Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Фосфорилирование регуляторных белков при сокращении гладких мышц

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Крымский, Михаил Александрович

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Регуляция сокращения гладких мышц.

2. Фазные и тонические гладкие мышцы.

3. Тоническое сокращение гладких мышц.

4. Молекулярные механизмы регуляции Са2+-чувствительности гладкомышечного сокращения.

4.1 Са2+-зависимость фосфорилирования легких цепей миозина. а) Фосфорилирование и модуляция активности MLCK. б) Модуляция активности фосфатазы RLC. в) Влияние KRP на сокращение гладких мышц. г) Фосфорилирование RLC Са2+-независимыми киназами.

4.2 Зависимость силы сокращения от фосфорилирования RLC. а) Регуляция нефосфорилированных актомиозиновых мостиков. б) Роль кальдесмона в регуляции Са2+-чувствительности сокращения. в) Снижение зависимости силы сокращения от фосфорилирования RLC.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. Материалы.

2. Методы.

2.1 Биохимические и физико-химические методы.

Определение концентрации белков.

Приготовление образцов тканей для электрофореза.

Выделение тканевого KRP.

Электрофорез и денситометрия.

Иммуноблоттинг.

Изоэлектрическое фокусирование.

Фосфорилирование белков in vitro.

Фосфоаминокислотный анализ (РАА).

Двумерные фосфопептидные карты (2D-PPM).

Выделение фосфопептидов.

2.2 Иммунологические методы.

Получение фосфоспецифичных антител.

2.3 Молекулярно-биологические методы.

Трансформация Е. coli.

Бактериальная экспрессия.

Очистка рекомбинантного KRP.

2.4 Физиологические методы.

Измерение сократительной активности мышц.

Нагрузка ткани [32Р]Р04 и фосфорилирование in situ.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Различия в сокращении тонических и фазных гладких мышц под воздействием форболового эфира.

2. Относительное содержание киназы легких цепей миозина, KRP и кальдесмона в экстрактах тонических и фазных гладких мышц.

3. Фосфорилирование белков в гладких мышцах под воздействием форболового эфира.

4. Определение участков фосфорилирования MLCK, KRP и кальдесмона.

4.1 Определение сайтов фосфорилирования кальдесмона in vivo.

4.2 В ткани KRP фосфорилируется по нескольким остаткам в короткой N-концевой области Ser12-Ser18.

4.3 Картирование участков фосфорилирования киназы легких цепей миозина.

4.4 Фосфорилирование MLCK в гладкомышечных тканях происходит в основном по KRP домену.

19 1R

5. Получение фосфо-специфичных антител к Ser и Ser KRP.

6. Фосфорилирование KRP, MLCK по участкам РКА и МАРК в тонических гладких мышцах под воздействием форболового эфира.

7. Фосфорилирование кальдесмона по сайтам МАР-киназы в тонических гладких мышцах под воздействием форболового эфира и форсколина.

8. Фосфорилирование KRP снижает силу сокращения скинированной фазной мышцы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Фосфорилирование регуляторных белков при сокращении гладких мышц"

Гладкие мышцы входят в состав всех внутренних органов и кровеносных сосудов и вовлечены в регуляцию гомеостаза организма. Нарушение их нормального функционирования сопутствует, а в ряде случаев является причиной патологических состояний, таких как гипертоническая болезнь, инфаркт миокарда, инсульт, сосудистые дистонии, патологии пищеварительной и мочеполовой систем, родовые нарушения и др. Понимание молекулярных механизморв регуляции сокращения является актуальным не только с фундаментальной, но и с прикладной точки зрения для создания эффективных и специфических способов воздействия на сократительный аппарат гладких мышц.

Установлено, что в основе сокращения всех известных типов мышц позвоночных (поперечно-полосатых и гладких) лежит энергозависимое скольжение филаментов актина и миозина друг относительно друга и что сигналом к сокращению является повышение внутриклеточной концентрации свободного Са2+ ([Ca2+]j). С другой стороны, гладкие мышцы значительно отличаются от поперечно-полосатых мышц по механизмам регуляции сокращения. Если в поперечно-полосатой мускулатуре сила сокращения практически пропорциональна [Са ]•„ то в гладкой мышце такой зависимости не наблюдается (Kamm and Stall, 1985; Somlyo and Somlyo, 1994). Различные стимулы могут индуцировать одинаковый подъем [Са2+]; и при этом вызывать разные сократительные ответы, и наоборот, одинаковые силовые характеристики гладких мышц могут вызываться агонистами, мобилизующими [Ca2+]i в различной степени. Эти наблюдения позволяют предположить, что в гладкой мышце существуют дополнительные механизмы, регулирующие чувствительность этой ткани к [Ca2+]i. Изменяя Са2+-чувствительность сократительного аппарата, гладкая мышца как бы "симулирует" изменения внутриклеточной концентрации свободного [Са2+], при ее фактическом постоянстве. Предполагается, что это свойство гладкой мышцы играет важную роль в т.н. тоническом сокращении, т.е. способности гладкой мышцы длительное время пребывать в сокращенном состоянии.

В физиологических экспериментах установлено, что процесс сокращения гладкой мышцы сопровождается фосфорилированием ряда сократительных и регуляторных белков. Классическим примером этого является фосфорилирование регуляторных легких цепей 7 миозина специальным Са2+/кальмодулин-зависимым ферментом - киназой легких цепей миозина, в результате чего активируется АТФаза актомиозина и развивается сокращение. Помимо миозина, при сокращении фосфорилируются и другие регуляторные белки: сама киназа легких цепей миозина, белок KRP, являющийся независимо экспрессируемым С-концевым фрагментом киназы легких цепей миозина, и белок кальдесмон. Однако остается неясным, вносит ли вклад такое фосфорилирование в изменение чувствительности гладких мышц к [Са2+];, какие внутриклеточные каскады и протеинкиназы вовлечены при этом в фосфорилирование in vivo, и как фосфорилирование влияет на активность этих белков.

В настоящей работе исследовано фосфорилирование киназы легких цепей миозина, KRP и кальдесмона при сокращении гладких мышц в ответ на форболовый эфир, наиболее сильный модулятор Са2+-чувствительности, определены участки и продемонстрированы вероятные эффекты фосфорилирования этих белков in vivo.

Целью настоящей работы являлось изучение роли фосфорилирования регуляторных белков в сокращении гладких мышц.

В работе были поставлены следующие экспериментальные задачи:

1. Исследовать сокращение гладких мышц под воздействием форболового эфира и эндогенное фосфорилирование киназы легких цепей миозина, KRP и кальдесмона.

2. Определить участки фосфорилирования этих белков в гладкомышечной ткани.

3. Изучить влияние фосфорилирования регуляторных белков на их свойства в модельных сократительных системах.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Крымский, Михаил Александрович

ВЫВОДЫ

1. Обнаружено, что форболовый эфир PDBu вызывает сокращение тонических, но не фазных гладких мышц позвоночных. Сила форбол-зависимого сокращения коррелирует с увеличением степени фосфорилирования кальдесмона и MLCK. Фосфорилирование KRP не связано с развитием тонического сокращения, но может участвовать в расслаблении фазных гладких мышц.

2. Установлено, что фосфорилирование кальдесмона в тонической мускулатуре происходит, в основном, с участием МАР-киназ. Определены фосфорилируемые остатки и обнаружен новый участок фосфорилирования кальдесмона (Thr673), инвариантныи у высших позвоночных. Показано существование в гладких мышцах новой киназы кальдесмона, отличной от протеинкиназ, фосфорилирующих этот белок in vitro.

3. Показано, что фосфорилирование МАР-киназой отменяет ингибирование кальдесмоном

707

АТФазы актомиозина in vitro, а степень фосфорилирования Ser кальдесмона МАР-киназой in vivo коррелирует с циклом сокращения-расслабления гладких мышц сосудов.

4. Определены остатки KRP и MLCK, фосфорилируемые в интактной гладкой мускулатуре (Ser12/Ser828, Ser15/Ser831 и Ser18/Ser834, соответственно). Идентифицированы протеинкиназы, способные фосфорилировать эти остатки in vitro.

5. Получены и охарактеризованы фосфоспецифические антитела против MLCK и KRP, фосфорилированных по гомологичным участкам сАМР-зависимой протеинкиназой и МАР-киназой. Продемонстрирована их применимость для неизотопного анализа фосфорилирования продуктов генетического локуса MLCK в тканях позвоночных.

89

БЛАГОДАРНОСТИ

Хочу выразить глубокую благодарность моим научным руководителям Воротникову Александру Вячеславовичу и Ширинскому Владимиру Павловичу за помощь и участие в проведении работы и обсуждении полученных данных.

Я искренне благодарен перечисленным ниже сотрудникам Кардиоцентра и зарубежным коллегам за помощь в проведении ряда экспериментов:

Беспалова Ж. Д. Вилиткевич Е.Л. Гончарова Е.А. Грачева Е.О. Гурский Я.Г. Дуднакова Т.В. Ефремов Е.Е. Лапшин А.В. Молокоедов А.С. Назимов И.В.

Никашин А.В. Овчинников М.В. Сидорова М.В. Хапчаев А.Ю. Чибалина М.В. Arner А. Forner К. Krause Е. Lukas T.J. Marston S.B.

Отдельно, хочу выразить огромную благодарность всем сотрудникам лаборатории Пептидного Синтеза, а также моей семье за поддержку и помощь при проведении мной данной работы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Известные различия в изоформах и свойствах сократительных белков фазных и тонических гладких мышц не позволяют полностью объяснить отличия в сократительном ответе этих тканей. В данной работе мы предприняли попытку связать различия в фосфорилировании регуляторных белков с особенностями сокращения тонических и фазных гладких мышц. В качестве модели было выбрано сокращение при стимуляции форболовыми эфирами. При этом происходило сокращение сосудистых тонических ГМ, по-видимому, за счет изменения кальций-чувствительности сократительного аппарата, и не происходило сокращения фазных мышц тонкого кишечника. На основании полученных данных мы предлагаем следующую модель участия фосфорилирования кальдесмона, MLCK и KRP в форбол-зависимом сокращении тонических и фазных гладких мышц (Рис. 33).

Тонические ГМ сила н t время \

4 I сокращение

Фазные ГМ сила время

PDBu I I 1 нет сокращения

Рис. 33. Предполагаемая схема PDBu-зависимого сокращения тонических и фазных гладких мышц.

При стимуляции форболовым эфиром тонических гладких мышц сосудов происходит фосфорилирование MLCK и кальдесмона, которое может способствовать развитию сокращения. Из обзора литературы и наших данных следует, что в присутствии внеклеточного кальция стимуляция этих тканей форболовым эфиром вызывает сокращение, сопровождаемое небольшим увеличением фосфорилирования регуляторных легких цепей миозина, что может отражать повышенную активность MLCK. В бескальциевой среде PDBu вызывает меньшее по силе сокращение, но при этом легкие цепи не фосфорилируются, а сокращение может происходить за счет снятия ингибирующего действия кальдесмона при фосфорилировании по сайтам МАР-киназ. По нашему мнению, в физиологических условиях оба этих белка совместно принимают участие в регуляции сокращения.

В фазных гладких мышцах форболовый эфир не вызывает сокращения, что, с одной стороны, может быть обусловлено отсутствием фосфорилирования MLCK и кальдесмона, а с другой - наличием больших количеств КНР, фосфорилирование которого, по нашим данным, может препятствовать развитию сокращения.

В настоящее время проводится дальнейшая работа по идентификации протеинкиназы, транзиторно фосфорилирующей кальдесмон при стимуляции фазных гладких мышц форболовым эфиром. Если такая протеинкиназа будет обнаружена, то мы попытаемся определить, способно ли фосфорилирование кальдесмона этой протеинкиназой препятствовать сокращению фазных ГМ. Мы исследуем также способность MAP-киназы фосфорилировать Thr730 кальдесмона млекопитающих, соответствующий Trh673 кальдесмона птиц. В дальнейшем планируется, используя специфические ингибиторы МАР-киназ, исследовать влияние фосфорилирования кальдесмона этими киназами на сокращение тонических гладких мышц в бескальциевой среде. Мы планируем в экспериментах in vitro изучить влияние фосфорилирования МАР-киназой и протеинкиназой А на активность MLCK в адекватных условиях, подразумевающих использование в качестве субстрата филаментов миозина или акто-миозиновый комплекс, а не выделенные легкие цепи или короткий синтетический пептид. В целом, молекулярные механизмы регуляции гладкомышечного сокращения посредством фосфорилирования сократительных и регуляторных белков представляют несомненный интерес и, несомненно, будут изучаться в дальнейшем.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Крымский, Михаил Александрович, Москва

1. Богачева,Н.В. и Гусев,Н.Б. (1997) Структура и функции кальдесмона и кальпонина.

2. Успехи иологической химии. 37:3-48.

3. Воротников,А.В., Крымский,М.А., Чибалина,М.В., Кудряшов,Д.С. и Ширинский,В.П. (2000) Различия в форболзависимом фосфорилировании регуляторных белков и сокращении фазных и тоническихгладких мышц. Цитология. 42:378-391.

4. Гусев,Н.Б., Воротников,А.В., Бирюков,К.Г.и Ширинский,В.П. (1991) Кальдесмон икальпонин белки, участвующие в регуляции взаимодействия миозина и актина в немышечных клетках и гладких мышцах. - Биохимия. 56:1347-1367.

5. Чибалина,М.В. (2000) Экспрессия, локализация и фосфорилирование изоформ киназы легких цепей миозина в клетках животных и человека. Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук.

6. ЧурылоДА. (2000) Кальпонин: биологические, химические и структурные свойства.1. Цитология. 42:7-18.

7. Ширинский,В.П. (1999) Белки-регуляторы актомиозина и их роль в сокращениигладких мышц. Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук.

8. Abe,M., Hasegawa,K, and Hosoya,H. (1996) Activation of chicken gizzard myosin light chain kinase by Ca2+/calmodulin is inhibited by autophosphorylation. Cell Struct.Funct. 21:183-188.

9. Adam,L.P., Gapinski,C.J., and Hathaway,D.R. (1992) Phosphorylation sequences in h-caldesmon fromphorbol ester- stimulated canine aortas. FEBS Lett. 302:223-226.

10. Adam,L.P., Haeberle,J.R, and Hathaway,D.R. (1989) Phosphorylation of caldesmon in arterial smooth muscle. J.Biol.Chem. 264:7698-7703.

11. Adam,L.P. and Hathaway,D.R. (1993) Identification of mitogen-activated protein kinase phosphorylation sequences in mammalian h-Caldesmon. FEBS Lett. 322:56-60.

12. Adelstein,R.S. and Klee,C.B. (1982) Purification of smooth muscle myosin light-chain kinase. -Methods Enzymol. 85 Pt B:298-308.

13. Alessi,D.R., Cuenda,A., Cohen,P., Dudley,D.T., and Saltiel,A.R. (1995) PD 098059 is a specific inhibitor of the activation of mitogen- activated protein kinase kinase in vitro and in vivo. -J.Biol.Chem. 270:27489-27494.

14. Alessi,D.R, MacDougall,L.K, Sola,M.M., Ikebe,M., and Cohen,P. (1992) The control of protein phosphatase-1 by targetting subunits. The major myosin phosphatase in avian smooth muscle is a novel form of protein phosphatase-1. Eur.J.Biochem. 210:1023-1035.

15. Amano,M., Ito,M., Kimura,K., Fukata,Y., Chihara,K., Nakano,T., Matsuura,Y., and Kaibuchi,K. (1996) Phosphorylation and activation of myosin by Rho-associated kinase (Rho-kinase). -J.Biol. Chem. 271:20246-20249.

16. Barany,K., Polyak,E., and Barany,M. (1992) Protein phosphorylation in arterial muscle contracted by high concentration of phorbol dibutyrate in the presence and absence of Ca2+. -Biochim.Biophys.Acta. 1134:233-241.

17. Barany,M. and Barany,K. (1996): Protein Phosphorylation during Contraction and Relaxation. In: Biochemistry of Smooth Muscle Contraction, edited by M.Barany, pp. 321-339. Academic Press, Inc., New York.

18. Blumenthal,D.K. and Stull,J.T. (1980) Activation of skeletal muscle myosin light chain kinase by calcium(2+) and calmodulin. Biochem. 19:5608-5614.

19. Boyle,W.J., Van der Geer,P., and Hunter,T. (1991) Phosphopeptide mapping and phosphoamino acid analysis by two- dimensional separation on thin-layer cellulose plates. Methods Enzymol. 201:110-149.

20. Bretscher,A. (1984) Smooth muscle caldesmon. Rapid purification and F-actin cross- linked properties. J.Biol.Chem. 259:12873-12880.

21. Chacko,S. and Eisenberg,E. (1990) Cooperativity of actin-activated ATPase of gizzard heavy meromyosin in the presence of gizzard tropomyosin. J.Biol.Chem. 265:2105-2110.

22. Chatterjee,M. and Tejada,M. (1986) Phorbol ester-induced contraction in chemically skinned vascular smooth muscle. Am.J.Physiol. 251:C356-C361

23. Chew,M.W.K. and Squire,J.M. (1995) Packing of a-helical coiled-coil myosin rods in vertebrate muscle thick filaments. J.Struct.Biol. 115:233-249.

24. Childs,TJ. and Mak,A.S. (1993) Smooth-muscle mitogen-activated protein (MAP) kinase: purification and characterization, and the phosphorylation of caldesmon. Biochem. J. 296 ( Pt 3):745-751.

25. Collins,E.M., Walsh,M.P., and Morgan,K.G. (1992) Contraction of single vascular smooth muscle cells by phenylephrine at constant Ca2+.i. Am.J.Physiol.Heart Circ.Physiol. 262:H754-H762

26. Conti,M.A. and Adelstein,R.S. (1981) The relationship between calmodulin binding and phosphorylation of smooth muscle myosin kinase by the catalytic subunit of 3':5' cAMP-dependent protein kinase. J.Biol.Chem. 256:3178-3181.

27. Cook,A.K., Carty,M., Singer,C.A., Yamboliev,I.A., and Gerthoffer,W.T. (2000) Coupling of M(2) muscarinic receptors to ERK MAP kinases and caldesmon phosphorylation in colonic smooth muscle. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 278:G429-G437

28. D'Angelo,E.K., Singer,H.A., and Rembold,C.M. (1992) Magnesium relaxes arterial smooth muscle by decreasing intracellular Ca2+ without changing intracellular Mg2+. J.Clin.Invest. 89:19881994.

29. D'Angelo,G., Graceffa,P., Wang,C.A., Wrangle,J., and Adam,L.P. (1999) Mammal-specific, ERK-dependent, caldesmon phosphorylation in smooth muscle. Quantitation using novel anti-phosphopeptide antibodies. J.Biol.Chem. 274:30115-30121.

30. Dabrowska,R., Aromatorio,D., Sherry, J.M., and Hartshorne,D J. (1977) Composition of the myosin light chain kinase from chicken gizzard. Biochem Biophys Res Commun. 78:1263-1272.

31. Deng,J.Т., Van Lierop,J.E., Sutherland,C., and Walsh,M.P. (2001) Ca2+-independent smooth muscle contraction, a novel function for integrin-linked kinase. J.Biol.Chem. 276:16365-16373.

32. Dessy,C., Kim,I., Sougnez,C.L., Laporte,R., and Morgan,K.G. (1998) A role for MAP kinase in differentiated smooth muscle contraction evoked by alpha-adrenoceptor stimulation. -Am.J.Physiol. 275:C1081-C1086

33. Di Blasi,P., Van Riper,D., Kaiser,R., Rembold,C.M., and Murphy,R.A. (1992) Steady-statedependence of stress on cross-bridge phosphorylation in the swine carotid media. Am.J.Physiol. 262:C1388-C1391

34. Di Salvo,J., Steusloff,A., Semenchuk,L., Satoh,S., Kolquist,K., and Pfitzer,G. (1993) Tyrosine kinase inhibitors suppress agonist-induced contraction in smooth muscle. Biochem Biophys Res Commun. 190:968-974.

35. Dillon,P.F. and Murphy,R.A. (1982) Tonic force maintenance with reduced shortening velocity in arterial smooth muscle. Am.J.Physiol. 242:C102-C108

36. Driska,S.P. (1987) High myosin light chain phosphatase activity in arterial smooth muscle: can it explain the latch phenomenon? Prog.Clin.Biol.Res. 245:387-398.

37. Eto,M., Ohmori,T., Suzuki,M., Furuya,K, and Morita,F. (1995) A novel protein phosphatase-1 inhibitory protein potentiated by protein kinase C. Isolation from porcine aorta media and characterization. J.Biochem. 118:1104-1107.

38. Foster,D.B., Shen,L.H., Kelly,J., Thibault,P., Van Eyk,J.E., and Mak,A.S. (2000) Phosphorylation of caldesmon by p21-activated kinase. Implications for the Ca(2+) sensitivity of smooth muscle contraction. -J.Biol.Chem. 275:1959-1965.

39. Foyt,H.L. and Means,A.R. (1985) Characterization and analysis of an apparent autophosphorylation of chicken gizzard myosin light chain kinase. J.Cyclic.Nucleotide.Protein.Phosphor.Res. 10:143-155.

40. Fu,X., Gong,M.C., Jia,T., Somlyo, A. V., and Somlyo, A.P. (1998) The effects of the Rho-kinase inhibitor Y-27632 on arachidonic acid-, GTPgammaS-, and phorbol ester-induced Ca2+-sensitization of smooth muscle. FEBS Lett. 440:183-187.

41. Fujihara,H., Walker,L.A., Gong,M.C., Lemichez,E., Boquet,P., Somlyo,A.V., and Somlyo,A.P. (1997) Inhibition of RhoA Translocation and Calcium Sensitization by In Vivo ADP-Ribosylation with the Chimeric Toxin DC3B. Mol.Biol.Cell. 8:2437-2447.

42. Gailly,P., Gong,M.C., Somlyo,A. V., and Somlyo, A.P. (1997) Possible role of atypical protein kinase С activated by arachidonic acid in Ca2+ sensitization of rabbit smooth muscle. J Physiol (Lond). 500:95-109.

43. Gallagher,P.J. and Herring,B.P. (1991) The carboxyl terminus of the smooth muscle myosin light chain kinase is expressed as an independent protein, telokin. J.Biol.Chem. 266:23945-23952.

44. Gallagher,P.J., Herring,B.P., Griffin,S.A., and Stull,J.T. (1991) Molecular characterization of a mammalian smooth muscle myosin light chain kinase published erratum appears in J Biol Chem 1992 May 5;267(13):9450. J.Biol.Chem. 266:23936-23944.

45. Gallagher,P.J., Herring,B.P., and Stull,J.T. (1997) Myosin light chain kinases. -J.Muscle Res.Cell Motil. 18:1-16.

46. Gerthoffer, W.T. (1987) Dissociation of myosin phosphorylation and active tension during muscarinic stimulation of tracheal smooth muscle. J.Pharmacol.Exp. Ther. 240:8-15.

47. Gerthoffer, W.T. and Pohl,J. (1994) Caldesmon and calponin phosphorylation in regulation of smooth muscle contraction. CanJ.Physiol.Pharmacol. 72:1410-1414.

48. Gerthoffer,W.T., Yamboliev,I.A., Pohl,J., Haynes,R., Dang,S., and McHugh,J. (1997) Activation of MAP kinases in airway smooth muscle. Am.J.Physiol. 272:L244-52.

49. Gerthoffer,W.T., Yamboliev,I.A., Shearer,M., Pohl,J., Haynes,R., Dang,S., Sato,K., and Sellers,J.R. (1996) Activation of MAP kinases and phosphorylation of caldesmon in canine colonic smooth muscle. -J Physiol (Lond). 495:597-609.

50. Gleason,M.M. and Flaim,S.F. (1986) Phorbol ester contracts rabbit thoracic aorta by increasing intracellular calcium and by activating calcium influx. Biochem Biophys Res Commun. 138:1362-1369.

51. Goeckeler,Z.M., Masaracchia,R.A., Zeng,Q., Chew,T.L., Gallagher,P., and Wysolmerski,R.B. (2000) Phosphorylation of myosin light chain kinase by p21-activated kinase PAK2. -J.Biol.Chem. 275:18366-18374.

52. Gong,M.C., Fujihara,H., Somlyo,A.V., and Somlyo,A.P. (1997a) Translocation of rhoA associated with Ca2+ sensitization of smooth muscle. -J.Biol.Chem. 272:10704-10709.

53. Gong,M.C., Fujihara,H., Walker,L.A., Somlyo,A.V., and Somlyo,A.P. (1997b) Down-regulation of G-protein-mediated Ca2+ sensitization in smooth muscle. Mol.Biol.Cell. 8:279-286.

54. Hai,C.-M. and Murphy,R.A. (1988) Cross-bridge phosphorylation and regulation of latch state in smooth muscle. Am J.Physiol. 254:C99-C106

55. Haller,H., Smallwood,J.I., and Rasmussen,H. (1990) Protein kinase С translocation in intact vascular smooth muscle strips. Biochem. J. 270:375-381.

56. Hartshorne,D J. (1998) Myosin phosphatase: subunits and interactions. Acta Physiol.Scand. 164:483-493.

57. Hartshorne,D.J. and Hirano,K. (1999) Interactions of protein phosphatase type 1, with a focus on myosin phosphatase. Mol Cell Biochem. 190:79-84.

58. Hartshorne,D.J., Ito,M., and Erdodi,F. (1998) Myosin light chain phosphatase: subunit composition, interactions and regulation. J.Muscle Res.Cell Motil. 19:325-341.

59. Hartshorne,D.J. and Mrwa,U. (1982) Regulation of smooth muscle actomyosin. Blood Vessels. 19:1-18.

60. Hashimoto,Y. and Soderling,T.R. (1990) Phosphorylation of smooth muscle myosin light chain kinase by Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II: comparative study of the phosphorylation sites. Arch.Biochem.Biophys. 278:41-45.

61. Hellstrand,P. (1996): Energetics of Smooth Muscle Contraction. In: Biochemistry of Smooth Muscle Contraction, edited by M.Barany, pp. 379-392. Academic Press, Inc., New York.

62. Helper,D. J., Lash, J. A., and Hathaway,D.R. (1988) Distribution of isoelectric variants of the 17,000-dalton myosin light chain in mammalian smooth muscle published erratum appears in J Biol Chem 1989 Feb 5;264(4):2391. -J.Biol.Chem. 263:15748-15753.

63. Herring,B-P- and Smith,A.F. (1996) Telokin expression is mediated by a smooth muscle cell-specific promoter. Am.J.Physiol. 270:0 656-65.

64. Hettasch,J.M. and Sellers, J.R. (1991) Caldesmon phosphorylation in intact human platelets by cAMP- dependent protein kinase and protein kinase C. J.Biol.Chem. 26:11876-11881.

65. Hewett,T.E., Martin,A.F., and Paul,R.J. (1993) Correlations between myosin heavy chain isoforms and mechanical parameters in rat myometrium. J Physiol (Lond). 460:351-364.

66. Himpens,B., Matthijs,G., Somlyo,A.V., Butler,T.M., and Somlyo,A.P. (1988) Cytoplasmic free calcium, myosin light chain phosphorylation, and force in phasic and tonic smooth muscle. -J. Gen.Physiol. 92:713-729.

67. Holden,H.M., Ito,M., Hartshorne,D.J., and Rayment,I. (1992) X-ray structure determination of telokin, the C-terminal domain of myosin light chain kinase, at 2.8 A resolution. J.Mol.Biol. 227:840-851.

68. Horowitz,A., Clement-Chomienne,0., Walsh,M.P., and Morgan,K.G. (1996a) Epsilon-isoenzyme of protein kinase С induces a Ca2+-independent contraction in vascular smooth muscle. -Am. J.Physiol. 271:C589-C594

69. Horowitz,A., Menice,C.B., Laporte,R, and Morgan,K.G. (1996b) Mechanisms of smooth muscle contraction. Physiol.Rev. 76:967-1003.

70. Huber,P.A.J., El-Mezgueldi,M., Grabarek,Z., Slatter,D.A., Levine,B.A., Marston,S.B., and

71. Huber,P.A. (1996) Multiple-sited interaction of caldesmon with Ca2+-calmodulin. Biochem.J. 316:413-420.

72. Jiang,M.J. and Morgan,K.G. (1987) Intracellular calcium levels in phorbol ester-induced contractions of vascular muscle. Am J.Physiol. 253:H1365-H1371

73. Jiang,M.J. and Morgan,K.G. (1989) Agonist-specific myosin phosphorylation and intracellular calcium during isometric contractions of arterial smooth muscle. Pflug.Arch. 413:637-643.

74. Jin,N., Siddiqui,R.A., English,E., Rhoades,R.A., and English,D. (1996) Communication between tyrosine kinase pathway and myosin light chain kinase pathway in smooth muscle. -Am.J.Physiol. 271:H1348-H1355

75. Kamm,K.E. and Grange,R.W. (1996): Calcium Sensitivity of Contraction. In: Biochemistry of Smooth Muscle Contraction, edited by M.Barany, pp. 119-129. Academic Press, Inc., New York.

76. Kamm,K.E., Hsu,L., Kubota,Y., and Stull,J.T. (1989) Phosphorylation of smooth muscle myosin heavy and light chains. Effects of phorbol dibutyrate and agonists. J.Biol.Chem. 264:2122321229.

77. Kamm,K.E. and Stull,J.T. (1985) The function of myosin and myosin light chain kinase phosphorylation in smooth muscle. Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol. 25:593-620.

78. Kasturi,R., Vasulka,C., and Johnson,J.D. (1993) Ca2+, caldesmon, and myosin light chain kinase exchange with calmodulin. J.Biol.Chem. 268:7958-7964.

79. Katoh,T., Tanahashi,K., Hasegawa,Y., andMorita,F. (1995) Porcine aorta smooth-muscle myosin contains three species made of different combinations of two 17-kDa essential light-chain isoforms. Eur.J.Biochem. 227:459-465.

80. Kelley,C.A. and Adelstein,R.S. (1994) Characterization of isoform diversity in smooth muscle myosin heavy chains. Can.J.Physiol.Pharmacol. 72:1351-1360.

81. Kelley,C.A., Sellers,J.R., Goldsmith,P.K., and Adelstein,R.S. (1992) Smooth muscle myosin is composed of homodimeric heavy chains. J.Biol.Chem. 267:2127-2130.

82. Kelley,C.A., Takahashi,M., Yu,J.H., and Adelstein,R.S. (1993) An insert of seven amino acids confers functional differences between smooth muscle myosins from the intestines and vasculature. -J.Biol.Chem. 268:12848-12854.

83. Khalil,R.A., Lajoie,C., Resnick,M.S., and Morgan,K.G. (1992) Ca2+-independent isoforms of protein kinase С differentially translocate in smooth muscle. Am.J.Physiol. 263:C714-C718

84. Kimura,K, Ito,M., Amano,M., Chihara,K, Fukata,Y., Nakafiiku,M., Yamamori,B., Feng,J.,

85. Nakano,T., Okawa,K., Iwamatsu,A., and Kaibuchi,K. (1996) Regulation of myosin phosphatase by Rho and Rho-associated kinase (Rho-kinase) see comments. Science. 273:245-248.

86. Kitazawa,T., Masuo,M., and Somlyo,A.P. (1991) G protein-mediated inhibition of myosin light-chain phosphatase in vascular smooth muscle. Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 88:9307-9310.

87. Kitazawa,T., Takizawa,N., Ikebe,M., and Eto,M. (1999) Reconstitution of protein kinase C-induced contractile Ca2+ sensitization in triton Х-100-demembranated rabbit arterial smooth muscle see comments. J Physiol (Lond). 520 Pt 1:139-152.

88. Klemke,R.L., Cai,S., Giannini,A.L., Gallagher,P.J., de Lanerolle,P., Cheresh,D.A., and de1.nerolle,P. (1997) Regulation of cell motility by mitogen-activated protein kinase. J. Cell Biol. 137:481-492.

89. Komatsu,S. and Hosoya,H. (1996) Phosphorylation by MAPKAP kinase 2 activates Mg(2+)-ATPase activity of myosin II. Biochem Biophys Res Commun. 223:741-745.

90. MacDonald,J.A., Borman,M.A., Muranyi,A., Somlyo,A.V., Hartshorne,D.J., and Haystead,T.A. (2001) Identification of the endogenous smooth muscle myosin phosphatase-associated kinase. -Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 98:2419-2424.

91. Makhlouf,G.M. and Murthy,K.S. (1997) Signal transduction in gastrointestinal smooth muscle. -Cell Signal. 9:269-276.

92. Malmqvist,U. and Arner,A. (1991) Correlation between isoform composition of the 17 kDa myosin light chain and maximal shortening velocity in smooth muscle. Pflug.Arch. 418:523-530.

93. Marston,S.B. (1995) Ca(2+)-dependent protein switches in actomyosin based contractile systems. -Int.J.Biochem.CellBiol. 27:97-108.

94. Masato,T., Numata,T., Katoh,T., Morita,F., and Yazawa,M. (1997) Crosslinking of telokin to chicken gizzard smooth muscle myosin. J.Biochem. 121:225-230.

95. McDaniel,N.L., Chen,X.L., Singer,H.A., Murphy,R.A., and Rembold,C.M. (1992)

96. Nitrovasodilators relax arterial smooth muscle by decreasing Ca2+.i and uncoupling stress from myosin phosphorylation. Am. J.Physiol. 263:C461-C467

97. Menice,C.B., Hulvershorn,J., Adam,L.P., Wang,C.A., and Morgan,K.G. (1997) Calponin and mitogen-activated protein kinase signaling in differentiated vascular smooth muscle. -J.Biol.Chem. 272:25157-25161.

98. Miura,M., Iwanaga,T., Ito,K.M., Seto,M., Sasaki, Y., and Ito,K. (1997) The role of myosin light chain kinase-dependent phosphorylation of myosin light chain in phorbol ester-induced contraction of rabbit aorta. Pflug.Arch. 434:685-693.

99. Monical,P.L., Owens,G.K., and Murphy,R.A. (1993) Expression of myosin regulatory light-chain isoforms and regulation of phosphorylation in smooth muscle. Am. J.Physiol. 264:C1466-C1472

100. МогапоД., Erb,G., and Sogl,B. (1993) Expression of myosin heavy and light chains changes during pregnancy in the rat uterus. Pflug.Arch. 423:434-441.

101. Morgan,K.G., Khalil,R.A., Suematsu,E., and KatsuyamaJH. (1992) Calcium-dependent and calcium-independent pathways of signal transduction in smooth muscle. JpnJ.Pharmacol. 58 Suppl 2:47P

102. Morgan,K.G. and Leinweber,B.D. (1998) PKC-dependent signalling mechanisms in differentiated smooth muscle. Acta Physiol.Scand. 164:495-505.

103. Morrison,D.L., Sanghera,J.S., Stewart,J., Sutherland,C., Walsh,M.P., and Pelech,S.L. (1996) Phosphorylation and activation of smooth muscle myosin light chain kinase by MAP kinase and cyclin-dependent kinase-1. Biochem.CellBiol. 74:549-557.

104. Murata-Hori,M., Suizu,F., Iwasaki,T., Kikuchi,A., and Hosoya,H. (1999) ZIP kinase identified as a novel myosin regulatory light chain kinase in HeLa cells. FEBS Lett. 451:81 -84.

105. Murphy,R.A. and Strauss,J.D. (1998) Ca2+, Cross-Bridge Phosphorylation and Vascular Tone. -International Journal of Cardiovascular Medicine and Science. 1:149-154.

106. Murphy,Т.V., Cross,K.M., Dunning,P.M., and Garland,C.J. (1994) Phorbol esters impairendothelium-dependent and independent relaxation in rat aortic rings. Gen Pharmacol. 25:581588.

107. Murthy,K.S., Grider,J.R., Kuemmerle,J.F., and Makhlouf,G.M. (2000) Sustained musclecontraction induced by agonists, growth factors, and Ca(2+) mediated by distinct PKC isozymes. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 279:G201-G210

108. Murthy,K.S., Zhou,H., Grider,J.R., and Makhlouf,G.M. (2001) Sequential activation of heterotrimeric and monomeric G proteins mediates PLD activity in smooth muscle. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 280:G381-G388

109. Nabeshima,Y., Nonomura,Y., and Fujii Kuriyama,Y. (1987) Nonmuscle and smooth muscle myosin light chain mRNAs are generated from a single gene by the tissue-specific alternative RNA splicing. -J.Biol.Chem. 262:10608-10612.

110. Nagai,R., Kuro, Babij,P., and Periasamy,M. (1989) Identification of two types of smooth muscle myosin heavy chain isoforms by cDNA cloning and immunoblot analysis. J.Biol.Chem. 264:9734-9737.

111. Nakai,K., Suzuki,Y., Kihira,H., Wada,H., Fujioka,M., Ito,M., Nakano,T., Kaibuchi,K., Shiku,H., and Nishikawa,M. (1997) Regulation of myosin phosphatase through phosphorylation of the myosin- binding subunit in platelet activation. Blood. 90:3936-3942.

112. Newton,A. (1995) Protein kinase C: structure, function, and regulation. J.Biol.Chem. 270:2849528498.

113. Newton,A. C. and Johnson, J.E. (1998) Protein kinase C: a paradigm for regulation of protein function by two membrane-targeting modules. Biochim.Biophys.Acta. 1376:155-172.

114. Ngai,P.K. and Walsh,M.P. (1985) Properties of caldesmon isolated from chicken gizzard. -BiochemJ. 230:695-707.

115. Nieznanski,K. and Sobieszek,A. (1997) Telokin (kinase-related protein) modulates the oligomeric state of smooth musle myosin light chain kinase and its interaction with myosin filaments. -Biochem.J. 322:65-71.

116. Nishikawa,M., Sellers,J.R., Adelstein,R.S., and Hidaka,H. (1984b) Protein kinase С modulates in vitro phosphorylation of the smooth muscle heavy meromyosin by myosin light chain kinase. -J.Biol.Chem. 259:8808-8814.

117. Nixon,G.F., Iizuka,K., Haystead,C.M., Haystead,T.A., Somlyo,A.P., and Somlyo,A.V. (1995) Phosphorylation of caldesmon by mitogen-activated protein kinase with no effect on Ca2+ sensitivity in rabbit smooth muscle. J Physiol (bond). 487:283-289.

118. Numata,T., Katoh,T., and Yazawa,M. (2001) Functional role of the c-terminal domain of smooth muscle myosin light chain kinase on the phosphorylation of smooth muscle myosin. J Biochem (Tokyo). 129:437-444.

119. Obianime,A.W. and Dale,M.M. (1989) The effect of relaxants working through different transduction mechanisms on the tonic contraction produced in rat aorta by 4 beta-phorbol dibutyrate. Br. J.Pharmacol. 97:647-656.

120. Ozaki,H., Ohyama,T., Sato,K., and Karaki,H. (1990) Ca2+-dependent and independent mechanisms of sustained contraction in vascular smooth muscle of rat aorta. Jpn.J.Pharmacol. 52:509-512.

121. Paul,R. J. (1990) Smooth muscle energetics and theories of cross-bridge regulation. Am.J.Physiol. 258:C369-C375

122. Pfitzer,G. and Amer,A. (1998) Involvement of small GTPases in the regulation of smooth muscle contraction. Acta Physiol.Scand. 164:449-456.

