Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Цитогематологическое исследование рыб при воздействии тяжелых металлов и сырой нефти

ВАК РФ 03.00.10, Ихтиология

Автореферат диссертации по теме "Цитогематологическое исследование рыб при воздействии тяжелых металлов и сырой нефти"

На правах рукописи

Абдуллаева Наида Муртузалиевна

ЦИТОГЕМАТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ РЫБ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ И СЫРОЙ НЕФТИ

03.00.10 — ихтиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

□ОЗОВ55Т5

Махачкала - 2007

003065575

Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных и Лаборатории моря Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «ДАГЕСТАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ», г. Махачкала

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Габибов Магомед Магомедович

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор

Исуев Али Раджабович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Зайцев Вячеслав Федорович

доктор биологических наук, профессор Шихшабеков Магомед Магомедович

Ведущая организация: Прикаспийский институт биологических ресурсов Дагестанского научного центра РАН

Защита диссертации состоится «12» октября 2007г. в 14.00 часов на заседании диссертационного совета К212.053.12 по присуждению ученой степени кандидата биологических наук Дагестанского государственного университета по адресу: 367025, г. Махачкала, ул. Ба-тырая, 4, Даггосуниверситет, биологический факультет.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Даг-госуниверситета

Автореферат разослан «11» сентября 2007г. Ваш отзыв, заверенный печатью, просим направить по адресу: 367025, г. Махачкала, ул. М.Гаджиева, 43а, биологический факультет, e-mail-cacal@yandex.ru, факс 8(8722)675915

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

/ К

Магомедова М.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. В последние годы особую актуальность приобретает проблема охраны водных экосистем от загрязняющих веществ антропогенного происхождения. Бурное развитие перерабатывающей промышленности, химизация сельского хозяйства приводит к все нарастающему загрязнению окружающей среды тяжелыми металлами, нефтью и нефтепродуктами и пагубно влияет на всю живую природу (Миронов, 1973, Гусев, 1975, Нельсон-Смит, 1977; Лукъяненко, 1983, Касымов, 1994; Линник и др., 1997; Будни-ков., 1998; Иванов, Сокольский, 2000, Патин, 2001; РпЬещ, ЕНпёег, 1993; вора! е.а., 1997; Каг^п, Cogum, 1999).

Антропогенная химическая трансформация биосферы, выражающаяся в преобразовании вещества поверхностных оболочек планеты, в результате производственной деятельности человека приобретает глобальный характер (Орлов и др, 2002; Леонова, 2004). Ведущее место по масштабам загрязнения принадлежит водным экосистемам.

Многие повреждающие факторы окружающей среды при действии в малых, совместимых с жизнью дозах, вызывают в организме нарушения, которые могут в той или иной степени компенсироваться за счет восстановительных, защитных адаптивных реакций. Улавливать такие «сигналы тревоги» помогает анализ реакций тканевых систем, прежде всего гематологической, кроветворной и иммунной, а также изменений в метаболических процессах и генетическом аппарате клетки (Хрущов, 1993; Исуев и др., 2000; Абдусамадов и др., 2004; Гилева, Щупак, 2005).

Выявить токсичность того или иного вещества для рыб и других гидробионтов и ее степень можно только в экспериментальных условиях, т.к. самое детальное изучение водоема не может дать ответа на эти вопросы. Точно также, только в экспериментальных условиях, можно установить и безвредную концентрацию того или иного вещества для конкретного вида рыб. Отсюда становится очевидным необходимость и актуальность развития исследований по ихтиотоксико-логии.

Понимание механизмов действия токсикантов на рыб и других гидробионтов является необходимой предпосылкой для разработки научных основ и методов определения ПДК, применительно к задачам рыбохозяйственной регламентации поступающих в водоемы ток-

сических веществ. Речь идет о развитии физиолого-биохимического и цитогенетического подхода к решению проблем ихтиотоксикологии

Цель и задачи исследования:

Целью работы является исследование цитогематологических показателей рыб при хроническом воздействии тяжелых металлов и сырой нефти.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследование динамики содержания гемоглобина, эритроцитов и элементов белой крови (лейкоцитов, нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов) сеголеток карпа и двухлеток красноперки при хроническом (5, 15, 30,40 суток) воздействия ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти.

2. Изучение кинетики кислотного гемолиза эритроцитов сеголеток Карпа и двухлеток красноперки при хроническом воздействии ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти

3. Исследование влияния хронического загрязнения водной среды ионами РЬ2+, Сё2+и сырой нефтью на накопление индуцированных генетических повреждений в эритроидных клетках сеголеток карпа и двухлеток красноперки на основе микроядерного теста.

4. Оценка состояния водных экосистем по накоплению индуцированных генетических повреждений в эритроидных клетках разных видов рыб (на примере внутренних водоемов Дагестана и района Ту-рали-2 Дагестанского побережья Каспийского моря).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При хроническом воздействии ацетата свинца в течение 40 суток и сырой нефти в течение 30 суток наблюдается снижение уровня гемоглобина, эритроцитов и общего количества лейкоцитов, увеличение моноцитов и полиморфоядерный лейкоцитоз в крови сеголеток карпа и двухлеток красноперки.

2. Под влиянием ионов РЬ2+, Сй2+, сырой нефти отмечено снижение кислотной резистентности эритроцитов и их «старение», которое выражается в накоплении в крови среднестойких и высокостойких, и исчезновение из сосудистого русла высокочувствительных к кислотному гидролизу эритроцитов, а также в существенном сокращении общего времени гемолиза.

Выявлена относительно более высокая устойчивость эритроцитов сеголеток карпа при длительном воздействии ацетата свинца по сравнению с хлоридом кадмия. Под влиянием ионов Сё2+ и сырой

нефти наблюдаются более значимые изменения качественного состава эритроцитарной популяции.

3. Установлено, что при хроническом воздействии ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти частота встречаемости эритроид-ных клеток со следами хромосомных поломок значительно превышает уровень спонтанно возникающих мутаций; в популяции эритроид-ных клеток увеличивается количество клеток с микроядрами и дву-ядерных клеток. Отмеченное повышение более выражено при хроническом воздействии сырой нефти.

4. Цитогенетический мониторинг внутренних водоемов Дагестана и района Турали Каспийского моря, проведенный с помощью микроядерного теста на 9 видах промысловых рыб, показал, что частота встречаемости клеток с микроядрами и двуядерных клеток находится в пределах спонтанного мутагенеза. Полученные материалы свидетельствуют об относительном цитогенетическом благополучии данных водоемов, а также о возможности использования кроветворных клеток рыб в качестве надежной тест-системы для обнаружения цито- и генотоксических соединений и проведения цитогенетическо-го мониторинга водных экосистем.

Научная новизна. В настоящей работе впервые проведено ци-тогематологическое исследование рыб при хроническом воздействии ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти.

Показано, что при хроническом воздействии исследованных токсикантов происходит снижение уровня гемоглобина, эритроцитов и общего количества лейкоцитов при одновременном повышении нейтрофилов и моноцитов.

Установлено снижение кислотной резистентности эритроцитов рыб и сокращение общего времени гемолиза под влиянием указанных токсикантов.

С помощью метода микроядерного теста установлено увеличение количества эритроидных клеток с микроядрами и двуядерных клеток, что свидетельствует о мутагенном влиянии изученных нами токсикантов.

Проведенный цитогенетический мониторинг внутренних водоемов Дагестана и района Турали-2 Каспийского моря с использованием микроядерного теста свидетельствует об относительном цитогенетическом благополучии исследованных водоемов.

Делается вывод о возможности использования кроветворных клеток рыб в качестве надежной тест-системы для проведения цито-генетического мониторинга водных экосистем.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные данные представляют теоретический и практический интерес для понимания цитогенетических механизмов влияния ионов Pb2+, Cd2+ и сырой нефти при их хроническом воздействии. В результате проведенного исследования показано, что под влиянием ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти в хроническом эксперименте возникают изменения в показателях красной и белой крови, кислотной резистентности эритроцитарных мембран, увеличивается количество эритроидных клеток со следами хромосомных поломок

Предложенный в работе микроядерный тест эритроидных клеток может быть использован в качестве тест-системы для обнаружения генотоксических веществ и проведения цитогенетического мониторинга водных и наземных экосистем.

Материалы, полученные в диссертации, используются в учебном процессе специальности «Водные биоресурсы и аквакультура» на кафедре ихтиологии Дагестанского государственного университета при чтении курса «Ихтиотоксикология» и спецкурсов.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы докладывались на: ежегодных научных сессиях профессорско-преподавательского состава Дагестанского государственного университета (2004-2007г.г.); Международной научной конференции «Проблемы мониторинга экосистем Каспийского моря» (Махачкала, 23-30 сентября 2002); XVII Научно-практической конференции по охране природы Республики Дагестан (Махачкала, 2003), V Международной научно-практической конференции «Медицинская экология» (Пенза, 29-30 июня 2006); III Научно-практической конференции «Новые технологии' в медицине» (Махачкала, 2006); Международной научной конференции «Современные проблемы адаптации и биоразнообразия» (Махачкала, 23-26 ноября 2006); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные аспекты жизнедеятельности человека на Севере» (Архангельск, 16-17 ноября 2006); Международном форуме по проблемам науки, техники и образования (Москва, 4-8 декабря 2006); XX съезде Физиологического общества им. И.П. Павлова «Физиология 21 века - перспективы» (Москва, 4-8 июня 2007); Международной конференции «Новые технологии в экспериментальной биологии и медицине» (Ростов-на-

Дону, октябрь 2007); совместном заседании кафедр физиологии человека и животных и ихтиологии Дагестанского государственного университета (сентябрь 2007 г.)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, объем 1,62 п.л Личный вклад диссертанта в опубликованном материале 85%

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 100 страницах, включая библиографию. Работа состоит из введения и трех глав: состояние изученности проблемы, материалы и методы исследования, результаты исследования и их обсуждение; заключения, выводов и списка использованной литературы. Библиографический указатель включает 163 источников, из них 132 на русском, 31 на иностранных языках Работа иллюстрирована 8 таблицами и 8 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Основным объектом исследования были сеголетки (5-6 мес., массой 100-150 г.), обоего пола карпа (Cyprmus carpió L.), отловленные из прудов Широкольского рыбоводного комбината в осеннее время (ноябрь 2004-2006 годов) перед их переброской в зимовальные пруды. Другим объектом исследования явились двухлетки красноперки (Scardinius erythrophthaimus L.) массой 15,5 г, отловленные в южной части Аграханского залива Каспийского моря. В работе также использованы взрослые рыбы, отловленные в водоемах (Караколь-ский, Аракумские, Нижнетерские), впадающих в Аграханский залив: линь (Tinca tinca), сазан (Cyprinus carpió L.), красноперка (Scardinius erithrophthalmus L.), золотой карась (Carassius auratus auratus), серебряный карась (Carassius auratus gibelio), тостолоб (Hypophtalmichtys molitux), лещ (Abramis brama), сом (Silurus glanis).

Моделирование хронического загрязнения ацетатом свинца в концентрации 0,5 мг/л (ПДК для рыбохозяйственных водоемов 0,1 мг/дм3 (Методические указание, 2003; Волошина, 2006); кадмия в концентрации 1,0 мг/л (ПДК для рыбохозяйственных водоемов 0,05 мг/дм , Колупаев, Колупаева, 2006) и сырой нефтью в концентрации 0,5 мг/л (10 ПДК) (Перечень рыбохозяйственных нормативов, 1999) проводили в аквариальных условиях. Хронический эксперимент проводился в течение 5,15,30,40 суток. Контролем во всех опытах служили рыбы, содержавшиеся в аквариумах с чистой водой.

Цитогематологические анализы проводили по следующим показателям: цитогенетический анализ эритроидных клеток (путем учета микроядер и двуядерных клеток) (Захидов и др., 1993), определения гемоглобина, эритроцитов и их кислотной резистентности (Терскова, Гительзон, 1957), лейкоцитов, нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов, подсчет лейкоцитарной формулы.

Статистическую обработку результатов проводили методом малой выборки по ^критерию Стьюдента (Лакин, 1990) с использованием интегрированного пакета обработки информации БТАТОКАРН-ГСЭ. Различия полагали статистически значимыми при уровне р<0,05 и ниже.

ВЛИЯНИЕ АЦЕТАТА СВИНЦА, ХЛОРИДА КАДМИЯ И СЫРОЙ НЕФТИ НА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ РЫБ

1. Содержание гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитарная формула рыб при воздействии тяжелых металлов и сырой нефти

Одним из критериев оценки действия токсических веществ на организм являются гематологические показатели. При воздействии ацетата свинца в концентрации 0,5 мг/л, хлорида кадмия (1,0 мг/л) и сырой нефти (5 мг/л) уже на 5-е сутки наблюдались изменения в содержании гемоглобина и значительнее всего при действии сырой нефти (рис. 1-3), Если при воздействии ацетата свинца имело место незначительное повышение его уровня (на 4,7%), при воздействии хлорида кадмия снижение на 6,3%, то под действием сырой нефти его содержание снижено на 5-е сутки на 28,3% по сравнению с контролем (р<0,001).

На 15-й, 30-й и 40-й дни воздействия исследованных токсикантов имело место более глубокое снижение уровня гемоглобина в крови рыб по сравнению с 5 сутками и контролем. Это снижение особенно значительно на 30-е сутки воздействия ацетата свинца и сырой нефти (на 21,3 и 63,1 %, соответственно) и на 15-е сутки воздействия хлорида кадмия (на 37,5 %).

На 5-е и 15-е сутки воздействия ацетата свинца и хлорида кадмия происходило незначительное повышение количества эритроцитов в периферической крови сеголеток карпа (рис. 1,2) На 30-й и 40-й дни воздействия токсикантов наблюдалось снижение их уровня и

больше всего (на 24,7%) на 40-е сутки воздействия хлорида кадмия (р<0,05).

На начальных этапах действия сырой нефти также имело место некоторое повышение содержание эритроцитов крови рыб. При пролонгировании ее действия до 25 и 30 суток уровень эритроцитов в крови рыб снижался. На 30-е сутки снижение составило 27,9% относительно контроля (рис.3).

Разнонаправленные изменения были отмечены нами и в содержании элементов белой крови рыб (рис. 1-3). Однако во все периоды воздействия ацетата свинца и хлорида кадмия снижение уровня лейкоцитов незначительно и оно статистически недостоверно относительно контроля, В то же время действие сырой нефти вызывало существенное снижение содержания лейкоцитов и значительнее всего на 30-е сутки (на 38,9% ниже контроля).

При воздействии ацетата свинца существенное накопление ней-трофилов в крови сеголеток карпа происходило на 5-е сутки. Оно в 2,1 раза выше контроля. Через 15-е и 40-е сутки его действия количество нейтрофилов не отличалось от контрольного уровня. Хлорид кадмия также вызывал накопление нейтрофилов в крови рыб. При этом в отличие от ионов РЬ2+, ионы Сс12+ обладали хроноконцентра-ционным действием: накопление нейтрофилов находилось в прямой зависимости от времени экспозиции в среде с токсикантом, достигая максимума на 40-е сутки (в 3 раза выше контроля).

пмэгЛОбин Э№П»Ц»ГТЫ лвйамжты пнжЬошпи моноюти

□ 5-Й Ш15-Й ® 30-й И40-Й

Рис. 1. Динамика содержания гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов в крови сеголетков карпа при хронической интоксикации ацетатом свинца.

Здесь и далее: * - достоверность различий относительно контроля.

На 5-е сутки воздействия сырой нефти уровень нейтрофилов выше контроля в 2,5 раза, в то время как на 15 и 30-е сутки это увеличение статистически недостоверно (р>0,5).

*

———--— —

ВНйм ИМДиЬ ОЧС-ЙЛЧ^

Ркс. 2. Динамика содержания гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов в крови сеголетков карпа при хронической интоксикации хлоридом кадмия.

Рис, 3. Динамика содержания гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, моноцитов, нейтрофилов, лимфоцитов в крови красноперок при хронической интоксикации нефтью.

Воздействие ацетата свинца не вызывало существенных сдвигов в содержании моноцитов на 5-е сутки. На 15-е сутки экспозиции рыб в среде с ионами РЬ2+ уровень моноцитов повышался на 19,8%, снижаясь на 20,4 и 37,1% на 30-е и 40-е сутки соответственно.

При воздействии хлорида кадмия снижение количества моноцитов на 41,1% происходило на 30-е сутки, не отличаясь от контроля на 5-е, 15-е и 40-е сутки. Интоксикация водной среды нефтью вызывало существенное увеличение количества моноцитов и больше всего на 5-е сутки (в 3,5 раза выше контроля). На 15-е и 30-е сутки нефтяной интоксикации уровень моноцитов в крови двухлеток красноперки оставался также повышенным.

2. Кислотная резистентность эритроцитов периферической крови рыб при хроническом действии ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти

Метод кислотных эритрограмм, предложенный И. А. Терсковым и И.И. Гительзоном (1957) позволяет группировать морфологически однородные эритроциты по их возрастному составу. Распределение эритроцитов по стойкости зависит от физико-химического состава мембран.

Как видно из рис 4, 5, 6 эритрограмма контрольных сеголеток карпа и двухлеток красноперки одновершинна и ее пик приходится на 0,6 мин В этой точке гемолизу подвергается около 27,15% эритроцитов. Продолжительность эритрограммы контрольных рыб составляет 1,8 мин. Размах основания пика составил 0,4 мин. Одно-вершинность эритрограммы указывает на относительную однородность популяции, соответствующей нормобластическому типу кроветворения. Длительность гемолиза после наступления пика занимает 1,2 мин.

Воздействие токсикантов существенно отражается на эритро-грамме рыб. При этом менее значимые изменения наблюдаются при хроническом воздействии ацетата свинца (рис.4). На 5-й день воздействия ацетата свинца эритрограмма сеголеток карпа сходна с таковой контрольных рыб как по продолжительности гемолиза (2,0 мин), положению пика (0,6 мин), так и по размаху (1,4 мин). Однако, в отличие от контроля увеличивается число эритроцитов, подвергшихся гемолизу к 0,6 мин до 38,13%.

По мере пролонгирования действия ацетата свинца изменения в качественном составе эритроцитов становятся более выраженными.

Уже на 15-й день наблюдается смещение пика гемолиза; происходит понижение стойкости и увеличение количества разрушенных эритроцитов до 80,35%. На 30-е и 40-е дни экспозиции рыб в среде с ацетатом свинца наблюдается растянутость правого крыла эритрограммы, что, по-видимому, является следствием притока в сосудистое русло эритроцитов с высокой резистентностью и указывает на компенсаторный характер реакции кроветворной системы.

Воздействие хлорида кадмия (1 мг/л) приводит к значительному перераспределению популяций эритроцитов (рис 5) Степень обнаруженных изменений зависит от времени экспозиции рыб в среде токсиканта.

На 5-й день опыта основная часть эритроцитов (64,71%) разрушается в первые 0,6 мин. На 15-й день эксперимента наблюдается смещение эритрограммы в правую сторону и ее размах длится 1,6 мин. На 30-й день воздействия хлорида кадмия наблюдается аналогичная растянутость эритрограммы в правую сторону. Длительность эритрограммы составляет 1,8 мин При этом гемолизу подвергается 96,89% эритроцитов. На 40-й день экспозиции рыб в среде с хлоридом кадмия имеет место ранний гемолиз эритроцитов и на 1,4 мин почти все эритроциты (99,18%) подвергаются разрушению.

Не

г £

о а.

50 п 0 •50

¡0.2 0,6 1 1,4 1,8 время{мин}

»— контроль —«—5-й день

-20 4О2 06 1 1,4 1,8 время(мин)

-контроль ■

-30-й день

¡5 2 40-.

| 20-]

?! °

6 г. -го

Т-7-1-1-Г^^^Т^

0,2 0,6 1 1,4 1 8 время (шм)

-контроль

15-й день

0,в 1 1,4 вромя (мин)

-коктрогъ -

-40-й день

Рис.4 (а,б,в,г) Устойчивость эритроцитов сеголетков карпа к кислотному гемолизу при хроническом действии ацетата свинца.

0 2 0,6 1 14 1 8 время(мин)

-контроль ■

-5-й день

06 1 14 18 время (мин)

-контроль - г, - 15 й день ]

40

2 1? 20 В I "20

02 06 1 14 18 время (мин)

0 2 0,6 1 1,4 время(мин)

-30-й день |

-контроль -

- 40-й день [

Рис 5 (аДв,г) Устойчивость эритроцитов сеголетков карпа к кислотному гемолизу при хроническом действии хлорида кадмия.

.«итрвя» >8-ЙДЧР

Рис. 6 (аДв) Устойчивость эритроцитов двухлеток красноперки к действию нефти в условиях хронического опыта.

Кислотные эритрограммы рыб на различных этапах воздействия сырой нефти отражают существенные изменения в популяции эритроцитов (рис.6). На 5-е сутки воздействия сырой нефти выявлены изменения в сторону смещения эритрограммы в левую сторону. Наблюдается смещение максимума эритрограммы к 0,4 мин. Размах основания эритрограммы составляет 1,4 мин. За это время гемолизу подвергаются 99% эритроцитов.

На 15-й день экспозиции рыб в среде с сырой нефтью выявлены дальнейшие изменения в сторону смещения эритрограммы в левую сторону. Эритрограмма одновершинна со смещением максимума к 0,4 мин. Размах основания пика составляет 1,2 мин. За это время гемолизу подвергалось 98% эритроцитов. Время полного гемолиза сокращено. Уже на 1,4 мин наступает полное разрушение всех эритроцитов.

На 30-й день интоксикации сырой нефтью эритрограмма смещена влево. Разрушение эритроцитов происходит с первых секунд - нет стадии, предшествующей гемолизу. Пик гемолиза приходится на 0,4 мин. Продолжительность эритрограммы занимает 1,6 мин. При этом гемолизу подвергается 89% эритроцитов. Время полного гемолиза наступает к 1,4 мин.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о неодинаковой чувствительности эритроцитов к кислотному гемолизу под влиянием ионов РЬ2+ , Сё2+ и сырой нефти. Выявлена относительно более высокая устойчивость эритроцитов сеголеток карпа к кислотному гемолизу при длительному воздействии ацетата свинца что, по-видимому, можно связать с тем, что ионы РЬ2+ менее токсичны, нежели ионы С(12+ и сырая нефть. Под влиянием ионов С<12+ и сырой нефти наблюдаются более значительные изменения качественного состава эритроцитарной популяции.

Сокращение продолжительности гемолиза, исчезновение популяций высоко- и сверхчувствительных эритроцитов из кровяного русла, увеличение доли высоко- и среднестойких эритроцитов при воздействии РЬ2+, С<12 и сырой нефти свидетельствуют о «старении» популяции эритроцитов, которое может явиться следствием деструктивных процессов, возникающих в эритроцитарной мембране под влиянием изученных токсикантов.

Одной из причин старения эритроцитов может явиться окислительная модификация белков и липидов мембран эритроцитов под

влиянием изученных нами токсикантов (Козлова и др., 1998). Другой причиной может быть поступление в кровяное русло из депо старых форм эритроцитов с низкой устойчивостью к кислотному гемолизу (Маслова, 1994).

3. Влияние загрязнения водной среды ионами РЬг+, Cd2* и сырой нефтью на накопление индуцированных генетических повреждений в эритроцитах сеголеток карпа и двухлеток красноперки

Проведенные нами исследования по влиянию ионов РЬ2+, Cd2+ и сырой нефти подтверждают результаты ряда работ по генетической чувствительности кроветворных клеток рыб к действию токсикантов. В условиях воздействия токсикантов нами отмечены высокие уровни генетически аберрантных клеток (в 1,4-7,3 раза выше), чем в контроле (рис. 7,8).

Несмотря на то, что при выбранных нами условиях эксперимента ионы Pb2+, Cd2+ и сырой нефти вызывали статистическое значимое увеличение числа микроядер и двуядерных эритроцитов, в крови сеголеток карпа и двухлеток красноперки была выявлена кластогенная активность. Очевидно, это связано с условиями модельного эксперимента либо с сильными цито-токсическими эффектами токсикантов, приводящих к массовой клеточной гибели, в результате которой и происходит искусственное занижение клеток со следами хромосомных аномалий (Tates, Engels, 1989).

Вполне возможно, что специфическая среда содержания рыб в модельном эксперименте с токсикантами провоцирует изменения экспрессии некоторых генов, которые передаются эпигенетическим путем.

Из полученных нами данных следует, что кроветворные клетки рыб могут быть использованы как удобные тест-системы для выявления цито- и генотоксических веществ, а также в цитогенетическом мониторинге водной среды, так как колебания уровня спонтанного и индуцированного митогенеза могут отражать изменения степени загрязненности водной среды различными генотоксикантами.

Рис, 7. Динамика количества клеток с микроядрами (в % к контролю) в эритроцитах крови карпа и красноперок в хроническом эксперименте при воздействии ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти.

400 -

350 300 -

жцетп емши итпрпд пдмня пефгь

в 5-й ■ 15-« аэо-м

день лег м, день день.

Рис. 8. Динамика количества двуядериых клеток (в % к контролю) в эритроцитах кроен карпа и красноперок в хроническом эксперименте при воздействии ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти.

4. Мониторинг водных экосистем по накоплению индуцированных генетических повреждений в эритрондных клетках рыб (ва примере внутренних водоемов Дагестана и района Турали-2 Каспийского моря)

Нами в рамках патогенетического мониторинга проведено исследование генетических повреждений разных видов рыб, обитаю-

щих в различных водоемах Дагестана и района Турали Каспийского моря. Сбор материала проводился в апреле-мае 2006г. Было исследовано 100 особей 9 видов рыб. Определение уровня хромосомных мутаций в эритроцитах проводили с помощью метода учета микроядер и двуядерных клеток.

Таблица 1

Цитогенетический мониторинг эритроидных клеток рыб, обитающих во внутренних водоемах Дагестана и Дагестанского побережья Среднего Каспия (М±т, п=10)___________

Место сбора объектов исследования Рыбы Количество микроядер, % Число двуядерных клеток, %

Внутренние водоемы Дагестана Нижнетерские линь красноперка сазан сом щука 1,10±0,21 0,62±0,19 0,93±0,25 0,86±0Д7 1,05±0,21 1,13±0,18 1,44±0,20 0,87±0,25 1,84±0,38 2,40±0,35

Каракольский сазан зол карась сер. карась линь лещ 0,08±0,19 1,09±0,24 2,83±0,35 0,77±0,14 5,06±1,33 0,93±0Д8 1,18±0,26 2,07±0,38 2,89±0,24 1,26±0,28

Аракумские сазан сер. карась толстолоб 0,99±0,29 4,23±0,46 1,07±0,19 1,04±0,18 1,87±0,28 1,01±0,17

Дагестанское Побережье Среднего Каспия район Турали карп сазан линь толстолоб 1,19±0,21 1,25±0,13 1,11±0,31 0,78±0,22 2,22±0,35 2,92±0,16 2,50±0,29 2,84±0,38

В табл.1 приведены полученные нами результаты, характеризующие частоты встречаемости эритроидных клеток с микроядрами и двуядерных клеток в периферической крови разных видов рыб, обитающих во внутренних водоемах Дагестана.

У исследованных видов рыб из разных водоемов нами обнаружены микроядра, хромосомные мутации в эритроцитах с небольшим разбросом. Наименьший процент микроядер (0,62±0,19) нами обнаружен у красноперки из Нижнетерских водоемов, наибольший (4,23±0,46) - у карася из Аракумских водоемов (табл. 1).

Таким образом, частота встречаемости клеток с микроядрами в наших экспериментах колеблется от 0,62±0,19 до 4,23±0,46%, а двуядерных клеток от 0,87±0,25 до 2,92±0,1б%. Полученные материалы

соответствуют литературным, согласно которым в норме частота встречаемости клеток с микроядрами составляет 2-4% (Урываева, Делоне, 1992; Та1ев е.а., 1986). Содержание аберрантных клеток с микроядрами, согласно полученным нами данным, находилось в пределах нормы. В большинстве случаев у исследованных видов рыб частоты хромосомноаномапьных эритроцитов относительно низки.

Представленные данные могут служить фоновыми показателями при генетическом скрининге рыбных ресурсов с целью регистрации экологического состояния внутренних водоемов Дагестана, впадающих в Аграханский залив, и района Турали-2 Среднего Каспия.

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что в целом цитогенетическая картина в исследованных внутренних водоемах и в районе Турали-2 Среднего Каспия находится в пределах нормы. В пользу высказанного положения свидетельствуют и полученные нами данные по характеристике картины крови изученных видов рыб в этих водоемах. Содержание гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, нейтрофилов, моноцитов, лимфоцитов в крови рыб из различных водоемов находилось в пределах контрольных величин

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изучение морфологии крови является важным показателем в токсикологических исследованиях, т к в ней отражается физиологическое состояние организма. Под воздействием ионов РЬ2+, С<12 и сырой нефти происходят существенные изменения в картине красной и белой крови, содержании гемоглобина у исследованных рыб. Если у контрольных рыб наряду со зрелыми формами встречаются единичные юные формы, то при интоксикации в прямой зависимости от степени отравления увеличивается количество кислотно-резистентных зрелых эритроцитов при снижении числа менее устойчивых к кислотному гемолизу популяций эритроидных клеток. При воздействии ионов РЬ2+, С<12 и сырой нефти у сеголеток карпа и двухлеток красноперки развивается анемия, повышается ненасыщенность эритроцитов гемоглобином. Наименьшее содержание гемоглобина отмечается в крови рыб на 15-е сутки воздействия хлорида кадмия и на 30-е сутки воздействия сырой нефти.

Некоторые изменения выявлены нами со стороны клеток белой крови, характеризующиеся снижением уровня лейкоцитов Значительное уменьшение количества лейкоцитов имеет место во все пе-

риоды воздействия сырой нефти При воздействии ацетата свинца и хлорида кадмия изменение общего количества лейкоцитов в большинстве случаев статистически недостоверно по отношению к контролю

Наряду с изменением количества гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов, у рыб в среде с токсикантами обнаружены незначительные изменения в соотношении отдельных форм лейкоцитов, приводящие к нарушениям в лейкоцитарной формуле У опытных рыб снижение количества лимфоцитов на 19,5% имеет место на 30-е сутки воздействия сырой нефти. При воздействии токсикантов наблюдается полиморфоядерный лейкоцитоз- увеличение количества ней-трофилов, а также моноцитов. Эти изменения особенно выражены при воздействии сырой нефти.

Анализ результатов цитогематологических исследований и данных литературы (Кудрявцев, Кудрявцева, 1969; Кондратьева и др, 2001; Горбунова и др., 2003) указывает на взаимосвязь между изменением содержания в крови лейкоцитов и иммунных свойств крови рыб в среде с тяжелыми металлами и сырой нефтью, а, следовательно, на нарушение защитной реакции организма при изученных интоксикациях.

Одним из методов цитогенетического контроля является микроядерный тест, результаты которого характеризуют частоты хромосомных мутаций на уровне микроядер (Захидов и др., 19936; Урывае-ва, 1993; Smidt, 1975; Ashby, 1986; George е.а, 1989).

С помощью метода учета микроядер нами показано, что в периферической крови рыб, подвергшихся действию высоких концентраций ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти, частота встречаемости эритроцитов со следами хромосомных поломок значимо превышает уровень спонтанно возникающих мутаций на 5-, 15-, 30- и 40-е дни воздействия. При всех изученных сроках воздействия токсикантов в популяции эритроидных клеток наблюдается увеличение против нормы числа клеток с микроядрами и двуядерных клеток. Значительнее всего их увеличение имеет место в случае воздействия сырой нефти, что можно объяснить многокомпонентностью ее состава и способностью аккумулировать другие поллютанты. Для более обоснованной интерпретации полученных результатов к условиям реальной действительности представляют интерес исследования по комбинированному воздействию этих токсикантов на рыб. Очевидно, что попадание тяжелых металлов и сырой нефти в больших концен-

трациях в водные экосистемы может быть фактором риска в плане их влияния на генетический аппарат гидробионтов (Тихонова и др, 1996; Чистяков и др., 2001).

Наши результаты показывают, что кроветворные клетки рыб могут быть использованы как надежная тест-система для обнаружения цито- и генотоксических соединений, а также в цитогенетическом мониторинге водной среды. Такое положение подтверждается нашими исследованиями, проведенными в рамках онтогенетического мониторинга внутренних водоемов Дагестана (Нижнетерских, Кара-кольского и Аракумских), впадающих в Аграханский залив, и района Турали-2 Каспийского моря. Эти исследования, проведенные на 9 видах промысловых рыб, показали, что обнаруженная нами частота встречаемости клеток с микроядрами и двуядерных клеток разных видов рыб находилась в пределах вероятности спонтанного мутагенеза. Полученные материалы в целом свидетельствуют об относительном цитогенетическом благополучии данных водоемов.

Представленные данные могут иметь значение как для практики, так и для разработки теоретических вопросов ихтиотоксикологии. Они требуют дальнейших исследований, связанных с контролем качества природных вод, оценкой биологических эффектов комплексного загрязнения на популяции ценных промысловых рыб При этом цитогенетический ихтиомониторинг должен приобрести систематический и сравнительный характер.

ВЫВОДЫ

1. При хроническом воздействии ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти в течение 30-40 суток происходит снижение уровня гемоглобина и эритроцитов в периферической крови сеголеток карпа и двухлеток красноперки.

2. При экспозиции рыб с токсикантами происходят определенные изменения в содержании элементов белой крови. Значительное снижение общего количества лейкоцитов имеет место во все периоды (5,15, 30 суток) воздействия сырой нефти.

3. Обнаружено постоянство количества лимфоцитов в крови рыб при воздействии ионов РЬ2+, С<12+ и сырой нефти. Только на 30-е сутки действия сырой нефти происходит статистически достоверное снижение уровня лейкоцитов по сравнению с контролем (на 19,5%).

4. При воздействии ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти наблюдается полиморфоядерный лейкоцитоз - увеличение количества нейтрофилов, а также моноцитов

5. Под влиянием токсикантов происходит снижение кислотной резистентности эритроцитов и их «старение», которое выражается в накоплении в крови средне - и высокостойких эритроцитов и исчезновении из сосудистого русла высокочувствительных к кислотному гемолизу эритроцитов, а также существенным сокращением времени гемолиза. Чувствительность эритроцитов к кислотному гемолизу под влиянием ионов РЬ2+, С(12+ и сырой нефти неодинакова.

6. В периферической крови сеголеток карпа и двухлеток красноперки в течение 5-, 15-,30- и 40 дней воздействия ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти частота встречаемости эритроцитов со следами хромосомных поломок значительно превышает уровень спонтанно возникающих мутаций.

7. Частота встречаемости клеток с микроядрами и двуядерных клеток у 9 видах промысловых рыб внутренних водоемов Дагестана и района Турали-2 Каспийского моря находится в пределах спонтанного мутагенеза, которая свидетельствует об относительном цитогене-тическом благополучии данных водоемов.

8. Кроветворные клетки рыб могут быть использованы в качестве надежной тест-системы для обнаружения цито- и генотоксических соединений, а также для цитогенетического мониторинга водных экосистем.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Курбанова И.К., Габибов М.М., Абдуллаев Х.Т., Абдуллаева НМ Поведенческие реакции рыб при нефтяном стрессе // Материалы Ме-ждунар. конфер. «Проблемы мониторинга экосистем Каспийского моря». Тез. докл. - Махачкала, 28-30 октября 2002 г. - С.30-32.- 0,125 п.л., личный вклад 30%.

2. Курбанова И К., Габибов М.М., Абдуллаева Н.М., Гусейнова С А. Исследование эмбриотоксичности нефти для кутума // Материалы XVII научно-практ. конфер. по охране природы Республики Дагестан. Тез. докл. - Махачкала- Юпитер, 2003 - С. 123-124. - 0,062 п.л., личный вклад 30%.

3. Габибов М.М., Абдуллаева Н.М. Гематологические показатели сеголеток карпа (Сурппш сагрю Ь.) при воздействии токсиканта - аце-

тата свинца // Материалы Международной научно-практ. конфер. «Медицинская экология». Тез. докл.- Пенза 2006 г. - С. 11-12..- 0,062 п.л., личный вклад 80%.

4. Абдуллаева Н.М. Черкесова Д.У Исуев А.Р. Габибов М М. Устойчивость эритроцитов крови сеголеток карпа (Cyprinus carpió 1.)в условиях загрязнения водной среды ацетатом свинца // Труды Междунар. науч. конфер. «Современные проблемы адаптации и биоразнообразия». Тез. докп-Махачкала, 24-27 октября 2006 г. - С.59-61. - 0,125 п.л, личный вклад 60%.

5. Абдуллаева Н. М., Исуев А. Р. Чувствительность хромосом эритроцитов рыб семейства карповых к действию токсикантов // Труды международ, науч. Конфер. «Современные проблемы адаптации и биоразнообразия», 24-27 октября 2006 года. - Махачкала -2006. -С. 37-38.-0,125 п.л., личный вклад 80%.

6. Абдуллаева Н.М. Рабаданова А.И. Габибов М.М. Исмаилов O.A. Состояние периферической крови сеголетков карпа (Cyprinus сагрю L. ) при загрязнении водной среды ацетатом свинца И Труды Междунар. форума по проблемам науки, техники и образования под ред В.П. Савиной, В.П Вишневского. Тез. докл. - Москва 2006 г. - С. 141142. - 0,062 п.л., личный вклад 60%

7. Габибов М. М., Мусаев Б. С., Мурадова Г. Р., Рабаданова А. И., Абдуллаева Н. М. Влияние тяжелых металлов на некоторые показатели липидного обмена карпа (Cyprinus carpió L.) // XX съезд Физиол. общества им. И.П. Павлова. Экологическая физиология «Физиология 21 века - перспективы», Москва, 2006 - С. 0,062 п.л., личный вклад 40%.

8. Габибов М. М., Мусаев Б. С., Абдуллаева Н. М., Мурадова Г. Р. Влияние загрязнения водной среды ацетатом свинца на липидный обмен тканей и кислотную резистентность эритроцитов крови сеголетков карпа Cyprinus carpió L. // В сб.: Материалы Всерос. Научно -практ. конфер. с междунар. участием «Актуальные аспекты жизнедеятельности человека на Севере»: 16-17 ноября 2006, Архангельск, «Экология человека». Приложение. 4/2. - 2006. - С. 77-79, - 0,125 п.л., личный вклад 50%.

Формат 60x84 1/16 Печать ризографная Бумага № 1 Гарнитура Тайме Уел леч л -1,5изд леч л -15 Заказ - 83 - 27 Тираж 100 «в Подписано в печать 28 08,07 г Отпечатано в ООО «Деловой мир» Махачкала, ул Коркмаеова 35а

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Абдуллаева, Наида Муртузалиевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЗАГРЯЗНЕНИЕ ТЯЖЕЛЫМИ МЕТАЛЛАМИ И НЕФТЬЮ И ЕГО ПОСЛЕДСТВИЯ

1.1. Влияние тяжелых металлов на гидробионтов.

1.2. Нефтяное загрязнение водной среды и его влияние на водные организмы.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследования.

2.2. Постановка эксперимента.

2.3. Методики исследований

2.3.1. Метод учета микроядер.

2.3.2. Гематологические исследования рыб

2.3.2.1. Определение гемоглобина.

2.3.2.2. Определение кислотной резистентности эритроцитов.

2.3.2.3. Подсчет эритроцитов и лейкоцитов.

2.3.2.4. Подсчет лейкоцитарной формулы.

2.4. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА j . DJlflVllltlLj r\LJ^lZ 1 Г\ А 1 ж, uuiuuj,! ^ ~ ^^l^i/I

И СЫРОЙ НЕФТИ НА ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ РЫБ

3.1. Гематологические показатели рыб при воздействии тяжелых металлов и сырой нефти.

3.2. Кислотная резистентность эритроцитов периферической крови рыб при хроническом действии ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти.

I ^ i

3.3. Влияние загрязнения водной среды ионами Pb , Cd и сырой нефтью на накопление индуцированных генетических повреждений в эритроцитах сеголеток карпа и двухлеток красноперки.

3.4. Мониторинг водных экосистем по накоплению индуцированных генетических повреждений в эритроидных клетках рыб.

Заключение Диссертация по теме "Ихтиология", Абдуллаева, Наида Муртузалиевна

ВЫВОДЫ

1. При хроническом воздействии ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти в течение 30-40 суток происходит снижение уровня гемоглобина и эритроцитов в периферической крови сеголеток карпа и двухлеток красноперки.

2. При экспозиции рыб с токсикантами происходят определенные изменения в содержании элементов белой крови. Значительное снижение общего количества лейкоцитов имеет место во все периоды (5, 15, 30 суток) воздействия сырой нефти.

3. Обнаружено постоянство количества лимфоцитов в крови рыб при

Л | . воздействии ионов Pb , Cd и сырой нефти. Только на 30-е сутки действия сырой нефти происходит статистически достоверное снижение уровня лейкоцитов по сравнению с контролем (на 19,5%).

4. При воздействии ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти наблюдается полиморфоядерный лейкоцитоз - увеличение количества нейтрофи-лов, а также моноцитов.

5. Под влиянием токсикантов происходит снижение кислотной резистентности эритроцитов и их «старение», которое выражается в накоплении в крови средне - и высокостойких эритроцитов и исчезновении из сосудистого русла высокочувствительных к кислотному гемолизу эритроцитов, а также существенным сокращением времени гемолиза. Чувствительность эритроцитов к кислотному гемолизу под влиянием ионов Pb , Cd и сырой нефти неодинакова.

6. В периферической крови сеголеток карпа и двухлеток красноперки в течение 5-, 15-,30- и 40 дней воздействия ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти частота встречаемости эритроцитов со следами хромосомных поломок значительно превышает уровень спонтанно возникающих мутаций.

7. Частота встречаемости клеток с микроядрами и двуядерных клеток у 9 видах промысловых рыб внутренних водоемов Дагестана и района Турали-2

Каспийского моря находится в пределах спонтанного мутагенеза, которая свидетельствует об относительном цитогенетическом благополучии данных водоемов.

8. Кроветворные клетки рыб могут быть использованы в качестве надежной тест-системы для обнаружения цито- и генотоксических соединений, а также для цитогенетического мониторинга водных экосистем.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время понятие «мониторинг» в связи с глобальными загрязнениями территорий и акваторий приобрело широкий смысл, учитывающий и контролирующий патогенные и токсикогенные воздействия (Юровицкий, Сидоров, 1993; Захидов, Урываева, 1993).

Показательным биомаркером являются рыбы, которые служат важным компонентом в пищевых взаимоотношениях водоемов, и позволяют оценивать состояние водной среды. Рыбы являются также продуктом питания человека, по которым можно составлять прогнозы о воздействии факторов среды на его организм.

Исследование активности ряда лизосомальных ферментов, мембранных и запасных липидов рыб показало, что различные показатели биохимического статуса специфически реагируют на изменения экологических факторов, в том числе антропогенных. Изучение экологической вариабельности различных липидов (фосфолипидов, триацилглицеридов, холестерина, жирных кислот), аминокислот, белков, лизосомалных ферментов, мембранных структур позволил сформулировать общую концепцию, характеризующую зависимость интенсивности и глубины изменений от экологических факторов (Котелевцев и др., 1986; Исуев и др., 2000; Костров и др., 2003; Курбанова и др., 2004; Габибов, Рабаданова. 2006; Курбанова, Габибов, 2006).

Изучение морфологии крови является важным показателем в токсикологических исследованиях, т.к. в ней отражается физиологическое состояние организма. Под воздействием ионов Pb2+, Cd2+ и сырой нефти происходят существенные изменения в картине красной и белой крови, содержании гемоглобина у исследованных рыб. Если у контрольных рыб наряду со зрелыми формами, встречаются единичные юные формы, то при интоксикации в прямой зависимости от степени отравления увеличивается количество кислотно-резистентных зрелых эритроцитов при снижении числа менее устойчивых к кислотному гемолизу популяций эритроидных клеток.

При воздействии ионов Pb , Cd и сырой нефти у сеголеток карпа и двухлеток красноперки развивается анемия, повышается ненасыщенность эритроцитов гемоглобином. Наименьшее содержание гемоглобина отмечается в крови рыб на 15-е сутки воздействия хлорида кадмия и на 30-е сутки воздействия сырой нефти.

Некоторые изменения выявлены и со стороны клеток белой крови, характеризующиеся снижением уровня лейкоцитов. Особенно значительное уменьшение количества лейкоцитов имеет место во все периоды воздействия сырой нефти. При воздействии ацетата свинца и хлорида кадмия изменение общего количества лейкоцитов в большинстве случаев статистически недостоверно по отношению к контролю.

Наряду с изменениями количества гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов, у рыб в среде с токсикантами обнаружены незначительные изменениями в соотношении отдельных форм лейкоцитов, приводящие к нарушениям в лейкоцитарной формуле. У опытных рыб снижение количества лимфоцитов на 19,5% имеет место на 30-е сутки воздействия сырой нефти. При воздействии токсикантов наблюдается полиморфноядер-ный лейкоцитоз - увеличение количества нейтрофилов, а также моноцитов. Эти изменения особенно выражены при воздействии сырой нефти.

Изучение отдельных факторов естественного иммунитета, в частности различных форм лейкоцитов и антимикробных свойств сыворотки крови свидетельствует об угнетении этого показателя под влиянием изученных тяжелых металлов и сырой нефти, причем степень выраженности эффекта возрастает с увеличением времени экспозиции в среде с токсикантами (Серпунин, 2001).

Анализ результатов цитогематологических исследований и данных литературы (Кудрявцев, Кудрявцева, 1969; Кондратьева и др., 2001; Горбунова и др., 2003) указывает на взаимосвязь между изменением содержания в крови лейкоцитов и иммунных свойств крови рыб в среде с тяжелыми металлами и сырой нефтью, а, следовательно, на нарушение защитной реакции организма при изученных интоксикациях.

Таким образом, в диапазоне исследованных концентраций и интервалов времени действия тяжелые металлы и в особенности сырая нефть оказывают существенное влияние на морфологию и иммунную систему крови, вызывая нарушения гомеостаза организма рыб.

Для оценки состояния наземных и водных экосистем и изучения ге-нотоксического потенциала природных водоемов и искусственных источников водоснабжения в рамках эколого-биохимического мониторинга проводят цитогенетический мониторинг, данные которого весьма важны для определения степени генетического риска и для человека. Одним из методов цитогенетического контроля является микроядерный тест, результаты которого характеризуют частоты хромосомных мутаций на уровне микроядер (Захидов и др., 1993 б; Schmidt, 1975; Ashby, 1986; George е.а., 1989).

В работе И.В. Урываевой (1993) выявлена сезонная изменчивость частот генетически аберрантных клеток с микроядрами, которая может быть связана с разной степенью загрязненности водной среды в летние и осенние месяцы года, либо с сезонными изменениями клеточного метаболизма рыб.

С помощью метода учета микроядер нами показано, что в периферической крови рыб, подвергшихся действию высоких концентраций ацетата свинца, хлорида кадмия и сырой нефти, частота встречаемости эритроцитов со следами хромосомных поломок значимо превышает уровень спонтанно возникающих мутаций на 5-, 15-, 30- и 40-е дни воздействия. При всех изученных сроках воздействия токсикантов в популяции эрит-роидных клеток наблюдается увеличение против нормы числа клеток с микроядрами и двуядерных клеток. Значительнее всего их увеличение имеет место в случае воздействия сырой нефти, что можно объяснить многокомпонентностью ее состава и способностью аккумулировать другие поллютанты. Для более обоснованной интерпретации полученных результатов к условиям реальной действительности представляют интерес исследования по комбинированному воздействию этих токсикантов на рыб. Очевидно, что попадание тяжелых металлов и сырой нефти в больших концентрациях в водные экосистемы может быть фактором риска в плане развития отдаленных последствий их влияния на генетический аппарат гидробионтов.

Известно, что действие веществ - генотоксинов, повышающих частоту мутаций или иных генетических повреждений, приводит к росту числа наследственных заболеваний, врожденных уродств, развитию злокачественных опухолей у различных биологических объектов (Чистяков и др., 2001). Установлено наличие высокой корреляции между генотоксич-ностью воды и частотой генетических аномалий и нарушением развития молоди осетровых рыб (Тихонова и др., 1996).

Наши наблюдения показывают, что кроветворные клетки рыб могут быть использованы как надежная тест-система для обнаружения цито- и генетических соединений, а также в цитогенетическом мониторинге водной среды. Такое положение подтверждается нашими исследованиями, проведенными в рамках цитогенетического мониторинга внутренних водоемов Дагестана (Нижнетерских, Каракольских и Аракумских), впадающих в Аграханский залив и района Турали-2 Каспийского моря. Эти исследования, проведенные на 9 видах промысловых рыб, показали, что обнаруженные нами величины клеток с микроядрами и двуядерных клеток разных видов рыб находились в пределах спонтанного мутагенеза. Полученные материалы в целом свидетельствуют об относительном цитогенетическом благополучии данных водоемов.

Представленные данные могут иметь значение, как для медицины, так и для ихтиологии. Они побуждают к дальнейшим исследованиям проблем, связанных с контролем качества природных вод, оценкой биологических эффектов комплексного загрязнения на популяции ценных промысловых рыб. При этом цитогенетический ихтиомониторинг должен приобрести систематический и сравнительный характер.

83

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Абдуллаева, Наида Муртузалиевна, Махачкала

1. Аббасов Р.А., Джавадова Л.А., Крючков В.И. Исследование влияния сырой нефти из различных месторождений на сывороточные белки куринской белуги // Международная конференция по проблемам Каспийского моря, июнь 1991 Баку, 1991- С.5-6.

2. Абдусамадов А.С., Абдурахманов Г.М., Карпюк М.И. Современное состояние и эколого-экономические перспективы развития рыбного хозяйства в Западно-Каспийском регионе России- М: Наука,2004.- 497с.

3. Аксенова М.Е. Тяжелые металлы: механизмы нефтетоксичности // Журнал РДО. 2000 - С. 1-2.

4. Алиев Н.К., Абдурахманов Г.М., Мунгиев А.А., Гаджиев А.А. Экологические проблемы бассейна Каспия Махачкала: Дагпресс,1999 - 160с.

5. Алов И.А. Цитофизиология и патология митоза М.: Медицина, 1972 -С.45-78.

6. Богдан В.В., Кирилюк С.Д., Нефедова З.А. Влияние тяжелых металлов на липидный состав мышц сига и осетра // Тез. докл. конфер. по экол. биохимии рыб.- Петрозаводск.-1992 С.33-35.

7. Брагинский Л.П. Теоретические аспекты проблемы нормы и патологии в водной экотоксикологии // Материалы 3-го советско амер. симп., 2-6 июня 1979г., Борок, СССР.- Л.: Наука,1981. - С. 29 - 40.

8. Будников Г.К. Тяжелые металлы в экологическом мониторинге водных систем //Биология. Соросовский журнал. -1998.-Т 7, №4.- С. 21-28.

9. Булатов А.И., Макаренко П.П., Шеметов В. Охрана окружающей среды в нефтегазовой промышленности- М.: Недра, 1997.-440с.

10. Бутаев A.M. Каспий: статус, нефть, уровень Махачкала, 1999.-221с.

11. Бутаев A.M., Кабыш Н.Ф. Грозит ли Каспию нефтяное загрязнение // Междунар. конфер.: «Современные проблемы Каспия»- Астрахань, 2002.- С. 33-39.

12. Верещагин Н.К. Чем грозит морское бурение животному миру Каспийского моря // Сов. Россия.-1998.- №86.- С. 2.

13. Вернадский В.И. О количественном учете химического атомного состава биосферы М.: Типолит. имени Фрунзе, 1940 - 32с.

14. Владимцева Т.М., Пашкевич И.А., Салмина А.В. Морфофункциональное состояние клеток костного мозга при свинцовой и цинковой интоксикации //Гигиена и санитария,- 2006 №2. - С.71-72.

15. Войнар А.И. Биологическая роль микроэлементов в организме животных и человека М: Высшая школа, 1960.-543с.

16. Волошина Г.В. Экологическая оценка состояния поверхностных вод реки Понура // Экол. вестник Сев. Кавказа.- 2006 Т.2, №1.- С.118-122.

17. Габибов М.М., Рабаданова А.И. Содержание белков в печени, почках и мышцах сеголеток карпа при интоксикации ацетатом свинца // Труды Меж-дунар. конфер. «Соврем, проблемы адаптации и биоразнообразия» 24-27 октября 2006г. Махачкала. -2006.- С. 143-145.

18. Гаджиев А.А., Шихшабеков М.М., Абдурахманов Г.М., Мукгиев А.А. Анализ экологического состояния Среднего Каспия и проблема воспроизводства рыб.- М.: Наука, 2003. 422с.

19. Галичев С.А. Возможность фармакологической коррекции токсического действия свинца при помощи селената натрия и окиси цинка // Автореф. дисс. . канд. мед. наук.- М.- 2004.- 21с.

20. Гаранина С.Н., Костров Б.П., Курапов А.А. Влияние разработки морских нефтегазовых месторождений на продуктивность водорослей Каспийского моря// В сб. Рыбохозяйственные исследования на Каспии.- Астрахань. -2003.- С.104 -107.

21. Гилева Э.А., Щупак E.JL Хромосомная нестабильность и содержание тяжелых металлов у амфибий из Юганского заповедника // Экология.-2005.-№1.-с.73-76.

22. Гительзон И.И., Терсков И.А. Неоднородность эритроцитов и ее значение для использования качественного состава красной крови // В кн.: Вопросы биофизики, биохимии и патологии эритроцитов. Красноярск: АН СССР, 1960 - С.55.

23. Горбунова Г.С., Костров Б.П., Горбунова Н.В. Влияние нефти, газоконденсата и отходов бурения на показатели крови рыб // В сб. Рыбохозяйст-венные исследования на Каспии.- Астрахань. 2003. - С. 109-113.

24. Гордина А.Д., Миронов О.Г., Руднева И.И., Гавенаускайте T.JI. Влияние антропогенного фактора на рыбохозяйственное состояние Севастопольской бухты. // Всес. совещ. по рыбохоз. токсикол.- СПб, 1991.- Т.1.- С. 123-124.

25. Грубен О.М. Взаимосвязь функционирования системы гемоглобина и перекисного окисления липидов в крови карпа при интоксикации. // Докл. нац. АН Украины.- 1997.- №2 С. 146-150.

26. Гусев А.Г. Охрана рыбохозяйственных водоемов от загрязнения.- М.: Пищ. Пром., 1975. 367с.

27. Евтушенко Н.Ю. Роль макро- и микроэлементов в метаболизме пресноводных рыб.- Автореф. докт. дисс.- Киев.- 1986.

28. Евтушенко Н.Ю., Данилко О.В. Особенности накопления тяжелых металлов в тканях рыб Кременчугского водохранилища. // Гидробиол. журн.-1996.-Т. 32, №4.- С. 58 66.

29. Житенева Л.Д. Экологические закономерности ихтиогематологии. Ростов - на Дону: АзНИИРХ, 1999. - 56 с.

30. Житенева Л.Д., Макаров Э.В., Рудницкая О.А. Эволюция крови.- Ростов на Дону: Донский издат. дом, 2001.- 116с.

31. Заботкина Е.С., Лапирова Т.Б. Влияние тяжелых металлов на иммуно-физиологический статус рыб // Успехи соврем, биол.- 2003.- Т. 123, №4.- С. 401-408.

32. Захидов С.Т., Карпюк М.И., Галиченков В.А. Цитогенетический мониторинг волжского бассейна. Уровни хромосомных мутаций в половых и соматических клетках самцов стерляди // Изв. РАН, сер. Биол.- 1993а.- №1.-С. 102-106.

33. Захидов С.Т., Хани А.Х., Свечеревский Н.Н., Галиченков В.А. Чувствительность хромосом кроветворных клеток личинок Xeno Laevis к действию химического мутагена фотрина // Изв. РАН, сер. Биол.- 19936. №1.- С.107-111.

34. Захидов С.Т., Урываева И, В., Маршак T.JI., Делоне Г. В., Стародубов С. М., Галиченков В.А. Цитогенетический мониторинг Южного Приаралья: оценка генотоксической активности воды // Изв. РАН, сер. Биол.- 1993 в.-№1.-с. 95-101.

35. Зорина J1.A. Клиника, диагностика, лечение и профилактика свинцовых отравлений.- М.: Медицина, 1965. С. 4-24, 36-42.

36. Иванов А.А. Физиология рыб. М.: Мир, 2003.- 284с.

37. Иванов В.П., Сокольский А.Ф. Научные основы стратегии защиты биологических ресурсов Каспийского моря от нефтяного загрязнения.- Астрахань: Изд-во Касп НИИРХ, 2000.- 181с.

38. Иванова Н.Т. Атлас клеток крови рыб.- М: Легкая и пищ. пром., 1983.-84с.

39. Израэль Ю.А. Цыбань А.В. Антропогенная экология океана.- Л.: Гидро-метеоиздат, 1989.- 528с.

40. Исуев А.Р., Габибов М.М., Гусейнова С.А. Состояние перекисного окисления липидов и антиокислительной активности сеголеток русского осетра при загрязнении окружающей водной среды нефтью // Вопросы ихтиол.-2000.- Т.40, №4. С. 551-559.

41. Кадмий. Серия «Науч. обзоры советской лит -тры по токсичности и опасности хим. веществ».- МРПТХВ: М., Центр междунар. проектов ГК НТ. 1984. -60 с.

42. Казанчеев Е.Н. Рыбы Каспийского моря (определитель).- М.-1981. 166 с.

43. Камшилов И.М. Функциональные свойства гемоглобина у разных по экологии групп рыб.- Автореферат дисс. . канд. биол. наук. Борок, 1999.28 с.

44. Касымов А.Г. Экология Каспийского озера. Баку. 1994. - 237 с.

45. Касумян А.О. Воздействие химических загрязнителей на пищевое поведение и чувствительность рыб к пищевым стимуляторам // Вопросы ихтиол.- 2001. Т.41, №1. - С. 82 - 85.

46. Козлова Н.М., Слобожанина Е.И., Черницкий Е.А. Окисление мембранных белков и изменение поверхностных свойств эритроцитов // Биофизика.-1998.- Т.43, вып. 3. С. 480-483.

47. Коваленко Л. Д., Костров Б.И., Курапов А.А. Влияние отходов бурения на зоопланктон // В сб. Рыбохозяйственные исследования на Каспии. Астрахань - 2003. - С. 107-109.

48. Ковальчук А., Брень Н. Содержание тяжелых металлов в тканях организмов из бассейна Тисы // Наук. висн. Ужгор ун-та. Сер.биол. 1999. - №6. - С. 70.

49. Колупаева В.Б., Колупаев Б.И. Решение эколого-экономических проблем качества среды обитания // http: Zhurn. аре. relarn. ru / altides / 2006 / 009 pdf. Электронный научный журнал. Исследовано в России.

50. Кондратьева И.А., Киташова А.А., Ланге М.А. Современные представления об иммунной системе рыб // Вестник Моск. ун-та. сер. 16. Биология. -2001.-№4.-С. 11-20.

51. Королев A.M., Семина Т.К., Мазманиди Н.Д. Влияние водорастворимой фракции нефти на некоторые характеристики сыворотки крови черноморской ставриды // Биология моря. 1980. - №1. - С.69-79.

52. Костров В.П., Чистяков В.А., Сазыкина М.А., Уцов С.А. Анализ гено-токсичности материалов нефтегазовой индустрии Северного Каспия // Материалы Междунар. конфер. «Рыбохоз. наука на Каспии: задачи и перспективы».- Астрахань, 2003а.- С.94-96.

53. Костров В.П., Уцов С.А., Курапов А.А., Горбунова Н.В. Влияние продуктов нефтегазовой индустрии на липидный обмен рыб Каспия // Рыбохоз. исследования на Каспии.- Астрахань. 20036. С. 114-118.

54. Котелевцев С.В., Стволинский C.J1., Бейм A.M. Эколого-токсикологический анализ на основе биологических мембран.- М.: Изд-во МГУ, 1986.- 106 с.

55. Крючков В.И. Суточный ритм двигательной активности южнокаспийского осетра при нефтяном загрязнении // Осетровое хозяйство водоемов СССР: Тез. докл. Ч. 1.- Астрахань, 1989. - С. 165-166.

56. Крючков В.Н., Бойко А.В. Изучение механизма нефротоксичности кадмия для рыб // Междунар. конфер. «Соврем, проблемы Каспия».- Астрахань, 2002.-С. 152 155.

57. Кудрявцев А.А., Кудрявцева JI.A. Гематология животных и рыб.- М.: Колос, 1969.-320 с.

58. Курбанова И.К., Исуев А.Р., Габибов М.М. Влияние нефтяного загрязнения водной среды на некоторые показатели белкового обмена молоди кутума // Вопросы ихтиол. 2004. - Т. 44, - №5. - с. 700 - 708.

59. Курбанова И.К., Габибов М.М. Динамика активности пептид-гидролиз в мышечной ткани кутума при нефтяной интоксикации // Материалы 3-й Научно-практ. конфер. «Новые технологии в медицине». Махачкала. - 2006. - С. 244 - 246.

60. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа, 1990. - 352 с.

61. Леменовский Д.А. Содержание липидов в живой природе // Химия. Сорос. образоват. журн. 1997. - №9. - с.48-53.

62. Леонова Г.А. Биогеохимическая индикация загрязнения водных экосистем тяжелыми металлами // Водные ресурсы (качество и охрана вод, экологические аспекты). 2004. - Т.31. №2. - С. 215 - 222.

63. Леонова Г.А., Ломоносов И.С., Сутурин А.Н., Шепотько А.О. Токсическое действие соединений свинца на гидробионты и водоплавающих птиц (обзор) // Гидробиол. журн. 1992. Т. 28. №4. - С. 68 - 75.

64. Леонова В.Г. Анализ эритроцитарных популяций в онтогенезе человека." Новосибирск: Наука, 1987.- 242с.

65. Линник П.Н., Искра И.В. Кадмий в поверхностных водах: содержание, формы нахождения, токсическое действие // Гидробиол. журн. 1997. - ТЗЗ, №6. - С. 72 - 87.

66. Луговская С.А. Лабораторная гематология.- М.: Лаборатория, 2001. -№2.-С. 2-3.

67. Лужников Е.А. Клиническая токсикология. М.: Медицина, 1999. - 138с.

68. Лукьяненко В.И. Общая ихтиотоксикология. М.: Легкая и пищ. пром., 1983.-320с.

69. Магомедов Г.М. Промысловые рыбы Дагестана, их запасы и промысел.-Махачкала., 1982. - 231с.

70. Максимова Г.В. Кадмий // Неорг. химия. 1959. - №3. - С. 98.

71. Маляревская А.Я., Карасина Ф.М. Динамика накопления тяжелых металлов и общего тиамина у рыб // Гидробиол. журн. 1991. - Т. 27, №4. - С. 69 - 74.

72. Маслова Н.М, Активность мембранных ферментов эритроцитов при различных стрессорных воздействиях // Физиол. журн. им. И.М.Сеченова. -1994.-Т. 80, №7.-С. 76-80.

73. РД 118-02-90. Методическое руководство по биотестированию воды.-М: 1991.-47 с.

74. Методические указания к практикуму «Анализ объектов окружающей среды». Ростов - на - Дону, 2003. - 26 с.

75. Микряков В.Р., Лапирова Т.Б. Влияние солей тяжелых металлов на состав белой крови молоди Ленского осетра Acipencer baeri // Вопросы ихтиол. 1997. - Т. 37, №4. - С. 538 - 542.

76. Мирзаев М.З., Рабаданов А.С. Руководство по изучению рыб, определению численности и запасов. Махачкала: 2007. - 258 с.

77. Миронов А.Г. Биологические ресурсы моря и нефтяное загрязнение.- М.: Пищепромиздат, 1972.- 105с.

78. Миронов О.Г. Нефтяное загрязнение и жизнь моря.- Киев: Наукова Думка, 1973.- 86с.

79. Миронов О.Г., Гордина А.Д., Руднева И.И. и др. Воздействие тяжелых нефтяных фракций на развивающуюся икру желто красной собачки Bien-nius Sanguinolentus // Вопросы ихтиол. - 1992. - Т.32, №4. - С.169 - 172.

80. Моисеенко Т.И. Изменение стратегии жизненного цикла рыб под воздействием хронического загрязнения вод // Экология. 2002. - №1. - С. 50 -60.

81. Мур Дж., Рамомурти С. Тяжелые металлы в природных водах,- М.: Мир, 1987.-286 с.

82. Миронов О.Г., Гордина А.Д., Руднева И.И., Гавенаускайте Т.Л. Влияние нефти и нефтепродуктов на некоторых гидробионтов Севастопольской бухты // Ихтиофауна Черноморских бухт в условиях антропогенного воздействия: Киев: Наукова Думка, 1993. С. 46 - 57.

83. Насроладзе С.Х., Мелакишамали М.М. Колебания уровня нефтяного загрязнения в отдельных важных портах южной части Каспийского моря // Междунар. конфер. «Соврем, проблемы Каспия. Астрахань, 2002. - С. 403 -405.

84. Неваленный А.Н., Бедняков Д.А. Влияние ионов кадмия в среде на уровень активности ферментов, обеспечивающих процессы мембранного пищеварения у карпа // Экология. 2004. - №2. - С. 152 - 155.

85. Нельсон-Смит А. Нефть и экология моря.- М.: Прогресс, 1977. 301 с.

86. Никаноров A.M. Мониторинг качества вод: оценка токсичности.- СПб.: Гидрометеоиздат, 2000. 159 с.

87. Орлов Д.С., Садовникова JI.K., Лозановская И.Н. Экология и охрана биосферы при химическом загрязнении.- М: Высшая школа, 2002. 334 с.

88. Панасенко Д.Н. Экологическая безопасность Каспийского моря: загрязнение нефтяными промыслами // Междунар. конфер. «Рыбохозяйственная наука на Каспии: задачи и перспективы».- Астрахань, 2003. С.136-138.

89. Папина Т.С. Транспорт и особенности распределения тяжелых металлов в речных экосистемах.- Новосибирск: Наука, 2001.- серия «Экология».-Вып. 62.-58с.

90. Патин С.А. Экологические аспекты глобального загрязнения морской среды // Океанология. 1976. - Т. 16, №4. - С. 624 - 626.

91. Патин С.А. Экологические проблемы освоения нефтегазовых ресурсов морского шельфа.- М.: Изд во ВНИРО, 1997. - 350 с.

92. Патин С.А. Нефть и экология континентального шельфа. М.: Изд-во ВНИРО, 2001.-247 с.

93. Перязева Е.Г. Миграция тяжелых металлов в окружающей среде // Экология и промышленность России. 2001. - №10. - С. 29 - 31.

94. Попов П.А., Андросова Н.В., Аношин Т.Н. Накопление тяжелых и переходных металлов в рыбах Новосибирского водохранилища // Вопросы ихтиол.- 2002.- Т.42, №2.- с.264-270.

95. Птицын JI.P. Биолюминесцентный анализ SOS объекта клеток Escherichia coli // Генетика. - 1996. - Т. 32, №3. - С. 354 - 358.

96. Пурмаль А.П. Антропогенная токсикация планеты // Химия. Сорос, образовав журн. 1999. - №1. - С. 2 - 7.

97. Решетников Ю.С., Богуцкая Н.Г., Васильева Е.Д., Дорофеева Е.А., Насека A.M., Попова О.А., Савваитова К.А., Сиделева В.Г., Соколов Л.И. Список рыбообразных и рыб пресных вод России // Вопросы ихтиологии. -1997. Т.37, №6. - С. 734- 737.

98. Руднева И.И. Эколого-физиологические особенности антиоксидантной системы рыб и процессов перекисного окисления липидов // Успехи соврем, биологии. 2003. - Т. 123, №34. - С. 391 - 400.

99. Сазыкина М.Л., Чистяков В.А., Войнова Н.В. Способ определения генотоксичности химических веществ.- Патент РФ №2179581-2001.

100. Салманов М.А. Роль микрофлоры и фитопланктона в продукционных процессах Каспийского моря. М.: Наука, 1987. -216 с.

101. Салманов М.А. Экология и биологическая продуктивность Каспийского моря. Баку, 1999. - 400 с.

102. Серпунин Г.Г. Гематологическая норма карпа Cyprinius carpio L. разного возраста в летне осенний и зимний периоды // Вопр. рыболовства. -2000.-Т. 1, №4. - С. 155 - 168.

103. Серпунин Г.Г. Гематологические показатели адаптаций молоди карпа к воздействию ионов тяжелых металлов // Аквакультура и биомониторинг водоемов. Сб. научных трудов.- Калининград: КГТУ, 2001. С. 84 - 98

104. Строганов И.С. Актуальные задачи водной токсикологии в связи с охраной водоемов от загрязнения химическими веществами // Элементы водных экосистем. М: - 1978. - С. 150 - 173.

105. Строганов Н.С. Принципы оценки нормального и патологического состояния водоемов при химическом загрязнении // Материалы 3-го советско-амер. симп. 2-6 июня 1979г., Борок., СССР.- Л.: Наука, 1981. С. 16 - 29.

106. Суховская И.В., Смирнов Л.П., Немова Н.Н., Комов В.Т. Влияние ртути на фракционный состав низко молекулярных пептидов мускулатуры окуней Perca fluviatilis L. // Вопросы ихтиол. - 2001. - т. 41, №5. - С. 699 -703.

107. Терсков И.А., Гительзон И.И. Метод кислотных эритрограмм // Биофизика. 1957. - т. 2, вып.2. - С. 259 - 266.

108. Ткаченко В.А., Айвазова Л.З. Влияние растворенных нефтепродуктов на морские и одноклеточные водоросли // Экол. аспекты хим. и радиоактивного загрязнения водной среды. М.: 1974. - С. 68 - 72.

109. Трахтенберг И.М., Короленко Т.К., Утко Н.А., Мурадян Х.К. Свинец и окислительный стресс // Экол. токсикол. 2002. - Вып. 1. - С. 209 - 214.

110. Тряпицына Л.Н. Экология красноперок и густеры дельты Волги в условиях зарегулированного стока.- М.: Наука, 1975. 179 с.

111. Урываева И.В. Перспективы разработки и применения в экологических исследованиях цитогенетического метода анализа микроядер в гепатоцитах // Изв. РАН., сер. биол. 1993. - №1. - С. 88 - 94.

112. Урываева И.В., Делоне Г.В. Оценка уровня накопленных возрастом и индуцированных генетических повреждений в клетках печени по индукции микроядер // Онтогенез. 1992. - Т.23, № 4. - С. 370.

113. Устарбеков А.К. Морфоэкологическая изменчивость основных промысловых видов карповых рыб Каспийского бассейна. Автореф. дисс. . доктора биол. наук. - М., 2000. - 39 с.

114. Хрущов Н.Г. Биология развития и экология // Изв. РАН, сер. биол. -1993.-№1.-С. 5-7.

115. Шапоренко С.И. Загрязнение прибрежных морских вод России // Качество, охрана вод. Экол. аспекты.- М.: РАН, 1997. С. 121 - 129.

116. Шатуновский М.И. Экологические закономерности обмена веществ морских рыб. М.: Наука, 1980. - 283 с.

117. Шихшабеков М.М., Карпюк М.И., Абдурахманов Г.М., Рабазанов Н.И. Биологические ресурсы Дагестанской части среднего Каспия. Астрахань, 2006.- 355 с.

118. Шоттгер Р.А., Людке Дж. Л. Стратегия исследования для предсказания угрозы загрязнения водной среды // Теор. вопросы водной токсикол. Л.: Наука, 1981.-С. 7- 16.

119. Черкесова Д.У., Магомедгаджиева Д.Н, Магомедов Т.П., Исуев А.Р. Реакция гидробионтов на воздействие свинца // Материалы 4-й Ассамблеи Ассоциации Ун-тов Прикасп. государств. 7-11 сент. 1999. - Махачкала. -1999.-С. 218.

120. Чесалина Т.Л., Руднева И.И. Воздействие тяжелых нефтяных фракций на икру и личинок бычка кругляка // Вопросы ихтиол. - 1998. - Т. 38, №3. -С. 141 -144.

121. Экологические проблемы Каспийского моря. М.: ГЭФ / ПРООН/ Всемирный Банк, 2000.

122. Юрин В.М. Основы ксенобиологии. Минск: Новое знание, 2002. -267с.

123. Юровицкий Ю.Г., Сидоров B.C. Эколого- биохимический мониторинг и эколого- биохимическое тестирование в районах экологического неблагополучия // Изв. РАН, сер. биол,- 1993.- №1.- с.74-82.

124. Andersen R.A., Daal H.L., Mikalsen A., Alexander J/ Occurence of varions forms of metallothionein in the rat after a short- term cadimium injection regimen // Сотр. Biochem. and Physiol. 1989. - Vol .93, №2. - P. 367 -3 75.

125. Ashby J. The prospects for a simplified and internationaily harmonized approach to the delection of possible human carcinogens and mutagens // Mutagenesis. 1986. - Vol.1, №1. - P. 3 - 4.

126. Eckl PM., Alati Т., Jirtle R.L. The effects of a purified diet on sister chromatid exchange freguencies and mitotic activity in adult rat heratocytes // Carcinogenesis. 1991. - Vol. 12, №4. - P. 643 - 644.

127. Gautam R, K., Pariar R. Lead and mercury lipid contents in liver and kidney of Heteropneuites fossilis // Qlfar. Pradesh. Zool. 1996. - Vol. 16, №1. - P. 28 -30.

128. Goldman L.S. Medical illness in patients with Schizophrenical // Z. Cline. Psychiatry- 1999. Vol. 60, suppl. 21. - P. 10 - 15.

129. Gopal V., Parvathys S., Balasubramanian P.R. Effect of heavy metals on the beood protein biochemistry of the fish Cyprinus carpio and its use as a bioindi-caten of pollution stress // Environ. Monit. and Assess. 1997. - Vol. 48, № 12. -P. 117-124.

130. Goyer R.A. Mechanisms of lead and cadmium nephrotoxicity // Toxicol. Lett.- 1989. Vol. 46, № 1 - 3. P. 153 - 162.

131. Heckyung В., Sook N.S., Kwangsik P. Metallothionein in RNA seguencing and induction by cadmium in gills of the crucian carp // j. Health sci. 2005. -№3. - P. 284 - 290.

132. Hiskey C.R. Fish hematology, its uses and significance // Fish and Bam-mej.- 1976.-Vol. 25, №2.-P. 170- 175.

133. Ни H., Watanabe H., Payton M., Korrick S., Rotnitzky A. The relationship between bone and hemoglobin // JAMA. 1994. - Vol. 272, №19. - P. 272 - 275.

134. Jalet A., Deparis P., Gaschignard D. Induction of micromulei in peripheral erythrocytes of oxolotl larvae following in vivo exposure to mutagenic agents // Mutagenesis. 1986. - Vol. 1. - P. 211 - 215.

135. Friberg L., Eiinder C.G. Biological monitoring of toxic metals // Scand. J. Work Environ. Health. 1993. - Suppl. 1. - P. 7 - 13.

136. Karen V.C., Goenada I.H., Freddy A. Induction and binging of Cd, Cu, and Zn to metallothionein in carp using HPLC ICPTOFMS // Toxicology Sci. -2004. - № 2. - P. 276 - 287.

137. Kargin F., Cogum N.Y. Metal interaction during accumulation and elimination of zinc and cadmium in tissues of the freshwater fish Tilapia niloca // Bull. Environ. Contam. and Toxicol. 1999. - Vol. 63, №4. - P. 511 - 519.

138. Kasimov A.G., Aliev A.D. Experimental study of the effects of oil on some representatives of benthos in the Caspian Sea // Water, Air and Pollut. 1973. -2, №2. - P. 235 - 245.

139. Lauwerys R.R., Bernard A., Roels H., Buchet J.P. Cadmium: Exposure markers as predictors of nephrotoxic effects // Clin Chem. 1994. - Vol. 40. -P. 1391 - 1394.

140. Longwell A.C., Chang S., Heberts A.e.a. Pollution and developmental abnormalities of Atlantic fishes // Environment. Biol. Fishes. 1992. - Vol 35, №3. -P. 1- 10.

141. Nathalie K., Gregoire V., Michele В., David M. Cadmium- induced oxidative stress and lung emphysema in rats // Prostaglands, leukotrienes and Essential Fatty Acids. 2004. - № 1. - P. 57 - 58.

142. Nicholson J.K., Higham D.P., Timbrell J.A., Sadler P.J. Quantitative high resolution H-NMR urinalysis studies on the biochemical effects of cadmium in the rat // Mol. Pharmacol.- 1989, № 3. - P. 398 - 404.

143. Orton J.N. Possible effects on marine organisms of oil discharged at sea // Nature 1965. - № 115. - P. 910 - 911.

144. Scarpato R., Migliore L., Barale R. The micronucleus assay in Anodonta cygnea for the defection of drinking water mutagen ecity // Mutat. Res. 1990. -vol. 245,№ 6.-P. 231 -235.

145. Schmidt W. The micronueleus test // Mutation Res.-1975. vol. 31. - P. 9 -15.

146. Serpunin G.G., Lihaceva O.A., Tzehiatowski R., Sodowski J., Odebralska D. Blood parameters of carp /Cyprinus carpio L./ kept in heated water culture at different feeding regimes // Acta scientiarum polonorum // Piscaria. 2002. -1(2).-P. 121 - 128.

147. Smith D.M., Picock J.A., Murphy W.M. Aluminium containing Dense Deposits of the glomerular Basement Membrane // Am. J. Clin. Path. - 1982. -vol. 77, №3.-P. 341 - 346.

148. Straugham D. Biological effects of oil pollution in the Santa Barbara Channel // FAO tech. conf. mar. Pollut. Rome, 1970. - P. 12 - 17.

149. Tates A.D., den Engels L. The role of the induction of micronuclei in rat liver by ethylnitrosourea and methyl methanesulphonate: the importance of experimental design // Mutat. Res. 1989. - vol.210, №2. - P.271.

150. Urivaeba J.V., Delone G.V. An improved method of mouse liver micronucleus analysis an application to age related genetic alteration and polyploidy study // Mutation Res. - 1995. - vol. 334. - P.71-88.

151. Van Assenalft O.W., Holtz A.H., van Kampen E.J., Zijstra W.G. Control data of international hemoglobin cyanide reference solutions // Clinica Chimica Acta.- 1967.- vol. 18, № 1. P.78 - 81.

152. Waalkes M.P., Rehm J. Cadmium and prostate cancer // J. Toxicol. Environ Health. 1994,- vol.43. № 3. - P. 251 - 269.

153. Wu Guo Xing, Ye Cong- Yin, Hu Cui. Accumulation of cadmium and its effects on growth development and hemolymph biochemical composition Boettcherisca peregrine larvae // Insect. Sci. - 2006. - №1. - P. 31 - 39.