Фармако-токсикологические свойства препарата эмексид и его эффективность при послеродовом эндометрите у коров

Горб, Наталья Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Фармако-токсикологические свойства препарата эмексид и его эффективность при послеродовом эндометрите у коров
ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармако-токсикологические свойства препарата эмексид и его эффективность при послеродовом эндометрите у коров"

ГОРБ НАТАЛЬЯ НИКОЛАЕВНА

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРЕПАРАТА ЭМЕКСИД И ЕГО ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИ ПОСЛЕРОДОВОМ ЭНДОМЕТРИТЕ У КОРОВ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

1 2 СЕН 2013

Новосибирск - 2013

005532836

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Новосибирский государственный аграрный университет»

Научный руководитель доктор ветеринарных наук, доцент

Попов Юрий Геннадьевич

Официальные оппоненты: Лопатин Сергей Викторович

доктор ветеринарных наук, старший научный сотрудник, ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии, ведущий научный сотрудник

Кашин Алексей Степанович

доктор ветеринарных наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Красноярский ГАУ», заведующий кафедрой

Ведущая организация ФГБОУ ВПО «Омский государственный

аграрный университет им. А.П. Столыпина»

Защита состоится « 08 » октября 2013 г. в 14— часов на заседании диссертационного совета Д 006.045.01 при ГНУ «Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока» Россельхозакадемии по адресу: 630501, Новосибирская обл., Новосибирский р-н, п. Краснообск, ГНУ ИЭВСиДВ а/я 8; тел./факс (383)348-44-62, E-mail: dis.ievsidv@list.ru

С диссертацией можно ознакомиться в Сибирской научной сельскохозяйственной библиотеке Россельхозакадемии.

Автореферат разослан « » CL^t^ycraff 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Г.М. Стеблева

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Причины и формы бесплодия коров многообразны, их соотношение в хозяйствах и регионах, в разные годы сильно варьирует. Однако отмечено значительное преобладание симптоматического бесплодия у коров на почве гинекологических заболеваний. В числе последних лидирующее место занимает острый послеродовой эндометрит (C.B. Шабунин с соавт., 2005; А.Г. Нежданов с соавт., 2005; И.С. Коба, 2006; И.Н. Зюбин с соавт., 2007; В.Ф. Дегай, 2007; В.И. Михалев с соавт., 2008; Е.И. Грибкова, 2011; C.B. Чуп-рын с соавт., 2012). У переболевших послеродовым эндометритом коров удлиняется сервис-период, что приводит к значительному экономическому ущербу (В.П. Иноземцев с соавт., 2000; H.H. Кочнев с соавт., 2002).

Острый послеродовой эндометрит вызывается преимущественно ассоциациями бактерий и зачастую осложняется или протекает на фоне вирусных, микозных заболеваний или протозойной инвазии (В.Н. Сюрин с соавт., 1991; Г.В. Небогатиков с соавт., 1998; В.П. Иноземцев с соавт., 2000; H.H. Кочнев с соавт., 2002; О.В. Распутина, М.Н. Шадрина, 2003; А.Г. Нежданов, А.Г. Шахов, 2005; И.Н. Зюбин с соавт., 2007; Л.В. Кралько, 2009; P.M. Васильев, 2009; К.В. Леонов с соавт., 2012; S. LeBlanc et al., 2002; I.M. Sheldon, H. Dobson, 2004; S. Akira et al., 2006; I.M. Sheldon et al., 2006).

Известно, что в связи со значительным распространением на фермах хозяйств лекарственноустойчивой микрофлоры, эффективность лечения с применением широко используемых антимикробных средств заметно снизилась (H.A. Костромитинов, 2001; H.H. Шкиль с соавт., 2008; Ю.М. Тремасов, 2009; A.M. Hammerum, 2007; European Centre for Disease, 2009). Это побуждает к более детальному изучению этиопатогенеза острого послеродового эндометрита у коров, разработке, научному обоснованию и испытанию новых комплексных антимикробных препаратов.

Эмексид — оригинальный комплексный препарат для лечения эндометритов у коров, разработанный нами совместно с ЗАО «Росветфарм». В его состав входит антибактериальный компонент из группы фторхинолонов третьего поколения — энрофлоксацин и противопротозойный компонент из группы нитро-имидазолов — метронидазол.

Цель исследований. Разработать и изучить комплексный антибактериальный препарат для лечения острого послеродового эндометрита у коров и предложить эффективный способ его применения.

Задачи исследований:

1. Изучить распространение акушерско-гинекологических заболеваний в хозяйствах Новосибирской области.

2. Изучить микробиоценоз матки у коров при остром послеродовом эндометрите и определить антимикробную активность Эмексида.

3. Определить токсикологические параметры Эмексида.

4. Изучить влияние препарата на клинические и гематологические показатели и естественную резистентность коров при лечении острого послеродового эндометрита.

5. Разработать оптимальную схему применения Эмексида при лечении острого послеродового эндометрита у коров и определить его терапевтическую и экономическую эффективность.

Научная новизна. Разработан препарат для лечения острого послеродового эндометрита у коров — Эмексид.

Определены основные токсикологические параметры Эмексида — острая и хроническая токсичность, сенсибилизирующие и аллергенные свойства, влияние на слизистые оболочки и кожные покровы.

Установлена высокая антимикробная активность препарата в отношении референтных штаммов и полевых изолятов микрофлоры из матки коров, больных острым послеродовым эндометритом; отмечено потенцирование антимикробного действия энрофлоксацина в составе препарата другими его компонентами.

Дано экспериментальное и клиническое обоснование применения в ветеринарной гинекологической практике препарата Эмексид и определена его терапевтическая и экономическая эффективность.

Выявлено положительное влияние препарата Эмексид в процессе лечения на морфологические и биохимические показатели крови, естественную резистентность, клинико-физиологическое состояние больных острым послеродовым эндометритом коров.

Научная новизна исследований подтверждена патентом РФ на изобретение №2438668 «Препарат для лечения острых послеродовых эндометритов у коров и способ его применения» от 10 января 2012 г.

Теоретическая и практическая значимость. Современными данными дополнена информация о распространении и структуре гинекологических патологий коров в хозяйствах Новосибирской области.

Результаты работы используются в учебном процессе по дисциплине «Акушерство, гинекология и биотехника размножения животных» на факультете ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Новосибирский государственный аграрный университет».

По результатам исследований разработаны методические рекомендации «Способ лечения острого послеродового эндометрита у коров с применением комплексного препарата Эмексид», утвержденные научно-методическим советом факультета ветеринарной медицины Новосибирского ГАУ (протокол № 43 от «11» апреля 2013 г.).

Результаты исследований внедрены в ЗАО «Солнечное» ПУ «Новорога-левское» Ордынского района Новосибирской области.

региона» (Омск, 2011); X и XI Сибирских ветеринарных конференциях «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2011, 2012); конференциях Всероссийского конкурса на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых учебных заведений Минсельхоза России по номинации «Ветеринарные науки» (Омск, 2011; Ставрополь, 2011); X межрегиональной конференции молодых ученых аграрных вузов СФО Ассоциации «Агрооб-разование» «Инновации молодых ученых аграрных вузов Сибири» (Кемерово, 2012); международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны» (Санкт-Петербург, 2012); международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири» (Улан-Удэ, 2013).

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 12 печатных работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобразования РФ («Вестник НГАУ», «Ветеринарная патология»).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 132 страницах компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследований, обсуждения результатов исследований, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения, в своей структуре содержит 13 таблиц и иллюстрирована 13 рисунками. Список литературы включает 312 наименований, из них 267 отечественных и 45 зарубежных авторов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты анализа заболеваемости коров гинекологическими патологиями в хозяйствах Новосибирской области.

2. Результаты токсикологического исследования Эмексида.

3. Результаты изучения антимикробной активности Эмексида.

4. Разработка оптимальной схемы лечения острого послеродового эндометрита Эмексидом, определение его терапевтической и экономической эффективности.

5. Динамика гематологических показателей и естественной резистентности у коров при лечении острого послеродового эндометрита.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в 2009-2012 гг. на кафедре акушерства и биотехники размножения факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Новосибирский государственный аграрный университет». Экспериментальные и научно-производственные исследования выполнены на базе ЗАО «Солнечное» ПУ «Новорогалевское» Ордынского района Новосибирской области. Тема диссертационной работы является составной частью научных исследований ФГБОУ ВПО «Новосибирский государственный аграрный университет» «Терапия острого послеродового эндометрита у коров препаратом Эмексид» и имеет государственную регистрацию № 01201261931.

