Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Физиологические механизмы адаптации рыб к влиянию каспийской нефти

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Физиологические механизмы адаптации рыб к влиянию каспийской нефти"

На правах рукописи

КАНИЕВА НУРИЯ АБДРАХИМОВНА

ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ АДАПТАЦИИ РЫБ К ВЛИЯНИЮ КАСПИЙСКОЙ НЕФТИ

Специальность - 03.00.13 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Астрахань - 2004

Работа выполнена в Астраханском государственном техническом университете.

Научный консультант:

заслуженный деятель науки России, доктор биологических наук, профессор

В. И.Воробьев

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук доктор медицинских наук, профессор доктор биологических наук

Г.Ф.Металлов В.Ф.Киричук М.А.Егоров

Ведущая организация: Саратовский государственный университет им. Н.Г.Чернышевского

На заседании регионального диссертационного совета ДМ 212.009.01 при Астраханском государственном университете по адресу: 414000, г. Астрахань, пл. Шаумяна, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Астраханского государственного университета.

Автореферат разослан «/^ « О^Ир^ 2004 г.

Защита диссертации состоится «

2004 г. в «/КГ

« часов

Ученый секретарь совета,

доктор биологических наук

Ю.В.Нестеров

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В общей проблеме загрязнения рыбохозяйственных водоемов нефть занимает одно из первых мест и до настоящего времени влияние ее на биоту продолжает оставаться предметом серьезных научных исследований (Касымов,1994; Костров и др., 1997; Иванов, Сокольский,2000; Патин,1979;2001). Влияние нефти зависит от ее состава (природы нефтяных углеводородов - НУ), месторождения и экологических условий среды жизни гидробионтов, в т.ч. рыб в каждом конкретном субрегионе биосферы (Вернадский, 1922; 1927; Ковальский,1974; Воробьев,1993; Воробьев, Каниева,2003).

Особую актуальность проблема влияния нефти на гидробионтов приобретает в связи с нефтеразведочными работами на Северном Каспии, где в самой ближайшей перспективе планируется промышленная добыча нефтяного сырья и где уже начат исследователями КаспНИРХа мониторинг за изменениями среды (Романов и др., 1998; Гераскин, Алтуфьев и др;1999; КатунинД999). Основной задачей настоящей работы явилось комплексное изучение на единой методологической и методической основе функционального состояния различных гидробионтов, в т. ч. рыб, под влиянием такого стресс-фактора, как каспийская нефть, что в итоге позволит определить физиологические механизмы адаптации и степень воздействия различных доз нефти на гидробионтов с целью нормирования концентрации токсикантов в водоемах, проведения экологических экспертиз и экологического аудита гидросистем и тому подобных физиолого-биохимических и экологических исследовании. Данные наших экспериментальных работ могут использоваться для изучения индивидуальной резистентности и адаптивных способностей организма рыб к новым факторам внешней среды, которые складываются в результате дальнейшего антропогенного прессинга на ихтиофауну.

Исходя из всего выше сказанного, в настоящей работе были поставлены следующие цель и задачи исследований.

Цель исследований.

Установить критерии толерантности гидробионтов, в т. ч. рыб и их адаптивных возможностей под влиянием различных доз сырой каспийской нефти, выявить основные морфофункциональные изменения, определяющие потенциальные возможности адаптации рыб к нефтяному загрязнению. Определить физиолого-биохимические и морфологические (структурно-оптические свойства биожидкостей, гистологическое строение органов и тканей) параметры адаптивных изменений у рыб.

Задачи исследований.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

В процессе влияния нефти на гидробионтов выявить характер динамики физиолого-биохимических параметров рыб (двигательно-пищевая реакция, гематологические показатели, кинетика обменных процессов, ГТБ и ГЭБ мышц, печени и мотонейронов).

-Оценить функциональное состояние ферментов кишечника, фракционного состава белков, процессов ПОЛ под влиянием различных доз и экспозиций нефти для вскрытия физиологических закономерностей адаптационного механизма рыб и их индивидуальной резистентности.

- Выяснить влияние различных доз каспийской нефти на морфологические текстуры морфотипов и их корреляционные соотношения с физиологическими параметрами рыб.

- Выяснить видовые и индивидуальные различия физиологических параметров резистентности рыб и их связь с полиморфностью сывороточных и тканевых белков скелетных мышц, печени и морфотипами.

Научная новизна. Впервые установлены ранее неизвестные физиологические механизмы адаптации рыб к различным дозам каспийской нефти, в основе которых лежит изменение кинетики ряда показателей метаболизма, что в итоге может вызывать нарушение стереотипа поведения рыб, и ведет к потере их плавательной способности и отказе от корма. Установлено, что по мере увеличения времени влияния нефти изменяется качественный состав -а, и (3 глобулярных фракций сывороточных и тканевых белков. Выявлена зависимость резистентности рыб и спектрального состава компонентов фракций среднемолекулярных (СМБ) и высокомолекулярных белков (ВМБ) скелетных мышц карпа. Впервые установлено количественное соответствие изменения проницаемости нейтрального красного через ГТБ печени, дорзальных мышц и ГЭБ по уровню сорбции витального красителя с морфологическими нарушениями в мозге рыб под влиянием нефти.

Впервые апробирован метод поляризационной микроскопии в изучении изменчивости формы анизотропных текстур биологических жидкостей рыб, в частности для характеристики физиологического состояния организма рыб под влиянием нефти. Установлены отличительные особенности морфологической картины сыворотки крови, гомогенатов печени и дорзальных мышц, связанные с резистентностью организма рыб в различных условиях влияния нефти. Показано, что появление атипичных цветных морфотипов в образцах сыворотки крови и гомогенатах органов и тканей рыб служит критерием декомпенсации

общего гомеостаза организма. Установлена обратная зависимость уровня базисных морфотипов от величины общего белка, мочевины, КСБ в сыворотке крови рыб при 20-ти суточной экспозиции На защиту выносятся следующие положения:

1. Установлена связь токсикорезистенгности рыб с полиморфностью а,-, и р - глобулинов. Степень полиморфизма белковых соединений прямо связана с физиологической устойчивостью организма, а физиологический механизм данного явления имеет отношение к неспецифической форме адаптации в условиях влияния различных доз каспийской нефти. Выраженность адаптации в организме так же зависит от видовой и индивидуальной изменчивости, которая в природных условиях, возможно, лежит в основе избирательной смертности. Увеличение полиморфизма белков под влиянием нефти тесно связано с различными показателями метаболизма, среди которых, прежде всего, важно выделить коллоидную устойчивость водорастворимых общих белков, активность дегидрогеназ, параметры липидного обмена, гематологические показатели и морфологические изменения сканированной структуры сыворотки и водной вытяжки мышц и печени (морфотипы).

2. Выявлена кинетика физиолого-биохимических показателей и морфологических изменений скелетных мышц и ЦНС, которые по мере их развития приводили к нарушению внешнего дыхания и дыхательной функции крови, что в итоге отражалось на гликолизе мышечной ткани с последующим отказом рыб от корма.

Исследования проводились в соответствии с комплексной программой Ai "ГУ по теме: "Исследование влияния ашропогенного воздействия на окружающую среду и разработка мероприятий по его уменьшению", - № гос. регистрации 0505.

Теоретическое и практическое значение работы. На основе изучения механизма влияния НУ разработаны научные основы снижения воздействия нефтяного загрязнения на организм гидробионтов.

Вскрытые физиологические механизмы действия нефти предлагаем использовать для уточнения ПДК по НУ и дальнейшей специальной разработки установления пределов физиологической пластичности и адаптации устойчивых и малоустойчивых особей в популяции различных видов ихтиофауны. Для оценки критического уровня нефтяного загрязнения впервые для рыб, разработан биотест на основе изменчивости полиморфности белков и стуктурных образований (морфотипы) сыворотки крови, гомогенатов органов и тканей. Полученные данные могут быть использованы в вузах при изучении

курсов физиологии, экологической физиологии, биохимии, экологии, этологии животных, гидробиологии и др.

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на Международных научно-практических конференциях (Москва, 1998; 2004; Vodnany, Czech Republic, 1998; Санкт-Петербург, 1998; Астрахань, 2000; 2001; 2002; 2004; Баку,2002; Белгород , 2004; Пенза, 2004; Петрозаводск, 2004). На научных конференциях Российской Академии Естествознания, (Египет, 2003, 2004). На Всероссийских конференциях (Борок, 2002; Волгоград, 2004; Пенза, 2004); на научно-1"ехнических конференциях профессорско-преподавательского состава АГТУ (Астрахань, 1998 - 2004гг.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 33 работы.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, материалов и методов исследований семи глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка указателя использованной отечественной и зарубежной литературы, включающей 385 литературных источника. Диссертация изложена на 264 страницах компьютерного набора, содержит 24 таблиц, 83 рисунка из них 17 страниц приложения.

Во введении подробно рассматриваются вопросы влияния нефти на водные экосистемы. Рассмотрены литературные данные о судьбе Каспийского моря, в т.ч. района северного Каспия. Приводятся данные о влиянии нефти на фгоиолого-биохимические параметры различных гидробионтов, подчеркивается фрагментар ность подобных работ и отсутствие комплексных исследований морфо-функционального направления, позволяющих судить о многогранном влиянии нефти и ее фракций на фгоиолого-биохимические процессы организма гидробионтов, в т.ч. различных видов рыб, с целью необходимости исследования физиологического механизма воздействия каспийской нефти.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Экспериментальные исследования. Исследования проводили с 1998 по 2004 годы в соответствии с утвержденной научной программой Астраханского государственного технического университета (АГТУ). Работа выполнена на базе АГТУ, лаборатории Экологической физиологии и генетики КаспНИРХа и лаборатории патоморфологии НИИ Лепры, кафедры ветеринарной медицины Астраханского государственного университета. Эксперименты по изучению токсичности сырой нефти на рыб проводили по общепринятым методам исследований (Строганов, 1971;

Лесников, 1971; Лукъяненко и Карпович, 1989). Объектом исследований были выбраны сеголетки, годовики и двухлетки карпа (Cyprinus carpio L.), годовики серебрянного карася (Carassius auratus L.), сеголетки русского осетра (Acipenser guldenstaedti Brandt), разновозрастные бычки-песочники (Neogobius fluviatilis pallasi, Berg), рачки (Daphnia magna S.). Объекты исследований доставлялись с рыбоводных предприятий: Волжского и Кизанского рыбоводного заводов, а так же с озера Сенчака Лиманского района Астраханской области, принадлежащего к западным подстепным ильменям и части Прикаспийской бессточной котловины. Бычки-песочники были взяты из уловов 15-ти футового трала. Траление проводились в течение 20 мин. на глубинах от 4 до 5 метров в западной часта Северного Каспия в апреле 2002 г. сотрудниками КаспНИРХ. Одновозрасгаые (10-ти дневные) рачки (Daphnia magna S.) выращивались в лабораторных условиях с постоянной аэрацией, которые были использованы в специальных опытах.

Влияние различных концентраций сырой каспийской нефти на гидробионтов испытывали в сериях опытов. Для определения максимально-переносимой концентрации в течение 96-ти часового воздействия был проведен, на исследуемых нами объектах, предварительный - острый опыт. Выбранная шкала концентраций для карпа составила 25: 50; 100; 150; 200; 250; 500; 1000; 2000мг/л нефти, а для сеголетков осетра 1 ; 2 и 3 мг/л. Основным критерием действия нефти явилось время выживания при обязательной регистрации изменений внешнего стереотипа поведения рыб. Как показатели результаты острых опытов у рыб наблюдали снижение двигательной активности с последующей утратой реакции на корм, что в итоге завершалось летальным исходом. Полученные данные явились предпосылкой для изучения метаболизма в организме рыб в момент явного угнетения и утраты двигательно - пищевых реакций. С этой целью в подострых опытах (время воздействия токсиканта 10-30 суток) использовали сублетальные концентрации нефти: 50,100 150 и 200 мг/л, которые были установлены из результатов острого влияния (ЛКо=200 мг/л). Для осетра доза 1мг/л, также установлена в остром опыте, как витальная. Для Dafoia magna S., в предварительных опытах установлена витальная концентрация равная 0,2 мг/л. Рабочие концентрации (дозы) и время воздействия нефти подобраны эмпирическим путем и на основе существующих исследований (Лакин,1968; Лесников,1973; Лукъяненко, 1983). Условия содержания для рыб и дафний в работе определяли исходя из литературных источников (Лукъяненко, 1987: Флеров, 1989; Земков и др.,1990; Журавлева и др.,1991).

В процессе физиологических экспериментов вели регулярные наблюдения за подопытными рыбами. Регистрировали двигательную активность, реакцию на раздражители, интенсивность дыхания, временя и процент гибели. Все изменения метаболических показателей в крови, органах и тканях и патоморфологические нарушения сопоставляли с утратой двигательно-шпцевых и оборонительных реакций у рыб и сравнивали с контролем.

2. Химические методы анализа использовали с целью определения фракционного состава нефти в опытных растворах методом газовой хроматографии с масспектрометрией (?Р-5000 по методике ВНИРО (Друго и Родин,1999). Аналитические показатели сырой Каспийской нефти: плотность, вязкость, содержание серы, содержание хлористых солей, содержание механических примесей, парафинов, йодное число, содержание воды, температура застывания определены в исследовательской лаборатории ЦЗЛ ОТК АГПЗ согласно ГОСТ 9965-76. Фракционный состав сырой нефти изучались на базе КаспНИРХ по ГОСТ 11011-85 и ГОСТ 2177-99.

3. Гидрохимические показатели: температуру, активную реакцию среды (рН), перманганатную окисляемость: растворенный кислород; БПК20 взвешанные вещества; жесткость; щелочность; сухой остаток; аммонийный азот; нитраты; железо; температуру и общую концентрацию нефти осуществляли по общепринятым методам исследований (Строганов, 1971; Привезенцев,1973; Лурье.1973; Семенов.1977).

4. Физиологический анализ гематологических показателей (скорость оседания эритроцитов (СОЭ), количество эритроцитов и лейкоцитов, изготовление мазков для определения лейкоцитарной формулы) проводили по общепринятым методикам (Иванова, 1983; Житенева и др. 1989). Содержание гемоглобина измеряли методом колориметрирования на аппарате ФЭК-М (Дервиз и Воробьев, 1959).

5. Биохимический анализ. Количество общего белка в сыворотке и гомогенатах органов и тканей определяли биуретовым методом анализа, мочевины - диацетилмоноаксимовым, глюкозы глюкозооксидазным, общие липиды - фосфорно-ванилиновым комплексом, по методу Цольнера; креатинин - по реакции Яффе (Покровский, 1969; Балаховский, 1987).Осмотическое давление сыворотки крови измеряли на осмометре ОМКА 1Ц-01. Показатель коллоидной устойчивости сывороточных белков (лента Вельтмана) проводили по методике Салменкова и Малинина (1976), в модификации Кычанова и др. (2000). Определение активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ) проводили на фотоколориметре КФК-2МН по изменению оптической плотности раствора ( Методы биологии развития, 1974);

активность цитохромоксидазы (ЦО) определяли спектрофотометрически по уменьшению оптической плотности поглощения цитохрома С (cyt-c) (Гумидова и др., 1967); концентрацию белка в супернатанге определяли спектрофотометрически по методу Варбурга и Христиана,(1999). Концентрацию молочной кислоты в сыворотке и мышцах определяли энзиматическим колориметрическим методом (Z.Clin, 1972, Балаховский и Наточин;1973). Содержание гликогена в печени и мышцах определяли с помощью антронового реактива (Selfler at. ol, 1950; Прохова, Тупикова, 1965). Для выявления скорости перекисного окисления липидов (СпПОЛ), аскорбат зависимового перекисного окисления (АсПОЛ), малонового диальдегида (МДА) использовали микрометод (Строев, Макарова, 1986). Влагу определяли весовым способом. Пробы мышц взвешивали в сыром виде, затем высушивали до сухого постоянного веса. Активность кишечных ферментов (а-амилазы, мальтазы и щелочной фосфотазы) измеряли методом Smith и ROC в модификации А.М.Уголева (Давлетова и др., 1986). Фракционирование белков проводили методом блокэлектрофореза в полиакриламидном геле в однородной буферной системе (Маурер, 1971; Корочкин, Серов и др.; 1977). Проницаемость гистогематического (ГТБ) и энцефалического барьеров (ГЭБ) определяли in vitro колориметрическим методом (Справочник «Биохимические методы исследования в клинике», 1969).

6. Морфологические методы анализа биологических жидкостей

Изучение структур твердой фазы сыворотки крови проводили методом краевой дегидратации в аналитических ячейках, представлявших собой пространство между предметным и покровным стеклами, в которое помещали 0,02 мл исследуемой биожидкости. Просмотр структур, образовавшихся при медленном (в течение 48-72 часов) высушивании, производился в поляризованном свете. Наблюдаемые текстуры оценивали согласно классификации В.Н. Шабалина и С.Н.Шатохиной (2001). Выделяли: базисные морфотипы -текстуры компенсированного гомеостаза (состояния нормы): сферолиты (мелкие, средние) и нитевидные; вторичные морфотипы - текстуры адаптационного гомеостаза: веерные, дендритные, полиморфные, игольчатые; атипичные морфотипы - текстуры декомпенсированногО гомеостаза, имеющие дефектность формы и отличающиеся от монохромных вторичных и базисных форм цветовой гаммой; состояние аморфизации - изотропные структуры, характеризующие выраженные нарушения механизмов гомеостаза.

Изучение морфологической картины гомогенатов внутренних органов проводили методом клиновидной дегидратации. Полученную

биожидкость в форме капли наносили на поверхность предметного стекла объемом 0,02 мл и высушивали при комнатной температуре в течение суток. Выявление образованных анизотропных структур осуществляли с использованием стереомикроскопа фирмы «Leica - MZ 12,5», оснащенного поляризационной насадкой и телевизионной камерой «Picxera». Морфологическое исследование биологических жидкостей проводилось на базе патоморфологической лаборатории ГУ НИИ по изучению лепры Минздрава РФ.

7. Гистологические и гистохимические методы анализа. Гистосрезы печени, мышц жабр, селезенки, сердца толщиной 7-10 микрон окрашивали гематоксилином и эозином, срезы головного мозга по Нисслю (Ромейс,1953;Меркулов,1969). Гистохимически выявленные липиды окрашивались Суданом IH-IV, рибонуклеопротеиды (РНП) - по Браше, активность ферментов - сукцинатдегидрогеназы (СДГ), лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и цитохромоксидазы (ЦО) определяли по общепринятым методикам (Пирс, 1962, Лилли,1969). Все препараты микроскопировали и фотографировали на микроскопе фирмы «ОНтрш»,стереомикроскопе фирмы «Leica - MZ 12.5», оснащенной телевизионной камерой «Picxera».

8. Статистические методы анализа. Для обработки данных исследований использованы методы вариационной статистики, парной корреляции (Лакин,1973; Плохинский,1973). Полученный цифровой материал обработан статистически на компьютерной программе D STAT на базе КаспНИРХ.

Всего обследовано 660 экземпляров карповых рыб, 70 экземпляров сеголетков осетра, 90 экземпляров каспийских бычков, 240 экземпляров рачков Daphnia magna S.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Зависимость степени влияния каспийской нефти на рыб от количественного состава ее компонентов в водной среде.

Каспийская нефть содержит различные углеводороды, среди которых до 15 наименований с конденсированными бензольными ядрами. По результатам качественного состава от 40до 80% нефть содержит 2-метил-нафтена и нафталина, остальные фракции от 0, 001 до 24%, считая от общего массового числа нефтяных углеводородов (НУ). Сырая нефть также содержит воду и другие неорганические соединения. При таком сложнейшем составе изучение влияния нефти на рыб сопряжено с большими трудностями. Все НУ различаются между собой

[

по стабильности и растворимости в воде, что будет существенно отражаться на динамике каспийской нефти во времени и в зависимости от экологических факторовб: температуры, жесткости воды, рН-среды, взвешенных веществ и т.д. ( Патин, 1997; Салманов, 1999; Рашутняк и др., 2000). Охватить все многообразие постоянно меняющейся экологической обстановки практически невозможно. В экологических исследованиях для преодоления этих трудностей обычно применяют методику биотестирования. В настоящей работе в качестве тест-объекга использовали одновозрастных десятидневных рачков Daphnia magna S.

Результаты опыта, проведенного в течение 30-ти суток опыта, отражают характер динамики выживаемости подопытных рачков в зависимости от времени влияния нефти, что, в сущности и отражает динамику влияния на них нефти. Так, в первую и вторую декады опыта гибель рачков начиналась на пятый день содержания их в опытных аквариумах, но в первую декаду гибель дафний составляла 90, а во вторую декаду 10%, считая от общего количества рачков. В третью декаду гибель дафний впервые зарегистрирована на второй день опыта, но уровень гибели не превышал 3%, общий уровень гибели к концу третьей декады составил 60%, тогда как в конце предыдущих периодов уровень ее достигал 90-100% .

Таким образом, максимально-острое влияние нефти наблюдалось в первые две декады, а в третью декаду токсичность нефти снизилась до сублетального уровня. Выявленный характер снижения токсичности предворительно можно считать как результат химической трансформации нефтяных углеводородов.

Важно сопоставить кинетику выживаемости рачков с количественной динамикой НУ в зависимости от экспозиции. Мы установили, что во вторую декаду, относительно первой уровень почти всех НУ увеличился, кроме нафталина, 2-бутилфталата и хризена, а в третью декаду уровень НУ заметно уменьшился по сравнению с первоначальным уровнем, кроме аценафтилена, аценафтена, флоурена и фенантрена.

