В. Сергеева, А.Н. Цыгин, О.А. Чумакова и др. // Рос. педиатрический журнал. 2000. - № 5. - С. 20-22.

143. Физиология лейкоцитов человека / В.А. Алмазов, Б.В. Афанасьев, А.Ю. Зарицкий и др.. Л.: Наука, 1979. - 232 с.

144. Флогогенная и гемопоэзстимулирующая активности макрофагов печени и легких при регенерации печени / И.В. Плющ, Д.Д. Цырендоржиев, А.А. Зубахин, Д.Н. Маянский // Бюлл. экспер. биологии и медицины. 1996. - № 11. - С. 494-498.

145. Фрейдлин, И.С. Ключевая позиция макрофагов в цитокиновой регуляторной сети / И.С. Фрейдлин // Иммунология. 1995. - № 3. - С. 44-48.

146. Фрейдлин, И.С. Система мононуклеарных фагоцитов. М.: Медицина, 1984.-272 с.

147. Фриденштейн, А .Я. Гистогенетические отношения между фибробластами и гистиоцитами / А.Я. Фриденштейн // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1974. - Т. 66, вып. 4. - С. 5-7.

148. Фриденштейн, А.Я. Индукция костной ткани и остеогенные клетки-предшественники / А.Я. Фриденштейн, К.С.Лалыкина. М.: Медицина, 1973. - 223 с.

149. Функциональные перестройки системы мононуклеарных фагоцитов при экспериментальном циррозе печени / Д.Н. Маянский, Я.Ш. Шварц, Д.Д. Цырендоржиев, С.Н. Кутина // Бюлл. экспер. биологии и медицины. 1988. - № 2. - С. 214-216.

150. Хазанов, А.И. К вопросу об алкогольных поражениях печени / А.И. Хазанов // Рос. мед. вести. 1998. - № 1. - С. 40-44.

151. Хасанов, Р.А. Инъекционная форма аллотрансплантатов серии «Аллоплант». Получение, анализ и биологическая активность: автореф. дис. канд фарм. наук. Пермь, 1999. - 24 с.

152. Хем, А. Гистология: пер. с англ. / А. Хем, Д. Кормак. М.: Мир, 1983.-Т. 2.-254 с.

153. Хрущов, Н.Г. Гистогенез соединительной ткани. М.: Наука, 1976.- 120 с.

154. Хрущов, Н.Г. Электронно-микроскопическое и радиоавтографическое исследование гигантских клеток инородныхтел очага асептического воспаления / Н.Г. Хрущов, М.А. Ланге, Г.Н. Сатдыкова // Арх. анатомии, гистологии и эмбриологии. 1978. - № 8.- С. 43-50.

155. Цепов, Л.М. Клинико-лабораторная диагностика заболеваний пародонта / Л.М. Цепов, В.Г. Морозов, А.И. Николаев. Смоленск: СГМА, 1995.-80 с.

156. Цитокины и внеклеточный матрикс при экспериментальных гломерулопатиях / С.Ю. Богомазов, О.П. Гладских, А.А. Иванов и др. // Арх. патологии. 1997. - Т. 59, № 6. - С. 45-50.

157. Челышев, Ю.А. Посттравматическое выживание нейронов спинальных ганглиев при стимуляции регенерации нерва / Ю.А. Челышев, И.С. Рагинов // Бюл. экспер. биол.и мед. -2002. Т. 134, № 12. - С.690-692.

158. Чернух, A.M. Воспаление. М.: Медицина, 1979. - 449 с.

159. Шатилова, И.Г. Плацентарные макрофаги (клетки Кащенко-Гофбауэра) и их роль в патологии / И.Г. Шатилова, А.П. Милованов, М. Кадыров // Арх. патологии. 1997. - № 5. - С. 70-74.

160. Шатилова, И.Г. Роль плацентарных макрофагов (клетки Кащенко- Гофбауэра) в развитии ворсин и патогенезе неразвивающейся беременности: автореф. дис. канд. фарм. наук. М., 1999. - 24 с.

161. Шехтер, А.Б. Воспаление, адаптивная регенерация и дисрегенерация (анализ межклеточных взаимодействий) / А.Б. Шехтер, В.В. Серов // Арх. патологии. 1991. - Т. 53, № 7. - С. 7-14.

162. Шехтер, А.Б. Репаративная регенерация и дисрегенерация (роль межклеточных взаимодействий) / А.Б. Шехтер // современные проблемы регенерации. Йошкар-Ола, 1987. - С. 48-63.

163. Шехтер, А.Б. Тканевая реакция на имплантат / А.Б. Шехтер, И.Б. Розанова // Биосовместимость / под ред. В.И. Севастьянова. М., 1999.-С. 174-211.

164. Шехтер, А.Б. Фибробласты / А.Б. Шехтер // Воспаление. Руководство для врачей / под ред. В.В. Серова, B.C. Паукова. М.: Медицина, 1995.-С. 164-176.

165. Экспериментально-клиническое обоснование коллагеносклеропластики / С.Н. Багров, Т.И. Ронкина, Н.Х. Балашова и др. // Офтальмохирургия. -1991. № 4. - С. 48-55.

166. Эндоскопическое лечение гастродуоденальных язв с применением Аллопланта / Р.Т. Ибрагимов, С.А. Муслимов, А.Н. Некрасов и др. // Новые технологии в хирургии: тез. докл. международ, симп. Уфа, 1994. - С. 65-67.

167. Юрина, Н.А. Морфофункциональная гетерогенность и взаимодействие клеток соединительной ткани / Н.А. Юрина, А.И. Радостина. М.: изд-во УДН, 1990. - 322 с.

168. Ярилин, А. А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии / А.А. Ярилин // Иммунология. 1997. - № 5. - С. 7-14.

169. Aalto, M. Neutralization of the fibrogenic silica-released macrophage factor by antiserum / M. Aalto, M. Viljanen, E. Kulonen // Exp. Path. -1982.-Vol. 22.-P. 181-184.

170. Abittan, Ch. Alcogol liver disease / Ch. Abittan, Ch. Lieber // Clin. Perspect. Gastroenterol. 1999. - №5. - P. 257-263.

171. Acquisition of the monocyte/macrophage phenotype in human mesangial cells / S. Watanabe, A. Yoshimura, K. Inui et al. // J. Lab. Clin. Med. 2001. - Vol. 138, № 3. - P. 193-199.

172. Adams, D.O. Phagocitic cell: cytotoxic activities of macrophages /

173. D.O. Adams, T.A. Hamilton // Inflammation: basic principles and clinical correlates / eds. by J.I. Gallin et al.. N. Y., 1988. - P. 471-492.

174. Adams, D.O. The biology the granulomas / D.O. Adams // Pathology of granulomas /ed. by H.L. Ioachim. N. Y., 1983. - P. 1-19.

175. Adamson, J.W. Erythropoietin: in vitro and in vivo studies of the regulation of erythropoiesis / J.W. Adamson // Schweiz. Med. Wschr. -1988. Vol. 118, № 42. - P. 1501-1506.

176. Alison, M.R. Liver cancer: the role of stem cells / M.R. Alison, M.J. Lovell // Cell Prolif. 2005. - Vol. 38, № 6. - P. 407-421.195. "Alloplant" new generation of transplant for eye and plastic surgery /

177. E.R. Muldashev, R.T. Bulatov, R.T. Nigmatullin et al. // Biomateriales. -Warna, 1990.-P. 128.

178. Alloplant in esophagus surgery / Y.Y. Bulgakov, E.R. Muldashev, R.T. Nigmatulin, E.Y. Ionis // Rev. Inst. Nal. Enf. Resp. Мех. 1994. -Vol. 7,№2.-P. 113-115.

179. Alloplant scleral Reinforcement in progressive myopia / E.R. Muldashev, R.T. Bulatov, O.V. Rodionov et al. // Pr. the 5th Intern. Conf. on myopia. -N.Y.; Singapore, 1995. P. 295-308.

180. Analysis of transforming growth factor beta receptor binding in embryonic, fetal, and adult rabbit fibroblasts / L.A. Durham, T.M.

181. Krummel, J.W. Cawthorn et al. // J. Pediatr. Surg. 1989. - Vol. 24, № 8. - P. 784-788.

182. Arima, E. SEM observation and X-ray microanalysis on macrophage's phagocytosis: AODO freeze-cracking method and EDX / E. Arima // J. Trace and Microprobe Techn. 1997. - № 4. - P. 717-727.

183. Arlein, W.J. Continuity between wound macrophage and fibroblast phenotype: analysis of wound fibroblast phagocytosis / W.J. Arlein, J.D. Shearer, M.D. Caldwell // Am. J. Physiol. 1998. - Vol. 275. - P. 10411048.

184. Arvilommi, H. A method for simultaneous determination of rosette formation and phagocytosis by cell / H. Arvilommi // J. Immunol. Meth. -1975.-Vol. 8.-P. 345-350.

185. A scrutiny of matrix metalloproteinases in osteoclasts: evidence for heterogeneity and for the presence of MMPs synthesized by other cells / T.L. Andersen, O.M. del Carmen, T. Kirkegaard et al. // Bone. 2004. -Vol. 35,№5.-P. 1107-19.

186. Ash, P. Osteoclasts derived from heamatopoietic steem cells / P. Ash, J.F. Loutit, K.M.S. Townsend // Clin. Ortop. Rel. Res. 1981. - Vol. 155. -P. 249-258.

