Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов при хроническом гломерулонефрите у человека

Абрамова, Таисия Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов при хроническом гломерулонефрите у человека
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов при хроническом гломерулонефрите у человека"

На правах рукописи

АБРАМОВА ТАИСИЯ ВЛАДИМИРОВНА

ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТЕ У

ЧЕЛОВЕКА

03.00.25 - гистология, цитология, клеточная биология 14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург - 2005

Работа выполнена в Государственном Учреждении Научно-исследовагельский институт экспериментальной медицины Российской Академии Медицинских Наук

Научный руководитель, доктор биологических наук Рыбакина Елена Георгиевна

Официальные оппоненты

доктор биологических наук Пигаревский Петр Валерьевич доктор биологических наук Суховская Ольга Анатольевна

Ведущая организация- Г'ОУ ВПО Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени акад. И П Павлова

Защита состоится ¿/¿¿^З^Л* 2005 г в часов на заседании

диссертационного совета Д001022 02 при ГУ Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН по адресу 197376, Санкт-Петербург, ул Акад Павлова, д. 12.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГУ Научно-исследовательский институт экспериментальной медицины РАМН по адресу: 197376, Санкт-Петербург, ул Акад Павлова, д. 12

Автореферат разослан -Д.-

?2005г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Е.С Петрова

jMOfzL IJcvf

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность проблемы

Гломерулонефрит - обобщенное название заболеваний почек, при котором происходит первичное вовлечение в патологический процесс клубочков с последующим поражением канальцев и интерстиция, что приводит к прогрессированию заболевания, а в итоге - к развитию хронической почечной недостаточности (Рябов С И , 2000)

В группе заболеваний почек и мочевыволяших путей гломерулонефрит (ГН) занимает 3-4-е место, уступая по распространенности только пиелонефриту и мочекаменной болезни (Григорьев F А , 1988, Рябов СИ, 2000; Храйчик ДЕ.. 2001, Арупонян В М и соавтр , 2002) В связи с распространением хронических форм болезни, доля пациентов с ГН среди больных почечной недостаточностью, направленных на гемодиализ и трансплантацию, постоянно возрастает (Григорьев Е А , 1988; Рябов С И, 2000)

В настоящее время патофизиоло! ические механизмы, ведущие к прогрессированию хронического гломерулонефрита (ХГН), принято разделять на иммунные и неиммунные - гемодинамические и метаболические Ранее считалось, что основную роль в развитии ХГН играют иммунные комплексы и антитела к базальной мембране клубочков Сейчас этим факторам повреждения отводят важную роль скорее в индукции процесса (Тареева И Е , 1996) При исследовании пролиферативных форм ХГН у людей особое внимание уделяется гуморальным (системе комплемента, кининам, вазоактивным аминам, метаболитам арахидоновой кислоты) и клеточным (нейтрофилы, тромбоциты, моноциты, макрофаги, лимфоциты) медиаторам воспаления в почечной ткани (Шилов Е М 2000)

Известно, что нейтрофильные гранулоциты участвуют в развитии патофизиологических процессов при многих заболеваниях, высвобождая комплекс различных агентов, нарушающих нормальную деятельность клеток и разрушающих соединительную ткань (Маянский А Н, Маянский Д.Н., 1989) Не является исключением и ХГН (Johnson R et al, 1997), хотя роль нейтрофильных гранулоцигов при этой форме патологии исследовалась мало Так как нейтрофилы являются первыми эффекторными клетками, поступающими в очаг воспаления, изучение их функциональной активности при развитии и прогрессировании пролиферативных форм ГН является актуальной задачей

Перемещение нейтрофильных граиулоцитов из кровеносных -сосудов в ткань почки - важный фактор развития многих почечных заболеваний (Segerer S et al, 2000) Однако большинство исследований, подтверждающих активное участие нейтрофильных гранулоцигов в поражении почечной ткани, выполнено на экспериментальных моделях нефрита, патогенез которых значительно отличается от патогенеза первичных ХГН у человека В этих исследованиях обнаружено, что динамика развития клинико-морфологического синдрома связана с количеством и

активностью нейтрофильных гранулоцигов инфильтрирующих почечную ткань (Linas

S L etal, 1995: Huang X.R. et al., 1997)

Полученные на экспериментальных моделях данные свидетельствую г о том, что нейтрофилы привлекаются в почечную ткань иммунными комплексами и различными медиаторами воспаления (Noris М, Remuzzi GG, 1995; Donovan К L, et al, 1995; Kitching A.R et al., 2002) Активную роль при поступлении нейтрофилов в ткань играют различные адгезионные молекулы, экспрессирующиеся как на нейтрофильных гранулоцигах, так и на эндотелии капилляров почечного клубочка (Tipping Р G et al, 1994, Lcfkowith J. В , 1997; Lai К N , 2002)

В настоящей работе проведено исследование функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови пациентов, страдающих ХГН, а именно lgA-нефропатией, мезанги&чьно-пролиферативнмм гломеручонефритом (МезПГН) и мембранозно-пролиферативным гломерулонефритом I типа (МПГН 1 типа) Исследованы изменения уровня экспрессии рецепторов к СЗЬ-компоненту комплемента на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных с ХГН, что позволило установить связь изменений данного показателя с изменением функций почек у пациентов с исследованными морфологическими формами пролиферативных ГН

Известно, что рецепторы нейтрофильных гранулоцигов к СЗЬ-компонекгу комплемента (Мас-1) функционально связаны с экспрессируемыми на мембране этих же клеток Fcy-рецепторами (Tang Т et al, 1997), которые участвуют в утилизации отложившихся в почечной ткани иммунных комплексов При использовании экспериментальной модели ГН установлено, что продукция активных форм кислорода нейгрофильными гранулоцитами инициируется через активацию Fсу-рецепторов (Suzuki Y et al, 2003) Исследования изменения уровня экспрессии Fcy-рецепторов на мембране нейтрофилов периферической крови при ХГН у человека не фо водились

Попадая в почечную ткань и принимая участие в реализации защитных функций (Westerhuis R et al, 2000), нейгрофильные гранулоциты могут поражать инфильтрируемую ткань в результате высвобождения свободных кислородных радикалов (Poelstra К et al, 1990, Baund L et al, 1992; Shah S V, 1995) или участия неокислительных механизмов (Matzner Y et al, 1985, Lehrer RI et al, 1993, JanofTA 1985) Катионные белки и пептиды (КБ), к которым относятся дефенсины, лизоцим, эластаза, катепсин G, лактоферрин, миелопероксидаза, обеспечивают антимикробный потенциал нейтрофилов, оказывая комплексное воздействие на структуру и обменные процессы фагоцитированных микроорганизмов, и обуславливают их киллинг (Кокряков В H, 1999) В то же время, КБ увеличивают проницаемость стенки кровеносных сосудов (Matzner Y et al, 1985) и даже вызывают ее повреждение (Harlan J M , 1987, Lehrer RI et al, 1993) Использованный в работе лизосомально-катионный тест (ЛКТ), позволил определить уровень содержания катионных белков в нейтрофильных гранулоцитах периферической крови пациентов, который характеризует функциэнальную активность нейтрофильных гранулоцигов

Поскольку повреждающая роль нейтрофильных гранулоцитов при ХГН не подвергается сомнению, актуальной задачей является поиск способов снижения их негативного влияния на инфильтрируемую почечную ткань (Ward К P. et al., 2000; Hruby Z et al, 2000; Stambe С et al, 2003) Поэтому информационно значимым представляется проведение корреляционного анализа показателей функциональной активности клеток нейтрофилыю-гранулоцитарного звена периферической крови при пролиферагивных формах хронического гломерулонефрита у людей с другими широко используемыми иммунологическими показателями и клинико-лабораторными данными, характеризующими функциональное состояние почек, полученными при обследовании госпитализированных пациентов. До настоящего времени подобные сведения в литературе отсутствуют

Таким образом, изучение функциональной активности нейтрофилов при различных морфологических формах ХГН у человека с одной стороны позволяет расширить существующие представления о патофизиологических механизмах развития этих заболеваний, а с другой - может иметь научно-практическое значение, позволяя определять тактику лечения больного и прогнозировать динамику развития процесса.

1.2. Цель и задачи исследования

Целью работы явилось исследование значения изменений функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови в развитии ХГН у больных, страдающих различными формами этого заболевания (мезангиально-пролиферативный гломерулонефрит, мембранозно-пролиферативный гломерулонефрит 1 типа, 1{>А- нефропатия)

В задачи работы входило:

1 Исследование содержания катионных белков в нейтрофильных гранулоцитах периферической крови у больных ^А-нефропатией, МезПГН, МПГН 1 типа и здоровых доноров;

2 Изучение уровня экспрессии Е+-реиепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных ^А-нефропатией, МезПГН, МПГН 1 типа и здоровых доноров;

3 Изучение уровня экспрессии СЗЬ+-реиепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных ^-нефропатией, МезПГН, МПГН 1 типа и здоровых доноров;

4 Изучение уровня экспрессии Рсу-рецегтгоров на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных ^А-нефропатией, МезПГН, МПГН 1 типа и здоровых доноров;

5 Исследование следующих иммунологических показателей- содержания в периферической крови пациентов различных субпопуляций лимфоцитов, уровня гемолитической активности комплемента сыворотки крови, концентрации циркулирующих иммунных комплексов и иммуноглобулинов М, в и А классов в сыворотке крови, определение наличия отложений иммуноглобулинов М, С и А классов в ткани почечных бжмггатов,

6. Определение корреляционных взаимосвязей между исследованными в работе функциональными показателями активности нейтрофильных гранулоцитов и данными лабораторных исследований госпитализированных больных. 13. Научная новизна исследования

Проведенное исследование позволило выявить ряд особенностей изменения функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови при МПГН 1 типа, ^А-нефропатии и МезПГН у людей

Впервые для этой цели проведена комплексная оценка уровня экспрессии Е+-, СЗЬ+- и Рсу-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической

крови, а также изучение содержания катионных белков и пептидов в непрофильных гранулоцигах при трех исследованных пролиферативных формах ХГН Использование ЛК'Г позволило получить новые данные о снижении содержания КБ в нейтрофильных гранулоцигах периферической крови при МПГН 1 типа, ^А-нефропатии и МезПГН у людей Впервые показано значительное повышение уровня экспрессии СЗЬ+-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных с изученными формами ХГН

Приоритетный характер носят результаты корреляционного анализа исследованных показателей и клинико-лабораторных данных, полученных при обследовании госпитализированных пациентов Они позволили выявить существенные различия в характере защитных реакций при МПГН 1 типа, ^А-нефропатии и МезПГН. Показано, что изменения уровня экспрессии Е+-, СЗЬ*- и Рсу-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови, а также содержания в них катионных белков и пептидов, коррелирует с изменением функции почек при МПГН 1 типа, ^А-нефропатии и МезПГН

1.4. Теоретическая и практическая значимость работы

Представленная работа, посвященная исследованию функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови при мембранозно-пролиферативном гломерулонефрите 1 типа, ^А-нефропатии и мезангиально-пролиферативном гломерулонефрите, носит фундаментально-прикладной характер. Результаты исследования расширяют и дополняют сложившееся в настоящее время представление о роли нейтрофильных гранулоцитов в прогрессировании изученных форм хронического гломерулонефрига. Основное значение работы состоит в установлении корреляции между изменениями изученных показателей функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической' крови и степенью активности развития МПГН 1 типа, ^А-нефроматии, МезПГН, определенной по изменению показателей, характеризующих функции почек

Комплекс проведенных исследований, а также их корреляционный анализ, выявили ряд взаимосвязей между изменениями показателей функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов и показателями, характеризующими функцию почек, позволяющих предложить новые критерии для прогнозирования течения МПГН 1 типа, ^-нефропатии, МезПГН у людей, основанные на оценке содержания КБ в нейтрофильных гранулоцигах, интенсивности экспрессии Е+-, СЗЬ+-

и Fcy-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитах, что может быть использовано в клинической практике

1.5. Основные положения, выносимые на защиту

1. В нейтрофильных гранулоцитах периферической крови больных мембранозно-пролиферативным гломерулонефригам 1 типа, lgA-нефропатией и мезангиально-пролиферативным гломерулонефритом снижено содержание катионных белков и повышена экспрессия СЗЬ+- рецепторов на плазматической мембране этих клеток Интенсивность экспрессии Fcy-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцигов у этих больных сохраняется в пределах нормальных величин

2 Уровень экспрессии Е+-рецепторов на плазматической мембране нейтрофильных гранулоцигов периферической крови у больных IgA-нефропатией и МезПГН ниже соответствующего показателя у здоровых людей У больных МПГН 1 типа этот показатель варьирует в пределах нормы.