Некоторые лабораторные исследования проведены в ГНУ ИЭВСиДВ Рос-сельхозакадемии, ЗАО «Росветфарм», РЦДБЛ МУЗ «Городская поликлиника №

24», ГУ «Научный центр клинической и экспериментальной медицины» СО РАМН, ГБУ НСО УВ Ордынского района «Ордынская ветеринарная лаборатория», ФГБУ «Новосибирская межобластная ветеринарная лаборатория». В работе также использованы данные ветеринарного учета и отчетности ГБУ «УВ Ордынского района НСО» и ГБУ «Управление ветеринарии Новосибирской области».

При постановке опытов применялись клинические, биохимические, морфологические, иммунологические и другие методы исследований.

Распространение акушерско-гинекологических заболеваний у коров было изучено по данным ветеринарного учета и отчетности ГБУ «Управление ветеринарии Новосибирской области», ГБУ «Управление ветеринарии Ордынского района НСО» и ЗАО «Солнечное» ПУ «Новорогалевское». Были изучены данные за 2003-2011 гг.

Для установления нозологического профиля патологий органов репродуктивной системы в ЗАО «Солнечное» в течение 2011 г. было проведено кли-нико-гинекологическое обследование 465 коров.

Предварительное исследование действия препарата на референтные штаммы и смешанную микрофлору, выделенную от больных послеродовым эндометритом животных, проводили дискодиффузионным методом на МПА, при этом учитывали размер зоны задержки роста. Смывы для определения микрофлоры брали по методике М.А. Лучко (1988) в трех хозяйствах Новосибирской области: СПК «Кирзинский», ЗАО «Солнечное» и ОАО племзавод «Учхоз Тулинский». Дальнейшие испытания антимикробной активности препарата и его компонентов проводили методом серийных разведений.

Антимикробную активность Эмексида определяли в соответствие с рекомендациями В.Ф. Ковалева с соавт. (1988).

Чувствительность Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Enterococcus faecium, Escherichia coli к 18 антибактериальным препаратам определяли дискодиффузионным методом с использованием стандартных дисков с антибиотиками производства ЗАО «НИЦФ».

Полевые изоляты микроорганизмов выделяли от больных коров и дифференцировали путем высева их на элективные среды. Изучали морфологические, культуральные и биохимические свойства по общепринятым методикам. Идентифицировали в соответствии с «Определителем бактерий Берджи» (1997).

Патогенность выделенных микроорганизмов изучали путем внутрибрю-шинного заражения белых мышей одномиллиардной взвесью суточной культуры микроорганизмов в дозах 0,2-0,5 мл (200-500 млн. КОЕ).

Определение токсикологических параметров Эмексида проводили в соответствии с «Методическими указаниями по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве» (Л.П. Маланин с соавт., 1988) и «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2005). Опыты проведены на 138 белых мышах, 20 морских свинках-альбиносах, 12 кроликах и 15 коровах.

Острую токсичность препарата определяли на белых мышах (98 голов) обоих полов, массой 19-22 г. За животными вели наблюдение, отмечая клини-

ческую картину и фиксируя число погибших. Расчет 1ЛЭ5о проводили по методу Г.Н. Першина (1950). Полученные результаты сравнивали с ГОСТ 12.1.007 — 76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».

Хроническую токсичность определяли на 40 беспородных белых мышах обоих полов массой 16-18 г. Препарат задавали внутрь. В течение 30 дней за животными вели наблюдение, павших вскрывали.

Сенсибилизирующие и аллергенные свойства Эмексида изучали методом эпикутанных аппликаций на 10 морских свинках-альбиносах массой 270-300 г при 10 животных в контроле. Капиллярную проницаемость кожи определяли на 15-й день опыта по резорбции физиологического раствора.

Влияние препарата на слизистую оболочку изучали на 12 кроликах с массой тела 2-2,5 кг путем проведения конъюнктивальной пробы. За животными вели наблюдение в течение 5 дней.

Опыт по влиянию препарата на слизистую оболочку влагалища был проведен на 10 голштинизированных черно-пестрых коровах 2-4 лактации массой 450-500 кг при 5 коровах в контроле. Подопытным животным препарат вводили интравагинально в однократной и трехкратной терапевтических дозах в течение 5 дней. До начала опыта и по его окончании у коров опытной и контрольной групп брали кровь для гематологического исследования, при этом определяли количество лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина. Измеряли рН влагалищной слизи при помощи индикаторной бумаги. За животными вели наблюдение в течение 3 недель.

Исследование влияния Эмексида на окислительно-метаболитическую функцию лейкоцитов проводили ¡п уИго, при этом использовали растворы препарата в концентрациях 5, 10, 25, 50, 70 и 100% и взвесь лейкоцитов от 15 ин-тактных крыс линии Вистар. Учет реакции проводили с помощью хемилюми-нометра по степени торможения суммарной ХЛ светимости. Исследования проводили с помощью биохемилюминометра «СКИФ-0306 М» (СКТБ «Наука», Красноярск) по методу Д.Н. Маянского с соавт. (1996) в модификации Б.И. Клебанова с соавт. (1999). Про- и антиоксидантную активность сыворотки крови подопытных коров оценивали до лечения и на 20-й день после начала курса лечения.

Разработку оптимальной схемы применения Эмексида для лечения острого послеродового эндометрита у коров проводили на 50 больных коровах. По принципу аналогов, с учетом общего состояния и тяжести заболевания, из них сформировали 4 опытные и контрольную группы по 10 животных в каждой. Животным опытных групп внутриматочно вводили Эмексид, предварительно подогретый до температуры тела. Коровам первой опытной группы препарат вводили в дозе 50 мл 1 раз в день, второй — 50 мл 2 раза в день, третьей — 100 мл 1 раз в день и четвертой - 100 мл 2 раза в день. Лечение продолжали до клинического выздоровления. Животных контрольной группы лечили по схеме, принятой в хозяйстве: внутриматочно вводили Эндометрамаг-Т, согласно действующей инструкции. Всем подопытным животным в первые 3 дня лечения внутримышечно вводили 30 ЕД раствора окситоцина. За животными вели на-

блюдение, при этом ежедневно учитывали: общее состояние, кратность введения препарата, сроки клинического выздоровления.

Изучение терапевтической эффективности Эмексида проводили на базе ЗАО «Солнечное» ГТУ «Новорогалевское» Ордынского района Новосибирской области в течение 2010-2011 гг. Для этого были сформированы опытная (п=105) и контрольная (п=104) группы. Всем подопытным коровам внутримышечно вводили 30 ЕД раствора окситоцина в течение 3-х дней. Животным опытной группы внутриматочно вводили Эмексид в дозе 100 мл 1 раз в сутки до клинического выздоровления. Животным контрольной группы внутриматочно вводили Эндометрамаг—Т в соответствии с действующей инструкцией. Терапевтическую эффективность этих схем лечения определяли по изменению клинических показателей.

До начала опыта, на 10-й и 20-й дни опыта у подопытных и клинически здоровых животных проводили исследование крови и сыворотки. Взятие крови и получение сыворотки проводили общепринятыми методами.

Гематологические показатели (количество лейкоцитов, эритроцитов, содержание гемоглобина) определяли унифицированными методами (Методы ветеринарной клинической ..., 2004). Биохимические показатели сыворотки и крови (содержание кальция, фосфора, щелочного резерва, АлАТ, АсАТ, общего белка и его фракций) определяли на автоматическом многофункциональном спектроанализа-торе «Infropid-61» (Венгрия) в соответствии с методическими рекомендациями ИЭВСиДВ Россельхозакадемии (2002).

Показатели неспецифической резистентности организма определяли до и после окончания опыта, руководствуясь методическими рекомендациями ИЭВСиДВ Россельхозакадемии по оценке естественной резистентности сельскохозяйственных животных (2003).

Экономическую эффективность определяли по «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий», утвержденной Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 21 февраля 1997 г.

Все цифровые данные, полученные в ходе исследований, обработаны методами математической статистики, принятыми в биометрии. Критерий достоверности определяли с помощью таблицы t-распределения по Стьюденту с учетом рекомендаций Г.Ф. Лакина (1990) и В.А. Середина (2001). В некоторых случаях при обработке данных и построении графиков использовали пакет программ «Microsoft Office Excel 2007» на PC Pentium Inside.