187. Balars, E.A. Cytological studies on the developing vitreous as related to the hyaloid vessel system / E.A. Balars, L.Z. Toth, V. Ozanics // Graefes Arch. Klin. Exp. Ophthalmol. 1980. - Vol. 213. - P. 71-84.

188. Barker, de J.M., Daems, W. Th. The heterogeneity of mous peritoneal macrophages. In: Yeterogeneity of mononuclear Phagocytes (Foster G., Landy M. - eds.) Academic Press, London; New York, Toronto et al. -1981. - V.28. P.l 1-13.

189. Barrett, A.W. Limitations of flow cytometry in the analysis of CDla/HLADR+ human oral mucosal Langerhans cells / A.W. Barrett, D.A. Ross, J.A. Goodacre // Oral Dis. 1995. - Vol. 1, № 1. - P. 49-53.

190. Baud, L. Switching off renal inflammation by anti-inflammatory mediators: the facts, the promise and the hope / L. Baud, B. Fouqueray, A. Belloqo // Kidney Int. 1998. - Vol. 53. - P. 1118-1126.

191. Bekkum, D.W. van. Phylogenetic aspects of tissue regeneration: role of stem cells. A concise overview / D.W. van Bekkum // Blood Cells Mol. Dis. 2004. - Vol. 32, № 1. - P. 11-6.

192. Berman, B. Histochemical analysis of Langerhans cell / B. Berman, D.C. France //Am. J. Dermatopathol. 1979. - Vol. 1. - P. 215-221.

193. Bieber, Th. The Langerhans cell: outpost of the immune system in the epidermis / Th. Bieber// Hautarzt. 1986. - Bd. 37, № 8. - S. 424-431.

194. Biology of fetal wound healing: collagen biosynthesis during dermal repair / F.W. Frantz, R.F. Diegelmann, B.A. Mast, I.K. Cohen // J. Pediatr. Surg. 1992. - Vol. 27, № 8. - P. 945-8.

195. Biology of fetal wound healing: hyaluronate receptor expression in fetal fibroblasts / S.M. Alaish, D. Yager, R.F. Diegelmann, I.K. Cohen // J. Pediatr. Surg. 1994. - Vol. 29, № 8. - P. 1040-3.

196. M.C.S. Birbeek, A.S. Brenthnach, J.D. Everall // J. Invest. Derm. -1961.-Vol. 37.-P. 51-63.

197. Bissell, D.M. Hepatic fibrosis as wound repair: a progress report / D.M. Bissell // J. Gastroenterol. 1998. - Vol. 33, № 2. - P. 295-302.

198. Bissell, D.M. The influence of extracellular matrix on gene expression: is structure the message? / M.J. Bissell, M.H. Barcellos-Hoff // J. Cell Sci. Suppl. 1987. - Vol. 8. - P. 327-43.

199. Black, M.M. Formation of multicleate giant cell in organized epithelioid granuloms / M.M. Black, W.L.Epstein // Am. J. Path. 1974. -Vol. 74. - P. 263-274.

200. Bogdan, C. Modulation of macrophage function by transforming growth factor beta, interleukin-4, and interleukin-10 / C. Bogdan, C. Nathan // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1993. - Vol. 685. - P. 713-39.

201. Bone marrow as a potential source of hepatic oval cells / B.E. Petersen, W.C. Bowen, K.D. Patrene et al. // Science. 1999. - Vol. 284. -P. 1168-1170.

202. Border, W.A. Cytokines in kidney disease: the role of transforming growth factor-beta / W.A. Border, N.A. Noble // Am. J. Kidney Dis. -1993.-Vol. 22, № l.-P. 105-13.

203. Border, W.A. Transforming growth factor beta in tissue fibrosis / W.A. Border, N.A. Noble // N. Engl. J. Med. 1994. - Vol. 331, № 19. -P. 1286-92.

204. Bosch, F.X. Epidemiology of primary liver cancer / F.X. Bosch, J. Ribes, J. Borras // Semin. Liver Dis. 1999. - Vol. 19. - P. 271-286.

205. Both kupffer cells and liver cudothelial cells play an important role in the clearance of IgA and IgG immune complexes / W. Bogers, R. Stad, Es. Van, M. Daba // Res. Immunol. 1992. - Vol. 143, № 2. - P. 219-224.

206. Burd, A. Allogenic skin in the treatment of burns / A. Burd, T. Chiu // Clin. Dermatol. 2005. - Vol. 23, № 4. - P. 376-87.

207. Carr, I. The fine structure of the mammalian lymphoreticular system / I. Carr // Int. Rev. Cytol. 1970. - Vol. 27. - P. 283-348.

208. Castellucci, M. A three-dimensional study of the normal human placental villous core. I. The Hofbauer cells / M. Castellucci, D. Zaccheo, G. Pescetto // Cell Tissue Res. 1980. - Vol. 210, № 2. - P. 235-247.

209. Castellucci, M. The Hofbauer cells of the human placenta: morphological and immunological aspects / M. Castellucci, D. Zacchea // Prog. Clin. Biol. Res. 1989. - Vol. 296. - P. 443-51.

210. CD34{+} peripheral blood progenitor cell and monocyte derived dendritic cells: a comparative analysis / B. Herbst, G. Kohler, A. Mackensen et al. // Br. J. Haematol. 1997. - № 3. - P. 490-499.

211. Cellular mechanisms of osteoclast formation and lacunar resorption in giant cell granuloma of the jaw /1. Itonaga, I. Hussein, O. Kudo et al. // J. Oral Pathol. Med. 2003. - Vol. 32, № 4. - P. 224-231.

212. Celulas de langerhans da mucosa oral humana / M. Ferreira Nascimento, A. Silva et al. // Clenc. Biol. Mol. Cell. Biol. 1990. - № 5. - P. 62.

213. Chambers, T.J. Pathobiology of the osteoclast / T.J. Chambers // J.Clin. Pathol. 1985. - Vol. 38, № 3. - P. 241-252.

214. Characterization and quantitation of wound matrix in the fetal rabbit / R.L. DePalma, T.M. Krummel, L.A. Durham et al. // Matrix. 1989. -Vol. 9, №3.- P. 224-231.

215. Chardonnet, Y. Epitheliums, cellules de Langerhans et infections virales / Y. Chardonnet, J. Viae, D. Schmitt // Med. Sci. 1998. - № 4. - P. 404-411.

216. Cho, M.I. An electron microscopic radioautographic study of collagen secretion in periodontal ligament fibroblasts of the mous. I. Normal fibroblasts / M.I. Cho, P.R. Garant // Anat. Rec. 1981. - Vol. 201, № 4. -P. 577-586.

217. Cline, M. The White cell. Cambridge, 1975. - 564 p.

218. Collagen and myofibroblasts of granulation tissue. A chemical, ultrastructural and immunologic study / G. Gabbiani, M. Le Lous, A.J. Bailey et al. // Virchows Arch. B. Cell Pathol. 1976. - Vol. 21, № 2. -P. 133-145.

219. Contribution of bone marrow-derived cells to skin: collagen deposition and wound repair / C. Fathke, L. Wilson, J. Hutter et al. // Stem Cells. 2004. - Vol. 22, № 5. - P. 812-22.

220. Cordeiro, M.F. Human anti-transforming growth factor-beta2 antibody: a new glaucoma anti-scarring agent / M.F. Cordeiro, J.A. Gay, P.T. Khaw // Inv. Ophth. Vis. Sci. 1999. - Vol. 40, № 10. - P. 2225-2234.

221. Cortesini, R. Stem cells, tissue engineering and organogenesis in transplantation / R. Cortesini // Transpl. Immunol. 2005. - Vol. 15, № 2. -P. 81-9.

222. Couser, W.G. Pathogenesis of glomerular damage in glomerulonephritis / W.G. Couser // Nephrol. Dial. Transplant. 1998. -Vol. 13.-P. 10-15.

223. Curran, R.C. Mucopolysaccharides in peritoneal granulomas in the rat / R.C. Curran, D. Lovell, A.E. Clark // J. Pathol. Bacteriol. 1966. - Vol. 91, №2.-P. 429-39.

224. Cuskey, R.S. Fine structure and function of Kupffer cells / R.S. Cuskey, P.A. Cuskey // J. Electron. Microsc. Tech. 1990. - Vol. 14, № 3. - P. 237-246.

225. Cutaneous wound healing: myofibroblastic differentiation and in vitro model / T.P. Amadeu, B. Coulomb, A. Desmouliere, A.M. Costa // Int. J. Low Extrem. Wounds. 2003. - Vol. 2, № 2. - P. 60-68.

226. Cytokine expression by epidermal cell subpopulations / H. Matsue, P.D. Cruz, P.R. Bergstresser, A. Takashima // J. Invest. Dermatol. 1992. -Vol. 99,№5. -P. 42-45.

227. Cytokine pattern of Langerhans cells isolated from murine epidermal cell cultures / S. Schreiber, O. Kilgus, E. Payer et al. // J. Immunol. -1992.-Vol. 149, № 11.-P. 3524-34.

228. Cytokine-induced gene expression of a neutrophil chemotactic factor/IL-8 in human hepatocytes / A.E. Thornton, R.M. Strieter, I. Lindley et al. //J. Immunol. 1989. - Vol. 144. - P. 2609-2613.

229. Cytokines and growth factors in renal disease / I.L. Noronha, Z. Niemir, H. Stein et al. // Nephrol. Dial. Transplant. 1995. - Vol. 10, № 6. - P. 775-786.