123. Pfitzer,G., Merkel,L., Ruegg,J.C., and Hofmann,F. (1986) Cyclic GMP-dependent protein kinase relaxes skinned fibers from guinea pig taenia coli but not from chicken gizzard. Pflug.Arch. 407:87-91.

124. Rasmussen,H., Forder,J., Kojima,I., and Scriabine,A. (1984) TPA-induced contraction of isolated rabbit vascular smooth muscle. Biochem Biophys Res Commun. 122:776-784.

125. Redwood,C.S., Marston,S.B., and Gusev,N.B. (1993) The functional effects of mutations Thr673->Asp and Ser702->Asp at the Pro-directed kinase phosphorylation sites in the C- terminus of chicken gizzard caldesmon. FEBS Lett. 327:85-89.

126. Rembold,C.M. (1992) Regulation of contraction and relaxation in arterial smooth muscle. -Hypertension. 20:129-137.

127. Rembold,C.M. and Murphy,R.A. (1988) Ca2+.-dependent myosin phosphorylation in phorbol diester stimulated smooth muscle contraction. AmJ.Physiol. 255:C719-C723

128. Rembold,C.M. and Murphy,R. A. (1993) Models of the mechanism for crossbridge attachment in smooth muscle. J.Muscle Res.Cell Motil. 14:325-334.

129. Rembold,C.M. and O'Connor,M. (2000) Caldesmon and heat shock protein 20 phosphorylation in nitroglycerin- and magnesium-induced relaxation of swine carotid artery. -Biochim.Biophys.Acta. 1500:257-264.

130. Roach,P.J. (1991) Multisite and hierarchal protein phosphorylation. J.Biol.Chem. 266:1413914142.

131. Roush,C.L., Kennelly,P.J., Glaccum,M.B., Helfman,D.M., Scott,J.D., and Krebs,E.G. (1988) Isolation of the cDNA encoding rat skeletal muscle myosin light chain kinase. Sequence and tissue distribution. -J.Biol.Chem. 263:10510-10516.

132. Rusconi,F., Potier,M.C., Le Caer,J.P., Schmitter,J.M., and Rossier,J. (1997) Characterization of the chicken telokin heterogeneity by time-of- flight mass spectrometry. Biochem. 36:11021-11026.

133. Sanders,L.C., Matsumura,F., Bokoch,G.M., and de Lanerolle,P. (1999) Inhibition of myosin light chain kinase by p21 -activated kinase see comments. Science. 283:2083-2085.

134. Sato,K., Leposavic,R., Publicover,N.G., Sanders,K.M., and Gerthoffer,W.T. (1994) Sensitization of the contractile system of canine colonic smooth muscle by agonists and phorbol ester. J Physiol (Lond). 481:677-688.

135. Savineau,J.-P. and Marthan,R. (1997) Modulation of the calcium sensitivity of the smooth muscle contractile apparatus: molecular mechanisms, pharmacological and pathophysiological implications. Fundam.Clin.Pharmacol. 11:289-299.

136. Schaffner,W. and Weissmann,C. (1973) A rapid, sensitive, and specific method for the determination of protein in dilute solution. Anal Biochem. 56:502-514.

137. Shimizu,H., Ito,M., Miyahara,M., Ichikawa,K., Okubo,S., Konishi,T., Naka,M., Tanaka,T.,

138. Hirano,K., Hartshorne,D.J., and et-al (1994) Characterization of the myosin-binding subunit of smooth muscle myosin phosphatase. J.Biol.Chem. 269:30407-30411.

139. Silver,D.L., Vorotnikov,A.V., Watterson,D.M., Shirinsky,V.P., and Sellers,J.R. (1997) Sites of Interaction between kinase related protein and smooth muscle myosin. J.Biol.Chem. 272:25353-25359.

140. Singer,H.A. (1990) Phorbol ester-induced stress and myosin light chain phosphoiylation in swine carotid medial smooth muscle. J.Pharmacol.Exp.Ther. 252:1068-1074.

141. Singer,H.A., Oren,J.W., and Benscoter,H.A. (1989) Myosin light chain phosphorylation in 32P-labeled rabbit aorta stimulated by phorbol 12,13-dibutyrate and phenylephrine. J.Biol.Chem. 264:21215-21222.

142. Somlyo,A.P. (1993) Myosin isoforms in smooth muscle: How may they affect function and structure. J.Muscle Res.CellMotil. 14:557-563.

143. Somlyo,A.P. and Somlyo,A.V. (1998) From pharmacomechanical coupling to G-proteins and myosin phosphatase. Acta Physiol.Scand. 164:437-448.

144. Somlyo,A.P. and Somlyo,A.V. (2000) Signal transduction by G-proteins, rho-kinase and protein phosphatase to smooth muscle and non-muscle myosin II. J Physiol (bond). 522 Pt 2:177-185.

145. Somlyo,A.V., Goldman,Y.E., Fujimori,Т., Bond,M., Trentham,D.R., and Somlyo,A.P. (1988) Cross-bridge kinetics, cooperativity, and negatively strained cross-bridges in vertebrate smooth muscle. A laser-flash photolysis study. J.Gen.Physiol. 91:165-192.

146. Somlyo,A.V. and Somlyo,A.P. (1968) Electromechanical and pharmacomechanical coupling in vascular smooth muscle. J.Pharmacol.Exp.Ther. 159:129-145.

147. Sparrow,M.P., Mohammad,M.A., Arner,A., Hellstrand,P., and Ruegg,J.C. (1988) Myosincomposition and functional properties of smooth muscle from the uterus of pregnant and nonpregnant rats. -Pflug.Arch. 412:624-633.

148. Steusloff,A., Paul,E., Semenchuk,L.A., Di-Salvo,J., and Pfitzer,G. (1995) Modulation of Ca2+ sensitivity in smooth muscle by genistein and protein tyrosine phosphorylation. -Arch.Biochem.Biophys. 320:236-242.

149. Strauss,J.D. and Murphy,R.A. (1996): Regulation of Cross-bridge Cycling in Smooth Muscle. In: Biochemistry of Smooth Muscle Contraction, edited by M.Barany, pp. 341-353. Academic Press, Inc., New York.

150. Stall,J.T., Hsu,L., Tansey,M.G., Kamm,K.E., and Hsu,L.C. (1990) Myosin light chain kinase phosphorylation in tracheal smooth muscle. J.Biol.Chem. 265:16683-16690.

151. Stall,J.T., Krueger,J.K., Kamm,K.E., Gao,Z.-H., Zhi,G., and Padre,R.C. (1996): Myosin Light Chain Kinase. In: Biochemistry of Smooth Muscle Contraction, edited by M.Barany, pp. 119129. Academic Press, Inc., New York.

152. Stall,J.Т., Lin,P.J., Krueger,J.K., Trewhella,J., and Zhi,G. (1998) Myosin light chain kinase: functional domains and structural motifs. Acta Physiol.Scand. 164:471-482.

153. Stall,J.T., Tansey,M.G., Tang,D.-C., Word,R.A., Kamm,K.E., and Tang,D.C. (1993)

154. Phosphorylation of myosin light chain kinase: a cellular mechanism for Ca2+ desensitization. -Mol.Cell Biochem. 127/128:229-237.

155. Surks,H.K., Mochizuki,N., Kasai,Y., Georgescu,S.P., Tang,K.M., Ito,M., Lincoln,T.M., and Mendelsohn,M.E. (1999) Regulation of myosin phosphatase by a specific interaction with cGMP- dependent protein kinase Ialpha. Science. 286:1583-1587.

156. Sward,K., Dreja,K., Susnjar,M., Hellstrand,P., Hartshorne,D.J., and Walsh,M.P. (2000) Inhibition of Rho-associated kinase blocks agonist-induced Ca2+ sensitization of myosin phosphorylation and force in guinea-pig ileum. J Physiol (Lond). 522:33-49.

157. Sybertz,E.J., Desiderio,D.M., Tetzloff,G., and Chiu,P.J. (1986) Phorbol dibutyrate contractions in rabbit aorta: calcium dependence and sensitivity to nitrovasodilators and 8-Br-cyclic GMP. -J.Pharmacol.Exp.Ther. 239:78

158. Takio,K., Blumenthal,D.K., Walsh,K.A., Titani,K., and Krebs,E.G. (1986) Amino acid sequence of rabbit skeletal muscle myosin light chain kinase. Biochem. 25:8049-8057.

159. Tang,D.-C., Stull,J.T., Kubota,Y., and Kamm,K.E. (1992) Regulation of the Ca(2+) dependence of smooth muscle contraction. J.Biol.Chem. 267:11839-11845.

160. Tansey,M.G., Luby-Phelps,K., Kamm,K.E., and Stull,J.T. (1994) Ca2+-dependent phosphorylation of myosin light chain kinase decreases the Ca2+ sensitivity of light chain phosphorylation within smooth muscle cells .-J.Biol.Chem. 269:9912-9920.

161. Tokui,T., Ando,S., and Ikebe,M. (1995) Autophosphorylation of smooth muscle myosin light chain kinase at its regulatory domain. Biochem. 34:5173-5179.

162. Towbin,H., Staehelin,T., and Gordon,G. (1979) Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 76:4350-4354.

163. Umekawa,H. and Hidaka,H. (1985) Phosphorylation of caldesmon by protein kinase C. Biochem Biophys Res Commun. 132:56-62.

164. Van Riper,D.A., Weaver,B.A., Stull,J.T., and Rembold,C.M. (1995) Myosin light chain kinase phosphorylation in swine carotid artery contraction and relaxation. Am. J.Physiol. 268:H2466-75.

165. Vorotnikov,A.V., Gusev,N.B., Hua,S., Collins,J.H., Redwood,C.S., and Marston,S.B. (1994) Phosphorylation of aorta caldesmon by endogenous proteolytic fragments of protein kinase C. -J.Muscle Res.CellMotil. 15:37-48.

166. Vorotnikov,A.V., Marston,S.B., and Huber,P.A. (1997) Location and functional characterization of myosin contact sites in smooth muscle caldesmon. Biochem.J. 328:211-218.

167. Vorotnikov,A.V., Shirinsky,V.P., and Gusev,N.B. (1988) Phosphorylation of smooth muscle caldesmon by three protein kinases: implication for domain mapping. FEBS Lett. 236:321-324.

168. Vyas,T.B., Mooers,S.U., Narayan,S.R., Witherell,J.C., Siegman,M.J., and Butler,T.M. (1992) Cooperative activation of myosin by light chain phosphorylation in permeabilized smooth muscle. -Am.J.Physiol. 263:C210-C219

169. Walker,L.A., Gailly,P., Jensen,P.E., Somlyo,A.V., and Somlyo,A.P. (1998) The unimportance of being (protein kinase C) epsilon. FASEBJ. 12:813-821.

170. Walker,L.A., MacDonald,J.A., Liu,X., Nakamoto,R.K., Haystead,T.A., Somlyo,A.V., and

171. Somlyo,A.P. (2001) Site-specific phosphorylation and point mutations of telokin modulate its Ca{super2+}-desensitizing effect in smooth muscle. J.Biol.Chem.

172. Walsh,M.P. (1994) Calmodulin and the regulation of smooth muscle contraction. Mol.Cell Biochem. 135:21-41.

173. Watts,S.W., Yeum,C.H., Campbell,G., and Webb,R.C. (1996) Serotonin stimulates protein tyrosyl phosphorylation and vascular contraction via tyrosine kinase. J. Vase.Res. 33:288-298.

174. Weber,L.P., Van Lierop,J.E., and Walsh,M.P. (1999) Ca2+-independent phosphorylation of myosin in rat caudal artery and chicken gizzard myofilaments. J Physiol (Lond). 516 (Pt 3):805-824.

175. White,S., Martin,A.F., and Periasamy,M. (1993) Identification of a novel smooth muscle myosin heavy chain cDNA: Isoform diversity in the SI head region. Am.J.Physiol. 264:C1252-C1258

176. Widmann,C., Gibson,S., Jarpe,M.B., and Johnson,G.L. (1999) Mitogen-activated protein kinase: conservation of a three-kinase module from yeast to human. Physiol Rev. 79:143-180.

177. Winder,S. J., Allen,B.G., C10ment-Chomienne,O., and Walsh,M.P. (1998) Regulation of smooth muscle actin-myosin interaction and force by calponin. Acta Physiol.Scand. 164:415-426.

178. Word,R. A., Tang,D.C., and Kamm,K.E. (1994) Activation properties of myosin light chain kinase during contraction/relaxation cycles of tonic and phasic smooth muscles. J.Biol. Chem. 269:21596-21602.

179. Wu,X., Haystead,T.A., Nakamoto,R.K., Somlyo,A.V., and Somlyo,A.P. (1998) Acceleration of myosin light chain dephosphorylation and relaxation of smooth muscle by telokin. Synergism with cyclic nucleotide-activated kinase. J.Biol.Chem. 273:11362-11369.

180. Zhang,M. and Vogel,H.J. (1994) The calmodulin-binding domain of caldesmon binds to calmodulin in an alpha-helical conformation. Biochem. 33:1163-1171.

181. Zhou,N., Yuan,Т., Mak,A.S., and Vogel,H.J. (1997) NMR studies of caldesmon-calmodulin interactions. Biochem. 36:2817-2825.