Автор выражает благодарность научному руководителю доктору ветеринарных наук Ю.Г. Попову, сотрудникам ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии, РЦДБЛ МУЗ «Городская поликлиника № 24», ГУ «Научный центр клинической и экспериментальной медицины» СО РАМН, ГБУ НСО УВ Ордынского района «Ордынская ветеринарная лаборатория», ФГБУ «Новосибирская межобластная ветеринарная лаборатория» за помощь в проведении некоторых исследований.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 2.2.1. Распространение гинекологических патологий у коров в Новосибирской области

Нами установлено, что в 2003-2011 гг. болезни органов репродуктивной системы в хозяйствах Новосибирской области ежегодно регистрировали у 3,02-52,22 % коров (в среднем 17,18 %). В структуре болезней органов репродуктивной системы у коров преобладают эндометриты. В зависимости от года наблюдения на их долю приходилось 41,20-49,86 % от общего числа выявленных патологий.

К числу районов Новосибирской области, неблагополучных по распространению гинекологических патологий у коров относится Ордынский район. В нем ежегодно регистрируют гинекологические патологии у 24,89-46,42 %. На долю эндометритов, в зависимости от года наблюдения, приходится 35,3669,36% от всех выявленных гинекологических патологий.

Распространение гинекологических патологий в ЗАО «Солнечное» ПУ «Новорогалевское», где и проводились основные исследования, за последние 6 лет варьировало в пределах от 48,60 до 58,9 %.

В структуре болезней послеродового периода на долю острого послеродового эндометрита приходится 61,57 % (41,62 % всех гинекологических патологий), причем в 71,2 % случаев он развивался как следствие травм родовых путей в период родов, неправильной позиции, предлежания или членорасположения плода, задержания последа

2.2.2. Микробиоценоз влагалищно-цервикальной слизи у коров при послеродовом эндометрите

При бактериологическом исследовании влагалищно-цервикальной слизи от 30 больных коров, преимущественно выделяли стрептококки, стафилококки и кишечную палочку (табл. 1).

Таблица 1 - Микробиоценоз влагалищно-цервикальной слизи коров, _больных острым послеродовым эндометритом_

Выделенная микрофлора Выделено культур В том числе

кол-во % монокультур ассоциаций

кол-во % кол-во %

Streptococcus spp. 18 29,03 1 1,61 17 27,42

в том числе Strept. pyogenes 13 20,97 1 1,61 12 19,36

Escherichia coli 18 29,03 3 4,84 15 24,19

в том числе патогенная Е. coli 5 8,07 3 4,84 4 6,45

Staphylococcus spp. 12 19,36 2 3,23 10 16,13

в том числе Staph, aureus 5 8,07 1 1,61 4 6,45

Proteus vulgaris 5 8,07 - - 5 8,07

Bacillus sp. 5 8,07 - - 5 8,07

Enterococcus faecium 2 3,23 - - 2 3,23

Citrobacter sp. 1 1,61 - - 1 1,61

Clostridia sporogenes 1 1,61 - - 1 1,61

Всего 62 100 6 9.68 56 90,32

В подавляющем большинстве случаев (90,32 %) высевали ассоциации микроорганизмов, состоящие из 2-4 видов, причем Proteus vulgaris, Bacillus sp., Citrobacter sp., Clostridia sporogenes, Enterococcus faecium высеивали исключительно в ассоциациях. При остром послеродовом эндометрите наиболее часто выделяли ассоциации Escherichia coli + Streptococcus pyogene, Staphylococcus aureus + Streptococcus pyogenes и Proteus vulgaris + Staphylococcus epidermidis.

Нами была определена чувствительность наиболее часто выделяемой микрофлоры (Streptococcus spp., Staphylococcus spp., Enterococcus faecium, Escherichia coli) к широко используемым в хозяйствах антибактериальным препаратам. Проведенная нами подтитровка показала высокую устойчивость микрофлоры к бен-зилпенициллину, полимиксину, канамицину и фурадонину, совершенно не дав задержки роста. К четырем антибиотикам (стрептомицин, гентамицин, энрофлокса-цин, тилозин) выделенная микрофлора проявила высокую чувствительность.

Для установления этиологической роли возбудителей хламидиоза, кампи-лобактериоза и трихомоноза в возникновении острого послеродового эндометрита в ЗАО «Солнечное» ПУ «Новорогалевское» проведены дополнительные лабораторные исследования, по результатам которых, перечисленных выше возбудителей выявлено не было.

2.2.3. Доклиинческпе исследования Эмекснда 2.2.3.1. Антимикробная активность Эмексида in vitro

Предварительные испытания антимикробной активности Эмексида проводили дискодиффузионным методом. Определяли чувствительность препарата и его действующих веществ к референтной микрофлоре (Staph, aureus АТСС 6538 Р, Е. coli АТСС 25922, Enterobacter spp., Proteus vulgaris) и смешанной микрофлоре, выделенной от больных коров (табл. 2).

Таблица 2 — Антимикробная активность Эмексида _и его действующих веществ in vitro, мм_

Микрофлора Энрофлоксацин Метронидазол Эмексид

Полевая микрофлора (п=12) 39±1,60 - 42±1,10

Референтная микрофлора

Staph, aureus АТСС 6538 Р 40 - 40

Е. coli АТСС 25922 35 - 34

Proteus vulgaris 45 - 45

Enterobacter sp. 35 20 35

Метронидазол, входящий в состав Эмексида, потенцирует антимикробное действие энрофлоксацина в отношении полевой микрофлоры, что выражается увеличением зоны задержки роста на 16,38 %.

Более подробно изучали активность препарата и его действующих веществ в отношении наиболее часто выделяемой микрофлоры из влагалищно-цервикальной слизи при остром послеродовом эндометрите (табл. 3).

Концентрацию действующего вещества в Эмексиде рассчитывали по эн-рофлоксацину. Как видно из табл. 3 комбинация действующих веществ и вспомогательных компонентов в препарате обладает выраженным антимикробным

действием, причел« входящий в состав препарата метронидазол, не проявляя собственного антимикробного действия на микрофлору, оказывает потенцирующее влияние в отношении энрофлоксацина. Так, минимальная подавляющая концентрация Эмексида по сравнению со взятым отдельно энрофлоксаци-ном уменьшилась по отношению к патогенной Е. coli в 20, к Staphylococcus spp. в 25 раз, а к Streptococcus spp. в 50 раз.

Таблица 3 — Чувствительность полевых изолятов к Эмексиду _и его действующим веществам, мкг/мл_

Выделенная микрофлора Антибактериальный препарат

Эмексид Энрофлоксацин Метронидазол

Streptococcus spp. 0,185 9,375

Escherichia coli (,патогенная) 0,185 3.75 -

Staphylococcus spp. 0.375 9,375 -

2.2.3.2. Острая токсичность Эмексида

На предварительном этапе определения острой токсичности между дозами были взяты широкие интервалы и на каждую дозу использовано по три животных. Для окончательного опыта дозы подобраны так, чтобы минимальная не вызывала гибели животных, а максимальная — 100 % гибель и между этими дозами не менее четырех промежуточных доз. В качестве растворителя использовали дистиллированную воду.

Гибель мышей происходила в группах, получивших по сумме действующих веществ дозы свыше 300 мг/кг массы тела, а доза 750 мг/кг массы тела вызвала гибель 100 % животных.

Клиническая картина острого отравления характеризовалась следующими изменениями: в первые 1,5-2 ч — угнетением, отказом от корма, диспепсическими явлениями, одышкой, повышенной возбудимостью, мышечной дрожью с развитием судорожных явлений. Позднее отмечали гиподинамию, покраснение конъюнктивы, клонические судороги, вытягивание задних конечностей, парезы, через 3-4 ч коматозное состояние и гибель подопытных животных. У выживших мышей признаки отравления исчезали через 3-4 дня. Расчетным путем были определены параметры токсичности Эмексида для белых мышей при введении в желудок. Расчет ЬБ50 осуществляли по методу Г.Н. Першина (1950). Они характеризовались следующими величинами: МПД - 300 мг/кг; ЬВ|П0 - 750, расчетная ЬО<о - 495 мг/кг массы тела.