3 Выявлены изменения коэффициентов корреляции функциональной активности нейтрофильных гранулоцигов периферической крови с иммунохимическими показателями сыворотки крови и субпопуляционным составом лимфоцитов периферической крови

4. Определены корреляционные зависимости между показателями функциональной активности нейтрофильных гранулоцигов и ряда показателей, характеризующих функциональное состояние почек, позволяющие предложить ряд новых прогностически значимых критериев прогрессирования МПГН 1 типа, IgA-нефропатии, МезПГН

1.6. Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 123 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов работы, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы из 154 источников, из них 115 - зарубежных авторов Работа проиллюстрирована 14 рисунками и 7 таблицами

1.7. Апробация работы

По теме диссертации опубликовано 13 научных работ в отечественных журналах, а также в сборниках по материалам Всероссийских и Международных конференций.

Материалы работы докладывались и обсуждались на заседаниях Отдела общей патологии и патофизиологии ГУ "НИИ ЭМ РАМН" совместно с НИИ нефрологии

СПбГМУ им акад И П Павлова (С Петербург) в 2003 и 2004 гг, а также на Российских и Международных научных конференциях 1-м съезде нефрологов России (Казань, Россия, 1994), 3-м еже1 одном Санш-Петербургском нефрологическом семинаре (СПб, Россия, 1995), 33-м Congress of EDTA (Amsterdam, the Netherlands, 1996), the Second Bantao Congress (Macedonia, Skopie, 1997), Научной конференции "Актуальные проблемы внутренней медицины и стоматологии", EDTA - ERA Annual Congress (Italy, Rimini, 1998), 2-м съезде нефрологов России (Москва, Россия, 1999), 9-ой Всероссийской конференции по физиологии и патологии почек и водно-солевого обмена (СПб, Россия, 2001), 5-м Конгрессе общества иммунологов и аллергологов (Москва, Россия, 2002)

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использована венозная кровь и биоптаты почечной ткани 56 больных ХГН, проходивших обследование и лечение в нефрологических отделениях №1 и №2 клиники пропедевтики внутренних болезней СПбГМУ им акад И.П Павлова и венозная кровь 12 практически здоровых человек У всех обследованных больных функция почек была сохранная Обследование проведено до начала патогенетической терапии Всем больным для установления диагноза ХГН была проведена прижизненная нефробиопсия Морфологическое исследование ткани нефробиоптата выполняли с помощью световой, иммунофлюоресценгной и электронной микроскопий. Забор крови производили из локтевой вены в стандартных условиях (утром, натощак), в сроки, максимально приближенные к нефробиопсии.

Морфологически у 20 обследованных был выявлен мембранозно-пролиферативный гломерупонефрит I типа (подтвержден электронно-микроскопическим исследованием), у 15 - lgA-нефропатия (на основании наличия отложений IgA, Х- и к-легких цепей иммуноглобулинов в свежезамороженных срезах почечного биоптата) и у 21 пациента - мезангиально-пролиферативный гломерулонефрит Иммунофлюоресценгное исследование нефробиоптата и некоторые иммунологические исследования проведены в лаборатории клинической иммунологии и морфологии НИО НИИ нефрологии (СПбГМУ им акад И П Павлова) Анализ срезов ткаии почки на световом уровне выполнила с н с Клемина И К. а электронно-микроскопическое исследование ткани нефробиоптата провела с н с Титова В А Изучение функциональной активности нейтрофильных гранулоцигов осуществлено на базе Отдела общей патологии и патофизиологии ГУ НИИ ЭМ РАМН

Суммарное содержание катионных белков в нейтрофильных гранулоцигах периферической крови определяли по методу В Е Пигаревского (1988) с последующим вычислением цитохимического показателя Изучение экспрессии рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов и лимфоцитов проводили методом розеткообразования Нейтрофильные гранулоциты выделяли из гепаринизированной периферической крови в желатиновом градиенте На их мембране изучали экспрессию Е+ СЗЬ+- (Петрова И В и соавтр , 1980), FclgGR+-peuerrropoB (Новиков Д Н , 1987) Экспрессию этих же рецепторов и FcIgMR+-penenropoB изучали также на мембране лимфоцитов, полученных из гепаринизированной крови в градиенте плотности фиколла-верографина (Boyum А , 1969) Подсчитывало» процент клеток, образующих розетки по отношению к общему количеству лейкоцитов Уровень комплемента в сыворотке крови определяли по 50% гемолизу эритроцитов барана (Kabat А , Mayer М , 1968) Концентрацию иммуноглобулинов классов М, G и А в сыворотке крови оценивали методом радиальной иммунодиффузии (Manchini G et at, 1965) Концентрацию циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови определяли путем осаждения с помощью полиэтиленгликоля (м м 6000) (Riho J et al, 1979)

Статистическую обработку данных проводили с использованием t-критерия Стьюденга Вычисляли коэффициенты линейной корреляции Пирсона (г) и непараметрические коэффициенты Спирмена (г5) (Гланц С , 1999) Полученные данные Обрабатывали с помощью программы "STATISTICА"

2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Показатели лизосомально-катионного теста нейтрофильных гранулоцитов и уровень экспрессии Е+-, СЗЬ*- и Fcy-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных хроническим гломерулонефритом и у здоровых доноров

У Здоровых людей значение среднего цитохимического коэффициента лизосомально-катионного теста, характеризующего содержание катионных белков в нейтрофильных гранулоцитах периферической крови, составляло 1,47 ± 0,020

При всех изученных морфологических формах ХГН у пациентов выявлено снижение показателей J1KT по сравнению с теми же показателями у здоровых людей

Показатели ЛКТ у больных с МПГН 1типа, 1^-нефропатией и МезПГН не различались Средние значения показателей ЛКТ у обследованных пациентов были следующими при МезПГН - 1,03 ± 0,044, при !§А-нефропатии - 0,92 ± 0,070, при МПГН 1 типа - 1,01 ±0,055

При изучении уровня экспрессии Е+-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулошпов периферической крови получены данные, представленные на рис. 1 У здоровых людей относительное количество нейтрофильных гранулоцигов, экспрессирующих на своей мембране рецепторы к эритроцитам барана, колебалось от 29% до 58% Среднее значение в группе здоровых людей составляло 39,8 ± 2,33 %.

Относительное количество нейтрофильных гранулоцигов периферической крови, экспрессируюших на своей мембране рецепторы к эритроцитам барана, у ботьных с ^А-нефропатией составляло 19,6 + 2,60 % и было снижено по сравнению с их количеством у здоровых доноров У больных с МезПГН этот показатель был также снижен - 28,9 ± 3,10% Снижения экспрессии Е+-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов не наблюдалось у больных с МПГН I типа, среднее значение относите пыю го содержания мейтрофилов, экспрессирующих Е+-рецепторы, у этих пациентов составляло 34,7 ± 3,85% Кроме того, установлено выраженное снижение экспрессии рецепторов к эритроцитам барана на мембране нейтрофильных гранулоцигов периферической кроии у бочьных с ^А-нефропатией

Среднее относительное количество нейтрофильных гранулоцитов, несущих на своей мембране рецепторы к СЗЬ-компоненту комплемента, у пациентов с ХГН превышало нормальные величины (8,1 ± 1,62%) (Рис 1), при этом не выявлены различия этих показателей у пациентов с исследованными морфологическими формами ХГН Среднее ошосительное кочичество нейтрофильных гранулоцигов экспрессирующих СЗЬ^-рсцешоры у больныл ХГН составляло у больных МезПГН -18,9 ± 2,86%, у пациентов с ^А-нефропатией - 19,6 ± 4,25% у пациентов с МПГН 1 типа - ! 6,8 =£2,49%

Интенсивность экспрессии Рсу-рецеггторов на мембране нейтрофильных гранулоцигов у больных с исследованными формами ХГН не отличалась от нормальных величин (Рис 1) Средние значения относительного содержания нейтрофилов периферической крови, несущих на своей мембране Рсу-рецепторы, соответственно составляли в группе здоровых нолей 13,6 ± 2,84%, у больных МезПГН - 15,5 ± 2,36%; у пациентов ^А-нефропатией - 16,1 ± 2,64%, у больных МПГН 1 типа - 13,6 ± 2,62%

Рис 1 Экспрессии Е+- (I), СЗЬ+- (2) и Fcy-рецепторов (3) на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у здоровых людей, больных МПГН 1 типа, IgA-нефропатией и МезПГН.

по оси ординат - процент нейтрофилов периферической крови, экспрессирующих Е+-(1), СЗЬ+- (2) и Fcy-рецепторы (3)

| 1-здоровые доноры (п = 12), Г~! i-МезПГН (п = 21), клллл - IgA-нефропатия (n = 15), [/Ллу- МПГН 1 типа (п =20)

п - количество обследованных людей

• * - р < 0,05; ** -р<0,01, о** - р < 0,001 - по сравнению с показателями у здоровых доноров,

• + - р < 0,05, + + - р < 0,01 -по сравнению с показателями у больных IgA -

нефропатией

3.2. Корреляционная взаимосвязь активности нейтрофильных гранулоиитов и уровня иммунохимических показателей сыворотки крови и субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови у больных с изученными формами хронического гломерулонефрита

У этих же пациентов исследованы интенсивность экспрессии Ь+-рсцепторов, рецепторов к СЗЬ-компоненту комплемента. Fey- и Fcp-рецепторов на мембране лимфоцитов периферической крови, гемолитическая активность комплемента, количество циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови, концентрация IgG, IgM и IgA в сыворотке крови

Корреляционный анализ всех исследованных показателей позволит опредетигь прямолинейные и непараметрические корреляции между величинами згих показателей

Из данных, представленных в таблице I, видно, что при МПГН I типа и IgA-нефропатии величина изменения уровня ЛКГ коррелируют с относительным

количеством Т-лимфоцитов периферической крови, экспрессирующих рецепторы к эритроцитам барана При этом наблюдается положительная взаимосвязь этих величин при МПГН 1 типа и отрицательная прямолинейная корреляция у больных с нефропатией.

