Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Фармако-токсикологические свойства новой композиции ДАФС-25 + полизон

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармако-токсикологические свойства новой композиции ДАФС-25 + полизон"

ТОЛМАЧЁВ ПАВЕЛ ВЛАДИМИРОВИЧ

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НОВОЙ КОМПОЗИЦИИ ДАФС-25 + ПОЛИЗОН

06.02.03 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

31 ОКГ 2013

Краснодар-2013

005536757

005536757

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный аграрный университет»

Научный руководитель доктор ветеринарных наук, доцент

Кильметова Инна Робертовна Научный консультант доктор технических наук

Струнин Борис Павлович

Официальные оппоненты доктор ветеринарных наук, ведущий

научный сотрудник лаборатории фармакологии ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии Кузьминова Елена Васильевна

доцент кафедры фармакологии и токсикологии имени И.Е.Мозгова ФГБОУ ВПО МГАВМиБ, кандидат биологических наук Тухфатова Регина Фановна

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет имени Н. И. Вавилова»

Защита состоится ¡¿¿и. 2013 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 при ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» по адресу: 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13:

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» (350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13).

Автореферат размещён на официальном сайте ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» - http://www.kubsau.ru «...»...................2013 г. и официальном сайте ВАК - http://www.vak.ed.gov.ru

Автореферат разослан «_»_2013 г.

Учёный секретарь /ъ^-

диссертационного совета

И.А. Родин

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Непременное требование к животноводческим комплексам - их высокая экономичность. Однако, она возможна только, если комплексы имеют здоровое поголовье, а содержание и кормление животных соответствует их нормальной жизнедеятельности. В условиях промышленного животноводства особое значение имеют проблемы профилактики незаразных заболеваний животных (Мисаилов В.Д., 1996; Бузлама B.C. и др., 1997-а, б; Константинов В.А., 1999; Папуниди К.Х. и др., 2002; Антипов В.А. и др., 2004; 2010; Киселев С.Ф. и др., 2004; Мирошниченко Е.Б., 2008; Юсупов P.C., 2008; Родионова Т.Н., 2010; Савинков A.B., 2012).

Одним из важнейших факторов, способствующих возникновению различных заболеваний, является неравномерное распределение микро- и макроэлементов в окружающей среде, в частности, селена (Авцын А.П. и др., 1991; Самохин В.Т., 1997; Сидельникова В.Д., 1999; Давлетшина Д.Ф., 2000; Блин-нохватов А.Ф., 2001; Борисов В.М. и др., 2001; Старова Н.В., 2001; Ашинков В. и др., 2005; Голубкина H.A., 2006; Сидоркин В.А. и др., 2008).

В настоящее время имеется широкий спектр современных селенооргани-ческих препаратов и кормовых добавок, таких как селенолин, «Сел-Плекс», се-ленметионин, селебен, седимин, карсел, селенопиран, селедант, эктраселен, ан-тавин, ДАФС-25 и другие (Холев С.А., 2000; Самохин В.Т., 2003; Лемешева М., 2006; Рубцов В.В., Алексеева С.А., 2006; Шабунин C.B. и др., 2007, 2008; Суханова С. и др., 2008; Тарасов Н.В., 2009; Родионова Т.Н., Антипов В.А., Лазарев В.Г., 2010; Трошина Т.А., 2010; Строгов В.В., Родионова Т.Н., Гринь В.А., 2011; Насибов М.Н. и др., 2011 и др.).

В последнее время интенсивно расширяется выпуск биологически активных органико-минеральных композиций различной направленности для лечения патологических процессов, повышения естественной резистентности, а также для улучшения продуктивности животных. Применение комбикормов с содержанием преимущественно растительных белков увеличивает дефицит незаменимых аминокислот, снижает их доступность в первую очередь, метионина и лизина (Пивовар Л.М., 1989; Лебедев П.А., 1996; Константинов В.А. и др., 1999; Василенко Е.Г. и др., 2003; Лемешева М., 2006; Портиов Д.В., 2009; Тарасов Н.В., 2009; Кулешов К.А., 2010; Савкова М.Г., 2012).

На отечественном рынке в настоящее время представлен синтетический аналог метионина - препарат Полизон. Ранее были проведены комплексные исследования вышеуказанного препарата, а также его композиций с тиамина бромидом и ретинола ацетатом, сочетающие несколько видов биологической ат-кивности (Баранова И.А. и др., 2004-а,б; Сафина и др., 2004; Исмагилова А.Ф. и др., 2006; Тухватова Р.Ф. и др., 2005, 2006; Файзуллина Л.Р., 2006; Каримов P.P., 2005; 2007; Фенченко Н.Г. и др., 2005; 2007; Фарукшина Т.В., 2009; Константинов В.А., 2010 и др.).

В условиях промышленного животноводства важное значение имеет разработка и внедрение препаратов для предупреждения и ликвидации болезней, связанных с недостатком селена, а также средств, применяемых для повышения продуктивности животных.

Цель и задачи исследования. Цель данной работы - изучить токсико-фармакологические свойства новой композиции ДАФС-25 + Полизон и её применение в животноводстве для улучшения сохранности и продуктивности сельскохозяйственных животных.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- изучить особенности кислотного гидролиза препарата Полизон;

- дать токсикометрическую оценку композиции ДАФС-25 + Полизон (острая и субхроническая токсичность, влияние на центральную нервную систему, функцию почек, массу внутренних органов) для мышей и крыс;

- изучить антиульцерогенную активность композиции ДЛФС-25 + Полизон;

- изучить влияние композиции ДАФС-25 + Полизон на функциональное состояние печени;

- дать оценку противовоспалительного действия композиции ДАФС-25 + Полизон;

- изучить влияние композиции ДАФС-25 + Полизон на гематологические и биохимические показатели крови;

- определить ростостимулирующее действие композиции ДАФС-25 + Полизон;

- определить экономическую эффективность применения композиции ДАФС-25 + Полизон в животноводстве.

Научная новизна. Впервые проведено исследование широкого комплекса токсикологических показателей композиции ДАФС-25 + Полизон, позволившее выявить степень безопасности его применения.

Впервые изучены токсико-фармакологические свойства и противоязвенная активность композиции ДАФС-25 + Полизон, её влияние на массу внутренних органов, на функциональное состояние печени, выявлена биологическая активность композиции в отношении процесса воспаления, биохимических показателей крови и, влияние на прирост массы тела и сохранность телят. Композиция ДАФС-25 + Полизон имеет высокие показатели на основании доклинических и производственных исследований.

Практическая значимость работы. Выполненные исследования и полученные результаты позволили предложить композицию ДАФС-25+Полизон как конкурентноспособный препарат для повышения продуктивности сельскохозяйственных животных. Предложенные дозы не вызывают отрицательного действия и способствуют стимуляции роста молодняка крупного рогатого скота.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на: Международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию Башкирского ГАУ, 30 сентября-01 октября 2010 г. «Состояние, проблемы и перспективы развития АПК» (Уфа, 2010), на Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани «Актуальные проблемы современной ветеринарии» (Краснодар, 2011), Международной научно-практической конференции, посвященной 121 годовщине создания Саратовского научно-исследовательского ветеринарного института «От теории - к практике: вопросы современной

ветеринарии, биотехнологии и медицины» (Саратов, 2011), Международной научно-практической конференции б рамках XXII Международной специализированной выставки «Агрокомплекс-2012», 13-15 марта 2012 г. «Инновационному развитию агропромышленного комплекса - научное обеспечение» (Уфа, 2012).

Публикации. Основные положения диссертации изложены в 9 научных статьях, в том числе пять публикаций - в рецензируемых научных журналах: «Вестник Башкирского государственного аграрного университета», «Вестник ветеринарии» и «Вестник Казанского технологического университета».

