Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Фармако-токсикология композиционных антибактериальных препаратов и их клиническая эффективность при послеродовом эндометрите у коров

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармако-токсикология композиционных антибактериальных препаратов и их клиническая эффективность при послеродовом эндометрите у коров"

На правах рукого*

ШАПОШНИКОВ ИВАН ТИХОНОВИЧ

фармако-токсикология композиционных

антибактериальных препаратов и их клиническая эффективность при послеродовом эндометрите у коров

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

06.02.06 - ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Воронеж - 2013

005531688

Работа выполнена в отделе фармакологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии»

Научные консультанты: доктор биологических наук

Востроилова Галина Анатольевна

Официальные оппоненты: Аргунов Муаед Нурдинович

доктор ветеринарных наук, профессор, профессор кафедры терапии и фармакологии факультета ветеринарной медицины и технологии животноводства ФГБОУ ВПО «Воронежский аграрный университет им. императора Петра I»

Жуков Иван Васильевич

доктор ветеринарных наук, заместитель директора Липецкого филиала ОГБУ «Тульская межобластная ветеринарная лаборатория» Попов Леонид Кириллович доктор ветеринарных наук, профессор, профессор кафедры зоотехнии и основ ветеринарии ФГБОУ ВПО «Мичуринский государственный аграрный университет»

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Белгородская государственная

сельскохозяйственная академия им. В .Я. Горина»

Защита состоится « 16 » августа 2013 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 006.004.01 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии» (ВНИВИПФиТ) по адресу: 394087, г. Воронеж, ул. Ломоносова, 114-6.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ ВНИВИПФиТ Россельхозакадемии

Автореферат разослан «/<2итюля 2013 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета, к.б.н., доцент

Ермакова Т.И.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из причин возникновения временного или постоянного бесплодия у коров являются послеродовые эндометриты, сдерживающие воспроизводство стада крупного рогатого скота. Поэтому вопросам этиологии, патогенеза, профилактики послеродовых эндометритов, совершенствованию способов лечения больных коров уделяется большое внимание.

Однако, несмотря на достижения современной ветеринарной науки в этой области, послеродовые эндометриты повсеместно распространены, носят массовый характер и остаются одной из главных проблем в воспроизводстве животных

Нежданов А.Г. с соавт. (2005), Турченко А.Н., Коба И.С. (2009), Шабу-нин C.B. с соавт.(2009, 2012), Михалев В.И. (2012) и др. считают, что болезни органов размножения у крупного рогатого скота представляют одну из важнейших проблем современного ветеринарного акушерства и гинекологии, так как являются основной причиной возникновения у коров длительного бесплодия сопровождающегося снижением молочной продуктивности, прекращением лактации и преждевременной их выбраковкой. Болезни органов размножения развиваются на фоне глубоких структурных изменений в половых органах. В матке они проявляются в виде отечности серозной и мышечной оболочек, отсутствия признаков ретракции, диффузной инфильтрации эндометрия лимфо-идными клеточными элементами, некроза, распада и отторжения поверхностного слоя, сильной васкуляризации и кровенаполнения кровеносных сосудов, вследствие чего в матке образуется кровоточащая раневая поверхность, приводящая к обильным кровянистым выделениям из половых органов. При этом создаются благоприятные условия для проникновения в полость матки и размножения патогенных микроорганизмов, токсины которых усиливают нарушение обмена веществ и микроциркуляцию в пораженных тканях. Устанавливается порочный круг патологических процессов с изменением причинно-следственных отношений. В развитии патологического процесса значительно возрастает роль условно-патогенной микрофлоры, в связи с повышением ее вирулентности и числа штаммов, устойчивых к лекарственным препаратам, а также с высокой частотой инфицирования беременных животных.

Поэтому одной из причин недостаточно эффективной терапии коров и риска увеличения послеродовых осложнений является возрастающая лекарственная устойчивость возбудителей заболевания. В этой связи необходим постоянный мониторинг как за составом микроорганизмов-возбудителеи, так и за динамикой развития их резистентности. Это позволяет разработать адекватную стратегию и тактику антибактериальной терапии в конкретных условиях каждого молочного комплекса или фермы с включением в лечебный курс препаратов широкого спектра действия (Нежданов А.Г. с соавт., 2005; Шабунин

C.B. с соавт., 2009).

Исходя из этого, в системе лечебно-профилактических мероприятии при болезнях органов размножения важная роль принадлежит их фармакотерапии и фармакопрофилактике (Шабунин C.B. с соавт., 2005).

В настоящее время для профилактики и лечения эндометритов применяется большое количество фармакологических средств, имеющих различный механизм действия. Среди них перспективными являются комплексные антимикробные препараты.

Однако, при большом количестве предлагаемых препаратов для лечения больных эндометритами коров, недостаточное внимание уделяется их влиянию на последующую воспроизводительную функцию животных и экологическую чистоту, получаемых от них продуктов.

По данным литературы возникновение, развитие и исход воспалительных процессов в эндометрии у коров в значительной степени определяется состоянием естественной резистентности организма, и в частности местной защиты матки. При этом уровень местной защиты любого органа неразрывно связан с уровнем его структурной организации, что не всегда учитывается при изучении патогенеза эндометритов и испытании лечебно-профилактических средств (Жаров A.B., 2006; Сулейманов С.М., 2005).

В связи с этим многие предложенные препараты для лечения больных эндометритом коров, без учета их влияния на структурную организацию матки и организм животного, часто не обеспечивают получения желаемого результата.

Поэтому разработка как более эффективных методов и средств, так и комплексных препаратов для лечения больных эндометритом коров, должна проводиться с учетом местной защитной реакции матки, которая находится в прямой зависимости от состояния ее структурной организации и всего организма.

Однако до настоящего времени недостаточно изучены композиционные препараты при эндометритах у коров, а также их влияние на морфофункцио-нальное состояние органов размножения у больных эндометритом коров.

Цели и задачи исследований. Целью настоящей работы являлось изучение распространения, патогенеза и патологической морфологии острых послеродовых эндометритов у коров, разработка, изучение экспериментальной и клинической фармакологии новых композиционных препаратов для терапии и профилактики острых послеродовых эндометритов у коров с учетом их влияния на морфофункциональное состояние эндометрия.

Задачи исследования:

1. Изучить распространение и этиологическую структуру послеродовых эндометритов у коров в хозяйствах ЦЧР;

2. Дать клинико-морфологические и гисто-структурную характеристику матки коров при развитии в ней воспалительного процесса;

3. Разработать новые композиционные антибактериальные препараты для лечения коров с воспалительными заболеваниями матки и провести их фарма-ко-токсикологическую оценку;

4. Выявить влияние новых композиционных препаратов на иммунобио-химический статус коров и структурную организацию эндометрия;

5. Провести клинические испытания и определить эффективность применения новых композиционных антибактериальных препаратов в комплексной терапии коров при послеродовом эндометрите;

6. Установить возможность применения новых антибактериальных препаратов для профилактики послеродовых заболеваний у коров;

7. Разработать и утвердить нормативно-техническую документацию и инструкции по применению на новые комплексные антибактериальные препараты для профилактики и лечения послеродовых эндометритов у коров.

Научная новизна. Определена этиологическая структура и дана клини-ко-морфологическая, гистологическая и ультраструктурная оценка тканей матки у коров после родов. Расширены представления о механизмах развития острого послеродового эндометрита у коров. Научно обоснованы состав и рецептура новых высокоэффективных комплексных антибактериальных препаратов диометр, тетраметр и энроцид для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров. Проведена их фармако-токсикологическая оценка. Выяснено их действие на организм коров на морфобиохимическом уровне и на матку - на тканевом, клеточном и субклеточном уровне организации эндометрия. Научно аргументирована, экспериментально и клинически доказана перспективность использования новых комплексных антибактериальных препаратов диометр, тетраметр и энроцид в ветеринарной практике.

Новизна исследований подтверждена патентами РФ на изобретение №2464979, №2455992 и № 2467755.

Практическая значимость и внедрение. На основании результатов исследований разработаны новые эффективные антибактериальные препараты диометр, тетраметр и энроцид для профилактики и лечения больных эндометритом коров и налажено их серийное производство.

Материалы исследований вошли в «Методическое пособие по профилактике бесплодия у высокопродуктивного молочного скота», одобренное секцией патологии, фармакологии и терапии Отделения ветеринарной медицины РАСХН (Воронеж, 2010) и «Практическое руководство по обеспечению продуктивного здоровья крупного рогатого скота», допущенное учебно-методическим объединением в области зоотехнии и ветнадзора в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений (УМО №06-19275 от 18.03.2011 г.).

В Российской Федерации Россельхознадзором проведена регистрация препаратов диометр (регистрационный номер ПВР-2-0.3/01214), тетраметр (регистрационный номер ПВР-2-0.3/01216) и энроцид (регистрационный номер ПВР-2-0.3/01215) и утверждены инструкции по их применению.

Апробация. Основные положения и результаты исследования представлены, доложены и одобрены на: годовых отчетах по НИР Всероссийского НИ-ВИ патологии, фармакологии и терапии (Воронеж, 2003-2012); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы болезней обмена веществ у сельскохозяйственных животных в современных условиях», посвященной 40-летию ГНУ ВНИВИПФиТ (Воронеж, 2010); 3-м съезде фармакологов и токсикологов России «Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации» (Санкт-Петербург, 2011); 17-ой Всероссийской научно-методической конференции по патологической анатомии животных «Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики

болезней животных» (Москва, 2011); Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 65-летию Краснодарского НИВИ (Краснодар, 2011); Международной научно-технической конференции «Биотехнологические системы в производстве пищевого сырья и продуктов: инновационный потенциал и перспективы развития» (Воронеж, 2011); Международной научно-практической конференции «Экологические проблемы использования природных и биологических ресурсов в сельском хозяйстве» (Екатеринбург, 2012); Международной научно-практической конференции, посвященной 85-летию со дня рождения профессора Г.А. Черемисинова и 50-летию создания Воронежской школы ветеринарных акушеров «Современные проблемы ветеринарного акушерства и биотехнологии воспроизведения животных» (Воронеж, 2012); IV съезде фармакологов и токсикологов России «Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации» (Москва, 2013).

Публикации. Основные научные результаты, включенные в диссертацию, опубликованы в 38 печатных работах, в том числе 14 статей в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ («Ветеринария», «Актуальные вопросы ветеринарной патологии», «Ветеринарная патология», «Ветеринарный врач», «Международный вестник ветеринарию)), 3 методических пособиях, 3 патентах.

Основные положения, выносимые на защиту:

> распространение, клинико-морфологическая и патоморфологическая характеристика острого послеродового эндометрита у коров в хозяйствах ЦЧР;

> обоснование состава и рецептуры новых композиционных препаратов -диометр, тетраметр и энроцид

> фармако-токсикология новых композиционных препаратов диометр, тетраметр и энроцид;

> обоснование применения новых композиционных препаратов диометр, тетраметр и энроцид при остром послеродовом эндометрите с учетом их влияния на структурную организацию эндометрия у коров;

> клиническая фармакология диометра, тетраметра и энроцида при терапии и профилактике острого послеродового эндометрита у коров.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 318 страницах и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, предложений, списка литературы, который включает 396 источников, в том числе 76 зарубежных. Работа иллюстрирована 60 рисунками и 89 таблицами.

3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Исследования по теме диссертации выполнены в 2003-2012 годы в соответствии с тематическим планом НИР Всероссийского НИВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН по заданиям: 04 «Программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК РФ»; 08.04. «Разработать новые экспресс - тесты и терапевтические препараты для эффективной системы мероприятий по диагностике, профилактике и терапии болезней органов размножения и молочной железы у коров и свиней,

обеспечивающей снижение бесплодия маточного поголовья, получение жизнеспособного приплода и производство продукции высокого санитарного качества» (№№ гос. регистрации: 01860113279; 01.9.90001257; 01.200.117018; 15070.36660226906.06.8.002.3).

Лабораторные исследования проводились в отделах фармакологии, пато-морфологии, патологии воспроизводства сельскохозяйственных животных, физико-химических методов исследования.

Производственные опыты выполнялись на базе хозяйств: АО «Ямен-ское», ЗАО «Промкор», ЗАО «Зареченское» и ЗАО «Подгорное» Рамонского района, ООО «Сторожевое» и ООО «Криниченское» Острогожского района, СХА «Родина» и СХА «Свобода» Россошанского района и ООО «Родина» Павловского района Воронежской области; СПК «Новая жизнь» Алексеевского района, ФГУП «Белгородское», ОАО «Яснозоренское», колхоз им. Фрунзе Белгородского района Белгородской области; ООО «Путятинский» Добровско-го района и ОАО АПО «Дружба» Грязинского района Липецкой области.

В проведении экспериментальных и научно-производственных работ использовали: самцов и самок беспородных белых мышей с массой тела 20,0±3,0 г (п=1800); самцов и самок белых крыс беспородных и линии Wistar с массой тела 180,0±25,0 г (п=1650); кроликов разного пола породы шиншилла с массой тела от 2,1 до 2,5 кг (п=12); коров красно-пестрой и черно-пестрой пород (п=5417).

При проведении опытов на лабораторных и домашних животных соблюдались требования к врачебно-биологическому эксперименту (Фролов И.Т., 1965) по постановке контроля, подбору аналогов, одинаковому кормлению и содержанию животных в период исследований.

Антимикробную активность препаратов изучали in vitro методом серийных разведений (Антонов В.И., 1986) в отношении референтных и полевых штаммов микроорганизмов - потенциальных возбудителей воспалительных заболеваний матки. Минимальную бактериостатическую концентрацию (МБсК) определяли в мясопептонном бульоне, минимальную бактерицидную концентрацию (МБцК) путем высева из пробирок с МПБ на плотные питательные среды. Содержание микробных клеток в 1 мл среды составляло 500 тыс.

Эксперименты по изучению острой, подострой токсичности, эмбриоток-сичности, тератогенности и аллергенности выполнялись на белых нелинейных мышах и крысах обоего пола. Животные содержались в условиях вивария ГНУ ВНИВИПФиТ в стандартных пластиковых клетках (по 8-10 гол.) на подстилке из опилок лиственных пород деревьев в соответствии с правилами группового содержания. Температура воздуха под держивалась в пределах 18-23°С, относительная влажность - 45-60%. Температура и влажность воздуха регистрировались ежедневно. Доступ к воде и корму был свободным. Рацион кормления животных соответствовал принятому в виварии ГНУ ВНИВИПФиТ. В опыты отбирали здоровых животных, группы формировали по принципу аналогов, используя в качестве критерия массу тела (различия по средней массе животных не превышало 10-12%).

Острую токсичность препаратов диометр, тетраметр и энроцид изучали на двух видах экспериментальных животных - белых мышах и крысах. Опыты выполнялись в двух повторностях для каждого вида животных. Препараты вводили однократно подкожно в следующих дозах: диометр и тетраметр от 4500,0 до ] 2500,0 мг/кг, энроцид - от 10000,0 до 24500, мг/кг в объеме 0,8 мл на мышь и 6,0 мл на крысу. Наблюдение за животными проводили непрерывно на протяжении первого дня после введения препаратов. В последующем состояние животных отмечали дважды в сутки в течение 14 дней. В ходе экспериментов учитывали внешний вид, поведение, поедаемость корма и прием воды, ритм и частоту сердцебиения, количество дыхательных движений и глубину дыхания.

В. основу подбора доз и определения параметров токсичности препаратов был положен принцип нахождения скользящих величин, вызывающих необходимый эффект: появление симптомов токсикоза или гибели особей в группах.

На первом этапе испытаний определялись недействующая и, абсолютно смертельная дозы. На втором этапе токсические дозы испытывались с интервалами в возрастающем по силе действия порядке, то есть, недействующая доза доводилась до величины 100 %-ной гибели особей.

Среднелетальную дозу - ЬО50 - определяли аналитическим способом Спирмена-Кербера (Лакин Г.Ф., 1990) и с помощью пробит-анализа с использованием прикладной программы «Статистика +2003». Величины ЬЭ|6 и ЬБ84 препаратов для белых мышей и белых крыс определяли графически на основании соответствующих пробитов и доз в мг/кг массы тела, показатель ошибки средней дозы эффекта - 8ЬБ50 - аналитически и графически.

При испытании токсических доз изучали симптомокомплекс острого экспериментального отравления препаратами и патологоанатомические изменения в органах и тканях животных.

Изучение подострой токсичности препаратов проводили на белых крысах самках с массой тела 170-210 г при подкожном введении в течение 14 дней. Для каждого препарата было подобрано по 60 животных (три группы по 20 крыс). Расчет дозировок проводили по готовым лекарственным формам, исходя из ДЦ$а, установленной в остром опыте для каждого препарата и с учетом его плотности. В исследованиях использовали две дозы: 1/50 и 1/10 от ЛД50 соответственно: диометр - 167,5 и 837,5 мг/кг; тетраметр - 168,0 и 840,4 мг/кг и энроцид - 337,7 и 1688,4 мг/кг. На протяжении экспериментов отмечали: общее состояние (динамика массы тела); вегетативный статус (по состоянию слизистых, шерстного покрова, ширины глазных щелей, наличию саливации, диареи, опрятности животных). Гематологические (количество эритроцитов, лейкоцитов, уровень гемоглобина, лейкоцитарная формула) и биохимические (общий белок, глюкоза, общие липиды, креатинин, мочевина, холестерол, кальций, фосфор, активность ферментов: АсАТ, АлАТ и ЩФ) показатели изучали через сутки после последнего введения препаратов и через 7 суток после их отмены (восстановительный период). В эти же сроки крысы всех'опытных групп были подвергнуты эвтаназии, производили взвешивание внутренних органов подопытных животных (печень, почки, сердце, легкие, селезенка, надпочечники, тимус) для выявления органа-мишени действия препаратов. После определения

массы органов были рассчитаны их массовые коэффициенты и проведены их макроскопические и гистологические исследования.

Изучение безвредности (переносимости) препаратов диометр, тетраметр и энроцид проведено на 45 коровах красно-пестрой породы (по 15 животных на препарат), 3-5 отела, массой 500-550 кг, которые через 6-8 часов после самопроизвольного отделения последа были разделены на 3 группы по 5 животных. Коровы первой группы служили контролем, второй - внутриматочно вводили изучаемый препарат в терапевтической дозе (100 мл на животное), третьей - в дозе, в три раза превышающей терапевтическую (300 мл на животное). Препараты вводили однократно в полость матки с помощью шприца Жане, предварительно подогрев до температуры 37-40°С.

Токсическое действие препаратов при их применении оценивали по клиническому состоянию животных, морфологическим и биохимическим показателям крови. Кровь для исследования брали у коров из яремной вены утром до кормления до введения препаратов и через 7 суток после однократного внутри-маточного введения.

Изучение субхронической токсичности препаратов проведено на 45 коровах красно-пестрой породы (по 15 животных на препарат), 3-5 отела, массой 450-550 кг, которые через 6-8 часов после самопроизвольного или сразу после оперативного отделения последа были разделены на 3 группы по 5 животных. Коровы первой группы служили контролем, второй (опытная №1) - в течение 5 дней с интервалом 24 часа вводили внутриматочно изучаемые препараты в терапевтической дозе (100 мл на животное), и третьей (опытная №2) - в течение 5 дней с интервалом 24 часа вводили внутриматочно изучаемые препараты в 3-х кратно терапевтической дозе (300 мл на животное).

Токсическое действие препаратов при их применении оценивали по клиническому состоянию животных, морфологическим и биохимическим показателям крови. Кровь для исследования брали у коров из яремной вены утром до кормления в начале опыта и на 6-й день опыта (через сутки после последнего введения препаратов).

Раздражающее действие препаратов на кожу изучали в опытах на кроликах, которым наносили препараты в чистом виде. Площадь нанесения составляла 5% от общей поверхности тела животных. Реакцию кожи на воздействие препарата оценивали через 1 и 16 часов после однократного нанесения. Учитывали функциональные нарушения кожи, характеризующиеся появлением различной степени выраженности эритемы, отека, трещин, изъязвлений, изменением температуры тела.

В экспериментах степень эритемы учитывали визуально и оценивали в баллах. Величину отека определяли путем измерения толщины кожной складки и оценивали в баллах.

Для изучения влияния препаратов на конъюнктиву глаз были проведены опыты на кроликах породы белый великан. Клиническое состояние животных (температуру тела, частоту пульса, количество дыхательных движений), а также изменение кровенаполнения конъюнктивы, наличие выделений, состояние

роговицы и век оценивали через 0,5; 1; 2; 3; 4; 5 и 6 часов после инсталляции препаратов (табл. 1).

_Таблица 1

Интенсивность реакции Оценка в баллах Раздражающий эффект

Нет реакции 0 Отсутствует

Слабая реакция 2 Слабый

Выраженная реакция 4 Умеренный

Лакримация 6 Слабо выраженный

Наличие выделений 8 Выраженный

Отек век 10 Сильно выраженный

Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия проведено по методике А.П. Шицковой с соавт. (1977) на самках белых крыс (36 гол.) массой 200,0±10,0 г.

Изучение остаточных количеств диометра в молоке проведено по определению содержания диметилсульфоксида, диоксидина и канамицина; тетраметра - диметилсульфоксида, диоксидина и окситетрациклина; энроцида - диметилсульфоксида и энрофлоксацина. Количественное содержание диметилсульфоксида и диоксидина проводили при помощи газового хроматографа «Цвет», канамицина и окситетрациклина определяли микробиологическим методом диффузии в агар и энрофлоксацина в молоке крупного рогатого скота методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектированием.

Диагноз на послеродовый эндометрит у коров устанавливали в соответствии с «Методическими указаниями по диагностике, терапии и профилактике болезней органов размножения у коров и тёлок» (М.,2000).

Лечебную эффективность препаратов при послеродовом остром эндометрите у коров оценивали в ООО «Родина» Павловского района Воронежской области с использованием двух схем лечения (табл. 2 и 3).

Таблица 2

Препараты Дни

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Диометр (тетраметр, энроцид), внутриматочно, 100мл 100 мл 100мл *

Утеротон, в/мышечно 10 мл 10 мл 10 мл

* - при необходимости

Таблица 3

Препараты Дни

1 2 3 4 5 6 7 8 9

ПДЭ, п/к 25 мл 25 мл 25 мл

15% раствор АСД-2Ф на тетрагидровите (тривите) 10 мл 10 мл 10 мл

Утеротон, в/мышечно 10 мл 10 мл 10 мл

Диометр (тетраметр, энроцид), внутриматочно 100 мл 100 мл 100 мл

При оценке эффективности лечения при остром послеродовом эндометрите коров всех групп животных учитывали общее состояние, объём и характер выделений из наружных половых органов, процент выздоровевших животных, сроки выздоровления, период от отёла до оплодотворения и коэффициент оплодотворения.

Производили взятие крови для проведения морфологических, биохимических и иммунологических исследований, включая показатели эндогенной интоксикации, перед лечением и после клинического выздоровления по группам комплексной терапии по 5 животных. Кровь брали от одних и тех животных. Микробиологические исследования проводили перед лечением и после клинического выздоровления из группы комплексной терапии (по 5 проб из каждой группы, всего 40 проб) на наличие возбудителей и их чувствительность к компонентам препаратов: перекрестно для всех четырех. В матке гистологически изучали общую структурную организацию эндометрия (10% формалин) до и после лечения (ещё при незакрытой шейке матки) от каждой группы (где один препарат) и из группы комплексной терапии (по 3 животных из каждой группы, всего 42 пробы).

С целью характеристики общего состояния животных при проведении опытов были взяты пробы крови для проведения гематологических, биохимических и иммунологических исследований. Общее состояние животных оценивали общепринятыми методами (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1982; И.П. Кон-драхин с соавт., 2004). Морфологический анализ крови проводили на гематологическом анализаторе «АВХ Micros 60», биохимические исследования - на анализаторе «Hitachi-902» в соответствии с «Методическими рекомендациями по применению биохимических методов исследований крови животных» (2005). Фракции белка определяли электрофорезом в агарозном геле, концентрацию общего белка и липидов наборами фирмы «Витал» (Санкт-Петербург).

Для характеристики неспецифической иммунологической резистентности организма определяли показатели гуморального звена: бактерицидную активность (%) сыворотки крови; лизоцимную (мкг/мл) активность сыворотки крови и клеточного звена: фагоцитарную активность лейкоцитов в соответствии с «Методическими рекомендациями по оценке и коррекции неспецифической резистентности животных» (2005).

Для морфологических исследований материал был взят от 7 коров, убитых после окончания лечения препаратами диометр, тетраметр и энроцид.

Кроме того, в динамике развития послеродового эндометрита у коров, материал отбирался методом биопсии (патент РФ, № 2281720).

Материал для световой микроскопии фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа, обезвоживали в спиртах, хлороформе, заливали в парафин, готовили срезы на микротоме МПС-2 толщиной 5-7 мкм, депарафинировали и окрашивали гематоксилин-эозином, по Ван-Гизон и толлуидиновым синим.

Фиксацию материала для электронной микроскопии проводили в 2,5% -ном растворе глютарового альдегида на 0,114 М коллидиновом буфере (рН -7,3) на холоде с постфиксацией в 1% - растворе тетраокиси осмия на том же

буфере. Для достижения осмиомолярности 360 моем во второй фиксатор вводили 0,05 М железосинеродистого калия и раствор Рингера. Материал заключали в смолу Эпон - 812. готовились полутонкие срезы, окрашенные азур-2 в сочетании с фуксином основным, которые просматривались в световом микроскопе «Leica». Ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме Ultracut «Leica», монтировали на вольфрамовые сетки, контрастировали цитратом свинца и уранилацетатом и просматривали в электронном микроскопе ЕМ-208 фирмы Philips (Гайер Г., 1974; Гольдин Л.С., 1963; Reynolds E.S., 1963).

Статистическая обработка полученных данных проведена методами математической статистики, принятыми в биологии и медицине (Лакин Г.Ф., 1973; Гублер Е.В.,1978), а также с использованием прикладных программ «Sta-tistica 5.0» и «Microsoft Excel» на PC «Pentium III».

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Этиологическая структура послеродового эндометрита у коров

в хозяйствах ЦЧР

Забоеваемость коров послеродовыми эндометритами учитывалась в хозяйствах Белгородской (ФГУП «Белгородское», ОАО «Яснозоренское», колхоз им. Фрунзе), Липецкой (ООО «Путятинский» Добровского района, ОАО АПО «Дружба» Грязинского района) и Воронежской (ЗАО «Заря», ЗАО «Герино», ЗАО «Родина» Павловского района) областей.

Нами было установлено, что заболевание коров послеродовым эндометритом зависит от количества животных в хозяйстве. Больше всего коров заболевает в хозяйствах с более высокой концентрацией поголовья (табл. 4).

Таблица 4

Распространение эндометритов у коров в хозяйствах ЦЧР_

Кол-во коров в хозяйстве (гол.) Кол-во заболевших эндометритом

коров ( %

Воронежская область

ЗАО «Заря» 500 140 28,0

ЗАО «Герино» 420 92 21,9

ЗАО «Родина» 1100 517 47,0

Белгородская область

ФГУП «Белгородское» 620 321 51,8

ОАО «Яснозорен-ское» 615 291 47,3

Колхоз им. Фрунзе 2500 1520 60,8

Липецкая область

ООО «Путятинский» 261 55 21,0

ОАО АПО «Дружба» 700 483 69,0

При лабораторном исследовании влагалищной слизи были выделены культуры Escherichia coli, Citrobacter spp, Staphylococcus aureus, Staphylococcus albus, Streptococcus spp, Proteus vulgaris. Выделенная микрофлора была чувствительна к антибиотикам: норфлоксацин, энрофлоксацин, гентамицин, нео-

мицин, левомицетин, канамицин, доксициклин, тетрациклины, фурагин, фура-золидон.

Таким образом, заболеваемость коров острым послеродовым эндометритом колебалась в пределах от 21 до 69% и, чем больше количество коров в хозяйстве, тем больше вероятность их заболеваемости острым послеродовым эндометритом.

3.2. Клинико-морфологическая, гистоструктурная и электронномикроско-пическая характеристика острого послеродового эндометрита у коров

Клиническое состояние коров, больных острым послеродовым эндометритом, в большинстве случаев, находилось в пределах нормы, а у некоторых из них наблюдалось лёгкое угнетение и небольшое снижение молочной продуктивности.

У больных коров регистрировали выделение из матки гнойно-слизистого экссудата полужидкой консистенции с желтоватым или буроватым оттенком. Экссудат отмечался на корне хвоста и в нижнем углу вульвы в виде засохших корочек. Клиническое проявление острого послеродового эндометрита у коров характеризовалось наличием катаральных выделений из матки. Катаральный экссудат выделялся при дефекации, мочеиспускании и, как правило, после ночного отдыха коров. На внутренней поверхности хвоста и седалищных буграх коровы экссудат обнаруживался в виде корочек.

У коров, больных гнойно-катаральным эндометритом, иногда наблюдались слизисто-гнойные истечения из матки серо-желтого цвета.

Установлено, что гематологические, биохимические и иммунологические показатели крови коров, больных острым послеродовым эндометритом, имеют отклонения от нормы, а иммунный статус организма был понижен (табл. 5).

Таблица 5

Гематологические и иммунологические показатели крови коров

при остром послеродовом эндомет рите

Показатели Клинически здоровые Больные на 10-15 дни после отела

Эритроциты, 10'~/л 6,48±0,58 6,25±0,41

Лейкоциты, 10ч/л 6,84±0,32 9,90±0,52

Общий белок, г/л 81,5±7,54 76,8±4,69

у-глобулины, % 30,6± 1,72 26,8± 1,15

Общие иммуноглобулины (г/л) 28,1±4,37 25,8±0,98

ЛАСК, мкг/мл 0,36±0,04 0,25±0,03

БАСК, % 68,9±5,66 59,1±4,35

Нейтрофилы, % 29,2±2,11 32,6±2,71

Эозинофилы, % 7,20±0,78 5,40±2,62

Моноциты, % 4,20±0,41 5,17±1,07

Лимфоциты, % 62,9± 1,82 57,9±3,90

Структурные изменения при остром послеродовом эндометрите у коров характеризовались следующим образом: Макроскопические. Наблюдалась гиперемия и отёчность слизистой оболочки преддверия влагалища и влагалища, наличие ссадин, точечных и полосчатых кровоизлияний. В просвете влагалища имелся гнойно-слизистый экссудат, выделяющейся из канала шейки матки. Канал шейки матки, как правило, был открытым. Складки влагалищной части шейки матки выглядели набухшими, отёчными и покрасневшими, присутствовали точечные и полосчатые кровоизлияния.

При вскрытии коров, убитых на 10-15 дни после отёла, инволюция матки была не завершена. Ее величина (1925±35 см2) соответствовала 3,5-4,5 месячной беременности. На слизистой оболочке матки был виден обильный катаральный экссудат, который заполнял складки слизистой оболочки, а также наблюдали его скопление вокруг и вблизи карункулов. На фоне слизисто-катарального налета на слизистой оболочке имелись множественные кровоизлияния, которые диффузно охватывали всю внутреннюю поверхность органа. Они были, в большинстве своем, точечные и пятнистые. Вся слизистая оболочка матки была набухшей и отечной (Рис. 1).

Рис. 1. Макроскопические изменения при остром послеродовом эндометрите у коров: а) Обильное слизпсто-гнойное выделение из матки; б) Точечно-полосчатые кровоизлияния в области складок шейки матки; в) Задержка инволюции матки; г) Катаральный налет и точечно-пятнистые кровоизлияния на слизистой оболочки эндометрия. Оригиналы.

Гистологические. В слизистой оболочке матки наблюдалось нарушение целостности покровного эпителия, его некроз и десквамация, а местами отмечалось полное отсутствие эпителиальной выстилки.

В структурной организации функционального слоя слизистой оболочки матки наблюдалось обилие клеток крови на фоне лимфоидных и эпителиальных скоплений. Эти экссудативно-инфильтративные процессы охватывали всю толщину эндометрия и характеризовали ее отечность. Поэтому эндометрий выглядел набухшим и был обильно инфильтрирован эмигрировавшими клетками.

В толще эндометрия маточные железы, как правило, были воспалены, отечны и содержали набухший эпителий. Они находились в окружении воспалительных инфильтратов. В слизистой оболочки матки отмечался отёк и диффузная клеточная инфильтрация. В слизистой оболочке матки регистрировалась обильная инфильтрация лейкоцитов, гистиоцитов, лимфоцитов.

В структурной организации эндометрия на полутонких срезах регистрировали острые гнойно-катаральные процессы. Верхний слой эндометрия превращался в клеточный детрит с воспалительным инфильтратом. Здесь же

накапливался обильный катаральный экссудат, содержащий как клеточный детрит, так и форменные элементы крови и диффузно расположенные микробные клетки.

В сосудистом слое отмечали набухание эндотелия сосудов, а их просветы частично уменьшались и содержали единичные форменные элементы крови. В глубоких слоях эндометрия маточные железы в большинстве своем находились в состоянии некробиоза, а в уцелевших железах регистрировали выраженную дистрофию клеток.

Таким образом, выявленные в полутонких срезах изменения в эндометрии были характерны острому гнойно-катаральному эндометриту (Рис. 2).

Рис. 2. Гистологические изменения в эндометрии при остром послеродовом эндометрите у коров: а) Катаральная слизь с форменными элементами крови и бактериями на слизистой оболочки эндометрия: б) Набухание и некробиоз эпителиального пласта эндометрия; в) Дистрофия и некробиоз эпителиальных и лимфоидных клеток и отечность стромы функционального слоя эндометрия: г) Некробиотическое состояние маточных желез эндометрия. Окр. Азур 2 в сочетании с фуксином основным. Ув. 200 (б), 400 (в, г), 800 (а).

Ультраструктурные. Выявленные гистологические структурные изменения в матке у коров при эндометрите были подтверждены ультраструктурной организацией клеток слизистой оболочки эндометрия.

На апикальной части эпителия, уцелевших на поверхности слизистой оболочки эндометрия, отмечалось разрушение микроворсинок и накопление катаральной слизи с микрофлорой, что указывало на структурные нарушения клеток эндометрия. Далее апикальная часть эпителия полностью разрушалась, теряла микроворсинки, вакуолизировалась и превращалась в гомогенную массу.

В катаральной слизи на поверхности эндометрия наблюдалось обилие бактериальной флоры, в которой превалировали диплококки. Местами отмечалось разрушение бактериальной флоры и появление макрофагов - гистиоцитов. Хотя единичные бактерии встречались на фоне множественных просветленных митохондрий в эпителиальном пласте и в глубоких слоях эндометрия. В большинстве случаев преобладали некротические (апоптические) процессы. В эндометрии значительно изменялась микроциркуляция в паренхиме органа. При этом регистрировалось резкое набухание эндотелия сосудов и кровеносных капилляров.

В целом, в ультраструктурной организации эндометрия у коров, больных острым послеродовым эндометритом, наблюдались глубокие дистрофические и некробиотические процессы в клетках паренхимы и стромы эндометрия, а так-

же экссудативные процессы с изменением целостности микроциркуляторного русла (Рис. 3). ....... ................

Рис. 3. Ультраструктурные изменения клеток эндометрия при остром послеродовом эндометрите у коров: а) Разрушение микроворсинок на апикальной поверхности эпителия: б) Обилие кокковой микрофлоры на поверхности эпителия: в) Некробиоз клеток эпителия: г) Парциальный отек ядра и цитоплазмы гистиоцита. У в. 2800 (в, г), 3500 (а), 5600 (б).

3.3. Разработка новых лекарственных препаратов для лечения больных эндометритом коров, их фармако-токсикологическая и клиническая

оценка

3.3.1. Обоснование создания новых комплексных антибактериальных препаратов для лечения эндометрита у коров

Исследования по разработке новых антимикробных препаратов для лечения эндометрита у коров проведены в два этапа. На первом этапе определен видовой состав микрофлоры половых путей 96 больных послеродовым эндометритом коров из сельхозпредприятий Воронежской, Липецкой и Белгородской областей.

Установлено, что микрофлора половых путей коров, больных эндометритом, представлена, в основном, ассоциациями грамположительных и грамотри-цательных микроорганизмов (77,1%), а также микроскопическими грибами.

Из общего числа изолированных культур на долю Е. coli приходилось 43,2%; Ent. faecalis - 19,6%, Ent. faecium - 18,5%; Citrobacter diversus - 15,6%; Proteus vulgaris — 3,1%.

Чувствительность микрофлоры от больных коров в различных хозяйствах имела отличия. Исследования показали, что выделенная микрофлора была чувствительной к норфлоксацину - в 74,5% случаев, к энрофлоксацину и не-омицину - в 78%, к левомицетину — в 67%, к канамицину, доксициклину и тетрациклину - в 57,8%), к фурагину - в 34,8%, к фуразолидону - в 24,2%. К бен-зилпинициллину, ампициллину, эритромицину, рифампицину чувствительными было менее 10% от числа выделенных культур. В 38,9% случаев микрофлора обладала множественной лекарственной устойчивостью.

Это явилось основанием для разработки новых антибактериальных препаратов для лечения и профилактики послеродовых заболеваний у коров. Исходя из данных литературы, фармакологической и фармацевтической совместимости, возможного эффекта синергизма были разработаны следующие составы

препаратов: 1 — диоксидин : канамицин: ДМСО, 2 - диоксидин : окситетрацик-лин : ДМСО и 3 - энрофлоксацин : ДМСО.

На втором этапе было проведено изучение антимикробной активности препаратов и их компонентов (диоксидин и канамицин; диоксидин и окситет-рациклин; энрофлоксацин). Для выявления оптимального соотношения компонентов в препаратах антимикробную активность различных комбинаций сравнивали с активностью исходных действующих веществ.

Как следует из представленных данных на рисунке 4, минимальная бактериостатическая концентрация диоксидина в отношении Staph, aureus 209 Р составила 15,6 мкг/мл и Е. coli 866 — 3,9 мкг/мл, а канамицина соответственно — 0,78 и 3,9 мкг/мл. Наиболее выраженным антимикробным действием обладала четвертая композиция, минимальная бактериостатическая концентрация которой в отношении Staph, aureus снизилась в 40 раз, в отношении Е. coli 866 — в 2,5 раза по сравнению с таковой у диоксидина, а по сравнению с канамици-ном - в 2 раза в отношении Staph, aureus и в 2,5 раза в отношении Е. coli 866.

О St. aureus 209 Р

Рис. 4. Антимикробная активность диоксидина, канамицина и различных композиций

Таким образом, совместное применение диоксидина и канамицина в различных соотношениях позволило снизить минимальную бактериостатическую концентрацию препарата в отношении изученных культур, что свидетельствует о синергидном действии составляющих компонентов. Но наиболее эффект синергизма проявился в композиции 4 (К4). Так антимикробная активность диоксидина в отношении стафилококков возросла в 120 раз, в отношении эшерихий - в 7,5 раза. Антимикробная активность канамицина в отношении эшерихий возросла в 3,8 раза, стафилококков - возросла в 3 раза.

В связи с этим в дальнейшей работе из изученных композиций была выбрана композиция 4, которая была названа — диометр.

На рисунке 5 представлены результаты изучения антимикробной активности различных комбинаций в сравнении с диоксидином и окситетрацикли-ном. Как следует из представленных данных, минимальная бактериостатическая концентрация диоксидина в отношении Staph, aureus 209 Р составила 15,6 мкг/мл и Е. coli 866 — 3,9 мкг/мл, а окситетрациклина соответственно — 3,9 и 12,5 мкг/мл. Наиболее выраженным антимикробным действием обладала четвертая композиция, минимальная бактериостатическая концентрация которой в отношении Staph, aureus снизилась в 40 раз, в отношении Е. coli 866 - в 1,25 раза по сравнению с таковой у диоксидина. По сравнению с окситетрациклином

минимальная бактериостатическая концентрация снизилась в 10 раз в отношении Staph, aureus и в 4 раза в отношении Е. coli 866.

Таким образом, совместное применение диоксидина и окситетрациклина в различных соотношениях позволило снизить минимальную бактериостатиче-скую концентрацию препарата в отношении изученных культур, что свидетельствует о синергидном действии составляющих компонентов. Но наиболее эффект синергизма проявился в композиции 4 (К4). Так антимикробная активность диоксидина в отношении стафилококков возросла в 120 раз, в отношении эшерихий - в 3,8 раза. Антимикробная активность окситетрациклина в отношении эшерихий возросла в 6 раз, стафилококков - возросла в 15 раз.

В связи с этим в дальнейшей работе из изученных композиций была выбрана композиция 4, которая была названа — тетраметр.

Обоснованность данных композиций обусловлена тем, что в лекарственной форме сочетаются по два антимикробных компонента с различным спектром и механизмом антимикробного действия, что в свою очередь обеспечивает синергидный эффект.

Исходя из данных, полученных в опытах in vitro, энрофлоксацин показал наиболее высокую минимальную бактериостатическую концентрацию в отношении Staph, aureus 209 Р и Е. coli 866 составила 0,39 мкг/мл. Антимикробная активность диоксидина в отношении Staph, aureus 209 Р была ниже в 40 раз, у канамицина - в 2 раза и у окситетрациклина - в 10 раз. В отношении Е. coli 866 у диоксидина и канамицина в сравнении с энрофлоксацином антимикробная активность была ниже в 10 раз, у окситетрациклина - в 32 раза. Также в ходе экспериментов было установлено, что лекарственная форма комплексных препаратов на основе энрофлоксацина и канамицина или окситетрациклина нестабильны. Поэтому обоснованность состава препарата энроцид обусловлена высокой антимикробной активностью энрофлоксацина и достаточно ограниченной фармацевтической совместимостью его с канамицином и окситетрациклином.

3.3.2. Фармакотоксикология диометра 3.3.2.1. Антимикробная активность диометра

При изучении антимикробной активности диометра установлено, что препарат обладает широким спектром антимикробного действия.

Наиболее выраженное действие он проявлял в отношении кокковой микрофлоры: стрептококков и стафилококков - 0,39-1,56 мкг/мл. Активность пре-

QSt aureus 209 Р ШЕ.coli 866

Рис.5. Антимикробная активность диоксидина, окситетрациклина и различных композиций

парата в отношении музейных штаммов эшерихий была на уровне - 1,56 мкг/мл, однако, в отношении полевых она была ниже в 2 раза (3,12 мкг/мл). Бактерицидное действие препарата в отношении изученных культур превышало бактериостатическое соответственно в 2 раза.

3.3.2.2. Острая токсичность диометра В результате изучения острой токсичности препарата диометр на лабораторных животных было установлено, что препарат в соответствии с классификацией Сидорова К.К. (для парентерального введения) относятся к относительно безвредным препаратам (табл. 6).

Таблица 6

Токсикометрия диометра при однократном подкожном введении

для лабораторных животных (мг/кг)

Вид Параметры токсичности 81ЛЭ50

животных • МПД 1Л)16 1Л}50 1^84 ГОюо

Белые мыши 4500,0 6328,0 8692,9 (7930-9450) 11105,0 12299,3 ±380,6

Белые крысы 4500,0 5086,9 8375,0 (7420-9330) 11633,8 13270,5 ±476,6

3.3.2.3. Изучение безвредности (переносимости) диометра на коровах

Применение диометра однократно внутриматочно в терапевтической дозе (100 мл на животное) и в три раза ее превышающей не оказывало существенного влияния на клинический статус, поведение и аппетит животных. В течение опыта частота пульса, количество дыхательных движений, сердечных толчков и сокращения рубца находились в пределах нормы. Внутриматочное введение диометра коровам не влияло негативно на морфологические и биохимические показатели крови животных.

3.3.2.4. Подострая токсичность диометра

Опыт по изучению подострой токсичности диометра проведен на 45 белых половозрелых крысах самцах с массой тела 170-200 г при подкожном введении препарата в течение 14 дней в дозах: 1-я группа - контроль (стерильный изотонический раствор хлорида натрия); 2-я группа - 1/50 ЬО50 - 167,5 мг/кг; 3-я группа - 1/10 ЬО50- 837,5 мг/кг.

Проведенными исследованиями установлено, что многократное подкожное введение диометра во всех испытанных дозах не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных. Гибели животных в период опыта не было.

Существенной разницы в привесах крыс контрольной и опытных групп в течение опыта не было отмечено. Относительные массы внутренних органов крыс, которым применяли диометр подкожно в течение 14 дней, существенно не отличались от контроля. При исследовании крови животных, которым вводили препарат, не отмечено достоверных изменений в морфологическом составе крови и биохимических показателях по сравнению с показателями в крови животных контрольной группы.

3.3.2.5. Субхроническая токсичность диометра

В опыте по изучению субхронической токсичности на коровах диометр в изученных дозах не оказывал существенного влияния на их клинический статус, поведение и аппетит. Показатели клинического состояния коров всех групп в течение всего опыта находились в пределах физиологической нормы. В период всего опыта коровы контрольной и опытных групп были подвижны, аппетит выражен, рефлексы сохранены. Нарушений функций пищеварения и мочеотделения не установлено. Результаты опыта, представленные в таблице 7, свидетельствуют о том, что внутриматочное введение диометра не оказывает существенного влияния на биохимические и гематологические показатели крови подопытных животных.

Таблица 7

Гематологические показатели крови коров при применении диометра

Показатели Период исследования

До начала опыта Через день после последнего введения Через 10 дней после последнего введения

100 мл на животное 300 мл на животное 100 мл на животное 300 мл на животное

Эритроциты, 10'"7л 5,83+0,27 5,56±0,21 5,47±0.38 5,89±0,24 5,55±0,23

Лейкоциты, 10'7л 8,73+1,61 9,18+0,37 8,99+1,37 9,18+0,81 8,87+1,83

Гемоглобин, г/л 108,9+3,9 109,4+3,7 109,8+2,2 108,8±3,0 109,3±3,2

Общий белок, г/л 81,8±3,14 80,8+3,87 82,3+2,55 80,9+3,52 82,4+5,33

Альбумины, % 38,8+2.96 38,0±1,45 38,7±3.65 37,9+2,38 37,9+2.43

Эозинофилы, % 5,28+2,11 5,76+1,76 5,36+2,30 5.69+1,45 5,12+1,49

Моноциты, % 2,01±0,45 2,11+0,23 2,28+0,47 2,15±0,47 1,99±0,69

Лимфоциты, % 50,3+2,21 50,6+3,25 50,2+3,53 49,3+3,48 49,2±3,88

3.3.2.6. Раздражающие свойства препарата диометр

Изучение раздражающего действия диометра на слизистые оболочки, проведенное на кроликах, инсталляцией препарата в течение 6 часов на конъюнктиву глаза, не выявило изменений температуры тела, частоты пульса и количества дыхательных движений, изменений кровенаполнения конъюнктивы, наличие лакримации и выделений.

Опыты по изучению раздражающего действия на кожу проведены на кроликах, однократной аппликацией препарата диометр в нативном виде в дозах от 0,02-0,12 мл/см2. Реакцию кожи на воздействие препарата оценивали через 1 и 16 часов после однократного нанесения. Согласно полученным данным при однократной аппликации на кожные покровы, диометр не вызывает повреждение кожи в виде эритемы или ее отеков.

3.3.2.7. Эмбриотоксическое и тератогенное действие диометра

В опытах по изучению эмбриотоксического и тератогенного действия диометра на крысах, которым его вводили подкожно в дозе 1/10 от ЛД50 (837,5 мг/кг) на пятый день беременности (период имплантации) и пятнадцатый день беременности (период органогенеза) установлено отсутствие эффекта действия. Диометр не оказывает отрицательного влияния на овуляторные процессы.

Существенных различий в плодовитости крыс опытной и контрольной групп не установлено.

Крысята, рожденные от самок опытной группы, не отличались от крысят контрольных самок. Проведенные морфологические исследования показали отсутствие аномалий развития внутренних органов и скелета плодов, рожденных от крыс опытной группы.

Таким образом, диометр не оказывает эмбриотоксического и тератогенного действия.

3.3.2.8. Определение остаточных количеств препарата диометр в молоке

Количественное определение содержания активнодействующих веществ в пробах молока после пятикратного внутриматочного введения диометра коровам показало, что пробы молока свободны от содержания диметилсуль-фоксида через 84 часа после пятикратного введения препарата (табл. 8). Диоксидин не обнаруживали через 120 часов. Антибиотик канамицин - после пятикратного внутриматочного введения в молоке обнаруживался в течение 96 часов.

Таблица 8

Содержание активнодействующих веществ в молоке после

пятикратного внутриматочного введения диометра_

Время исследования,час Диметилсульфоксид, мкг/мл Диоксидин, мкг/мл Канамицин, мкг/мл

24 6.20±1.758 3,7±1,90 3,03+0,27

48 3,35±1,712 1,9±1.90 2,44+0,34

72 1,22± 1,002 1,6±0,89 0,81+0,22

96 0 0,7±0,70 0,12+0,05

120 0 следы следы

Таким образом, использование молока в пищевых целях допускается не ранее, чем через 6 суток после последнего введения препарата.

3.3.3. Клиническая фармакология диометра 3.3.3.1. Лечебная эффективность диометра при остром послеродовом

эндометрите у коров

При оценке терапевтической эффективности диометра при остром послеродовом эндометрите коров установлено, что препарат проявляет высокую терапевтическую эффективность (табл. 9). Эффективность применения диометра для лечения коров, больных послеродовым эндометритом составила 83,9%, что в среднем на 21,5% выше, чем в результате применения палочек с фуразолидо-ном (контрольная группа). Клиническое выздоровление коров опытной группы констатировали после 3,7±0,18 введений диометра, а в контрольной группе после 4,6±0,15. Продолжительность лечения животных опытной группы была короче, чем коров контрольной группы на три дня. При этом в последующем, из числа выздоровевших животных, оплодотворились в опытной группе 87,2% и в контрольной группе 69,9%.

Индекс оплодотворения у коров опытной группы в среднем составил 1,52±0,06, тогда как в контрольной группе - 1,93±0,05. Период от отела до оплодотворения, в среднем на одно животное, в опытной группе составил 58,4±0,51 дня, что по сравнений с коровами контрольной группы было меньше на 8,4 дня.

Таблица 9

Эффективность препарата диометр при лечении послеродового эндометрита у коров

Показатели Группа животных

Диометр Палочки с фуразолидоном

Количество животных 485 431

Выздоровело, коров % 407 269

83,9 62,4

Срок выздоровления, дни 10,3±0,67 13,0±0,54

Количество введений препарата 3,70±0,18 4,60±0,15

Период от отела до оплодотворения, дни 58,4±0,51 66,8±0,21

Оплодотворилось, % 87,2 69,9

Индекс оплодотворения 1,52±0,06 1,93±0,05

3.3.3.2. Профилактическая эффективность диометра при остром послеродовом эндометрите у коров

Как видно из таблицы 10, лучший профилактический эффект был достигнут при применении препарата диометр. Приведенные данные свидетельствуют о том, что препарат диометр является эффективным профилактическим средством при послеродовых акушерских заболеваниях и в 87,7% случаях предотвращает заболевания коров послеродовыми эндометритами.

Таблица 10

Эффективность применения диометр для профилактики _послеродовых акушерских болезней у коров_

Группы животных

Показатели диометр Палочки с Без примене-

фуразолидоном ния препарата

Количество животных, гол 455 375 31

Заболело послеродовыми

эндометритами, гол 56 70 26

% 12,3 18,7 83,9

Период от отела до оплодо- 56,0±1,51 67,3±2,83 73,2±2,79

творения, дни

Оплодотворилось, гол 346 218 3

% 86,7 71,5 60,0

Индекс оплодотворения 1,45±0,02 1,84+0,05 2,27+0,09

3.3.4. Фармакотоксикологпя тетраметра 3.3.4.1. Антимикробная активность тетраметра

При изучении антимикробной активности тетраметра установлено, что препарат обладает широким спектром антимикробного действия.

Наиболее выраженное действие он проявлял в отношении кокковой микрофлоры: стрептококков и стафилококков - 0,39 мкг/мл. Активность препарата в отношении музейных штаммов эшерихий была на уровне - 6,25 мкг/мл. Бактерицидное действие препарата в отношении изученных культур превышало бактериостатическое соответственно в 2 раза.

3.3.4.2. Острая токсичность тетраметра В результате изучения острой токсичности препарата тетраметр на лабораторных животных было установлено, что препарат в соответствии с классификацией Сидорова К.К. (для парентерального введения) относятся к относительно безвредным препаратам (табл. 11).

Таблица 11

Токсикометрия тетраметра при однократном подкожном введении

Вид животных Параметры токсичности 8ЬО50

МПД ЬБ16 ьо50 ЬОюо

Белые мыши 4500,0 6011,0 8403,0 (7640-9170) 10770,4 11960,0 ±381,8

Белые крысы 4500,0 5303,1 8115,7 (7160-9080) 10814,0 12191,7 ±479,0

3.3.4.3. Изучение безвредности (переносимости) тетраметра

на коровах

Применение тетраметра однократно внутриматочно в терапевтической дозе (100 мл на животное) и в три раза ее превышающей не оказывало существенного влияния на клинический статус, поведение и аппетит животных. В течение опыта частота пульса, количество дыхательных движений, сердечных толчков и сокращения рубца находились в пределах нормы. Внутриматочное введение тетраметра коровам не влияло негативно на морфологические и биохимические показатели крови животных.

3.3.4.4. Подострая токсичность тетраметра

Опыт по изучению подострой токсичности тетраметра проведен на 45 белых половозрелых крысах самцах с массой тела 190-210 г при подкожном введении препарата в течение 14 дней в дозах: 1-я группа - контроль (стерильный изотонический раствор хлорида натрия); 2-я группа - 1/50 ЬО50 - 168,0 мг/кг; 3-я группа -1/10 ЬО50 - 840,4 мг/кг.

Проведенными исследованиями установлено, что многократное подкожное введение тетраметра во всех испытанных дозах не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных. Гибели животных в период опыта не было.

Существенной разницы в привесах крыс контрольной и опытных групп в течение опыта не было отмечено. Относительные массы внутренних органов крыс, которым применяли тетраметр подкожно в течение 14 дней, существенно не отличались от контроля. При исследовании крови животных, которым вводили препарат, не отмечено достоверных изменений в морфологическом составе крови и биохимических показателях по сравнению с показателями в крови животных контрольной группы.

3.3.4.5. Субхроннческая токсичность тетраметра

В опыте по изучению субхронической токсичности на коровах тетраметр в изученных дозах не оказывал существенного влияния на их клинический статус, поведение и аппетит. Показатели клинического состояния коров всех групп в течение всего опыта находились в пределах физиологической нормы. В период всего опыта коровы контрольной и опытных групп были подвижны, аппетит выражен, рефлексы сохранены. Нарушений функций пищеварения и мочеотделения не установлено. Результаты опыта, представленые в таблице 12, свидетельствуют о том, что внутриматочное введение тетраметра не оказывает существенного влияния на биохимические и гематологические показатели крови подопытных животных.

Таблица 12

Гематологические показатели крови коров при применении тетраметра

Показатели Период исследования

До начала опыта Через день после последнего введения Через 10 дней после последнего введения

100 мл на животное 300 мл на животное 100 мл на животное 300 мл на животное

Эритроциты, 10 "/л 5,47+0,38 5,55±0,23 5,83+0,27 5,56±0,21 5,89±0,24

Лейкоциты, 10Ч/л 8,99±1,37 8,87±1,83 8,73+1,61 9,18±0,37 9,18±0,81

Гемоглобин, г/л 109,8±2,2 109,3±3,2 108,9±3,89 109,4±3,67 108,8±2,99

Общий белок, г/л 82,3+2,55 82,4±5,33 81,8+3,14 80,8±3,87 80,9±3,52

Альбумины, % 38,7±3,65 37,9±2,43 38,8±2,96 38,0±1,45 38,0±2,38

Эозинофилы, % 5,36±2,30 5,12+1,49 5,28±2,11 5,76±1,76 5,69±1,45

Моноциты, % 2,28±0,47 1,99±0,69 2,01±0,46 2,11+0,23 2,15±0,47

Лимфоциты, % 50,2±3,53 49,2±3,88 50,3±2,21 50,6±3,25 49,3±3,48

3.3.4.6. Раздражающие свойства препарата тетраметр

Изучение раздражающего действия тетраметра на слизистые оболочки, проведенное на кроликах, инсталляцией препарата в течение 6 часов на конъюнктиву глаза, не выявило изменений температуры тела, частоты пульса и количества дыхательных движений, изменений кровенаполнения конъюнктивы, наличие лакримации и выделений.

Опыты по изучению раздражающего действия на кожу проведены на кроликах, однократной аппликацией препарата тетраметр в нативном виде в дозах от 0,02-0,12 мл/см2. Реакцию кожи на воздействие препарата оценивали через 1 и 16 часов после однократного нанесения. Согласно полученным данным при однократной аппликации на кожные покровы, тетраметр не вызывает повреждение кожи в виде эритемы или ее отеков.

3.3.4.7. Эмбриотоксическое и тератогенное действие тетраметра

В опытах по изучению эмбриотоксического и тератогенного действия тетраметра на крысах, которым его вводили подкожно в дозе 1/10 от ЛД50 соответственно 840,4 мг/кг на пятый день беременности (период имплантации) и пятнадцатый день беременности (период органогенеза) установлено отсутствие

эффекта действия. Тетраметр не оказывает отрицательного влияния на овуля-торные процессы.

Существенных различий в плодовитости крыс опытной и контрольной групп не установлено.

Крысята, рожденные от самок опытной группы, не отличались от крысят контрольных самок. Проведенные морфологические исследования показали отсутствие аномалий развития внутренних органов и скелета плодов, рожденных от крыс опытной группы.

Таким образом, тетраметр не оказывает эмбриотоксического и тератогенного действия.

3.3.4.8. Определение остаточных количеств препарата тетраметр в молоке

Количественное определение содержания активнодействующих веществ в пробах молока после пятикратного внутриматочного введения Тетраметра коровам показало, что пробы молока свободны от содержания диметилсульфок-сида через 84 часа после пятикратного введения препарата. Диоксидин не обнаруживали через 120 часов. Антибиотик окситетрациклин - после пятикратного внутриматочного введения в молоке обнаруживался в течение 96 часов (табл. 13).

Таблица 13

Содержание активнодействующих веществ в молоке после

Время исследования, час Диметилсульфоксид, мкг/мл Диоксидин, мкг/мл Окситетрациклин, мкг/мл

24 5,67±2,27 2,1±0,38 1,43+0,2

48 4,08±2,07 2,0±2,00 1,16+0,3

72 0,70±0,70 1,8±1,13 0,54+0,1

96 0 1,5±1,02 0,23+0,1

120 0 следы 0

ранее, чем через 6 суток после последнего введения препарата.

3.3.5. Клиническая фармакология тетраметра 3.3.5.1. Лечебная эффективность тетраметра при остром послеродовом

эндометрите у коров

При оценке терапевтической эффективности тетраметра при остром послеродовом эндометрите коров установлено, что препарат проявляет высокую терапевтическую эффективность (табл. 14).

Эффективность применения тетраметра для лечения коров, больных послеродовым эндометритом составила 84,2%, что в среднем на 19,9% выше, чем в результате применения палочек с фуразолидоном (контрольная группа). Клиническое выздоровление коров опытной группы наступало после 3,71±0,09 введений тетраметра, а в контрольной группе после 4,66±0,09. Продолжительность лечения животных опытной группы была короче, чем коров контрольной группы на 2,5 дня.

Таблица 14

Эффективность препарата тетраметр при лечении послеродового _эндометрита у коров__

Показатели Тетраметр Палочки с фуразолидоном

Количество животных, гол 450 395

Выздоровело, гол. 379 254

% 84,2 64,3

Срок выздоровления, дни 10,6±0,11 13,1±0,37

Количество введений препарата 3,71±0,09 4,66±0,09

Период от отела до оплодотворения, дни 58,5±0,41 67,2±0,45

Оплодотворилось, % 88,7 70,5

Индекс оплодотворения 1,53±0,07 1,90±0,09

Индекс оплодотворения у коров опытной группы в среднем составил 1,53±0,07, тогда как в контрольной группе - 1,90±0,09. Период от отела до оплодотворения, в среднем на одно животное, в опытной группе составил 58,51±0,41 дня, что по сравнению с коровами контрольной группы было меньше на 8,7 дня.

3.3.5.2. Профилактическая эффективность тетраметра при остром послеродовом эндометрите у коров

Как видно из таблицы 15, лучший профилактический эффект был достигнут при применении препарата тетраметр. Приведенные данные свидетельствуют о том, что препарат тетраметр является эффективным профилактическим средством при послеродовых акушерских заболеваниях и в 87,0% случаях предотвращает заболевания коров послеродовыми эндометритами.

Таблица 15

Эффективность применения тетраметр для профилактики _послеродовых акушерских болезней у коров_

Группы животных

Показатели тетраметр Палочки с Без примене-

фуразолидоном ния препарата

Количество животных, гол 471 427 39

Заболело послеродовыми

эндометритами, гол 61 84 32

% 13,0 19,7 82,1

Период от отела до оплодо- 55,2±0,90 68,5+0,47 73,8+0,66

творения, дни

Оплодотворилось, гол 354 263 4

% 86,3 76,7 57,1

Индекс оплодотворения 1,45±0,02 1,93±0,02 2,33±0,22

З.З.б. Фармакотоксикология энроцида 3.3.6.1. Антимикробная активность энроцида

При изучении антимикробной активности энроцида установлено, что препарат обладает широким спектром антимикробного действия.

Наиболее выраженное действие он проявлял в отношении кокковой микрофлоры: стрептококков и стафилококков - 0,39-0,78 мкг/мл. Активность препарата в отношении музейных штаммов эшерихий была на уровне — 1,56 мкг/мл. Бактерицидное действие препарата в отношении изученных культур превышало бактериостатическое соответственно в 2 раза.

3.3.6.2. Острая токсичность энроцида В результате изучения острой токсичности препарата энроцид на лабораторных животных было установлено, что препарат в соответствии с классификацией Сидорова К.К. (для парентерального введения) относятся к относительно безвредным препаратам (табл. 16).

Таблица 16

Токсикометрия энроцида при однократном подкожном введении

для лабораторных животных (мг/кг)

Вид Параметры токсичности 81ЛЭ50

животных МПД ЬО,6 ЬБзо ш84 1Л)юо

Белые мыши 10000,0 12782,4 17229,0 (15500-18900) 21650,7 23867,7 ±854,1

Белые крысы 10000,0 11558,0 16886,4 (15000-18800) 22062,5 24688,7 ±948,4

3.3.6.3. Изучение безвредности (переносимости) энроцида на коровах

Применение энроцида однократно внутриматочно в терапевтической дозе (100 мл на животное) и в три раза ее превышающей не оказывало существенного влияния на клинический статус, поведение и аппетит животных. В течение опыта частота пульса, количество дыхательных движений, сердечных толчков и сокращения рубца находились в пределах нормы. Внутриматочное введение энроцида коровам не влияло негативно на морфологические и биохимические показатели крови животных.

3.3.6.4. Подострая токсичность энроцида

Опыт по изучению подострой токсичности энроцида проведен на 45 белых половозрелых крысах самцах с массой тела 230-245 г при подкожном введении препарата в течение 14 дней в дозах: 1-я группа - контроль (стерильный изотонический раствор хлорида натрия); 2-я группа - 1/50 ЬР50 — 337,7 мг/кг; 3-я группа - 1/10 Ц}50 - 1688,6 мг/кг.

Проведенными исследованиями установлено, что многократное подкожное введение энроцида во всех испытанных дозах не вызывает существенных изменений в клиническом состоянии животных. Гибели животных в период опыта не было.

Существенной разницы в привесах крыс контрольной и опытных групп в течение опыта не было отмечено. Относительные массы внутренних органов крыс, которым применяли энроцид подкожно в течение 14 дней, существенно не отличались от контроля. При исследовании крови животных, которым вводили препарат, не отмечено достоверных изменений в морфологическом составе крови и биохимических показателях по сравнению с показателями в крови животных контрольной группы.

3.3.6.5. Субхроническая токсичность энроцида

В опыте по изучению субхронической токсичности на коровах энроцид в изученных дозах (терапевтическая и в три раза ее превышающая) не оказывал существенного влияния на их клинический статус, поведение и аппетит. Показатели клинического состояния коров всех групп в течение всего опыта находились в пределах физиологической нормы. В период всего опыта коровы контрольной и опытных групп были подвижны, аппетит выражен, рефлексы сохранены. Нарушений функций пищеварения и мочеотделения не установлено. Результаты опыта, представленые в таблице 17, свидетельствуют о том, что внутриматочное введение энроцида не оказывает существенного влияния на биохимические и гематологические показатели крови подопытных животных.

Таблица 17

Гематологические показатели крови коров при применении энроцида

Период исследования

Через 10 дней

Показатели До начала после последнего введения

опыта 100 мл на животное 300 мл на животное

Эритроциты, 1012/л 5,47±0,28 5,55±0,23 5,50±0,21

Лейкоциты, 109/л 8,79±1,27 8,77±0,83 9,04±0,97

Гемоглобин, г/л 107,8+2,11 108,8+3,21 109,6+3,27

Общий белок, г/л 80,2±2,45 81,1+5,53 80,8+3,87

Альбумины, % 38,0±3,75 36,9±2,33 37,0±2,45

Эозинофилы, % 5,56±2,30 5,27+1,40 5,16±1,76

Моноциты, % 2,28+0,47 2,18±0,67 2,12±0,23

Лимфоциты, % 51,8±3,53 50,0±3,28 50,4±3,25

3.3.6.6. Раздражающие свойства препарата энроцид

Изучение раздражающего действия энроцида на слизистые оболочки, проведенное на кроликах, инсталляцией препарата в течение 6 часов на конъюнктиву глаза, не выявило изменений температуры тела, частоты пульса и количества дыхательных движений, изменений кровенаполнения конъюнктивы, наличие лакримации и выделений.

Опыты по изучению раздражающего действия на кожу проведены на кроликах, однократной аппликацией препарата энроцид в нативном виде в дозах от 0,02-0,12 мл/см2. Реакцию кожи на воздействие препарата оценивали через 1 и 16 часов после однократного нанесения. Согласно полученным данным при однократной аппликации на кожные покровы, энроцид не вызывает повреждение кожи в виде эритемы или ее отеков.

3.3.6.7. Эмбриотоксическое и тератогенное действие энроцида

В опытах по изучению эмбриотоксического и тератогенного действия энроцида на крысах, которым его вводили подкожно в дозе 1/10 от ЛД50 соответственно 1688,6 мг/кг на пятый день беременности (период имплантации) и пят-

надцатый день беременности (период органогенеза) установлено отсутствие эффекта действия. Энроцид не оказывает отрицательного влияния на овулятор-ные процессы.

Существенных различий в плодовитости крыс опытной и контрольной групп не установлено.

Крысята, рожденные от самок опытной группы, не отличались от крысят контрольных самок. Проведенные морфологические исследования показали отсутствие аномалий развития внутренних органов и скелета плодов, рожденных от крыс опытной группы.

Таким образом, энроцид не оказывает эмбриотоксического и тератогенного действия.

3.3.6.8. Определение остаточпых количеств препарата энроцид в молоке

Количественное определение содержания активнодействующих веществ в пробах молока после пятикратного внутриматочного введения Энроцида коровам показало, что пробы молока свободны от содержания диметилсуль-фоксида через 72 часа после пятикратного введения препарата. Энрофлокса-цин не обнаруживали через 96 часов (табл. 18).

Таким образом, использование молока в пищевых целях допускается не ранее, чем через 6 суток после последнего введения препарата.

Таблица 18

Содержание диметилсульфоксида и энрофлоксацина в молоке

после пятикратного введения энроцида_

Время исследования, час Диметилсульфоксид, мкг/мл Энрофлоксацин, мкг/мл

24 6,79±2,14 0,71±0,03

48 4,88±1,63 0,56±0,07

72 0,53±0,41 0,12±0,01

96 0 следы

120 0 0

3.3.7. Клиническая фармакология энроцида 3.3.7.1. Лечебная эффективность энроцида при остром послеродовом эндометрите у коров

При оценке терапевтической эффективности энроцида при остром послеродовом эндометрите коров установлено, что препарат проявляет высокую терапевтическую эффективность (табл. 19). Эффективность применения энроцида для лечения коров, больных послеродовым эндометритом составила 83,8%, что в среднем на 20,0% выше, чем в результате применения палочек с фуразолидо-ном (контрольная группа). Сроки клинического выздоровления коров опытной группы были короче на 18,8%.

Индекс оплодотворения у коров опытной группы в среднем составил 1,52±0,07, тогда как в контрольной группе - 1,87±0,04. После проведённого лечения энроцидом оплодотворились 88,8% выздоровевших животных, что на

19,1% больше в сравнении с палочками с фурозолидоном, при сокращении периода от отёла до оплодотворения на 6,4 дня.

Таблица 19

Эффективность препарата энроцид при лечении послеродового _эндометрита у коров_

Группа животных

Показатели Энроцид Палочки с фуразолидоном

Количество животных 470 428

Выздоровело, коров 394 273

% 83,8 63,8

Срок выздоровления, дни 10,4±0,67 13,2±0,74

Количество введений препарата 3,67±0,07 4,52±0,11

Период от отела до оплодотворения, дни 59,9±4,47 66,3±5,73

Оплодотворилось, % 88,8 69,7

Индекс оплодотворения 1,52±0,07 1,87±0,04

3.3.7.2. Профилактическая эффективность энроцпда при остром

послеродовом эндометрите у коров

Полученные результаты показали, что при применении препарата энро-цида заболеваемость коров послеродовыми эндометритами была ниже на 6,5% по сравнению с заболеваемостью в группе, которой применялись фуразолидо-новые палочки, а по сравнению с группой отрицательного контроля (без применения препаратов) - на 65,1% (табл. 20). Сокращался период от отела до оплодотворения на 12,4 и 18,9 дня соответственно, также увеличивалось количество оплодотворенных коров 12,3 и 30,1%.

Таблица 20

Эффективность применения энроцид для профилактики _послеродовых акушерских болезней у коров_

Группы животных

Показатели энроцид Палочки с Без примене-

фуразолидоном ния препарата

Количество животных, гол 472 426 31

Заболело послеродовыми

эндометритами, гол 58 80 24

% 12,3 18,8 77,4

Период от отела до опло- 45,52±1,15 57,9+0,85 64,42±0,32

дотворения, дни

Оплодотворилось, гол 361 259 4

% 87,2 74,9 57,1

Индекс оплодотворения 1,38±0,03 1,87±0,02 2,82±0,04

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о том, что препарат энроцид является эффективным профилактическим средством послеродовых акушерских заболеваний коров.

3.3.8. Клинико-морфологическая характеристика коров после лечения эндометрита препаратами диометр, тетраметр и энроцид

Результаты проведённых морфологических, биохимических и иммунологических исследований крови свидетельствуют, что в процессе комплексного лечения послеродового эндометрита с применением диометра отмечается снижение содержания лейкоцитов на 27,6%, увеличение содержания общего белка на 6,7%, глюкозы - на 9,8%, общих липидов - на 46,3%, витамина А - на 32,6%, витамина Е - на 24,1%, при снижении концентрации креатинина на 9,9%, активности аспартатаминотрансферазы - на 8,7% и аланинаминотрансферазы - на 24,8%.

Отмечалась нормализация в лейкограмме — уменьшался процент палоч-коядерных нейтрофилов (практически в 2,5 раза), эозинофилов - в 3,9 раза и увеличивался процент сегментоядерных нейтрофилов (на 24,4%), лимфоцитов -на 5,1%.

В процессе клинического выздоровления животных повышалась неспецифическая резистентность, как за счет гуморального, так и клеточного звена: увеличивалась бактерицидная (на 12,3%), лизоцимная (на 21,5%) активность сыворотки крови, фагоцитарная активность лейкоцитов (на 9,1%), общие иммуноглобулины — на 12,8%.

Применение диометра, купируя воспалительный процесс, способствует снижению интенсивности свободнорадикального окисления липидов, что выражается в уменьшении уровня МДА на 13,8%. При лечении диометром снижается индекс эндогенной интоксикации на 34,4%.

Изменения показателей гематологического, иммунологического и биохимического статуса отмечены после клинического выздоровления коров, которых лечили тетраметром. Отмечено увеличение содержания гемоглобина на 7,2%, эритроцитов - на 20,7%, снижением лейкоцитов - на 15,9%. Происходит нормализация лейкограммы - уменьшался процент палочкоядерных нейтрофилов (на 68,4%), эозинофилов - в 2,7 раза и увеличивался процент сегментоядерных нейтрофилов (на 8,2%), лимфоцитов - на 4,8%,.

В процессе клинического выздоровления животных повышалась неспецифическая резистентность, как за счет гуморального, так и клеточного звена: увеличивалась бактерицидная (на 14,9%), лизоцимная (на 44,7%) активность сыворотки крови, фагоцитарная активность нейтрофилов (на 12,3%), общие иммуноглобулины — на 8,7%.

Применение тетраметра, купируя воспалительный процесс, способствует снижению интенсивности свободнорадикального окисления липидов, что выражается в уменьшении уровня МДА на 25,5%. При лечении тетраметром снижается индекс эндогенной интоксикации на 42,8%.

После проведенного лечения с использованием тетраметра отмечено увеличение содержания общих липидов на 76,6%, витамина А - на 57,9%, витамина Е - на 68,7%. В процессе комплексного лечения эндометрита с использованием тетраметра происходило снижение функциональной нагрузки на печень, что подтверждается снижением активности аминотрансфераз — АлАТ — на 27,5%, АсАТ - на 17,2%.

Выздоровление животных, которых лечили энроцидом, сопровождалось увеличением содержания гемоглобина на 25,4%, эритроцитов - на 22,6%, процента сегментоядерных нейтрофилов (на 36,8%), лимфоцитов - на 12,9%, снижением лейкоцитов - на 17,8%, процент палочкоядерных нейтрофилов (на 17,6%), эозинофилов — в 4,3 раза, что свидетельствует об ослаблении воспалительной реакции.

В процессе клинического выздоровления животных повышалась неспецифическая резистентность, как за счет гуморального, так и клеточного звена: увеличивалась бактерицидная (на 20,1%), лизоцимная (на 61,3%) активность сыворотки крови, фагоцитарная активность лейкоцитов (на 12,7%).

Применение энроцида, купируя воспалительный процесс, способствует снижению интенсивности свободнорадикального окисления липидов, что выражается в уменьшении уровня МДА на 21,8%. При лечении энроцидом снижается индекс эндогенной интоксикации на 41,8%.

После проведенного лечения с использованием энроцида отмечено увеличение содержания общих липидов на 46,3%, витамина А - на 62,7%, витамина Е — на 1 6,6%. В процессе комплексного лечения эндометрита с использованием энроцида происходило снижение функциональной нагрузки на печень, что подтверждается снижением активности аминотрансфераз — АлАТ — на 29,4%, АсАТ - на 23,5%, ГГТ - на 33,1%.

3.3.9. Структурная организация эндометрия у коров после лечения

послеродового эндометрита диометром, тетраметром и энроцидом

Диометр. У коров на 10-15 дни после лечения отсутствовало выделение из влагалища, а матка уменьшалась в объеме и становилась эластичной. Происходило восстановление структурной организации слизистой оболочки эндометрия. При этом эпителиальный пласт состоял из высоких цилиндрических эпи-телиев, которые были в основном двурядными. Ядра клеток преимущественно ориентировались по высоте покровных эпителий. В функциональном слое наблюдались единичные молодые стромальные клетки фибробластического ряда и располагались по одиночке. Происходила репарация слизистой оболочки эндометрия из молодых клеток. Здесь же, наблюдалось появление единичных межэпителиальных лимфоцитов, что указывало на повышение локальной иммунной защиты органа.

В ультраструктуре клеток маточных желез появлялись электронно плотные призматические эпителии с множественными апикальными микроворсинками, а стенка их обновлялась молодыми призматическими клетками со стороны базальной мембраны железы. В мышечном слое эндометрия ультраструктура гладкомышечных клеток находилась в пределах нормы.

Тетраметр. У коров, подвергнутых лечению послеродового эндометрита тетраметром, так же улучшалось как клинико-морфологическое и иммунобиологическое состояние организма, так и анатомическое, гистологическое и ультраструктурное строение эндометрия. Матка значительно уменьшалась в объеме, становилась эластичной, легко обхватывалась кистью руки и подтягивалась в тазовую полость. На вскрытии у коровы, убитой для проведения морфологических исследований, в половых органах отсутствовали видимые изменения, а

на слизистой оболочке влагалища, шейки матки и матки отсутствовали воспалительные процессы и кровоизлияния. В структурной организации эндометрия происходило восстановление эпителиального пласта молодыми клетками. Улучшалась ультраструктура эндометрия, но полное восстановление микроворсинок на апикальной поверхности клеток эпителиального пласта не наблюдалось. На 13 день после лечения острого послеродового эндометрита нередко наблюдались межэпителиальные лимфоциты на базальной части эпителиального пласта.

Энроиид. У коров, подвергнутых лечению послеродового эндометрита энроцидом, так же улучшались клинико-морфологические и иммунобиологические показатели организма с соответствующими анатомическими, гистологическими и ультраструктурными строениями клеток и тканей эндометрия.

ВЫВОДЫ

1. Заболеваемость коров послеродовым эндометритом в различных хозяйствах Центрально-Черноземного региона РФ колеблется в пределах от 21 до 70%. Наибольшая заболеваемость регистрируется в хозяйствах промышленного типа с высокой концентрацией животных.

2. В развитии воспалительного процесса в половых органах в значительной степени играют изменения во взаимосвязи систем неспецифической резистентности и патогенной микрофлоры окружающей среды. В крови коров с риском развития послеродовой патологии отмечено снижение содержания у-глобулинов на 12,4%, общих иммуноглобулинов - на 8,2%, бактерицидной активность сыворотки крови - на 14,2%, лизоцимной - на 30,6%, фагоцитарной активности лейкоцитов - на 14,3%.

Непосредственной причиной воспалительных заболеваний матки является инфицирование ее полости патогенной и условно-патогенной микрофлорой: чаще всего выделяются - Е. coli - 43,2%; Ent. faecalis - 19,6%, Ent. faecium -18,5%; Citrobacter diversus - 15,6%; Proteus vulgaris - 3,1% и их ассоциации в различных сочетаниях (77,1%).

3. Клинико-морфологически острое течение заболевания характеризуется гиперемией и отечностью каудальной части влагалища и шейки матки с точечно-полосчатыми кровоизлияниями, покрытыми гнойно-слизистым экссудатом. На слизистой оболочке матки выявляется обильный катаральный налет с множественными точечно-пятнистыми кровоизлияниями. Через две недели после отела величина матки у коров варьировала в пределах 1925±35 см", что соответствовала ее размерам в 3,5-4,5 месячной беременности.

4. В слизистой оболочке матки у коров, больных острым послеродовым эндометритом, выявлялось набухание слизистой оболочки покровного эпителия с последующим его распадом и десквамацией в ее полость. Патологический процесс проникал в более глубокие слои эндометрия в виде экссудативно-инфиггьтративных изменений. Отек функционального слоя эндометрия сопровождался диффузной клеточной инфильтрацией, содержащей обилие некробио-тических лейкоцитов, лимфоидных и тканевых клеток, а так же скопление гнойных телец в просвете маточных желез. На оголенной поверхности эндо-

метрия изобиловал катаральный экссудат, содержащий дисквомированные эпителиальные клетки, форменные элементы крови и кокковую микрофлору.

5. В ультраструктурной организации клеток матки у коров, больных острым послеродовым эндометритом, выявлялись необратимые изменения в цито-плазматических органоидах, в ядерной кариоплазме и ядрышках. Увеличивалось количество апоптоидных телец и некробиотических клеток на слизистой оболочке матки. Отмечался парциальный отек ядра и цитоплазмы в гистиоцитах эндометрия. Появлялись фрагменты плазматических клеток и лимфоцитов, активизировались макрофагальные клетки в слизистой оболочке матки. Происходило набухание стенки кровеносных капилляров и их эндотелия, нарушалась целостность микроциркуляторного русла.

6. Диометр, тетраметр и энроцид обладают широким спектром антимикробной активности (МБсК от 0,39 до 6,25 мкг/мл) против кокковой и палочковидной грамположительной и грамотрицательной микрофлоры.

7. Антимикробные композиции диоксидина и энрофлоксацина относятся к относительно безвредным препаратам (4 класс опасности). При подкожном введении ЛД50 диометра для белых мышей и крыс составляет 8716,5 и 8360,3 мг/кг, ЛД50 тетраметра - 8391,1 и 8058,5 мг/кг и ЛД50 энроцида - 17216,5 и 16810,3 мг/кг. Препараты хорошо переносятся животными при однократном внутриматочном введении в дозе, в три раза превышающей терапевтическую.

8. При многократном подкожном введении препараты не вызывают изменений в поведении и общем состоянии лабораторных животных, отклонений в скорости роста, нарушений гемопоэза, функций печени, почек. Препараты не влияют на биохимические показатели крови, характеризующие функциональное состояние внутренних органов, не вызывают изменений метаболических процессов в печени и нарушений ее обезвреживающей функции; не оказывают местнораздражающего действия на кожные покровы, при нанесении на слизистые оболочки глаз проявляют слабое раздражающее действие; не обладают кумулятивным, аллергенным, эмбриотоксическим и тератогенным действием.

9. Комплексное лечение коров, больных послеродовым гнойно-катаральным эндометритом с внутриматочным введением диометра, тетраметра или энроцида, обеспечивало восстановление структурной организации эпителиального пласта, функционального и базального слоев эндометрия, а также маточных желез с появлением в нем молодых стромальных клеток фибробла-стического ряда и межэпителиальных лимфоцитов, что свидетельствует о завершении репаративных процессов и возрастании локальной иммунной защиты.

10. Активно действующие вещества диометра, тетраметра и энроцида при их внутриматочном введении не обнаруживаются в молоке через 72-96 часов. Использовать молоко в пищевых целях можно через 6 суток после последнего введения препаратов.

11. Применение в комплексном лечении больных эндометритом коров диометра обеспечивало выздоровление 83,9% животных в среднем за 10,3±0,11 дней. После проведённого лечения оплодотворились 87,2% выздоровевших жи-

вотных. Период от отела до оплодотворения составлял 58,4±4,11 дней с индексом оплодотворения 1,52.

12. Выздоровление коров, подвергнутых комплексному лечению с использованием в качестве этиотропного средства диометра, сопровождалось повышением в крови содержания эритроцитов на 17,3%, гемоглобина — на 26,7%, процента сегментоядерных нейтрофилов — на 24,4%, общего белка — на 6,7%, общих иммуноглобулинов — на 12,8%, активности щелочной фосфатазы - на 17,8%, содержания общих липидов - на 46,3%, витамина А - на 32,6%, витамина Е — на 24,1%, бактерицидной активности сыворотки крови - на 12,3%, лизо-цимной — на 21,5%, фагоцитарной активности лейкоцитов - на 9,1%, с одновременным снижением количество лейкоцитов на 27,6%, содержания мочевины -на 21,0%, креатинина — на 9,9%, активности АсАТ — на 8,7% и АлАТ — на 24,8%, уровня малонового диальдегида - на 13,8%, индекса эндогенной интоксикации — на 34,4%.

13. Терапевтическая эффективность тетраметра при остром послеродовом эндометрите коров в среднем составила 84,2% при средней продолжительности лечения 10,6±0,11 дней, а энроцида - 83,8% и 10,4±0,12 дней соответственно.

14. Выздоровление коров, подвергнутых комплексному лечению с использованием в качестве этиотропного средства тетраметра, сопровождалось повышением в крови содержания эритроцитов на 20,7%, гемоглобина — на 7,2%, процента сегментоядерных нейтрофилов - на 8,2%, общих иммуноглобулинов — на 8,7%, бактерицидной активности сыворотки крови — на 14,9%, лизо-цимной - на 44,7%, фагоцитарной активности лейкоцитов — на 12,3%, общих липидов - на 76,6%, витамина А — на 57,9%, витамина Е - на 68,7%, с одновременным снижением количества лейкоцитов на 15,9%, процента палочкоядер-ных нейтрофилов — на 68,4%, эозинофилов - в 2,7 раза, активности АсАТ - на 17,2% и АлАТ - на 27,5%, уровня малонового диальдегида - на 25,5%, индекса эндогенной интоксикации - на 42,8%.

15. Выздоровление коров, подвергнутых комплексному лечению с использованием в качестве этиотропного средства энроцида, сопровождалось повышением в крови содержание эритроцитов на 22,6%, гемоглобина - на 25,4%, лимфоцитов — на 12,9%, процента сегментоядерных нейтрофилов - на 36,8%, бактерицидной активности сыворотки крови — на 20,1%, лизоцимной - на 61,3%, фагоцитарной активности лейкоцитов - на 12,7%, содержание общих липидов - на 46,3%, витамина А - на 62,7%, витамина Е - на 16,6%. При этом происходило снижение содержания лейкоцитов на 17,8%, процента палочко-ядерных нейтрофилов — на 17,6%, эозинофилов - в 4,3 раза, активности ГГТ — на 33,1%, АлАТ - на 29,4%, АсАТ - на 23,5, уровня малонового диальдегида -на 21,8%, индекса эндогенной интоксикации - на 41,8%.

16. Однократное внутриматочное применение диометра коровам через 6-8 часов после самопроизвольного отделения последа или сразу после оперативного его отделения предупреждает развитие эндометрита у 82,6-89,9% животных, тетраметра - у 85,5-89,1% и энроцида - у 86,5-89,2%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для профилактики и лечения послеродового эндометрита у коров дио-метр применять внутриматочно в дозе 100 мл на животное, в соответствии с инструкцией по применению, утвержденной Россельхознадзором РФ (регистрационный номер ПВР-2-0.3/01214).

Для профилактики и лечения послеродового эндометрита у коров тетраметр применять внутриматочно в дозе 100 мл на животное, в соответствии с инструкцией по применению, утвержденной Росельхознадзором РФ (регистрационный номер ПВР-2-0.3/01216).

Для профилактики и лечения послеродового эндометрита у коров энро-цид применять внутриматочно в дозе 100 мл на животное, в соответствии с инструкцией по применению, утвержденной Росельхознадзором РФ (регистрационный номер ПВР-2-0.3/01215).

2. При разработке мероприятий по профилактике и лечению акушерско-гинекологических заболеваний животных, при организации воспроизводства и профилактики бесплодия у высокопродуктивного молочного скота руководствоваться «Методическим пособием по профилактике бесплодия у высокопродуктивного молочного скота» (протокол №3 от 26 октября 2010г.) и «Практическим руководством по обеспечению продуктивного здоровья крупного рогатого скота» (УМО №06-19-275 от 18.03.2011 г.).

3. Предприятиям ветфарминдустрии предлагается выпускать комплексные препараты в соответствии со стандартом предприятия для производства диометра СТО 10590965-0023-2008, тетраметра - СТО 10590965-0024-2008 и энроцида- СТО 10590965-0025-2008.

4. Основные научные положения работы и ее практические результаты рекомендуется использовать в производственных условиях ветеринарными специалистами, а также в учебном процессе студентами, аспирантами и научными работниками ветеринарного профиля.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Методическое пособие по профилактике бесплодия у высокопродуктивного молочного скота / А.Г. Нежданов, C.B. Шабунин, Ю.Н. Алехин, И.Т. Шапошников и др. // ГНУ «ВНИВИПФиТ РАСХН», Воронеж, 2010. - 54 с.

2. Шапошников И.Т. Лечебная эффективность диометра, тетраметра и энроцида при эндометрите у коров / И.Т.Шапошников // Актуальные проблемы болезней обмена веществ у сельскохозяйственных животных в современных условиях: Матер. Междунар.науч.-практ. конф., посвящ. 40-летию ГНУ ВНИВИПФиТ. - Воронеж: Из-во «Истоки». - 2010. - С. 264-266.

3. Шапошников И.Т. Общее действие диометра на организм коров и сроки его выведения / И.Т. Шапошников, Т.И.Ермакова // Актуальные проблемы современной ветеринарии: Матер, междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 65-летию ветеринарной науки Кубани. - Краснодар, 2011. - Ч. 1. - С. 109-112.

4. Шапошников И.Т. Острая токсичность энроцида / И.Т. Шапошников, С.М. Сулейманов // Актуальные проблемы современной ветеринарии: Матер.

междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 65-летию ветеринарной науки Кубани. -Краснодар, 2011.-Ч. 1.-С. 112-115.

5. Шапошников И.Т. Антимикробное действие диометра / И.Т.Шапошников // Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации: Матер. 3-го съезда фармакологов и токсикологов России. - Санкт-Петербург. - Из-во СПбГАВМ. - 2011. - С. 492-493.

6. Шапошников И.Т. Определение остаточных количеств активнодействую-щих веществ диометра/ И.Т.Шапошников И Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации: Матер. 3-го съезда фармакологов и токсикологов России. - Санкт-Петербург. - Из-во СПбГАВМ. — 2011. -С. 493-495.

7. Шапошников И.Т. Определение раздражающего действия диометра / И.Т.Шапошников II Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации: Матер. 3-го съезда фармакологов и токсикологов России. - Санкт-Петербург. - Из-во СПбГАВМ. - 2011. - С. 495-496.

8. Шапошников И.Т. Острая токсичность диометра / И.Т.Шапошников // Актуальные проблемы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации: Матер. 3-го съезда фармакологов и токсикологов России. - Санкт-Петербург. -Из-во СПбГАВМ. - 2011. - С. 496-498.

*9. Лечебно-профилактическая эффективность тетраметра при эндометрите у коров / С.М. Сулейманов, И.Т. Шапошников, A.A. Щербаков, П.А. Паршин, И.В Цветнова // Ветеринарная патология. — 2011. - № 1-2 (36). — С. 70-74. *10. Изучение лечебной эффективности диометра при послеродовом эндометрите у коров/ И.Т. Шапошников, A.A. Щербаков, П.А. Паршин, И.В Цвет-нова// Ветеринарная патология.— 2011. - № 1-2(36).-С. 95-98. *11. Шапошников И.Т. Терапия эндометрита у коров ротационными препаратами/ И.Т. Шапошников//Ветеринарная патология. - 2011. - № 3 (37). - С. 49-52.

12. Практическое руководство по обеспечению продуктивного здоровья крупного рогатого скота Серия «Учебники для вузов. Специальная литература» Под редакцией C.B. Шабунина и Ф.И. Василевича/ C.B. Шабунин, Ф.И. Василевич, А.Г. Нежданов и [др.]., И.Т. Шапошников// Воронеж «Антарес». - 2011. - 220 с.

13. Проблемы патологической морфологии незаразных болезней животных /С.М. Сулейманов, Ю.П. Жарова, B.C. Слободяник, П.А. Паршин, И.Т. Шапошников // Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных: Матер. 17-й Всероссийской науч.-методич. конф. по патологической анатомии животных. — Москва, 2011. — М.: ФГБОУ ВПО МГАВМиБ. - С. 111-114.

14. Волкова Д.В. Ультраструктурная характеристика эндометрия при остром гнойно-катаральном эндометрите у коров / Д.В. Волкова, И.С. Толкачев, В.И. Михалёв, И.Т. Шапошников, А.А Щербаков // Современные проблемы патологической анатомии, патогенеза и диагностики болезней животных: Матер. 17-й Всероссийской науч.-методич. конф. по патологической анатомии животных. - Москва, 2011. - М.: ФГБОУ ВПО МГАВМиБ. - С. 118-119.

*15. Сулейманов C.M. Клинико-морфологические и ультраструктурные изменения при остром гнойно-катаральном эндометрите у коров / С.М. Сулейманов, И.Т. Шапошников, Д.В. Волкова, A.A. Щербаков // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. — 2011. - № 3 (11). - С. 49-54.

*16. Шапошников И.Т. Профилактическая эффективность диометра при остром эндометрите у коров / И.Т.Шапошников // Ветеринарный врач. — 2011. - № 4. - С. 34-35.

*17. Шапошников И.Т. Лечение острого эндометрита у коров энроцидом / И.Т. Шапошников // Ветеринарный врач. — 2011. - № 5. - С. 51-53. *18. Гуморальный иммунитет и морфологические изменения при эндометрите у коров / Ю.Н. Масьянов, В.И. Михалёв, И.Т. Шапошников, И.С. Толкачев, А.А Щербаков.// Ветеринарный врач. - 2011. - № 6. - С. 41 -44.

19. Шапошников И.Т. Морфо-биохимические показатели крови коров при внутриматочном применении препарата диометра и его экскреция из организма / И.Т.Шапошнпков, С.М. Сулейманов, П.А.Паршин // Биотехнологические системы в производстве пищевого сырья и продуктов: инновационный потенциал и перспективы развития: Матер. Междунар. науч.-технич. конф. - Воронеж, 2011. - ВГУИТ. - С. 534-537.

20. Шапошников И.Т. К оценке токсичности препарата тетраметра / И.Т. Шапошников, С.М. Сулейманов // Биотехнологические системы в производстве пищевого сырья и продуктов: инновационный потенциал и перспективы развития: Матер. Междунар. науч.-технич. конф. - Воронеж, 2011. - ВГУИТ. -С. 537-540.

21. Шапошников И.Т. Антимикробная активность тетраметра/. И.Т.Шапошников// Биотехнологические системы в производстве пищевого сырья и продуктов: инновационный потенциал и перспективы развития: Матер. Междунар. науч.-технич. конф. - Воронеж, 2011. - ВГУИТ. - С. 540-542.

*22. Шапошников И.Т. Применение тетраметра при послеродовом эндометрите у коров / И.Т. Шапошников // Ветеринарный врач. - 2012. - № 1. - С. 3335.

*23. Факторы защиты и морфофункциональные изменения при послеродовом эндометрите у коров/ С.М. Сулейманов, Ю.Н. Масьянов, И.Т. Шапошников, В.И. Михалёв, И.С. Толкачев, А.А.Щербаков // Ветеринария. - 2012. - № 6. - С. 39-42.

24. Методы морфологических исследований (методическое пособие). 3-е издание переработанное и дополненное. Одобрено секцией «Патология, фармакология и терапия» ОВМ РАСХН (протокол № 1 от 30 марта 2000 г.)./ С.М. Сулейманов, И.Т. Шапошников, В.В. Авдеев и др.//Издательство ФГБОУ ВПО «Воронежский ГАУ имени императора Петра 1», Воронеж, 2012, 104 с. *25. Шапошников И.Т. Активно действующие вещества тетраметра и его остаточные количества в биологических жидкостях у коров / И.Т.Шапошников // Международный вестник ветеринарии. - 2012 - № 2. - С. 38-39.

26. Лечебное действие энроцида на коров, больных острым послеродовым эндометрита/ И.Т. Шапошников, Н.Е Папин, В.А. Степанов, H.A. Шевченко//

Современные проблемы ветеринарного акушерства и биотехнологии воспроизведения животных: Мат. Международной науч.-практ. конф., посвящен. 85-летию со дня рожд. профессора Г. А. Черемисинова и 50-летию создания Воронежской школы ветеринарных акушеров. — Воронеж: Издательство «Истоки», 2012. -С. 511-514.

27. Шапошников И.Т. Влияние диометра на показатели крови коров, больных острым послеродовым эндометритом / И.Т. Шапошников, И.С. Толкачев, В.И. Шушлебин, Д.А. Ерин // Современные проблемы ветеринарного акушерства и биотехнологии воспроизведения животных: Мат. Междунар. научно-практ. конф., посвящн. 85-летию со дня рождения профессора Г.А. Черемисинова и 50-летию создания Воронежской школы ветеринарных акушеров. - Воронеж: Издательство «Истоки», 2012. - С. 514-518.

28. Шапошников И.Т. Гематологические, биохимические и иммунологические показатели крови у коров при лечении острого послеродового эндометрита тетраметром / И.Т. Шапошников, A.A. Щербаков, Г.Г. Чу сова, В.И.Моргунова // Современные проблемы ветеринарного акушерства и биотехнологии воспроизведения животных: Мат. Междунар. научно-практ. конф., посвящн. 85-летию со дня рождения профессора Г.А. Черемисинова и 50-летию создания Воронежской школы ветеринарных акушеров. - Воронеж: издательство «Истоки», 2012. -С. 518-522.

*29. Изменения в молочной железе при катарально-гнойном мастите у коров, переболевших острым послеродовым эндометритом / О.Б. Павленко, С.М. Су-лейманов, Л.П. Миронова, И.Т.Шапошников // Ветеринарная патология. -2012.-№3(41).-С. 19-21.

30.Шабунин C.B. Определение остаточных количеств активнодействующих веществ тетраметра в биологических жидкостях / C.B. Шабунин, И.Т. Шапошников// Современные проблемы и инновационные подходы к диагностике, лечению и профилактике болезней животных и птиц: Матер, междунар. науч.-практ. конф. — Екатеринбург: "Уральское аграрное издательство, 2012. - С. 261.

31. Шапошников И.Т. Активнодействующие вещества диометра и его остаточные количества в биологических жидкостях у коров/ И.Т.Шапошннков// Современные проблемы и инновационные подходы к диагностике, лечению и профилактике болезней животных и птиц: Матер, междунар. науч.-практ. конф.

- Екатеринбург: Уральское аграрное издательство, 2012. - С. 262.

32. Шапошников И.Т. Определение остаточного количества активно действующего вещества энроцида в биологических жидкостях лактирующих коров/ И.Т.Шапошников // Современные проблемы и инновационные подходы к диагностике, лечению и профилактике болезней животных и птиц: Матер, междунар. науч.-практ. конф. - Екатеринбург: Уральское аграрное издательство, 2012.

- С. 263.

33. Шапошников И.Т. Раздражающее действие тетраметра на глаз кролика/ И.Т.Шапошников // Современные проблемы и инновационные подходы к диагностике, лечению и профилактике болезней животных и птиц: Матер, междунар. науч.-практ. конф. - Екатеринбург: Уральское аграрное издательство, 2012.

- С. 264.

34. Сулейманов С.М. Влияние на клинико-морфологическое состояние коров ротационных препаратов при терапии послеродовой патологии / С.М. Сулейманов, И.Т. Шапошников, A.A. Щербаков, П.А. Паршин, B.C. Слободяник // Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации: Матер. IV съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России. - Воронеж: издательство «Истоки», 2013. - С. 548-551.

35. Шапошников И.Т. Распространение послеродовой патологии у коров, ее профилактика и терапия / И.Т. Шапошников, Ю.Н. Бригадиров, А.Н. Модин, Д.А. Ерин // Актуальные вопросы ветеринарной фармакологии, токсикологии и фармации: Матер. IV съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России. - Воронеж: издательство «Истоки», 2013. - С. 634-637.

ПАТЕНТЫ

*36. Патент на изобретение № 2464979. Препарат для лечения и профилактики послеродового эндометрита и синдрома метрит-мастит-агалактии у свиноматок / C.B. Шабунин, И.Т. Шапошников, Г.А. Востроилова, Т.Е. Рогачева, Г.Н. Близнецева, JI.B. Ческидова, И.В. Брюхова, Т.А. Панина, О.С. Шабунина; №2011143314/15., заявлено 26.10.2011., опубл. 27.10.2012, Бюл. № 30. *37. Патент №2455992. Препарат для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров / C.B. Шабунин, И.Т. Шапошников, Г.А. Востроилова, Т.Е. Рогачева, А.Г. Нежданов, В.И. Михалев, Д.А. Ерин, Л.В.Ческидова; № 2011129143 /15; заявл. 13.07.2011., опубл. 20.07.2012., Бюл. №20. *38. Патент на изобретение № 2467755. Способ комбинированного лечения послеродового эндометрита у коров / C.B. Шабунин, И.Т. Шапошников, Г.А. Востроилова, Г.Н. Близнецова, С.М Сулейманов;№2011137150/15., заявл. 08.09.2011.,опубл. 27.11.2012 Бюл. № 33.

* - публикации в научных изданиях, рекомендованных перечнем ВАК РФ

ИЗДАТЕЛЬСТВО «ИСТОКИ»

394026, г. Воронеж, ул. Солнечная, 33 Телефон/факс (473) 239-55-54 E-mail: istoki-vrn@mail.ru

Подписано в печать 30.05.2013 г. Формат 60x80 1/16. Гарнитура «Times New Roman» Печать офсетная. Бумага офсетная. Объем 2,0 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 485.

Отпечатано в соответствии с качеством предоставленного оригинал-макета.

ТИПОГРАФИЯ «ИСТОКИ» 394026, г. Воронеж, ул. Солнечная, 33 Телефон/факс (473) 239-55-56

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, доктора ветеринарных наук, Шапошников, Иван Тихонович, Воронеж

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

ГНУ ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДСЖ ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ ПАТОЛОГИИ, ФАР

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЯ КОМПОЗИЦИОННЫХ АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ И ИХ КЛИНИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИ ПОСЛЕРОДОВОМ ЭНДОМЕТРИТЕ У КОРОВ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

06.02.06 - ветеринарное акушерство и биотехника репродукции животных

ТЕРАПИИ

05201351423

На правах рукописи

ШАПОШНИКОВ ИВАН ТИХОНОВИЧ

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Научный консультант:

доктор биологических наук Г.А. Востроилова

Воронеж - 2013

СОДЕРЖАНИЕ

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ......................................................................6

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ....................................................................................................................12

2.1. Послеродовые эндометриты и их роль в развитии бесплодия у коров......................................................................................................................................................................12

2.1.1. Распространение послеродовых эндометритов у коров..................................12

2.1.2. Клинико-морфологическое проявление послеродовых эндометритов у коров................................................................................................................................................17

2.1.3. Диагностика послеродовых эндометритов у коров................................................23

2.2. Роль микроорганизмов и показателей естественной резистентности

в развитии эндометрита у коров..................................................................................................26

2.2.1. Микрофлора, выделяемая из матки коров с послеродовым эндометритом..............................................................................26

2.2.2. Влияние естественной резистентности на заболеваемость коров эндометритами............................................................................................................................................31

2.2.3. Факторы, предрасполагающие к развитию послеродовых эндометритов у коров..........................................................................................................................................34

2.3. Терапия послеродовых эндометритов у коров..........................................................38

2.3.1. Применение препаратов антимикробного действия............................................38

2.3.2. Применение препаратов патогенетического и общестимулирующе-

го действия................................................................................................................................................54

2.3.3. Применение способов нетрадиционной терапии....................................................58

2.4. Методы профилактики послеродовых эндометритов у коров....................61

2.5. Заключение..............................................................................................................................................69

3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ......................................................72

4. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ............................................................................80

4.1. Этиологическая структура послеродового эндометрита у коров в хозяйствах ЦЧР......................................................................................................................................80

4.2. Клинико-морфологическая, гистоструктурная и электронномикро-скопическая характеристика острого послеродового эндометрита у коров................................................................................................................................................................81

4.3. Обоснование создания новых комплексных антибактериальных препаратов для лечения эндометрита у коров..........................................................125

4.4. Фармакотоксикология диометра............................................................................................130

4.4.1. Антимикробное действие диометра..................................................................................130

4.4.2. Острая токсичность диометра..................................................................................................131

4.4.3. Изучение безвредности (переносимости) диометра на коровах..............134

4.4.4. Подострая токсичность диометра на лабораторных животных................136

4.4.5. Субхроническая токсичность диометра на коровах..............................................138

4.4.6. Раздражающее действие диометра......................................................................................139

4.4.6.1. Раздражающее действие диометра на глаз кролика............................................139

4.4.6.2. Раздражающее действие диометра при внутрикожном методе введения кроликам......................................................................................................................................140

4.4.7. Эмбриотоксическое и тератогенное действие диометра................................141

4.4.8. Определение остаточных количеств диметилсульфоксида, канами-

цина и диоксидина в молоке......................................................................................................142

4.5. Клиническая фармакология диометра..............................................................................143

4.5.1. Лечебная эффективность диометра при остром послеродовом эндометрите у коров...............................................................................143

4.5.2. Профилактическая эффективность диометра при послеродовом эндометрите у коров................................................................................................................................144

4.6. Фармакотоксикология тетраметра......................................................................................149

4.6.1. Антимикробное действие тетраметра................................................................................154

4.6.2. Острая токсичность тетраметра..............................................................................................154

4.6.3 Изучение безвредности (переносимости) тетраметра на коровах..........157

4.6.4. Подострая токсичность тетраметра на лабораторных животных............158

4.6.5 Субхроническая токсичность тетраметра на коровах........................................160

4.6.6 Раздражающее действие тетраметра................................................................................161

4.6.6.1. Раздражающее действие тетраметра на глаз кролика........................................161

4.6.6.2. Раздражающее действие тетраметра при внутрикожном методе введения кроликам..............................................................................................................................162

4.6.7. Эмбриотоксическое и тератогенное действие тетраметра..........................163

4.6.8. Определение остаточных количеств диметилсульфоксида, диоксидина и окситетрациклина в молоке........................................................................................164

4.7. Клиническая фармакология тетраметра..........................................................................165

4.7.1. Лечебная эффективность тетраметра при остром послеродовом эндометрите у коров..................................................................................................................................165

4.7.2. Профилактическая эффективность тетраметра при послеродовом эндометрите у коров..........................................................................................................................170

4.8. Фармакотоксикология энроцида............................................................................................175

4.8.1. Антимикробное действие энроцида....................................................................................175

4.8.2. Острая токсичность энроцида..................................................................................................176

4.8.3. Изучение безвредности (переносимости) энроцида на коровах..............179

4.8.4. Подострая токсичность энроцида на лабораторных животных................180

4.8.5. Субхроническая токсичность энроцида на коровах..............................................182

4.8.6. Раздражающее действие энроцида........................................................................................184

4.8.6.1. Раздражающее действие энроцида на глаз кролика............................................184

4.8.6.2 Раздражающее действие энроцида при внутрикожном методе введения кроликам......................................................................................................................................185

4.8.7. Эмбриотоксическое и тератогенное действие энроцида................................186

4.8.8. Определение остаточных количеств диметилсульфоксида и энроф-локсацина в молоке............................................................................................................................187

4.9. Клиническая фармакология энроцида..............................................................................188

4.9.1. Лечебная эффективность энроцида при остром послеродовом эндометрите у коров................................................................................................................................188

4.9.2. Профилактическая эффективность энроцида при послеродовом эндометрите у коров................................................................................................................................193

4.10. Клинико-морфологическая характеристика коров, после лечения

эндометрита препаратами диометр, тетраметр и энроцид............................198

4.11. Структурная организация эндометрия у коров после лечения послеродового эндометрита препаратами диометр, тетраметр и энроцид....................................................................................................................................................................207

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ....................................................................................220

6. ВЫВОДЫ..................................................................................................................................................237

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ........................................................................242

8. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ........................................244

ПРИЛОЖЕНИЯ..........................................................................................................................................................297

СОКРАЩЕНИЯ И УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

АлАТ - аланинаминотрансфераза

АсАТ - аспартатаминотрансфераза

БАСК - бактерицидная активность сыворотки крови

у-ГТТ - у-глутамилтрансфераза

КРС - крупный рогатый скот

ЛАСК - лизоцимная активность сыворотки крови

лд - летальная доза

МБсК - минимальная бактериостатическая концентрация

МБцК - минимальная бактерицидная концентрация

МПА - мясопептонный агар

МПБ - мясопептонный бульон

мтд - минимальная токсическая доза

ПАН - плацента активное начало

пдэ - плацента денатурированная эмульгированная

ТР - технологический регламент

ФАЛ - фагоцитарная активность лейкоцитов

ФИ - фагоцитарный индекс

ФЧ - фагоцитарное число

ЦЧР - Центрально-черноземный регион

ЩФ - щелочная фосфатаза

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Одной из причин возникновения временного или постоянного бесплодия у коров являются послеродовые эндометриты, сдерживающие воспроизводство стада крупного рогатого скота. Поэтому вопросам этиологии, патогенеза, профилактики послеродовых эндометритов, совершенствованию способов лечения больных коров уделяется большое внимание.

Однако, несмотря на достижения современной ветеринарной науки в этой области, послеродовые эндометриты повсеместно распространены, носят массовый характер и остаются одной из главных проблем в воспроизводстве животных.

А.Г. Нежданов с соавт. (2005), А.Н. Турченко, И.С. Коба (2009), C.B. Ша-бунин с соавт.(2009, 2012), В.И. Михалев (2012) и др. считают, что болезни органов размножения у крупного рогатого скота представляют одну из важнейших проблем современного ветеринарного акушерства и гинекологии, так как являются основной причиной возникновения у коров длительного бесплодия, сопровождающегося снижением молочной продуктивности, прекращением лактации и преждевременной их выбраковкой. Болезни органов размножения развиваются на фоне глубоких структурных изменений в половых органах. В матке они проявляются в виде отечности серозной и мышечной оболочек, отсутствия признаков ретракции, диффузной инфильтрации эндометрия лимфоидными клеточными элементами, некроза, распада и отторжения поверхностного слоя, сильной васку-ляризации и кровенаполнения кровеносных сосудов, вследствие чего в матке образуется кровоточащая раневая поверхность, приводящая к обильным кровянистым выделениям из половых органов. При этом создаются благоприятные условия для проникновения в полость матки и размножения патогенных микроорганизмов, токсины которых усиливают нарушение обмена веществ и микроциркуляцию в пораженных тканях. Устанавливается порочный круг патологических процессов с изменением причинно-следственных отношений. В развитии патологического процесса значительно возрастает роль условно-патогенной микрофлоры, в связи с повышением ее вирулентности и числа штаммов, устойчивых к ле-

карственным препаратам, а также с высокой частотой инфицирования беременных животных.

Поэтому одной из причин недостаточно эффективной терапии коров и риска увеличения послеродовых осложнений является возрастающая лекарственная устойчивость возбудителей заболевания. В этой связи необходим постоянный мониторинг, как за составом микроорганизмов-возбудителей, так и за динамикой развития их резистентности. Это позволяет разработать адекватную стратегию и тактику антибактериальной терапии в конкретных условиях каждого молочного комплекса или фермы с включением в лечебный курс препаратов широкого спектра действия (А.Г. Нежданов с соавт., 2005; C.B. Шабунин с соавт., 2009).

Исходя из этого, в системе лечебно-профилактических мероприятий при болезнях органов размножения важная роль принадлежит их фармакотерапии и фармакопрофилактике (C.B. Шабунин с соавт., 2005).

В настоящее время для профилактики и лечения эндометритов применяется большое количество фармакологических средств, имеющих различный механизм действия. Среди них перспективными являются комплексные антимикробные препараты.

Однако, при большом количестве предлагаемых препаратов для лечения больных эндометритами коров, недостаточное внимание уделяется их влиянию на последующую воспроизводительную функцию животных и экологическую чистоту, получаемых от них продуктов.

По данным литературы возникновение, развитие и исход воспалительных процессов в эндометрии у коров в значительной степени определяется состоянием естественной резистентности организма, и в частности местной защиты матки. При этом уровень местной защиты любого органа неразрывно связан с уровнем его структурной организации, что не всегда учитывается при изучении патогенеза эндометритов и испытании лечебно-профилактических средств (A.B. Жаров, 2006; С.М. Сулейманов, 2005).

В связи с этим многие предложенные препараты для лечения больных эндометритом коров, без учета их влияния на структурную организацию матки и организм животного, часто не обеспечивают получения желаемого результата.

Поэтому разработка как более эффективных методов и средств, так и комплексных препаратов для лечения больных эндометритом коров, должна проводиться с учетом местной защитной реакции матки, которая находится в прямой зависимости от состояния ее структурной организации и всего организма.

Однако до настоящего времени недостаточно изучены композиционные препараты при эндометритах у коров, а также их влияние на морфофункциональ-ное состояние органов размножения у больных эндометритом коров.

Цели и задачи исследований. Целью настоящей работы являлось изучение распространения, патогенеза и патологической морфологии острых послеродовых эндометритов у коров, разработка, изучение экспериментальной и клинической фармакологии новых композиционных препаратов для терапии и профилактики острых послеродовых эндометритов у коров с учетом их влияния на морфофунк-циональное состояние эндометрия.

Задачи исследования:

1. Изучить распространение и этиологическую структуру послеродовых эндометритов у коров в хозяйствах ЦЧР;

2. Дать клинико-морфологические и гисто-структурную характеристику матки коров при развитии в ней воспалительного процесса;

3. Разработать новые композиционные антибактериальные препараты для лечения коров с воспалительными заболеваниями матки и провести их фармако-токсикологическую оценку;

4. Выявить влияние новых композиционных препаратов на иммунобиохи-мический статус коров и структурную организацию эндометрия;

5. Провести клинические испытания и определить эффективность применения новых композиционных антибактериальных препаратов в комплексной терапии коров при послеродовом эндометрите;

6. Установить возможность применения новых антибактериальных препаратов для профилактики послеродовых заболеваний у коров;

7. Разработать и утвердить нормативно-техническую документацию и инструкции по применению на новые комплексные антибактериальные препараты для профилактики и лечения послеродовых эндометритов у коров.

Научная новизна. Определена этиологическая структура и дана клинико-морфологическая, гистологическая и ультраструктурная оценка тканей матки у коров после родов. Расширены представления о механизмах развития острого послеродового эндометрита у коров. Научно обоснованы состав и рецептура новых высокоэффективных комплексных антибактериальных препаратов диометр, тетраметр и энроцид для лечения и профилактики послеродового эндометрита у коров. Проведена их фармако-токсикологическая оценка. Выяснено их действие на организм коров на морфобиохимическом уровне и на матку - на тканевом, клеточном и субклеточном уровне организации эндометрия. Научно аргументирована, экспериментально и клинически доказана перспективность использования новых комплексных антибактериальных препаратов диометр, тетраметр и энроцид в ветеринарной практике.

Новизна исследований подтверждена патентами РФ на изобретение №2464979, №2455992 и № 2467755.

Практическая значимость и внедрение. На основании результатов исследований разработаны новые эффективные антибактериальные препараты диометр, тетраметр и энроцид для профилактики и лечения больных эндометритом коров и налажено их серийное производство.

Материалы исследований вошли в «Методическое пособие по профилактике бесплодия у высокопродуктивного молочного скота», одобренное секцией патологии, фармакологии и терапии Отделения ветеринарной медицины РАСХН (Воронеж, 2010) и «Практическое руководство по обеспечению продуктивного здоровья крупного рогатого скота», допущенное учебно-м