Количество КБ в нейтрофильных гранулоцитах также коррелирует с концентрацией ЦИК в сыворотке крови у больных с ^А-нефропатией и МПГН 1 типа, причем при МПГН 1 типа выявлена положительная корреляционная зависимость, а при 1§А-нефропатии - отрицательная

ТАБЛИЦА 1

Коэффициенты линейной (г) корреляции Пирсона и непараметрической (г5) корреляции Спирмена между величинами изученных показателей

функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов и ряда иммунологических показателей у больных с МПГН 1 типа, ^А-нефропатией и

МезПГН

~—■—Группы больных Показатели: ——. Пациенты с

МПГН 1 т п = 20 ^А-нефропатия п = 15 МиПГН п = 21

ЛКТ х НГ(Е+-РОК)% - г = -0,536" г = - 0,795лпп

ЛКТ х НГ-РсуЯ% т„ = 0,563 - и = - 0,679'г-

ЛКТ х Т(Е+-РОК)% г5 = 0,600 1 г = - 0,734 11 -

ЛКТ х ЦИК ус.ед. г$ = 0,479' г, = - 0,552" -

ЛКТ х ДО г/л г5 = -0,513 - г = 0,667

НГ'(Е+-РОК)%хМГ-РсуК % - - г, = 0,578т

НГ(Е+-РОК)%хТ(Е+-РОК)% - г = 0,806"" -

НГ(Е+-РОК)% х Т-Рсц!* % г, = 0,511'' г„-0,817"" -

НГ(Е+-РОК)% х СН50 ус.ед. г, = - 0,444 ' г, = - 0,575 -

НГ(Е+-РОК)% х ЦИК ус ед г, = 0,616' - -

НГ(Е+-РОК)% х 1§М г/л г5 = 0,485 ! - -

НГ(Е'-РОК)% х ДО г/л - г, = 0,516' -

НГ(СЗЬ+-РОК)%хСН,„ус.ед. - - г = -0,536

НГ(СЗЬ+-РОК)%хЦИКус ед. - - г5 = - 0,688' г

Примечание: 1 - р < 0,05; " - р < 0,01; " - р < 0,001 - значимость коэффициента корреляции

г5 - коэффициент корреляции Опирмана; г - коэффициент корреляции Пирсона, п - количество обследованных пациентов, НГ - нейтрофильный гранулоцит

Интенсивность экспрессии Е+-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов у больных МПГН I типа коррелирует с величиной относительного содержания мононуклеаров в периферическом русле, несущих Рсу-рецептор, уровенем гемолитической активности комплемента, концентрацией ^М и ЦИК в сыворотке периферической крови У больных с ^Л-нсфропатией интенсивность экспрессии Е+-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов коррелирует с относительным

содержанием общих Т-лимфоцитов, мононуклеарных клеток, несущих на своей мембране Рсц-рецепторы, гемолитической активностью комплемента и концентрацией в сыворотке крови При МезПГН обнаружена корреляция относительного количества нейтрофильных гранулоцигов, экспрессирующих на мембране СЗЬ+-реиепторы, с уровнем гемолитической активностьи комплемента и содержанием ЦИК в сыворотке периферической крови

3.3. Корреляции уровня функциональной активности нейтрофильных гранулоцнтов при хроническом гломерулонефрите у человека с показателями функционального состояния почек и биохимического состава крови

Наиболее распространенными клинико-лабораторными методами обследования больных ХГН являются анализ мочи, пробы, характеризующие функциональное состояние почек (определение скорости клубочковой фильтрации, суточная протеинурия) и биохимическое исследование крови (исследования концентрации общего белка, альбумина, креатинина, мочевины в сыворотке крови) Эти методы характеризуют патофизиологические изменения почек при данном заболевании, так как позволяют определить активность заболевания и прогнозировать его течение В отличие от морфологического исследования почечной ткани и других сложных методов оценки состояния почек (преимущественно с использованием веществ с радиоактивной меткой), клинико-лабораторные исследования, перечисленные выше, могут выполняться с достаточной частотой, необходимой для наблюдения за динамикой развития заболевания

Так как установлено, что никакие клинико-лабораторные данные, определенные в день исследования нейтрофильных гранулоцитов, корреляционно не связаны с исследованными в работе показателями функциональной активности нейтрофипов, были проанализированы данные лабораторных анализов, проведенных в последующие дни после изучения функциональной активности нейтрофильных гранулоцигов периферической крови до проявления значимых корреляций Проявлялись чти взаимосвязи для разных показателей в разные сроки В исследовании приведены сроки, на которых проявлялись корреляционные зависимости

3.3.1. Корреляции количества и степени функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов у пациентов с хроническим гломерулонефритом с уровнем протеинурии, лейкоцитурии и эритроцитурии

У больных ^А-нефропатией выявлена взаимосвязь между уровнем экспрессии СЗЬ -рецспторов на мембране нейтрофильных гранулоцигов и концентрацией белка в моче (г5 = - 0,545, р = 0,0357), определенной через 1 неделю после исследования функциональной активности нейтрофипов У больных ^А-нефропатией уровень экспрессии Рсу-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов взаимосвязан с содержанием белка в моче оцененным через 2 нед после исследования функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов (г = 0,633, р = 0,011) Изменения концентрации белка в моче не были корреляционно взаимосвязаны с изменениями уровня исследованных показателей активности нейтрофилов периферической крови у больных МПГН 1 типа и у пациентов МезПГН

Содержание КБ в нейтрофильных гранулоцитах коррелировало с уровнем г.ейкоиитурии, развившейся через 3-4 недели после исследования ЛКТ, у больных МПГН 1 типа (г = 0,621, р = 0,003) С изменениями других показателей функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов уровень лейкоцигурии у больных МПГН 1 типа не коррелировал Как и у больных ^-нефропагией и МезПГ! I, цитохимические показатели ЛКТ и относительное содержание нейтрофильных гранулоцигов периферической крови, экспрессирующих Е\ СЗЬ+- и Рсу-рецепторы, не коррелировали с уровнем лейкоцигурии

У пациентов с ^А-нефропатией величина ЛКТ отрицательно коррелировала только с уровнем эритроцитурии (г - - 0,570, р = 0,026), определенной через 2 мес после исследования функциональной активности нейтрофильных гранулоцигов периферической крови У больных МПГН 1 типа такой взаимосвязи не выявлено Интенсивность экспрессии Р су-рецепторов на мембране нейгрофилов больных с МезПГН коррелировала с количеством эритроцитов в моче (г=0,596 , р=0,006), определенных через две недели после проведенного исследования функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов

3.3.2. Корреляционные теисимости между показателями функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов, скорости клубочковой фильтрации и уровнем суточной протеинурии

При проведении корреляционного анализа, у пациентов с 1§А-нефропатией обнаружена отрицательная непараметрическая корреляция интенсивности экспрессии рецепторов к эритроцитам барана на мембране нейтрофильных гранулоцитов со скоростью клубочковой фильтрации (СКФ), зафиксированной в день исследования функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов, (г8 = -0,567, р = 0,027)

Вместе с тем, при МезПГН выявлена положительная линейная корреляция между уровнем экспрессии эритроцитарных рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцигов и СКФ (г = 0,481, р = 0,027), которая проявилась через 2 недели после исследования экспрессии эритроцитарных рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцигов периферической крови

Величина цитохимического показателя ЛКТ коррелирует со скоростью клубочковой фильтрации, оцененной по эндогенному креатинину (г = -0,473, р = 0,035) и зафиксированной спустя два месяца после исследования ЛКТ у больных МГ1ГН I типа.

У части пациентов с МПГН 1 типа величины цитохимического показателя ЛКТ ниже 1,00 (п=10, 1-я группа), у других - величины цитохимического показателя ЛКГ превышали 1,00 (п=10, 2-я группа) Анализ величин среднего уровня СКФ в день исследования нейтрофильных гранулоцитов и спустя два месяца после изучения функциональной активности выявил различия СКФ через два месяца у пациентов 1-ой и 2-ой групп (табл 2).

ТАБЛИЦА 2

Изменение среднего уровня скорости клубочковой фильтрации у больных мембранозно-пролиферативным гломерулонефритом 1 типа при различных величинах цитохимического показателя лнзосомально-катионного теста

Скорость клубочковой фильтрации (мл/мин), оцененная по уровню эндогенного креатинина Величина цитохимического коэффициента ЛКТ у больных МПГН 1 типа Уровень достоверности

менее 1,00 (п=10) г более 1,00(п=10)

в день определения ЛКТ 85,64 ± 9,04 75,02 ± 5,38 р > 0,05

через два месяца после определения ЛКТ 88,37 ±4,8 68,64 ± 5,21 р < 0,002

Примечание: п - число пациентов

Интенсивность экспрессии СЗЬ+-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцигов периферической крови у больных МПГН I типа коррелировала со скоростью клубочковой фильтрации, оцененной по клиренсу эндогенного к ре ;и инина, измеренной спустя две недели после исследования функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов (г5 = 0,587 , р = 0,0065)

У больных МПГН 1 типа также выявлена отрицательная непараметрическая зависимость между содержанием КБ в нейгрофильных фанулоцигах и уровнем суточной протеинурии, измеренной чере* два месяца после исследования функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов (д = - 0,468, р = 0,037)

У пациентов с IgA-нефропатией уровень экспрессии СЗЬ+-рецепторов на мембране нейтрофилов коррелировал с суточной протеинурией, чго проявилось через 1 неделю после исследования количественного содержания и функциональной активности нейтрофильных гранулоцигов (г5 = - 0,560, р = 0,029).

Интенсивность экспрессии Fcy-рецепторов на нейтрофильных гранулоцигах периферической крови при IgA-нефропатии коррелировала с суточной протеинурией (г = 0,732, р = 0,002)

У больных МезПГН цитохимический показатель ЛКГ, уровень экспрессии Е+-, СЗЬ+- и Fcy-рецегтгоров не коррелировал с СПБ

3.3.3. Корреляции функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови с изменениями биохимических показателей сыворотки крови у дольных МПГН1 типа, IgA-нефропатией и МезПГН

У больных МезПГН и IgA-нефропатией не выявлено корреляционных взаимосвязей между изученными показателями активности нейтрофильных гранулоцитов и концентрацией креатинина сыворотки крови

Относительное количество нейтрофильных гранулоцитов периферической крови, образующих розетки с эритроцитами барана, у больных МПГН 1 гипа - в пределах нормы Величины лого показа!еля связаны отрицательной зависимостью с уровнем сывороточного креатинина, определенным спустя два месяца после исследования функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов По уровню экспрессии Е'-рецепторов на мембране нейтрофилов пациентов с МПГН 1 типа можно разделить также на две группы пациенты, у которых в периферическом русле менее 26% нейтрофильных гранулоцитов, экспрессирующих Е^-рецеторы (1-я группа), и пациенты, в периферической крови которых содержится более 26% нейтрофилов, экспрессирующих Е+-рецегпоры (2-я группа) (табл 3)

У пациентов первой группы через два месяца после исследования нейтрофильных гранулоцитов уровень креатинина в сыворотке крови повышаем, а у пациентов второй группы - не изменяется в течение этих двух месяцев Средние значения уровня сывороточного креатинина на момент исследования функциональной активности нейтрофлчьных гранулоиитову пациентов обеих групп не различались (табл 3)

У больных МезПГН и МПГН 1 типа не выявлено корреляционных взаимосвязей между изученными показателями функциональной активности нейтрофилов и концентрацией общего белка сыворотки крови

ТАБЛИЦА 1

Концентрация креатинина в сыворотке крови у пациентов с мембранозно-

пролифератнвиым гломерулонефритом 1 типа при различной интенсивности

экспрессии Е+-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов _периферической крови_

Концентрация креатинина в сыворотке крови Интенсивность экспрессии Е+-рецепгоров на мембране нейтрофильных гранулоцитов у большх МПГН 1типа Уровень достоверности

менее 26% (п=8) более 26% (п=12)

в лень определения интенсивности экспрессии Е+-рецептора на мембране НГ 0,108 ±0,004 0,094 ± 0,007 р > 0,05

через два месяца после определения интенсивности экспрессии Е+-рецептора на мембране НГ 0,116 ±0,007 0,086 ± 0,005 р<0,01

Примечание: п - число пациентов

У больных ^А-нефропатией относительное содержание нейтрофилов с Рсу-рецепторами на плазматической мембране непараметрически связано с количеством общего белка в сыворотке крови (г5 = -0,672, р = 0,0061), определенной через 2 нед. после исследования функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов, и с концентрацией альбумина в сыворотке крови, зафиксированной через 1 неделю после исследования нейтрофильных гранулоцитов (г5 = -0,800, р = 0,00034)

У больных МПГН 1 типа выявлена прямая корреляционная зависимость между уровнем экспрессии Е+-рецепгоров на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови и концентрацией мочевины в сыворотке крови в день исследования функциональной активности нейтрофилов (г = 0,459, р = 0,042)

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

8 настоящее время все большую актуальность приобретают исследования изменения защитных функций организма, включающих реакции как врожденного, так и приобретенного иммунитета, при различных формах патологии и стрессе (Кошеуа Е А е1 а1, 1997; Кокряков В.Н , 1999; Рыбакина Е Г, Корнева Е.А , 2002, Ботерашвили Н М и др, 2000, 2002) Важным звеном врожденного иммунитета являются нейгрофильные гранулоциты (Маянский А Н, Маянский Д Н 1989) Активное участие нейтрофильных гранулоцитов в поражении почечной ткани не вызывает сомнения

(Johnson R et al, 1997, Segerer S et al, 2000), однако роль этих клеток при хроническом гломерулонефрите у человека изучена далеко не исчерпывающе

Проведенное исследование позволило выявить отличительные особенности изменения функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови человека при различных формах ХГН МПГН 1 типа, lgA-нсфропатии и МезПГН.