Основные положения . выносимые на защиту7:

- токсикологическая оценка композиции ДАФС-25 + Полизон;

- степень безвредности композиции ДАФС-25 + Полизон;

- эффективность введения композиции ДАФС-25 + Полизон и её влияние на рост и развитие молодняка крупного рогатого скота.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, собственных исследования, заключения, выводов, практических предложений, библиографического списка. Список использованной литературы включает 284 источника, в том числе 58 -зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 27 таблицами и 8 рисунками.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнялась с 2009 по 2012 гг. на кафедре внутренних незаразных болезней, клинической диагностики и фармакологии ФГБОУ ВПО «Башкирский государственный аграрный университет», в Институте органической химии Уфимского научного центра РАН, в Башкирской научно-производственной ветеринарной лаборатории г.Уфы, ветеринарной лаборатории Давлекановского района Республики Башкортостан, в условиях производства ООО «Аграрные традиции» Давлекановского района Республики Башкортостан в рамках темы «Разработка и применение новых фармакологических средств и методов для улучшения роста, продуктивности и резистентности организма сельскохозяйственных животных и птиц в условиях Республики Башкортостан», № госрегистрации 0203222520331.

Основной объект исследований - композиция, состоящая из фосфорнокислой соли 2-амино-4метилтио-(8-оксо-3-имино)-масляной кислоты (Полизон), производителем которой является ООО «Подивит» (г. Уфа) и диацетофе-нонилселемида (ДАФС-25), который производит ЗАО «Сульфат»(г. Саратов).

Всего в лабораторных и экспериментальных опытах было использовано: белых мышей - 181.; белых крыс - 276; телят чёрно-пёстрой породы - 72.

Лабораторные животные содержались в одинаковых зоогигиенических условиях вивария. Кормление животных проводили согласно суточной потребности лабораторных животных (Санпин. Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев) М.:Закон, 1999).

Общетоксические свойства композиции ДАФС-25 + Полизон были изучены и определены в соответствии с «Методическими рекомендациями по ток-сикоэкологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветеринарии», одобренных секцией отделения ветеринарной медицины РАСХН (1998).

Опыты проводили с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите животных, используемых для экспериментальных целей (г. Страсбург, Франция 1986; Хабриев Р.У., 2005).

Перед началом опыта животных взвешивали и рассчитывали количество композиции для каждого индивидуально в миллиграммах на 1 кг массы. На каждую группу брали не менее б голов, подобранных по принципу аналогов. Исследуемую композицию вводили перорально.

Параметры острой токсичности композиции ДАФС-25 + Полизон вычислялись с помощью пробит-анализа по методу Литчфильда и Уилкоксона (Беленький M.JI., 1963).

Изучение субхронической токсичности проводили на белых крысах в течение 30 дней.

Морфологические исследования крови проводили на приборе Нета-Screen 13, а также общепринятыми методами (Воронин Е.С., 2003).

Содержание гемоглобина определяли с помощью гемометра по Сали.

Подсчёт эритроцитов и лейкоцитов крови проводили по общепринятой методике, используя счётную камеру с сеткой Горяева.

Выведение лейкограммы осуществляли с помощью окрашивания мазков по Романовскому-Гимзы под микроскопом.

Биохимические исследования крови заключались в определении в сыворотке крови общего белка, общего кальция, неорганического фосфора, глюкозы, билирубина, альбуминов, а-, р- и у-глобулинов, аланин-аминотрансферазы (АлАТ), аспартат-аминотранферазы (АсАТ) (Антонов Б.И., 1991; Воронин Е.С., 2003).

Коэффициент де Ритиса определяли отношением АсАТ к АлАТ.

Интенсивность процесса перекисного окисления липидов определяли по взаимодействию свободного малонового диальдегида (МДА) с тиобарбитуро-вой кислотой.

Исследование влияния композиции ДАФС-25 + Полизон на изменение массы внутренних органов изучали на беспородных белых крысах со средней живой массой 190-240 г. На 10-е, 20-е и 30-е сутки животных декапитировали под наркозом и производили взвешивание внутренних органов (Хабриев Р.У., 2005).

Влияние композиции ДАФС-25 + Полизон на центральную нервную систему проводили, исследуя ориентировочно-двигательную реакцию крыс.

Для изучения влияния ДАФС-25 + Полизон на функцию почек у крыс исследуемую композицию вводили внутрь в трёх дозах: 1,5; 2,0 и 2,5 мг/кг в течение 30 дней. Диурез определяли в течение трёх часов на 10-й, 20-й и 30-й дни эксперимента (Хабриев Р.У., 2005).

Противоязвенную активность композиции ДАФС-25 + Полизон проводили на моделях аспириновых и индометациновых язв по методике Аничкова C.B. и Заводской И.С. (1965).

Противовоспалительная активность композиции была изучена на моделях трипсинового, формалинового, каррагенинового, серотонинового воспаления и воспаления, вызванного агаром Дифко по общепринятой методике (Три-нус Ф.П., 1976).

Производственные опыт проводился на бычках чёрно-пёстрой породы с 1- до 6-месячного возраста. В ходе экспериментов и научно-производственных опытов учитывали сохранность поголовья и анализ причин падежа. Кормление телят проводили согласно нормам и рационам кормления сельскохозяйственных животных (Калашников А.П., 1985).

Для оценки влияния композиции ДАФС-25 + Полизон на прирост молодняка крупного рогатого скота проводили ежемесячное взвешивание телят опытных и контрольной группы на электронных весах. Определяли абсолютный, относительный и среднесуточный прирост (Изилов Ю.С., 2009).

Экономическая эффективность устанавливалась по «Методике определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий» (Ветеринарное законодательство, 2000).

Результаты проведённых исследований обрабатывали статистически с применением метода вариационной статистики и проверкой достоверности результатов с использованием уровня значимости и критерия Стьюдента (Р). Достоверность различий оценивали при Р < 0,05 (ГОСТ 11.004-74; Лакин Г.Ф., 1990).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Особенности кислотного гидролиза препарата Полизон

С помощью метода рентгеноструктурного анализа определена химическая структура фосфорнокислой и солянокислой соли Полизон. Показано, что указанные соли гидролизуются с образованием различных соединений.

С целью разработки надёжных методов аналитического контроля производных метионина целесообразно изучить реакции взаимодействия этих продуктов со вспомогательными хромоформными компонентами.

2-амино-4-(метилтио)-бутановая кислота реагирует в водно-щелочной среде с фенилизотиоцианатами (ФИТЦ), образуя 4-(метилтио)-2[[(фениламино)-карбонотиоил]-амино]-бутановоую кислоту. Нагревание последней в солянокислой среде приводит к циклизации с образованием тетра-гидро-5-[2-(метилтио)-этил]-3-фенил-2-тионо-4Н-имидазол-4-она. Соединения обладают хромоформными свойствами, что позволяет использовать перечисленные реакции в аналитической химии для количественного анализа произ-

водных метионина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Однако в случаях, когда аминокислота дополнительно содержит какие-либо активные группы упомянутые выше реакции могут сопровождаться протеканием побочных процессов, затрагивающих эти группы. С целью моделирования возможных вариантов был синтезирован ряд производных аминокислоты общей формулы

СН3— X— СН2—СН2— СН —СООН ЫН2

где X = — Б — метионин*, - 8О - оксиметионин - 8СЬ - диоксиметионин -8(0)№1 - Полизон.

* В данной работе использовался коммерческий образец Е)Х-метионина с содержанием основного вещества не менее 99 %.

