Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Формы гетероморфизма Listeria monocytogenes и их значение при листериозной инфекции

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Формы гетероморфизма Listeria monocytogenes и их значение при листериозной инфекции"

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ЛЕНИНА ' ^ & ^ ? ,

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ имени Я. Р. КОВАЛЕНКО

ВСЕСОЮЗНАЯ ОРДЕНА ЛЕНИНА И ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

ЛЕНИНА

¿1

На правах рукопис|Г

ОВА ГАЛИНА АЛЕКСАНДРОВНА

■кандидат биологических наук

УДК 579.869.1:[616.98:579.869.1

г.-..'.ФОРМЫ ГЕТЕ РО МО РФИЗМА ¿15ТЕР1А МОМОСУТООЕЫЕ5 И ИХ ЗНАЧЕНИЕ ПРИ ЛИСТЕРИОЗНОЙ ИНФЕКЦИИ (03.00.07 — микробиология)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степей» доктора биологических наук

Москпа — 1989

Работа выполнена в научно-исследовательском ордена Трудового Красного Знамени институте эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н. Ф. Гамалеи АМН СССР и во Всесоюзном научно-исследовательском институте ветеринарной вирусологии и микробиологии Госагропрома СССР

Официальные оппоненты:

Заслуженный деятель науки РСФСР, доктор биологических наук, профессор П. И. Притулпн (ВИЭВ);

доктор биологических наук, профессор А. Ф. Мороз (НИИЭМ им. Н. Ф. Гамалеи);

доктор ветеринарных наук, профессор Ю. А. Малахов (ВГНКИ)

Ведущее учреждение — Московская ордена Трудового Красного Знамени ветеринарная академия имени К- И. Скрябина

Защита состоится « » _1990 г. в _ часов на

заседании Специализированного совета Д.020.28.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всесоюзном ордена Ленина научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии имени Я. Р. Коваленко (109472, Москва, Кузминки, ВИЭВ)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЭВ

Автореферат разослан « » _1990 г.

Ученый секретарь Специализированного

совета кандидат ветеринарных наук Ф. Г. Терешков

0Ы1АЯ ХАРАКТЕРИСТИКА PAEOTU

Актуальность проблемы. Листериоз — инфекционная болезнь животных и человека. К ней восприимчивы. все вида сельскохозяйственных животных, но наиболее широко листериоз распространен сродл овец. У овэц в подавляющем большинстве случаев (80-95Я болезнь протекаот в нервной (Торле и, кап'правило, приводит к гибели животных. Листо-риоз наносит значительный экономический ущерб животноводству. В ФРГ, где ведется официальный учат инфекции, экономический ущерб, причиняемый листориозами и сальмонеллезаш в сельском хозяйстве, ежегодно составляет более 130 млн^ларок.

В медицинской практике листериоз чаще регистрируют у новорожденных, беременных, людей пожилого возраста. Количество перинатального листориоза неуклонно возрастает /Bortotutsi Я.. , 1984;'ТоЬег9 Я. el at ,'1987; ¿еппоп 25. et al. f j;g84; iamoni A.tt oi.„ 1985 и др./. Смертность новорожденных при листориозо дос нгает 40-5(#.

Актуальность проблемы для ветеринарии и медицины получила международное признание. Об этом свидетельствуют 10 международных симпозиумов, прошедших с 1957 по 1988 года, и создание в 1973 году "Таксономического подкомитета по листориям". В Великобритании за последнее досятилетиэ количество случаев заболевания листериозом овец увеличилось в 5 раз. Веторинарные специалисты страны считают, что эта проблема станет одной из наиболее серьезных в ближайшие несколько лот /Cave-Penney т., 1987/. За последнее десятилетие во всем миро наблюдается рост лисгориозной инфекции животных и человека /Bareow 3L, JUcSorumB, 1385;¿ееf.ger h.p.R. , I988;^icoto.i _ Scfioticn M.2. ttoi., 1985/. Об этом говорилось на Консультативном совещании, проподенном ВОЗ п Злпадном'Горлина в декабре 1987 года /Videqa Я., 1987/, и на последнем 10-м международном симпозиуме по лксториозу» «оеголкгокся в ISflfl году в г.Ноч (ВНР).

Листориозы известны с 1926 года, в мировой печати этшду вопросу посвящено более 2000 публикаций» но болезнь продолжает оставаться для исследователей до конца непонятой.- Несмотря на то, что многие аспекты листериозной инфекции ужа хорошо изучены, патогенез бо- ■ лезли в целом остается на расшифрован,отсутствуют эффективный средства ее специфической профилактики» Летальность у людей достигает 35£, а у больных с нарушенным именным статусом - до 70$. Не расшифрованы трудности бактериологической и серологической, диагностики широко распространенной нервной формы листориоза: трудность выделения возбудителя из патологического материала и частое отсутствие в сыворотка крови специфических антител. Эти и многие другие особенности лпстериоза не объясняет биология классических бактериальных форм ли-стерий» Однако вне поля зрения исследователей, занимающихся вопросами инфекционной патологии, остаются формы гетероморфизма листерий — разнообразные форш несбалансированного роста, стабильные и нестабильный Л-формы. Исследование их роли при листериозной инфекции представляется чрезвычайно актуальным.

Б настоящее время феномак гетероморфизма бактерий является неоспоримым фактом /Тимаков БД», Каган ГЛ., 1961, 1967, 1973;тал •¿.Н ■ 1974; Прозоровский СЛ., Кац ЛЛ.» Каган ГЛ., 1981 и др./. Убедительно доказана роль форм гетероморфизма, в частнооти Л-форл, • в патогенезе таких эаболиванай как туберкулез, бруцеллез, бршной « тиф, гнойные менингиты и энцефалиты ¿других /Клодницкая C.H.,IS6I^ Коптелова ЕЛ», 1374-, Кочемасова З.Н., i97q; Aiaiiman ii.H. ; 1968; J/eEsort4.a.; Pie-fsttt AJ. tj., E95I и др./» Биологические особенности форм гетероморфизма потребовали, коррекции диагностики, терапии и профилактики этих болезней.

Данные литературы об образовании листерияш форм гетероморфизма полны и убедительны /£>rtm А. ,-üveE.and W.ü., 1967, I968;Jlsr\ani Р., GiEt К., I985;^0uriQ «•<■ cU. , 1967; lladoff S. ,ÄHenes S. ,i967j

-з-

Гершун В.И., IS88 и др./. Показана их индукция в опытах in wt'rt» и in vivo , объектах внешней среды — почва, растительных субстратах. Однако, практически не исследовано явление гетероморфизма листерий при естественном течении листериоза. Во многом не ясны особенности патогенетического действия (¡[орм гетероморфизма листерий, не разработай специфические методы их обнаружения. Роль форм гетероморфизма листерий в инфекционной патологии животных и человека к. началу наших исследований не была известна.

Цель и задачи исследования. Целью работы явилась характеристика биологических особенностей форм гетероморфизма листерий, определяющих их роль при листериозной инфекиии.

Соответственно доли исследования были поставлена следующие задачи:

Г. Выявление принципиальной возможности индукции форм гетероморфизма листорий при естественном течении листериозной инфекции.

2. Характеристика субмикроскопической организации, культуралъ-ных и антигенных особенностей форм гетероморфизма листерий, разработка специфическихвметодов их обнаружения.

3. Разработка лабораторных моделей, позволяющих виявить особенности патогенетического действия форм гетероморфизма листорий.

4. Экспериментальное моделирование инфекции в опытах на овцах.

5. Разработка рекомендаций по внедрению полученных научных результатов в практику.

Для решения поставленных задач исследования проводили с использованном методов классической микробиологии, электронно-микроскопических, биохимических, иммуноцитохимических, иммунологических, гистологических методов.

Научная новизна результатов» В результата проведенных исследований:

- устшюшшио ннличио явления гитароморфизма листерий при вето-

ственном течении листориоза, которое во многом опродьляет особенно-отц клинического течения болазни;

- установлена патогенетическая роль Л-форм листерий в развитии нервной ^"ормы листориоза;

- выявлено существование ранее неизвестной эгщефалопагической формы листориоза и показана возможность ее экспериментального моде-, лирования при инфицировании животных стабильными Л-фюрмами листерий протопластного типа;

- выявлено ранее неизвестное при листериозе расстройство кроветворения, характеризующиеся диффузной атрофией лимфогемопоэтической системы организма: аплазией костного мозга (вплоть до тотальной), опустошением тимуса, Т— и В-вависимых зон селезенки, лимфоузлов;

- показано, что явление 'гетероморфизма листерий. осложняет бактериологическую и серологическую диагностику листериоза: особенности репродукции и метаболизма форм гетероморфизма не позволяют их выявлять методами классической бактериологии, а невысокая антиган-ность поверхностных структур и иммуносупрессивная активность обусловливают низкие титры "гуморальных антител или их полное отсутствие;

- разработаны специфические метода обнаружения в исследуемом материале форм гетероморфизма листерий (непрямой метод флюоресцирующие антител, непрямой метод пероксидазных антител), усовершенствованы метода! лабораторной диагностики-листериоза.

Основные положения, выносимыв на-'защиту:

1. При утрате листериями клеточной стенки изменяются многий биологические' характеристики возбудителя, в том числе патогенные свойства, реализация которых приводит к развитию патологического процесса, резко отличающегося от такового при инфицировании бактериальными культурами;.

