Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА И БИОТЕХНИКА РАЗМНОЖЕНИЯ В СКОТОВОДСТВЕ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА И БИОТЕХНИКА РАЗМНОЖЕНИЯ В СКОТОВОДСТВЕ"

сЯ-2&3&3

На правах рукописи

ШИРИЕВ ВАКИЛЪ МИРГАЛИЕВИЧ

ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА И БИОТЕХНИКА РАЗМНОЖЕНИЯ В СКОТОВОДСТВЕ

03.00.13 - физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

п. Дубровицы, Московской области 2000

Работа выполнена во Всероссийском Государственном научно-исследовательском институте животноводства (ВИЖ)

Научные консультанты: доктор биологических наук,

профессор ИМ, Сергее*;

академик Л.К. Эрнст

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор ЮЛ- КяцнскыН;

доктор биологических наук, профессор А.Н. Успенский',

доктор биологических наук, профессор Р-Н. Уелъдапо*

Ведущее_учреждение:

Всероссийский научно-исследовательский институт племенного дела

Защита диссертации состоится «¿л?» 2000 года, в 10 часов,

на заседании диссертационного совета Д.020.16.02. во Всероссийском Государств-ном научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес: 142132, л. Дубровицы Подольского района Московской области

С диссертацией можно ознакомиться а библиотеке ВИЖа Автореферат разослан б^й/ 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, кандидат биологических иаук/ В.П. Губанова

и

введение

Актуальность исследований. Высокоэффективная структура стада имеет определяющее значение в ряду существующих организационно-хозяйствен н ых элементов системы воспроизводства. Однако, современное отечественное скотоводство характеризуют негативными структурными изменениями: с 1991 года происходит устойчивое сокращение поголовья крупного рогатого скота, сопровождающееся повышением доли коров в стаде при одновременном уменьшении шлейфа, ^то не только снижает возможности увеличения производства, молока, но и сохранения его на прежнем уровне.. По существу, скотоводство приобретает экстенсивные формы ведения (ДЛ. Левантин, 1995, 1997). . ■ ,

Процессы интенсификации в скотоводстве в значительной мере сдерживаются из-за нарушений плодовитости. При современных технологиях эксплуатации у 30% коров после отёла регистрируют задержание последа, что обусловливает субинволю-¿.„шло матки, неизбежно осложняющуюся различными формами эндометритов. В ряде хозяйств эндометритами могут переболевать до 70% коров. В определенной степени с этим связывают нарушения гормональной и генеративной функции яичников. В период раздоя яичники в стадии гипофункции регистрируют у 30-55% коров. В подобных стадах оплодотворяемость после первого осеменения не превышает, 40%. Эти и другие нерешенные проблемы, связанные с воспроизводством, наносят ощутимый экономический эффект, который превышает потери, вызванные всеми заразными и незаразными заболеваниями вместе взятыми. В этих условиях исследования с целью нормализации половой функции приобретают особую актуальность (А.Г. Неждинов н др., 1996; Б.П. Мохов и др., 1999; В.П. Иноземцев и др., 1995; Ю.Д. Клннский и др., 1997; А.М.Чомаев, 1997).. , .

В первую очередь сюда относят биотехнические методы гормонального управления половыми процессами, теоретические принципы которых впервые были разработаны отечественными учеными (М.М, Завадовский, 1934, 1936, 1963). ,

Однако, потенциальные возможности биотехнологии в практике воспроизводства стада крупного рогатого скота используются ещё далеко не полностью. Перехода исследований от чисто научных испытаний к внедрению их в повсеместную практику в масштабах, прогнозируемых теоретическим! г^^р^ы^^йгЛ^^НРоисход! т. В то же время, современная экономика диктует не с глекци-

им» К. А, -Тширпгее

онной работы для ускоренного создания пород, линий, семейств животных, отвечающих потребностям постоянно меняющейся конъюнктуры рынка. Без продолжения исследований в области эмбряотрансллаятации н одновременной реализации её достижений в практику селекционной работы решить проблему не представляется возможным! ' *

Большую актуальность приобретают исследования, направленные на решение, задачи воспроизводства выбраковываемых и проблемных коров, обладающих ценными селекционно-генетическими качествами, используя для этого как традиционную технологию воспроизводства, так и метод трансплантации эмбрионов.

Получившие широкую известность схемы биотехнического контроля половой функции ориентированы, преимущественно, на проведение так называемых фронтальных обработок больших групп животных, без индивидуальной оценки исходного функционального состояния репродуктивных органов. Фронтальные обработки теми или иными препаратами применяют для устранения различных патологий матки и? яичников. В ряде случаев такой подход мало эффективен и даже заведомо неприемлем. Считают, что существенную рационализацию обеспечит переход на селективный принцип применения биорегуляторов половой функции. Он позволит, с одной стороны, сократить расход препаратов, с другой — повысить эффективность их применения. Необходимо учитывать, что многие схемы применения биотехнических средств разработаны в странах с высокоразвитым скотоводством н ориентированы на фермерские хозяйства европейского уровня, поэтому механический перенос их в наши условия не всегда оправдан (Н.И. Полянцев, 1997,1999).

В настоящее время наши знания относительно методов гормонопрофилактики, гормонотерапии, эмбриогенеза и эндокринных аспектов размножения значительно обогатились. Вместе с тем, без необходимой корректировки доз, схем и режимов использования различных типов гормональных препаратов как при групповом, так и индивидуальном подходе эффективно проводить работу в производственных условиях по восстановлению плодовитости, синхронизации охоты; стимулированию суперовуляции и другим технологическим элементам невозможно. |

Репродуктивная физиология , и патфизиология являются фундаментальными разделами современной биологии. В этом смысле, исследования, проводимые по совершенствованию новейших биотехнических методов управления воспроизводитель-

ной функцией, предоставляют уникальную возможность познания закономерностей такого сложнейшего биологического явления, как бесплодие.

Вез дальнейшего углубления исследований в области искусственного осеменения, эмбрнотрансплантации, корректирования половых циклов, восстановления плодовитости проблемных коров невозможно реализовать в практику скотоводства результаты таких перспективных направлений, как клонирование, получение тотнпо-тентных эмбриональных стволовых клеток с генными конструкциями для создания-множественных линий с генетическим разнообразием, получение трансгенных животных, элиминацию нежелательных генов н др. Поэтому, методы воспроизводства крупного рогатого скота на основе современных биотехнологий приобретают еще большую актуальность и значимость. .

Цель и задачи исследований. Целью работы являлись физиологическая оценка и совершенствование биотехники размножения в скотоводстве.

Для достижения цели было необходимо решить следующие задачи:

г

- дать оценку и усовершенствовать способы применения отечественных про-статландинов с целью управления половыми циклами коров; .

• исследовать наиболее существенные факторы индуцирования суперовуля-, ции л актирующих коров-доноров;

- провести исследования по эффективному использованию для воспроизводства выбраковываемых и проблемных корову включая применение эмбри-

- отранеллантации;

- изучить эффективность методов нормализации фолликуяогенеза при различных нарушениях функции яичников у коров;'

- разработать методы физиотерапевтической профилактики послеродовых осложнений;

- определить эффективность использования коров в качестве доноров эмбрионов после устранения различных форм нарушений их репродуктивной функции;

- оценить значение микроклиматических условий и факторов для корректирования воспроизводительной функции коров;

-. изучить эндокринные профили, определяющие нормальное функционирование репродуктивной системы корок при введении биорегуляторов;

по всей работе провести анализ и сформулировать общее заключение, выводы и практические предложения.

Научная новизна. Исследованы и изучены морфо-функциональные предпосылки, определяющие эффективность воздействий гормональными препаратами при индуцировании охоты и суперовуляции. Усовершенствованы и научно обоснованы биотехнические методы воспроизводства проблемных и выбракованных коров на основе детальной дифференциации нарушений половой функции; определена методическая основа устранения различных форм нарушения фолликулогенеза. Обоснована необходимость комплексного подхода к методам управления репродуктивной функцией коров при её нарушениях путём одновременного применения гормональных н физиотерапевтических средств. Изучены эндокринные профили у коров при различном функциональном состоянии яичников на протяжении спонтанного и индуцированного полового цикла. Определены элементы эндокринного статуса при гипофункции яичников. Исследованы факторы, оказывающие негативное влияние на плодовитость коров, а также эффективность проведения биотехнических мероприятий по воспроизводству в летний период года. Предложен механизм отрицательного влияния стрессового повышения температуры окружающей среды на плодовитость.

Практическая значимость. Изученные факторы, определяющие эффективность воздействий гормональными препаратами, позволяют широко планировать и эффективно проводить как искусственное осеменение, так и индуцирование суперовуляции у коров с целью получения эмбрионов. Повышение эффективности биотехнических мероприятий реализуется, прежде всего, за счёт роста производительности труда, благодаря снижению трудоёмкости, уменьшению расхода дорогостоящих импортных препаратов, а также экономии времени, затрачиваемого на проведение гормональных обработок. Совершенствование методов управления репродуктивной функцией проблемных и выбракованных коров позволяет их успешно искусственно осеменять, а также эффективно использовать в качестве доноров эмбрионов. Физиотерапевтические методы лечения и профилактики бесплодия, вводимые как элемент биотехнических методов воспроизводства, позволяют снизить уровень выбраковки коров и существенно улучшить общепринятые зоотехнические показатели плодовитости. . .

■ Данные об этиологии микроклиматического бесплодия могут служить научно-методической основой для разработки и проведения комплексной системы профилак-

тики и лечения бесплодия с учётом конкретных факторов внешней среды. Это открывает новые перспективы более эффективного применения биотехнологии и даёт возможность более широко использовать высокопродуктивных коров в качестве доноров эмбрионов, что предполагает расширенно селекционно-генетического потенциала в скотоводстве. .

Реализация результатов исследований. Основные положения и практические предложения, вытекающие из исследований, вошли в комплексные системы по борьбе с бесплодием и технологии трансплантации эмбрионов в Республике Башкортостан, а также в Нижегородской и Московской областях. Материалы научных исследований положены в основу составления Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российской Федерации методических рекомендаций по интенсификации воспроизводства и борьбе с бесплодием крупного рогатого скота. ' •

Основные положения, выиосииые на защиту:

- разработка критериев с целью дифференциации овариопатолопш;

• экспресс методы управления репродуктивной функцией у коров;

- ' разработка активизации послеродового акэстрального состояния с исполь-

зованием гормональных препаратов и физиотерапевтических средств;

- разработка локального УВЧ-воздействия на матку, как элемента биотехнических методов воспроизводства. ,

< Апробация работы. Материалы диссертации доложены и одобрены на заседаниях ученых советов МВА, ВИЖ, ТСХА, ГГАУ, НГСХА <1993-1999 гг.); на двенадцати Всероссийских, зональных и республиканских конференциях (Москва, Дубровины, Уфа, Оренбург, Львов, Нижний Новгород, Вологда, Элиста, Душанбе, Влади-, кавказ, Воронеж {1990-1999 гг.). Основные научные результаты, включённые в диссертацию, опубликованы в 21 научной работе, в том числе и в практических рекомендациях.

ОбъСм и структура. Диссертация изложена на 303 страницах машинописного текста, содержит 67 таблиц, 20 рисунков. Обзор литературы включает 344 источника, в т. ч. 249 иностранных.

1. материалы и методы исследований

Научные исследования (рис.11) проведены в 1990-1999 гг. в племенных хозяйствах Московской, Тульской, Нижегородской областей н в Республике Башкортостан на коровах и тСлках чёрно-пёстрой породы и породы герефорд. ' (

Кормление животных соответствовало нормам, разработанным ВИЖ.

Индуцирование половых циклов, вызывание суперовуляции, проведение операций по извлечению зародышей, определение эффективности разных препаратов, осеменение коров и тёлок осуществляли по методикам и инструкциям ВИЖа.

Концентрацию гормонов в крови коров определяли радиоиммунологическим методом.

Стимуляцию активности яичников при различных формах нарушения фояли-кулогенеза проиллюстрировали опытами, проведенными более чем на 250 коровах с использованием различных биорегуляторов как отечественного, >так н зарубежного производства: ФСГ, ГСЖК, в комплексе с аналогами гонадолибернна, хориогониче-ского гонадотропнна человека, синтетическими простагландинамн в разных сочетаниях и дозировках. Эффективность использования в качестве доноров эмбрионов выбракованных высокопродуктивных коров испытана на 80 животных.

Разработки.по УВЧ терапии и профилактике гинекологических заболеваний проиллюстрированы результатами опытов более чем на 100 животных.

Для диагностики нарушений фолликулогенеза и эндометрита у коров использовали комплексный метод в соответствии с Методическими указаниями по диагностике, лечению и профилактике акушерско-гинекологаческих болезней и ветеринарному контролю за воспроизводительной функцией коров (1985).

Терапевтическая эффективность электромагнитного поля УВЧ малой мощности при ректальном расположении излучателя в сравнительном аспекте 'изучали на коровах, имеющих послеродовые осложнения (рис. 2).

Животных контрольных групп обрабатывали по схемам, рекомендуемым областными ветеринарными лабораториями и принятыми в хозяйствах. Ректально определяли величину, консистенцию, болезненность, тонус, реакцию матки отвечать сократимостью в ответ на ректальную пальпацию.

Рисунок и Общая схема исследований.

Рисунок 2. Схемы лечения корое, больных послеродовым эндометритом (по группам) I—первая; И—вторая; Ш—третья; IV—четвёртая; V—пятая.

_:_п_

Способность коров к оплодотворению после УВЧ-лечения и продолжительность бесплодия устанавливали по данным зоотехнического учета; Контроль за общим состоянием поголовья до и во время опыта проводили согласно методам, принятым в современной ветеринарной клинической диагностике, ■

•. Эффективность воздействия и время реабилитации определяли по показателям выздоровления и восстановления воспроизводительной способности коров.

В ряде случаев описание методики экспериментов сочли целесообразным давать по ходу текста. "

В работе применены: общезоотехнические методы исследований, племенные записи, материалы зоотехнического учета по воспроизводству в стадах хозяйств, а также материалы ветеринарного учёта. Статистическую обработку проводили по Е.К. МеркурьевоЙ (1970, 1983). •

г: результаты собственных исследований;

2.1. Аспекты применения биорегуляторов.

2.1.1; Лютеолитическая активность клатрапростина, тстуфалана и. ани-проста при действии на спонгаичо и индуцированно образованную лютеальную ткань.

Оценка эффективности отечественных препаратов - простагландина — клатрапростина, эстуфалана и анипроста показала, что в дозировке 500 мкг действующего вещества (по клопростенолу) они не уступают зарубежным аналогам^ Анализ аспектов применения простагландинов как лютеолитических веществ привел в выводу о том, что их эффективность определяется оптимальной продолжительностью периода между сроком введения препарата к сроком проявления признаков индуцированной охоты. С учетом этого обстоятельства провели сравнение эффективности найденных оптимальными доз клатрапростина, эстуфалана и анипроста, как лютеолитнческих агентов, при действии на спонтанно и индуцировано образовавшуюся лютеальную ткань. ,

Почти у всех коров после обработки испытуемыми проста гландииами происходит резкое и с большой степенью синхронности падение концентрации прогестерона. Но в противоположность,этой тенденции сроки проявления признаков эструса весьма вариабельны. Отчасти, явление можно обусловить наличием, большего или

меньшего числа атретических фолликулов в зависимости от стадии и характера цикла, приходящихся иа момент введения простагландина.

Сравнимые задержки проявления охоты при суперовуляции и синхронизации, проводимых на ранних стадиях полового цикла, объясняются присутствием больших растущих фолликулов в результате воздействия гонадотропина (при суперовуляции) и как продолжение нормальной динамики фолликулярного роста (спонтанный цикл).

Хотя средние интервалы стимулированного восстановительного периода различались по группам незначительно, при обработке анипростом проявлялась тенденция задержки проявления охоты у определенного числа коров.

Эпизодически отмечаемая высокая частота случаев замедленного лютеолизиза трудно объяснима. В основе молекулярной структуры синтетических аналогов простагландина лежит полиэтиленгликоль, который при внутримышечных инъекциях обеспечивает более длительный период распада соответствующих лютеолитических агентов по сравнению с естественным просгагланднном Рга. После суперовуляции и извлечения эмбрионов в яичниках доноров неизбежно остаётся определённая часть не созревших желтых тел,'то есть не'достигших лютеолитич еского состояния. Как раз свойство пролонгированного действия должно обусловить целесообразный эффект, так как до момента времени распада и выведения препарата из организма желтые тела достигают зрелости. Однако наши исследования не подтверждают этого положения. В естественных условиях лютёолизис происходит под действием маточного простая лаидина, имеющего характер пульсаторной инкреции и пульсаторного расщепления с

образованием пиковых концентраций. Вероятно, равномерное и пролонгированное » ■ , расщепление экзогенных лютеолитических агентов при отсутствии пиковых концентраций может снижать их лютеолитическую активность. ' '

Увеличение срока восстановления у доноров с положительной суперовулятор-ной реакцией нельзя связывать только с наличием большой массы лютеальной ткани. Механизм лютеолизиза очень сложен и окончательно не выяснен. Вероятно, специфика индуцированной лютеальной ткани ещё более усложняет механизм лютеолиэи-са. '

В собственных исследованиях мы зафиксировали факт, когда через 116 часов: после извлечения эмбрионов уровень прогестерона опустился ниже 1 нг/мл^ а коровы поведенческих симптомов эструса не проявляли. Считают даже нормальным прояв-

_13_

ление эструса, как минимум, через 7 дней после извлечения, аргументируя это необходимостью «периода отдыха» для суперовулировавшего яичника. Так или иначе, но правильное объяснение причины задержек восстановления нормальной цикличности после извлечения эмбрионов у л актирующих коров-доноров зависит от более полного понимания механизмов лютеолизиса, принципов фолликулогенеза и принципа обратной отрицательной связи эндокринной функции структур яичника и гипоталамо-гипофизарного комплекса.

Таким образом, следует, констатировать практически равную эффективность клатрапростнна, эстуф&лана и анипроста при применении как с целью синхронизации охоты и для индуцирования суперовуляции, так и с целью стимулирования скорости завершения восстановительного периода после извлечения эмбрионов. Особо следует обратить внимание на ключевой момент: обработка с целью синхронизации в ранний период лютеальной стадии на 6-8 день цикла определяет оптимальный срок охоты при суперовуляции, её показатели, а также эффективность стимулирования скорости завершения восстановительного периода.,.

2.1.2. Индуцированиесупероиуляцик.. . ..

Выраженные признаки эструса и,наличие суперовуляторного ответа не означают, что отсутствие признаков эструса предполагает отсутствие суперовуляторного ответа и наоборот, то есть возможна суперовуляция," не сопровождающаяся охотой, равно как возможны выраженные признаки охоты, не сопровождающиеся супероаудиторным ответом. В этом — отличие обработок ГСЖК от обработок гнпофизарными гонадотропинами. Это происходит в результате того, что ГСЖК способствует увеличению концентрации эндогенного 17-р-эстрадиола, обусловливающего эффект овуля-торных центров головного мозга на выраженность полового поведения. Определенные дозы ГСЖК. могут препятствовать полному лютеолнзнсу при однократной инъекции простагландина Р2а. Данный вывод аргументируют опытами, в которых множественными, инъекциями простаглачдина добивались увеличения показателей су-перовуляторной; реакции,! а также. фактом < наличия в лютеальной ткани ФСГ-рецегггоров, которые, как предполагают, связывают активные структуры СЖК, однако биологическая роль; этих' рецепторов в физиологическом:процессе лютеальной функции пока ещ£ неизвестна.. , . • . . ,

14_

Масса яичника при стимулировании ГСЖК зависела от дозировки, причём вве- ■ дение антисыворотки уменьшало СЖК-стимуляцию увеличения массы, что соответствует данным литературы. Увеличение массы яичников совпадало с увеличением ■ числа неовулировавших фолликулов с параллельным увеличением числа желтых тел. Влияние антисыворотки на снижение числа неовулировавших фолликулов сопровождалось снижением массы яичников. Большое число неовулировавших фолликулов является негативным свойством сывороточных гонадотропинов из-за длительного периода полураспада. В нашей работе введение антисыворотки сокращало число неовулировавших фолликулов во всех опытных группах.

Можно считать доказанным положение о том, что введение поли- или моно-клональных антител к ГСЖК способствует увеличению нормы овуляции и общего числа и числа пригодных для трансплантации эмбрионов.

Не смотря на.успехи, достигнутые в совершенствовании технологии эмбри-отрансплантации, остаётся много нерешенных проблем. Одну из ких>представляет индивидуальная изменчивость, проявляемая коровами-донорами в суперовуляторном ответе практически на все существующие схемы и режимы гормональных воздействий. В этом отношении испытанный нами метод индуцирования суперовуляции в начале астрального цикла не стал исключением. В целом, овуляторный ответ был ниже, чем в группе, обработанной в середине цикла. Другие параметры, такие как число эмбрионов отличного, хорошего и удовлетворительного качества, были ниже. Аналогична ситуация по показателям числа дегенерированных эмбрионов::Это говорит.о том, что перенесение обработок на ранний период цикла положительного влияния не оказывает и на этот показатель.

Однако, соотношение эмбрионов, пригодных для криоконсервации, то есть отличного качества, к числу овуляций было более приемлемым при обработке в начале цикла, что позволяет-говорить о тенденции улучшения качества сулеровуляторного ответа. Следовательно, исследованиянаправленные на разработку методов контроля и управления механизмом развития'популяции фолликулов дадут возможность прогнозировать и получать заданный и желаемый суперовуляторный ответ у каждого -, животного.

Анализ уровней ЛГ. обнаружил несколько аспектов эффективности обработок гонадотропными препаратами, содержащими определенные соотношения ФСГУЛГ,

_[У_

Во всех группах било различие ЛГ-концентраций, которое приходилось на период индуцированного лизиса, когда завершился процесс роста формирования фолликулов и начался процесс окончательного созревания.

Высокие уровни ЛГ. могут быть результатом лютеинизации фолликулов, снижать чувствительность ЛГ-рецепторов или вызывать преждевременную овуляцию. Низкие уровни могут вызывать отклонения компонентов в цитоплазме ооцитов и созревании ядра. В целом, перечисленные отклонения обусловливают получение определённого процента неоплодотворёиных яйцеклеток, дегенерированных эмбрионов на разных стадиях развития. Таким образом, детерминированное введение ЛГ в гона-дотропную обработку может оказать положительное влияние на процесс фолликулярного и ооцитного созревания. После завершения индуцированного лютеолшиса, экзогенный ЛГ, хотя и может играть положительную роль в определённых ситуациях,. но не столь важную, как в предшествующий период.

Уровень прогестерона перед искусственным осеменением отражал разное содержание ЛГ в гонадотропиых обработках, однако, сравнительно более высокие уровни были характерны для животных, обработанных ФСГ с более высокой контаминацией ЛГ. Увеличение уровней прогестерона положительно коррелировало с числом индуцированных желтых тел и полученных эмбрионов и яйцеклеток. Это подтверждает вывод о том, что исследование концентрации прогестерона пригодно в качестве теста для оценки суперовуляторного ответа, а перед началом обработки — для прогнозирования ей эффективности.

Мы пришли к выводу, что применение гонадотропных обработок с различными соотношениями ФСГ/ЛГ, при условии совершенствования, позволит снизить вариабельность суперовуляторного ответа. Совершенствование методов применения препаратов следует проводить в направлении, разработки определения оптимального . ФСГ/ЛГ-соотношення, причём индивидуально определённого. В свою очередь, для этого потребуется разработка объективных показателей овариального статуса для каждой коровы-донора.

2.1.3. Многократные нилуКированные суперовуляцнн.

Эксперименты по многоразовой гормональной обработке показали стабильную тенденцию снижения уровней суперовуляции после каждой последующей обработки.

Не смотря на негативную тенденцию к снижению результативности.при многократных обработках, суммарно среднее число интактных эмбрионов на донора при четырёхкратной обработке почти в два раза выше, чем при двух и трехкратной. По нашему мнению— это весьма важно и аргументирует-целесообразность многократного использования в качестве доноров тех коров, для которых учитывается существенная деталь: отсутствие положительной реакции на обработку не является абсолютным показанием для исключения животного из числа доноров.-

2.2. Эффективность гормональных препаратов при устранении нарушений плодовитости.

2.2.1. Восстановление плодовитости при нарушениях фоллнкулогенеза.'

Опыт собственной работы показал, что в условиях практики весьма трудно выявить причину многократных перегулов коров. В определённой мере объяснением этому может служить неправильное определение сроков проведения искусственного осеменения. Контролем за динамикой морфологических изменений фолликула'установлено, что в случае отсутствия ошюдотворяемости после 2 и 3 осеменений нарушается процесс овуляции, который может способствовать атрезии. При удлинённом эст-русе и. отсутствии своевременной овуляции применение аналогов гонадолибернна или хориогонического гонадотропина и дополнительное осеменение дало определённое увеличение оплодотворяем ости. Возможно, это является следствием детерминн-

- »■ ■ ■ ■ ■ ■

рованного по срокам осеменения. Тем не менее, положительные результаты данного фрагмента исследований не. исключают положения, о необходимости проведения, серьёзных обследований и в соответствии с ними — интенсивных гормональных воздействий на коров, которых три и более раз безуспешно осеменяли. Это аргументируется н тем, что определённое число коров, не ставших стельными после возобновления половой цикличности в дальнейшем её прекратили.

Применение аналогов простагландина в сочетании с гонадотропинами дало по-1 зитивные показатели относительно возобновления половой цикличности и оплодо-творяемости у коров как чёрно-пёстрой породы, так и породы герефорд. Отсутствие положительных результатов у определенного числа животных можно объяснить аналитическими ошибками при проведении диагностических исследований. При симптомах эндометрита свыше 60% всех обработанных животных стало стельными, од-

на ко, в процессе нашей практики установили, что колебания могут составлять промежуток 31,1+67*7%. При традиционных методах лечения оплодотворяемость более низкая, а колебания могут составлять 20,5+30,5%. Необходимо отметить, что около 15% коров следует подвергать обработкам дважды. Причиной этого является состояние анэструса после индуцированной охоты и пропуски охоты. Отсутствие эффекта чаще всего обусловлено глубокими деструктивными процессами в тканях матки и органическими гормональными нарушениями.'

В целом, к применению простзглакдина в сочетании с аналогами гонадолибе-рина или ХГЧ могут служить показания:, анэструс в течение 60 дней после родов и анэструс у не оплодотворившихся после ряда осеменений коров.

Таким образом, проведенные исследования позволяют положительно оценить результаты применения аналогов простагландина в стаде с проблемами воспроизводства относительно применения традиционных методов лечения.

Собственными исследованиями по восстановлению половой цикличности коров с перснстентяым желтым телом подтверждено преимущество применения с этой целью препаратов простаглацдина. В значительной степени это преимущество определяется проявлением охоты в определённый срок. Полученные результаты исследований показали, что в большинстве случаев индуцированная охота проявляется, на 3-4 день после введения простагландина. Остальная часть животных проявляет большой разброс сроков прихода в охоту. В этом проявляется существенное отличие от сроков наступления охоты при индуцировании полового цикла простагландином у здоровых животных, когда охота наступает в большинстве случаев через 48 часов после инъекции. Явление, по нашему мнению, может быть объяснено выпадением влияния маточного простагландина вследствие нарушения его образования в подверженных альтерации тканях матки и, возможно, специфическими особенностями персистентного желтого тела, которые ещё не выяснены. Эти факторы и определяют большую или меньшую продолжительность времени, необходимого для полного лизиса. Вследствие этого необходимы наблюдения и качественная фиксация охоты в течение продолжительного периода после введения простагландина, в противном случае возможна потеря до 30% животных, пригодных для плодотворного осеменения.

_' _ 18 _"

Данные, полученные при устранении фолликулярной, лютеальной кист » гипофункции яичников зафиксировали приблизительно равный эффект выздоровления коров при всех трёх морфофункциональных нарушениях.

Определённое-противоречие имеет место в отношении сообщений, согласно которым отрицательный результат может достигать 40%. Это объясняли в этих случаях проведением гормональных воздействий без учёта характера внешних проявлений половой цикличности. По вашему мнению, важнее учитывать динамику патогенеза морфо-функциональных нарушений, так как фолликулярная, лютеальная кисты и, в ряде случаев, гипофункция яичников являются звеньям и единого патогенеза, определяющего динамику нарушений.нормоцикличной.деятельности яичников и, следовательно, динамику и характер внешних проявлений полового никла. Поэтому, мероприятия, направленные на возобновление и регуляцию циклической деятельности яичников, необходимо проводить с учётом последовательного «плюс-минус» взаимодействия с гипотапамо-гипофизарной системой.

♦

Лучшие результаты нормализациинарушенного . фоллнкулогенеза. следует ожидать после внутриматочного применения антибиотиков;с воздействием:УВЧ в дополнение к гормональному воздействию. Необходимость комплексного лечения диктует взаимообусловленность практически всех, нарушений циклической деятельности яичников с патологией матки и наоборот (А.Г. Кононов, 1965, 1966, 1967).

Основная причина, снижающая возможность использования коров в качестве доноров эмбрионов после устранения различных форм фолликулогенеза — это неравномерная цикличность функциональной-деятельности яичников.' Компенсировать этот негативный фактор можно за счёт искусственного осеменения коров, которые не подходят для использования в качестве доноров эмбрионов,- С учетом данного положения мы провели эксперимент, в котором индуцирование суперовуляции проводили только у тех коров, которые проявили правильное чередование, как минимум, 2-х циклов. В период охоты, предшествующий началу обработок, провели профилактическую санацию матки в сочетании с УВЧ-воздействием.

В целом, были получены вполне удовлетворительные показатели, табл. К Следует отметить, что наиболее приемлемые показатели были получены в группах коров ■■ после устранения лютеальной кисты и персистентного желтого тела — 2,5±0,б и

_ 19_

2,3±0,1 интактный эмбрион на положительного донора. В других группах эти показатели более чем в 2 раза ниже. - -

Таблица 1.

Показатели суперовуляции, индуцированной после восстановления равномерной половой цикличности

Показатель. Гvynna коро* ■

/ ff III ГУ

Характер устранённого нарушения \ Фолликулярная киста Лютеальная киста Гипофункций Яичников Персистетп-ное желтое тело

Обработано коров, п 11 9 13 9

Число неовулировавших фолликулов на положительного донора. А/±ш 2.1±13 0,1 ±2,6 1,9±1,1 1,1 ±0,6

Число овуляций на положительного донора. Mim 9,1*1,4 5,2*2,1 6,8*1,9 4,2±0,б

Получено зародышей на положительного донора,, Wim б,7±1,1 3,6±0,9 2,б±0,9 2,9±0,6

В том числе:

- нормальных I,U0,6 2,5±0,6 1,1 ±0.3 2,3±0,t

- дегенерироеанных 3,6±0Т3 0,5±0.2 0,9±0,4 0,3±0,3

- неоплодотеорённых яйцеклеток 2,0±0.6 0,6±0,4 0,б±0,6 0.3±0,2

Примечание: (Р<0,01)

Таким образом, подтверждена реальная возможность получения эмбрионов у коров после нормализации нарушенной функции фолликулогенеза.

2.2.2. Профилактика осложнений у коров в послеродовой период.

Для практических работников очень важно дифференцировать постфизнолога-ческую ациклию (Н.И. Полянцев, 1997) от гипофункции яичников, которую регистрируют, как правило, у коров по I и 2-ой лактации, в то время как постфизиологиче- . екая ациклия может проявляться в любом возрасте.

С целью сравнения показателей плодовитости у коров при временном застое цикла после спонтанного и стимулированного восстановления половой цикличности нами были отобраны контрольная и опытная группы животных. Опытной группе возобновление оварнальной активности стимулировали введением ГСЖК (1000 ИЕ) и эстуфалана (500 мкг).

В целом, за 3,5 месяца после начала опыта в контрольной группе стельность наступила у 19 коров (47,5%). Сервис-период составил свыше 121 дня при индексе

осеменения 2,3. У животных опытной группы аналогичные показатели выгодно отличались н были близки к общепринятым нормативным, табл. X'

Таблица 2.

Показатели плодовитости после устранения постфизнологической ациклии

Показатель Число КО-роя, п Срок появления ¡-Ой охоты, дней, Л/±Я1 Опяодопчоряе-ммп« после 1-ого осеменения Общая 0п№ йотеоряе-мость Сереие-перыод, дней, М±т Индекс осеменения

п: % п %

/ группа - 40 60,1 ±9,7 8 20,0 19 47,5 121,9±18,1 2,3

11 группа 40 7.1 ±2,1 22 55,0 35 87,5 87,9±73 'г?

Примечание: (Р<0,01}

Таким образом, данные опыта нашей работы аргументируют целесообразность: стимулирования оаариальной активности у коров после отёла..

Мы провели разработку и оценку системы лечебно-профилактических мероприятий при послеродовых нарушениях путём применения ультравысокочастотного электромагнитного поля метрового диапазона малой мощности (по вышеописанной методике). Самой высокой терапевтической эффективностью (88,5%) обладая комплексный метод лечения, включающий .УВЧ-излучение в сочетании с. парентеральным введением бицнллииа-3, табл. 3.

Таблица 3.

Эффективность физиотерапевтических воздействий при эндометритах.

Показатель Группм :

/ 2 ' * 4 $■

Число коров, гг 29 26 33 79 57

Число выздоровевших коров:

- количество, п 25 23 28' 64 42

-% 86.2 88,5 84,9 81,0 73,6

Примечание: (Р<0,01)

Профилактическое введение синтетических гонадолнберинов коровам с предполагаемым эндометритом и инволюцией матки имеет целью индуцирование нормального. с физиологической точки зрения; полового цикла и комплексное купирование развития послеродовых нарушений. Теоретически такая необходимость определяется тем, что воспроизведение регулируется нейрогуморальной системой в определённой последовательности, где основными звеньями ■ являются гипоталамус, гипофиз, яичники и матка, деятельность которых регулируется прямыми и обратными..

'_ 21__

связями.- Вследствие этого следует иметь в виду, что функциональные нарушения деятельности яичников после отёла могут не являться первичными, В'этих случаях выздоровление матки способствует наступлению нормальной половой цикличности.

Данные положения подтверждают исследования по гормональной стимуляции в послеродовой период, которые приводят к выводу: на сколько стимулированы регрессивные и регенеративные процессы послеродовой матки, настолько, в равной степени, даёт позитивные и негативные результаты гормональное обусловливание репродуктивной функции. Поэтому, фронтальное введение-в ранний послеродовой период одних только гормональных средств — ГСЖК, гонадолиберинов и простаглэнди-нов, равно как и одних только локальных воздействий на матку, могут давать отрицательные результаты и оказывать негативное влияние на инволюционный процесс.

Проведенная в наших исследованиях аппликация ГСЖК и гонадолиберина параллельно с локальной обработкой матки антибиотиками и УВЧ в качестве профилактического мероприятия на коровах как с видимыми, так и без видимых клинических нарушений воспроизводительной функции дала достоверное улучшение показателей этой функции;. ' -

2 Л Л. Влияние экзогенных факторов на эффективность применения гормональных средств..

Учитывая эндогенные причины нарушений воспроизводительной функции,. связанные с фолликулогенезом, следует принимать во внимание и экзогенные факторы. Частота проявления нарушений фолликулогеиеза имеет выраженный сезонный характер, В частности,-гипофункция наиболее, часто у чёрно-пёстрой породы встречается в зимне-весенний период года..Поэтому, можно предположить причину её возникновения в неправильных рационах кормления. Причина может быть заключена и в высокой молочной продуктивности коров; при когорой так же повышается вероятность ошибки при составлении рационов кормления, особенно в отношении сбалансированности концентратов и комбинированных кормов, составляющих рационы высокопродуктивных молодых> коров. . Нельзя исключить и возможность повышенной предрасположенности ■ высокопродуктивных коров - к дистрофическим процессам в яичниках вследствие недостатка определённых питательных веществ, в результате чего в передней доле гипофиза снижается чувствительность к сигналам гипоталамуса

и не образуется необходимый уровень ЛГ в крови, который имеет решающее значение в образовании желтого тела. Поэтому, для сознания овуляционной ситуации, наряду с другими процессами, необходимо нормальное физиологическое соотношение процессов лизиса и лютеинизацнн. Этот довод подтверждает обоснованность направленной лютеинизации фолликула при лечении овариальных патологий. Следовательно, необходимо решение как минимум двух задач по:

нормализации гормонального статуса (полноценное кормление, гестагени-зация или йодизация);

резкому повышению концентрации ЛГ в крови (инъекции гонадотропного рилизинг-гормона, хориогоннческого гонадотропина или других биологически активных веществ подобного действия).

У коров породы герефорд гипофункцию яичников и «застой цикла» наблюдали чаше в летний период, что, вероятно, обусловлено «лактационной доминантой», связанной с содержанием телят на подсосе,

В практических.условиях для показаний гормональной терапии необходима чёткая дифференциация гипофункции яичников вследствие дистрофии от состояния коров, находящихся в метэстральном периоде. Для этого необходимы двукратные гинекологические исследования с интервалом 7-10 дней.

Проведение успешной гормонотерапии возможно только тогда, когда ей предшествует хотя бы частичная корректура кормления. В то же время одно только улучшение кормления без проведения гормонотерапии к успеху не приведёт.

Для рационов коров с овариопатологией, которых подвергали гормонотерапии; был характерен недостаток энергетических компонентов при некотором излишке доли протеинов. Хотя полную перестройку рациона в условиях производства провести не представлялось возможным, благодаря гормональной терапии у большинства коров половой цикл был восстановлен и получены хорошие показатели оплодотворяе-

МОСТИ. .',.-■*.

Эффективность биорегуляторов зависит от природно-климатических факторов. Мы выяснили наличие связи негативных показателей применения аналогов Гн-Рф и ХГЧ для повышения огшодотворяемости дважды перегулявших- коров параллельно' третьему осеменению с сезоном года.

__23_

Для разных сезонов года эффективность сурфагона и ХГЧ была практически одинакова, причём наибольшая результативность для обоих препаратов имела место при введении их на фоне индуцированной (синхронизированной) эстуфаланом охоты. Однако коровы всех групп, включая контрольных животных, нмели более низкие показатели оплодотворяемостн в пастбищный период, чем в стойловый, табл. 4:

. Таблица 4.

Влияние инъекции гонадолкберина и ХГЧ на результаты осеменения по сезонам года (1995— 1999 гг.)

Группе ПРЕПЛРАТ Комшролк

Гн — РФ (сурфаган) ХГЧ

Число есеменЯн* ро*. я Чеся* ллоДе-тлорп» оа-хен/н* икс КО- рал. я Шка»- оп- лодет*о~ ряемо- стя. К Чмсд* асжмемём-ГШ.Х ко- ро*. И Число тшорно ныл коРМ. п Помом* мель яодотёФ» ряем«* стм, % Число ммхко-ро*, Я Чше» т*орпо ослмтён- ЛМЩ. юн, к Показатель оп- С««. %

Стойловый период 6 месяцев)

1 390 120 30,8 380 110 30,5 200 35 17,5

// 490 280 65,0 400 260 65,0 250 120 48,0

Пастбищный период (6 месяцев)

Г 400 60 15,0 330 50 15,2 200 10 5,0

п 460 200' 43,0 395 170 43,0 <250 60 24.0

Примечание: , [группа —коровы в спонтанной охоте;

II группа — коровы в синхронизированной охоте (эстуфалан).

90

О Ч—I—I • I—I—I—I—1—1—I—I—I—I—г

1 2 3 4 5 $ 7 8 9 10 11 12 Месяцы года -

Рисунок 3- Оплодотеоряемостъ в спонтанную охоту.

Рисунок 4. Опладотворяемость в синхронизированную охоту.

Динамика показателей оплодотворяемости по месяцам года аналогична для: всех групп животных, включая контроль {рис. 3 н рис. 4): при характерной вариабельности прослеживается устойчивая тенденция к снижению показателей до минимальных значений в летние месяцы. В зимне-весенний и осенне-зимний периоды показатели оплодотворяемости достигают максимальных значений. Можно предполагать влияние самых разнообразных факторов на снижение результативности применения испытуемых препаратов в летнее время, однако окончательно и в полном объёме конкретизировать причины пока не представляется возможным.

В опытах по индуцированию полиовуляции гипофизарными гонад атропинами нами было установлено, что средние показатели реакции в разные периоды года неодинаковы. Однако, в ходе детального анализа длительного периода по месяцам (1985-1999 гг.) закономерно постоянного влияния сезонного фактора на получение после индуцированной полиовуляции эмбрионов проследить не удалось. Тем не менее, выяснили, что резкие изменения температуры окружающей среды, которые могут носить стрессовый характер для организма, обусловливают снижение воспроизводительной способности лактирующих коров.

Мы проводили работы по получению эмбрионов от коров-доноров в условиях, когда днём температура воздуха в теин поднималась выше +32°С. Животные практически круглосуточно находились на пастбище и только доение и осеменение осуще-

_25 ' _

ствляли в корпусах. Группе из десяти высокопродуктивных, здоровых коров чёрно-пёстрой породы индуцировали суперовуляцию режимом обработок ФСГ-супер^ Р2о по 4-х-дневноЙ схеме в синхронизированный половой цикл. Ни у одной из коров-доноров не получили позитивной реакции, табл. 5.

При этом были зафиксированы следующие характерные особенности; ]) инду-цнрованная охота как при синхронизации циклов, так и при суперовуляцин была всегда плохо выражена, со стёртыми признаками; 2) у коров было очень трудно определить начало индуцированной охоты; 3) в синхронизированную охоту у всех животных было зафиксировано повышение внутри маточной температуры на 0,5 — 1,0°С выше средне нормальной (38,5°С); 4) перед обработкой желтые тела плохо пальпировались; 5) была зафиксирована достоверно низкая концентрация прогестерона перед обработкой.

Для подтверждения негативного влияния на показатели повышенной температуры окружающей среды у этих же коров тем же методом вызывали суперовуляцию в начале осени при температуре воздуха, которая не могла обусловить стрессового состояния животных. Были получены удовлетворительные и хорошие результаты, табл. б. У всех животных после обработки с целью синхронизации половых циклов были хорошо выражены признаки синхронизированной охоты. Охота при индуцированной суперовуляции была также хорошо выражена. Внутри маточная температура у всех коров при синхронизированной охоте была в пределах нормы. Желтые тела на 9-10 день индуцированного цикла перед началом стимулирования суперовуляции оценивались как хорошие, а показатели гормонов - в пределах нормы.

Летом того же года мы испытали возможность нивелировать условия термаль-

*.

ного стресса, когда температура воздуха днём превышала 30°С в тени. Группу коров, у которых синхронизировали цикл и вызывали суперовуляцию содержали круглосуточно в просторном, слегка затененном помещении. В корпусе проводили принудительную вентиляцию по 30 минут 7 раз в сутки с интервалом в 2 часа и разбрызгивание водой. Таким образом, благодаря несложным мероприятиям, происходила оптимизация условий содержания: температура в помещении колебалась от +22"С до +25вС. И хотя показатель оплодотворяемости яйцеклеток был низок, тем не менее явно прослеживалась тенденция к улучшению результатов.

• ' Таблица 5.

Результаты индуцирования суперовуляции у коров в условиях термального стресса

Мл>п мерный донора Де'% чикла, * которым начала обработ- > ' Концсн* трецил 'рема, . нг/'мя Кенцен* гпряция ¿доле» пг/мл Хораьтгр желтого шаа перед обработкой Внутри-маточная темп?- ратурв, *С Реакция яичннкм Число инт^нних ыробишгв. я

(чиею Ж1 + ф<т ммлхтея икеяв*) " Всего * том vuc.it:

Пртый личяия Лыыы яичник Пртиш яычяак Леей й яичник нормальных деинеря-рогонаих дат*, мй-цекчетвя

! 1224 .9 0,9 19,7 • Плох. 39,1 2 Ф 2 ЖТ 1 - - 1

2 1933 10 1,2 . 18,7 Удовл. 39,0 4жт 4жт 4 1 1 . 2

3' 1125 10 . 1,1 26,8 Плох. 39,1 - -

' 4 . 1250 10 . М 35,1 Удовл, 38,9 - ■ - ' - - - -

5 1202 9 1,6 17,1 Плох/ ■ - 38,9 1жт+1ф 2жт 1 1 - ■ -

6 1388 10 0,8 30,9 - ■ Плох. 39,1 4жт 4ф 2 - 1 1

7 1360 )0 и 22,6 Плох, 38,7 2жт+1ф 1жт+2ф 1 - - . I

8 1008 9 и 22,1 Плох.- Плох. 38,7 4 ф 1 ЖТ - - -

9 0920 10 '0,9 22,0 Удовл. - 39,9 4жт+2ф 2жт+1ф 1 - - . 1

10 2180 9 1,0 36,1 • Плох. , 39,2 2ф Зжг+1ф - - - •

Общее количество зародышей, полученных от 10 коров-доноров: 10 2 2 6 :

Таблица 6.

Результаты индуцирования суперовуляции у коров при нормальной температуре воздуха окружающей среды

Мя/я Инвен-тирний номер ¿оиорв День кик* Яа,вКв-тория качаян »бреСот* ку КвицеН' ярацч* прогестерона, нг/мл Концен-/прения Рстра-¿иоае, пг/мя Характер мселяшго теля »ерей обработка Внутри-метанная мсяяе-ретурв, •с Реакция явчяикт {число жияи тел + фйлднкулов) Числе юелеч/иних инннЫшей, я

Всега в том чясяе:

Прогиб ЯНЧМЯК Левин янчник Правый личник Левый янчннк иормоя*. них рмйннил Неопло-¿епв. яй-некчеток

1 1224 9 2,4 33,5 ■ Хор. 38,4 6 ЖТ 11 жт 17 3 10 ' 4

2 1933 10 IX 19,7 Отл. - 38,5 2жт Зжт 5 3 2

3 1123 10 2,0 22,6 - Отл. 38,4 5жт -2 жт 6 - 4 : 2

4 ■ 1250 9 2,1 30,7 Удовл. Удовл. 38,4 Зжт 4жт 7 4 I 2

5 1202 10 3,1': 22,7 Хор. - 38,4 4 жт 4жт+1ф 6 5 1 - ■■

6 1388 10 3,1 20,6 Отл. 38,5 8жт 8жт 16 12 1 3

7 1360 10 1,8 18,1 Удовл, - 38,6 7жт 7жт 9 .3 5 1

8 1008 И 3,2 . .22,1 Хор. - 38,3 4жП-1ф Зжт 6 ' 6 ■ - - - ■

9 0920 10 2,6 29,0 Хор. - 38,5 2жт 4 жт 4 3 1 -

10 •2180 9 2,9 28,0 Хор.. Хор. 38,4 9жт 10 жт 15 2 9 .4

Общее количество зародышей, полученных от 10 коров-докоров: 91 41 34 16

______

По нашему мнению важно, что в ходе исследований были выяснены различия в показателях концентраций прогестерона и зстрздиола у коров в стрессовых и нормальных условиях. Известно, что концентрация кортизола может значительно увеличиваться в условиях термального стресса. А кортизол и регулятор его продукции — кортикотропин обладают способностью тормозить активность «полового центра» гипоталамуса. В таких случаях, количество пульсаций уровня ЛГ на 5-й день полового цикла снижается, а на 12-й день возвращается к пределам нормы. Это дает основание считать, что термальный процесс может подавить выработку ЛГ-в гипофизе, не оказывая существенного влияния на секрецию яичниками стероидных гормонов. Поэтому можно считать установленным непрямое влияние изменений уровня тиреоидных гормонов, сильно зависящих о колебаний температуры внешней среды, на оплодо-творяемость у коров. Положение находится в соответствии с данными, согласно которым йодосодержащие тириоидные гормоны влияют на лютеинизирующую функцию гипофиза. Для нормального функционирования .системы гипоталамус-гипофиз-гонады влияние на гипоталамус гормонов щитовидной железы необходимо обязательно. Объективно необходимость такого влияния подтверждена экспериментами, когда было показано, что отсутствие овуляции, связанное с резким снижением лю-теиннзирующей функции гипофиза в свою очередь связано с низкой активностью щитовидной железы. Таким образом, прослеживается направленная обусловленность процесса овуляций от температурного фактора:внешней среды через посредство взаимосвязи щитовидная железа — гипоталамус — гипофиз — гонады при определенной роли надпочечников (учитывая повышение концентрации кортизола в сыворотке кро- ' ви при термальном процессе).

Низкая концентрация прогестерона в середине цикла является следствием повышенной секреции эндометрием лактирующих коров простагландина, который ин-гнбирует развитие и гормональную активность желтого тела. Это происходит из-за увеличения чувствительности эндометрия к окситоцину в ответ на действие которого и осуществляется дополнительный выброс маточного простагландина. Повышение же чувствительности к окситокснну происходит из-за нарушения внутри маточного равновесия температуры в условиях .термального стресса. Правильность ■ выдвигаемой концепции подтверждают данные, полученные на коровах-донорах; не давших в условиях термального стресса позитивной - суперовулягорной реакции, : но позитивно1

прореагировавших в нормальных условиях. В целом мы пришли к выводу, что термостресс один из факторов, оказывающий негативное влияние на воспроизводительную функцию в соответствующие сезоны года, который возможно нивелировать за счет оптимизации условий содержания коров даже при существенном повышении температуры воздуха.

• 2.3. Обобщающий аиализ эндокринных аспектов

2.3.!. Гормональные профили при различном функциональном состоянии яичников?

Репродуктивная функция у самок крупного рогатого скота на протяжении периода половой зрелости подвержена циклической эволюции овогенстических и эндокринных процессов в яичниках, регуляция которых, по современным понятиям, в значительной степени автономна. Внутриовариальные процессы находят проявления в половом цикле, начало которого соответствует дню охоты, обозначаемому нулевым днем цикла. Яичник имеет строго последовательный циклический ритм: - волнообразное развитие и рост популяции антральных фолликулов - созревание доминирующего фолликула последней волны роста популяции — овуляция - развитие желтого тела. При этом центральным явлением периодической функциональной деятельности яичника и вместе с тем периодичности половых процессов является овуляция, которая разделяет фолликулярную и прогестативную фазу морфологических изменений. В эндометрии этому соответствуют пролиферативная и секреторная фазы. При учете поведения самок следует считать, что овуляция происходит, в середине эструса, ей предшествует окончание проэструса и начало эструса. После завершения овуляторно-го процесса в свою очередь следует окончание эструса и начало метэструса. Таким; образом, овуляция не просто центральное явление в периодической функциональной деятельности, а играет центральную роль в рамках полового цикла в качестве механизма, дающего пригодную для оплодотворения яйцеклетку и обусловливающего гормональную ситуацию, соответствующую плодотворному осеменению и подготавливающую организм к беременности.'

В технологиях направленной-регуляции полового цикла, например, для синхронного проявления охоты определенным числом животных с целью их одновременного осеменения, большое значение имеют, сведения а продолжительности спонтанно протекающего цикла и его отдельных стадий. Это обусловлено тем, что целе-

_за__

сообразная эффективность воздействий гормональными препаратами возможна только на определенных стадиях цикла, строго ограничена времеинымн параметрами.

Данные о продолжительности полового цикла самок крупного рогатого скота по сведению ряда авторов весьма различны. Кроме того, для конкретного животного продолжительность цикла — величина не постоянная и может варьировать в широких пределах. Тем не менее, обобщив большое число данных, полученных в результате собственных исследований, й данных других авторов, можно прийти к выводу, что в' среднем продолжительностью полового цикла у коров следует считать 21 день, у телок (к периоду случки) — 20 дней. Собственный опыт показывает, что минимальная вариабельность продолжительности цикла встречается в возрасте коровы между 3-3 л актациями, когда воспроизводительная функция наиболее «точно отрегулирована», причем точность растет к пределам оптимума воспроизводительного периода. Увеличение степени вариабельности продолжительности цикла (с преобладанием в сторону уменьшения) наиболее выражено у старых животных.

Исследования относительно продолжительности фолликулярной и прогеста-тивной фаз указывают на более постоянный характер последней, что объясняют значительно лучшей регуляцией продолжительности прогестативной фазы в связи с выполнением ею существенной роли в подготовке организма к возможной беременно-ста. До настоящего времени нет единой точки зрения на механизм этой регуляции, которым можно было бы объяснить эволюцию желтого тела у разных животных. Как было указано, регуляция внутриовариальных процессов в значительной степени автономна, однако нормальная функциональная деятельность яичников невозможна без определенного влияния гонадотропных гормонов.' Прежде всего, это относится к необходимой' степени гипофизарной поддержки функционирования желтого тела на разных стадиях развития, т.к. в ряде случаев гипофизарная поддержка необходима только в определенное время, вне рамок которого развитие становится автономным. Общепризнанно, что у крупного рогатого скота для реализации лютеотропной функции необходимо обязательное присутствие ЛГ, тогда как неясно, способен ли, так называемый, чистый ЛГ играть лютеотропную роль. Ясно только, что в эксперименте для этой функции необходимо его постоянное введение в составе с пролонгатором (адъювант Фрейда).

Таким образом, цикличность функции яичника взрослой самки крупного рогатого скота регулируется выделением гонадотрошшов из гипофиза, деятельность ко- ■ торого осуществляется высшими нервными стимулами в рамках.системы положительной обратной связи с гипоталамусом. Однако, основную роль играет контроль относительно реакции гипофиза на гонадолиберин через посредство главным образом, уровня циркулирующих в крови сте ролов. Этот контроль следует рассматривать как алгебраическую сумму положительной и отрицательной связей с одной стороны. прогестагенов, с другой - эстрогенов, причем большее значение здесь имеет эстради-ол, колебания плазматической концентрации которой изменяют гипофизарную секрецию в течение нескольких часов. В границах положительных механизмов обратной связи следует особо отметить положительный эффект эстрогенов на выделение Л Г, выполняющего важную роль, обусловливающую нормальное течение как спонтанно- -го, так и индуцированного экзогенными гормонами овуляторного процесса. Причем эстрогены не оказывают действия положительной обратной связи на выделение ФСГ, в то время как прогестагены, при адекватных условиях, могут обусловить рост концентрации к ФСГ, и ЛГ.

' На протяжении полового цикла возможны две или три волны роста популяции а игральных фолликулов, каждая из которых сопровождается развитием доминантного фолликула. Момент образования доминантного фолликула соответствует наибольшей степени асннхронности развития остальных фолликулов в общей популяции : и началу процесса атрезии их определенного большинства.

Исходный фолликулярный рост последней волны, завершающейся созреванием и овуляцией доминантного фолликула, отмечается на поздней лютеальной - начале фолликулярной фазы полового цикла. Доминантные фолликулы предшествующих волн после достижения определенной стадии роста подвергаются регрессии и атрезии. На начальных стадиях фолликулярный рост не сопровождается повышением концентрации эстрогенов в плазме, но затем под комбинированным воздействием ФСГ и ЛГ, растущие фолликулы начинают выделять эстрогены. Повышающийся уровень эстрогенов достигает максимума незадолго до овуляции, непосредственно которую иницирует предшествующее риковое значение концентрации ЛГ (рис. 5).

Таким образом, временные и количественные параметры ЛГ являются ключе--вым явлением регуляции функциональной деятельности яичника.

.1°

-12-(71

к

п

1

¥

Iзстрадиол [прогестерон

зггггаЛГ

Ш

.. 1 ■

Ж

ОВУЛЯЦИЯ

ъ

ч

ДНИ [ИКЛа

Фолликулярная фаза

ЯИЧНИК

. Полифератнвнм фаза ЭНДОМЕТРИЙ ——-

Проэструс ЭСТРАЛЬНЫЙ ЦИКЛ

Развитие желтого тела

Прогестативная фаза

Секреторная фаза

Метэструс

■ Диэструс . ■ . Эструс

ФОЛЛИКУЛЯРНЫЙ ЦИКЛ

Рисунок 5. Иллюстрация к тексту: злолюция концентраций прогестерона, устрпИшща и ЛГ. * соопиетспмшн с эволюцией фалликут и желтою тела.

Поэтому считают, что большинство вариантов гормонального дисбаланса сводятся в конечном итоге к значительному отклонению от нормы временных и количественных параметров пика ЛГ, приводящее к нарушениям, как спонтанно протекающего, так и индуцированного овуяяторного процесса в виде преждевременных или поздних овуляций либо полным отсутствием овуляции с последующим перерождением кеовулнрованных фолликулов. Негативное значение преждевременных и поздних овуляций обусловливается выходом незрелых либо состарившихся яйцеклеток, что

исключает возможность нормальной оплодотворяемости и развития зиготы.

Приведенные обобщающие соображения по опогенетическому циклу приводят к выводу, что эффективность гормонального индуцирования полиовуляции, как элемента технологии эмбриотрансплантации, в первую очередь, будет зависеть от генетической предрасположенности, конкретное выражение которой проявляется в размерах популяций антральных фолликулов на протяжении цикла. Следует учитывать, что эти размеры колеблются я широких пределах, как у разных животных, так и на протяжении жизни у одного и того же животного. Это и другие положения, с учетом того, что в комплекс обработок с целью регуляции цикла включают препараты гона-долибернна,- блокирующего возможные негативные изменения параметров пика Л Г, позволяют считать современные дозировки и режимы применения биорегуляторов вполне приемлемыми для направленного корректирования воспроизводительной функции, т.е. поиски в направлении совершенствования унифицированных дозировок и режимов к значительному возрастанию эффективности не приведут.

2,3.2." Динамика гормональных. профилей во время индуцированной су-перовуляцнн

. Выяснению взаимосвязи динамики. гормональных профилей и показателями. индуцированной суперовуляции была посвящена цель наших исследований, для достижения которой поставили задачу; проследить в какой степени количественные и качественные показатели гормонального фона при суперовуляции соответствуют параметрам гормонального фона в аналогичный период спонтанного цикла и, в этой связи, проанализировать качество эмбриопродутиености доноров,

Суперовуляиию у коров-доноров двух опытных групп вызывали на 10 день по— . лового цикла сочетанием препаратов ФСГ и простагландина Р2а по 4-дневной схеме. Осеменение проводили через 48 ч после инъекции простагландина дважды, с интервалом 12 ч. Донорам И группы перед первым осеменением вводили в качестве гона-долиберина по 15 мг сурфагона. Графическое построение динамики гормонального фона;осуществляли;по средним значениям концентраций. Дня представителей. 1 -Й опытной группы построили 2 графика, соответствующие негативной и позитивной, реакциям; Животные II группы в целом прореагировали позитивно (при извлечении от донора 3-х и более ннтактных эмбрионов реакцию считали позитивной, менее 3-х-негатнвной).

_ 35_

На рис.' 6-А. представлено графическое отражение средних значений прогестерона (Р<0,01) и эстр&циола (Р<0,05) конца-начала спонтанного цикла (п=20), построенное на основе собственных данных, совпадающих, либо близких данным, приведенным в публикациях других исследователей (А .Г. Нежданов, Н.А Соловьев, 1986, 1990; B.C. Шипилов и др.г 1987).

Изменения концентрации прогестерона и эстрадиола, соответствующие позитивной суперовуляторной реакции (рис. б-В) количественно и качественно близки значениям, которые характерны для соответствующего периода, спонтанного цикла. При оптимальных размерах и функциональной активности желтого тела на 10 день цикла; вследствие дополнительно к эндогенному гонадотропного ФСГ-действия препарата происходит рост дополнительного числа фолликулов и вместе с тем продуцирование . дополнительного количества эстрадиола. Поэтому эстрогенная вершина в предовуляторный период выше, чем при обычной течке. Затем следует крутое ладе- -иие, незначительный, к 3 дню подъем и снова умеренное падение эстрадиола к 7 дню индуцированного цикла. Иллюстрируемая динамика определена нормально проходящим процессом стимулированного роста, созревания и овуляций фолликулов.

Параллельно, вследствие воздействия эндогенного простагландина, происходит быстрый лизис желтого тела цикла. Концентрация прогестерона закономерно Снижается до базального уровня соответствующей концентрации, характерной для спонтанной охоты и начинается умеренной и, далее, с 3 дня быстрый и крутой, подъем к 7 дню цикла, что обусловлено значительной общей массой лютеальной ткани, образовавшейся в результате овуляции большого числа фолликулов.

Графическая кривая, (рис.- 6-Е), отражающая. изменения концентрации эстрадиола и прогестерона при суперовляции С негативными показателями, резко отличается от графиков,- отражающих спонтанно протекающую овуляцию и позитивную су-перовуляторную реакцию. Отличия; равно как и негативные показатели, могут быть -обусловлены целым рядом факторов^ Одним из них может быть неполный либо недостаточный лизис желтого тела после воздействия экзогенного простагландина, что является важнейшей причиной отсутствия позитивных показателей в реакции яичников на гонадотропии, к как остаточная активность желтого тела отрицательно влияет на развитие и оплодотворение яйцеклеток. В этой ситуации обратная реакция выделения гипофизом ЛГ на действие эстрогенов, хотя и позитивна, но может быть не--*

__36_

достаточна для овуляции всех вызванных к росту фолликулов.. Одновременно нельзя исключить возможность преждевременного возрастания концентрации прогестерона, . чему способствует преждевременная овуляция какой-то части индуцированных фолликулов и, соответственно, секреторная активность преждевременно образовавшихся желтых тел. Яйцеклетки этих фолликулов досрочно проникают в матку и, вследствие физиологической неподготовленности маточной среды подвергнутся процессу перерождения. Ситуация хорошо прослеживается на кривой, отражающей смену падения концентрации прогестерона в день 0 его подъемом вдень 1.

Эстрадпол секретирующая: функция - индуцированных фолликулов, как было указано, предполагает более высокую концентрацию эстрадиола, чем при спонтанной течке. В дни 0; I; 3 средине значения были 22,0; 20,0; 23,0 пг/мл (Р< 0,05), соответственно, в то время как при спонтанном цикле - 21,0; 17,1; 19,6 пг/мл (Р< 0,05). Такая разница не оказывает отрицательного влияния на показатели суперовуляторной реакции. Однако, существенно высокие концентрации эстрадиола предполагают негативные показатели.' Это возможно в случае, когда под действие гонадотропных препаратов попадает какая-то часть фолликулов начинающейся «второй , волны» популяции, эстрогенная инкреция. которых суммарна к инкреции фолликулов от «первой волны» создает чрезмерный эстрогенный фон;.

Сохранению, высокой постовуляторной концентрации -эстрадиола будет способствовать и некоторое число фолликулов, остающихся неовулировавшими либо запаздывание их овуляции, а остаточный эстрогенный. фон отрицательно сказывается на процессе оплодотворения и развития эмбрионов. ~ .

Нами кратко изложена лишь часть возможных вариантов гормональных сдвигов, ваимообусловленных с предовуляторным состоянием, индуцированных к росту фолликулов, предполагающих негативные результаты. Однако, существенно важным моментом является то, что все варианты предовуляторного гормонального дисбаланса сведутся в конечном счете к отклонению в сторону увеличения или уменьшения продолжительности интервала между-инъекцией простагландина и пиком лютеинизи-рующего гормона при возможной, одновременно, его общей недостаточности в количественном отношении.: Только это может быть непосредственной причиной трех важнейших нарушений ■ в ■ ггроцессе множественной овуляции: 1. преждевременные или поздние овуляции; 2. отсутствие овуляций большего или меньшего числа фолли-

_37_

купов; 3. Сочетание двух первых нарушении. Указанные нарушения уже в свою очередь обусловливают постовуляторные сдвиги в гормональном балансе, ответственном за оплодотворение яйцеклеток и развитие эмбрионов. Поэтому, вполне закономерно, что введение синтетического аналога гонадолиберина в режимы гормонального индуцирования суперовуляции приводит к стабилизации позитивных результатов за счет оптимальной унификации срока выброса Л Г. Справедливость положения доказывают эволюции концентраций наиболее информативных гормонов — прогестерона, и эстрадиола, отраженных графически, которые качественно идентичны эволюциям, протекающим во время спонтанной овуляции (рис. 6-Г).

Таким образом, введением аналогов гонадолиберина или ЛГ в схемы обработок можно аргументировать целесообразность двухкратного осеменения коров-доноров через 48 и ¿0 часов после инъекции простагландина. При рекомендуемых параметрах учитывается: жизнеспособность яйцеклеток— 8 часов, живучесть спермиев в половых путях — 24 часа, длительность продвижения их к месту оплодотворения — около 12 часов. Благодаря этим факторам, возможные незначительные сдвиги выброса пика ЛГ и связанные с этим изменения продолжительности овуляторных процессов в небольших временных границах существенного негативного влияния не окажут;

233. Унификация методов синхронизации охоты н суперовуляции ■ ■

Инъекции прогестерона или лрогестагеиов, вводимы* в режимы обработок с целью индуцирования охоты, существенно повышают точность ее синхронного проявления у обработанных животных. Вероятно, этому способствует длительный период нмитаци функционирования желтого тела. На этот период блокируется интенсивность интраовариальных процессов. В то же время происходит упорядочивание возможных (даже на минимальном уровне) деструктивных явлений. Таким образом, инъекцию прогестерона можно квалифицировать'как метафилактическое мероприятие. Становится понятным проявление положительного эффекта,', когда при гипофункции яичников у коров в послеотельный период в обработку гонадотропинами ■ предварительно вводят прогестерон. Интеграция прогестерона в обработку. ГСЖК обеспечивает синхронное проявление охоты у коров до 87-100%. Данные были подтверждены в собственных исследованиях по стимулированию половой активности в так называемый анэстральный период у коров герефордской породы. Практически в

неизмененном виде мы перенесли опыт на коров черно-пестрой породы, у которых не было выявлено клинически выраженных признаков, патологии: С целью синхронизации применили 3 схемы обработки: 1-й группе в основание уха под кожу вводили имплантанты,' содержащие 6 мг норгестомета, а за 48 ч, до их извлечения — ГСЖК и акипрост в дозе 900 МЕ и 500 мкг, соответственно. Второй группе проводили то же самое мероприятие, но без ГСЖК. В контроле охоту индуцировали при хорошо выраженном желтом теле 500 мкганипроста. . . . .

Лучшие показатели оказались в 1-й группе коров, где воздействие оказывали комплексно: норгестомет, ГСЖК, анипрост.

Предполагая расширить положительные свойства комплекса препаратов, мы. ввели в обработку сурфагон. Эффективность поверили на 2-х группах коров: 1-й трупе перед введением имплантанта с норгестаметом инъецировали 10,0 мл сурфагона. За 48 часов до удаления имплантанта — ГСЖК и анипрост (900 МЕ и 500 мкг). Перед осеменением в индуцированную окоту проводили еще одну инъекцию сурфагона. . Вторую труппу обработали также, как первую труппу в первом опыте. Введение сурфагона дало последовательное улучшение показателей (табл; 7). Учитывая, что обработки в группах проводили фронтально, эффект первой инъекции сурфагона можно* объяснить овуляцией или лютеинизацней фолликула, который неизбежно присутствовал у какого-то числа животных, а вторая инъекция сурфагона, проведенная при осеменении, опосредовано стимулировала овуляцию в оптимальные сроки. ;

■ ■ . .. - Таблица 7.

... Результаты синхронизации охоты с введением; -

в режим обработки погестерона и сурфагона .

ПОКАЗАТЕЛЬ Группа

1 //

я К п • Я. ■

Обработано животных, п 20 100,0 20 100,0

Пришли в охоту, • - 20 100,0 •16 80,0 '

- в том числе через:

48 часов 18 90,0 15 75,0

■■■■■■ > 72 часа 2 10,0 1 5.0

Не пришли в охоту ■ . . ■ . ...... 4 ■ 20.0 ■

Опяодотворяемость от пер* вого осеменения, % 67,0 : 55,0

Индекс осеменения 1,9 . . - 2,0

_ 39_:__

. Учитывая высокие конечные показатели, доказывающие качественный, с физиологической точки зрение, процесс индуцированной охоты (а, следовательно, и овуляции), мы предположили возможность за счет увеличения дозы гонадотропнна достигнуть приемлемых показателей суперовуляции. Предположение проверили на 2-х группах коров, которых обработали, как в предыдущем опыте. Однако в обеих группах вместо ГСЖК ввели однократно ФСГ-супер (с пролангаггором) в дозе 50 ед. (A.C.). Полученные результаты (табл. 8) свидетельствуют о принципиальной возможности получать предлагаемым способом положительные показатели индуцированой суперовуляции. Это имеет большое практическое значение, т.к. совершенно очевидно упрощает и унифицирует систему гормональных воздействий по сравнению с рекомендуемыми в инструкциях.

Таблица 8.

Результаты унифицированной экспресс-обработки с целью индуцирования суперовуляцни

ПОКАЗАТЕЛЬ Группа ■

! и

Обработано коров, п 15 14

Реагировало суперовуляцией, п-% П -73,3% 9-64,3%

Число неовулироеавишх фолликулов на положительного донора, М±т 1,1 ±0,6 1,9±0,3

Число овуляций на положительного донора, М±т 8,9*1,7 10,1 ±2,4

Получено зародышей на положительного донора, М±т 5,7±0,9 7,Ott 1.5

В том числе:

- нормальных 3,9±0,4 3,5±0,9

- дегенерированных ■■ 1,1±0.1 1,9±0,1

- неоплодотворённых яйцеклеток 0,1±0,1 1,б±0,4

Примечание: Р<0,01 .

В продолжение исследований по многократному вызыванию суперовуляции у коров по вышеописанной методике мы провели ограниченный эксперимент на 9-ти головах коров. Отличие настоящего эксперимента заключалось в том, что повторное индуцирование суперовуляцин мы проводили практически сразу же после извлечения эмбрионов. При этом считали правомочным принимать дань начала обработки за «день-10», принимая при этом за «день-0» — день индуцированной охоты во время' предшествующей суперовуляцни. В результате получили не очень высокие, но вполне приемлемые показатели (табл. 9).

Таблица

Двукратное индуцирование суперовуляции ускоренным методом (п=9).

Показатель Желтые тела. Зародыши Нормальные эмбрионы Дегенериро-ttiuune ).м- брионы Неоплодо-ячорённиг яйцеклетка

1 обработка. Mim б,4±0,9 3,1 ±0.6 2,6±0.8 0,4±0,4 0,1±0,3

2 обработка. М±т 7,01:1,3 3,0±1,5 2,0±0,5 0,5±0,1 0,5±0,1

Всего за две обработки 13,3±1,1 . 6.1±1,0 4,5±0,4 t,0±0,2 0,6±0.1

Примечание: Р<0,01.

В том же режиме мы провели третье и четвертое индуцирование суперовуляции, которые, однако, не привели к сколько-нибудь приемлемым показателям. Полученную ситуацию можно связать с тем, что столь плотный режим обработок истощает резервы первичных фолликулов и дальнейшее увеличение числа обработок в столь плотном режиме невозможно.

3. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Факторы, влияющие на показатели гормональных воздействий при проведении биотехнических мероприятий по корректировке половой функции можно разделить на 2-е группы: органические и индуцированные. К первой труппе следует отнести: породу, возраст; наследственность животных. Данные факторы обусловливают специфику реакции организма на гормональные средства. Во всех этих случаях низкие или высокие по эффективности показатели (при прочих равных условиях) объективно запрограммированы. Подобного мнения придерживаются и другие исследователи (J. Säumende, 1980, 1984, 1985). Ко второй группе следует отнести так называемые сим--птоматическне или игщуцированные факторы. Их можно разграничить.на две подгруппы: А. - связанные с патологией репродуктивной системы: это - нарушенный послеродовой период, различные виды оваркопатологий, эндометриты, другие виды патологий; Б. — факторы внешней среды: это — время года, стрессовые воздействия, лактация, уровень удоя, технологии содержания, кормления, эксплуатации н др.

При детальном рассмотрении и анализе факторов, негативно влияющих на показатели гормональных воздействий, в первую очередь отмечается их разнообразие, но при этом прослеживается общая закономерность: все они обусловливают изменения за пределы границ нормы уровней (и соотношения) половых гормонов. А через механизм гормонального дисбаланса реализуется, все многообразие свойств класси-

фицированных-факторов; В конечном счёте это отражается, главным образом, иа варьировании сроков начала и продолжительности индуцированной охоты. Отклонения в сторону увеличения или уменьшения оптимальных сроков начала охоты, равного 48 ч. (после инъекции простагландина) и ее продолжительности, равной 24 ч. приведут к снижению: I. Результативности осеменения в индуцированную охоту; 2, Эффективности использования коров в качестве доноров; У. Увеличению продолжительности восстановительного периода после использования коровы в качестве донора.

**

Центральным явлением гормонального дисбаланса является нарушение временных и количественных параметров пика ЛГ, которые в свою очередь иннцируют постовуляторные сдвиги гормонального фона, ответственного за оплодотворение яйцеклеток и развитие эмбрионов. Поэтому, вполне закономерно, что введение синтетического аналога гонадолиберииа приводит к стабилизации позитивных результатов за счет оптимальной унификации срока выброса ЛГ.

■ , Необходимо разграничение показаний к применению препаратов гонадолиберииа: ]. Дня улучшения качества индуцированной охоты с целью наиболее плодотворного искусственного осеменения; 2. для достижения качественного индуцированного цикла при подготовке доноров и реципиентов. В первом случае введение препарата в охоту перед осеменением корректирует выброс ЛГ, что создает адекватные условия для оплодотворения. Во втором случае, введение препарата через 48 часов после инъекции простагландина, за счет корректировки срока выброса ЛГ, стабилизирует время прихода животных в охоту, что на момент начала введения гормональных препаратов'для вызывания суперовуляции (коровы-доноры) положительно влияет на функциональное качество желтого тела в индуцированный цикл. -

Следует констатировать, что определением концентрации стероидных гормонов в крови коров возможно: ■■ ■ . ' -—правильно оценить овариальную активность яичников после родов; — уточнять н дополнять данные клинического контроля перед синхронизацией охоггы и индуцированием суперовуляции;

—проводить осеменение коров в физиологически обоснованном режиме; —осуществлять отбор коров для использования в качестве доноров.

_42_;_'

Собственными исследованиями мы предполагаем теоретическую и методическую основу реально н в соответствии с экономической целесообразностью управлять процессом воспроизводства в скотоводстве. По нашему убеждению, это позволит в значительной мере сократить негативные показатели проводимых биотехнических мероприятий. На основе полученных знаний показана возможность применения экспресс методов обработок при одновременной их унификации (в определенной степени), т.е. в одной и той же схеме обработок, изменяя только дозировку гонадотропина, возможно добиться эффективных показателей: .устранения вероятных нарушений, синхронизации охоты с целью осеменения, индуцирования суперовуляции, в т.ч. и многократного. Совершенно очевидно, что это позволит, как увеличить производительность трудз, так и удешевить проведение биотехнических мероприятий. -

ВЫВОДЫ

1, Варьирование продолжительности интервала между инъекцией простаглан-дина и началом индуцированной охоты является основным фактором, негативно влияющим на результаты синхронизации. Степень варьирования зависит от морфо* функционального состояния < яичников, которое определяется возрастом растущего межэструал ьного фолликула и реакционной способностью желтого тела.

2. Введение в схему обработок по синхронизаци охоты гонадотропинов унифицирует овариальные процессы и инициирует оптимальный срок начала индуцированной охоты, равный 48 часам, , ■ -

Многочисленные варианты .предовуляторного гормонального дисбаланса, обусловливающие нарушение процесса овуляции приводят к изменению пиковой концентрации ЛГ во временных и количественных параметрах. Введение в режимы обработок аналогов гонадолиберина способствует оптимизации параметров пика ЛГ, что стабилизирует позитивные показатели индуцированной овуляторной реакции. .

.4. Анализ экспериментальных данных и данных литературы приводит к выводу, что эффективность гормонального индуцирования, как моно-, так и суперовуля-цни в первую очередь зависит от генетической предрасположенности, конкретное выражение которой проявляется в размерах популяции антральных фолликулов на протяжении цикла, которые имеют широкие пределы колебаний как у разных, так и у одного и того же животного. Это и другие положения позволяют считать сушест-

вующие дозы биорегуляторов вполне приемлемыми, в широкая вариабельность су-перовуляторной реакции вполне закономерна.

5. Стимулирование восстановления нормальной циклической активности у лактирутощих коров-доноров после извлечения эмбрионов (в дополнение к послеродовой овариостимуляцин) позволяет получать эмбрионы в условиях производства за период времени не превышающий экономически обоснованный.

6. Повышенный суммарный показатель числа нормальных эмбрионов за несколько извлечений предполагает целесообразность многократного исследования коров в качестве доноров эмбрионов.

7. При двухкратном использовании коровы в качестве донора повторное индуцирование суперовуляции можно начинать через 3-4 дня после первого извлечения эмбрионов. 1 . '

8. Индуцирование суперовуляции возможно проводить однократной инъекцией гипофнзарного гонадотропина при условни его введения с пролангатором, В качестве пролангатора можно использовать тетравит.

9. Определением концентрации прогестерона возможно и следует дифференцировать овариалъную патологию после родов и уточнять данные клинического контроля перед стимулированием половой функци. 1

Ю.Сгимуляцня послеродового анестрального состояния биорегуляторами в комплексе с УВЧ-воздействием при вероятных отклонениях в функциональной деятельности яичников н эндометрия значительно сокращают сервис-период. С равной долей успеха его можно применять на коровах молочного и мясного направлений продуктивности.

11. Проблемных коров после нормализации фолликулогенеза можно эффективно использовать в качестве доноров эмбрионов.

12. Чередование разных по продолжительности циклов — основной фактор, снижающий возможности использования коров в качестве доноров после устранения различных форм овариопатологий.

13. Взаимонаправленность патогенетического процесса матка • яичники диктует необходимость комплексных методов лечения н профилактики.

14. Комплексная система профилактических мероприятий с УВЧ-воздействием возможных нарушений репродуктивной системы позволяет улучшить показатели эм-бриопродуктнвности. ■■■ ,

рекомендации для внедрения

1. С целью профилактики и улучшения общепринятых показателей плодовитости коровам после отела следует проводить коррекцию функциональной активности яичников введением комплекса препаратов: сурфагон, прогестерон,, простаглан-дин в общепринятых дозировках. В индуцированный таким образом цикл можно вызывать суперовуляцию. .

2. .. Для устранения гипофункции яичников у коров при уровне концентрации прогестерона в крови более 0,5 нг/мл рекомендуется использовать ГСЖК (1200 ИЕ), либо фоллитропин (двукратно по 300 ЕД) в сочетании с простагландином. При снижении содержания гормона ниже 0,5 иг/мл следует проводить комплексное лечение животных гестагенами, ГСЖК и ПГ, < : ■ .

3. Для достижения адекватной реакции при нормализации воспроизводительной функции в схеме обработок животных следует использовать эстуфалан или клат-рапростин в дозе 500 мкг по клопростенолу, не изменяя схему введения остальных составляющих при комплексном использовании препарата с другими гормональными средствами. .

4. ., . Для снижения трудоёмкости при проведении обработок с целью индуцирования суперовуляции гипофизарный гонадотропин следует вводить однократно с пролонгатором;' в качестве пролонгатора использовать тетравит.

5. . ■ ■ При проведении мероприятий комплексом гестагенов, гонадотропинов и ПГ для снижения трудоемкости 1%-й раствор прогестерона можно вводить в виде однократной инъекции под кожу. Необходимым условием при этом является увеличение терапевтической дозы в 1,25-1,5раза. • • .

Список основных научных работ, опубликованных по материалам диссертации

1. Ширяев В.М. Эффективность вызывания суперовуляции в зависимости от вида гонадотропиого препарата // Резервы увеличения производства сельскохозяйственной продукции, -Оренбург. -1990. -С. 12.

2. Хнлькевич С.Н., Шириев В.М., Евстигнеева Н.М. Влияние ФСГ-п, гонадолибе-рина и лютеиниэирукнцего гормона на качество эмбрионов // Зоотехния. -1990.

. -№7. -С.72-73.

3. Сергеев Н.И., Хклькевич С.Н., Шириев В.М. Влияние некоторых факторов на прижнвляемость эмбрионов // Молочное и мясное скотоводство. -1991. I. -С.28-29. *

4. Лебедев В.И., Хклькевич С.Н., Шириев В.М. Применение гипофизарных гонадо-тропинов для вызывания сулеровуляцнн у коров-доноров // Проблемы развития биотехнологии в животноводстве. -Дубровнцы. -1990. -С.61-62.

5. Хнлькевич С.Н., Шириев В.М. Многократное использование коров-доноров эмбрионов // Достижения и перспективы развития биотехнологии. -Львов.—1990.

-С.68. ' . ..

6. Хнлькевич С.Н., Шириев В.М. Синхронизация.охоты у тСлок-реципиентов // Достижения и перспективы развития биотехнологии. -Львов. -1990. -С.39-40.'

7. Сергеев Н.И., Хнлькевич С.Н., Шириев В.М. Извлечение зародышей нехирургическим методом//Молочное и мясное скотоводство.-1990.-№5.-С32-33

8. Шириев В.М. Эффективность применения ФСГ-п у тёлок и коров разного возраста // Вопросы интенсификации животноводства. Дубровицы. -1991, -С.75-77.

9. Хнлькевич С.Н., Шириев В.М., Алибаев P.M. Влияние возраста коров на эффективность гормональной обработки и приживляемость эмбрионов. Биотехнологические приёмы в технологии трансплантации эмбрионов // Бюл. науч. работ ВИЖ.-Дубровицы.-1991.-Вып. 104.-С.36-38.

10. Хнлькевич С.Н., Тяпугин Е.А., Самоделкин А.Г., Шириев В.М. Синхронизация половых циклов коров в программе трансплантации эмбрионов // Зоотехния.

-1993.-№4.-С.24-25. ,

11. Шириев В.М.. Мишуковская Г.С. Способы возобновления активности яичников у коров при их гипофункции //Научные труды ВНИНМС.-1994. -С.

12.: Шириев В.М., Мишуковская Г,С. Раннее прогнозирование эмбриопересадок по концентрации половых гормонов в крови реципиентов // Научные труды ВНИ-ИМС.-I994.-C. 64-65

13. Шириев В.М., Мишуковская Г.С. Биотехнология воспроизводства крупного рогатого скота И Основные направления системы ведения агропромышленного производства в Республике Башкортостан.-Уфа.-1994.-С. 37-39

14. Шириев В.М., Мишуковская Г.С. Лечение эндометритов у крупного рогатого скота// Проблемы зоотехнии и ветеринарной медицины. -Уфа.-1996.-С. 62-63

15. Шириев В.М., Козелов Л.И., Мишуковская Г.С. Дифференцированный подход в диагностике и лечении гипофункции яичников у коров // Современные проблемы ветеринарной медицины. -Уфа, -1996.-С. 65-67.

16. Хилькевич С.Н., Тяпугин Е.А., Самоделкин А.Г., Шириев В.М, Гормональный профиль у коров при суперовуляции И Доклады РЛСХН, -1995. -№3. -С. 38-39.

17. Шириев В.М., Мишуковская Г.С. Раннее прогнозирование результатов гормонального воздействия на репродуктивную функцию коров и тЬгак. Актуальные вопросы прикладной биохимии и биотехнологии // Материалы конференции биохимиков Урала и Западной Сибири. -Уфа.-1998. -С. 126-128,

18. Шириев В.М., Самоделкин А.Г., Тяпугин Е.А., Лопарев В.И, Стимулирование * овариальной активности у коров в послеродовой период//Зоотехния.—1999.

-№10. -С.27-28.

19. Шириев В.М, Самоделкин А.Г., Лопарев В.И. Опыт по воспроизводству «про-. блемных коров» И Ветеринария.-1999. -Kai 1. -С. 35-37.

20. Шириев В.М., Самоделкин А.Г., Лопарев В.И, Влияние климатических факторов на показатели суперовуляции // Молочное и мясное скотоводство. -2000. -№1.

21. Шириев В.М, Получение двоен с использованием эмбриотрансплантацин от ко, ров специализированных мясных пород. Рекомендации. -Уфа. -1999. -2IC.

-С.13-15,

Заказ № 801. Тираж 100 экз. Отпечатано а Щарбинской типографии 113623, Москва, ул. Типографская, д. 10