При всех трех исследованных морфологических формах ХГН происходит выраженное снижение цитохимического показателя ЛКТ Снижение уровня экспрессии рецепторов к эритроцитам барана наблюдается только у пациентов с МезПГН и IgA-нефропатией, причем у больных lgA-нефропатией это снижение более выражено При МПГН 1 типа, lgA-нефропагии и МезПГН относительное содержание в периферической крови нейтрофильных гранулоцитов, экспрессирующих на своей мембране СЗЬ+-рецепторы, превышает нормальные величины Интенсивность экспрессии Fcy-рецепторов на мембране циркулирующих нсйтрофилов при изученных формах ХГН не отличается от нормальных величин

При корреляционном анализе выявлены разнонаправленные корреляции изменений показателей функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов с иммунохимическими показателями сыворотки крови (концентрацией ЦИК, IgG, IgM и гемолитической активностью комплемента) и субпопуляционным составом лимфоцитов периферической крови (о i носи тельным количеством Т-лимфоциюв периферической крови, экспрессирующих на своей мембране рецепторы к эритроцитам барана и к Fc-фрагменту IgM) при МПГН 1 rana, igA-нефропатии и МезПГН. что, возможно, обусловлено различиями в динамике развития защитных реакций у больных с изученными морфологическими формами ГН.

Корреляционный анализ показал, что снижение содержания катионных белков в нейтрофильных гранулоцитах является прогностически неблагоприятным признаком при IgA-нефропатии, так как у пациенюв с низкими циюхимическим показателем ЛКГ увеличивается уровень эритроцитурии У больных МП! Н I типа, напротив, низкое содержание КБ в гранулах нейтрофилов периферической крови является прогностически благоприятным признаком, так как у пациенюв с высоким показателем ЛКТ через два месяца после исследования функциональной активности нейтрофилов снижается СКФ

Снижение экспрессии Е+-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов может рассматриваться как прогностически благоприятный признак при IgA-

нефропагии, так как при повышении экспрессии этих рецепторов на нейтрофильных гранулоцигах у этих больных наблюдается снижение СКФ В то же время, снижение в периферической крови относительного количества нейтрофилов, экспрессирующих на своей мембране рецепторы к эритроцитам барана, - прогностически неблагоприятный признак при МПГН 1 типа (коррелирует с повышением уровня креатинина в сыворотке крови) и при МезПГН (коррелирует со снижением СКФ)

Высокая интенсивность экспрессии СЗЬ+-рецепторов у больных 1§А-нефропатией корреляционно взаимосвязана с низкой суточной протеинурией и эритроцитурией. а у пациентов с МПГН 1 типа - с нормальной СКФ Повышение экспрессии Рсу-рецепгоров на мембране нейтрофилов периферической крови является прогностически неблагоприятным признаком при ^А-нефропатии (коррелирует с повышением суточной протеинурией и с понижением концентрации альбумина в сыворотке крови) и при МезПГН (коррелирует с повышением эритроцитурии)

Таким образом, проведенное исследование показало, что изменение функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови является информативным показателем и может быть использовано как дополнительный прогностически значимый критерий течения этого заболевания при мембранозно-пролиферативном гломерулонефрите 1 типа, ^А-нефропатии и мезангиально-пролнфераггивном гломерулонефрите

ВЫВОДЫ

I В нейтрофильных гранулоцигах периферической крови больных мембранозно-пролиферативным гломерулонефритом 1 типа, 1§А-нефропатией и мезангиально-пролиферативным гломерулонефритом снижено содержание катионных белков и пептидов

2. Уровень экспрессии Е+-рецепторов на плазматической мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных ^А-нефропатией и МезПГН ниже соответствующего показателя у здоровых людей У больных МПГН 1 типа этот показатель варьирует в пределах нормы. 3 Выраженное повышение экспрессии СЗЬ+-рецепторов на плазматической мембране нейтрофилов периферической крови наблюдается при МПГН 1 типа, ^Л-нефропатии и МезПГН ; интенсивность экспрессии Рсу-рецепторов у этих больных - в пределах нормальных величин

4 Изменения функциональной активности нейтрофильных гранулошпов периферической крови связаны корреляционной зависимостью (положительной либо отрицательной) с иммунохимическими показателями сыворотки крови и субпопуляционным составом лимфоцитов периферической крови, что подтверждает различия изменений защитных функций при МГ1ГН 1 типа, IgA-нефропатии и МезПГН.

5 При МПГН 1 типа прогностически благоприятными признаками являются снижение показателей ЛКТ, повышение экспрессии СЗЬ+- и Е+-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови

6 Прогностически благоприятными признаками при IgA-нефропатии являются нормальные величины показателей ЛКТ и экспрессии Fcy-рецепгоров на плазматической мембране нейтрофилов периферической крови, а также снижение уровня зкспрессии Ь*-рецегтгоров и повышение уровня экспрессии СЗЬ+-рецепторов

7 При МезПГН прогностически неблагоприятными признаками являются повышение экспрессии Н~- и Fcy-рсцегтгоров на плазматической мембране нейтрофильных гранулоцитов

8 Комплекс проведенных исследований, а также корреляционный анализ показа!елей функцион&чыюй активности нейтрофильных гранулоцитов (ЛКТ, уровня экспрессии F+, СЗЬ*-, Hcv-реиепторов на мембране непрофильных гранулоцитов) и ряда показателей функционального состояния почек, позволяв предложить ряд новых прогностически значимых критериев оценки течения МПГН I типа, IgA-нефропатии, МезПГН

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1 Ракитянская И А Абрамова Т В Оценка функционального состояния нейтрофилов крови метолом лизосомально-катионного теста у больных хроническим гломерулонефритом // Сборник тезисов докладов 1 съезд нефрологов России 11-13 октября, 1994г Казань - 1994 -с 41-42

2 Ракитянская И А., Абрамова ТВ Оценка состояния фанулярного annapaia нейтрофильных гранулоцитов периферической крови больных хроническим гломерулонефритом//Сборник трудов III ежегодного СПб нефрологического семинара 26 мая-3 июня, 1995 - Санкт-Петербург - 1995 с 248

3 Ryabov S I, Rakityanskaya I А , Abramova Т V Evaluation of the State of peripheral blood neutrophil granulocytes in patient uith chronic glomeruloncphitis with the use of lysosomal cationic test //Abstracts XXXI11 Congrcss of the EDTA Furopean Renal Association June 18-21 - Amsterdam, the Netherlands - 1996 -p 23

4 Rakityanskaya I A , Abramova T V, Trofimenko 11 Diagnostic significance of the lysosomal-cationic test (LCT) for patient with glomerulonephitis// Abstracts of the Second Bantao Congress. - Macedonia, Skopje 1997 - July 24 -p 73

5 Трофименко И И, Абрамова Т В Диагностическая значимость лизосомально-катионного теста у больных ХГН // Актуальные проблемы внутренней медицины и стоматологии сборник научных трудов - Санкт-Петербург - 1997 - с 267

6 Ryabov SI , Rakityanskaya IА, Abramova Т V The dynamics of neutrophil granulocytes membrane receptors expression in patient with chronic glomerulonephitis // Abstracts EDTA-ERA Annual Congress (6-9 June 1998, Rimini, Italy) - 1998 - p 30

7 Ryabov S I, Rakityanskaya I A , Abramova T V The degree of neutrophil granulocytes sensibility to renal autoantigen "in vitro" in patient with mesangio-proliferative glomerulonephitis// Abstracts EDTA-ERA Annual Congress (6-9 June 1998. Rimini, Italy) - 1998 -p 31

8 Рябов СИ, Ракитянская НА., Абрамова ТВ Некоторые функциональные характеристики нейгрофильных гранулоцитов при прогрессировании мезангис-пролиферативного гломерулонефрита (МезПГН) // 2-ой Съезд нефрологов России Сборник материалов - Москва - 1999 - с. 242

9 Ракитянская И А, Абрамова Т В Гломерулосклероз и изменение некоторых показателей нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных с мембранозно-пролиферативным гломерулонефригом 1 типа и lgA-нсфропатией // IX Всероссийская конференция по физиологии и патологии почек и водно-солевого обмена (Санкт-Петербург 12-14 сентября 2001i ) - Нефрология -2001 -Т 5 - № 3-е. 148

10 Абрамова Т В , Новикова Н С , Трофименко И И Нейтрофильные гранулоцигы при хроническом гломерулонефрите // 5-й Конгресс Современные проблемы аллергологии и иммунофармакологии (Москва 12-14 ноября 2002г) Сборник трудов. Т2 Тезисы докладов - 2002 - с 5

11 Абрамова Т В Количество катионных белков в гранулах нейтрофилов и экспрессия на их мембране эритроцигарных, комплементарных и Fcy-яецепгоров при определенных формах хронического гломерулонефрита у человека // Медицинская иммунология -2003 -Т 5 -№1-2 - с. 137-142

12 Абрамова ТВ., Рыбакина ЕГ, Каюков И.Г Количество катионных белков нейтрофилов и экспрессия комплементарных и Гсу-лецспторов на их мембране при lgA-нефропатии // Нефрология 2003 -Т7 -№3 - с 67-71

13 Абрамова ТВ, Рыбакина ЕГ, Каюков ИГ, Трофименко ИИ Количество катионных белков нейтрофилов и экспрессия на их мембране эритроцитарных комплементарных и Рсу-жсцспторов при мембранозно-пролиферативном гломерулонефрите I типа.//Нефрология - 2003 - Т 7 -№4 - с 51-56

РНБ Русский фонд

2005-4 38649

- «* t х » >

843

2 7

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Абрамова, Таисия Владимировна

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Современные представления о механизмах развития хронического гломерулонефрита у человека.

1.2 Роль нейтрофилов в развитии гломерулонефритов.

1.2.1. Роль медиаторов воспаления в модуляции функций нейтрофильных гранулоцитов при гломерулонефрите.

1.2.2. Рецепторы нейтрофильных гранулоцитов при гломерулонефрите.

1.2.3. Элиминация иммунных комплексов из почечной ткани нейтрофильными гранулоцитами.

1.2.4. Деструктивная роль нейтрофильных гранулоцитов в почечной ткани при гломерулонефрите.

1.2.4.1 Окислительные механизмы поражения почечной ткани.

1.2.4.2. Неокислительные механизмы поражения почечной ткани.

1.2.5. Динамика инфильтрации почки нейтрофильными гранулоцитами при гломерулонефрите.