Полученные соединения реагируют с ФИТЦ в водно-щелочной среде (КОН) с образованием калиевых солей соответствующих 4-(метил-Х)-2-[[(фениламино)-карбонотиоил]-амино]-бутановых кислот - производных фе-нилтиомочевины:

СНзХСН2СН2СНСООК + г^]-Ы=С = 3 СН3ХСН2СН2СНСООК

где X = — Б — метионин, — ЗО — оксиметионин — БОг — сульфооксиметионин - 8(0)КН - Полизон.

Таблица 1 Спектральные характеристики ЯМР 13С производных метионина

производные фенил-тиоизо-цианата 6, м.д. / '.Ген, Гц 8(Р1г), м.д. / '1сн, Гц

с5 с4 с3 с2 С1 С(Э) Со Г 4— г11 сР

метионин 14.9 138.9 30.2 139.7 31.7 131.3 59.8 143.4 178.2 179.5 137.4 126.0 161.8 130.1 162.5 127.4 161.8

оксиметионин 37.1 139.8 49.7 139.8 25.6 129.8 59.1 141.2 177.2 179.8 137.5 126.2 160.9 130.1 163.0 127.6 162.5

сульфооксиметионин 40.1 139.4 51.0 136.4 25.2 132.4 58.6 143.7 176.8 179.9 137.4 126.0 161.8 130.1 162.5 127.5 163.3

полизон 41.6 139.7 53.0 137.1 26.3 132.3 58.6 142.6 177.0 179.9 137.5 126.1 162.5 130.1 162.5 127.6 162.5

3.2. Токсикологическая оценка композиции ДАФС-25 + Полпзон 3.2.1. Острая токсичность композицииДАФС-25 + Полигон

В результате проведённого скрининга было выявлено наиболее эффективное соотношение исследуемой композиции, состоящей из ДАФС-25 и Полизона. Наиболее эффективным оказалось соотношение ДАФС-25 и Полизона -1:3 (1 мг ДАФС-25 - 3 мг Полизона).

Параметры острой токсичности композиции ДАФС-25 + Полизон определяли на белых беспородных мышах. Исследуемую композицию задавали внутрь однократно индивидуально по 0,3 мл на животное в дозах от 200 мг/кг до 1000 мг/кг. Токсическое действие композиции ДАФС-25 + Полизон оценивали по срокам гибели, числу павших животных и по состоянию и поведению животных.

Среднесмертельная доза (ЬВ_<;о) композиции ДАФС-25 + Полизон составила для белых мышей 800 мг/кг (500^1280), 1Т>84 - 1751 мг/кг и 1Т>16 - 301 мг/кг.

Таким образом, в результате проведённых исследований нами установлено, что согласно ГОСТ 12.1.00.7 - 76 композиция ДАФС-25 + Полизон относится к III классу опасности (умеренно опасные вещества).

3.2.2. Субхроническая токсичность композиции ДАФС-25 + Полизон

Эксперименты по изучению субхронической токсичности композиции ДАФС-25 + Полизон проводили на белых беспородных крысах в течение 30 дней.

Животные были подобраны со средней живой массой 190-240 г, одного возраста, по 18 голов в каждой группе. Разброс в группах по исходной массе не превышал 10%. Животные содержались в стандартных условиях вивария, имея свободный доступ к воде и пище. В течение эксперимента за всеми животными велись наблюдения: учитывали общее состояние, потребление корма и воды, двигательные реакции и особенности поведения.

Для изучения субхронической токсичности нами были сформированы 4 группы из белых беспородных крыс - опытные группы животных, которым пе-рорально задавали композицию ДАФС-25 + Полизон в дозах 1,5, 2,0 и 2,5 мг/кг (1-я, 2-я и 3-я группа, соответственно) и интактная (4-я - контроль).

При исследовании вДиянйя композиции ДАФС-25 + Полизон на показатели крови нами установлено, что количество эритроцитов на 30-е сутки эксперимента в группах, получавших композицию ДАФС-25 + Полизон, было на 1618 % ниже, чем в контроле. Подобная тенденция наблюдалась и по показателям лейкоцитов.

Уровень гемоглобина в группах животных, которым задавали композицию, увеличивался в среднем на 9,6-11%, по сравнению с контролем. Однако, это повышение было в пределах физиологической нормы, характерной для данного вида животных.

Таблица 2 Содержание глюкозы и общего белка в сыворотке крови крыс при применении композиции ДАФС-25 + Полизон (п=6)

Показатели Время исследований, сут. Группы животных

1 -я группа 2-я группа 3-я группа контроль

Глюкоза, ммоль/л 10-е 5,10±,0,27 5,15±,037 5,0±,0,1 4,80±0,27

20-е 5,2 0±,0,24 5,30±0,18 5,07±,0,6 5,06±0,18

30-е 5,31±,0,17 5,52±0,17 5,10±,0,1 5,15±0,27

Общий белок, г/% 10-е 7,74±0,61* 7,89±0,56* 7,65±0,2* 6,29±3,68

20-е 7,56±0,52** 7,74±0,2* 7,61±0,3** 6,88±2,72

30-е 7,46±0,47 ° 7,25±0,9 ° 7,34±1,07 8,35±4,06

Примечание: * —Р<0,01;

° - Р<0,02; **- Р<0,05.

Для оценки влияния композиции ДАФС-25 + Полизон на биохимические показатели крови телят проведены исследования на определение содержания глюкозы и общего белка. Результаты исследования представлены в таблице 1.

Как видно из таблицы 2, в опытных группах, получавших композицию, количество глюкозы на 10-е сутки эксперимента увеличилось в среднем на 7%, по сравнению с контролем. На 30-е сутки достоверной разницы в опытных и контрольных группах не наблюдалось.

В опытных группах на 10-й и 20-й день эксперимента достоверно увеличилось содержание общего белка по сравнению с контролем (Р<0,01, Р<0,05). Так, на 20-й день опытов его содержание составляло 7,56±0,52 г % (1-я группа), 7,74±0,2 г % (2-я группа), 7,61±0,3 г % (3-я группа) и 6,88±2,72 г % (контроль). На 30-е сутки опытов количество общего белка в контроле было выше, чем в опытных группах и составляло, соответственно 8,35±4,06 г %, 7,46±0,47 г % (1-я группа), 7,25±0,9 г % (2-я группа) и 7,34±1,07 г % (3-я группа).

Таким образом, данные опыта показывают, что при поступлении композиции ДАФС-25 + Полизон в дозе 1,5, 2,0 и 2,5 мг/кг в течение 30 дней не изменяются гематологические и биохимические показатели крови у крыс.

Для учёта прироста живой массы и определения массы отдельных органов на 10-е, 20-е и 30-е сутки проводили взвешивание животных.

Так, на 10-й день живая масса крыс, получавших композицию ДАФС-25 + Полизон в дозе 2 мг/кг, составляла 244,0±4,65 г, а в контроле - 191,6±4,10 г; на 20-й день - 246,6±4,69 г и 193,5±4,02 г, на 30-й день - 249,1±4,б4 г и 196,6±4,13 г, соответственно (Р<0,001).

Масса сердца в опытных группах оказалась ниже, в среднем, на 6,9% (10-е сутки), 8,2 % (20-е сутки) и 3,1 % (30-е сутки), чем в контрольной группе.

Такая же тенденция прослеживалась в отношении лёгких и печени.

Масса селезёнки и почек, наоборот, во все сроки в опытных группах была выше контроля, в среднем, на 4,6% и 12,8%, соответственно.

В результате проведенных исследований установлено, что при даче композиции ДАФС-25 + Полизон в дозе 2 мг/кг, масса тела крыс была на 27,3% выше, чем в контроле на 10-й день, на 27,4% - на 20-й день и на 26,7% - на 30-й день, соответственно.

При оценке влияния композиции ДАФС-25 + Полизон на центральную нервную систему регистрировалось число вставаний на задние лапы (вертикальная составляющая ориентировочной реакции), числа пересечённых квадратов, а также числа заглядываний в отверстия в полу (норковое поведение, отражающее исследовательскую активность) за 3 минуты наблюдения.