230. Das chemotaktische Verhalten von Alveolarmakrophagen wird durch GM-CSF beeinfluBt / R. Neuwirth, K. Kienast, M. Knorst et al. // Atemwegs Lungenkr. 1995. - Vol. 10. - P. 476.

231. Decker, K. Biologically active products of stimulated liver macrophages (Kupffer cells) / K. Decker // Eur. J. Biochem. 1990. - Vol. 192.-P. 245-261.

232. Delineation of the dendritic cell lineage by generating large numbers of Birbeck granule-positive Langerhans cells from human peripheral blood progenitor cells in vitro / A. Mackensen, B. Herbst, G. Kohler et al. // Blood. 1995. - № 7. - P. 2699-2707.

233. Dendritic cells with antigen-presenting capability reside in airway epithelium, lung parenchyma, and visceral pleura / K. Sertl, T. Takemura, E. Tschachler et al. //J. Exp. Med. 1986. - Vol. 163, № 2. - P. 436-451.

234. Desmouliere, A. Tissue repair, contraction, and the myofibroblast / A. Desmouliere, C. Chaponnier, G. Gabbiani // Wound Repair. Regen. -2005.-Vol. 13,№ l.-P. 7-12.

235. Determination of the lenght of the histological stages of apoptosis in normal liver and altered hepatic foci of rats / W.C. Bursch, B. Paff, G. Putz, R. Schulte-Hermann // Carcinogenesis. 1990. - Vol. 11. - P. 847.

236. Dezutter-Dambuyant, C. Recent data and current studies of epidermal Langerhans cells / C. Dezutter-Dambuyant // Pathol. Biol. (Paris). 1995. -Vol. 43, № 10.-P. 841-847.

237. Diamond, J.R. Macrophages and progressive renal disease in experimental hydronephrosis / J.R. Diamond // Am. J. Kidney Dis. 1995. -Vol. 26, № i.-p. 133-140.

238. Diegelmann, R.F. Fibrogenic processes during tissue repair / R.F. Diegelmann, W. Linbland, I.K. Cohen // Collagen / ed. M. Nimni. -Florida: CPC Press, 1988. P. 114-138.

239. Diegelmann, R.F. Wound healing: an overview of acute, fibrotic and delayed healing / R.F. Diegelmann, M.C. Evans // Front. Biosci. 2004. -Vol. 1, № 9. - P. 283-9.

240. Different proliferative responses of periportal and pericentral rat hepatocytes to hepatocyte growth factor / A. Volk, G. Michalopoulos, M. Weidner, R. Gebhardt // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. - Vol. 207, №2.-P. 578-584.

241. Differential production of TNF by Kupffer cells after phagocytosis of E. Coli and C. Albicans / J.K. Olynyk, G.M. Matuschak, A.J. Lechner et al. // Am. J. Physiol. 1994. - Vol. 267, № 2. - Pt. 1. - P. G213-G219.

242. Differentiation and function of Kupffer cells / M. Naito, G. Hasegawa, Y. Ebe, T. Yamamoto // Med. Electron. Microsc. 2004. - Vol. 37, № 1. -P. 16-28.

243. Differentiation of oval cells into duct-like cells in preneoplastic liver of rats placed on a choline-deficient diet supplemented with ethionine / L.B. Tee, Y. Kirilak, W.H. Huang et al. // Carcinogenesis. 1994. - Vol. 15, № 12.-P. 2747-2756.

244. Durr, R. Carcinogenesis of primary liver malignancies / R. Durr, W.H. Caselmann // Langenbeck's Arch. Surg. 2000. - Vol. 385. - P. 154 -161.

245. Early gene expression of hepatocyte growth factor in mononuclear phagocytes of rat liver after administration of carbon tetrachloride / T. Armbrust, D. Batusic, L. Xia, G. Ramadori // Liver. 2002. - Vol. 22, № 6.-P. 486-94.

246. Effect of sulfur dioxide on cytokine production of human alveolar macrophages in vitro / M.M. Knorst, K. Kienast, J. Muller-Quernheim, R. Ferlinz//Arch. Environ. Health. 1996. - Vol. 51, № 2. - P. 150-156.

247. Elastin fragments attract macrophage precursors to diseased sites in pulmonary emfhysema / G. Hunninghake, J. Davidson, S. Rennard et al. // Science. 1981. - Vol. 212. - P. 925-927.

248. Electron microscopic observations and X-ray microanalysis of a multinucleated giant cell / B.H. Bay, Y.G. Chan, T.Y. Yick et al. // J. Electr. Microsc. 1998. - № 4. - P. 359-361.

249. Emilson, A. Quantitative and three-dimensional analysis of human langerhans cells in epiderman sheets and vertical skin sections / A. Emilson, A. Scheynius // J. Histochem. Cytochem. 1995. - № 10. - P. 993-998.

250. Enders, A.C. The cytology of Hofbauer cells / A.C. Enders, B.F. King //Anat. Rec. 1970. - Vol. 167, № 2. - P. 231-236.

251. Endogenous interleukin-10 modulates fibrosis and regeneration in experimental chronic pancreatitis / A. Demols, J.L. van Laethem, E. Quertinmont et al. // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2002. -Vol. 282, № 6. - P. 1105-1112.

252. Engineered growth factors and cutaneous wound healing: success and possible questions in the past 10 years / X. Fu, X. Li, B. Cheng et al. // Wound Repair Regen. -2005. Vol. 13, № 2. - P. 122-130.

253. Enhancement of murine bone marrow macrophage differentiation by b-endorphin / K. Hagi, K. Inaba, H. Sakuta et al. // Blood. 1995. - № 4.-P. 1316-1321.

254. Epidermal growth factor receptor transactivation mediates tumor necrosis factor-induced hepatocyte replication / G.M. Argast, J.S. Campbell, J.T. Brooling, N. Fausto // J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279, № 33.-P. 34530-6.

255. Epidermal Langerhans cells express la antigens /1. Klareskog, U.M. Tjierlund, U. Forsam, PA. Peterson // Nature. 1977. - Vol. 268. - P. 248250.

256. Exogenous transforming growth factor-beta amplifies its own expression and induces scar formation in a model of human fetal skin repai / R.Y. Lin, K.M. Sullivan, P.A. Argenta et al. // Ann. Surg. 1995. - Vol. 222, №2.-P. 146-154.

257. Expression and function of b2 —integrins on alveolar macrophages from human and nonhuman primates / R.K. Albert, L.J. Embree, J.E.

258. McFeely et al. // Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 1992. - Vol. 7. - P. 182189.

259. Expression of alveolar macrophage adhesion molecules in pulmonary sarcoidosis /1. Striz, Y.M. Wang, 0. Kalaycioglu et al. // Chest. 1992. -Vol. 102. - P. 882-886.

260. Expression of hepatocyte growth factor and its receptor c-met, correlates with severity of pathological injury in experimental alcoholic liver disease / N. Lalaniel, R. Poulsom, G. Stamp et al. // Int. J. Mol. Med. 2005. - Vol. 15, № 5. - p. 811-7.

261. Expression of transforming growth factor-beta isoforms in human glomerular diseases / T. Yamamoto, N.A. Noble, A.H. Cohen et al. // Kidney Int. 1996. - Vol. 49, № 2. - P. 461-9.

262. Extracellular matrix remodeling at the early stages of liver regeneration in the rat / Т.Н. Kim, W.M. Mars, D.B. Stolz et al. // Hepatology. 1997. - Vol. 26, № 4. - P. 896-904.

263. Eyden, B. Electron microscopy in the study of myofibroblastic lesions / B. Eyden // Semin. Diagn. Pathol. 2003. - Vol. 20, № 1. - P. 13-24.

264. Fate of DNA from retinal cells dying during development: Uptake by microglia and macroglia (Muller cells) / R. Egensperger, J. Maslim, S. Bisti et al. //Dev. Brain Res. 1996. - № 1. - P. 1-8.

265. Fausto, N. Liver regeneration / N. Fausto // J. Hepatol. 2000. - Vol. 32.-Suppl. l.-P. 19-31.

266. Fausto, N. The role of hepatocytes and oval cells in liver regeneration and repopulation / N. Fausto, J.S. Campbell // Mech. Dev. 2003. - Vol. 120,№ l.-P. 117-30.

267. Fetal response to injury in the rabbit / T.M. Krummel, J.M. Nelson, R.F. Diegelmann et al. // J. Pediatr. Surg. 1987. - Vol. 22, № 7. - P. 640-4.

268. Fetal vasculogenesis and angiogenesis in human placental villi / R. Demir, P. Kaufmann, M. Castellucci et al. // Acta Anat. (Basel). 1989. -Vol. 136, №3.-P. 190-203.

269. Flotte, T.J. Demonstration of T200 on human Langerhans cell surface membranes / T.J. Flotte, G.F. Murphy, A.K. Bhan // J. Invest. Dermatol. -1984.-Vol. 82.-P. 535.

270. Francois, J. Immunology of the vitreous body / J. Francois, V. Victoria-Troncoso // Mod. Probl. Ophthalmol. 1972. - Vol.5 - P. 113120.

271. From Cell-ECM interactions to tissue engineering / F. Rosso, A. Giordano, M. Barbarisi, A. Barbarisi // J. Cell Physiol. 2004. - Vol. 199, №2.-P. 174-180.

272. From lysosomes to plasma membrane: localization of vacuolar type H+-ATPase with the a3 isoform during osteoclast differentiation / T. Toyomura, Y. Murata, A. Yamamoto et al. // J. Biol. Chem. 2003. -Vol. 278, № 24. - P. 22023-30.

273. Furth, R. van. Cells of the mononuclear phagocyte system: nomenclature in terms sites and condidition / R. van Furth // Mononuclear Phagocytes. Functional Aspects / ed. by R. van Furth. Boston, 1980. - P. 1-30.

274. Furth, R. van. Development of mononuclear phagocytes / R. van Furth // Heterogeneity of mononuclear phagocytes / eds. by O. Forster, M. Landy. -N. Y. et al.: Academic Press, 1981. Vol. 28. - P. 3-10.

275. Furth, R. van. Origin and turnover of monocytes and mskrophages / R. van Furth // Cell Kinetik Inflammatiry Reaction. Berlin, 1989. - P. 125150.

276. Furth, R. van. The Mononuclear Phagocyte / R. van Furth. London: Blackwells, 1970.-P. 140-200.

277. Garcia, D.I. El histiocito: conceptos actuales / D.I. Garcia, J. Toribio // Actas dermo-sifiliogr. 1997. - Vol. 12. - P. 649-662.

278. Geisler, A. The cellular reproduction in physiological and reparative liver regeneration / A. Geisler, K. Stiller, G. Machnic // Exp. Toxicol. Pathol. 1994. - Vol. 46, № 3. - P. 247-250.

279. Generation of human dendritic cells/Langerhans cells from circulating CD34{+} hematopoietic progenitor cells / D. Strunk, K. Rappersberger, C. Egger et al.//Blood. 1996.-№4.-P. 1292-1302.

280. Gharaee-Kermani, M. Role of cytokines and cytokine therapy in wound healing and fibrotic diseases / M. Gharaee-Kermani, S.H. Phan / Curr. Pharm. Des. 2001. - Vol. 7,№ ll.-P. 1083-1103.

281. Giannoudis, P.V. Tissue regeneration. The past, the present and the future / P.V. Giannoudis, I. Pountos // Injury. 2005. - Vol. 36. - Suppl. 4. -P. S2-5.

282. Goldberg, B.D. Binding of soluble type I collagen to fibroblasts: effects of thermal activation of ligand, ligand concentration, pinocytosis, and cytoskeletal modifiers / B.D. Goldberg // J. Cell Biol. 1982. - Vol. 95, N3.-P. 747-51.

283. Goldberg, B.D. Electron microscjpic studies of procollagen from cultured human fibroblasts / B.D. Goldberg // Cell. 1974. - №7 . - P. 185-192.

284. Gonzalez, S. Microglia as mediators of inflammatory and degenerative diseases / S. Gonzalez, G. Baltuch // Annu. Rev. Neurosci. -1999.-№22.-P. 219-240.

285. Gordon, S. Immunofluorescent and ultrastructural studies of "sarcomeric" units in stress fibers of cultured nonmuscle cell / S. Gordon // Exp. Cell. Res. 1978. - Vol. 117. - P. 253-260.

286. Gordon, S. Secretion of macrophage neutral proteinase is enhanced by colchicine / S. Gordon, Z. Werb // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1976. -Vol. 73, №3.- P. 872-6.

287. Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor down-regulates CD 14 expression on monocytes / M. Kruger, J.G.J, van de Winkel, T.P.M. de Wit et al. // Immunology. 1996. - Vol. 1. - P. 89-95.

288. Griffin, F.M. Augmentation of macrophage cpmplement receptor function in vivo / F.M. Griffin, P.J. Mullinax // J. Exp. Med. 1981. - Vol. 154.-P. 499-509.

289. Grimaud, J.A. Matrix receptors to cytokines: from concept to control of tissue fibrosis dynamics / J.A. Grimaud, H. Lortat-Jacob // Pathol. Res. Pract.- 1994.-Vol. 190,№9-10.-P. 883-90.

290. Habeshaw, J. Quantitation of subclasses of mononuclear cells in normal human blood by membrane receptor studies / J. Habeshaw, G. Young// Br. J. Haematol. 1975. - Vol. 29. - P. 43-56.

291. Hadley, J.G. Agrapod mediated pahgocytosis by alveolar macrophages / J.G. Hadley, D. Gardner, D. Menzel // J. Reticuloendothel. Sol. Suppl. 1977. - Vol. 22. - P. A34-A39.

292. Hagen Timo, L.M. Isolation and characterization of murine Kupffer cells and splenic macrophages / L.M. Hagen Timo, W. Vianen, I.A.J.M. Bakker-Woudenberg // J. Immunol. Meth. 1996. - № 1. - P. 81-91.

293. Hagiwara, H. Immunoelectron microscopic study of proteoglycans in rat epiphyseal growth plate cartilage after fixation with rutheniumhexamine trichloride (RHT) / H. Hagiwara // Histochemistry. 1992. - Vol. 98, № 5. p. 305-309

294. Hashimoto, M. Functional capacity of the cirrhotic liver after partial hepatectomy in the rat / M. Hashimoto, G. Watanabe // Surgery. 1999. -Vol. 126, №3. p. 541-7.

295. Heimark, R.L. Inhibition of endothelial regeneration by type-beta transforming growth factor from platelets / R.L. Heimark, D.R. Twardzik, S.M. Schwartz //Science. 1996. -Vol. 233. -P. 1078-1080.

296. Hepatic Kupffer cell phagocytotic function in rats with erythrocytic-stage malaria / M.S. Nobes, H. Ghabrial, K.M. Simms et al. // J. Gastroenterol. Hepatol. 2002. - Vol. 17, № 5. - P. 598-605.

297. Hepatic oval cells express the hematopoietic stem cell marker Thy-1 in the rat / B.E. Petersen, J.P. Goff, J.S. Greenberger, G.K. Michalopoulos // Hepatology. 1998. - Vol. 27, № 2. - P. 433-45.

298. Hepatosite growth factor promotes liver regeneration and protein sintesis after hepatectomy in cirrotic rats / Y. Ogura, M. Havanoue J. Tanabe et al. // Hepatogastroenterology. 2001. - Vol. 48, № 38. - P. 545-549.

299. Heterogeneity of accessory cells / P. Erb, G. Ramila, S. Studer et al. //Immunobiology. 1984,- Vol. 168, №3.5. p. 141-153.

300. Heterogeneity of host immunological risk factors in patients with aggressive periodontitis / K. Takahashi, H. Ohyama, M. Kitanaka et al. // J. Periodontol. 2001. - Vol. 72, № 4. - P. 425-437.

301. Heterogeneity of mouse spleen dendritic cells: In vivo phagocytic activity, expression of macrophage markers, and subpopulation turnover / P.J.M. Leenan, K. Radosevic, J.S.A. Voerman et al. // J. Immunol. -1998. -№3.- P. 2166-2173.

302. Histochemical localization of acidic glycosaminoglycans in normal human placentae / L. Wasserman, A. Abramovici, H. Shlesinger et al. // Placenta. 1983.-Vol.4, № l.-P. 101-8.

303. Hugh, P.V. The impact of systemic infection on the progression of neurodegenerative disease / P.V. Hugh, A. Tracey // Newman and Colm Cunningham Nature Reviews Neuroscience. 2003. - Vol. 4, № 2. - P. 103 -112

304. Human circulating CD 14+ monocytes as a source of progenitors that exhibit mesenchymal cell differentiation / K. Masataka, 0. Yuka, K. Hiroaki et al. // J. Leukoc. Biol. 2003. - Vol. 74. - P. 833-845.

305. Human neitrophil-specific granule deficiency; a model to assess the rote of neutrophil-specific granules in the evolution of the inflammatory response / J. Gallin, M. Fletcher, B. Seligmann et al. // Blood. 1982. -Vol. 59.-P. 1317-1330.

306. Human placental Hofbauer cells express sprouty proteins: a possible modulating mechanism of villous branching / E.Y. Anteby, S. Natanson-Yaron, C. Greenfield et al. // Placenta. 2005. - Vol. 26, № 6. - P. 476483.

307. Human villous macrophage-conditioned media enhance human trophoblast growth and differentiation in vitro / S. Khan, H. Katabuchi, M. Araki et al. // Biol. Reprod. 2000. - Vol. 4, № 62. - P. 1075-1083.

308. Hyaluronic acid inhibits fetal platelet function: implications in scarless healing / O.O. Olutoye, E.J. Barone, D.R. Yager et al. // J. Pediatr. Surg. 1997. - Vol. 32, № 6. - P. 827-30.

309. Hyaluronic acid is a major component of the matrix of fetal rabbit skin and wounds: implications for healing by regeneration / B.A. Mast, L.C. Flood, J.H. Haynes et al. // Matrix. 1991. - Vol. 11, № l. p. 63-68.

310. Hyaluronic acid modulates proliferation, collagen and protein synthesis of cultured fetal fibroblasts / B.A. Mast, R.F. Diegelmann, T.M. Krummel, I.K. Cohen // Matrix. 1993. - Vol. 13, № 6. - P. 441-446.

311. IL-12 synthesis by human Langerhans cells / K. Kang, M. Kubin, K. Cooper et al. // J. Immunol. № 4. - 1996. - P. 1402-1407.

312. In vitro differentiation of the murine macrophage cell line BDM-1 into osteoclast-like cells / J.H. Shin, A. Kukita, K. Ohki et al. // Endocrinology. 1995. - Vol. 10. - P. 4285-4292.

313. In vivo degradation of fetal wound hyaluronic acid results in increased fibroplasia, collagen deposition, and neovascularization / B.A. Mast, J.H. Haynes, T.M. Krummel et al. // Plast. Reconstr. Surg. 1992. - Vol. 89, № 3. - P. 503-509.

