Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Фармако-токсикологическая характеристика премикса янтамет и его применение в свиноводстве

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Фармако-токсикологическая характеристика премикса янтамет и его применение в свиноводстве"

На правах рукописи ____

СКАЛКИНА ОЛЬГА АЛЕКСАНДРОВНА

ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕМИКСА ЯНТАМЕТ И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ В СВИНОВОДСТВЕ

06.02.03 - ветеринарная фармакология с токсикологией,

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

2 7 МАЙ 2015

005569354

Санкт-Петербург 2015

005569354

Работа выполнена на кафедре фармакологии и токсикологии федерального государственного бюджетного общеобразовательного учреждения высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

Андреева Надежда Лукояновна,

доктор биологических наук, профессор

Трошина Татьяна Алексеевна,

доктор ветеринарных наук, профессор кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы и радиобиологии ФГБОУ ВПО «Ижевская государственная сельскохозяйственная академия»

Резниченко Людмила Васильевна,

доктор ветеринарных наук, профессор кафедры инфекционной и инвазионной патологии, ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия им.В.Я. Горина»

ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных»

Защита состоится « 24 » июня 2015 г. в «13» часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.03 при ФГБОУ ВПО «Санкт -Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, Санкт-Петербург, ул. Черниговская, 5. Тел/факс 8(812)388-10-55.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Автореферат разослан «

О*»

2015 г.

Автореферат размещен на сайте ВАК Минобразования и науки РФ: ЬИр//уак.ес1.§оу.ги « » 2015 г. и на сайте http://spbgavm.ru «О 0у 2015 г.

Ученый секретарь л

диссертационного совета « С-Л~сМ*— Белова Лариса Михайловна.

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы исследования. При выращивании животных, особенно молодняка, на них воздействуют различные неблагоприятные факторы внешней среды в виде всевозможных стрессов, которые снижают общую сопротивляемость организма, продуктивность и вызывают различные болезни. Кроме того, от животных с иммунодефицитом, рождается молодняк с ослабленной иммунной системой неспособной противостоять экстремальным воздействиям внешней среды (Плященко С.И.. Сидоров В.Т., 1983; Давыдов В.У., 1986; Соколов В.Д.,1989; Придыбайло Н.Д.,1991; Самохин В.Т., Шахов

A.Г., 2000).

Как отмечает Соколов В.Д. (2006) стрессы и иммунодефициты стали неотъемлемой частью ведения нашего животноводства. Эти состояния дополняют друг друга и порой трудно установить их приоритет.

Именно из-за этого при выращивании молодняка стали использовать различные лекарственные средства, корректирующие влияние негативных факторов на организм и проявляющие ростостимулирующий эффект (Соколов

B.Д. и соавт., 1982; Бузлама B.C. и соавт., 1985; Андреева H.JL, Соколов В.Д., 1987; Иванов A.B., 2000; Ноздрин Г.А., 2003).

Степень её разработанности. На сегодняшний день к таким препаратам относятся кормовые антибиотики, иммуностимуляторы, адаптогены, органические кислоты, пробиотики и другие биологически активные добавки (БАД), которые по А.Хенниг (1976) и Н.Л.Андреевой (1990), включены в группу эрготропных средств, не являющихся жизненно необходимыми для организма, как например витамины и микроэлементы, но способные корректировать иммунобиохимические процессы в позитивном направлении, повышать защитные силы организма и стимулировать рост и развитие животных.

Длительный период ведущее положение в группе эрготропных средств занимали кормовые антибиотики, проявляющие наиболее выраженный ростостимулирующий эффект (Евдокимов П.Д., 1964; Мозгов И.Е. 1971; Соколов В.Д.. и соавт., 1972; Ковалев В.Ф., 1980; Пивняк И.Г., 1982; Солнцев K.M.. 1990).

Отмечая высокую эффективность кормовых антибиотиков в повышении продуктивности молодняка сельскохозяйственных животных, следует заметить, что уже в период их широкого применения, появились работы, в которых отмечались негативные явления этих препаратов, проявляющиеся в дисбактериозах, аллергических реакциях и, главное, в возникновении устойчивых рас микроорганизмов (Субботин В.М., 1974; Соколов В.Д., 1977, 1990; Сазонов Г.Ф.. 1981).