В соответствии с ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности» Эмексид относится к препаратам III класса опасности — вещества, умеренно опасные.

2.2.3.3. Хроническая токсичность Эмексида

Введение препарата Эмексид мышам внутрь в дозах 5 и 10 мг/кг в течение 10 дней не сопровождалось явлениями токсикоза. Препарат в дозе 50 мг/кг в течение 10 дней вызвал у мышей выраженную картину отравления. Отмечали нервные явления — повышенная возбудимость, мышечная дрожь, адинамия,

столкновение с окружающими предметами, волочение задних конечностей и подпрыгивание при движении.

В первых двух группах гибели животных не отмечено, в 3-й пало 2 мыши. При вскрытии павших выявлены множественные кровоизлияния в подкожной клетчатке, мышцах, на серозных оболочках внутренних органов, на слизистых оболочках желудка и кишечника. Печень дряблая, с закругленными краями, коричнево-желтого цвета.

2.2.3.4. Аллергенное и сенсибилизирующее действие Эмексида

Исследования показали, что нанесение препарата на кожные покровы морских свинок не сопровождается развитием местных патологических реакций (болезненность, отечность, гиперемия и др.). На 5-10-й дни опыта отмечен активный рост шерстного покрова на выстриженных участках кожи.

Рассасывание физиологического раствора, введенного внутрикожно на месте аппликации Эмексида в объеме 0,2 мл, происходило в течение 50±1,5 минут. Указанное время резорбции характерно для кожи с нормальной капиллярной проницаемостью.

Экспериментальными исследованиями установлено, что Эмексид не обладает аллергенным и сенсибилизирующим действием и не оказывает раздражающего влияния на кожный покров подопытных животных.

2.2.3.5. Местно-раздражающее действие Эмексида

Изучение местно-раздражающего действия препарата Эмексид проводили в два этапа: на кроликах и коровах.

1-й этап. Исследования проведены на 12 кроликах, которых разделили на 4 группы по 3 кролика в каждой — 3 опытные и контрольную. Эмексид наносили на конъюнктиву глаза кроликов. В конъюнктивальный мешок второго глаза препарат не закапывали и использовали его в качестве контроля.

Через 2 ч после закапывания и в последующие 2-3 дня каких-либо макроскопических изменений на конъюнктиве, роговице или склере не отмечено. Величина зрачка соответствовала норме.

Эмексид не обладает раздражающим действием на слизистые оболочки.

2-й этап. Для оценки влияния препарата на слизистую оболочку влагалища из 15 клинически здоровых коров, сформировали 3 группы по 5 животных в каждой — 2 опытные и контрольную. Подопытным животным Эмексид вводили интравагинально в расчетной терапевтической и трехкратной терапевтической дозах один раз в сутки в течение 5 дней. Животным контрольной группы вводили стерильный физиологический раствор в объёме 100 мл. За животными вели наблюдение в течение всего периода опыта и последующие 5 дней.

При осмотре слизистых оболочек влагалища коров опытных и контрольной групп макроскопических изменений не выявлено. Реакция влагалищно-цервикальной слизи у подопытных и контрольных животных на протяжении всего периода опыта колебалась в пределах 6,5-7,5 и не имела достоверных различий. Количество лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина в течение опыта также достоверных различий не имело.

Таким образом, Эмексид при интравагинальном введении клинически здоровым коровам в расчетной терапевтической и трехкратной терапевтической дозах в течение 5 дней, не оказывает негативного действия на общий клинический статус животных, не обладает местным раздражающим действием на слизистую оболочку влагалища коров и не влияет на их гематологические показатели.

2.2.4. Клинические исследования Эмексида 2.2.4.1. Разработка оптимальной схемы применения Эмексида

Результаты опыта по определению оптимальной схемы Эмексида представлены в табл. 4.

Таблица 4 — Терапевтическая эффективность различных схем применения ___препарата Эмексид_

Показатель Группа

1-я опытная 2-я опытная 3-я опытная 4-я опытная контрольная

Препарат Эмексид Эндотетрамаг-Т

Доза и кратаость 50 мл 1 раз в день 50 мл 2 раза в день 100 мл 1 раз в день 100 мл 2 раза в день 100 мл 1 раза в день

Продолжительность лечения, дней 6,5±0,56 5,4±0,43 4,9±0,46 5,1±0,35 6,3±0,5

Клиническое выздоровление, дней 8,3±0,68 6,7±0,5 6,1±0.39 6,3±0,42 7,4±0,75

Терапевтическая эффективность, % 90,0 100,0 100,0 100,0 90,0

Проведенный нами опыт свидетельствует о том, что применение препарата Эмексид во 2, 3 и 4 опытных группах позволило добиться 100,0 % терапевтической эффективности, тогда как применение Эмексида в дозе 50 мл в день (1-я опытная группа) и Эндометрамага—'Г в дозе 100 мл в день (контрольная группа) обеспечивали только 90,0 % терапевтическую эффективность. Кроме того, в первой опытной и контрольной группах на 1-2 дня увеличивалась продолжительность лечения и позднее наступало выздоровление животных. В связи с этим целесообразно применять Эмексид в дозе 100 мл 1 раз в день до клинического выздоровления.

2.2.4.2. Терапевтическая эффективность Эмексида

У животных, которым применяли Эмексид, клиническая картина заболевания изменялась уже на следующий день после введения Эмексида у 85 % коров и характеризовалась, главным образом, увеличением количества выделений из матки и изменением их качества. После третьего введения препарата количество выделений снижалось, они становились слизистыми, прозрачными. К 5-6-му дню лечения слизистая оболочка влагалища, как правило, была бледно-розового цвета, контуры матки хорошо выражены, стенки эластичные, матка при пальпации активно сокращалась.

У коров контрольной группы после первого введения препарата положительная динамика наблюдалась у 80 % коров. Слизистая оболочка влагалища была гипе-ремирована, отечная, обильно покрытая экссудатом. Матка и рога матки увеличены в объеме и опущены в брюшную полость, контуры их выражены слабо, стенки дряблые, наблюдалась флюктуация, реакция матки на пальпацию слабая. На 4-е сутки выделение экссудата значительно сокращалось, в этот же период ригидность матки проявлялась в виде слабых сокращений. Признаки гиперемии и отечности исчезали на 5-й день лечения, а к 6-му дню слизистая оболочка влагалища была бледно-розовая, без признаков воспаления, умеренно влажная. Контуры матки были хорошо выражены, стенки эластичные, матка при пальпации активно сокращалась.

Терапевтическая эффективность Эмексида составила 95,0 %, при продолжительности лечения 5,21±0,79 дней и сроках нормализации клинического состояния 6,45±0,29 дней. В контрольной группе, при лечении коров Эндометрамагом-Т, терапевтическая эффективность составила 90,9) % при продолжительности лечения 6,05±1,06 и сроках нормализации клинического состояния 7,63±0,25 дней.

Из числа животных опытной и контрольной групп, а также здоровых животных, было случайным образом отобрано по 30 коров и проведен анализ данных журнала искусственного осеменения. Результаты исследования представлены в табл. 5.

Таблица 5 — Показатели воспроизводительной функции коров, п=30

Показатель Группа Здоровые животные

опытная контрольная

Сервис-период, дней 122,34±6,13 128,76±7,15 108,14±5,76

Количество дней бесплодия 92,34±6,13 98,76±7,15 78Д4±5,76

Оплодотворилось всего, % 73,33 76,66 86.66

в т.ч. от первого осеменения,% 46,66 40,00 53.33

от второго осеменения,% 23,33 26,66 30,00

от третьего осеменения,% 3,33 9,99 3,33

Индекс осеменения 2,41±0,24 2,76±0,22 1,93±0,29

Оплодотворяемость коров в опытной и контрольной группах была ниже по сравнению со здоровыми коровами, соответственно, на 15,38 и 11,54 %. Одновременно с этим следует отметить, что в опытной группе по сравнению с контрольной оплодотворилось на 4,34 % коров меньше. Индекс осеменения у здоровых животных составил 1,93±0,29, у животных опытной и контрольной групп, соответственно, 2,41 ±0,24 и 2,76±0,22. Как следствие позднего оплодотворения увеличивалась продолжительность сервис-периода, а, следовательно, и число дней бесплодия. У здоровых коров этот показатель составил 78,14±5,76 дней, у коров опытной и контрольной групп, соответственно, — 92,34±6,13 и 98,76±7,15 дней.