Таким образом, полученные результаты выявили, во-первых, многосложный процесс распределения НУ в водной среде, а во-вторых, динамику в сторону снижения количественного содержания НУ в последнюю декаду опыта, что прямо связано с выживаемостью дафний, в результате инактивации нефти в течение 30-ти дней. При этом качественный состав нефти не изменился, следовательно, активация нефти происходит за счет снижения количественного изменения НУ в воде. Сопоставляя выживаемость дафний с количественной динамикой НУ, мы обнаружили различие интенсивности гибели рачков между первой и второй декадами. Общий уровень гибели дафний в эти два

периода отличается на 10%, а интенсивность гибели выше в первую декаду, чем во вторую, несмотря на заметное увеличение концентрации НУ в воде на 20 -ый день опыта. Такая динамика гибели рачков доказывает смещение токсичности НУ в направлении от острого до субэкстремального уровня. В последнюю декаду интенсивность и уровень гибели дафний заметно ниже и находились в прямой зависимости от количественного содержания НУ в воде. Полученные данные согласуются с известными результатами Молдавской и др.,(2003), где авторы отметили снижение токсичности Гербицида ялана для дафний по мере трансформации его с образованием метаболита.

Результаты количественного и качественного состава нефти в водных растворах, показали, что основными компонентами являются НУ с конденсированными бензольными ядрами. Количество их в воде подекадно изменяется непрямолинейно, а токсичность снижается со временем от острого до сублетального эффекта. Такой характер зависимости указывает на инактивацию нефти в воде, что, видимо, связано с процессами сорбции и биосорбции химической трансформации НУ.

Полученные данные были использованы в последующих, опытах в которых экспозицию действия нефти определяли по признакам явного изменения поведения карповых рыб, при сравнении с контролем. Основными экологическими критериями служили симптомы расстройства двигательно-пищевой активности в условиях сублетального влияния нефти на карпов. Во время явного снижения плавательной способности и отказа от корма у рыб брали пробы крови и органов для изучения изменений их метаболизма.

Результаты проведенного в течение 12 суток опыта с добавлением 50 и 100 мг/л нефти показали, что нефть оказывает прямое и опосредованное влияние на рыб, что проявлялось в виде ухудшения гидрохимического режима в аквариумах. Количественный уровень регистрируемых гидрохимических показателей значительно отличался от контроля в прямой зависимости от концентрации нефти (Р < 0,05)

Симптомы отравления проявлялись в виде изменений двигательной активности, ритме дыхания, а также ослабления оборонительной реакции. Заглатывание воздуха, потеря равновесия проявлялись на 8-ые сутки от начала эксперимента. При концентрации нефти 100мг/л рыбы больше находились у поверхности воды, постоянно заглатывая воздух. Частота дыхания увеличилась до 67, а в контроле - 60 раз в минуту. В последующие сутки появилась аритмия дыхания, а частота дыхательных движений в среднем составила 46 раз в минуту. В конце опыта, на 12-ые сутки, при концентрациях нефти 50 и 100мг/л

частота дыхания у рыб соответственно составила 46 и 32, а в контроле оставалась прежней - 60 раз в минуту. При этом уровень гемоглобина в крови подопытных рыб был значительно выше, чем в контроле. При концентрациях нефти 50 и 100 мг/л его количество составило 7,08 и 6,34, а в контроле 5,82%. В том же направлении изменялось количество общего белка и глюкозы, при снижении количества мочевины (Р<0,05). Существенных изменений скорости оседания эритроцитов и осмотического давления сыворотки крови в опыте по сравнению с контролем не наблюдалось. В печени подопытных рыб количество гликогена изменялось в прямой зависимости с увеличением концентрации нефти. Но по сравнению с контролем уровень гликогена при концентрации 50мг/л был ниже ( Р < 0,05), а при концентрации нефти равной - 100мг/л различия между опытом и контролем не обнаружены (Р.>0,05). В мышцах с увеличением концентрации нефти количество гликогена заметно снижалось, но по сравнению с контролем в опыте уровень гликогена значительно выше (Р < 0,05).

Таким образом, на 12-ый день влияния нефти наблюдалась зависимость количественного уровня показателей крови от концентрации нефти, исключением из этого является количество мочевины и осмотического давления крови. Фазность интоксикации рыб вполне сапоставима с состоянием животных под влиянием стресс-фактора (Лукъяненко, 1967; Строганов, 1971). Видимо, повышение уровня различных показателей крови карпа под влиянием нефти отражает фазу тревоги стресс- реакции животных в ответ на воздействие. С плавательной способностью тесно связаны процессы энергетического обмена в мышце, в частности, расход гликогена. Существенное превышение уровня гликогена в мышце подопытных рыб, особенно при концентрации нефти 50мг/л, по сравнению с контролем указывает на снижение его расхода под влиянием нефти, в результате заметного снижения двигательно-пшцевых реакций. В печени подопытных рыб расход гликогена значительно превышал таковой в контроле, наблюдалось более высокое содержание глюкозы в крови рыб под влиянием нефти при концентрации ее 50мг/л. Однако, в нормальных условиях в печени голодающих рыб отмечали высокое содержание гликогена и глюкозы в крови е1.а1., 1971).Видимо, кратковременное голодание при токсикозе вызывает иной характер метаболизма в печени и, кроме того, кинетика расхода гликогена, как и других показателей, зависит от фазы интоксикации.

В изучении механизма действия различных доз нефти большое значение имеет изучение реакций перекисного окисления липидов (ПОЛ). Нарушение ПОЛ прежде всего приводит к накоплению

различных продуктов переокисления до уровня вредного влияния на общий процесс метаболизма и, в частности, на целостность мембран (Бурлакова. 1977; Воробьев, 1993), что имеет большое значение в изучении механизма действия не только экзотоксикантов, но и превышающий оптимальный уровень экстрактивных веществ. Количественные показатели перекисного окисления липидов при влиянии концентрации нефти 50мг/л были ниже относительно контроля (Р < 0,05). В мышцах по мере повышения содержания нефти содержание АсПОЛ и МДА были достоверно (Р 5- 0,05) выше контроля. Показатели ПОЛ в печени при концентрации нефти 50мг/л были меньше, а при 1 ООмг/л несколько больше их аналогов в контроле ( Р < 0,05).

Мы установили, что , все показатели ПОЛ изменялись в зависимости от концентрации нефти в воде, а не от типа органов. В скелетной мышце подопытных рыб скорость ПОЛ ниже по сравнению с контролем (Р < 0,05) и это логически приводит к увеличению МДА как конечного продукта переокисления при концентрации нефти 1 ООмг/л, чего не наблюдалось в другом опыте при концентрации 50мг/л нефти. Возможно, при максимальной концентрации нефти (1 ООмг/л) нарушается механизм инактивации альдегида. Подобный характер изменения ПОЛ отмечен и в печени опытных рыб, следовательно, в пределах заданных концентраций нефти процессы переокисления липидов изменяются без особенностей для обоих типов органов.

Как указывалось выше, пробы на анализ брали спустя 12 дней, когда рыбы не реагировали на пишу, что прямо связано с понижением двигательной активности. Известны факты длительного голодания рыб в природе и в лабораторных условиях. Этим представители ихтиофауны существенно отличаются от теплокровных животных. Под влиянием нефти непродолжительное голодание, безусловно, не может существенно отразиться на выживаемости, но в данном случае голодание рассматривается как следствие токсикоза, усугубляющее состояние организма.

В связи с угнетением двигательной активности рыб в опыте и с последующим отказом их от корма представляют интерес результаты анализа активности ферментов кишечника. Полученные данные показали, что с увеличением концентрации нефти активность всех изученных ферментов кишечника изменялась и была достоверно выше, чем в контроле.

Характер изменения активности ферментов в кишечнике подопытных карповых рыб имеет сходство с таковым по реакции ПОЛ. Выявлено определенное несоответствие активности щелочной фосфатазы и а - амилазы. Из литературных источников известно (Уголев, Кузмин,1991), что у некоторых видов рыб оптимальную активность

амилазы наблюдали при рН=6,8, тогда как под влиянием нефти у рыб повышение активности щелочной фосфатазы свидетельствует о щелочной среде. Такое соотношение активности этих двух ферментов предварительно можно считать следствием влияния нефти. В различных отделах кишечника активность кислой и щелочной фосфотазы различается в соответствии с последовательностью переваривания пищи. Поэтому отмеченное повышение амилазы и щелочной фосфотазы у рыб под влиянием нефти, возможно, связано не с пищеварением, а как результат воздействия стресс-фактора и развития токсикоза.

Важными для оценки степени токсичности веществ является возникновение деструктивных явлений в тканях и, в частности, клеток крови.

У подопытных и контрольных рыб деструктивные изменения клеток красной крови не зарегистрированы, но в опыте в отличие от контроля, количество молодых эритроцитов было больше, чем зрелых клеток , что, вероятно, связанно с активизацией процесса кроветворения. Кроме того, в опыте при концентрации нефти 50мг/л наблюдали лимфоцитарный лейкоз, а при 100мг/л отмечалась лейкопения. В данном случае вновь прослеживается зависимость этих изменений от концентрации нефти. Явления деструкции в наиболее тяжелой форме (локальный некроз печени) - обнаружены у рыб при максимальной концентрации нефти.

Несмотря на прогрессирующее ослабление двигательно-пшцевых реакций у подопытных рыб в результате ухудшающихся экологических условий (под влиянием нефти) наблюдалась различная направленность количественных показателей крови и метаболизма в печени и мышце по сравнению с контролем. Те показатели, уровень которых в опыте выше, чем в контроле, мы объясняем эколого-адаптационной реакцией организма, но с момента полного отказа рыб от корма компенсаторные процессы видимо не имеют позитивного значения. Такое предположение подтвердилось и в последующих опытах.

Обратимость нарушений, вызванных изменениями экологической обстановки - действием нефти, возможно, ожидать в паренхиматозных органах и тканях, которым свойственна пролифирация клеточных элементов (печень, почки, селезенка, мышцы и т.д.) В других тканях, в частности, нервной не все клеточные элементы, например, мотонейроны обладают пролиферацией. В связи с этим представляют интерес результаты по изучению проницаемости гисто-энцефалического барьера (ГЭБ) в соответствии с деструктивными изменениями нейронов двигательных центров.

Нарушение гистогематич еских барьеров (ГТБ) приводит к нарушению трофики и накоплению эндотоксикантов в крови и тканях

органов. Эти нарушения особенно опасны для мозга и ЦНС в целом, т.к. это ведет к функциональному расстройству не только отделов ЦНС, но и других систем организма.

Результаты проведенных экологическихопытов показали, что при воздействии нефти у рыб снижается проницаемость нейтрального красного через ГГБ печени, дорзальных мышц и через ГЭБ по сравнению с контролем. В данном случае витальный краситель служит индикатором изменения проницаемости ГГБ и ГЭБ , но не отвечает на вопрос, как это влияет на проницаемость вредных и необходимых для питания органов, тканей и мозга метаболитов. Чтобы оценить последствия снижения проницаемости ГГБ и в частности ГЭБ, параллельно проведен патогистологический анализ печени, дорзальных мышц, среднего и продолговатого отделов головного мозга и каудальной части спинного мозга.

При гистологическом исследовании печени опытных рыб отмечались крупные кровоизлияния, обширные участки некротизированной паренхимы. Сохранившиеся гепатоциты часто имели деформированные ядра и вакуолизированную цитоплазму. При гистологическом исследовании дорзальных мышц опытной группы обнаружены крупные участки мышечных волокон с нарушенным тинкториальным эффектом и выраженными деструктивными явлениями в виде распада некоторых волокон на отдельные фрагменты. Наблюдались отдельные участки некроза.

Результаты анализа мозга позволили установить, что у рыб в опыте мотонейроны всех отделов, включая сюда и двигательные ядра среднего мозга, находятся в состоянии деструкции. Наиболее тяжелые изменения обнаружены в виде некробиоза и некроза нервных клеток. Заслуживает внимание факт эктопии ядер и кйриорексиса различной степени. В большинстве случаев базофильное вещество не выявлялось, (хромофобия), что может быть связано с редукцией РНК (Теплый и др.,1965; Ярыпш и др. 1973). В других случаях отмечены, аксональная реакция и тигролиз. Все приведенные данные соответствуют о снижении проницаемости красителя через ГГБ и ГЭБ с патологическими нарушениями в органах и отделах мозга.

Вместе с тем полученные результаты открывают возможность для дальнейших исследований в изучении различных вопросов и, в частности, вопроса материального накопления НУ в организме рыб.

Подытоживая изложенные выше результаты экспериментов, обращает на себя внимание разная направленность количественных изменений показателей дыхательной функции крови и метаболизма под влиянием нефти на фоне выраженного угнетения двигательно-пшцевых реакций у рыб. Снижение двигательной активности в конечном итоге

приводит к потере плавательной способности и в предлетальный период это прямо связано с дистрофией, деструктивными и необратимыми явлениями мотонейронов. Рассматривая весь комплекс симптомов вызванных влиянием нефти как стресс - фактора среды, следует отметить, что последовательность их проявления начинается с нарушений поведенческих двигательных актов и последующей утратой реакций на корм. Остальные показатели, отражающие предлетальное состояние рыб, следует оценивать как следствие прямого повреждающего действия нефти. Утрата реакций на корм при температуре 20° С и более градусов для рыб в итоге приводит к истощению и гибели, а под влиянием нефти негативные последствия для организма прогрессируют еще быстрее при накоплении вредных продуктов метаболизма. В связи с неопределенностью функционального значения компенсаторных реакций важно рассмотреть количественную динамику различных показателей в зависимости от времени действия нефти. Кинетика этих показателей в предшествующий период, а также в более поздние сроки экспозиции представлена в следующих разделах настоящей работы.

2. Кинетика физиолого-биохимических реакций организма рыб в зависимости от концентрации и времени действия нефти

Количество влаги в мышцах годовиков карпа на 10-ые сутки эксперимента составило 6,02 % при 50мг/л и 4,2% при 100мг/л нефти. На 20-ые сутки при влиянии минимальной дозы стресс - фактора нефти количество влаги было близко к контролю, а при максимальной (100мг/л) - чуть ниже такового. На последние сутки эксперимента количество влаги при воздействии 50мг/л нефти снизилось, относительно контроля и составило 5.9, а при 100мг/л - возросло, возросло до 8,2%.

При обеих концентрациях нефти количество общего белка в сыворотке у рыб в опыте был ниже, чем в контроле в различные периоды времени. В зависимости от концентрации нефти количество общего белка в сыворотке изменялось неоднозначно. Самый низкий уровень белка, равный 17,3г/л, отмечен в опыте при концентрации нефти в воде равной 50мг/л на 20-ые сутки, а в последующие сутки (ЗОсуток) он вновь увеличился до 33,2 г/л. При концентрации нефти 100мг/л в сыворотке крови количество белка неуклонно снижалось. Таким образом, независимо от концентрации нефти в воде уровень сывороточных белков у рыб снижается по сравнению с контролем, но характер их количественной динамики зависит от дозы и времени влияния стресс - фактора.

В сопоставлении с результатами количественной динамики общего белка и мочевины, в первые три периода времени интоксикации при обеих концентрациях нефти, уровень мочевины изменялся незначительно и только в последний период времени (ЗОсуток), ее количество возросло в 3 и более раз относительно контроля (Р < 0,05). Главным итогом анализа кинетики уровня белка и мочевины можно считать накопление мочевины, усугубляющее состояние рыб в результате содержания их в сублетальных условиях беспрерывного действия нефти. Этому предшествовало прекращение внешнего источника пополнения белка в связи с отказом рыб от пищи и снижением его количества к концу опыта - на 30-ый день. Кроме этого сам факт накопления мочевины указывает на расстройство систем регулирующих утилизацию и выведение ее го организма, что в условиях развития экзотоксикоза усиливает его развитие.

Деструктивные изменения в дорзальной мышце являются одним из прямых доказательств снижения общей двигательной активности и плавательной способности рыб. В функциональном отношении отмечены изменения компенсаторного значения, например, увеличение количества креатинина, при концентрации нефти ЮОмг/л, который является продуктом синтеза ферментов, участвующих в процессе сократительной способности скелетной мускулатуры. Но характер количественного изменения, как видно по результатам анализа таблицы 1, зависит от концентрации нефти в воде.

На 10-е сутки при обеих концентрациях нефти (50 и 100мг/л) уровень липидов в сыворотке крови рыб в несколько раз был выше, чем в контроле, а на 20-ые сутки количество липидов уменьшилось, но оставалось выше контрольного уровня ( Р < 0,05). Более выраженное увеличение липидов наблюдалось при концентрации нефти 50мг/л, это объясняется защитной функцией липидов в момент расстройства двигательных реакций под влиянием сублетального влияния нефти. Компенсаторно-приспособительное значение выявлено и относительно глюкозы, уровень которой в опыте на 20-е сутки при обеих концентрациях нефти был значительно выше контроля (Р < 0,05).

Все перечисленные количественные изменения метаболитов сыворотки крови карпов под влиянием нефти наблюдались через 20 и 30 суток опыта на фоне снижения уровня гемоглобина в крови. В предшествующий период времени величина гемоглобина в опьгге превышала таковую в контроле. Такая динамика вновь подтверждает необходимость многоразового анализа по мере экспозиции интоксикации.

Из всех показателей, отражающих метаболизм рыб под влиянием нефти, существенное место занимают данные осмотического давления крови, относительное постоянство которого является важным условием поддержания общего гомеостаза организма в конкретных экологических условиях. Снижение уровня осмотического давления в крови подопытных карпов произошло, как и по другим показателям, на 20-е и продолжало снижаться в последующие сутки. Смещение осмотического давления в любую сторону негативно отражается и на гемодинамике и осмотической резистентности форменных элементов крови.

По количественному содержанию глюкозы в крови рыб можно лишь предположительно судить о скорости гидролиза запасов гликогена в печени. По опубликованным данным известно, что у голодающих рыб и в случаях различного рациона кормления высокое содержание глюкозы наблюдается за счет неоглюкогенеза из аминокислот при неизменном уровне запасного гликогена (Freeman N.C.,1973; Donaldson E.M.JDye N.M.,1975; Лукьяненко,1983, Миронов, 1985). В наших экспериментах под влиянием нефти в печени карпа запасы гликогена уменьшались в каждый из периодов времени, но наиболее выраженный расход его запасов отмечен при концентрации нефти 50мг/л, а по срокам интоксикации на 30-ые сутки. Такая динамика расхода гликогена печени, как и других показателей, зависит от времени действия, так и от дозировки изучаемого стресс - фактора.

В мышцах характер расхода гликогена совпадает с таковым в печени при концентрации нефти равной 50мг/л. При максимальной концентрации нефти 100мг/л после 20-ые суток экспозиции, уровень гликогена был достоверно выше контроля ( Р < 0,05). Следовательно, в зависимости от концентрации нефти в скелетной мышце метаболизм гликогена изменяется в различном направлении, что, возможно, зависит от изменчивости активности ферментов, участвующих в реакциях глюкогенеза и гликогенеза в скелетной мускулатуре (Панин, 1983; Воробьев, 1993; Каниева, 2004).

Давая общую оценку метаболизма можно отметить, что кинетика гликолиза и расхода общего белка в организме карпа под влиянием нефти развивается в сторону снижения резервов протеидов и гликогена в организме гидробионтов.

Исключением из этого является количество липидов в мышцах, которое, как уже было отмечено, снижалось на 20-ые сутки, но оставалось на уровне выше контроля. В связи с этим мы проанализировали перекисное окисление липидов (ПОЛ). В мышцах все три показателя ПОЛ в количественном отношении изменялись в зависимости от концентрации и времени действия нефти на рыб.

Например, уровень спонтанного окисления липидов (СпПОЛ) в опыте был выше, чем в контроле (Р < 0,05). Исключение составляло снижение скорости СпПОЛ в мышцах карпа на 30-е сутки при концентрации нефти 50мг/л (7,02нмоль/час), что в меньшей степени проявлялось и при максимальной концентрации нефти, равной 100мг/л (11,23нмоль/час). Несколько иначе изменялась скорость аскорбатзависимого ПОЛ, уровень которого в первые 10 суток значительно повышался при обеих дозах нефти до 76,87 и 63,98 нмоль/час ( Р < 0 0,05), а в последующие сутки АсПОЛ заметно снижался до 26,60 и 30,73 нмоль/час, соответственно, относительно контроля. Величина содержания малоновогодиальдегида (МДА), как конечного продукта переокисления, в первые 10 суток при 50мг/л (1,79) и особенно на 30 сутки при обеих дозах нефти заметно была ниже (1,66 и 1,05), соответственно, контрольного уровня, составившая 2,74 нмоль/час. Однако, при концентрации нефти 50мг/л на 20-ые сутки уровень МДА возрастал в 4 раза - 8,87 нмоль/час, относительно контроля. Почти столь же резкое увеличение МДА наблюдали при концентрации нефти 100мг/л на 10-ые -6,10 и 20-ые сутки-3.60 нмоль/час.

Сопоставляя данные количественной динамики ПОЛ с повышенным уровнем липидов в мышце, мы установили, что скорость всех видов ПОЛ (за исключением МДА), к концу опыта заметно снижается относительно контроля. На этом основании можно утверждать о высоком уровне АОА в организме подопытных рыб, обеспечивающем регуляцию процесса ПОЛ.

За редким исключением аналогичная динамика ПОЛ развивалась и р. печени. Вероятно, даже в прсдлстальном состоянии, активность антиоксидантов обеспечивает защиту от деструкции клеток, а, возможно, и от денатурации активных метаболитов, включая ферменты, гормоны, что и создает условия для обратимости интоксикации.

3. Влияние нефти на морфофизиологические показатели двухлеток карпа.

Несмотря на спонтанный и в ряде случаев парадоксальный характер количественных изменений некоторых отдельных показателей метаболических реакций, которые представлены в предыдущем разделе, нами выявлено неуклонное снижение резервов белков и гликогена при утрате плавательной способности рыб, если на них влияют определенные количества нефти в течение изучаемых временных интервалов. Для оценки степени воспроизводимости полученных данных был проведен специальный опыт, где использованы двухлетки карпа под влиянием нефти в сублетальной дозе равной 150мг/л. В течение 30 суток до

момента утраты плавательной способности рыб периодически регистрировали данные анализа крови и внутренних органов.

Под влиянием нефти у рыб в течение 30-ти суток опыта развивается гипоксия, как результат изменений качественного состояния клеток красной крови. К основным признакам, прежде всего, относится базофшхия цитоплазмы эритроцитов, анизоцитоз, пойкилоцитоз указывающие на изменение эластичности эритроцитов, их неравномерное распределение на мазке и агглютинация.

Микроскопический анализ мазков крови позволил установить также изменения лейкоформулы, которые обычно относят к воспалительным процессам. Это, прежде всего, выражалось в виде увеличения лимфоцитов к концу опыта и снижении процентного содержания гранулоцитов в 1,5-2 раза ниже, чем в контроле (Р < 0,05).

По сравнению с результатами предыдущих опытов в сыворотке крови карпов уровень белка понижался относительно контроля первые 10 суток, а в последующие периоды он увеличивался, а на 30-ые сутки был в 1, 3 раза выше контроля ( Р <0,05). Несмотря на увеличение общего белка в сыворотке количество мочевины возрастало, и на 30-ые сутки уровень ее был в 2 раза больше, чем в контроле, что согласуется с данными предыдущего опыта. Аналогичная картина наблюдалось и по характеру количественной динамики креатинина, достигшего уровня в 5 раз меньшего, чем в контроле на 30-ые сутки. В соответствии с увеличением общего количества белка в сыворотке увеличился и уровень коллоидной стабильности белков (КСБ) (Р < 0,05).

Таким образом, кроме количественной динамики белка, характер изменения других показателей в настоящем опыте согласуются с результатами предыдущего эксперимента.

Известно, что морфология текстур, формирующихся при фазовых переходах биологических жидкостей в процессе высушивания, отражает состояние организма и изменяется при развитии патологических процессов. Эти изменения характеризуют химические сдвиги, связанные с нарушением нейрогуморальной регуляции и функции органов и систем.. В связи с этим морфотесты в последнее время достаточно широко используются в динамической оценке состояния организма при воздействии эндо- и экзогенных факторов среды (Кунгуров Н.В. с соавт. ,1997, Шабалин В.Н.ДЫатохина С.Н., 2001).

Принимая во внимание информационное значение структур твердой фазы биологических жидкостей, мы провели морфологический анализ текстур сыворотки крови рыб в аналитической ячейке методом поляризационной микроскопии при воздействии сырой нефти.

Результаты анализа структурных образований сыворотки крови показали, что имеются определенные отличия в формировании анизотропных текстур биожидкости, полученной от контрольных и экспериментальных особей.

При просмотре в поляризованном свете оптических ячеек, приготовленных из сыворотки крови рыб контрольной группы, было обнаружено преимущественное содержание базисных форм кристаллов, в виде сферолитов, на фоне которых регистрировалось незначительное количество вторичных текстур (рис.1 а). В сыворотке крови рыб через 10 суток эксперимента отмечалось увеличение по сравнению с контролем содержания вторичных дендритных и мелких полиморфных морфотипов почти в 5 раз (рис. 16), при одновременном уменьшении числа базисных в 3,2 раза и появления атипичных цветных, что связывают с напряженностью механизмов адаптации (Минц,1984; Шабалин с соавт., 1997; 2000). Влияние нефти в течение 20-30 суток привело к увеличению вторичных морфотипов в 4,1 и 4,5 раза и нарастанию числа атипичных цветных кристаллов в сыворотке крови рыб в 21,4 и 23,6 раза, соответственно, относительно контрольных (рис.1 в,г)

Таким образом, при воздействии нефти происходит изменение в соотношении базисных, вторичных форм и появление атипичных текстур. При этом отличительной особенностью морфологической картины сыворотки крови являлось наличие цветных структур, спектр красок которых находился в зависимости от уровня и времени действия стресс-фактора. Изменения морфоструктур в виде атипичных кристаллов соотносятся с отклонениями биохимических показателей, очевидно, являются следствием конформации различных белков

Данное предположение подтверждается результатами корреляционного анализа. Для установления силы связи между данными физиолого-биохимических и структурных показателей применяли метод парной корреляции. Установлена обратная зависимость уровня базисных морфотипов от величины общего белка, мочевины и КСБ в сыворотке крови рыб при 20-ти суточной экспозиции, где сила связи составила -0,69;-0,58 и -0,79. При 30-ти суточной экспозиции зависимость уровня базисных морфотипов от величины КСБ составила -0,60 соответственно. Важно отметить высокую положительную зависимость вторичных морфотипов сыворотки крови от тех же биохимических показателей (белка, мочевины, КСБ), где коэффициент корреляции составил 0,77; 0,54 и 0.67 соответственно при 20-ти «уточной экспозиции и 0,59 при 30-ти суточной экспозиции.

Подытоживая данные корреляционного анализа, установлено изменение количества базисных морфотипов в обратной зависимости от количественного уровня белка, мочевины и КСБ, а уровень базисных морфотипов изменяется в прямой зависимости от содержания тех же показателей.

С увеличением мочевины в сыворотке крови двухлеток карпа отмечено и снижение активности ферментов цитохромоксидазы (ЦО), участвующей в конечных реакциях окисления, и лактатдегидрогеназы (ЛДГ), фермента анаэробного гликолиза. Активность этих ферментов в мышце и печени рыб в различные периоды времени также как и в сыворотке (ЛДГ) была ниже, чем в контроле.

Исключение составило увеличение активности ЛДГ в печени на 1-ые и 20-ые сутки опыта, соответственно в 1,5 и 1.05 раза, относительно контроля. Снижение уровня окисления и анаэробного гликолиза в мышце и печени в последний период времени эксперимента хорошо согласуется с явной утратой плавательной способности подопытных рыб.

а - базисные

б - вторичные

в - вторичные и

атипичный кристал

цветные атипичные текстуры

Рис. 1 Морфотипы сыворотки крови карпа а- контроль; 6-10 суток эксперимента; в-20 суток эксперимента; г- 30 суток экперимента. Ув. 50

В этой связи представляет интерес данные анализа количества молочной кислоты, глюкозы и гликогена в печени и в мышцах. Установлено сходство количественной динамики этих метаболитов. Как известно, недоокисление молочной кислоты в мышце приводит к угнетению ее сократительной деятельности, что внешне проявлялось в опытах с карпом в виде снижения двигательно-шпцевой активности, особенно в последние два периода опыта (20 и 30-ые сутки). Кроме того, мы установили компенсирующий эффект в метаболизме гликогена, запасы которого снижались и соответственно увеличивалось количество глюкозы не только в сыворотке крови, но и в печени, мышце и мозге

4. Изменения перекисного окисления липидов (ПОЛ) в организме двухлеток карпа в зависимости от времени воздействия

каспийскбй нефти.

Развитие внешних симптомов интоксикации карпов под влиянием нефти находит свое объяснение в динамике ПОЛ и антиокислительной активности (АОА). В мышце наблюдалось снижение АОА в зависимости от экспозиции действия нефти, что, как правило, происходило в соответствии с увеличением скорости ПОЛ, что также отразилось на увеличении конечного продукта переокисления МДА. Такое количественное соотношение этих двух показателей обычно приводит к накоплению перекисных соединений (Владимиров и др., 1972; Журавлев, 1975; Бурлакова, 1977). В печени наблюдалась иная зависимость, а именно, с увеличением уровня АОА снижалась скорость ПОЛ. Эти различия дают основание полагать о меньшей устойчивости системы АОА мышц по сравнению с печенью. СпПОЛ и АсПОЛ печени уменьшился в два раза относительно контроля. МДА в печени падало, от начала к концу опыта и было меньше контроля (Р < 0,05), а в мышцах, наблюдалась обратная тенденция.

Накопление мочевины в организме подопытных рыб отразилось на проницаемости гистогематических барьеров внутренних органов. С изменением проницаемости на фоне деструктивных процессов в тканях, видимо, токсикоз

выступает в новую фазу своего развития разрушающего характера. В опыте с 2-х летками карпа подтвердились данные, полученные нами на годовиках карпа. Увеличение проницаемости ГЭБ зарегистрированы и по проницаемости ГТБ печени и мышцы.

Проведенный анализ проницаемости ГТБ и ГЭБ разных органов и тканей (мозг, печень, мышцы) двухлеток карпа показал нам реальные изменения функциональных особенностей проницаемости клеточных

структур в условиях экспериментальных неблагоприятных воздействий каспийской нефти.

При исследовании гомогенатов мышц, подвергшихся действию нефти в течение 10 суток в поляризованном свете в структуре фаций преобладали монохромные анизотропные кристаллы, на фоне которых регистрировались единичные цветные образования. В гомогенатах печени рыб той же экспозиции поляризационно-оптическим методом установлено наличие большого количества цветных анизотропных образований. При исследовании гомогенатов мышц через 20 суток эксперимента в поляризованном свете в структуре фаций около 40% наблюдаемых анизотропных образований имели цветные вставки. В структуре фаций гомогенатов печени в поляризованном свете около 75% наблюдаемых анизотропных образований отличались различной цветовой гаммой.

Поляризационно-микроскопическое исследование гомогенатов мышц 30-ти суточной экспозиции позволило установить, что большая часть поверхности фаций содержала цветные анизотропные образования. При исследовании гомогенатов печени в поляризованном свете практически вся поверхность фаций заполнена цветными кристаллами.

При исследовании гомогенатов печени в поляризованном свете практически вся поверхность фаций заполнена цветными кристаллами.

Таким образом, проведенные экспериментальные работы, позволили получить данные, свидетельствующие о суммации действия экзо-, и эндотоксикантов. Такой адаптивный характер интоксикации протекает на фоне компенсаторно-защишых реакций, но эффект которых утрачивает свое позитивное значение для организма вследствие развития необратимых процессов в виде деструкции мотонейронов в отделах ЦНС подопытных рыб.

5. Видовые различия устойчивости рыб к влиянию каспийской нефти

С целью изучения адаптационных возможностей рыб в настоящей работе были использованы три вида рыб: годовики карася (Carassius auratus L.), годовики карпа (Cyprinus carpió L.), находящиеся под влиянием 50 мг/л, и сеголетки осетра (Asipenser guldenstaedti Brandt) в условиях содержания нефти в воде i мг/л. Устойчивость перечисленных видов к нефти оценивали по уровню показателей физиологии дыхания, а также по изменениям количественного содержания метаболитов,

отражающих белковый и углеводный обмен, с учетом процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ).

Регистрация всех эколого-физиологических показателей осуществлялась в различные периоды времени, что позволяло смоделировать кинетику развития процесса в условиях влияния нефти на рыб.

На 10-ые сутки в опыте и в контроле у карася гемоглобин составил 2,5; 2,06. а на 30-ые сутки в несколько раз увеличился уровень гемоглобина и достиг 11,6 а в контроле в тот же период составил 2,17 г%. При этом на 30-е сутки достоверное снижение осмотической резистентности эритроцитов отмечено в опыте относительно контроля -8,6 и 10,75 соответственно (Р < 0,05). Резистентность эритроцитов изменялась в прямой зависимости от осмотического давления сыворотки крови, которое в опыте составило в тот же период времени 263, против контроля - 292 моль/кг. Увеличение уровня гемоглобина на 30-ые сутки, видимо, отразилось на снижении общего белка. Относительно контроля его количество уменьшилось более, чем в 2 раза Соответственно этому заметно возрос уровень мочевины до 63,4 и креатина - 274 против контроля - 5.0ммоль/, 192 моль/л. (Р £ 0,05) Высокая скорость окисления белков, видимо приводит к повышенному содержанию мочевины и креатинина несмотря на гипероксию. О скорости гликолиза можно судить по уровню глюкозы в крови В контроле количество глюкозы почти не изменилось по мере увеличения экспозиции. В опыте у рыб содержание глюкозы увеличивалось и, на 30-ые сутки величина ее достигла 15,5, против контроля -8.3ммоль/л (Р < 0,05).

С увеличением глюкозы в крови, по мере длительности опыта, уровень гликогена в печени уменьшалось и на 30-ыс сутки, кол>псство его составило 2872, а в контроле 4786 М1/%. В скелетных мышцах интактных рыб гликоген не расходовался. Уровень его в опыте возрастал, и, на 30-ые сутки достиг величины 1096 против контроля -52.4 мг%. Таким образом, скорость распада гликогена ¡¡од влиянием нефти заметно выше в печени, что, очевидно, и является причиной увеличения глюкозы в крови.

В мышце 1ликоген не расходуется, и в значительной степени накапливается. Возможно, это отражается на сократительной активности белков и п конечном итоге на снижении двигательной активности рыб в последний период экспозиции.

На сократительную деятельность мышц определенное влияние оказывают продукты переокисления липидов, о чем можно судить по уровню ПОЛ. При воздействии нефти в печени, через 10 дней уровень ПОЛ понижался, а затем на 30-ые сутки увеличивался относительно контроля.

Увеличение скорости ПОЛ происходило при одновременном увеличении количества МДА - конечного продукта переокисления липидов.

Совершенно в другом направлении изменялись показатели ПОЛ в мышце. Спустя первые 10 суток опыта скорость переокисления и уровень МДА заметно увеличивались по сравнению с контролем, а через 30 суток уровень всех показателей ПОЛ был значительно ниже, чем в контроле. Такая динамика количественных показателей ПОЛ, вероятно, объясняется изменением АОА. Следовательно, даже в предлетальный период в скелетной мышце рыб возможен компенсаторный эффект. На примере теплокровных животных это доказано с помощью введения животным антиоксиданта токоферола, после чего заметно восстанавливалось сокращение мышц (Теплый, 1974).

В связи с этим в изучении физиологического механизма действия стресс-факторов на примере различных доз нефти определение симптомов, отражающих критическое состояние организма, возможно только на основе сопоставительного анализа внутренних факторов в конфетных экологических условиях с физиологией внешнего поведения рыб. Полученные результаты также показали различия количественной динамики регистрируемых физиолого-биохимических показателей в зависимости от специализации внутренних органов. К важным итогам проведенного опыта следует отнести обнаруженную гипероксию, показателем которой является уровень гемоглобина в крови подопытных рыб.

Прослеживая динамику количества белка и мочевины в сыворотке крови подопытных карпов, мы выяснили этот же характер изменений, что и в кинетике уровня этих показателей у подопытных карасей, при одинаковой концентрации нефти, равной 50мг/л.

Сходство количественных данных отмечено и по кинетике осмотического давления, которое увеличилось первые 2 периода, а на 20 и 30-ые сутки было, ниже - 248; 206 соответственно, против контроля -270,5 ммоль/л (Р < 0,05). Наиболее выраженное сходство с карасем наблюдалось по динамике снижения гликогена в печени, уровень его понизился на 30-ый день до 229,8, против контроля - 2680,6 мг/%, а в мышце отмечен высокий уровень расхода гликогена.

Основной вывод по анализу ПОЛ заключается в том, что в момент явной потери двигательно-пищевых реакций рыб, которая проявляются под влиянием нефти через 30 суток, все показатели этого процесса у подопытных рыб в печени и в мышце ниже, чем в контроле (Р < 0,05).

Несмотря на общее сходство кинетики обмена веществ, по уровню насыщения крови гемоглобином оба вида резко отличаются между собой, как и другие показатели, количественные различия дыхательного пигмента в наибольшей степени проявлялись в последний период

времени при полном расстройстве двигательно-пищевых реакций. Отличительные признаки показателей лейкоформулы крови карася и карпа выражались в виде повышения количества эозинофилов и моноцитов, что обычно у теплокровных животных связывают как с повышением, так и с понижением лимфоцитов, что характеризует уровень развития неспецифических иммунных реакций. Кроме того, моноцитоз в крови карасей наблюдался на фоне резкого увеличения бластоцитов, что свидетельствует о функциональной активности кроветворения. Общим для обоих видов является лимфоцитоз с понижением уровня гранулоцитов, за исключением особенностей, отмеченных по результатам анализа крови карасей.

Для более полного изучения видовых различий действия нефти на рыб разных сублетальных концентраций нефти также использовали сеголетков русского осетра. Этот вид рыб достаточно широко распространен в Волго-Каспийском регионе, в т.ч. и в районе планируемой добычи нефти на Северном Каспии. По данным результатов наших исследований установлено, что концентрация нефти выше 1 мг/л для него оказались летальными, что по устойчивости в 50 раз ниже, чем у карпа и карася. Следовательно, можно утверждать, что осетр экологически менее устойчив к нефтяному загрязнению, чем карп, по токсикорезистентности, установленной еще Н.С.Строгановым (1968;1971).

Например, частота дыхания у сеголетков осетра плавно нарастала, а у исследованных нами обоих видов карповых этот показатель носил фазный характер. Компенсация дыхательной функции у карпа происходит путем повышения гемоглобина в крови, а у осетра - за счет увеличения частоты внешнего дыхания, при понижении уровня гемоглобина. Фазность интоксикации носит неспецифичный характер, что соответствует теории Селье (1960), который в стереотипном ответе организма на воздействие любого стресс-фактора выделяет три стадии: тревоги, адаптации и истощения.

Мы считаем, что развитие интоксикации у рыб в конце опыта завершается явно выраженными изменениями в стереотипе поведения, которые в виде нарушения двигательно-пищевых реакций следует рассматривать как фазу истощения т-за отсутствия реакции на корм с последующей интенсификацией развития токсикоза.

Метаболические реакции не всегда изменялись в соответствии с характером кинетики ритма дыхания, который у осетра также отличался от карпа. Видимо, постепенное увеличение частоты дыхания осетра в течение всего срока интоксикации объясняется его экологической и природной оксифильностыо по сравнению с карпом.

В последний день эксперимента поведение осетра не отличалось от таковых у карпа, и в сыворотке обоих видов рыб количество общего белка было выше по сравнению с контролем, но скорость белкового обмена, судя по уровню мочевины, значительно выше у карпа, чем у осетра.

Таким образом, увеличение белка в сыворотке крови на этапе существенного снижения плавательной способности обоих видов рыб, сопровождается у осетра повышенным количеством мочевины, определенная концентрация которой может вызвать эндотоксикоз. В этой связи критерии токсичности веществ, отражающие изменения метаболических процессов в организме видоспецифичны.

Видовые различия проявлялись и по уровню гемоглобина, у карпа при обеих концентрациях количество дыхательного пигмента выше, а у осетра ниже, чем в контроле. Эти различия имеют большое значение при оценке негативных последствий для рыб в районах возможного нефтяного загрязнения.

6. Влияние нефти на белковый обмен рыб и на индивидуальную резистентность рыб

Научная проблема по нефтяному загрязнению заключается в определении пределов эколого-физиологической устойчивости организма рыб, в которых возможна адаптация к изменяющимся экологическим условиям, что в итоге позволяет судить об устойчивости популяции, которая дифференцируется на упругую и резистентную (Одум,1982; Алтухов, 1983). Одним из подходов подобных исследований является выявление белков- маркеров индивидуальной физиологической адаптации организма к условиям (стресс-факторам) внешней среды

С этой целью в настоящей работе использовали метод электрофоретического анализа сыворотки крови карпов, которые содержали в аквариумах с добавлением 150 мг/л нефти. В итоге проведенных в течение 30 суток опытов установлено увеличение гетерогенности фракционного состава белков (рис.2). Белковый состав сыворотки крови интактных карпов представлен пятью фракциями, а именно преальбумином, альбумином, a-, (J- и у-глобулинами. В свою очередь а-, |3- и у - глобулины также состоят из нескольких компонентов. Индивидуальные колебания общего числа белковых компонентов у карпа составили 17-18.

Под влиянием нефти выявлена динамика качественного состава белков в сыворотке крови рыб, особенностью которых является их количественная направленность, как по сравнению с интактными рыбами, так и в зависимости от времени действия нефти. В то же время

выявлена индивидуальная изменчивость в дифференциации отдельных фракций белков. Число компонентов Р- глобулинов у отдельных опытных рыб, (на 30-ые сутки) составило 4, а количество а - глобулинов на 10-ые и 20-ые сутки эксперимента, колебалось в пределах 13-14, соответственно.

Фактические данные эксперимента фракционного состава сыворотки крови подопытных рыб важно было сопоставить с индивидуальной устойчивостью рыб при воздействии на них нефти. С этой целью был проведен эксперимент с двухлетками карпа для выявления индивидуальный устойчивости на основе изучения фракционного состава белков и морфотипов сыворотки крови. Опытная рыба содержалась в бассейне емкостью 150 л, в растворе нефти с дозой 200мг/л, с постоянной аэрацией воды и двухразовым кормлением ежедневно. В процессе опыта, периодически (через 10 и 20 суток) отбирали кровь у особей с явными признаками нарушения в поведении (опрокидывание, броски) и дыхании (1-ая группа), а параллельно, из той же емкости отбирали кровь на анализ у внешне здоровых рыб (2-ая группа) - без внешне видимых нарушений в поведении и дыхании.

Результаты эксперимента показали, что на 10-ые сутки у всех рыб 1-ой группы (потеря равновесия, слабая реакция на корм) и частотой дыхания 36-48 раз в минуту, общее число компонентов сывороточных белков составило - 17-19 Сывороточные белки состояли из альбуминов, Р-глобулинов (трансферринов), а-глобулинов и у - глобулина. Фракция альбуминов была представлена в основном двумя, реже тремя компонентами. Трансферрины включали в себя три компонента, однако, по интенсивности окраски отмечена только один компонент (первый). Наиболее гетерогенной являлась зона а - глобулинов, содержащая 1011 компонентов, у - глобулин, оставшийся на старте, состоял из одного компонента.

У 2-ой группы опытных рыб данной экспозиции (Юсуток), частота дыхания составила 60-68 раз/мин. Фракция р-глобулинов имела две мощные по интенсивности окраски компоненты (первая и вторая). Общее число компонентов, фракции - альбумины и а - глобулины не отличались по компонентному составу от 1-ой группы исследуемых рыб.

Через 20 суток эксперимента у 1-ой группы рыб (с неадекватным поведением - с нарушениями координации движения , отсутствием реакции на корм и частотой дыхания 20-28 раз в минуту), общее число компонентов оставалось прежним - 17-19, в одном случае 20. В альбуминовой зоне сыворотки большинства исследуемых рыб обнаружены три компоненты. Трансферрины состояли так же из трех компонентов с преобладанием по мощности из них двух - первой и

второй, а-глобулиновая зона включала 11-12, в единичном случае 9 компонентов. На 20-е сутки у второй группы рыб у более 60% исследованных рыб с относительно высокой частотой дыхания на данное время (40-48 раз/мин.) и внешне нормальными признаками поведения общее число компонентов составило 19-22. Увеличение их числа происходило за счет дифференциации компонентов а-глобулиновой зоны до 12-14 В р-глобулиновой зоне почти у всех исследованных рыб сохраняется преобладание мощности по интенсивности окраски двух компонентов (первый и второй). В отдельных случаях, обнаружены четыре компонента, с наиболее мощным вторым и третьим. По компонентам р-глобулинов, включающих в себя трансферрин, обнаруживают полиморфизм.

При определении индивидуальной устойчивости рыб к нефти по результатам анализа анизотропных образований (морфотипов) сыворотки крови нами было установлено четыре вида морфоструктурных реакций. Первая реакция характеризовалась крайне низким уровнем структурирования или состоянием аморфизации (изотропная структура). Вторая реакция отличалась высоким уровнем структуропостроения и наличием большого числа атипичных (цветных) текстур. Особенностью третьей реакции являлось наличие большого числа вторичных морфотипов и равного соотношения базисных и атипичных форм. Для четвертой реакции было характерным преобладание вторичных форм в сочетании с базисными

На 10-ые сутки эксперимента у рыб 1-ой группы наблюдали три типа ответных морфоструктурнаых реакций У 30% исследованных рыб морфологическая картина характеризовалась состоянием аморфизации .(реакция первого типа) У остальных особей в равном процентном соотношении встречались реакции второго и третьего типов. Кристаллов много (занимают около 70% площади оптической ячейки). Наблюдаются крупные и мелкие сферолиты, веерные, дендритные, мелкие полиморфные текстуры. Богатая цветная гамма у 40% наблюдавшихся анизотропных образований (Базисные30%, Вторичные 20% и Атипичные 50%). В сыворотке крови рыб второй группы среди наблюдавшихся кристаллов преобладают вторичные формы: веерные, полиморфные. Встречаются единичные сферолиты,. цветных кристаллов мало (Базисные 10%, Вторичные 80% и Атипичные 10%). Морфологическая картина сывороткти крови карпов свидетельствует о декомпенсированном состоянии гомеостаза. В единичных случаях отмечалась реакция первого типа, характеризующаяся изотропной структурой.

Через 20 суток эксперимента в сыворотке крови первой группы рыб среди наблюдавшихся структур мелкие сферолиты, крупные веерные и дендритные. Часть структурных вторичных форм имеет желтовато-красный оттенок или мелкие цветные вкрапления (Базисные 30%; Вторичные 50%: Атипичные 20%). Морфологическая картина свидетельствует о декомпенсированном состоянии гомеостаза рыб. В сыворотке крови второй группы исследованных рыб, среди наблюдавшихся кристаллов много мелких монохромных сферолитов. Встречаются веерные и полиморфные текстуры, часть которых отличается цветностью (Базисные 60%: Вторичные 20% и Атипичные 20%). Морфологическая картина сыворотки крови свидетельствует об адаптивном состоянии организма с тенденцией к декомпенсации.

У рыб второй группы (20 суток эксперимента) преобладала морфоструктурная реакция второго типа. У 43,75 % исследованных особей в морфологической картине наблюдалось большое количество цветных текстур. У 18,75% особей регистрировалась реакция третьего типа, у 25 % - четвертого типа.

В дальнейшем, для выяснения возможности обратимости процессов метаболизма в организме рыб после длительного воздействия нефти был проведен следующий эксперимент. Для этого двухлеток карпа содержали в бассейне емкостью 150 л с добавлением дозы нефти -50мг/л. Длительность эксперимента составила 30 суток. Через 15 суток от начала эксперимента одну половину посадочного материала отбирали на анализ фракционного состава сывороточных белков и его структурных компонентов (морфотипов), а вторую пересаживали в бассейн с чистой отстоянной водой. Через две недели (15 дней) пребывания рыб в чистой воде проводили отбор проб крови для определения тех же показателей.

После 15-ти суточной экспозиции в растворе нефти выявили, что электрофоретически сывороточные белки карпа разделяются на 15-19 компонентов и состоят из альбуминов, а-, Р- и у - глобулинов. Альбуминовая фракция состоит, в основном, из 3-х , реже из 2-х и, в единичных случаях, из 4-х компонентов. При этом, самой мощной по интенсивности окраски компонентой, у 70% исследуемых рыб, была вторая, а у остальных -30% - третья компонента. р-глобулины, включающие в себя трансферрин, состоят в основном из 2-х и, только в двух случаях, 3-х компонентов. Наиболее гетерогенной является зона а-глобулинов, содержащая 9-11, а в одном случае, 8 компонентов. Самыми мощными компонентами данной зоны являются 7 и 8, реже - 6 и 9. у -глобулин, остающийся на старте состоят из одного компонента.

Результаты анализа рыб в течение двух недель в нормальных условиях (чистая вода) показали, что частота дыхания восстановилась у всех исследованных особей и составила 56-60 раз в минуту. Электрофоретически сывороточные белки карпа разделяются на меньшее число компонент (14-17 и только в одном случае, 19). Белки представлены также фракциями альбуминов, а,- |3-, и у - глобулинов. Следует отметить, что в р-глобулиновой фракции у 50% исследуемых рыб обнаружена третья компонента, самой мощной по интенсивности окраски компонентами этой зоны оставались вторая и третья. Особенностью результатов данной 1руппы явилось и то, что исчезает 9-й компонент зоны а-глобулинов, представленный у всех рыб. За счет этого у всех рыб данной группы снижается общее количество компонентов. Также следует отметить, что компоненты 3 и 4 зоны ос-глобулинов, сходны по интенсивности окраски с 7 и 8 компонентами этой зоны. Это указывает на увеличение относительного количества 3 и 4-го компонента зоны а-глобулинов.

Морфологическая картина структурных компонентов сыворотки крови рыб после 15-ти суточной экспозиции в растворе нефти, аналогична результатам предыдущих экспериментов. Представляет интерес данные анализа морфотипов сыворотки крови рыб после их пересадки из стресс-фактора (раствора нефти) в чистую, отстоянную, воду. Результаты пребывания рыб в течение двух недель в нормальных условиях показали, что частота дыхания восстановалась у всех исследованных особей и составляла 56-60 раз в минуту. От общего количества компонентов сывороточных белков, разделенных электрофоретически, изменялись его морфотипы. Особи, суммарный фракционный состав сывороточных белков которых состоял из 14, включали все структурные компоненты - Базисные, Вторичные и Атипичные, в количестве 10; 60 и 30% соответственно. Кристаллов много, в основном вторичные формы. Встречались цветные кристаллы, однако спектр их красок ограничивался желтовато-красными оттенками. У рыб, суммарная фракция сывороточных белков которых была равна 15, структурные компоненты представлены мелкими вторичными (веерные, полиморфные формы) и единичными, мелкими сферолитами (Базисные 20-55%, Вторичные 45-80%). Крайне неблагоприятное состояние морфологической картины - угнетение структурированности, состояние аморфизации (ячейки покрыты бесструктурной темной массой) появление единичных кристаллов более чем через 72 часа определено в сыворотке крови рыб, с общим количеством фракционных белковых компонентов равных 16-17. Это свидетельствует о глубоких нарушениях

метаболизма, о подавлении всех компенсаторных возможностей в организме рыб под влиянием стресс-фактора.

Электрофоретические исследования скелетных мышц обнаружили изменения белкового спектра у рыб между опытом и контролем (рис.2). Обычно принято фракционный состав водорастворимых белков мышц на протеинограмме по молекулярному весу условно делить на три группы: низкомолекулярные (НМБ), среднемолекулярные (СМБ) и высокомолекулярные (ВМБ), которые отличаются между собой по электрофоретической подвижности (Кузмин, 1994).

Результаты опыта показали, что до воздействия нефти у интактных рыб белковый спектр имеет сложный состав и состоит из 13-15 компонентов. Состав НМБ представлен в количестве 4-х компонентов и сохраняется в течение эксперимента у всех исследованных рыб. В некоторых случаях СМБ состоят из 3-4 , а ВМБ - из 6-7 компонентов. На 10-е сутки экспозиции число компонентов в зоне СМБ равно 4, за исключением одного случая. Изменения наблюдались в соотношении числа компонентов в зоне ВМБ, где гетерогенность была выше, чем предыдущих белков и достигала количества 7-ми компонентов (рис. 2).

Результаты исследований печени интактных рыб обнаружили, что белковый спектр состоит из 18-22 компонентов. Состав НМБ представлен 4-5 компонентами, а в некоторых случаях в количестве 7 (контроль) и 6 (30 суток) воздействия нефти. СМБ представлены - из 5 -6-ю компонентами, однако количество опытных рыб с 6-ю белковыми компонентами, особенно на 30-ые сутки эксперимента уменьшалось. На 20 и 30 сутки опыта изменения наблюдались и в соотношении числа компонентов в зоне ВМБ, где гетерогенность была ниже и состояла только из 8 компонентов.

Наши исследования выявили дифференциацию мышечных белков, главным образом среди СМБ и ВМБ, что, вероятно, прямо связано с механизмом адаптации организма рыб под влиянием нефти.

В анализе признаков и показателей модификационной изменчивости необходимым условием является выбор основных критериев устойчивости организма и связь ее с экологической резистентностью популяции. В качестве таких критериев в данной работе используется выживаемость особей и степень функциональных нарушений.

При электрофоретическом анализе сывороточных белков выявлено, что при воздействии сырой нефти образуются новые компоненты во фракции а- и р - глобулинов, а увеличение числа компонентов сывороточных и мышечных белков у опытных рыб есть

конкретное проявление физиолого-биохимической адаптации к неблагоприятным условиям окружающей среды.

Мы также допускаем возможность образования устойчивых комплексов белок - водорастворимые фракции нефти. По мере увеличения времени действия нефти растет количество компонентов р -глобулинов.Это и свидетельствует о том, что на молекулярном уровне в

Рис. 2 Электрофоретический спектр мышечных белков карпа при действии сублетальной концентрации нефти: 1 - контроль; 2-10 суток экспозиции;

3-20 суток экспозиции; 4-30 суток экспозиции.

организме происходят изменения адаптационного характера в ответ на сублетальное влияние нефти. Возможно, рост числа компонентов во фракции а -глобулина, идентифицированного как гаптоглобин, связан так же и с устойчивостью эритроцитов рыб.

Анализируя выше изложенные физиолого-морфологические параметры метаболизма рыб под влиянием нефти, можно говорить, что нами установлена индивидуальная изменчивость рыб, что очень важно для понимания физиологических механизмов адаптации рыб при нефтяном загрязнении.

7. Физиологические особенности адаптации каспийских рыб, постоянно находящихся в районах нефтеразведки Северного Каспия

Целесообразность изучения адаптации бычка песочного (Neogobius fhiviatilis pallasi Berg), объекта нашего исследования заключается в том, что он постоянно обитает в районах нефтеразведки и

в течение многих лет служит объектом - монитором (Алтуфьев, 1999). В то же время, в доступной нами литературе мы не нашли данных по качественному составу мышечных белков этого вида рыб.

Установлено, что по своему составу белки представлены тремя группами, различающихся по молекулярной массе. В свою очередь каждая груша состоит из нескольких фракций. Так, низкомолекулярные (НМБ) и среднемолекулярные белки (СМБ) состоят из четырех, а высокомолекулярные (ВМБ) из восьми фракций, их подвижность в электрическом поле колебалась в следующих пределах 0,62-1; 0,33-0,54; 0,02-0,27 см соответственно. Из всего состава фракций по количественной величине выделялись 1 и 3-ая фракции СМБ, что составило 28,5+0,42 и 20,4+0,7 Соответственно количество других фракций всех групп белков не превышало 6.5 относительных единиц, измерения. Наибольший коэффициент варьирования количественного содержания белков наблюдалось среди ВМБ, особенно по величине 2,3 и 4-ой фракций и НМБ - фракция 4.

Представляют интерес данные корреляции между всеми типами белков. Например, обратная зависимость наблюдалась между 1-ой фракции НМБ с той же фракцией СМБ и ВМБ (г= -0,5280 и -0,5896); 2-ой фракцией НМБ со 2-ой фракцией ВМБ (г= -0,.4612); 4-ой фракцией НМБ с 4-ой фракцией ВМБ (г=-0,4201). В одном случае наблюдалась положительная корреляция 3-ей фракции НМБ с 3-ей фракцией ВМБ (г =0,4666). В остальных случаях корреляция незначительная (г=0,1196). Таким образом, количество НМБ в основном зависит от величины ВМБ и в некоторых случаях от СМБ. Обнаруженная корреляция отражает известный механизм взаимопревращения изученных белков.

Установлено, что тяжесть структурных нарушений в печени у самцов более выражена, чем у самок, но сами изменения в печени бычков не превышают умеренного уровня и классифицируются как воспалительные явления.

Все типы белков коррелируют с СДГ, при этом связь НМБ и СМБ с СДГ положительная, а ВМБ отрицательная. Таким образом, очень тесная связь наблюдалась НМБ и ВМБ с ферментом СДГ, с той разницей, что в первом случае г =0,97, а в другом г= -0,80.

Корреляция НМБ мышц наблюдалась только с липидами (г=0,42) и с активностью ЦО (г = -0,45), СМБ связь невысокая с липидами (г = -0,32) с ферментом СДГ (г = - 0,50), ВМБ с морфологией в мышце (г =-0,48) с ЛДГ (г=0,33) и с ЦО (г =0,47). Эти данные указывают на то, что ВМБ в большей степени связаны с метаболическими процессами и в частности с активностью дегидрогеназ.

Количество молочной кислоты в мышцах с патоморфологическими изменениями коррелирует (г= -0,42), с СДГ и ЛДГ (г=0,44; г= -0,62 соответственно). Связь НМБ с патоморфологическими изменениями (г=0,31),СМБ с СДГ (г=0.31), с ЛДГ (г = -0,43) и с ЦО (г= -0,42), ВМБ с патоморфологией (г=0,83) с липидами (г = 0,43), с РНП (г =0,38) и с ЦО (г= -0,35).

Все приведенные данные корреляции свидетельствуют о наибольшей связи ВМБ и СМБ с метаболитами, и все это происходит на фоне умеренных, по тяжести морфологических изменений в мышце. Главное, что их корреляция отражает сущность морфофункциональных процессов происходящих в организме рыб, что согласуется с опубликованными данными в литературе по каспийским осетровым (Журавлева и др.,2002; Молдавская и др.,2003).

Обобщая весь материал по изучению изменчивости полиморфизма сывороточных и водорастворимых белков в составе образцов внутренних органов рыб, важным итогом проведенных исследований является идентификация определенных белков - маркеров, имеющих большое значение в изменении резистентности рыб под влиянием сырой нефти. Полученные результаты экспериментальных и натурных исследований позволяют использовать применение изменчивости полиморфизма белков в качестве маркеров устойчивости рыб, обитающих в условиях нефтяного загрязнения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Комплексные исследования, проведенные в лабораторных и натурных условиях, позволили нам установить целый ряд физиолого-биохимических и морфо-физиологических изменений в организме рыб, возникающих в условиях различного влияния по времени и дозам сырой каспийской нефти на гцдробионтов.

В соответствии с поставленной целью и задачами по материалам исследований установлены физиологические параметры влияния различных доз в острых и подострых экспериментах каспийской нефти на рыб. Известно, что влияние нефти на гидробионтов в значительной степени зависит от содержания нафтенов. Как показано в ходе анализа каспийская нефть, в основном, действительно, содержит углеводороды нефтяного ряда с конденсированными бензольными ядрами. Такой состав нефти, очевидно, отражает относительно невысокую степень ее токсичности.

Сложный состав нефти не позволяет оценить степень токсичности каждого из ее компонентов, да и действует нефть как единый комплексный фактор, поэтому в настоящей работе использован метод биотестирования разработанный Г.В. Земковым (1990). С этой целью в качестве тест-объекта, как описано выше, использовали одновозрастных дафний. Результаты опытов, на беспозвоночных, позволили установить существенное снижение токсичности нефти через 30 дней от острого до сублетального эффекта действия.

В настоящей работе, выполненной комплексно, на единой биогеохимической методологической основе все регистрируемые показатели позволяют понять физиологический механизм влияния различных доз каспийской нефти на рыб при разных экспозициях. При этом морфофункциональные изменения не только рассматривались во времени, но еще и сопоставлялись с внешним физиологическим стереотипом поведения в виде изменения двигательно-пшцевых реакций у рыб до серьезной утраты ими плавательной способности. Под влиянием нефти, вероятно, снижается активность ферментов, участвующих в гликолизе, а также актина и миозина, что отражается на скорости расхода гликогена. Вполне допустимо, что снижение активности ферментов связано с исчезновением шероховатости эндоплазматического ретикулума и митохондрий, как одного из признаков активности этих субклеточных элементов в метаболизме.

Определенные различия выявлены и по другим показателям, что связано с полифункциональной особенностью печени.

В комплексных исследованиях выявлены также признаки прогрессирующих морфологических нарушений не только в отделах ЦНС, но и во внутренних органах, в том числе в печени и мышце. Каспийская нефть приводит к изменению в соотношении текстур морфотипов, которые следует рассматривать как дополнительный и важный параметр физиологического состояния рыб.

Таким образом, не оставляет сомнений факт совместного развития метаболических и морфологических нарушений в сократительной активности скелетной мускулатуры рыб под влиянием нефти. Морфологические изменения мышц имеют прямое отношение к угнетению и утрате плавательной способности и локомоции рыб, а усугубляющим их фактором является деструкция мотонейронов. Важно подчеркнуть морфофункциональную кумуникабильность ЦНС (Коштоянц, 1957; Карамян, 1970; Анохин, 1980), поэтому нарушения в двигательных центрах, видимо, негативно отражаются и на функции всех остальных отделов ЦНС.

В природных водоемах в условиях субэкстремального и хронического влияния различных поллютантов обычно снижается численность наиболее ценных видов ихтиофауны, что находит свое объяснение в момент резистентности оксифильных рыб. В результате проведенных экспериментальных исследований выявлены белки, имеющие отношение к механизмам адаптации организма при воздействии нефти. В сыворотке крови подопытных рыб происходит изменение качественного состава глобулярных белков, взаимопревращение которых - факт известный и связан с гуморальным фактором иммунитета животных, в том числе и рыб (Лукъяненко,1967). Применительно к нашей работе дифференциацию белков, очевидно, следует отнести к механизму физиологической адаптации в направлении увеличения резистентности организма к каспийской нефти. Аналогичные данные также получены и по белковому спектру тканевых водорастворимых белков у бычков, среди которых в наибольшей степени дифференцируются СМБ и ВМБ, которые оказались более лабильными.

Бычки используются в качестве объекта мониторинга в связи с тем, что они постоянно обитают в районе нефтеразведочных работ (Гераскин и др.,1993). Данные анализа по качественному составу тканевых белков у рыб в натурных съемках, так и в экспериментах, позволяют говорить о адаптационной роли СМБ и ВМБ, что, безусловно, является перспективным направлением следующих специальных исследований.

выводы

1. Адаптации каспийских рыб к нефтяному загрязнению обеспечивается широким спектром неспецифических физиолого-биохимических механизмов, способствующих их выживанию в постоянно изменяющихся условиях среды обитания. При воздействии изучаемых доз нефти на рыб у них наблюдается прогрессивное ослабление двигательно-птцевых реакций, изменение активности амилазы и щелочной фосфатазы, изменение липидного обмена, повышение уровня глюкозы, увеличение количества креатинина, снижение проницаемости нейтрального красного через 11Ь печени, дорсальных мышц и через ГЭБ. Мотонейроны всех исследованных отделов, включая и двигательные ядра среднего мозга, находятся в состоянии деструкции, что объясняется адаптационной реакцией организма до момента полного отказа рыб от корма, угнетения двигательной активности, когда компенсаторные процессы уже не имеют физиологического значения.

2. Установлены критерии физиологической толерантности рыб к влиянию различных доз сырой нефти Каспийского месторождения. Острый эффект действия нефти на карповых рыб возникает при концентрации более 200 мг/л ее в воде. Для осетровых рыб сублетальный порог влияния каспийской нефти равен 1 мг/л. Ущерб от влияния нефти в районе Северного Каспия понесут и постоянно обитающие виды рыб, в т.ч., бычки, являющиеся донным и малоподвижным видом и важным кормовым объектом ценных хищных видов рыб.

3. Независимо от концентрации нефти в воде уровень сывороточных белков у опытных рыб снижается по сравнению с контролем, но характер их количественной динамики зависит от дозы и времени влияния стресс-фактора. Анализ кинетики уровня белка и мочевины показал накопление мочевины и увеличение КСБ, усугубляющее состояние рыб в результате содержания их в условиях беспрерывного действия 50 и 100 мг/л нефти.. Динамика гликолиза и расхода общего белка в организме карпа под влиянием 50 и 100 мг/л нефти развивается в сторону снижения резервов протеидов и гликогена в организме гидробиоитов относительно контроля. Скорость всех видов ПОЛ в мышцах и печени (за исключением МДА) к концу опыта заметно снижается относительно контроля, что свидетельствует о высоком уровне АОА в организме рыб под влиянием нефти, обеспечивающем реакцию процесса ПОЛ, что предопределяет защиту клеток от деструкции.

4. Воздействие каспийской нефти приводит к изменению в соотношении базисных, вторичных и появлению атипичных текстур морфотипов. Отличительной особенностью морфологической картины сыворотки крови является наличие цветных структур, спектр красок которых находится в зависимости от уровня и времени действия стресс-фактора. Изменения морфоструктур в виде атипичных кристаллов, соотносятся с отклонениями физиолого-биохимических показателей и являются следствием конформации различных белков, что может быть использовано в качестве маркерных показателей.

5. Установлена обратная зависимость уровня базисных морфотипов от величины общего белка, мочевины, КСБ в сыворотке крови рыб при 20-ти суточной экспозиции, где сила связи составила -0,69; -0,58 и -0,79. При 30-ти суточной выдержке зависимость уровня базисных морфотипов от величины КСБ составила -0,60. Обнаружена высокая положительная зависимость вторичных морфотипов от тех же показателей - белка, мочевины и КСБ, где коэффициент корреляции (г ) составил 0,77; 0,54 и 0,67 при 20-ти днях выдержки, и 0,59 - при 30-ти суточной экспозиции.