2. Л-формы листерий протопластного типа индуцируют развитие ранее неизвестной внцофалопатической форми листориоза;

3» Л-формп листсрнй ггротопластного типа вызывают ранее неизвестное при листерпозе расстройство кроветворения, характеризующееся диффузной атрофией лкмфогемопоэтической системы организма: аплазией костного мозга (вплоть до тотальной), опустошением тимуса, Т— и В-зависишх зон селезенки, лимфоузлов;

4. Специфика репродутдш, антигенных и иммуногешшх особенностей форм гетероморфизма листерий обосновывают новый подход к лабораторной диагностике листериоза - иммуноцитохимическому выявлению специфических антигенов в непрямом мотоде флюоресцирующие или пвроксидазпых антител.

Теоретическая значимость работы.

Получены принципиально новые данные о формах гетероморфизм y.lstcritx monocytogenes j особенностях вызываемого шли инфекционного процзсса, что обосновывает необходимость нового подхода к лечению и профилактике листериоза.

Практическая значимость работы.

Знание культуралышх, антигенных и иммуногенных особенностей форм гетероморфизма листорий позволяет внести коррекцию в этиологическую и серологическую диагностику листериоза, способствует своевременному выявлению возбудителя разработанными иммуноцитохимичес-кими методами - непрямым мотодоы флюоресцирующих антител и непрямым методом пвроксидазпых антител, позволяет своеиременно проводить мероприятия по борьбе с листериозом животных и человека.

Внедрение результатов исследования в практику.

Материалы диссертации использованы

- при разработке: а) Лабораторного регламента № 119 и ТУ 42 ИЗО 142-70 на "Диагностические антитела против кролика и других животных, меченные пороксидазой"; б) Производственного регламента 221-432 и ТУ 42.14-276-Й2 на "Сухие диагностические антитела протон 'j^(H), ^JU(hJ ,<J9J!(H) .«JgiKHj f<3g<S(H)

человека, меченные пероксидазой"; указанная документация разработана ' сотрудниками 1ШИЭМ им.Н.Ф.Пшалеи АШ СССР и М1У им.М.ВЛомоносова, ' . документы утверждены МЗ СССР; в) В'НИИЗМ им.Н.Ф.Ламалеи АГffi СССР." налажено производство антител, моченных пороксвдазой, по упомянутым выше регламентам; выпускаемые биопрепараты универсальны и используются для серодиагностики инфекционных болезней человека и животных различной этиологии (вирусной, бактериальной);■

- в монографиях: a) "5pfieroplasts »^rctopEasts алd ¿--formi of Baclecla ",3nS2£m,<3aris , 1976, vo£. 65, pp. 265-271; б) нЛ-фор-'" ш бактерий" - Прозоровский C.B., Ка^Л.Н., Кагаа ГЛ., U., 1981, отр. 178-185 , 205-206;

- в лекционном курсе при проведения Госагропромом СССР и Минздравом СССР Всесоюзных семинаров по бактериологической и серологической диагностике листориоза и мерам борьбы с этой болезнью;

- Материалы диссертации волин в "Методические рекомендации'па лабораторной диагностике листериоза животных и людей" /М.', 1987 г./, раздел 3-й "Л-формы. листерий и метода их обнаружения"; методические рекомендации утверждены Минздравом СССР /1986/ и Госагропромом СССР /1987/.

Основные материалы диссертации доложены и обсужденн на:

1) симпозиуме "Профилактика и меры борьбы с лэптоспиразом и листериозом ^сельскохозяйственных smçotrçux в крупных специализированных животноводческих хозяйствах", Новочеркасск, 26-28 сентября 1972 гЛ;

2) У-ой Всесоюзной научно-мотодочеокой конференции по патологической анатомии сельскохозяйственных животных, Тбилиси, 18-22 сентября 1972 г.;

3) П-ом объединенном, съезде гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов Казахстана, Алма-Ата, 1975 г.; •

4) Международном микробиологическом симпозиуме, Пария, 21-25 сентября 1976 г.;

-75) Х-ой Всесоюзной конференции по электронной микроскопии, Ташкент, 5-8 октября 1976 г.;

6) Пленума проблемной комиссии "Медицинская микробиология", Кишинев,, май 1979 г.; •

7) Республиканской.научной конференции "Вопросы эпидемиологии и гигиены в Литовской ССР", Вильнюс, 6-7 сентября 1979 г.;

8) 8-ой Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы патолого— анатомической диагностики болезней животных", Витебск, 15-17 сентября 1981 г.;

9) Совместном заседании секции микробиологии и инфекционной иммунологии с теоретическим семинаром "Гонетическив и б'иохшичоскив основы патогенности бактерий", Москва, ИЭГ.1 им. Н.Ф.Гамалеи АМН СССР, 21 января 1981 г.;

10) Научной конференции Ивановского государственного медицинского института им, А.С.Еубнова "Физико-хкь. '¡оские исследования патогенных энтеробактерий в процессе культивирования", 1985 г.;

1 II) Научных конференциях Всесоюзного научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии Госагропрома СССР (1973, 1981, 1983, 1987 гг.).

о

Основные положения"диссертации доложены и обсуждены 16 июня 1983 г. на конференции, отдела эпидемиологии НИИЭМ им.Н.Ф.Шлалеи АМН СССР, а также 20 сентября 1989 г. на межлабораторном совещании сотрудников ВИЭВ им. Я.Р.Коваленко ВАСХНИЛ. '

Основный положения диссертации отражены в 27 печатных работах, опубликованных в центральной, зарубежной, республиканской прессе, в трудах симпозиумов, съоздов и -конференций. •

Структура п объем работы. Диссертация состоит из: введения, обзора литературы, методической части, 5 глав собственных исследований обсуждения, выводов и библиографического указателя. Работа изложена

на 275 страницах машинописи, содержит 26 таблиц, 57 рисунков. '

Список литературы включает 295 работ, в том числе 85 отечественных и 210 иностранных авторов.

Работа выполнена в лаборатории бактериологии Всесоюзного научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Госагропрома СССР (директор - академик ВЛСХНШ1 Еакулов И.А.) и в лаборатории Л-форм бактерий научно-исследовательского института эпидемиологии и микробиологии им, Н.ФЛ&малеи АМН СССР (директор - академик-АМН СССР Прозоровский С Л.).

Исследования проводили в соответствии с:

1) Межведомственной научно-технической программой 0.сх.37 задание 01.06 по проблема "Листериоз" — "Разработать, усовершенствовать и внедрить методы и специфические средства диагностики, терапии и профилактики листериоза. человека и животных"!

2) целевой программой научно-исследовательских работ по эпидемиологии и клинике инфекционных болезней человека бактериальной этиологии, направленных на совершенствование системы лечебных и противоэпидемических мероприятий (раздел 1.3.02 - "Роль Л-фюрм в персистенвди патогенных бактерий"), с программой работ НИИЭМ.им. Н.ФЛамалеи АМН СССР "Персистенция патогенных микроорганизмов" и планом основной тематики работ НИИШ им. Н.Ф.Гамалаи. АМН СССР

& 8103255&. , ...

При выполнении отдельных этапов '„работы исследования -были проведены в комплексе с сотрудниками ВНШВВиМ Госагропрома СССР С.Ф'.Чевелевыы, ГЛЛыминой, А .А .Цага новой, сотрудниками 1ШИ2Ы им. Н.Ф.Гамалеи А1.Ш СССР Н.ДКонстантиновой, И.И.Федотовой, И.Н.Кокора-нып, ЕД »Кабаковой, А Л .Снегиревой, ТЛ^Биргаинай, ВД^Лапшовым, А.В.Саниным, Т.Н.Николаевой, сотрудником Московского научно-исследовательского института им. Г.Н.Габричевского МЗ РС5СР В Л .Высоцким.

Выражао сердечную благодарность академику АМН СССР профессору С.В .Прозоровскому и акадимику ВАСХНИЛ ГЬрою Социалистического труда, профессору И.А.Еакулову за оказание консультативной помощи при проведении научных исследований.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

Материалы и методы исследования. В раооте использованы 4 штамма УЛзиг1й топосу^дтеа _ 52 (соровар 4в), 1472 (серовар I), 766 (соровар 1а), 9-129 (соровар 3). Все перечисленные штаг.:и листерий типичны по с'воим культуралыю-морфологическим, тинктсриалышм, биохимическим, серологическим и патогенным свойствам. Сор.',а; гетероморфизма листерий получали по методу Б.ДДо^о-Р-Г и /1958/ под действием пенициллина, являщегося универсальным Л-тра»сформирующим агонтом. Культуры выращивали на 1,3% агара (мясопептошшй починочный агар или агар на триптичсгсксм пароваре ...¡рдечной мыицы КГС), 2,5-5$ хлористого натрия и 10-30$ нормальной лоаадиисй сыворотки без консерванта.

Исследование иорГологии и субмикроскопической организация. Морфологические особенности бактериальных культур и их форм гетероморфизма исследовали при световой с использованном фазового контраста и электронной микроскопии. Зшоктронно-микроски'пические исследования проводили на электронном микроскопа ^ЕМ-ЮСВ ПРИ ускоряющим напряжении 80 кВ и инструментальном увеличении 30000-100000. За основу фиксации материала был взят мотод, предложенный ч/цп! /1967, Ю68/ для фиксации Л-форм и микоплазм.

Исслопопанпе пути и скорости превращения глюкозы Л-формамц листерий. Характер и скорость'превращения глюкозы Л-формама листерий шт. 52, 1472, 9-129 определяли радиометрический мотодом в аппарате Вмроурга. Об интенсивности процесса судили по образованию

C-^Og за счат окисления I С*^- или 6 С*4-глкжозы.

Исследование антигенных свойстп листерий. Антигенные свойства бактериальных форм листорий шт. 1472, 766, 52 и их Л-форм исследовали в реакциях агглютинации (РА), связывания комплемента (РСК); дайфу^Ш* преципитации в геле по OueMertcny (РДП), а также напря-мом метода флюоресцирующих антител (НМФА) и непрямом методо перокси-дазиых антител (ШЛА).

