Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Филогения и таксономический статус близкородственных видов кровососущих комаров р.р. Anopheles Meigen и Culex Linnaeus фауны России и сопредельных территорий

ВАК РФ 03.00.08, Зоология

Автореферат диссертации по теме "Филогения и таксономический статус близкородственных видов кровососущих комаров р.р. Anopheles Meigen и Culex Linnaeus фауны России и сопредельных территорий"

На правах рукописи

Сибатаев Ануарбек Каримович

Филогения и таксономический статус близкородственных видов кровососущих комаров р.р Anopheles Meigen и Culex Linnaeus фауны России и сопредельных территорий

Специальность: 03.00.08 - зоология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

ТОМСК-2007

Работа выполнена в НИИ биологии и биофизики ГОУ ВПО «Томский государственный университет»

Научный консультант

доктор биологических наук, профессор Стегний Владимир Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Бабенко Андрей Сергеевич, кафедра защиты растений, Томский государственный университет

доктор биологических наук, профессор Бугров Александр Геннадиевич, факультет естественных наук, Новосибирский государственный университет

доктор биологических наук, Комарова Людмила Алексеевна, кафедра биологии и химии, Бийский педагогический государственный университет

Ведущая организация:

Институт экологии растений и животных УрО РАН

Защита состоится «~> ноября 2007 г в 14 00 часов на заседании диссертационного совета Д 212 267 09 в ГОУ ВПО «Томский государственный университет» по адресу 634050, г Томск, пр Ленина 36

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Томского государственного университета

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

В П Середина

Актуальность темы Кровососущие комары семейства CuJwidae являются одной из наиболее интенсивно изучаемых групп насекомых в связи с их эпидемиологической значимостью как переносчиков малярии, желтой лихорадки, лихорадки Денге, энцефалитов и других трансмиссивных болезней

На примере многих видовых комплексов показано, что даже близкородственные виды кровососущих комаров обладают различной способностью к переносу поражающих человека трансмиссивных болезней, различной антропофилыюстью, различной широтой ареала и численностью, что придает им разную эпидемическую значимость Точная идентификация видов является важной как для фундаментальных, так и для прикладных исследований Это особенно необходимо для переносчиков заболеваний при проведении широких кампаний по регуляции их численности Проблемы в классической таксономии близкородственных видов заключаются не только в сильном морфологическом сходстве между ними, но также и в выраженной морфологической изменчивости в пределах вида

Решение сложных таксономических ситуаций требует комплексного подхода, который включает морфологические, молекулярные, цитогенетические и экологические исследования Известно, что виды-двойники комплексов часто отличаются по способности переносить опасные болезни, поэтому идентификация видов этих комплексов важна для прогнозирования распространения заболеваний

Особый интерес представляют виды-двойники малярийных комаров, объединяемых в комплекс "Anopheles macultpenms" Этот комплекс занимает огромную территорию Голарктики и является интересным объектом для решения вопросов филогенеза, видообразования и таксономии (Kitzmiller et al, 1967, Стегний, 1991) Комары комплекса «Culex pipiens» также представляют большой научный и практический интерес Высокая экологическая пластичность, сложная таксономическая структура и характер взаимоотношений между членами комплекса привлекают постоянное внимание исследователей (Laven, 1967, Виноградова, 1997)

Несмотря на достаточно хорошую морфо-экологическую (Беклемишев, 1944, Мончадский, 1951) и цитогенетическую изученность (Fnzzi, 1947, 1953, Kitzmilleret al, 1967, Стегний, и др , 1976, Стегний, 1979), виды комплекса "macultpenms" можно идентифицировать в основном по структуре политенных хромосом или морфологии яиц, а также по молекулярным данным, что затрудняет решение научных и практических вопросов Виды и формы комплекса Culex ptptens трудно идентифицировать по структуре политенных хромосом их диагностика возможна только молекулярными методами По личинкам С torrentium и С р pipiens не различимы, определение ведется только по самцам, диагностическое значение имеют особенности строения гипопигия (Service, 1968, Виноградова, 1997)

Определение видов-двойников должно основываться на комплексе признаков морфологических, экологических, этологических, генетических, что предполагает необходимость комплексных исследований Комплексный подход особенно актуален применительно к близкородственным видам для оценки эколого-генетических принципов адаптации популяций и видов к условиям обитания Обычная идентификация ввдов на основе фенотипа (морфотипа) является самым дешевым, быстрым и простым методом (White, 1977)

Цель работы Анализ филогенеза и характера морфо — физиологической адаптации и эволюции видов на основе исследования морфологической,, цитогенетической и молекулярно-генетической дифференциации близкородственных видов комплексов «Anopheles macuhpenmsn и nCulex pipiens» !

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи

1 Изучить фенотипическую изменчивость в природных популяциях кровососущих комаров близкородственных видов комплексов «Anopheles macultpenms» и «Culex pipiens»

2 Провести морфологическое описание близкородственных видов и составить определительные таблицы

3 Выявить морфологические признаки для идентификации видов в онтогенезе в соответствии с хромосомной структурой видов

4 Выяснить молекулярно-генетическую дифференциацию видовых популяций в комплексах «Anopheles macultpenms» и «Culex ptpiens» с помощью метода таксонопринта путем сравнительного анализа повторов геномной ДНК

5 Осуществить поиск молекулярно - генетических маркеров для идентификации представителей комплекса «Culex pipiens» и оценки их внутри - и межвидовой изменчивости

6 Выявить молекулярно-генетическую внутри- и межвидовую изменчивость и дивергенцию у членов комплекса «Culex pipiens»

7 Выяснить адаптационные признаки по физиологическим параметрам у малярийных комаров

8 Провести анализ филогенетических связей в комплексе «Anopheles macultpenms» на основе хромосомных, молекулярных и морфологических показателей

Научная новизна. Выявлена фенотипическая изменчивость в географически удаленных популяциях кровососущих комаров рр Anopheles и Culex Впервые показано, что фенотипическая изменчивость коррелирует со степенью хромосомной изменчивости Впервые проведено морфологическое описание комаров An beklemtshevi и An artemievt, выявленных ранее цитогенетическими и молекулярными методами Проведен сравнительный морфологический анализ видов-двойников р Anopheles

По результатам анализа спектров повторяющихся последовательностей ДНК у кровососущих комаров получены новые данные о межвидовой и межродовой изменчивости геномов Anopheles, Culex по составу семейств повторяющихся ДНК

Выявлены различия в чувствительности к патогену Bti у личинок комаров An messeae и An beklemtshevi с различными фенотипическими, физиологическими, весовыми и размерными параметрами и показано, что чувствительность комаров к патогену существенно различается в зависимости от вариаций этих параметров Изучена генетическая детерминация физиологического параметра - скорости поглощения пищи личинками Показано, что особи с разными хромосомными вариантами имеют различия по этим физиологическим параметрам

Впервые проведенное изучение ряда близкородственных видов комплекса "macultpenms" по многим морфологическим признакам позволило провести реконструкцию филогенеза и установить соответствие характера эволюции морфологических признаков с ранее полученными данными по хромосомному и гибридологическому анализу (Стегний, 1991)

Практическая значимость Впервые уточнен видовой состав малярийных комаров России, Средней Азии и Казахстана Составлены определительные таблицы на различных стадиях развития малярийных комаров в азиатской части России и сопредельных территориях, что важно для практических энтомологов Впервые были найдены видоспецифичные RAPD - маркеры для идентификации Culex torrentium Определена нуклеотидная последовательность RAPD - праймеров Показано, что

ПЦР с использованием SCAR - праймеров является простым, быстрым и надежным методом идентификации С torrentmm Полученные данные по пищевому поведению личинок необходимы при обработке биопрепаратами с целью регулирования численности комаров Полученные результаты по фенотипической изменчивости дают информацию для различных биомониторинговых и других экологических исследований

Апробация результатов. Материалы работы представлены на конференции «Проблемы экологии Томской области», Томск, апрель 1992 г, на региональной научно-практической конференции (Томск, 1994), на I съезде ВОГиС, декабрь, 1994, г Саратов, на 10 th European SOVE Meeting, (Strasbourg, 1996), на XX International Congress of Entomology (Firence, Italy, 1996), на I научной конференции Новосибирского отделения Паразитологического общества РАН «Паразиты и паразитарные болезни в Западной Сибири» (Новосибирск 1996), на II En Gebi Conference on bacterial control of agricultural insect pests and vectors of human diseases (Shoresh, Israel, 1996), на I международном симпозиуме «Эволюция жизни на земле» (Томск, 1997), на XI энтомологическом съезде (Санкт-Петербург, 1997), на конференции «Проблемы эволюционной цитогенетики, селекции и интродукции» (Томск, 1997), на VI Всероссийском диптерологическом симпозиуме «Место и роль двукрылых насекомых в экосистемах» (Санкт-Петербург, 1997), на научной конференции «Проблемы энтомологии в России» научной конференции «Биологическое разнообразие животных Сибири» (Томск, 1998), на I Международной конференции «Биоразнообразие и динамика экосистем Северной Евразии» (Новосибирск, 2000), на I, П и Ш Международных конференциях «Проблема вида и видообразование», Томск (2000,2001,2004), на I Международной Школе-семинаре «Кровососущие насекомые - переносчики трансмиссивных заболеваний и проблемы генетической безопасности» (Москва, 2002), на ХП Съезде Русского энтомологического общества (2002), на Ш Съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров, Москва (2004), VII Межрегиональном совещании энтомологов Сибири и Дальнего Востока «Энтомологические исследования в Северной Азии» (Новосибирск, 2006), на I Всероссийском совещании по кровососущим насекомым (Санкт-Петербург, 2006), ХШ съезде Русского энтомологического общества (Краснодар, 2007)

Публикации По теме диссертации опубликовано 48 работы (среди них 19 статей, из которых 17 в рецензируемых журналах, входящих в перечень ВАК)

Положения, выносимые на защиту.

1 Фенотипическая изменчивость характерна доя разных видов кровососущих комаров Большей фенотипической изменчивостью отличаются полиморфные по хромосомному составу виды кровососущих комаров по сравнению с мономорфными видами Флуктуирующая асимметрия количественных признаков малярийных комаров варьирует под действием неблагоприятных факторов (патогеная микрофлора) и зависит от хромосомной структуры популяции

2 В популяциях С р pipiens L 1758,, С р molestus Fors , 1775 и С torrentium Mart, 1924 умеренных широт существует генетическая дифференциация по геномной ДНК В природных популяциях видов комплекса «С pipiens» отсутствуют гибридные формы В зонах симпатрии природных популяций между С р pipiens, С р molestus и С torrentium отсутствует гибридизация Личинки комаров С р pipiens и С torrentium, обитающих совместно в открытых водоемах, имеют большее морфологическое сходство между собой, чем с С р molestus, обитающим в основном в закрытых помещениях

3 У кровососущих комаров комплексов «Ап тасиЬрепть» и «Сргргет» спектры повторяющихся последовательностей ДНК отличаются разнообразием в организации повторов и низким содержанием общих фракций

4 Близкородственные виды комаров комплекса «Ап тасиИреппк» имеют разную степень сходства по морфологическим признакам Виды, находящиеся в одной филетической линии ближе по морфологии, чем в разных линиях Характер эволюции морфологических признаков у видов комплекса «тасикрептя» соответствует филогенетической схеме, предложенной ранее на основе гибридологического и хромосомного анализов

Структура диссертации Диссертация состоит из введения, семи глав, заключения выводов Текст диссертации изложен настраницах и включает 39 таблиц и 90 рисунков Список литературы содержит 441 источников, из которых 258 на иностранном языке

Благодарности Выражаю искреннюю благодарность всем соавторам публикаций, сотрудникам НИИББ ТГУ за помощь и поддержку при выполнении данной работы Особую признательность выражаю научному консультанту проф В Н Стегнию за всестороннюю помощь и поддержку

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1. Современное состояние исследования кровососущих комаров семейства Culicidae

В данной главе приведены сведения о комарах комплексов «Anopheles maculipenms» и «Culex pipiens» Подробно проанализированы публикации, касающиеся изучения таксономического статуса, морфологии и фенотипической изменчивости, экологии, молекулярной и цитогенетической диагностики кровососущих комаров

ГЛАВА 2 Материал и методика исследований

Материалом для морфологического анализа послужили выборки личинок и имаго кровососущих комаров комплексов «maculipenms» и «Culex piptens», собранных в разных частях бывшего СССР Морфологию личинок малярийных комаров изучали параллельно с определением кариотипа Морфометрические измерение личинок проводили с помощью миллиметровой шкалы на МБС-10 Давленые препараты политенных хромосом готовили по лактоацеторсеиновой методике (Кабанова и др , 1972) В основу настоящего исследования положен материал как собранный лично автором в 1988-2005 годах, так и предоставленный коллегами Проанализировано 14957 личинок малярийных комаров и 980 имаго малярийных комаров, 2100 личинок комаров комплекса "Culexpipiens"

Личинок комаров комплекса «Culex pipiens» изучали параллельно с молекулярной идентификацией (Crampton, 1994, Ноу, 2003)

Достоверность частных коэффициентов корреляции определена путем сравнения их с критическим значением при уровне значимости 0,05 Определение уровня значимости для парных коэффициентов осуществлено в пакете Statistica 7 0В данном случае достоверными считали коэффициенты с р<0,05

ГЛАВА 3 Фенотшшческая изменчивость кровососущих комаров

Варьирование морфологических признаков у личинок кровососущих комаров связано с разнообразием экологических условий их местообитаний и генетической изменчивостью Изучение морфологической неоднородности преимагинальных фаз развития комаров имеет важное значение для диагностики видов, поскольку для низших двукрылых характерно наличие многочисленных видов-двойников, плохо различимых по внешним признакам У личинок комаров отмечена обширная вариабельность количественных и качественных морфологических признаков (Беклемишев, 1944, Мончадский, 1951, Маслов, 1967, Пестрякова, 1971, Dahl et al, 1988, Сибатаев, Гордеев, 1993, Гордеев, Сибатаев, 1995, 1996, Бурлак, Сибатаев, 1995, Виноградова, 1997, Бурлак, Сибатаев, 1998, Сибатаев, Бурлак, 2000) В главе рассматривается взаимосвязь фенотипического и генетического полиморфизмов В комплексе «.macuhpenms» самым полиморфным видом является - An messeae, а в комплексе «Сpipiens» - Cpipiens Сравнение этих видов с мономорфными видами позволило определить влияние генетической компоненты на фенотипический полиморфизм

31 Изменчивость фенотипа stripe у личинок малярийных комаров в природных водоемах Изучена частота встречаемости фенотипа stripe (Benedict et al, 1996) у личинок малярийных комаров из природных водоемов Фенотип stripe хорошо заметен невооруженным глазом Проявляется в виде рисунка (полосы, пятен или их комбинации) белого цвета, реже - красного цвета на спинной стороне груди и брюшка Наличие полосы обусловлено отложениями мочевой кислоты в амебоидных клетках жирового тела, сходных с уроцитами Предполагается, что пигмент имеет адаптивное значение, предохраняя окрашенных личинок от избыточной инсоляции

Частота фенотопа stripe (st) в популяциях малярийных комаров довольно значительна В течение 4 лет обследовано свыше 10 тыс личинок малярийных комаров (An messeae, An beklemishevt An macuhpenms, An sinensis) из более чем 30 водоемов Западной Сибири, Среднего Урала, Алтая, Северного Казахстана, Дальнего Востока и Подмосковья Фенотип stripe имеет значительную изменчивость

Доля пигментированных личинок варьировала от 13,5 до 57, 3 % в различных водоемах и увеличивалась на юг и запад В одновременных выборках с участков одного водоема различий в концентрации пигментированных особей не обнаружено В разных водоемах одного местообитания частота окрашенных особей достоверно варьировала По межсезонной динамике частоты фенотипа stripe у личинок малярийных комаров водоемы делились на "стабильные" и "лабильные" 3 2 Изменчивость количественных признаков личинок

Для оценки внутри- и межпопуляционной фенотипической изменчивости использовали один из самых вариабельных морфологических признаков - количество зубцов гребней стигмальной пластинки (Мончадский, 1951) Личинки малярийных комаров 4-го возраста имеют на каждом из двух гребней по 5 - 11 больших зубцов, между которыми помещается от 0 до 11 более мелких Суммы зубцов на правом и левом гребнях одной и той же личинки могут не совпадать (явление асимметрии, которое демонстрирует вариативность выражения признака в ходе онтогенеза) В связи с этим подсчитывало«, количество зубцов на обоих гребнях

Исследование проводили на выборках личинок малярийных комаров из Средней Азии и Сибири Число зубцов было просчитано у 785 личинок Ли beklemishevt и 3490 личинок An messeae

При сравнительном анализе всех популяций (г. Томск, пос. Тегульдет, пос. Киреевск и Коларово) двух видов выяснилось, что количество зубцов на гребне у Лп.Ьек1епй.->ке\ч выше, чем у Ап.тезяеае (Рисунок 1). Анализ этого признака по полу показывает, что количество зубцов на гребне самок больше у обоих видов.

Сравнение количества больших и малых зубцов стигмальной пластинки личинок выявило, что во всех популяциях больше зубцов у особей с хромосомной инверсией 2Коо, чем у личинок с инверсией 2Иц (Рисунок 2). Сравнительный анализ личинок из разных местообитаний показал, что число малых зубцов закономерно увеличивается в направлении с юга на север (Сибатаев, Гордеев, 1996; Сибатаев, Бурлак, 1996). 53,0

52,5

ш 52,0 о.

>, 51,5

(О

§ 51,0

о ф

5 50,5 с

° 50,0 49,5 49,0

Рисунок 1 - Количество больших и малых зубцов гребней стигмальной пластинки 0- самцы Ап.Ьек1ет1з11ег1, 1 - самки ^и.йеЛг/етиАт', 2- самцы Лн./медаеяе, 3 - самки Ап.теззеае. Указан 95% доверительный интервал.

58 |56

1.54

1 52

§50 §

48 46

т вйя

■ ¡И~ ■

2гаэ

2Я00

2Я01

о Ряц1

- В Ряц2 -13 РядЗ

- В Ряд4

2НЛЛ

Рисунок 2 - Количество зубцов гребней стигмальной пластинки Ряд 1 - г. Томок, ряд 2 - пос. Тегульдет, ряд 3 - пос. Коларово, ряд 4 - пос. Киреевск. 2Ш> Ап.ЬеЫепшЬ™, 211ооДЯо1,2Яц - Ап. теээеае. Указан 95 % доверительный интервал

В Киргизии и на юге Казахстана среднее число зубцов не превышает 33,50, в пос Науалы возрастает до 33,73 и в пос Коларово достигает 36,83 (р < 0,001)

Изменчивость морфологических признаков видов комплекса Ср/рге/и В изученных популяциях представителей комплекса «Сргргет» в искусственных открытых водоемах чаще встречаются комары вида СкагепЬит и иногда Сррщет В искусственных закрытых водоемах со 100% частотой встречается комар Срщепз то1е$1их Многие исследователи, изучающие виды этого комплекса, отмечают, что большинство морфологических различий между ними носит количественный характер, что для идентификации в симпатрических популяциях не всегда удобно

Hh ч Ь 1 г

X { 1 ■ .1",»' }}} ? { { ! !

■I

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 11 12 13 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 0 - mol х tor, 1-И-molestos, S-30-torrentium,31 -culex

Рисунок 3 - Сифональный индекс личинок 1-13 - выборки из подвальных помещений г Томска, 20 - пос Белоусово Томской области (ТО), 21, 27-30 -Керамический завод, 22 , 23, 26 - пос Белоусово, 31 - г Томск (открытый водоем), 24 - пос Аксаковка (Казахстан), 25 - г Алматы (Казахстан) Указан 95 % доверительный интервал_

о г-"

с

я Ш

-8-о

о

I

I

mol х tor

molestus

torre ntium

pipíe ns

Рисунок 4 - Сифональный индекс личинок комаров по видам и подвидам mol х tor- гибридыF1 С р molestusх S3 С torrentium Указан 95 % доверительный интервал

Отмечено, что величина еифонального индекса косвенно связана с добыванием пищи Зубцы ментума связаны непосредственно с пищевым поведением личинок Морфологические структуры, имеющие большую функциональную нагрузку, характеризуют дивергенцию популяций (Ивницкий и др, 2006) Исследование еифонального индекса у личинок комаров выявило различие между выборками (Рисунок 3) Наименьший сифональный индекс оказался у гибридов комаров (выборка № 0, Рисунок 3) Наибольший сифональный индекс оказался у личинок комаров Ср pipiens и С torrentium

При объединении и сравнении еифонального индекса личинок по видам и группам выявлены интересные результаты (Рисунок 4) Дисперсионный анализ по данному признаку показал четкие различия (SS= 288,7, df=3, р<0 01) Использование метода критерия наименьшей значимой разности обнаружило различие по сифоналыюму индексу между выборками (р<0 01)

Важным признаком, позволяющим идентифицировать виды и подвиды комплекса «Culex pipiens», является количество зубцов на ментуме По данному признаку выявляется две группировки ntolestus и torrentium - pipiens

и

18 .....................—..........................................................................

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 11 12 13 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31

О - mol х tor 1 Я molestus Х- 30 - torrentium,31 - culex

Рисунок 5 - Количество зубцов на ментуме у личинок Обозначение в рисунке 3 Указан 95 % доверительный интервал mol х tor - гибриды F1 9 Q С р molestus х 3<3 С torrentium

Наибольшее количество зубцов на ментуме у личинок С р molestus, наименьшее -у С torrentium и Ср pipiens (Рисунок 5) Использование данного признака в сочетании с сифональным индексом позволяет идентифицировать комаров Ср molestus от других видов комплекса Полученные различия по количеству зубцов ментума, по-видимому, связаны с различиями поведенческих актов в добывании пищи личинками комаров комплекса «С pipiens»

25

3 3 Изменчивость морфологии класпет гипопигиев самцов малярийных комаров комплекса Anopheles maculipennis

Исследовано вооружение класпет гипопигиев восьми палеарктических видов малярийных комаров комплекса «Anopheles macuhpennts» An beklemishevi, An messeae, An maculipennis, An melanoon, An artemievi, An sacharovi, An martinius, Anatroparvus Сравнительные данные показывают, что наибольшей изменчивости подвержены дорсальные шипы класпет Изменчивость морфологических признаков класпет весьма значительна в пределах одного вида По всей видимости, в процессе видообразования, у видов - двойников комплекса «maculipennis» не происходило значительной дивергенции по данному признаку

Таким образом, анализ изменчивости морфологических признаков на разных стадиях развития позволяет сделать предположение, что наличие внутривидовых группировок в популяциях полиморфных видов Сpipiens и An messeae повышает экологическую пластичность этих популяций Полиморфные виды комаров с различными адаптивными комплексами сосуществуют в условиях динамического равновесия и успешно конкурируют с другими видами

Глава 4 Морфологии малярийных комаров комплекса Anopheles mxicuhpennis на территории России

Подробный морфологический анализ, сопровождаемый кариотипическими и молекулярными данными, позволил оценить и выявить ряд морфологических показателей для идентификации видов-двойников в комплексе An maculipennis Представлены морфологические описания видов, открытых на основе цитогенетических и молекулярных исследований (Стегний, Кабанова, 1976, Гордеев и др, 2005) В данной главе дается описание представителей комплекса "maculipennis" и определительные таблицы для различных стадий развития

4.1 Anopheles beklemishevi Stegmy and Kabanova, 1976

Яйца. Рисунок экзохориона яиц An beklemishevi схож с рисунком An maculipennis На поверхности, ближе к концам, имеются две темные поперечные полосы, более широкие у яиц Anbeklemishevi (Стегний, Кабанова, 1976) Воздушные камеры хорошо развиты, поверхность межреберной перепонки морщинистая

Личинка IV стадии Внутренние волоски наличника 2, прикрепляющиеся к бугоркам, сближены своими основаниями Эти волоски в основном бывают в следующих вариациях простых или разделяющихся на вершине на 2 ветки Наружные волоски наличника 3 дихотомически разветвлены

Три срединных волоска переднегруди включают внутренний (1) - короткий, который может ветвиться на конце, средний (2) - длинный перистый, наружный (3) - короткий простой Переднегрудная плевральная группа состоит из длинных простых волосков 9, 10, 12, и короткого простого волоска 11 Волоски 10 и 12 одинаковой длины и длиннее волоска 9 Среднегрудная плевральная группа образована двумя длинными простыми волосками 9, 10 и короткими волосками 11 и 12 Заднегрудная плевральная группа включает длинные простые волоски 9 и 10, короткий простой волосок 11 Волосок 12 короткий, простой или разделяющийся на две ветви Заднегрудной волосок 6 простой, иногда раздвоенный

Основными отличиями в морфологии личинок An beklemishevi от других членов комплекса An maculipennis являются следующие 1 Внутренние волоски наличника 2

простые или разделяющиеся на вершине на 2 ветки; 2. Переднегрудная плевральная группа состоит из длинных простых волосков 9, 10,12 и короткого простого волоска 11, волоски 10 и 12 одинаковой длины и длиннее волоска 9.

Куколка. Интегумент светлый, желтоватый. Дорзальный апотом со слегка вогнутой или плоской верхушкой подобен откидной створке без апикального выступа. Передний угол скутума широкий, около 90° (в 80%), переходящий в короткую прямолинейную лопасть. Медиальный киль со слабо выраженными поперечными полосами. Латеральная линия медиального киля длинная, продлевается от волоска 4-СТ за волосок 8-СТ (в 78 %), в остальных случаях не доходит до основания волоска 8-СТ.

Труба. Angusticorn типа, простая, с глубокой расселиной, листок ее коричневого цвета. Длина трубы 0,8-1,1 мм, в среднем 0,94 мм, ширина 0,1-0.15 мм, в среднем 0.11мм, индекс 6.2-10.0, в среднем 7.75. Длина листочка составляет 0.47-0.56, в среднем 0.52 от длины трубы.

Имаго. Общая окраска по большей части тела серовато-бурая. Голова с боков с темно-серыми чешуйками, на макушке с такими же чешуйками чисто белого цвета; лоб с торчащим вперед пучком серебристых чешуек и волосков. Хоботок и щупики одноцветно темно-серые. Усики серые, у основания члеников с розетками довольно длинных бурых волосков; первые 5-7 члеников усиков со светлыми кольцами в местах соединения.

Крылья самок и самцов различаются по длине (соответственно 6,7±0,21 мм и 6,3+0,21 мм, р<0.005). Ширина крыла самок превышает ширину крыла самцов (соответственно 1,5+0,01 мм, и 1,2+0,02 мм, р<0.001).

По сравнению с Ап. Ьек1ет1чке\ч, особи Ап. теэяеае более крупные. Общий окрас тела - рыжевато-коричневый. Отличается размер и расположение апикального пятна: оно меньше по величине, образовано золотисто-желтыми чешуйками и расположено от ветвления радиальной жилки- до 1^4+5 (Рисунок 6). Пятно менее контрастно по отношению к общей окраске крыла, встречаются особи без явно выраженного апикального пятна. Величина и расположение пятна на верхушке крыльев у самок Ап.теззеае и Ап.ЬеИетгвИеУ! может считаться систематическим признаком.

Рисунок 6 - Крыло комара Ап. Ьек1етгзИеу1. На схеме сплошными стрелками указаны границы апикального пятна Ли. Ьеккпткеуу, прерывистыми - Ап. теээеае. Жилки: С - костальная, Яь Яг, Яз, И4+5 - радиальные, Мь М2 - медиальные.

4.2. Ап Шепиеп Согс1ео\' сЧ а1., 2004

Яйца. На поверхности экзохориона яиц Ап. аг1еппеу1 отсутствует какой-либо рисунок, поверхность одноцветная светло-серая. Яйца имеют форму лодки с легким расширением на переднем конце. При рассмотрении сбоку видно, что дорзальная поверхность слегка вогнута, а боковые части более выпуклые. В срединной части каждого яйца воздушные поплавки не развиты, присутствует только оторочка. На каждом боковом конце яйца имеются 3^1 крупных розетковидных воздушных

пузырька с 5-7 боковыми лепестками, окруженных склеротизированной каймой. Остальная поверхность покрыта более мелкими колбовидными пузырьками. Пузырьки хориона на наружных боковых поверхностях располагаются отдельно друг от друга, имеют уплощенную, сглаженную поверхность и полностью закрыты тонким мембрановидным слоем - пластроном, составленным из пяти - шестиугольных ячеек.

Личинка IV стадии, (обозначения по Рейнерту (Reinert et al., 1997)) Личинки в основном светлые, серого или желтоватого цвета. Обитают в хорошо прогреваемых стоячих или слабо текучих водоемах с густой растительностью. Длина тела в среднем 6.3±0.6 мм.

Голова. Длина головы в среднем 0.77±0.007 мм; ширина - 0.75±0.007 мм; индекс головы 1.1. Внутренние волоски наличника 2, прикрепляющиеся к бугоркам, сближены своими основаниями. Эти волоски бывают простые или разделяющиеся на вершине на 2 ветки. Наружные волоски наличника 3 дихотомически разветвлены и, по сравнению с An. messeae Falleroni, 1926, имеют меньшее количество ветвлений (рис. 7). Эти волоски у An. martinius Shingarev, 1926, An. sacharovi Favre, 1903 также характеризуются небольшим количеством ветвлений. У видов An. artemievi, An. martinius, An. sacharovi наружные волоски наличника заходят за края боковых лопастей верхней губы, в отличие от других палеарктических видов комплекса maculipennis. Антенны покрыты шипиками, дистальные участки антенн слегка пигментированы. Длина антенны - 0,34±0,01 мм. Волосок 1 антенны ветвится от 2 до 7 раз. Волосок на антенне короче, чем у An. messeae.

Грудь. Переднегрудная плевральная группа состоит из длинных простых волосков 10,12 и короткого простого волоска 11. Волоски 10 и 12 одинаковой длины и длиннее волоска 9, который ветвится 2-5 (3) раз. Среднегрудная плевральная группа образована двумя длинными простыми волосками 9,10 и короткими волосками 11 и 12.

Рисунок 7 - А - стигмальная пластинка и гребень стигмальной пластинки Ап. artemievi. Б - гребень стигмальной пластинки Ап. artemievi. Ап. те55еае. Обозначения: СТ- стигмальная пластинка; СГ - срединная грануляция; ПД - передняя лопасть; БЗ -большие зубцы; МЗ - малые зубцы.

Заднегрудная плевральная группа включает длинные волоски 9 и 10, короткий простой волосок 11. Волосок 6 короткий, ветвится 1-3 раза, чаще раздвоен. Волосок 12 обычно с 1-3 (2) ветвлениями.

Хитиновые части стигмальной пластинки достаточно сильно пигментированы. Основание передней лопасти пигментировано в большей степени, вся остальная ее

часть окрашена значительно светлее Передний отросток своим основанием доходит до границы между передним и средним отделами В среднем отделе имеется срединная грануляция, проходящая полосой между средним и задним отделами

Гребень на боковых пластинках VIII сегмента брюшка состоит из 5-10 (7) больших зубцов, между которыми помещаются 0-5 более мелких зубцов Маленькие зубцы копьевидной формы, сближены своими основаниями Внутренняя их поверхность покрыта шипиками

Куколка. Обозначения по Рейнерту (Reinert et al, 1997)

Головогрудь Интегумент светлый, желтоватый Дорзальный апотом со слегка вогнутой или плоской верхушкой подобен откидной створке без апикального выступа

Труба Angusticorn типа (Reíd et al, 1961), простая, с глубокой расселиной, листок ее коричневого цвета Длина трубы 1 02-1 20 мм, в среднем 1 09±0 03 мм, ширина 0 098-0 13 мм, в среднем 0 11±0,005 мм, индекс 8 67-10 86, в среднем 9 59 Длина листочка составляет 0 55-0 62 мм, в среднем 0 58±0,01 от длины трубы

Имаго Комар светлой окраски Голова с боков с темно-серыми чешуйками, на макушке с такими же чешуйками чисто белого цвета, лоб с торчащим вперед пучком серебристых чешуек и волосков Хоботок и щупики одноцветно темно-серые Усики серые, у основания члеников с розетками довольно длинных бурых волосков, первые 5-7 члеников усиков со светлыми кольцами в местах соединения

Среднеспинка золотисто-желтая Срединная полоса выражена слегка Спереди, у головы, близ средней линии, с пучком белых чешуек Срединная и боковые области среднеспинки густо покрыты короткими белыми и золотистыми волосками На верхней части боков имеются светло-коричневые и коричневые волоски, в нижней части - длинные черные волоски

Длина крыла 4 2-А 5 мм, в среднем 4 4 мм, ширина 0 95-1 2 мм, в среднем 1 07 мм Чешуйки на жилках узкие, длинные, серые У основания крыла короткие, с зазубренным краем Пятна на крыловой пластине и апикальное пятно выражены слабо Пятно на апексе крыла образовано светло-желтыми чешуйками Оно начинается чуть ниже ветвления радиальной жилки Ri и заканчивается посредине между жилками R,+5 и разветвлением медиальной жилки - Mi (Рисунок 8)

Рисунок 8 - Схема крыла А - схема крыла Ап тезяеае, В - схема крыла Ап агЫгтеуг Обозначения пунктирные стрелки - границы апикального пятна Ап тсаьеае сплошные стрелки- границы апикального пятна Ап аг!епиеУ1 Жилки крыла -С-костальная, Rl, R2, Rз, 1^4+5 - радиальные, Мь М2, М3+4- медиальные

По морфологии личинки и имаго Ап аг1ет1еуг является видом - двойником Ап тагШшя и Ап ,час1югоу1 (Гордеев и др, 2005) Имаго имеют светлую окраску тела, срединная матовая полоса среднеспинки не выражена Пятна темных чешуек на их крыльях хорошо различимы, бахромка у вершины крыла одноцветно темная На

с

с

стадии яйца описано отсутствие воздушных камер, наличие только оторочки и отсутствие рисунка на поверхности

Сравнивая наши данные по Ли aríenuevi с данными Седагата (Sedaghat et al, 2003) по Ап sacharovt, можно отметить отличия (в основном, количественного характера) видов друг от друга Так, у личинок Ап artemievi более округлая голова, внутренний волосок наличника 2 ветвится 1-3 (2) раза, тогда как у Ли sacharovi 2-5 (4) раза Волосок 1 переднегруди yAn artemievi ветвится 3-7 (5) раз, у Ли sacharovi 1-5 (4) раза, волосок 9 переднегруди у Ап sacharovi никогда не бывает простым, у Ап artenuevi подобный вариант встречается Волосок 2 на V сегменте у Ап artemievi имеет 1-4(3) разветвления, у Ап sacharovi - 6-11 (6) разветвлений Количество ветвлений волоска 7 на VII сегменте у Ап artemievi составляет 5-8 (5), у Ап sacharovt 3-5 (5) Для куколок Ап artemievi характерны более крупные размеры тела, а также отсутствие дополнительных волосков 8,10,11 на П сегменте Волосок 2 на Ш сегменте у Ап artemievi имеет 7-9 (7) ветвлений, у Ап sacharovt - 4-6 (5) ветвлений Волосок 1 пятого брюшного сегмента у Ап artemievi ветвится 3-6 (5) раз, у Ап sacharovt 1-5 (3) раза Количество ветвлений волоска 5 на VI и VII сегментах у Ап artemievi составляет 4-8 (5) и 3-5 (3), у Ап sacharovt 1-3 (3) и 1-3 (2) соответственно Волосок 1 плавника у Ап artermevi всегда простой, у Ап sacharovt ветвится 2-5 (4) раза Имаго Ап sacharovt отличается от Ап aríemtevt отсутствием срединной матовой полосы на среднеспинке и апикального пятна на крыловой пластине (Sedaghat et al, 2003) По характеристикам имаго Ап aríemtevt занимает промежуточное положение между Ап sacharovt и Ап macultpenms Имаго Ап sacharovt имеют светлую окраску тела, невыраженную срединную полосу среднеспинки, одноцветную бахромку у вершины крыла (Гуцевич, Дубицкий, 1981) У комаров Ап macuhpennts имаго тело по большей части рыжевато-коричневые, с четкой матовой полосой на среднеспинке и контрастно светлым пятном на апексе крыла

Нами отмечены некоторые отличительные признаки личинки IV возрастной стадии Ап marttmus - еще одного вида-двойника Ап aríemtevt Спинные пластинки брюшка немного темнее остального покрова Гребень на боковых пластинках VIH сегмента брюшка состоит из 4-8 (6) больших зубцов, между которыми помещаются 0-5 более мелких зубцов Маленькие зубцы сосулевидной формы, основания их отстают друг от друга На их внутренней поверхности в небольшом количестве имеются слабо выраженные шипики Из количественных признаков можно выделить следующие волосок 1 переднегруди у Ап aríemtevt ветвится 3-7 (5) раз, у Ап marítmus 1-3 (2) раза, волосок 2 на V сегменте yAn aríemtevt разветвляется 1^1 (3) раза, у Ап marítntus -3-8 (5) разветвлений, на X брюшном сегменте волосок 2 у Ли aríemtevt разветвляется 14-25 (17) раз, yAn marítntus - 3-14 (10) раз

На территории Кыргызстана Ап sacharovt и Ап marttmus не встречаются (Гордеев, Сибатаев, 1996) Там, возможно, происходит перекрывание ареалов Ли aríemtevt с Ап messeae - также морфологически сходных представителей комплекса macuhpennts На стадии яйца эти виды четко отличаются наличием воздушных камер и рисунка на экзохорионе у Ли messeae

При анализе морфологических признаков на личиночной стадии развития выявлено, что длина антенны и волоска на ней варьируют у обоих видов Для личинок Ли aríemtevt характерно меньшее расстояние между основанием антенны до волоска 1А, в отличие от Ли messeae (соответственно 0 67±0 02 и 0 94±0 05 нм, р < 0,001) Этот признак может применяться для определения этих видов при помощи статистических данных (Сибатаев, Шабанова, 2007)

Наиболее интересный результат выявлен при изучении морфологии и числа зубцов стигмальной пластинки У личинок Ап аНетгеуг структура малых зубцов отличается от Ап теяяеае более утолщенной, копьевидной формой и слабо выраженными шипиками на них Малые зубцы на гребнях Ап аг/епаеуг сближены своими основаниями (Рисунок 7Б), тогда как для Ап тезяеае характерно почти параллельное их расположение относительно друг друга и сильно развитые шипы на зубцах Число малых зубцов обоих гребней стигмальной пластинки у личинок Ап аг&ппеп меньше, чем у Ап теглеае Имеется еще один признак - спинные пластинки брюшка Ап аг1егтеУ1 такого же цвета, что и весь покров, у Ап те.чъеае эти пластинки от темно-коричневого до черного цвета (Сибатаев, Шабанова, 2007)

У куколки Ап messeae волосок 12- СТ ветвится 1-3 (2) раз, у Ап аг1егтеУ1 3-5 (4)

раз

На крыльях имаго Ап тезяеае скопления чешуек образуют четыре темных пятна, хорошо различимых даже невооруженным глазом Апикальное пятно образовано золотисто-желтыми чешуйками и расположено от ветвления радиальной жилки - Л] почти до 114+5 (Рисунок 8 А) (Шабанова, Сибатаев, 2004) У Ап аг1епиеп пятна на крыловой пластине слабо выражены, апикальное пятно менее контрастно и располагается ниже, чем у Ап теззеае, - оно начинается чуть ниже ветвления радиальной жилки Л] и заканчивается посредине между жилками 1^+5 и разветвлением медиальной жилки -М, (Рисунок 8 Б)

Выявленные морфологические и цитогенетические признаки позволяют идентифицировать Ап аНетгещ среди изученных палеарктических видов, что важно для практических энтомологов и эпидемиологов в связи с проблемами регуляции численности опасных переносчиков малярии

При составлении ключей был использован собственные и литературные данные, на основе которых составлены определительные таблицы (Гуцевич и др, 1970, Дубицкий, 1970, Данилов, 1985, Гуцевич, Дубицкий, 1981, вЬск, 1992, Пагае, 8аташс1ои-Уоуас1^1ои, 1997, АтегавтдЬе ^ а1,2002)

4 3 Определительные ключи по яйцам комаров комплекса «macuhpenms» 1 Яйца с хорошо выраженными поплавками 2

Поплавки отсутствуют, или имеются слабо выраженные, рудиментарные поплавки 6

2(1) Экзохорион яйца с рисунком из темных пятен и полос 3

- Рисунок экзохориона представлен двумя темными полосами на уровне концов поплавков 5

3(2) Поверхность экзохориона с темными поперечными полосами, между

которыми имеются темные пятна Межреберная перепонка морщинистая

An messeae Falleroni

- Поверхность межреберной перепонки гладкая или слегка морщинистая 4 4(3) Окраска экзохориона одноцветно темная или более светлая, с

поперечными полосами и темными пятнами между ними (контрастный рисунок на светлом фоне)

An melanoon Hack

- Рисунок на поверхности яиц образован темными пятнами, отходящими от краев и суживающимися к середине

An atroparvus Van Thiel 5(2) Ширина верхней поверхности яйца в его средней части между

поплавками составляет 17±1% от длины яйца Поверхность яйца шероховатая

An maculipennis Meig - Ширина верхней поверхности яйца в его средней части между поплавками составляет 12±1% от длины яйца Поверхность яйца гладкая

An beklemishevi Steg et Kab

6(1) Поверхность экзохориона однородно серая

An sacharovi Favre

Определительные ключи малярийных комаров по личинке IV стадии

1 Сифон отсутствует, на сегментах брюшка имеются

хитинизированные тергальные пластинки и пальмовидные волоски (подсем Anophelinae, род Anopheles) 2

2(1) Внутренние волоски наличника 2 сближены своими основаниями 3 Основания внутренних волосков наличника 2 сильно удалены друг от друга 14

3(2) Наружные волоски наличника 3 простые или слабо ветвящиеся на концах или с середины Передняя лопасть стигмальной пластинки полностью пигментирована 4

- Наружные волоски наличника 3 древовидно ветвящиеся Передняя лопасть стигмальной пластинки пигментирована наполовину 7

4(3) Лобные волоски 5,6,7 короткие и простые Боковые волоски на IV-VI сегментах брюшка длинные, перистые

An plumbeus Steph

- Лобные волоски 5, 6,7 длинные и перистые Боковые волоски на IV-VI сегментах брюшка не перистые, а делятся на несколько ветвей недалеко от основания 5

5(4) Внутренние волоски наличника 2, начиная с середины или концевой трети, несут тонкую вторичную перистость Лепестки звездчатых волосков длинные и узкие

An algeriensis Theob

- Внутренние волоски наличника 2 гладкие, без вторичной перистости 6

6(5) Лепестки звездчатых волосков брюшка без вытянутой концевой нити,

с гладкими или слегка зазубренными краями

An clanger Meig

7(3) Волосок на антенне короткий, не превышает ширины последней и

отходит недалеко от основания 9

- Волосок на антенне длинный, около половины длины последней, отходит от ее середины 8

8(7) Волоски 9-12 переднегрудной плевральной группы простые Ареал комара - Дальний Восток

An sinensis Weld

- Ареал комара - европейская часть России

An hyrcanus Pall

9(7) Волосок 9 переднегрудной плевральной группы всегда простой и примерно одинаковой длины с волосками 10 и 12

An beklemishevi Steg et Kab

- Волосок 9 переднегрудной плевральной группы ветвится и короче волосков 10 и 12

10(9) Наружные волоски наличника и волосок на антенне относительно длинные, наружные волоски наличника обычно заходят за края боковых лопастей верхней губы

An sacharovt Favre

- Наружные волоски наличника и волосок на антенне короче, чем у

A sacharovt, наружные волоски наличника обычно не доходят до края боковых лопастей верхней губы 11

11(10) Волоски 2 IV, V сегментов брюшка в сумме в среднем ветвятся 10 8, стандартное отклонение 1 62, в диапазоне 7-16

An atroparvus Van Thiel

- Волоски 2 IV, V сегментов брюшка в сумме в среднем ветвятся

более 108 12

12(11) Волоски 2 IV, V сегментов брюшка в сумме в среднем ветвятся

13 5, стандартное отклонение 1 35, в диапазоне 10-17

An macuhpenms Meig Волоски 2 IV, V сегментов брюшка в сумме в среднем ветвятся более 13 5 13

13(12) Волоски 2 IV, V сегментов брюшка в сумме в среднем ветвятся

14 82, стандартное отклонение 240, в диапазоне 11-21

An messeae Fall

- Волоски 2 IV, V сегментов брюшка в сумме в среднем ветвятся 24 49, стандартное отклонение 3 30, в диапазоне 16-32

An melanoon Hack 14(3) Наружный волосок 3 и задний волосок 4 наличника простые

An superpictus Grassi

4 23 Определительные ключи по имаго малярийных комаров

1 Максиллярные пальпы примерно такой же длины, как хоботок Щиток

цельнокрайний (род Anopheles) 2

2(1) Крылья преимущественно темно-чешуйчатые 3

- Крылья с контрастными темными и светлыми пятнами 11 3(2) Пучок узких белых чешуек на лбу отсутствует Среднеспинка

коричнево-желтая, одноцветная, с довольно длинными темно-бурыми волосками, фронтальный пучок темный

An algeriensis Theob

- Пучок белых чешуек на лбу явственно развит Среднеспинка бурая или коричневая, посредине с широкой матовой полосой Фронтальный пучок светлый 4

4(3) Крылья с очевидными пятнами темных чешуек на жилках и их разветвлениях На апексе крыла имеется светлое пятно (подрод Anopheles) 5

- Чешуйки на крыльях равномерно распределены, не образуют темных пятен 10

5(4) Крылья с перьевидными узкими чешуйками на радиальной жилке (R), постепенно сужающимися к концу (верхушке)

An atroparvus Van Thiel

- Крылья с широкими перьевидными чешуйками на радиальной жилке (R)

6(5) Крылья с перьевидными чешуйками на радиальной жилке (R), остро сужающимися к верхушке

An melanoon Hack

- Крылья с перьевидными чешуйками на радиальной жилке (R) шире, чем у A melanoon, менее остро сужающимися к верхушке 7

7(6) Апикальное пятно на бахромке крыла контрастное, начинается от костальной жилки (С) и заканчивается близко к разветвлению медиальной жилки - М

An beklemishevi Steg et Kab

- Апикальное пятно менее контрастно, меньше по размерам 8

8(7) Апикальное пятно на бахромке крыла расположено от ветвления

радиальной жилки- Ri до R4+5

An messeae Fall

Границы апикального пятна шире 9

9(8) Апикальное пятно на бахромке крыла начинается на 2-3 чешуйки выше ветвления радиальной жилки- Ri и заканчивается на 2-3 чешуйки ниже

R4+5

An maculipenms Meig

- Апикальное пятно отсутствует Темные пятна на крыльях выражены слабо Среднеспинка светло-коричневая

An sacharovi Favr

10(4) Преобладающая окраска желто-бурая или сероватая Фронтальный пучок имеет желтоватый оттенок Срединная полоса среднеспинки с очень узкими светлыми волоскообразными чешуйками Длина пальпомера 5 не превышает 0,5 длины пальпомера 4 Нижние волоски проэпистернума имеются

An clavtger Meig

- Преобладающая окраска черно-серая со свинцовым отливом Фронтальный пучок чисто белого цвета Срединная полоса среднеспинки покрыта светлыми чешуйками от узких до умеренно широких Длина пальпомера 5 превышает 0,5 длины пальпомера 4 Нижние волоски проэпистернума отсутствуют

An plumbeus Steph

11(2) На переднем крае крыла менее 4 темных пятен, включающих жилки

костальную (С), радиальную (R) и Ri 12

- Передний край крыла с 4 и более темными пятнами, включающими жилки костальную (С), радиальную (R) и Ri (подрод Cellia) 13

12(11) Костальная (С) жилка с двумя светлыми пятнами IV членик задних лапок белый, иногда белая окраска распространяется и на часть V членика Ареал комара - Дальний Восток

An sinensis Weid

- IV членик задних лапок темный, с узким светлым кольцом у вершины, иногда у основания Ареал комара - европейская часть России

An hyrcanus Pall

13(11) Срединная полоса среднеспинки покрыта светлыми широкими

чешуйками Отсутствуют верхние волоски проэпистернума Анальная (А) жилка крыла с двумя темными пятнами, дистальное пятно длиннее

An superpictus Grassi

Глава 5. Молекулярный анализ комаров комплексов «Anopheles maculipennis» и «Culex pipiens»

5.1. Сравнение спектров повторяющихся последовательностей ДНК у комаров методом таксонопринга

Наши исследования были проведены на представителях кровососущих комаров родов Anopheles и Culex. В серии опытов показана воспроизводимость картин распределения ДНК-фракций в геле. Длина фрагментов повторяющихся последовательностей на таксонопринтах комаров варьировала примерно от 30 до 600 п.н. Сравнение таксонопринтов разных видов позволило выявить как сходство, так и различия в спектрах повторов.

А ВС

Рисунок. 9 - Таксонопринты видов комаров: А - таксонопринты видов комплекса «maculipennis»-. sc - An. sachar ovi, bk - An. beklemishevi, ms - An. messeae, mc - An. maculipennis, sb -An. melanoon, at - An. atroparvus, lb -An. labranchiae по рестриктаза M Hind///, Sie/; В, С - таксонопринты видов рода Culex: pip - С. p. pipiens, mol - С. pipiens f. molestus, tor - С. torrentium, qui - С. pipiens quinquefasciatus, mod - C. modestus, ter - С. territans по рестриктазам BglII, Hind///.