Установлено, что дача композиции ДАФС-25 + Полизон в дозе 2 мг/кг в течение 30 дней не оказывает отрицательного влияния в поведении крыс.

О функциональном состоянии почек судили по величине диуреза при водной нагрузке.

За день до опыта животные получали перорально воду из расчёта 5 мл на 100 г массы тела, затем их помещали в индивидуальные мочесборники. Диурез определяли в течение трёх часов на 10-й, 20-й и 30-й дни эксперимента.

В течение всего эксперимента во всех группах моча была светло-жёлтого цвета, прозрачная, без примесей и резкого специфического запаха. Акты мочеиспускания были произвольными и производились в естественной позе

Диурез у опытных животных, получавших композицию ДАФС-25 + Полизон в течение 30 дней введения, аналогичен таковому у контрольных, что позволяет сделать вывод об отсутствии влияния композиции ДАФС-25 + Полизон на функцию почек.

3.2.3. Влияние композиции ДАФС-25 + Полизон на функциональное состояние печени

Для изучения влияния композиции ДАФС-25 + Полизон на функциональное состояние печени мы определяли активность ферментов переаминирования - аланин-аминотрансферазы (АЛТ), аспартат-аминотранферазы (ACT) и билирубина. Коэффициент де Ритиса определяли отношением ACT к AJIT. Интенсивность процесса перекисного окисления липидов определяли по взаимодействию свободного малонового диальдегида (МДА) с тиобарбитуровой кислотой.

В клинической практике широко применяется одновременное определение активности ACT и АЛТ, так как оно несёт больше информации о локализации и глубине поражения, активности патологического процесса.

В соответствии с разработанной нами схемой опыта, 1-я группа служила контролем (интактные животные); крысам 2-й группы вводили композицию ДАФС-25 + Полизон ( 2 мг/кг); в 3-й группе задавали композицию Селплекс + Метионин (2 мг/кг), в 4-й - препарат Карсил (12 мг/кг).

При оценке активности ферментов нами установлено, что на 10-й, 20-й и 30-й день опыта уровень ACT и АЛТ находился в пределах физиологической нормы во всех группах.

Коэффициент де Ритиса составлял: в группе, где вводили композицию ДАФС-25 + Полизон - 1,29±0,06 (10-й день эксперимента), 1,11±0,08 (20-й день эксперимента) и 1,26±0,09 (30-й день эксперимента), в контроле - 1,30±0,23 (10-й день), 1,40±0,06 (20-й день) и 1,29±0,13 (30-й день).

Наибольшее увеличение количества билирубина наблюдалось у крыс опытных групп (ДАФС-25 + Полизон и Карсил) на 20-й и 30-й дни эксперимента. Так, на 30-й день эксперимента в контрольной группе количество билирубина составило 3,70±0,17 мкМ/л, в группе, где задавалась композиция ДАФС-25+Полизон - 4,40±0,51 мкМ/л, 4,0±0,51 мкМ/л в группе, где вводилась композиция Селплекс + Метионин.

Процессы перекисного окисления липидов характерны для всех нормальных клеток и тканей. Увеличение содержания МДА указывает на степень активации интенсивности ПОЛ. Композиция ДАФС-25 + Полизон снижает интенсивность течения процессов перекисного окисления липидов в организме крыс, что проявилось снижением концентрации МДА. Показатели МДА на 10-й день опыта был одинаков во всех группах и составляли 3,3±0,61 мкМ/л (контроль), 3,27±0,57 мкМ/л (ДАФС-25 + Полизон) и 3,3±0,32 мкМ/л (Селплекс + Метионин). На 30-й день эксперимента уровень МДА составлял 4,25±0,37 мкМ/л (контроль), 3,22±0,62 мкМ/л (ДАФС-25 + Полизон) и 4,8±0,43 мкМ/л (Селплекс + Метионин).

Проведёнными исследованиями установлено, что композиция ДАФС-25 + Полизон не оказывала отрицательного влияния на функциональное состояние печени крыс (уровень ферментов ACT и АЛТ, билирубина, уровень МДА сыворотки крови) при 30-дневном введении внутрь.

3.2.4. Антиульцерогенное действие композиции ДАФС-25 + Полизон

Причинами возникновения язвенной болезни являются применение фармакологических препаратов (нестероидные противовоспалительные препараты), инфицирование различными возбудителями, нарушение секреции, промышленные стрессы.

Для исследования противоязвенной активности композиции ДАФС-25 + Полизон на модели острой язвы, вызванной ацетилсалициловой кислотой, были подобраны крысы массой 200-220 г. Были сформированы 5 групп по б животных в каждой. За сутки до эксперимента животные были лишены еды. Острые язвы вызывали пероральным двукратным введением ацетилсалициловой кислоты в дозе 150 мг/кг: Изучаемая композиция и препараты сравнения вводились за час до воспроизведения язв. Через сутки у наркотизированных животных извлекали желудки и подсчитывали количество язв, отмечая характер слизистой оболочки желудка.

Как видно из таблицы 3, высокая противоязвенная активность наблюдалась в тех группах, где животным вводили композицию ДАФС-25 + Полизон и ОМЕЗ и составляла 2,13 и 2,69, соответственно. При введении соединений ДАФС-25 и Полизон уровень противоязвенной активности составлял 1,83 и 0,98, соответственно.

Таблица 3 Влияние композиции ДАФС-25 + Полизон па развитие экспериментальной язвы желудка, вызванной ацетилсалициловой кислотой

№ п/п Наименование соединения Количество жив-х Доза, мг/кг Количество деструкций СОЖ Индекс Паулеса Противоязвенная активность Критерий достоверности

1 ДАФС-25 6 2 10,3 ± 0,85 10,3 1,83 Р<0,001

2 Полизон б 2 19,17 ± 1,19 19,17 0,98 Р<0,001 Р<0,001

3 ДАФС-25 + Полизон 6 2 8,67 ± 0,85 8,67 2,13 Р<0,001

4 ОМЕЗ б 20 7,0 ±0,68 7,00 2,69 Р<0,001

5 Контроль 6 - 18,83 ± 1,36 18,83 - -

В группе животных, получавших композицию ДАФС-25 + Полизон, наблюдались незначительные мелкоточечные кровоизлияния и слабая гиперемия в слизистой оболочке желудка, тогда как в группах, где применяли отдельно ДАФС-25 и Полизон, слизистая оболочка была гиперемирована и отёчна с мелкоточечными язвами. В контрольной группе встречались полосовидные язвы, лежащие в складках, длиной до 4-5 мм, и множество мелкоточечных и точечных (1-2мм) язв.

Таким образом, в результате проведённых опытов установлено, что в группе, где использовалась композиция ДАФС-25 + Полизон, способность к яз-вообразованию ниже по сравнению с группами, где применялись отдельно ДАФС-25 и Полизон. Уровень противоязвенной активности составлял больше 2, что позволяет сделать вывод о том, что исследуемая композиция ДАФС-25 + Полизон обладает антиульцерогенными свойствами при применении ацетилсалициловой кислоты.

3.2.5. Противовоспалительное действие композиции ДАФС-25 + Полизон

Исследование проведено в весенний период в одинаковом диапазоне температур на беспородных белых мышах массой 20-24 г. Для испытания была взята доза композиции ДАФС-25 + Полизон 2 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали ортофен в дозе 8 мг/кг. Исследуемая композиция ДАФС-25 + Полизон и ортофен вводились внутрижелудочно по 0,3 мл на животное.

Острое воспаление вызывали субплантарным введением в правую заднюю лапку 0,05 мл 0,25% раствора трипсина; 0,05мл 0,1% раствора формалина; 0,05мл 0,01% раствора серотонина; 0,05 мл 1% раствора каррагенина и 0,05мл 1% раствора агара Дифко.