314. In vivo differentiation of rat liver oval cells into hepatocytes / R.P. Evarts, P. Nagy, H. Nakatsukasa et al. // Cancer Res. 1989. - Vol. 49, № 6.-P. 1541-1547.

315. Induction of the CDla Langerhans cell marker on human monocytes / S. Athanasas-Platsis, N.W. Savage, T.A. Winning et al. // Arch. Oral Biol. 1995.-Vol. 40, №2.-P. 157-160.

316. Inflammatory (foreign body) macrophages differentiate into osteoclastic bone-resorbing cells / A. Sabokbar, J. Brett, J.M. Quinn et al. //J.Pathol. 1995.-Vol. 12.- P. 12.

317. Inhibition of GM-CSF production in fibroblast-monocyte coculture by prednisone and effects of rhGM-CSF on human lung fibroblasts / S.M. Fitzgerald, D.S. Chi, S.A. Lee et al. // Front Biosci. 2004. - Vol. 1, № 9. - P. 342-348.

318. Interleukin-6 production by tumor necrosis factor and lipopolysaccharide-stimulated rat renal cells / E. Pirotzki, R.M. Dellatre, A. Hellegouarch et al. // Clin. Immunol. Immunopathol. 1990. - № 56. -P. 271-279.

319. Ioannidis, I. Cytotoxicity of nitric oxide in Fu5 hepatoma cells; evidence for co-operative action with hydrogen peroxide /1. Ioannidis, H. Groot //Biochem. J. 1993. - Vol. 296. - P. 341-345.

320. Isolation and characterization of Hofbauer cells from human placental villi / D. Zaccheo, V. Pistoia, M. Castellucci et al. // Arch. Gynecol. Obstet. 1989. - Vol. 4, № 246. - P. 189-200.

321. Isolation of human multipotent mesenchymal stem cells from second-trimester amniotic fluid using a novel two-stage culture protocol / M.S. Tsai, J.L. Lee, Yu.J. Chang, Sh.M. Hwang // Human Reproduction. -2004.-Vol. 19.-P. 1450-1456.

322. Iwata, M. A large chondroitin sulfate proteoglycan has the characteristics of a general extracellular matrix component of adult brain / M. Iwata, S.S. Carlson//J. Neurosci. 1993. - Vol. 13,№ 1. - P. 195-207.

323. Jacoby, F. / F. Jacoby // Cells and Tissues in Culture / ed. by E.N. Willmer. N. Y.; London: Academic Press, 1965. - Vol. 2. - P. 1-93.

324. Jiang, D. Исследование фагоцитарной функции макрофагов аутотрансплантированной ткани селезенки / Jiang D., Chen W., Guo G. // Di-San Junyi Daxue Xuebao. 1999. - № 2. - P. 137-138.

325. Johnson, R.L. Lymphokine stimulation of collagen accumulation / R.L. Johnson, M. Ziff// J. Clin. Invest. 1976. - Vol. 58, № 1. - P. 24052.

326. Johnston, R.B. Mononuclear phagocytes: physiology and functional abnormalities / R.B. Johnston // Acta Paediatr. Hung. 1988-1989. - Vol. 29,№ 1-2.-P.23-28.

327. Juri, L. Det akutte inflammatoriske respons / L. Juri, H. Kehlet // Ugeskr. Laeger. 1996. - № 41. - P. 5754-5761.

328. Katz, S. Epidermal Langerhans cells are derived from cells originating in bone marrow / S. Katz, K. Tamaki, D.H. Sachs // Nature. 1979. - Vol. 282,№5736. -P. 324-326.

329. Kennedy, J.F. Chemical and biochemical aspects of the glycosaminoglycans and proteoglycans in health and disease / J.F. Kennedy//Adv. Clin. Chem.- 1976.-Vol. 18.-P. 1-101.

330. Kerr, J.F.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implication in tissue kinetics / J.F.R. Kerr, A.H. Wyllie, A.R. Currie //Br. J. Cancer. 1972. - Vol. 26, № 4. - P. 239-257.

331. King, G.J. The relation of ultrastructural changes in osteoclasts to resorption in bone cultures stimulated with parathyroid hormone / G.J. King, M.E. Holtrop, L.G. Raisz // Metabol. Bone Dis. Relat. Research. -1978.-Vol. l.-P. 67.

332. Kitamura, M. TGF-beta and glomerulonephritis: anti-inflammatory versus prosclerotic actions / M. Kitamura, T.S. Suto // Nephrol. Dial. Transplant. 1997. - Vol. 12, № 4. - P. 669-679.

333. Kitamura, T. Liver regeneration, liver cancers and cyclins / T. Kitamura, S. Watanabe, N.J. Sato // Gastroenterol. Hepatol. 1998. - № 13.-P. 96-99.

334. Kobayashi, Y. Regulatory mechanism of bone resorption: roles of bone remodeling-regulatory cytokines 'osteokines' in osteoclast differentiation and function / Y. Kobayashi, N. Takahashi // Nippon Rinsho. 2003. - Vol. 61, № 2. - P. 200-206.

335. Kupffer cell function in chronic liver injury and after partial hepatectomy / K. Hamazaki, S. Sato, M. Yunoki et al. // Res. Exp. Med. (Berl).- 1994.-Vol. 194, №4.-P. 237-246.

336. Langerhans cell density and serological changes following intradermal immunisation of mice with dengue 2 virus / S. Taweechaisupapong, S. Sriurairatana, S. Angsughakorn et al. // J. Med. Microbiol. 1996. - № 2. -P. 138-145.

337. Lavrisheva, G.I. Problems in reparative regeneration of bone tissue / G.I. Lavrisheva // Stomatologiia (Mosk). 2003. - T. 82, № 3. - C. 65-9.

338. Leibovich, S.J. The role of the macrophage in wound repair. A study with hydrocortisone and antimacrophage serum / S.J. Leibovich, R. Ross // Am. J. Path. 1975. - Vol. 78. - P. 71-101.

339. Leor, J. Myocardial tissue engineering: creating a muscle patch for a wounded heart / J. Leor, S. Cohen // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2004. - Vol. 1015.-P. 312-319.

340. LeRoy, E.C. Cytokines and human fibrosis / E.C. LeRoy, M.I. Trojanowska, E.A. Smith // Eur. Cytokine Netw. 1990. - Vol. 1, № 4. - P. 215-219.

341. Leu-3/T4 expression on epidermal Langerhans cells in normal and diseased skin / V. Groh, H. Tani, A. Harrer et al. // J. Invest. Dermatol. -1986.-Vol. 860, №2.-P. 115-120.

342. Lewis, T.A. Gallium arsenide modulates proteolytic cathepsin activities and antigen processing by macrophages / T.A. Lewis, C.B. Hartmann, K.L. McCoy //J. Immunol. 1998. - № 5. - P. 2151-2157.

343. Liver regeneration after resection: molecular and cellular mechanism / G. Wakabayashi, M. Shimazu, M. Ueda et al. // Nippon Geka Gakkai Zasshi.-2004.-Vol. 105, № 10.-P. 650-3.

344. Liver regeneration following partial hepatectomy and stimulation by cirrhotic and non-cirhotic rats / T.L. Hwang, H.C. Yu, P.C. Chen, M.F. Chen // Res. Exp. Med. (Br). 1995. - Vol. 195, № 4. - P. 201-208.

345. Lobb, R. Purification and characterization of endothelial cell growth factors / R. Lobb, J. Sasse, R. Silvian // J. Biol. Chem. 1986. - Vol. 261. -P. 1924-1928.

346. Lovdal, T. Transcription of Fc(gamma) receptors in different rat liver cells / T. Lovdal, T. Berg // Cell Biol. Int. 2001. - Vol. 25, № 8. - P. 821824.

347. Lower cytokine release by fetal porcine platelets: a possible explanation for reduced inflammation after fetal wounding / O.O. Olutoye, D.R. Yager, I.K. Cohen, R.F. Diegelmann // J. Pediatr. Surg. 1996. -Vol. 31, № 1.-P. 91-5.

348. Lucht, V. Uptake of peroxidase by calcitonin in inhibited osteoclasts / V. Lucht, J.O. Norgaard // Histochemistry. 1977. - Vol. 54. - P. 143.

349. Lung, E.A. The Origin and Nature of Microglia / E.A. Lung // Advances in Cellular Neurobiology / eds. by S. Fedoroff, L. Hertz. N. Y, 1981.-Vol. 2.-P. 72-78.

350. Mackie, R.M. Quantitation of dendritic cells in normal and abnormal human epidermis using monoclonal antibodies directed against la and HTA antigens / R.M. Mackie, M.L. Turbitt // J. Invest. Derm. 1983. -Vol. 81, №3.-P. 216-220.

351. Macrophage activation and immunomodulation by myeloperoxidase / D.L. Lefkowitz, K. Mills, D. Morgan, S.S. Lefkowitz // Proc. Soc. Exsp. Biol. Med.- 1992.-Vol. 199, № 2. P. 204-210.

352. Macrophages overloaded with tissue debris in Wegener's granulomatosis / Z. Mackiewicz, A. Rimkevicius, J. Petersen et al. // Ann. Rheum. Dis. 2005. - Vol. 64, № 8. - P. 1229-32.

353. Mainardi, C.L. Effect of dexametason, indomethacin and lypopolysaccaride on the secretion of intestinal collagenase and type V collagenase by cultured macrophages / C.L. Mainardi // Biochem. Biophys. Acta. 1984. - Vol. 805. - P. 137-142.

354. Matrix metalloproteinase induction in fibrosis and fibrotic nodule formation due to silica inhalation / J.F. Scabilloni, L. Wang, J.M. Antonini et al. // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2005. - Vol. 288, № 4. -P. 709-717.

355. Matrix metalloproteinase induction in post-transplant obliterative bronchiolitis / L.M. Eerola, H.S. Alho, P.K. Maasilta et al. // J. Heart Lung Transplant. 2005. - Vol. 24, № 4. - P. 426-32.

356. Messner, K. Meniscal regeneration or meniscal transplantation / K. Messner// Scand. J. Med. Sci. Sports. 1999. - Vol. 9, № 3. - P. 162-167.

357. Miyazono, К. The mechanism of action of transforming growth factor-beta / K. Miyazono, C.H. Heldin // Gastroenterol. Jpn. 1993. - Vol. 28.-Suppl. 4.-P. 81-85.

358. Mohammed, F.F. Thinking outside the cell: proteases regulate hepatocyte division / F.F. Mohammed, R. Khokha // Trends Cell Biol. -2005.-Vol. 15, № 10.-P. 555-563.

359. Monocyte, macrophage and foreign body giant cell interacitions with moleculary engineered surfaces / J.M. Anderson, K. Defife, A. McNally et al. //J. Mater. Sci. Mater. Med. 1999. - Vol. 10-11. - P. 579-588.

360. Moulin, V. Growth factors in skin wound healing / V. Moulin // Eur. J. Cell Biol.- 1995.-Vol. 68, № l.-P. 1-7.

361. Murabe, Y. Cell Tissue Res. Morphological studies on neuroglia. VI. Postnatal development of microglial cells / Y. Murabe, Y. Sano // Cell Tissue Res. 1982. - Vol. 225, № 3. - P. 469-485.

362. Murine langerhans cells cultured under serum-free conditions mature into potent stimulators of primary immune responses in vitro and in vivom / A. Kocikova, A. Kolesaric, F. Koszik et al. // J. Immunol. 1998. - № 8. -P. 4033-4041.

363. Myofibroblast^ differentiation leads to hyaluronan accumulation through reduced hyaluronan turnover / R.H. Jenkins, G.J. Thomas, J.D. Williams, R. Steadman // J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279, № 40. - p. 41453-60.

364. NAD(P)H oxidase 4 mediates transforming growth factor-beta 1-induced differentiation of cardiac fibroblasts into myofibroblasts / I. Cucoranu, R. Clempus, A. Dikalova et al. // Circ. Res. 2005. - Vol. 97, № 9. - P. 900-907.

365. Nathan, C. Mechanisms and modulation of macrophage activation / C. Nathan // Behring Inst. Mitt. 1991. - Vol. 88. - P. 200-7.

366. Nathan, C.F. Secretion of oxygen intermediates: role in effector functions of activated macrophages / C.F. Nathan // Fed. Proc. 1982. -Vol. 41.-P. 2206-2211.

367. Nathan, C.F. Secretory products of macrophages / C.F. Nathan // J. Clin. Invest. 1987. - Vol. 79, № 2. - P. 319-26.

368. Natural inhibitor of TGF-beta protects against scarring in experimental kidney disease / W.A. Border, N.A. Noble, T. Yamamoto et al. // Nature. 1992. - Vol. 360. - P. 361-364.

369. Nelson, D. The immunobiology of macrophages. N. Y.: Acad. Press, 1976.-256 p.

370. Nijweide, P.J. Cells of bone: proliferation, differentiation and hormonal regulation / P.J. Nijweide, E.H. Burger, J.H.M. Feyen // Physiol. Rev. 1986. - Vol. 66, № 4. - P. 855-886.

371. Nikol'skii, V.Iu. Morphologic analysis of reparative osteogenesis in cases of immediate dental implantation in experiments on rabbits / V.Iu. Nikol'skii // Stomatologiia (Mosk.). -2005. -T. 84, № 3. C. 8-12.

372. Nitrous acid pretreatment of tendon xenografts cross-linked with glutaraldehyde and sterilized with gamma irradiation / K.A. Johnson, G.J. Rogers, S.C. Roe et al. // Biomaterials. 1999. - Vol. 20, № 11. - P. 1003-1015.

373. Novel tissue-engineered biodegradable material for reconstruction of vascular wall / S. Iwai, Y. Sawa, S. Taketani et al. // Ann. Thorac. Surg. -2005.-Vol. 80, №5.-P. 1821-7.

374. Okazaki, I. Formation of liver fibrosis to cirrhosis from the aspect of collagen degradation /1. Okazaki, K. Maruyma // Exp. Pathol. 1985. -Vol. 28.-P. 137-138.

375. Osteoclast morphology in autosomal recessive malignant osteopetrosis due to a TCIRG1 gene mutation / E. Bruder, T. Stallmach, K. Peier et al. // Pediatr. Pathol. Mol. Med. 2003. - Vol. 22, № 1. - P. 3-9.

376. Participation of bone marrow derived cells in cutaneous wound healing / E.V. Badiavas, M. Abedi, J. Butmarc et al. // J. Cell Physiol. -2003. Vol. 196, № 2. - P. 245-50.

377. Pathomorphology of acute and chronic stages of CCl-4-induced liver fibrosis: immunohistochemical and in situ hybridization studies / H. Herbst, S. Milani, O. Heinrichs, D. Schuppan // Z. Gastroenterol. 1992. -Vol. 30. - Suppl. 1.-P. 21-28.

378. Peguet-Navarro, J. La fonction de presentation antigenique des cellules dendritiques / J. Peguet-Navarro // Pathol. Biol. 1995. - № 10. -P. 863-870.

379. Peter, R. Microbiogi des parodontalyses / R. Peter // Rev. Frans. Odonto. Stomat. 1970. - Vol. 17. - P. 1041-1062.

380. Platelet-derived growth factor С induces liver fibrosis, steatosis, and hepatocellular carcinoma / J.S. Campbell, S.D. Hughes, D.G. Gilbertson et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. - Vol. 102, № 9. - P. 338994.

381. Platelet-derived growth factor induces fetal wound fibrosis / J.H. Haynes, D.E. Johnson, В .A. Mast et al. // J. Pediatr. Surg. 1994. - Vol. 29, № 11.-P. 1405-1408.

382. Pober, J.S. Cytokines and endothelial cell biology / J.S. Pober, R.S. Contran // Physiol. Rev. 1990. - Vol. 70, № 2. - P. 427-451.

383. Postlethwaite, A.E. Fibroblast. Inflamation basic principles and clinical correlates / A.E. Postlethwaite, A.H. Kang // Inflammation / ed.by J. Gallin. N.Y.: Raven Press, 1988. - P. 577-597.

384. Postlethwaite, A.E. Role of T cells and cytokines in effecting fibrosis / A.E. Postlethwaite // Int. Rev. Immunol. 1995. - Vol. 12, № 2-4. - P. 247-258.

385. Potten, C.S. A model implicating the Langerhans cell in keratinocyte proliferation cjntrol / C.S. Potten, T.D. Allen // Differetuation. 1976. -Vol. 5. - P. 43-47.

386. Poulter, L.W. Antigen presenting cells in situ: their identification and involvement in immunopathology / L.W. Poulter // Clin. Exp. Immunol. -1983.-Vol. 53, N3.-P. 513-20.

387. Production of IL-lb by cultured human monocytes and murine microglia in response to b-amyloid / E. Prat, L. Meda, P.L. Baron et al. // Clin. Neuropathol. 1996. - № 3. - P. 180.

388. Production of pro- and anti-fibrotic agents by rat Kupffer cells; the effect of octreotide / C. Xidakis, D. Ljumovic, P. Manousou et al. // Dig. Dis. Sci. 2005. - Vol. 50, № 5. - P. 935-941.

389. Production of transforming growth factor-beta by cultured rat mesangial cells / J. Yao, L. Li, F. Shimizu, T. Oite // Chin. Med. J. (Engl.). 1995. - Vol. 108, № 11. - P. 820-824.

390. Proinflammatory cytokines differentially regulate hyaluronan synthase isoforms in fetal and adult fibroblasts / C.I. Kennedy, R.F. Diegelmann, J.H. Haynes, D.R. Yager // J. Pediatr. Surg. 2000. - Vol. 35, № 6. - P. 874-879.

391. Proliferation of mature and immature subpopulations of bronchoalveolar monocytes/macrophages and peripheral bood monocytes / P.Th.W. van Hal, J.M. Wijkhuijs, P.G.H. Mulder et al. // Cell Proliferat. -1995.-Vol. 10.-P. 533-543.

392. Pulverulent alloplant as a new bioimmunomodulator / E.R. Muldashev, S.V. Sibiryak, S.A. Muslimov et al. // Arch. Pharm. 1998. -Vol. 358, № l.-P. 729.

393. Quantitation of cutaneous Langerhans cells of sarcoidosis patients / J. Fox, B. Berman, A. Teirstein et al. // J. Invest. Derm. 1983. - Vol. 80. -P. 472-475.

394. Reddi, A.H. Biochemical sequences in the transformation of normal fibroblasts in adolescent rats / A.H. Reddi, C. Huggins // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1972.-Vol. 69.-P. 1601-1605.

395. Regulation of cell-substrate adhesion by proteoglycans immobilized on extracellular substrates / M. Yamagata, S. Suzuki, S.K. Akiyama et al. //J. Biol. Chemistry. 1989. - Vol. 264. - P. 8012-8018.

396. Regulation of endotoxin-induced IL-6 production in liver sinusoidal endothelial cells and Kupffer cells by IL-10 / P.A. Knolle, E. Loser, U. Protzer et al. //Clin. Exp. Immunol. 1997. - Vol. 3. - P. 555-561.

397. Reid, C.D.L. The dendritic cell lineage in haemopoiesis / C.D.L. Reid // Br. J. Haematol. 1997. - № 2. - P. 217-223.

398. Reise, S.C. Phagocytosis of by Langerhans cell in vitro / S.C. Reise, P.D. Stahl, J.M. Austyn //J. Exp. Med. 1993. - № 178. - P. 509-519.

399. Role of lipopolysaccharide and tumor necrosis factor-aa in induction of hepatocyte necrosis / J.H. Wang, H.P. Redmond, R.W.G. Watson, D. Bouchier-Hayes // Am. J. Physiol. 1995. - Vol. 269, № 2. - Pt. 1. - P. 297-304.

400. Role of macrophages in regeneration of liver / Y. Shiratori, Sh. Hongo, Y. Hikiba et al. //Dig. Dis. Sci. 1996. - Vol. 41. - P. 1939-1946.

401. Role of myofibroblasts during normal tissue repair and excessive scarring: interest of their assessment in nephropathies / C. Badid, N. Mounier, A.M. Costa, A. Desmouliere // Histol. Histopathol. 2000. - Vol. 15,№ l.-P. 269-80.

402. Romen, W. Diffuse glomerulosclerosis--a dysfunction of the mesangium? A morphometric study of the rat's kidney / W. Romen, R. Morath // Virchows. Arch. Cell Pathol. 1979. - Vol. 31. - P. 205-210.

403. Roske, A. Monocytes and Macrophages / A. Roske, P. Lipsky // Textbook of Reumatology / ed. W.N. Kelloy, E.D. Harris, W Saunders. -Philadelphia, 1989. P. 346-366.

404. Ross, R. Atherosclerosis an inflammatory disease. Atherosclerosis -an inflammatory disease / R. Ross // Fibrinolysis. - 1996. - 44 c.

405. Ross, R. The fibroblast and wound repair / R. Ross // Biol. Rev. -1968.-Vol. 43.-P. 51-96.

406. Rowden, G. Expression of la antigen on Langerhans cells in mice, guinea pigs and man / G. Rowden // J. Invest. Dermatol. 1980. - Vol. 75. -P. 22-31.

407. Salamon, A. Development of collagenous fibres in autologous and preserved homologous tendon grafts / A. Salamon, J. Hamori // Acta. Morphol. Acad. Sci. Hung. 1976-1977. - Vol. 24, № 1-2. - P. 11-22.

408. Schmitt, D. Reponse immunitaire de la peau / D. Schmitt // Rev. Fr. Allergol. Immunol. Clin. 1995. - № 5. - P. 447-454.

409. Schmitt-Graff, A. Heterogeneity of myofibroblast phenotypic features: an example of fibroblastic cell plasticity / A. Schmitt-Graff, A.

410. Desmouliere, G. Gabbiani // Virchows. Arch. 1994. - Vol. 425, № 1. -P. 3-24.

411. Schocklmann, H.O. Regulation of mesangial cell proliferation / H.O. Schocklmann, S. Lang, Sterzel // Kidney Int. 1999. - Vol. 56, № 4. - P. 1199-207.

412. Schuler, G. A comparison of murine epidermal Langerhans cells with spleen dendritic cells / G. Schuler, N. Romani, R.M. Steinman // J. Invest. Dermatol. 1985. - Vol. 85, № 1. - P. 99-106.

413. Schuller, G. Isolation and characterization of interferon-producing reticuloepithelial cell from mouse epidermis / G. Schuller, J. Кое, A. Fowler// Clin. Immunol. Immunopathol. 1984. - Vol. 31, № 3. - P. 331343.

414. Schweigerer, K. Capillary endothelial cells express basic fibroblast growth factor / K. Schweigerer, G. Neufeld, D. Gospadoriwicz // Nature. -1987.-Vol. 325.-P. 257-259.

415. Sebad, J. Anatomie et physiologie du corps vitre / J. Sebad // Encyclved. Chir. (Paris-France), Ophtalmologie, 21-020-E-10,1995. 8 p.

416. Secretion of matrix metalloproteinase-9 by macrophages, in vitro, in response to Helicobacter pylori FEMS / P.J. Bergin, W. Sicheng, P.H. Qiang, Q.J. Marianne // Immunol. Med. Microbiol. 2005. - Vol. 45, № 2. -P. 159-69.

417. Seiffert, K.E. Biological aspects of collagenous homografts / K.E. Seiffert // Acta Otorhinolaryngol. Belg. 1970. - Vol. 24, № 1. - P. 27-33.

418. Seiffert, K.E. Biologische grundlagen der homologen transplantation konservieter bindegewebe. Berlin et al.: Springer-Verlag, 1967. - P.2-3.

419. Seitzer, U. A human in vitro granuloma model for the investigation of multinucleated giant cell and granuloma formation / U. Seitzer, H. Haas, J. Gerdes // Histol. Histopathol. 2001. - Vol. 16, № 2. - P. 645-53.

420. Seljelid R., Eskeland T. The biology of macrophages: I. General principles and properties / R. Seljelid, T. Eskeland // Eur. J. Haemat. -1993. Vol. 51, № 5. - P. 267-275.

421. Seljelid, R. The biology of macrophages: II. Inflammation and tumors / R. Seljelid, T. L. Busund //. Eur. J. Haematol. 1994. - Vol. 52, № 1. - P. 1-12.

422. Serial analysis of gene expression in human monocytes and macrophages / S. Hashimoto, T. Suzuki, H. Dong et al. // Blood. 1999. -Vol. 3. - P. 837-844.

423. Sherlock, S. Diseases of the Liver and Biliary Sistem / S. Sherlock, J. Dooley // Tenth Edition Blackwell Science. 1997. - P. 129-132.

424. Shin, D.The effect of myofibroblast on contracture of hypertrophic scar / D. Shin, K.W. Minn // Plast. Reconstr. Surg. 2004. - Vol. 113, № 2.-P. 633-40.

425. Shiratori, Y. Different clinicopathological features of hepatitis B- and C-related hepatocellular carcinoma / Y. Shiratori // J. Gastroenterol. Hepatol. 1996. - Vol. 11, № 10. - P. 942-943.

426. Shrikant, P. The central nervous system as an immunocompetent organ: role of glial cells in antigen presentation / P. Shrikant, E.N. Benveniste // J. Immunol. 1996. - № 5. - P. 1819-1822.

427. Silbert, J.E. Intracellular membranes in the synthesis, transport, and metabolism of proteoglycans / J.E. Silbert, G. Sugumaran // Biochim. Biophys. Acta. 1995. - Vol. 1241, № 3. - P. 371-84.

428. Slavin, J. The role of cytokines in wound healing / J. Slavin // J. Pathol. 1996.-№ l.-P. 5-10.

429. Sminia, T. The origin of osteoclasts: an immunohistochemical study on macrophages and osteoclasts in embryonic rat bone / T. Sminia, C.D. Dijkstra // Calcif. Tissue Intern. 1986. - Vol. 39, № 4. - P. 263-266.

430. Snyderman, P. Structure and function of monocytes and macrophages / P. Snyderman, M. Pike // Arthritis and allied conditions / ed. by D. McCarty. N.Y.: Leaa. Febiger, 1989. - P. 306-335.

431. Sobiczwska, E. The role of selected growth factors in the wound healing process / E. Sobiczwska, S. Szmigielski // Przegl. Lek. 1997. -Vol. 54, № 9. - P. 634-638.

432. Sorgente, O.N. Inhibition of endothelial proteoglycans immobilized on extracellular substrates / O.N. Sorgente, C.K. Dorey // J. Biol. Res.1980.-Vol. 128.-P. 63-71.

433. Spiteri, M.A. Alveolar macrophages that suppress T-cell response may be crucial to the pathogenic outcome of pulmonary sarcoidosis / M.A. Spiteri, S.W. Clarke, LW. Poulter // Eur. Respir. J. 1992. - Vol. 5. - P. 394-403.

434. Spiteri, M.A. Characterization of immune inducer and suppressor macrophages from the normal human lung / M.A. Spiteri, L.W. Poulter // Clin. Exp. Immunol. 1991. - Vol. 83. - P. 157-162.

435. Staquet, M.-J. Adherence et migration des cellules dendritiques epidermiques / M.-J. Staquet // Pathol. Biol. 1995. - № 10. - P. 858-862.

436. Steinman, R.M. Dendritic cells / R.M. Steinman // Transplantation.1981.-Vol.31,№3.-P. 151-5.

437. Stimulation by concanavalin A of cartilage-matrix proteoglycan synthesis in chondrocyte cultures / W.Q. Yan, K. Nakashima, M. Iwamoto, Y. Kato // J. Biol. Chem. 1990. - Vol. 265, № 17. - P. 10125-31.

438. Streit, W.J. The Brain's immune system / W.J. Streit, C.A. Kincaid-Colton // Sci. Am. 1995. - № 5. - P. 38-43.

439. Study of mechanisms of anti-irradiation effects of interleukin-lbeta in long-term bone marrow cultures / V.G. Lebedev, B.B. Moroz, I.B. Deshevoi et al. // Radiats. Biol. Radioecol. 2002. - Vol. 42, № 1. - P. 60-64.

440. Sutherland, J. Motogenic substrata and chemokinetic growth factors for human skin cells / J. Sutherland, M. Denyer, S. Britland // J. Anat. -2005. Vol. 207, № 1.-P. 67-78.

441. Svensson, M. Bone marrow-derived dendritic cell can process bacteria for MHC-I and MHC-II presentation to T cells / M. Svensson, B. Stockinger, M.J. Wick // J. Immunol. 1997. - № 158. - P. 4229-4236.

442. Synthesis and sorting of proteoglycans / J.E. Silbert, G. Sugumaran, K. Prydz, K.T. Dalen // J. Cell Sci. 2000. - Vol. 113, № 2. - P. 193-205.

443. Takezawa, R. Direct evidence of macrophage differentiation from bone marrow cells in the liver: a possible origin of kupffer cells / R. Takezawa, Y. Watanabe, T. Akaike // J. Biochem. 1995. - № 6. - P. 11751183.

444. Tamaki K. The origin of Langerhans cells / K. Tamaki, G. Stingl, S.I. Katz // J. Invest. Dermatol. 1980. - Vol. 74, № 5. - P. 309-3011.

445. Tauro, J.C. Comparison of bovine collagen xenografts to autografts in the rabbit / J.C. Tauro, J.R. Parsons, J. Ricci et al. // Clin. Orthop. 1991. -Vol. 266.-P. 271-284.

446. TGF-beta antisense oligonucleotides reduce mRNA expression of matrix metalloproteinases in cultured wound-healing-related cells / K. Philipp, F. Riedel, G. Germann et al. // Int. J. Mol. Med. 2005. - Vol. 15, №2.-P. 299-303.

447. TGF-beta isoforms in renal fibrogenesis / L. Yu, W.A. Border, Y. Huang, N.A. Noble // Kidney Int. 2003. - Vol. 64, № 3. - P. 844-856.

448. The effect of antirheumatic agents on macrophage function / P. Davies, R. Bonney, J. Humes et al. // Int. J. Immunopharmacol. 1982. -Vol. 4.-P. 111-118.

449. The fibronectin domain ED-A is crucial for myofibroblastic phenotype induction by transforming growth factor-betal / Serini G, Bochaton-Piallat M.L, Ropraz P. et al. // J. Cell Biol. 1998. - Vol. 142, № 3.-P. 873-81.

450. The human osteoclast precursor circulates in the monocyte fraction / Y. Fujikawa, J.M.W. Quinn, A. Sabokbar et al. // Endocrinology. 1996.- Vol. 9. P. 4058-4060.

451. The immune response against Francisella tularensis liver vaccine strain in Lps{n} and Lps{d} mice / A. Macela, J. Stulik, L. Hernychova et al. // FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1996. - № 3. - P. 235-238.

452. The Influence of the "Alloplant" Series Transplant Extract for Eyelid Plasty upon the Cells Culture DNA Synthesis / E.R. Muldashev, J. Wieman, N.N. Kurchatova et al. // Bull. Exp. Biol. Med. 1994. - Vol. 1.- P. 75-79.

453. The local effects of Cachectin/Tumor Necrosis Factor on Wound Healing / G.D. Salomon, A. Kasid, D.T. Cromack et al. // Ann. Surg. -1991.-Vol. 214, №2.-P. 175-180.

454. The phenotype of alveolar macrophages and its correlation with immune cells in bronchoalveolar lavage /1. Striz, Y.M. Wang, I. Svarcova et al. //Eur. Respir. J. 1993. - Vol. 6. - P. 1287-1294.

455. The presence of cytokines in Langerhans' cell histiocytosis / J.H. Graaf, R.Y.J. Tamminga, A. Dam-Meiring et al. // J. Pathol. 1996. - № 4. p. 400-406.

456. The role of inflammatory cytokines in wound healing: accelerated healing in endotoxin-resistant mice / D.A. Bettinger, J.V. Pellicane, W.C. Tarry et al. //J. Trauma. 1994. - Vol. 36, № 6. - P. 810-3.

457. The role of Kupffer cells after major liver surgery / H.A. Prins, C. Meijer, P.G. Boelens et al. // J. Parenter Enteral. Nutr. 2005. - Vol. 29, № l.-P. 48-55.

458. The role of Kupffer cells in liver regeneration / T. Takeishi, K. Hirano, T. Kobayashi et al. // Arch. Histol. Cytol. 1999. - Vol. 62, № 5. - P. 413-422.

459. The underlying cellular mechanism of fibrosis / H.P. Rodemann, A. Binder, A. Burger et al. // Kidney Int. Suppl. 1996. - Vol. 54. - P. 32-36.

460. Thivolet, J. La cellule de Langerhans / J. Thivolet // Presse. Med. -1985.-Vol. 14.-P. 883-888.

461. Thompson, C.B. Distinct roles for the costimulatory ligands B7-1 and В7-2 in T helper cell differentiation / C.B. Thompson // Cell. 1995. - Vol. 81.-P. 979-982.

462. Thrombospondin modulates adhesion, proliferation and production of extracellular matrix in mesangial cells / H. Tada, H. Kawai, H. Ishii et al. // Tohoku. J. Exp. Med. 1995. - Vol. 177, № 4. - P. 293-302.

463. Tissue engineering of nearly transparent corneal stroma / X. Hu, W. Lui, L. Cui et al. // Tissue Eng. -2005. -Vol. 11, № 11-12.-P. 1710-7.

464. Transforming growth factor beta (TGF-beta) induces fibrosis in a fetal wound model / T.M. Krummel, B.A. Michna, B.L. Thomas et al. // J. Pediatr. Surg. 1988. - Vol. 23, № 7. - P. 647-652.

465. Transforming growth factor betas and their receptors in human liver cirrhosis / H.U. Baer, H. Friess, M. Abou-Shady et al. // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 1998. - Vol. 10, № 12. - P. 1031-1039.

466. Treatment of cirrhotic rats with epidermal growth factor and insulin accelerates liver DNA synthesis after partial hepatectomy / Hashimoto M., P.C. Kothary, F.E. Eckhauser, S.E. Raper // J. Gastroenterol. Hepatol. -1998. Vol. 13, № 12. - P. 1259-1265.

467. Turk, J.L. The monocyte-macrophage system in granulomatous inflammation / J.L. Turk, R.B. Narayanan // Haematol. Blood Transfus. -1981.-Vol. 27.-P. 101-107.

468. Turk, J.L. The origin, morphology, and function of epithelioid cells / J.L. Turk, R.B. Narayanan // Immunobiology. 1982. - Vol. 161, № 3-4. -P. 274-282.

469. Unanue, E.R. Regulation of immunity and inflammation by mediators from macrophages / E.R. Unanue, D. Beller // Am. J. Pathol. 1976. - Vol. 85.-P.465-478.

470. Uncoupling of cell cycle arrest from the expression of monocytic differention markers in HL60 cell variants / G.P. Studzinski, B. Rathod, Q.M. Wang et al. // Exp. Cell Res. 1997. - Vol. 2. - P. 376-387.

471. Universal hepatitis В vaccination in Taiwan and the incidence of hepatocellular carcinoma in children / M.-N. Chang, C.-J. Chen, M.-S. Lai et al. // N. Engl. J. Med. 1997. - Vol. 336. - P. 1855-1859.

472. Up-regulation of collagen and tissue inhibitors of matrix metalloproteinase in colonic diverticular disease / T. Mimura, A.C. Bateman, R.L. Lee et al. // Dis. Colon. Rectum. 2004. - Vol. 47, № 3. -P. 371-378.

473. Vergana, N.M. CNS regeneration: a morphogen's tale / N.M. Vergana, Y. Aarsenijevic, K. Del Rio-Tsonis // J. Neurobiol. 2005. - Vol. 64, № 4. -P. 491-507.

474. Versen, R. von. Verfahren zur Herstellung von Weichteilpreparaten fur die Klinische Anwendung / R. von Versen, G. Matthes, Schimmack // 3rd International Meeting of Tissue Bank Specialists. Rostock, 1990. -Abst. № 46.

475. Waxman, S.G. Correlative Neuroanatomy / ed. P. Hall. 23rd. - 1996. -P. 12-54.

476. Werb, Z. Plasma membrane synthesis in the macrophage following phagocytosis of polystyrene latex particles / Z. Werb, Z.A. Cohn // J. Biol. Chem. 1972. - Vol. 247, № 8. - P. 2439-46.

477. Wisse E., W.Th. Daems // Mononuclear Phagocutes. Oxford: Blackwell, 1970. - P. 200-209.

478. Woessner, J.F.Jr. Matrix metalloproteinases and their inhibitors in connective tissue remodeling / J.F. Woessner Jr. // FASEB J. 1991. -Vol. 5.-P. 2145-2154.

479. Zajicek, G. The streaming liver / G. Zajicek, R. Oren, M. Weinreb Jr. // Liver. 1985. - Vol. 5. - P. 293-300.

480. Zaripov, Ch.A. Endoscopic treatment of peptic gastroduodenal ulcers using «Alloplant». Approaching a New Era in Insight, Innovation, and Mutial Understanding / Ch.A. Zaripov, R.T. Ibragimov, S.A. Muslimov. -Japan, 1996.-P. 222.

481. Zhang, K.G. Periosteum construction in vitro by small intestinal submucosa combined with bone marrow mesenchymal stem cell / K.G. Zhang, B.F. Zeng, C.Q. Zhang // Zhonghua Wai Ke Za Zhi. 2005. - Vol. 43, №24.-P. 1594-1597.