1.3. Методы лечения гломерулонефрита, основанные на представлении об активном участии нейтрофильных гранулоцитов в патогенезе заболевания.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Условия получения образцов крови и почечной ткани у больных хроническим гломерулонефритом.

2.2. Иммунофлюоресцентные методы исследования почечного биоптата.

2.3. Иммунохимические методы исследования сыворотки крови.

2.3.1. Определение уровня комплемента в сыворотке крови гемолитическим методом титрования по 50% гемолизу.

2.3.2. Определение содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови.

2.3.3. Определение циркулирующих иммунных комплексов в сыворотке крови методом осаждения полиэтиленгликолем.

2.4. Субпопуляционная характеристика мононуклеаров периферической крови.

2.4.1. Выделение фракции мононуклеаров периферической крови в градиенте плотности фиколл-верографин.

2.4.2. Определение субпопуляции Т-лимфоцитов в периферической крови методом спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК).

2.4.3. Определение субпопуляций Т-лимфоцитов с рецепторами к Рс-фрагментам иммуноглобулинов /#(7, (Тр, Ту).

2.4.4. Определение содержания В-лимфоцитов (ЕАС-РОК) в периферической крови.

2.5. Изучение функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов.

2.5.1. Лизосомально-катионный тест.

2.5.2. Субпопуляционная характеристика нейтрофильных гранулоцитов периферической крови.

2.5.2. ¡.Выделение суспензии лейкоцитов из периферической крови.

2.5.2.2. Определение уровня экспрессии рецепторов к СЗЬ-компоненту комплемента на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови.

2.5.2.3. Определение нейтрофильных гранулоцитов с рецепторами к эритроцитам барана (Е+-рецептор) и к Гс-фрагменту /£(7 (Рсу-рецептор).

2.6 Статистическая обработка результатов.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1.Показатели лизосомально-катионного теста нейтрофильных гранулоцитов и уровень экспрессии Е+-, СЗЬ+- и Гсу-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных хроническим гломерулонефритом и у здоровых доноров.

3.2. Корреляционная взаимосвязь активности нейтрофильных гранулоцитов и уровня иммунохимических показателей сыворотки крови и субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови у больных с изученными формами хронического гломерулонефрита.

3.3 Корреляции уровня функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов при хроническом гломерулонефрите у человека с показателями функционального состояния почек и биохимического состава крови.

3.3.1 Корреляции количества и степени функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов у пациентов с хроническим гломерулонефритом с уровнем протеинурии, лейкоцитурии и эритроцитурии.

3.3.2. Корреляционные зависимости показателей функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов, скорости клубочковой фильтрации и уровнем суточной протеинурии.

3.3.3. Корреляции функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови с определенными изменениями биохимических показателей сыворотки крови у больных с МПГН1 типа, ^А-нефропатией и МезПГН.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

5. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов при хроническом гломерулонефрите у человека"

Актуальность проблемы

В группе заболеваний почек и мочевыводящих путей гломерулонефрит (ГН) занимает 3-4-е место, уступая по распространенности только пиелонефриту и мочекаменной болезни (Григорьев Е.А., 1988; Рябов С.И., 2000; Храйчик Д.Е., 2001; Арутюнян В.М. и соавтр., 2002). В связи с распространением хронических форм болезни, доля пациентов с ГН среди больных почечной недостаточностью, направленных на гемодиализ и трансплантацию, постоянно возрастает (Григорьев Е.А., 1988; Рябов С.И., 2000).

В настоящее время патофизиологические механизмы, ведущие к прогрессированию хронического гломерулонефрита (ХГН), принято разделять на иммунные и неиммунные - гемодинамические и метаболические. Ранее считалось, что основную роль в развитии ХГН играют иммунные комплексы и антитела к базальной мембране клубочков. Сейчас этим факторам повреждения отводят важную роль скорее в индукции процесса (Тареева И.Е., 1996). При исследовании пролиферативных форм ХГН у людей особое внимание уделяется гуморальным (системе комплемента, кининам, вазоактивным аминам, метаболитам арахидоновой кислоты) и клеточным (нейтрофилы, тромбоциты, моноциты, макрофаги, лимфоциты) медиаторам воспаления в почечной ткани (Шилов Е.М., 2000).

Известно, что нейтрофильные гранулоциты участвуют в развитии патофизиологических процессов при многих заболеваниях, высвобождая комплекс различных агентов, нарушающих нормальную деятельность клеток и разрушающих соединительную ткань (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989). Не является исключением и ХГН (Johnson R. et al., 1997), хотя роль нейтрофильных гранулоцитов при этой форме патологии исследовалась мало. Так как нейтрофилы являются первыми эффекторными клетками, поступающими в очаг воспаления, изучение их функциональной активности при развитии и прогрессировании пролиферативных форм ГН является актуальной задачей.

Перемещение нейтрофильных гранулоцитов из кровеносных сосудов в ткань почки - важный фактор развития многих почечных заболеваний (Segerer S. et al., 2000). Однако большинство исследований, подтверждающих активное участие нейтрофильных гранулоцитов в поражении почечной ткани, выполнено на экспериментальных моделях нефрита, патогенез которых значительно отличается от патогенеза первичных ХГН у человека. В этих исследованиях обнаружено, что динамика развития клинико-морфологического синдрома связана с количеством и активностью нейтрофильных гранулоцитов, инфильтрирующих почечную ткань (Linas S.L. et al., 1995; Huang X.R. et al., 1997).

Полученные на экспериментальных моделях данные свидетельствуют о том, что нейтрофилы привлекаются в почечную ткань иммунными комплексами и различными медиаторами воспаления (Noris М., Remuzzi G.G., 1995; Donovan K.L., et al., 1995; Kitching A.R. et al., 2002). Активную роль при поступлении нейтрофилов в ткань играют различные адгезионные молекулы, экспрессирующиеся как на нейтрофильных гранулоцитах так и на эндотелии капилляров почечного клубочка (Tipping P.G. et al., 1994; Lefkowith J.B., 1997; Lai К. N., 2002).

В настоящей работе проведено исследование функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови пациентов, страдающих ХГН, а именно IgA-нефропатией, мезангиально-пролиферативным гломерулонефритом (МезПГН) и с мембранозно-пролиферативным гломерулонефритом 1 типа (МПГН 1 типа). Исследованы изменения уровня экспрессии рецепторов к СЗЬ-компоненту комплемента на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных с ХГН, что позволило установить связь изменений данного показателя с изменением функций почек у пациентов с исследованными морфологическими формами пролиферативных ГН.

Известно, что рецепторы нейтрофильных гранулоцитов к СЗЬ-компоненту комплемента (Мас-1) функционально связаны с экспрессируемыми на мембране этих же клеток F су-рецепторами (Tang Т. et al., 1997), которые участвуют в утилизации отложившихся в почечной ткани иммунных комплексов. При использовании экспериментальной модели ГН установлено, что продукция активных форм кислорода нейтрофильными гранулоцитами инициируется через активацию Fcy-рецепторов (Suzuki Y. et al., 2003). Исследования изменения уровня экспрессии Fcy-рецепторов на мембране нейтрофилов периферической крови при ХГН у человека не проводились.

Попадая в почечную ткань и принимая участие в реализации защитных функций (Westerhuis R. et al., 2000), нейтрофильные гранулоциты могут поражать инфильтрируемую ткань, в результате высвобождения свободных кислородных радикалов (Poelstra К. et al., 1990; Baund L. et al., 1992; Shah S.V., 1995), или участия неокислительных механизмов (Matzner Y. et al., 1985; Lehrer R.I. et al., 1993; Janoff A. 1985). Катионные белки и пептиды (КБ), к которым относятся дефенсины, лизоцим, эластаза, катепсин G, лактоферрин, миелопероксидаза, обеспечивают антимикробный потенциал нейтрофилов, оказывая комплексное воздействие на структуру и обменные процессы фагоцитированных микроорганизмов и обуславливают их киллинг (Кокряков В.Н., 1999). В то же время, КБ увеличивают проницаемость стенки кровеносных сосудов (Matzner Y. et al., 1985) и даже вызывают ее повреждение (Harlan J.M., 1987; Lehrer R.I. et al., 1993). Использованный в работе лизосомально-катионный тест (J1KT), позволил определить уровень содержания катионных белков в нейтрофильных гранулоцитах периферической крови пациентов, который характеризует функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов.

Поскольку повреждающая роль нейтрофильных гранулоцитов при ХГН не подвергается сомнению, актуальной задачей является поиск способов снижения их негативного влияния на инфильтрируемую почечную ткань (Ward K.P. et al., 2000; Hruby Z. et al., 2000; Stambe C. et al., 2003). Поэтому информационно значимым представляется проведение корреляционного анализа показателей функциональной активности клеток нейтрофильно-гранулоцитарного звена периферической крови при пролиферативных формах хронического гломерулонефрита у людей с другими широко используемыми иммунологическими показателями и клинико-лабораторными данными, характеризующими функциональное состояние почек, полученными при обследовании госпитализированных пациентов. До настоящего времени подобные сведения в литературе отсутствуют.

Таким образом, изучение функциональной активности нейтрофилов при различных морфологических формах ХГН у человека с одной стороны позволяет расширить существующие представления о патофизиологических механизмах развития этих заболеваний, а с другой -может иметь научно-практическое значение, позволяя определять тактику лечения больного и прогнозировать динамику развития процесса.

Цель и задачи исследования

В задачи работы входило:

1. Исследование содержания катионных белков в нейтрофильных гранулоцитах периферической крови у больных с ^А-нефропатией, МезПГН, МПГН 1 типа и здоровых доноров;

2. Изучение уровня экспрессии Е+-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных с 1§А-нефропатией, МезПГН, МПГН 1 типа и здоровых доноров;

3. Изучение уровня экспрессии СЗЬ+-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных с 1§А-нефропатией, МезПГН, МПГН 1 типа и здоровых доноров;

4. Изучение уровня экспрессии Рсу-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных с 1§А-нефропатией, МезПГН, МПГН 1 типа и здоровых доноров;

5. Исследование следующих иммунологических показателей: содержания в периферической крови пациентов различных субпопуляций лимфоцитов, уровня гемолитической активности комплемента сыворотки крови, концентрации циркулирующих иммунных комплексов и иммуноглобулинов М, в и А классов в сыворотки крови, определение наличия отложений иммуноглобулинов М, О и А классов в ткани почечных биоптатов;

Научная новизна исследования

Проведенное исследование позволило выявить ряд особенностей изменения функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови при мембранозно-пролиферативном гломерулонефрите 1 типа, 1§А-нефропатии и мезангиально-пролиферативном гломерулонефрите у людей.

Впервые для этой цели была проведена комплексная оценка уровня экспрессии Е+-, СЗЬ+- и Рсу-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови, а также изучение содержания катионных белков и пептидов в нейтрофильных гранулоцитах при следующих пролиферативных формах ХГН: МПГН 1 типа, ^А-нефропатия и МезПГН. Использование ЛКТ позволило получить новые данные о снижении содержания КБ в нейтрофильных гранулоцитах периферической крови при изученных формах ХГН у людей. Впервые показано значительное повышение уровня экспрессии СЗЬ+-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных с изученными формами ХГН.

Приоритетный характер носят результаты корреляционного анализа исследованных показателей и лабораторных данных, полученных при обследовании госпитализированных пациентов. Они позволили выявить существенные различия в характере защитных реакций при МПГН 1 типа, ^А-нефропатии и МезПГН. Показано, что изменения уровня экспрессии Е+-, СЗЬ+- и Рсу-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови, а также содержания в них катионных белков и пептидов, коррелирует с ухудшением функции почек при МПГН 1 типа, ^А-нефропатии и МезПГН.