У семи видов-си блингов малярийных комаров комплекса Anopheles maculipennis был проведен анализ таксонопринтов по рестриктазам Hindill, Sfel, (Рисунок 9А). Повторяющиеся последовательности были выявлены по всем использованным рестриктазам. Большинство фракций повторов у видов Anopheles являлись видоспецифичными или общими для нескольких видов. Одна общая фракция, представляющая собой яркую полосу размером около 450 п.н. в Bgltt-таксонопринтах, была обнаружена у всех видов. Кроме того, в ЕсоШ-таксонопринтах выявлена общая фракция размером около 55 п.н., однако для каждого вида имелись значительные вариации по интенсивности и наличию одинарных или двойных полос. Таксонопринты гомосеквентных видов малярийных комаров - An. maculipennis и An. melanoon, An. labranchiae и An. atroparvus - также имели четкие отличия. Следует

отметить наличие у Anopheles большого количества полос высокой интенсивности, характерных для нескольких, но чаще для одного вида Наименьшее число фракций повторов выявлено для An. sacharovi Таксонопринтный анализ позволяет дискриминировать практически на любой стадии развития все виды комплекса, в том числе гомосеквентные - идентичные по структуре политенных хромосом

Для комаров рода Culex были получены таксонопринты по следующим рестриктазам BglII, Hind///, (Рисунок 9В, 9С) Число фракций повторов по каждой отдельной рестриктазе варьировало от 1 до 12 У трех представителей комплекса Culex pipiens -С р ptpiens, С р f molestus, С р qumquefasciatus и вида С torrentmm, относящихся к подроду Culex, различий по картине распределения фрагментов не было обнаружено ни по одной из рестриктаз Таксонопринты С modestus (подрод Barraudius) и С territans (подрод Neoculex) видоспецифичны по каждой из использованных рестриктаз Фракции, общей для всех шести видов, не выявлено

Можно предположить, что различия таксонопринтов между двумя группами видов рода Culex, возможно, связаны с наличием двух типов интерсперсии внутри одного рода или с промежуточным типом организации повторов у ряда видов

5 2 1 RAPD - маркеры

Скрининг RAPD - праймеров показал, что для идентификации С torrentmm и С р pipiens можно использовать фрагменты ДНК, амплифицирующиеся RAPD -праймерами ОРВ - 02 и OPA- 11

I А

# * # *** fit?"* £2 . 13 ^т ■ "ж ямн^р^^ц^ 4MMI' Л » ! W Ы í» t zz --driaBä^ * mm MB щ** ++ mm * -Ж:

12 3 4 5 6 7 8 9 1011 1213 14 15 161718 19

Рисунок 10 - Результаты амплификации ДНК с использованием RAPD - праймеров ОРВ - 02 (А) и OPA - 11 (В)

Примечание Специфичные для С torrentium фрагменты ДНК обозначены стрелками Дорожки 2 - 9 - С torrentium Дорожки 11 - 13 - С р pipiens, дорожки 14 - 18 - С р molestus Дорожки 1, 10, 19 ДНК маркеры lkb (10, 8, 6, 5, 4, 3, 2 5,2, 1 5, 1, 0 75, 0 5, 0 25 т п н ) (А), ЮОЬр + l,5kb (1 5, 1, 0 9, 0 8, 0 7, 0 6, 0 5, 0 4, 0 3, 0 2, 0 1 т п н ) (В)

В спектре фрагментов ДНК, амплифицированных праймером ОРВ - 02 (5' -TGATCCCTGC - 3'), был выявлен мономорфный бэнд, размером 1183 пн (по данным секвенирования), идентифицирующий С torrentium (Рисунок 10А)

На рисунке 10В представлены результаты амплификации с использованием праймера OPA - 11 (5' - CAATCGCCGT - 3') В паттерне С torrentium четко выявляется специфичный фрагмент ДНК, размером 680 п н (по данным секвенирования), отсутствующий в спектре амплифицированных фрагментов ДНК С р pipiens и С р molestus

Использование RAPD - маркеров позволяет надежно идентифицировать особей С torrentium Маркеры не подвержены внутри - и межпопуляционной изменчивости, они представлены в спектрах RAPD - фрагментов у всех особей С torrentium всех изученных популяций, но отсутствуют в спектрах амплифицированных фрагментов ДНК С р pipiens и С р molestus, т е , присутствие RAPD - маркера среди продуктов амплификации характеризует особей С torrentium, а его отсутствие - особей С р pipiens и С р molestus

52 2 SCAR-маркеры

Специфичные RAPD - бэнды были клонированы и секвенированы Определение последовательности нуклеотидов позволило подобрать специфичные SCAR -праймеры Праймеры SCARcpl и SCARcp2 (Таблица 1) были созданы на основе нуклеотидной последовательности фрагмента, размером 1183 пн, амплифицированного RAPD - праймером ОРВ - 02 Праймеры SCARcp3 и SCARcp4 (Таблица 1) - на основе последовательности RAPD - фрагмента, размером 680 п н (RAPD - праймер OPA - 11) Результатом использования SCAR - праймеров является амплификация одного специфичного фрагмента ДНК (SCAR - маркера)

В ходе SCAR - ПЦР с праймерами SCARcpl и SCARcp2 у особей С torrentium и гибридов между $$ С р molestus и SS С torrentium амплифицируется фрагмент ДНК, размером 1093 пн, особи С р pipiens и С р molestus характеризуются отсутствием амплификации фрагмента ДНК соответствующего размера (Рисунок 11 А)_ ___

mm —

«м» т • mm ЯП» am т т »•<••

Я 2 3 4 5 6 7 8 9 10 И 12 13 14 15 16 1? ¡8 19202! 22 23

= - Щ т _ mm

в" 2 3 4 5 6 7 8 9 10 It 12 13 14 15 16 17 IS 19 202) 22 23

Рисунок 11 - Результаты амплификации ДНК с использованием праймеров SCARcpl и SCARcp2 (А), SCARcpЗ и SCARcp4 (В)

Примечание Дорожки 2,4, 6, 8, 11,13,15, 17 - С /оггепШт, дорожки 3,5,7 -С р рщет, дорожки 9, 12, 14, 16, 18 - С р токхШх, дорожки 19 - 21 - Р1 С р то1езШ х с?с? С /оггепШт Дорожка 23 - негативный контроль, дорожки 1, 10, 22 -ДНК маркеры 1,5 кЬ + 100 Ьр (А) и 100 Ьр (1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 200,100 пн) (В)

Использование праймеров SCARcp3 и SCARcp4 приводит к амплификации фрагмента ДНК, размером 474 пну особей С torrentium и гибридов между $ $ С р molestus и С torrentium, у особей С р pipiens и С р molestus данный фрагмент ДНК не амплифицируется (Рисунок 11В)

SCAR - маркеры являются специфичными, т к не подвержены внутри - и межпопуляционной изменчивости Применение SCAR - маркеров позволяет усовершенствовать метод RAPD - идентификации С torrentium, сделать его доступным широкому кругу исследователей, тк в случае использования SCAR -маркеров отпадает необходимость в анализе набора фрагментов ДНК разных размеров Однако, эти маркеры не позволяют идентифицировать гибриды, т к гибридные особи от скрещивания 9$ С р molestus х с?с? С torrentium идентичны по SCAR - маркерам особям С torrentium

Таблица 1 - Праймеры, использованные в работе

Праймер Последовательность праймера, 5' -> 3' Продукт амплификации

SCARcpl SCARcp2 CCCTTACGCACGGAGAAA CTAACAAAGTACTCCCTCAA Специфичный RAPD -фрагмент (SCAR - маркер)

SCARcp3 SCARcp4 ATTTGGATTGGACTTTCTATTTA TTGAATTTTGACATGACGGTTTTT Специфичный RAPD -фрагмент (SCAR - маркер)

UEA9 UEA10 GTAAACCTAACATTTTTTCCTCAACA TCCAATGCACTAATCTGCCATATTA Участок митохондриального гена субединицы I цитохромоксидазы с

5 8S 28S 5 8Sa TGTGAACTGCAGGACACATG ATGCTTAAATTTAGGGGGTA ATCACTCGGCTCGTGGATCGAT ITS2 регион рДНК

ACEpip ACEtorr В1246s GGAAACAACGACGTATGTACT TGCCTGTGCTACCAGTGATGTT TGGAGCCTCCTCTTCACGG Участок второго интрона гена ацетилхолинэстеразы 2

5 2 3. ITS2 регионы рнбосомалыюн ДНК

По данным Виноградовой и Шайкевич (2005), размер ПЦР фрагментов ДНК С torrentium и С р molestus, полученных в результате амплификации с праймерами, фланкирующими ITS2 регион, составляет приблизительно 410 пн и 460 пн соответственно, т е различие между ними достигает 50 п н На рисунке 12 представлены результаты амплификации ITS2 регионов рДНК с использованием праймеров 5 8S и 28S (Таблица 2) Размеры амплификатов равны около 410 пн уС torrentium и около 460 ни у С р pipiens и С р molestus В рДНК гибридных особей от скрещивания $$ С р molestus х с? с? С torrentium представлены оба варианта (материнский и отцовский) ITS2 регионов (Рисунок 12)

Использование праймеров, фланкирующих ITS2 регионы, позволяет идентифицировать особей С torrentium и С р pipiens или С р molestus, а также гибриды от скрещивания $$ С р molestus х 3$ С torrentium К сожалению, не удалось изучить наследование молекулярно - генетических маркеров у гибридных

особей от скрещивания $ $ С. IоггепНит и С. р. токяШ.ч, т.к. не было получено потомков от такого типа скрещивания.

И]

I 8 S '* m mm mm**'»* — "*

Рисунок 12 - Результаты амплификации ITS2 регионов рДНК с использованием праймеров 5.8S и 28S

Примечание. Специфичные продукты амплификации обозначены стрелками. Дорожки 2-9 -С. torrentium; дорожки 10-12-F1: ÇÇ С. ^ molestas х с?с? С. torrentium; дорожки 14 - 16 - С. p. pipiens, дорожки 17-21 -С. p. molestus, дорожка 23 - негативный контроль; дорожки 1, 13, 22 - 100 Ьр ДНК маркер

Однако можно предположить, что у этих гибридов, так же, как у гибридов от скрещивания С. р. pipiens и С. torrentium, будут представлены два типа ITS2 регионов.

5.2.4. Участок гена субъединицы I цитохромоксидазы с.

Анализ последовательностей участка митохондриального гена субъединицы I цитохромоксидазы с (COI) С. torrentium и С. p. molestus, заключается в обработке рестриктазой SspI амплифицированного участка гена COI, размером 311 п.н. (Виноградова, Шайкевич, 2005).

Для амплификации участка гена COI использовали праймеры UEA9 и UEA10 (Otranto, Traversa, Guida et al., 2003) (Таблица 1). Амплифицированный участок ДНК, размером 311 п.н., после обработки рестриктазой Sspl у С. torrentium оставался неизмененным, в то время как у С. р. pipiens и С. р. molestus он разрезался рестриктазой на два фрагмента, размером 220 и 90 п.н. (Рисунок 13), т.е., особи С. р. pipiens и С. р. molestus идентичны по этому маркеру, но отличаются от особей С. torrentium. У гибридных особей от скрещивания С. p. molestus х S S С. torrentium амплифицированный участок митохондриального гена COI расщепляется на два фрагмента так же, как у материнской формы (Рисунок 13).

Рисунок 13 - Результаты рестрикции амплифицированного участка гена COI рестриктазой Sspl

Пргшечание. Дорожки 2 - 7, 9, 10 - С. torrentium', дорожки 11 - 13 - С. р. pipiens; дорожки 14, 15 - Fl: $$ С. р. molestus х SS С. torrentium; дорожки 17 - 22 - С. р. molestus. Дорожки 1, 23 - ДНК маркер pUC19 / Mspl (501 (489), 404, 331, 242, 190, 147,110(111), 67, 34 п.н.); дорожки 8,23- 100 Ьр ДНК маркер

Было проведено ееквенирование участка гена COI у особей С. p. pipiens и С. р. molestus. Сравнение нуклеотидных последовательностей участка гена COI С. р. pipiens и С. р. molestus показало, что они идентичны между собой и соответствуют последовательности С. р. molestus, представленной в работе Шайкевич и Виноградовой (2004).

5.2.5. Второй нитрон гена ацетилхолинэстеразы 2.

Анализ последовательностей второго интрона гена ацетилхолинэстеразы 2 (АСЕ2), проведенный Смит и Фонсекой (Smith, Fonseca, 2004), позволил создать видоспецифичные праймеры для идентификации нескольких представителей рода Culex, включая С. torrentium и С. pipiens.

В результате мультипраймерной ПЦР с использованием праймеров ACEpip, ACEtorr и B1246s (Таблица 2) у особей С. torrentium амплифицируется фрагмент ДНК, размером 416 п.н., у особей С. p. pipiens и С. р. molestus - 610 п.н.; у гибридных особей от скрещивания $ $ С. р. molestus х с?с? С. torrentium амплифицируются оба фрагмента (Рисунок 14)._

«M

а» <■* um ш» mm ШШШ0Ф* 3 mm érnmé mtm --- s

mt *•» «X» ■ят

1 2 3 4 5 6 7 8 9 W 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21

Рисунок 14 - Результаты амплификации ДНК с использованием праймеров ACEpip, ACEtorr и B1246s

Примечание. Дорожки 2-9 -С. torrentium; дорожки 10 - 12-F1: С. p. molestus х S<5 С. torrentium; дорожки 14-17 - С. p. molestus; дорожки 18-20 - С. p. pipiens; дорожки 1,13,21 - 100 bp ДНК маркер

Эти маркеры позволяют легко идентифицировать особей С. torrentium от С. р. pipiens и С. p. molestus в выборках из любых природных популяций, включая смешанные. Кроме этого, данные маркеры применимы и для идентификации гибридных особей. Учитывая характер наследования, следует ожидать, что использование праймеров ACEpip, ACEtorr и В 1246s позволит выявлять гибридных особей от любого направления скрещивания С. p. molestus и С. torrentium, а также С. p. pipiens и С. torrentium.

Секвенирование и сравнение нуклеотидных последовательностей участка второго интрона гена АСЕ2 у особей С. p. pipiens и С. p. molestus показало, что они идентичны между собой.

В таблице 2 представлены все молекулярно - генетические маркеры, изученные в настоящей работе (полученные самостоятельно и предложенные другими авторами).

Выявлено соответствие результатов при использовании различных типов маркеров. Как следует из таблицы 2, все типы маркеров, рассмотренные в работе, позволяют надежно идентифицировать особей С. torrentium. Эти маркеры применимы к любой стадии развития организма. Особи С. p. pipiens и С. p. molestus идентичны по всем изученным молекулярно - генетическим маркерам. Это свидетельствует о большей генетической близости С. p. pipiens и С. p. molestus и отдаленности от них С. torrentium, что соответствует существующим представлениям о степени филогенетического родства представителей комплекса С. pipiens (Miller, Crabtree, Savage, 1996; Виноградова, 1997).

Таблица 2 - Молекулярно - генетические маркеры для идентификации

Праймер Размер продукта амплификации / рестрикции, п н

С torrentium С р piptens С р molestus F1 5$ С р molestus х с?с? С torrentium

ОРВ - 02 1183 нет нет 1183

OPA - 11 680 нет нет 680

SCARcpl SCARcp2 1093 нет нет 1093

SCARcp3 SCARcp4 474 нет нет 474

5 8S 28S 410 460 460 410, 460

5 8Sa 28S 460 510 510 460,510

UEA9 UEA10 + рестрикция SspI 311 220,90 220,90 220,90

ACEpip ACEtorr B1246s 416 610 610 416,610

Примечание Нет - отсутствие амплификации

Однако, учитывая значительное сходство С р piptens и С р molestus по этим участкам ДНК, мы считаем, что наиболее быстрым способом получения молекулярно - генетических маркеров для идентификации С р piptens и С р molestus является поиск специфичных RAPD - маркеров и создание на их основе SCAR - маркеров Гибридных особей от скрещивания С torrentium и С р molestus можно выявить как в ходе анализа размеров ПЦР - фрагментов ITS2 регионов, так и при использовании праймеров ACEpip, ACEtorr и В 1246s

52 3 Генетическая дифференциация популяций Cpptpiens, С р molestus и Ctorrentium умеренных широт Полиморфизм по RAPD - маркерам был изучен в десяти популяциях С torrentium, пяти популяциях Ср molestus и трех популяциях Cppipiens из г Томска, Томской области (ТО) и Республики Казахстан (РК) Для оценки генетической изменчивости использовался RAPD - праймер OPA - 01, амплифицирующий наибольшее число полиморфных фрагментов ДНК

Генетическую дифференциацию популяций оценивали, используя величину генетического расстояния по Нею (DNei) (Nei, 1978), которая отражает среднее число замен аллелей в каждом локусе, произошедших за время раздельной эволюции двух популяций Величина Dnh варьирует от нуля (максимальное сходство) до бесконечности (максимальное различие)

Средние значения генетических расстояний (£>Nei) между популяциями Cppipiens и Ср molestus (г) больше 0Nel между популяциями Cppipiens (а) и между популяциями Ср molestus (б) DNnмежду популяциями Cpptpiens и С torrentium (д) больше, чем средние значения генетических расстояний между популяциями Ср pipiens (а) и между популяциями С torrentium (в) (Рисунок 15)

Средние значения генетических расстояний между популяциями Ср токхШя и С ¡оггепШт (е) значительно превышают генетические расстояния между популяциями Ср тоЬйЫз (б) и между популяциями С /оггеЫшт (в) 0,20 ---

0,00 -

а 8 I где

Рисунок 15 - Средние значения генетических расстояний между популяциями Ср ргргепя, Ср то\е$1ш, С ¡оггешшт

Средние значения генетических расстояний между популяциями а) Ср р^епя, б) С р тоЬяШя, в) СIоггепНит, г )С р ргргет и С р то1е$1их, д) Ср ргр1вт и СIоггепШт, е)Ср то1е$1и$ и С 1оггепШт Указан 95% доверительный интервал

ТЖ-тМА - депдрограмма, основанная на коэффициентах генетического сходства по Нею (1978) показывает, что все изученные популяции разделяются на три отчетливых кластера в одном представлены популяции Ср то1езШ, в другом - Ср р1р1ет, в третьем - С /оггепНит (Рисунок 16)

Анализ генетического полиморфизма ИАРБ - маркеров позволяет сделать вывод о значительной дифференциации популяций С р ргргет, С р то1е$1и$ и С 1оггеп!шт в районе проведенных исследований

Вывод базируется на следующих положениях 1) генетические расстояния (Е^еО между популяциями разных подвидов или вида достоверно превышают генетические расстояния между популяциями в пределах одного подвида или вида, 2) дендрограмма генетического сходства показывает, что все изученные популяции разделяются на три отчетливых кластера в одном представлены популяции С р то!езШх, в другом - С р ргр1ет, в третьем - С 1оггепНит, 3) не получены прямые или косвенные подтверждения, свидетельствующие о существовании природной гибридизации между С р ргргет и С /оггепНит или между С р тсАеьЫь и С /оггепПит, гибридные особи не выявлены ни в одной из изученных популяций, включая смешанные выборки По всей видимости, генетическая дифференциация, наблюдаемая между популяциями С р ¡пргеп.ч, С р то1е.ч1и.1 и С ¡оггепШт умеренного климата, обусловлена как пре- так и постзиготическими механизмами

репродуктивной изоляции К ним относятся отличия, касающиеся жизненных циклов, полового поведения, а также разобщенность местообитаний и цитоплазматическая несовместимость

— Е

-C.p.pipm

У С. р. molestos

--L \

R I

Q к м

у

С. tormüm

I-м

Р J

Рисунок 16 - Дендрограмма генетического сходства популяций Ctorrentium, Ср pipiens и С р molestus, построенная с использованием метода иерархического кластерного анализа (UPGMA) по результатам RAPD - анализа (RAPD - праймер OPA-01)

Популяции А - с Моряковский Затон, ТО (2003г ), В - г Алматы, РК (1999г ), С -г Семипалатинск, РК (2004 г), D - г Томск, ул Короленко, 15 (2004 г), Е - г Томск, ул Тимакова, 3 (2003г ), F - г Томск, ул Алтайская, 78/2 (2004 г ), G - г Томск, ул Иркутский тр , 104 (2004 г ), Н - г Сарышаган, РК (2005 г ), I - с Моряковский Затон, ТО (2003 г), J- Керамический завод, ТО (2003 г), К - Керамический завод, ТО (2004 г), L - г Алматы, РК (1999 г), М - с Науалы, РК (2003 г), N - с Аксаковка, РК (2003 г ), О - г Алматы 1, РК (2004 г ), Р - г Алматы 2, РК (2004 г ), Q - г Томск, ул Короленко, 15 (2005 г), R - г Томск, ул Короленко, 15 (2004 г )

Глава 6. Пищевое поведение личинок п его взаимосвязь с морфологическими и генетическими параметрами

Питание насекомых - один из важнейших параметров экологии (внутри- и межвидовые отношения), физиологии (скорость обмена веществ и развитая особи) и патологии (вероятность быть инфицированным) Пищевое поведение кровососущих двукрылых в течение длительного времени исследуется не только на имагинальной, но и на личиночной стадии (Беклемишев, 1944, Ивницкий и др, 1984, Николаева,

1986, Dadd, 1970, Nilsson, 1987, Dahl et al, 1988, Merntt et al, 1992) Проведенные наблюдения и эксперименты свидетельствуют о том, что пищевое поведение насекомых адаптивно и отражает особенности занимаемой ими экологической ниши

Для выяснения этих вопросов был проведен анализ биотопической изменчивости морфологических параметров головной капсулы и антенны у двух видов малярийных комаров An beklemishevi и An messeae

Изученные выборки различались соотношением видов An messeae и An beklemishevi An beklemishevi встречался в водоемах Томского региона (г Томск, пос Тегульдет, пос Киреевск) и не встречался в Средней Азии (окр г Бишкека),пос Кант, пос Сокулук, пос Кенес) Соотношение видов в пределах тегульдетской популяции варьировало от 9 1 до 14, несмотря на незначительную удаленность водоемов друг от друга

Средние размеры головы оказались выше у личинок An messeae При этом изменение средних длины (ДГ) и ширины (ШГ) головы по водоемам, как правило, происходило синхронно у обоих видов Головной индекс (ГИ) у An messeae, как правило, превышал таковой у An beklemishevi из той же выборки Приведенные данные указывают на широкую вариабельность экологических условий в пределах одного местообитания Суммированные данные показывают, что ГИ An messeae возрастал на юге ареала вида (в Средней Азии), хотя ДГ и ШГ при этом уменьшались Для исследования скорости поглощения пищи личинками 4-го возраста симпатрических видов малярийных комаров An messeae и An beklemishevi и ее связи с длиной тела, шириной головы и груди, числом зубцов гребня стигмальной пластинки и их асимметрией использовали графит

Соотношение видов в двух водоемах диаметрально различалось доля An beklemishevi в первом водоеме составила 13 1 ± 1 95%, во втором -80 1 ± 2 31% Поэтому в эксперименте идентифицировано 311 личинок An messeae и 275 -An beklemishevi Личинки An messeae достигали большей длины, чем An beklemishevi (Таблица 3)

Таблица 3 - Морфометрические показатели личинок двух видов малярийных комаров, отобранных в эксперимент_

Показатель сравнения Вид

An messeae An beklemishevi

Длина тела, мм 3 3-7 95 3 5-7 75

Ширина груди, мм 1 319± 0 010 (0 9-1 8) 1 269 ±0 010**(0 9-1 65)

Ширина головы, мм 0 8125 ±0 0013 (0 74-0 87) 0 7734 ±0 0014* "(0 71-0 84)

Головной индекс 0 9745 + 0 0018 0 9639 ± 0 0022*

Число зубцов (М± sm) 49 6 ±0 03 51 4 ±0 02**

у самок 50 4 ±0 04 51 7 ±0 03**

у самцов 48 6 ±0 06 51 1 ±0 04**

Асимметрия -0 152 ±0 014 +0111 ±0 008**

у самцов -0 029 ±0 027 -0 146 ±0 019*

у самок -0 247 ±0 028 +0 298 ±0 013**

Примечание *р<0,05, **р<0 001

Заполнение кишечника у личинок обоих видов также уменьшалось с увеличением ширины груди. Максимальная ширина груди оказалась больше у Ап. тезяеае; распределение особей двух видов по этому показателю также различалось (Таблица 3). Скорость поглощения графита у личинок обоих видов обратно коррелировала с длиной тела: чем длиннее были особи, тем медленнее они заполняли свой кишечник.

Снижение скорости заполнения оказалось неодинаковым для обоих видов: для Ап.теэзеае эта величина уменьшалась с 26 до 14% (в 1.9 раза), для An.be/demishevi с 37 до 14% (в 2.7 раза). Различия в скорости заполнения кишечника касались только начала 4-го возраста, когда личинки имели длину тела 3.5-5 мм (р < 0.05).

Ширина головы (ШГ) и головной индекс у An.messeae в среднем превышали аналогичные показатели у Ап.beklemishevi (Таблица 3). Распределение исследованных особей по ШГ также различалось. Построение линий регрессии показало, что скорость заполнения кишечника оставалась неизменной у особей Ап.Ьек1епп51ге\п и возрастала с увеличением ШГ у Ап.теяяеае.

Скорость заполнения кишечника у самцов и самок каждого из видов оказалась неодинаковой. Статистические различия обнаружены между всеми четырьмя группами особей (Рисунок 17А).

1.20г

А

11

1.30

1,(5

1.10

1.05

1.00

С

Д о.«

I Б

1 1*11

1 1 ЙЯИ 1

1

кариотип

1 2 3 вид и пол

Рисунок 17 - Заполнение графитом кишечника личинок комаров. А -заполнение кишечника личинок у самцов (1, 3) и самок (2, 4) Ап.Ьек1епи.чкеУ1 (1, 2) и Ап.теззеае (3, 4). Б - заполнения кишечника у личинок An.beklemishevi с разными инверсионными вариантами половой хромосомы. 1 - самцы, 2 - самки гомозиготные, 3 - самки гетерозиготные. Указан 95%-ный доверительный интервал.

Число зубцов гребня стигмальной пластинки в среднем оказалось выше у личинок Ап. beklemishevi. По этому признаку также отмечены внутривидовые различия по полу (р < 0.001). С увеличением числа зубцов у личинок Ли.шегаеае скорость заполнения кишечника уменьшалась, у An.beklemishevi - не изменялась.

Неодинаковой оказалась флуктуирующая асимметрия по числу зубцов стигмальной пластинки по видам и у каждого из видов у особей обоих полов (/><0.001; Таблица 3). Линии регрессии заполнения кишечника в зависимости от асимметрии показали, что изменения у видов противоположны.

Личинки с разными инверсионными генотипами Ап.теявеае и Ап. Ьек1ет1.чИе\ч заполняли кишечник с неодинаковой скоростью.

Комары Ап. ЪеЫепткещ имели полиморфизм только по хромосоме ХЬ: наряду с гомозиготными по хромосомной последовательности самками встречались также гетерозиготные; гомозиготные по инверсии самцы и самки отсутствовали. Оказалось,

что самцы поглощали пищу быстрее самок с обоими инверсионными генотипами, а гетерозиготные самки - быстрее гомозиготных (Рисунок 17Б)

У личинок Ап те.кеае из популяции пос Тегульдет полиморфизм наблюдался по четырем плечам трех хромосом При этом корреляции скорости заполнения кишечника с частотой генотипа не наблюдалось (Таблица 4)

Скорость заполнения кишечника оказалась неодинаковой у личинок с разными инверсионными генотипами Наиболее быстро заполняли кишечник самцы ХЬь ХЬг и самки ХЬц и ХЬгг, наименее - самцы ХЬо и самки ХЬ0о Скорость фильтрации также различалась для особей с различными вариантами аутосом

Таблица 4 - Скорость поглощения графита особями Ап техБеае с разными инверсионными генотипами

Вариант Частота f±s6% (n = 309) Заполнение Ширина, мм Длина

груди головы

Самцы

xl0 2 9 ± 0 96 0 72 ±0 058 143 ±0 018 0 787 ±0 0023 6 78 ± 0 077

XL! 29 1 ± 2 58 0 87 ± 0008 1 34± 0 002 0 815 ± 00003 631±0010

xl2 6 8 ± 1 43 0 93 ± 0 034 1 41 ± 0 007 0 821 ±0 0013 6 76 ± 0 034

Самки

xl00 1 9 ± 0 78 0 38 ± 0 062 1 32± 0 026 0 810 ± 0 0045 6 53 ± 0 154

xl0i 2 9 ± 0 96 0 64 ± 0 054 131±0016 0 807 ± 0 0028 6 34± 0 102

xl„ 39 5 ± 2 78 0 86 ± 0 005 1 29± 0001 0 812 ± 0 0002 6 20 ± 0 007

XLn 15 5 ±206 0 69 ±0 013 1 30± 0 004 0 810 ± 0 0004 6 20 ± 0 020

xlk 1 3 ± 0 64 0 95 ± 0 189 141 ±0 030 0 816 ±0 0072 6 86 ± 0 102

Самцы + самки

2Roo 15 5 ±206 0 67 ±0 011 1 31 ±0 003 0 797 ± 0 0005 6 33 ±0 017

2Roi 23 ±0 85 0 84 ±0110 1 29 ± 0 028 0 808 ±0 0015 6 21 ±0 146

2R„ 82 2 ± 2 18 0 85 ± 0 003 1 32± 0 001 0 816 ±0 0001 6 30 ± 0 003

3Roo 28 2 ± 2 56 0 75 ±0 008 1 35 ± 0 002 0 810 ± 0 0003 6 47 ± 0 011

3R„1 52 1 ±284 0 82 ± 0 004 131 ± 0 001 0 814 ± 0 0002 6 23 ± 0 004

3R,i 19 7 ± 2 26 0 93 ± 0 011 130±0003 0 813 ± 0 0004 6 27 ±0 013

3L00 83 2 ± 2 13 0 84 ± 0 003 1 31± 0001 0 812± 0 0001 6 27 ± 0 003

3L0i(n) 16 8 ± 2 13 0 75 ±0 012 1 36 ± 0 003 0 818 ±0 0004 6 45 ±0 015

Предполагается, что последовательность XLi адаптирована к условиям резкоконтинентального климата, XL0 - умеренного (Стегний, 1991) Вероятно, уменьшенные размеры и более высокая скорость поглощения пищи у самцов XLi и самок XLn также являются следствием этой адаптации

Различие в скорости поглощения графита выявлено у особей при взаимодействии вариантов плеча 3R с гомозиготой 2Rj ], тогда как при взаимодействии с генотипом 2Roo такой дифференциации не оказалось (Рисунок 18А)

Чтобы проверить существование обратной связи между инверсионными генотипами и скоростью заполнения кишечника, совершили обратную операцию всех личинок поделили на три группы по скорости поглощения графита и сравнили их хромосомный состав - группу 1 составили особи с максимальной скоростью поглощения, группу 3-е минимальной, группу 2-е промежуточной Различия обнаружены между группами 1 и 2 по частоте аутосомных гомозигот ЗЬоо (х2=7 2, fd=l, р<0 01), гетерозигот 3L0i (х2=5 64, fd=l, р<0 05), комбинацией 2Rn-3L00

(Х2=5.48, £с!=1, р<0.05), инверсией ЗЬ, (х2=7.97, 1У=1, р<0.01). Группы 1 и 3 различались частотой последовательностей половой хромосомы ХЬо (х2=4.5, £¿=1, р<0.05), ХЬ, (х2=4.44, 1'с1=1, р<0.05), аутосом 2Я (х2=4.05, Гс1 1, р<0.05) и ЗИо (х2=4.53, й=1, р<0.05; Рисунок 18 Б). Различий между группами 2 и 3 не оказалось.

А

комбинация 2Е-ЗК

Рисунок 18 - Скорость заполнения кишечника у личинок Ап.те&чеае А - личинки An.mes.seae по комбинациям 211-311. 1 - 21^оо-31^оо, 2 - 2К01-ЗКоь 3 - 2R.ii-3]^оо, 4 - 2Кц-311оь 5 - 2Кц-ЗКц. Б - частота хромосомных последовательностей в группах личинок Ап.шевзеае с различной скоростью заполнения кишечника: а - ХЬо, 21^0, ЗЬ0; Ь - ХЬь ЗЬь с - ХЬ2 Указан 95% доверительный интервал.

Результаты проведенного нами эксперимента показывают, что личинки с инверсиями в генотипе по всем трем хромосомам имели различия в скорости поглощения пищи. Из этого мы можем заключить, что регуляция скорости фильтрации у личинок Ап.тейзеае связана со всеми тремя хромосомами.

Плечо 2R у An.be/ilemishevi сходно по структуре дисков с гомозиготой 2R.ii полиморфной инверсии у Ап.теиеае. Это, вероятно, свидетельствует о том, что регуляция скорости поглощения пищи достигалась у обоих видов одним и тем же способом. Последовательность ХЬ1 у An.mes.4eae адаптирована к условиям резкоконтинентального климата, ХЬ0 - умеренного (Стегний, 1991). Это позволяет рассматривать перестройку ХЬг как элемент генетической адаптации в условиях конкуренции с Ап. beklennshevi.

Состав хромосомных последовательностей в популяциях широко варьировал по частоте. Различия по концентрации инверсий отмечены у личинок из разных водоемов тегульдетской популяции. Частота инверсий неоднозначно коррелировала с долей Ап.Ьек1епт11^1. В частности, в восьми выборках из киреевской и тегульдетской популяций последняя слабо положительно коррелировала с частотой инверсий Ап.те.ч.чеае ХЬо, ХЬь 2Ro, ЗКо, слабо отрицательно - с частотой инверсии ХГг, не коррелировала с частотой ЗЬ0. Эти данные подтверждают ранее сделанные выводы о конкурентном взаимодействии данных видов в зонах симпатрии (Стегний, 1991). Выявлена положительная взаимосвязь длины головы с долей инверсии 2К), отрицательная - с частотой инверсий ХЬь ЗЯЬ 31,1 (Рисунок 19).

Особи гомозиготные по 1 наполняли кишечник быстрее гомозигот 211оо на протяжении всей 4-ой стадий, что, вероятно, указывает на повышенные темпы развития особей с генотипом 2Rll, а также раскрывает один из механизмов дифференцированной чувствительности An.messe.ae к ВН. Личинки Ап.Ьек1ет1,<сИеу1

имели сниженную относительную восприимчивость к Вп, несмотря на более высокую скорость фильтрации (Бурлак, Сибатаев, 1995, Бурлак, Сибатаев, 1998)

Таким образом, изучение детерминации физиологического параметра - скорости поглощения пищи личинками показало, что особи с разными хромосомными вариантами имеют различия по этим физиологическим параметрам В популяциях личинок малярийных комаров обоих видов скорость фильтрации у самцов выше, чем у самок

Рисунок 19 - Зависимость длины головы от инверсионного состава популяций Аптеязеае А -ХЬь Б - 2ЯЬ В - ЗЯь Г -31,1 Приведены линии регрессий

Глава 7 Морфологическая дифференциация близкородственных видов кровососущих комаров

Комплекс "тасиЬрептя"делится на неарктические и палеарктические виды Неарктические виды по морфологическим параметрам значительно более дифференцированы, и эти виды являются в значительной степени аллопатрическими (\Vhite, 1978) В то же время палеарктические виды являются очень сходными по морфологии и среди них есть виды как аллопатрические, симпатрические, так и викарирующие Виды симпатрические - Ап тасикрепш.ч и Ап те.^еае, Ап техьеае и Ап аЬгорагшБ, Ап аЬ-орагшв и А тасиНреппн, Ап та-жае и Ап Ьеккт^кеуг Викарирующие виды — Ап 1аЬгапс1пае с Ап а^орагуия, Ап те1апооп с Ап тея-чепе, Ап тасикрептя, Ап ,час)шго\ч с Ап тагипшх и Ап тасиЬрептя с Ап Ьек/епп.чЬеп (Новиков, Алексеев, 1989, Стегний, 1991) Предполагается, что эволюция неарктических видов по сравнению с палеарктическими видами происходила более длительное время (КйггшПег с! а1, 1967)

На основе результатов, полученных цитогенетическими методами, предлагался ряд схем филогенетических отношений комплекса «тасикрептя» (\Vhite, 1978, Стегний, 1979) На данный момент существует около 10 различных схем филогенеза, построенных на основании молекулярных данных, которые часто изменяются с появлением новых методов (СоНшб, Раэкеш^, 1996, Новиков и др , 2004, Гордеев и

100-1

О А ■ 5 аВ • Г

О

0,80 0,81 0,82 0,83 0,84 0,85 0,86 Длина головы, мм

др , 2004) Для анализа филогении по фенотипу палеарктических видов малярийных комаров использовали схемы филогении, основанные на цитогенетическом методе и гибридологическом анализе (Стегний, 1979)

По этой схеме исходные виды в каждой из двух филетических линий -Ап labranchtae и Ап melanoon - являются в максимальной степени стенобионтными и имеют самые узкие ареалы (Стегний, 1991)

Предметом рассмотрения в данной главе является морфологическая дифференциация близкородственных видов комплекса «macuhpetmis» на различных стадиях развития

Яйца. Экологические особенности обитания видов комаров тесно связаны с формами яиц Стадия яиц является промежуточным звеном развития гемипопуляций комаров Наиболее примитивным типом у Anophilinae считается форма яиц Ап plumbetis (Mattingly, 1969)

Эти комары развиваются в дуплах деревьев и не нуждаются в поплавках По этой схеме от типа в дальнейшем отходят типы «algeriensis» и «concolor» Тип «concolor» появляется у многих видов подродов Anopheles

Палеарктические виды комплекса umaculipenms» произошли от неарктических видов Все неарктические виды комаров комплекса «maculipenms» Ап occidentalis, Anfreeeborni, Anearlei, Ап azlecus имеют поплавок (Aitken, 1945) Палеарктические виды, более молодые по сравнению с неарктическими, имеют несколько вариантов формы яиц (Рисунок 20)

В филетической линии Ап sacharovi - Ап martimus в процессе эволюции и продвижении видов на юг возникает тип яиц без поплавков - Ап concolor (Рисунок 21Б) Данный тип характеризуется вторичной потерей поплавков Особи филетической линии Ап sacharon - Ап martimus отличаются повышенной солевыносливостью и теплоустойчивостью, они обитают в условиях резкоконтинентального климата со значительными перепадами зимне-летних температур Считается также, что серебристая окраска яиц является одним из способов защиты от хищников (Mattingly, 1969) Это окраска дает возможность яйцам сливаться с поверхностью воды снизу и быть незаметными Недавно открытый новый вид Ап artemievi имеет форму яиц как у Ап sacharovt - Ап martmius (Гордеев и др, 2005)

Нами отмечено, что при принудительном скрещивании комаров $Ап beklemishevi х с^ Ап atroparvus и $Ли macuhpennis х <3 Ап atroparvus, фенотип яиц наследуется по отцовской линии родительского вида

Личинки Следующая стадия развития комаров - личинки Среди неарктических видов четко отличаются личинки Ап aztecus, которые имеют большие, широко расставленные внутренние волоски наличника (Pratt, 1952) У других трех видов эти волоски более мелкие и ближе расположены (Рисунок 22) У Ап earlei внутренние волоски наличника раздвоены на конце Головы личинок Ли jreebomi и Ап occidentalis очень похожи, внутренние волоски наличника близко расположены Однако пальмовидные (звездчатые) волоски на четвертых брюшных сегментах у этих видов значительно различаются

Личинки палеарктических видов комплекса очень сходны по морфологии При детальном анализе нами были выявлены некоторые различия Палеарктические виды делятся на несколько групп по внутренним волоскам наличника (Рисунок 7 8) Первая группа включает Ап beklemishevi, у которого внутренние волоски простые или в конце ветвятся на две ветви (Рисунок 23А) В этом определяется их сходство с личинками

An.ea.rlei. По структуре политенных хромосом An.beklemishevi происходит от Ап.еагШ (Стегний, 1991).

еаг!е1

1аЬгапсЫае

атгорап/ив

тасиКрепгнз

аПегг^ тез5еае

БасИагоу!

тагИтиэ

Рисунок 20 - Формы яиц комаров комплекса «тасиНретш»

Рисунок 21 - Форма поплавков яиц малярийных комаров А - Ап.а^орагуия; Б-АпмНетгеп. Стрелками указано поплавок яиц.

Вторая группа видов имеет ветвление внутренних волосков переднегрудной плевральной группы, что является одним из систематических признаков личинок комаров (Рисунок 23Б). Происхождение этой группы возможно от комаров Ап./гееЬогт или Ап.осЫскМаНя (Стегний, 1991). У тчток An.beklemishevi волоски 9, 10, 12 простые (Рисунок 23А), чем он отличается от остальных палеарктических видов (Рисунок 23Б).

Ш Рй

тасиНреппю

N А

Ьек1ет|БИеу|

Б

теэзеае засИаго|Л

тагйпшв

Рисунок 22 - Головы личинок Голарктических видов комплекса «тасиИрептя». Стрелками указаны возможные пути видообразования по нашим данным и данным В.Н.Стегния (1991).

Рисунок 23 - Грудные волоски личинки. А, Б - переднегрудная группа волосков груди. А, Б - соответствует видам, обозначенным в рис. 22

Вторая группа видов, в свою очередь, делится на 2 подгруппы по характеру ветвления наружных волосков наличника. I подгруппа: Ап.аЬ-орап'т, Ап.те1апооп, Ап.тасиИретш и Ап.п^даае. (Рисунок 24А); II подгруппа: Ап.зас/гагоуг, Ап.аНеппеп, Ап.тагИптя (Рисунок 24Б). У личинок АпласИагспп, Ап.аг1ет1е\1, Ап.тагШшч наружные волоски наличника длинные и обычно заходят за края боковых лопастей верхней губы.

Куколки. На стадии развития куколки палеарктические виды комаров практически не различаются.

Рисунок 24 - Наружные волоски наличника

А - Ап.аП-орагуия, Ап.те1апооп, Ап.тасиИрепт.ч и Б - Ап.яасИаголч,

Ап. аг1ет\е\п, Ап. тагНтт.

Имаго. Все имаго близкородственных видов комплекса «тасиИрептх» имеют пятнистые крылья. По интенсивности окраски крыла можно выделить две группы. Эти группы полностью совпадают с группами, которые выделяются на основе особенностей наружных волосков наличника (Рисунок 25).

Рисунок 25 - Крыло комаров комплекса «тяси/греиии»

А - Ап.аО-орагуиэ, Ап.те1апооп, Ап.тасиНрептя и ,4;г.те.55еае; Б - Ап.эас/шгоУ!, Ап. аг/етгет/, Ап. тагНтги.

При суммировании выявленных признаков у комаров комплекса «тасиНрептя» на различных стадиях развития выделяется три группы (Таблица 5). Большинство видов имеют сходные признаки и в таблице 5 выделены серым цветом. Вторая группа включает три вида.

Таблица 5 - Основные морфологические признаки Голарктических видов

Виды Наличие поплавка яиц рисунок 21 Ветвление внутренних волосков наличника рисунок 22 Наружные волоски наличника сильно разветвленные рисунок 24 Ветвление переднегрудных плевральных волосков рисунок 23 Интенсивность окраски крыла рисунок 25

ойесш* + - + - -

р'ееЬогт* + - + - +

осск^еШайя* + - + - +

еаг1ег* + - + - +

Ьек1етпкем1 + - + - +

Шорагеш + + + + +

ЫЬгапсЫае + + + + +

те1апооп + + + + +

тасикрептч + + + + +

те.ч.чеае + + + + +

аг1егтеУ1 - + - + -

яасИагохп - + - + -

тагйтш - + - + -

«+» означает присутствие данного признака, «-» отсутствие * - описание неарктических видов (РтаК, 1952)

Сравнительный анализ морфологических и хромосомных признаков

По дисковой структуре политенных хромосом Ап агЫтхехх отличается от видов Ап теязеае, Ап-аЬ-ораппи, Ап ¡аЬгапскше, Ап ЪеШеппзкемг, Ап ьаскагоп, Аптагйтт, но является гомосеквентным Ап те1апооп и Ап тасиЬретт (Гордеев и др, 2005, Андреева и др, 2007) В связи этим интересно сравнить организацию политенных хромосом питающих клеток яичников Ап аг1епаш, Ап те1апооп и Ап тасиЬреппи По хромосоме ХЬ эти виды различаются по морфологии прицентромерного участка Для Ап тасикрептз характерен асинапсис гомологов в прицентромерном районе, что не характерно для Ап те\апооп и не всегда наблюдается у Ап аг1еппс\ч В отличие от Ап те1апооп в прицентромерном районе Ап аг1епие\ч не формируется яркоокрашенный гетерохроматиновый блок Отличительной чертой политенных хромосом Ап аПеппеп является формирование крупных гетерохроматиновых блоков в прицентромерном районе 15 2Ь плеча хромосомы 2 и в районе 33 ЗЬ плеча хромосомы 3 По этим признакам вид Ап аг1спие\ч отличается от всех ранее изученных палеарктических видов

По морфологии Ап агЫпиеп сходен с видами Ап засЬагст, Ап тагитиз Однако по структуре прикрепления хромосом Ап аг1епче\п сходен с видами Аптасикреппи и Ап те!апооп По гипотезе МаШгщ1у (1969), конечные виды в эволюции имеют формы яиц типа сопсо1ог - без поплавков (Рисунок 21) На основании этой гипотезы мы предполагаем, что Ап аг/еппехч занимает конечное положение в филетической линии Ап тасиЬрептя - Ап те1стооп (Рисунок 26) На основании хромосомных перестроек комары Ап Ьеккпи.Фехч происходят от Ап еагкг (Стегний, 1991) По морфологическим параметрам Ап ЪеМетиЬем более сходны с неарктическими видами (Таблица 5)

На основании цитогенетических, морфологических данных мы предлагаем уточненную филогенетическую схему Голарктического комплекса «тасиИрептх» (Рисунок 26).

Рисунок 26 - Филогенетическая схема Голарктического комплекса «тасиИрептх» Серым цветом выделены неарктические виды.

Таким образом, проведенный анализ эволюции близкородственных видов малярийных комаров по морфологическим признакам позволил уточнить филогению комплекса "тасиНрепшз". Данные по морфологическим признакам соответствуют филогенетической схеме, составленной ранее на основе гибридологического и цитогенетического анализа.

Выводы

1 Выявлена фенотипическая изменчивость в популяциях кровососущих комаров р р Anopheles, Culex Показано, что она коррелирует со степенью хромосомной изменчивости Выявлен фенотипический признак - "флуктуирующая асимметрия" в популяциях личинок An messeae Виды комаров комплекса «Culex pipiens» статистически различаются по фенотипам

2 Сравнительный морфологический анализ видов-двойников позволил уточнить видовой состав палеарктической группы «Anopheles macuhpennis» Впервые описаны по морфологии виды An beklemishevi и An artemievi Составлены определительные таблицы по морфологии на различных стадиях развития для видов комплекса «Anopheles macuhpennis»

3 Анализ спектров повторяющихся последовательностей ДНК у кровососущих комаров показал межвидовую и межродовую изменчивость геномов Anopheles, Culex по составу семейств повторяющихся ДНК Показано, что видоспецифичная фракция на таксонопринте An messeae представляет собой тандемный повтор с длиной мономера около 53 п н Разнообразие в организации повторов в пределах одного семейства и низкое содержание общих фракций отличает Culicidae от всех изученных ранее групп организмов

4 Впервые были найдены видоспецифичные RAPD - маркеры для идентификации Culex torrentium Определение нуклеотидной последовательности RAPD - фрагментов позволило создать специфичные SCAR - праймеры ПЦР с использованием SCAR - праймеров является простым, быстрым и надежным методом идентификации С torrentium Показано, что эти маркеры позволяют идентифицировать особей С torrentium, в то время как С р pipiens и С р molestus идентичны по этим маркерам Выявлено соответствие результатов при использовании различных типов молекулярно - генетических маркеров Впервые предложен способ идентификации гибридных особей от скрещивания С torrentium и С р molestus

5 Анализ изменчивости RAPD - маркеров в популяциях С р pipiens, С р molestus и С torrentium из г Томска, Томской области и Республики Казахстан позволил сделать вывод о генетической дифференциации С torrentium, С р pipiens и С р molestus и об отсутствии природной гибридизации между ними в районе проведенных исследований Кроме того, показано, что в открытых личиночных биотопах (Томская область и Республика Казахстан) доминантным видом является С torrentium, личинки С р pipiens встречаются с небольшой частотой

6 Изучение детерминации физиологического параметра - скорости поглощения пищи личинками - показало, что особи малярийных комаров с разными хромосомными вариантами имеют различия по этим физиологическим параметрам В популяциях личинок малярийных комаров скорость фильтрации у самцов выше, чем у самок

7 Проведенный анализ эволюции близкородственных видов малярийных комаров по морфологическим признакам позволил уточнить филогению комплекса "macuhpennis" Данные по морфологическим признакам соответствуют филогенетической схеме, составленной ранее на основе гибридологического и цитогенетического анализа

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

1 Снбатаев А К, Гордеев М И Морфологический и цитогенетический анализ личинок видов-двойников малярийных комаров Западной Сибири // Известия СО РАН Сибирский биологический журнал - 1993 - №2 - С 3-9

2 Снбатаев А.К Изменчивость количества зубцов гребня у личинок малярийных комаров комплекса «Anopheles maculipennis» / Естественные науки Материалы региональной научно-практической конференции для молодых ученых Томск -1994 -С 11

3 Гордеев МИ , Снбатаев А К Возрастной отбор и способность к каннибализму у личинок малярийных комаров с разными кариотипами // Генетика. - 1995 - Т 31 -№7 - С 939-946

4 Гордеев М И, Снбатаев А К Процессы отбора личинок малярийных комаров под влиянием хищного растения пузырчатки Utncularia vulgaris // Экология - 1995 -№ 3 - С 241-245

5 Бурлак В А, Снбатаев А.К Абсолютна и относительная чувствительность личинок двух видов малярийного комаров из природных популяций к Bacillus thuringiensis israelensis и Bacillus thuringiensis fulaiokaensis II Известия CO PAH Сибирский биологический зкурнал - 1995 - № 5 - С 448-456

6 Снбатаев А.К. Процессы отбора личинок малярийных комаров под влиянием хищного растения пузырчатки Utncularia vulgans // Генетика - 1994 - Т 30 -Приложение - С 142-143

7 Burlak V А , Gordeev МI, Sibataev А.К., Nikolaeva N V Susceptibility of natural populations of malaria mosquitoes to the toxins of Bacillus thunngiensis subsp israelensis (B11) // Program and abstracts of П En Gebi Conference on bacterial control of agricultular insect pests and vectors of human diseases (Shoresh, Israel, August 12-16, 1996) Shoresh Ben-GunonUniv ofNegev -1996 Pll

8 Sibataev A.K., Nikolaeva N V Morphological and ecological aspects of the larval feeding of malana mosquito // Proceedings of 10th European SOVE Meeting, Strasbourg, France, September 2-6 -1996 -P 54-55

9 Stegnu VN, Sharakhov IV, Sharakhova MV, Sibataev A.K., Wasserlauf IE Evolution-genetic analysis of the palearctic Anopheles maculipennis (Díptera Culicidae) complex // Proceedings of XX International Congress of Entomology, Firence, Italy, August 25-31 -1996 -P 256

10 Stegnu VN, Sharakhov IV, Sharakhova MV, Sibataev A.K., Wasserlauf IE, Burlak V A Evolution-genetic analysis of the palearctic Anopheles maculipennis (Díptera Culicidae) complex // Proceedings of 10th European SOVE Meeting, (Strasbourg, France, September 2-6 1996) -1996 -P 41

11 Бурлак В A , Снбатаев А К Асимметрия в природных популяциях личинок малярийных комаров и ее связь с чувствительностью к двум подвидам Bacillus thunngiensis патотипа А // Паразиты и паразитарные болезни в Западной Сибири Тез докладов I научной конф Новосибирского отделения Паразит общества РАН -Новосибирск -1996 - С 17-18

12 Гордеев М И Снбатаев А К. Цитогенетическая и фенотипическая изменчивость в центральных и периферийных популяциях малярийного комара Anopheles messeae Fall (Díptera, Culicidae) II Генетика. - 1996 - Т 32 - № 9 -С 1199-1205

13 Снбатаев А К, Бурлак В А Изменчивость числа зубцов гребня стигмальной пластинки в личиночных популяциях малярийных комаров (Díptera, Cuhcidae) / Паразиты и паразитарные болезни в Западной Сибири Тез докладов I научной конф Новосибирского отделения Паразит общества РАН - Новосибирск - 1996 - С 87-88

14 Бурлак В А , Спбатаев А К Характер взаимоотношений природных популяций малярийных комаров Anopheles группы maculipenms mg (Díptera, Cuhdidae) и кристаллообразующих бактерий Bacillus thunngiensis israelensis // Пробл энтомол в России - Тезисы энтомологического съезда С-Петербург - 1998 -Т1 -С 51

15 Бурлак В А , Снбатаев АК Частота встречаемости фенотипа stripe у личинок малярииных комаров в природных водоемах // Известия СО РАН - Сибирский экологический журнал - 1997 -№6 - С 589-594

16 Бурлак В А, Спбатаев А К Чувствительность личинок малярийных комаров к энтомопатогенной бактерии Bacillus thunngiensis israelensis и экстенсивность заражения их микроспоридиями // Успехи энтомологии на Урале - Екатеринбург -

1997 - С 166-167

17 Снбатаев А К Детерминация пищевого поведения личинок в популяциях малярийных комаров // Проблемы эволюционной цитогенетики, селекции и интродукции Материалы научных чтений, посвященные 100-летию проф В П Чехова, Томск, 1997 -С 52-54

18 Снбатаев А К Хромосомный полиморфизм Anopheles messeae в природных популяциях Казахстана / Проблемы эволюционной цитогенетики, селекции и интродукции Материалы научных чтений, посвященные 100-летию проф ВП Чехова, Томск, 1997 -С 54-56

19 Снбатаев АК, Бурлак В А Некоторые закономерности полосатой окраски личинок малярийных комаров комплекса Anopheles maculipennis // Успехи энтомологии на Урале -Екатеринбург -1997 -С 198-199

20 Спбатаев А К, Стегний В Н Морфологический и цитогенетический анализ филогении малярийных комаров комплекса "maculipennis" // Место и роль двукрыл насекомых в экосистемах материалы докл на 6 Всерос симп диптерологов, - Санкт-Петербург, 21-25 апр , 1997 - СПб,-1997 -С 119

21 Шарахов ИВ , Снбатаев А К, Бурлак В А Морфологические закономерности эволюции яиц при видообразовании малярийных комаров // Эволюция жизни на земле Материалы I Между нар симпозиума -Томск Изд-воНТЛ -1997 -С 145

22 Бурлак В А Снбатаев АК Микроспоридиозы в природных популяциях малярийных комаров Anopheles messae Fall // Проблемы энтомологии в России, сборникнауч трудов - С-Петербург -1998 -С 50-51

23 Бурлак В А, Сибатаев А К Скорость поглощения пищи и ее связь с морфометрическими показателями у личинок двух видов малярийных комаров (Díptera, Cuhcidae) //Экология -1998 - №1 -С 55-61

24 Сибатаев А К Изменчивость параметров головы личинок малярийных комаров (Díptera, Cuhcidae) в зонах симпатрии Западной Сибири // Биологическое разнообразие животных Сибири Материалы конф, посвященные 110-летию зоолог исслед и образов в Сибири -гТомск -1998 -С 100-101

25 Бурлак В А , Шарахова М В , Шарахов И В, Лапик Е Р , Сибатаев АК Связь морфотипов хромосом самок малярийного комара Anopheles atroparvus с чувствительностью их потомства к Bacillus thunngiensis israelensis И Генетика -

1998 -Т 34 -№7 -С 992-995

26 Бурлак В А , Снбатаев А К , Перевозкин В П , Гордеев М И Взаимосвязь

скорости поглощения пищи личинками двух видов малярийных комаров (Díptera, Culicidae) с их инверсионными генотипами // Экология - 1999 -№5 -С 379-381

27 Braginets О Р , Sharakhova М V , Sibataev А К Variability of repetitive DNA in two genera of the blood-sucking mosquitoes (Culicidae, Díptera) // Biodiversity and Dynamics of Ecosystems in North Eurasia - V 1 - Part 3 Molecular-genetic bases of biodiversity (animals and plants) - Novosibirsk, 2000 - P 22-24

28 Брагинец О П, Сибатаев А.К, Стегний В Н Рестриктазный анализ повторяющихся последовательностей ДНК у представителей кровососущих комаров рода Culex // Проблема вида и видообразования Тезисы докладов 1-ой Междунар конф -г Томск -2000- С 16-17

29 Бурулько М Л , Штумпф О В , Сибатаев А К Фенотипическая изменчивость комаров комплекса Culex pipiens / Естественные и точные науки III Сибирская школа молодого ученого Материалы конф Студентов, аспирантов, и молодых ученых (2223 декабря 2000 г) Т 1 - Томск Изд-во ТГПУ - 2000 - С 83-84

30 Сибатаев А. К, Бурлак В А Изменчивость параметров головы и антенны у личинок двух видов малярийных комаров из различных биотопов Западной Сибири и Средней Азии // Известия СО РАН Сибирский экологический журнал - 2000 - в 4 -С 477-483

31 Храброва НВ Сибатаев А.К Анализ генетической изменчивости комаров Culex pipiens (Díptera, Culicidae) с использованием микросателлитного локуса CQ46 в качестве маркера// Проблема вида и видообразования Тезисы докладов 2-ой Междунар конференции, 24-26 октября 2001г, г Томск - Т 2 - 2002 -С 392-393

32 Sibataev А К., Gordeev МI The morphological analysis of malarial mosquito larva of Western Siberia // Vector-Borne Diseases and Problems of Genetic Safety - Proceedings ofthe First International Workshop, Moscow, 6-12 October 2002- 2003 -P 10

33 Сибатаев A.K, Гордеев M И, Унгер М Ф Фенотипическая и цитогенетическая изменчивость двух видов малярийных комаров - Anopheles messeae и Anopheles beklemishevi (Díptera, Culicidae)! Материалы ХП съезда Русского энтомологического общества, Санкт-Петербург, 19-24 августа2002 г -2002-С 317-318

34 Штумпф О В , Сибатаев А К. Скрещивание Culex pipiens pipiens и Culex pipiens molestus// Материалы VII общероссийской межвузовской конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Наука и образование" - Естественные и точные науки Т1 -2003 -С 126-127

35 Храброва Н В, Сибатаев А.К, В Н Стегний RAPD-маркеры для идентификации представителей рода Culex - переносчиков вируса западно-нильской лихорадки // Вестник Томского государственного университета -2004 -№10 -С 128- 130

36 Шабанова Ю В, Сибатаев А.К Сравнительный анализ морфологии имаго малярийных комаров азиатской части территории России // Вестник Томского государственного университета - №10 - 2004 -С 141-144

37 Храброва Н В, Сибатаев А К, Стегний В Н SCAR - маркер для идентификации Culex pipiens pipiens (Díptera Culicidae) // Вестник Томского государственного университета -№30 2004 -С 146-149

38 Храброва НВ, Сибатаев А.К. Молекулярные маркеры для идентификации комаров Culex pipiens pipiens и Ср pipiens f molestus (Díptera Culicidae) // Генетика в XXI веке современное состояние и перспективы развития Материалы III съезда ВОГиС Москва-2004 - Т1 -С 520

39 Храброва НВ , Сибатаев А К , Стегний В Н Таксономический статус комаров Culex pipiens L и Culex molestus F // Эволюционная биология Материалы Ш Международной конференции «Проблема вида и видообразования» / Под ред В Н Стегния - Томск Томский государственный университет, 2005 - Т 3 - С 275 - 299

40 Храброва Н В , Сибатаев А.К , Стегний В Н Генетическая идентификация комаров группы Culex pipiens (Diptera Culicidae) методом RAPD-анализа// Доклады Академии Наук -2005 -Т402 -№3 -С 1-2

41 Храброва НВ, Сибатаев А.К., Стегний ВН Распространение комаров комплекса Culex pipiens (Diptera, Culicidae) // Энтомологические исследования в Северной Азии Материалы VII Межрегиональное совещание энтомологов Сибири и Дальнего Востока -Новосибирск -2006 -С 434-435

42 Шабанова Ю В, Сибатаев А.К Малярийные комары (Diptera, Culicidae) Сибири и Дальнего Востока // Энтомологические исследования в Северной Азии Материалы VII Межрегиональное совещание энтомологов Сибири и Дальнего Востока Новосибирск -2006 -С 438^439

43 Шабанова Ю В, Сибатаев А К Проблемы морфологической таксономии малярийных комаров комплекса Anopheles tnaculipennis (Diptera, Culicidae)// Материалы I Всероссийского совещания по кровососущим насекомым (24 - 27 октября 2006 г, Санкт-Петербург) СПб ЗИН РАН,-2006 -С 289-290

44 Храброва НВ, Сибатаев А.К, Стегний ВН Молекулярно-генетические маркеры для идентификации представителей комплекса Culex pipiens (Diptera, Culicidae) // Материалы I Всероссийского совещания по кровососущим насекомым (24- 27 октября 2006 г, Санкт-Петербург) - СПб ЗИН РАН - 2006 - С 211-213

45 Шабанова Ю В, Сибатаев А К, Стегний В Н Морфологическая и цитогенетическая характеристика малярийного комара Anopheles beklemishevi Stegnn et Kabanova // Медицинская паразитология и паразитарные болезни - 2007 - №1 С 33-37

46 Сибатаев А К, Шабанова Ю В Малярийные комары Республики Кыргызстан // Вестник Томского государственного университета - 2007 - №296 март -С 227-231

47 Сибатаев А К Андреева Ю В Морфология малярийных комаров комплекса Anopheles macuhpenms на территории России // В кн Научно-практическое руководство по малярии (эпидемиология, систематика, генетика) - 2007 - С 146185

48 Шабанова Ю В, Сибатаев А К Изменчивость морфологии класпет гипопигиев самцов малярийных комаров комплекса Anopheles macuhpenms // Вестник Томского государственного университета - 2007 - №300 (11) - С 252256

Тираж 100 Заказ 1160 Томский государственный университет систем управления и радиоэлектроники 634050, г. Томск, пр Ленина, 40

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Сибатаев, Ануарбек Каримович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

КРОВОСОСУЩИХ КОМАРОВ СЕМЕЙСТВА CULICIDAE

1.1 История изучения близкородственных видов в комплексах.

1.1Л Комары комплекса Anopheles maculipennis.

1.1.2 Комары комплекса «Culex pipiens».

1.2 Таксономический статус близкородственных видов в комплексах An.maculipennis и С.pipiens.

1.2.1 Таксономический статус близкородственных видов комплекса An. maculipennis.

1.2.2 Таксономический статус С. ppipiens и Ср. molestus.

1.3 Морфология комаров комплексов Anopheles maculipennis и Culex pipiens.

1.3.1 Фенотипическая изменчивость.

1.3.2 Флуктуирующая асимметрия морфологии.

1.4 Цитогенетические исследования кровососущих комаров.

1.4.1 Цитогенетические исследования малярийных комаров.

1.4.2 Цитогенетические исследования комаров комплекса

Culex pipiens».

1.5 Молекулярные методы популяционной генетики, систематики и филогении.

1.5.1 Изучение повторяющихся последовательностей ДНК методом таксонопринта.

1.5.2 Изоферментный анализ.

1.5.3 Иммунологический анализ.

1.5.4 RFLP-анализ.

1.5.5 Секвенирование.

1.5.6 RAPD-анализ.

1.6 Объекты молекулярной систематики и филогении.

1.6.1 Митохондриальная ДНК.

1.6.2 Рибосомальная ДНК.

1.7 Экология личинок малярийного комара.

1.8 Пищевое поведение личинок кровососущих комаров.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА.

ГЛАВА 3. ФЕНОТИПИЧЕСКАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ

КРОВОСОСУЩИХ КОМАРОВ.

3.1 Изменчивость фенотипа stripe у личинок малярийных комаров в природных водоемах.

3.2. Изменчивость количественных признаков личинок.

3.3 Изменчивость морфологии класпет гипопигиев самцов малярийных комаров комплекса Anopheles maculipennis.

3.4 Морфологическая изменчивость видов комплекса «C.pipiens».

ГЛАВА 4. МОРФОЛОГИЯ МАЛЯРИЙНЫХ КОМАРОВ

КОМПЛЕКСА «ANOPHELES MACULIPENNIS» НА

ТЕРРИТОРИИ РОССИИ

4.1 Anopheles beklemishevi Stegnii and Kabanova, 1976.

4.2 Anopheles artemievi Gordeev et al., 2004.

4.3 Anopheles maculipennis Meigen, 1818.

4.4 Anopheles messeae Falleroni, 1926.

4.5 Anopheles atroparvus Van Thiel, 1927.

4.6 Anopheles melanoon Hackett, 1934.

4.7 Anopheles sacharovi Favre, 1903.

4.8 Anopheles martinius Shingarev, 1926.

4.2 Определительные таблицы диагностики малярийных комаров

ГЛАВА 5. МОЛЕКУЛЯРНЫЙ АНАЛИЗ КОМАРОВ КОМПЛЕКСОВ

ANOPHELES MACULIPENNIS» И «CULEX PIPIENS».

5.1. Сравнение спектров повторяющихся последовательностей ДНК у комаров методом таксонопринта.

5.2 Молекулярно-генетические маркеры для идентификации представителей комплекса Culex pipiens.

5.2.1 RAPD - маркеры.

5.2.2. SCAR - маркеры.

5.2.3 ITS2 регионы рибосомальной ДНК.

5.2.4 Участок генабъединицы I цитохромоксидазы

5.2.5 Второй интрон гена ацетилхолинэстеразы 2.

5.3. Генетическая дифференциация популяций C.p.pipiens,

С.p.molestus и С. torrentium умеренных широт.

5.4 Распространение C.torrentium и С. p.pipiens на территории

Томской области и Республики Казахстан.

ГЛАВА 6. ПИЩЕВОЕ ПОВЕДЕНИЕ ЛИЧИНОК И ЕГО ВЗАИМОСВЯЗЬ С МОРФОЛОГИЧЕСКИМИ И ГЕНЕТИЧЕСКИМИ ПАРАМЕТРАМИ.

6.1 Хромосомный полиморфизм малярийного комара An.messeae

6.2 Морфологический анализ параметров головы и антенны у личинок двух видов малярийных комаров из различных биотопов Западной Сибири и Средней Азии.

6.3 Изменчивость морфологических характеристик головы личинок в зависимости от хромосомного инверсионного полиморфизма

6.4 Пищевое поведение личинок и его связь с морфологическими параметрами.

6.5 Взаимосвязь скорости поглощения пищи личинками малярийных комаров с их инверсионными генотипами.

ГЛАВА 7 МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ БЛИЗКОРОДСТВЕННЫХ ВИДОВ

КРОВОСОСУЩИХ КОМАРОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Филогения и таксономический статус близкородственных видов кровососущих комаров р.р. Anopheles Meigen и Culex Linnaeus фауны России и сопредельных территорий"

Кровососущие комары семейства Culicidae являются одной из наиболее интенсивно изучаемых групп насекомых в связи с их эпидемиологической значимостью как переносчиков малярии, желтой лихорадки, лихорадки Денге, энцефалитов и других трансмиссивных болезней.

На примере многих видовых комплексов показано, что даже близкородственные виды кровососущих комаров обладают различной способностью к переносу поражающих человека трансмиссивных болезней, различной антропофильностью, различной широтой ареала и численностью, что придаёт им разную эпидемическую значимость. Точная идентификация видов является важной как для фундаментальных, так и для прикладных исследований. Это особенно необходимо для переносчиков заболеваний при проведении широких кампаний по регуляции их численности. Проблемы в классической таксономии близкородственных видов заключаются не только в сильном морфологическом сходстве между ними, но также и в выраженной морфологической изменчивости в пределах вида.

Решение сложных таксономических ситуаций требует комплексного подхода, который включает морфологические, молекулярные, цитогенетические и экологические исследования. Известно, что виды-двойники комплексов часто отличаются по способности переносить опасные болезни, поэтому идентификация видов этих комплексов важна для прогнозирования распространения заболеваний.

Особый интерес представляют виды-двойники малярийных комаров, объединяемых в комплекс "Anopheles maculipennis". Этот комплекс занимает огромную территорию Голарктики и является интересным объектом для решения вопросов филогенеза, видообразования и таксономии (Kitzmiller et al., 1967, Стегний, 1991). Комары комплекса «Culex pipiens» также представляют большой научный и практический интерес. Высокая экологическая пластичность, сложная таксономическая структура и характер взаимоотношений между членами комплекса привлекают постоянное внимание исследователей (Laven, 1967; Виноградова, 1997).

Несмотря на достаточно хорошую морфо-экологическую (Беклемишев, 1944; Мончадский, 1951) и цитогенетическую изученность (Frizzi, 1947, 1953; Kitzmiller et al., 1967; Стегний, и др., 1976; Стегний, 1979), виды комплекса "maculipennis" можно идентифицировать в основном по структуре политенных хромосом или морфологии яиц, а также по молекулярным данным, что затрудняет решение научных и практических вопросов. Виды и формы комплекса Culex pipiens трудно идентифицировать по структуре политенных хромосом: их диагностика возможна только молекулярными методами. По личинкам С. torrentium и С. p. pipiens не различимы, определение ведется только по самцам, диагностическое значение имеют особенности строения гипопигия (Service, 1968; Виноградова, 1997).

Определение видов-двойников должно основываться на комплексе признаков: морфологических, экологических, этологических, генетических, что предполагает необходимость комплексных исследований. Комплексный подход особенно актуален применительно к близкородственным видам для оценки эколого-генетических принципов адаптации популяций и видов к условиям обитания. Обычная идентификация видов на основе фенотипа (морфотипа) является самым дешевым, быстрым и простым методом (White, 1977).

Цель работы: Анализ филогенеза и характера морфо -физиологической адаптации и эволюции видов на основе исследования морфологической, цитогенетической и молекулярно-генетической дифференциации близкородственных видов комплексов «Anopheles maculipennis» и «Culexpipiens».

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Изучить фенотипическую изменчивость в природных популяциях кровососущих комаров близкородственных видов комплексов «Anopheles maculipennis» и «Culexpipiens».

2. Провести морфологическое описание близкородственных видов и составить определительные таблицы.

3. Выявить морфологические признаки для идентификации видов в онтогенезе в соответствии с хромосомной структурой видов.

4. Выяснить молекулярно-генетическую дифференциацию видовых популяций в комплексах «Anopheles maculipennis» и «Culex pipiens» с помощью метода таксонопринта путём сравнительного анализа повторов геномной ДНК.

5. Осуществить поиск молекулярно - генетических маркеров для идентификации представителей комплекса «Culex pipiens» и оценки их внутри - и межвидовой изменчивости.

6. Выявить молекулярно-генетическую внутри- и межвидовую изменчивость и дивергенцию у членов комплекса «Culex pipiens».

7. Выяснить адаптационные признаки по физиологическим параметрам у малярийных комаров.

8. Провести анализ филогенетических связей в комплексе «Anopheles maculipennis» на основе хромосомных, молекулярных и морфологических показателей.

Научная новизна. Выявлена фенотипическая изменчивость в географически удаленных популяциях кровососущих комаров p.p. Anopheles и Culex. Впервые показано, что фенотипическая изменчивость коррелирует со степенью хромосомной изменчивости. Впервые проведено морфологическое описание комаров An.beklemishevi и An.artemievi, выявленных ранее цитогенетическими и молекулярными методами. Проведен сравнительный морфологический анализ видов-двойников р. Anopheles.

По результатам анализа спектров повторяющихся последовательностей ДНК у кровососущих комаров получены новые данные о межвидовой и межродовой изменчивости геномов Anopheles, Culex по составу семейств повторяющихся ДНК.

Выявлены различия в чувствительности к патогену Bti у личинок комаров An.messeae и An.beklemishevi с различными фенотипическими, физиологическими, весовыми и размерными параметрами и показано, что чувствительность комаров к патогену существенно различается в зависимости от вариаций этих параметров. Изучена генетическая детерминация физиологического параметра - скорости поглощения пищи личинками. Показано, что особи с разными хромосомными вариантами имеют различия по этим физиологическим параметрам.

Впервые проведенное изучение ряда близкородственных видов комплекса "maculipennis" по многим морфологическим признакам позволило провести реконструкцию филогенеза и установить соответствие характера эволюции морфологических признаков с ранее полученными данными по хромосомному и гибридологическому анализу (Стегний, 1991).

Практическая значимость. Впервые уточнен видовой состав малярийных комаров России, Средней Азии и Казахстана. Составлены определительные таблицы на различных стадиях развития малярийных комаров в азиатской части России и сопредельных территориях, что важно для практических энтомологов. Впервые были найдены видоспецифичные RAPD - маркеры для идентификации Culex torrentium. Определена нуклеотидная последовательность RAPD - праймеров. Показано, что ПЦР с использованием SCAR - праймеров является простым, быстрым и надежным методом идентификации С. torrentium. Полученные данные по пищевому поведению личинок необходимы при обработке биопрепаратами с целью регулирования численности комаров. Полученные результаты по фенотипической изменчивости дают информацию для различных биомониторинговых и других экологических исследований.

Апробация результатов. Материалы работы представлены: на конференции «Проблемы экологии Томской области», Томск, апрель 1992 г.; на региональной научно-практической конференции (Томск, 1994); на I съезде ВОГиС, декабрь, 1994, г. Саратов; на 10 th. European SOVE Meeting,

Strasbourg, 1996); на XX International Congress of Entomology (Firence, Italy, 1996); на I научной конференции Новосибирского отделения Паразитологического общества РАН «Паразиты и паразитарные болезни в Западной Сибири» (Новосибирск. 1996); на II En Gebi Conference on bacterial control of agricultural insect pests and vectors of human diseases (Shoresh, Israel,

1996); на I международном симпозиуме «Эволюция жизни на земле» (Томск,

1997); на XI энтомологическом съезде (Санкт-Петербург, 1997); на конференции «Проблемы эволюционной цитогенетики, селекции и интродукции» (Томск, 1997); на VI Всероссийском диптерологическом симпозиуме «Место и роль двукрылых насекомых в экосистемах» (Санкт-Петербург, 1997); на научной конференции «Проблемы энтомологии в России» научной конференции «Биологическое разнообразие животных Сибири» (Томск, 1998); на I Международной конференции «Биоразнообразие и динамика экосистем Северной Евразии» (Новосибирск, 2000); на I, II и III Международных конференциях «Проблема вида и видообразование», Томск (2000, 2001, 2004); на I Международной Школе-семинаре «Кровососущие насекомые - переносчики трансмиссивных заболеваний и проблемы генетической безопасности» (Москва, 2002); на XII Съезде Русского энтомологического общества (2002); на П1 Съезде Вавиловского общества генетиков и селекционеров, Москва (2004); VII Межрегиональном совещании энтомологов Сибири и Дальнего Востока «Энтомологические исследования в Северной Азии» (Новосибирск,

2006); на I Всероссийском совещании по кровососущим насекомым (Санкт-Петербург, 2006); ХШ съезде Русского энтомологического общества (Краснодар,

2007).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 48 работы (среди них 19 статей, из которых 17 в рецензируемых журналах, входящих в перечень ВАК), 1 находится в печати.

Положения, выносимые на защиту:

1. Фенотипическая изменчивость характерна для разных видов кровососущих комаров. Большей фенотипической изменчивостью отличаются полиморфные по хромосомному составу виды кровососущих комаров по сравнению с мономорфными видами. Флуктуирующая асимметрия количественных признаков малярийных комаров варьирует под действием неблагоприятных факторов (патогеная микрофлора) и зависит от хромосомной структуры популяции.

2. В популяциях С. p. pipiens L. 1758,, С. p. molestus Fors., 1775 и С. torrentium Mart., 1924 умеренных широт существует генетическая дифференциация по геномной ДНК. В природных популяциях видов комплекса «C.pipiens» отсутствуют гибридные формы. В зонах симпатрии природных популяций между С. p. pipiens, С. p. molestus и С. torrentium отсутствует гибридизация. Личинки комаров С. p. pipiens и С. torrentium, обитающих совместно в открытых водоемах, имеют большее морфологическое сходство между собой, чем с С. p. molestus, обитающим в основном в закрытых помещениях.

3. У кровососущих комаров комплексов «An.maculipennis» и «C.pipiens» спектры повторяющихся последовательностей ДНК отличаются разнообразием в организации повторов и низким содержанием общих фракций.

4. Близкородственные виды комаров комплекса «An.maculipennis» имеют разную степень сходства по морфологическим признакам. Виды, находящиеся в одной филетической линии ближе по морфологии, чем в разных линиях. Характер эволюции морфологических признаков у видов комплекса «maculipennis» соответствует филогенетической схеме, предложенной ранее на основе гибридологического и хромосомного

Заключение Диссертация по теме "Зоология", Сибатаев, Ануарбек Каримович

Выводы

1. Выявлена фенотипическая изменчивость в популяциях кровососущих комаров p.p. Anopheles, Culex. Показано, что она коррелирует со степенью хромосомной изменчивости. Выявлен фенотипический признак "флуктуирующая асимметрия" в популяциях личинок An. messeae. Виды комаров комплекса «Culex pipiens» статистически различаются по фенотипам.

2. Сравнительный морфологический анализ видов-двойников позволил уточнить видовой состав палеарктической группы «Anopheles maculipennis». Впервые описаны по морфологии виды An. beklemishevi и An.artemievi. Составлены определительные таблицы по морфологии на различных стадиях развития для видов комплекса «Anopheles maculipennis».

3. Анализ спектров повторяющихся последовательностей ДНК у кровососущих комаров показал межвидовую и межродовую изменчивость геномов Anopheles, Culex по составу семейств повторяющихся ДНК. Показано, что видоспецифичная фракция на таксонопринте An. messeae представляет собой тандемный повтор с длиной мономера около 53 п.н. Разнообразие в организации повторов в пределах одного семейства и низкое содержание общих фракций отличает Culicidae от всех изученных ранее групп организмов.

4. Впервые были найдены видоспецифичные RAPD - маркеры для идентификации Culex torrentiurn. Определение нуклеотидной последовательности RAPD - фрагментов позволило создать специфичные SCAR - праймеры. ПЦР с использованием SCAR - праймеров является простым, быстрым и надежным методом идентификации С. torrentiurn. Показано, что эти маркеры позволяют идентифицировать особей С. torrentiurn, в то время как С. p. pipiens и С. p. molestus идентичны по этим маркерам. Выявлено соответствие результатов при использовании различных типов молекулярно - генетических маркеров. Впервые предложен способ идентификации гибридных особей от скрещивания С. torrentium и С. р. molestus.

5. Анализ изменчивости RAPD - маркеров в популяциях С. p. pipiens, С. p. molestus и С. torrentium из г. Томска, Томской области и Республики Казахстан, позволил сделать вывод о генетической дифференциации С. torrentium, С. p. pipiens и С. p. molestus и об отсутствии природной гибридизации между ними в районе проведенных исследований. Кроме того, показано, что в открытых личиночных биотопах (Томская область и Республика Казахстан) доминантным видом является С. torrentium', личинки С. p. pipiens встречаются с небольшой частотой.

6. Изучение детерминации физиологического параметра - скорости поглощения пищи личинками - показало, что особи малярийных комаров с разными хромосомными вариантами имеют различия по этим физиологическим параметрам. В популяциях личинок малярийных комаров скорость фильтрации у самцов выше, чем у самок.

7. Проведенный анализ эволюции близкородственных видов малярийных комаров по морфологическим признакам позволил уточнить филогению комплекса "maculipennis". Данные по морфологическим признакам соответствуют филогенетической схеме, составленной ранее на основе гибридологического и цитогенетического анализа.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Сибатаев, Ануарбек Каримович, Томск

1. Алтухов Ю.П., Рычков Ю.Г. Популяционные системы и их структурные компоненты. Генетическая стабильность и изменчивость // Журн. общ. биологии. 1970. - Т. 31, № 5. - С. 507.

2. Алтухов Ю.П. Генетические процессы в популяциях М.: Наука. 1983.279 с.

3. Алтухов Ю.П., Салменкова Е.А. Полиморфизм ДНК в популяционной генетике // Генетика. 2002. - Т. 38, № 9. - С. 1173 - 1195.

4. Андреева Ю.В., Сибатаев А.К., Русакова A.M., Стегний В.Н. Морфо-цитогенетическая характеристика малярийного комара Anopheles artemievi (Diptera: Culicidae) комплекса maculipennis II Паразитология. T.41 - вып. 5 - 2007.

5. Антипин М.И., Имашева А.Г. Генетическая изменчивость и флуктуирующая асимметрия морфологических признаков Drosophila melanogaster при развитии на среде, содержащей пестицид// Генетика Т.37-№3.-2001.-С. 325-331.

6. Астауров БЛ. Исследования наследственного изменения галтеров у Drosophila melanogaster // Журн. экспер. биол. Сер.А. Т.З.- 1927. - вып. 1/2. -С.1-61.

7. Астауров Б.Л. К итогам моей научной деятельности в области генетики // Историко-биологические исследования/ М.: Наука. -1978. вып.6.- С. 116-160.

8. Баранова A.M. Эпидемиология малярии // Научно-практическое руководство по малярии (эпидемиология, систематика, генетика) / Под ред. В.Н.Стегния. Томск, 2007. - С. 4-28.

9. Беклемишев В.Н. Экология малярийного комара. М.: Медгиз. 1944.299 с.

10. Беклемишев В.Н. Виды Anopheles СССР и сопредельных стран Азии, их распространение и участие в переносе малярии // Мед. паразит, и паразитар. болезни. 1948. - Т. 17. - вып.З. - С. 201-209.

11. Беклемишев В.Н. Биоценологические основы сравнительной паразитологии. М.:Наука. - 1970. - 502 с.

12. Беклемишев В.Н.,Желоховцев А.Н. Географическое распространение обыкновенного малярийного комара (Anopheles maculipennis) и его подвидов в пределах СССР // Мед. паразит, и паразитар. болезни. 1937. - Т.6. вып.6. - С. 819-835.

13. Беклемишев В.Н.,Желоховцев А.Н. Ареалы некоторых видов Anopheles в СССР и причины, их обуславливающие // Бюл. МОИП, T.L вып. 1-2. - 1945. -С. 56-73.

14. Бигон М., Харпер Дж., Таусенд К. Экология. Особи, популяции и сообщества. М.: Мир. 1989. Т.1. - 667 с.

15. Бигон М., Харпер Дж., Таусенд К. Экология. Особи, популяции и сообщества. М.: Мир. 1989. - Т.2. - 447 с.

16. Борейко Т.А., Коржов В.М., Костюченко И.П., Царичкова Д.Б. Характер действия бактокулицида на кровососущих комаров // Тез. докл. IX съезда ВЭО.-Киев: Наук, думка, 1984, ч.1.-с.64.

17. Борейко Т.А., Костюченко И.П. Изучение действия и последействия бактокулицида на личинок Aedes aegypti (L.) // Киевский ун-т, Киев, 1988. 9с. - Рук.-Деп. в УкрНИИНШ 04.01.88, №.42-Ук88.

18. Бурлак В. А., Гордеев М. И. Клоновые особенности действия Bacillus thuringiensis подвида israelensis на личинок малярийного комара Anopheles messeae Fall, с разными кариотипами // Сиб. экол. журн. 1995. - №5. - С. 432 -437.

19. Бурлак В.А., Гордеев М.И. Влияние плотности на чувствительность личинок малярийных комаров с разными кариотипами к кристаллообразующей бактерии в популяциях севера ареала // Экология. -1996. -№ 2. С. 125-131.

20. Бурлак В.А., Сибатаев А.К. Абсолютная и относительная чувствительность личинок двух видов малярийных комаров из природных популяций к Bacillus thuringiensis israelensis и Bacillus thuringiensis fukuokaensis // Сиб. экол.журн. 1995. - № 5. - С. 448-456.

21. Бурлак В.А., Сибатаев А.К. Скорость поглощения пищи и ее связь с морфометрическими показателями у личинок двух видов малярийных комаров (Diptera; Culicidae) // Экология. 1998. - № 1. - С. 55-61.

22. Бурлак В.А., Сибатаев А.К., Перевозкин В.П., Гордеев М.И. Взаимосвязь скорости поглощения пищи личинками двух видов малярийных комаров (Diptera; Culicidae) с их инверсионными генотипами // Экология. 1999. - № 5. -С. 379-381.

23. Веренич С.В. Флуктуюрующая асимметрия как маркер фенотипической адаптивности (модель неврологических проявлений поясничного остеохондроза) // Онтогенез. 1996. - Т.27. - №2, - С. 137-140.

24. Виноградова Е. Б. О биологической обособленности подвидов Culex pipiens L. (Diptera, Culicidae) // Энтомол. обозрение. 1961. - Т. 40, вып. 1. - С. 63-75.

25. Виноградова Е.Б. Наследование морфологических признаков при гибридизации в комплексе Culex pipiens L. (Diptera: Culicidae) // Тр. ЗИН АН СССР. 1965. - Т. 36. - С. 58 - 69.

26. Виноградова Е.Б. Кровососущие комары комплекса Culex pipiens L. (Diptera, Culicidae), их практическое значение, систематика и биология // Энтомол. обозрение. 1966. - Т. 45, вып. 2. - С. 241 - 257.

27. Виноградова Е.Б. Комары комплекса Culex pipiens в России (таксономия, распространение, экология, физиология, генетика, практическое значение и контроль). СПб.: Изд - во Зоологического института РАН. - 1997. - 307 с.

28. Виноградова Е.Б. Городской комар // Природа. 2003. - № 12. - С. 3 - 11.

29. Виноградова Е.Б., Шайкевич Е.В. Дифференциация городского комара Culex pipiens pipiens f. molestus и Culex torrentium (Diptera: Culicidae) молекулярно генетическими методами II Паразитология. - 2005. - Т. 39, № 6-C. 574 - 576.

30. Виноградская O.H. К нахождению Culex torrentium Mart. {Culex exilis Dyar) в Подмосковье // Мед. паразитол. 1970. - Т. 39, № 4. - С. 502 - 504.

31. Внуковский В.В. Материалы по фауне и биологии комаров (Culicidae) Томского округа // Сиб. мед. журн. 1926. - № 2- С.17-26.

32. Внуковский В.В. К познанию фауны двукрылых (Diptera) Каменского округа (Западная Сибирь) //Изв. Зап.-Сиб. гос. музея. Омск. 1928. - №1. вып.81. - С.85-86.

33. Грант В. Эволюция организмов. М.:Мир. 1980. - 407 с.

34. Гаврилец С.Ю. Эволюция модификациониой изменчивости в случайных внешних условиях //Журн.общ. биол. T.XLIX, №2, - 1988. - С. 271-276.

35. Ганушкина Л.А., Войцик А.А. Чувствительность разных видов и разных стадий личинок комаров к бактериальным препаратам // Мед. паразитол. -1986. №.6. - С.55-58.

36. Гинатулин А. А., Гинатулина Л.К., Калина А.Г., Кораблев В.П. Обнаружение тандемных повторов в геномах сусликов рода Citellus с помощью рестриктаз // Молекулярная биология. 1988. - Т. 22. - Вып. 4. - С. 1005-1014.

37. Глотов Н.В., Тараканов В.В. Норма реакций генотипа и взаимодействие генотип-среда в природной популяции // Журн.общ. биол. T.XLVI. - №6. -1985.-С. 813-823.

38. Гоженко В.А., Титова Л.М. О влиянии экологических факторов на соотношение полов у некоторых видов комаров (Culicidae) // Экология. 1982. -№5.-С. 85-88.

39. Гордеев М.И., Бурлак В.А. Структура популяции и устойчивость личинок малярийного комара Anopheles messeae (Diptera,Culicidae) к кристаллообразующей бактерии Bacillus thuringiensis subsp. israelensis // Зоол. журн. 1992. - T.71. -N11. - C.69-76 .

40. Гордеев М.И.,Бурлак В.А. Инверсионный полиморфизм малярийного комара Anopheles messeae. Сообщение XI. Групповой эффект при инфицировании личинок бактерией Bacillus thuringiensis subsp. israelensis // Генетика. 1992. -T.28. - №7 - С. 82-88.

41. Гордеев М.И., Званцов А.Б., Горячева И.И., Шайкевич Е.В., Ежов М.Н. Описание нового вида Anopheles artemievi sp.n.U Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2005. - №2. - С. 4-5.

42. Гордеев М.И., Сибатаев А.К. Влияние хищного растения пузырчатки Utricularia vulgaris на процессы отбора у личинок малярийных комаров // Экология. 1995. - №3. - С.245-249.

43. Гордеев М.И., Сибатаев А.К. Возрастной отбор и способность к каннибализму у личинок малярийных комаров с разными кариотипами // Генетика. 1995. - Т.31. - №5. - С.655-661.

44. Гордеев М.И. Сибатаев А.К. Цитогенетическая и фенотипическая изменчивость в центральных и периферийных популяциях малярийного комара Anopheles messeae Fall. (Diptera, Culicidae) // Генетика. 1996. - Т. 32. - № 9. -С. 1199-1205.

45. Гордеев М.И.,Стегний В.Н. Инверсионный полиморфизм малярийного комара Anopheles messeae. Сообщение VIIL Распределение личинок в биотопах в условиях совместного обитания с Anopheles beklemishevi // Генетика.- 1989. -Т.25. -№2. С. 283-291.

46. Гордеев М.И., Стегний В.Н. Инверсионный полиморфизм малярийного комара Anopheles messeae. Сообщение VII. Плодовитость и популяционно-генетическая структура вида // Генетика. 1987.- Т.23. №12. - С.2169-2174.

47. Горностаева P.M., Данилов А.В. Об ареалах малярийных комаров (Diptera: Culicidae: Anopheles) комплекса maculipennis на территории России // Паразитология. Т.36. - Вып.1 2002. - С.33-47

48. Грант В. Эволюционный процесс: Критический обзор эволюционной теории. М.: Мир, 1991 .-488с.

49. Гречко В.В. Молекулярные маркеры ДНК в изучении филогении и систематики // Генетика. 2002. - Т. 38, № 8. - С. 1013 - 1033.

50. Гречко В.В., Рябинин Д.М., Федорова Л.В., Федоров А.Н., Даревский С.И., Рысков А.П. Таксонопринтный анализ ДНК некоторых видов ящериц семейства Lacertidae // Молекулярная биология. 1993, т. 27, вып. 6. С. 14041412.

51. Гундерина Л.И., Салина Е.А. полиморфизм и дивергенция мультилокусных маркеров ДНК у видов двойников Chironomus riparius Meigen и Chironomus piger Strenzke (Diptera, Chironomidae) // Генетика. - 2003-T. 39, № 8. - C. 1059-1065.

52. Гуцевич A.B., A.M. Дубицкий Новые виды комаров фауны Советского Союза //Паразитол. сб. 1981. - Т. 30. - С. 97-165

53. Гуцевич А.В., Мончадский А.С., Штакельберг А.А. Комары (семейства Culicidae).- В кн: Фауна СССР. Насекомые двукрылые. Т.З. вып. 4, Л.: Наука. -1970.-384 с.

54. Данилов В.Н. Комары (Diptera, Culicidae) Афганистана. Сообщение 2. Определительная таблица личинок IV стадии // Паразитол. и паразитар. болезни. 1985.-вып.4.-С. 51-55.

55. Денисова З.М. Изменчивость гипопигиев An.maculipennis messeae в популяции Марбумстроя (Марийская АССР) / В сб. «Вопросы физиологии и экологии малярийных комаров». 1940. - С. 113-119

56. Денисова З.М. Материалы по изучению вариаций гипопигиев самцов Ап. maculipennis atroparvus Thiel и An. maculipennis sacharovi Favre // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1948. Т. 17, №3. С. 221 227

57. Дубинин Н.П. Экспериментальное исследование интеграции наследственных систем в процессах эволюции популяций// Журн. общ. биол. -1948. Т.9. - № 3. - С. 203-244.

58. Денисова З.М. Вариации гипопигиев самцов некоторых подвидов малярийного комарами, maculipennis II Энтомологическое обозрение. 1964. -Т.43.-№4.-С. 815-822

59. Дубицкий A.M. Кровососущие комары (Diptera: Culicidae) Казахстана. -Алма Ата: Изд-во «Наука» Казахской ССР. - 1970. - 222 с.

60. Животовский Л.А. Интеграция полигенных систем в популяциях / М.: Наука. 1984. 182 с.

61. Захаров В.М. Флуктуирующая асмметрия билатеральных структур животных в природных популяциях: автореф. дисс.канд. биол. наук/ М.: Ин-т биологии и развития АН СССР, 1979. 19 с.

62. Захаров В.М. Асимметрия животных. М.: Наука. 1987. - 216 с.

63. Захаров В.М. Влияние температуры на стабильность развития линии тутового шелкопряда (Bombix mori), различающихся по уровню гетерозиготности// Генетика. 1995. - Т.31. - С. 1254-1260.

64. Захаров В.М., Щепоткин Д.В. Влияние температуры на стабильность развития линий тутового шелкопряда (Bombix mori), различающихся по уровню гетерозиготности // Генетика. Т. 31. - №9. - 1995. - С. 1254-1260.

65. Звягинцев С.Н. К вопросу об избирательной способности самок анофелес при откладке яйц и судьба яиц, отложенных в водоемах различной степени солености//Мед. пар. ипаразитарн. болезни, 1939. -Т.8 -вып.2. С. 181-188.

66. Ивницкий С.Б. Преобразование количественных признаков в процессе дивергенции в роде Aedes (Diptera:Culicidae)II Зоол. журн. Т.73. - вып. 12. -1994.-С.71-80.

67. Ивницкий С.Б., Тамарина Н.А., Креславский А.Г. Изменчивость числа зубцов в гребне сифона в лабораторной популяции Aedes caspius caspius и ее связь с экологией особей // Зоол.журн 1984. - Т. XLIII. - вып.5. - С.687-695.

68. Кабанова В.М., Карташова Н.Н., Стегний В.Н. Кариологические исследования природных популяций малярийного комара в Среднем Приобъе. I. Характеристика кариотипа Anopheles maculipennis messeae // Цитология. -1972а,-№5.-С. 630-636.

69. Кабанова В.М., Карташова Н.Н., Стегний В.Н. Кариологические исследования природных популяций малярийного комара в Среднем Приобъе. II. Хромосомный полиморфизм Anopheles maculipennis messeae // Цитология. -19726.-№8.-С. 1027-1036.

70. Камшилов М.М. О фенотипической изменчивости в популяциях и биотопах // Биол. журн. 1935. - Т.4. - № 2. - С. 385-400.

71. Камшилов М.М. Роль фенотипа в эволюции // Генетика. 1967. - №12. -С. 108-116.

72. Карпович А.И., Добрынина Л.И. Подвидовой состав и биология Anopheles maculipennis в окрестностях Сталинска (Кузнецкий бассейн) // Мед. паразит, и паразитар. болезни. 1941. - Т.10. вып.1. - С. 74-77.

73. Кирпичников B.C. Роль ненаследственной изменчивости в процессе естественного отбора // Биол. журн. 1935. - Т.4. - № 5. - С.775-801.

74. Киселева Е.Ф. Материалы по фауне Culicidae Сибири // Мед. паразитол. и паразитар. болезни. 1936. - T.V. - вып.2. - С.220-240.

75. Киселева Е.Ф. К фауне комаров Тазовой губы// Русск.гидробиол. журн. -1927. -T.VL-C.11-12.

76. Куликов A.M., Мельников А.И., Горностаев Н.Г., Митрофанов В.Г. Дивергенция видов дрозофил группы virilis по форме фаллуса // Доклады академии наук. 2001. - Т.376. - №6. - С. 841 - 843

77. Куприяшкин А.Г., Николаева Н.В. Фенология развития и лёта кровососущих комаров в лесотундре Таймыра // Пространственно-временная организация энтомокомплексов Субарктики. Свердловск. 1990. С. 19-30.

78. Кухарчук Л.П. Экология кровососущих комаров (Diptera: Culicidae) Сибири. Новосибирск: Наука, 1981. - 232 с.

79. Левонтин Р. Генетические основы эволюции. М.: Мир, 1978. 351с.

80. Лопатин О.Е. Комары Culex pipiens: электрофоретическая изменчивость ферментов // Сибирский эколог, журнал. 2000. - № 4. - С. 461 - 475.

81. Майр Э. Зоологический вид и эволюция. М.: Мир. 1968. 597 с.

82. Майр Э. Популяция, виды и эволюция. М.: Мир. 1974. 460 с.

83. Макгрегор Г., Варли Дж. Методы работы с хромосомами животных. -М.:Мир, 1986.-272 с.

84. Мамедниязов О. Таксономия переносчиков малярии в странах Европейского региона / Материалы совещания стран, столкнувшихся с проблемой возврата малярии. Алма-Ата, Казахстан. - 2001. - С. 21-38.

85. Маркович Н.Я., Артемьев М.М., Дарченкова Н.Н. Видовой состав и географическое распространение основных переносчиков малярии комаров комплекса An. maculipennis в России. 2003. http ://lib2005 .rat-info.ru/sostavJkomarov3.shtml

86. Маслов А.В. Кровососущие комары подтрибы Culisetina мировой фауны. -Л.: Наука, 1967. 182 с.

87. Маслов А.В. Материалы по экологии развития кровососущих комаров. Сообщение 3. Выживаемость в ходе развития у комаров группы Culiseta // Зоол.журн. 1961 а. - T.XL. вып.4. - С. 616-619.

88. Маслов А.В. Материалы по экологии развития кровососущих комаров. Сообщение 6. Условия питания и ротовые органы личинок комаров группы Culiseta // Зоол.журн. 19616. - T.XL. вып.6. - С.865-871.

89. Маслов А.В. О зимовках Anopheles maculipennis Mg. в г. Томске // Сиб. мед. журн. — 1929. — № 11.-С. 3-14.

90. Маслов А.В. Условия существования и нормы поведения личинок Culiseta begrothi Edw. (Diptera, Culicidae)// Зоол. журн. 1964. - Т. 43. - № 6.-С. 859-871.

91. Медников Б.М., Банникова А.А., Ломов А.А., Мельникова М.Н., Шубина Е.А. Рестриктазный анализ повторяющейся ядерной ДНК, критерий вида и механизм видообразования // Молекулярная биология. 1995. - Т. 29. - вып. 6. - С.1308-1319.

92. Митрофанов В. Г. Некоторые аспекты генетики насекомых // Итоги науки и техники, ВИНИТИ, сер. Энтомология, 1990, - №10, - С.5-95.

93. Мончадский А.С. Личинки комаров (сем. Culicidae) СССР и сопредельных стран. М - Л.: Изд-во АН СССР, 1936. - 383 с.

94. Мончадский А.С. Личинки кровососущих комаров СССР и сопредельных стран (подсем. Culicinae) / Серия: Определители по фауне СССР. М - Л.: Изд-во АН СССР. - 1951. - 290 с.

95. Некрасова Л.С. Экологический анализ перенаселенности личинок кровососущих комаров. Свердловск: УрО АН СССР, 1990. - 123 с.

96. Николаева Н.В. Потребление пищи и биомасса личинок северных популяций кровососущих комаров / В кн.: Эколог. Оценка энег. Баланса животных. Свердловск. 1980. - С.19-28.

97. Николаева Н.В. Соотношение факторов динамики численности северных популяций кровососущих комаров // Регуляция численности и плотности популяций животных в Субарктике. Свердловск. 1986. С.26-54.

98. Николаева Н.В., Гилев А.В., Куприяшкин А.Г. Изменчивость количественного признака в экологически дифференцированных популяциях кровососущих комаров // Фенетика природных популяций/ Тез. докл. Всесоюзн.совещ., Борок, ноябрь, 1990. - М., 1990 - С.199-200.

99. Николаева Н.В. Адаптивные изменения в популяциях и сообществах кровососущих комаров Материалы I Всероссийского совещания покровососущим насекомым. (24 .- 27 октября 2006 г., Санкт-Петербург). СПб.: ЗИН РАН. 2006. - С. 136-139.

100. Новиков Ю.М. Дифференциация кариофонда малярийного комара Anopheles messeae, ее характер и функции // В кн.: Проблемы популяционной и эволюционной цитогенетики растений и животных / Под ред. Пегеля В.А., Изд-во Томского ун-та, Томск, 19806-С.63-76.

101. Новиков Ю.М., Алексеев А.Н. О северо-восточной границе ареала Anopheles maculipennis и юго-западной Anopheles beklemishevi // Мед. паразитол. и паразитар. болезни. - 1989. - № 1. - С.14-16.

102. Новиков Ю.М., Гордеев М.И. Циклические изменения соотношения численности видов-двойников Anopheles messeae и A. beklemishevi на юге Западной Сибири // Зоол. журн. 1983. - Т.62. - №.7. - С. 1026-1032.

103. Новиков Ю.М., Гордеев М.И., Гаденова Е.В. Экологическая дифференциация личинок Anopheles messeae, A. beklemishevi и A.maculipennis // Зоол. журн. -1983. -Т.62. -№ 12.-С.1818-1826.

104. Новиков Ю.М.,Кабанова. Адаптивная ассоциация инверсий в природной популяций малярийного комара Anopheles messeae Fall.// Генетика. 1979. -Т. 15.-№6.-С. 1033-1044.

105. Новиков Ю.М., Шевченко А.И., Ваулин О.В. О молекулярно-генетической дивергенции критических видов таксона Anopheles messeae (Diptera: Culicidae) и филогении комплекса maculipennis // Вестник Томского гос. университета. -2004. №10. - С.69-77.

106. Олифан В.И. О количественном методе, применяемом нами в полевых исследованиях экологии личинки An.maculipennis / В кн.: Экология личинки малярийного комара. М., 1934. С.106-108.

107. Перевозкин В.П., Лукьянцев С.В., Гордеев М.И. Сравнительный анализ пищедобывакмцего поведения водных и полуводных пауков Argyroneta, Dolomedes, Pirata, Pardosa II Экология. 2004. - № 2. - С. 103-109.

108. Пестрякова Т.С. Закономерности поля тяготения анофелес в связи с биологическими предпосылками эпидемиологии и профилактики малярии. Автореф. канд. дис. Томск. 1955. - с 17.

109. Пианка Э. Эволюционная экология. М.:Мир, 1981. - 400 с.

110. Плешкова Г.Н., Стегний В.Н., Новиков Ю.М., Кабанова В.М. Инверсионный полиморфизм малярийного комара Anopheles messeae. Сообщение III. Временная динамика концентрации инверсий в популяции центра ареала // Генетика. 1978. - Т.14. - №12. - С. 2169-2176.

111. Полуконова Н.В., Морфологическая и хромосомная дифференциация комаров-звонцов (Chironomidae, Diptera) в процессе видообразования: Дис. д-ра биол. наук М., 2006. - 44 с.

112. Попов В.М. Материалы к биологии Anopheles maculipennis в Нарымском округе // Мед. паразит, и паразитар. болезни. 1937. - Т.6. вып.5. -С.696-705.

113. Расницын С.П, Ясюкевич В.В., Войцик А.А. Связь между способом питания личинок малярийных комаров и их устойчивостью к бактериальным препаратам // Мед. паразит, и паразитар. болезни. 1992. - №5. - С.28-30.

114. Расницын С.П., Войцик А.А., Влияние температуры воды на действие бактериальных инсектицидов против личинок комаров // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. №1. - 1993. - С.8-10.

115. Расницын С.П., Ясюкевич В.В. Связь способов питания личинок малярийных комаров с их строением и поведением // Зоол. журн. 1989. -T.LXVIII. вып. 7. - С. 155-157.

116. Рейнгард Л.Д., Топчиев А.Г. Возможность спаривания и скрещивания между различными подвидами Anopheles maculipennis в лабораторных условиях // Мед. паразитол. и паразитар. бол. 1955. - №3. - С. 267-269.

117. Родендорф Б.Б. Историческое развитие двукрылых насекомых. М.: Наука, 1964.-311 с.

118. Рузский М.Д. О малярийном комаре в г. Томске // Газета "Сибирская жизнь". 1915.-№228.

119. Рузский М.Д. Материалы по фауне курорта "Карачинское озеро".- Изв. Томск, ун-та. 1925. T.LXXV.

120. Саура А., Локки Ю., Корвенконтио П., Локки М.-Л., Ултанен И. Генетическая обособленность малярийных комаров Anopheles beklemishevi и

121. Anopheles messeae (Diptera, Culicidae) и их внутривидовой полиморфизм // Генетика.-1979.-Т. 15, № 12. С. 2183 - 2194.

122. Сибатаев А.К., Бурлак В.А., Изменчивость параметров головы и антенны у личинок двух видов малярийных комаров из различных биотопов Западной Сибири и Средней Азии // Сибирский экологический журнал №4. - 2000. - С. 477-483

123. Сибатаев А.К., Гордеев М.И. Морфологический и цитогенетический анализ личинок видов-двойников малярийных комаров Западной Сибири // Сибирский биол.журн. 1993- №2. - С. 3-9.

124. Сибатаев А.К., Шабанова Ю.В. Малярийные комары республики Кыргызстан.// Вестник Томского государственного университета. 2007. Т.296. №3. - С. 227-231

125. Сичинава Ш.Г. Реципрокное скрещивание С. p. pipiens с С. p. molestus, копуляция и соотношение полов родительских и гибридных поколений // Сообщ. АН ГрССР. 1975. - Т. 80, № 3. - С. 733 - 736.

126. Сичинава Ш.Г. Реципрокное скрещивание С. p. pipiens с С. p. molestus, автогенность и плодовитость родительских и гибридных поколений // Сообщ. АН ГрССР. 1976. - Т. 81, № 3. - С. 717 - 720.

127. Соколов Е.П. Анализ повторяющихся элементов геномной ДНК у представителей близких видов птиц // Генетика. 1998. - Т.34. - № 8. - С. 10451048.

128. Стегний В.Н. Выявление хромосомных рас у малярийного комара Anopheles sacharovi II Цитология. 1976. - Т.18. - №8. - С.1039-1041.

129. Стегний В.Н. Проблема систематики малярийных комаров, комплекса Anopheles maculipennis (Diptera, Culicidae). Современные данные цитогенетики / В кн: Кариосистематика беспозвоночных животных. 1979. С. 29-35.

130. Стегний В.Н. Реорганизация структуры интерфазных ядер в онто- и филогенезе малярийных комаров //Доклады АН СССР. Т.249. - №5. - 1979. -С. 1231-1234.

131. Стегний В.Н. Репродуктивные взаимоотношения малярийных комаров Anopheles комплекса maculipennis II Зоол. журнал. 1980. - Т.59. - вып. 10. -С.469-1475.

132. Стегний В.Н. Генетические основы эволюции малярийных комаров. Сообщение I. Хромосомные филогенетические связи // Зоол. журнал. 1981. -Т.60. - вып.1. - С.69-77.

133. Стегний В.Н. Инверсионный полиморфизм малярийного комара Anopheles messeae. Сообщение IV. Стационарность частотного распределения инверсий по ареалу вида // Генетика. 1983. Т. 19. - №3. - С. 466-473.

134. Стегний В.Н. Инверсионный полиморфизм малярийного комара Anopheles messeae. Сообщение V. Взаимодействие разнохромосомных инверсий в пространстве ареала // Генетика. 1983. - Т.19. - №3. - С. 473-482.

135. Стегний В.Н. Эволюционное значение хромосомных инверсий //Журн. общ. биол. 1984. - Т.45. - № 1. - С. 3-15.

136. Стегний В.Н. Популяционная генетика и эволюция малярийных комаров. Томск: Изд - во Томского гос. ун-та, 1991. - 136 с.

137. Стегний В.Н. Архитектоника генома, системные мутации и эволюция. Новосибирск: Изд-во Новосиб. ун-та, 1993. 111 с.

138. Стегний В.Н., Кабанова В.М., Новиков Ю.М. Кариотипическое исследование малярийного комара Anopheles messeae // Цитология. 1976. -Т.18. - №6. - С. 760-766.

139. Стегний В.Н., Кабанова В.М., Новиков Ю.М., Плешкова Г.Н. Инверсионный полиморфизм малярийного комара Anopheles messeae. Сообщение I. Распространение инверсий по ареалу вида// Генетика. 1976. -Т.12 -№4. - С. 47-55.

140. Стегний В.Н., Кабанова В.Н. Хромосомный анализ видов малярийного комара Anopheles atroparvus и A. maculipennis (Diptera,Culicidae)// Зоол. журн. -1978. Т.57. - №4. - С. 613-619.

141. Стегний В.Н., Новиков Ю.М., Кабанова В.М. Цитогенетический анализ и распространение малярийного комара Anopheles beklemishevi// Зоол. журн. -1978. Т.57. - №6. - С. 873-876.

142. Стегний В.Н., Новиков Ю.М., Плешкова Г.Н., Кабанова В.М. Инверсионный полиморфизм малярийного комара Anopheles messeae.

143. Сообщение II. Межпопуляционная вариабельность инверсионных частот // Генетика. 1978. - Т.14. - №6. - С. 1017-1023.

144. Струнников В.А. Природа гетерозиза и новые методы его повышения. -Наука. 1994. 108 с.

145. Струнников В.А.,Вышинский И.И. Модификационная изменчивость изогенных популяций тутового шелкопряда, различающегося по генотипу и способу размножения// Журн.общ. биол. T.XLIX. -№5. 1988. С.642-652.

146. Струнников В.А.,Вышинский И.И. Реализационная изменчивость у тутового шелкопряда // Проблемы генетики и теории эволюции. Н-ск: Наука. 1991. С. 99-114.

147. Суле М. Аллометрическая изменчивость теория и следствие //Журн. общ. биол. 1984. T.XLV.N1. С. 16-27.

148. Суханов В.В., Лопатин О.Е. Математическая модель индивидуального развития хирономид // Журн. общ. биология. 1990. Т.51, № 2, С. 217-226.

149. Тамарина Н. А., Георгиева Е. К. Роль численности и плотности в личиночных поселениях кровососущих комаров (Diptera, Culicidae) как г-стратегов // Зоол. журн. 1987. - Т. 64. - № 2. - С. 229 - 235.

150. Тарабухин И.А. О распространение видов в Новосибирской области // Мед. паразит, и паразитар. болезни. 1941. - Т.10. - вып.3-4. - С.444-450.

151. Тарабухин И.А. Фенология Anopheles maculipennis Meig. // Мед. паразит, и паразитол. болезни. 1944. - Т.13. - вып.4. - С.38-44.

152. Тимофеев-Рессовский Н.В. О фенотипическом проявлении генотипа. I. Геновариация radius incompletus у Drosophila melanogaster // Журн. экспер. биол. Сер. А. 1925. с.1. - вып.3-4. - С.93-142.

153. Тишкин В.В.,Глотов Н.В. Общая приспособленность и морфологические признаки у Drosophila melanogaster // Генетика. —Т. 19 — 1983. №4. - С.622-627.

154. УиттекерР. Сообщества и экосистемы. -П. Прогресс. 1980.-328 с.

155. Федоров А.Н., Гречко В.В., Слободянюк С.Я., Федорова Л.В., Тимохина Г.И. Таксономический анализ повторяющихся элементов ДНК // Молекулярная биология. 1992, - Т. 126. - С. 464-469.

156. Филипченко Ю.А. Изменчивость и методы ее изучения. М.: Наука. 1974.272 с.

157. Хадорн Э., Венер Р. Общая зоология. М.: Мир. 1989. - 528 с.

158. Шайкевич Е.В., Виноградова Е.Б. Молекулярно генетические методы идентификации городского комара Culex pipiens pipiens f. molestus (Diptera, Culicidae) // Паразитология. - 2004. - Т. 38, № 5. - С. 406 - 412.

159. Шарахова М.В., Брагинец О.П., Стегний В.Н. Пространственная организация политенных хромосом в ядрах трофоцитов яичников малярийного комара Anopheles labranchiae Fall. // Цитология. 1999 - Т.41. - №3/4. - С. 226227.

160. Шварц С.С. Экологические закономерности эволюции. М.: Наука. -1980.-278 с.

161. Шивокене Я. Симбиотическое пищеварение у гидробионтов и насекомых. Вильнюс. Мокслас, 1989. - 222 с.

162. Шингарев Н.И. Заметки по Culicidae // Тропическая медицина и ветеринария. 1928. - С. 47 - 53.

163. Шипицина Н.К. Абсалютные размеры поверхностной пленки, облавливаемой личинкой Anopheles при фильтрации // Мед. паразитол. -1943. -Т. 12. -№2. С. 14-24.

164. Шипицина Н.К. Дневные убежища An. maculipennis в Прикаспийской низменности Дагестана // Мед. паразит, и паразитар. болезни. 1934. - Т.З. вып. 1. — С.9.

165. Шипицина Н.К. К вопросу об эпидемиологическом значении осеннего поколения An. maculipennis в северной полосе СССР //Мед. паразит, и паразитар. болезни. 1944. - Т. 13. - вып.4. - С.44-52.

166. Шипицина Н.К. Сезонный ход численности главного переносчика малярии Anopheles maculipennis в Советском Союзе / В кн.:Вопросы общей зоол. и мед. паразитологии. 1962. - с. 562-588.

167. Шмальгаузен И.И. Пути и закономерности эволюционного процесса. М.: Изд-во АН СССР, 1939. - 231 с.

168. Шмальгаузен И.И. Факторы эволюции. М.: Наука. 1968. 451 с.

169. Шобанов Н.А., Зотов О.Д., Цитогенетические аспекты филогении рода Chironomus Meigen (Diptera, Chironomidae) // Энтомол. обозрение. 2001. -Т.53. -№1. - С.180-193.

170. Штакельберг А.А. Кровососущие комары (ceM.Culicidae) Союза ССР и сопредельных стран Изд-во Ленинград, 1927. - 170 с.

171. Штакельберг Фауна СССР. Насекомые двукрылые. Семейство Culicidae. Т. 3, вып. 4. М. - Л.: Изд - во Академии наук СССР. 1937. - 260 с.

172. Эрман Л. Генетика поведения и эволюция /Л.Эрман, П.Парсон// Латерализация у дрозофилы, мыши и человека. М.: Мир, 1984. - 566 с.

173. Эрман Л., Парсонс.П. Генетика поведения и эволюция. М. 1984.

174. Achary P.M.R. A simple technique for the preparation of polytene chromosomes from Culex quinquefasciatas IIJ Am Mosq Control Ass. 1994. - v. 10: -P. 112-114.

175. Aitken, Т. H. G. Studies on the anopheline complex of western America // Univ. Calif. Publ. Ent. 1945. 7: P. 273-364, illus.

176. Alten B, Bellini R, Caglar SS, Simsek FM, Kaynas S. Species composition and seasonal dynamics of mosquitoes in the Belek region of Turkey //J Vector Ecol. -2000. Dec;25(2).-P.l46-54.

177. Aly C. Feeding behavior of Aedes vexans larvae (Diptera: Culicidae) and its influence on the effectiveness of Bacillus thuringiensis var. israelensis// Bull. Soc. Vector Ecol. -1983.-8: P.94-100.

178. Aly C. Filter feeding of mosquito larvae (Diptera, Culicidae) in the presence of the bacterial pathogen Bacillus thuringiensis var. israelensis // Z. angew. Entomol. -1988.-v. 105.-№2.-P. 160- 166.

179. Ameen M. & T.M.Iversen. Food of Aedes larvae (Diptera, Culicidae) in a temporary forest pool //Arch. Hydrobiol. 1978. - V. 88: - P. 552-564.

180. Amerasinghe FP, Mukhtar M, Herrel N. Keys to the Anopheline mosquitoes (Diptera: Culicidae) of Pakistan // J Med Entomol. 2002 - Jan;39(l). -P. 28-35.

181. Apostol B.L., Black W.C., Reiter P., Miller B.R. Population genetics with RAPD PCR markers: the breeding structure of Aedes aegypti in Puerto Rico // Heredity. - 1996. - Vol. 76. - P. 325 - 334.

182. Avise J.C., Vrijenhoek R.C. Mode of inheritance and variation of mitochondrial DNA in hybridogenic fishes of the genus Poeciliopsis II Mol. Biol. Evol. 1987. -Vol. 4.-P. 514-525.

183. Ayres C.F.J., Romao T.P.A., Melo Santos M.A.V., Furtado A.F. Genetic diversity in Brazilian populations of Aedes albopictus II Mem. Inst. Oswaldo Cruz. -2002. - Vol. 97, № 6. - P. 871 - 875.

184. Barr A.R. Culex II Handbook of genetics, vol.3: Invertebrates of genetic interest. New York, 1975. - P. 347 - 375.

185. Barr A.R. Cytoplasmic incompatibility as a means of eradication of Culex pipiens L. // Proc Pap Annu. Conf Calif Mosq Control Assoc. 1965. 34. - P. 32-5.

186. Barr A.R. Occurrence and distribution of the Culex pipiens complex // Bull. Wld. Hlth. Org. 1967. - Vol. 33. - P. 293 - 296.

187. Barr A.R. The distribution of Culex p. pipiens and C.P. quinquefasciatus in North America // Am J Trop Med Hyg. 1957.- Jan. 6(1). - P.l 53-65.

188. Bates M. The nomenclature and taxonomic status of the mosquitoes of the Anopheles maculipennis complex // Ann. Entomol. Soc. Amer. 1940. - Vol. 33. - P. 343-356.

189. Beckingham K. Insect rDNA // In: Busch H, Rothblum L, eds. The cell nucleus/ Vol. X. Part A.New York: Academic Press. - 1982. - P. 205-269.

190. Belkin, J. N. The mosquitoes of the South Pacific (Diptera: Culicidae). Vol. 1, 1962a. 608 pp. Univ. Calif. Press.

191. Belkin, J. N. The mosquitoes of the South Pacific (Diptera: Culicidae). Vol. 2, 1962b. 412 figures. Univ. Calif. Press.

192. Benedict MQ, Levine BJ, Ke ZX, Cockburn AF, Seawright JA. Precise imitation of concerted evolution to ORFs in mosquito Hsp82 genes // Insect Mol Biol. -1996.- Feb;5(l). -P.73-9.

193. Benedict MQ, McNitt LM, Collins FH. Genetic traits of the mosquito Anopheles gambiae: red stripe, frizzled, and homochromyl // J Hered. 2003, May-Jun; 94(3). -P.227-35.

194. Benedict MQ, McNitt LM, Cornel AJ, Collins FH. Mosaic: a position-effect variegation eye-color mutant in the mosquito Anopheles gambiae // J Hered. 2000. Mar-Apr. - 91(2). -P.128-33.

195. Benedict MQ, Seawright JA, Changes in pigmentation in mosquitoes (Diptera: Culicidae) in response to the color of the environment // Ann Entomol Soc Am. -1987. 80. -P.55-61.

196. Bentley M.D., Day J.F. Chemical ecology and behavioral aspects of mosquito oviposition // Ann. Rev. Entomol. -1989. v.34. - p.401-421.

197. Bermingham E., Lamb Т., Avise J.C. Size polymorphism and heteroplasmy in the mitochondrial DNA in lower vertebrates // J. Hered. 1986. - Vol. 77. - P. 249 -252.

198. Besansky N.J., Powell J.R. Reassociation kinetics of Anopheles gambiae (Diptera, Culicidae) DNA // J. Med. Entomol. 1992. - V. 29. - P. 125-128.

199. Bianchi U. Homologous alkaline phosphatases and homologous loci in two sibling species of European Anopheline mosquitoes // Nature. 1968. -V.217. -P.382-383.

200. Birky C.W. Relaxed cellular controls and organelle heredity // Science. 1983. -Vol. 222.-P. 468-475.

201. Black W.C., Rai K.S. Genom evolution in msquitoes: intraspecific and interspecific variation in repetitive DNA amounts and organization // Genet. Res. -1988.-V.51.-P. 185-196.

202. Bullini L. The electrophoretic approach to the study of parasites and vectors // Parassitologia. 1982. - Vol. 27. - P. 1 - 11.

203. Byrne K., Nichols R.A. Culex pipiens in London underground tunnels: differentiation between surface and subterranean populations // Heredity. 1999. -Vol. 82.-P. 7-15.

204. Campos J. Carlos F. S. Andrade, S. M Recco-Pimentel. Malpighian Tubule Polytene Chromosomes of Culex quinquefasciatus (Diptera, Culicinae) // Mem Inst Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro. 2003 - Vol. 98(3). - P.383-386.

205. Carlson J.E., Tulsieram L.K., Glaubitz J.C. et al. Segregation of random amplified DNA markers in Fi progeny of conifers // Theoretical and Applied Genetics. 1991.-Vol. 83.-P. 194-200.

206. Chapman R.W., Stephens J.C., Lansman R.A., Avise J.C. Models of mitochondrial DNA transmission genetics and evolution in higher eukaryotes // Genet. Res. 1982. - Vol. 40. - P. 41 - 57.

207. Chevillon C., Eritja R., Pasteur N., Raymond M. Commensalism, adaptation and gene flow: mosquitoes of the Culex pipiens complex in different habitats // Genet. Res. 1995. - Vol. 66. - P. 147 - 157.

208. Chevillon C., Rivet Y., Raymond M. et al. Migration/selection balance and ecotypic differentiation in the mosquito Culex pipiens II Molecular Ecology. 1998-Vol. 7.-P. 197-208.

209. Christophers S.R. Note on morphological characters differentiating Culex pipiens L. from Culex molestus Forskal and the status of these forms // Trans. R. Ent. Soc. Lond. 1951. -Vol. 102, № 7. - P. 372 - 379.

210. Clary D.O., Wolstenholme D.R. The mitochondrial DNA molecule of Drosophila yakuba: nucleotide sequence, gene organization, and genetic code // J. of Mol. Evol. 1985. - Vol. 22. - P. 252 - 271.

211. Cohuet A., Simard F., Toto J. C. et al. Species identification within the Anopheles funestus group of malaria vectors in Cameroon and evidence for a new species // Am. J. Trop. Med. Hyg. - 2003. - Vol. 69, № 2. - P. 200 - 205.

212. Collins F.H., Paskewitz S.M. A review of the use of ribosomal DNA (rDNA) to differentiate among cryptic Anopheles species // Insect Mol. Biol. 1996. - Vol. 5. -P. 1 -9.

213. Coluzzi M, Sabatini A, Petrarca V, Di Deco MA. Chromosomal differentiation and adaptation to human environments in the Anopheles gambiae complex // Trans R Soc Trop Med Hyg. 1979. - 73(5). - P.483-97.

214. Cornel A.J., Porter C.H., Collins F.H. Polymerase chain reaction species diagnostic assay for Anopheles quadrimaculatus cryptic species (Diptera: Culicidae) based on ribosomal DNA ITS2 sequences // J. Med. Entomol. 1996. - Vol. 33. - P. 109-116.

215. Coyne J.A., Orr A. The evolutionary genetics of speciation // Phil. Trans. R. Soc. bond. 1998. - Vol. 353. - P. 287 - 305.

216. Coyne J.A., Orr H.A. Patterns of speciation in Drosophila II Evolution. 1989. -Vol. 43.-P. 362-381.

217. Crampton J.M. Molecular studies of insect vectors of malaria // Adv. Parasit. -1994.-V. 34.-P. 1-31.

218. Cranston P.S., Ramsdale C.D., Snow K.R. and G.B.White. Keys to the adult, male hypopygia, fourth-instar larvae and pupae of the British. 1987. 149 p.

219. Cross N.C.P., Dover G.A. Tsetse fly rDNA: An analysis of structure and sequence // Nucleic Acids Res. 1987. - V. 15. - P. 15 - 30.

220. Cummins, K.W. & M.J. Klug. Feeding ecology of stream invertebrates// Annu. Rev. Ecol. Syst. 1979. - 10: P. 147-172.

221. Cupp E.W., Ibrahim A.N. Identification of members of the Culex pipiens complex by immunodiffusion and Immunoelectrophoresis // J. Med. Ent. 1973. -Vol. 10, №3.-P. 277-281.

222. Dadd, R.H. & J.E. Kleijan. Phagostimulation of larval Culex pipiens L. by nucleic acid nucleotides, nucleotides and bases // Physiological Entomology. 1985. - 10. - P.37-44.

223. Dadd, R.H. Autophagostimulant by mosquito larvae // Entomol. Exp. Appl. -1973. -V.3. -№ 1. -P.21-28.

224. Dadd, R.H. Ingestion of colloid solutions by filter-feeding mosquito larvae: relationship to vescosity// J.Exp. Zool. 1975. - 191: 3, P.335-406.

225. Dadd, R.H. Relationship between filtering activity and ingestion of solids by larvae of the mosquito Culex pipiens: a method for assessing phagostimulant factors// J. of Med. Entotomology. 1970. 7. - P. 708-712.

226. Dahl C. Taxonomic studies on Culex pipiens and C. torrentium II Biosystematics of Haematophagous Insects // Oxford Systematics Assoc. 1988. -Special vol. 37. - P. 149 - 175.

227. Dahl C., G.Sahlen, J.Grawe, A. Johannisson, H. Amneus. Differential particle uptake by larvae mosquito species (Diptera, Culicidae) // J. Med. Entomol. 1993. -V.30. -№ 3. -C. 537-543.

228. Dahl C., L.E.Widahl & C.Nillson. Functional Analysis of the Suspensions Feeding System in Mosquitoes (Diptera: Culicidae)//An. Entomol. Soc. Am. 1988. -V.81. -№ 1.-P. 105-127.

229. Darsie RF Jr, Samanidou-Voyadjoglou A. Keys for the identification of the mosquitoes of Greece.// J Am Mosq Control Assoc. 1997 . - Sep; 13(3). - P:247-54.

230. Dennhofer L 1974. Die speicheldrusenchromosomen der Stechmucke Culex pipiens L. II. Erganzungen zur kartierung // Genetica. 45. - P. 29-38.

231. Dennhofer L. Salivary gland chromosomes of the mosquito Culex pipiens. I. The normal chromosome complement// Chromosoma. 1968. - Nov; 25(3). - P.365-76.

232. Djadid N.D., Gholizadeh S., Tafsiri E., Romi R., Gordeev M., Zakeri S. 2007. Molecular identification of Palearctic members of Anopheles maculipennis in northern Iran //Malaria Journal, 6:6.

233. Dobzansky T. Genetics of natural population. XXXIII. Aprogress report on genetics changes in populations of Drosophila pseudoobscura and Drosophila persimilitis in a locality in Caliphornia // Evolution. 1963- v.17. - №2. - P.334-339.

234. Edwards F. W. Mosquito notes // XI. Bull. ent. Res. -1932. 23. -P.559-562.

235. Falleroni D. Fauna anophelica italiana e suo "Habitat" // Riv. Malariol 1926. -V.5.-P. 553-593.

236. Favia G., Dimopoulos G., Delia Torre A. et al. Polymorphisms detected by random PCR distinguish different chromosomal forms of Anopheles gambiae II Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994.-Vol. 91. - P. 10315 - 10319.

237. Favia G., Dimopoulos G., Louis C. Analysis of the Anopheles gambiae genome using RAPD markers // Insect Mol. Biol. 1994. - Vol. 3. - P. 149 - 157.

238. Feder J.L., Chilcote C.A., Bush G.L. Are the apple maggot, Rhagoletis pomonella, and blueberry maggot, R. mendax, distinct species? Implications for sympatric speciation // Entomologia Experimentalis et Applicata. 1989. - Vol. 51. -P. 113-123.

239. Ficalbi E. Descrizione di una specie nuova. Zanara di colorito modesto Culex modestus n. sp. (Notizie preventive sulle zanzare italane. IVa. Nota preventiva)// Boll. Soc. ent. ital. 21: 1890. - P.93-94

240. Foley D.H., Bryan J.H. Electrophoretic keys to identify members of the Anopheles punctulatus complex of vector mosquitoes in Papua New Guinea // Med. Vet. Entomol. 1993. - Vol. 7. - P. 49 - 53.

241. Foley D.H., Meek S.R., Bryan J.H. The Anopheles punctulatus group of mosquitoes in Solomon Islands and Vanuatu surveyed by allozyme electrophoresis // Med. Vet. Entomol. 1994. - Vol. 8. - P. 340 - 350.

242. Foley D.H., Paru R., Dagoro H., Bryan J.H. Allozyme analysis reveals six species within the Anopheles punctulatus complex of mosquitoes in Papua New Guinea 11 Med. Vet. Entomol. 1993. - Vol. 7. - P. 37 - 48.

243. Fonseca D.M., Keyghobadi N., Malcolm C.A. et al. Emerging vectors in the Culex pipiens complex // Science. 2004. - Vol. 303. - P. 1535 - 1538.

244. Forskal, P. Descriptiones animalium avium, amphibiorum, piscium, insectorum, vermium, quae in itinere orientali observavit, post mortem auctoris edidit Carsten Niebuhr. Havniae, Moeller. - 1775. - 164 p.

245. Fritz GN, Narang SK, Kline DL, Seawright JA. Inheritance of the stripe trait in Anopheles freeborni // J Am Mosq Control Assoc. 1989. - Jun;5(2). - P. 278-9.

246. Frizzi G. Etude cytogenetique d' Anopheles maculipennis en Italie. Extension des recherches a'd'auteres especes d'anopheles // Bull. WHO. -1953. V.9. - P. 335344.

247. Frizzi G. Genetica di popolazioni in Anopheles maculipennis // Ric. Sci. 1949.- V.19. P.544-552.

248. Frizzi G. Salivary gland chromosomes of Anopheles// Nature (London). -1947.-V. 160. P.226-227.

249. Garner K.J., Slavicek J.M. Identification and characterization of a RAPD-PCR marker for distinguishing Asian and North American gypsy moths // Insect Molecular Biology. 1996. - Vol. 5. - P. 81 - 91.

250. Gerritsen, J. and K.G. Porter. The role of surface chemistry in filter feeding by zooplankton // Science. 21- 1982. - P.1225-1226.

251. Gillies M.T., Gubbins S.J. Culex {Culex) torrentium Martini and Cx. (Cx.) pipiens L. in Southern English county, 1974 1975 // Mosquito Systematics. - 1982.- Vol. 14, № 2. - P. 127 - 130.

252. Glick, J.I. Illustrated key to the female Anopheles of southwestern Asia and Egypt (Diptera: Culicidae)// Mosq. Syst. -1992.- 24. P. 125-153.

253. Goldschmidt R.B. Theoretical genetics Berkeley; Los Angeles: Cambridge Univ. press. 1955. 563 p.

254. Gordeev M.I., Goriacheva I.I., Shaikevich E.V., Ejov M.N. Variability of the second internal transcribed spacer of the ribosomal DNA among five Palaearctic species of anopheline mosquitoes // European Mosq. Bull. 2004. - № 17. - P. 14 -19.

255. Graham J. Antisymmetry, directional asymmetry and dynamic morphogenesis / J.Graham, D.C. Freeman, J. Emlen // Genetica. 1993. - V.89. №1-3. -P.121-137.

256. Grassi, B. Razza biologica di Anofele che non punge l'uomo. Un singolarissimo caso di anofelismo senza malaria// Atti Acc. Lincei, Rend. CI. Mat Fis. Nat. 1921.-S.6,30:-P.l 1-13

257. Gray M.W. Origin and evolution of mitochondrial DNA // Annu. Rev. Cell Biol. 1989. - Vol. 5. - P. 25 - 50.

258. Green СЛ., Gass R.F., Munstermann L.E., Baimai V. Population genetic evidence for two species in Anopheles minimus in Thailand // Med. Vet. Entomol. -1990.-Vol. 4.-P. 25-34.

259. Green C.A., Munstermann L.E., Tan S.G. et al. Population genetic evidence for species А, В, С and D of the Anopheles dirus complex in Thailand and enzyme electromorphs for their identification // Med. Vet. Entomol. 1992. - Vol. 6. - P. 29 -36.

260. Guillemaud Т., Pasteur N., Rousset F. Contrasting levels of variability between cytoplasmic genomes and incompatibility types in the mosquito Culex pipiens // Proc. R. Soc. Lond. 1997. - Ser. B, vol. 264. - P. 245 - 251.

261. Gyllensten U., Wharton D., Wilson A.C. Maternal inheritance of mitochondrial DNA during backcrossing of two species of mice // J. Hered. 1985. - Vol. 76. - P. 321-324.

262. Hackett L.W., Missirolli A. The varieties of Anopheles maculipennis and their relation to the distribution of malaria in Europe // Rivista di Malariologia. 1935. -Vol. 14.-P. 1-67.

263. Hall H.G. Parental analysis of introgressive hybridization between African and European honeybees using DNA RFLPs // Genetics. 1990. - Vol. 125. - P. 611 -621.

264. Hance R. T. The fixation of mammalian chromosomes // Anat. Rec. 1917.1. P.12.

265. Harbach R.E., Harrison B.A., Gad A.M. Culex {Culex) molestus Forskal (Diptera: Cilicidae): neotype designation, description, variation, and taxonomic status // Proc. Entomol. Soc. Wash. 1984. - Vol. 86, № 3. - P. 521 - 542.

266. Haymer DS, Mclnnis DO, Arcangeli L. Genetic variation between strains of the Mediterranean fruit fly, Ceratitis capitata, detected by DNA fingerprinting. Genome. -1992.- Jun;35(3). -P.528-33.

267. Hembelen V., Leweke В., Roth A., Stadler K. Organization of highly repetitive satellite DNA of two Cucurbitaceae species {Cucumis melon and C. sativus) // Nucleic Acids Res. 1982. -V. 10. - P. 631-644.

268. Henning W. Phylogenetic systematics // Univ. Illinois Press, Urbana. 1966. -263 p. *

269. Jaenson T.G.T. Overwintering of Culex mosquitoes in Sweden and their potential as reservoirs of human pathogens // Med. Vet. Ent. 1987. - Vol. 1, № 2, -P. 151-156.

270. Jaenson TG, Lokki J, Saura A. Anopheles (Diptera: Culicidae) and malaria in Northern Europe, with special reference to Sweden // J Med Entomol. 1986 Jan 24;23 (1). - P.68-75.

271. Jobling B. The development of mosquitoes in complete darkness // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1937. - Vol. 30. - P. 467 - 474.

272. Jupp P.G. Culex (Culex) pipiens and Culex (Cx.) torrentium (Diptera: Culicidae) in England: notes on their taxonomy and biology // Mosquito Systematics. -1979.-Vol. 11, №2.-P. 121-126.

273. Kambhampati S., Black W.C. IV, Rai K.S. Random amplified polymorphic DNA of mosquito species and populations (Diptera: Cilicidae): techniques, statistical analysis, and applications // J. Med. Entomol. 1992. - Vol. 29. - P. 939 - 945.

274. Kanda T. The salivary gland chromosomes of Culex pipiens fatigans Wiedemann // Jpn J Exp Med. 1970. - 40.- P. 335-345.

275. Karn M.N., Penrose L.S. Birth weight and distantion time in relation to maternal age, parity and infant survival// Ann. Eugenics. 1951. - v.47. - P. 147-164.

276. Kasap, M. (1990) Comparison of experimental infectivity and development of Plasmodium vivax in Anopheles sacharovi and An. superpictus in Turkey //Am J Trop Medical Hyg. v. 42: - P.l 11-117.

277. Keyl H.-G. Cromosomenevolution bei Chironomus П. Chromosomenbauten und phylogenetische Bezichungen der Arten // Chromosoma. 1962. - v. 13. - №4. S. 464-514.

278. Khawaled K, Barak Z, Zaritsky A.Feeding behavior of Aedes aegypti larvae and toxicity of dispersed and of naturally encapsulated Bacillus thuringiensis var. israelensis. // J Invertebr Pathol. 1988.- Nov;52(3). -P.419-26.

279. Kitzmiller J.B. Anophelini Names: Their Derivations and Histories/ Entomological society of America. 1982. - 639 p.

280. Kitzmiller J.B., Frizzi G., Baker R. Evolution and spetiation within the Maculipennis complex of the genus Anopheles, Genetics of Insekt Vectors of Disease, Wright and Pal (Eds.) // Amsterdam: Elsevier Publ.Co. 1967, Chaster 5, - P. 151210.

281. Kitzmiller J.B., Clark C.C. Salivary gland chromosomes in Culex mosquitoes// Genetics. 1952. - 37. P. 596.

282. Kitzmiller JB, Keppler WJ 1961. Salivary gland chromosomes maps in Culex p. pipiens // Genetics 46: - P. 875-876.

283. Kitzmiller JB, Mason GF, Formal Genetics of Anophelines / In: Genetics of Insect Vectors of Disease (Wright JW and Pal R, eds). Amsterdam: Elsevier. 1967. -P. 3-15.

284. Kitzmiller J.B. Mosquito cytogenetics. A review of the literature 1953-62. Bull. WHO. 1963. - 29. P. 345-355.

285. Klingenberg CP, Leamy LJ, Cheverud JM.Integration and modularity of quantitative trait locus effects on geometric shape in the mouse mandible // Genetics. -2004. Apr; 166(4).-P. 1909-21.

286. Knight K.L. A review of the Culex pipiens complex in the Mediterranean subregion (Diptera, Culicidae) // Trans. R. Ent. Soc. Lond. 1951. - Vol. 102, № 7. -P. 354-364.

287. Knight K.L. Supplement to a catalog of the mosquitoes of the world (Diptera, Culicidae). College Park, 1978. - 107 p.

288. Koekemoer L. L., Kamau L., Hunt R. H., Coetzee M. A cocktail polymerase chain reaction assay to identify members of the Anopheles funestus (Diptera: Culicidae) group // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2002. - Vol. 6, № 6. - P. 804 - 811.

289. Kondo R., Satta Y., Matsuura E.T. et al. Incomplete maternal transmission of mitochondrial DNA in Drosophila II Genetics. 1990. - Vol. 126. - P. 657 - 663.

290. Kruppa T. Vergleichende Untersuchengen zur Morphologie und Biologie von drei Arten des Culex-pipiens -Komplexes // Dissertaion zur Erlangung des octorgrades des Fachbereichs Biologie. Hamberg, 1988. - 72. p.

291. Krzywinski J., Besansky N. Molecular systematics of Anopheles: from subgenera to subpopulations // Annu. Rev. Entomol. 2003. - Vol. 48. — P. Ill — 139.

292. Kulikov A.M., Melnikov A.I., Gornostaev N.G., Lazebny О. E. and Mitrofanov V. G. Morphological analysis of male mating organ in the Drosophila virilis speciesgroup: a multivariate approach // J. Zool. Syst. Evol. Research. V. 42, № 2. -2004. -P.135-144.

293. Kumar A and Rai KS. Chromosomal localization and copy number of 18S + 28S ribosomal RNA genes in evolutionarily diverse mosquitoes (Diptera, Culicidae)// Hereditas. 113: - 1990. - P. 277-289.

294. Kuperus W.R., Chapco W. Usefulness of internal transcribed spacer regions of ribosomal DNA in Melanopline (Orthoptera: Acrididae) systematics // Ann. Entomol. Soc. Am. 1994. - Vol. 87. - P. 752 - 754.

295. Ma M., Beier J.C., Petrarca V., Gwadz R.W. et al. Differentiation of Anopheles gambiae and An. arabiensis (Diptera: Culicidae) by ELISA using immunoaffinity-purified antibodies to vitellogenin // J. Med. Entomol. 1990. - Vol. 27. - P. 564 -569.

296. MacGregor M.E. The occurrence of Roubaud's "Race autogene" in a German strain of Culex pipiens in England: with notes on rearing and bionomics // Trans. R. Soc. Trap. Med. Hyg. 1932. - Vol. 26. - P. 307 - 314.

297. Manguin S., Kengne P., Sonnier L. et al. SCAR markers and multiplex PCR -based identification of isomorphic species in the Anopheles dirus complex in Southeast Asia // Medical and Veterinary Entomology. 2002. - Vol. 16. - P. 46 -54.

298. Marinucci, M., Romi, R., Mancini, P., Di Luca, M. & Severini, C. Phylogenetic relationships of seven Paleartic members of the maculipennis complex inferred from ITS2 sequence data // Insect Molecular Biology. 1999. - 8. - P. 469-480.

299. Marshall J. F. The British mosquitoes. Brit. Mus. Pub. 1938.-341 p.,

300. Marshall J.F., Staley J. Some notes regarding the morphological and biological differentiation of Culex pipiens Linnaeus and Culex molestus Forskal (Diptera, Culicidae) // Proc. R. Ent. Soc. Lond. 1937. - Ser. A, vol. 12, p. 1 - 2. - P. 17 - 26.

301. Martini E. Die Fliegen der palearktischen Region/ Stuttgart. 1929. - 144 p.

302. Martini E. The Hypopygia of Certain Anophelines (DipterarCulicidae)// Proc. Ent. Soc. Wash. 35(5). - 1933.- P:61-67.

303. Mason G.F.Genetic studies on mutations in species A and В of the Anopheles gambiae complex // Genet. Res. Camb. 1967. V.10. - P.205-217.

304. Mattingly P.F. Culex {Culex) torrentium Martini, a mosquito new in Great Britain//Nature. 1951a. - Vol. 168. - P. 172.

305. Mattingly P.F. Mosquito eggs II. Tribe Anophelini // Mosq. Syst. Newsl. -1969.-1(3).-P. 41-50.

306. Mattingly P.F. The Culex pipiens complex. Introduction // Trans. R. Ent. Soc. Lond.-19516.-Vol. 102, №7.-P. 331 -342.

307. Matveeva L.K. Community structure of planktonic roifers in a mesotrophic lake// Hydrobiologia. 1983. - v. 104. - p.353-356.

308. Mer G. Variations saisonnieres des caracteres de Anopheles elutus en Palestine. II // Bulletin de la Societe de Pathologie Exotiquie. 30. -1937. - P.38-43.

309. Merritt R.W., Cummins K.W., Burton T.M. The role of aquatic insects in the processing and cycling of nutrients/ The ecology of aquatic in insects. Praeger, New York. 1984.-P. 134-163.

310. Merritt R.W., Morland M.M., Cersabeck E.F., Ross D.H. X-ray diffraction analysisof particles ingested by filter feeding animals// Entomol. Exp. Appl. V.24. 1978. -P.27-34.

311. Miles S J. Laboratory evidence for mate recognition between behaviour in a member of the Culex pipiens complex (Diptera: Culicidae) // Aust. J. Zool. 1977. -Vol. 25.-P. 491-498.

312. Miles S.J., Paterson H.E. Protein variation and systematics in the Culex pipiens group of species // Mosquito Systematics. 1979. - Vol. 11, № 3. - P. 187 - 192.

313. Miller B.R., Crabtree M.B., Savage H.M. Phylogeny of fourteen Culex mosquito species, including the Culex pipiens complex, inferred from the internal transcribed spacers of ribosomal DNA // Insect Mol. Biol. 1996. - Vol. 5, № 2. - P. 93-107.

314. Mitchell S.E., Narang S.K., Cockburn A.F. et al. Mitochondrial and ribosomal DNA variation among members of the Anopheles quadrimaculatus species complex// Genome. 1992. - Vol. 35. - P. 939 - 950.

315. Mitchell SE, Seawright JA. A red stripe mutant and its relationship in an allelic series in Anopheles quadrimaculatus // J Hered. 1984. - Sep-Oct;75(5). -P.421-2.

316. Moller A.P. Developmental instability and parasitism: a review // Oikos. 77 -1996.-P. 189-196.

317. Munstermann L.E., Conn J.E. Systematics of mosquito disease vectors (Diptera: Culicidae): Impact of molecular biology and cladistic analysis // Annu. Rev. Entomol. 1997. - Vol. 42. - P. 351 - 369.

318. Narang S.K., Kaiser P.E., Seawright J.A. Dichotomous electrophoretic key for the identification of sibling species А, В and С of the Anopheles quadrimaculatus (Say) species complex (Diptera: Culicidae) // J. Med. Entomol. 1989a. - Vol. 26. -P. 94 - 99.

319. Narang S.K., Kaiser P.E., Seawright J.A. Identification of species D, a new member of the Anopheles quadrimaculatus species complex: a biochemical key // J. Am. Mosq. Control Assoc. 19896. - Vol. 5. - P. 317 - 324.

320. Nazni W.A., Lee H.L., Mori A. Restriction fragment patterns of DNA in Culex pipiens complex // Tropical Biomedicine. 1997. - Vol. 14. - P. 125 - 127.

321. Nei M. Estimation of average heterozygosity and genetic distance from a small number of individuals // Genetics. 1978. - Vol. 89. - P. 583 - 590.

322. Nicolaeva N.V. Situation of Vector-Borne Disease in Russia Worsens // Vector ecology Newsletter. 1996a. - Vol. 27. -№ 3. - P. 6-7.

323. Nikolaeva N.V. Resurgence of malaria in the former Soviet Union (FSU). // SOVE Newsl 1996. - 27. - P. 10-11.

324. Nilson C. Coprofagy in larval Culiseta bergrothi (Diptera,Culicidae)// Hydrobiologia. 1983. - V.98. - P. 267-269.

325. Nilson C. Feeding and food utilisation of mosquito larvae // Acta Univ. Upsal. Сотр. Summ. Uppsala Siss. Fac. Sci. - 1987. - № 73. - P. 1 -29.

326. Onyeka J.O.A. The taxonomic value of pre alar scales in the identification of Culex (Culex) pipiens L. and Culex (Cx.) torrentium Martini (Diptera: Culicidae) // Mosquito Systematics. - 1982. - Vol. 14. - P. 41 - 51.

327. Palmer A.R. and C. Strobeck. Fluctuating asymmetry: measurement, analysis and patternII Ann. Rev. Ecolog. Syst. 17. - 1986. - P. 391-421.

328. Paran I., Michelmore R.W. Development of reliable PCR-based markers linked to downy mildew resistance genes in lettuce // Theoretical and Applied Genetics. -1993. Vol. 85. - P. 985 - 993.

329. Parsons P.A. Fluctuating asymmetry: an epigenetic measure of stress// Biol. Rev. 1990. - V.65. - P. 131-145.

330. Paskewitz S.M., Wesson D.M., Collins F.H. The internal transcribed spacers of ribosomal DNA in five members of the Anopheles gambiae species complex // Insect Mol. Biol. 1993. - Vol. 2, № 4. - P. 247 - 257.

331. Piper R.G. Larval aggregation in vigilax (Skuse) (Diptera: Culicdae) // AustralJEnt. Mag. 1988. - V. 15. - №4, - P. 119-122.

332. Porter C.H., Collins F.H. Species diagnostic differences in a ribosomal DNA internal transcribed spacer from the sibling species Anopheles freeborni and Anopheles hermsi (Diptera: Culicidae) // Am. J. Trop. Med. Hyg. - 1991. - Vol. 45. -P. 271 -279.

333. Power E.G.M. RAPD typing in microbiology a technical review // J. of Hospital Infection. - 1996. - Vol. 34. - P. 247 - 265.

334. Pratt H. D. Notes on Anopheles earlei and other American species of the Anopheles maculipennis complex // Am. J. trop. Med. Hyg. -1952 1: P.484-493.

335. Profit J., Maier W.A., Kampen H. Identification of six sibling species of the Anopheles maculipennis complex (Diptera: Culicidae) by a polymerase chain reaction assay // Parasitol. Res. 1999. - Vol. 85. - P. 837 - 843.

336. Pucat A.M. The functional morfology of the mouthparts of some mosquito larvae// Quaest. Entomol. 1965. - V.l. - P.41-86.

337. Rai K.S., Black W.C. Mosquito genomes: structure, organisation and evolution // Adv. Gen. 1999. - V. 41.- P. 1-34.

338. Ramoska, W. A. & T. L. Hopkins. 1981. Effects of mosquito laravl feeding behavior on Bacillus sphaericus efficacy // J. Invertebr. Pathol. 37: - P. 269-72.

339. Rashed SS, Mulla MS. Comparative functional morphology of the mouth brushes of mosquito larvae (Diptera: Culicidae) // J Med Entomol. 1990. -Jul;27(4). - P.429-39.

340. Rashed SS, Mulla MS. Factors influencing ingestion of particulate materials by mosquito larvae (Diptera: Culicidae)// J Med Entomol. 1989. -26(3). - P.210-6.

341. Reeve E.C.R. Some genetic tests on asymmetry of sternopleural chate number in Drosophila// Genet.Res. 1960. - v.l. -P.151-172.

342. Reid J.A., Knight K.L. Classification within the Subgenus Anopheles (Diptera, Culicidae) И Annals of Trop. and Parasitol, -1961.-55 (4): P.475^88.

343. Reisen W.K. Intraspecific competetion in Anopheles stephensi Liston // Mosquito News. 1975. - V.35. -№ 4. - P.473-482.

344. Renn C.E. The food economy of Anopheles quadrimaculatus and A. crucians larvae. Relationships of the air-water interface and surface-feeding mechanism/ In A symposium on hydrobiology. Univ. of Wisconsis, Madison. - 1941. - P.329-341.

345. Rice W.R., Hostert E.E. Laboratory experiments on speciation: what have we learned in 40 years? // Evolution. 1993. - Vol. 47. - P. 1637 - 1653.

346. Rioux J. Les culicids du «Midi» mediterraneen; Etude systematique et ecologique, Editions Paul Lechevalier, 12 Rue de Tournon, 12, Paris, 1958, p. 157.

347. Rohdendorf B.B. The Historical Development of Diptera. University of Alberta Press, Edmonton, Canada. 1974

348. Roubaud E. La differentiation des races zootropiques d'anopheles et la regression spontanee du paludisme // Bull. Sot. Path. Exot. 1921. xiv (9). - P.577

349. Roubaud M.E. Ariete nouvelle de YAnopheles maculipennis au Maroc, A. maculipennis sicaulti (n. var.) // Bull. Soc. Pat. exot. 1935. - 28. - P.107-111.

350. Rubenstein D.I., Koehl M.A. The mechanismsof filter feeding. Some theoretical considerations // Am. Nat. V.l 11. - P. 981-994.

351. Sallum M.A.M., T.R. Schultz and R.C. Wilkerson. Phylogeny of Anophelinae (Diptera, Culicidae) based on morphological characters // Ann. Entomol Soc. Am. -2000. 93. -P.747-775.

352. Schaffner F. A revised checklist of the French Culicidae // European Mosq. Bull. 1998. - № 2. - P. 1 - 9.

353. Schluter, D. Ecological causes of adaptive radiation // Am. Nat. 1996. - 148, P.40-64.

354. Sedaghat MM, Linton YM, Nicolescu G, Smith L, Koliopoul G, Thanassius

355. КZ, Oshaghi MA, Vatandoost H, Harbach RE. Morphological and molecular characterization Anopheles (Anopheles) sacharovi Favre, a primary vector of malaria in the Middle East // Systematic Entomology. 2003. - 28(2). - P.241-256.

356. Service M.W. The taxonomy and biology of two sympatric sibling species of Culex, C. pipiens and C. torrentium (Diptera: Culicidae) // J. Zool. 1968. - Vol. 156.-P. 313-323.

357. Severson, D.W., S.E. Brown and D.L. Rnudson. Genetic and physical mapping in mosquitoes: molecular approaches// Annual Review of Entomology. 2001. -46. -P. 183-219

358. Sewell D., Burnet В., Connolly K. Genetic analysis of larvae feeding behaviour in Drosophila melanogaster // Genet. Res. 1975. - v.24. - P.163-173.

359. Shalaby A.M. On the mouth parts of the larval instars of Anopheles quadrimaculatus (Say). (Diptera:Culicidae-Anophelini) // Bull. Soc. Entom. Egypte, -1956. XL: P.137-174.

360. Shalaby A.M. On the mouth parts of the larval instars of Culex quinquefasciatus (Say) (Diptera: Culicidae) // Bull. Soc. Entom. Egypte, 1957. V.41.- P.269-298.

361. Sharma, G. P., R. Parshad, S. L. Narang and P. Kaur, 1969 Salivary gland chromosomes of Culex p. fatigans// Res. Bull. Panjab Univ. Sci. 20. P.541-546.

362. Shute P.G. Culex molestus II Trans. R. Ent. Soc. Lond. 1951. - Vol. 102, № 7. -P. 380-382.

363. Shute P.G. The value of the external spine of the harpago in identifying varietes of Anopheles maculipennis. // Parazitology. 1935. - Vol. 27. № 4. - P.561-563.

364. Singh, Zouros E. Genetic variation associated with growth rate in the American oyster (Crassostrea virginica) // Evolution. 1978. - v.32. - P. 342-353.

365. Soto Ignacio M, Valeria P Carreira, Juan J Fanara and Esteban Hasson. Evolution of male genitalia: environmental and genetic factors affect genital morphology in two Drosophila sibling species and their hybrids // BMC Evolutionary Biology.-2007, 7. 77.

366. Smith J.L., Fonseca D.M. Rapid assays for identification of members of the Culex (Culex) pipiens complex, their hybrids, and other sibling species (Diptera: Culicidae) // Am. J. Trop. Med. Hyg. 2004. - Vol. 70, № 4. - P. 339 - 345.

367. Soyle M.E. Heterozysity and developmental stability: another look// Evolution. 1979-V.33.-P.396-401.

368. Stegnii V.N. Genetic adaptation and spetiation in sibling species of the Eurasian Maculipennis Complex // Recent Developments in the Genetics of Insect Disease

369. Vectors: a symposium proceedings / Ed. By W.W.M. Steiner, W.J. Tabachnick, K.S. Rai and S. Narang. Stipes Publishing Company, Champaign, Illinois. P. 454-464.

370. Stevens N.M. The chromosomes in the germ cell of Culex // J.Exp. Zool-1910.-№8.-P. 359-374.

371. Strong K.L., Mahon R.J. Genetic variation in the Old World screw-worm fly, Chrysomya bezziana (Diptera: Calliphoridae) // Bulletin of Entomological Research. -1991.-Vol. 81.-P. 491-496.

372. Surtees G. Functional and morfological adaptationsof the larval mouthparts in the sub family Culicidae (Diptera) with a review of some relatid studies by Montschadsky//Proc.R. Entomol. Soc.Lond.- 1959.- V.34.-P.7-16.

373. Sutton E. Salivary gland type chromosomes in mosquitoes // Proc Natl Acad Sci USA. 1942. - v.28. - P.268-272.

374. Tamura K. The rate and pattern of nucleotide substitution in Drosophila mitochondrial DNA // Mol. Biol. Evol. 1992. - Vol. 9. - P. 814 - 825.

375. Tate P., Vincent M. The biology of autogenous and anautogenous races of Culex pipiens L. (Diptera: Culicidae) // Parasitology. 1936. - Vol. 28. - P. 115 -145.

376. Tewfik H.R., Barr A.R. The salivary gland chromosomes of Culex pipiens L. Mosq News. 1974. - v.34. - P.47-54.

377. Tsai T.F., Popovici F., Cernescu C. et al. An epidemic of West Nile encephalitis in southeastern Romania // Lancet. 1998. - Vol. 352. - P. 767 - 771.

378. Urbanelli S., Silvestrini F., Sabatinelli G. et al. Characterization of the Culex pipiens complex (Diptera: Culicidae) in Madagascar // J. Med. Entomol. 1995. -Vol. 32.-P. 778-786.

379. Urbanelli, S., Silvestrini, F., Reisen, W.K., De Vito, E. and Bullini, L. (Californian hybrid zone between Culex pipiens pipiens and Cx. p. quinquefasciatus revisited (Diptera: Culicidae)// J Med Entomol. 1997. - 34. - P. 116-127.

380. Van Thiel, P. H. Sur l'origine des variations de taille de YAnopheles maculipennis dans les Pays-Bas// Bull. Soc. Pat. exot. 1927. - 20:- P.366-390.

381. Van Valen L. A study of fluctuating asymmetry // Evolution. 1962. - V.16. -№2. - P.125-142.

382. Vargas L. Anopheles earlei Vargas, 1942, n. sp. norteamericana del grupo maculipennis//Bol. Ofic. sanit. pan-amer. 1943. - V.22. - P.8-12,

383. Verma RK, Paknaik S, Prasad R, Das CC Salivary gland chromosomes of Culex quinquefasciatas // Caryologia. 1987. - V.40. - P.99-108.

384. Waddington C.H. Canalization of development and the inheritance of acquired characters //Nature. 1942. - V.150. - P. 563-565.

385. Waddington C.H. The strategy of the genes. L. / George Allen and Unwin. -1957.-262 p.

386. Wainhouse D., Jukes M.R. Geographic variation within populations of Panolis flammea (Lepidoptera: Noctuidae) in Britain // Bulletin of Entomological Research. -1997.-Vol. 87.-P. 95-99.

387. Walton C., Shape R.G., Pritchard S.J. et al. Molecular identification of mosquito species // Biological J. of the Linn. Soc. 1999. - Vol. 68. - P. 241 - 256.

388. Wasserman M. Cytology and phylogeny of Drosophila // Amer. Nat. 1963. -V.97. - №896. - P.333-342.

389. Welsh J., McClelland M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers //Nucl. Acids. Res. 1990. - Vol. 18. - P. 7213 - 7218.

390. Werren J.H., Zhang W., Guo L.R. Evolution and phylogeny of Wolbachia: reproductive parasites of arthropods // Proc. R. Soc. Lond. 1995. - Ser. B, vol. 261. -P.55-71.

391. Wesenberg Lund C. Les anophelines du Danemark et les fievres palude'ennes // C. R. Sot. Biol. - 1921. -LXXXV (26).-P. 386.

392. Wesson D.M., McLain D.K., Oliver J.H. et al. Investigation of the validity of species status of Ixodes dammini (Acari: Ixodidae) using rDNA // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - Vol. 90. - P. 10221 - 10225.

393. West D.F., Black W.C. Breeding structure of three snow pool Aedes mosquito species in northern Colorado // Heredity. 1998. - Vol. 81. - P. 371 - 380.

394. White G.B. Systematic reappraisal of the Anopheles maculipennis complex // Mosquito Systemat. 1978. - V. 10. - №1. - P. 13-44

395. White G.B. The place of morphological studies in the investigation of Anopheles species complexes // Mosq. Syst. 1977. - 9(1). - P. 1-24.

396. Wilkerson R.C., Parsons T.J., Albright D.G. et al. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers readily distinguish cryptic mosquito species (Diptera: Culicidae: Anopheles) II Insect Molecular Biology. 1993. - Vol.1, - № 4. -P. 205-211.

397. Williams J.G.K., Kubelik A.R., Livak K.J., Rafalski J.A., Tingey S.V. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers // Nucl. Acids. Res.-1990.-Vol. 18.-P. 6531 -6535.

398. Wood, D.M. and A. Borkent. Phylogeny and classification of the Nematocera // Ch. 114, pp. 1333-1370 In Manual of Nearctic Diptera. Vol. 3. Agr. Can. Monogr. -1989.-32. vl.-P. 1333-1581.

399. Wotton R.S. Bacteria as food for blackfly larvae (Diptera, Simuliidae) in a lake-outlet in Findland// Ann.Zool.Fenn. 1984. - V. 17. - P.217-221.

400. Wotton RS, Chaloner DT, Yardley CA, Merritt RW. Growth of Anopheles mosquito larvae on dietary microbiota in aquatic surface microlayers // Med Vet Entomol. 1997. - Jan;l 1(1). -P.65-70.

401. Wuelker W.F., Kiknadze I.I., Kerkis I.E., Nevers P. Chromosomes, morphology, ecology and distribution of Sergentia baueri, spec, no v., S.prima, Proviz 1997 and S.coracina Zett., 1824 // Spixiana. 1988. - Vol. 22. - №1. - P.69-81.

402. Yasothornsrikul S., Panyim S., Rosenberg R. Diagnostic restriction fragment patterns of DNA from the isomorphic species of Anopheles dims I I Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health. 1988. - Vol. 19. - P. 703 - 708.

403. Yen J.H., Barr A.R. The etiological agent of cytoplasmic incompatibility in Culex pipiens И J. Invertebr. Pathol. 1973. - Vol. 22. - P. 242 - 250.

404. Zouros E., Singh S.H., Miles H.E. Growth rate in oysters: an overdominant phenotype and its possible explanations// Evolution. 1980. - v.34. - p.856-867.