Именно поэтому в ряде западных стран кормовые антибиотики были запрещены для применения в животноводстве. Однако, резкое ухудшение экономических показателей при выращивании молодняка животных и прежде всего в свиноводстве, заставило исследователей искать альтернативу этим препаратам. Как указывает Н.Л.Андреева (2009) альтернативой лечебным и кормовым антибиотикам на сегодняшний день могут служить органические кислоты, пробиотики, иммуностимуляторы и некоторые другие БАД, проявляющие адаптогенное и ростостимулирующее действие.

Исследования, проведенные на кафедре фармакологии и токсикологии СПбГАВМ в последнее время показали, что при выращивании свиней положительных результатов можно добиться, используя пробиотики, БАВы из высших грибов, иммуностимуляторы, то есть средства, оказывающие меньше негативного влияния на организм, но достаточно эффективные (Соколов В.Д. и соавт., 2010; Попова О.С., 2011; Богданов В.Е.,2012; Филиппова И.А. и соавт.,2012). Подобные исследования проводят и другие ученые (Иванова А.Б. и соавт.,2012; Кротов Л.Н.,2012; Мельникова Н.В., Степанов В.А„2012; Ноздрин Г.А. и соавт.,2012.

Поэтому разработка средств, уменьшающих отрицательное влияние стресс-факторов на организм молодняка животных, в том числе поросят и являющимися позитивными в экологическом плане, является актуальной и отвечает запросам науки и практики.

Цель и задачи. В связи с изложенным, целью наших исследований явилась разработка, изучение фармако-токсикологических свойств премикса янтамет и эффективность его применения в свиноводстве.

Для этого было необходимо решить следующие задачи:

1. Разработать рецептуру премикса янтамет.

2. Изучить ростостимулирующее и адаптогенное действие янтамета на лабораторных животных.

3. Установить оптимальные дозы и схемы применения премикса на лабораторных животных.

4. Дать токсикологическую оценку действия премикса янтамет.

5. Провести производственные испытания препарата на поросятах отъемышах.

Научная новизна. Впервые разработана рецептура нового премикса янтамет, дана его фармако-токсикологическая характеристика. Определено корректирующеее действие янтамета на показатели естественной резистентности организма лабораторных животных. Изучено влияние премикса на продуктивность и сохранность поросят. Проведено гистологическое исследование внутренних органов свиней, получавших премикс.

Теоретическая и практическая значимость работы. На основании проведённых исследований установлены дозы и схемы применения премикса для повышения резистентности, продуктивности и сохранности поросят. Результаты исследований использованы при составлении «Временной инструкции по применению премикса янтамет для повышения сохранности и продуктивности свиней», одобренной Ученым Советом СПбГАВМ.

Методология и методы исследования.

Исследования проведены с использованием фармакологических, токсикологических, гематологических, иммунологических, биохимических, гистологических методов.

Положения, выносимые на защиту. Материалы по изучению фармакологического и возможного токсического действия премикса Янтамет и применение его в ветеринарии.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность цифровых результатов исследований определяли с помощью критерия Стьюдента с использованием программы Microsoft Excel.

Основные положения и результаты диссертационной работы доложены на Международных и Всероссийских научно-практических конференциях: Санкт-Петербург (2009, 2010, 2011, 2012). На III Международном конгрессе ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 2014 г.).

Основные результаты исследований опубликованы в семи научных работах, в том числе три из них в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ.

Объём и структура диссертации. Работа изложена на 114 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения.

Работа содержит 18 таблиц и 3 рисунка. Список использованной литературы включает 206 источников, из них 20 иностранных авторов.

2. Собственные исследования

2.1.Материалы и методы

Экспериментальные исследования были выполнены в течение 2006 -2014 г.г. на кафедре фармакологии и токсикологии ФГБОУ ВПО «Санкт-

Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», а также в АОЗТ совхоза «Октябрьский» Волосовского района Ленинградской области.

Было проведено три этапа исследований:

1. Изучение основных фармакологических свойств премикса янтамет (ростостимулирующее, адаптогенное и иммуностимулирующее действие).

2. Токсикологические исследования премикса (определение острой и подострой токсичности).

3. Производственные испытания на сельскохозяйственных животных.

В работе использовано 60 белых беспородных мышей, 315 белых крыс и 60 поросят.

В качестве изучаемого препарата использовали премикс янтамет, включающий в качестве действующих веществ янтарную кислоту и метилурацил. Разработанный нами на кафедре фармакологии и токсикологии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины. Исследования проводили по методическим рекомендациям по изучению общетоксического действия фармакологических средств, утверждённым Управлением государственного контроля лекарственных средств и медицинской техники Минздрава России 29.12.1997 г.