Теоретическая и практическая значимость работы

Представленная работа, посвященная исследованию функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови при мембранозно-пролиферативном гломерулонефрите 1 типа, IgA-нефропатии и мезангиально-пролиферативном гломерулонефрите, носит фундаментально-прикладной характер. Результаты исследования расширяют и дополняют сложившееся в настоящее время представление о роли нейтрофильных гранулоцитов в прогрессировании изученных форм хронического гломерулонефрита. Основное значение работы состоит в установлении корреляции между изученными показателями функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови с активностью Mill Н 1 типа, IgA-нефропатии, МезПГН, определенного по изменению показателей, характеризующих функции почек.

Комплекс проведенных исследований, а также их корреляционный анализ, выявили ряд взаимосвязей между изменениями показателей функциональной активности и показателями, характеризующими функцию почек, позволяющих предложить новые критерии для прогнозирования течения МПГН 1 типа, IgA-нефропатии, МезПГН у людей: исследование лизосомально-катионного теста, уровня Е+-, СЗЬ+- и Fcy-рецепторов, что может быть использовано в клинической практике.

Основные положения, выносимые на защиту

I. В нейтрофильных гранулоцитах периферической крови больных мембранозно-пролиферативным гломерулонефритом 1 типа, IgA-нефропатией и мезангиально-пролиферативным гломерулонефритом снижено содержание катионных белков и повышена экспрессия СЗЬ+-рецепторов на плазматической мембране этих клеток. Интенсивность экспрессии Fcy-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов у этих больных сохраняется в пределах нормальных величин.

2. Уровень экспрессии Е+-рецепторов на плазматической мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных IgA-нефропатией и МезПГН ниже соответствующего показателя у здоровых людей. У больных Mill Н 1 типа этот показатель варьирует в пределах нормы.

3. Выявлены изменения коэффициентов корреляции функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови с иммунохимическими показателями сыворотки крови и субпопуляционным составом лимфоцитов периферической крови.

4. Определены корреляционные зависимости между показателями функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов и ряда показателей, характеризующих функциональное состояние почек, позволяющие предложить ряд новых прогностически значимых критериев прогрессирования МПГН 1 типа, IgA-нефропатии, МезПГН.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 123 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов работы, результатов собственных исследований, их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы из 154 источников, из них 115 -зарубежных авторов. Работа проиллюстрирована 14 рисунками и 7 таблицами.

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Абрамова, Таисия Владимировна

5. ВЫВОДЫ

1. В нейтрофильных гранулоцитах периферической крови больных мембранозно-пролиферативным гломерулонефритом 1 типа, IgA-нефропатией и мезангиально-пролиферативным гломерулонефритом снижено содержание катионных белков и пептидов.

2. Уровень экспрессии Е+-рецепторов на плазматической мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови у больных IgA-нефропатией и МезПГН ниже соответствующего показателя у здоровых людей. У больных МПГН 1 типа этот показатель варьирует в пределах нормы.

3. Выраженное повышение экспрессии СЗЬ+-рецепторов на плазматической мембране нейтрофилов периферической крови наблюдается при МПГН 1 типа, IgA-нефропатии и МезПГН.; интенсивность экспрессии Fcy-рецепторов у этих больных - в пределах нормальных величин.

4. Изменения функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов периферической крови связаны корреляционной зависимостью (положительной либо отрицательной) с иммунохимическими показателями сыворотки крови и субпопуляционным составом лимфоцитов периферической крови, что подтверждает различия изменений защитных функций при МПГН 1 типа, IgA-нефропатии и МезПГН.

5. При МПГН 1 типа прогностически благоприятными признаками являются снижение показателей ЛКТ, повышение экспрессии СЗЬ+- и Е+-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов периферической крови.

6. Прогностически благоприятными признаками при IgA-нефропатии являются нормальные величины показателей JIKT и экспрессии Feyрецепторов на плазматической мембране нейтрофилов периферической крови, а также снижение уровня экспрессии Е+-рецепторов и повышение уровня экспрессии СЗЬ+-рецепторов.

7. При МезПГН прогностически неблагоприятными признаками являются повышение экспрессии Е+- и Fcy-рецепторов на плазматической мембране нейтрофильных гранулоцитов.

8. Комплекс проведенных исследований, а также корреляционный анализ показателей функциональной активности нейтрофильных гранулоцитов (ЛКТ, уровня экспрессии Е+, СЗЬ+-, Fcy-рецепторов на мембране нейтрофильных гранулоцитов) и ряда показателей функционального состояния почек, позволяет предложить ряд новых прогностически значимых критериев оценки течения МПГН 1 типа, IgA-нефропатии, МезПГН.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Абрамова, Таисия Владимировна, Санкт-Петербург

1. Альбини Б., Брентьенс Я.Р., Андрее Д.А. Иммунопатология почки. М.: Изд-во "Медицина", 1982. - 264 с.

2. Арутюнян В.М., Микаелян Е.С., Багдасарян A.C. Клиническая нефрология. Ереван: Изд-во "Гитутюн" НАНРА, 2000. - 239 с.

3. Ботерашвили Н.М., Рыбакина Е.Г., Шанин С.Н., Козинец И.А., Сорокина М.Н., Иванова В.В. Продукция и эффекты действия интерлейкина-1 при серозных и гнойных менингитах у детей // Медицинская иммунология. 2000. - Т.2. - №3. - С.321-328.

4. Ботерашвили Н.М., Алешина Г.М., Сорокина М.Н., Иванова В.В, Корнева Е.А. Миелопероксидаза и лактоферрин в сыворотке крови и ликворе детей, больных менингитом // Медицинская иммунология. -2002. Т.4. - №4-5. - С.565-572.

5. Буглова С.Е., Чиж К.А., Сумисик Л.В. Иммунологические критерии активности гломерулонефритаю.// Тер. архив. 1992. - Т.64, №11 - С. 75-79.

6. Григорьев Е.А. Эпидемиология заболевания почек в Ленинграде.// Диспансеризация нефрологических больных. Л., 1988. - С.4-14.

7. Гланц С. Медико-биологическая статистика (пер. с англ.). М.: Изд-во «Практика», 1999. - 460 с.

8. Ефремова Н.Б., Быкова В.А., Козловская Л.В. Метод оценки резервной активности полиморфноядерных лейкоцитов (ПЯЛ) у больных хроническим гломерулонефритом.// I съезд нефрологов России (тезисы докладов). Казань, 1994.-С. 15.

9. Жмуров В.А., Малишевский М.В., Гапон Л.И., Мельников А.Н. Дестабилизация липидной фазы мембран нейтрофилов у больных гипертонической формой хронического гломерулонефрита. I съезд нефрологов России (тезисы докладов). Казань, 1994. С. 16.

10. Ю.Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Основы общей патологии. СПб.: "ЭЛБИ-СПб", 1999.- 620 с.

11. П.Козловская Л.В., Коррыева Б.Ч., Артемьева В.Б. Воспалительные механизмы активности нефрита. // 5 Пленум союзной проблемной комиссии «нефрология», 14-16 мая 1990. Тезисы докладов. Фрунзе, 1990.-С. 37.

12. Кокряков В.Н. Биология антибиотиков животного происхождения. СПб.: Наука, 1999. 162с.

13. Коэн А., Наст С. Иммуноопосредованные гломерулопатии.// Нефрология. 1998. Т.2. - №1. - С.106-115.

14. Кэбот Е., Мейер М. Экспериментальная иммунология // М.: Медицина, 1968.-С. 140-158.

15. Лесников В.А. Нейрогуморальные механизмы функции костного мозга как источника стволовых кроветворных клеток // В кн. Иммунофизиология. Под ред. чл.-корр. РАМН Е.А.Корневой. СПб.: Наука, 1993.-С. 294-319.

16. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и марофаге. -Новосибирск: Наука 1989. - 344с.

17. Мирошниченко Н.Г. Изменение фагоцитарного индекса у больных хроническим гломерулонефритом. // Врачебное дело. 1979. - №9. - С. 36-38.

18. Мирошниченко Н.Г., Полянцева JI.P., Козловская J1.B. Фагоцитарная активность лейкоцитов крови у больных хроническим гломерулонефритом. // Тер. архив. 1980. - №4. - С. 31-35.

19. Мухин H.A. Комментарии к разделам, написанным Е.М.Тареевым. // В кн. Нефрология. Руководство для врачей. Под ред. ч-корр РАМН И.Е.Тареевой. М.: "Медецина", 2-ое изд. 2000. - С. 205-210.

20. Наумова В.И., Михайлова М.З., Панченко JI.E., Бобкова В.П., Кетебаева З.Б., Чумакова О.В. Течение и исход IgA-гломерулонефрита.// Тер архив. 1996. - №6. - С. 82-84.

21. Новиков Д.Н. Справочник по клинической иммунологии и аллергологии// Минск, Беларусь. 1987. - 218с.

22. Пигаревский В.Е. Лизосомально-катионный тест.// В кн. Клиническая морфология нейтрофильных гранулоцитов. Сборник научных трудов под ред. проф. В.Е.Пигаревского.- Л. 1988. - С. 87-101.

23. Пигаревский В.Е. Новое в клинико-морфологической оценке функционального состояния нейтрофильных гранулоцитов // В кн. Клиническая морфология нейтрофильных гранулоцитов. Сборник научных трудов под ред. проф. В.Е.Пигаревского.- Л. 1988. - С. 3-11.

24. Рябов С.И. Нефрология (руководство для врачей). СПб.: СпецЛит 2000. 672с.

25. Рыбакина Е.Г., Корнева Е.А. Физиологическая роль интерлейкина-1 в механизмах развития стрессорной реакции. // Мед. Акад. Журнал. -2002. Т.2, №2. - С.4-17.

26. Тареева И.Е. Механизмы прогрессирования гломерулонефрита. // Тер.арх. 1988. - №6. - С. 3-7.

27. Тареева И.Е. Механизмы прогрессирования гломерулонефрита. // Тер арх.- 1996.-№6. -С. 5-10.

28. Серов В.В., Варшавский В.А., Иванов A.A. Морфология гломерулонефрита.// В кн. Нефрология. Руководство для врачей. Под ред. ч-корр РАМН И.Е.Тареевой. М: "Медецина" 2-ое изд., 2000. — С. 210-220.

29. Серов В.В., Варшавский В.А., Куприянов JI.A. Иммунопатология почки. М.: «Медицина» 1983. - 174 с.

30. Храйчик Д.Е. Секреты нефрологии. СПб.: «Бином Нев. диалект» 2001. -160 с.

31. Хейфец Л.Б., Абалакин В.А. Разделение форменных элементов крови человека в градиенте плотности верографин-фиколл.// Лабораторное дело. 1973. - №10. - С. 578-579.

32. Шалыгина Н.Б., Астафьева Н.В., Шалыгина А.Ю., Серебровская Л.В., Габрилович Д.Е., Семашко М.И., Хабарова В.В. Клеточный иммунный ответ при различных формах дифтерии у взрослых // ЖМЭИ. 1990. -№8. - С. 84-88.

33. Шилов Е.М. Иммунопатология болезней почек. // В кн. Нефрология. Руководство для врачей. Под ред. ч-корр РАМН И.Е.Тареевой. М.: "Медицина" 2-ое изд. 2000. - С. 132-144.

34. Шубич М.Г., Авдеева М.Г., Вакуленко А.Д. Адгезивные межклеточные взаимодействия. // Арх патологии. 1997. - т.59, №6. - С. 3-9.

35. Шулутко Б.И. Концепция гломерулонефрита как нозоологии.// Нефрология. 2002. - т.6, №2. - С. 102-108.

36. Шулутко Б.И. Нефропатии как сосудистая патология.// Нефрология. -2003. т.7, №4. - С. 21-28.

37. Arnaout М.А. Structure and function of the leukocyte adhesion molecules CD11/CD16.//Blood.- 1990.-V. 75.-P. 1037-1050.