6. Установлено повышение активности ферментов кишечника, что в период голодания рыб под влиянием нефти, возможно, объясняется непрекращающимся процессом резорбции питательных веществ за счет использования внутренних запасов. В обратном направлении изменялась активность дегидрогеназ в сыворотке крови. По отношению к контролю у опытных рыб

активность ЦО и ЛДГ заметно снижается на 30-е сутки влияния нефти не только в сыворотке, но и в скелетной мускулатуре, вызывая при этом увеличение молочной кислоты, также способствующей снижению сократительной активности мышц, относительно контроля.

7. Все морфофункциональные изменения в организме рыб протекают в соответствии с дифференциацией сывороточных и тканевых белков, и расцениваются как физиолого-адаптационные реакции организма рыб в условиях влияния нефти. При этом в сыворотке крови подопытных рыб происходят изменения, сущность которых заключается главным образом в увеличении фракционного состава а - , Р -глобулинов. Дифференциация спектрального состава наблюдалась по СМБ и В МБ, где происходило увеличение числа их компонентов в мышцах по мере экспозиции опыта. Особенностью фракции СМБ в мышцах явилось увеличение содержания белка третьего компонента в течение опыта и резкое повышение доли первого компонента только на 30-е сутки эксперимента, тогда как в предшествующие экспозиции их количество не отличалось от контроля.

8. Установлены видовыеи индивидуальные различия рыб к влиянию каспийской нефти по их резистентности, показателям обмена веществ, гематологическим параметрам (гемоглобин, общий белок, мочевина) и поведенческим реакциям. Показано, что осетр значительно более чувствителен к нефтяному загрязнению, чем карповые. Полученные результаты экспериментальных и натурных исследований позволяют рекомендовать применение изменчивости полиморфизма белков и морфотипов крови в качестве маркеров устойчивости рыб, обитающих в условиях нефтяного загрязнения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

На основе изучения механизма влияния НУ на рыб разработаны научные основы нормирования степени воздействия нефтяного загрязнения на организм рыб.

Вскрытые физиологические механизмы действия нефти представлены для уточнения ПДК нефтепродуктов в

биогеохимических условиях Каспийского моря. Предлагаются материалы для дальнейшей специальной разработки установления пределов физиологической пластичности и адаптации устойчивых и малоустойчивых особей в популяции различных видов ихтиофауны. Для оценки критического уровня нефтяного загрязнения впервые для рыб, разработан биотест на основе изменчивости полиморфности белков и стуктурных образований (морфотипы) сыворотки крови, гомогенатов органов и тканей. Методы определения морфотипов в биологических жидкостях рыб имеют применение в рыбоводстве. Полученные данные могут быть использованы в вузах при изучении курсов физиологии, экологической физиологии, биохимии, экологии гидробиологии и др.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

1. Воробьев В.И., Каниева H.A. Изменения метаболических реакций в организме карпа при интоксикации нефтью.-Саратов.- «Вестник» СГАУ им. Н.ИЛЗавилова, №3.- 2003, С.96-103.

2. Воробьев В.И., Каниева H.A. Резистентность различных видов рыб в зависимости от степени их оксифильности в условиях сублетального действия нефти. - Саратов «Вестник» СГАУ им. Н.И.Вавилова». №1.- 2004. -С .71-84.

3. Каниева H.A. Особенности изменения белкового спектра сыворотки крови и скелетных мышц карпа в процессе интоксикации нефтью. -Саратов.«Вестник» СГАУ им. Н.И.Вавилова». №2,- 2004. -С. 36.

4. Каниева H.A. Влияние каспийской нефти на гематологические показатели карпа. -Саратов «Вестник» СГАУ им. Н.И.Вавилова». №3.2004. -С. 7-12.

5. Каниева H.A. Влияние каспийской нефти на функциональные и структурные изменения в организме рыб.-Саратов.-«Вестник» СГАУ им. Н.И.Вавилова». №3.- 2004 -С. 12-17.

6. Каниева H.A., Аюпова А.К. Заявка на изобретение № 2003138171/13 (041198) «Способ оценки токсического действия химических веществ на органы и ткани рыб» МПК G 01N 33/12 ФИПС, Москва, Г-59, ГСП-5.

7. Каниева H.A. Тест - оценка действия нефти по морфоструктурному анализу криви.- Оренбург.- «Вестник ОГУ». -2004,-С. 75-81.

8. Каниева H.A. Морфо-функционалоьное состояние головного мозга карпа под влиянием нефти,- Оренбург.- «Вестник ОГУ».-2004,-С.81-86.

9. Каниева H.A. Морфофизиологические особенности адаптации каспийских бычков в районах нефтеразведки с резистентностью организма при экстримальных условиях Северного Каспия. Материалы второй Международной научной конференции и выставки « Биотехнология - окружающей среде». - Москва. Сб. МГУ.- 2004.- С.76-79.

10. Каниева H.A. Оценка влияния каспийской нефти на метаболизм карповых рыб. - М. «Академия естествознания». - №3- 2003. -С.68-69.

И Каниева H.A. Резистентность рыб под влиянием нефти в зависимости от гетерогенности белков. // Материалы П научной

конференция Российской Академии Естествознания «Экология и рациональное природопользование»,- Хургада.-2004. - С. 71.

12. Кириллов В.Н., Каниева H.A., Давлетьярова P.A. Сравнительная характеристика биохимических показателей и уровня содержания хлорорганических пестицидов и тяжелых металлов в организме русого осетра с ярковыраженными патологическими изменениями и в их отсутствии. // Сб. трудов Академии наук СССР. «Физиоло-биохимический статус Волго-Каспийских осетровых в норме и при расслоении мышечной ткани (Кумулятивный политоксикоз)». -Рыбинск.-1990. -С.69-74.

13. Fedorova N.N., Kirillov V.N., Kanieva N.A. The pathology of sturgeons blood cells que to the influence of environmental antropogenic pollutions. Vth International ichthyonaematology conference. -Vodnany. Czech Republic.-1998.-C. 105-103.

14. Каниева H.A. Зависимость степени токсичности нефти от количественного состава ее компонентов в воде. НТЖ «Вестник» БГТУ №8, ч. IV. «Экология: образование, наука, промышленность и здоровье». -Белгород, -2004.-С.75-77.

15. Каниева Н.А.Изменение гематологических показателей у рыб в зависимости от уровня сублетальных концентраций нефти. Материалы Международной конференции, посвященной 105-летию КаспНИРХа «Современные проблемы Каспия».- Астрахань. -2002.-С.130-132,

16. Каниева Н.А.Соотношение скорости переокисления липидов и карпа под патологических изменений гистологической организации печени влиянием нефти Материалы Междунар..научно-практ. копф.посв.современным проблемам рыбного хозяйства Каспийского моря. -Баку.- 2002. -С. 56 -57.

17. Каниева Н.А.Изменение гематологических показателей у рыб в зависимости от уровня сублетальных концентраций нефти. // Материалы Междун. конф. «Современные проблемы Каспия». -Астрахань.-2002.- С. 130-132.

18. Каниева Н.А.Физиолого-биохимические изменения в организме карпа под влиянием нефти. // Материалы Всероссийской научно-практической Конференции «Экологические проблемы загрязнения водных ресурсов Волжского бассейна, современные методы и пути их решения «.- Волгоград,- 2004. -С52-54.

19. Каниева H.A. Метаболические изменения в организме карпа под влиянием нефти. // Материалы второй Международной научно-практической конференция «Человек и животное ».- Астрахань. АГУ,-2004. -С.77-79

20. Каниева Н.А.Перекисное окисление липидов и гистологическая организация печени карпа под влиянием нефти.// Материалы второй Международной научно-практической конференция «Человек и животное » .- Астрахань. АГУ.-2004. -С.74-76

21. Каниева Н.А.Биохимические показатели адаптивных реакций в организме карпа под влиянием нефти. // Материалы второй Международной научной конф. »Проблемы сохранения и рационального использования биоразнообразия Прикаспия и сопредельных регионов». -Элиста. КалмГУ.-2004. -СЛ38-140.

22. Каниева H.A. Биохимические аспекты адаптации карпа под влиянием сублетальной концентрации нефти. Материалы Международной научной конференции «Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов». -Петрозаводск.-Инстшут биологии КарНЦ РАН.- 2004. -С. 75 - 77.

23. Каниева H.A. Влияние нефти на морфофизиологические параметры рыб. // Сб. статей VII Международной научной конференции «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря». -Астрахань,- 2004.- С. 112-114.

24. Воробьев В.И., Каниева H.A. Морфо-функциональные изменения в мышцах при блокировании пищевых реакций у рыб под влиянием сырой нефти // Сб. статей VII Международной научной конференции «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря». -Астрахань. АГУ.- 2004.- С.115-118.

25. Федорова Н. Н., Кириллов В. Н., Каниева H.A. Особенности картины крови осетровых рыб в современных экологических условиях Волго-Каспийского бассейна. //Труды Международного Форума по проблемам науки, техники и образования. -М. Академия Наук о Земле. -1998. С, 150-151.

26. Кириллов В.Н., Каниева H.A., Чепурная А.Г., Федорова H.H. Активная реакция среды - экологический фактор, определяющий развитие паразитофауны рыб. //Сборник статей Международной конференции «Безопасность XXI века». -Санкт- Петербург.-1998. -С.96-100.

27. Каниева Н.А.Изменения некоторых показателей дыхания и гликолиза в организме осетра и карпа под влиянием нефти.// Материалы Всероссийской Конференции «Современные проблемы водной токсикологии».- Борок.-2002.-С.45.

28. Каниева Н. А.Изменение химического состава воды под влиянием сырой нефти. //Материалы докладбв II Всероссийской научно-практической конференции «Водохозяйственный комплекс России: Состояние, проблемы, перспективы». ВК-30-4.- Пенза.-.2004. -С. 69-73.

29. Каниева Н.А. Межвидовые различия в организме рыб при интоксикации нефтью. // Материалы докладов II Всероссийской научно-практической конференции «Водохозяйственный комплекс России: Состояние, проблемы, перспективы». ВК-30-4.- Пенза.-2004 .-С. 73- 77.

30. Каниева Н. А. Биотестирование инактивации нефти, растворенной в воде по количеству гибели дафний в различные периоды времени. //Материалы докладов II Всероссийской научно-практической конференции «Водохозяйственный комплекс России: Состояние, проблемы, перспективы». ВК-30-4,- Пенза.-2004. -С. 77 -81 .

31. Каниева Н.А.Влияние нефти на морфофизиологические параметры рыб. Материалы докладов II Всероссийской научно-практической конференции «Водохозяйственный комплекс России: Состояние, проблемы, перспективы». ВК-30-4.- Пенза.-2004. -С. 81 -85.

32. Каниева Н. А.Морфо-функциональные нарушения респираторного эпителия жабр карпа при действии сырой нефти. // Материалы докладов II Всероссийской научно-практической конференции «Водохозяйственный комплекс России: Состояние, проблемы, перспективы». ВК-30-4. -Пенза.-2004. -С. 85 -88.

33. Каниева Н.А. Видовые различия устойчивости рыб к влиянию каспийской нефти. НТЖ «Южно-Российский Вестник геологии, географии и глобальной энергии»,- Астрахань. -2004.

47

»18948

РНБ Русский фонд

2005-4 16230

Типография АГТУ. Заказ 730 от 08.10.2004 г. Тираж 100 экз.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Каниева, Нурия Абдрахимовна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. Ретроспективный анализ научной информации по проблеме нефтяного загрязнения природных водоемов и его влияния на гидробионтов

1.1 Проблемы влияния углеводородного сырья на биоресурсы Каспия

1.2 Уровень, опасность и последствия нефтяного загрязнения водоемов

1.3 Химическая трансформация нефти и другие виды самоочищения природных условиях.

1.4 Экспериментальные данные изучения степени влияния нефти на физиолого-биохимические показатели рыб.

1.5 Экологическая пластичность рыб и критерии ее оценки на основе изучения адаптивной модификации.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА II Материал и методы исследования

2.1 Экспериментальные исследования

2.2 Химические методы анализа

2.3 Гидрохимические показатели

2.4 Физоологический анализ

2.5 Биохимический анализ

2.6 Морфологические методы анализа биологических жидкостей

2.7 Гистологические и гистохимические методы анализа

2.8 Статистические методы анализа

ГЛАВА III Зависимость степени влияния каспийской нефти на гидробионтов от количественного состава ее компонентов в водной среде

ГЛАВА IV Кинетика физиологических реакций организма рыб в зависимости от концентрации и времени действия нефти

ГЛАВА V Влияние нефти на морфо-физиологические показатели двухлеток карпа под влиянием нефти

ГЛАВА VI Изменение физиолого-биохимических показателей в организме двухлеток карпа в зависимости от времени действия каспийской нефти.

ГЛАВА VII Видовые различия устойчивости рыб к влиянию каспийской нефти

ГЛАВА VIII Влияние каспийской нефти на белковый обмен и индивидуальную резистентность рыб

ГЛАВА IX Физиологические особенности адаптации каспийских рыб, находящихся постоянно в районах нефтеразведки

Северного Каспия

Введение Диссертация по биологии, на тему "Физиологические механизмы адаптации рыб к влиянию каспийской нефти"

Актуальность проблемы. В общей проблеме загрязнения рыбохозяйственных водоемов нефть занимает одно из первых мест и до настоящего времени влияние ее на биоту продолжает оставаться предметом серьезных научных исследований (Касымов,1994; Костров и др., 1997; Иванов, Сокольский,2000; ПатинД979;2001). Влияние нефти зависит от ее состава (природы нефтяных углеводородов - НУ), месторождения и экологических условий среды жизни гидробионтов, в т.ч. рыб в каждом конкретном субрегионе биосферы (Вернадский, 1922; 1927; Ковальский, 1974; Воробьев, 1993; Воробьев, Каниева,2003).

Особую актуальность проблема влияния нефти на гидробионтов приобретает в связи с нефтеразведочными работами на Северном Каспии, где в самой ближайшей перспективе планируется промышленная добыча нефтяного сырья и где уже начат исследователями КаспНИРХа мониторинг за ^ изменениями среды (Романов и др., 1998; Гераскин, Алтуфьев и др., 1999; Катунин, 1999). Основной задачей настоящей работы явилось комплексное изучение на единой методологической и методической основе функционального состояния различных гидробионтов, в т. ч. рыб, под влиянием такого стресс-фактора, как каспийская нефть, что в итоге позволит определить физиологические механизмы адаптации и степень воздействия различных доз нефти на гидробионтов с целью нормирования концентрации токсикантов в водоемах, проведения экологических экспертиз и экологического аудита гидросистем и тому подобных физиолого-биохимически, экологических и других исследований. Данные наших экспериментальных работ могут использоваться для изучения индивидуальной резистентности и адаптивных способностей организма рыб к новым факторам внешней среды, ф которые складываются в результате дальнейшего антропогенного прессинга на ихтиофауну.

Исходя из всего выше сказанного, в настоящей работе были поставлены следующие цель и задачи исследований.

Цель исследований. Установить критерии толерантности гидробионтов, в т. ч. рыб и их адаптивных возможностей к влиянию различных доз сырой каспийской нефти, выявить основные морфофункциональные изменения, определяющие потенциальные возможности адаптации рыб к нефтяному загрязнению. Определить физиолого-биохимические и морфологические параметры адаптивных изменений у рыб. Задачи исследований.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

В процессе влияния нефти на гидробионтов выявить характер динамики физиолого-биохимических параметров рыб (двигательно-пищевая реакция, гематологические показатели, кинетика обменных процессов, ГГБ и ГЭБ мышц, печени и мотонейронов).

Оценить функциональное состояние ферментов кишечника, фракционного состава белков, процессов ПОЛ под влиянием различных доз и экспозиций нефти для вскрытия физиологических закономерностей адаптационного механизма рыб и их индивидуальной резистентности.

- Выяснить влияние различных доз каспийской нефти на морфологические текстуры морфотипов и их корреляционные соотношения с физиологическими параметрами рыб.

- Выяснить видовые и индивидуальные различия физиологических параметров резистентности рыб и их связь с полиморфностью сывороточных и тканевых белков скелетных мышц, печени и морфотипами.

Научная новизна. Впервые исследованы ранее неизвестные физиологические механизмы адаптации рыб к различным дозам каспийской нефти, в основе которых лежит изменение кинетики ряда показателей метаболизма, что в итоге может вызывать нарушение стереотипа поведения рыб и ведет к потере их плавательной способности и отказу от корма. Установлено, что по мере увеличения времени влияния нефти изменяется качественный состав а,- и (3 - глобулярных фракций сывороточных и тканевых белков. Выявлена зависимость резистентности рыб и спектрального состава компонентов фракций среднемолекулярных (СМБ) и высокомолекулярных белков (ВМБ) скелетных мышц карпа. Впервые установлено количественное соответствие изменения проницаемости нейтрального красного через ГГБ печени, дорзальных мышц и ГЭБ по уровню сорбции витального красителя с морфологическими нарушениями в мозге рыб под влиянием нефти.

Впервые апробирован метод поляризационной микроскопии в изучении изменчивости формы анизотропных текстур биологических жидкостей рыб, в частности для характеристики физиологического состояния организма рыб под ^ влиянием нефти. Установлены отличительные особенности морфологической картины сыворотки крови, гомогенатов печени и дорзальных мышц, связанные с резистентностью организма рыб в различных условиях влияния нефти. Показано, что появление атипичных цветных морфотипов в образцах сыворотки крови и гомогенатах органов и тканей рыб служит критерием декомпенсации общего гомеостаза организма. Установлена обратная зависимость уровня базисных морфотипов от величины общего белка, мочевины, КСБ в сыворотке крови рыб при 20-ти суточной экспозиции На защиту выносятся следующие положения:

Установлена связь токсикорезистентности рыб с полиморфностью а-, и Р- глобулинов. Степень полиморфизма белковых соединений прямо связана с физиологической устойчивостью организма, а физиологический механизм ф данного явления имеет отношение к неспецифической форме адаптации в условиях влияния различных доз каспийской нефти. Выраженность адаптации в организме так же зависит от видовой и индивидуальной изменчивости, которая в природных условиях, возможно, лежит в основе избирательной смертности. Увеличение полиморфизма белков под влиянием нефти тесно связано с различными показателями метаболизма, среди которых, прежде всего, важно выделить коллоидную устойчивость водорастворимых общих белков, активность дегидрогеназ, параметры липидного обмена, гематологические показатели и морфологические изменения сканированной структуры сыворотки и водной вытяжки мышц и печени (морфотипы).

Выявлена кинетика физиолого-биохимических показателей и морфологических изменений скелетных мышц и ЦНС, которые по мере их развития приводили к нарушению внешнего дыхания и дыхательной функции крови, что в итоге отражалось на гликолизе мышечной ткани с последующим отказом рыб от корма.

Исследования проводились в соответствии с комплексной программой АГТУ по теме: "Исследование влияния антропогенного воздействия на окружающую среду и разработка мероприятий по его уменьшению", - № гос. регистрации 0505.

Теоретическое и практическое значение работы.

На основе изучения механизма влияния НУ разработаны научные основы снижения воздействия нефтяного загрязнения на организм гидробионтов.

Вскрытые физиологические механизмы действия нефти предлагаем использовать для уточнения ПДК по НУ и дальнейшей специальной разработки установления пределов физиологической пластичности и адаптации устойчивых и малоустойчивых особей в популяции различных видов ихтиофауны. Для оценки критического уровня нефтяного загрязнения впервые для рыб, разработан биотест на основе изменчивости полиморфности белков и структурных образований (морфотипы) сыворотки крови, гомогенатов органов и тканей. Полученные данные могут быть использованы в вузах при изучении курсов физиологии, экологической физиологии, биохимии, экологии гидробиологии и др.

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены на Международной конференции «Безопасность XXI века». Санкт- Петербург, 1998, на Международном Форуме по проблемам науки, техники и образования. (Москва, 1998),. Vth International ichthyonaematology cjnference (Vodnany. Czech Republic, 1998), на Международной конференции «Проблемы изучения и рационального использования природных ресурсов морей» (Астрахань, 2001), на Международной научно-практической конференции, посвященной современным проблемам рыбного хозяйства Каспийского моря. (Баку, 2002), на Международной конференции «Современные проблемы Каспия» (Астрахань, 2002), на Международной научно-практической конференции «Экология: образование, наука, промышленность и здоровье» (Белгород, 2004), на II Международной научно-практической конференция «Человек и животное» (Астрахань, 2004), на II Международной научной конференции и выставки « Биотехнология - окружающей среде» (Москва,2004), на II Международной научно-практической конференции «Агропромышленный комплекс: Состояние, проблемы, перспективы». (Пенза-Нейбранденбург,2004), на Международной научной конференции «Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов» (Петрозаводск, 2004), на VII Международной научной конференции «Эколого-Биологические проблемы бассейна Каспийского моря». (Астрахань, 2004), на I и II Научной конференции Российской Академии Естествознания «Экология и рациональное природопользование» (Египет, 2003, 2004), на Всероссийской конференции «Современные проблемы водной токсикологии» (Борок, 2002), на Всероссийской научно-практической Конференции «Экологические проблемы загрязнения водных ресурсов Волжского бассейна, современные методы и пути их решения« (Волгоград, 2004г), на II Всероссийской научно-практической конференции «Водохозяйственный комплекс России: Состояние, проблемы, перспективы». (Пенза, 2004). Материалы доложены и обсуждены на научно-технических конференциях профессорско-преподавательского состава АГТУ, Астрахань. 1999 - 2004 гг.

Публикации по материалам диссертации: опубликовано 33 работы.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, материалов и методов исследований, семи глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка указателя использованной отечественной и зарубежной литературы, включающей 385 литературных источника. Диссертация изложена на 264 страницах компъюторного набора, содержит 24 таблицы, 83 рисунка 17 страниц приложения.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Каниева, Нурия Абдрахимовна

ВЫВОДЫ ф 1. Адаптация каспийских рыб к нефтяному загрязнению обеспечиваются широким спектром неспецифических физиолого-биохимических механизмов, способствующих их выживанию в постоянно изменяющихся условиях среды обитания. При воздействии изучаемых доз нефти на рыб у них наблюдается прогрессивное ослабление двигательно-пищевых реакций, изменение активности амилазы и щелочной фосфатазы, изменение липидного обмена, повышение уровня глюкозы, увеличение количества креатинина, снижение проницаемости нейтрального красного через ГГБ печени, дорзальных мышц и через ГЭБ. Мотонейроны всех исследованных отделов, включая и двигательные ядра среднего мозга, находятся в состоянии деструкции, что является морфологической основой, угнетения двигательной активности, когда щ компенсаторные процессы уже не имеют физиологического значения.

2. Установлены критерии физиологической толерантности рыб к влиянию различных доз сырой нефти Каспийского месторождения. Острый эффект действия нефти на карповых рыб возникает при концентрации более 200 мг/л ее в воде. Для осетровых рыб сублетальный порог влияния каспийской нефти равен 1 мг/л. Ущерб от влияния нефти в районе Северного Каспия понесут и постоянно обитающие виды рыб, в т.ч., бычки, являющиеся донным и малоподвижным видом и важным кормовым объектом ценных хищных видов рыб.

3. Независимо от концентрации нефти в воде уровень сывороточных белков у опытных рыб снижается по сравнению с контролем, но характер их количественной динамики зависит от дозы и времени влияния стресс-фактора. Анализ кинетики уровня белка и мочевины показал накопление мочевины и увеличение КСБ и усугубляющее состояние рыб в результате содержания их в условиях беспрерывного действия 50 и 100 мг/л нефти. Динамика гликолиза и расхода общего белка в организме карпа под влиянием 50 и 100 мг/л нефти развивается в сторону снижения резервов протеидов и гликогена в организме гидробионтов относительно контроля. Скорость всех видов ПОЛ в мышцах и печени (за исключением МДА) к концу опыта заметно снижается относительно контроля, что свидетельствует о высоком уровне АОА в организме рыб под влиянием нефти, обеспечивающем реакцию процесса ПОЛ, что предопределяет защиту клеток от деструкции.

4. Воздействие каспийской нефти приводит к изменению в соотношении базисных, вторичных и появлению атипичных текстур морфотипов. Отличительной особенностью морфологической картины сыворотки крови является наличие цветных структур, спектр красок которых находится в зависимости от уровня и времени действия стресс-фактора. Изменения морфоструктур в виде атипичных кристаллов, соотносятся с отклонениями физиолого-биохимических показателей и являются следствием конформации различных белков, что может быть использовано в качестве маркерных показателей.

5. Установлена обратная зависимость уровня базисных морфотипов от величины общего белка, мочевины, КСБ в сыворотке крови рыб при 20-ти суточной экспозиции, где сила связи составила - 0,69; - 0,58 и - 0,79. При 30-ти суточной выдержке зависимость уровня базисных морфотипов от величины КСБ составила -0,60. Обнаружена высокая положительная зависимость вторичных морфотипов от тех же показателей - белка, мочевины и КСБ, где коэффициент корреляции (;■) составил 0,77; 0,54 и 0,67 при 20-ти днях выдержки, и 0,59 - при 30-ти суточной экспозиции.

6. Установлено повышение активности ферментов кишечника, что в период голодания рыб под влиянием нефти, возможно, объясняется непрекращающимся процессом резорбции питательных веществ за счет использования внутренних запасов. В обратном направлении изменялась активность дегидрогеназ в сыворотке крови. По отношению к контролю у опытных рыб активность ЦО и ЛДГ заметно снижается на 30-е сутки влияния нефти не только в сыворотке, но и в скелетной мускулатуре, вызывая при этом увеличение молочной кислоты, также способствующей снижению сократительной активности мышц, относительно контроля.

7. Все морфофункциональные изменения в организме рыб протекают в соответствии с дифференциацией сывороточных и тканевых белков, и расцениваются как физиолого-адаптационные реакции организма рыб в условиях влияния нефти. При этом в сыворотке крови подопытных рыб происходят изменения, сущность которых заключается главным образом в увеличении фракционного состава а -, Р - глобулинов. Дифференциация спектрального состава наблюдалась по СМБ и ВМБ, где происходило увеличение числа их компонентов в мышцах по мере экспозиции опыта. Особенностью фракции СМБ в мышцах явилось увеличение содержания белка третьего компонента в течение опыта и резкое повышение доли первого компонента только на 30-е сутки эксперимента, тогда как в предшествующие экспозиции их количество не отличалось от контроля.

8. Установлены видовые и индивидуальные различия рыб к влиянию каспийской нефти по их резистентности, показателям обмена веществ, гематологическим параметрам (гемоглобин, общий белок, мочевина) и поведенческим реакциям. Показано, что осетр значительно более чувствителен к нефтяному загрязнению, чем карповые. Полученные результаты экспериментальных и натурных исследований позволяют использовать применение изменчивости полиморфизма белков и морфотипов крови в качестве маркеров устойчивости рыб, обитающих в условиях нефтяного загрязнения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

На основе изучения механизма влияния НУ на рыб разработаны научные основы нормирования степени воздействия нефтяного загрязнения на организм рыб.

Вскрытые физиологические механизмы действия нефти представлены для уточнения ПДК нефтепродуктов в биогеохимических условиях Каспийского моря. Предлагаются материалы для дальнейшей специальной разработки установления пределов физиологической пластичности и адаптации устойчивых и малоустойчивых особей в популяции различных видов ихтиофауны.

Для оценки критического уровня нефтяного загрязнения впервые для рыб, разработан биотест на основе изменчивости полиморфности белков и стуктурных образований (морфотипы) сыворотки крови, гомогенатов органов и тканей. Методы определения морфотипов в биологических жидкостях рыб имеют применение в рыбоводстве.

Полученные данные могут быть использованы в вузах при изучении курсов физиологии, экологической физиологии, биохимии, экологии гидробиологии и др.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Каниева, Нурия Абдрахимовна, Астрахань

1. Абакумов В.А. Экологические модификации и развитие биоценозов // Труды Международного симпозиума СССР, Нальчик, 1-12 июня 1990г.-Л.: Гидрометеоиздат, 1991. С. 18-37.

2. Агаджанов М.И. Перекисное окисление липидов в норме и патогенезе различных заболеваний // Сб. науч. тр. Ереванского мед. ин-та. Ереван, 1988.- 141 с.

3. Агаджанов М.И. Воздействие физических и химических факторов на метаболизм и структуру мембран / Сб. статей. Саранск; М.: Изд-во МГУ.-1989.-С. 43-51.

4. Агаджанян Н.А. Экологическая физиология: проблема адаптации и стратегия выживания // Материалы X Международного симпозиума «Эколого-физиологическая проблемы адаптации».- М., 2001. С.5-12

5. Алимова Е.К. Липиды и жирные кислоты в норме и при ряде патологических состояний. М.: Медицина, 1973. - С.85-91.

6. Алтухов Ю.П. Генетические процессы в популяциях. М.: Наука, 1983. — 278с.

7. Алтухов Ю.П.; Салменкова Е.А. Трансплантация, системная организация и рациональное использование популяции рыб. Популяционная генетика и управление рыбным хозяйством. М.: Агропромиздат, 1991. — С. 15—27.

8. Алтуфьев Ю.В., Гераскин П.П., Мумжу В.А. Гистофизиологический и токсикологический аспекты проявления миопатии русского осетра // Тез. докл.VII Всесоюзной конференции. Ярославль, 1989. - С.8-10.

9. Алтуфьев Ю.В. Печень каспийских осетровых в условиях антропогенного загрязнения среды // Тез. докл. симпозиума «Экологические и морфофункциональные основы адаптации гидробионтов». Л., 1990. - С.

10. Ю.Алтуфьев Ю.В., Романов А.А., Шевелева Н.Н. Гистопатология поперечнополосатой мышечной ткани и печени каспийских осетровых // Вопросы ихтиологии. 1992.-Т.32. - Вып.2. - С.157-171.

11. П.Алтуфьев Ю.В. Морфофункциональное состояние мышечной ткани и печени молоди русского осетра и белуги в экспериментах по хронической интоксикации//Вопросы ихтиологии. 1994. -Т.34. - №1. - С. 135-138.

12. Алтухов Ю.П. Генетические процессы в популяциях. М.: Наука, 1983. -277с.

13. П.Алтуфьев Ю.В. Адаптационные процессы в воспроизводстве каспийских осетровых // Диссертация в виде научного доклада на соискание ученой степени, д-ра биол. наук. СПб.; Пушкин, 1999. - 74 с.

14. Алтухов Ю.П., Салменкова Е.А. Трансплантации, системная организация и рациональное использование популяций рыб // Популяционная генетика и управление рыбным хозяйством. М.: Агропромиздат, 1991.— С.15-36.

15. Андронникова И.Н. Количественная оценка участия зоопланктона в процессах самоочищения (на примере оз. Красного) // Гидробиологические основы самоочищения вод. JI., 1976. - С.30-35.

16. Анохин П.К. Узловые вопросы теории функциональной системы. М.: Наука, 1980.- 195с.

17. Аршаница Н.М. Перевозников М.А. Ихтиотоксикологический мониторинг водоемов // Тез. докл. I Конгресса ихтиологов России (сентябрь, Астрахань, 1997). М.: Изд-во ВНИРО, 1997. - С.140.

18. Арчаков А.И. Оксигеназы биологических мембран. М.: Наука, 1983. С.74-95

19. Артюхова В. И., Носов В. Н. Особенности и пороги токсического воздействия нефтепродуктов на гидробионтов Каспийского моря. // Теоретическая экология. М.: Изд-во МГУ, 1987. - С. 70-80.

20. Афанасьева Н. А., Кирьянов С. В. Состояние загрязнённости Каспийского моря на современных этапах // Материалы Всесоюзного совещания по проблеме Каспийского моря. Гурьев, 1991.- С. 31-36.

21. Ахмедова Т.П., Дохолян В.К., Л.Д. Коваленко Адаптационные изменения биохимических параметров молоди осетра при загрязнении «Буровыми растворами» // Тез. докл VII Всесоюз. конф. «Экологическая физиология и биохимия рыб». 1989. Т.1. - С.22-24.

22. Балаховский И.С., Наточин Ю.В. Проблема космической биологии. М.: Наука, 1973.-32с.

23. Балаховский И.С. Лабораторные методы исследования в клинике. М., 1987. - С.230-234.

24. Баранникова И.А., Буковская О.С., Дюбин В.П. Некоторые физиологические показатели осетра при современном состоянии экосистемы Каспийского бассейна // Тез. докл. Всесоюзного совещания «Осетровое хозяйство водоемов СССР». 4.1. Астрахань, 1989- С. 2021.

25. Беспрозванный Б.К. Куферовские клетки печени и некоторые морфологические варианты их системных реакций // Успехи гепатологии. 1980.-Вып. 8.-С. 21-31.

26. Бобырев В.Н., Почерняева В.Ф. и др. Специфичность систем антиоксидантной защиты органов и тканей основа дифференцированной фармакотерапии антиоксидантами // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1994. - Т.57. - С.47-54.

27. Брагинский Л.П. Теоретические аспекты проблемы «нормы» «патологии» в водной токсикологии // Материалы III симпозиума «Теоретические вопросы водной токсикологии». Борок; Л.: Наука, 1979. - С.29-40.

28. Бурлакова Е.Б. Влияние липидов мембран на ферментативную активность // Липиды, структура, биосинтез, превращения и функции. М.: Наука, 1977.-С. 16-27.

29. Бурлакова Е.Б. Роль липидов в процессе передачи информации в клетке // Биохимия липидов и их роль в обмене веществ.- М.: Наука, 1981. С.З— 16.

30. Бурлакова Е.Б. Липиды. М., 1977. - С. 16-27.

31. Бурлакова Е.Б., Хохлов А.П. Биологические мембраны. 1985. - Т. 2. -№6.-С. 557-565.

32. Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г. Перекисное окисление липидов мембран и природные антиоксиданты // Успехи химии. 1986. - Т. 54. - Ч. 9. — С.1540-1558.

33. Ведемейер Г.А., Мейер Ф.П. Смит Л. Стресс и болезни рыб.- М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981 128с.

34. Веселов Е.А. Методы определения токсичности компонентов сточных вод для водных организмов // Вопросы гидробиологии. Материалы I съезда Всесоюзного гидробиологического общества. М., 1965. - 62 с.

35. Вернадский В.И. Химический состав живого вещества в связи с химией земной коры. -М.: Время, 1922. 240с.

36. Вернадский В.И. Очерки геохимии. M.;JI.: Время, 1927.-158с.

37. Вишневская Е.К. Клетки синусоидных сосудов печени // Морфология. — 1993. Т. 104. - №. 3-4. - С. 135-143.

38. Винберг Г.Г., Сивков Г.Н. Фитопланктон как агент самоочищения загрязненных вод //Тр. Всесоюзного гидробиологического общества. — М.,1956.-Т.7. С.155-158.

39. Винберг Г.Г. Первичная продукция водоемов. Минск: Изд-во АН БССР, 1969.-328с.

40. Винберг Г.Г. Итоги исследований пресноводных сообществ всех трофических уровней // Ресурсы биосферы Л., 1976. - Вып.2. - С145-147.

41. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. -М.: Наука, 1972. 182с.

42. Владимиров Ю.А. Биологические мембраны и патология клетки. М.: Знание, 1979.

43. Владимиров Ю.А. Биомембраны: Структура. Функции. Медицинские аспекты. Рига, 1981. -320 с.

44. Владимиров Ю.А. Свободно-радикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран // Биофизика.- 1987. Т.32. - №5. - С. 830-844.

45. Воробьев В.И. Микроэлементы и их применение в рыбоводстве. Пищевая промышленность. М., 1979. - С.339.

46. Воробьев В.И. Биогеохимия и рыбоводство. Саратов: Изд-во «Литера», 1993.-С.396.

47. Воробьев В.И., Каниева Н.А. Изменение метаболических реакций в организме карпа при интоксикации нефтью // Вестник СГАУ им. Н.И.Вавилова. 2003. - №3. - С.96-103.

48. Воробьев В.И., Каниева Н.А. Резистентность различных видов рыб в зависимости от степени их оксифильности в условиях сублетального действия нефти. //Вестник СГАУ им. Н.И.Вавилова. 2004. - №1. -С.4-10.

49. Гапочка Л.Д., Ваттах М., Дрожжина Т.С., Карауш Г.А., Шавырина О.Б., Белая Т.И. Популяционные аспекты адаптации гидробионтов к токсическим веществам //Вестник МГУ. Серия 16. Биология. №4.-С.34— 41

50. Гельман Н.С., Лукьянова М.А., Островский Д.Н. Мембраны бактерий и дыхательная цепь. М.: Наука, 1972. -246 с.

51. Геннис Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функции. М.: Мир, 1997.-624с.

52. Гераскин П.П., Металлов Г.Ф., Шелухин Г.Н., Переварюха Ю.Н., Баль Н.В. Аксенов В.П., Львов В.Л. Мониторинг физиологического состояния осетровых в условиях загрязнения Каспия и реки Волги. Астрахань, 1997.-64 с.

53. Гераскин П.П., Металлов Г.Ф., Шелухин Г.Н., Переварюха Ю.Н., БальН.В. Аксенов В., Львов В.Л. Характеристика физиологического состояния осетровых. Астрахань, 1998. - 204с.

54. Гераскин П.П., Алтуфьев Ю.В., Металлов Г.Ф. Мониторинг физиологического состояния осетровых в условиях загрязнения Каспия и реки Волги. // Рыбохозяйственные исследования на Каспии. Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 1999.-С.173-189.

55. Гербильский Н.Л. Гистологический анализ переходов между ранними этапами онтогенеза у рыб // Материалы совещания эмбриологов «Проблемы эмбриологии». Л., 1956.-С.8-12.

56. Гербильский Н.Л. Эколого-гистофизиологическое направление в ихтиологических исследованиях // Биологические основы рыбного хозяйства. Томск: Изд-во Томского университета, 1959. С.83-87.

57. Герлах С. А. Загрязнение морей. Диагноз и терапия. Л.: Гидрометиздат, 1985.-269 с.

58. Гинзбург А.С., Детлав Т.А. Развитие осетровых рыб. М.: Наука, 1969. -134с.

59. Гительзин И.И. Исследование крови методами объективной спектрофотометрии // Автореф. дисс. канд. биол. наук. Красноярск, 1954.- 12с.

60. Головина Н.А. Методы гематологических исследований в ихтиопатологической практике // Труд ЦНИИТЭИРХ 1989 - Вып. 4 - С. 8-18.

61. Гримм О.А. О гибельном влиянии нефти на рыб и мерах противодействия этому // Вестник рыбопромышленности -1891- №12. С.379-387.

62. Грицено А.И., Максимов В.М., Акопова Г.С. Нефть и газ. -М., 1997

63. Гумидова Г.П., Сорокина Н.Н. Некоторые условия спектрофотометрического определения активности СДГ и ЦО в митохондриях мозга // Биол. экспер. Биол и мед.-1967.-№1. 41с.

64. Деев А.И., Добрецов Т.Е., Владимиров Ю.А. // Вопр. мед. химии. -1977. -№4.-С. 545-549.

65. Дервиз Г.В., Воробьев А.И. Количественное определение гемоглобина крови посредством аппарата ФЭК-М // Лаб. дело. 1953. - №3. - С.8-10.

66. Детлаф Т.А., Бродский В.Я., Гаузе Г.Г. Методы биологии развития. Экспериментально-эмбриологические, молекулярно-биологические и цитологические. М.: Наука, 1974. - 619с.

67. Деревягина Н.Г., Поленов А. Л. Функциональная морфология нейрогипофиза белуги при действии гербицида ялана // Тез. I Всесоюз. конф. «Эндокринная система организма и токсические факторы внешней среды». Л., 1979.-С.53-54.

68. Джабаров М.И., Бабаева Р.Ф., Гасанова Г.Ш. Влияние различной концентрации сырой нефти на физиолого-биохимический показатель рыб.// Тез. докл. I Международной конф. по проблемам Каспийского моря. Баку, 1991. - С. 31-32.

69. Долгов Г.И., Никитинский Я.Я. Стандартные методы исследований питьевых и сточных вод. М.,1927.

70. Досон Р., Эллист Д., Джонс.К. Справочник биохимика. М.: Мир, 1999. -464с.

71. Дохолян В.К. Нефтяное загрязнение и токсикология гидробионтов Каспия. //Проблемы охраны морской среды. Калининград, 1977. — С.265.

72. Дохолян В.К., Ахмедова Т.П. Влияние факторов среды на содержание гликогена в раннем онтогенезе рыб // Тез. докл VII Всесоюзн. конф. «Экологическая физиология и биохимия рыб». 1989. - Т.1. - С.119.

73. Дохолян В. К., Ахмедов JI. Д., Шейфер Г. С. Состояние физиолого-биохимических параметров и их адаптационные изменения в присутствии экстримальных факторов. Вильнюс, 1993. - С.63-64.

74. Друго Ю.С., Родин А.А.Газохроматографическая идентификация загрязений воздуха, воды и почвы. Практическое руководство. СПБ., 1999.-622с.

75. Дубинин Н.П. Мутагены среды и наследственность человека // Генетические последствия загрязнения окружающей среды. М.: Наука, 1977.-С.З-20.

76. Евгеньева Т.П. Патология мышечной ткани осетровых рыб М.: Изд-во РАН, 2000.- 102с.

77. Егоров М.А., Витвицкая JI.B. Использование биологически активных веществ в искусственном воспроизводстве осетровых Волго-Каспийского региона. Моногр. Астрахань, 2002. - 100 с.

78. Елисеев В.Г., Субботин М.Я., Афанасьев Ю.И., Котовский Е.Ф. Основы гистологии и гистопатологической техники. М.,1967. - С.115-266.

79. Еремеева С. В., Курапов А. А., Мельников С. А., Русаков Г. В., Ревякин В. И., Леденева Л.В. Современное экологическое состояние северной части Каспийсого моря в зимне-весенний период // Вестник МАНЭБ. -1999. №9 (21). - .С. 51-55.

80. Жаботинский Ю.М. Нормальная и патологическая морфология нейрона // Медицина. Л., 1965. - 322с.

81. Житенева Л.Д. Изменение гематологических показателей у рыб заливов Корфа и Олюторского в зависимости от условий обитания // Тез. докл. IV Всесоюзн. конф. по экологической физиологии и биохимии рыб. — Вильнюс, 1985. С.76-77.

82. Житенева Jl.Д., Гориславская М.М. Гематологические показатели сельди Clupea pallasi pallasi Val. В зависимости от физиологического состояния // Вопросы ихтиологии. 1986. - Вып.1. - Т26. - С.137-146.

83. Житенева Л.Д., Полтавцева Т.Г., Рудницкая О.А. Атлас нормальных и патологически измененных клеток крови рыб. Ростов-на-Дону, 1989. 112с

84. Жукинский В.Н. Влияние абиотических факторов на разнокачественность и жизнеспособность рыб в раннем онтогенезе. М.: Агропромиздат, 1986.-248с.

85. Журавлева Г.Ф., Земков Г.В. Гистохимическое определение динамики активных метаболитов в гонадах рыб в экологических исследованиях // Методы ихтиотоксикологических исследований. Д., 1987. - С. 36.

86. Журавлева Г.Ф., Земков Г.В. Морфофукциональные нарушения в организме промысловых видов рыб как возможные последствия загрязнения дельты реки Волги // Тез. докл. регион, конф. «Экологические проблемы Волги». 4.II. Саратов, 1989. - С. 192-194.

87. Журавлева Г.Ф., Земков Г.В. Проблема адаптивной модификации современных Каспийских осетровых (патоморфофункциональные исследования) // Успехи современного естествознания. 2002. - №3. -С.28.

88. Журавлева Г.Ф. М. Морфофункциональные основы Адаптивной модификации осетровых при эндоэкологическом токсикозе // «Успехи современного естествознания». 2003. - №3. - С.68.

89. Журавлев А.И. Биоантиокислители в животном организме. М.: Наука, 1975.-273с.

90. Земков Г.В., Журавлева Г.Ф., Федорова Н.Н. Развитие морфофункциональных нарушений в печени карпа под влиянием возрастающих концентраций меди // Тез. докл. регион, конф. «Экологические проблемы Волги». Ч.П. Саратов, 1989 - С. 115-116.

91. Земков Г.В., Журавлева Г.Ф., Кокушкина И.В. Физиолого-биохимические показатели Осетровых рыб в зависимости от уровня накопления экзотоксикантов во внутренних органах // Сб. научных трудов ГосНИОРХ. Вып.313. М., 1990. - С. 186-204.

92. Земков Г.В., Журавлева Г.Ф. Кинетика патологических изменений при кумулятивном токсикозе в организме как критерий сопротивляемости популяции рыб // «Успехи современного естествознания». 2004. - № 1. -С. 41-47.

93. Иванов А.В., Полянский Ю.И., Стрелков А.А. Большой практикум по зоологии беспозвоночных. М., 1981. - С.8-^2.

94. Иванов Н.Т. Атлас клеток крови рыб. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. - С. 184.

95. Иванов В.П. Биологические ресурсы Каспийского моря. Астрахань, 2000. - 196с.

96. Иванов В. П. Нефть и биологические ресурсы Каспийского моря. В кн.: Прогноз и контроль геодинамической и экологической обстановок в регионе Каспийского моря в связи с развитием нефтегазового комплекса. - М.: Научный мир, 2000. - С 57-62.

97. Иванов В. П., Сокольский А. Ф. Научные основы стратегии защиты биологических ресурсов Каспийского моря от нефтяного загрязнения. -Астрахань, 2000.-181 с.

98. Казанчеев Е. Н. Рыбы Каспийского моря. М.: Рыбное хозяйство, 1963 .-180с.

99. Казначеев Е. Н. «О полупроходных рыбах Северного Каспия» // Тр. ВНИРО. Т.89.-М., 1972.

100. Калюжный В. Статус Каспия может подождать // Нефтегазовая вертикаль. 2001. - №11С. 22-24.

101. Ш.Камшилов И.М. Функциональные характеристики гемоглобинов проходных осетровых рыб. // Вопросы ихтиологии. 2000. - Т. 40.- С. 832-841.

102. Каниева Н.А. Изменение некоторых показателей дыхания и гликолиза в организме осетра и карпа под влиянием нефти // Современные проблемы водной токсикологии. Борок, 2002. - С.45

103. Каниева Н.А. Особенности изменения белкового спектра сыворотки крови и скелетных мышц карпа в процессе интоксикации нефтью // Вестник СГАУ. 2004. - №2. - С.3-6.

104. Каниева Н.А. Зависимость степени токсичности нефти от количества состава ее компонентов в воде // Вестник БГТУ. 2004. - №8.

105. Каниева Н.А. Оценка влияния каспийской нефти на метаболизм карповых рыб // Успехи современного естествознания. 2003. - №3. — С.68-69.

106. Карагезян К. Г., Офсепян JI. М. И др. Исследования регуляции перекисного окисления липидов в биомембранах в норме и патологии // Биофизические и физико-химические исследования витаминологии. М., 1981.-С. 45^8.

107. Карамян А.И. Функциональная эволюция мозга позвоночных. Д.: Наука, 1970.-302с.

108. Каратаева Б.Б. Влияние экологических факторов на биологическое состояние рыб // Биопромысловые и экономические вопросы

109. Кассиль Г.Н. Гистоэнцефалический барьер. М.: Изд-во Академии наук СССР, 1963.-407с.

110. Кассиль Г.Н. Внутренняя среда организма. М.: Наука, 1978. - С.223.

111. Каспийское море: Ихтиофауна и промысловые ресурсы / Отв. ред. В.Н.Беляева, А.Д.Власенко, В.П.Иванов. М.: Наука, 1989.- 236 с.

112. Каспийское море. Фауна и биологическая продуктивность / Отв. ред Е.Я.Яблонская. М.: Наука, 1985 - 277 с.

113. Касимов Р.Ю., Рустамова Ш.А. Влияние нефти и нефтепродуктов на осетровых и других рыб // Тр. ЦНИОРХ. 1971. -Т.З.-С. 191-195.

114. Касимов Р.Ю., Аббасов Р.Ю., Исмайлов А.А., Палатников Г.М. В кн.: Экологическая физиология и биохимия рыб. - Астрахань, 1979. - С. 1820.белуги. В кн.: Осетровое хозяйство водоемов СССР. Тез. докл. -Астрахань, 1989.-С. 131-133.

115. Касымов Р.Ю., Грановский С.М.О влиянии нефти на донных животных Каспийского моря // Гидробиология. 1970. - №5. - С.96-99.

116. Касымов А. Г., Багиров Р. М. Биология современного Каспия. Баку, 1983.-154с.

117. Касымов А. Г. Каспийское море. Д.: Гидрометеоиздат, 1987. - 152 с.

118. Касымов А. Г. Экология Каспийского озера. Баку, 1994. - 240 с.

119. Кириллов В.Н., Чепурная А.Г., Федорова Н.Н., Каниева Н.А. Активная реакция среды экологический фактор, определяющий развитиепаразитофауны рыб // Материалы Международной конференции «Безопасность XXI века». СПб., 1998. С.144-147.

120. Кириллов О.И. Процессы клеточного обновления и роста в условияхстресса М., «Наука» - 1977.-117с.

121. Кирпичников B.C. Генетические основы селекции рыб. Л.: Наука, 1979.-391с.

122. Кисели Д. Практическая микротехника и гистохимия. — Будапешт: Изд-во АН Венгрии, 1962-399с.

123. КлебановГ.И.,Бабенкова И.В.,Теселкин Ю.О.,Комаров О.С.,Владимиров Ю.А. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов. Лабораторное дело. М.-«Медицина».-1988.-С.59-61.

124. Ковалёва Г. И. Влияние растворенных нефти на углеводородный обмен черноморских рыб разной экологии // Автореферат. канд. биол. наук. -Севастополь, 1977. 270 с.

125. Ковальский В.В. Геохимическая экология. -М.: Наука, 1974. 420с.

126. Кодыняк И.П., Абрамова А.И. Сравнительная устойчивость легких, почек и печени к гипоксии // Проблемы патологии в эксперименте и клинике. Тр. Львовского мединститута. Львов, 1991. - С. 18-24.

127. Козлов Ю.П. Структурно-функциональные аспекты перекисного окисления липидов в биологических мембранах // Липиды, структура, биосинтез, превращения и функции. М.: Наука, 1977. - С.80-93.

128. Козлов Ю.П., Братковская Л.Б. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах // Биофизические и физико-химические исследования витаминологии. М, 1981. - С. 9 -12.

129. Козловская В.Н., Новичкова Н.С., Флерова В.А. В кн.: Физиология и паразитология животных. - JI., 1979. - С.42-49.

130. Колье О.Р., Максимов Г.В. Ритмическое возбуждение в соматических нервах. М.: Наука, 1987. - 175 с.

131. Кокуричева М.П. О применении гистологического изучения органов и тканей рыб в водной токсикологии // Изв. ГосНИОРХ. Влияние пестицидов и нефтепродуктов на водные организмы. Т. 98. JL, 1974. -С.112-120.

132. Коржуев Н.А. Экологические и физиологические особенности крови осетровых рыб // Вопросы ихтиологии. 1963. - Т. 3. - № 1 (25). - С. 152.

133. Коржуев Н.А, Глазова Т.Н. Сравнительно-физиологическая характеристика крови и кроветворных органов рыб и водных млекопитающих // Биология моря. Вып. 15. Киев: Наукова думка, 1968 - С.131-145.

134. Коржуев Н.А. О биохимических аспектах обмена веществ у рыб. В кн.: Современные вопросы экологической физиологии рыб. - М., 1979. -С. 11-19.

135. Корниенко Г.Г., Кожин А.А., Воловик С.П., Макаров Э.В. Экологические аспекты биологии репродукции. Ростов-на-Дону, 1998. -238с.

136. Корочкин Л.И., Серов О.А., Пудовкин А.И. Генетика изоферментов. М.: Наука, 1977.-С. 278.

137. Косинова Н.Р. Влияние фосфорорганических пестицидов на уровень метаболизма некоторых видов рыб // Автореферат дисс. канд. биол. наук. -Севастополь, 1978- 24с.

138. Костров Б.П.; Горбунова Г.С.; Курапов А.А. и др. Влияние нефти на биотические компоненты экосистемы Северного Каспия // Рыбохозяйственные исследования на Каспии. Астрахань: Изд-во КаспНИРХа, 1998. - С. 52-59.

139. Костров Б. П., Магомедов А. К., Курапов А. А. Экспериментальная оценка биодеградации нефти // Материалы 15 Научно-практической конференции по охране природы Дагестана. Махачкала, 1999 ~ С. 245246.

140. Котов A.M. Морфологические и физиолого-биохимические особенности черноморских рыб в различные периоды годового цикла и при отравлении нефтепродуктами // Автореф. дисс. канд. биол. наук. Баку, 1976.-23с.

141. Котык А., Яначек К. Мембранный транспорт. М.: Мир, 1980. - 341с.

142. Кошелев В.В. Изменение нормы реакции при адаптации рыб к новым условиям существования // Реакция гидробионтов на загрязнение».- М— 1983- С.74-81.

143. Коштоянц Х.С. Основы сравнительной физиологии. Т.21. М.: Изд-во АН СССР, 1957.-630с.

144. Коронелли Т. В. Поглощение углеводородов микроорганизмами // Успехи микробиологии. 1980. - Т. 15. - С. 26-44.

145. Крепе Е.М. Липиды клеточных мембран: Эволюция липидов мозга: Адаптационная функция липидов. Л., 1981. - 342 с.

146. Кретович В.А.Введение в энзимологию. М.: Наука, 1986. - 330с.

147. Крылов В. П. Методические указания по гематологическому исследованию рыб в водной токсикологии. Л.: ГосНИОРХ, 1974. -С. 39.

148. Крылов О.Н. Методика токсиологических опытов на рыбах с целью установления пограничных концентраций вредных веществ // Химические средства защиты ценных видов рыб. Л.: ГосНИОРХ, 1974. -Вып. 146.-С. 100-116;

149. Крючков В.И. Суточный ритм двигательной активности молоди южнокаспийского осетра при нефтяном загрязнении //Осетровое хозяйство водоемов СССР. Астрахань, 1989 - С. 165-166.

150. Кузьмин Е.В. Сравнительный анализ фракционного состава саркоплазматических мышечных белков различных представителей семейства осетровых // Вопросы ихтиологии. 1994. - Т.34. - №4. - С. 548-556.

151. Кузьмин Е.В. Сравнительный анализ электрофоретических спектров сыворотки крови некоторых представителей семейства осетровых. // Биол. внутр. вод. 2001. - №3.-С.64-68.

152. Кудрявцев А.А., Кудрявцева JI.A., Привольнее Т.И. Гематология животных и рыб. М.: Колос, 1969. С.320.

153. Кушнер В.П. Конформационная изменчивость и денатурация биополимеров. JL: Наука, 1977. - С.273.

154. Кычанов В.М., Солохина Т.А., Югай Т.В.Взаимосвязь отдельных физиолого-биохимических параметров с фертильностью самок осетровых рыб // «Рыбохозяйственные исследования на Каспии». -Астрахань. 2000. - С. 429^435.

155. Кычанов В.М. Биологические тесты в воспроизводстве ценных видов рыб. Астрахань, 2003. -162с.

156. Лабораторные исследования в ветеринарии. М.: Колос, 1971. - 647с.

157. Лакин Г.Ф. Биометрия. -М.: Высшая школа, 1973. -343с.

158. Ласкорин В.Н., Лукъяненко В.И. Стратегия и тактика охраны водоемов от загрязнения.// Мир науки. -1993. Т.37. -№2.-С. 13-17.

159. Ласкорин В.Н., Лукъяненко В.И. Влияние антропогенного загрязнения на качество воды и осетровых рыб Каспийского моря // Вторая Всесоюз. конф. по рыбохозяйственной токсикологии «Проблема качества воды в России». Тез. докладов. Т.2. СПб., 1991. - С.9-10.

160. Лебединский Н.А., Помаржанская В.А. Санитарная гидробиология и водная токсикология. Рига, 1968.-С.81-86.

161. Ленинджер А. Основы биохимии. М.: Мир, 1985. - 1056 с.

162. Лепилина И. Н. Количественный состав предличинок севрюги в зависимости от состояния водной среды // Материалы IV Ассамблеи

163. Ассоциации университетов прикаспийских государств. Махачкала, 1999.-С. 226-227.

164. Лесников Л.А. Методика оценки влияния воды из природных водоемов на Daphnia magna. В кн.: Методики биологических исследований по водной токсикологии. - М.: Наука, 1971. - С. 157-168.

165. Лесников Л. А. Разработка нормативов допустимого содержания веществ в воде рыбохозяйственных водоемов. В кн. Вопросы методик в водной токсикологии. - Л.: ГосНИОРХ, 1979 - С.3-42.

166. Лесников Л.А., Чинарева И.Д. Патогистологический анализ состояния рыб при ролевых и экспериментальных токсикологических исследованиях. Л., 1987. - С. 80-81.

167. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. М.: Мир, 1969.-621с.

168. Лиманский В.В., Бекина Е.Н. Методы определения углеводов в тканях рыб // Типовые методики исследования продуктивности видов в пределах их ареалов. Вильнюс, 1981. - С. 13-29.

169. Лукин А.А., Даувальтер В.А., Новоселов А.П. Экосистема Печоры в современных условиях. Монография. Апатиты: Изд-во Кольского научного центра РАН, 2000.-192с.

170. Лукъяненко В.И. Токсикология рыб. М.: Пищевая промышленность, 1967.-С. 316.

171. Лукъяненко В.И., Ермолин Г.А., Седов С.И., Попов А.В. Белковый спектр сыворотки крови осетровых по данным дискэлектрофореза в полиакриламидном геле // Доклады АН СССР. -1967.-Т.174. —№1 — С.227-229.

172. Лукъяненко В.И. Коллоидная устойчивость сывороточных белков осетровых.// Тр. ЦНИОРХ. 1970.-Т.2 - С. 38^0.

173. Лукъяненко В.И., Гераскин П.П., Баль Н.В., Лукъяненко В.В. Коллоидная устойчивость сывороточных белков различных популяцийволжской стерляди./ЛГез. отчетной сессии ЦНИОРХ. Астрахань, 1973 — С.61-62.

174. Лукъяненко В.И. Общая ихтиотоксикология. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1983.-С.320.

175. Лукъяненко В.И.; Карпович Т. А.; Биотестирование на рыбах. Методическая рекомендация. Рыбинск, 1989. - С.96.

176. Лурье Ю.Ю. Унифицированные методы анализа вод. М.: Химия. 1973.-375с.

177. Магомедов А. К. Дохолян В. К. Экспериментальная оценка влияния нефти на гидробионтов Каспия // Биологические ресурсы дагестанского прибрежья Каспийского моря. Махачкала, 1992.-Вып. 1.-С. 31-41.

178. Мазманиди Н. Д. К патоморфологии отравления рыб фосфором. В кн.: Вопросы водной токсикологии.-М.: Наука, 1973. С. 128-136.

179. Мазманиди Н.Д., Котов A.M. Влияние дисперсантов нефти на выживаемость и некоторые физиолого-биохимические показатели черноморской смариды // Гидробиологический журнал. -1981. Т.12. -№1.-С.74-77.

180. Мазманиди Н.Д., Котов A.M. Нефтяное загрязнение и экология морских организмов // Рыбное хозяйство. 1982. - №8.-С. 32-33.

181. Мазус М.М. Экологические проблемы нефтяной индустрии // Вестник МГУ: Экономика. 1999. - №5.- С.74-81.

182. Маилян Р.А. Загрязнение Каспийского моря и его отрицательное влияние на рыбную и другие отрасли народного хозяйства // Загрязнение Волго-Каспия и перспективы рыбного хозяйства. Астрахань, 1966. -С.49-62.

183. Маляревская А.Я. Обмен веществ у рыб в условиях антропогенного евтрофирования водоемов // Киев: Наук, думка, 1979. 186с.

184. Маляревская А.Я. Специфические и неспецифические изменения при действии различных токсикантов как показатели патологическогосостояния организма рыб //Теоретические проблемы водной токсикологии-М., 1983 .—С. 12— 15.

185. Маршин В.Г. Наследование общей двигательной активности гибридов осетра и стерляди. В кн.: Генетика поведения-М., 1969. - С. 155-160.

186. Матюхин В.А., Хаскин В.В., Шошенко К.А. Исследование энергетики движения рыб. Новосибирск, 1984 - 134с.

187. Матей В. Е. Функциональная морфология жаберного эпителия пресноводных костистых рыб // Физиология, биохимия и токсикология пресноводных животных. JL: Наука, 1990. - С. 104-141.

188. Маурер Г. Диск-электрофорез. М. Мир .1971. С 175-176 лактатдегидрогеназы в полиакриламидном геле. В кн.:::: Сравнительная биохимия рыб и их гельминтов. - Петрозаводск, 1977. - С.77-85.

189. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники. М.: Медицина, 1969,- 422с.

190. Металлов Г.Ф., Аксенов В.П. Динамика ключевых ферментов энергетического обмена у русского осетра в условиях Волго-Каспийского бассейна // Тез.докл. I Конгресса ихтиологов России (Астрахань, 1977).— М.: ВНИРО, 1997.-С.422.

191. Мешкова Н.Н., Северин С.Е. Практикум по биохимии животных. М.: Сов. наука, 1950.

192. Мещерин А. В. Сюжет без интриги // Нефтегазовая вертикаль. 2001. -№11. — С.5-8

193. Милынтейн В.В. Осетроводство. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982- 152с.

194. Минц Р.И., Кононенко Е.В.Жидкие кристаллы (мезофазы) в организме человека // Архив патологии 1981. -Т. XLIII. - № 7 - С.3-11.

195. Миронов О.Г. Развитие некоторых рыб в морской воде, загрязненной нефтепродуктами // Вопросы ихтиологии. 1969. -№26. -С. 1136-1139.

196. Миронов О.Г. Нефтяное загрязнение и жизнь моря. Киев: Наукова думка, 1973. -86с.

197. Миронов О.Г., Щекатурина Т.Л. К вопросу о метаболизме углеводов у морских гидробионтов //Экспериментальные исследования влияния загрязнителей на водные организмы. Апатиты, 1979. -С. 128-132.

198. Миронов О.Г., Взаимодействие морских организмов с нефтяными углеводородами-Л.: Гидрометиоиздат, 1985 127с.

199. Миталёв В. Н. Состояние углеводоокисляющей микрофлоры как показателя нефтяного загрязнения Северного Каспия // Материалы IV Ассамблеи ассоциации университетов прикаспийских государств. -Махачкала, 1999. -С. 196-197.

200. Михайлова Л.В., Лыгина В.П., Журавлева А.И. Сдвиги в обмене белка у рыб в присутствии водорастворимой фракции нефти (ВРФН).- В кн.: Рефераты науч. сообщ. Ш Всесоюз. биохим. съезда. Т.2. Рига, 1974. -С.354.

201. Михайлова Л.В. Образование комплексов нефть-белок как один из факторов определяющих токсичность и кумулятивные свойства // Тез. докл. IVВсесоюзной конференции-1979.

202. Михайлова Л.В. Исследование возможности образования комплекса водорастворимой фракции нефти с белками крови и печени карпа // Вопросы ихтиологии-1983 -Т.23 -Вып.З. -С.519-521.

203. Моисеенко Т.Н. Морфологические перестройки организма рыб под влиянием загрязнения (в свете теории С. Шварца) // Экология. — М.: Мир, 2000. № 6. - С 463-472.

204. Молдавская А.А.; Журавлева Г.Ф.; Врочинский К.К.; Федорова Н.Н. Теплый Д.Л.; Земков Г.В. Морфо-функциональные аспекты проявления токсикоза у рыб. Астрахань, 2003. - С. 18.

205. Монахов С. К., Поставин П. В., Соловьев Д. В., Яготинцев В. Н. Экосистема и окружающая среда Каспийского моря Махачкала, 1997 — 116с.

206. Монина Ю.И. География нефтяного загрязнения океана // Природа-1991.-MS.-С. 70-74.

207. Мороз И.В. Накопление хлорорганических пестицидов в организме осетровых рыб и степень проявления токсического воздействия на различных стадиях их онтогенеза // Сб. научн. тр. ИБВВ АН СССР. — Рыбинск, 1990. С.62-69.

208. Мосевич Н.А. Загрязнение рыбохозяйственных водоемов сточными водами и нормирование сброса сточных вод как борьба с их вредным влиянием. // Вестник Ленингр. ун-та. 1952. - №8. -209с.

209. Навозов-Лавров Н.П. Влияние нефтеперевозок на рыбные запасы. // Рыбное хозяйство. -1940. №12.-С.14.

210. Нельсон-Смит А. Нефть и экология моря. М.: Прогресс, 1977. -С. 302.

211. Новиков М.А. Оценочное эколого-рыбохозяйственное районирование морских акваторий // Водные ресурсы. 2004. - Т.31. - №2. -С. 193-198.

212. Нога Г.С. Наблюдения и опыты по зоологии. М.: Просвещение, 1979. 143 с.

213. Одум Ю. Экология. -М: Мир. -1986. -Т.1. -С.328.

214. Обухов Д.К., Крючков В.И. Исследование влияния нефтяного загрязнения на морфофункциональное развитие молоди осетровых рыб // Вопросы рыболовства. 2000 - Т.1.-Вып.4.-С.98-117.

215. Паавер Т. Биохимическая генетика карпа Cyprinus carpio L. -Таллин: Валгус, 1983-122с.

216. Палатников Г.М., Мамедов Ч.А. Нейрональные корреляты обонятельного поведения молоди русского осетра в условиях нефтяного загрязнения // Тез. V Всесоюзной конференции по водной токсикологии. М.: ВНИРО, 1988. - С.141-142.

217. Панин JI.E. Биохимические механизмы стресса. Новосибирск: Наука, 1983.-233с.

218. Патин С.А., Петухов С.А., Морозов И.П. О распределении и дифференциации металлов в экосистеме пелагиали океана // Докл. АН СССР. 1978 - Т.240.-№2.-С.445-447.

219. Патин С.А. Влияние загрязнения на биологические ресурсы и продуктивность мирового океана. М.: Пищевая промышленность, 1979.-185с.

220. Патин С. А. Экологические проблемы освоения нефтегазовых ресурсов морского шельфа. М.: Изд-во ВНИРО, 1997. - 359 с.

221. Патин С. А. Нефть и экология континентального шельфа. М.: Изд-во ВНИРО, 2001.-247 с.

222. Петров B.C., Серова И.П. Влияние нефтяного загрязнения Каспийского моря // Мурманский морской институт Кольского научного центра РАН. -Мурманск, 1992. 14.-Деп. ВИНИТИ.26.392 №1052-В92.

223. Пирс Э. Гистохимия теоретическая и прикладная. М.: ИЛ, 1962.-962с.

224. Плохинский Н.А. Биометрия-М.: Изд-во МГУ, 1970.-302с.

225. Покровский А.А., Тутельян В.А. Лизосомы. М.: Наука, 1976. - 382 с.

226. Покровский А.А. Биохимические методы исследования в клинике. — М.,1969.

227. Покровский А.А. Ультраструктура гепатоцита // Тр. ДАН СССР. -1970.- Т. 192.-С. 58.

228. Поленов A.JI. Гипоталамическая нейросекреция. JL: Наука, 1971 — 158с.

229. Полякова А.В., Полякова Т.В. Влияние химического загрязнения вод на экологические условия мирового океана //Тр. Международного биотехнологического центра МГУ «Биотехнология охране окружающей среды». Ч.Н - М.: Спорт и культура, 2004.-С. 132-137.

230. Попов В.В., Собчук Б.А. Лабораторное дело. №3. Красноярск, 1957-192с.

231. Привезенцев Ю.А. Гидрохимия пресных водоемов.- М.: Пищевая промышленность, 1973.-С.117.

232. Прохова М.И., Туликова З.И. Большой практикум углеводному и липидному обмену. Л., 1965.-С. 34-56.

233. Ратушняк А.А., Андреева М.Г., Латыпова Л.Г., Гарипова Л.Г. Токсикологическое воздейсвие нефти на продуктов ее переработки на Daphnia magma II // Гидробиологический журнал.- 2000.-Т.36— №6— С.92-101.

234. Романов Ал. А., Федорова Н.Н., Дубовская А.В. Морфофункциональные нарушения жаберного эпителия осетровых рыб Волго-Каспия в природных условиях // Цитология. -1998. Т.40. - №6. -С. 529-533.

235. Ромейс Б. Микроскопическая техника. М.: ИЛ, 1953. -720с.

236. Росин Я.А. Учение Л.С. Штерн о гистогематических барьерах. Сборник «Гистогематические барьеры и нейрогуморальная регуляция». -М.: Наука, 1981.

237. Салманов М.А. Экология и биологическая продуктивность Каспийского моря. Баку.-1999. -С.399.

238. Салменков Е.А., Малинина Т.В. Применение электрофоретических методов в популяционно-генетических исследованиях рыб. В кн.:::: Типовые методики исследований продуктивности видов рыб в пределах их ареалов. - Вильнюс: Моколас, 1976. - С.82-92.

239. Саркисов Д.С. , Пальцев М.А., Хитров Н.К. Общая патология человека. М.: Медицина, 1995. - С.269.

240. Саркисов Д.С. Очерки истории общей патологии. М.: Медицина, 1997. -510с.

241. Сейфулла Р.Д., Борисова И.Г. Проблемы фармакологии антиоксидантов // Фармакология и токсикология. -1990. Т.53. - №6. - С.З- 20.

242. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме. М.: Медгиз, 1960. -254с.

243. Селюков А.Г. Состояние репродуктивной системы и печени рыб в условиях загрязнения Обь-Иртышского бассейна // Тез. докл. Конгресса ихтиологов России. Астрахань, 1997 - С. 130.

244. Семенов А. Д., Кишкинова Т.С. Изучение содержания хлорорганических пестицидов в водной экосистеме Волго-Каспийского бассейна в связи с заболеваниями осетровых // Тез. докл. Всесоюз. совещ. «Осетровое хозяйство водоемов СССР». Ч.И. 1989. - С.15-16.

245. Сидоров B.C. Экологическая биохимия рыб. Липиды. Л.: Наука, 1983. -240 с.

246. Сидоров B.C., Шатуновский М.И. Теоретический и пракитический аспекты экологической биохимии рыб // Сравнительная биохимия водных животных. Петрозаводск, 1983.

247. Смит Л.С. Введение в физиологию рыб // Сокращ. пер. с англ. В.И. Лапина. -М.: Агропромиздат, 1986 168с.

248. Сорвачев К.Ф. Причины расслоения мышц осетровых рыб не познаны наукой. М.: Изд-во МГУ, 1997.-35с.

249. Строганов Н.С. Гидрохимия. М.: Изд-во МГУ, 1969. - 170 с.

250. Строганов Н.С. Методика определения токсичности водной среды.- М.: Наука, 1971.-С. 14-60.

251. Слоним А.Д. Экологическая физиология животных. М.: Высшая школа, 1971.-449с.

252. Строганов Н.С. Теоретические вопросы экологической физиологии рыб в связи с усилением токсичности водной среды // Современные вопросы экологической физиологии рыб. М.: Наука, 1979 - С. 19-34

253. Строганов Н.С. Допустимые уровни загрязнения водоемов. В кн.: Влияние загрязняющих веществ на гидробионтов и экосистемы водоемов. -Л, 1979.-С. 9-16.

254. Строев Е.А., Макарова В.Г. Практикум по биохимической химии. М.: Высшая школа, 1986.

255. Струков А.И. Патологическая анатомия.- М.: Медицина, 1971. 600с.

256. Таранов М.Т. Биохимия и продуктивность животных. М, 1976.

257. Тарасов А. Г. Биотический индекс дельты реки Волги и Северного Каспия // Автореф. дисс. канд. биол. наук. М., 1993. - 23 с.

258. Телитченко М. М., Говорова М. Ф. Ранняя диагностика токсикозов рыб эритрограмм // Вопросы ихтиологии. 1962. - Т. 2. - Вып. 3(24).

259. Телитченко М.М., Говорова М.Ф. Ранняя диагностика токсикозов рыб методом эритрограмм // Вопросы ихтиологии. 1962. - Т.2. - Вып. 3(24).

260. Теплый Д.Л. Влияние витамина Е на проницаемость гематоэнцефалического барьера // Физиол. журн. СССР 1979. - Т.65, № 10. - С.123-134.

261. Теплый Д.Л., Зуммеров Р.А., Бекчанов А.Н. Гистологические изменения в моторных нейронах пояснично-кресцового отдела спинного мозга кошек при экспериментальном ботулизме и столбняке // Тез. 48-й сессии Гос. мединститута. Астрахань, 1965.- С.37-38.

262. Топарская В.Н. Физиология и патология углеводного, липидного и белкового обмена. -М.: Медицина», 1970.

263. Устьевая область Волги: гидролого-морфологические процессы, режим загрязняющих веществ и влияние колебаний уровня Каспийского моря. — М.: ГЕОС, 1998.-2208 с.

264. Ушакова В.Н., Иоданидис Н.В., Кадошникова Г.Д., Деева З.М. Контроль перекисного окисления липидов. Новосибирск, 1993. - 121с.

265. Федий С.П. Значение ихтиофауны в биопродукции качества воды водоемов степной зоны Украины // Самоочищение воды и миграция загрязнений по трофической цепи. М.: Наука, 1984. - С. 102-106.

266. Филенко О.Ф. Водная токсикология. М.: Черноголовка, 1988.-154с.

267. Флеров Б.А. Влияние малых концентраций фенола на двигательную пищевую активность и прирост живого веса карасей // Вопросы ихтиологии. 1965. - Т. 5. - Вып. № 1 (34). - С. 164-172.

268. Флеров Б.А. Эколого-физиологические аспекты токсикологии пресноводных животных. JL, 1989. -144 с.

269. Хазанов А.И. Функциональная диагностика заболеваний печени. М.: Медицина, 1989. -199 с.

270. Халафов X. Статус моря: политические и правовые аспекты // Нефтегазовая вертикаль. 2001. - № 3 - С.28-29.

271. Холикова Н.И. Патогистологические изменения некоторых органов леща (Abramis brama L.) под влиянием 2-метил-5этиперидина (НЭП) и2-метил-5винилпиридина (МВП) //Инф. биол. «Биол. вн. вод». Рыбинск, 1970.-№5.-С.39-42.

272. Хочачка П., Сомеро Дж. Стратегия биохимической адаптации. М.: Мир, 1977.-С.214-223.

273. Червова И. А., Караганов Я. Л. Ультроструктурные основы проницаемости сосудисто-тканевых барьеров. В кн.: Биологические мембраны. - М.: Медицина, 1977. - С.208-344.

274. Чернышева М.П. Роль липидов в метаболическом эффекте гормонов. — Ташкент. ФАН. -1990.

275. Черниговский В.Н., Сапов И.А Организм в условиях гипербарии / Сб. науч. тр. Л.: Наука, 1984. - 149 с.

276. Шабалин В.Н., Шатохина С.Н. Клиническая кристаллография: становление, проблемы, перспективы // Кристаллографические методы исследования в медицине: Сб. науч. тр. М., 1997. - С.3-25.

277. Шабалин В.Н., Шатохина С.Н. Принципы аутоволновой самоорганизации биологических жидкостей // Вестник РАМН. 2000. — №3.-С.45-49.

278. Шатуновский М.И. Экологические закономерности обмена веществ морских рыб. М.: Наука, 1980. - 283с.

279. Шапоренко С. И. Загрязнение прибрежных вод России // Водные ресурсы. -1997. Т.24, №3. - С. 320-327

280. Шварц С.С. Эволюционная экология животных // Труды института экология растений и животных. Вып. 65. Свердловск: Изд-во АН СССР. С. 12-18.

281. Шелухин Г.К. Физиолого-биохимические параметры осетровых в морской и речной периоды жизни // Автореф. дисс. канд. биол. наук -1974.

282. ЗЮ.Шлейфер Г.С., Дохолян В.К., Ахмедова Т.П. Состояние физиолого-биохимических параметров осетра при интоксикации нефтью // Осетровое хозяйство водоемов СССР. Астрахань, 1989 - С.350-352

283. Щербаков Ю.А. Морфологические изменения, развивающиеся в органах рыб при привыкании к токсическим веществам //Реакция гидробионтов на загрязнение. М., 1983. - С. 114-116.

284. Шишинашвили Л.А., Флеров Б.А. Токсикологические аспекты экологических модификаций //Экологические модификации и критерии экологического нормирования / Тр. Междунар. симпозиума СССР. 1-12 июня, 1950. Л.: Гидрометеоиздат, 1951. - С.253-264.

285. Шкорбатов Г.Я. Эколого-физиологические аспекты микроэволюций водных животных. Харьков, 1973.

286. Шляпинтох В.Я., Карпухин О.Н. Постников Л.М. и др. Хемилюминесцентные методы исследования медленных химических процессов. -М.: Наука, 1966. -142 с.

287. Шмальгаузен И.И. Избранные труды. М.: Наука, 1983. -359с.

288. Шмид-Нельсон К. Экологическая физиология животных. М., 1985. -318с.

289. Эмануэль Н.М. Кинетика и механизм цепных реакций жидкофазного окисления углеводородов. // Проблемы кинетики элементарных химических реакций. М.: Наука, 1973. - С. 31-50.

290. Юровицкий Ю.Г., Мильман А.С. Синтез и деградация гликогена в оогенезе и раннем эмбриогенезе рыб // Экологическая физиология рыб-Киев, 1976. -С.136-138.

291. Якубов Ш.А. Фоновый мониторинг мутагенеза рыбохозяйственных водоемов // Материалы докл. АН СССР. М., 1988. - Т.228. - №4. - С.1-14.

292. Якубов Ш.А., Алтуфьев Ю.В. О физиолого-генетических аспектах массовой гибели осетровых рыб и других гидробионтов Каспия на рубеже XXI века // Тез. докл. I научн.-практ. конф. «Проблемы современного товарного осетроводства». Астрахань, 2003. - С.31-32.

293. Якубов Ш.А., Александрова М.А., Якубова Д.Ш. О сохранении генофонда и биоразнообразия водных экосистем // Наука и образование 2003 / Материалы Всерос. научн.-техн. конф. Мурманск: Изд-во МГТУ, 2003.-С. 165-166.

294. Ясуо Кагава. Биомембраны. -М.: Высшая школа, 1985. -303с.

295. Andralewich E. Harmful substances // Stud.Mater.Oceanol. 1992. -No.61. -P.131-148.

296. Anonymous. Russian pipeline spill // Mar.Pollut.Bull. 1995. - Vol.30. -No.7. - P.433-434.

297. Bjoerke H., Dallen J., Bakkeplass K., Hansen K., Rey L. Availability of seismic activities in relation to vulnerable fish resources // help Havforskningsinist. Egg-Larveprogram. 1991. -No.38.

298. Blackman R.A. Offshore oil impact // Mar.Pollut.Bull. 1988. - Vol. 19, No. 4.-P. 185-186.

299. Boesch D.F., Rabalais N.N. (eds.). Long-term environmental effects of offshore oil and gas developments. New-York: Elsevier Applied Science, 1987.-P. 708.

300. Bruegmann L. Meeresverunrelngung. Berlinn: Academie Verlag, 1993, P.294.

301. Cairns W.J. (ed.). North Sea oil and the environment. Developing oil and gas resources, environmental impacts and responses. London and New-York: Elseiver Applied Science, 1992. - P. 722.

302. Cairns W.J. Mitigation by design // North Sea oil and the environment: Developing oil and gas resources, environmental impacts and responses. — London and New York: Elseiver Applied Science, 1992. P. 281-332.

303. Cardy S. Angling for oil at Wytch Farm. // Petroleum Reviews. 1993. -Vol.47. - No.561. - P .446-447.

304. Dalen J., Ona E., Soldal F.V., Saetre R. Seismiske undersokelser til havs. // Fisken og Havet. 1996. -No.9. - P.26.

305. Dalen J., Knutsen G.M. Scaring effects on fist and harmful effects on eggs, larvae and fiy by offshore seismic explorations // Proc. 12-th Intern. Congr. Accust. Halifax, July 16-18, 1986. New- York, 1987. -P.93-102.

306. Davies J.M., Kingston P.F. Sources of environmental disturbance associated with offshore oil and gas developments. // North Sea oil and the environment:

307. Developing oil and gas resources, environmental impacts and responses. -London and New-York: Elseiver Applied Science, 1992. P. 417-440.

308. Davis W.J. Contamination of coastal versus surface waters. A brief metaanalysis // Mar. Pollut. Bull. 1993. - Vol.26. -No.3. - P. 128-134.

309. Dicrs B. (ed.). Ecological impacts of the oil industry // Proceedings of the International Meeting, organized by Institute of Petroleum and held in London in November 1987. New York, 1989. P. 316.

310. Duke T.W. Potential impact of drilling fluids on estuarine productivity. // Proceedings of the International Symposium on Utilization of Coastal Ecosystems: Planning, Pollution and Productivity. Rio Grande, Brasil. -1995. -P.215-240.

311. Donaldson E.M., Dye N.M. Journ. Fish. Res. Board Can., 1975. P. 535-539.

312. Fedorova N. N., Kirillov V. N., Kanieva N.A. The pathology of sturgeons blood cell que to the influence of environmental anthropogenic pollutions. Vth International ichthyonaematology conference. Vodnani. Czech Republic, 1998.

313. Eichenberger E.E., Bohui P. //FEBS Lett. 1982. Vol. 142, N1. -P. 59-62.

314. Freeman N.C., Idler D.R. Gen. Сотр. Endocrinal. -1973. - P. 69-75.

315. Freeman N.C., Idler D.R. Gen. Сотр. Endocrinal. -1973. - P. 69-75.

316. Fowler S. W. Concentration of selected contaminants in water, sediment and living organisms // UNEP Technical annexes to the report on the state of the marine environment. UNEP Regional Sea Reports and Studies No.l 14/2. -UNEP, 1990. P.209-230.

317. Gas N. Alterations structurales du muscle blanc de Carpe (Cyprinus carpio L.) au cours du jeune prolonge // C. R. Acad. Sc. Paris. 1972. V. 275.

318. GESAMP. Impact of oil and related chemicals and wasters on the marine environment. // GESAMP Reports and Studies No. 50. London: IMO, 1993. - P.180.

319. GESAMP. Land/Sea boundary flux contaminants: contribution from rivers. // GESAMP Reports and Studies. No.32. - Paris: UNESCO, 1987. - P. 174.

320. GESAMP. The state of the marine environment. Oxform: Blackwell Scientific Publications Ltd, 1992. -P. 128.

321. Gluth G., Hank W. Сравнение физиологических изменений у карпа, вызванные некоторыми загрязнителями в сублетальных концентрациях. — 1984.

322. Gray J.S. Environmental politics and monitoring around oil platforms. // Mar.Pollut.Bull. 1988. - Vol. 19. - No. 11. - P.549-550.

323. Gray J.S. Anthropocentric or ecocentric? // Mar.Pollut.Bull. 1991. -Vol.22.-No. 11.-P.529.

324. Gourlay K.A. Chapter 3. The black death: oil. // Poisoners of the seas. -London; Zed Books Ltd., 1988. P. 133-188.

325. Grogan W.C., Blanchard J.R. Environmental assessment. // North Sea oil and the environment: Developing oil and gas resources, environmental impacts and responses. London and New-York: Elseiver Applied Science, 1992. - P. 362-402.

326. Halsband E., Prochonow F. Исследование влияния кадмия на характеристики крови, электропроводимость (тела) и скелетную систему форелей // Veroff, Inst. Kusten und Binnefis. -1980. -P. 285.

327. Histochemistry theoretical and applied-London, 1960, P. 871. Love/1980

328. ICES. Report of the ICES Advisory Committee on the Marine Environment -Copenhagen: ICES, 1994.-P. 122.

329. Knott D. More North Sea oil flowing in despite of stormy disruption. // Oil and gas Journ. 1993. - Vol.91. - No.44. - P.23-28.

330. Khan R. A., Kictneuk J., Dawe M., Williams U/ Long-term effects of crude oil on Atlantic cod // International Council for the Exploration of the Sea. -ICES С.М/ 1981/E, 40. 1981. - 10 p.

331. Laane R.W.P.M. (ed.). Background concentrations of natural compounds in rivers, sea water, atmosphere and mussels. // Report DGW-92.033. The Hague, 1992. P.78.

332. Love R. The chemical of fishes, L. N. Y. 1980, v. 2.

333. McGunness N. Stress hyperglycemia and minimally invasive surgery // Surg. Laparose. Endocr. V. 87. 1999. P. 435-437.

334. Moore В., Hamilton T. Shallow gas hazard the HSE perspective. // Petroleum Reviews. - 1993. - Vol.47. -No.560. - P.403^07.

335. Morrow J.E., Gritz R.L., Kirton M.P. Effects of some coponents of crude oil on young coho salmon // Copeia.- 1975. No 2. - P. 326-331.

336. Mursa O.P., Sxena V.P. Effects of environmental pollution on the growth and stability analisis //Indian J. Pure and Appl. Math. 1991. - Vol.22. - NolO. -P. 805-817.

337. Nakano Т., Tomlinson N. Journ. Fich.Rec. 1960. - Vol.89. - P.358-370.

338. Naidu K. Akhilender, Kamamurthi. Действие ртути на некоторые ферменты мозамбикской теляпии при остром отравлении //Ecotoxicol and Environ Safetg. -1984. 8p.

339. Neff J.M. Petroleum in the marine environment: regulatory strategies and fisheries impact // Battelle Ocean Sciences Laboratory. Duxbery, 1993. -P.13use in the marine environment. COGLA EPB technical Report N5, Ottawa, Canada, 1985. - P.324-353.

340. Parsons L.S. Management of marine fisheries in Canada. Ottawa: Nat.res.Council of Canada, 1993. - P.764.

341. Patterson S., Goldspink G. The effect of starvation on the ultrastructure of the red and white myotomal muscles of the Crucian Carp (Carassius carassius) // Z. Zellforsh., 1973. Vol. 146.

342. Patin S.A. Global pollution and biological resources of the World ocean. // World Fisheries Congress Proceedings. New Delhy: Oxford and IBH Publ.Co., 1995. - P.69-75.

343. Pearce J.B. Collective effects of development on the marine environment // Oceanologica Acta. 1991. - Vol. SP. - No. 11. - P.287-298.

344. Sastry K., Rao D. Влияние хлорида ртути на некоторые биохимические и физиологические параметры пятнистого змееголова // Environ Res. -1984. -34р.

345. Reiter R. I., Mtkchiorri D., Severynek E., Poeggeler B. at.al. A review of the evidence supporting melatonins role as an antioxidant //I. Pineal Res. 1995. P.5-11

346. Shears J.R. An analysis of the frequency, location and magnitude of oil spills around the British Isles, and an evaluation of their environmental damage. -Department of geography, University of Southampton, 1989. P.47.

347. Side J.S. Decommissioning and abandonment of offshore installations. // North Sea oil and the environment: Developing oil and gas resources, environmental impacts and responses. London and New York: Elseiver Applied Science, 1992. - P. 523-552.

348. Seifler S. et.al. The cetimation of Hliycogen with the centrone Reagent. -Arch Biochem. -1950. Vol. 25. - P. 191.

349. Smits J. E. TORREY CANYON pollution and marine life.- London. Cambridge Univ. Press, 1968.-196 p.

350. Stimpson J.H. Сотр. Biochem. Physiol. 1965.15.P. 187-197

351. Taylor P. The state of the marine environment: a critique of the work and of the Joint Group of Experts on Scientific Aspects of Marine Pollution (GESAMP). // Mar.Pollut.Bull. 1993. - Vol.26. -No.3. - P. 120-127.

352. Topping G. The role and application of quality assurance in marine environmental protection // Mar.pollut.Bull. 1992. - Vol.25. - No.l—4. -P.61-65.

353. Tonk I. P. Биомониторинг загрязнения воды сублетальной концентрацией пестицидов. Системный подход //Acta hydrochim et hydrobiol. -1984. -12р.

354. Warren R.P. Offshore oil and gas exploration: what are the environmental effects do to justify limitation of access to coastal waters // APEA Joum. 1989. P.84-94.247