Б раооте использовали гилэримцунные Ш-сыворохки кролит против бактериальных форм указанных штаммов и иммунные сыворотки против их Л-форм сферопластного и протопластного типов. Бакториалыш-ми культурами иммунизировали кроликов внутривенно с семидневным интервалом в дозах I, 2, 3, 5, 8, 10 млрд. микробных клеток. Л-форма-ми тонизировали кроликов по схеме Плесчиа. Лводкли антиген в сш-ои о неполным адъювантом фрейнда.

Для выявления форм гетероморфизма листерий в ШФА и ШЛА, наряду с антибактериальной сывороткой, использовали глобулиповую фракцию гипериммункой сыворотки против Л-форм листерий протопластного типа. Для Еыдаления глобулиповой фракции променяли 20$-ый раствор полиэтиленгликоля с молекулярным весом 6000» Для выявления антигенного' родства бактериальных форм листерий и Л-форм электронно-микроскопическим методом в работе использовали гамма-глобулин против бактериальных форм и Л-форм протопластного типа, меченный феррпти-ном по методу Strvgtc и ScfucU /1961/.;

Инфицирование культур клеток. В опытах использовали II видов культур клеток: 6 перевиваемых линий - MA-I04 (почки зеленой шрты-пки), L (мышиные фибробласты), Hela (аденокарцинома шайки матки), ТЕ (вмниотические клетки человека), 2 первично-трипсинизированные культуры КП2Г.1 (клетки почки зелелой мартышки) и ККЭ (клетки куриного эмбриона) и 3 диплоидных штамла -КФ (кроличьи фибробластспо-

добные клеттО, СК (ретикулярные строгальные клатки селезенки кролика) и ДКЛЧ (клетки легких эмбриона чоловопа).

Клотки инфицировали 3-б-ти суточной культурой Л-форм листерий •штампов 1472 и 52 в дозах Ю3-Ю8 КОЕ. Для выявления Л-форм в инфицированных метках использовали бактериологический, иммуноцитохими-чоский (Шшл,, ШЛА) и электронно-микроскопический метода. При электронно-микроскопическом исследовании культуры клаток обезвоживали и заключали в аралдит по методу йи*^ /1961/.

Моделирование инфекционного процесса у ппструппк лила £аомгц$ ^аЗцгиз ггр" РВЯД91П1Ц Л—'Торм листерий одновременно с препаратом . сернокислого колоза. В опиты были взяты 255 пострушек вида ^адигц* ¿а^мгиз различного возраста: от 2-3-х дневного до 2,5 ::.ос,иного и старта. Животных инфицировали 5-ти суточной культурой стабильных Л-ф>орм листерий протопластного типа шт.1472. Посгрушкам контрольных групп вводили: а) Л-формы — 92 пострушкам; ) пропарат сернокислого железа — 25 пострушкам; в) бактериальную 1сультуру листерий ит.1472 -49 пеструшкам. Пострушкам подопытных групп Л-форми вводили одновре-. монно с препаратом сернокислого железа: а) 1-ая группа - пеструшкам в возрасте 4-5-ти недель внутриСрюшшго вводили Л-формы в дозе 50-60 тыс. КОЕ и сернокислоо железо в доза 0,02 мг; б) 2-ая группа — пострушкам в.возраста сшше 2,5 месяцев (самцам и самкам в 4-7-мн дневный срок беременности) внутрибрюшинно вводили Л-форми в доза 1,5-2 млн. КОЕ и сернокислое железо в дозе 0,05-0,06 мг. В зависимости от целой опыта наблюдение за животными проводили в течение 1-3,5 месяцев.

ИнФицироппнив неинбрелннх мышей 5ПК Л-пиРмлми листеппй при одновременном введении полимара поли—4-виншмиридина (ПВП). В опыт взяты 45 мышей массой 12 г. 10-ти животным контрольной группы .4 I внутрибршшшо вводили Л-формы листерий протопластного типа шт.1472

в дозе 50-60 тыс. КСЕ; 10-ти животным контрольной группы 15 2 внутривенно вводили полимер ПВП из расчета 100 мг на I кг кассы.Мышам подопытной группы (25 мышам) одновременно вводили внутрпбрюшшщо Л-формы и внутривенно полимер ПВП. В работе использовали полимер ПВП с молекулярным весом 100000 в 1% растворе' 0,5£ уксусной кислоты. Полимер вводили медленно из-ва его высокой токсичности за 15-30 га-нут до введения Л-форм. Наблюдение за-животными проводили в течение Г месяца.

Инфицирование мышей линии ВАДЗ/с Л-Формато листерий и вирусом лейкоза Рпутдера (ВЛР). Источником вируса служила плазма крови больных лейкозом мышей. Для определения титра вируса десятикратные разведения плазмы крови вводили 2-х месячным мышам ВАДЗ/с внутрибрю-пшнно в объема О,Г мл. На 21-ио сутки животных убивали и определяли массу селезенки. Мышей, у которых масса селезенки превышала 200 мг, считали больными лейкозом. Активность вируса высчитывали по методу Кербера и в наших опытах она составляла 105 ИДдо/мл.

Для внутркбрюиинногс'заражения мышей использовали 5-ти суточ-

п

ную культуру Л-форм листерий шт.1472 в дозе. 10 КОЕ. Опыты проводили на 364 кашах линии ВАШ/с 2-х месячного возрасти. Мышей контрольных групп заражали: а) вирусом — 68 мыпзй; б) Л-форкащ листерий — 68 шшеС„ Еивотным подопытной группы (268 мышзй) вирус в Л-форгли вводили одновременно', , .„

Наблюдение за животными проводили в течение 60 сутог. Еяена-дельно на протяжении всего срока наблюдения (7, 1С, 21, 28, 35, 42, 49 , 56-е1 сутки) из подопытной и контрольной групп убивали по 2-3 шши, у которых исследовали плааму крови и селезенку. Плазму про-ви исследовали на наличие вируса, а селезенку - гистологически и алактронномикроскопически. С целью обнаружения вируса в плазма крови мышей подопытной группы и контрольной с моноинфокцией ВЛР ставили биопробу на 96 мышах. Для выявления листерий в организме мытой

г.саольоохолп Сак-ч1гг.о.пог.пескпй метод и 1ШЛ.

Исслодорпияв .влияния Л-Лорм лксгеркй на дкмТогомопоэтпчоскуи систему м.чмпй. 3 опытах на гаках исследовали-воздействие Л—юрм дксторий протопластпого типа шт. 1-172: I) на процоссы пролпферации и миграции стволопых кроветворных клеток - эритроидгшх продкестпен— ннков; 2) на генерацию антителообразующих клоток (АТОК) в селезенке. Процоссы пролиферации и миграции стволовых кроветворных клеток (СИС) оценивали по Нормированию эндогенных колоний в селезенка 36 кь-дсй линии СБА, которых облучали в сублетальной доза - 550 рад. Мышам подопытной грунТгы (15 животных) за I супа! до облучонит в!Ггтрибрю-иинно вводили Л-форки в дозе Ю7 КОЕ в объеме 0,7 мл. [1а 5_иа и Э-ыа сутки .типотннх контрольной и подопытной хрупп убивали и подсчитывали на поверхности селезенки число кроветворных колоний.

Влияниз Л-^орм листерчЯ на генерацию ангитолообразуви'лх клеток в солозенке изучали на 40 мышах линии ВАГВ/ . Мы'лам подопытной группы внутрибрюшшшо вводила Л-формы в дозе 10 млнКОЕ. На I, 4, 0, 18 сутки 5 ¡алией подопытной и 5 мышей контрольно!! групп имцунизирова-ли эритроцитами барана. На пике иммунного ответа (4-ые сутки после введения эритроцитов) определяли число АТОК методом локального гемолиза в голо по , ХСогоип /1963/.

Внутривенное инфицирование овец бакториалъной культурой листа-рий, Бактериальной культурой листерий шт.1472 внутривенно были заражены 30 овец породы прекос в возраста 5-ти месяцев: 14-ти животным 1-оД группы культуру вводили в дозе 300 млн.микроб1!ых клеток, а 16-ти животным 2-ой группы — в дозе 2 млрд. Наблюдение за .тавотными проводили в точоние 2-х месяцев. Первые 4 недели их ежедневно тпрмометрировали. В различные сроки поело заражения (4, 7, II, 14, 21, 28, 40 и 60 сутки) у 4-х тавотных каждой группы исследовали сыворотку крови4в серологических роагашях — ГА, РСК, РД1. Из каждой

группы на 4, 7, 14, 21 и 40. сутки убивали по 2 овцы для гистологического исследования их органов.

Внутрипенное инфицирование овец стабильными Л-формами листерий. В качестве инфекционного материала использовали стабилыше Л-формы листорий ит»1472, пассировавшиеся поело их получения в течение 3,5-5 лет. Л-фирмами были заражены 30 овец: цз ник 24 овцы породы прекос (двадцать животных 5-ти месячного, четыре - 3-х месячного) возраста) были заражены в дозе 300 млн.КСЕ, а 6 овец романовской порода (2,5 месячного возраста) - в дозе 60 млн .КОЕ. Наблюдете за животными проводили в течьнпа 3-х месяцев. Серологические исследорашш сыворотки крови оьец проводили по той же схема, что и при инфицировании бактериальной культурой. Органы погибших овец,, а также овец, убитых в различные сроки посла заражения (II, 14, 2Г, 28, 74 и 90 сутки), исследовали бактериологически и гистологически'. Для гистологического исследования штериал фиксировали в 10£ раствора формалина и жидкости Карцуа, заливали в парафин, срезы «сращивала гематоксилин-эозином по Браше и Нисслга.

Интратрахеалъно и интраназалъно были заражены 41 овца породы

#

прекос в возраста 5-6 месяцев. Для заражения использовали те же бакториальную культуру листерий шт.1472 и ее стабильную Л-форму«

Интратрахеалъно инфицировали 8 овец, интраназально — 33 овщг. <

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

I"; Гетероморфизм листерий при естественном течении' листйрио-

30.

1»Г. Выявление форм гетероморфизма листорий при ластериоза овец. При обследовании в 1971, 1975 и 1977 годах 3-х овцеводческих хозяйств Волгоградской области и одного овцеводческого хозяйства Орловской области были получены данные, свидетельствующие.о наличии

с

форм гетероморфизма листерий в организме овец, Оолышх иорвной формой листериоза. В органах 14-ти из 27-ми исследованных овец были выявлены формы несбалансированного роста, нестабильные и стабильные Л~формы. В НМФА формы несбалансированного роста взаимодействовали о сывороткой к бактериальным формам листерий, Л-формы в большинства случаев — с гамма-глобулином к стабильным Л-формам листерий протопластного типа. Образование форм гетероморфизма листерий наблюдали у животных всех 4-х оболедовпнных хозяйств. Их выявляли в организме вакцинированных и невакцинированных овец, а также в организме овец, получавших о лечебной цолью препараты теграцмшшово-го ряда.

У животных, из организма которых были выделены нестабильные Л-формы листерий, в 1ДОС обнаружили; острый негнойный энцефалит лим-фоцитарного типа. Он характеризовался сочетанием альтератквнин, экссудативннх и пролифоративных явлений. II: первый план выступали изменения пролифоративного характера с образованием многочисленных пориваскулярных цуфт, состоящих из лимфоидных и адвентициальных клеток. В печени, почках выявляли дистрофлчоско-нокротическиа изменения, а в других органах — геморрагический диатез.

У животных, из организма которых были выделены стабильные Л—формы, - наиболее' типичным явилось поражение Щ1С в виде энцефалопатии с распространенными дистрофическими поражениями головного и спинного мозга, резким расстройством Гимодинамшш и отсутствием воспалительной клеточной реакции. Наряду с геморрагическим диатезом и дистрофическо-некротическими изменениями в паренхиматозных органах, у ягнят имела место атрофия лимфоидной ткани.

1.2. Выявление форм гетероморфизма листерий при листериозе дотай перинатального периода и ранного возраста. Бактериологически нами исследованы органы 5-ти дотай перинатального пар'.ода и

-162-х детей ранногс возраста (5-ти и 6-ти масяиов), погибших от лпс-ториоза. Секционный материал был получен из прозектуры Клинической инфекционной больницы ü Г, Детской клинической'больницы Ü 2 им. И.В.Гуоакова и кафедры патологической анатомии педиатрического фа- . иультета 2-го МОПИИ им» НЛ.Пирогова. На аутопсии макроскопические изменения, характерные для листориозного сепсиса, обнаружены у всех 7-t.ni детей'.

Срок жизни детей, погибших от перинатального листериоза, исчислялся от 6~ти часов до 5-ги суток. При бактериологическом исследовании органов 3-х из этих детой были выделены бактериальные культуры листерий. В органах 2-х других детей, помимо бактериальной культуры, обнаружили также формы готоро;,'.орфизма листерий: в одном случае - формы несбалансированного роста» в другом - стабильные Л-формы. Формы несбалансированного роста при первичном высеве на срода давали слабый диффузный рост. В НМФА они взаимодействовали с сывороткой против бактериальных форм листсрий/. Л-<ормы давали обильный рост через 1-2 суток после посева. В НМФА они апецифичосгл взаимодействовали с гамма-глобулином против Л-фсрм листерий протопласгного иша.

При бактериологическом исследовании органов детей, погибшие в раннем возрасте» были выделены стабильный Л-формы, идентифицированные как Л-формы листерий в НМФА.. В мазках-отпечатках органов одного ребенка выявили также формы несбалансированного роста, которые взаимодействовали с сывороткой против бактериальный форм листерий, но на питательных средах не росли.

Л-формы листерий, выделенные от детей, как и Л-формы, выделенные от овец, обычно не пассировались в условиях лаборатории, дажа если при первичном шеево давали хороший рост да средах. Через 2, максимум 3 пассажа, культуры Л-форм погибали.

ZA, Суй.п^х.чжотпоскал организация .íopn roTnpovo¡>¡«w¡». !1¡ :'. «оздоЛстлки im йякторшш.иум ¡гулыуру люгпркЛ ушп-.прлчлыюг'п Л-трш:-!ор-и^гадиго лгинтл — петщиллядо, в norm, шшболои удилн»-иоИ от диска о антибиотиком, гдо концентрации иго Сиди 1.:зшш:1лт.:ш~ г".!, иуоло место образованно <)орм иосгЧитисированного roi.TM. (n:i ri<-ли щмдставллш нятеьидшт ocoöje.«, у одних из котцих, наряду с i'.a¡ryi.;nu:íG!,f провесов дпдонзя, ппбллдала nonposyroim« внутрицитошт-av."гических мсн;Орашшх структур и частичный лизис iuuti.'iiiu!! отпнки.

В пень, ирилояшпоП ближе к диояу с антибиотиком, г ¡>tr ::лгкн индуцировал нонплонио истинных протопластов с<}ор!1чоскс:' <.'-p:.rtí. и иротонласт!шх lïopM искрпшюшюЛ К0П'1л1урац!!П. Одпопре.'.-ошш у листа рнй происходил выброс мембранных структур из цитоплазмы. Зхн b<i~ риапты лист.чр::!!, попностью лишенные стенки, били способны к дальни йгя Я трансформации в Л-4ормы. Л—»!opf.nj то: о оказались гшеы-а лабильными вариантами, способшг/и к опредолипным превращениям.

¡{улт.тури J1—<J орм лисгерий первой гвпорции и прпнадяожали к протопластному типу, были лишены внутрицитоплазматичоских мембран-них ст|!уктур и размножались преимущественно по типу перетяжки на равновеликие и кпрпвноьоликиа особи. Сохранение их в течение мо-ояца без пересола или дальнейшее культивирование па средах с небольшими концентрациями пенициллина (25 ЕД/мл) вновь приводило к изменении субмикрископической организации листорий. Л-<101«.ш приобретали способность размножаться разнообразными способами, включая гндо- и окзопочкованиа; о(е novo синтезировали внутрипитоплазмати-чоокиэ момб^чшши структуры, отличный от тиковых у бактериальных ¡¡орм; синтошц опали де ¡октную стоику, располагавшуюся на поверхности fiur.:6pfiiiu в вида отдельных ¡1 рягеентоп. Шишчпв дв'[<зктной стенки «уи«»г«лj.i'tj>ои«ло о гтроходи Л—; орг.: нрптммаетного тшш ь C'.'cj о-нла." гни:1.

При пересеве на среди.с возрастающими дозами пенициллина (IOO, 150, 300,1000 ЕД/мл) Л-формы опять утрачивали фрагменты стопки, внутрицитоплазматические момбранныо структуры .и стабилизировались в Л-форме протопластного типа. Для популяции стабильных Л-форм било характерно-особое морфологическое разнообразив'. В их состав входили особи различной конфигурации, гигантские тала, тяяистые и волокнистые формы, бесструктурные массы.

При роверсии Л-форм в клетках вновь синтезировались вкутригш-топлазматические мембранные структуры. Но материал клеточной отопки у них был представлен по-разному. У одних особой он имол фибриллярную структуру, у других — был уплотнен и толщина его варьировала. Располагался материал стенки в надо отдельных ф;раплентов или полностью покрывал поверхность цитоплазматической мембраны. Ровер-сирувдпе клетки делились по типу перотягаш, расцеплялись или вытягивались по оси, приобретая палочковидную форму.

Реверсия Л-форл листерий носила завершенный характер только в свежеполученных культурах. В длительно пассировавшихся культурах она была абортивной. При этом образовывались формы с клеточной стенкой, ригидность которой была нарушена. Эти варианты имела форму, близкую к палочковидной или овоидной. Б процессе деления они образовывали поперечные перегородки, но расхождения дочерних особей часто не Наступало, что, в свою онерадь, приводило к формирования конгломератов разнообразной конфигурации. В процессе культивирования одни особи с клеточной стенкой лизировались, у других — отслаивалась стенка и образовывались почкующиеся протопластные фор,т. В цитоплазме некоторых клеток с неполноценной стенкой наблюдали образование элементарных тел.

В культурах Л-форм листерий, выделенных из организма овец при спонтанном листериозе, бактериальные формы листерий образовывались непосредственно в цитоплазме Л-клегок.

2.2. Культуральгыэ и некоторые метаболические свойства форм гетероморфизма листерий. Проведенные исследования показали, что формы несбалансированного роста листерий, как и других видов бактерий, активно не размножаются. По они способны к ограниченной ро-продукции. В зависимости от уоловий окружающей среды формы несбалансированного роста реверсируют в бактериальную культуру, трансформируются в Л-форму или гибнут. Между тем Л-формы сфоропластного и протопластного типов являются активно репродуцирующимися формами возбудителя при частичной или полной утрате ими клетэчной стешш. Время роста Л-форм листорий широко варьирует, что обусловлено особенностями их репродукции, метаболизма и степенью адаптации к питательным средам. Время формирования визуально видимчх колоний исчислялось от I суток до 1,5 месяцев.

Л—формы, полученные in vitro при разных условиях, различш по своим ассимиляционным свойствам и тробуг различных условий культивирования. Однако для их активной репродукции vitro обычно необходим солевой стабилизатор. Нормальная лошадиная сиворотка оказывает стимулирующее влияние на рост- Л-фирм, а в 30% концентрации обладает выраженным стабилизирующим действием. Установлено, что Л-формы листорий мигут однократно вырастать на ородах для культивирования бактериальных форм возбудителя, но воспроизводимость этого феномена не предсказуема, механизм, ответственный за его развитие, остается невыясненным.

Л-формы листерий не растут на средах с таллуритом калия, которые используются в качестве элективных сред. Но, подобно бактериальным формам возбудителя, они используют глюкозу по ШП, размножаются при 40С, при этом пониженная температура способствует восстановлению клеточной стопки. При роворсии форм гетероморфизма в условиях лаборатории ьозоудитоль сохраняет свойства, имеющие таксономическую значимость.

2.3. Антигенные свойства форм гетероморфизма листорий. Поскольку форш несбалансированного роста и протопласты листер;.".!! активно но- ропролуцировялнсь, исследование их биологических свойств, и том число антигенных особенностей, било в значительной степени трудноно. Наиболоо полно памп изучены антигошшо свойства Л-ф-орм протопластного и сфороплаотного типов.

Поверхностно антигены Л-форм л историй протопластного типе, по сравнению с таковыми бактериальных форм, обладали монымй активностью, При иммунизации кроликов бакторипльнами культурами листе-р-ий ь организме хзтвотних спнтоэпровалпсь агглютинины, выявляемые, гомологичными антигенами в титрах 1:640—1:12B0. 1,'олуту том, в отвот на введение Л-форм протопластного типа синтезировались агглютинины, которые взаимодействовали с гомологичными Л-пнтигинами в развода ни:; 1:40-1:160.

Различий в величине титров проципитирушпх антител, спнтозиро-вавшихся в ответ на вводанио бактериальных форм листорий шт. 766, 1472 и их Л—фор?л протопластного типа выявлено но было. В среднем, они составляли X:16—Ij32. Исключение составили сыворотки против Л-Форм шт.52. В них гомологичные преципитшш выявляли в титрах 1:2-1:4.

Л-формы листерий протопластного типа, как и бактериальные формы возбудителя, индуцировали синтез конпломентсвязывапдих антител (таблица I).

Несмотря ка изменение антигенных свойств листорий в процесса Л-трансформяции, мо.хду Л-tJoptломи в бактериальными <?ор\:аш сохраняется общность антигенного строения, которая выявляется в РА, FCK, РД1 (таблица I).

Родство поверхностных антигенов Л-форм листорий протопластного типа с исходными бактериальными Нормами выявляется такие при

РЕЗУЛЬТАТЫ СЕРОЮПИЕСДг PEAI-CCa (гЛ.РДТ.РСК) И НЕЯРЯШГО ШГССД МВОРЗСЦЙРЯЕЗа АНТИТЕЛ (HL2A) ПО ВШШЕкИ£ AHSJTEsEGTO ?C"CÏS БАКТЕРИАЛЬНЫХ SOPU JEKTZPK2 И ИХ .I-CCPU ПРОКШАСВ-ХГО И CÎEPOmvClHCTO Г.ШСЗ

Антиген i Гиперишунная ; сыворотка к

Роакцип

_РА

___

Баятериальная бактериальной фораэ 1:640-1:1230 1:16-1:32 I: 10-1:И Форма

Л-фор^аа П-типа 1:20-1:40 1:2-1:16 1:1С

i

го

Л-форш сферо- бактериальной фо^з ■ 1:160-1:6-10 1:16-1:64 О

пластного типа

(С-типа) Л-фюрыаа П-тшш ООО

+ (-) - (-)

Л-форш прото- бактериальной форь'з I: £0-1:160 пластного типа

(П-типа) Л-фор^ал П-типа 1:80-1:160

1:16-1:64 О

1:15-1:32 О

Обозначения: + результат полозхтельЕнй - результат отрицательный

- результат сс.-^атэл! О рэаясго не ставгла

плактропно-микроскопичоском исследовании с использованием антибактериального у-глобулина, моченного форритином. При этом феррити-ноиую мотну обнаруживали на поверхности цитоплазматичоской.мембра-1Ш различных особей Л-<)орм, включая элементарные тола. Между тем, чувствительность ПМФА значительно ниже. В ПМФА рабочие разведения антибактериальных сывороток не выявляли Л-форглы протонластного типа и, наоборот, гамма-глобулин к Л-формам протопластного типа на выявлял интактные клетки.

Л-1{ормы сфоропластного типа, сохранявшие фрагменты клеточной стенки, в антигенном отношении были болов близки бактериальным формам, чем Л-формы протопластного типа (таблица I). Л-формы сфвропла-отного типа взаимодействовали с антибактериальными сыворотками также в ПМФА. Особенно наглядно это было видно ш примера реверсирующих культур Л-форм первых пассажай. Если степень сохранности клеточной стенки оказывалась но значительной (что подтверждалось алоктьопно-микроскопичвскими исследованиями), результаты ПМФА с антибактериальными сыворотками били сомнительными. Формы несбалансированного роста взаимодействовали в НМФА с антибактериальными сыворотками и на взаимодействовали с сыворотками к Л-формам протопластного типа.

2.4. Взаимодействие с культурами клеток. Все взятые в опыт виды культур клеток по своой чувствительности к инфицированию Л-фор-мими листерий четко делились на 3 группы: а) высокочувствительные (ККЭ) - чорез 1-2-09' суток после заражения Л-формами в дозе Ю^-Ю3 КОЕ в культуро клеток развивались цитотоксическио изменения, приводящие к ее гибели на 3-4 сутки; б) сродночувствительные (СК, КФ, ШШ, МА-104,9Ь ,ц ) - цитотоксичискоо дойствие обычно проявлялось на дозы возбудителя 10^-10' КОЕ, но метки, как правило,' не гибли и в дальнейшем но пассировались; в) нечувствительные (ДКЧЛ, ЯЬ ,

Но1а, СПЗВ) — Л-формы и дозст 10 - 10® КОН но вызывали в культурах цитотогссичоского действия.

Штаммовых различий в патогенетическом* действии Л-форм листорий но енявлоно: Л-форлы штаммов 1472 и 52 вызывали в культурах клеток однотипные изменения. В случае острой инфекции и гибели клеток в порвыз 2-3-оэ сутоп поело инфицирования наблюдали обильный рост Л-форм на босклеточных оредах.

В культуре клеток: КФ Л-формы листорий вызывали хроническую инфекцию. Единичные колонии Л-форм выделяли на средах на протяжении 3-х пассадей з точения I месяца. Но эти Л-формы в дальнейшем но пассировались. На 4-ом пассата культура КФ погибла. В культуре ?1А—101 и Ь-клзткпх Л—формы вызывали латентную инфекцию. В культура МА-104 через 3,5 месяца пооло инфицирования возбудитоль был выявлен з вида нестабильных Л-фюрм, давших рост и реверсию на средах. О пэр-систирующэй инфекция в ь-клетках свидетельствовали данные И.МА, НША и элоктронно-минроскопичоскнх исследований, Злоктронно-шкро-скоппчеокое исследование культуры ь -клеток 7-го пассат позволило выявить Л-фюрмы, располагавшиеся в фагоцитарных вакуолях цитоплазмы клоток и вноклоточно, на клеточной мембране. Однако, несмотря на свою морфологическую полноценность, эта.Л*фюрмы не росли па босгага-точиых средах.

Полученные данные убедительно свидетельствуют о возможности внутриклеточного существования Л-форм листорий. При этом Л-формы в процессе внутриклеточного ппразитирования мо1у? утрачивать способность расти и пассироваться га питательных средах.

У;_Витулентнне оЕойсгва Л-форм листорий в опытах на лабораторных аявотных.

3.1» Моделирование инфекционного процесса у пеструшек вида Йадигш (.о^иги» при введении Л-форл листерий одновременно с про-

няратим сернокислого к<лоза. В результате прогодошшх исследований .устанок.'ннш, что сираокпслоь млазо г.оьиаг.от чувствительность пис-трушик '1-5—14; иоднишюго возраста к ш[ши:рои-.:г.,.г Л-фор'""^ л::от'.-риЬ. Циотруишд контролымх групп, которым иьод»»лк ироп:»!«? голезс. и листириа, по кродьпли юшикчоекп гиримиюх признаков би-

лтши пи |фотя'.мш:и м;:о1'о масяца (срок кио/надоная). Уечау

тчг.:, 10 из 33 кивотних, которым щюли Л-<1орки лвсторий одиощюмошго с. ир-.нiap.iiтом и.илоза, в тичеш-л. норных 10-14 суток были милоаклмыш-ш, отк>«;«Л1£1Лкоь от кокли. У 2-х посгдесок аоямушсь с;;:;;ггс;.:а иорч-кчния нервной оиитнмп - нароэи задних конечностий,, ц хлнопша погибли на Я и 15 сутки ноем заражения. При ьскцшч:« ниниих кипотных ооравдла на соба внимание рнзко шракониан атрофия сила пенки к тимуса. ^[тупш орППШ бнлп б€3 Ы1ДИШХ изменений. При шияио суспензии органов на полутвердый среды наблюдали ]юот полимарфнш; образованы! л зорниотих форм. Культури п ШФЛ окрашивались сывороткой против бактериальных форм листирий, что сви.потильстиошло о наличии у НИХ фрШМШГГои КЛОТОЧНОЙ стошси.

Инстцушки в ш при сто 2,5 мосяцои оказались менее чуьствитель-1ш к инфицированию при одновременном влодошш им Л-форл и сернокислого железа и пи проявляли признаков заболевания, Ьоримшшость такжн но провоцировала их развития. Однако в 3-х случаях удалось доказать нринципиалыгук) возможность передачи позбудитолл от инфицированной самки потомству. У 3-х самок погибли II ди'тонишей в сроки от 7 до 19 суток поело рождении, при этом у возбудителя в ряде случаев синтезировались ф)>агменти клеточной стенки, а в одном случае имела мосто роверсия в бактериальную культуру.

3.2. Ходилированио инфекционного процесса у ноиибреднше ми-иай ЭНК при вьодбиии Л-форм листорий о.дновромишш о пиш.шром НИИ. Полпмнр Ш;П ьизиьааг ь ор1 ¡т.-.з'/а ии.огшп каосовун габалъ

'прптроцитов и развитие строссорчых явлений в порпыо сутки после ::::здлш1л.. 3 наших опытах вводе шю маппм л-<1орл лпстерий одновременно-с полимером 1ШП повышало чувствительность животных к заражению.

'"¿:;пк контрольных групп на протлдвнии I месяца (срок наолюдя-ния) но проявили клинически выраженных признаков болезни. Между том животные подопытной группы в течение 1-ой недоли посла инфицирования откапывались от корма, глрстный покров их был взъеропоп. К началу 2-ой недели они отставали в росте от мы ста Я контрольных групп. На н 17-ые сутки погибли 2

При гистологическом исследовании органов г/мод (.'§ 12В), погибшей па 17-ые сутка, и ииви (3 127), убитой па 7-ио сутки в период бологнп, впятили слодугсцио изменения. Селезенка обоих мышей была в "гл'щтсль'юй степени обеднена лимф-онднкми элементами. У мыши й 127 наблюдали гиперплазию миолоидной ткани в селезенка с большим количеством молодых и зрелых форм полилорфподдврпых лейкоцитов, а у гиен 'I Г20 — розхо выраженную родуко» ератроэдного • кровотворзшш. Б головном мозго имели место перяцолляднр-шй отек а гипярхроматоз нервных »теток. В печени обнаружили диффузную и очаговую гиперплазию фпферовских клеток, в почках — зернистое перерождения эпителия и некроз извитых канальцев, сморщивание отдельных клубочков с расширением капсул. ' - .

3.3. Смотанное инфицирование мыяэй линии ВА1В/с Л—фюрж'^гля лпстерий и вирусам лейкоза Роушэра. В контрольной группа мышзЯ, ::отор:лл вводили Л-формн листерий, на протетзгага 60 суток (срок: наблюдения) тавотные не проявили признаков болезни. На 60-ыа сутки ливотные были убита, макроскопических изменений в их органах нэ обнаружили,!^ссс£ол8зенки у них не прзЕышала170 нг.

В. контрольной группа мыпэй, инфицированных вирусом Рауирра,

к копну опита - 60 суткам, из 50 зараженных животных погибли 18 (36?!). Наибольшее число мышей контрольной группы погибли в период с 40 по 50 сутки. При вскрытии 32 мыиой, оставшихся в живых, у 15-ти (30$) выявили спленомогалию. . •

В подопытной группе из 92 мыший, инфицированных вирусом Рауте-, ра и Л-формами листерий, от лейкоза погибли 80 еквопшзс (87$). В отличие от контрольной группы, наибольшее число мышей подопытной группы погибли раньше, б период с 30 по 40 сутки. Причем,- процент гибели мышей со смешанной инфекцией в этот период времени был выше, чем у шшай с моноинфокциой ВЛР в течение всего срока наблюдения. У 12 мышей, оставшихся в живых к 60 суткам, при вскрытии также* обнаружили резко выраженную спленомегалию.

Гистологпческоо исследование селезенки мышей и данные биопробы подтверждали стимулирующое влияние Л-форм листерий на развитие лейкоза.

Начиная с 21-28 суток по 49 включительно, из солезенки мышей • со смешанной инфекцией обильно высевались Л-формы листерий. Несмотря на то, что при первичном посеве Л-форш хорошо росли на средах, в дальнейшем они но пассировались. Исследование селезенки в ШФк и элоктронно-микроскопичоски' позволило выявить формы гетероморфизма листорий, лишонные и синтезирующие клеточную стенку.

В контрольной группе мышей, которым вводили монокультуру Л-форм, Л-формы выделяли в виде единичных колоний из ткани селезенки - в 20$ случаев.

Придсташшняые данные показывают, что при введении мышам линии ВЛШ/о вируса лейкоза Раушера одновременно с -Л-ф.ормами листерий _ значительно сокращались сроки развития лейкоза, к 60-ым суткам имела место 100* заболеваемость животных (таблица 2) - стимуляция лейкоза была статистически достоверна (Р<0,1). При этом Л-форми активно репродуцировались в организме мыший.

Зяраженяэ мышей линии BAIB/c вирусом лейкоза Раушора п Л-формамз листерий протопластного типа

Таблица 2

Введенный материал

1 ¡Число мы- ! Эритробластоз у выжив-

! Число ин— !шей, пав— ! mix мышей

! Фицирован-.'ших с яз— !---

! ных мыяой .'лонипми ! ! I '! зритробла-( наличие ¡отсутствие ■JL..,.............,!.cipaa___i______t ___

ВЛР и Л-формы листерий

ВЛР

Л-форш лиотерий

92 (1002) 80 (872) 12 (132)

50 (1002) 18 (362) 15 (30J5) ' 17 (342)

50 (1002) - - 50 (1002)

3.4. Влияние Л-форм листерий ¡а лимфогемопоэтическую систему мыиой»

Проведенные исследования показали, что Л-формы листерий стимулирую? пролиферацию эндогенных КСЕ^д в селезенка мышей (таблица 3). При этом численности КСЕ0 в костном мозге инфицированных

мышэй уже через Г сутки после заражения резко снижалась. Она сое

ставляла на 10 кариовдтов 144 КСЕс (у мыпай контрольной группы -292 КСЕ0), а на бедро - 1152 (в контроле - 3679)» Клеточный состав костного'мозга через I сутки после -заражения падал с 12,6 ¡.ига/бедро (контрольная группа) до 8,0 млн/бедро (подопытная группа). ■ ' '

Л-формы листерий'протопластного типа обладают сильной иммуно— супрессивной активностью. На 4-ые сутки после заражения Л-форламд' число АТОК против эритроцитов барана во всей селезенка увеличилось па 402 от контроля, по увеличения АТОК 'практически не отмечали при пересчете па .1 млн. кариоцитов селезенки. К 8-ым суткам посла

зармтшш число А'ГОК резко снизилось как во всей солозенко (до 33,7- ит контроля), так и на I млн.кариоцитов (до 30,» от контроля). К 22-им суткам иммуниоуироссияный эффект усугубился: до 20£ от контроля на млн.кариоцитов и до 11% от контроля ьо всей селезенке.

Таблица 3

МрПЗОЫШИО эндогенных колоний у нишей СБА через 5 и У суток после облучения в дозе 5,5 Грей (550 рал)

Вариант

число колоний (М ¿ш ) через

5 суток

9 суток

контрольная группа

33,4 ±4,1 (8)

подопытная группа 47,0 - 7,7 (8)

4,1 ± 0,6 (13) 7,1 ± О,У . (7)

> 0,05

<0,05

1; скобках приведено число мл шей

4Г СУспкримчнтатытн лрсториоаная инф''кпия .у овец.

Л—1(лисгс-рий вызывают патологичискни процесс у овец. Внутривенной введении овцам Л-форм листорий нротинластною типа привило к развитию у £9 из 30 животных стертой <;орш листериоаа. Однако степень глрпьишнос-ти патологических изменений при ппфнциронании Л—рормами б|4ла нисколько меньшой, но с охра шиш сь они дольше, чем при заражении бактериальной культурой в той же дозе. При инфицировании бактериальными культурами патологические пзмшшнпл в органах сохранялись до 21 суток, при инфицировании Л-формами - до 28 суток. Они характеризовались нарушением гемодинамики и развитием весьма незначительных: дистрофических и пролкфоратиышх явлений в тканых.

«

-291

Агглютинины против Л-фопм синтезировались в насколько меньших титрах и достигали своей максимальной величины в более поздние сроки: при введении бактериальных культур на 7-ыо сутки, при вводешш Л-форм - к 21-ым суткам.

У 10-ти овец инфекция, обусловленная Л-формаки, приняла хроническое неблагоприятное точонио и привела к развитию нервной формы болезни. При нервной формо экспериментального листериоза овец, вызванной внутривенным введением стабилышх Л-форм листерий, продолжительность инкубационного периода исчислялась от 15-ти до 65-ти суток» Клинические признаки болезни у овец характеризовались гаруса ни ем координации движений, движением по кругу ('"вертячкой"), потерей равновесия. Но температура при этом оставалась в пределах порты. Животные были крайне истощены. В дальнейшем у них разливались парезы конечностей, ригидность мышц шаи и затылка, "плавательные" движения, тонические судорога. Несмотря ка т.тг.зсть состояния, стогие овцы принимали коря. Из 10-ти овец, заболевалх нервной формой листериоза, у 9-тп лиеотных инфекционный процеез закончился латалышм исходом еа 3-10 сутки после по.<рзлэнил симптомов болезни. Лишь у одной овцы о вяло тающими парезами конечностей заболевание со прогрессировало, а .черзз 1,5 педели наступила выздоровление.

В периферической крови овец, больных первной формой дастерио—

п

зз, наблюдали снижение числа эритроцитов (3,5-4 млн. в I. ум ) а-лэйютцитоз (4-4,5 тыс. в -I мм^)» Резкое снигеюю числа лимфоцитов (0,7-1 тыс» в I км ) свидетельствовала о тягзлой степени поражения лимфоидной ткани и подавлении иммунологической реактивности организма. Базофаш, эозинофили и моноциты в большинства случаев отсутствовали» Элементы крова претерпевали, дегенеративные изменения.

При серологическом исследовании сывороток крова, взятых оз овец в период выраженной койросиыптоматики, выявить агглютинины,

кимпломентсвязиваицие и праципитирующие антитела, как правило, цз удавалось. Это касалось, прежде всего, тех животных, у которых клиническая картина развивалась в отдаленные сроки посла инфицирования. Лишь у 2-х овец, заболевших нервной формой листериоза на 15-ые и 16-м в сутки, обнаружили преципитирущио и агглютинирующие антитела, взаимодействующие о антигеном Л-форм листерий в титрах 1:2-1:4 и 1:Г0, соответственно.

Несмотря на то, что клинические симптомы нервной формы болезни, воспроизведенные нами при инфицировании овец Л-формами листерий, но отличались от таковых при спонтанном листериозр, в мозге животных имели место явления энцефалопатии, а не энцефалита. Развитие последнего при нервной форме листериоза в.настоящее время считается обязательным. Дншшо, получишше на овцах, позволяют заключить, что продуктивный компонент воспалительной реакции в мозге свидетельствует о проникновении возбудителя через гемагоэнцефшшческий барьер, но развитии синдрома, характерного для нервной формы листериоза, возможно при полном отсутствии пролифоративних изменений.

В отличив от бакториалышх форм листерий, Л-фюрш протопласт-ного типа практически не индуцировали выраженных пролиферативных изменений в органах. При Неблагоприятном течении инфекции они вызывали опустошите тимуса, Т- и В-зашсимых зон селозонки, лимфоузлов, отсутствовало созревание призматических клеток. В костном мозга при атом отмочали исчезновение элементов эритробластического и миилоидииго рядов. В синтшуш ретикулярной стромы оставались лишь единичные клетки на фоне расширенных капилляров и мелких кровеносных сосудов, что свидетельствовало о тотальной аплазии костного мозга. В других органах (гшчени, почках, надпочечниках и т.д.) выявляли обширные кровоизлияния с очагами нокроза паренхимы.

Дальнейшие исследования показали, что нервная форма болезни,

которую обычно не удается моделировать при инфицировании бактериальными культурами листерий, развивается не только при внутривенном, но и при интратрахоолыюгл вводе шш Л-форм. В наших опытах из 8-ми овецг эаракошшх Л-формами листерий интратрахеально, у 2-х имело место поражение, нервной системы. Клинические проявления болезни были отмочены на 25-но п 29-ыа сутки после заражения. Чпроз 3-ов суток одна овца погибла. Гистологические изменения в ее органах били полностью аналогичны таковым у овец» павших от нервной формы при внутривенном инфицировании".

Л-формы листерий проникают через неповрежденную "слизистую и при интраназальном инфицировании, а одновременное интраназальное ввяденло овцам исходной бакториалыюй культуры листерий и их стабильных Л-форм протопластного типа отягощало течение инфекционного процесса у животных, в единичных случаях вплоть до летального исхода. В органах животных клали место ярко выраконныа деструктивные изменения, гаялэ характерные для патогенетического действия Л-форм. Несмотря на то, что-овцы были одновременно инфицированы и бактериальной культурой, пролиферативный компонент воспаления при этом полностью отсутствовал.

При нервной форма листориоза в мозге»экспериментально инфицированных животных тлела место энцефалопатия, аналогичная той, которую мы выявляли при спонтанном листериозе. Получанные данные не. только подтверждали наши наблюдения о наличии при листериозе ранее пеизвестной энцефалопатической формы болезни, но и свидетельствовали о возможности ев воспроизведения в условиях эксперимента..При _ нервной форма экспериментального, как и спонтанного, листериога специфические антитела в сыворотки крови, как правило, отсутствовали, а обнаружение возбудителя было в значительной степени затруднено наличием в организма листерий в вида форм гегероморфппиа.

Рекомендации по практическому использованию методов обнаружении 'Уорм гетероморфизм! листерий и совершенствованию лабораторной диагностики листприозя.

Методы обнаружения Л-форм листерий включают посевы патологического материала на питательные среды и идентификацию выделенных культур иммунофшюоресцонтным или иммупопероксицазным методами.

Микробиологическое исследование. Из органов и тканей делают посевы на среды, обычно используемые для выделения бактериальных ^орм -листерий (мяооппптонный или мясопептошшй печеночный агар Д1ИА, МШ1А/ или бульон ДЛШ, МШШ/ с'добавлением 1% глюкозы и 2-32 глицерина, рН 7,2-7,4) и на полутвердый и жидкие Л-среды для культивирования Л-форм листерий в условиях лаборатории — 1,32-ний МПА (МППА) и бульон, содержащий 2% хлористого натрия и 2% нормальной лошадиной сыворотки без консерванта. ■

При отрицательном розультато порвичпого посева рекомендуется сохранять патологический материал в холодильнике при 4°С в течение 30 дней и проводить повторные исследования через каждые 10 дней.

Посевы инкубируют в течение 3-4 суток при 30°С или 37°С. При отсутствии роста срок наблюдения увеличивают до 1-1,5 месяцев, но посевы при этом выдерживают при комнатной температуре (20-22°С).

Л-формы листерий при первичном посеве из организма могут вырастать но только на Л-среде, но и на обычных бактериальных средах, однако дальнейшие пересевы их, как правило, но удаются.

• Л-формы листерий обладают каталазной активностью. Выделенные культуры изучают в фазово-контрастном микроскопе, ощюшивают по Граму и исследуют иммунофлюоресцонтным или иммунопероксидазньи методами.

Окрашивать по 1\>аму можно изолированные колонии агаровой культуры Л—1 о[».1, либо бульонную культуру, если в жидкую среду пиросева-

лп колонии о агара. Нользя окрашивать но Граму бульонную культуру (зсли в сроду засовали суспензии органов) и мазки-отпочатки органов, так как при этом возможны артефакты.

При окраске по Граму большинство особой Л-форл листерий грпм-положительпы, но мотут встречаться и единичные грамотрицатслышо особи.

По чувствительности выявления Л-форл листерий в мазках-отпо-чатках органов и мазках культур Л-форм иммунофлюоресцептный и имму-пеперогсеидазпнй методы практичосш равноценны.

Дта выявления Л-форл листерий сферопластного тнйа с хорошо гыражонной клеточной стенкой можно использовать сыворотку против бактериальшх форл листерий, поэтому постановка реакции осуществляется в условиях любой бактериологической лншратория. Л-форгя* лпеторий протопластного типа шэ выявляются антибактериальной сывороткой» Работниками науч[ю-исследоватольских учреждений могут быть получены гипорнлмунпые сыворотки против стабильных Л-форм-листерий протопластного типа.

Предварительный диагноз ставят ка основании комплекса эпизо-отологичеекпх донных, клинических признаков,патологоанатомичвеких. н•гистологических измонений, а такгэ при наличии возбудителя в мазках-отпочатках органов'.

■ Окончательный диагноз на листериоз- устанавливают в случае" выделения возбудителя (бактериальной формы, нестабильной пли стабильной Л-формы). Стабильные Л-фор.ш листерий, не давшие реверсии, должны быть идентифицйровапы оялунофлкорэсцантнш или иммуноперо-. лоидазным методами. •

Реализация научных положений диссертации а разработанных ма-г-тодик имеет народно-хозяйственпое знычениа: они представляют новосг направление з решении крупкой научно-практической проблемы и-будут .

опособст'вовать рациональному и эффективному проведению мероприятий, направленных на улучшение диагностики и мер. борьбы с листериозом животных и человека.

В и В О Д Ы

1. При естественном течении'листериоза человека и животных игле' ет мосто образование форм гетероморфизма листерий: форм несбалансированного роста (вариантов, способных к ограниченной репродукции)

и Л-форм (активно репродуцирующихся вариантов).

2. Формы гетероморфизма листерий (формы несбалансированного роста, протопласты, Л-форлы сферопластного и протопластного типов) продсташшют ообоИ варианты,весьма лабильные по субмикроскопическоР организации, антигенной структуро, метаболизму, репродукции и при изменившихся условиях существования легко пороходят из одной формы в ДВДУю, способствуя сохранению возбудителя в неблагоприятной для него среде обитания. . .

3. Л-Формы листерий обладают вирулентными свойствами и при экспериментальном заражении культур'клеток, неинбредных мышей 5НК, пест[|ушек вида ¿адигш £а^иги& , овоц мохут вызывать различные • формы инфекции: латентодю, хроническую, острую.

4. К наиболее ха1актерным особенностям патогенетического действия Л-форм историй протопластного типа относится их способность вызывать латентную инфекцию У грызунов и овоц; у овец чаще, чем у грызунов, латонтная инфекция прогрессирует, приводя к развитию нервной формы болезни. . ' '

5. Нервная форма листериоза [извивается У оьец при разных способах введения Л-форм - внутривенном, интратрахепльном, интрана-зальном; продолжительность инкубационного периода исчисляется от 15 до 70 суток, болезнь протокаиг о классическим симптомакомплек-

сом, характерным для естественного течения инфекции, и заканчивается летальным исходом.

6. Реализация вирулентных свойств Л-фирм листерий во многом зависит от.индивидуалышх особенностей организма: одни и то же дозы возбудителя в одних случаях вызывают незначительные патологические изменения обратимого характера, в других - приводят к гиболи животных.

7. Л-форкы листерий протопластного типа вызывают ранее неизвестное при листериоза расстройство кроветворения, характеризующееся диффузной атрофией лшфчзгемопоэтической системы макрборганизма: аплазией костного мозга (вплоть до тотальной), опустошением тимуса,

Т- и В-зависимых зон оелезенки, лимфоузлов, отсутствием пролифора-тивного компонента, воспалительной реакцией в органах, развитием энцефалопатии.

8. Л-фх)рмы листерий, подавляя лимфогемопоэтичоскую систему организма, создают условия для реализации патогенных свойств других возбудителей: одновременное введение мышам линии ВАГВ/с вируса лейкоза Рауиера и Л-форм листерий протопластного типа резко стимулирует развитие эрлтробла'стоза у яивотшпг.

• 9, Явление гетероморфизма листерий. ооложняет бактериологическую диагностику листериоза: формы несбалансированного роста активно не репродуцируются, а Л-форглы при выделении из организма, как правило, не пассируются на разных видах, искусственных питательных, сред в силу своих метаболических особенностей'.

ГО. Явление гетероморфизма листорий. осложняет серологическую. диагностику листериоза: частичная или полная утрата листериями клеточной стенки приводит к сншсонию антигенной активности, поверхностных структур возбудителя, способствует реализации его годалуно- ' супрессивной активности, обуславливает низкие титры хуморальных

ин'гатол или их полноо отсутствие.

II. Иммуноцитохшлическо'е выявление антигенов листорий нелря— мим методом флюоресцирующих или пероксидазпых антител повышает аф-фактивность лабораторной диагностики листериоза: использование анти-сивороток к бактериальным формам листерий и их Л-фюрмам протопласт-ного типа позволяет выявить формы гетероморфизма, в различной степени дефектные по клеточной стенке.

СПИСОК РАьОТ, ОПУЫЖОВАНШХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Видолонио £1-форм из организма овец, больных спонтанным лис-тириозом /Г.Л.Котлярова, И.АЛЗакулов, С.В.Прозоровский и др.

// Материалы симпозиума "Профилактика и меры борьбы с лептоспирозом и листериозом сельскохозяйственных животных в крупных .специализированных жинотповодчорких хозяйствах.-М., 1972,- С.65-66.

2. Высоцкий И.В., Котлярова. Г .А,. К вопросу о цитологии и архитектонике ^.-популяций yiMtria monocytogtnes и Извостия АН ОССГ. Сор. биол,- 1981,- ib 4.— С.583-693.

3. Высоцкий В.В., Котлярова Г.А. Некоторые особенности ультраструктуры периферических отделов Ч -колоний У-ii-teria monocytoçtnES Ц Извостия АН СССР. Сор. биол.- 1982,- № 5,- C-70B-7I4.

4. Константинова II.Д., Котлярова Г.А.', Прозоровский C.B. Суб-микроскшшчиокая организация листорий в процоссо Й-Ч'рлю'формации // Ы.Ш.- 1977,- И 4.- С.50-53.

5. Константинова 11.Д., Котлярова Г.А., Прозоровский C.B. Злпкт-рошю-микроскоиичеокио данные о реверсии îi-форм листорий //¿iî.iDIl.-1980.- № 3.- С.35-38.

С. . Константинова II.Д., Котлярова Г.А,, Федотова П.П. Электрошю-микроскглшчискж) изучении нроцнсса ^-трансформации и рпвиршш у

листерий // Тезисы докладов 10-ой Всесоюзной конференции по олок-тронной микроскопии. - M., 1976. - Т.2. - С .94-3 5. 7. ■ Котлярова Г.А., Прозоровский C.B. Индикация £6-форм листерий при листериозной шгфогсции человека // Актуальные вопроси бактериологии и микоплазматолоига: Тезисы докладов пленума проблемной комиссии "Медицинская микробиология". - Кишинев: Тимпул. - 1979. — С.31.

Э. Котлярова Г.А., Снегирева. А.Е., Бирюлина Т.И. Влияние Й~форм листерий на развитие лейкоза Рауиера у мышей ВА1В/с // Вирусы рака и лейкоза: Сб. науч. трудов. - M., 1980. C.II3-II4. 9. Котлярова Г .А., Высоцкий В.В. О классификации форм гетероморфизма бакторлй // Физико-химические исследования патогенных ентвройагстерий в процессе культивирования: Сб. науч. трудов Ивановского мед. ин-та. им.А.С.Бубнова МЗ РСФСР. - Иваново, 1985. -С.39-46.

10.. tL -форш листзри!) и их возможная роль в патогенезе листери-озной инфекции / И.А.Бакулов, C.B.Прозоровский, Г.А.Котлярова и др. //Вопросы ветеринарной вирусологии, .микробиологии и эпизоотологии: Тез. докл. науч. конф. ВНИИВВиМ. - Покров, 1973. — С.59.

11. Макрофаги в системо иммунитета. / б.ФЛевелев, И.А.Бакулов, ■ В.В^акаров и др. // Ветеринария, - 1983. - 6 6, - С.27-30.

12. Макрофаги и их значение в противоинфекционком иммунитете/ С.ЗЛевелев, И.А.Бакулов, В.В.Макаров и др. // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии: Тез. докл. Ьауч. конф. БНИИВВяИ; - Покров, 1983. - С.76-87.

13. Морфологические изменения во внутренних органах ягнят, зараженных бактериальной и ££-формами листерий / С.ФЛевелев, Г.П. Дымина, Г.А.Котлярова и др. // Труды 5-ой Всесоюзной научно-мо-тодачвспой конференции по патологической анатомии сельсяохозя^ст-

вешшх животных. — M.t 1973.. — G.II6-II8.

M. [(oboq в патогенезе листериоза животных / С.Ф.Чевелев, И.А.Гнкулов, Г.А.Котлярова и др. //Актуальные вопросы-патилого-шштомичоскои диагностики болезней животных: Материалы 8-ой Bee-союз. конф. по патологической анатомии животных. — Л., 1982. -G,2 07-2 09.

Г5. О возможной роли З^-форм при листериоза овец . / Г.А.Котлярова, 11 .А.Гакулов, С.Ф.Чевелев и др. // Вестник'сольскохоз. науки.-1976. - № 7. - С.84-08.

16. О патогенеза листериоза животных / С.Ф.Човелев, И.А.Баку— лов, Н.М.Котляров и др. // Вопросы ветеринарной вирусологии, мик- . робиолопш и эпизоотологии: Тез. докл. науч. конф. ВНИИВВиМ. — Покров. - 198Г.- С.79-82.

17. Особенности патоморфологичоских изменений У овец в связи

с Л-трансформавдой листерий / Г.П.Дымина, Г.А.Котляроьа, В.М.Кот-ляров п др. // Пагоморфология, патогенез и диагностика болозней сельскохозяйственных животных.- М., 1980,- С.137-136. IB'. Paihogen'ic'.ty of Xibteriat ¿-forms. SpfieropCastb, PratopCnsts and ii-focmi ßacterip,. SpheropCabtes, Protopeasiea t-L lorrnes L dts. batteries / S. Prosorovs ky, rj.Kotl^arova,^. Sedotova tt ^(.inSfiRm, ai-гб гер-iembtr 197C.).- Paris.-v.65.-P.£CS-a?2

19. Пптогешше потенции tt-форм листерий и первые случаи их шдиления из организма детей, погибших от листериоза / С.В.Нрозо-¿чшский, Г.А.Котлярова, Е.И.Папилова и др. // Вопросы эпидемиологии « гигиены в Литовской ССР. Кишечные-и вирусные^инфекции и инвазии: Материалы роспубл. науч.конф. - Вильнюс., 1379,- С.236-238.

20. Голь системы мононуклеарных фагоцитов в патогенезе листериоза / С.Ф.Чевелев, И.А.Ьакулов, Ü.Г! .Вишнякова и др. // Потери-

пария,- 1982,- ,'i 6„- С.25-29.

21. Смешанное инфицирования мышей линии BAIB/c вирусом лейкоза Раупера и Л-формами листерий /ГД .Котлярова, Т.И.Биршина, А.Е.Сногирева и др. // Экспериментальная онкология,— IS82.-

т .4,li I'.- С.21-25.

22. Ультраструктура Л-форл. Сообщение П. £-форш listeria monocytogenes / Н.Д.Константинова, Л.Н.Кац, Г.А.Котлярова и др. // ИШ.- 1975.— Я 2.- С.58-61.

23. Федотова "i „d Котлярова ГД. Особливост! взаемодСЬ Я--форм л(стер!й- s культуршлп гсл1тин // Микроб) ол.'журнал.-1977^- т.39, в.5»- С.657-658.

24. Экспериментально® инфицирование ягнят S-форма!,® листерий. Сообщ..1: Лабораторно-клшшческоо исследование /Г.А.Котлярова, С.В.Прозоровский, И Д.Баку лов и др. // МЭИ.- 1973,- Л 2.-

С .Г12-1Г6".

25. Экспериментальное инфицирование ягнят ^-формами листерий. Сооб'д. Пг Патоморфологичеокоо исследование! /С.Ф.Чевелев, ГЛ.Ды-¡пша, ГД.Котлярова и др. // ШЭИ.- 1973.- Л 5.-С.62-64.

26. Экспериментальное исследований влияния iL-форл листерий пн иммунологическую реактивность организму / Г.А.Котлярова, С.В. Прозоровский, И.А.Бакулов и др. // Материалы 2-га объединенного съезда гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов Казахстана*- Алма-Ата, 1975»- Т.4г Микробиология и вирусология.— С.163. ' •

27. Явление' Л-трансформации — фактор роализации икмуносупрос- _ оивных свойств листерий /3.В.Прозоровский,' ГД';Кртлярова~, ИД; Бакулов и др. // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологи? и эпизоотологии;- Тез. докл. науч. конф., посвящ. 70-летшэ Великого Октября^-Покров, 1987,-С.87-07.