Выраженность воспалительной реакции оценивали через 3 часа после индукции воспаления по изменению объема лапы путем взвешивания отрезанных контрольных и опытных лап.

Исследуемые вещества вводили зондом в желудок 3 раза (первый раз до введения флогогена, затем дважды: через час и через два часа).

Выраженность отёка на модели трипсинового воспаления в группе животных, где задавалась композиция ДАФС-25 + Полизон, на 24,7% меньше, чем в группе, где препаратом сравнения служил ортофен.

При изучении антифлогистического действия композиции ДАФС-25 + Полизон на модели формалинового воспаления выраженность отёка в группе, где исследовали композицию ДАФС-25 + Полизон, на 2,36% меньше, чем в группе, где использовали ортофен и на 4% меньше, чем в контрольной группе.

Выраженность угнетения воспаления, вызванного агаром Дифко, составила в группе, где применяли ортофен, составила 16,5 %, тогда как в группе, где применяли композицию ДАФС-25 + Полизон - 25,04 %.

При изучении антифлогистического действия композиции ДАФС-25 + Полизон на модели каррагенинового воспаления (таблица 4) выраженность отёка в группе, где применяли композицию ДАФС-25+ Полизон, составляла 32,65±3,09 % , в группе, где применяли ортофен - 44,0±4,99 %, а в контрольной группе - 87,3±2,60 % (Р<0,001). Выраженность угнетения воспаления - 57,3% (ДАФС-25 + Полизон) и 46,9% (ортофен).

Таблица 4 Изучение антифлогистического действия композиции ДАФС-25 + Полизон на модели каррагенинового воспаления

Группа Доза, мг/кг Кол-во животных Шол-ПЬд % выраженности отёка % угнетения воспаления

ДАФС-25 + Полизон 2 7 44,5 32,65±3,09* 57,3

Ортофен 8 7 55,3 44,0±4,99* 46,9

Контроль - 7 100,7 87,3±2,60 -

Примечание: * - Р<0,001.

Таким образом, проведенные исследования показали, что композиция ДАФС-25 + Полизон в дозе 2 мг/кг при пероралыюм введении мышам обладает противовоспалительным эффектом на моделях острых отеков, вызванных трипсином, формалином, серотонином, каррагенином и агаром Дифко. Вполне вероятно, это связано с тем, что в исследуемой дозе при данном соотношении композиция уменьшает капиллярную проницаемость.

3.3. Применение композиции ДАФС-25 + Полизон в ветеринарии

3.3.1. Влияние композиции ДАФС-25 + Полигон на показатели крови у телят

Изучение эффективности новой композиции ДАФС-25 + Полизон проведены в условиях производства на телятах чёрно-пёстрой породы. В ходе эксперимента проводились исследования морфологических и биохимических показателей крови.

Основной этап опыта проводился в течение 5 месяцев по следующей схеме: животным 1-й группы задавали композицию ДАФС-25 + Полизон в дозе 2 мг/кг (опыт), 2-я группа служила контролем.

Так, к концу опыта у 6-месячных у телят, в рацион которых добавляли композицию ДАФС-25 + Полизон, количество эритроцитов составляло 6,9 ± 0,08 х Ю12/л, тогда как в контроле - 6,5 ± 0,1 х 1012/л; количество лейкоцитов составило в опытной группе 7,0 ± 0,17 х 109/л и 7,0 ± 0,23 х 10% в контроле; уровень гемоглобина в опытной группе составил 102,6 ±0,17 г/л и 100,0 ±0,13 г/л в контроле.

Количество общего белка в сыворотке крови повысилось до 8,2 ±0,15 г% в опытной группе. Содержание общего кальция составило 11,6 ± 0,13 мг%, а неорганического фосфора - 6,1 ± 0,16 мг%. Уровень общего белка, общего кальция и неорганического фосфора в контроле составил 7,6 ±0,17 г%, 10,34 ± 0,17 мг% и 5,0 ± 0,22 мг%, соответственно.

При анализе гематологических и биохимических показателей у телят опытных групп отмечалось незначительное повышение количества форменных элементов крови, общего белка и общего кальция в пределах физиологической нормы.

3.3.2. Применение композиции ДАФС-25 + Полизон для повышения продуктивности молодняка крупного рогатого скота

Для оценки влияния композиции ДАФС-25 + Полизон на прирост молодняка крупного рогатого скота было проведено три серии опытов. Телят в месячном возрасте разделили на 4 группы по 6 голов в каждой. Животным 1-й группы задавали композицию ДАФС-25 + Полизон в дозе 2 мг/кг, 2-й группе -ДАФС-25 в дозе 2 мг/кг, 3-й группе - Полизон в дозе 2 мг/кг, 4-я группа служила контролем.

Взвешивание телят проводили в возрасте 1, 2, 3, 4, 5, 6-месяцев на электронных весах. Все телята подбирались по принципу аналогов, со средней живой массой 42 кг.

Взвешивание телят в 3-месячном возрасте выявило тенденцию к отставанию в росте животных контрольной группы, которая сохранилась до конца опыта.

К концу экспериментальных исследований (6 месяцев) живая масса опытных групп составляла 168,6±2,38 кг (1-я группа), 160,0±2,55 кг (2-я группа), 165,3±1,7 кг (3-я группа) и 128,6±1,19 кг (контрольная).

Анализируя данные таблицы 5, можно заключить, что наибольший среднесуточный прирост наблюдается при включении в основной рацион композиции ДАФС-25+Полизон. В частности, у телят, получавших рацион с композицией ДАФС-25+Полизон, среднесуточный прирост составлял за опытный период 829,бОг, что выше на 265,13 г или на 46,97 %, чем в контрольной группе. Среднесуточный прирост телят, получавших рацион с добавлением ДАФС-25 и Полизона, составлял, 772,36 г и 809,21 г или на 36,8 % и 43,3 %, соответственно, выше, чем в контрольной группе.

Таблица 5 Влияние композиции ДАФС-25+Полизон на прирост массы тела телят (п=6)

Группа животных Масса тела на начало опыта, кг Масса тела на конец опыта, кг Среднесуточный прирост, г Прирост массы тела, кг

1-опытная 42,5±0,85 168,6±2,38* 829,60 126,1±1,68*

2-опытная 42,6±0,85 160,0±2,55* 772,36 117,4±1,15*

3-опытная 42,3±0,85 165,3±1,7* 809,21 123,0±1,03*

Контрольная 42,8±0,85 128,6±1,19 564,47 85,80±0,94

Примечание: * - Р<0,001.

Таким образом, установлено, что композиция ДАФС-25+Полизон в дозе 2 мг/кг живой массы положительно влияет на прирост живой массы молодняка крупного рогатого скота, стимулируя обменные процессы животного.

3.4. Экономическая эффективность применения композиции ДАФС-25 + Полигон

Для определения экономической эффекта от применения композиции ДАФС-25 +Полизон задаваемой в виде подкормки в составе рациона кормления, вычислили экономическую эффективность в период выращивания молодняка крупного рогатого скота в течение 5-и месяцев.

Экономическая эффективность за период выращивания на 1 рубль затрат составила 11,24 рубля.

4. ВЫВОДЫ

1. Методом РСА установлена структура сернокислой и фосфорнокислой солей 2 амино-4-(метилсульфонимидоил)-бутановой кислоты. Выявлены особенности гидролиза изученных солей, и методом ЯМР,3С идентифицированы продукты гидролиза.

2. Среднесмертельная доза (LD;n) композиции ДАФС-25 + Полизон составила при пероральном введении для белых мышей 800 мг/кг (500^-1280). Согласно ГОСТ 12.1.00.7 - 76 композиция ДАФС-25 + Полизон относится к III классу опасности.

3. Применение композиции ДАФС-25 + Полизон в дозах 1,5, 2,0 и 2,5 мг/кг в течение 30 дней не вызывает изменений морфологических и биохимических показателей крови, не оказывает отрицательного влияния на центральную систему, функцию почек, а также способствует увеличению живой массы крыс.

4. При длительном введении крысам в дозе 2 мг/кг композиция ДАФС-25 + Полизон не оказывала отрицательного влияния на функциональное состояние печени (уровень ферментов ACT и AJIT, билирубина, МДА).

5. При воспроизведении аспириновых и индометационых язв композиция ДАФС-25 + Полизон в дозе 2 мг/кг способствует снижению язвообразования. Противоязвенная активность композиции составила 2,13.

6. Композиция ДАФС-25 + Полизон в дозе 2 мг/кг обладает антифлоги-стическим действием в отношении воспалений, вызванных серотонином, формалином, трипсином, каррагенином и агаром Дифко.

7. Пероральное введение композиции ДАФС-25 + Полизон телятам в возрасте от 1 до 6 месяцев в дозе 2 мг/кг массы не приводит к изменению гематологических и биохимических показателей крови.

8. Применение композиции ДАФС-25 + Полизон стимулирует увеличение прироста живой массы телят. Среднесуточный прирост период с 1-го до 6-и месяцев составил 829,60 г, превышая контрольную группу на 46,97 %.

9. Экономическая эффективность при применении композиции ДАФС-25 + Полизон в период выращивания телят от одного до 6-месячного возраста составила на рубль затрат 11,24 рубля.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

С целью стимуляции обменных процессов организма, повышения сохранности и продуктивности сельскохозяйственных животных рекомендуется применение композиция ДАФС-25 + Полизон в практическом животноводстве и ветеринарии.

Композицию ДАФС-25 + Полизон рекомендуется применять телятам от 1 до 6 месяцев в дозе 2 мг/кг в течение всего периода выращивания.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАНПЫХ РАБОТ

1. Толмачёв, П.В. Результаты исследования композиции ДАФС-25 + По-лизон / П.В. Толмачёв, И.Р. Кильметова // Материалы международной научно-практической конференции», посвященной 80-летию Башкирского ГАУ, 30 септября-01 октября 2010 г. «Состояние, проблемы и перспективы развития АПК. - Уфа, 2010. - С.120 - 121.

2. Толмачёв, П.В. Результаты исследования ульцерогенного действия композиции ДАФС-25 + Полизон // П.В. Толмачёв, И.Р. Кильметова, Б.П. Сгрунин // Материалы международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной ветеринарии», посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани - Краснодар, 2011. - Ч. 1. - С. 89- 90.

3. Толмачёв, П.В. Результаты исследования действия композиции ДАФС-25 + Полизон на желудочно-кишечный тракт / П.В. Толмачёв И.Р. Кильметова, Б.П. Струнин // Материалы международной научно-практической конференции «От теории - к практике: вопросы современной ветеринарии, биотехнологии и медицины», посвященной 121 годовщине создания института.

- Саратов, 2011. - С.306 - 308.

4. Толмачёв, П.В. Результаты исследования противоязвенной активности композиции ДАФС-25 + Полизон на модели острой язвы, вызванной индомета-цином / П.В. Толмачёв, И.Р. Кильметова // Вестник Башкирского государственного аграрного университета. - 2011. - № 2 (18). - С.39 - 41.

5. Толмачёв, П.В. Влияние новой композиции ДАФС-25 + Полизон на организм молодняка крупного рогатого скота / П.В. Толмачёв, И.Р. Кильметова // Материалы международной научно-практической конференции «Инновационному развитию агропромышленного комплекса - научное обеспечение». -Уфа, 2012. - 4.1. - С.288 - 291.

6. Толмачёв, П.В. Влияние композиции ДАФС-25 + Полизон на функциональное состояние печени / И.Р. Кильметова, П.В. Толмачёв, Б.П. Струнин, С.Ф. Габдрахманова, Н.С. Макара // Вестник ветеринарии. - 2012. - № 60 (1/2012).-С.70- 72.

7. Толмачёв, П.В. Влияние композиции ДАФС-25 + Полизон на массу внутренних органов / Е.А. Тарасова, П.В. Толмачёв, И.Р. Кильметова, // Вестник Башкирского государственного аграрного университета. - 2012. - № 2 (22).

- С.27 - 29.

8. Толмачёв, П.В. Особенности кислотного гидролиза 2-амино-4-(метилсульфоимидоил)-бутановой кислоты / П.А. Гуревич, Б.П. Струнин, А.Т. Губайдуллин, Т.Б. Пахомова, Ю.Е. Сапожников, Л.Ф. Саттарова, И.Б. Струни-на, П.В. Толмачёв, Ф.И. Гусейнов // Вестник Казанского технологического университета. - 2012. - Т. 15. - № 3. - С.7-10.

9. Толмачёв, П.В. Биологическая активность композиции ДАФС-25 + Полизон в отношении процесса воспаления / П.В. Толмачёв, И.Р. Кильметова, Б.П. Струнин // Вестник Башкирского государственного аграрного университета. - 2013. - № 2 (22). - С.27 29.

Подписано в печать 21.05.2013. Формат бумаги 60х841/16- Усл. печ. л. 1,10 Бумага офсетная. Гарнитура «Тайме». Печать трафаретная. Заказ 234. Тираж 100 экз.

РИО ФГБОУ ВПО Башкирский ГАУ 450001, г. Уфа, ул. 50-летия Октября, 34

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Толмачёв, Павел Владимирович, Уфа

ФГБОУ ВПО «БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

04201451 471

На правах рукописи

ТОЛМАЧЁВ ПАВЕЛ ВЛАДИМИРОВИЧ

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НОВОЙ КОМПОЗИЦИИ ДАФС-25 + ПОЛИЗОН

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией

Диссертация на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, доцент Кильметова И.Р.

Научный консультант: доктор технических наук Струнин Б.П.

Уфа-2013

<

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ПРИВЕДЁННЫХ

В ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЕ............................................................4

ВВЕДЕНИЕ.........................................................................................................5

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................................................10

1.1. Селен в природе. Биологические свойства селена...........................10

1.2. Селен- и метионинсодержащие препараты, применяемые

в ветеринарии для повышения продуктивности животных............25

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ......................................37

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ........................................................44

3.1. Особенности кислотного гидролиза препарата Полизон.................44

3.1.1. Кислотный гидролиз 2-амино-4-(метилсульфони-мидоил)-бутановой кислоты......................................................44

3.1.2. Реакции 2-амино-4-(метилтио)-бутановой кислоты и ее производных с фенилизотиоцианатом......................................49

3.2. Токсикологическая оценка композиции

ДАФС-25 + Полизон............................................................................53

3.2.1. Острая токсичность композиции ДАФС-25 + Полизон.........53

3.2.2. Субхроническая токсичность композиции ДАФС-25 + Полизон.......................................................................................57

3.2.3. Влияние композиции ДАФС-25 + Полизон на массу внутренних органов...................................................................60

3.2.4. Влияние композиции ДАФС-25 + Полизон на центральную нервную систему......................................................63

3.2.5. Влияние композиции ДАФС-25 + Полизон на функцию почек............................................................................................65

3.2.6. Влияние композиции ДАФС-25 + Полизон на функциональное состояние печени..................................................66

3.2.7. Антиульцерогенное действие композиции ДАФС-25 + Полизон.......................................................................................71

3.2.8. Противовоспалительное действие композиции ДАФС-

25 + Полизон...............................................................................75

3.3. Применение композиции ДАФС-25 + Полизон в ветеринарии..........................................................................................................79

3.3.1. Влияние композиции ДАФС-25 + Полизон на показатели крови у телят......................................................................79

3.3.2. Применение композиции ДАФС-25 + Полизон для повышения продуктивности молодняка крупного рогатого скота........................................................................................83

3.4. Экономическая эффективность применения композиции ДАФС-25 + Полизон.............................................................................86

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ............................................................................................88

5. ВЫВОДЫ......................................................................................................96

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.........................................................98

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК.............................................................99

г

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ПРИВЕДЁННЫХ В ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЕ

1. 2 мг/кг ж. м. - 2 мг/кг живой массы

2. ДАФС - 25 - диацетофенонилселенид

3. Полизон - 2-амино-4 метилтио-CS - окси - S - имино)-масляная кислота

4. ACT - аспартат-аминотрансфераза

5. AJTT - аланин-аминотрансфераза

6. МДА - малоновый диальдегид

7. СОЖ - слизистая оболочка желудка

8. ОМЕЗ - омепразол

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В нашей стране проводится огромная работа по переводу животноводства на промышленную основу, что является качественно новым в развитии этой отрасли сельскохозяйственного производства. Это связано с необходимостью решения важнейших научно-технических проблем, в том числе в ветеринарной науке и практике (Г.Т. Клименко, 1980; В.И. Шушлебин, 1988; М.Н. Лебедев, 1990; К.Х. Па-пуниди и др., 2002; С.Ф. Киселёв и др., 2004; P.C. Юсупов и др., 2008 и

др.).

Непременное требование к животноводческим комплексам - их высокая экономичность. Однако, она возможна только, если комплексы имеют здоровое поголовье, а содержание и кормление животных соответствует их нормальной жизнедеятельности. В условиях промышленного животноводства особое значение имеют проблемы профилактики незаразных заболеваний животных (В.Д. Мисаилов, 1996; B.C. Бузлама и др., 1997 - а, б; В.А. Константинов, H.A. Чигалинцев 1999; К.Х. Папуниди и др., 2002; В.А. Антипов и др., 2004; 2010; С.Ф. Киселёв и др., 2004; Е.Б. Мирошниченко, 2008; Т.Н. Родионова и др., 2010 и др.).

Одним из важнейших факторов, способствующих возникновению различных заболеваний, является неравномерное распределение микро- и макроэлементов в окружающей среде, в частности, селена (А.П. Авцын, 1990; В.Т. Самохин, 1997; В.Д. Сидельникова, 1999; Д.Ф. Давлетшина, Р.Н. Уельданов, 2000; А.Ф. Блиннохватов и др., 2001; В.М. Борисов, Е.М. Савош, 2001; Н.В. Старова и др., 2001; В. Ашинков и др., 2005; H.A. Голубкина, Т.Т. Папазян, 2006; В.А. Сидоркин и др., 2008).

Известно, что селен является биологически активным микроэлементом, входящим в состав ряда ферментов и защищающим клетку и внутриклеточные структуры от повреждающего действия свободных радикалов,

которые образуются как при обмене веществ, так и под влиянием внешних факторов. Селен участвует во многих окислительно-восстановительных процессах, работе ферментной системы, способствует всасыванию витамина Е, обладает антитоксическим и антиоксидантным действием. Селен влияет на обмен белков, жиров и углеводов (Б.Д. Кальницкий, 1985;

A.С.Логинов, Б.Н. Матюшин, 1990; В.М. Борисов, Е.М. Савош, 2001; Л.В. Виноградов, Ж.А. Сирзоян 1993; В.П. Дерягина и др., 1996; B.C. Буз-лама и др., 1997 - а, б; В.Н. Иванов и др., 1997; Г.И. Боряев, А.Ф. Блиннох-ватов, 1999; В.В. Вапиров и др., 2000; И.В. Гмошинский и др., 2000;

B.А. Барабой, 2004; С.А. Алексеева, В.В. Рубцов, 2006; Ю.П. Балым и др., 2007 - а, б, в; C.B. Станкевич, 2009; В.А. Антипов и др., 2010; Ю.А. Дол-женков, 2010; А.И. Бердников, 2011; W.J. Hartley, 1964; W.M. Allen et al, 1975; W.G. Hoekstra, 1975).

В настоящее время имеется широкий спектр современных селеноор-ганических препаратов и кормовых добавок, таких как селенолин, «Сел-Плекс», селенметионин, селебен, седимин, карсел, селенопиран, селедант, эктраселен, антавин, ДАФС-25 и другие (С.А. Холев, 2000; В.Т. Самохин, 2003; М. Лемешева, 2006; В.В. Рубцов, С.А. Алексеева, 2005, 2006;

C.B. Шабунин и др., 2006, 2007, 2008; Н.В. Тарасов, 2009; Т.Н. Родионова, В.А. и др., 2010; Т.А. Трошина, 2010; В.В. Строгов и др., 2011 - а, б, в, г, д; М.Н. Насибов и др., 2011 - а, б).

Кроме селенсодержащих препаратов в последнее время интенсивно расширяется выпуск биологически активных органико-минеральных композиций различной направленности для лечения патологических процессов, повышения естественной резистентности, а также для улучшения продуктивности животных. Применение комбикормов с содержанием преимущественно растительных белков увеличивает дефицит незаменимых аминокислот, снижает их доступность, в первую очередь, метионина и лизина (Л.М. Пивовар, 1989; П.А. Лебедев, 1996; В.А. Константинов и др.,

1999, 2000; Е.Г. Василенко и др., 2003; М. Лемешева, 2006; С. Суханова, А. Бутюгина, 2008; Д.В. Портнов, 2009; Н.В. Тарасов, 2009; К.А. Кулешов, 2010; М.Г. Савкова, 2012 и др.).

На отечественном рынке в настоящее время представлен синтетический аналог метионина - препарат Полизон. (фосфорнокислая соль 2-амино-4-метилтио-(8-оксо-8-имино)-масляной кислоты). Ранее были проведены комплексные исследования вышеуказанного препарата, а также его композиций с тиамина бромидом и ретинола ацетатом (И.А. Баранова и др., 2004 - а, б; Л.Р. Сафина и др., 2004, 2005; Р.Ф. Тухватова и др., 2004, 2005, 2006; Л.Р. Файзуллина, 2006; P.P. Каримов, 2005, 2007; Н.Г. Фенчен-ко и др., 2005, 2007; А.Ф. Исмагилова и др., 2006, 2007; Т.В. Фарукшина и др., 2009; В.А. Константинов, 2010 и др.).

В условиях промышленного животноводства, важное значение имеет разработка и внедрение препаратов группового и индивидуального применения для предупреждения и ликвидации болезней, связанных с недостатком селена, а также средств, применяемых для повышения продуктивности животных.

Цель и задачи исследования. Цель данной работы - изучить токси-ко-фармакологические свойства новой композиции ДАФС-25 + Полизон и её применение в животноводстве для улучшения сохранности и продуктивности сельскохозяйственных животных.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- изучить особенности кислотного гидролиза препарата Полизон;

- дать токсикометрическую оценку композиции ДАФС-25 + Полизон (острая и субхроническая токсичность, влияние на центральную нервную систему, функцию почек, массу внутренних органов) для мышей и крыс;

- изучить антиульцерогенную активность композиции ДАФС-25 + Полизон;

- изучить влияние композиции ДАФС-25 + Полизон на функциональное состояние печени;

- дать оценку противовоспалительного действия композиции ДАФС-25 + Полизон;

- изучить влияние композиции ДАФС-25 + Полизон на гематологические и биохимические показатели крови;

- определить ростостимулирующее действие композиции ДАФС-25 + Полизон;

- определить экономическую эффективность применения композиции ДАФС-25 + Полизон в животноводстве.

Научная новизна. Впервые проведено исследование широкого комплекса токсикологических показателей композиции ДАФС-25 + Полизон, позволившее выявить степень безопасности его применения.

Впервые изучены токсико-фармакологические свойства и противоязвенная активность композиции ДАФС-25 + Полизон, её влияние на массу внутренних органов, и на функциональное состояние печени, выявлена биологическая активность композиции в отношении процесса воспаления, биохимических показателей крови и, влияние на прирост массы тела и сохранность телят. Композиция ДАФС-25 + Полизон имеет высокие показатели на основании доклинических и производственных исследований.

Практическая значимость работы. Выполненные исследования и полученные результаты позволили предложить композицию ДАФС-25+Полизон как конкурентоспособный препарат для повышения резистентности и продуктивности сельскохозяйственных животных. Предложенные дозы не вызывают отрицательного действия и способствуют стимуляции роста молодняка крупного рогатого скота.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на: Международной научно-

практической конференции, посвященной 80-летию Башкирского ГАУ, 30 сентября-01 октября 2010 г. «Состояние, проблемы и перспективы развития АПК» (Уфа, 2010), Международной научно-практической конференции, посвященной 65-летию ветеринарной науки Кубани «Актуальные проблемы современной ветеринарии» (Краснодар, 2011), Международной научно-практической конференции, посвященной 121 годовщине создания Саратовского научно-исследовательского ветеринарного института «От теории - к практике: вопросы современной ветеринарии, биотехнологии и медицины» (Саратов, 2011), Международной научно-практической конференции в рамках XXII Международной специализированной выставки «Агрокомплекс-2012», 13-15 марта 2012 г. «Инновационному развитию агропромышленного комплекса - научное обеспечение» (Уфа, 2012).

Публикации. Основные положения диссертации изложены в 9 научных статьях, в том числе пять публикаций - в рецензируемых научных журналах: «Вестник Башкирского государственного аграрного университета», «Вестник ветеринарии» и «Вестник Казанского технологического университета».

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- токсикологическая оценка композиции ДАФС-25 + Полизон;

- степень безвредности композиции ДАФС-25 + Полизон;

- эффективность введения композиции ДАФС-25 + Полизон и её влияние на рост и развитие молодняка крупного рогатого скота.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 131 странице компьютерного текста и состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, собственных исследования, заключения, выводов, практических предложений, библиографического списка. Список использованной литературы включает 284 источника, в том числе 58 - зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 27 таблицами и 8 рисунками.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Селен в природе. Биологические свойства селена

Среди 27 биогенных элементов особое место занимает 34-й элемент периодической системы Д.И.Менделеева - селен (атомный вес 78,96).

В соединениях селен имеет валентность 2, 4, 6 и относится к малораспространённым химическим элементам, а его содержание в земной коре составляет 6x10"5 % (В.И. Вернадский, 1954; Б.В. Некрасов, 1973; В.И. Георгиевский и др., 1979; С.Н. Касумов, 1981). В магматических породах содержание селена составляет 0,01-0,05 мг/кг, в осадочных породах наибольшее его содержание отмечается в глинах - 0,4-0,6 мг/кг, в известняках и доломитах - 0,03-0,1мг/кг (Г.Б. Абдулаев, 1974 - б; Н.В. Старова и др., 2001). В почве селен встречается в виде элементарного и пиритного селена, селенитов, селенидов и органических соединений. (A.B. Чечёткин, В.И. Воронянский, 1982). В кислых гелевых почвах и в почвах с высоким содержанием органического вещества преобладают селениды, они малоподвижны и недоступны для растений. В хорошо дренируемых минеральных почвах (pH близок к нейтральному) доминируют селениты. Селениты щелочных металлов растворимы, а селениты железа нерастворимы и труднодоступны для растений. В щелочных почвах содержатся селенаты, которые легко растворимы и наиболее доступны для растений. Понижено содержание элемента в дерново-подзолитых, повышено в торфяных и горных карбонатных почвах (В.В. Ермаков, В.В. Ковальская, 1974; А.П. Кудрявцев, Л.А. Кудрявцева, 1974; 1979; W.M. Allen et al, 1975).

Основные черты геохимии селена в земной коре определяются близостью его ионного радиуса к ионному радиусу серы. Селен образует 37 минералов, среди которых в первую очередь встречаются ашавалит FeSe, клаусталит PbSe, тиманнит HgSe, гуанахуатит Bi2(Se, S)3, хастит CoSe2,

платинит PbBi2(S, Se)3, ассоциирующие с различными сульфидами, а иногда также с касситеритом (В.В. Вапиров и др., 2000). Селен образует редкие минералы, представленные главным образом селенидами свинца, меди, серебра, ртути и никеля (берцелианид, тиманнит, науманнит, эвкайрит, зоргит, круксид). Изредка встречается самородный селен (В.В. Ермаков, 1974). В промышленности селен извлекают как побочный продукт при обработке сульфидных руд этих металлов. Содержание селена в сульфидах колеблется от 7 до 110 г/т. Концентрация селена в морской воде составляет 4-Ю"4 мг/л (Л.В. Виноградов, 1957; А. Хенниг, 1976).

Значительное количество селена получают из шлама медно-электролитных производств, в котором селен присутствует в виде селенида серебра. Применяют несколько способов получения: окислительный обжиг с возгонкой Se02; нагревание шлама с концентрированной серной кислотой, окисление соединений селена до Se02 с его последующей возгонкой; окислительное спекание с содой, конверсия полученной смеси соединений селена до соединений Se(IV) и их восстановление до элементарного селена действием S02(B.B. Вапиров и др., 2000).

Хотя селен распространён повсеместно, его неравномерное распределение на поверхности земли приводит к существованию регионов с естественной повышенной и пониженной концентрацией селена в окружающей среде. Основным источником селена для животных являются растения, которые потребляют его из почвы. Концентрации селена в воде и воздухе обычно очень низкие и составляют, в среднем, 10 нг/м3 в воздухе и несколько мкл/л в воде (A.B. Чечёткин, 1982).

В почве содержание селена, в среднем, составляет 0,2 мг/кг с колебаниями от 0,005 до 1,1 мг/кг. На территориях хозяйств неблагополучных по мышечным дистрофиям молодняка животных почвы пастбищ имеют pH 5,3 - 6,5 и характеризуются малым содержанием водорастворимого селена (А.П. Кудрявцев, 1979). Наибольшее содержание селена имеют каштано-

вые почвы, чернозёмы и серозёмы 0,3-1 мг/кг, песчаные и дерново-подзолистые - 0,05 - 0,2 мг/кг (В.В. Ермаков, В.В. Ковальский, 1974; В.Д. Сидельникова, 1999).

И.К. Хабиров с соавторами (2010), проводя мониторинг распределения химических элементов в почве на Южном Урале (Республика Башкортостан), установил, что повышенное количество селена в верхнем слое почв обнаружено в северной лесостепной зоне в количестве 20 - 23мг/кг (в двух разрезах); в северо-восточной лесостепной зоне - 181,5 мг/кг (известняковая порода органического происхождения). В других почвах содержание селена колебалось от 0 до 0,70 мг/кг (северная лесостепная зона) и 0,58 - 4,8 мг/кг (северо-восточная лесостепная зона).

В растениях содержание селена впервые было обнаружено в 1932 г. французским химиком Таволгу. О. A. Bethe, H.F. Eppson, (1974) показали, что при одинаковом содержании селена в почве растения проявляют избирательную способность к элементу. Наиболее активно селен поглощается пшеницей. Установлено, что для ядовитых грибов характерно накопление большого количества селена. На накопление растениями селена большое влияние оказывает использование пахотных земель. При неправильном подходе к заготовке и хранению зерна теряется до 50% селена, в грубых кормах его содержание может уменьшиться в 3 раза. Одна из причин низкого содержания селена в растениях - �