Исследования проводили на здоровых половозрелых лабораторных животных, прошедших карантин 14 суток, которых получали из питомника Российской академии медицинских наук «Рапполово». Возраст животных, для разных опытов, колебался в интервале 1-3 месяцев. Различие по исходной массе не превышало 10%. Содержание экспериментальных животных соответствовало действующим санитарным правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев). На постоянном уровне поддерживали температуру, влажность, освещенность и кратность воздухообмена помещения, состав подстилок, кормление и др. параметры.

На первом этапе исследований проводили изучение ростостимулирующего, иммуностимулирующего, адаптогенного действия премикса на лабораторных белых крысах. Препарат вводили внутрь с помощью катетера. У подопытных животных в крови определяли гематологические, биохимические и иммунологические показатели.

Для определения адаптогенного действия премикса, стресс вызывали с помощью шуттель-аппарата. Для сравнения в качестве эталона брали нейролептик аминазин.

На втором этапе определяли острую и подострую токсичность по методу Кербера (1931) на лабораторных животных. При изучении подострой токсичности определяли изменение массы тела животных, с дальнейшей декапитацией и взятием крови для изучения биохимических показателей.

На третьем этапе проводили производственные испытания на поросятах отъемного периода в АОЗТ совхоза «Октябрьский» Волосовского района Ленинградской области. Исследовали разные дозы и курсы назначения премикса, проводили патоморфологические исследования по изучению возможного токсического действия на паренхиматозные органы: печень, почки и селезенку.

2.2. Фармакологическая характеристика премикса Янтамет

При разработке премикса янтамет мы исходили из данных литературы и научных разработок кафедры фармакологии и токсикологии СПбГАВМ. Поэтому в рецептуру премикса включили два препарата - янтарную кислоту и метилурацил, каждый из которых проявляет целую гамму позитивных фармакологических эффектов при низкой токсичности (ЛД50 каждого из ингредиентов превышает 3000 мг/кг, то есть 4-й, самый низкий класс опасности), которые в свое время проверялись на кафедре.

Янтарная кислота. Янтарная кислота и её соли сукцинаты являются метаболитами организма, которые широко участвуют в обменных процессах. Она обладает антиоксидантным, нейротропным, антиаритмическим, антигипоксическим, гепатотропным, адаптогенным действием, нормализует энергетический обмен, общее физиологическое состояние организма, усиливает процессы биосинтеза при патологиях и экстремальных условиях. В птицеводстве при аэрозольной обработке инкубационных яиц слабым раствором янтарной кислоты и последующем добавлении её в корм цыплятам позволило увеличить выводимость яиц и вывод цыплят на 12%, повысить их массу в 10-дневном возрасте на 5,3%, снизить падеж молодняка в постэмбриональный период более чем в три раза (Найденский М.С. и соавт.,2002).

Метилурацил. Метипурацил - производное пиримидина. Ускоряет процессы клеточной регенерации, заживление ран, стимулирует клеточные и гуморальные факторы иммунитета, оказывает противовоспалительное действие, активно стимулирует эритро- и особенно лейкопоэз (Машковский М.Д., 1993). Кроме того, по данным А.И. Левина и соавт. (1969), И.К. Асаулюка и П.П. Ждана (1980) эффективен при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки и при хроническом гастрите. Авторы считают, что терапевтический эффект при этом связан с нормализацией нуклеинового обмена в слизистой оболочке. Обладает анаболической и антикатаболической активностью. В ветеринарии используется ограниченно, имеются сообщения по применению метилурацила в качестве антистрессового средства при выращивании пушных зверей и поросят. Этот эффект по-видимому связан с антиоксидантными свойствами препарата.

Ростостимулирующее действие. Прежде всего нас интересовал ростостимулирующий эффект разрабатываемого премикса. В этих целях на белых крысах живой массой 210-218 г проверили ростостимулирующие свойства обоих препаратов по отдельности и в комплексе, испытав их

различные дозы: 10, 20 и 30 мг/кг каждого препарата по отдельности и такие же дозы при комбинированном назначении (каждый препарат в половинной дозе).

Препараты задавали в кашицеобразной кормовой массе на протяжении 10 дней, учет результатов в течение месяца после начала опытов.

Оказалось, что янтарная кислота проявляет достаточно выраженный ростостимулирующий эффект, который зависит от дозы препарата. Так, например, прирост массы при использовании самой низкой дозы - 10 мг/кг составил 106% по отношению к контрольной группе крыс. При дозе 20 мг/кг прирост массы у животных составил 114,1%, что было статистически достоверно. Увеличение дозы еще в 2 раза, практически не приводило к заметному повышению эффективности (прирост составил 114,9%).

Изучение ростостимулирующих свойств метилурацила показало, что препарат также проявлял ростостимулирующее действие, но оно было несколько менее выраженным по сравнению с янтарной кислотой и статистически недостоверным, хотя и приближалось к нему, то есть наблюдалась тенденция увеличения роста и развития белых крыс.

Далее установили, что янтарная кислота и метилурацил, заданные совместно в половинных дозах обладают достаточно выраженным ростостимулирующим эффектом при суммарной дозе 20 и 30 мг/кг. Характерно, что этот эффект был одинаковым при обеих дозах и составил 115,4% к контрольным животным (табл.1).

Таблица 1 - Влияние янтарной кислоты и метилурацила на рост и развитие белых крыс п=10 (М ±т)

Наименование групп и дозы ЯК и метилурацила мг/кг Живая масса в г

В начале опыта В конце опыта Прирост массы, г % прироста массы к контролю

1 гр. Контроль 210,5+9,6 225,3±9,3 14,8+0,7 100

2 гр. 10 мг/кг 217,4+8,4 223,6+7,4 16,2+0,6 109,4

3 гр. 20 мг/кг 211,2±7,5 228,3±8,8 17,1 ±0,7* 115,4*

4 гр. 30 мг/кг 216,4+6,7 233,5±8,7 17,1±0,7* 115,.4*

Примечание: * - результат достоверный по сравнению с группой контроля (р<0,05)

Проведенные исследования показали, что премикс янтамет проявляет выраженное ростостимулирующее действие на белых крыс. При этом установлено, что результаты данных опытов практически совпали с предыдущими опытами при назначении белым крысам комплекса — янтарная кислота + метилурацил. И в данном опыте наибольший прирост массы белых крыс наблюдался при скармливании премикса с суммарной дозой БАВ 20 и 30 мг/кг и составил 115,2 -115,4% по отношению к контрольным животным при статистической достоверности результатов (р<0,05).

В следующей серии опытов изучили адаптогенные свойства премикса янтамет. Опыт провели на 4 группах белых крыс, живой массой 210 -220 г, по 5 животных в каждой группе в двух повторностях. Стресс у подопытных крыс вызывали с помощью шуттель-аппарата, имитирующего транспортный (механический) стресс. На шуттель-аппарат помещали коробку с животными и выдерживали их в течение 120 мин. при включенном аппарате. В крови белых крыс определяли наиболее информативные показатели, характеризующие возникновение и течение стрессовой реакции (стрессовые медиаторы): глюкозу, общий белок, и количество лейкоцитов. Животные первой группы служили контролем без стресса. Вторая группа - контроль со стрессом без препаратов. Остальным подопытным группам животных предварительно, за 7 дней до стрессирования задавали внутрь препараты: третьей группе - аминазин, относящийся к группе нейролептиков и, обладающий наиболее сильным антистрессовым действием, в дозе 2,5мг/кг, четвёртой группе премикс Янтамет в дозе 20 мг/кг по АДВ. Исследование крови у крыс для определения вышеперечисленных показателей проводили через 1ч и 24ч после

стрессирования (табл.2). В конце эксперимента через месяц после его начала крыс взвешивали для определения их роста и развития.

Таблица 2. — Показатели стрессовой реакции через 1ч после стресса

п=10 (М ш)

Группа Глюкоза, ммоль/л Общий белок, г/л Лейкоциты, х 10%

1 гр. Контроль без стресса. 4,6±0,4 69,2±1,5 4,8±0,5

2 гр. Контроль со стрессом. 6,2±0,5 64,4±1,3 7,5ё±0,6

3 гр. Аминазин . 4,8±0,2* 66,5±1,2 5,1±0,2*

4 гр. Премикс янтамет. 5,0±0,3* 67,3±1,4 5,4±0,5*

Примечание: * - результат достоверный по сравнению с группой контроля со стрессом (р<0,05

По данным лабораторных исследований установили, что при стрессе содержание глюкозы, лейкоцитов увеличивается, и снижается количество общего белка. Например, уже через 1 ч после стрессирования концентрация глюкозы в четвертой группе составила 5,0±0,3 ммоль/л, против 6,2±0,5 ммоль/л в контрольной группе со стрессом, и 4,6±0,4 ммоль/л в контрольной группе, не подвергавшейся стрессу.

Через сутки после стресса эти показатели увеличились до 6,8±0,1 ммоль/л, 8,4±0,4 ммоль/л и 4,8±0,2 ммоль/л, соответственно. Показатели концентрации глюкозы в группе, где применяли аминазин, были сопоставимы с показателями четвертой группы, получавшей премикс и составляли 4,8±0,2 ммоль/л через час и 6,4±0,5 через 24 часа после стресса.

В таком же порядке у подопытных животных изменялось количество лейкоцитов, которое составило у чистого контроля 4,9±0,4; у стрессированных крыс 7,1±0,7, у получавших аминазин - 5,9±0,3 и премикс - 5,5±0,5 109/л через

24 ч после стресса. Содержание общего белка было соответственно: 1 гр. — 68,4±1,5; 2 гр. - 62,2±1,4; 3 гр. - 68,5±1,6 и 4гр. - 67,6±1,8 г/л.

Применение премикса янтамет нивелировало показатели глюкозы и лейкоцитов, приближая их к показателям чистого контроля без стресса. Таким образом, премикс янтамет проявлял определенное, антистрессовое (адаптогенное) действие.

За время эксперимента, который продолжался 30 дней, животные не проявляли признаков беспокойства, охотно поедали корм и пили воду.

Результаты взвешивания живой массы всех групп подопытных белых крыс в конце эксперимента представлены в табл.3.

Таблица 3 - Влияние исследуемых препаратов на рост и развитие белых крыс

п=10 (М±ш)

Наименование групп Живая масса в г

В начале опыта В конце опыта Прирост массы, г % прироста массы к контролю

1 гр. Контроль без стресса 212,5+8,6 228,3+9,5 15,8+1,6 100

2 гр. Контроль со стрессом 214,4+10,4 227,1+7,4 12,7±1,4 80,5

3 гр. Аминазин 218,2+6,5 235,6±8,8 17,4+1,6* 110,3*

4 гр. Янтамет 216,4+5,7 234,2+8,7 17,8+1,5* 113,2*

Примечание: * - результат достоверный (р<0,05) по отношению к группе контроля со стрессом.

Результаты таблицы 3 показывают, что применение премикса янтамет при экспериментальном стрессе у белых крыс проявляет ростостимулирующее действие. Самый большой прирост массы по сравнению с контрольными животными (15,8 г) получен при использовании премикса янтамет (17,8 г). Ростостимулирующий эффект составил 113,2% по сравнению с контролем без стресса. Меньше всего прирост массы отмечен во второй группе - контроль со стрессом 12,7 г или 80,5% по отношению к контролю без стресса.

13

Проведенные исследования показали, что премикс янтамет проявляет антистрессовое (адаптогенное) и ростостимулирующее действие. Эти фармакологические свойства указывают на перспективность проведения дальнейших исследований премикса с целью внедрения его в ветеринарию. Иммуностимулирующие свойства премикса Янтамет Учитывая многогранность иммунной системы организма, мы применили ряд методик, используемых для оценки этой системы и показывающие защитные функции организма. В частности, определяли фагоцитоз и иммуноглобулины при искусственном иммунодефиците, создаваемом с помощью иммуносупрессора циклофосфана, устойчивость организма при экспериментальном колибактериозе и устойчивость тканей организма к эшерихиям, используя метод Земского.

В первом опыте выяснили иммуностимулирующие свойства премикса янтамет путем создания искусственного иммунодефицита с помощью иммуносупрессора циклофосфан (табл.4).

Таблица 4. Результаты исследования крови лабораторных крыс при

искусственном иммунодефиците (М±т)п=10

Группы животных и препараты ФИ, % ФА, % ФЧ, %

Тимоген Циклофосфан 6,1±0,3* 70,3±1,3* 11,6±0,8

Янтамет Циклофосфан 5,9±0,5* 70,1 ±2,1* 10,8±0,9

Циклофосфан 4,3±0,3 61,0±2,4 9,2±0,9

Контроль 6,3±0,5 75,3±1,5 11,1±0,7

Примечание: * - результат достоверный (р<0,05) по отношению к группе с одним циклофосфаном.

Оказалось, что премикс Янтамет корректирует (уменыцает) негативное действие циклофосфана на процессы фагоцитоза, что проявлялось достоверным

увеличением показателей ФИ и ФА по сравнению с группой животных, которым инъецировали один иммуносупрессор (р<0,05). При этом иммунотропное действие премикса не сильно отличалось от эталонного иммуностимулятора тимогена (различия не достоверные).

Несколько иные результаты были получены при определении количества иммуноглобулинов. Как тимоген, так и янтамет, достоверно (р<0,05) корректировали негативное влияние цитостатика в отношении иммуноглобулина А и С2,. При этом, тимоген действовал несколько активнее премикса и в отношении других иммуноглобулинов, хотя результаты не были статистически достоверными, а находились на уровне показателей группы контрольных животных.

Известно, что любые экстремальные воздействия на организм животных изменяют гомеостаз и очень часто угнетают рост и развитие, снижая живую массу. Поэтому в конце эксперимента животные были вновь взвешены. Циклофосфан существенно влиял на рост и развитие белых крыс, что сказалось в уменьшении прироста массы тела животных, который составил всего 83,7 % по отношению к контрольным животным. Тимоген и янтамет в определенной степени нивелировали угнетающее влияние цитостатика на рост и развитие животных,

В группе животных, которым назначали тимоген, прирост массы тела по отношению к контрольным животным составил 90,8%, а при назначении премикса Янтамет- 95,3%.

Защитное действие премикса Янтамет при колиннфекции

В следующем опыте выяснили устойчивость тканей организма белых мышей к инфицированию кишечной палочкой, используя методику В.М.Земскова и соавт. (1977) о повышении устойчивости различных тканей внутренних органов белых мышей, получавших иммуностимулятор РНК, к эшерихиям. В этих целях животным в течение 20 дней предварительно

назначали янтамет в оптимальной дозе, после чего заразили сублетальной дозой суточной бульонной культурой эшерихий.

Установили, что содержание эшерихий в органах и тканях контрольных белых мышей (кровь, печень, селезенка, почки) было примерно одинаковым и составляло 870-1100 микробных клеток (КОЕ) в 1 мг. В тоже время у подопытных мышей, содержание эшерихий в вышеперечисленных органах и тканей было примерно в два раза меньше и составляло 380-450 микробных клеток (КОЕ).

Таким образом, можно констатировать, что премикс Янтамет, примененный за 20 дней до заражения животных повышал устойчивость их органов и тканей, а, следовательно, и всего организма, к инфицированию кишечной палочкой. Этот факт очень важен с точки зрения практического использования премикса во время выращивания животных, поскольку они постоянно испытывают достаточно сильное «микробное давление» и прежде всего именно кишечной палочки, которая постоянно находится в любом животноводческом помещении.

В заключительном этапе опытов по выяснению иммуностимулирующего и защитного действия премикса Янтамет провели эксперимент на модели экспериментального колибактериоза. С этой целью белым крысам за неделю до заражения кишечной палочкой и в течение недели после заражения назначали премикс в дозах: 10, 20, 40 и 80 мг/кг по АДВ. Предварительно концентрацию Е.соН оттитровали до 50-55%-ной гибели животных. Учитывали общее состояние животных, клиническое проявление болезни и падеж на протяжении двух недель после заражения.

Назначение премикса Янтамет с лечебно-профилактической целью при экспериментальном колибактериозе белых крыс подтвердило защитное действие препарата от колиинфекции. При этом эффективность препарата зависела от применяемой дозы. Так, например, при дозе 10 мг/кг заболело 70% животных и пало 15%. Процент сохранности составил 85%. При назначении

16

дозы 20 мг/кг заболело 60% животных и пало 10%. Сохранность составила 90%. Почти аналогичные результаты были получены и при увеличении дозы до 40 мг/кг. В тоже время в зараженном контроле заболело 100% животных и половина из них пала. Таким образом, проведенные эксперименты показали, что премикс Янтамет проявляет иммуностимулирующее и защитное действие организма лабораторных животных от воздействия возбудителя колибактериоза, что весьма важно с практической точки зрения, а именно, при назначении премикса в производственных условиях.

2.3. Токсикологическая характеристика премикса Янтамет

Изучение возможных токсикологических свойств премикса Янтамет показало, что в опыте, проведенном на белых крысах живой массой 240-250 г при определении острой токсичности в частности ЛД50 и ЛД100 препарат разбавляли дистиллированной водой, превращая в кашицу, и через катетер вводили крысам непосредственно в желудок в предельно возможном количестве (максимум 3,1-3,2 г). Нам не удалось установить эти показатели, поскольку максимально вводимые разовые дозы препарата не вызывали гибели лабораторных животных. Кроме того за время наблюдения в течение 14 суток не было отмечено каких-либо негативных отклонений в поведении животных. Крысы охотно поедали корм, пили воду при обычной двигательной активности (по сравнению с контрольной группой). В силу этого рассчитанная гипотетически ЛД50 премикса Янтамет для белых крыс составляла более 15000мг/кг, что говорит об очень низкой токсичности препарата, так как по существующей классификации препараты, у которых уровень ЛД50 превышает 1000 мг/кг относятся к малотоксичным веществам IV класса опасности.

В подостром опыте препарат задавали на протяжении 30 дней подряд в дозах, равной одной десятой от предельно вводимой (0,3 или 1,2г/кг), оптимальной (20 мг/кг по АДВ, что составляло 0,05 г премикса или 0,5г корма с премиксом на крысу), двукратной и четырехкратной доз от оптимальной (40 и

17

80 мг/кг по АДВ или 0,1 0,2 г премикса/кг) не влияло отрицательно на рост и развитие белых крыс.

Увеличение дозы премикса в 2 и 4 раза по сравнению с оптимальной также практически не влияло на гематологические показатели и содержание глюкозы в крови белых крыс при месячном назначении препарата (табл.5).

Таблица 5. - Влияние разных доз премикса Янтамет на некоторые гематологические и биохимические показатели белых крыс (М±ш, п=15)

Доза премикса по АДВ, мг/кг Показатели

Гемоглобин г/л Эритроциты х1012/л Лейкоциты х109/л Активность лизоцима, % Глюкоза ммоль/л

20 115,5±3,4 5,1 ±0,2 9,1 ±0,4 12,5±0,9 4,1±0,3

40 120,1±3,1 5,9±0,3 9,7±0,3 12,7±1,1 4,5±0,5

80 116,8±2,9 5,7±0,4 11,1 ±0,4 15,3±1,2* 4,9±0,3

120 110,3±2,8 5,1 ±0,2 13,4±0,2* 17,6±0,9* 5,6±0,2*

контроль 110,5±3,1 5,0±0,2 8,9±0,4 11,7±0,5 4,1±0,3

Примечание:*- статистически достоверно по сравнению с контролем (Р< 0,05).

В то же время при шестикратном увеличении дозы проявлялась некоторая тенденция снижения содержания гемоглобина и наблюдалось достоверное увеличение лизоцима, лейкоцитов и глюкозы в крови животных. Это можно объяснить активацией общего обмена веществ и систем неспецифической резистентности, а возможно и началом «сдвига» к стрессовой реакции организма (увеличение содержания глюкозы). Поэтому, четырехкратно увеличенную дозу при длительном назначении премикса Янтамет можно считать пороговой.

Оценка массы внутренних органов показала, что при назначении премикса не наблюдалось каких-либо отклонений абсолютных и относи-

тельных величин от физиологических значений. Все показатели находились в прямой корреляции с массой тела животных. А также не отмечено угнетения состояния животных, они были подвижны, хорошо поедали корм и пили воду. Имели блестящий гладкий шёрстный покров, как в контрольной, так и в подопытных группах. Не было замечено отклонений и в поведенческих реакциях, животные хорошо реагировали на внешние раздражители. Кроме того, у животных наблюдалось увеличение живой массы тела.

З.Производственные испытания премикса Янтамет

Опыты, проведенные на 40 поросятах-отъемышах группы доращивания, показали, что премикс Янтамет способствует повышению прироста массы у животных при разных схемах назначения. При постоянном дополнительном введении премикса в рацион поросят в оптимальной дозе 20 мг/кг (по АДВ) на протяжении месяца, прирост их живой массы по отношению к животным контрольной группы увеличивался на 6%. При двукратном прерывистом внесении премикса в корм в течение недели с недельным перерывом ростостимулирующий эффект был на 4,1%. выше. Увеличение курса применения премикса в этих же дозах до 45 дней незначительно увеличивало прирост массы у поросят по сравнению с 30-дневным применением и составило 7,2% по отношению к контролю. По результатам исследования оптимальной дозой премикса янтамет стала доза 20 мг/кг (по АДВ) и месячный курс назначения. Таким образом, и данный опыт подтвердил результаты лабораторных исследований по ростостимулирующему действию премикса.

Аналогично предварительному опыту провели изучение защитных сил организма поросят, учитывая возникновение болезней у животных (диарея и бронхопневмония) и сохранности. Установили, что дополнительное внесение премикса в рацион животных профилактирует проявление желудочно-кишечных и легочных болезней, значительно сокращая их проявление, примерно в 5 раз и предотвращает падеж. Повышение защитных сил организма

19

поросят можно объяснить адаптогенным (антистрессовым) и иммунотропным действием. Кроме этого эксперименты показали, что на лечение животных в контрольной группе израсходовано около 1,5 тысяч рублей (без учета труда ветспециалистов), тогда как стоимость премикса составила около 150 рублей.

Таким образом, разработанный на кафедре фармакологии и токсикологии СПбГАВМ при нашем участии премикс янтамет проявляет ростостимулирующее и защитное действие на организм растущих поросят, повышая их прирост массы, сохранность, корректируя отъемный стресс и профилактируя заболевания поросят диареей и бронхопневмонией.

В конце эксперимента провели дополнительные патоморфологические исследования по изучению его возможного токсического действия на паренхиматозные органы: печень, почки и селезенку, которые в наибольшей степени подвержены негативному воздействию ксенобиотиков. Патоморфологические исследования показали, что в подопытных группах свиней практически не наблюдались морфологические изменения в структуре печени, почек и селезенки. Учитывая экспериментальные исследования, можно заключить, что позитивное влияние премикса на организм поросят связано с ростостимулирующим, адаптогенным, иммуностимулирующим и активирующим обмен веществ действием.

4.Выводы

1. Разработан новый эффективный премикс Янтамет для свиней с высокой биологической активностью, включающий в качестве действующих веществ янтарную кислоту и метилурацил.

2. Премикс Янтамет проявляет ростостимулирующее, адаптогенное, иммуностимулирующее и защитное действие.

3. Установлена низкая токсичность премикса Янтамет для лабораторных животных, поросят и свиней, показано, что он относится к IV классу опасности (малоопасные вещества) согласно ГОСТ 12.1.007-76.

4. Отработаны дозы и схемы применения премикса янтамет. Оптимальной дозой премикса для поросят при отъёме является 20 мг/кг массы по АДВ в течение 30 дней.

5. Производственные испытания премикса на поросятах-отъемышах подтвердили его ростостимулирующее, адаптогенное, иммуностимулирующее и защитное действие у животных при диарее и бронхопневмонии.

6. Разработана «Временная инструкция по применению премикса янтамет для повышения сохранности и продуктивности свиней», апробированная в свиноводческом хозяйстве и одобренная Учёным советом ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

5.Практические предложения

В результате проведённых исследований производству предложен эффективный премикс Янтамет, который рекомендуется использовать в качестве ростостимулирующего, адаптогенного и иммуностимулирующего средства внутрь поросятам при отъёме в дозе 20 мг/кг в течение 30 дней.

Материалы диссертации включены в учебный процесс кафедры фармакологии и токсикологии и кафедры внутренних болезней животных им. А.В.Синёва Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины. А также рекомендуются для использования при написании монографий, обзора литературы и статей научными сотрудниками и аспирантами.

6. Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Андреева, H.JI. Новая биологически активная добавка - янтамет / H.JI. Андреева, В.Д. Соколов, O.A. Скалкина // Новые ветеринарные препараты и кормовые добавки: Экспресс-информация. СПб, - 2010. Вып. 21. С.4-5.

2. Скалкина, O.A. Ростостимулирующие свойства янтарной кислоты / O.A. Скалкина // Новые ветеринарные препараты и кормовые добавки: Экспресс-информация. СПб, - 2010. Вып. 21. С.25-26.

3. Андреева, H.JI. Адаптогенные свойства премикса янтамет / H.JI. Андреева, O.A. Скалкина // Международный вестник ветеринарии. 2013. №1. С.43-47.

4. Скалкина, O.A. Производственные испытания премикса янтамет / O.A. Скалкина // Новые ветеринарные препараты и кормовые добавки: Экспресс-информация. СПб, - 2013. Вып. 23. С. 36-37.

5. Скалкина, O.A. Изучение возможного токсического действия премикса янтамет / O.A. Скалкина // Материалы Ш-го международного конгресса ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии». СПб., 2014, С. 240-241.

6. Скалкина, O.A., Андреева H.JI. Влияние премикса на иммунологическую реактивность поросят / O.A. Скалкина, H.JI. Андреева // Международный вестник ветеринарии. - 2014.-.№2. - С.26-29.

7. Скалкина, O.A. Изучение возможного токсического действия янтамета на паренхиматозные органы поросят / O.A. Скалкина, H.JI. Андреева // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. - 2015. - №1. - С.144-145.

Подписано в печать 27.04.2015 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,2. Тираж 100 экз. Заказ № 3796.

Отпечатано в ООО «Издательство "ЛЕМА"» 199004, Россия, Санкт-Петербург, 1-я линия В.О., д.28 тел.: 323-30-50, тел./факс: 323-67-74 e-mail: izd_lema@rnail.ru http://www.lemaprint.ru