2.2.4.3 Влияния Эмексида на морфологические и биохимические показатели крови коров с послеродовым эндометритом

При изучении изменений в морфологическом составе крови у коров больных острым послеродовым эндометритом нами установлено достоверное (р<0,001) по-

вышенное содержание лейкоцитов по сравнению с здоровыми аналогами, достоверность различий сохранялась до 10 дня опыта. После проведенного лечения их содержание значительно снижалось как в опытной, так и в контрольной группах, соответственно, на 30,8 и 32,22 % (табл. 6). Уровень гемоглобина у больных животных был достоверно ниже (р<0,001), чем у их здоровых аналогов. После проведенного лечения содержание гемоглобина в опытной и контрольной группах повышалось, соответственно, на 6,07 и 13,50 % и достигало уровня здоровых коров.

Таблица 6 — Динамика морфологических показателей крови коров

Опытная Контрольная Здоровые

Показатель группа группа животные

М±т М±т М±1Т1

До опыта

Лейкоциты, * 10'7л 11,23±0,14*** П,15±0,37*** 7,66±0,14

Эритроциты, х1() /л 6,00±0,19 5,94±0,17 6,42±0,21

Гемоглобин, г/л 95.60+1,21*** 94,80±1,36*** 112,40±2,04

Гематокрит, % 34,85±0,76 32,04±1,64 36,50±2,12

10 день опыта

Лейкоциты, *10 /л 10.13±0,23*** 10,15±0,29*** 7,53±0,15

Эритроциты, > 1012/л 6,2±0.21 6,12±0,07 6,58±0,21

Гемоглобин, г/л 99±2,12* 97±1,38* 108,4±3,4

Гематокрит, % 31,16±1,40 34,31±0,91 31,45±1,16

20 день опыта

Лейкоциты, хЮ'/л 7,77±0,31 7,78±0,20 7,62±0,12

Эритроциты, хЮ12/л 6,3±0,15 6,24±0,11 6,48±0,24

Гемоглобин, г/л 101,4±1,44 107,60±2,73 104,80±4,73

Гематокрит, % 31,77±0,61 35,90±1,14 35,21±1,48

Примечание - Здесь и далее: достоверность различий с показателями здоровых животных *р<0,05; **р<0,01; ***р<0,001.

У больных животных была выявлена эозинопения, после выздоровления количество эозинофилов у животных в опытной и контрольной группах достоверно (р<0,05) увеличивалось, соответственно, в 2,8 и 2,1 раз. Помимо эозино-пении, также отмечали выраженный нейтрофильный лейкоцитоз со сдвигом влево. Содержание базофилов и моноцитов изменялось не достоверно. После проведенного лечения у коров опытной и контрольной групп достоверно (р<0,05) увеличивалось содержание сегментоядерных нейтрофилов, соответственно, на 42,25 и 44,30 %, уменьшалось количество лейкоцитов, соответственно, на 30,8 и 32,22 % и палочкоядерных нейтрофилов - на 42 и 45,16 %.

При изучении биохимических показателей крови (табл. 7) установлено, что до начала лечения содержание фосфора у коров опытной и контрольной групп было достоверно (р<0,01) ниже, чем у здоровых животных, соответственно, на 8,97 и 8,12 %. На 10-11 дни опыта достоверность различий между больными и здоровыми животными сохранялась, содержание фосфора было ниже, соответственно на 6,70 и 7,66 % (р<0,05). К 20 дню опыта содержание его возросло, но так и не достигло показаний здоровых животных-аналогов.

Таблица 7 — Динамика биохимических показателей крови коров

Показатель Опытная группа Контрольная группа Здоровые животные

М±т М±т М±ш

До опыта

Кальций, ммоль/л 3.49±0,01 3,49±0,02 3,49±0,01

Фосфор, ммоль/л 2,13±0,03*** 2,15±0,02*** 2,34±0,02

Щелочной резерв, % 37,71+0,14* 37,82±0,1* 38,13±0,1

АлАТ, ед/л 30,17±3,24* 29,99±1,78* 39,71±3,03

АсАТ, ед/л 40, П±1,06 40,43±1,12 38,92±0,75

Общий белок, г/л 66,68±1,09*** 68,51±3,92* 81,45±0,64

Альбумины, % 43,25±0,93** 42,49±2,17 36,75±0,85

а-глобулины, % 16,77±0,54* 15,56±0,42** 17,62±0,25

Р-глобулины, % 29,68±0,64* 29,92±1,41 32,35±0,85

у-глобулины, % 10,30±0,69* 12,03±1,09 13,10±0,37

10 день опыта

Кальций, ммоль/л 3,48±0,01 3,53±0,01 3,44±0,11

Фосфор, ммоль/л 2,23±0,06* 2,25±0,05* 2,09+0,01

Щелочной резерв, % 38,04±0,26 37,70±0,29 37,19±0,19

АлАТ, ед/л 34,21±3,70 32,75±2,72 31,32±3,12

АсАТ, ед/л 39,37±0,31 39,00±0,51 40,15±0,63

Общий белок, г/л 76,44±1,82* 80,61±3.05 84,84±2,48

Альбумины, % 41,45±0,91** 40,38±1,21** 34,60±0,74

а-глобулины, % 18,38±0,22 17,76±0,31 21,17±0,32

Р-глобулины, % 29,07±0,43 30,80±0,87 29,86±0,95

■у-глобулины, % 11,10±0,75* 11,86±0,61* 14,37±0,77

20 день опыта

Кальций, ммоль/л 3,44±0,03 3,45±0,03 3,48±0,19

Фосфор, ммоль/л 2,17±0,06 2,18±0,08 2,21±0.05

Щелочной резерв, % 37,51±0,21 37,97±0,12 37,90±0,33

АлАТ, ед/л 38,12±2,94 39,25±3,21 32,12±1,76

АсАТ, ед/л 37,54±1.59 37,12±1,05 39,70±0,46

Общий белок, г/л 79,72±2,67 83,2±2,39 82,86±2,52

Альбумины, % 36,91±1,42 37,84±1,10 39,19±1,91

а-глобулины, % 19,74±0,70 19,26±0,72 17,82±1,12

Р-глобулины, % 30,52±0,69 29,54±1,14 29,50±0,85

у-глобулшш, % 12,83±1,22 13,35±1,43 13,48±1,00

Так же происходило достоверное изменение щелочного резерва и АлАТ. Щелочной резерв в опытной группе был ниже, чем у здоровых коров на 1,10 %, в контрольной — на 0,81 % (р<0,05). АлАТ в опытной группе была ниже чем у здоровых коров на 24,02 %, в контрольной — на 24,48 % (р<0,05). При лечении и после выздоровления в обеих группах прослеживалась четкая тенденция к увеличению этих показателей до уровня здоровых коров-аналогов.

Ряд изменений при лечении подопытных животных был выявлен в соотношении содержания белка и его фракций (табл. 7). Следует отметить достоверно (р<0,05) низкий уровень общего белка и а-глобулинов у подопытных животных по сравнению с их здоровыми аналогами. После выздоровления содержание общего белка увеличилось в опытной группе на 19,56 % а, а в контрольной — на 21,44 %. При этом увеличение происходило преимущественно за счет глобулиновых фракций при одновременном снижении альбуминов. В опытной группе уровень альбуминов снижался на 17,18 %, в контрольной - на 11,23 %.

2.2.4.4. Влияния Эмекснда на естественную резистентность

Результаты исследования опсонофагоцитарной активности нейтрофилов, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови представлены в табл. 8.

У больных коров наблюдалось достоверное (р<0,01) снижение фагоцитарной активности нейтрофилов до уровня 47,74 % - в опытной группе и 47,43% — в контрольной, относительно здоровых аналогов. В процессе выздоровления подопытных животных изучаемый показатель в опытной и контрольной группах постепенно повышался и к 20-му дню достоверно не отличался от показателей здоровых животных-аналогов.

Лизоцимная активность сыворотки крови у больных коров была ниже, чем у их здоровых аналогов: в опытной группе на 36,77 %, в контрольной, соответственно, на 28,69 %. В процессе выздоровления лизоцимная активность сыворотки крови возрастала и на 20-й день опыта практически не отличалась от показателей здоровых аналогов. Причем в опытной группе увеличение показателя было достоверным (р<0,05).