38. Asghar S.S., Pasch M.C. Therapeutic inhibition of the complement system.// Front. Biosci. 2000. -V.l. - № 5. - P. E63-81.

39. Bach J. Evaluation of T-cells and thymic serum factor in man using the rosette technique.// Transpl. Rev. 1973. - V. 16. - P. 196-217.

40. Bainton D.F. Developmental biology of neutrophils and eosinophils // Inflammation: basic principles and clinical correlates, 3rd., edited by John I. Gallin and Ralph Snyderman. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia. - 1999.-P. 13-34.

41. Baund L., Fouqueray В., Philippe C., Ardaillou R. Reactive oxygen spicies as glomerular autacoids.// J. Am. Soc. Nephrol. 1992. - V.2. - P. 132-138.

42. Bevilacqua M.P., Stengelin S., Gimbrone M.A., Seed B. ELAM-1: An inducible receptor for neutrophils related to complement regulatory proteins and lectins. // Science. 1988. - V. 243. - P. 1160-1164.

43. Berger J., Hinglais N. Les depots intercapillaries dlgA-IgG.// J. Urol. Nephrol. 1968. - V. 74. - P. 694-695.

44. Bianco C., Patric R., Mussenweig U. A population of lymphocytes bearing a membrane receptor for antigen-antibody-complement complexes.// J. Exp. Med. 1970. - V. 132. - №4. - P. 702-720.

45. Cameron J.S., Turner D.R., Heaton J. Idiopathic mesangiocapillary glomerulonephritis. Comparison of types I and II in children and adults and long-term prognosis.// Am. J. Med. 1983. - V. 74. - P. 175-192.

46. Canton D. Adhesion molecules in renal disease.// Kidney Int. 1995. -V. 48.-P. 1687-1696.

47. Carla Z., Remuzzi G. Coagulation and thrombosis in immunologic renal disease.// Immunol. Renal. Dis. 1996. - V. 1. - P. 489-499.

48. Chen H.C., Guh J.Y., Chang J.M., Lai Y.H. Differential effects of FMLP-activated neutrophils from patients with IgA nephropathy enhanced endothelin 1 production of glomerular mesangial cells.// Nephron 2001. -V. 89. - P. 274-279.

49. Chen H.C., Tomino Y, Yaguchi Y, Fukui M, Koide H. Detection of polymorphonuclear cells, superoxide dismutase and poly C9 in glomeruli of patients with IgAN. Nephron 1991; 59: 38

50. Chen H.C., Tomino Y., Yaguchi Y., Fukui M., Yokoyama K., Watanaba A., Koide H. Oxidative metabolism of polymorphonuclear leukocytes (PMN) in patients with IgA nephropathy. Journal of Clinical Laboratory Analysis. -1992.-V. 6. -№ 1. P. 35-39.

51. Chun Gyoo Ihm, Jeong Taek Woo, Young Woon Chang, O Sun Kwon, Myung Jae Kim: Immunological abnormalitis in patient with IgA nephropathy.// Journal of Korean Medical Science 1986. - № 1. - P. 43-48.

52. Coppo R., Amore A., Gianoglio B., Reyna A., Peruzzi L., Roccatello D., Alessi D., Sena L.M. Serum IgA and macromolecular IgA reacting with mesangial matrix components.// Contr. Nephrol. 1993. - V. 104. - P. 162171.

53. Dixon F.J., Feldman J.D., Vazques J.J. Experimental glomerulonephritis. The pathogenesis of a laboratory model resembling the spectrum of human glomerulonephritis.// J Exp Med. 1961. - V.l 13. - №2. - P. 899-920.

54. Donovan K.L., Coles G.A., Williams J.D. Tumor necrosis factor-a augments the pro-inflammatory interaction between PMN and GBN via a CD 18 dependent mechanism.// Kidney Int. 1995. - V. 48 - P. 698-704.

55. Feng L., Xia Y., Yoshimura T., Wilson C.B. Modulation of neutrophil influx in glomerulonephritis in the rat with anti-macrophage inflammatory protein-2 (MIP-2) antibody.// J Clin Invest. 1995. - V. 95. - P. 1009-1017.

56. Gamble J.R., Skinner M.P., Berndt M.C., Vadas M.A. Prevention of activated neutrophil adhesion to endothelium by soluble adhesion protein GMP140.// Science. 1990. -V. 249. - P. 414-417.

57. Harada A., Sekido N., Akahoshi T., Wada T., Mukaida N., Matseahima K. Essential involvement of interleukin-8 (11-8) in acute inflammation.// J. of Leukocyte Biology. 1994. - V. 56. - № 5. - P. 559-564.

58. Harlan J.M. Neutrophil-mediated vascular injury.// Acta Med. Scand. Suppl. 1987.-V. 751.-P. 123-129.

59. Heeringa P., van Goor H., Iton-lindstrom Y., Maeda N. Lack of endothelial nitric oxide synthase aggravates murine accelerated anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis.// Am. J. Pathol. 2000. - V. 156. -№3.-P. 879-888.

60. Hiki Y., Kokubo T., Iwase H., Masaki Y., Sano T., Tanaka A., Toma K., Hotta K., Kobayashi Y. Under-glycosylation of IgAl hinge plays a certain role for its glomerular deposition in IgA nephropathy.// J. Am. Soc. Nephrol.-1999.-V. 10.-P. 760-769.

61. Hruby Z., Wendycz D., Kopec W., Zielinski B., Paczek L., Soin J. Mechanism of antinephritic effect of proteinase inhibitors in experimentalanti-GBM glomerulopathy.// Res. Exp. Med. 2000. - V. 199. - № 5. - P. 295-307.

62. Huang X.R., Holdsworth S.R., Tipping P.G. Th2 responses induce humorally mediated injury in experimental anti-glomerular basement membrane glomerulonephritis.// J Am Soc Nephrol. 1997. - V. 8. - P. 1101-1108.

63. Ito I., Yuzawa Y., Mizuno M., Nishikawa K., Tashita A., Jomori T., Hotta N., Matsuo S. Effects of a new synthetic selectin blocker in an acute rat thrombotic glomerulonephritis.// Am. J. of Kidney Diseases. 2001. - V. 38. -P. 265-273.

64. Janoff A. Neutrrophil proteases in inflammation.// Ann. Rew. Medicine. — 1972.-V. 23.-P. 177-190.

65. Janoff A. Elastase in tissue injury.// Ann. Rew. Medicine. 1985. - V. 36. -P. 207-216.

66. Johnson R., Klebanoff S.J., Couser W.G. Cellular mediators of immune injury: Neutrophils. In: Immunologic Renal Diseases, edited by Neilson E.G., Couser W.G. Philadelphia, Lippincott-Raven. - 1997. - P. 547-560.

67. Kashem A., Endoh M., Nomoto Y., Sakai H., Nakasawa H. Fca R expression on polymorphonuclear leukocyte and superoxide generation in IgA nephropathy.// Kidney Int. 1994. - V. 45. - P. 868-875.

68. Kashem A., Endoh M., Yano N., Yamauchi F., Nomoto Y., Sakai H., Kurakowa K. Glomerular FcaR expression and disease activity in IgA nephropathy.// Am. J. of Kidney Diseases. 1997. - V. 30. - P. 389-396.

69. Kincaid-Smith P., Nicholls K., Birchall I. Polymorphs infiltrate glomeruli in mesangial IgA glomerulonephritis.// Kidney International. — 1989. V. 36. -№ 6.-P. 1108-1111.

70. Koizumi R., Kanai H., Maezawa A., Kanda T., Nojima Y., Naruse T. Therapeutic effects of ulinastatin on experimental crescentic glomerulonephritis in rats.// Nephron. 2000. - V. 84. - № 4. - P. 347-352.

71. Kokubo T., Hiki Y., Iwase H., Horii A., Tanaka A., Nishikido J., Hotta K., Kobayashi Y. Evidence for involvement of IgA 1 hinge glycopeptide in IgAl-IgAl interaction in IgA nephropathy.// J. Am. Soc. Nephrol. 1997. - V. 8 -P. 915-919.

72. Kokubo T., Hiki Y., Iwase H., Tanaka A., Toma K., Hotta K., Kobayashi Y. Protective role of IgAl glycans against IgAl self-aggregation and adhesion to extracellular matrix proteins.// J. Am. Soc. Nephrol. 1998. - V. 9. - P. 2048-2054.

73. Korneva E.A., Rybakina E.G., Orlov D.S., Shamova O.V., Shanin S.N., Kokryakov V.N. Interleukin-1 and defensins in thermoregulation, stress and immunity.// Ann. N. Y. Acad. Sci. 1997. - V.831. - P.465-473.

74. Lai K.N. Future directions in the treatment of IgA nephropathy.// Nephron. — 2002. V. 92. - № 2. - P. 263-270.

75. Lai K.N., Leung J.S.K., Li P.K.T. Heat aggregated IgA prepared from patients with IgA nephropathy increases priming of human neutrophils to produce inositol triphosphate following FMLP stimulation in vitro.// Nephron.- 1995.-V. 69. -P.l-8.

76. Lai K.N., Leung J.S.K. Heat aggregated IgA prepared from patients with IgA nephropathy increases calcium mobilization and superoxide production of human neutrophils in vitro.// Nephron. 1993. - V. 64. - № 1 - P. 129-135.

77. Lai K.N., Shute J., Lindley I., Lai F.M., Yu A.W., Li P.K., Lai C.K. Neutrophil attractant protein-1/Interleukin 8 and its autoantibodies in IgA nephropathy.// Clin. Immunol. Immunopathol. 1996. - V. 80. - P. 47-54.

78. Lai K.N., Wong K.C., Li P.K.T., Lai C.K.V., Chan H.S., Chui Y.I., Haskard D.O. Circulating leukocyte-endothelial adhesion molecules in IgA nephropathy.// Nephron. 1994. - V. 68. - P.294-300.

79. Lefkowith J.B. Leukocyte migration in immune complex glomerulonephritis: role of adhesion receptors.// Kidney Int. 1997. - V. 51 - P. 1469-1475.

80. Lehrer R.I., Lichtenstein A.K., Ganz T. Defensins: Antimicrobial and cytotoxic peptides of mammalian cells.// Annu. Rev. Immunol. 1993. - V. 11.-P. 105-128.

81. Li H.L., Hancock W.W., Hooke D.H., Dowling J.P., Atkins R.C. Mononuclear cell activation and decreased renal function in IgA nephropathy with crescents.// Kidney Int. 1990 - V. 37. - P. 1552-1556.

82. Linas S.L., Whittenburg D., Parsons P.E., Repine J.E. Ishemia increases neutrophil retention and worsens acute renal failure: role of oxygen metabolites and ICAM-1.// Amer. J. Kidney Internatiol. 1995. - V. 48. - P. 1584-1591.

83. Magen D., Mandel H., Berant M., Ben-Izhak O., Zelikovic I. MPGN type I induced by granulocyte colony stimulating factor.// Pediatr. Nephrol. 2002. -V. 17.-№5.-P. 370-372.

84. Manchini G., Garbonara A.L., Heremas J.F. Immunochemical quantitation of antigens by single radial immunodiffusion// Immunochemistry. 1965. -V. 2.- P.235-258.

85. Matsumoto K. Effect of various cytokines, lipopolysaccharides, and soluble immune complexes on the release of interleukin-8 by monocytes from patients with IgA nephropathy (letter).// Nephron. 1995. - V. 69. - P. 352353.

86. Mayadas T.N., Mendrick D.L., Brady H.R., Tang T., Papayianni A., Assmann K.J., Wagner D.D., Hynes R.O., Cotran R.S. Acute passive antiglomerular basement membrane nephritis in P-selectin-deficient mice.// Kidney Int. 1996. - V. 49. - P. 1342-1349.

87. Mclntyre T.M., Zimmerman G.A., Prescott S.M. Leukotrienes C4 and D4 stimulate human endothelial cells to synthesize platelet-activating factor and bind neutrophis.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. - V. 83. - P. 22042208.

88. McMahon B., Mitchel S., Braly H.R., Godson C. Lipoxins: Revelations in resolution.// TiPS. 2001. - V. 22. - P. 391-395.

89. Mizutani M., Yuzawa Y., Maruyama I. Glomerular localization of trombomodulin in human glomerulonephritis.// Lab. Invest. 1993. - V. 69. -P. 193-202.

90. Mulligan M.S., Johnson K.J., Todd R.F., Issekutz T.B., Miyasaka M., Tamatani T., Smith C.W., Anderson D.C., Ward P.A. Requirements for leukocyte adhesion molecules in nephrotoxic nephritis.// J. Clin. Invest. -1993.-V. 91.-P. 577-587.

91. Nath K.A., Croatt A.J., Hostetter T.N. Oxygen consumption and oxidant stress in surviving nephrons.// Am. J. Physiol. 1990. - V. 258. - P. F1354-F1362.

92. Noris M., Remuzzi G. New insights into circulating cell-endothelium interaction and their significance for glomerular pathophysiology.// Am. J. of Kidney Diseases. 1995. - V. 26. - № 3. - P. 541-548.

93. Oda T., Hotta O., Taguma Y., Kitamura H., Sudo K., Harigome I., Chiba S., Yoshizawa N., Nagura H. Involvement of neutrophil elastase in crescenticglomerulonephritis.// J. Human Pathology. 1997. - V. 28. - № 6. - P. 720728.

94. Ohse T., Ota T., Kieran N., Godson C., Yamada K., Tanaka T., Fujita T., Nangaku M. Modulation of interferon-induced genes by lipoxin analogue in anti-glomerular basement membrane nephritis.// J. Am. Soc. Nephrol. — 2004. V. 15. - № 4. - P. 919-927.

95. O'Meara Y.M., Brady H.R. Lipoxins, leukocyte recruitment and the resolution phase of acute glomerulonephritis.// Kidney Int -Supplement. -1997.-V. 58.-P. S56-61.

96. Papayianni A., Serhan C.N., Brady H.R. Lipoxin A4 and B4 inhibit leukotriene-stimulated interaction of human neutrophils and endothelial cells.// J. Immunol. 1996. - V. 156. - P. 2264-2272.

97. Papayianni A., Serhan C.N., Philips M.L., Rennke H.G., Brady H.R. Transcellular biosynthesis of Lipoxin A4 during adhesion of platelets and neutrophils in experimental immune complex glomerulonephritis.// Kidney Int. 1994. - V.47. - P. 1295-1302.

98. Peichl P., Ceska M., Broell H., Effenberger F., Lindley I.L.D. Human neutrophil activating peptide/interleukin 8 acts as an autoantigen in rheumatoid arthritis.// Annals Rheum. Dis. 1992. - V. 51. - P. 19-22.

99. Peters D.K., Martin A., Weinstein A. Complement studies in membranoproliferative glomerulonephritis.// Clin. Exp. Immunol. 1972. — V. 11.-P. 311-320

100. Poelstra K., Hardonk M.J., Koudstaal J., Bakker W.W. Intraglomerular platelet aggregation and experimental glomerulonephritis.// Kidney Int. -1990.-V. 37.-№6.-P. 1500-1508.

101. Pollak V.E. Glomerular thrombosis predicts progression of glomerulonephritis: Can we prevent progression?// Am. J. Kidney Dis. -1995.-V. 26.-P. 535-540.

102. Riho J., Hoskava V., Koslik F.G. The use of polyethylene glucol for immune complex detection in human sera// Molecular Immunology. 1979. -V. 16.- № 7. -P.489-493.

103. Robson M.G., Cook H.T., Pusey C.D., Walport M.J., Davies K.A. Antibody-mediated glomerulonephritis in mice: the role of endotoxin, complement and genetic background.// Clin. Exp. Immunol. 2003. - V. 133.-№3.-P. 326-333.

104. Rosenberg R.D., Àird W.C. Vascular-bed-specific hemostasis and hypercoagulable states.// N. Engl. J. Med. 1999. - V. 340. - P. 1555-1564.

105. Rosenkranz A.R., Mendrick D.L., Cotran R.S., Mayadas T.N. P-selectin deficiency exacerbates experimental glomerulonephritis: A protective role for endothelial P-selectin in inflammation.// J. Clin. Invest. 1999. - V. 103. -P. 649-659.

106. Saleem S., Dai Z., Coelho S.N., Konieczny B.T., Assman K.J.M., Baddoura F.K., Lakkis F.G. IL-4 is endogenous inhibitor of neutrophil influx and subsequent pathology in acute antibody-mediated inflammation.// J. Immunol. 1998. - V. 160. - P. 979-984.

107. Sano T., Hiki Y., Kokubo T., Iwase H., Shigematsu H., Kobayashi Y. Enzymatically deglycosylated human IgAl molecules accumulate and induce inflammatory cell reaction in rat glomeruli.// Nephrol. Dial. Transplant. -2002.-V. 17.-P. 50-56.

108. Savill J., Fadok V.A. Corpse clearance defines the meaning of cell death.// Nature. 2000. - V. 407. - P. 784-787.

109. Savill J., Smith J., Sarraf C., Ren Y., Abbott F., Rees A. Glomerular mesangial cells and inflammatory macrophages ingest neutrrophils undergoing apoptosis.// Kidney Int. 1992. V. 42. - № 4k> - P. 924-936.

110. Schrijver G., Bogman J.J.T., Assmann K.J.M., de Wall R.M.W., Robben H.C.M., van Gasteren H., Koene R.A.P. Anti-GBN nephritis in the mouse: role of granulocytes in the heterologous phase.// Kidney Int. 1990. - V. 38. -P. 86-95.

111. Segerer S., Nelson P.J., Schlondorff D. Chemokines, chemokine receptors, and renal disease: From basic science to pathophysiologic and the therapeutic studies.// J. Am. Soc. Nephrology. 2003. - V. 14. - P. 338-351.

112. Shah S.V. The role of reactive oxygen metabolites in glomerular disease.// Annu. Rev. Physiol. 1995. - V. 57. - P.245-262.

113. Sheerin N.S., Springall T., Carrol M.C., Hartley B., Sacks S.H. Protection against anti-glomerular basement membrane (gbm)-mediated nephritis in C3-and C4-deficient mice.// J. Clinical & Experimental Immunology. 1997. -V. 110. - № 3. - P. 403-409.

114. Soma J., Saito T., Ootaka T., Sato H., Abe K. Differences in glomerular leukocyte infiltration between IgA nephropathy and membranoproliferative glomerulonephritis.// Nephrol. Dial. Transplant. 1998. - V. 13. - P. 608616.

115. Stambe C., Atkins R.C., Tesch G.H., Kapoun A.M., Hill P.A., Schreiner G.F., Nikolic-Paterson D.J. Blockade of p38a MAPK Ameliorates Acute Inflammotory Renal Injury in Rat Anti-GBM Glomerulonephritis.// J. Am. Soc.Nephrology. 2003.-V. 14.-P. 338-351.

116. Takazoe K., Tesch G.H., Hill P.A., Hurst L.A., Jun Z., Lan H.Y., Atkins R.C., Nikolic-Paterson D.J. CD44-mediated neutrophil apoptosis in the rat.// Kidney Int. 2000. - V. 58. - № 5. - P. 1920-1930.

117. Tao K., Nicholls K., Rockman S., Kincaid-Smith P. Expression of complement 3 receptor (CR1 and Cr3) on neutrophils and erytrocytes in patients with IgA nephropathy.// Clinical Nephrology. -1989. V. 32. - № 5. -P. 203-208.

118. Theofilopoulos A.N., Dixon F.J. The biology and detection of immune complexes.// In: Advances in immunology. Ed. FJ Dixon. New York. 1979. -V. 28.-P. 89-220.

119. Tipping P.G., Huang X.R., Berndt M.C., Holdsworth S.R. A role P-selectin in complement-independent neutrophil-mediated glomerular injuri.// Kidney Int. 1994. - V. 46. - P. 79-88.

120. Trachtman B., Schwob N. Administration of vitamin E attenuates chronic puromycin aminonucleoside nephropathy (abstract).// J. Am. Soc. Nephrol. -1993. — V.4. P. 785.

121. Travis J., Savesen G.S. Human plasma proteinase inhibitors.// Ann. Rev. Biochem. 1983. - V. 52. - P. 655-709.

122. Wada T., Yokoyama H., Tomosugi N., Hisada Y., Ohta S., Naito T., Kobayashi K., Mukaida N., Matsushima K. Detection of urinary interleukin-8 in glomerular diseases.// Kidney Int. 1994. - V. 46 - P. 455-460.

123. Ward K.P., Kuemmerle N.B., Krieg R.J., Saborio P., Norkus E.P., Chan J.C.M. Indices of progression of IgA nephropathy are modulated by a-tocopherol in rats.// Clin. Exp. Nephrol. 2000. - V. 4. - P. 187-192.

124. Werteim W.A., Kunkel S.L., Standiford T.J., Burdick M.D., Becker F.S., Wilke C.A., Gilbert A.R., Strieter R.M. Regulation of neutrophil-derived IL-8: the role of prostaglandin E2, dexamethasone, and IL-4.// J. Immunol. -1993.-V. 151.-P. 2166-2178.

125. Wu X., Dolecki G.J., Sherry B., Zagorski J., Lefkowith J.B. Chemokines are expressed in a myeloid cell-dependent fashion and mediate distinct functions in immune complex glomerulonephritis in rat.// J. Immunol. -1997. V. 158. - P. 3917-3924.

126. Wu X., Helfrich M.H., Horton M.A., Feigen L.P., Lefkowith J.B. Fibrinogen mediates platelet-polymorphonuclear leukocyte cooperation during immune-complex glomerulonephritis in rat.// J. Clin. Invest. 1994. -V. 94. - № 3. - P. 982-936.

127. Wu X., Pippin J., Lefkowith J.B. Attenuation of immune-mediated glomerulonephritis with an anti-CD 1 lb monoclonal antibody.// Am. J. Physiol. 1993. - V. 264. - P. F715-F721.

128. Xu H., Gonzalo J., Pierre Y., Williams I., Kupper T., Cotran R., Springer T., Gutierrez-Ramos J. Leukocytosis and resistance to septic shock in intercellular adhesion molecule 1-deficient mice.// J. Exp. Med. 1994. - V. 180.-P. 95-102.

129. Yared A., Albrightson W.C., Griswold D., Takahashi K., Fogo A., Badr K.F. Functional significance of leukotriene B4 in normal and glomerulonephritic kidneys.// J. Am. Soc. Nephrol. 1991. - V. 2. - P. 4556.

130. Yoshioka T., Ichikawa I. Glomerular dysfunction induced by polymorphonuclear leukocyte-derived reactive oxygen species.// Am. J. Physiol. 1989. - V. 257. - P. F53-F59.

131. Yoshioka K., Takemura T., Murakami K., Okada M., Yagi K., Miyazato H., Matsushima K., Maki S. In situ expression of cytokine in IgA nephropathy.// Kidney Int. 1993. - V. 44. - P. 825-833.

132. Zachem C.R., Alpers C.E., Way W., Shankland S.J., Couser W.G., Johnson RJ. A role for P-selectin in neutrophil and platelet infiltration in immune complex glomerulonephritis.// J. Am. Soc. Nephrol. 1997. - V. 8. -P. 1838-1844.

Информация о работе

Абрамова, Таисия Владимировна
кандидата биологических наук
Санкт-Петербург, 2005
ВАК 03.00.25

Диссертация

Функциональная активность нейтрофильных гранулоцитов при хроническом гломерулонефрите у человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы