Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Ферменты обмена этанола у человека и животных при алкогольной интоксикации

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Ферменты обмена этанола у человека и животных при алкогольной интоксикации"

РГ8 ОД

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК НАУЧНО-НССЛЕДОЕАТЕЛЬСКИП ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ

На правах рукописи УДК 015.778.4:577.158,34

СОКОЛОВСКАЯ Нина Евгеньевна

ФЕРМЕНТЫ ОБМЕНА ЭТАНОЛА У ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ ПРИ АЛКОГОЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

03.00.04-<5МОХИМКЯ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Сонст-Пете-р'Зууг 1993

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте экспериментальной медицины РАМН (директор - академик РАИН Б.И.Ткаченко)

Научный руководитель:

доктор медицинских наук м.С.Усатенко

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Н.Д.Ещенко доктор мадиц!-.неких наук БIИ.Клементьев

Ведущее учреждение:

ИНСТИТУТ ТОКСИКОЛОГИИ МЗРФ

защита состоится /¿¿'¿¿¿^^ |яазг. в<г^часов

на заседании специализированного Ученого Сотета К.001.23.в1 при Научно-исследовательском институте экспериментальной медицины РЛМН (197376, Санкт-Петербург, ул. акад. Павлова, 12).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института (197378, Санкт-Петербург, ул. акад. Павлова, 12),

Автореферат разослан "_"__1993г.

Ученый секретарь специализированного Ученого Совета, кандидат биологических наук

О.Г.Куликова

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ, формирование алкогольной зависимости обусловлено нарушением функционирования различных биохимических и физиологических процессов, многие иэ которых можно рассматривать в качестве патогенетических факторов алкоголизма. К таким факторам предположительно можно отнести усиленное образование в печени ацетальдегида иэ этанола, при избыточном поступлении последнего в организм (Островский ».Н, и др. 1988). Внутриклеточная концентрация этанола и ацетальдегида в основном определяется активностью алкогольдегидрогенаэы (АДГ КФ 1.1.1.1) и альдегидде-гидрогеназы (АлДГ КФ 1.2.1.3.), локализованных преимущественно в печени. Часть образующегося из этанола высокотоксичного ацетальдегида может избежать обменных превращений в печени и транспортироваться в ток крови. В последние годи ацетальдегид рассматривают как регулятор добровольного потребления этанола (Eriksson, 1982; Скугаревская Е.И., 1988; Божко Г.К., 199»; von Wartburg, 1990; Lieber, 199«К Представляется вероятным, что количество ацетальдегида, транспортируемого иэ печени в ток крови, зависит как от общей активности АДГ и АлДГ, так и от соотношения их активностей в печени. В сущности, алкоголь-и апьдегиддегидрогеназние реакции в печени тесно взаимосвязаны и представляют собой двухэтапный путь окисления этанола до ацетата. Наряду с тем, что изучении роли каждой из этих дегидро-геназ в патогенезе алкоголизма посвящено значительное число исследований (Островский Ю.М. и др., 1986; 1988; von Wartburg е.а., 1989; Aga.rwa.1 е.е.,, 1989;, Сзтановская В.И., 1990; Охотин В.Е. и др., 1990; Sasse, tfaly, 1989; Rout, Koivusala, 1990; Goede, Agarwal, 1990; Wertmuth e.a., 1991; K&seba, Sato, 1991), неизученным остается соотношение активностей АДГ/АлДГ в развитии алкогольной зависимости и органоповрекдакпцвг действия. Комплексное исследование этих Функционально связанных дегидрогеназ актуально для получения качественно новой информации о роли дегидрогеназ ного пути обмена в формировании алкоголизма ив повреждающем действии на ткани организма, разработке объективных биохимических методов диагностики алкоголизма посвящено большое число работ (Яковченко В.А. и др., 1989; Saleepuro, 1989; Коган Б,И,, Анохина И.П., 1990; Chen, 1990; Староверов А.Т., Скворцов Ю.И., 1990; Haltberg e.a., 1991; Rosman, Lieber, 1990). Обьективная диагностика алкоголизма необходима, для контроля за ходом лечения и ремиссии, для выявления больных алкоголизом при дисснмуляции и неосознанном отрицании заболевания больными в лечебных учреждениях- Тем не менее, в настоящее время отсутствует достаточно надежный (специфический и чувствительный) тест на систематическое употребление алкоголя. Таким образом, поиск и разработка биохимических критериев алкоголизма является еажнеф практической задачей.

Одним иэ важных аспектов этой проблемы является вопрос о связи между употреблением алкоголя.и патологией сердечно-сосудистой системы (Кочегуров В.Н., 1.979; Руденокзя Г.Е. и др. , 1982; Aschey, 19Ô2; Кононяченко B.Á. и др., 1983; Наколкин И.В. и др., 1985; Бабанин и др., 1989; Грудцын Г.В;, . 1991; Есщанова Ф.С.. 1992; Аники:: Б.В. и др., 19921. Известно,что сердечно-сосудистая патология не-рыцко сочетается с патологией печени (Грудцын Г.В.. 1991) .особенно' при злоупотреблении ..спиртными налитками; Установленным фактом является устойчивая связь между повышением активности АДГ сыворотки крови и наличием патологии, печени (Усэтбнко М.С. и др., 1984; БоЧ родкин ».С. и' др,' 1985: Соколовская H.É. н др. 1987)., Таким об-, рх^он, исследование. .уровня эктив^ооти- АДГ сыворотки, крови у. боль-

ных с сердечно-сосудистыми заболеваниями имеет важное значение для дифференциальной диагностики сердечно-сосудистой патологии осложненной и неосложнешюй патологией печени.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью настоящей работы явилось изучение роли ферментов обмена этанола - АДГ и АлДГ в нарушении метаболизма в тканях человека, и животных при патологических состояниях, связанных с алкогольной интоксикацией.

В задачи работы входило:

1. Изучение активности АДГ растворимой фракции цитоплазмы и АлДГ митохондрий клеток печени у экспериментальных животных: а) предпочитающих воду или этанол в условиях свободного выбора между ними; б) при хронической алкогольной интоксикации.

2. Сравнение повреждающего действия этанола на клетки печени у животных с различным соотношением активностей АДГ и АлДГ в печени.

3. Оценка возможности использования определения активности АДГ сыворотки крови и АлДГ эритроцитов крови для диагностики алкоголизма.

4. Оценка возможности использования определения активности АДГ в сыворотке крови для диагностки патологии печени у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Установлено, что соотношение активностей АДГ/АлДГ печени играет определяющую роль в регуляции потребления этанола и в реализзации его гепатотоксического действия. Установлено, что АДГ сыворотки крови и АлДГ эритроцитов являются биохимическими маркерами алкогольной интоксикации.

основные положения, выносниш на защиту. Уровень добровольного потребления этанола у экспериментальных животных зависит от соотношения активностей АДГ/АлДГ печени, основных ферментов катализирующих два последовательных этапа окисления этанола в организме. Гепатотоксическое действие алкоголя зависит от соотношения активностей АДГ/АлДГ печени.

Для диагностики алкоголизма информативными показателями являются активность АДГ в сыворотке крови и АлДГ в эритроцитах. Определение активности АДГ в сыворотке крови и активности АлДГ в эритроцитах может быть нспользс®аво в качестве дополнительных объективных критериев для диагностики алкоголизма.

Алкогольдегидрогеназный тест может выть использован для диф-ференциалоьной диагностики сердечно-сосудистой патологии, осложненной и неусложненной патологией печени.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЫ. Теоретическое значение работы заключается в том, что проведено комплексное изучение особенностей функционирования основной ферментной системы обмена этанола в печени животных с различной алкогольной мотивацией. Полученные данные подтверждают представления о роли соотношения АДГ/АлДГ печени в регуляции потребления алкоголя, реализации его гепатотоксического действия и могут быть использованы для выяснения патогенеза алкоголизма.

Помимо научно-теоретического значения работа имеет научно-практический выход. Теоретические положения диссертации используются в лекционных курсах на кафедрах клинической биохимии и наркологии СПб МАПО, кафедре биохимии ЛСГМИ. Методическая разработка - модификация метода определения активности АДГ - применяется в научно-исследовательских работах (имеются акты о внедрении).

Полученные данные использованы для разработки вльдегиддегид-рогеназного теста, который внедрен в практику и используется в качество биохимического критерия для объективной диагностики алкоголизма и выявлевия патологии печени, сопутствукщей сердечнососудистым заболеваниям.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации «дли долох'.-нн па Советско-Тмкляндском симпозиуме по нейропсияофармакологим и еио-

медицинским аспектам алкоголизма (Москва, 1983), на городской конференции молодых ученых по механизмам регуляции физиологических функций (Ленинград, 1985), на 5-ом Всероссийском съезде невропатологов и психиатров (Иркутск, 1935); на заседаниях Ленинградского отделения ВБО (1981, 1984, 1989); на заседаниях отдела фармакологии им. С.В.Аничкова НИИЭМ (1984, 188(5, 1987, 1992).

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликованы 11 работ.

ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 96 страницах и состоит из введения, в глав, выводов и списка литературы. Библиографический указатель включает 194 работы, из них 75 отечественных и 119 иностранных источников. Текст диссертации иллюстрирован 12 таблицами и 13 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальные исследования проводили на белых беспородных крысах-самцах (200-300 г), которых разделяли на группы по предпочтительному употреблению 15» раствора этанола или воды в течение 10 дней в условиях свободного выбора. Отбор проводили в индивидуальных клетках при свободном доступе к сухому стандартному брикетированному корну. Для кдас, предпочитающих воду (ПВ), промежуточной группы (ПГ) и предпочитающих этанол (ПЭ) потребление 15%-го раствора этанола составляло соответственно 0-8Х, 16-35% и свыше 50Х от общего объема выпитой жидкости, животные, прошедшие отбор до начала биохимических исследований соотношения активностей АДГ/АлДГ печени у трех групп крыс, в течение 3-4 недель не имели контакта с алкоголем.

В опытах с изучением повреждающего действия этанола на печень животные ПВ, ПГ и ПЭ групп в течение 12 месяцев получали 15Х раствор этанола в качестве единственного источника жидкости. При этом животные дополнительно к брикетированному корму дважды в неделю получали поливитамины и творог.

Активность АДГ определяли в растворимой Фракции печени по методу Бюттнера (1965). Активность НАД-зависимых АлДГ в митохондриях печени - по методу Тоттнара с соавт. (1973) с использованием в качестве субстрата 5 мМ и 0,05 мМ ацетальдегида. Содержание белка в ткани печени определяли по методу Лоури с соавт. (1951). Активность ферментов измеряли при 25 С и выражали в единицах, отнесенных на 1 г сырой массы печени и на 1 мг белка. За единицу Фермента принимали его количество которое катализирует превращение 1 мкМ. .(НАД Н2) за 1 минуту при указанных условиях измерения (Е).

Гистологический анализ печени проводили.у алкоголизиро®анных и неалкоголизированных ПЭ, ПГ, и ПВ групп совместно с к.б.н. Р.П.Анакиной. Для гистологического анализа кусочки печени размером 0,5x0,5 см фиксировали жидкостью Вузна и 10% нейтральным Формалином и заключали в парафин. Парафиновые срезы толщиной 6 мкм окрашивали квасцовым гематоксилином Майера с окраской эозином. ■ - . ■

Для исследования активности этанолметаболизирукяцих дегидро-геназ в крови людей были налажены и модифицированы: 1) метод определения активности АДГ в сыворотке кров)') 2) метод определения активности АлДГ в эритроцитах, /что позволило изучить изменения активности этих важнейших этансивдкисляюцих ферментов у больных алкоголизмом на разных стадиях заболеЕЗпия.

Б ходе изучения динамики активности АДГ в сыворотке крови при острой алкогольной интоксикации• получали образцы крови из медвытрезвителя (68 чел,). Кровь для анализа из локтевой вены брали сразу при поступлении пациентов в медвытрезвитель и спустя 12 часов.' . ".■";•.".• ' ■,,'" •' ' •."

Для исследования динамики активности АДГ в сыворотке крови и АлДГ эритроцитов крови получали образцы крови из наркологической

клиники Петербургского психоневрологического НИИ ин. В.М. Бехтерева. Кровь для анализа брали утром, натощак и спустя но менее 24 часов воздержания от алкоголя.

Для исследования активности АДГ у больных, сердечно-сосудистыми заболеваниями, отяговргниыми и неотягогценныки патологией печени, образцы крови получали из Петербургского НИИ кардиологии, где в ходе совместной работы с сотрудниками НИИ кардиологии больные были обследованы: проведены электрокардиография, велозр-гометрия, ретгенологическое »следование сердца (томокимогра-фия), статическая сцинциграфия печени, анализы по определению уровней трансаминаз, билирубина, холестерина, в-ли-.:опротеидов и сахара в крови по обв|епришта< стандартным методикам. Контрольную группу составили добровольцы - 68 здоровых мужчин в возрасте от 1В до 80 лет - обследованные также.

Активность АДГ определяли модифицированным нами методом Skursfcy (1979), после выбора оптимальных условий протекания реакции (Ueatenko е.а., 1933). Принцип метода основан на способности АДГ катализировать две последовательные реакции : окисление бутанола НАД и, затем, восстановление п-нитрозодиметиланилина (НДМА) посредством НАД Н , который образуется в ходе первой реакции. Скорость реакции регистрировали спектрофотометрически по обесцвечиванию ИДМА, имеющего интенсивную желтую окраску.

Определение активности АлДГ в эритроцитах крови людей проводили методом, основанным на описанных ранее методах (Agarwal е.а., 1983; Inoue е.st., 1979; Mattheweon е.а., 1986), в нашей мо, дификации (Матвеева И,М. и др., 1991). Трудность определения активности АлДГ в эритроцитах связана с необходимостью освободиться от гемоглобин?», который прешггстуег фотометрическому определению активности АлДГ, поэтизму в качестве начальной процедур« проводится разделение АлДГ и гемоглобина на колонке с сефадексом СМ-бе.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием критерия Стывдента (Беленький И.Л., 1933; Кокункн В.А., 1975). При анализе активности АДГ в крови у людей равного возраста применяли метод наименьших квадратов (Чзрыков А.К., 1977).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ U ИХ ОБСУ8ДЕННВ

1. Соотношение активностей АДГ/АлДГ печени у »«Битных,

предпо ч тител ь f ю употребляющих раствор этанола или воду При изучении механизмов формирования влечения к. этанолу важная роль отводится первому промежуточному продукту его обмена - ацетальдегиду. Ацетальдегнц - соединение, способное вызывать токсические эффекты и, как следствие, отвращение к алкоголю. Наряду с этим, продукты конденсации ацетальдигида и катехоламинов обладают- морфиноподобным действием и способны повитать добровольное потребление этанола. Исследование роли ферментов обмена этанола и ацетальдегида в регуляции потребления алкоголя явилось одной иэ задач работы.

Мы исходили иэ продпопояония о том, что для проявления феномена предпочтения этякола абсолютные величины активности АДГ и АлДГ в печени имеют на такое ваяно© значение как соотношение активности этих ферментов, определяющее баланс между образованием и утилизацией ацеталъдегида. Полученные нами результат« подтвердили это предположение (табл. 1).

У предпочитает ix этячел (ПЭ) крас ооопк .тенне- активности АДГ/АлДГ в печени било значительно ниже, чем у предпочитающих воду (I7B) >:рь:с. Жшзотны« промежуточной групп;i (ПГ) г?о величина коэффициента АДГ/АлДГ занимали стыднее положение» мовду ПЭ и ПЗ ирисамм. Таким обрьзем, для кгис ПЭ карак^рен зисокий оОдпй уровень активности ферменте» е<«нен« этанола и ацетяльяет-ид* » печени и низкий ксоффци^нт ЛДГ/АлДГ. Эти розульт^тм по-эг-оляу.т считг.ть. что в почеши крыс ПЭ действует ноханизм, обсспечип-чюший

Таблица 1

Активность АДГ и АлДГ в печени крыс, предпочитающих воду или этанол

Животные Активность дегидрогеназ

икМ/иин/r печени =r==r=======r=============== АДГ/АЛДГ

АДГ АЛДГ

Предпочитающие воду (63) 4 .81+0. 03* 0. 08+0. 01** 58+4. ,5*

Промежуточная группа (71) 4 .65+0. 19* 0. .09+0. 01 49+1. .7

Предпочитающие этанол (в) 5 .19+0. 13 0. .13+0. .02 39+3. .5

* - Р<0,05; »» 4 -Р<0,02 по отношению к ПЭ группе крыс наиболее Полное окисление этанола до ацетата, и, следовательно препятствующий переносу ацетал ьдегида из печени в ток крови. Отсутствие при этом токсических эффектов ацетал ьдегида, по-видимому, является одной из причин предпочтительного потребления этанола такими животными.

2.Роль соотношения активностей АДГ/АлДГ печени в

гепатотоксическом действии хронической алкоголизации

Патология печени - наиболее частое осложнение алкоголизма. Степень поражения печени у больных алкоголизмом варьирует от слабо выраженных обратимых нарушений метаболизма до глубоких поражений ткани печени, приводящих к летальному исходу (Desmet, 1985; Брейдо В.А. и др., 1991; Русак И.Э., ЧуйкинН.А., 1991; Фаликович М.Я. и др., 1991; Bird, 1991). Биохимические механизмы повреждения клеток печени при систематическом употреблении алкоголя остаются невыясненными. Болывое значение в этом отношении придается ацетальдегиду - первому и наиболее токсичному продукту обмена этанола (Lieber, 1983, 1991; Грудцын Г.В., 1991). Количество ац&тальдегида, которое образуется в печени из этанола, в значительной мере зависит от соотношения в ней активностей АДГ/АЛДГ. Чем выше это соотношение, тем больше ацеталъдегида избегает обменных преврадес tfi, накапливается в гепатоцитах и, затем высвобождается из них в ток крови (Усатенко Н.С. и др., 1985). Поэтому мы предположили, что в услоиях хронической алкоголизации соотношение. активностей АДГ/АЛДГ в печени играет определяющую роль в повреждающем действии ацетальдегида на гепатоциты.

Экспериментальная проверка этого . предположения была осуществлена на Крысах, разделенных на ПВ, ПГ и ПЭ группы, каждая из которых в свою очередь была поделена на контрольную и опытную группы. Алкоголизацию опытных животных проводили в течение 12 месяцев. Контрольные животные в качестве питья получали воду при сходной Д.1ЙТв.

Гистологический анализ печет показал, что кистозно-жировая дистрофия у алкоголмзировантк ПЭ крыс наблюдалась в 8* случаев (рис. 1!, а у алкоголизированных ПВ крыс в 4УХ случаев. Признаки белковой дистрофии печени были такжо сильнее выражены в группе алкоголизированных ПВ крыс. Зер. метая белковой дистрофии

встречалась у ПВ крыс в 6 раз чаще, чем у ПЭ. Возникает вопрос: что явилось осноовной причиной различий в повр^ждакчг in действии этанола на печень у крыс ПЭ и ПВ? В условиях принудительной алкоголизации суточная доза употребляемого зтпжхг" у крмс всех групп была сходная (различия не' превышали • . Поэтому ло-

- в -

гично предположить, что причина неодинакового повреждающего действия алкоголя на печень крыс разных групп свяана с особенностями метаболизма этанола и накоплением относительно высоких концентраций ацетальдегкда в печени животных ПВ. Это предположение соответствует нашим данным о высоком сооотиоиеиии ЛДГ/АлДГ в печени крыс ПВ.

Рис. 1. Наличие кистозно-жировой дистрофии у животных ПЭ и ПВ групп

X

40 30 20 10

1 /////

ПЭ ПВ

/////

,'/// //// //// //// /У/// //77

ПВ

ПВ животные СЗ пэ »квотные

контроль алкоголизация

По оси ординат-иаличие кистозно-жировой дистрофии в процентах.

При сравнении активности дегидрогеназ в печени крыс ПВ, ПГ и ПЭ видно, что величины активности АДГ контрольных животных всех трех групп были близкими ( соответственно 6.1; 5.9; 6.3 В/ч), а активность АлДГ у к ом рольных ПВ крыс была в 2 раза ниже, чем у контрольных ПЭ крыс. Вследствие различий в активности АлДГ коэффициент АДГ/АлДГ у животных ПВ был значительно выве, чем у животных ПЭ (табл. 2). Таким образом, наличие у животных ПВ относительно высокого соотношения активностей АДГ/АЛДГ создает необходимые условия для накопления в гепатоцитах более высоких концентраций ацетальдегида, чем у животных ПВ. Активность АДГ печени у всех трех групп алкоголизировавных крыс снизилась, а

Таблица 2

Влияние длительной (12 месяцев) алкоголизации на активность АДГ и АлДГ в печени крыс, предрасположенных к потреблению води или раствора этанола

Условия Животные эксперимента

Число Активность ферментов Соотношение опытов Е/г сырой массы печени активностей ---------------------- АДГ/АлДГ

АДГ АлДГ

Предпочи- К в в. . 1010.03 0. .0710. .01 87+8. 2

тающие воду О в 4 .90+0.07* 0. 10+0. 01* 49+5. 1»

Промежу- к 10 5, 94+0.05 0. .09+0. .01 66+3. .8

точная группа о в 4. 6'=1+0. 08* 0. .13+0. .01 42+4. 4*

Предпочи- к 7 6. 28+0.04 0. 15+0. 0': 42*3. 5

тающие этанол 0 6 4. .92+0.04* 0. 16+0, .02 31+2. Э*

* - Р<0.05; К- контроль; О- опыт.

активность АлДГ несколько возросла. В результате у всех крыс после алкоголизации коэффициент АДГ/АлДГ снизился, причем наиболее значительно в группе крыс ПВ. Таким образом, различие в величинах коэффициента АДГ/АлДГ между тремя группами крыс уменьшились, однако ок оставался наиболее высоким у ПЭ крыс (4915.1; табл. 2).

Следует обратить внимание, что концентрации эндогенного этанола и ацетзльде гида в печени человека и животных крайне низки по сравнению с потенциальной активностью ферментных систем их окисления (Островский W.M. и др., 1938). Поэтому уместно подчеркнуть, что "биохимические предпосылки" для накопления в гепатоци-тах токсических доз ацетзльдегида могут реализоваться лишь при поступлении в организм избыточных, количеств "экзогенного" этанола. Так, гистологический анализ печени контрольных групп животных ПЗ и ПВ не показал существенных различий между ними (рис. 1). У этих животных наблюдалась слабовыраженная белковая дистрофия печени, преимущественно в зернистой Форме. Из представленных данных видно, что соотношение акивностей АДГ/АлДГ печени, основных ферментов, ме-таболизирующих этанол и ацетальдегид, определяет предпочтительное добровольное употребление раствора этанола или води экспериментальными животными, а также играет решающую роль в осуществлении гепа-тотоксического действия алкоголя. Животные с высоким соотношением АДГ/АлДГ не только отвергают этанол, у них быстрее развивается дистрофия печени при принудительной алкоголизации.

3. Динамика активности АДГ и АлДГ в крови больных алкоголизмом. Значение для диагностики алкоголизма

С точки зрения биохимических маркеров алкоголизма особый интерес представляют ферменты обмена этанола и ацетзльдегида АДГ и АлДГ. Для исследования активности этих ферментов в крови людей были налажены и модифицированы два метода: определение активности АДГ в сыворотке крови и определение активности АлДГ в эритроцитах. Используемые прежде методы определения активности АДГ в сыворотке крови, основанные на оптическом тесте Вэрбург (Sh.iixia.eue е.а., 1972), позволяли регистрировать лишь высокие значения активности АДГ крови, которые обычно наблюдались при различной патологии печени. Несколько расширили возможности экспериментаторов определение активности фермента при повышенной температуре (Carter, lese lbacher, 1977), а также метод с использованием полусинтетического тиодеривата НАД (Fujisawa е.е.., 1976). В настоящей работе для измерения активности АДГ в сыворотке крови мы использовали метод Скурски с соавт. (1979) в нулей кодификации ((Je&tenko е.а., 1983), принцип которого основан на способности АДГ катализировать две последовательные реакции; окисление бутанола НАД и, затем, восстановление НДМА посредством НАД Н , который образуется в ходе первой реакции.

Учитывая новизну данного метода, мы исследовали некоторые каталитические свойства кристаллической АДГ . печени лошади и на основании полученных данных осуществляли выбор оптимальных условий протекания гшкохх^ъдегидрогсмазвой реакции. Были определены: 1) слияние концентрации бутанола на активность АДГ и Км АДГ для бутанола; 21 влияние концентрации НАД на активность АДГ и Км А"Г для НАД; 3) зависимостиь скорости реакции от концентрации ндма и ферментного белка.

По сравнению с традиционными методами, которые применялись при изучении влияния хронической алкогольной интоксикации на активность Адг сыворотки крови < ГЭДтовенхо В.И.. 1975; Громашевская Л.Л. и др., 1976), чувствительность теста с НДКА оказалась значительно гите (рис. 'J), благодаря разработке данного высокочувствительного спектгюфэтометр! «ческого метоп« оиредалеппя активности АДГ is . ita-op<m«f npc'ivn (UaatPnkc е. а., 19Ö?> с :>.ппо)Ч стороны, ста-

ло возможным расширить представления о роли этого энзима в патогенезе алкоголизма, а с другой - оценить значимость данного теста для клинической практики. Использование алкогольдегидрогеназного теста, основанного на методике Скурски (Usatenko е.а., 1903) позволило определить активность АДГ у всех о«Зследованных: здорових и больных алкоголизмом (Уеатенко и др., 1934; Бокий И.В. и др., 1984, 1985, 1937;,. Ьородкин ».С. и да., 1985; Соколовская Н.Е., Калистратов H.A., 1935; Соколовская Н.Е., 1985; Мошков К.А., и др., 1985; Соколобскэя Н.Е. и др., 1967).

Рис.2. Активность кристаллической АДГ. измеренная разными

Ö7B (ТГзо оТ/З"

По оси абсцисс - концентрация фермента в 1 мл инкубационной среды (мг х 1000); по оси ординат - скорость реакции (Е мин х 1000). Состав инкубационных смесей:

1. На - фосфатный буфер рН 8.5-0.0 ММ; н-бутанол - 10 мМ; НАД- 0-2 мМ; НДМА - 0-02 ММ. Обьем про«5ы 2.6 мл.

2. К - фосфатный буфер рН 7-4-0.1 М; НАД«Н - 0.13 мМ; ацет-альдегид - 3.3 мм. Обьем про<5и - Змл.

3. Глициновый буфер рН 9.6-0.1 М; НАД - 0.5 мМ; этиловый спирт- 0.7 И. ,Обьем пробы - 3 мл. Измерения проводилсь при температуре 25еС.

На рис. 2 показаны результаты измерения активности кристал-

Таблица Э

Динамика активности АДГ сыворотки крюви пр>и острой акогольной

интоксикации

Число Активность АДГ, Е/л

оболе- =============.т===г==================;==

Обследовэннью довэн- Опьянение средней Через 12 чэ.сов возник и тяжелой степени держания от алкоголя

Больные хро- 35 4-1110.46+ 3.52+0.37*

ническим

алкоголизмом

Злоупотребля- 21 2.65+0.221- 2.09+0.14*

гадие алкоголем, но без признаков хронического алкоголизма

Употр«эблякиме 12 1.23+0.14 1.10+0.09

алкогольные на-питкп эпизодически

-Р'.О. I

лической АДГ печени лошади методом, примененном нами для исследования активности АДГ сыворотки крови У людей, по сравнению с об-щепринятьми ранее методами (Battrier, 1965). Скорость реакции при использовании ВДМА в 20 и 7 раз выше скорости реакций, измеренных соответственно по образованию и убыли НАД» H . Учитывая коэффициент абсорбции для НЛД'Н и НДНА чувствительность нового метода в 55 раз выше чувствительности теста, основанного на прямом измерении образования НАД > H (Sfcweefcy е.а., 1979). ; Ори■изучении влияния острой алкогольной интоксикации На динамилу активности АДГ сыворотки крови бьшо показано, что в период алкогольного опьянения самые высокие величины были у больных хроническим апкогзджздом, $ наиболее низкие - у лиц, при случайном опьянении (табл. 3).

Как видно из табл. 3, через 12 часов у больных хроническим алкоголизмом активность АДГ снизилась на 20Х, У лиц, злоупотребляющих алкоголен в форме пьянствва - на 21%, а при -случайном опьяне-ниии снижение активности АДГ было незначительным.

В настоящее время можно считать установленным, что активность АДГ в крови больных алкоголизмом возрастает, причем ее повышение тем больше, чем длительнее заболевание (Оеаteriko, 1983; Бокий И.В., и др, 1984; УСатенко И.С. и др., 1984; 1985; Бородкин Ю.С., 1985; Соколовская Н.Е., 1985). На основании этих данных било предложено использовать анализ активности АДГ крови в качестве дополнительного критерия для диагностики хронической интоксикации алкоголем (Бокий И.В. и др., 1985). Однако сведения о величинах активности АДГ сыворотки крови в период ремиссии крайне недостаточны, а динамика изменений этих показателей в ремиссии не изучена. Вместе с тем, имеются основания считать, что активность АДГ сыворотки крови при длительных ремиссиях остается повышенной в то время, как другие показатели функционального состояния печени нормализуются. Цель этого раздела исследований состояла в изучении изменений активности АДГ сыворотки крови больных алкоголизмом при различных сроках воздержания от алкоголя. Для решения этой задачи было обследовано 242 больных алкоголизмом второй стадии мужчин в возрасте от 18 до 68 лет, пациентов наркологической клиники. Контрольную группу составили 94 здоровых мужчины, «©злоупотреблявших алкоголем. В группу с наиболее длительной ремиссией: 2 и более лет (22 больных) включены 5 больных с ремиссией более 5 лет и один (зольной с ремиссией 10 лет. Из табл. 4 видно, что самую многочисленную группу составили больные с алкогольным абстинентным синдромом (152 человека). В эту группу были включены пациенты, находившиеся в клинике в течение 1-20 дней с момента поступление. У этих пациентов активность АДГ в среднем была в три раза вине контрольной величины, что согласуется с нашими прежними данными о значительном повышении активности АДГ в сыворотке крови больных алкоголизмом в период абстинентного синдрома (Бокий И.В. и др., 1984; Усатенко М.С. и др., 1904, 1985; Бородкин Ю.С, и др., 1985, 1989; Соколовская Н.Е. 1985). Наиболее значительное повышение активности АДГ в сыворотке крови наблюдалось в течение первых двух оутег. после окончания запоя. В последующие 3-5 суток воздержания от алкоголя происходил значительный спад активности АДГ с 4,48 до 2.71 Е/л (табл.4). При дальнейшем воздержании от алкоголя активность АДГ продолжала постепенно снижаться. Однако даже при длительных ремиссиях сроком более двух лет активность АДГ значительно превызйэлэ контрольный уровень.

Активность аланннэминотрансфераэы (АЛТ), так же как актив ность АДГ, максимальной била в первые два дня развития абстк нентного синдрома ( тзбл. 4 ). В этот срок она F; среднем была раЕ ной 0.7510.07 ММ/час/л с patбрусом значений от 0.4в до 0 мМ/час'л, то есть у многих больных пр«5ЕШ1злэ верхнюю rp»3HHL норму 0,6В ММ'ЧЭС/Л (MftHbWtKOE р.в., 1933 К Б процесса ставши«? ции ремиссии активность АЛТ «■. крови ri-.■ггаденмо '■.т.лгз.пэсь. В ц»:

Таблица 4

Активность АДГ и аланинаминотрансферазы в сыворотке крови больных алкоголизмом через разные сроки воздержания от алкоголя

Срок воздержания Число об- Активность Фермента

дован- следован- ================== ============:

НЫХ АДГ (В/л) АЛТ (мМ/час/Л

Алкогольный абс-

тинентный синд-

ром (1-20 дней) 152 3. 45±0.16*» 0.63+0.04*

До 2-х дней 37 4. 46+0.38«* 0.75+0.07*

3-5 дней 42 2. 71+0.21** 0.58+0.04*

8-10 дней 39 2. 41+0*19** 0.55+0.04*

От 11 дней

до 1 месяца за 2. 13+0.18* 0.49+0.03*

От 5 месяцев

до 1 года 15 1. 60+0.15* 0-46+0.02

От 1 года

до 2 лет 15 1. 44+0.14 0.44+0.03

Более 2-х лет 22 1. 42+0.09* 0.43+0.02

Контроль 94 1. 18+0.06 0.41+0.01

* - Р < 0,95; »* - Р < 0,91 лом динамика активности АЛТ била сходной с динамикой АДГ. Однако изменения активности АДГ были значительно более выражены.

Значительный интерес для диагностики акоголизма представляет собой активность АлДГ, которая при заболеваниях печени неалкогольной этиологии в эритроцитах не меняется, а в цитоэоле печени значительно снижается (Matthewson, Record, 1983, 1986; Goedde, Agarwal, 199Я).

АлДГ широко распространена в различных органах и тканях (PietruBzko, 1983), но наиболее активна в печени, где, главным образом, окисляется этанол (Tomlta е.а., 1986). В печени человека АлДГ представлена 2 изоферментами, различающимися по кинетическим характеристикам и внутриклеточной локализации (Fietruozko, 1983). В эритроцитах активвость АлДГ на 2 порядка меньше, чем в печени, и идентична изоферменту цитозоля печени (Agarwal o.a., 1983; Inoue е.а., 1979; Matthewson е.а., 1986).

После приема высоких доз алкоголя значительная часть образующегося в печени ацеталъдагида переносится в ток крови (Llnd-гов. 1978). Ацетальдегид легко проникает из плазмы крови ч эритроциты, в которых окисляется до ацетата (Maring е.а., 1982). Таким образом, исследование активности АлДГ в эритроцитах приставляется целесообразным для выяснения возможного участия этого фермента в патогенезе алкоголизма и возможности использовать этот критерий для диагностики алкоголизма.

Мы изучали активность АлДГ в эритроцитах у здоровых людей и больных алкоголизмом с разными сроками воздержания от алкоголя модифицированным нами спектрофотометрическим методом, основанным на выделении АлДГ-содержащих фракций из гемолизатов эритроцитов посредством хроматографии на сефадексе СИ-50 (Матвеева И.И. и др.. <S'91).

Гезультаты измерения активности АлДГ у здоровых и больных алкоголизмом с разными сроками воздержания от алкоголя представлены в табл. 5, из которой видно, что в эритроцитах людей, употребляющих алкоголь в значительных количествах, активность АлДГ достоверно ниже (Р'-0.01), чем у 0.180 и 0.292

нМ/мин/иг соответственно. Низкая активность АлДГ в эритроцитах сохранялась примерно в течение 1 месяца после прекращения yno-i-

ребления алкоголя, однако даже в эти сроки прослеживается тенденция к ее повышению: 0.180 нМ/мин/мг у лиц с воздержанием от алкоголя сроком от 1 до 7 дней и 0.207 нИ/мин/мг - от 7 дней до 1 месяца. При более длительной ремиссии (от 1 месяца до 1 года) активность исследуемого фермента практически нормалиуется (0.285 нМ/мин/мг).

Представленные данные согласуются с результатами других авторов, свидетельствующими о снижении активности АлДГ в эритроцитах при хроническом употреблении алкоголя (Chend-Chung е.а., 1984; Matthewson е.а., 1986). Подобное уменьшение активности АлДГ наблюдали и в цитозоле печени при хроническом алкоголизме (Thomas е.а., 1982). Из табл. 5 следует, что низкая активность данного фермента в эритроцитах нормализовалась после 1 месяца воздержания от алкоголя. Эти результаты соответствуют данным других авторов (Agarwal е.а., 1983; Chen-Chung е.а., 1984) о нормализации активности АлДГ в эритроцитах через 2-4 недели после прекращения употребления алкоголя. Существуют сведения и о более длительных сроках, необходимых для нормализации активности АлДГ в эритроцитах-(Agarwal е.а., 1Э83).

Таблица 5

Активность АлДГ в эритроцитах эдороввых лкаей и больных алкоголизмом с разными сроками воздержания от алкоголя

Группы

обследованных

Срок воздержания

ЗдороЕыз (9)**

Больные

алкоголизмом:

1-я группа (11) 1-7 дней

2-я группа (30) -7-3© дней

3-я группа (20) 1 месяц-

1 год

Активность АлДГ, Возраст, годы нМ/мин/мг

0.292+0.027

0.18Э±0.017* 0.207+0.016*

2Q-5S (средний-44.6)

33-58 (средний-44.5) 24-58 (средний-38.3)

0.285±0.029 27-49 (средний-40.0)

* - Р<0.01 дано в сравнении со здоровыми; '** - указано число обследованных.

Активность данного фермента в эритроцитах в "0О раз ниже, чем его активность в цитозоле печени (МаЬ^еизоп е.а., 1986), и несомненно, печень является главным местом окисления ацетальде-гида. Возникает вопрос о возможном участии АлДГ эритроцитов в окислении ацетальдегида в организме. Активность АлДГ в эритроцитах крови лиц контрольной группы составляла в среднем 0.3 нМ/мпн/мг при 37 е С (табл. 5). В организме взрослого человека циркулируют примерно 4.5 л крови. После центрифугирования крови обьем плазмы и эритроцитов находились в соотношении 55:45. В 1 мл приготовленнного нами гемолизата !1 часть взвеси эритроцитов + 4 мл воды) содержалось в среднем 50 *г белка. На основе этих величин легко рассчитать, что вся АлДГ в эритроцмтоах крови взрос, ого человека способна окислить 400 мг ацетальдегида за 1 час. Ац^тальдегид присутствует в организме в равновэсных (1:100) с этанолом отношениях (МаЛсЪгслггсз, 1973). После приема этачола его солер.*г>нче в цельной крови человека может колебаться в широких пределах: от 2 до 13 г, т.е. в крови при этом циркулирует приметно от 29 до 180 мг ацетальдегида 'Матвеева И.И.и др.. 1991).

Ачетальдегид легко проникает из плазмы в эритроциты (Li.nd.ro3, 1973). Апьдегиддегпдрогеназвая реакция протекает приблизительно с рэвчой скорость*".' при использовании в качеств* субстрата как ацетальдегида, Т2>; и пропионового альдегида Ппеие е.а.. 1980). Н-? .~мс-тр-я на пр-пблнзитч'льгк'сть сделанных расчетов они показывают.

что АлДГ эритроцитов потенциально достаточно активна, чтобы в течение 1 часа окислить циркулирующий в крови ацетальдегид. Представляется вероятным, что АлДГ в эритроцитах может существенно влиять как на развитие алкогольной интоксикации, так и на Формирование алкоголизма.

Таким образом, исследование динамкики активности АДГ сыворотки крови и АлДГ эритроцитов при разных сроках воздержания от алкоголя показало, что имеются разнонаправленные изменения активности данных зтанолметаболиэируквдих ферментов в крови. Так, в период абстинетного синдрома в крови максимальная активность АДГ сыворотки (табл. 4) и минимальная активность АлДГ эритроцитов (табл. 5) создают ситуацию, при которой высокое соотношение активностей АДГ/АлДГ крови способствует накоплению в крови высокотоксичного . ацетальдегида, что, безусловно, утяжеляет состояние больного хроническим алкоголизмом в период абстиненции. При этом следует упомянуть, что по данным Thomas с соавт. (1982) активность АлДГ печени при хровическом алкоголизме также значительно снижается. В ходе ремиссии активность АДГ сыворотки крови снижается значительно, но не приходит к контрольным (нормальным) величинам (табл. 4), а активность АлДГ эритроцитов через месяц воздержания от алкоголя нормализуется (табл. 5). При этом уменьшается соотношение активностей данных энзимов, что благоприятствует окислению ацетальдегида в крови. При острой алкогольной интоксикации наблюдали снижение активности АДГ сыворотки крови через 12 часов после приема алкоголя с приближением уровня ее активности к контрольным величинам (табл. 3).

Можно предположить, что эти изменения активности этанолокис-ляющих ферментов связаны с мембранотропным действием этанола и ацетальдегида на гепатоциты и эритроциты, а также с воздействием ацетальдегида, который усиливает процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) в печени, что в свою очередь также ведет к увеличению проницаемости клеточных мембран, и кроме того, продукты ПОЛ ингибируют активвость АлДГ (Буров Ю.В., Ведерникова H.H., 1985; Балаклеевский А.И. и др., 1988; Tsutsuml е.а., 1989; Груд-цын Г.В., 1991; Брейдо В.В., 1991).

Проведенные исследования показали, что активность АДГ сыворотки крови и активность АлДГ эритроцитов являются информативными показателями и их определение может быть использовано в качестве дополнительных объективных критериев дня диагностики алкоголизма на разных этапах развития заболевания.

4. Активность АДГ сыворотки крови больных с

сердечно-сосудистой патологией при наличии и отсутствии злоупотребления алкоголем

Вопрос о связи между употреблением алкоголя и заболеваниями сердечно-сосудистой системы привлекает большое внимание исследователей . Убедительно показана неблагоприятная роль алкоголя в возникновении алкогольной миокардиодистрсфии (АМД), гипертонической болезни (ГБ), ишемической болезни сердца (ИБС), нейроцир-куляторной днстонии - НЦД (Кочегуров ВВ.Н., 1978; Руденская Г.Е. И др. 1982; Ashley, 19В2; Кононяченко В.А. И ДР., 1983; Маколкин И,В. и др., 1985; Бабанин A.A. и. др.-, 1989;Грудцын Г.В., 1991; Еганова Ф.С., 19Э1; Аникин В,В. и др., 1992). Кроме того, злоупотребление алкоголем приводит к различным поражениям печени: жировому перерождению, гепатиту, фиброзу и циррозу, которые могут быть, за исключением, циррозов, обратимы после отмены алкоголя (Fleming, MçGee, 1991; Грудцын Г.В., 1991). . .

Повышение активности АДГ в сывортке крови свидетельствует о нзруыенми целостности гепптсцитов, при котором этот Фермент переходит в ток. крови (Meseу p.a., 19658; Гуртовенко В.М. и др.. 1974 . Громаяевская Л-.Л. и др., 1976; Усатенко М.С. и др., 1984;

Бородкив D.C. и др., 1885). Настоящее исследование предпринято с целью оценки клинической значимости алкогольдегидрогенаэного теста для обнаружения патологии печени, сопутствующей сердечно-сосудистым заболеваниям, особенно АМД.

У обследованных больных били следующие сердечно-сосудистые заболевания: алкогольная ииокардиодистрофия, ишемическая болезнь сердца, гипертоническая болезнь и. нейроциркуляторная дистония. Наряду с опросом больных (алкогольный анамнез) определяли уровни холестерина, -лнпопротендов, сахара, аминотрансфераз, билирубина и активность АДГ в крови. Кроме того, были проведены электрокардиография (ЭКГ), велоаргонетрия (ВОН), рентгенологическое исследование сердца (тоыокиногрэфия) и статическая сцинтиграфия печени. В каждой группе больных (1-я - АНД, 2-я - ИБС, 3-я - ГБ, 4-я - НЦЦ) были выделены пациенты, с патологией печени и без нее. О наличии патологии печени судили по изменениям биохимических показателей (содержание билирубина больше 20.52 мкыоль/л, активность трансаминазы выше 0.68 «моль/л) и по даниьм статической сцинтиграфии печени. Контрольную группу (68 здоровых мужчин в возрасте от 18 до 60 лет) (вставили добровольцы, обследованные в Петербургском НИИ кардиологии (Соколовская Н.Е., Калистратов H.A., 1985). ( :

50 из 123 обследованных злоупотребляли алкоголем, т.е. употребляли спиртные валмтки (водка, коньяк,вино, пиво) 2 раза в неделю и более. Патология печени выявлена у 35 больных, из которых 19 злоупотребляли алкоголем, причем, только у двух из них заболевание печени нельзя было связаггь с приемом алкоголя.

1-я группа . . (основной . диагноз АИД) полностью состояла из больных,злоугэгребляюммх алкоголем. При проведши» ВЭМ у больных с АМД клинических и электрокардиографических проявлений ишемии миокарда не обнаружено. Однако у 12 больных отмечалось снижение толерантности к физической нагрузке. В этой груше сердечно-сосудистая патология в 42% случаев сочеталась с поражением печени. Наиболее часто регистрировалась и повышенная активность АДГ крови.

Из 31 больного ЮС злоупотребляли алкоголем 13Х, имели патологию печени 16Х, активность АДГ в крови была повышена у 29% больных. Среди 27 больных ГБ злоупотребляли алкоголем ПК, патология печени была у 4XX, и у такого же количества больных активность АДГ превышала норму. Из 37 больных РОД злоупотребляли спиртными напитка») 40*, имели патологию печени 19а, активность АДГ в крови была вше у ЗЗХ больных.

Таблица 8

Сочетание сердечно-сосудистой патологии с патологией печени и активность АДГ сыворотки крови

Пациенты без патологии Пациенты с патологией печени печени

Основной • Число обсле- Активность Число обсле- Активность

диагноз дованных АДГ, В/я дованных АДГ, Е/л

1. АИД 1в 0.954Ö.16» 12 3.7S±1.21*

2. ИБС 26 1.124». 13 5 1.4810.73

3. ГБ I и П ст. 16 0.9ÖS».12* 11 2.7810.07*

4. КПД за 1.12+0.17 7 2.2310.66

контроль 66 1.20+0.20

« - р< е.е>5

При сравнении активности АДГ в крови у больных указанных групп (табл. 6) выявлено, что в среднем этот показатель находился в пределах нормы у всех больных без патологии печени. При соче-

тании сердечно-сосудистых заболеваний с патологией печени наблюдалось достоверно более высокая активность АДГ в сыворотке крови, особенно у больных с АНД, котору» составляли лица, злоупотреблявшие алкоголем.

Кроме этого были проанализированы данные по активности АДГ у тех же больных по степени употребления акоголя (табл. 7). У больных, которые употребляли спиртные напитки 2 раза в неделю и более имели сочетание патологии сердечно-сосудистой системы и печени, была достоверно более высокой активность АДГ в крови. Это указывает на развитие у них тяжелого поражения печени, которое было подтверждено наличием дифсрузно-неравномерного поражения паренхимы печени с участками гибели гепатоцитов по данным радиоизотопного исследования.

Таблица 7

Активность АДГ у больных, злоупотребляющих и незло употреблявших алкоголем

Пациенты без пжтоло- Пациенты с патоло-Группы обследованных гни печени гией печени

Число Активность Число Активность больных АДГ, Е/л больных АДГ, Е/д

1.Пациенты,злоупотреблявшие алкоголем 31 0.97+0.11* 19 3.28+0.84*

2.Пациенты,употреблявшие спиртные напитки эпизодически 57 1.15+0.12 16 1.84+0.41

* - Р<0.005

Таким образом, комплексное обследование больных с АМД, ГБ, ИБС и НОД дало возможность судить о валичии патологии печени по повышенной активности АДГ сыворотки крови. По нашему мнению, определение активности АДГ сыворотки крови может быть использовано в качестве дополнительного критерия для диагностики поражения печени у больных с различными сердечно-сосудистыми заболеваниями, особенно с АМД.

ВЫВОДЫ

1. У крыс-самцов, предпочтительно употребляющих раствор этанола, соотношение в печени активностей АДГ/АлДГ ниже, чем у животных, предпочтительно употребляют« в качестве питья воду.

2. При длительной алкоголизации (12 месяцев) у крыс с высоким коэффициентом - АДГ/АлДГ в печени (предпочитающие воду) повреждающее действие алкоголя на клетки печени выражено сильнее, чем у крыс с относительно низким коэффициентом АДГ/АлДГ (предпочитающие этанол).

3. У злоупотребляющих алкоголем мужчин, включая больных алкоголизмом, в период острой алкогольной интоксикации активность АДГ сыворотки крови в 3 раза превышает контрольный уровень.

4. У больным алкоголизмом значительное повышение активности АДГ в сыворотке крови наблюдается, в течение первых ..двух суток вынужденного воздержания от алкоголя. При дальнейшем воздержании от алкогсля активность АДГ постепенно снижается. Однако, даже при длительных ремиссиях сроком более двух лет активность АДГ в сыворотке хрови остается выше контрольного уровня. , •

5. У больных алкоголизмом достоверно снижена активность. АлДГ эритроцитов крови, которая нормализуется в период ремиссии сроком 1 месяц. . ' ■ ■ .. .."••••'.'

, 6. Активность. АДГ,-о»гор<отки чровй.'больных'с' сердечно-сосудистой ' патологией,' сочетанноЛ, .<:•/ патологией печ<~нй ;■/достоверно ыли^'. .

чем у больных»'не имеющих патологии печени. Наиболее высокий уровень активности АДГ наблюдается в группе больных с алкогольной миокардиоди строфией.

7. Для диагностики алкоголизма информативными показателями являются активность АДГ в сыворотке крови и АлДГ в эритроцитах. Определение активности ЛИГ в сыворотке крови и активности АлДГ в эритроцитах может быть использовано в качестве дополнительных объективных критериев для диагностики алкоголизма.

8. Алкогольдегидрогеназный тест может быть использован для дифференциальной диагностики сердечно-сосудистой патологии, осложненной и неослохнеииой патологией печени.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ. ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

I.Uaatenko M.S., Bok.y I.V., Moehkov К.A., Petrova H.A., Soko-lovek&ya M.E., Hickólaev Ya.V., Alcohol de hydro gene.ee wvd cerulo-plnemin In human and animal blood serosa tkurlne acute and chronic alcohol Intoxication //Heurophermacology arid biomedical aapectB of alcoholism: Soviet-Finnish Simp.-Moscow, 1933 - P. 120.

2-Бородкин B.c., Бокий И.В., Усатенко И.С., Соколовская Н,В., Петрова M.А., Николаев ю.в. Активность адкогольдегидрогеназы сыворотки крови человека и жкеоткых при острой и хронической алкогольной интоксикации. /Фармакология токсикология - 1985. - Т. 46, N 3. - С. 99-103.

3.Соколовская К.В.,' Калистратов H.A. лктнвность алкогольде-гидрогеназы крови людей и животных разного возраста /Ред. жури. Фармакология токсикология, 1885 (Рук. деп. в ВИНИТИ 22 мая 1985 Г., H 3528-05 Деп.К

4.Соколовская Н.Е. влияние алкоголя на активность алкогольде-гидрогеназы э крови людей й животных //Механизмы регуляции физиологических функций: Тез. докл. - Л., 1985. - С. 166.

5. Ноюксв К.А., Петров В.Н., Бурмистров С.О., Соколовская Н.Е., Гриненко А.Я. Алкогольдегидрог&наза и церулошшзмин сыворотки крови .при иглорефлексстерапии больных алкоголизме»«. //Иеханиэмы регуляции физиологических функций. Л., 1985. - С. 26-27.

6. Мотков к.А.. Гриненко а.Я., Соколовская Н.Е., Петров В.Н., Жердева в.ii. , Дьячкова h.a. Динамика активности алкогольдегидооге-назы и церулоплазкина в ходе лечения алкоголизма и бензотоксикома-нии //Бсерос.сьезд невропатологов и психиатров, 6-и: Тез. докл. -М., 1885. - Т. 2. - С. 91-03.

7.Соколовская 8.В., Усат^нко Н.С., Калистратов H.a., Гуре-вич B.C., Бородкин Ю.С. Активность Ешкогольдагидрогеназы в сыворотке крови у больных с сердечно-сосудистой патологией //Кардиология - 1387. - Т. 27, M 7. - С. 111-114.

8.Бородки» B.C., Усатенко ' М.с., Meantes к.А., Матвеева И.М., Бурмистров С.о., Николае® Ю.В., Петрова H.A., Борисова О.П., Соколовская Н.В., Бульон В.В. //Заключительный отчет о НИР "Изучение некоторых белков головного мозга (S-iee, 14-3-2 и ) и множественных форм алкоголадегидрогеназы в печени в патогенезе алкоголизма. 1988, ин®. Я 0287.0041.051.

9.Бокий И.В., Усатенно Н.С., Трюфанс^ В.*., Соколовская Н.Е. Активность алкогольдегидрогевазы и содержание липидов в сыворотке крови больных алкоголизмом в ремиссии //Ремиссии при. алкоголизме. -Л., 1887. - С. 54-61.

10.Усатенко М.С., Петрова H.A., Соколовская И.В., Аяаки-на Р.П. Повреждающее действие этанола на печень: роль алкогольде-гидрогеназц и альдегиддегидрогеназы //Цитология. - 1089. - Т. 31, H 5. - С. 604-607J

II.Матвеева И.К., Петрова H.A., Усатенко U.C., Соколовская Н.Е., Рыбакова Т.Г., Борюдкин ю.С. Ак-^ивность альдегиддегидроге-казы в эритроцитах больных алкоголизмом //Лав. дело. - 1991. -N 6. - С. 20-24.