Таблица 8 — Динамика показателей естественной резистентности

Показатель Группа Здоровые животные

опытная контрольная

М±гп М±т М±га

ФА, % 47,74±0.6** 59,49±1.98 47.43±0,95* 56,87±0,98 59,06±2,7

ФИ, м.т. 3,05±0.07** 4,88±0,2 2,98±0.06*** 4.39±0,17 4,5±0,28

ФЧ, м.т. 6,39±0.16** 8,26±0.29 6.3±0.19* 7.72±0.29 7,62±0,3

БАСК, % 39.7±5.97 46,27±3,12 41,52±4.39 47,02±4.22 46,12±3,92

ЛАСК, % 10,73±0,22* 16,21±0.39 12,1±1.02 16,04±0.58 16,97±0,19

Примечание: в чиашгтте-шказатели больных животных в начале опыта, в знаменателе—на 20-й день опыта; достоверность различий с показателями здоровых животных *р<0 05' **р<0 01 • ***р<0,001.

Аналогичная динамика наблюдалась в изменении бактерицидной активности сыворотки крови. Однако достоверных различий выявлено не было.

2.2.4.5. Влияния Эмексида на про- и антноксндантную активность

сыворотки крови

Результаты исследования общей прооксидантной и антиоксидантной сыворотки крови представлены в табл. 9.

Таблица 9 — Влияние Эмексида на прооксидантную и антиоксидантную _ активность сыворотки крови коров _

Показатель До лечения После лечения Здоровые животные

М±т М±т М±щ

ПОА, усл. ед. 1,77±0,11*** 1,22±0,11 * 0,97±0,02

АОА, усл. ед 3,56±0,14*** 6.98±0.24* 8,05±0,38

КС, % 50,05±4,54*** 17,65±4,54** 12,17±0,77

Примечание : достоверность различии с показателя ми здоровых животных *р<0,05; **р<0,01; ***р<0,001.

У больных острым послеродовым эндометритом коров ПОА сыворотки крови в 1,82 раза превышает контрольное значение (здоровые животные-аналоги), а показатель АОА, напротив, был ниже в 2,26 раза (в обоих случаях р<0,001). Отсюда соотношение ПО А/АО А сыворотки крови у больных в 4,11 раза выше, чем в контроле (р<0,001).

В результате проведенного лечения установлено снижение ПОА сыворотки крови на 31 % по сравнению с исходным значением. АОА сыворотки крови коров повысилась на96,07 %. В обоих случаях изменения были достоверны (р<0,05). Соответственно КС снизился в 2,84 раза, однако остался достоверно высоким по сравнению с контролем (р<0,01). Следует отметить, что ни один из изучаемых показателей после выздоровления так и не достиг уровня показателей здоровых животных-аналогов.

Исследования препарата Эмексид in vitro показали, что независимо от концентрации его в растворе количество хемилюминесцентных импульсов, выпущенных 1 лейкоцитом в течение 20 мин., не изменялось и соответствовало контролю. Препарат не обладает прямым антиоксидантным действием.

2.2.4.6. Экономическая эффективность препарата Эмексид

Экономическую эффективность применения Эмексида при остром послеродовом эндометрите определяли на примере ЗАО «Солнечное» ПУ «Новоро-галевское» Ордынского района Новосибирской области.

Экономическая эффективность в опытной группе составила 50,09 руб. на 1 руб. затрат, в контрольной группе — 16,02 руб. на 1 руб. затрат.

3. ВЫВОДЫ

1. Гинекологические заболевания широко распространены в хозяйствах Новосибирской области, они ежегодно регистрируются у 3,02-52,22 % коров. В структуре гинекологических заболеваний преобладает острый послеродовой эндометрит, на долю которого приходится 41,20-49,86 %.

2. При остром послеродовом эндометрите нами вьщелены ассоциации микроорганизмов (Escherichia coli + Streptococcus pyogenes. Staphylococcus aureus + Streptococcus pyogenes и Proteus vulgaris + Staphylococcus epidermidis), обладающие высокой устойчивостью к широко используемым антибактериальным препаратам.

3. Для лечения острого послеродового эндометрита у коров разработаны препарат Эмексид и схема его применения, обеспечивающая высокую терапевтическую эффективность (95 %) при сокращении сроков лечения до 5,21±0,79 дней.

4. Эмексид обладает высокой антимикробной активностью в отношении референтных штаммов и полевых изолятов микроорганизмов, выделенных при остром послеродовом эндометрите у коров. Минимальная подавляющая концентрация препарата составляет 0,185-0,375 мкг/мл. В составе Эмексида установлено потенцирование действия энрофлоксацина другими компонентами препарата.

5. Эмексид относится к 3 классу веществ по степени опасности по ГОСТ 12.1.007-76 (LD50-495 мг/кг), не оказывает аллергического и сенсибилизирующего действия, не раздражает кожу и слизистые оболочки. Препарат не обладает местным раздражающим действием на слизистую оболочку влагалища и не влияет на гематологические показатели коров при трехкратном увеличении лечебной дозы.

6. Применение Эмексида при остром послеродовом эндометрите благоприятно действует на организм коров. Морфологические, биохимические показатели крови и показатели естественной резистентности не имеют достоверных различий с показателями здоровых коров-аналогов к 20 дню опыта.

7. При остром послеродовом эндометрите наблюдается окислительный стресс. Эмексид, способствует достоверному снижению уровня ПО А на 31,0 % и повышению АОА на 96,07 % у подопытных животных к 20 дню опыта.

8. Экономическая эффективность применения Эмексида составляет 50,09 руб. на 1 рубль затрат, что в 3,13 раза выше, чем в контрольной группе.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для лечения острого послеродового эндометрита у коров рекомендуем применять ветеринарный препарат Эмексид, в дозе 100 мл 1 раз в день до клинического выздоровления животных.

2. Разработаны методические рекомендации «Способ лечения острого послеродового эндометрита у коров с применением комплексного антимикробного препарата Эмексид» (утверждены научно-методическим советом факультета ветеринарной медицины Новосибирского ГАУ, протокол № 43 от «11» апреля 2013 г.).

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Попов, Ю.Г. Послеродовый эндометрит у коров и оценка схем лечения / Ю.Г. Попов, Н.Н. Горб // Вестник НГАУ. - 2011. - № 1. - С. 116-121.

2. Горб, Н.Н. Про- и антиоксидантный статус у коров с послеродовым гнойно-катаральным эндометритом / Н.Н. Горб, Ю.Г. Попов // Ветеринарная патология. - 2012. - № 1. — С. 15-18.

3. Горб, H.H. Токсикологическая характеристика нового препарата для лечения острого послеродового эндометрита у коров / H.H. Горб, JI.B. Макаренко, Ю.Г. Попов, М.Н. Скомарова // Вестник НГАУ. - 2012. - № 2. - С. 75-79.

4. Пат. № 2438668 РФ. Препарат для лечения острых послеродовых эндометритов у коров и способ его применения / Ю.Г. Попов, H.A. Дровосеков, H.H. Горб. Заявитель и патентообладатель ЗАО «Росветфарм»; за-явл. 20.05.10; опубл. 10.01.12; бюл. № 1. - 5 с.

5. Попов, Ю.Г. Лечение послеродового эндометрита у коров / Ю.Г. Попов, H.H. Горб // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: мат. X Сиб. ветеринар, конф. - Новосибирск, 2011. - С. 60-61.

6. Горб, H.H. Эффективность Эмексида при лечении острого послеродового эндометрита у коров / H.H. Горб, Ю.Г. Попов // Инновации молодых ученых аграрных вузов - агропромышленному комплексу Сибирского региона: мат. IX регион, науч.-практ. конф. молодых ученых вузов СФО. - Омск, 2011.— С. 107-108.

7. Горб, H.H. Показатели естественной резистентности, про- и антиок-сидантной активности сыворотки крови коров при лечении острого послеродового эндометрита / H.H. Горб, Ю.Г. Попов // Науч. тр. УГАВМ. - 2011. -Т. XVI.-С. 27-31.

8. Горб, H.H. Антимикробная активность препарата / H.H. Горб И Инновации молодых ученых аграрных вузов Сибири: сб. мат. Х-й межрегион, конф. молодых ученых аграрных вузов СФО Ассоциации «Агрообразование» — Кемерово, 2012. - С. 94-96.

