Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Физиолого-биохимическое значение исследований поверхностного натяжения крови лошадей и модельных систем

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Физиолого-биохимическое значение исследований поверхностного натяжения крови лошадей и модельных систем"



На правах рукописи

Милаёва Ирина Валерьевна

ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ ПОВЕРХНОСТНОГО НАТЯЖЕНИЯ КРОВИ ЛОШАДЕЙ И МОДЕЛЬНЫХ СИСТЕМ

03 00 04 - биохимия 03 00 13 - физиология

Автореферат

на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-2007 год

003175891

Работа выполнена в ФГОУ ВПО "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К И Скрябина"

Научные руководители

доктор химических наук, профессор

доктор биологических наук, профессор

Зайцев Сергей Юрьевич Максимов Владимир Ильич

Официальные оппоненты

доктор биологических наук Букова Наталья Константиновна

доктор биологических наук,

профессор Шайдуллин Ильяс Нургалиевич

Ведущая организация ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская

государственная академия ветеринарной медицины»

Защита диссертации состоится" года

в 'Ч^°часов на заседании диссертационного совета Д 220 042 04 при ФГОУ ВПО "Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им К И Скрябина" (109472, г Москва, ул Академика Скрябина, 23, тел 377-93-83)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии

Автореферат разослан " " ^/рг^,^ 2007 года

Учёный секретарь диссертационного совета

Фомина В Д

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы В настоящее время все более очевидной становится значимость определения физиолого-биохимического статуса животного при определении процессов развития и жизнедеятельности его органов, тканей, систем и организма в целом Физиолого-биохимический статус животного определяется складывающимися на определенный период концентрациями липидов, белков и других биологически активных соединений (БАС) в 1фови, в тканях и органах Эти вещества, обладают поверхностно-активными свойствами, те способны адсорбироваться на жидких границах раздела фаз и изменять динамическое поверхностное натяжение (ДПН) плазмы крови Многие физиолого-биохимические процессы происходят на границе раздела фаз с участием поверхностно-активных соединений (ПАВ) связывание кислорода и выделение диоксида углерода, стадии адсорбции и десорбции липидов и белков на межфазной поверхности, функционирование ферментных систем дыхательной цепи митохондрий и др [Измайлова В Н и др 1988, Казаков В Н, Файнерман В Б, Миллер Р, 1995, Лысов В Ф , 1996, Зайцев С Ю , 2006, Максимов В И, Григорьев В С , 2007]

Вот почему исследование ДПН, то есть поверхностного натяжения при разных временах существования поверхности, биологических жидкостей организма является важным и актуальным

Изучение ДПН биологических жидкостей, в частности плазмы крови, зависимость ДПН от качественного и количественного состава крови осуществляется главным образом у человека [Казаков В Н и др, 1997, 2003] Однако до начала наших работ, не было сведений об особенностях ДПН плазмы крови, зависимости его от количественного и качественного состава крови у животных В области животноводства, практической ветеринарии и зоотехнии изучение изменения ДПН в зависимости от физиологического состояния животного и химического состава биологических жидкостей, может дать ценную уникальную информацию для ранней оценки физиолого-биохимического статуса организма и диагностики его нарушения, те болезней В связи с этим вполне

з

очевидна актуальность и целесообразность исследований ДПН плазмы крови у животных, зависимости его от количественного и качественного состава биологически активных соединений в крови

Цель работы - разработка методологических основ определения динамического поверхностного натяжения крови животных, модельных систем, выявление физиолого-биохимических особенностей динамического поверхностного натяжения крови, зависимости его от биохимических показателей крови у лошадей в разные сроки постнатального онтогенеза

Исходя из этой цели, были поставлены задачи

1 Усовершенствовать методику определения динамического поверхностного натяжения сыворотки крови применительно к животным 2 Изучить становление показателей динамического поверхностного натяжения сыворотки крови у лошадей в разные сроки постнатального онтогенеза 3 Исследовать содержание альбуминов, общего белка, триглицеридов, холестерина, мочевины, глюкозы, кальция, калия, натрия, хлоридов в крови у лошадей в разные сроки постнатального онтогенеза 4 Определить корреляцию динамического поверхностного натяжения с биохимическими показателями в крови у лошадей в разные сроки постнатального онтогенеза 5 Провести сравнительную оценку динамического поверхностного натяжения, зависимости его от количественного и качественного состава крови у лошадей и крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе 6 Определить динамическое поверхностное натяжение систем, моделирующих сыворотку крови животных

Научная новизна работы состоит в том, что впервые разработаны методологические основы определения ДПН сыворотки крови здоровых животных определены средние значения ДПН и углы наклона тензиограмм, показано, что для сыворотки крови лошадей значения ДПН изменяются в зависимости от возраста, а углы наклона тензиограмм в зависимости от пола, что значения ДПН коррелируют с уровнем общего белка, альбуминов, калия, триглицеридов в крови, выявлено, что индивидуальные растворы бычьего сывороточного альбумина (БСА) в концентрациях, близких к сыворотке крови

вызывают значительное понижение ДПН, добавление лецитина усиливает это понижение, а добавление натрия хлорида уменьшает, что в трехкомпонентных смесях БСА, лецитина и натрия хлорида в концентрациях близких к сыворотке крови на ДПН в области коротких времен (0,01-1 с) основное влияние оказывает концентрация соли, а в области больших времен (10-100 с) - концентрация белка илипида

Теоретическая и практическая значимость. Выполненное исследование содержит решение важной теоретической и практической проблемы - оценки физиолого-биохимического статуса животных по параметрам ДПН плазмы крови, зависимости ДПН как от качественного и количественного состава крови животных в разные сроки постнатального онтогенеза, так и от физиологического состояния животного Установленные средние значения ДПН и углы наклона тензиограмм для здоровых животных разного вида, пола и возраста, влияние отдельных компонентов крови и их корреляция со значениями ДПН отражают физиолого-биохимический статус организма Полученные результаты ДПН крови животных перспективны для использования в ранней экспресс-оценке физиолого-биохимического статуса животных и экспресс-диагностике нарушений физиологического состояния (болезней) животных, в том числе в полевых условиях, контроля за лечением Значительные фундаментальные результаты получены для модельных белок-липид-солевых систем

Основные положения диссертации используются в учебном процессе, в преподавании физиологии и биохимии студентам по специальностям "Ветеринария", "Зоотехния" и "Биохимия" в ФГОУ ВПО МГАВМиБ им К И Скрябина, ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская ГАВМ» Получено положительное решение формальной экспертизы по заявке на патент РФ№028499 от 24 08 07 (приоритет от 11 07 07 г ).

Основные положения, выносимые на защиту: 1 Значения динамического поверхностного натяжения сыворотки крови животных коррелируют с количественными и качественными изменениями состава биологически активных соединений в крови 2 Для каждого срока постнатального онтогенеза для

сыворотки крови лошадей свойственны определённые значения ДПН и углы наклона тензиограмм, что перспективно использовать как стандартные показатели физиолого-биохимических норм для кобыл и жеребцов определенных возрастных групп 3 Значения динамического поверхностного натяжения липид-белок-солевых систем являются адекватной моделью ДПН плазмы крови животных

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены на XVffih European Chemistry at Interfaces Conference (Англия, Loughborough University, 2005), конференции молодых учёных и аспирантов ветеринарно-биологического факультета (Москва, МГАВМиБ, 2005), 3-ей конференции по учебно-методической, воспитательной и научно-практической работе академии (Москва, МГАВМиБ, 2006), 7-ой международной конференции «Болезни лошадей диагностика, профилактика и лечение» (Москва, 2006), всероссийской научно-практической конференции по физиологии животных (Казань, КГАВМ, 2006), научной конференции, посвящённой 90-летию со дня рождения проф А Н Голикова (Москва, МГАВМиБ, 2007), XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Москва, Президиум РАН, 2007)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ, из них 11 статей (в том числе 4 в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК РФ) и 2 тезиса докладов

Структура и объём диссертации. Работа включает следующие разделы общая характеристика работы, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований, обсуждение результатов собственных исследований, выводы, практические предложения, список литературы, приложения Диссертация изложена на -/2 ¿страницах компьютерного текста, содержит & рисунков, УУ таблиц, список литературы включает /^источников, в том числе зарубежных и российских

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проведены в 2004 2007 гг на кафедре органической и биологической химии, кафедре физиологии животных в ФГОУ ВПО МГАВМиБ

им К И Скрябина, а также в период краткосрочных стажировок в международном медицинском физико-химическом центре при Донецком государственном медицинском университете (г Донецк, Украина) и Макс-Планк-Институте коллоидов и поверхностей (г Гольм-Потсдам, Германия)

Для решения поставленных задач было проведено определение ДПН и угла наклона тензиограмм, уровня альбуминов, общего белка, триглицеридов, холестерина, мочевины, глюкозы, кальция, калия, натрия, хлоридов в плазме крови у лошадей и крупного рогатого скота в разные сроки постнатального онтогенеза

В работе использовано 68 животных, из них 59 лошадей и жеребят русской рысистой породы, 9 коров и телят чёрно-пёстрой породы, Проанализировано 736 образцов крови и модельных систем

Животные были разделены на группы взрослые лошади - на две группы в зависимости от пола (жеребцы и кобылы) и каждая группа в свою очередь - на 6 подгрупп в зависимости от возраста 2 года, 3 и 4 года, 5, 6 и старше 10 лет, жеребята (кобылки) - одна группа в возрасте 1 месяца, крупный рогатый скот - на три группы по возрасту 6 месяцев, 1 год, 3 года

Материалом для исследований служила кровь, поскольку она является наиболее важной биологической жидкостью организма, объединяющей все органы и ткани, и наиболее полно отражает протекающие в них процессы Кровь у животных брали в утренние часы, натощак, в состоянии покоя Сыворотку крови лошадей получали методом отстаивания цельной крови, крупного рогатого скота - отстаиванием цельной крови, ретракцией кровяного сгустка и последующим центрифугированием, при скорости 2000 об/мин в течение 10-15 минут

В качестве модельных систем были использованы одно-, двух-, трех компонентные смеси, состоящие из бычьего сывороточного альбумина (БСА), лецитина и хлорида натрия, липидные везикулы из дипальмитоилфосфатидилхолин (ДПФХ), из ДПФХ и трилаурина в воде, водном и солевом растворе БСА

Для определения ДПН использовали методы максимального давления в пузырьке (А) и висящей капли (Б) [Русанов А.И., Прохоров В.А., 1994]. Метод А позволяет получать кривую ДПН в диапазоне времени от 0,01 до 100 секунд с воспроизводимостью не менее 0,2%. Преимуществом метода Б является малый объём анализируемой жидкости (менее 0,5 мл) и широкий диапазон измерений времени существования капли (от 10 до 10000 с и более), что дополняет возможности метода А. Сочетание двух методов (А и Б) позволяет получить временной интервал от 10"3 до 104 секунд.

Результаты исследований представляются в виде тензиограмм (кривых зависимости поверхностного натяжения (а) от времени (1)), на которых определяются: точки, соответствующие 1=0,01 с (а0), 1=1 с (стО, 1=10 с (а2), 1=100 с (аз), а также равновесному ДПН (а4); подсчитываются углы наклона начального

Рис. 1, Тензиограммы водных Рис. 2. Тензиограммы сыворотки

растворов БСА крови кобыл

Определение уровня общего белка - осуществляли методом биуретовой реакции, уровень альбуминов - колориметрическим методом с бромокрезолом (Ashwood E.R., 1965), уровень триглицеридов, холестерина, мочевины -ферментативно-колориметрическим методом (Stein Т.А., Myers G.L., 1974), уровень глюкозы - глюкозооксидазным методом (Ashwood E.R., 1965), содержание общего кальция - колориметрическим методом с о-крезолфталеином (H. Gitelman, 1976), натрия - колориметрическим методом (Henri R.J., 1974),

калия - нефелометрическим методом (Henri RJ, 1974), хлоридов -колориметрическим методом с цианатом ртуга (Burtis С А, 1980)

В опытах использовали реактивы фирмы «Sigma-Aldrich» (Германия) БСА (чистота 97%, ММ 661935), ДПФХ (чистота 99%, ММ 734,04), Glyceryl tndodecanoate (трилаурин) (чистота 98%, ММ 639), лецитин (чистота 99%, из мозга крупного рогатого скота, ММ 676), хлорид натрия (NaCl) (чистота 99%) Для проведения биохимического анализа использовались реактивы фирмы "Диаком" Статистическую обработку проводили с помощью программ "Статистика" для Windows Определены критические значения критерия достоверности на основе распределения Стыодента с учетом принятой для научных экспериментов величины уровня значимости * 0,05, **0,01, ***0,001

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Показатели динамического поверхностного натяжения крови у

лошадей

Одним из показателей функционального становления системы крови в процессе постнатального развития животных является характер и степень изменения ДПН сыворотки крови Исследованиям выявили закономерные возрастные и половые изменения ДПН сыворотки крови животных

3.1.1. Становление показателей динамического поверхностного натяжения

крови у лошадей в разные сроки постнатального онтогенеза У месячных жеребят (кобылок) данные ДПН отличаются от взрослых животных Так, у кобылок в возрасте 1 месяц значения oi с3 значительно (на 215%) ниже, а значение Хо (на 70-103%) - выше по сравнению с взрослыми кобылами (табл 1)

После периода интенсивного роста и адаптации к новым условиям в течение 2-х лет, значения ДПН крови у кобыл отличаются от кобылок следующими показателями ai о3 и h значительно (на 6-13%) выше, а значение 1о ниже на 103%, при этом значения <т0 не изменяются Дальнейший рост и совершенствование организма кобыл сопровождается снижением значений ®о (на

2-4%) в возрасте 3-4 лет и повышением, начиная с 5-летнего возраста Значения 01 более высокие для взрослых животных на 5-10% по сравнению с кобылками в возрасте 2-10 лет, причем максимальное значение О] (77,9±1,1мН/м) получено для 5-летних животных

Таблица 1. Средние значения ДПН крови кобылок и кобыл

Возраст 1 месяц 2 года Згода 4 года 5 лет 6 лет >10 лет

п 3 3 3 3 3 3 7

во, мН/м 77,5+ 77,4± 76,3± 74,6± 79,5+ 78,8+ 78,0±

0,9* 0,9* 1,5* 0,2** 1,1*** 0,7** 0,8*

в1, мН/м 71,1+ 75,5± 74,5± 73,5± 77,9± 76,5± 75,5±

0,6" 1,2* 1,6* 0,5** 1,1* 1,1** 0,5*

вг> мН/м 68,7+ 72,5+ 72,3± 73,3± 73,9+ 73,8+ 73,0±

0,3* 1,3** 1,5* 1,1** 0,9** 1,2* 1,0*

сз, мН/м 61,1+ 62,8+ 65,6± 61,8± 62,7+ 63,2± 62,5±

0,7* 0,9* 1,3" 0,7* 1,3** 0,7* 1,2"

мН-м V" 9,52± 4,7± 3,б± 1>9± 5,4± 4,7± 4,9±

0,12** 0,2** 0,6** 0,4* 0,7" 0,3* 1,1*

Хи мН-м У2 7,83+ 9,0± 7,4± 11,9± 12,9+ 12,2± 11,7±

0,15*** 0,4*** 0,3** 0,8* 0,4** 0,5*** 1,6*

Значения 02 увеличиваются с возрастом от 68,7±0,3 мН/м для кобылок до

72,3 73,9 мНУм для взрослых животных Значения 03 для большинства исследованных групп взрослых животных незначительно (на 0,5-1,5%) выше, чем значения, полученные для кобылок, только в возрасте трех лет о3 выше всех других значений на 7% Значения Ао для кобылок значительно выше, чем у взрослых животных, с возрастом оно изменяется незначительно, ниже на 60-80% только значения для кобыл 3 и 4 лет Значения Х{ для кобылок и животных в возрасте 2-3 лет существенно (на 50-70%) ниже, чем для более взрослых кобыл, у которых они отличаются незначительно

Следовательно, рост и развитие, адаптация организма у лошадей в постнатальный период сопровождается закономерными изменениями в системе крови, что отражают параметры ДПН - как интегральные показатели плазмы крови, связанные со степенью функциональной активности системы

3.1.2. Становление показателей динамического поверхностного натяжения

у лошадей в зависимости от пола Известно, что самки по особенностям физиологических отправлений организма отличаются от самцов, что проявляется в их организме с возрастом

Сравнительный анализ результатов определений ДПН крови кобыл и жеребцов позволил выявить ряд существенных особенностей в его становлении (табл 1,2)

Так, при коротких временах (оо) значения ДПН снижаются для кобыл на 3,5% в возрасте от 2 до 4 лет, а от 5 лет и выше на 2,3% Для жеребцов 2 и 3 лет о0 отличается незначительно, а для 4 и 5 лет - существенно, на 3,3%, ниже остальных Для жеребцов от 6 лет и старше значения а0 повышаются на 1,5% до 78,4-79,4 мН/м Таким образом, по значениям а0 кобыл условно можно разделить на две группы с близкими значениями - это 2-4 года и 5 лет и старше, а жеребцов на три группы — 2-3 года, 4-5 лет и 6 лет и старше

Таблица 2. Средние значения ДПН крови жеребцов

Возраст, лет 2 3 4 5 6 >10

11 8 7 3 5 8 3

«о, мН/м 77,8± 77,9± 75,4± 75,1± 78,4± 79,4±

IX 1,9* 0,5* 1,8" 1,5* 0,9**

О], мН/м 74,1± 76,0± 73,9± 73,7± 76,3± 76,1±

1,2" 1,3" 0,9* 0,7" 1,9* 1,1***

«2, МН/М 71,8± 73,5± 70,5± 72,1± 72,9± 74,5±

1,6* 0,8 2,1" 1,2* 1,3* 1,1**

«»з, мН/м 63,1± 66,7± 62,85± 62,2± 62,3± 63,3+

1,0" 1,5* 2,06" 1,4" 1,5* 1,1*

Хо, мНм'с1* 5,9± 5,б± 5,3± 4,7± 5,3± 4,5+

ОД 0,3" 0,8 0,5" 0,2* 0,3*

Хи мН'м V2 9,6± 7,б± 8,1± 10,3± 12,3± 12,5±

1,0* 0,5* 0,7*** 0,3*** 0,6** 0,1*

Для кобыл значения О] снижаются на 3% к 4 годам, затем увеличиваются на 6%

(5 лет), а потом снижаются на 3% с увеличение возраста животных Для жеребцов отмечаются близкие значения <*1 в возрасте 2, 4 и 5 лет (74,1-73,7 мНУм) и выше на 3% значения в возрасте 3, 6 лет и старше (76,0-76,3 мН/м) Значения с2 для кобьш повышаются на 2% с возрастом от 2 до 8 лет и снижаются до 73,0 мН/м только для животных старше 10 лет Значения Ог У жеребцов мало изменяются с возрастом и незначительно ниже, чем у кобыл, кроме 3 лет и старше 10 лет, когда значения аг у жеребцов на 3% увеличиваются Значения о3 для кобыл и для жеребцов близки (от 62,2 до 63,3 мН/м у жеребцов и от 61,8 до 62,8 мН/м у кобыл) для всех возрастных групп, более высокие значения получены только для 3-летних животных Значения Ао для кобьш с возрастом снижаются на 60% от 4,7 мН м-У* (2 лег) до 1,9 мН-м"1с,/2 (4), потом повышаются до 5,4 мН м"'с!/2 (5 лет) и

дальше изменяются незначительно Значения Яо для жеребцов мало изменяются от 4,5 мН м"1с"ш (> 10 лет) до 5,9 мН м 1с"ш (2 лет) Значения 9ц для кобьш более низкие в 2 и 3 года (9,0 и 7,4 мН-м'1сш), для других групп практически одинаковы от 11,9 мН м-1 с1/2 до 12,9 мНм"'си Значения м для жеребцов снижаются до 4 лет от 9,6 до 8,1 мН м"1с|/2, а с 5 лет повышаются на 54% до 10,3 мН м_1с~1й и продолжают увеличиваться до 12,5 мН м_1с1/2 в группе старше 10 лет Таким образом, ДПН крови имеет особенности, зависящие от пола животного Различия в значениях ДПН с возрастом у кобыл и жеребцов связаны с отличием во времени физиологического созревания и начала интенсивного тренинга, величины угла наклона ко являются специфическим показателем, который изменяется в зависимости от пола животного (например, может достоверно отличаться даже при отсутствии отличий в значениях а0 оз)

3.2. Становление биохимических показателей крови у лошадей в разные сроки постнатального онтогенеза Исследованы основные биохимические показатели, которые оказывают наибольшее влияние на ДПН крови и выявлены их определенные особенности с возрастом у лошадей (табл 3 и 4)

Таблица 3. Биохимические показатели" крови кобылок и кобыл

Возраст 1 мес. 2 года 3 года 4 года 5 лет 6 лет >10 лет

п 3 3 3 3 3 3 7

Общий белок, г/л 90±2 85±5 76±2 76±4 55+3 61,9±1,3 74±3

Альбумины, г/л 30±1 34+5 21±2 38±2 21,8+1,3 22+3 24±4

Триглицериды, 0,8± 0,7+ 0,23+ 0,37± 0,39+ 0,57+ 0,4±

мМ 0,2 0,4 0,05 0,12 0,02 0,23 0,2

Холестерин, мМ 2,9+ 3,58+ 1,43± 1,8+ 1,93± 1,58± 1,98±

0,6 0,09 0,11 0,6 0,12 0,12 0,19

Глюкоза, мМ 0,92± 1,31± 1,35+ 4,3+ 4,49± 4,5± 4,3±

0,11 0,16 0,12 0,2 0,15 0,6 0,8

Мочевина, мМ 0,43± 4,0± 4,б± 6,8+ 5,1± 7,53+ 4,70±

0,05 0,5 0,9 1,2 1,2 1,12 0,18

Са, мМ 3,2±0,2 3,1±0,9 3,0±0,1 2,8±0,3 2,1+0,2 2,0±0,1 3,0±0,6

К, мМ 5,б±0,6 6,1±0,6 6,3±0,2 7,0±0,2 5,7±0,1 4,8±1,1 7,2±0,7

N3, мМ 134±4 178+2 100±5 168±3 124±2 101±3 121±2

Хлориды, мМ 48±2 84+3 71+4 91+3 97±3 99+2 94±4

"Для всех значений, представленных в таблице Р<0,05

Для кобыл 2-4 лет и старше 10 лет уровень общего белка на 30% выше, чем в возрасте 5-6 лет, уровень альбуминов у 2 и 4 летних - выше на 50%, уровень триглицеридов у 2 и 6 летних - выше на 75 и 42%, уровень холестерина у 2 летних - на 80%, уровень глюкозы у кобыл старше 3 лет выше в 2,5 раза, уровень мочевины у 4 и 6 летних - выше на 44%, уровень кальция у 5 и 6 летних кобыл -ниже на 30%, а уровень калия - ниже на 22%, уровень натрия у 2 и 4 летних кобыл - выше на 42%, уровень хлоридов у 2, 3 летних кобыл - ниже на 13%

Таким образом, у молодых кобыл в крови выше уровень белков (общий белок, альбумины), липидов (триглицериды, холестерин) и катионов (кальция, калия, натрия), но ниже уровень углеводов (глюкозы), мочевины и хлоридов Это, по-видимому, связано с процессами интенсивного роста и ускоренными обменными процессами в молодом организме

Для жеребцов уровень общего белка выше на 6 и 24%, уровень альбуминов на 30 и 43% в возрасте 5 и 6 лет (самые низкие значения получены для 2 летних животных), уровень триглицеридов выше на 25% у жеребцов 2 лет и старше 10 лет, уровень глюкозы выше на 56%, а уровень мочевины на 20-50% у жеребцов старше 3 лет, уровень кальция выше на 40-50% у 2, 5 и 6 летних животных, уровень калия ниже на 30% (в 6 лет) и выше на 40% (> 10), уровень натрия на 30% выше (в 3), уровень хлоридов ниже на 30% (в 3 лет)

Таблица 4. Биохимические показатели* крови жеребцов

Возраст, лет 2 3 4 5 6 >10

о 8 7 3 5 8 3

Общий белок, г/л 54±7 68,4±1,9 68±5 72+4 84±2 69+2

Альбумины, г/л 19+4 21±3 23+6 30±2 33±8 22±3

Триглиц., мМ 0,5+0,4 0,23±0,05 0,4±0,3 0,39±0,03 0,37±0,03 0,57±0,02

Холестерин, мМ 1,58±0,0б 1,65±0,11 1,8±0,2 1,57±0,07 2,1+0,5 1,6±0,2

Глюкоза, мМ 2,52±0,12 2,09±0,09 4,7±0,7 4,б±0,9 4,67±1,08 4,66±0,12

Мочевина, мМ 5,9±0,6 3,0±0,9 7,1±0,8 7,1±0,6 6,6+0,6 6,4±0,6

Са, мМ 2,4+1,5 1,74±0,09 1,8+0,2 2,5+0,3 3,3+0,6 1,85+0,04

К,мМ 6,9+0,5 6,04±0,17 5,6+0,2 5,98+0,07 3,9+0,5 8,52±1,14

N8, мМ 135,6±1,3 184±5 121±4 148±3 105±5 132±2

Хлориды, мМ 94+4 74±6 101±3 87±5 112+2 102+2

"Для всех значений, представленных в таблице Р<0,05

Таким образом, общим у жеребцов и кобыл является повышение уровня глюкозы, мочевины и хлоридов в возрасте старше 3 лет и уровня триглицеридов у

молодых животных и старше 10 лет Только у жеребцов максимальный уровень белка в крови отмечается в возрасте 5-6 лет, а не у самых молодых из исследованных животных Также можно отметить повышение уровня кальция, снижение уровня калия и натрия в этом возрасте Указанные отличия, по-видимому, связаны с максимальной интенсивностью тренинга жеребцов в этом возрасте

3.3. Корреляционный анализ между отдельными биохимическими показателями и данными межфазной тензиометрии у кобыл и жеребцов в разные сроки иостнатального онтогенеза

Для выяснения зависимости ДПН крови от количественного и качественного состава ее у лошадей в разные сроки постнатального онтогенеза и пола животных был проведен корреляционный анализ между показателями межфазной тензиометрии и данными биохимического анализа Результаты анализа представлены в таблицах (табл 5 и 6), где отмечены только сильные и средние корреляционные связи, которые являются достоверными

Таблица 5. Результаты корреляционного анализа между данными межфазной _тензиометрии и биохимическими показателями для жеребцов_

Показатели во,мН/м «j,mH/m «2,мН/м сз,мН/м ^.mHm-V2 Xi,m№mj с1й

Общий белок, г/л 11 11 ÎÎ

Альбумины, г/л 11 11 11 ÎÎ

Триглицериды, мМ 11 ÎÎ

Холестерин, мМ TÎ 11 ÎÎ

Мочевина, мМ ÎÎ ÎÎ ÎÎ

Глюкоза, мМ ÎÎ

Са, мМ тт ÎÎ ÎÎ

К, мМ TÎ ÎÎ ÎÎ ÎÎ ÎÎ

N8, мМ 11 ÎÎ ÎÎ

Хлориды, мМ 11 ÎÎ

îî(il) - средняя положительная (отрицательная) корреляционная связь, коэффициент корреляции 0,3-0,69, îîî(lil) - сильная положительная (отрицательная) корреляционная связь, коэффициент корреляции больше 0,69 Для средней (Р=0,05) и сильной (Р=0,01) корреляционной связи значения корреляционного коэффициента достоверны

Для жеребцов отмечаются связи только средней силы Общий белок и альбумины обратно связаны с 0о и о3 и прямо с %и альбумины кроме того обратно связаны с cri Кальций, мочевина прямо связаны с ©о, oi и Ао Триглицериды, холестерин и хлориды обратно - с 02 и прямо с Яо Калий прямо связан со всеми

показателями кроме ?ч Глюкоза связана только прямо с Хо Натрий прямо с о?, и А.] и обратно с а0 Таким образом, на значения ДПН при коротких временах (о0> 01) наибольшее влияние оказывают мочевина, катиона (кальций, калий) и холестерин, при повышении концентрации которых ДПН повышается, а также белки (альбумины, общий белок) и натрий при увеличении концентрации которых ДПН понижается

ДПН при средних временах (а2) повышается при увеличении концентрации катионов (калия и натрия), а понижается - при увеличении концентрации липидов (триглицеридов, холестерина) и хлоридов При больших временах (аз) основное влияние на ДПН оказывают белки (общий белок и альбумины), увеличение концентрации которых вызывает понижение ДПН, а повышается ДПН при увеличении концентрации калия Значение 1о увеличивается при повышении концентрации большинства исследованных компонентов сыворотки крови, кроме белков и натрия, повышение концентрации которых приводит к увеличению значения А* (табл 5)

Таблица 6. Результаты корреляционного анализа меяеду данными межфазной

тензиометрии и биохимическими показателями для кобыл

Показатели Оо,мН/м «1,мН/м «2>мН/м вз,мН/м Хо,мН м-'с"2 ХьмНмУ"

Общий белок, г/л и ш 11 11

Альбумины, г/л ш ш Ш 111

Триглицериды, мМ ш Ш 414

Холестерин, мМ И ТТ 111

Мочевина, мМ ттт ТТТ ТТТ ТТТ

Глюкоза, мМ ш 111 Ш 111 ТТТ

Са, мМ ТТ ТТТ 111

К, мМ и 444. и Ш 11 ТТТ

Ка, мМ ттт ТТТ ТТТ ТТ ТТТ 11

Хлориды, мМ тт ТТ ТТТ ТТ 111

Обозначения см как в табл 5

Для кобыл наблюдается наличие большого количества сильных и средних корреляционных связей Белки (общий белок, альбумины) и липиды (триглицериды) обратно связаны с ао с2, \>, общий белок также связан с а триглицериды с а2 Калий и глюкоза обратно связаны со всеми показателями, а прямо - с Х.1 Натрий, мочевина и хлориды прямо связаны почти со всеми показателями (хлориды не влияют на о2, а мочевина на а3) и обратно с (только

хлориды и натрий) Холестерин и кальций прямо связаны с аз и обратно с Аь холестерин обратно связан также с ог, а кальций прямо с Ст]

На ДПН при коротких временах у кобыл наибольшее влияние оказывают натрий, мочевина и хлориды, которые повышают ДПН, а также липиды (триглицериды), глюкоза, белки (альбумины, общий белок) и катионы (калий), которые его понижают При средних временах - повышают ДПН натрий и мочевина, а триглицериды, глюкоза, белки и калий снижают При больших временах глюкоза, калий, триглицериды снижают ДПН, а катионы, хлориды, холестерин повышают Значения Ао повышаются при повышении уровня мочевины, натрия и хлоридов, а понижаются - триглицеридов, глюкозы, белков, калия Значения А] повышаются при увеличении в крови глюкозы и калия, а понижаются при увеличении содержания кальция, хлоридов, общего белка, холестерина, натрия

Таким образом, для жеребцов и кобыл корреляционные связи между ДПН и биохимическим составом крови отличаются по силе и типу Но есть общие закономерности для жеребцов и кобыл содержание белков обратно связаны с сто и О], мочевины - прямо с Со, Ао, липидов - обратно с сг

3.4. Особенности становления показателей динамического поверхностного

натяжения крови у крупного рогатого скота с возрастом Сравнительные анализ показателей ДПН и биохимического состава крови у лошадей и крупного рогатого скота с возрастом позволил выявить особенности в их становлении

Для крупного рогатого скота значения углов наклона и ДПН с возрастом повышаются (сто и Ст1 на 5 %, а2 на 2%, Ао на 16%, А,] на 21%), только значение стз уменьшается на 2% Значения Ао колеблются в пределах 4,4-6,2 мН м"'сш, тогда как значения А1 постоянно увеличиваются с возрастом от 7,7 до 9,3 мН'м_1с1/2 (табл 7)

По сравнению с кобылами у крупного рогатого крота более выражена четкая зависимость показателей ДПН от возраста, что связано как с особенностями

полового и физиологического созревания, так и типом питания разных видов животных в разном возрасте

Таблица 7. Данные межфазной тензиометрии и биохимического анализа крови __крупного рогатого скота __________

Вид, пол, возраст Телочки, 6 месяцев Тёлки, 12 месяцев Коровы, 3 года

во, мН/м 74,7±1,4 77,5±1,9 78,3±0,9

в1, мН/м 73,4±0,9 76,3±1,3 77,1±0,8

02, мН/м 70,4±0,3 70,8±0,4 71,7±1,5

аз, мН/м 63,1±0,4 62,1±0,8 61,9+0,4

Хо, мНмУ2 4,4±0,6 6,2+0,3 5,1±0,7

Зч, мН-м'У2 7,7±0,4 8,б±0ДЗ 9,3±0,2

Общий белок, г/л 7б±3 73±3 83+2

Альбумины, г/л 13,16±1,09 6,9±0,3 8,17±1,16

Триглицериды, мМ 0Д8±0,06 0,17+0,02 0,16±0,05

Холестерин, мМ 1,6±0,2 2,26+0,09 4,4±1,5

Глюкоза, мМ 2,7±0,9 2,5±0,2 1,92±0,17

Мочевина, мМ 4,7±0,3 4,9±0,7 6,7±0,4

Са, мМ 1,73±0,17 2,04+0,07 1,76±0,08

К, мМ 9,7±0,3 11,6±0,6 9,9±0,2

N8,, мМ 143,3±1,8 152+4 127+2

Хлориды, мМ 86±6 85±4 78,3±0,9

Для всех значений, представленных в таблице Р<0,05 Для крупного рогатого скота отмечается прямая корреляционная связь а», 01 с уровнем мочевины, хлоридов, альбуминов, обратная с уровнем глюкозы (только с оо), кальция, холестерина, общего белка (только с 01), 03 с уровнем глюкозы, кальция, холестеринов и обратная с уровнем мочевины, хлоридов, альбуминов (табл 8)

Таблица 8. Результаты корреляционного анализа между данными межфазной

Показатели бо,мН/м в1,мН/м С2,мН/м вз,мН/м 5ц>, мН-мУ2 мН-м'с"2

Общий белок,г/л 44 444 ТТТ 444

Альбумины, г/л ТТТ ТТТ 44 444 ТТТ

Триглицериды, мМ ТТ ТТТ 444 ТТТ

Холестерин, мМ 14 444 444 ТТ ТТ 444

Мочевина, мМ ТТТ ТТ 44 444 ТТТ 44

Глюкоза, мМ 44 ТТТ ТТ 444 ТТТ

Са, мМ 444 444 44 ТТТ 44

К, мМ ТТ ТТТ 444 ТТТ

N8, мМ ТТ ТТТ 444 ТТТ

Хлориды, мМ ТТТ ТТ 44 444 ТТТ 44

Обозначения см как в табл 5

Значения Хо прямо связаны с уровнем белков, мочевины, хлоридов, холестерина и обратно с уровнем триглицеридов, глюкозы и катионов (калия, натрия) Для

значений ?ч отмечается такая же корреляция, но с обратным знаком по каждому биохимическому показателю

Таким образом, ДПН, количественный и качественный состав крови имеет видовые особенности Как для коров, так и для кобыл наблюдается большое количество сильных связей У коров и у кобыл выражено влияние белков на ДПН в области коротких времён и на значения углов наклона, но в отличие от кобыл у коров отмечается также прямая корреляция уровня альбуминов со значениями Ао; Со, С1

3.5. Показатели динамической тензиометрии для систем, моделирующих

сыворотку крови

В процессе данного исследования разработаны методологические основы определения ДПН крови животных, для чего выяснены проявления ДПН у искусственно созданных систем, моделирующих сыворотку крови животных

При исследовании систем, моделирующие сыворотку крови, на основе дипидных везикул были получены два типа везикул из ДПФХ (I типа) и ДПФХ и трилаурина (II типа) При концентрациях везикул I от 5><10"9 до 5x10"5 М получены значения 71-71,3 мН/м близкие к ДПН воды Существенные снижения ДПН обнаружены при концентрациях везикул I от 7Х10"4 до 1,4x10"3 М длинных временах ДПН (47,7 и 48,8 мН/м) Для везикул П в концентрациях от 5x10"10 до 5хЮ"5 М ДПН растворов при всех временах близко к ДПН воды При концентрации везикул П 5*10^ М наблюдается снижение ДПН до 49,4 мН/м (Х,2=319,ЗмН/м_1с1/2)

Для двухкомпонентных систем, состоящих из везикул I и БСА значения о0 -близки к ДПН воды, только при концентрациях везикул 5хЮ"7 и 5x10"6 М наблюдается уменьшение значений о3 до 65,9и 64,1 мН/м Для 04 наблюдается снижение на 2% ДПН смесей до 68,9 мН/м (при 2 х 10"8 М), а при 5 х 10"5 7х 10"4 М ДПН смеси снижается на 22% (54,2 52,7 мН/м) У смеси везикул П с БСА ДПН снижается только для концентрации 5ХЮ"4 М а\ до 62,0 мН/м и о4 до 53,2 мН/м В трехкомпонентных системах (состоящих из везикул П с БСА и солью) при концентрациях от 5хЮ"10- 5х10"5 М значения ДПН соответствуют ДПН солевого

раствора белка Для концентрации 5x10"4 М при длинных временах ДПН снижается до минимального значения 52,6 мН/м Таким образом, концентрация везикул 5Х10"4 М является критической во всех случаях, что связано, по-видимому, с насыщением межфазного слоя при этой концентрации за счет диффузии их к поверхности раздела фаз

Исследование модельных систем на основе липид-белок-солевых смесей, которые моделируют сыворотку крови лучше одно- и двухкомпонентных смесей, выявили характерные закономерности ДПН для концентраций растворов БСА -30-80 г/л, лецитина - 1-4 мМ, хлорида натрия - 120-160 мМ Так, тензиограммы водных растворов БСА (рис 1) имеют максимум ДПН в области времен около 0,1 мс Значения с>1 для всех исследованных концентраций БСА ниже ДПН воды, и только для раствора с концентрацией 80 г/л <л увеличивается до 73,9 мН/м Значения оз для всех концентрации составляют 56-57 мН/м Значения углов наклона тензиограмм для всех случаев также отличаются незначительно

Добавление соли к раствору БСА ведет к ассоциации бежа в растворе, результатом чего и является повышении а 04 смеси белка с электролитом и понижению значений и Хо При добавлении к БСА лецитина наблюдается повышение 01 (до 73,9 мН/м) при снижении 03 до 51,9 мН/м и увеличение угла X) до 19,7±0,1 мН/м"1 с1/2

В трёхкомпонентных смесях при варьировании концентрации белка происходит изменение значений ДПН при малых и больших временах, что, связано с взаимным влиянием компонентов смеси друг на друга Для большинства смесей наблюдается снижение значений ДПН при увеличении концентрации белка Наиболее сильное снижение ДПН отмечается при коротких временах При увеличении концентрации соли в смесях происходит повышение ДПН при малых и средних временах, а снижение - при больших временах Наибольшие различия в значениях ДПН при разных концентрациях соли отмечаются при коротких временах, равновесные значения изменяются незначительно Изменение концентрации лецитина в смесях приводит к

снижению ДПН в области средних времен (от 70-75 до 60-54 мН/м) и в области больших времен (от 54 до 50 мН/м)

Таким образом, ДПН при коротких временах определяется преимущественно солевым составом смеси, а при больших - постепенной адсорбцией липидов и белков на поверхности раздела фаз

ВЫВОДЫ

1 Рост и развитие, адаптация организма лошадей в разные сроки постнатального периода сопровождаются закономерными изменениями в системе крови, физиолого-биохимическими особенностями динамического поверхностного натяжения крови, зависимости его от количественного и качественного состава плазмы крови

1 1 Динамическое поверхностное натяжение крови у кобылок специфично в возрасте 1 месяца значения а оз значительно (на 2 15%) ниже, а значение %о (на 70 103%) выше по сравнению с таковыми для взрослых кобыл Многочисленные изменения в значениях поверхностного натяжения крови у кобыл с возрастом закономерно отражают рост и развитие всего организма и являются интегральными показателями физиолого-биохимического статуса животного

12 Динамическое поверхностное натяжение крови у лошадей имеет особенности, зависящие от пола животного Различия в значениях динамического поверхностного натяжения с возрастом у кобыл и жеребцов связаны с отличием во времени физиологического созревания и начала интенсивного тренинга, значение Ао может служить специфическим показателем, который изменяется в зависимости от пола животного (от 7,4 до 12,9 мН/м"1 сш)

13 Структурно-функциональное развитие лошадей в постнатальном онтогенезе сопровождается изменениями в биохимическом статусе крови, у более молодых кобыл в крови выше уровень белков (общего белка на 30%, альбуминов на 50%), липидов (триглицеридов на 42-75%, холестерина на 80%) и минеральных

веществ (кальция на 30%, калия на 22%, натрия на 42%), но ниже уровень глюкозы в 2,5 раза, мочевины на 44% и хлоридов на 13%

14 Согласующийся характер изменений величин динамического поверхностного натяжения и биохимических показателей в крови жеребцов и кобыл подтверждается корреляционными связями между ними Динамическое поверхностное натяжение и биохимический состав щюви отличаются по силе и типу, белки имеют обратные корреляционные связи с оо и О], мочевина прямые корреляционные связи с о0, оь ^о, липиды - с а2

2 Динамическое поверхностное натяжение, количественный и качественный состав крови имеют видовые особенности У коров и у кобыл сильно выражена корреляция белков с сто, сп и Ао, дополнительно у коров отмечается прямая корреляция уровня альбуминов со значениями о0> ai

3 Детальное изучение модельных систем показало, что максимальные значения поверхностного натяжения определяются солевым (кальций, калий, натрий) и липидным (триглицериды, холестерин) составом сыворотки крови, а минимальные значения - постепенной адсорбцией липидов и белков (общий белок, альбумины) из объёма на границу раздела фаз

3 1 Тензиометрия модельных систем на основе липидных везикул зависит от природы, содержания данного компонента в системе, их количества и соотношения Во всех случаях концентрация везикул 5x104 моль/л является критической, что связано с насыщением межфазного слоя за счет диффузии их к поверхности раздела фаз

3 2 Исследование модельных систем на основе липид-белок-солевых смесей, в концентрациях наиболее приближенных к сыворотке крови БСА - 30 80 г/л, лецитина - 1 4 моль/л, хлорида натрия - 120 160 моль/л показало характерные закономерности динамического поверхностного натяжения исследованных растворов, значения со, ai, Ао - определяются солевым и липидным составом смеси, а значения 02, 03 , Xj - постепенной адсорбцией липидов и белков на поверхность раздела фаз

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Установленные показатели ДПН, биохимического состава крови и их корреляционной зависимости у лошадей и крупного рогатого скота в разные возрастные сроки постнатального онтогенеза рекомендуется использовать 1) в качестве нормативных при изучении возрастных, половых и видовых особенностей лошадей и крупного рогатого скота, 2) как критерий нормы в клинической биохимии и физиологии, в научно-исследовательской работе при изучении физиолого-биохимического статуса организма, 3) в комплексе с обычными клиническими исследованиями для экспресс-оценки физиолого-биохимического состояния организма при тренинге лошадей и перед соревнованиями Основные положения диссертации использованы в учебном процессе по физиологии и биохимии по овладении специальностями -ветеринария, ветеринарная биохимия и зоотехния Получено положительное решение формальной экспертизы по заявки на патент РФ№028499 от 24 08 07 (приоритет от 11 07 07 г )

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

1 Гуревич И В Метод межфазной тензиометрии и его применение в терапии / Гуревич И.В., Зайцев С Ю, Фролова Л А, Миллер Р // Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии Сб науч Тр / ФГОУ ВПО МГАВМиБ им К И Скрябина - M, 2005 -С 20-24

2 Advantages of interfacial tensiometry for studmg the interactions of biologically active compounds / Generalova Alla N, Marchenko Svetlana В, Miller Reinhard, Gurevich Irina V., Tsarkova Manna S, Maksimov Vladimir I, Zaitsev Sergei Yu // XVIIth European Chemistry at Interfaces Conference Loughborough University UK 27 June - 1 July - UK, 2005 -P 106

3 Полимер-ферментные комплексы как функциональные нанобиоматериалы / Тульская Е В, Шароменко О В, Гуревич И.В., Каштиго Т В, Зайцев СЮ // Сборник материалов к Всероссийской выставке научно-технического творчества молодежи M, ВВЦ, 29 июня - 3 июля -М, 2005 - С 107-108

4 Милаева (Гуревич) ИВ Исследование поверхностного натяжения сыворотки крови лошадей методом межфазной тензиометрии / Милаёва (Гуревич) И.В , Тульская Е В , Зайцев С Ю, Максимов В И // Сборник молодых ученых ФГОУ ВПО МГАВМиБ - M, 2006 - Вып 3 -С 7-10

5 Зайцев С Ю Возможности метода межфазной тензиометрии для исследования поверхностного натяжения растворов липазы в комплексах с полидиаллилдиметиламмоний хлоридом / Зайцев СЮ, Максимов В И, Милаёва И.В., Генералова АН, Фролова Л А, Царькова M С //Сборник ВБФ ФГОУ ВПО МГАВМиБ - M, 2006 - С 4-10

6 Зайцев СЮ Влияние триацетата глицерина на поверхностное натяжение комплексов полиэлектролитов с липазой из поджелудочной железы свиньи / Зайцев С Ю, Максимов В И, Милаёва И.В., Генералова АН, Фролова Л А, Царькова MC // Сборник ВБФ ФГОУ ВПО МГАВМиБ - M, 2006 - С 10-16

*7. Милаева ИВ. Исследование поверхностного натяжения сыворотки крови лошадей / Милаёва И.В., Зайцев С Ю, Максимов В И, Козлов С А, Миллер Р // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные - 2006. - № 3- С.26-27.

8 Милаева И В Возможности метода межфазной тензиометрии для исследования поверхностного натяжения сыворотки крови животных различного возраста и пола / Милаёва И.В., Зайцев С Ю , Максимов В И // Материалы 3-ей конференции по учебно-методической, воспитательной и научно-практической работе академии В 3-х частях Ч 1 -М ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2006 -С 26-28

*9. Милаёва И В Исследование поверхностного натяжения сыворотки крови животных / Милаёва И.В, Максимов В И, Зайцев С Ю , Миллер Р , Козлов С А // Ветеринарная медицина. Научно-практический журнал, 2006. - № 2-3- С. 57-58.

*10. Максимов В И Особенности некоторых физиологических показателей сыворотки крови лошадей в связи с полом и возрастом / Максимов В И, Зайцев С Ю , Милаёва И.В., Козлов С А, Миллер Р // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины.- Казань, 2006.-Т.185.- С.208-213.

11 Максимов В И Использование метода межфазной тензиометрии сыворотки крови для характеристики физиологического состояния лошадей / Максимов В И, Зайцев С Ю , Милаева И.В. // Материалы VII научно-практической конференции по болезням лошадей - М, 2006 -С 74-75

*12. Зайцев С Ю Исследование поверхностного натяжения модельных систем и крови животных методом межфазной тензиометрии / Зайцев С Ю , Максимов В И, Милаёва И.В., Миллер Р // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные.-2007.-№2.-С.44-46.

13 Милаёва ИВ Метод межфазной тензиометрии для исследования сыворотки крови лошадей (The method of a surface tension measurements of the horse serum) / Милаева И.В., Зайцев СЮ, Максимов В И, Бесчастнова ЮМ// Тезисы докладов XVD3 Менделеевского съезда по общей и прикладной химии В 5 т, т 5 - М Граница, 2007 - С 122

* - публикации в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях согласно перечню ВАК России.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09 2000 г Подписано в печать 11.10.07 Тираж 100 экз. Уел п.л. 1 Печать авторефератов (495) 730-47-74, 778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Милаева, Ирина Валерьевна

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА?АБОТЫ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. НЕКОТОРЫЕ ВОПРОСЫ ПРИМЕНЕНИЯ ДИНАМИЧЕСКОЙ МЕЖФАЗНОЙ ТЕНЗИОМЕТРИИ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ

БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ.

1.1. Поверхностное натяжение жидкостей. Теория вопроса и методы изучения.

1.2. Влияние химических соединений и факторов среды на поверхностное натяжение жидкостей.

1.3. Липосомы как модели для исследования биологических систем.

1.4. Поверхностное натяжение биологических жидкостей людей при разном физиологическом состоянии.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Метод максимального давления в пузырьке.

2.2. Метод висящей капли.

2.3. Анализ тензиограмм.

2.4. Расчёт и определение достоверности коэффициента корреляции.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Модификация методики определения динамического поверхностного натяжения сыворотки крови животных.

3.2. Показатели динамического поверхностного натяжения крови у лошадей.

3.2.1. Становление показателей динамического поверхностного натяжения крови у лошадей в разные сроки постнатального онтогенеза.

3.2.2. Становление показателей динамического поверхностного натяжения у лошадей в зависимости от пола.

3.3. Становление биохимических показателей поверхностного натяжения крови у лошадей в разные сроки постнатального онтогенеза в зависимости от возраста и пола.

3.4. Корреляционные взаимодействия между отдельными биохимическими показателями и данными межфазной тензиометрии у лошадей в разные сроки постнатального онтогенеза и пола.

3.5. Особенности становления показателей динамического поверхностного натяжения и его зависимость от количественного и качественного состава крови у лошадей и крупного рогатого скота с возрастом.

3.6. Показатели тензиометрии систем, моделирующих сыворотку крови животных.

3.6.1. Поверхностное натяжение модельных систем на основе липидных везикул.

3.6.2. Поверхностное натяжение модельных систем на основе липид-белок-солевых смесей.

3.6.3. Поверхностное натяжение модельных систем на основе ферментов и их комплексов с полимерами.

3.7. Показатели тензиометрии и биохимического анализа крови животных разного вида.

4. ВЫВОДЫ.

5. СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ

РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Физиолого-биохимическое значение исследований поверхностного натяжения крови лошадей и модельных систем"

Актуальность темы. В настоящее время всё более очевидной становится значимость определения физиолого-биохимического статуса животного при определении процессов развития и жизнедеятельности его органов, тканей, систем и организма в целом. Физиолого-биохимический статус животного определяется складывающимися на определённый период концентрациями липидов, белков и других биологически активных соединений (БАС) в крови, в тканях и органах. Эти вещества, обладают поверхностно-активными свойствами, т.е. способны адсорбироваться на жидких границах раздела фаз и изменять динамическое поверхностное натяжение (ДПН) плазмы крови. Многие физиолого-биохимические процессы происходят на границе раздела фаз с участием поверхностно-активных соединений (ПАВ): связывание кислорода и выделение диоксида углерода, стадии адсорбции и десорбции липидов и белков на межфазной поверхности, функционирование ферментных систем дыхательной цепи митохондрий и др. [Измайлова В.Н. и др. 1988; Казаков В.Н., Файнерман В.Б., Миллер Р., 1995; Лысов В.Ф., 1996; Зайцев С.Ю., 2006; Максимов В.И., Григорьев B.C., 2007].

Вот почему исследование ДПН, то есть поверхностного натяжения при разных временах существования поверхности, биологических жидкостей организма является важным и актуальным.

Изучение ДПН биологических жидкостей, в частности плазмы крови, зависимость ДПН от качественного и количественного состава крови осуществляется главным образом у человека [Казаков В.Н. и др., 1997; 2003]. Однако до начала наших работ, не было сведений об особенностях ДПН плазмы крови, зависимости его от количественного и качественного состава крови у животных. В области животноводства, практической ветеринарии и зоотехнии изучение изменения ДПН в зависимости от физиологического состояния животного и химического состава биологических жидкостей, может дать ценную уникальную информацию для ранней оценки физиолого-биохимического статуса организма и диагностики его нарушения, т.е. болезней. В связи с этим вполне очевидна актуальность и целесообразность исследований ДПН плазмы крови у животных, зависимости его от количественного и качественного состава биологически активных соединений в крови.

Цель работы - разработка методологических основ определения динамического поверхностного натяжения крови животных, модельных систем, выявление физиолого-биохимических особенностей динамического поверхностного натяжения крови, зависимости его от биохимических показателей крови у лошадей в разные сроки постнатального онтогенеза.

Исходя из этой цели, были поставлены задачи:

1. Усовершенствовать методику определения динамического поверхностного натяжения сыворотки крови применительно к животным.

2. Изучить становление показателей динамического поверхностного натяжения сыворотки крови у лошадей в разные сроки постнатального онтогенеза.

3. Исследовать содержание: альбуминов, общего белка, триглицеридов, холестерина, мочевины, глюкозы, кальция, калия, натрия, хлоридов в крови у лошадей в разные сроки постнатального онтогенеза.

4. Определить корреляцию динамического поверхностного натяжения с биохимическими показателями в крови у лошадей в разные сроки постнатального онтогенеза.

5. Провести сравнительную оценку динамического поверхностного натяжения, зависимости его от количественного и качественного состава крови у лошадей и крупного рогатого скота в постнатальном онтогенезе.

6. Определить динамическое поверхностное натяжение систем, моделирующих сыворотку крови животных.

Научная новизна работы состоит в том, что впервые разработаны методологические основы определения ДПН сыворотки крови здоровых животных: определены средние значения ДПН и углы наклона тензиограмм; показано, что для сыворотки крови лошадей значения ДПН изменяются в зависимости от возраста, а углы наклона тензиограмм в зависимости от пола; что значения ДПН коррелируют с уровнем общего белка, альбуминов, калия, триглицеридов в крови; выявлено, что индивидуальные растворы бычьего сывороточного альбумина (БСА) в концентрациях, близких к сыворотке крови вызывают значительное понижение ДПН, добавление лецитина усиливает это понижение, а добавление натрия хлорида уменьшает; что в трехкомпонентных смесях БСА, лецитина и натрия хлорида в концентрациях близких к сыворотке крови на ДПН в области коротких времен (0,01-1 с) основное влияние оказывает концентрация соли, а в области больших времен (10-100 с) - концентрация белка и липида.

Теоретическая и практическая значимость. Выполненное исследование содержит решение важной теоретической и практической проблемы - оценки физиолого-биохимического статуса животных по параметрам ДПН плазмы крови, зависимости ДПН как от качественного и количественного состава крови животных в разные сроки постнатального онтогенеза, так и от физиологического состояния животного. Установленные средние значения ДПН и углы наклона тензиограмм для здоровых животных разного вида, пола и возраста, влияние отдельных компонентов крови и их корреляция со значениями ДПН отражают физиолого-биохимический статус организма. Полученные результаты ДПН крови животных перспективны для использования в ранней экспресс-оценке физиолого-биохимического статуса животных и экспресс-диагностике нарушений физиологического состояния (болезней) животных, в том числе в полевых условиях, контроля за лечением. Значительные фундаментальные результаты получены для модельных белок-липид-солевых систем.

Основные положения диссертации используются в учебном процессе, в преподавании физиологии и биохимии студентам по специальностям "Ветеринария", "Зоотехния" и "Биохимия" в ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины». Получено положительное решение формальной экспертизы по заявке на патент РФ№028499 от 24.08.07 (приоритет от 11.07.07 г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Значения динамического поверхностного натяжения сыворотки крови животных коррелируют с количественными и качественными изменениями состава биологически активных соединений в крови.

2. Для каждого срока постнатального онтогенеза для сыворотки крови лошадей свойственны определённые значения ДПН и углы наклона тензиограмм, что перспективно использовать как стандартные показатели физиолого-биохимических норм для кобыл и жеребцов определённых возрастных групп.

3. Значения динамического поверхностного натяжения липид-белок-солевых систем являются адекватной моделью ДПН плазмы крови животных.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Милаева, Ирина Валерьевна

выводы

1. Рост и развитие, адаптация организма лошадей в разные сроки постнатального периода сопровождаются закономерными изменениями в системе крови, физиолого-биохимическими особенностями динамического поверхностного натяжения крови, зависимости его от количественного и качественного состава плазмы крови.

1.1. Динамическое поверхностное натяжение крови у кобылок специфично: в возрасте 1 месяца значения аь.аз значительно (на 2. 15%) ниже, а значение Ао (на 70. 103%) выше по сравнению с таковыми для взрослых кобыл. Многочисленные изменения в значениях поверхностного натяжения крови у кобыл с возрастом закономерно отражают рост и развитие всего организма и являются интегральными показателями физиолого-биохимического статуса животного.

1.2. Динамическое поверхностное натяжение крови у лошадей имеет особенности, зависящие от пола животного. Различия в значениях динамического поверхностного натяжения с возрастом у кобыл и жеребцов связаны с отличием во времени физиологического созревания и начала интенсивного тренинга; значение Ао может служить специфическим показателем, который изменяется в зависимости от пола животного (от 7,4 до 12,9 мНм"1 с]/2).

1.3. Структурно-функциональное развитие лошадей в постнатальном онтогенезе сопровождается изменениями в биохимическом статусе крови; у более молодых кобыл в крови выше уровень белков (общего белка на 30%, альбуминов на 50%), липидов (триглицеридов на 42-75%, холестерина на 80%) и минеральных веществ (кальция на 30%, калия на 22%, натрия на 42%), но ниже уровень глюкозы в 2,5 раза, мочевины на 44% и хлоридов на 13%.

1.4. Согласующийся характер изменений величин динамического поверхностного натяжения и биохимических показателей в крови жеребцов и кобыл подтверждается корреляционными связями между ними. Динамическое поверхностное натяжение и биохимический состав крови отличаются по силе и типу; белки имеют обратные корреляционные связи с оо и ai; мочевина прямые корреляционные связи с а0, oj, Хо, липиды - с 02.

2. Динамическое поверхностное натяжение, количественный и качественный состав крови имеют видовые особенности. У коров и у кобыл сильно выражена корреляция белков с со, ci и Хо, дополнительно у коров отмечается прямая корреляция уровня альбуминов со значениями А^со, ci.

3. Детальное изучение модельных систем показало, что максимальные значения поверхностного натяжения определяются солевым (кальций, калий, натрий) и липидным (триглицериды, холестерин) составом сыворотки крови, а минимальные значения - постепенной адсорбцией липидов и белков (общий белок, альбумины) из объёма на границу раздела фаз.

3.1. Тензиометрия модельных систем на основе липидных везикул зависит от природы, содержания данного компонента в системе, их количества и соотношения. Во всех случаях концентрация везикул бхЮ"4 моль/л является критической, что связано с насыщением межфазного слоя за счёт диффузии их к поверхности раздела фаз.

3.2. Исследование модельных систем на основе липид-белок-солевых смесей, в концентрациях наиболее приближенных к сыворотке крови: БСА -30.80 г/л, лецитина - 1.4 моль/л, хлорида натрия - 120.160 моль/л показало характерные закономерности динамического поверхностного натяжения исследованных растворов; значения со, аь Хо - определяются солевым и липидным составом смеси, а значения 02, аз , Х\ - постепенной адсорбцией липидов и белков на поверхность раздела фаз.

СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ РЕЗУЛЬТАТОВ

ИССЛЕДОВАНИЙ

Установленные показатели ДПН, биохимического состава крови и их корреляционной зависимости у лошадей и крупного рогатого скота в разные возрастные сроки постнатального онтогенеза рекомендуется использовать: 1) в качестве нормативных при изучении возрастных, половых и видовых особенностей лошадей и крупного рогатого скота; 2) как критерий нормы в клинической биохимии и физиологии, в научно-исследовательской работе при изучении физиолого-биохимического статуса организма; 3) в комплексе с обычными клиническими исследованиями для экспресс-оценки физиолого-биохимического состояния организма при тренинге лошадей и перед соревнованиями.

Основные положения диссертации использованы в учебном процессе по физиологии и биохимии по овладении специальностями - ветеринария, ветеринарная биохимия и зоотехния. Получено положительное решение формальной экспертизы по заявки на патент РФ№028499 от 24.08.07 (приоритет от 11.07.07 г.)

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Милаева, Ирина Валерьевна, Москва

1. Абдулаев Н. Г. Биоорганическая химия зрительного процесса / Абдулаев Н. Г., Артамонов И. Д. // Биологические мембраны 1984.-Т.1.-№.8.- С.775-793.

2. Абрамзон А.А. Поверхностно-активные вещества / Абрамзон А.А. // Л.:Химия, 1981.-304 с.

3. Адамсон А. Физическая химия поверхностей / Адамсон А // М.:Мир, 1979. 568 с.

4. Адсорбция из растворов на поверхностях твёрдых тел / Под ред. Г. Парфита, К. Рочестера // М., 1986. С. 488.

5. Алиев А.А. Обмен веществ у жвачных животных. / Алиев А.А. // М.: НИЦ «Инженер», 1997.-419 с.

6. Барсуков Л.И. Липиды / Барсуков Л.И. // Соросовский Образовательный Журнал,- 1998. № 10. - С. 2-10.

7. Березин И. В. Иммобилизованные ферменты / Березин И. В., Клячко Н. Л., Левашов А. В., Мартинек К., Машаев В. В., Чмельницкий Ю. Л. // М.:Высшая школа, 1987. 159 с.

8. Бурмистров Е. Н. Клиническая лабораторная диагностика. Основные исследования и показатели / Бурмистров Е. Н. // М.:«Шанс», 2005. 92 с.

9. Васьковский В.В. Липиды / Васьковский В.В. // Соросовский Образовательный Журнал. 1997. - № 3. - С. 32—37.

10. Ю.Горохова И. В. Изучение взаимодействия и активации липазы из Pseudomonas fluorescens в монослоях и преципитатах ПАВ / Горохова И. В., Иванов А. Е., Зайцев С. Ю., Зубов В. П. // Известия Академии наук.-2003.-№4.-С. 38-47.

11. П.Зайцев С.Ю. Мембранные структуры на основе синтетических и природных полимеров / Зайцев С.Ю. // М.: ФГОУВПО МГАВМиБ, 2006.-.190 с.

12. Измайлова В.Н. Поверхностные явления в белковых системах / Измайлова В.Н., Ямпольская Г.П., Сумм Б.Д. // М., 1988.- 239 с.

13. Измайлова В.К. Структуробразование в белковых системах / Измайлова В.Н., Ребиндер П.А. // М., -1977,- 325 с.

14. Казаков В.Н. Динамическая межфазная тензиометрия новый метод изучения биологических жидкостей человека / Казаков В.Н., Миллер Р., Синяченко О.В. и др. // Вестн. Нов. Мед. Технол.- 1997.-Т. 4, №4.-С. 100-103.

15. Казаков В.Н. Динамическое поверхностное натяжение биологических жидкостей здоровых людей / Казаков В.Н., Синяченко О.В., Файнерман В.Б. и др. // Арх. Клин. Экспер. Мед.- 1996.-Т. 5,- №1.-С. 36.

16. Казаков В.Н. Межфазная тензиометрия биологических жидкостей: Вопросы теории, методы и перспективы использования в медицине / Казаков В.Н., Синяченко О.В., Постовая М.В. и др. // Арх. Клин. Экспер. Мед.-1998.-Т. 7.-№1.-С. 5-12.

17. Казаков В.Н. Факторы, влияющие на динамические межфазные тензиограммы крови и мочи у здоровых людей / Казаков В.Н., Возианов А.Ф., Синяченко О.В. и др. // Арх. Клин. Эксп. Мед.-1999.-Т. 8,- №8.-С. 19-24.

18. Казаков В.Н. Межфазная тензиометрия и реометрия биологических жидкостей в терапевтической практике / Казаков В.Н.; Под ред. Возианова А.Ф. Донецк : Мед. Университет, 2000.-296 с.

19. Казаков В.Н. Межфазная тензиометрия биологических жидкостей в терапии / В.Н. Казаков, О.В. Синяченко, Г.А. Игнатенко и др. -Донецк: Донеччина, 2003.- 584с.

20. Каштиго Т. В. Ферментативная активность липаз в полиэлектролитных комплексах / Каштиго Т.В., Зайцев С.Ю., Кривошеев А.А. // Сб. научных трудов «Наука и образование» часть 4. Мурманск 2003. -С.169-171.

21. Максимов В.И. О методах статистической обработки результатов исследований / Максимов В.И., Кузьмина А.И., Дыдаева Л.Г. // Ветеринарная медицина. Научно-практический журнал. М.: ООО «Агровет», 2005,- №1.-С.21-23.

22. Максимов В.И. Развитие бактерицидной и лизоцимной активности плазмы крови чистопородных и помесных поросят / Максимов В.И., Григорьев B.C. // Сельскохозяйственная биология, серия Биология животных.-М., 2006. №2.- С. 115-117.

23. Максимов В.И. Некоторые аспекты этологии животных / Максимов В.И., Лысов В.Ф. // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук: Научно-теоретический журнал, 2006.-№2.- С.21-22.

24. Марголис Л.Б. Липосомы и их взаимодействие с клетками / Марголис Л.Б., Бергельсон Л.Д. // М.: Наука, 1986.-352 с.

25. Мари Р. Биохимия человека / Мари Р., Греннер Д., Мейес П. и др. // М., Мир,- 1993.- Т.1.-380 с.

26. Русанов А.И. Межфазная тензиометрия / А.И. Русанов, В.А. Прохоров,-Санкт-Петербург: Химия, 1994,- 400с.

27. Синяченко О.В. Динамическая межфазная тензиометрия крови и мочи здоровых людей / Синяченко О.В., Казаков В.Н., Москаленко С.В. и др. //Лабораторнаядиагностика.-1998.-Т. 4.-№6.-С. 52-55.

28. Фадеев А.С. Свойства монослоёв коллагена, сформированных на границе фаз вода-воздух. Влияние рН и ионной силы субфазы / Фадеев А.С., Левачёв С.М., Ямпольская Г.П., Рудой В.М., Измайлова В.Н. // Коллоидный журнал. 1999.- Т.61 - №4. - С. 558-566.

29. Цветков В.Н. Структура макромолекул в растворах / Цветков В.Н, Эскин В.Е, Френкель С.Я. //М., 1964.- 268 с.

30. Aksenenko E.V. Surface dilational rheology of mixed adsorption layers at liquid interfaces E.V. Aksenenko, V.I. Kovalchuk, V.B. Fainerman et al. // J. Colloid Interface Sci.-1994.- Vol. 162,- P. 215-220.

31. Aveyard R Emulsions stabilised solely by colloidal particles / Aveyard R, Binks B.P, Clint J.H // Adv. Colloid Interface Sci. 2003. - Vol. 100-102. -P. 503-46.

32. Benjamins J. Surface Dilatational Rheology of Proteins Adsorbed at Air/Waret and Oil/Water Interfaces / J. Benjamins, E. H. Lucassen-Reynders // in "Proteins at Liquid Interfaces", Elsevier -1998,-Vol. 7,- P. 241-284.

33. Benjamins J.-W. New Experimental Setup To Use Ellipsometry To Study Liquid-Liquid and Liquid-Solid Interfaces / Benjamins J.-W., Jonsson В., Thuresson K., Nylander T. // Langmuir.- 2002.- Vol. 18,- P. 6437-6444.

34. Bangham A.D. Negative Staining of Phospholipids and their Structured Modification by Surface Agents as Observed in the Electron Microscope / Bangham A.D., Ноте R. W. //J. Mol. Biol. 1964. - Vol. 8. - P. 660-668.

35. Bangham A.D. Diffusion of Univalent Ions Across the Lamelae of Swollen Phospholipids / Bangham A.D., Standish M.M., Watkins J. С // Ibid. 1965. -Vol. 13.-P. 238-252.

36. Battal Т. Surfactant adsorption and Marangoni flow in liquid jets; 1. Experiments / Battal Т., Bain C.D, Weiss M, Darton R.C. // Colloid Interface Sci.-2003.- Vol. 263,- P. 250-60.

37. Boury F. Dilatational properties of poly (d,l-lactic acid) and BSA monolayers spread at the air/water interface / Boury F., Ivanova Tz., Panaiotov I. et al. // Langmuir.-1995.- Vol. 11,- P. 599-606.

38. Chen P. Axisymmetric Drop Shape Analysis (ADSA) and its Application, / P. Chen, D.Y. Kwok, R.M. Prokop et al. // in "Drops and Bubbles in Interfacial Science", Elsevier.-1998.- Vol. 6,- P. 61-138.

39. Christov N.C. Capillary mechanisms in membrane emulsification: oil-in-water emulsions stabilized by Tween 20 and milk, proteins / Christov N.C., Ganchev D.N., Vassileva N.D., Denkov N.D. // Colloids and Surfaces A.-2002.- Vol. 209.- P. 83-104.

40. Clark D.C. Evidence of extraneos surfactant adsorbtion altering adsorbed layer properties of P-lactoglobulin / Clark D.C., Husband F., Wilde P.J. et al. //J. Chem. Soc. Faraday Trans.-l995.- Vol. 91(13).-P. 1991-1996.

41. Douillard R. State Equation of P-casein at the air/water interface / Douillard R., Daoud M., Lefebvre J. et al. // J. Colloid Interface Sci.-1994. Vol. 163.-P. 277-288.

42. Dussaud A. Surface properties of protein alcoholic solutions / Dussaud A., Han G. В., Ter Minassian-Saraga L. et al. // J. Colloid Interface Sci.- 1994.-Vol. 167,- P. 247-255.

43. Exerowa D. Amphiphile bilayer films from DPPC: bilayer lipid membranes and Newton black films / Exerowa D., Todorov R., Nikolov L. // Colloids Surfaces A.-2004.- Vol. 250.- P. 195-201.

44. Exerowa D. Foam and wetting films: electrostatic and steric stabilization / Exerowa D, Churaev N.V., Kolarov T. et al. // Adv. Colloid Interface Sci.-2003.-Vol. 104.-P. 1-24.

45. Fainerman V.B. Adsorption Isotherms of Proteins at Liquid Interfaces / Fainerman V.B. and Miller R. // in "Proteins at Liquid Interfaces".- Elsevier, 1998.-Vol. 7.- P. 51-102.

46. Fainerman V.B. Anomalous dynamic surface tension of mixtures of nonionic suhfactants with different partial molar areas at the water-air interface / Fainerman V.B., Miller R. // Langmuir-1997. Vol. 13,- P. 409413.

47. Fainerman V.B. Dynamic surface tension of surfactant mixture at the water-air interface / Fainerman V.B., Miller R. // Colloids and Surfaces A.- 1995.-Vol. 97.-P. 65-82.

48. Fainerman V.B. Dynamic surface tension of micellar solutions in the millisecond and submillisecond time range / Fainerman V.B., Mys V.D., Makievski A.V. et al. // Journal of Colloid and Interface Science.- 2006.-Vol. 302,- P. 40^6.

49. Fainerman V.B. Competitive adsorption from mixed nonionic surfactant/protein solutions / Fainerman S.A., Zholob M., Leser K. et al. // Journal of Colloid and Interface Science. 2004,- Vol. 274,- P. 496-501.

50. Fainerman V.B. Accurate analysis of the bubble formation process in maximum bubble pressure tensiometry / Fainerman V.B., Miller R., Makievski A.V. //Rev. Sci. Instruments. -2004. Vol. 75.- P. 213-221.

51. Fainerman V.B. Dynamic surface tension measurements of surfactant solutions using the maximum bubble pressure method limits of applicability / Fainerman V.B., Kazakov V.N., Lylyk S.V., Makievski A.V. // Colloids Surfaces A.-2004.- Vol. 250. -P. 97-102.

52. Fainerman V.B. Correction for the aerodynamic resistance and viscosity in maximum bubble pressure tensiometry / Fainerman V.B., Mys- V.D., Makievski A.V., Miller R. //Langmuir.-2004.- Vol. 20.- P.1721 1723.

53. Fainerman V.B. Maximum bubble pressure tensiometry an analysis of experimental constrains / Fainerman V.B., Miller R. // Adv. Colloid Interface Sci. -2004. - Vol. 108-109. - P. 287-301.

54. Ferri J.K. Curvature effects in the analysis of pendant bubble data: Comparison of numerical solutions, asymptotic arguments, and data / Ferri J.K, Lin S.Y, Stebe K.J. //Colloid Interface Sci. -2001,- Vol. 241,- P. 154 -168.

55. Graham D.E. Adsorbtions of proteins at the interfaces / Graham D.E., Philips M.C. //J. Colloid Interface Sci.- 1979,- Vol. 70,- P. 427-435.

56. Hansen F.K. The kinetics of albumin adsorbtion to the air/water interface measured by automatic axisymmetric drop shape analysis / Hansen F.K., Myrvold R. // Colloid Interface Sci.- 1995. Vol. 176.- P. 408-417.

57. Jegota S. Spontaneous formation of vesicles / Jegota S., Tehak D. // Advances in Colloid and Interface Science.- 2006,- Vol. 121.- P. 51-75.

58. Joos P. Adsorbtion kinetics of lower alkanols at the air/water interface: effect of structure makers and structure breakers / Joos P., Serrien G. // J. Colloid Interface Sci.-1989.- Vol. 127,- P. 97-103.

59. Kalischewski K. Investigation of protein foams obtained by bubbling / Kalischewski K., Schugerl K. // Colloid and Polymer Sci.- 1979,- Vol. 251.-P. 1099-1110.

60. Kazakov V.N. Dynamic Surface Tensiometry in Medicine / Kazakov V.N., Sinyachenko O.V., Fainerman V.B., Pison U. // in "Studies in Interface Science". Elsevier, Amsterdam, 2000. - Vol. 8. - 378 p.

61. Ketelson H.A. Dynamic wettability properties of a soft contact lens hydrogel / Ketelson H.A., Meadows D.L., Stone R.P. // Colloids Surfaces В.- 2005. -Vol. 40,- P. 1-9.

62. Khristov Khr. Critical capillary pressure for destruction of single foam films and foam: effect of foam film size / Khristov Khr., Exerowa D., Minkov G. // Colloids Surfaces A.- 2002. Vol. 210,- 159-166.

63. Khristov Kh. Foam analyser an instrument based on the foam pressure drop technique / Khristov Kh., Exerowa D., Christov L., Makievski A.V. // Rev. Sci. Instrum.-2004. - Vol. 75. - P. 4797-4803.

64. Kragel J. Dynamic surface tension and surface shear rheology studies of mixed P-lactoglobulin/Tween 20 systems / Kragel J., Wustneck R., Clark D. et al. // Colloids and Surfaces A.-1995.- Vol. 98,- P. 127-135.

65. Kruglyakov P.M. Experimental investigation of capillary pressure influence on breaking of emulsions stabilized by solid particles / Kruglyakov P.M., Nushtayeva A.V., Vilkova N.G. // Colloid Interface Sci. -2004. Vol. 276,-P. 465-474.

66. Lassen B. Competitive protein adsorbtion studied with TIRF and Ellipsometry / Lassen В., Malmsten M. // Colloid Interface Sci. 1996.-Vol. 179,-P. 470-477.

67. Lavi B. The exponential power law: partial wetting kinetics and dynamic contact angles / Lavi В., Marmur A. // Colloids Surfaces A. 2004. - Vol. 250.-P. 409-414.

68. MacRitche F. Protein adsorbtion/desorbtion at fluid interfaces / MacRitche F. // Colloids and Surfaces.-1989.- Vol. 41,- P. 25-34.

69. Makievski A.V. Determination of equilibrium surface tension value by extrapolation via long time approximation / Makievski A.V., Fainerman V.B., Miller R. et al. // Colloids and Surface A.-1997.-Vol. 5,- N2.-P. 372381.

70. Makievski A.V. Adsorption of proteins at the liquid/air and liquid/oil interfaces as studied by the pendent drop method / Makievski A. V., Miller R., Fainerman V.B. et al. // Royal Soc. Chem.-1999.-P. 269-284.

71. Makievski A.V. Determination of equilibrium surface tension value by extrapolation via long time approximation / Makievski A.V., Fainerman V.B., Miller R. et al. // Colloids and Surfaces A.- 1997.- Vol. 122,- P. 269273.

72. Makievski A.V. Adsorption of Proteins at the Liquid/Air and Liquid/Oil Interfaces as Studied by the Pendent Drop Method / Makievski A.V., Miller R., Fainerman V.B. et al. // in "Food Emulsions anf Foams", Seville, RSC.-1998.- P. 269-284.

73. Miller R. Relaxation behavior of human albumin adsorbed at the solution/air interface / Miller R., Policova Z., Sedev R. et al. // Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects.-1993.- Vol. 76.-P. 179-185.

74. Miller R. Experimental studies on the desorption of adsorbed proteins from liquid interfaces / Miller R., Grigoriev D.O., Kragel J. et al. // Food Hydrocolloids.- 2005,- Vol. 19.- P. 479-483.

75. Mobius D. Novel Methods to Study Interfacial Layers / Mobius D., Miller R. // Studies in Interface Science.- Elsevier, Amsterdam, 2001.- Vol. 11.-268 P

76. Nikolov A.D. A novel method to study particle-air/liquid surface interactions /Nikolov A.D., Wasan D.T. // Colloids and Surfaces A. 2004,-Vol. 250.- P. 89-95.

77. Noskov B.A. Dynamic surface elasticity of surfactant solutions / Noskov B.A., Loglio G. // Colloids and Surfaces A.- 1998,- Vol. 143,- P. 167-183.

78. Noskov B.A. Kinetics of adsorption from micellar solutions / Noskov B.A. // Adv. Colloid Interface Sci.- 2002,- Vol. 95. -P. 237- 293.

79. Paulsson M. Surface film pressure of p-Lactoglobulin, a-Lactalbumin and BSA at the Air/Water interface studied by Wilhelmy Plate and Drop volume / Paulsson M., Dejmek P. // Colloid Interface Sci.-1992.- Vol. 150.- P. 394403.

80. Pitois 0. Liquid drainage through aqueous foam: study of the flow on the bubble scale / Pitois 0., Fritz C., Vignes-Adler M. // Colloid Interface Sci. -2005.- Vol. 282,-P. 458^65.

81. Robertson B. Pulmonary Surfactant: From Molecular Biology to Clinical Practice / B. Robertson, Van Golde L.M.G., Batenburg J.J. // Elsevier, Amsterdam, 1992.-P.265-268.

82. Robertson B. Surfactant Therapy for Lung Disease / Robertson В., Tlusch H.W. //Marcel Dekker Inc.- New York, 1995.-P. 127-131.

83. Rottenberg Y. Axisymmetric Drop Shape Analysis / Rottenberg Y., Boruvka L., Newmann A.W. // Colloid Interface Sci.-1983.- Vol. 93.- N 1.- P. 169183.

84. Serrien G. Dynamic surface properties of adsorbed protein solutions: BSA, casein and buttermilk / Serrien G., Geeraerts G., Ghosh L. et al. // Colloids and Surfaces.-1992,- Vol. 68,- P. 219-233.

85. Spector A.A. Biological and therapeutic potential of membrane lipid modification in tumors / Spector A.A., Burns C.P. // Cancer Res.-1987.-Vol. 47.-P. 4529-4537.

86. Suttisprasit P. The surface activity of a-Lactalbumin, p-Lactoglobulin, and BSA / Suttisprasit P., Krisdhasima V., McGuire J. // Colloid Interface Sci.-1992.- Vol. 154,-P. 316-326.

87. Tavana H. Contact angle measurements with liquids consisting of bulky molecules / Tavana H., Lam C.N.C., Grundke K., Friedel P. // Colloid Interface Sci.-2004.-Vol. 279.-P.493-502.

88. Turro NJ. Ananthapadmanabhan K.P., Aronson M., Spectroscopic probe analysis of protein-surfactant interactions: the BSA/SDS system / Turro N.J., Lei X.-G. // Langmuir. 1995,- Vol. 11P. 2525-2533.

89. Trukhin D.V. Dynamic surface tension and surface rheology of biological liquids / Trukhin D.V., Kazakov V.N., Sinyachenko О.V. // Coll. Surf. Biointer.-2001.-Vol. 21.-P. 231-238.

90. Uson N. Formation of water-in-oil (W/O) nano-emulsions in a water/mixed non-ionic surfactant/oil systems prepared by a low-energy emulsification method / Uson N., Garcia M.J., Solans C. // Colloids Surfaces A.- 2004.-Vol. 250,- P. 415-421.

91. Wantke K.D. The Oscillating Bubbles Method / Wantke K.D., Fruhner H. // in "Drops and Bubbles in Interfacial Science", Elsevier.-1998.- Vol. 6.- P. 327366.

92. Wustneck R. Dynamic surface tension and adsorbtion properties of (3-casein and {3-lactoglobulin / Wustneck R., Kragel J., Miller R. et al. // Food Hydrocolloids -1996,- Vol. 10,- N4.- P. 395-405.

93. Xu S. Kinetics of adsorbtion of proteins at the air-water interface from a binary mixture / Xu S., Damodaran S. // Langmuir -1994,- Vol. 10 P. 472480.

94. Yaseen M. The Structure of Zwitterionic Phosphocholine Surfactant Monolayers / Yaseen M., Lu R. // Langmuir.- 2006,- Vol. 22.- P. 5825-5832.