9. Попов, Ю.Г. Распространение акушерско-гинекологических заболеваний у коров в Новосибирской области / Ю.Г. Попов, H.H. Горб // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: мат. XI Сиб. ветеринар, конф. — Новосибирск, 2012. - С. 139-141.

10. Попов, Ю.Г. Терапевтическая и экономическая эффективность препарата Эмексид / Ю.Г. Попов, H.H. Горб // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: мат. XI Сиб. ветеринар, конф. - Новосибирск, 2012. - С. 137-139.

11. Горб, H.H. Некоторые аспекты эффективности лечения острого послеродового эндометрита препаратом Эмексид / H.H. Горб // Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны: мат. междунар. науч. конф. студентов, аспирантов и молодых ученых. - СПб, 2012. - С. 53-55.

12. Горб, H.H. Эмексид - новый препарат для лечения острого послеродового эндометрита у коров / H.H. Горб / Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири: мат. междунар. науч.-практ. конф. - Улан-Удэ, 2013 - Ч. 1. - С. 29-30.

Подписано в печать 22.08.2013 г. Формат 60x84 '/16 Печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ №179 Отпечатано в ООО «Печатное издательство Агро-Сибирь» г. Новосибирск, ул. Никитина 155, тел. (383) 267-19-90, e-mail: agroprint@mail.ru

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Горб, Наталья Николаевна, Новосибирск

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РФ

ФГБОУ ВПО

«Новосибирский государственный аграрный университет»

На правах рукописи

Горб Наталья Николаевна

СМ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

со

СМ СО

СО Диссертация

СО 8

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук, доцент Ю.Г. Попов

Новосибирск - 2013

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ..................................................................................................4

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.......................................................................9

1.1. Распространение острого послеродового эндометрита....................9

1.2. Этиология............................................................................................12

1.3. Патогенез.............................................................................................17

1.4. Профилактика.....................................................................................20

1.5. Лечение................................................................................................23

1.6. Заключение по обзору литературы...................................................35

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ...........................................37

2.1. Материалы и методы исследований........................................37

2.2. Результаты исследований............................................................45

2.2.1. Распространение гинекологических патологий...........................45

2.2.2. Микробиоценоз влагалищно-цервикальной слизи у коров при послеродовом эндометрите..........................................................................54

2.2.3. Доклинические исследования Эмексида.......................................57

2.2.3.1. Антимикробная активность Эмексида in vitro..........................57

2.2.3.2. Острая токсичность Эмексида....................................................59

2.2.3.3. Хроническая токсичность Эмексида..........................................61

2.2.3.4. Аллергенное и сенсибилизирующее действие Эмексида........62

2.2.3.5. Местно-раздражающее действие Эмексида..............................63

2.2.4. Клинические исследования Эмексида...........................................65

2.2.4.1. Разработка оптимальной схемы применения Эмексида..........65

2.2.4.2. Терапевтическая эффективность Эмексида..............................67

2.2.4.3. Изучение влияния Эмексида на морфологические и биохимические показатели крови коров с острым послеродовым эндометритом.................................................................................................70

2.2.4.4. Изучение влияния Эмексида на иммунологические показатели крови ........................................................................................................76

2.2.4.5. Изучение влияния Эмексида на про- и антиоксидантную

активность сыворотки крови........................................................................77

2.2.4.6. Экономическая эффективность препарата Эмексид................78

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ............83

4. ВЫВОДЫ..............................................................................................90

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ...........................................92

6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.................................................................93

ПРИЛОЖЕНИЯ........................................................................................132

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Причины и формы бесплодия коров многообразны, их соотношение в различных хозяйствах и регионах, в различные годы очень варьирует. Однако отмечено значительное преобладание симптоматического бесплодия у коров на почве гинекологических заболеваний. В числе последних лидирующее место занимает острый послеродовой эндометрит (C.B. Шабунин с соавт., 2005; А.Г. Нежданов с соавт., 2005; И.С. Коба, 2006; И.Н. Зюбин с соавт., 2007; В.Ф. Дегай, 2007; В.И. Михалев с соавт., 2008; Е.И. Грибкова, 2011; C.B. Чупрын с соавт., 2012). У переболевших послеродовым эндометритом коров увеличивается срок от отела до плодотворного осеменения, что в конечном итоге приводит к значительному экономическому ущербу отрасли, за счет недополучения приплода и животноводческой продукции (В.П. Иноземцев с соавт., 2000; H.H. Кочнев с соавт., 2002).

Острый послеродовой эндометрит вызывается преимущественно ассоциациями условно-патогенных бактерий, и зачастую осложняется или протекает на фоне вирусных, микозных заболеваний или протозойной инвазии (В.Н. Сюрин с соавт., 1991; Г.В. Небогатиков с соавт., 1998; В.П. Иноземцев с соавт., 2000; H.H. Кочнев с соавт., 2002; О.В. Распутина, М.Н. Шадрина, 2003; А.Г. Нежданов, А.Г. Шахов, 2005; И.С. Коба, 2006; В.П. Дегтярев, К.В. Леонов, 2006; И.Н. Зюбин с соавт., 2007; Л.В. Кралько, 2009; P.M. Васильев, 2009; К.В. Леонов с соавт., 2012; S. LeBlanc et al., 2002; I.M. Sheldon, H. Dobson, 2004; S. Akira et al., 2006; I.M. Sheldon et al., 2006).

дает к более детальному изучению этиопатогенеза острого послеродового эндометрита у коров, разработке, научному обоснованию и испытанию новых комплексных антимикробных препаратов.

Эмексид - оригинальный комплексный препарат для лечения эндометритов у коров, разработанный нами совместно с ЗАО «Росветфарм». В его состав входит антибактериальный компонент из группы фторхинолонов третьего поколения - энрофлоксацин и противопротозойный компонент из группы нитроимидазолов — метронидазол.

Задачи исследований:

1. Изучить распространение акушерско-гинекологических заболеваний в хозяйствах Новосибирской области.

3. Определить токсикологические параметры Эмексида.

Научная новизна. Разработан препарат для лечения острого послеродового эндометрита у коров - Эмексид.

Определены основные токсикологические параметры препарата Эмексид - острая и хроническая токсичность, сенсибилизирующие и аллергенные свойства, влияние на слизистые оболочки и кожные покровы.

Установлена высокая антимикробная активность препарата Эмексид в отношении референтных штаммов и полевых изолятов микрофлоры из матки коров, больных острым послеродовым эндометритом; отмечено потенцирование антимикробного действия энрофлоксацина в составе препарата другими его компонентами.

Дано экспериментальное и клиническое обоснование применения в ветеринарной гинекологической практике препарата Эмексид и определена его терапевтическая эффективность.

Выявлено положительное влияние препарата Эмексид в процессе лечения на морфологические и биохимические показатели крови, естественную резистентность и клинико-физиологическое состояние больных острым послеродовым эндометритом коров.

Научная новизна подтверждена патентом РФ на изобретение №2438668 «Препарат для лечения острых послеродовых эндометритов у коров и способ его применения» от 10 января 2012 г.

Теоретическая и практическая значимость работы. Современными данными дополнена информация о распространении и структуре гинекологических патологий коров в хозяйствах Новосибирской области.

Результаты исследований внедрены в ЗАО «Солнечное» ПУ «Новоро-галевское» Ордынского района Новосибирской области.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на заседаниях Научно-методического совета факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «НГАУ» (Новосибирск, 2009-2013); IX региональной научно-практической конференции молодых ученых вузов Сибирского федерального округа «Инновации молодых ученых аграрных вузов — агропромышленному комплексу Сибирского региона» (Омск, 2011); X и XI Сибирских ветеринарных конференциях «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2011, 2012); конференциях Всероссийского конкурса на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых учебных заведений Минсельхоза России по номинации «Ветеринарные науки» (Омск, 2011; Ставрополь, 2011); X межрегиональной конференции молодых ученых аграрных вузов СФО Ассоциации «Агрообразование» «Инновации молодых ученых аграрных вузов Сибири» (Кемерово, 2012); международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны» (Санкт-Петербург, 2012); международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной медицины Сибири» (Улан-Удэ, 2013).

зультатов исследований, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения, в своей структуре содержит 13 таблиц и иллюстрирована 13 рисунками. Список литературы включает 312 наименований, из них 267 отечественных и 45 зарубежных авторов.

Основные положения, выносимые на защиту:

2. Результаты токсикологического исследования Эмексида.

3. Результаты изучения антимикробной активности Эмексида.

5. Динамика гематологических показателей и показателей естественной резистентности у коров при лечении острого послеродового эндометрита.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Распространение острого послеродового эндометрита

В соответствии с Государственной программой развития сельского хозяйства на 2013-2020 гг. к 2020 году намечается довести производство молока в хозяйствах всех категорий собственности до 38,2 млн. т. В настоящее время этот показатель составляет 32,08 млн. т. (Государственная программа развития ...,2012). Такого быстрого темпа роста можно добиться только при высоком уровне воспроизводства стада. Следует отметить, что в 20042007 гг. в России выход приплода на 100 коров колебался в пределах 76-78 % (Сборник показателей ..., 2008), в настоящее время этот показатель находится на аналогично низком уровне.

Среди основных причин, вызывающих бесплодие коров, называют массовые послеродовые патологии, в частности, острый послеродовой эндометрит (И.С. Коба, 2006; C.B. Сиренко, 2006; И.Н. Зюбин с соавт., 2007; В.И. Михалев с соавт., 2008; A.A. Стекольников, К.В. Племяшов, 2009; Ш.А. Джамалутдинов с соавт., 2009; В. Knutti, 2000).

Многочисленные исследования отечественных и зарубежных авторов указывают на широкий диапазон заболеваемости коров острым послеродовым эндометритом. Данный показатель, в зависимости от технологии содержания, условий кормления, продуктивности, породы животных, уровня зоотехнической и ветеринарно-санитарной работы на фермах, агроклиматических условий региона, года и сезона исследований варьирует в пределах от 7,3 до 90 % (C.B. Шабунин с соавт., 2005; А.Г. Нежданов с соавт., 2005; И.С. Коба, 2006; И.Н. Зюбин с соавт., 2007; В.Ф. Дегай, 2007; М.Н. Лапина с соавт., 2008; В.И. Михалев с соавт., 2008; Е.И. Грибкова, 2011). При этом, несмотря на значительное внимание, которое наука и практика уделяют проблеме, распространение и ущерб от заболевания не только не снижаются, но

и возрастают (В.П. Иноземцев с соавт., 2000; Н.Н. Кочнев с соавт., 2002). Кроме того, эффективность лечения послеродового эндометрита в хозяйствах остается достаточно низкой - 58-74 % (А.А. Жерносенко, 2005).

В странах Европейского Союза острый послеродовой эндометрит регистрируют у 40 % коров, а наносимый им ущерб в расчете на 1 животное достигает 300 евро. При этом заболевании увеличивается период от отела до плодотворного осеменения до 146 дней, тогда как у здоровых он не превышает 128 дней, оплодотворяемость от первого осеменения составляет 49,2 % (у здоровых 61,5 %), а на 1 плодотворное осеменение затрачивается 1,92 доз семени (у здоровых 1,28) (Der Endometritis wirksam ..., 2011).

В Германии острый послеродовой эндометрит регистрируют у 18,037,0 % новотельных коров (М. Pickel et al., 1991; В.-А. Tenhagen et al.,1999; M. Drillich et al., 2002). В Италии и Финляндии наиболее частым заболеванием у коров также называют послеродовой эндометрит (Е. Parmigiani, В. Truszkowska, 1988; М. Heinonen, К. Heinonen, 1989).

В Канаде и США острый послеродовой эндометрит выявляют у 10,020,0 % новотельных коров (М. Overton, J. Fetrow, 2008; J. Dubue et al., 2010). В некоторых хозяйствах США ежегодно переболевает 40 % и более новотельных коров (K.N. Galvao et al., 2009; D.S. Hammon et al., 2006; J.M. Huzzey et al., 2007).

Патологии послеродового периода представляют значительную проблему и в странах ближнего зарубежья.

Гинекологические патологии диагностируют у 10- 90 % коров молочного направления в хозяйствах Украины (В. Мадисон, 2004; Г. Харута, Ю. Ордш, Б. 1васенко, 1997).

В Республике Беларусь бесплодие отмечают у 20,0-27% коров. Острый послеродовой эндометрит регистрируют у 13,2-39,8 % новотельных коров (К.Д. Валюшкин, Е.А. Юшковский, 2002; В.В. Яцина, 2002; Р.Г. Кузьмич, 2009).

В хозяйствах Таджикистана острый послеродовой эндометрит отмечают у 45,0-60,0 % коров, это самая распространенная гинекологическая патология (П. Асоев, 2009; П. Асоев, Т. Салимов, 2010).

Проблема послеродового эндометрита остро стоит в скотоводстве Казахстана (М.Н. Джуланов, 2002).

Неоднозначная ситуация по распространению острого послеродового эндометрита складывается в субъектах Российской Федерации.

В Центрально-Черноземном экономическом районе России заболеваемость эндометритами у коров составляет от 34,4 до 87,7 % (Б.Г. Панков с со-авт.,2001; Н.Г. Мясников, 2011; Д.А. Ерин, В.И. Зимников, 2012), а в отдельных районах достигает 100 % (В.Н. Бочкарев с соавт., 2004).

В хозяйствах Северо-Западного региона заболеваемость коров разными формами эндометритов достигает 92,0 % (H.H. Петров, П.Г. Захаров, 2002; З.Я. Косорлукова, Г.В. Зоткин, 2005; А.Я. Батраков, C.B. Васильев, 2012).

В Южном федеральном округе заболеваемость острым послеродовым эндометритом варьирует от 37,0 % до 70,0 % (В.М. Парахин, 1998; Э.Н. Грига, 2000; Г.М. Фирсов, 2004; В.Т. Ахмадов, 2007; К.П. Грибов, 2011; Л.Г. Войтенко, 2012; В.А. Оробец с соавт., 2012), при этом до 15,0-21,0 % переболевших коров остаются бесплодными (А.Н. Турченко, 2001 ).

Напряженная ситуация по гинекологическим заболеваниям наблюдается в Поволжском федеральном округе. Гинекологические патологии в нем регистрируют у 10,1 - 80,0 % новотельных коров (А.Ф. Колчина, 2008; И.А. Шкуратова, М.В. Ряпосова, 2009; С.П. Ерёмин с соавт., 2012), в том числе послеродовой эндометрит - у 15,7 - 50,5 % (Б.В. Рыжов с соавт., 1996; H.A. Проворова, 2006; М.А. Багрова, 2012).

В Дальневосточном федеральном округе симптоматическое бесплодие отмечают у 70,6 % коров, в том числе из-за эндометритов - у 62,8 %. Наибольшая заболеваемость коров эндометритами наблюдается в послеродовом

периоде - 58,0 % (H.H. Гавриленко, 1988; 2009; H.H. Гавриленко, М.А. Баг-манов, 2008).

Значительно распространены эндометриты в хозяйствах Западной и Восточной Сибири, где в разные годы заболеваемость составляла от 15,0 до 75,0 % (И.Н. Зюбин, 1998; Г.А. Ноздрин, 2000; О.В. Распутина, М.Н. Шадрина, 2002; Е.Ю. Смертина, 2007).

В хозяйствах Новосибирской области заболеваемость коров острым послеродовым эндометритом варьирует в пределах от 2,8 до 24,3 % (Е.Ю. Смертина, 2007; М.Н. Скомарова с соавт., 2010). Число коров с гинекологическими заболеваниями в период массовых отелов в Новосибирской области достигает 80,0-90,0 %, среди них острый послеродовой эндометрит составляет 65 % (О.В. Распутина, М.Н. Шадрина, 2001; Е.Ю. Смертина с соавт., 2001).

Несмотря на значительное внимание, которое наука и практика уделяет проблеме, распространение и ущерб от заболевания не только не сокращаются, но и возрастают (В.П. Иноземцев с соавт., 2000; H.H. Кочнев с соавт., 2002).

1.2. Этиология

По вопросам этиологии острого послеродового эндометрита не существует единого мнения. Ведущую роль в возникновении заболевания играет сочетанное влияние трех основных факторов: а) неблагоприятные условия существования животных, б) понижение резистентности организма, в) травмы род�

Информация о работе

Горб, Наталья Николаевна
кандидата ветеринарных наук
Новосибирск, 2013
ВАК 06.02.03

Диссертация

Фармако-токсикологические свойства препарата эмексид и его эффективность при послеродовом эндометрите у коров - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы