Элементы генома, ответственные за развитие основных групп генетически детерминируемых болезней человека

Мяндина, Галина Ивановна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Элементы генома, ответственные за развитие основных групп генетически детерминируемых болезней человека
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Элементы генома, ответственные за развитие основных групп генетически детерминируемых болезней человека"

На правах рукописи

МЯНДИНА Галина Ивановна

Элементы генома, ответственные за развитие основных групп генетически детерминируемых болезней человека

03.00.15 - генетика

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва 2005

Работа выполнена на кафедре биологии и обшей генетики медицинского факультета Российского университета дружбы народов

Научный консультант:

доктор биологических наук, профессор

Иткес Александр Веньяминовнч

Официальные оппоненты:

член-корреспондент РАН, доктор химических наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

доктор биологических наук, профессор

Кочетков Сергей Николаевич Асанов Алий Юрьевич Архипенко Юрий Владимирович

Ведущая организация:

Государственное учреждение Научный центр психического здоровья РАМН.

на заседании диссертационного совета Д 212.203.05 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117 198, г Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.8

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу: 117198, г.Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.

Зашита состоится

2005 г. в чЛ

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

О Б Гигани

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Геном человека содержит, наряду с собственно клеточными, нуклеотидные последовательности вирусного происхождения. Количество и расположение локусов клеточного происхождения в геноме достаточно постоянно, наличие вирусных последовательностей не является обязательным. Некоторые элементы генома как клеточного, так и вирусного происхождения можно рассматривать в качестве генетических маркеров для заболеваний, представляющих основные группы генетически детерминируемых болезней человека.

Актуальность данной темы определятся основополагающей ролью элементов генома в развитии заболеваний с наследственной предрасположенностью. Известно, что полиморфизм участков генома определяет целый спектр наследственных болезней человека, а также индивидуальные и популяционные различия наследственной предрасположенности к генетически детерминируемым болезням. С этой точки зрения полиморфные локусы являются генетическими маркерами, адекватный выбор которых позволяет решать как фундаментальные, так и прикладные задачи. Генетические маркеры обладают большим диагностическим и прогностическим потенциалом, поскольку остаются неизменными на протяжении всего онтогенеза и не зависят от наличия или отсутствия конкретного патологического процесса в организме. Они могут с успехом использоваться для оценки эффективности лечения и прогноза исхода болезни, а также для создания новых направлений в терапии генетически детерминируемых заболеваний В то же время, медико-генетическая служба в России не располагает в настоящее время компьютеризированными федеральными и региональными регистрами генетических маркеров основных групп болезней с наследственным предрасположением (Баранов B.C., 1997).

Актуальность молекулярно-генетических исследований предрасположенности к наиболее часто встречающимся и социально значимым болезням не вызывает сомнения. Сложившиеся в мировой науке оценки медико-демографической ситуации в России ставят вопрос о приоритетных направлениях исследований для медико-биологических наук. Согласно данным ВОЗ рождаемость в РФ снизилась па 31,1%, а отрицательный прирост населения составил 1,9%. В структуре смертности населения России онкологические заболевания занимают третье место после сердечнососудистых заболеваний и отравлений и травм (Гурвич И Н, 2005). Процессы депопуляции многие авторы связывают с алкоголизацией населения РФ (Norstrem Т., 1996; Nguen S.N, Frank J , 2001). Следовательно, выявление генетических маркеров для онкологических заболеваний, болезней матери и плода, а также целого ряда патологий, связанных со злоупотреблением алкоголем, на сегодняшний день являются крайне актуальным как для клинических целей, так и для проведения широкомасштабного скрининга населения с целью формирования групп риска развития генетически детерминируемой патологии и проведения досимптоматической терапии.

Цель исследования. Идентификация новых информативных генетических маркеров для основных групп заболеваний с наследственной предрасположенностью на основе молекулярно-генетического анализа элементов генома человека клеточного и вирусного происхождения. Для достижения указанной цели были сформулированы следующие основные задач я:р0С НАЦИОНАЛЬНАЯ 1

БИБЛИОТЕКА

srym

zr л

1. Изучить высоковариабельный участок гена EBNA-3C вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ) с целью определения прогностического значения полиморфного участка генома ВЭБ в определении моно- и поликлонального характера инфицирования В-лимфоцитов.

2. Провести молекулярно-генетический анализ участков генома вируса Мейзона-Пфайзера (MPMV), интегрированного в хромосомы больных с В-клеточными Беркитт-подобными лимфомами, и охарактеризовать их функциональную значимость в контексте схемы вирусного онкогенеза.

3. Изучить корреляцию инфекции вирусом папилломы человека (ВГГЧ) с риском развития онкологических заболеваний органов мочеполовой системы на основе регистрации элементов генома ВПЧ-16 в клетках опухолей и в циркулирующих клетках периферической крови пациентов методом ПЦР и гибридизации in situ.

4. Изучить роль полиморфизма Leu33Pro гена гликопротеина GP3a в развитии злокачественных новообразований органов мочеполовой системы.

5. Установить прогностическую значимость аллельного распределения гена GP3a в развитии и прогрессии рака предстательной железы (РПЖ).

6. Изучить корреляцию аллеля PLA2 гена GP3a с риском развития нарушений состояния фетоплацентарной системы для прогнозирования рождения детей с малым весом при разных формах позднего гестоза.

7 Изучить влияние генотипов гена GP3a матери и плода на развитие гестоза, фетоплацентарной недостаточности и задержки развития плода.

8 Изучить корреляцию аллельных вариантов АДГ2-1 и АДГ2-2 гена системы метаболизма алкоголя АДГ2 с риском развития разных форм клинического проявления хронической алкогольной интоксикации у злоупотребляющих алкоголем лиц.

9. Определить относительную роль генотипа АДГ2 и вирусной инфекции в развитии цирроза печени на фоне хронической алкогольной интоксикации

Научная новизна работы.

В результате молекулярно-генетических исследований элементов генома человека обнаружены новые информативные генетические маркеры вирусного и клеточного происхождения, определяющие развитие основных групп болезней с наследственной предрасположенностью

Выявленный впервые полиморфизм участка гена EBNA-3C вируса Эпштейна-Барр позволяет регистрировать моно- и поликлональный характер инфицирования В-лимфоцитов у пациентов с В-клеточными лимфомами. Впервые продемонстрирована интеграция полной копии ретровируса типа D Мейзона-Пфайзера в 10 и 17 хромосомы больных В-клеточными лимфомами, определен сайт его интеграции в локусе 17q. 11.22 и дана функциональная характеристика участка интеграции. Показано, что интеграция вируса Мейзона-Пфайзера произошла в непосредственной близости от экзона гена НСА-66, ассоциированого с гепатоцеллюлярной карциномой, характер интеграции соответствует схеме вирусного онкогенеза.

Установлено, что инфицирование ВПЧ-16 является фактором риска развития РМП, аллельный вариант PLA2 гена гликопротеина GP3a увеличивает риск развития данного заболевания у носителей в 9,5 раза. В работе применен новый патентованный способ определения аллельных вариантов гена GP3a для оценки генетической предрасположенности к раку предстательной железы (РПЖ) Впервые установлены положительные корреляционные зависимости между генотипом PLA1PLA2 и риском развития РПЖ, а также степенью его инвазивности и метастазирования.

В работе впервые обобщены результаты молекулярно-генетических исследований роли полиморфизма гена GP3a в развитии нарушений состояния фетоплацентарной системы (ФПС) и задержки развития плода (ЗРП) у беременных женщин с гестозами. Впервые показано, что носительство аллеля PLA2 является 100% фактором риска развития недостаточности ФПС на фоне предшествующей ' беременности экстрагенитальной патологии, а генетически детерминируемое

взаимодействие тканей матери и плода, определяемое геном гликопротеина СРЗа, играет существенную роль при развитии осложнений беременности.

Установлены положительные корреляционные зависимости между генотипом АДГ2 и риском развития разных форм клинической патологии у злоупотребляющих алкоголем лиц. Обнаружено, что гетерозиготный генотип АДГ2-1/2 определяет риск развития цирроза печени у неинфицированных вирусами гепатита В и С пациентов на фоне хронической алкогольной интоксикации. При этом риск развития цирроза печени у инфицированных пациентов не зависит от генотипа АДГ2.

Практическая значимость работы.

Результаты работы могут быть использованы в медико-биологических исследованиях, связанных с изучением молекулярных основ этиопатогенеза лимфом и других злокачественных новообразований Выявленный полиморфный элемент гена EBNA-3C вируса Эпштейна-Барр позволяет использовать его в диагностических целях для определения моно- и поликлонального характера инфицированных клеток В-лимфомы и степени се агрессивности с целью рекомендации более радикального лечения Предложенная схема ПЦР-анализа элементов генома ВЭБ в клетках периферической крови позволяет использовать её для скрининга вирусной инфекции с целью профилактики вирусных и аутоиммунных заболеваний.

Результаты исследований подтверждают вовлеченность ретровируса типа D Мейзона-Пфайзера в патогенез В-клеточных Берктг-подобных лимфом, что может i быть использовано в диагностических целях в клинической практике. Схема анализа

сайта интеграции вируса в хромосомы человека может использоваться в качестве модели для молекулярно-генетических исследований механизмов вирусного онкогенеза и молекулярных основ эволюции генома человека. Обнаружение белка, . ген которого поврежден вирусной вставкой, открывает новые возможности для

генетической коррекции опухоли. Выявленная корреляция ВПЧ-инфекции с риском развития рака мочевого пузыря (РМП) служит рекомендацией для выделения инфицированных пациентов в группу повышенного риска.

системы, гестоза, ЗРП у беременных, алкогольного цирроза печени и алкогольной зависимости позволяют использовать их для проведения скрининга населения и формирования групп повышенного риска с целью проведения досимптоматической терапии и профилактических мероприятий.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на:

7-ой и 8-ой Международных конференциях «СПИД, рак и родственные проблемы», С.-Петербург, 24 -28 мая 1999,2000.

X Международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации», Москва, 29-31 января 2001 г.

I Всероссийской конференции «Развитие научных исследований на медицинских факультетах университетов России», Москва, 23-25 января 2001г.

IY Международной конференции «Современные проблемы наркологии-биологические механизмы, диагностика, лечение, реабилитация, профилактика», Москва, 2002 г.

26 International Congress of Internal Medicine, Kyoto (Japan), 2002 r.

10-ой Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы», С - Петербург, 24-28 мая 2002 г.

Всероссийской конференции «Современные технологии лабораторной диагностики нового столетия», Москва, 28-31 мая 2002 г.,

XI Международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации», Москва, 27-28 января 2003 г.

Всероссийской научно-практической конференции «Современные проблемы артериальной гипертонии», Москва, 22-24 апреля 2003 г.,

И-ой Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы», С.- Петербург, 6-10 октября 2003 г.

Всероссийской научной конференции «Гистологическая наука России в начале XXI века: итоги, задачи, перспективы», 22-24 октября 2003 г.

Второй Международной конференции «Патофизиология и современная медицина», 22-24 апреля 2004 г.

12-ой Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы», С.- Петербург, 24-28 мая 2004 г.

14-ой Международной конференции «СПИД, рак и общественное здоровье» С.- Петербург, 23-27 мая 2005 г.

Положения, выносимые на защиту.

• Высоковариабельный участок гена EBNA-3C вируса Эпштейна-Барр определяет моно- и поликлональный характер В-лимфомы и степень ее агрессивности.

• Обнаружен клинический пример, где ретровирус типа D Мейзона-Пфайзера интегрирован в 17 хромосому человека в локусе 17q.ll.2 перед 3 экзоном гена гепатоцеллюлярной карциномы НСА-66, что соответствует схеме вирусного онкогенеза.

• Инфицирование пациентов вирусом папилломы человека типа 16 ассоциировано с риском развития рака мочевого пузыря.

• Предрасположенность к развитию рака мочевого пузыря и предстательной железы имеет генетическую предрасположенность и определяется носительством аллеля PLA2 гена GP3a.

• Полиморфизм гена GPia определяет уровень прогрессии опухоли и скорость развития локальной инвазии и метастазирования при раке предстательной железы.

• Фетоплацентарная недостаточность при гестозе генетически детерминированна и вероятность этого осложнения повышается на фоне имеющейся экстрагенитальной патологии.

• Генетически детерминируемое взаимодействие тканей матери и плода, определяемое геном GP3a, играет существенную роль при развитии нарушений состояния фетоплацентарной системы и задержки развития плода.

• Полиморфизм гена АДГ2 определяет разные формы клинического проявления алкогольной патологии у злоупотребляющих алкоголем лиц Население российской популяции генетически предрасположено к развитию цирроза печени при злоупотреблении алкоголем.

Публикации. По теме диссертации опубликована 31 работа в отечественных и зарубежных изданиях, получен патент на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на dOO страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, заключения, выводов, списка использованных сокращений, библиографического списка, включающего 5~2 отечественных и 4Q3 зарубежных источников. Диссертация иллюстрирована -/6 таблицами и 3JT рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

В работе использовали препараты геномной ДНК, выделенной из клеток периферической крови пациентов и здоровых доноров контрольной группы. Сведения об основных группах исследованных пациентов приведены в табл. 1.

Препараты геномной ДНК 4-х больных Беркитг - подобными лимфомами, содержащей последовательности вируса MPMV, плазмида pUC-MPMV, содержащая полный геном MPMV, предоставлены нам институтом канцерогенеза Российского онкологического научного центра им H.H. Блохина (РАМН, Москва). В работе использованы штаммы бактерий Е. coli DH-3, DH-5, (American Type Culture Collection), вектор pGEM3z/19, плазмида pUC 18.

Общее количество исследованных в работе препаратов геномной ДНК составило 599, в том числе 403 препарата ДНК пациентов.

1. Клиническая характеристика исследованных больных

В первую группу исследования включено 11 детей в возрасте от 8 до 15 лет с неходжкинскими лимфомами (NHL) и их здоровые матери. Диагноз и классификацию опухолей в соответствии с критериями NCI (Cancer, 1982) устанавливлен в НИИ детской гематологии МЗ РФ при Детской Республиканской клинической больнице г. Москвы (зав. отделением - д.м.н., проф. Е.В Самочатова).

Таблица 1. Основные группы пациентов, препараты геномной ДНК которых использованы для молекулярно-генетического анализа__

XI Количество

груп пы Группа заболеваний Подгруппа больных В подгруппе Всего

В-клеточные лимфомы (мелкоклеточные с нерасщепленными ядрами) 5

1 Лимфопролиферативны е заболевания Крупноклеточные анаплазированные В -лимфомы (СОЗО, кМ) 3

Т - клеточные лимфомы 2 19

лимфогранулематоз 1

Матери больных детей 8

Рак простаты 90

Рак яичника 9

2 Злокачественные Рак молочной железы 10 134

опухоли органов Рак мочевого пузыря 11

мочеполовой системы Рак почки и мочеточника 12

Рак яичка 2

Алкогольная зависимость 37

3 Алкогольная патология Алкогольный цирроз печени 36 73

Беременность, Всего с патологией 124 124

4 осложненная гестозами, Новорожденные дети 49 49

Недостаточностью ФПС беременных с гестозами,

и ЗРП ФПН и ЗРП

Общее количество пациентов 399

Контроль (здоровые доноры) 196

Вторую группу исследования составили больные с онкологическими заболеваниями органов мочеполовой системы в возрасте от 36 до 75 лет. Диагноз устанавлен на кафедре Урологии и оперативной андрологии Медицинской Академии последипломного образования на базе городской клинической больницы им. С.П. Боткина (зав. кафедрой - чл. - корр. РАМН, д.м.н., проф. О.Б. Лоран). Гистологические исследования образцов ткани из биопсий опухолей выполнены в

лаборатории патологической анатомии МНИОИ им. П.А. Герцена (рук. лаборатории - чл,- корр. РАМН, д.м н., проф. Г.А. Франк.).

В третью группу вошли 73 злоупотребляющих алкоголем лиц в возрасте от 25 до 69 лет из числа жителей московского мегаполиса с европеоидными чертами лица и восточноевропейской антропонимикой. Из них 37 человек с алкогольной зависимостью без цирроза печени (К10.2 согласно МКБ-10) отбирались из числа пациентов клиники НИИ наркологии МЗ РФ (директор - чл.-корр. РАМН, д.м.н, проф. H.H. Иванец) Подгруппу больных с хроническими заболеваниями печени составили 36 пациентов. Диагноз цирроза печени (К70.3 согласно МКБ-10) и злоупотребления алкоголем (К 10.1, МКБ-10) устанавлен на клинической базе кафедры внутренних болезней Российского университета дружбы народов в городской клинической больнице №64 г. Москвы (зав кафедрой - академик РАМН, д.м.н, проф. В.С Моисеев). Исследование вирусологических и серологических маркеров HBV и НВС проводено в ЦНИИ эпидемиологии МЗ РФ

124 пациентки в возрасте от 17 до 40 лет с беременностью, отягощенной гестозами на фоне недостаточности фсгоплацентарной системы (ФПС), и 49 новорожденных детей составили 4 группу Обследование пациенток и новорожденных, клиническая диагностика, наблюдение беременности и ведение родов проводились на клинической базе кафедры акушерства и гинекологии РУДН в 25 родильном доме г Москвы (зав кафедрой - д м н., проф. В.Е Радзинский.).

2. Молекулярно-генетические исследования.

Получение геномной ДНК из клеток периферической крови, электрофоретнческий анализ продуктов рестрикции и амплификации.

Геномную ДНК получали из свежей или замороженной крови, содержащей коагулянт, с использованием набора "Цитолизин" (Россия) или по стандартной методике Продукты рестрикции и ПЦР-амплификации разделяли электрофорезом в агарозном или полиакриламидном гелях (ПААГ) по стандартной методике (Манниатис,1989). Для визуализации фрагментов ДНК ПААГ окрашивали азотнокислым серебром по методике Echt C.S. et.al. (1996) с модификациями.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) проводилась на многоканальном амплификаторе ДНК МС2 и "Trepsonal" (Германия). В качестве ДНК-матрицы использовалась геномная ДНК, плазмидная ДНК, продукты амплификации (nested-PCR), а также сухая капля крови на бумажном носителе.

Создание библиотек клонов. Селективную ПЦР-супрессию проводили по методике, разработанной Лукьяновым К.А. и Лукьяновым С.А. (1997). Гибридизацию по Саузерну, клонирование продуктов селективной ПЦР-супрессии, обогащенных участками геномной ДНК, фланкирующих LTR вируса MPMV, выделение ДНК рекомбинантных плазмид проводили в соответствии с методикой Sambrook J., et.al., (1989). Очистку ДНК рекомбинантных плазмид проводили с помощью набора Wizard Midipreps DNA Purification System (Promega). Определение нуклеотидной последовательности клонированных вставок из рекомбинантных плазмид осуществляли по методу Сенгера в институте Молекулярной биологии им В.А. Энгельгардта.

Гибридизацию in situ проводили с использованием набора «Микровирус» HPV 16/18 (ЭП Медико-биологических препаратов PK НПК МЗ РФ, Москва, Россия) по методике, прилагаемой к набору. Эта методика позволяет анализировать стандартные парафиновые срезы и включает стадии: депарафинирование, обработку протеиназой К, гибридизацию с биотинилиро ванными олигонуклеотидными зондами, детекцию с использованием коньюгата щелочной фосфатазы и стрептавидина. Окрашенные препараты анализировали под световым микроскопом.

Праймеры, используемые для ПЦР-анализа. Подбор праймеров для амплификации ДНК-мишени проводили на основе программы "Primer 3" (http://www-genome.wi.mit.edu/cpi-bin/primer3/cgi). Дизайн праймеров проводили с использованием последовательностей полного генома MPMV (accession NC001550), генома ВЭБ (NID g59074), гена GPÎa (асс. М32672), приведенных в базе данных Genbank.

T7Notl 5'-GTAATACGACTCACTATAGGGCAGCGTGGTCGCGGCCGAGGT-3'

Т7 5 '-GTAATACG АСТС АСТАТ AGGGC-3 '

Notl 5 ' - AGCGTGGTCGCGGCCGAGGT-3 '

Not2 5'-ACCTCGGC-3'

AU5-443 5 '-GAGCAAACAGAGGCCAAGAC-3 '

AU5-420 5'-ATCCAGTCGGTAGAGCATGG-3 '

AU3-94 5'-ACTGCCTAATCCAATGACGG-3'

AU3-234 5 '-GTCTTGGCCTCTGTTTGCTC-3 '

Ai5 5'-CCAGTATCTTTCCCCTCCCACTTGCTGCCTGTG-3'

AU3-522 5'-ACCTGGAGGAGGGAGTGG-3'

Chr-17-1 5 '-AGGTACTCACAG ACGTTCAT-3 '

AU5-494 5'-GACGGAGAAGAACCFGGAAA-3'

E6 L : ttgcttttcgggatttatgc;

E6 R : caggacacagtggcttttga.

LI L : ttgcctcctgtcccagtatc;

LI R : aatggctgaccacgacctac.

GpIIIL - 1459 (5') gga ctt ctc ttt ggg ctc ctg

GpIIIR - 1729 (5') cac ctg ctt cag gtc tot cc

GpIIIL - 1375 (50 get cca atg tac ggg gta aa

GpIIIR - 1759 (5') ctc ctc aga cct cca cct tg

Концентрацию и температуру отжига синтезированных праймеров определяли по спектру поглощения образцов при длине волны 260 нм с использованием компьютерной программы "Концентрация олигонуклеотидов, учитывающей строение олигонуклеотида. Адрес в Internet www.humgen siobc.ras.ni".

Приготовление радиоактивного меченого зонда

Для приготовления радиоактивно меченого зонда использовали метод рассеянной затравки fhttp://www.promega/com/tbs/tb049 html) и метки [а-32Р] dATP (Обнинск). В качестве матрицы использовали эквимолярную смесь ДНК-

1 .плазмида pUC-MPMV

2 PCR-фрагменты LTR, амплифицированные на плазмиде pUC-MPMV с двумя парами праймеров:

(1) 5' LTR a¡5 и AU5-443, длина ПЦР-фрагментов 262 п.н

(2) 3' LTR AU-94 и AU5-522, длина ПЦР-фрагментов 428 п.н.

3. Маркер длин (смесь фрагментов ДНК) - 100 bp DNA ladder фирмы Promega,

США.

4 Маркер длин (смесь фрагментов ДНК) - 1 kb DNA ladder фирмы New England Biolabs, США.

Компьютерный анализ участка интеграции MPMV

Поиск с помощью NCBI BLAST. Для поиска был использован BLAST® (Basic Local Alignment Search Tool - инструмент для поиска локальных совпадений) - пакета программ, созданных для скрининга всех доступных библиотек нуклеотидных и аминокислотных последовательностей, при этом в качестве запроса могут выступать как белок, так и ДНК.

Адрес в Интернете: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/.

Для определения хромосомы с вставкой MPMV формировался нуклеотидный запрос в FASTA-формате (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/fasta.html), поиск проводился по базам данных GenBank+EMBL+DDBJ+PDB, оценивались статистически достоверные совпадения. При использовании транслированного BLAST для поиска известных мРНК или картированных генов в качестве запроса применяли пептиды, предсказанные GenScan.

Программу GenScan использовали для выявления экзонов генов на участке хромосомы, прилегающем к точке интеграции провируса. Для запроса использована полная нуклеотидная последовательность участка хромосомы из GenBank. Адрес в Интернете: http://genes.mit.edu/GENSCAN.html:

Поисковая система UCSC BLAT использовалась для определения точных координат искомого участка на целой хромосоме. Полная нуклеотидная последовательность каждой хромосомы получена путем анализа перекрываний более коротких участков генома человека из компьютерной базы GenBank. Адрес в Интернете: http://genome.ucsc.edu/.

Статистика.

Достоверность отличия частот генотипов в исследуемых группах от средних значений в популяции проводили с помощью пакета STATISTICA 6, StatSoft (программа «неаараметрическая статистика», сравнение наблюдаемых и ожидаемых заначений). Достоверными считали различия при р<0,05. Расчет увеличения вероятности развития заболевания у гетерозигот выражался в виде произведения отношений частот гетерозиготных и гомозиготных генотипов в группе исследования и в популяции в соответствие с методикой Б. Вейер (1995).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. Исследования элементов генома вирусного происхождения.

1.1. Детекция ДНК вируса Эпштейна - Барр в клетках периферической крови методом ПЦР.

ДНК вируса Эпштейна • Барр (ВЭБ) обнаружена в клетках периферической крови пациентов и их здоровых матерей методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием оригинальных праймеров, специфичных для участка гена ЕВЫА - ЗС ВЭБ. Схема анализа исследуемого участка генома ВЭБ методом ПЦР представлена на рис. 1.

101423

153 н.п.

Рис 1. Схема анализа ДНК ВЭБ методом ПЦР. Обозначены участки, кодирующие вирусные белки BERF3 и BERF4, нуклеотидные позиции вирусного генома указаны по последовательности Gene Bank NID g59074. Соединение в результате сплайсинга участков BERF3 и BERF4 приводит к образованию мРНК для синтеза белка EBNA-ЗС.

Олигонуклеотидные праймеры обозначены на схеме стрелками с номерами: 1), AACCGGTTCCAGTCAAGCCT; 2), CCCAGTATCCGAAGGACTCA; 3), AGAAGGGGAGCGTGTGTTGT; 4), GGCTCGTTTTTGACGTCGGC Амплификация полноразмерного фрагмента ДНК 227 н. п. проведена с праймерами 1 и 2; внутреннего фрагмента ДНК 153 н п. - с праймерами 3 и 4.

Данные о регистрации ДНК ВЭБ в клетках периферической крови пациентов методом ПЦР приведены в табл. 2. Элекгрофоретический анализ продуктов амплификации показал, что геном ВЭБ типа 1 зарегистрирован у 16 из 19 пациентов (84%), для контрольной группы здоровых доноров эта частота составила 70%.

Таблица 1. Регистрация ДНК ВЭБ в периферической крови больных детей, страдающих злокачественными заболеваниями, и их матерей

№ Тип опухоли Присутствие Примечания

ВЭБ-1*

1 В -лимфома + стандартное лечение, ремиссия

2 В - лимфома + стандартное лечение, ремиссия

4 В -лимфома + после второго блока

3 мать больного +

5 мать больного +

6 В -лимфома + хирургическое удаление опухоли,

ремиссия

7 мать больного +

8 В -лимфома + стандартное лечение, сохранение

остаточной массы опухоли,

трансплантация костного мозга,

ремиссия

9 мать больного +

10 лимфобластная Т- + стандартное лечение, ремиссия

лимфома

п мать больного +

12 лимфобластная Т- -

лимфома

13 крупноклеточная стандартно? лечение, ремиссия

анаплазированная -

лимфома (В-тип)

14 мать больного +

15 крупноклеточная + стандартное лечение, ремиссия

17 анаплазированная +

лимфома (В-тип)

16 мать больного +

18 мать больного +

19 лимфогранулематоз -

* Детекция ВЭБ проведена методом полимеразной цепной реакции с использованием праймеров, комплементарных участку гена ЕВЫ АЗ-С

1.2. Полиморфный элемент гена Е1ША -ЗС вируса Энштейна - Барр

Различия нуклеотидных последовательностей изучаемого участка гена ЕВЫА-ЗС зарегистрированы при электрофоретическом анализе на основе множественных фрагментов ДНК, синтезированных 2-х раундах НЦР с использованием внешних и внутренних праймеров, и представлены на рис. 2. В образце ДНК пациента №8, в отличие от остальных пациентов, зарегистрирован

индивидуальный продукт ПЦР 153 п.н. (рис.2), что свидетельствует о циркуляции в крови пациента клеток одного опухолевого клона, являющегося носителем индивидуального клона вируса. Результаты секвенирования данного фрагмента ДНК ВЭБ показали полное совпадение его нуклеотидной последовательности с «классической» последовательностью гена EBNA -ЗС, представленной в базе данных Gene Bank NID g59074.

«s—■ 227- - *

153-

4HF

6 M

-587 -458 -434

■288

KPPt Ш • 257/267

-174

Рис. 2. Электрофоретический анализ продуктов пе$1е<1-ПЦР. Слева указаны

позиции амплифицированных фрагментов ДНК 227 п.н. и 153 п.н., справа -

размеры фрагментов маркерной ДНК (дорожка «М»). На рисунке обозначены

номера дорожек, номера пациентов соответствуют номерам в табл. 1:

дорожка 1 - пациент №8, праймеры 1, 2 до трансплантации;

дорожка 2 - пациент №8, праймеры 3,4 до трансплантации;

дорожка 3 - пациент №8, праймеры 1,2 после трансплантации;

дорожка 4 - пациент №8, праймеры 3,4 после трансплантации;

дорожка 5 - пациент №4, праймеры 3,4;

дорожка 6 - пациент №6, праймеры 3, 4. Для проб, не указанных на рисунке, но приведенных в табл. 1, при ПЦР для фрагмента 153 п.н., получены аналогичные результаты, показанные для проб №5 и №6.

Объяснение полученного результата подтверждается тем фактом, что пациент №8 - единственный из обследованной группы больных, у которого не наблюдалась ремиссия после проведения стандартной терапии по схеме ВРМ-ЫНЬ-90. Это обстоятельство явилось основанием для проведения этому больному аутологичной трансплантации костного мозга, после которой была достигнута ремиссия, продолжающаяся длительное время. После достижения ремиссии ДНК из клеток периферической крови пациента №8 вновь была исследована на наличие индивидуального фрагмента размером 153 п.н. При этом индивидуальный продукт

ПЦР в ДНК пациента №8 не обнаружен; как и у других пациентов зарегистрированы множественные фрагменты ДНК вируса (рис. 2).

Обобщая полученные данные, можно заключить, что в пределах гена EBNA - ЗС находится участок повышенной вариабельности генома ВЭБ, который ранее не был зарегистрирован. Различия нуклеотидных последовательностей в рамках этого участка ДНК вируса позволяют регистрировать множественость линий ВЭБ в клетках периферической крови пациентов, что соответствует независимому инфицированию соответствующих клонов B-лимфоцитов. Наличие в клетках периферической крови только одного варианта нуклеотидной последовательности полиморфного участка генома ВЭБ может свидетельствовать о существовании моноклонапьного ВЭБ в клетках циркулирующей опухоли. Подобный методический прием, использующий для доказательства моноклонального происхождения опухолевых клеток анализ однородности ДНК ВЭБ в области концевых повторов, был описан ранее (Raab - Traub, 1986, OshimaK., et.al. 1998).

Полученные в нашем исследовании результаты могут использоваться в диагностических целях с целью определения моно- и поликлонального характера опухоли. Корреляция между наличием индивидуального продукта ПЦР ДНК вируса Эпштейна - Барр и неэффективностью лечения B-клеточной лимфомы по стандартному протоколу BFM-NHL-90 может использоваться в клинической практике для показаний радикального метода лечения данного заболевания.

1.3. Интеграция ретровируса типа D Мейзона-Пфайзера в хромосомы человека

Приготовление и анализ библиотеки ДНК человека, содержащей фрагменты LTR MPMV.

В работе использовали четыре образца ДНК больных B-клеточной Беркитт-подобной лимфомой, для каждого из образцов получены два набора амплифицнрованных фрагментов ДНК (соответствующих расщеплению хромосомной ДНК рестриктазами EcoRJ и Rsal), предположительно содержащих элементы генома MPMV. Для амплификации фрагментов ДНК использован метод селективной ПЦР-супрессии. Схема ПЦР-супрессии и положение праймеров, использованных в работе, приведены на рис. 3.

Результаты жесткой гибридизации по Саузерну (в качестве зонда использовали полноразмерный LTR MPMV) полученных продуктов амплификации показали наличие в анализируемой ДНК обоих LTR MPMV, при этом размеры основных LTR-содержащих фрагментов по исследуемым четырем образцам ДНК соответствуют 100-600 п. н. (Рис. 4). Можно предполагать, что интегрирована полная копия вирусного генома, поскольку гибридизационный анализ выявил наличие в ДНК всех больных обоих LTR MPMV.

Полученные продукты амплификации разделяли электрофорезом в легкоплавком агарозном геле, злюировали материал из областей, соответствующих примерным размерам LTR-содержащих ДНК, реамплифицировали с помощью Pfu-полимеразы и клонировали в плазмиде pGEM-3Z/19. Полученную библиотеку фрагментов ДНК анализировали мягкой гибридизацией, в качестве зонда использовали [a-32]dATP- меченный полноразмерный LTR вируса MPMV; 115 положительных клонов (из 1100) реамплифицировали и секвенировали. В результате исследований обнаружено четыре клона (№ 51, №19, №16-20, №23),

содержащих последовательность 1ЛТ* МРМУ и прилежащий фрагмент ДНК человека (от больного №1, 5*-Ь"Ш, Яха! - фрагмент); остальные клоны содержали неспецифические последовательности.

А.

Б.

5LTR

промрус

T7Noll I

5' LTR

LTR

провирус

В.

3' LTR

4- М5 -ИЗ

-AU5-420

„_ MJS-4H

| T7No)l

4 \<м/

Рис. 3. Селективная амплификация прилегающих к ЬТЯ фрагментов геномной ДНК. А. Общая схема провируса, интегрированного в геном. Показаны праймеры для 5' ЬТК (Б) и 3' ЬТЯ (В) вируса Я -сайт рестрикции; Т7№>Й -супрессионные адаптеры.

1234 5 6 7 S 9

Рис. 4. Гибридизационный анализ продуктов селективной амплификации, содержащих фрагменты ДНК человека и вируса Мейзона-Пфайзера. В качестве зондов использованы [а-32] dATP-мечениые 5'- и 3' - LTR вируса MPMV. Дорожки 1-4, 5'LTR; 5-8,3'-LTR;

1,5 - больной 1; 2,6 - больной 2; 3,7 - больной 3; 4,8 - больной 4; 9 - маркер длины ДНК "1 kb DNA Ladder".

Анализ клона 51, содержащего последовательность LTR MPMV и прилежащий фрагмент ДНК человека.

В результате определения нуклеотидной последовательности клона 51 обнаружена вставка длиной 78 нуклеотидов (Рис. 5), содержащая 50-нуклеотидный фрагмент, идентичный участку между нуклеотидами 112487 и 112438 клона HCIT542B22 17-ой хромосомы человека. Этот участок 17 хромосомы содержит ген, кодирующий белок НСА-66, который является антигеном, ассоциированным с гепатоцеллюлярной карциномой человека [асс. NP_060898].

Для подтверждения наличия элемента MPMV в 17-ой хромосоме больного №1, была проведена nested-ПЦР соответствующей исходной ДНК с праймерами, гомологичными прилежащим участкам 17-й хромосомы человека и 5'-LTR MPMV, которые не совпадали с праймерами для селективной ПЦР. Электрофоретический анализ показал наличие ожидаемого продукта длиной 85 п. н (рис. 6). При его расщеплении рестриктазой Spei образуются продукты длиной 57 п.н. и 32 п. н. (рис.5В), что соответствует ожидаемому результату, т. е. подтверждено наличие вставки MPMV в анализируемой человеческой ДНК.

Полученные результаты доказывают, что ДНК вируса MPMV интегрирована в 17-й хромосоме у одного из четырех обследованных больных B-клеточной лимфомой. По-видимому, в инфицированных клетках могут существовать и другие участки интеграции вируса MPMV, выявление которых потребовало дальнейших исследований.

1 aggtact(^cagacgttcatagttgnactagtccctctaocccatgct№a:g(2i;/ggi3/^ar^/c/rggcc/c/gr//gc/c/agcr

ehr ПI * AUS -US

91 ccatgítalgaaMaagatggcglallíccíggltcííctccgícttactl

AUS-HH

AUS US

СТО ТГОСС 12 к о CAGAACCO

--1

2Í+4 53t4

В.

Chr 17 1 Spei

лсатгслтаоттотт а стас тсс стс тлсссс атостстассоастссатоат ТССЛАОТ ATCAACAAT CATC lAOGOAGATGCOOTACCAGATOOCTGACCTACTA

Рис. 5. А. Участок интеграции генома МРМУ в 17-ой хромосоме: показаны курсивом последовательности генома вируса, прямым - последовательности 17 хромосомы, жирным - перекрывающиеся последовательности. В. Последовательности продукта Ыез1е<1-РСК (85 п н.), показаны сайт рестрикции и длины &ре!-фрагментов.

Рис. 6 Электрофоретический анализ продуктов ПЦР ДНК больного 1 на наличие в 17 хромосоме 5'1ЛИ МРМУ. 1,2,3, - продукты амплификации с праймерами СЬг-17 А115-494; 4,5,6, - продукты амплификации с праймерами СЬг-17-1 и Аи-443 1,4 - ДНК больного №1; 2,5 - контрольная ДНК из периферической крови; 3,6 - контрольная ДНК из плацнты. М - маркер рШМв/МвР!.

I 2 3 М 4 5 6

»э ж

242 100 147

1ц I

^^^ ^^^

А7 * ■--

Компьютерный анализ сайта интеграции MPMV в хромосомы человека.

Для определения хромосомы, в которую произошла интеграция генома MPMV, проводился анализ последовательностей посредством поиска по GenBank с помощью нуклеотид - нуклеотидного BLAST. Были проанализированы 4 последовательности ДНК, обозначенные как Seq_19, Seq 23, Seq_16-20 и Seq_51, содержащие отрезок LTR интегрированного генома MPMV и фланкирующий его участок геномной ДНК человека.

Длина каждой проанализированной последовательности, номера хромосом, в которые произошла интеграция, их описание по GenBank представлены в табл. 3

Для двух последовательностей (Seq_ 16-20 и Seq_51) сайты интеграции провируса в геном человека были определены однозначно и локализовались в 10 и 17 хромосомах человека соответственно Анализ Seq_19 и Seq_23 показал, что вставки, вероятнее всего, произошли в 7 и 2 хромосомы, соответственно, однако статистически значимые, но значительно более короткие и менее точные совпадения последовательностей имелись и на других хромосомах.

Для определения точки разрыва LTR вируса MPMV при его интеграции в геном человека применен попарный нуклеотидный BLAST Сравнивались анализируемые последовательности с геномом MPMV из GenBank (accession Ml 2349, gi:334702).

Таблица Ъ. Характеристика анализируемых последовательностей.

Последователен ость Хромосо ма Данные Gen Bank Координаты по BLAT Примечания

номер длина Клон /gi Начало / конец

Seq_19 709 п.о. 7qU.22 RP11-421 N1015778 772 65977828 65978262 2 замены длиной 7 и 18 и.о.; совпадения и на других хромосомах

Seq_23 710 п.о. 2q12.3 RP11- 368F12 15145583 106429108 106429302 Присутствуют векторные последовательности; совладения н на других хромосомах

Seq_16-20 291 п. о. 10q26.13 RP11- 99L6 14970798 124823422 124823521

Seq_51 89 п.о. 17qll.2 HCIT542B 22 3169206 30233706 30233756

Для последовательностей Seq_19, Seq_ 16-20 и Seq_23 точка разрыва LTR MPMV локализовалась внутри участка U3. Для Seq_5I точка разрыва последовательности провируса, возникшая при интеграции в геном человека, совпадала с началом U3, этот LTR остается полностью функционально активным. Нуклеотидные последовательности участков разрыва LTR вируса для анализируемых последовательностей представлены на рис. 7.

A. Seq_19 Chr. 7 U3 MPMV

485 GAGCATCTTTTCATGTG tgtcttggc ctctgtttgctc 522

B. Seq_23 Chr. 2 U3 MPMV

101 ACCTCACGTGATCCTCC tgtcttggcctetgtttgctc 64

C. Seq_ 16-20 U3 MPMV Chr. 10

39 tcttggcctctgtttgctc cctaca GTGAGTCGTATT 75

D. Seq_5I Chr. 17 U3MPMV

43 TACTAGTCCCTCTAC cccatgctc taccgact ggat 79

Рис. 7 Участки интеграции генома вируса Мейзона-Пфайзера в хромосомы человека. Заглавными буквами показаны последовательности генома человека, курсивом - генома вируса, жирным - перекрывающиеся последовательности. Номера иуклеотидов указаны по длине вставки.

Поскольку анализируемые участки 2, 7, 10 и 17 хромосом с функциональной точки зрения не были охарактеризованы, проводился поиск

вероятных кодирующих последовательностей ДНК человека в областях, прилегающих к сайту интеграции провируса MPMV. С этой целью были проанализированы нуклеотидные последовательности указанных участков программой GenScan. Предсказанные программой полипептиды использовались для поиска в GenBank соответствующих им мРНК, описанных ранее. Результат анализа участков 10 хромосомы (для Seq_16-20) оказался малоинформативным, не было найдено известных мРНК, содержащих предсказанные программой экзоны. Точка интеграции вируса Мейзона-Пфайзера картируется внутри интрона, предсказанного компьютерной программой гена NT 008902-28. Результаты анализа участков 7-й (для Seq_19) и 2-й (для Seq_23) хромосом, прилегающих к точке встраивания MPMV, также оказались малоинформативными. В соответствии с Human Working Genome Draft, интеграция провируса в 7 хромосому произошла в районе предполагаемого гена NT_007758.148, интеграция во 2 хромосому произошла в области предполагаемого гена NT 005224.5.

Наиболее интересные результаты были получены при анализе сайта интеграции генома ретровируса Мейзона-Пфайзера в 17 хромосому (Seq_51) Программой GenScan на расстоянии около I 5 тыс. нуклеотидов выше точки интеграции был предсказан инициаторный экзон, а в непосредственной близости от точки интеграции внутренний экзон (рис. 8).

104M-WUT4

маю - iiKM тяг ■ ною

и»» ■ mm iaui ■ tun

«I

OMU-ikms

Рис. 8. Интрон-экзонная структура гена НСА-66 со вставкой MPMV Координаты даны по GenBank (Chr. 17 clone HCIT542B22, accession AC004253).

При сравнении полученного пептида с данными GenBank (транслированный BLAST) была найдена мРНК (GenBank accession AF244135, gi:7670835), соответствующая белку НСА-66 - hepatocellular carcinoma-associated antigen, т.е. антиген, ассоциированный с гепатоцеллюлярной карциномой (GenBank accession NP 060898, gi'8923722). По найденной мРНК стало возможным найти остальные экзоны гена НСА-66 на 17 хромосоме. При этом оказалось, что между экзонами, предсказанными GenScan, имеется еще один экзон, а экзон, расположенный в области 114,3-114,4 килобаз является внутренним, а не инициирующим.

На момент написания данной работы функция белка НСА-66 (GenBank accession NM 060898, SwissProt accession Q9NYH9) еще не была охарактеризована. По данным SwissProt (http://www expasy.ch/sprot/) белок НСА-66 (597 аминокислот) содержит 5 НАТ-повторов по 32-34 остатка и состоит из двух доменов длинами 418

и 175 аминокислотных оснований, соединенных коротким линкером. Был проведен поиск гомологичных белков, при этом оказалось, что значительной гомологией с НСА-66 обладают белок crn_drome Drosophila melanogaster, crn-белки других видов, cm-подобный белок человека, и swf4 Schizosaccharomyces pombe.

Имеющиеся литературные данные дают основание полагать, что cm-белки и белок swf4 дрожжей S. pombe участвуют в регуляции клеточного цикла и сплайсинге пре-мРНК (Zhang К. 1996), а участок белка НСА-66 (остатки 392-597) фигурирует в описании делеции у больных нейрофиброматозом (Jenne D.E., 2000). Функции гомологичных белков дают основание полагать, что белок НСА-66 может участвовать в регуляции клеточного цикла, т е. является клеточным онкогеном.

Поскольку интеграция генома MPMV произошла в области интрона перед экзоном гена НСА-66, вероятно, кодирующие последовательности гена НСА-66 не повреждены. Возможно, мощные энхансерные и промоторные элементы в составе LTR интегрированного провируса приводят либо к гиперэкспрессии НСА-66, либо к образованию новой мРНК, продукт трансляции которой не имеет большей части второго домена. Изменение функции предсказанного белка могло иметь влияние на регуляцию клеточного цикла, однако, для обоснования подобных предположений необходимы дальнейшие исследования функций белка НСА-66. Полученные результаты согласуются со схемой ретровирусного онкогенеза и являются существенным доводом в пользу возможного участия ретровируса типа D Мейзона-Пфайзера в этиологии Беркитг-подобной лимфомы.

1.4. Детекция элементов генома вируса папилломы человека типа 16 в клетках опухолей и периферической крови пациентов, страдающих раком мочевого пузыря.

В рамках данной работы была проанализирована группа из 57 пациентов с опухолями органов мочеполовой системы, которых исследовали на наличие элементов генома ВПЧ - 16 в клетках периферической крови методом ПЦР. При использовании праймеров, специфичных к участку гена Е6 ВПЧ-16, соответствующий продукт ПЦР размером 209 п.н. обнаружен в трех образцах ДНК пациентов, страдающих раком мочевого пузыря (рис. 9). Частота ВПЧ-инфекции среди пациентов с опухолями мочевого пузыря составляет 27,2%, что согласуется с литературными данными (Griffits T.L., Mellon J.K., 2000). В ДНК, выделенной из клеток крови доноров с первичными опухолями другой локализации, вирусные последовательности не зарегистрированы. При использовании пары праймеров, специфичных для области гена LI ВПЧ-16, соответствующий продукт ПЦР размером 300 п.н., не зарегистрирован во всех исследуемых образцах ДНК Присутствие в исследуемых образцах крови только ДНК онкогена Е6, но не L1, вероятно, означает, что в крови пациентов циркулируют опухолевые клетки, содержащие элементы генома ВПЧ, но не вирусные частицы или клетки в состоянии литической или лизогенной инфекции.

Для подтверждения присутствия ВПЧ-16 в опухолевых клетках мы провели анализ операционного материала опухолей мочевого пузыря методом гибридизации in situ В качестве зондов были использованы олигонуклеотиды, специфичные к ДНК гена LI ВПЧ - 16. Результаты гибридизационного анализа приведены на рис. 10, из которого следует, что у больных, являющихся носителями вируса, гибридизационный сигнал обнаружен в ядрах опухолевых клеток.

и u is »»

Рис. 9. Электрофоретический анализ продуктов ПЦР . 11, 15, 19 - ДНК пациентов с раком мочевого пузыря, содержащие последовательность гена Е6 ВПЧ-16 (специфический продукт 209 п.н.). 13, 20 - ДНК пациентов с раком мочевого пузыря, не содержащие фрагментов гена Е6 ВПЧ-16. т - маркер длины ДНК (риС18/М8Р1).

t *

4 * " г * t

* * ,

Рис.10. Гибридизация in situ среза биопсийного препарата переходно-клеточного рака мочевого пузыря. Темные ядра - положительные гибридизационные сигналы.

Результаты гибридизации показали наличие полного генома ВПЧ-16 в инфицированных клетках эпителия мочевого пузыря и, вероятно, в клетках на

ранних стадиях образования опухоли, которые зарегистрированы в биопсийных препаратах. Когда в крови происходит циркуляция метастазируюших или некротических клеток опухоли, с интегрированными копиями онкогенов ВПЧ, они могут быть зарегистрированы методом ПЦР Полученные в настоящем исследовании данные указывают на возможную существенную роль ВПЧ в развитии рака мочевого пузыря и позволяют считать инфицирование ВПЧ-16 фактором риска развития этого заболевания.

2. Исследования элементов генома клеточного происхождения.

2.1. Идентификация аллелей PLA1 и PLA2 гена СРЗа методом ПЦР.

Интегрины являются трансмембранными гликопротеиновыми рецепторами клеточной поверхности, осуществляющими связь клетки с матриксом, а также проведение внутриклеточных сигналов, опосредующих влияние матрихса на экспрессию генов, движение, пролиферацию, дифференцировку, апоптоз и другие функции клетки. Ген GP3a (1TGB3) кодирует РЗ субьединицу интегринового рецептора (GP3a) и локализован в 17q.21.32 Полиморфизм ЬеиЗЗРго обусловлен транзицией цитидилового нуклеотнда на тимидиловый в третьем экзоне, что приводит к появлению аллельного варианта PL-A2 гена GP3a.

Электрофоретический анализ продуктов рестрикции амплифицированного фрагмента ДНК гена GP3a позволяет идентифицировать аллели PU и PLA2 в генотипе пациента на основе длин рестрикционных фрагментов. Результаты электрофоретического анализа продуктов рестрикции амплифицированного участка гена GP3a приведены на рис. 11.

175 Ш

120 Ж

é&A

295

12 3456789

Рис. 11. Электрофоретический анализ продуктов рестрикции После обработки эндонуклеазой амплифицированного полиморфного участка гена GP3a (384 и н) фрагменты ДНК аллеля PLA1 имеют размер 295 и 83 п.н., аллеля PLA2 - 175. 120 и 83 п.н. 1 - гомозигота PLA2PLA2; 2,4, 7, 8 - гетерозиготы PLA1PLA2; 3,5,6 -гомозиготы PLA1PLAI.

2.2. Первичный скрининг распределения генотипов гена GP3A среди пациентов с урогенитальными злокачественными опухолями.

Для изучения аллельного распределения гена GP3A был определен генотип гена GP3A у 75 пациентов с раками органов мочеполовой системы разной локализации В табл. 4 приведены абсолютные и относительные частоты Генотипов гена GP3A у пациентов, в группе контроля и в популяции Анализ наблюдаемых и

ожидаемых частот (метод х2) показал, что среди здоровых доноров группы контроля частота встречаемости генотипов гена вРЗА статистически не отличалась от таковой в популяции (р=0.85).

Среди исследуемой группы пациентов с урогенктальными опухолями распределение генотипов статистически значимо (р<0,05) отличалось от контрольной группы и популяции в целом. Гомозиготный генотип РЬА!А1 выявлен у 44 больных (58,7± 3,1(%), 95% ДИ 54,2-0,1(%)); гетерозиготный генотип Р1.А1А2 зарегистрирован у 29 пациентов (38,7 ± 5,0(%), 95% ДИ 33,5-42,6 (%)); гомозиготный генотип Р1.А2А2 определен у 2 пациентов (2,6±5,2 (%), 95% ДИ 0-11(%)) Анализ наблюдаемых и ожидаемых частот (метод хг) показал, что распределение генотипов гена йРЗА среди пациентов статистически значимо отличается от популяционного распределения (р<0,05), а относительный риск развития раковых заболеваний у носителей гетерозиготного генотипа в данной группе исследования увеличен в 2 раза по сравнению с популяцией.

Таблица 4. Аллельное распределение гена йРЗА среди пациентов с опухолями органов мочеполовой системы, в группе контроля и в популяции_

ГРУППА А1А1 N % А1А2 N % А2А2 N % ВСЕГО N % Р

Пациенты 44 58.7 29 38.7 2 2.6 75 100 <0,05

Контроль 37 74.0 12 24.0 1 2.0 50 100 0,85

Популяция ЫА 76.0 ЫА 22.0 ЫА 2.0 ЫА 100 ИА

N - число пациентов; Р - достоверность различия между распределением генотипов в группе и в популяции; ЫА - неприменимо.

2.3. Анализ распределения генотипов гена (1РЗА среди пациентов в зависимости от первичной локализации опухоли.

Данные анализа распределения генотипов гена ОРЗА среди пациентов разных групп в зависимости от первичной локализации опухоли приведены в табл. 3. 5

Как видно из табл. 5, в группах больных раком почки и/или мочеточника и раком молочной железы или яичников распределение генотипа СРЗА статистически не ^

отличается от популяционного (р=0,86 и р=0,63, соответственно). Внутри исследуемых групп частота генотипа РЬА1А1 статистически выше частоты генотипа РЬА1А2 (р<0,05).

В группе пациентов с РМП и РПЖ распределение генотипов гена ОРЗА статистически достоверно отличается от популяционного распределения (р<0,05). В этих группах значительно повышается пропорция лиц с гетерозиготным генотипом РЬА1А2. Внутри группы частота РЬА1А1 генотипа статистически отличалась от частоты генотипа РЬА1А2 (р<0,05). В группах РМП и РПЖ частота генотипа РЬА1А2 выше (р<0,01), а частота генотипа РЬА1А1 достоверно ниже (р<0,05), чем в популяции.

Результаты исследований показывают, что носительство аллеля Р1.А2 гена йРЗА у пациентов РПЖ и РМП является предрасполагающим генетическим фактором к развитию этих заболеваний. При этом у гетерозиготных носителей аллеля Р1Л2 риск развития РМП увеличен в 9,5, а РПЖ - в 2,8 раза. Учитывая распространение заболеваемости РПЖ среди мужчин старшего и среднего возраста, был проведен более подробный анализ и оценка достоверности различий аллельного распределения гена СгРЗА среди пациентов с РПЖ.

Таблица 5. Зависимость аллельного распределения гена йРЗА от первичной

ГРУППА и количество больных в группе ГЕНОТИП (В %) Р

А1А1,% А1А2,% А2А2, %

Рак почки и мочеточника, п=12 75 ±37 95% ДИ 4394 25 ±37 95% ДИ 5-57 0 <0,8

Рак мочевого пузыря, п=11 27,2± 16 95% ДИ 2770 72,8± 26 95% ДИ 5365 0 <0,05*

Рак молочной железы и яичников, п=19 73,7 ±25 95% ДИ 4889 21,0± 19 95% ДИ 1152 5,3± И 95% ДИ 021 <0,5

Рак предстательной железы, п=33 51,0± 20 95% ДИ 2763 45,5± 19 95% ДИ 30-65 3,5± 10 95% ДИ 0-21 <0,05*

Популяция 76 22 2 NA

Р - достоверность различия между распределением генотипов в группах исследования и в популяции; NA - неприменимо.

2.4. Анализ и оценка достоверности различий аллельного распределения гена GP3A у больных раком предстательной железы группы контроля и в популяции.

Следующий этап работы связан с изучением роли аллеля PL-A2 гена GP3a в развитии рака предстательной железы (РПЖ). В табл. 6 приведены абсолютные и относительные частоты встречаемости генотипов GP3A у пациентов РПЖ, в группе контроля и в популяции.

Анализ наблюдаемых и ожидаемых частот (метод х2) показал, что среди пациентов группы контроля частота встречаемости аллелей гена GP3A статистически не отличалась от таковой в популяции (р=0,85) Поэтому статистический анализ пациентов РПЖ проводился по сравнению с популяционными частотами, как статистически более корректными.

Как показано в табл. 6, у 52 пациентов РПЖ, что составило 57,8 ±3,3 (%), (95% ДИ 54,5-0,1(%)) был выявлен генотип PLA1A1; генотип Р1А1А2 у 34

пациентов, 37,8 ± 5,()(%), (95% ДИ 32,8-42,8(%)) и генотип Р1А2А2 у 4 больных, 4,4 ± 5,5(%), (95% ДИ 0-11(%)). Анализ наблюдаемых и ожидаемых частот (метод х2) показал, что частота генотипов гена йРЗА у больных РПЖ статистически значимо отличалось от такового в популяции (р< 0,01).

Таблица 6. Алпелъное распределение гена GP3A при РПЖ в группе контроля и в популяции.

ГРУППА А1А1 N % А1А2 N % А2А2 N % ВСЕГО N % Р

РПЖ 52 57.8 34 37.8 4 4.4 90 100 <0,01

контроль 22 73.3 7 23.3 1 3.3 30 100 0,85

Популяция NA 76.0 NA 22.0 NA 2.0 NA 100 NA

N - число пациентов; Р - достоверность различия между распределением аллелей в группе и в популяции; ЫА - неприменимо.

2.5. Анализ аллельного распределения гена СРЗА у больных РПЖ в зависимости от стадии заболевания.

Результаты анализа распределения генотипов йРЗА среди пациентов с РПЖ в зависимости от стадии заболевания представлены в табл. 7.

Таблица 7. Аллельное распределение гена вРЗА в зависимости от стадии

РПЖ.

ГРУППА А1А1,% А1А2,% А2А2, % Р

1 группа T1-2N0M0 67± 18 95% ДИ 49-95 33± 18 95% ДИ 15-51 0 <0,25

2 группа T3-4NxM0 50± 19 95% ДИ 31-69 40± 19 95% ДИ 23-59 10± 12 95% ДИ 2-26 <0,01

3 группа T3-4NxM+ 57± 18 95% ДИ 37-74 40± 19 95% ДИ 23-59 3± 8 95% ДИ 0-17 <0,05

Популяция 76 22 2 NA

Р - достоверность различия между распределением генотипов в группе и в популяции; ИА - неприменимо.

В группе больных с локализованным РПЖ частота генотипа Р1А1А1 достоверно выше частоты генотипа Р1А1А2 (р=0,01), а распределение генотипов статистически не отличается от популяционного (р=0,25). В группах больных с местно-распространённым и метастатическим РПЖ распределение генотипов GP3A статистически отличается от популяционного распределения (р<0,05).

Гетерозиготный генотип PIA1A2 (р=0,02) встречается достоверно чаще, а генотип Р1А1А1 (р=0,01) реже, чем в популяции. Среди пациентов анализируемых групп частота генотипа PIA1A1 достоверно не отличается от частоты генотипа Р1А1А2 ( р=0,44 и р=0,2).

Полученные результаты представляют статистически достоверное увеличение частоты встречаемости гетерозиготного генотипа PLA1A2 гена GP3A в группах больных инвазивным и метастатическим РПЖ, что может свидетельствовать о предрасположенности к развитию злокачественных форм РПЖ у носителей аллеля PLA2.

2.6. Анализ аллельвого распределение гена GP3A у больных РПЖ в зависимости от группы риска.

, Для изучения распределения генотипов гена GP3A у пациентов с разными

* группами риска, все обследованные больные были разделены на 4 стандартных

группы в соответствии с критериями 3-й Международной Консультации по Раку Предстательной Железы (Париж, 2002); результаты анализа приведены в табл. 8.

Таблица 8. Зависимость аллельного распределения гена GP3A от группы

и в

т В группах низкого и умеренного риска выявленное распределение генотипов

гена йРЗА статистически не отличается от популяционного (р=0,86 и р=0,63); частота генотипа Р1А1А1 достоверно выше частоты генотипа Р1А1А2 (р<0,05).

У пациентов с высоким и очень высоким риском распределение генотипов меняется и становится отличным от популяционного распределения (р<0,005). Внутри групп частота генотипа Р1А1А1 статистически не отличается от частоты генотипа Р1А1А2 (р=0,73 и р=0,62, соответственно). Соответственно, в этих группах риска частота гетерозиготного генотипа РЬА1А2 достоверно выше (р<0,05), а

риска по РПЖ.

ГРУППА (и количество больных) А1А1,% А1А2,% А2А2, % Р

Низкий риск, п=12 75± 37 95% ДИ 4394 25± 37 95% ДИ 557 0 <0,8

Умеренный риск, п=21 71 ±25 95% ДИ 4889 29± 25 95% ДИ 1152 0 <0,6

Высокий риск, п=23 48±26 95% ДИ 2770 43± 26 95% ДИ 2365 9± 16 95% ДИ 128 <0,005

Очень высокий риск, п=34 50± 20 95% ДИ 2763 44± 20 95% ДИ 3065 6± 11 95% ДИ 0-21 <0,005

Популяция 76 22 2 NA

Р - достоверность различия между распределением генотипов в ipynne

популяции; NA - неприменимо.

частота гомозиготного генотипа РЬА1А1 ниже (р<0,005), чем в популяции. Учитывая полученные результаты, можно полагать, что наличие гетерозиготного генотипа РЬА1А2 у пациентов РПЖ является предрасполагающим фактором к быстрой прогрессии заболевания.

2.7. Аллельное распределение гена <?РЗа в группах беременных женщин с гестозами и нарушениями состояния фетоплацентарной системы (ФПС)

В табл. 9 приведены абсолютные и относительные частоты генотипов гена ОРЗа среди пациенток, в группе контроля (физиологическое течение беременности) и в популяции.

Таблица 9. Аллельное распределение гена вРЗа 3 при гестозах и патологии ФПС, в группе контроля и в популяции.

ГРУППА А1А1 N % А1А2 N % А2А2 N % ВСЕГО N % РЬА2

Беременные с гестозами 97 78.2 26 21.0 1 0.8 124 100 11,3

Контроль 37 74.0 12 24.0 1 2,0 50 100 14,1

Популяция ЫА 76.0 1ЧА 22,3 ЫА 1.7 ИА 100 13,1

Примечание: N - число пациентов, ЫА - неприменимо

Как следует из табл. 9, в группах беременных с гестозами и патологией ФПС частоты генотипов РЬА1А1, РЬА1А2 и РЬА2А2 статистически не отличаются от соответствующих частот в популяции (р=0,8, метод хг)- В контрольной группе частота встречаемости генотипов гена йРЗа статистически не отличается от популяционной (р=0,85). В дальнейшем, статистический анализ частот генотипов среди пациенток проводился в сравнении с популяционными частотами, как статистически более корректными.

2.8. Анализ распределения аллелей РЬА1 и Р1А2 в разных группах беременных с гестозами и патологией фетоплацентарной системы.

Для анализа аллельного распределения гена йРЗа среди женщин с гестозами и/или патологией ФПС, все пациентки были разделены на пять групп исследования Данные, приведенные в табл. 10, показывают, что в группе пациенток с чистым гестозом частота гетерозиготного генотипа РЬА1Р1,А2 достоверно не отличается от частоты соответствующего генотипа в популяции (р= 0,85}.

В 1-ой группе пациенток с чистым гестозом без патологии ФПС частота аллеля РЬА2 составила 8,8%, что достоверно отличается от частоты аллеля РЬА2, зарегистрированной во 2-ой группе пациенток с патологией ФПС (р<0,05). В группе

пациенток с экстрагенитальной патологией, на фоне которой развивался сочетанный гестоз в поздние сроки беременности, частота аллеля РЬА2 (8,3%) достоверно отличается от частоты данного аллеля в популяции (р<0,05). В подгруппе пациенток с сочетанным гестозом без нарушений состояния ФПС носителей аллеля РЬА2 зарегистрировано не было. Среди пациенток с сочетанным гестозом и патологией ФПС (4-я группа) и в 5-ой группе пациенток с патологией ФПС без гестоза частота аллеля РЬА2 достоверно не отличается от таковой в популяции (р= 0,8).

Таблица 10. Распределение носителей аллеля РЬА2 по группам исследования

№ Группа сравнения Количество Количество носителей Частота

пациентов в аллеля РЬА2 в группе аллеля

группе абс. % РЬА2,%

«Чистый» гестоз, 55 12 21,8 11,8

всего:

1 без патологии ФПС 34 6 17,6 8,8*

2 с патологией ФПС 21 6 28,6 16,7

Сочетанный гестоз, 48 8 16,7 8,3»

всего:

3 без патологии ФПС 30 0 О" о*«

4 С патологией ФПС 18 8 44,4 22,2

5 Нарушения в ФПС без гестоза 21 7 33,3 16,7

Примечание: * - данное значение достоверно отличается от частоты аллеля в популяции (р<0,05), ** - данное значение достоверно отличается от соответствующих величин в других группах и в популяции (р <0,01).

Результаты анализа распределения генотипов гена йРЗа среди пациенток показывают, что при гестозе наличие в генотипе женщины аллеля РЬА2 коррелирует с предрасположенностью к развитию фетоплацентарной недостаточности, которое сопровождается задержкой развития плода Причем вероятность этой патологии повышается на фоне сочетанного гестоза, что позволяет прогнозировать нарушения состояния ФПС на фоне экстрагенитальной патологии у матери.

2.9. Роль генотипов матери и плода в прогнозировании гестоза и .1 патологии фетоплацентарной системы.

В связи с важной ролью интегринов в процессах имплантации и развития плода было проведено исследование роли генотипа плода в развитии ■> фетоплацентарной недостаточности. В первую группу (п=35) вошли матери с

гомозиготным генотипом РЬА1РЬА1, вторую группу (п=14) составили носительницы аллеля РЬА2 гена ОРЗа. Результаты анализа распределения генотипов матери и ребенка по гену йРЗа среди пациенток с гестозом и/или ЗРП представлены в табл.11.

Как видно из табл. 11, совпадение генотипов матери и ребенка зарегистрировано в первой группе в 33, во второй - в 6 случаях, и сопровождается

развитием разных форм гестозов и ЗРП. При несовпадении генотипов в паре мать/ребенок (в 1-ой группе - 2, в 2-ой группе - 8 случаев) наблюдается только ЗРП без развития гестоза у матери. Таким образом, если мать и ребенок имеют одинаковый набор аллелей гена СРЗа, при беременности наблюдаются все варианты гестоза и ЗРП. Если мать и ребенок имеют разные генотипы, гестоз при беременности не развивается, но может развиваться ЗРП как следствие декомпенсированной плацентарной недостаточности.

Таблица 11. Распределение генотипов матери и ребенка среди пациенток с

№ Группа пациенток Генотип матери / ребенка

А1А1 А1А2

А1А1 А1А2 А1А1 А1А2 А2А2

1 Чистый гестоз с ЗРП 11 0 0 2 0

2 Чистый гестоз без ЗРП 3 0 0 2 0

3 Сочетанный гестоз с ЗРП 5 0 0 0 0

4 Сочетанный гестоз без ЗРП 2 0 0 0 0

5 ЗРП без гестоза 12 2 6 2 2

Всего (п=49) 33 2 6 6 2

2.10. Анализ полиморфизма гена алкогольдегидрогеназы 2 (АДГ2) у лиц с алкогольной патологией в московской популяции.

В нашем исследовании методом ПЦР был определен генотип гена АДГ? у 50 здоровых доноров (новорожденные москвичи) и 73 злоупотребляющих алкоголем лиц. Результаты электрофоретического анализа аллелей АДГ2-1 и АДГ2-2 приведены на рис. 12.

При анализе распределения генотипов АДГ2 среди пациентов с разными клиническим последствиями злоупотребления алкоголем (алкоголизм или цирроз печени) выявлены статистически значимые различия частот гомозиготных и гетерозиготных генотипов в группах исследования и в контроле. Частоты генотипов АДГ2-1/1 (0,65 и 0,36) и АДГ2-1/2 (0,32 и 0,61) в группе пациентов с алкогольной зависимостью и алкогольными циррозами имеют достоверные отличия (р=0,019), распределение генотипов АДГ2 в группах исследования приведены в табл. 12.

Таблица 12. Частоты аллелей и генотипов АДГ2 у лиц с разным клиническим

проявлением алкогольной интоксикации и в контроле (Московская популяция)

Группы сравнения Кол-во Частоты генотипов АДГ2 Частоты аллелей АДГ2

1/1 1/2 2/2 АДГ 2-Х АДГ 2-2

Здоровые доноры (контроль) 50 0.58 0.40 0.02 0.79 0.21

Алкогольная зависимость без цирроза печени Е 10.2 37 0.65 ** 0.32 ** 0 03 0.81 0 19

Алкогольный цирроз печени К70.3 * 36 0.36 0.61 0.03 0.67 0.33

*- частоты аллелей и генотипов в данной группе достоверно отличаются от таковых в контроле (р<0,05): р = 0,041 для частот аллелей, (х2 = 4,187; ), р = 0,035 для частот генотипов (*2 = 6,416; <¡{=2).

** - частоты генотипов 1/1 и 1/2 в данной группе достоверно отличаются от таковых среди пациентов с алкогольными циррозами: р = 0,019 (%2 - 8,087; с1Г=1).

242

•-- ТОО

- 1ST

- tío

чфЛт 07

- 29

12 3 * 9

Рис. 12. Электрофоретический анализ аллелей гена АДГ2 Для амплификации участка гена АДГ2 (3 экзон) использованы праймеры, сконструированные на основе программы Primer 3. (1) aat ctt tic tga аса g (forward); (2) tea ccc ctt ctc caa cac tc (reverse). Аллели АДГ2-1 и АДГ2-2 регистрировали на основе анализа длин рестрикционных фрагментов ДНК после обработки амплифицированного фрагмента гена ЛДГ2 (165 нп) эндонуклеазой MaelII (размеры рестрикционных фрагментов ДНК указаны слева). Фрагменты 98 и 68 н.п соответствуют аллелю АДГ2 -1, фрагменты 63, 36 и 68 н п. - аллелю АДГ2 -2

Дорожки 1 и 4 - гомозиготы АДГ2 - 1\1. Дорожка 2 - гомозигота ЛДГ2- 2\2. Дорожка 3 - гетерозигота АДГ2 - 1\2. Дорожка 5 - шкала молекулярного веса

Таким образом, отмечена негативная корреляция между частотой гетерозиготного генотипа аллеля АДГ2-2/1 и развитием алкогольной зависимости без цирроза печени (р = 0,03) у злоупотребляющих алкоглем лиц В группе пациентов с алкогольным циррозом отмечено достоверно значимое увеличение частоты гетерозиготных носителей аллеля АДГ2-2 (генотип АДГ2-1/2) (р<0,05).

2.11. Роль полиморфизма АДГ2 в развитии алкогольного цирроза печени в зависимости от инфицирования вирусами гепатитов В и С.

Следующий этап работы связан с изучением роли полиморфизма АДГ2 и инфицирования пациентов вирусами гепатитов В и С в развитии алкогольного цирроза печени. 36 злоупотребляющих алкоголем больных с циррозом печени и 28 пациентов с алкогольной зависимостью обследованы на маркёры инфицирования вирусными гепатитами В и С: НВУ-БЫД, апй-НВс, НВсАЬ, НВвА§, НСУ-Ю^А, апй-НСУ, НСУАЬ Частоты маркёров инфицирования вирусами гепатитов В и С среди больных клиническими проявлениями злоупотребления алкоголем приведены в табл 13, из которой следует что, по частоте инфицирования вирусами гепатита В и С группы злоупотребляющих алкоголем пациентов с разными клиническими последствиями достоверно не отличаются (р=0,80, точный критерий Фишера), но в данных группах выявлены достоверные различия регистрации активной вирусной инфекции и антител к вирусным антигенам среди групп пациентов с разными клиническими проявлениями злоупотребления алкоголем (р<0,05)

Среди пациентов с алкогольными циррозами определены подгруппы инфицированных (п =16) и неинфицированных (п = 20) циррозов печени. Результаты анализа распределения генотипов АДГ2 среди злоупотребляющих алкоголем лиц в зависимости от инфекции вирусами гепатита НВУ и/или НСУ приведены в табл 14.

Таблица 13. Частота инфицирования вирусами НВУ и/или НСУе группах больных с алкогольным циррозом печени и алкогольной зависимостью без цирроза._

ЧАСТОТА МАРКЁРОВ ИНФИЦИРОВАНИЯ % (14)

ГРУППЫ СРАВНЕНИЯ N Всего инфицирован о НВУ и\или НСУ Вирусные маркёры (НВУ-БЫА и/или НСУ-1ША) Антитела (НВсАЬ и\или НСУАЬ)

Алкогольный цирроз печени 36 44,4(16) 30,6(11) 19,4 (7)

Алкогольная зависимость без цирроза* 28 39,3(11) 18,0 (5) 32,1 (9)

*- в данной группе выявлены достоверные различия частот вирусных маркеров р< 0,05

Как видно из табл 14, в подгруппе пациентов с нсинфицированными алкогольными циррозами гетерозиготный генотип АДГ2-1/2 встречается достоверно чаще, чем при алкогольной зависимости, не отягощенной циррозом печени (р = 0,003, точный критерий Фишера), что указывает на роль АДГ2-2 как фактора риска развития цирроза печени на фоне хронической алкогольной интоксикации у злоупотребляющих алкоголем лиц.

Таблица 14. Частоты генотипов АДГ2 в группах пациентов с инфицированными и неинфицированными алкогольными циррозами и алкогольной зависимостью без цирроза (Московская популяция)_

Группы сравнения п Частоты генотипов АДГ2 (п)

1/1 1/2 2/2

Неинфицированный цирроз печени* 20 0.25 (5) 0.75(15) 0.00

Инфицированный (НВУ и/или НСУ) алкогольный цирроз печени 16 0.50(8) 0,44 (7) 0 06(1)

Алкогольная зависимость без цирроза печени ПО.2 37 0.65 (24) 0.32(12) 0.03 (1)

*- частоты генотипов в данной группе достоверно отличаются от частот соответствующих генотипов в группе алкогольной зависимости без цирроза (р=0,036; критерий Фишера).

Известно, что ндивидуальные и популяционные особенности потребления алкоголя в решающей степени определяются полиморфизмом генов системы метаболизма алкоголя, среди которых ключевое значение имеет аллель АДГ2-2, кодирующий синтез высокоактивной алкогольдегидрогеназы 2 (ОиеЛетогН, 2004). При сравнении двух групп пацентов с разными клиническими проявлениями хронической алкогольной интоксикации обнаруживаются различия относительного риска развития цирроза печени и алкоголизма в зависимости от генотипа пациентов.

Установлено, что относительный риск развития алкогольной зависимости при злоупотреблении алкоголем у гетерозиготных носителей АДГ2-1/2 снижен на 43% (ОР=0,53), а риск развития у них цирроза печени увеличен в два раза (ОР=1,91). Полученные данные хорошо согласуются с результатами мета-анализа, проведенного \Vitfield (1997), согласно которым аллель АДГ2-2 уменьшает риск развития алкогольной зависимости, но увеличивает риск развития алкогольного цирроза печени среди алкоголиков. Среди неинфицированных вирусами гепатита В и С пациентов генотип АДГ2-1/2 повышает риск развития цирроза печени на 75% (ОР=1,75) у злоупотребляющих алкоголем лиц. Вероятно, поражения печени в группе пациентов с неинфицированными циррозами обусловлены ацетальдегидом, который в 10-30 раз токсичнее этанола и оказывает влияние на клеточный метаболизм (Ютига, 2000). Таким образом, на фоне зарегистрированной относительно высокой частоты аллеля АДГ2-2 (21,0%) северный стиль потребления спиртных напитков в российской популяции закономерно приводит к развитию тяжелых поражений внутренних органов и, в первую очередь, печени.

Выводы.

1. Обнаружен элемент генома вируса Эчштейна - Барр в пределах гена EBNA-3C, вариабельность которого может использоваться для определения моно- и поликлонапьного инфицирования В-лимфоцитов пациентов с В-клеточными лимфомами. Моноклональный характер инфекции В-лимфоцитов определеляет более агрессивный характер опухоли и может служить показанием к радикальному методу лечения В-клеточной лимфомы.

2 Установлено, что геном MPMV интегрирован в 17 хромосому человека в локусе17я11.2 в непосредственной близости от 3 экзона гена НСА-66, белковый продукт которого ассоциирован с гепатоцеллюлярной карциномой. Данный вариант интеграции соответствует схеме вирусного онкогенеза посредством инактивации гена-супрессора и служит доказательством роли вируса Мейзона-Пфайзера в развитии (этиологии) Беркитт-подобых лимфом.

3 Установлена роль вируса папилломы человека как фактора риска развития мочевого пузыря у инфицированных пациентов. Методом ПЦР у 27,2% пациентов с раком мочевого пузыря зарегистрированы элементы генома ВПЧ-16 в периферической крови. В эпителиальных клетках опухолей мочевого пузыря методом гибридизации in situ зарегистрирован полный геном ВПЧ-16.

4 Определен генетический фактор наследственной предрасположенности к развитию рака мочевого пузыря и рака предстательной железы. Установлено, что у носителей аллеля PLA2 гена СРЗа увеличен риск развития рака мочевого пузыря в 9,5, а риск развития рака предстательной железы - в 2,3 раза, что позволяет проводить скрининг населения с целью выявления групп повышенного риска и проведения доклинической терапии.

5. Носительство аллеля PL А 2 определяет более высокий уровень прогрессии рака предстательной железы и большую скорость локальной инвазии и метастазирования, по сравнению с пациентами с генотипом PLA1PLA1. Вероятность развития низкодифференцированного рака предстательной железы выше в 3,6 раза, местнораспространенного - в 2,8 раз, а метастатического - в 2,4 раза выше для гетерозиготных носителей PLA1PLA2 по сравнению с пациентами с генотипом PLA1PLA1.

6 При гестозе наличие аллеля PLA2 гена ОРЗа в генотипе женщины достоверно коррелирует с нарушениями состояния фетоплацентарной системы Эта корреляция повышается на фоне экстрагеннтальной патологии и при сочетанном гестозе наличие аллеля PL А 2 в генотипе женщины является 100% фактором риска нарушения состояния ФПС.

7 Генетически детерминируемое взаимодействие тканей матери и плода, определяемое геном GP3a, играет существенную роль в развитии патологии беременности. При совпадении генотипов матери и ребенка

по гену СРЗа выявляется весь спектр осложнений, связанных с гестозом и задержкой развития плода. При разных генотипах матери и ребенка резко снижается вероятность гестоза, но может развиваться ЗРП как следствие декомпенсированной плацентарной недостаточности.

8. Выявлена корреляция между генотипом АДГ? и клиническими последствиями злоупотребления алкоголем. При злоупотреблении алкоголем у гетерозиготных носителей АДГ2-1/2 относительный риск развития алкогольной зависимости снижен на 43% (ОР=0,53), а риск развития у них цирроза печени увеличен в два раза (ОР=1,91).

9. Риск развития цирроза печени на фоне инфицирования вирусами гепатита В и С не зависит от генотипа злоупотребляющих алкоголем лиц. Среди неинфицированных вирусами пациентов генотип АДГ2-1/2 повышает риск развития цирроза печени на 75% (ОР=1,75) у злоупотребляющих алкоголем лиц.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1 Мяндина Г.И., Щипкова Н.И., Пехов А.П. Идентификация и изучение дерепрессированных мутантов плазмиды рАР43//Молекул. генет, микробиол. и вирусол. - 1983,- №1. - С. 30 - 33.

2 Щипков В.П., Буянова Н.И., Мяндина Г.И, Пехов А.П. Изучение систем регуляции tra-генов дерепрессированных F-подобных плазмид//Бюлл. эксперим биол. и мед. - 1985. -№8. - С. 226 - 227.

3. Мяндина Г.И. Мобилизующая способность фактора генетического переноса рАР43// Проблемы переноса генетической информации: Тез. докл X Всесоюзного совещания 27-31 октября 1985 г. - М.:1985. - С.118 -119.

4 Мяндина Г.И. Интеграция плазмиды pAP43:Tn5-drd в хромосому Е coliZ/Молекулярная биология и генетика плазмид ("Плазмида-XI"): Тез. докл. XI Всесоюзного совещания 11-13 ноября 1986 г - М.:1986. - С. 89.

5 Мяндина Г.И. Делеционные drd-мутанты фактора генетического переноса рАР43//Бактериальные плазмиды: Тез.докл. XII Всесоюзного совещания -Нальчик: 1990.-С. 22-23.

6 Мяндина Г И, Щипков В П., Пехов А.П Системы генетической регуляции переноса коинтегративных плазмид в клетках E.coli К-12// Бюлл. .эксперим.биол. и мед. - 1993. -№9. - С. 304 -305.

7 Мяндина Г.И., Пехов А.П. Активность FIN-систем искусственно сформированных коинтегративных плазмид pAP42/pRSF2124 и pAP42/pUB781// Бюлл. эксперим. биол. и мед. - 1995. -№1. - С. 65-66.

8 Мяндина Г.И., Имамова Л Р., Островская А В., Самочатова Е.В, Иткес А В Полиморфный элемент гена EBNA-3C вируса Эпштейна-Барра в моно- и поликлональных инфицированных клетках крови//Русский журнал «ВИЧ/СПИД и родств.проблемы», 1999. - Т.З-№1 _ с 88-89.(Материалы 7-ой Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы», С-Пб., 23 -27 мая 1999 г)

9 Иткес AB , Гиличинская Я.М., Мяндина Г.И., Имамова Л.Р., Островская A.B., Самочатова Е В. Полиморфный элемент гена EBNA-3C вируса Эпштейна-Барра особый тип внутригенных перегруппировок ппи B-клеточных лимфомах,

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА I С. Петербург }

- Ш - J

резистентных к стандартной химиотерапии//Русский журнал «ВИЧ/СПИД и родственные проблемы», 2000. - Т.4. - №1. - С.36. (Материалы 8-ой Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы», С-Пб., 24 -27 мая 2000 г.).

10 Мяндина Г.И, Имамова J1.P., Островская A.B., Самочатова Е.В, Иткес А В. Полиморфный элемент гена EBNA-3C вируса Эпштейна-Барра: первичная характеристика и схема использования для определения моно- и поликлональной природы инфицированных клеток//Докл. акад. наук. - 2000. - Т.373.- №3. - С.20 -23.

11.Мяндина Г.И, Имамова Л.Р., Островская AB., Самочатова Е.В, Иткес AB. Новый механизм адаптации лимфоцитов человека к вирусной инфекции// Эколого-физиологические механизмы адаптации: Материалы X Международного симпозиума 29-31 января 2001. - М.:Изд-во РУДН, 2001. - С. 373 -374.

12. Иткес A.B., Мяндина Г.И., Имамова Л Р., Островская А.В, Самочатова Е.В Полиморфизм генома вируса Эпштейн-Барр в инфицированных лимфоцитах человека// Развитие научных исследований на медицинских ф-тах Университетов России:Тез. докл. 1 Всероссийской конференции 23-25 января 2001. - М.: Изд-во РУДН,2001. - С.151 -153.

13 Радзинский В.Е, Иткес А В, Галина Т.В , Карпова Е.В., Хотайт Г.Я., Мяндина Г.И. Корреляция различных форм позднего гестоза с генотипом по гену GPIIIa-цепи и1ггегрина//Акушерство и гинекология. - 2001. -№10. - С.53 - 56.

14. Ogurtsov P.P., Garmash I V., Miandina G I., Gushin A.E., Itkes A.V., Moiseev V S. Alcohol dehidrogenase ADH2-1 and ADH2-2 allelic isoforms in Russian population correlate with type of alcoholic desease//Addiction Biology. - 2001. - V.6. - №4 - P. 377 -383.

15 Лебедев Ю.Б., Ваеданмагсар Болорма, Кжишковска А.С , Осташкин A.C., Ильин К В., Мяндина Г.И., Пягай П.Э , Иткес А В. Интеграция генома ретровируса типа D Мейзона-Пфайзера в хромосомы человека//Молекулярная биология - 2002. -Т.36. -№6,- С. 1012-1014.

16. Огурцов П.П., Гармаш И.В., Итксс A.B., Мяндина Г.И., Моисеев В.С Протективный эффект аллеля АДГ2-2 в отношении алкоголизма в московской популяции// Современные проблемы наркологии: биологические механизмы, диагностика, лечение, реабилитация, профилактика: Материалы IY Международной конференции - М ■ 2002 г. - С.11

17.Иткес A.B., Ванданмагсар Болорма, Кжишковска ЮГ, Осташкин A.C., Ильин К.В., Мяндина Г.И., Пягай П.Э., Лебедев Ю.Б Интеграция генома ретровируса типа D Мейзона-Пфайзера в хромосомы человека// Русский журнал «ВИЧ/СПИД и родственные проблемы» - 2002. -Тб. -№1 - С 101 (Материалы 10-ой Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы», 24 -27 мая 2002 г., С.-Пб)

18 Иткес AB, Моисеев B.C., Радзинский BE., Мяндина ГИ, Тарасенко ЕВ, Огурцов П П., Гармаш И В , Галина Т В. Молекулярно-генетический анализ в энзимодиагностике// Современные технологии, лабораторная диагностика нового столетия- Труды Всероссийской конференции, 28-31 мая 2002 г. - М.: 2002. -С.100 - 102.

19. Моисеев В.С Огурцов П.П., Гармаш И В , Мяндина Г И , Гущин А.Е , Иткес А В. Alcohol dehydrogenase ADH2-2 allelic isoform in the Moscow urban population

correlates with severity of alcoholic liver desease//26 International Congress of Internal Medicine, Kyoto (Japan), 2002. - P.I.

20. Мяндина Г.И., В.Болормаа, Кжишковска Ю.Г, Осташкин A.C., Ильин К.В., Пягай П.Э., Лебедев Ю.Б., Иткес A.B. Интеграция генома ретеровируса типа D Мейзона-Пфайзера в хромосомы человека// Эколого-физиологические проблемы адаптации: Тез. докл XI Международного симпозиума 28-31 января 2003 г -М.:Изд-во РУДН.2003. - С. 381 -382.

21. Мяндина Г.И., Пягай П.Э., Фролов В А., Радзинский В.Е., Иткес AB Гены интегринов: ассоциация генетической предрасположенности к сердечнососудистым заболеваниям и к заболеваниям онкологического характера//Современные проблемы артериальной гипертонии: Тез докл Всероссийской научно-практическй конференции 22-24 апреля 2003 г. - М -Изд-во РУДН, 2003. - С. 146 -147.

22 Радзинский В.Е., Иткес A.B., Галина Т.В., Рамнадарат Ш., Хахва Н.Т, Тарасенко Е.В., Карасева Н.И , Мяндина Г.И. Прогнозирование гестоза и задержки развития плода по генотипам матери и плода//Акушерство и гинекология. - 2003. - №10 -С.23 -26.

23. Завалишина Л.Э., Мяндина Г И., Пягай П.Э., Иткес A.B., Франк Г.А. Детекция элементов генома вируса папилломы человека ВПЧ-16 в клетках опухоли и в периферической крови пациентов, страдающих раком мочевого пузыря// Русский журнал «ВИЧ/СПИД и родственные проблемы». -2003. -Т7. -№2.- С.56 (Материалы 11-ой Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы», 6-10 октября 2003 г., С.- Пб.).

24. Иткес A.B., Радзинский В.Е., Мяндина Г.И., Тарасенко Е.В. и др. Гены интегринов: генетическая предрасположенность к осложнениям беременности и гинекологическим заболеваниям// Гистологическая наука в России в начале XXI века: итоги, задачи, перспективы: Тез. докл. Всероссийской конференции 22-24 октября 2003. - М.:Изд-во РУДН, 2003. - С. 31 -33.

25.Мяндина Г.И., Завалишина Л.Э., Пягай П.Э., Иткес A.B., Франк ГА Детекция элементов генома вируса папилломы человека типа 16 в клетках опухолей и периферической крови пациентов, страдающих раком мочевого пузыря//Вестник РУДН. Серия «Медицина», Генетика. -2003. - №5. -С.29-33.

26 Мяндина Г.И., Гурьянова О.И., Пягай П.Э., Иткес А В, Лебедев Ю Б. Компьютерный анализ сайта интеграции ретровируса типа D Мейзона-Пфайзера в хромосомы человека// Вестник РУДН. Серия «Медицина», Генетика. -2003. -№5.-С.41 -46.

27 Мяндина Г.И, Пягай П.Э , Затолочина К.Э, Иткес A.B., Завалишина Л.Э., Франк Г.А. Ассоцировнность вируса папилломы человека типа 16 с опухолями мочевого пузыря// Патофизиология и современная медицина- Тез докл Второй международной конференции 22-24 апреля 2004 г. - М.: Изд-во РУДН, 2004 - С 286-287.

28 Иткес A.B., Мяндина Г.И., Гурьянова О..И., Сивов И.Г., Галактионова ТС., Лебедев Ю.Б. Интеграция ДНК ретровирусов обезьян в хроосомы человека// Русский журнал «ВИЧ/СПИД и родственные проблемы» -2004. -Т8 -№2 - С.25 (Материалы 12-ой Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы», 24 -27 мая 2004 г., С.-Пб.).

29 Лоран О Б , Иткес A.B., Серегин A.A., Мяндина Г.И Аллель PLA2 гена ОРЗа является генетическим фактором риска для заболевания инвазивными формами

рака предстательной железы// Русский журнал «СПИД, рак и общественное здоровье». -2005. -Т9. - №2,- С.67. (Материалы 14-ой Международной конференции «СПИД, рак и общественное здоровье», С.-Пб., 23 -27 мая 2005 г.).

30 Лоран О.Б, Иткес А.В, Серегин A.A., Мяндина Г.И. Прогностическая значимость аллелей PLA1 и PLA2 гена гликопротеина GP3a при раке предстательной железы// Русский журнал СПИД, рак и общественное здоровье.-2005. - Т9. - №1. - С.36 - 40.

31 Лоран О.Б., Иткес A.B., Серегин A.A., Мяндина Г.И. Предварительные результаты исследования прогностической значимости аллелей PLA1PLA2 гена гликопротеина GPIIIa при раке предстательной железы//Урология. - 2005. - №3. -С. 35-42.

ПАТЕНТ

1. Патент на изобретение №2004106510 «Способ определения предрасположенности к онкологическим заболеваниям мочеполовой системы», зарегистрированный 05 марта 2004 г., г. Москва Авторы изобретения: Лоран О.Б., Радзинский В Е., Иткес А В., Мяндина Г И., Серёгин А.А

Мяндина Галина Ивановна (Россия)

Элементы генома, ответственные за развитие основных групп генетически детерминируемых болезней человека

В работе представлены результаты молекулярно-генетических исследований элементов генома человека вирусного и клеточного происхождения, определяющих развитие генетически детерминируемых болезней Образцы ДНК 403 пациентов 3-х основных групп болезней с наследственной предрасположенностью исследованы на наличие генетических маркеров, ассоциированных с данными заболеваниями.

Предложена схема использования впервые выявленного полиморфного элемента гена EBNA-3C вируса Эпштейна-Барр для определения моно- и поликлональной природы инфицирования B-лимфоцитов у больных В-клеточными лимфомами Показано, что инфицирование пациентов вирусом папилломы человека типа 16 является фактором риска развития рака мочевого пузыря Установлено, что интеграция ретровируса типа D Мейзона-Пфайзера произошла в 17 хромосому пациента с B-клеточной лимфомой в локус 17q22.ll в соответствии со схемой вирусного онкогенеза посредством инактивации гена супрессора НСА-66. Выявлена корреляция аллельного варианта PLA2 гена GP3a с риском развития рака мочевого пузыря и рака предстательной железы Генетическая предрасположенность к формированию нарушений состояния фетоплацентарной системы у беременных женщин определяется носительством аллеля PLA2, а соотношение генотипов гена GPia матери и плода имеет существенное значение для развития осложнений беременности Изучена корреляция генотипа АДГ2 с риском развития алкогольной зависимости и алкогольного цирроза печени. Выявлена роль аллеля АДГ2-2 в развитии алкогольного цирроза печени у злоупотребляющих алкоголем лиц. Полученные результаты позволяют выделять группы риска по вышеперечисленным заболеваниям и предлагать обоснованный прогноз и лечение.

Galina I. Myandina (Russia)

The elements of the genome which determine the development of the human diseases with the genetic predisposition

The genetic elements of human genome of the viruses and cell's origin responsible for the genetic predisposition for some diseases was studied by using molecular methods. The DNA of 403 patients with 3 groups of the diseases was studied to detect the genetic markers for the development of such diseases.

The polymorphic element of Epstain-Barr virus EBNA-3C gene was studied using PCR-method. It was presented that this variable region determines the mono- and polyclonality of the infected B-lymphocytes. The association of HPV infection and bladder carcinoma development was presented It was demonstrated that integration of Mason-Pfizer virus in 17 chromosome occurs with the accordance of oncogenic mechanism by inactivating of gene supressor HCA-66 and increasing the risk of B-lymphoma development.

Our study has demonstrated the clearly association of the PLA2 allelic variant of gene GP3a with the risk of bladder carcinoma and prostate cancer development. It was determined that in the cases of the combined gestosis the PLA2 allelic variant of GP3a gene increases the risk of violence in mother-placenta-fetus system The importance of the coincidence of mother/child PLA genotypes in the development of complications associated with gestosis was presented. With different genotypes the likelihood of gestosis drastically reduces, but fetal development retardation may result. The correlation between the ADH2 genotype, alcoholic dependence and alcoholic cirrhosis was studied Alcohol misuse and possession of the ADH2-1/2 genotype increases the risk of cirrhosis

»2303 1

РНБ Русский фонд

2006-4 27767

Подписано в печатьS-07. 05~. Формат 60x84/16. Тиража экз. Усл. печ. л. А ХУ Заказ SSZ

Типография Издательства РУДН 117923, ГСП-1, г. Москва, ул. Орджоникидзе, д. 3

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Мяндина, Галина Ивановна

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Элементы генома вирусного происхождения и их роль в процессе онкогенеза

1.2. Таксономия ретровирусов

1.2.1. Репликативный цикл ретровируса типа Б Мейзона

Пфайзера

1.2.2. Организация генома вируса Мейзона-Пфайзера

1.2.3. Ассоциация вируса Мейзона-Пфайзера с патологией человека

1.3. Вирус Эпштейна-Барр

1.3.1. Геном вируса Эпштейна-Барр

1.3.2. Полиморфизм генома ВЭБ

1.3.3. Гены литической инфекции ВЭБ

1.3.4. Гены латентной инфекции ВЭБ 49 ф 1.3.5. Трансформирующая функция белков латентной инфекции ВЭБ

1.3.6. Строение и функции белка ЕВКА-ЗС

1.3.7. Ассоциация ВЭБ с развитием злокачественных заболеваний

1.4. Вирусы папиллом человека 60 • 1.4.1. Организация генома ВПЧ 62 А 1.4.2. Патогенез ВПЧ

1.4.3. Роль ВПЧ в развитии онкологических заболеваний органов мочеполовой системы

1.5. Генетическая предрасположенность к развитию онкологических заболеваний

1.6. Роль генетических факторов в развитии поздних гестозов беременных

1.7. Молекулы клеточной адгезии

1.7.1. Структурная модель интегринов

1.7.2. Интегрины и сигналинг

1.7.3. Гликопротеиновый комплекс ОРПЬ-ОРШа . Полиморфизм аллоантигенной системы тромбоцитов

1.7.4. Роль гликопротеинового комплекса ОРПЬ-ОРШа в развитии атеросклероза

1.7.5. Роль интегринов в эмбриогенезе

1.7.6. Роль интегринов в развитии опухолей

1.8. Гены системы метаболизма этанола

1.8.1. Популяционные различия полиморфизма генов системы метаболизма этанола

1.8.2. Полиморфизм ферментов метаболизма этанола и риск развития алкогольной патологии

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Исследование элементов генома вирусного происхождения.

3.1.1. Детекция ДНК вируса Эпштейн-Барр в клетках периферической крови методом ПЦР.

3.1.2. Полиморфный элемент гена ЕЕША-ЗС вируса

Эпштейн-Барр

3.2. Интеграция ретровируса типа О Мейзона -Пфайзера в хромосомы человека

3.2.1. Амплификация методом селективной ПЦР-супрессии концевых участков вирусной ДНК и прилегающих участков ДНК человека

3.2.2. Гибридизация по Саузерну продуктов ПЦР, содержащих концевые участки вирусной ДНК и прилегающие участки ДНК человека

3.2.3. Создание библиотеки клонов

3.2.4. Скрининг бибилиотеки и селекция клонов, содержащих концевые участки вирусной ДНК и прилегающие участки генома человека

3.2.5. Анализ нуклеотидной последовательности вставки рекомбинантного клона

3.2.6. Подтверждение наличия ЬТЯ вируса Мейзона-Пфайзера в 17-ой хромосоме человека

3.2.7. Анализ сайтов интеграции последовательностей вируса Мейзона-Пфайзера в хромосомы человека

3.2.8. Характеристика участков разрывов ЬТЯ вируса

3.2.9. Функциональная характеристика участков генома человека, в которые произошла интеграция МРМУ

3.2.10. Обсуждение результатов раздела 3.2.

3.3. Детекция элементов генома вируса папилломы человека типа 16 в клетках опухолей и периферической крови пациентов, страдающих раком мочевого пузыря. 3.3.1. Анализ ДНК, выделенной из клеток периферической крови пациентов с первичными опухолями органов мочеполовой системы, методом ПЦР. 3.3.2. Исследование биопсийных препаратов опухолей мочевого пузыря методом гибридизации in situ.

3.4. Исследования элементов генома клеточного происхождения

3.4.1. Идентификация аллелей PLA1 и PLA2 гена GP3a в генотипе пациентов

3.4.2. Первичный скрининг распределения генотипов гена GP3A среди пациентов с урогенитальными злокачественными опухолями

3.4.3. Анализ и оценка достоверности различий аллельного распределение гена GP3A у больных раком предстательной железы, группы контроля и в популяции

3.4.4. Анализ и оценка достоверности различий аллельного распределение гена GP3A у больных РПЖ в зависимости от стадии заболевания

3.4.5. Анализ и оценка достоверности различий аллельного распределение гена GP3A у больных раком предстательной железы в зависимости от степени дифференцировки опухоли

3.4.6. Анализ и оценка достоверности различий аллельного распределение гена GP3 А у больных раком предстательной железы в зависимости от группы риска

3.5. Аллельное распределение гена GP3A в группах беременных женщин с гестозами и фетоплацентарной недостаточностью, контроля и в популяции.

3.5.1. Анализ распределения аллеля PLA2 в группах пациенток с разными сочетаниями диагнозов гестоза и/или патологии ФПС.

3.5.2. Анализ распределения аллелей РЬА1 и РЬА2 в разных группах беременных с гестозами и патологией ФПС.

3.5.3. Роль генотипов матери и плода в прогнозировании развития позднего гестоза и патологии фетоплацентарной системы

3.6. Исследование роли полиморфизма алкогольдегидрогеназы-2 в развитии алкогольной патологии в московской популяции

3.6.1. Анализ полиморфизма АДГ2 у лиц с алкогольной патологией

3.6.2. Роль полиморфизма АДГ2 в развитии алкогольного цирроза печени в зависимости от инфицирования вирусами гепатитов В и С.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Элементы генома, ответственные за развитие основных групп генетически детерминируемых болезней человека"

Актуальность проблемы. Элементы генома человека представлены нуклеотидными последовательностями ДНК клеточного и вирусного происхождения. Несмотря на успешное завершение международного проекта «Геном Человека» (2001) полной расшифровкой нуклеотидной последовательности генома человека, функциональное значение большей части его элементов остается неизвестным [384].

Некоторые элементы генома человека как клеточного, так и вирусного происхождения могут рассматриваться в качестве маркеров основных групп генетически детерминируемых болезней человека. Такое определение функциональной значимости элементов генома человека способствует более глубокому пониманию механизмов патогенеза заболеваний, улучшению качества дифференциальной диагностики, обоснованию методов лечения и созданию новых направлений в терапии заболеваний с наследственным предрасположением.

Известно, что сбалансированный полиморфизм участков генома определяет целый спектр наследственных болезней человека, а также индивидуальные и популяционные различия наследственной предрасположенности к генетически детерминируемым болезням. С этой точки зрения полиморфные локусы являются генетическими маркерами, адекватный выбор которых позволяет решать как фундаментальные, так и прикладные медико-биологические задачи.

Генетические маркеры обладают большим диагностическим и прогностическим потенциалом, т.к. остаются неизменными на протяжении всего онтогенеза и не зависят от наличия или отсутствия патологического процесса в организме. Они могут с успехом использоваться для оценки эффективности лечения и прогноза исхода болезни, а также для скрининга населения и формирования групп риска развития генетически детерминируемой патологии.

Актуальность темы определятся основополагающей ролью генетических элементов в развитии заболеваний с наследственным предрасположением. Причины и механизмы развития этих болезней остаются недостаточно изученными, поскольку эти заболевания не имеют единой молекулярной основы, а их развитие связано с провоцирующим действием эндогеннных и экзогенных факторов [12]. В то же время, медико-генетическая служба в России не располагает компьютеризированными федеральными и региональными регистрами генетических маркеров болезней с наследственным предрасположением, а число реально диагностируемых молекулярными методами наследственных болезней в России не превышает 20 [13].

В настоящее время известно, что формирование злокачественных опухолей человека индуцируется онкогенными вирусами или фрагментами генома. В ряде случаев описана интеграция ДНК онкогенных вирусов в хромосомы человека, что является необходимой стадией канцерогенеза [22, 453]. Интеграция ДНК ретровирусов (провирус) в геном человека может влиять на регуляцию экспрессии генов, контролирующих пролиферацию, дифференцировку и апоптоз клеток, поскольку ЬТЯ ретровирусов представляют блок регуляторных элементов, включающий промоторные и энхансерные последовательности, а также участки сплайсинга и полиаденилирования.

В связи с этим, изучение молекулярных основ вирусного онкогенза, связанных с интегрированными онковирусными последовательностями, является приоритетным направлением медико-биологических исследований, а мониторинг вирусной инфекции является необходимой профилактической мерой в клинике опухолевых и аутоиммунных заболеваний [10, 19].

Необходимость прогнозирования течения онкологического заболевания, которое связано с проблемой последующего рецидива опухолевого роста, ставит перед клиницистами также задачу регистрации специфических генетических маркеров клеточного происхождения [24]. Одним из современных исследовательских направлений является изучение роли молекул клеточной адгезии в процессе канцерогенеза. С этой точки зрения несомненный интерес представляют интегрины, которые не только выполняют рецепторную функцию, но опосредуют влияние экстрацеллюлярного матрикса на экспрессию генов, движение, пролиферацию, дифференцировку и апоптоз клеток.

Полиморфизм ЬеиЗЗРго Р3-субъединицы интегринового рецептора, является одним из факторов развития различных опухолей у человека. В настоящее время установлена непосредственная корреляция между наличием аллеля РЬА2 гена вРШа (ГГСВЗ) в генотипе пациента и развитием раков кожи, молочной железы и яичников, что имеет большое значение для клинического прогнозирования прогрессии опухолевого роста и определения групп риска [85].

Несмотря на большое количество работ, посвященных изучению стадий канцерогенеза, связанных с полиморфизмом интегриновых рецепторов, проявления данной корреляции в каждом конкретном типе опухоли остается непонятным, что определяет актуальность современных исследований в этом направлении [43, 213, 403]. В настоящее время остается малоизученной корреляция аллеля РЬА2 гена ОРШа с опухолями органов мочеполовой системы, в том числе рака мочевого пузыря (РМП) и рака предстательной железы (РПЖ), а также роль аллеля РЬА2 в развитии и прогрессии опухолей, связанных с генетическими изменениями РЗ-субъединицы интегринов.

Одним из основных направлений снижения перинатальной заболеваемости и смертности является выявление информативных генетических маркеров, контролирующих особенности течения гестационного процесса и обеспечивающих раннее выявление осложнений беременности, среди которых гестоз занимает ведущее место в структуре материнской и детской смертности [2, 12].

В структуре патологии перинатального периода высокий удельный вес имеет недостаточность фетоплацентарной системы (ФПС) и её наиболее значимое клиническое проявление в виде задержки развития плода (ЗРП), частота которой колеблется от 3% до 40% [44, 52]. Раннее выявление данной патологии необходимо для ее успешной коррекции, однако, доклиническая диагностика как ЗРП, так и позднего гестоза не разработана. Широко применяемая ультразвуковая фетометрия плода не пригодна для доклинической диагностики недостаточности плаценты [12].

Известно, что ведущими звеньями патогенеза гестоза и ЗРП являются нарушения сосудистого компонента и межклеточных контактов между тканями матери и плода при формировании плаценты [248, 447, 448]. На доимплантационной стадии ключевую роль в формировании контактов между эмбрионом и эндометрием играют цитокины, факторы роста и интегрины, влияя на процессы имплантации и васкуляризации трофобаста, при нарушении которых возникает ранняя плацентарная недостаточность и, как следствие, ЗРП [449].

В последнее время установлено, что в результате мутаций соответствующих генов нарушается структура молекул адгезии клеток цитотрофобласта и материнских тканей, необходимых для нормального процесса инвазии. Наличие аллеля РЬА2 связывают с процессами венозного и артериального тромбоза, а также с нарушениями имплантации ' и ограничением инвазии трофобласта повехностными слоями [42,448].

Нам представляется вполне вероятным, что носительство аллеля РЬА2 определяет предрасположенность к локальному сосудистому тромбозу с последующим развитием фетоплацентарной недостаточности и задержки развития плода, несмотря на отсутствие сведений по этому вопросу в современной литературе.

Интенсивная алкоголизация населения является одной из основных медико-социальных проблем в России, связанных с общественным здоровьем нации и процессами депопуляции. Высокий уровень потребления спиртного, по некоторым оценкам превышающий 14 литров абсолютного алкоголя на человека в год, привел к резкому увеличению негативных исходов алкоголизации, в том числе росту уровня заболеваемости и смертности по причинам, связанным с злоупотреблением алкоголем среди населения [15, 30, 36, 38].

Анализ колебаний смертности показал, что российская популяция реагирует на колебания уровня потребления алкоголя четырехкратным повышением показателя общей смертности, по сравнению с населением западных стран. Частота хронческих заболеваний печени на 100 тыс. населения в Россиской Федерации в 2-3 раза выше, а смертельных отравлений алкоголем в 4-5 раза выше по сравнению с европейскими странами, сопоставимыми с Россией по уровню потребления алкоголя [16, 299].

Для российской популяции характерен наиболее опасный для здоровья населения паттерн потребления - северный, с преимущественным потреблением крепкого алкоголя, сопровождаемым тяжелой интоксикацией и девиантным поведением. Однако, по данным опроса 1999 года, уровень потребления спиртного, частота и разовая доза потребления, уровень тяжелой интоксикации среди населения российской популяции значительно превышают аналогичные показатели других северных стран: Финляндии, Швеции, Норвегии [8, 15].

Известно, что индивидуальные и популяционные различия потребеления алкоголя определяются как этническими и социокультурными особенностями, так и генетическими факторами [139, 322]. В решающей степени эти различия определяются активностью ферментов системы метаболизма алкоголя и, в первую очередь, фермента первого этапа окисления этанола - алкогольдегидрогеназы типа 2 (АДГ2) [54, 87, 88, 89].

Аллельный вариант АДГ2-2 контролирует синтез высокоактивной АДГ2, которая обеспечивает быстрое накопление токсичного альдегида в тканях, независимо от наличия или отсутствия неактивной изоформы фермента второго этапа метаболизма этанола - альдегиддегидрогенеазы типа 2 (АлДГ2-2). Известно, что аллель АДГ2-2 широко распространен в монголоидных популяциях (частота составляет 35-80%), где он является протективным генетическим фактором потребления значительных доз спиртных напитков, и крайне редко встречается в европейских популяциях (0-5%) [181, 183, 197].

Население авропейской части России традиционно принято относить к европейским популяциям. Однако, особенности потребления алкоголя в России ставят вопрос о возможности популяционных особенностей в системе генов метаболизма алкоголя, влияющих на избыточную заболеваемость и смертность россиян, что определяет необходимость молекулярно-генетических исследований по изучению полиморфизма генов системы метаболизма алкоголя в российской популяции.

Сложившиеся в мировой науке оценки медико-демографическрй ситуации в России ставят вопрос о приоритетных направлениях исследований для медико-биологических наук. Согласно данным ВОЗ рождаемость в РФ снизилась на 31,1%, а отрицательный прирост населения составил 1,9%. В структуре смертности населения России онкологические заболевания занимают третье место после сердечно-сосудистых заболеваний (55,5%) и отравлений и травм (14,5%) [16, 44].

В связи с этим, особую актуальность приобретают научные исследования, связанные, в первую очередь, с изучением молекулярно-генетических основ репродуктивного и психического здоровья населения. Выявление генетических маркеров наиболее распространенных и социально значимых заболеваний, в том числе онкологических, болезней матери и плода, соматических и психических нарушений, развивающиеся на фоне хронической алкогольной интоксикации у злоупотребляющих алкоголем лиц, не вызывает сомнения.

Исследования в этом направлении являются крайне актуальными как для клинических, диагностических и прогностических целей, так и для проведения широкомасштабного скрининга населения с целью формирования групп риска развития генетически детерминируемой патологии и проведения досимптоматической терапии.

1. Изучить высоковариабельный участок гена EBNA-3C вируса Эпштейна-Барр с целью определения прогностического значения полиморфного участка генома ВЭБ в определении моно- и поликлонального характера инфицирования В-лимфоцитов.

3. Изучить корреляцию ВПЧ-инфекции с риском развития онкологических заболеваний органов мочеполовой системы на основе регистрации элементов генома вируса папилломы человека типа 16 (HPV-16) в клетках опухолей и в циркулирующих клетках периферической крови пациентов методом ПЦР и гибридизации in situ.

4. Изучить роль полиморфизма ЬеиЗЗРго гена гликопротеина GPIIIa в развитии злокачественных новообразований органов мочеполовой системы.

5. Установить прогностическую значимость аллельного распределения гена GPIIIa в развитии и прогрессии рака предстательной железы (РПЖ).

6. Изучить корреляцию аллеля PLA2 гена GPIIIa с риском развития нарушений состояния фетоплацентарной системы для прогнозирования рождения детей с малым весом при разных формах позднего гестоза.

7. Изучить влияние генотипов гена GPIIIa матери и плода на развитие гестоза, фетоплацентарной недостаточности и задержки развития плода.

8. Изучить корреляцию аллельных вариантов АДГ2-1 и АДГ2-2 гена системы метаболизма алкоголя АДГ2 с риском развития разных форм клинического проявления хронической алкогольной интоксикации у злоупотребляющих алкоголем лиц.

9. Определить относительную роль генотипа АДГ2 и вирусной инфекции в развитии цирроза печени на фоне хронической алкогольной интоксикации.

Научная новизна работы. В результате молекулярно-генетических исследований элементов генома человека обнаружены новые информативные генетические маркеры вирусного и клеточного происхождения, определяющие развитие основных групп болезней с наследственной предрасположенностью.

Выявленный впервые полиморфизм участка гена EBNA-3C вируса Эпштейна-Барр позволяет регистрировать моно- и поликлональный характер инфицирования В-лимфоцитов у пациентов с В-клеточными лимфомами. Впервые продемонстрирована интеграция полной копии ретровируса типа Б Мейзона-Пфайзера в 10 и 17 хромосомы больных В-клеточными лимфомами, определен сайт его интеграции в локусе 17q. 11.22 и дана функциональная характеристика участка интеграции. Показано, что интеграция вируса Мейзона-Пфайзера произошла в непосредственной близости от экзона гена НСА-66, ассоциированого с гепатоцеллюлярной карциномой, характер интеграции соответствует схеме вирусного онкогенеза.

Впервые применен комплексный подход в определении генетических маркеров развития рака мочевого пузыря (РМП), включающий изучение генотипа пациента и инфицирование вирусом папилломы человека типа 16 (ВПЧ-16). Установлено, что инфицирование ВПЧ-16 является фактором риска развития РМП, аллельный вариант РЬА2 гена гликопротеина СРЗа увеличивает риск развития данного заболевания у носителей в 9,5 раза. В работе применен новый патентованный способ определения аллельных вариантов гена СРЗа для оценки генетической предрасположенности к раку предстательной железы (РПЖ). Впервые установлены положительные корреляционные зависимости между генотипом РЬА1РЬА2 и риском развития РПЖ, а также степенью его инвазивности и метастазирования.

В работе впервые обобщены результаты молекулярно-генетических исследований роли полиморфизма гена СРЗа в развитии нарушений состояния фетоплацентарной системы (ФПС) и задержки развития плода (ЗРП) у беременных женщин с гестозами. Впервые показано, что носительство аллеля РЬА2 является 100% фактором риска развития недостаточности ФПС на фоне предшествующей беременности экстрагенитальной патологии, а генетически дерминируемое взаимодействие тканей матери и плода, определяемое геном гликопротеина СРЗа, играет существенную роль при развитии осложнений беременности.

Практическая значимость работы. Результаты работы могут быть использованы в медико-биологических исследованиях, связанных с изучением молекулярных основ этиопатогенеза лимфом и других злокачественных новообразований. Выявленный полиморфный элемент гена EBNA-3C вируса Эпштейна-Барр позволяет использовать его в диагностических целях для определения моно- и поликлонального характера инфицированных клеток В-лимфомы и степени ее агрессивности с целью рекомендации более радикального лечения. Предложенная схема ПЦР-анализа элементов генома ВЭБ в клетках периферической крови позволяет использовать её для скрининга вирусной инфекции с целью профилактики вирусных и аутоиммунных заболеваний.

Результаты исследований подтверждают вовлеченность ретровируса типа D Мейзона-Пфайзера в патогенез В-клеточных Берктт-подобных лимфом, что может быть использовано в диагностических целях в клинической практике. Схема анализа сайта интеграции вируса в хромосомы человека может использоваться в качестве модели для молекулярно-генетических исследований механизмов вирусного онкогенеза и молекулярных основ эволюции генома человека. Обнаружение белка, ген которого поврежден вирусной вставкой, открывает новые возможности для генетической коррекции опухоли. Выявленная корреляция ВПЧ-инфекции с риском развития рака мочевого пузыря (РМП) служит рекомендацией для выделения инфицированных пациентов в группу повышенного риска.

Данные результатов исследований роли аллеля PLA2 в процессе развития РПЖ могут быть использованы в построении номограмм для прогнозировния инвазии клинически незначимых опухолей. Выявленные генетические маркеры предрасположенности к развитию РМП, РПЖ, недостаточности плацентарной системы, гестоза, ЗРП у беременных, алкогольного цирроза печени и алкогольной зависимости позволяют использовать их для проведения скрининга населения и формирования групп повышенного риска с целью проведения досимптоматической терапии и профилактических мероприятий.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на:

7-ой и 8-ой Международных конференциях «СПИД, рак и родственные проблемы», С.- Петербург, 24 -28 мая 1999; 2000.

X Международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации», Москва, 29-31 января 2001 г.

IY Международной конференции «Современные проблемы наркологии: биологические механизмы, диагностика, лечение, реабилитация, профилактика», Москва, 2002 г.

26 International Congress of Internal Medicine, Kyoto (Japan), 2002 r.

10-ой, Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы», С.- Петербург, 24-28 мая 2002 г.

XI Международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации», Москва, 27-28 января 2003 г.

11-ой Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы», С.- Петербург, 6-10 октября 2003 г.

Второй Международной конференции «Патофизиология и современная медицина», 22-24 апреля 2004 г.

12-ой Международной конференции «СПИД, рак и родственные проблемы», С.- Петербург, 24-28 мая 2004 г.

14-ой Международной конференции «СПИД, рак и общественное здоровье» С.- Петербург, 23-27 мая 2005 г.

Положения, выносимые на защиту.

• Обнаружен клинический пример, где ретровирус типа D Мейзона-Пфайзера интегрирован в 17 хромосому человека в локусе 17q. 11.2 перед третьим экзоном гена гепатоцеллюлярной карциномы НСА-66, что соответствует схеме вирусного онкогенеза.

• Предрасположенность к развитию рака мочевого пузыря и предстательной железы имеет генетическую основу и определяется носительством аллеля PLA2 гена GP3a.

• Полиморфизм гена GP3a определяет уровень прогрессии опухоли и скорость развития локальной инвазии и метастазирования при раке предстательной железы.

• Генетически детерминируемое взаимодействие тканей матери и плода, определяемое геном СРЗа, играет существенную роль при развитии нарушений состояния фетоплацентарной системы и задержки развития плода.

• Полиморфизм гена АДГ2 определяет разные формы клинического проявления алкогольной патологии у злоупотребляющих алкоголем лиц. Население российской популяции генетически предрасположено к развитию цирроза печени при злоупотреблении алкоголем.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 298 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, выводов, списка использованных сокращений, библиографического списка, включающего 52 отечественных и 403 зарубежных источника. Диссертация иллюстрирована 16 таблицами и 35 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Мяндина, Галина Ивановна

ВЫВОДЫ.

1. Обнаружен элемент генома вируса Эпштейна — Барр в пределах гена EBNA-3C, вариабельность которого может использоваться для определения моно- и поликлонального инфицирования В-лимфоцитов пациентов с В-клеточными лимфомами. Моноклональный характер инфекции В-лимфоцитов определеляет более агрессивный характер опухоли и может служить показанием к радикальному методу лечения В-клеточной лимфомы.

2. Установлено, что геном MPMV интегрирован в 17 хромосому человека в локусе17я11.2 в непосредственной близости от 3 экзона гена НСА-66, белковый продукт которого ассоциирован с гепатоцеллюлярной карциномой. Данный вариант интеграции соответствует схеме вирусного онкогенеза посредством инактивации гена-супрессора и служит доказательством роли вируса Мейзона-Пфайзера в развитии (этиологии) Беркитт-подобых лимфом.

3. Установлена роль вируса папилломы человека как фактора риска развития рака мочевого пузыря у инфицированных пациентов. Методом ПНР у 27,2% пациентов с раком мочевого пузыря зарегистрированы элементы генома ВПЧ-16 в периферической крови. В эпителиальных клетках опухолей мочевого пузыря методом гибридизации in situ зарегистрирован полный геном ВПЧ-16.

4. Определен генетический фактор наследственной предрасположенности к развитию рака мочевого пузыря и рака предстательной железы. Установлено, что у носителей аллеля PLA2 гена GP3a увеличен риск развития рака мочевого пузыря в 9,5, а риск развития рака предстательной железы - в 2,3 раза, что позволяет проводить скрининг населения с целью выявления групп повышенного риска и проведения доклинической терапии.

5. Носительство аллеля PLA2 определяет болёе высокий уровень прогрессии рака предстательной железы и большую скорость локальной инвазии и метастазирования, по сравнению с пациентами с генотипом РЬА1РЬА1. Вероятность развития низкодифференцированного рака предстательной железы выше в 3,6 раза, местнораспространенного - в 2,8 раз, а метастатического — в 2,4 раза выше для гетерозиготных носителей РЬА1РЬА2 по сравнению с пациентами с генотипом РЬА1РЬА1.

6. При гестозе наличие аллеля РЬА2 гена ОРЗа в генотипе женщины достоверно коррелирует с нарушениями состояния фетоплацентарной системы. Эта корреляция повышается на фоне экстрагенитальной патологии и при сочетанном гестозе наличие аллеля РЬА2 в генотипе женщины является 100% фактором риска нарушения состояния ФПС.

7. Генетически детерминируемое взаимодействие тканей матери и плода, определяемое геном ОРЗа, играет существенную роль в развитии патологии беременности. При совпадении генотипов матери и ребенка по гену вРЗа выявляется весь спектр осложнений, связанных с гестозом и задержкой развития плода. При разных генотипах матери и ребенка резко снижается вероятность гестоза, но может развиваться ЗРП как следствие декомпенсированной плацентарной недостаточности.

8. Выявлена корреляция между генотипом АДГ2 и клиническими последствиями злоупотребления алкоголем. При злоупотреблении алкоголем у гетерозиготных носителей АДГ2-1/2 относительный риск развития алкогольной зависимости снижен на 43% (ОР=0,53), а риск развития у них цирроза печени увеличен в два раза (ОР=1,91).

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Мяндина, Галина Ивановна, Москва

1. Айламазян Э.К. Акушерство. С-Пб: Специальная литература, 1998. С. 183 - 199.

2. Айламазян Э.К. Неотложная помощь при экстремальных состояниях в акушерской практике. М.: Медицина, 2000. - С. 10 - 20.

3. Аксель Е.М., Матвеев Б.П. Состояние онкоурологической помощи больным в России, 1997 г.// Клиническая онкология. 1999. - Т. 1. - №1. -С. 3-5.

4. Баткаев Э.А., Кицак В.Я., Корсунская И.М., Липова Е.В. Вирусные заболевания кожи и слизистых: учебное пособие для врачей — М.: Медицина,2001. 75с.

5. Боровиков В. STATISTICA. Искусство анализа данных на компьютере. 2-е Издание. С.-Пб.: Питер. 2003. - 686 с.

6. Бочков В.Н., Сорокин Е.В., Бызова Т.В., Мазуров A.B. и др. Участвуют ли гликопротеины Ilb/IIIa в активации тромбоцитов человека липопротеидами низкой плотности?// Биохимия. 1995. - Т. 60, вып. 8. -С. 1187-1193.

7. Вейер Б. Анализ генетических данных. М.: Мир, 1995. - 399с.

8. Волгарева Г., Завалишина Л., Франк Г. и др. Экспрессия белкового маркера pl6ink4a в опухолях шейки матки// Архив патологии. — 2002. -Т.64.-С. 22-24.

9. Ю.Гаранжа Т. А. Мониторинг герпесвирусных инфекций у иммуннокомпроментированных больных// Русский журнал "ВИЧ/СПИД и родственные проблемы". 2003. - Т.7. - С. 41.

10. П.Гигани О.О., Буянова Н.И., Соколова С. Л., Иткес A.B. и др. Аллельные формы гена бета-цепи интегрина как фактор генетической предрасположенности к некоторым гинекологическим заболевания// Вестник РУДН, серия «Медицина». 2003. - №5(24). - С. 23 - 28.

11. Гинекология от пубертата до менопаузы: практическое руководство для врачей/Под ред. акад. РАМН Э.К.Айламазяна. М.: МЕДпресс-информ., 2004. - 447с.

12. З.Горбунова В.Н., Баранов С.Б. Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний. С.- Пб.: Специальная литература, 1997. - 285с.

13. М.Гориловский Л. М., Толстова С. С. Рак предстательной железы// Избранные главы гериатрической урологии/ Под ред. Л.М. Гориловского/ М.: Ньюдиамед, 2000. С. 202 - 226.

14. Горячева Н.В., Тотубалина В.Ю. Алкоголизация и общественное здоровье населения в XXI веке// Русский журнал "ВИЧ/СПИД и родственные проблемы". 2003. - Т.7. - №2. - С. 46 - 47.

15. Гурвич И.Н. Состояние здоровья населения России: 1989 2003 гг.// Русский журнал «СПИД, рак и общественное здоровье». - 2005. - С. 72 — 83.

16. Иткес А. В. Генетические механизмы вирусного онкогенеза// Вестник РУДН. Серия "Медицина", Генетика. 2003. - №.5. - С. 7 - 22.

17. Кжишковска Ю.Г., Гордина Г.А., Киселев A.B., Курмашов В.И., Иткес А.

18. B., Ильин К.В. Генетические и серологические маркеры ретровируса типа D у детей с B-клеточными лимфомами и их родителей// Российский онкологический журнал. 1998. - №.2. - С. 25 - 28.

19. Киселев В.И., Киселев О.И. Этиологическая роль вируса папилломы человека в развитии рака шейки матки: генетические и патогенетические механизмы// Цитокины и воспаление. 2003. - Т.2. - №.4. - С. 31 - 38.

20. Киселев В.Ф., Мазуренко H.H., Волгарева Г.М., Киселева Н.П. Взаимодействие вирусных и клеточных генов в опухолях шейки матки // Молекулярная биология 2004. - Т. 18. - №2. - С. 224 - 232.

21. Кустаров В. Н., Линде В.А. Гестоз. М.: Гиппократ, 2000. - С. 4 - 37.

22. Лихтенштейн A.B. Генетические дефекты как маркеры опухолевого роста.// Русский журнал "ВИЧ/СПИД и родственные проблемы". 2004 -Т.8. -№.2. — С. 43.

23. Лукьянов К.А., Лукьянов С.А, Клонирование фрагментов ДНК in vitro за одну полимеразную цепную реакцию// Биоорган, химия 1997. - Т.23.1. C.882 887.

24. Мазуренко H.H. Роль вирусов папилломы в канцерогенезе шейки матки // Современная онкология. 2003. - № 1. - С.7 - 10.

25. Максименко Л.В., Моисеева Т.Ю., Тугаринова Г.В., Карпова Е.В., Фролов

26. В.А., Иткес A.B. Клиническая симптоматика острой коронарной недостаточности коррелирует с генотипом по гену GPIIIa бетасубъединицы интегрина// Бюл. эксперим. биол. и медицины. 2000. - №. 6.- С. 680 -683.

27. Матвеев Б.П., Бухаркин Б.В., Матвеев В.Б. Рак предстательной железы. -М.: Медицина, 1999. 154 с.

28. Матвеев Б.П., Фигурин K.M., Карякин О.Б. Рак мочевого пузыря. М.: Вердана, 2001. С. 6-71.

29. Моисеев B.C., Огурцов П.П. Алкогольная болезнь: патогенетические, клинические, диагностические аспекты// Терапевтический архив. 1997. -№.12.-с. 81-92.

30. Моисеев B.C., Огурцов П.П., Кобалава Ж.Д., Овчинникова Н.С., Гармаш И.В. и др. Индуцируемая алкоголем артериальная гипертония и генетический полиморфизм ферментов, метаболизирующих алкоголь// Терапевтический архив. ■■- 2005. №.6. - С.54 - 60.

31. Молекулярная клиническая диагностика. Методы: пер. с англ./Под ред. С. Херрингтона и Дж. Макги. М.: Мир,1999. - 558с.

32. Мол очков В. А. Папилломавирусы и новообразования полового члена// Росс, журнал кожных и венерических болезней. 2000. - №1. - С.4 - 9.

33. Молочков В.А., Киселев В.И., Рудых И.В., Щербо С.Н. Папилломавирусная инфекция: клиника, диагностика, лечение: пособие для врачей. М.: Изд. Дом «Русский врач», 2004. - 43с.

34. Мушкамбаров H.H., Кузнецов C.JI. Молекулярная биология. М.: Мед. информ. агенство, 2003. - 535с.

35. Панченко Е.П. Ингибиторы Ilb/IIIa рецепторов тромбоцитов новое направление в антитромботической терапии// Терапевтический архив. —1997. -№.9. -С. 66-71.

36. Пилле Э.П., Анджапаридзе О.Г. Ретровирусы обезьян// Вопросы вирусологии. 1994.- Т.4. - С. 146-150.

37. Радзинский В. Е., Смалько П. Я. Биохимия плацентарной недостаточности.- К.: Наукова думка, 1992. 196 с.

38. Ровенский Ю.А. Клеточные и молекулярные механизмы опухолевой инвазии//Биохимия.- 1998.-Т. 63.- №.9.-Р. 1204- 1221.

39. Россия в цифрах. 2003: Краткий статистический сборник/ Госкомстат России. М., 2003. - 398с.

40. Руководство по урологии: В Зт./ под ред. H.A. Лопаткина/ М.: Медицина,1998. Т.З: Рак предстательной железы. - 503 с.

41. Самсонов В.А. Опухоли мочевого пузыря.- М.: Медицина, 1978. 166 с.

42. Тареев Е.М., Сумароков A.B., Мухин H.A., Моисеев B.C., Михайлов A.A.,

43. Тареева И.Е., Козловская Л.В. Внутренние болезни. М.: Медицина, 1993. -Т. 1.-379 с.

44. Фаллер Д. М., Шилдс Д. Молекулярная биология клетки. М.: Бином-Пресс,2003. - 272с.

45. Фогель Ф., Мотульски А. Генетика человека. В 3-х томах. М.: Мир, 1990.

46. Хотайт Г.Я., Галина Т.В., Радзинский В.Е., Карпова Е.В., Иткес А.В. Носительство аллеля PL-АН гена GPIIIa и его связь с задержкой развития плода и поздним гестозом// Вестник РУДН, серия «Медицина». 2001. -№1. - С. 27 -31.

47. Agarwal В., Ramanathan U., Lokeshwas N., Nair R., Gopal R. et al. Lymphoid neoplasms in HIV-positive individuals in India//J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 2002. - Vol.29.-№.2.-P. 181 - 183.

48. Agarwal D. P. Genetic polymorphisms of alcohol metabolizing enzymes// Pathol. Biol. -2001. Vol. 49. - №.9 - P. 703 - 709.

49. Agarwal D.P., Goedde H.W. Pharmacogenetics of alcohol metabolism and alcoholism.// Pharmacogenetics. 1992.- Vol. 2. - P. 48-62.

50. Alani R.M., Munger 1С Human papillomavirus and associated malignancies// J. Clin. Oncol. 1998. - Vol. 16. - P. 330 - 337.

51. Allday M. J., P. J. Farrell. Epstein-Barr virus nuclear antigen EBNA3C/6 expression maintains the level of latent membrane protein 1 in G1-arrested cells//J. Virol.- 1994.- Vol. 68.-P. 3491 -3498.

52. Allday M. J., D. H. Crawford, J. A. Thomas. Epstein-Barr virus (EBV) nuclear antigen 6 induces expression of the EBV latent membrane protein and an activated phenotype in Raji cells// J. Gen. Virol.- 1993. Vol. 74. - P. 361 -369.

53. Allman D., Punt J. A., Izon D. J., Aster J.C., Pear W.S. An invitation to T and more: notch signaling in lymphopoiesis// Cell. 2002. - Vol. 109. - P. 1 -11.

54. Altschul, S.F., Madden, T.L., Schaffer, A.A. et al. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs// Nucleic Acids Res.-1997,- Vol. 25.-№ .17.-P. 3389 3402.

55. Alves G., Menezes Trindade Macrini C., De Souza Nascimento P. Detection and expression of Epstein-Barr virus (EBV) DNA in tissues from penile tumors in Brasil// Cancer Lett. 2004. - Vol. 215. - P. 79 - 81.

56. Ambinder R.F., Mann R.B. Detection and characterization of Epstein-Barr virus in clinical specimens//Am. J. Pathol. 1994. - Vol. 145. - №2. - P. 239 -252.

57. Anderson L. A., Friedman L., Osborne-Lawrence S., Lynch E. et al. High-density genetic map of the BRCA1 region of chromosome 17ql2-q21// Genomics.-1993.- Vol. 17.- P. 618-623.

58. Andre P., Srinivasa Prasad K. S., Denis C.V. et al. CD40L stabilizes arterial thrombi by a beta(3) integrin-dependent mechanism// Nature Med. 2002. -Vol. 8.-P. 247-252.

59. Anwar K., Naiki H., Nakakuki K. et al. High frequency of human papillomavirus infection in carcinoma of urinary bladder// Cancer.- 1992. -Vol. 70. P. 1267- 1273.

60. Arends M.J., Buckley C.H., Wells M. Aetiology, pathogenesis, and pathi\ology of cervical neoplasia//J. Clin. Pathol. 1998. - Vol. 51. - P. 96 - 103.

61. Arngrimsson R., Holmgeir Bjonsson, Geirsson M.D. Analysis of different inheritance patterns in preeclampsia/eclampsia syndrome// Hypertension in pregnancy. 1995. - Vol. 14. - № 1. - P. 27 - 38.

62. Aster J.C., Pear W.S. Notch signaling in leukemia// Curr. Opin. Hematol. -2001.- Vol.8. P.237 - 244.

63. Attwell S., Roskelley C., Dedhar S., The integrin-linked kinase (ILK) suppresses anoikis// Oncogene. 2000. - Vol 3. - № 19. - P. 3811 - 3815.

64. Baatout S, Chatelain B, Staquet P, Symann M, Chatelain C. Human megakaryocyte polyploidization is associated with a decrease in GPIIIA expression //Anticancer Res. 1999. - № 19. - P. 5187 - 5189.

65. Bachmann A. et al. Disturbance of tumor necrosis factor a-mediated interferon- p signaling in cervical carcinoma cells// J. Virol. - 2002. - Vol. 76. -P. 280-291.

66. Badaracco G., Venuti A., Sedati A., Marcante M.L. HPV 16 and HPV 18 in genital tumors: Significantly different levels of viral integration and correlation to tumor invasuveness// J. Med. Virol. 2002. - Vol. 67. - N4. - P. 574 - 582.

67. Bain M., R. J. Watson, P. J. Farrell, M. J. Allday. Epstein-Barr virus nuclear antigen 3C is a powerful repressor of transcription when tethered to DNA// J. Virol. 1996.- Vol. 70.-P. 2481-2489.

68. Barolo, S., T. Stone, A. G. Bang, J. W. Posakony. Default repression and Notch signaling: Hairless acts as an adaptor to recruit the corepressors Groucho and dCtBP to Suppressor of Hairless// Genes. Dev. 2002. - Vol. 16. -P. 1964- 1976.

69. Basani R.B., French D.L., Vilaire G., Brown D.L. et al. A naturally occurring mutation near the amino terminus of alpha lib defines a new region involved in ligand binding of alpha lib beta 3// Blood. 2000. - Vol. 95. - P. 180 - 188.

70. Bast, R. C., Kufe, D. W., Pollock, R. E., Weichselbaum, R. R., Holland, J. F., Frei, E. Cancer Medicine. 5th ed. / Canada: BC Decker Inc. 2000. (Section 3. Cancer etiology. Chapter 18. Tumor viruses).

71. Bayer R., Bankier A.T., Biggin M.D. et al. DNA sequence and gene expression of the B95-8 Epstein-Barr virus genome// Nature. 1984. - Vol. 310. - P. 207 -211.

72. Bayliss G.J., WolfH. Epstein-Barr-virus-induced cell fusion//Nature. 1980. - Vol. 287.-P. 164-165.

73. Beer J.Y., Pederiva S., Pontiggia L. et al. Genetics of platelet receptor single nucleotide polymorphisms: clinical implications in thrombosis// J. Neural. Trans. 2000. - Vol. 107. - P. 266 - 272.

74. Bénit, L., Dessen., P., Heidmann, T. Identification, phylogeny, and evolution of retroviral elements based on their envelope genes// Journal of Virology. -2001,- Vol.75.- №23.-P. 11709- 11719.

75. Blaise S., Mangeney M., Heidmann T. The envelope of Mason-Pflzer monkey virus has immunosuppressive properties// J. Gen. Virol. 2001. - Vol. 82. -P.1597 -1600.

76. Bojesen S. E., Tybjaerg-Hansen A., Nordestgaard B.G. Integrin beta3 Leu33Pro homozygosity and risk of cancer// J. Natl. Cancer Inst. 2003. -Vol. 95.-P.l 150- 1157.

77. Borges E, Jan Y, Ruoslahti E. PDGF-receptor-(beta) and EGF-receptor-2 bind to the (beta)3 integrin throiugh its extracellular domain// J Biol Chem. 2000. -№29.-P. 1112-1123.

78. Borras E., Coutelle C., Rosell A. Et al. Genetic polymorphism of alcohol dehydrogenase in Europeans: the ADH2-2 allele decreases the risk for alcoholism and is associated with ADH3-1// Hepatology. 2000. - Vol. 31. -P.984-989.

79. Bosron W.F., Li T.-K. Catalytic and structural properties of the human liver PP alcohol dehydrogenase isozymes. In Biomedical and Social aspects of alcohol and alcoholism. K. Kuriyama., A.Takada., H. Ishii (eds). Amsterdam Elsevier. 1988.-P. 31-34.

80. Bosron W.F., Lumeng L., Li T.-K. Genetic polymorphism of enzymes of alcohol metabolism and susceptibility to alcoholic liver disease// Mol. Aspects. Med. 1988.- Vol. 10.-P. 147 - 158.

81. Boucher N.R., Scholefield J.H., Anderson J.B. The aetiological significance of human papillomavirus in bladder cancer// Br. J. Urol. 1996. - Vol. 78. - P. 866-869.

82. Bowen J.A., Hunt J.S. The role of integrins in reproduction// Proc. Soc. Exp. Biol. Med. -2000. Vol.223. - №4. - P. 331 - 343.

83. Boyle M.J., Vasak E., Tschuchnigg M., Turner J.J., Sculley T. et al. Subtypes of Epstein-Barr virus (EBV) in Hodgkin's disease: association between B-type EBV and immunocompromise// Blood. 1993. - Vol. 81. - P. 468 - 474.

84. Brody B., A., Rhee S., S., Hunter E. Postassembly cleavage of a retroviral glycoprotein cytoplasmic domain removes a necessary incorporation signal and activates fusion activity// Journal of Virology. 1994. - Vol. 68. - P. 46204627.

85. Bryant M. L., Gardner M. B., Marx P.A., Maul D. H., Lerche N. W. et al. Immunodeficiency in rhesus monkeys associated with original Mason-Pfizer monkey virus// J. Natl. Cancer inst. 1986. - Vol. 77. - P. 957 -965.

86. Burge, C. and Karlin, S. Prediction of complete gene structures in human genomic DNA// J. Mol. Biol. 1997. - Vol. 268. - P. 78-94.

87. Burrows L., Clark K, Mould A.P., Humphries M.J. Fine mapping of inhibitory anti-alpha5 monoclonal antibody epitopes that differentially affect integrin-ligand binding// Biochem. J. 1999. - Vol. 1. - № .344. - P. 527 - 533.

88. Bush B. Screening for alcogol abuse using the CAGE questionnaire// American Journal of Medicine. 1986. - Vol. 82. - P. 231 - 235.

89. Butel J. S. Viral carcinogenesis: relevation of molecular mechanisms and etiology of human disease// Carcinogenesis. 2000. - Vol. 21. - №.3. - P. 405-426.

90. Callahan R., Raafat A. Notch signaling in mammary gland tumorigenesis// J. Mammary Gland Bio. Neoplasia. 2001. - Vol.6. - P. 23 - 36.

91. Calvete J.J. Platelet integrin GPIIMIIa: structure-fiinction correlations. An update and lessons from other integrins// Proc. Soc. Exp. Biol. Med.- 1999. -Vol. 222. №.1. - P. 29-38.

92. Campbell D.W., MacGillivray I., Carr-Hill R. Pre-eclampsia in second pregnacy// Br. J. Obster Gynaecol. 1985. - Vol. 92. - P. 131 - 140.

93. Campbell K.R., Ohman E.M., Cantor W., Lincoff A.M. The use of glycoprotein Ilb/IIIa inhibitor therapy in acute ST-segment elevation myocardial infarction: current practice and future trends// Am. J. Cardiol. -2000. Vol. 27. - № 85. - P. 32 - 38.

94. Campo M.S., Jarrett W.F., Barron R. et.al. Association of bovin papillomavirus type 2 and bracen fern with bladder cancer in cattle// Cancer Res. 1992. - Vol. 52. - P. 6898 - 6904 .

95. Castel S., Pagan R., Garcia R., Casaroli-Marano R.P., Reina M., Mitjans F., Piulats J., Vilaro S. Alpha v integrin antagonists induce the disassembly of focal contacts in melanoma cells// Eur. J. Cell. Biol.- 2000. Vol.79. - №. 7. -P. 502-512.

96. Cecchini S., Cipparone I., Confortini M. Urethral cytology of cytobrush specimens// Acta Cytol. 1998. - Vol. 32. - P. 314 - 317.

97. Chakrabarti O., Krishna S. Molecular interactions of "high risk" human papillomaviruses E6 and E7 oncoprotens: implications for tumor progression // J. Biosci. 2003. - Vol.28. - No.3. - P. 337 - 348.

98. Chen S.-H., Zhang M., Wang N.-S., Scott C.R. Gene frequencies of alcohol dehydrogenase 2 (ADH2) and and aldehyde dehydrogenase-2 (A1DH2) in five Chinese minorities// Hum. Genet. 1994. - Vol. 94. - P. 571 - 572.

99. Chen X., Chu, M., Giedroc, D., P. Spectroscopic characterization of Co(II)-, Ni(II)-, and Cd(II)-substituted wild-type and non-native retroviral-type zinc finger peptides// J. Biol. Inorg. Chern. 2000. - Vol. 5. - № .l.-P. 93-101.

100. Chen, R., Wang, H., Mansky, L. M. Roles of uracil-DNA glycosylase and dUTPase in virus replication// Journal of General Virology. 2002. - Vol. 83. -P. 2339-2345.

101. Cheng L., Nagabhushan M., Pretlow T. P, et al. Expression of E-cadherin in primary and metastatic prostate cancer// Am. J Pathol. 1996. - Vol. 148. - P. 1375 - 1380.

102. Cheresh D. Integrins: structure, function and biological properties// Adv. Mol. Cell Biol. 1993. - Vol. 6. - P. 225 -252.

103. Choi, G., Park, S., Choi, B., Hong, S., Lee, J., Hunter, E., Rhee, S. Identification of a Cytoplasmic Targeting/Retention Signal in a Retroviral Gag Polyprotein // Journal of Virology. 1999. - Vol. 73. - № 7. - P. 5431 -5437.

104. Chopra H.C., Mason M.M. A new virus in a spontaneous mammary tumor of a rhesus monkey// Cancer Res. 1970. - Vol. 30. - P. 2081 - 2086.

105. Coffin, J.M., Hughes, S.H., Varmus, H.E. Retroviruses. / CSHL Press. -1997. (Section 2. Retroviral Taxonomy, Protein Structures, Sequences, and Genetic Maps).

106. Cotter M. A., E. S. Robertson. Modulation of histone acetyltransferase activity through interaction of Epstein-Barr nuclear antigen 3C with prothymosin alpha// Mol. Cell. Biol. 2000. - Vol. 20. - P. 5722 - 5735.

107. Crabb D. W., Matsumoto M., Chang D., You M. Overwiew of the role alcohol dehydrogenase and aldehyde dehydrogenase and their variants in the genesis of alcohol-related pathology// Proc. Nutr. Soc. 2004. - Vol. 63. -№.1.-P. 49 - 63.

108. Cullen B.R. Nuclear RNA Export Pathways// Molecular and Cellular Biology.-2000. Vol. 20,- №. 12.-P. 4181 - 4187.

109. Dalbies-Tran, R., E. Stigger-Rosser, T. Dotson, C. E. Sample. Amino acids of Epstein-Barr virus nuclear antigen 3A essential for repression of J-mediated transcription and their evolutionary conservation// J. Virol. 2001. - Vol. 75. -P.90 - 99.

110. Darribere T., Skalski M., Cousin H.L., Gaultier A., Montmory C., Alfandari D. Integrins: regulators of embryogenesis // Biol. Cell.- 2000. Vol. 92. - №.1. - P. 5-25.

111. De Arcangelis A., Georges-Labouesse E. Integrin and ECM functions: roles in vertebrate development// Trends. Genet.- 2000. Vol. 1. - № 6. - P. 389 -395.

112. De Jong M.J., Wright S.L. New. adjunctive therapy for ischemic syndromes. //Crit. Care. Nurs. Clin. North. Am. 1999. - Vol. 11. - № 3. - P. 355 - 371.

113. Dillner I. Mapping of linear epitopes of human papillomavirus type 16: The El, E2, E4, E5, E6 and E7 open reading frames // Int. J. Cancer. 1990. -Vol.46. - P. 703-711.

114. Donehower L.A., Bohannon R.C., Ford R.Gj., Gibbs R.A. The use of primers from higly concerved pol regions to identify uncharacterized retroviruses by the polymerase chain reaction// J. Virol. Methods. 1990. -Vol. 28,№1.-P. 33-46.

115. Dong S., Kim H., Rha S. et al. Promotor hypermrthilation of multiple genes in carcinoma of the uterine cervix// Clin. Cancer. Res. 2001. - Vol. 7. - P. 1982-1986.

116. Du M., Hong E., Chen J.J. Interaction of oncogenic pappilomavirus E6 protein with fibulin-1// Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002. - Vol. 296. -P. 962 - 969.

117. Duc-Goiran P.,Mignot T.M., Bourgeois C., Ferre F. Embrio-maternal interactions at the implantation: a delicate equilibrium// European Jour, of Obstetrics&Gynecology and Reproductive Biology. 1999. - Vol. 83. - №. 1. -P. 85- 100.

118. Duncan A. W., Rattis F.M., DiMascio L. N., Congdon K. L., Pasianos G. et al. Integration of Notch and WNT signaling in hematopoietic stem cell maintenance// Nature Immunology. 2005. - Vol. 6. - N.3. - P. 314 - 322.

119. Echt C.S., May-Marquardt P., Hseih M., Zachorchak R. Characterization of microsatellite markers in eastern white pine// Genome. 1996. - Vol. 39. - P. 1102-1108.

120. Ehlers C. L., Gilder D. A., Wall T. L., Phillips E. et al. genomic screen for loci associated with alcohol dependence Mission Indians// Am. J. Med. Genet. 2004. - Vol. 129B. - P. 110 - 115.

121. Ernst R.K., Bray M., Rekosh d., Hammarskjold M.L A structural retroviral RNA element that mediates nucleocytoplasmatic export of intron-containing RNA//Moll.Cell Biol.-1997.- Vol. 17.-P. 135 144.

122. Ernst R.K., Bray M., Rekosh d., Hammarskjold M.L. Secondary structure and mutational analysis of the Mason-Pfizer monkey virus RNA constitutive transport element// RNA. 1997. - Vol. 3. - P. 210 - 222.

123. Ethnic variation as a key to the biology of human desease// Annals of internal Medicine. 1997.- Vol. 127. - P. 401 - 403.

124. Etzioni A. Integrins: the molecular glue of life// Hosp. Pract. 2000. - Vol. 15.- №.35.- P. 102- 108.

125. Fan H., Nicholls J., Chua D. et al. Laboratory markers of tumor burden in nasopharengeal carcinoma: A comparison of viral load and serologic tests for Epstein-Barr virus// Int. J. Cancer. 2005. - (Epub. ahead of print).

126. Farell P.J. Epstein-Barr virus genome. In advances in virol oncology., vol.8. Tumorigenic DNA viruses (Klein, G., ed.) p. 103 -132. New -York: Raven Press.

127. Fassone L., Cingolani A., Martini M., Migliaretti G., Oreste P.L., Capello D., Gloghini A. et al. Characterization of Epstein-Barr virus genotype in AIDS-related non-Hodgkin's lymphoma// AIDS Res. Hum. Retroviruses. 2002. -Vol. 18.-№.1.- P. 19-26.

128. Figuera-Silva C.M., Pereira F.E. Prevalence of Epstein-Barr virus antibodies in healthy children and adolescents in Vitoria, State of Esperito santo, Brasil.// Rev. Soc. Bras. Med. Trop. 2004. - Vol. 37. - №.5. - P. 409 -412.

129. Fine, D., Schochetman, G. Type D primate retroviruses: a review // Cancer Res.-1978.- Vol. 38.-№ 10.-P. 3123-3139.

130. Ford R. J., Donehover L. A., Bohannon R.C. Studies on a type D retrovirus isolated from an AIDS patient lymphoma// AIDS Res. Hum. Retroviruses. -1992.- Vol. 8. -No.5. P. 742-751.

131. Freed E.O. Viral late domains// J. Virol. 2002. - Vol. 76. - No.10. - P. 4679-4687.

132. Frish S.M., Screaton R.A. Anoikis mechanisms// Curr. Opin. Cell Biol. -2001.- Vol. 13.-P. 555-562.

133. Fuentes-Pananá, E. M., R. Peng, G. Brewer, J. Tan, P. D. Ling. Regulation of the Epstein-Barr virus C promoter by AUF1 and the cyclic AMP/protein kinase A signaling pathway// J. Virol. 2000. - Vol. 74. - P. 8166 - 8175.

134. Fukushi J., Ono M., Morikawa W., Iwamoto Y., Kuwano M. The activity of soluble VCAM-1 in angiogenesis stimulated by IL-4 and IL-13// J. Immunol.2000. Vol. 165. - № 5. - P. 2818 - 2823.

135. Gaetany C.D., Ferrari G., Righi E. et.al. Detection of human papillomavirus DNA in urinary bladder carcinoma by in situ hybridisation// J. Clin. Pathol. -1999.- Vol. 52.-P. 103 -106.

136. Galli M., Maggioni A.P., Vassanelli C., Tavazzi L. The clinical use of the GPIIb/IIIa inhibitors eptifibatide and tirofiban in the treatment of acute coronary syndromes of the "non-ST elevation" type.// Ital. Heart. J. 2000. -Vol. 1.- P. 202-211.

137. Gfatter R., Spaengler B., Boeck A., Braun F., Cross H., Spaengler H.P. The mitosis of fibroblasts in cell culture is enhanced by binding GP Ilb-IIIa of activated platelets on fibrinogen // Platelets. 2000. - Vol.11. - № 4. - P. 204 -214.

138. Giancotti F. G. pi-integrins involve in cell migration, cytoskeletal reorganization and signal transduction// Nat.Cell.Biol. 2000. - Vol.2. - P. 13 -14.

139. Giedroc D., P., Theimer, C., A., Nixon, P., L. Structure, stability and function of RNA pseudoknots involved in stimulating ribosomal frameshifting II J. Mol. Biol. -2000. Vol. 298.-P. 167-185.

140. Gillison M.L., Shan K.V. Human papillomavirus assotiated head and neck squamos carcinoma: mounting evidence for an etiologic role for human papillomavirus in a subset of head and neck cancers// Curr. Opin. Cell Biol.2001.- Vol. 13.-P. 183- 188.

141. Gimelli G., Kalra A., Sabatine M.S., Jang I.K. Primary versus rescue percutaneous coronary intervention in patients with acute myocardial infarction// Acta Cardiol. 2000. - Vol. 55. - №. 3. - P. 187 - 192.

142. Goedde H.W., Agarwal D.P., Fritze G., Meier-Tackmann D. Et al. Distribution of ADH2 and ALDH2 genotypes in different populations// Hum.Genet. 1992. - Vol. 88. - P. 344 - 346.

143. Goldschmidt-Clermont P.J., Coleman L.D., Pham Y.M. et al. Higher prevalence of GPIIIa P1(A2) polymorphism in siblings of patients with premature coronary heart disease// Arch. Path. Lab. Med. 1999. - Vol. 123. -P. 1223-1229.

144. Gonsalgo M.L. and Isaacs W.B. Molecular pathways to prostate cancer// J. Urol. 2003. - Vol. 170. - P. 2444 - 2452.

145. Gottwein E., Bodem J., Muller B., Schmechel A. et al. The Mason-Pfizer monkey virus PPPY and PSAP motifs both contribute to virus release// J. Virol.-2003. Vol. 77. - No. 17. - P. 9474 - 9485.

146. Grce M., Furcic I., Hraccan R et al. Human papillomaviruses are not associated with renal carcinoma//Anticancer Res. 1997. - Vol. 17. - P. 2193 -2196.

147. Griffits T.R., Mellon J.K. Human papillomavirus and urological tumors: II. Role in bladder, prostate, renal and testicular cancer// BJU. Int. 2000. - Vol. 85.- P. 211 -217.

148. Grundhoff, A. T., E. Kremmer, O. Tureci, A. Glieden, C. et al. Characterization of DP 103, a novel DEAD box protein that binds to the Epstein-Barr virus nuclear proteins EBNA2 and EBNA3C// J. Biol. Chem. -1999. Vol. 274. - P. 19136 - 19144.

149. Hamet P. Genetic determinants of the dynamics and kinetics of alcohol as an enviromental modifier of blood pressure.// Journal of Hypertension. 2003. - Vol. 21.-P. 1077-1078.

150. Hammerschmidt, W., B. Sugden, and V. R. Baichwal. The transforming domain alone of the latent membrane protein of Epstein-Barr virus is toxic to cells when expressed at high levels// J. Virol. 1989. - Vol. 63. - P. 2469 -2475.

151. Hannigan G.E., Leung-Hagesteijn C., Fitz-Gibbon L., Copalino M. et al. A novel ankyrin repeat-containing serine/threonine protein kinase interacts with the pi cytoplasmic domain// Nature. 1995. - Vol. 379. - P. 91 - 96.

152. Harada S. Genetic polymorphism of alcohol metabolizing enzymes and its implication to human ecology// J. Anthropol. Soc. Nippon. -1991. Vol. 99. -P. 123-139

153. Harada, S., E. Kieff. Epstein-Barr virus nuclear protein LP stimulates EBNA-2 acidic domain-mediated transcriptional activation// J. Virol. 1997. -Vol. 71.-P. 6611 -6618.

154. Harada, S., R. Yalamanchili, E. Kieff. Epstein-Barr virus nuclear protein 2 has at least two N-terminal domains that mediate self-association// J. Virol. -2001.- Vol. 75.-P. 2482-2487.

155. Harper J. A., Yuan J.S., Tan J.B., Visan I., Guidos C.J. Notch signaling in development and disease// Clin. Genet. 2003. - Vol. 64. - P. 461 - 472.

156. Hayward C., Brock D. Reply to Van Meter and Weaver: Concerns about the Genetics of Pre-eclampsia// Am. J. Hum. Genet. 1993. - Vol. 52. - P. 10131014.

157. Hayward C., Livingstone J., Holloway S., Liston W. F., Brock D. J. H. An exclusion map for pre- eclampsia: assuming autosomal recessive inheritance// Am. J. Humanity Genetic. 1992. - Vol. 50. - P. 749 - 757.

158. Heino J. The collagen receptor integrins have distinct ligand recognition and signaling functions//Matrix Biol.-2000.-Vol. l.-№. 19. P. 319 - 323.

159. Henkel, T., P. D. Ling, S. D. Hayward, M. G. Peterson. Mediation of Epstein-Barr virus EBNA2 transactivation by recombination signal-binding protein Jk// Science. 1994. - Vol. 265. - P. 92 - 95.

160. Higuchi S. Polymorphisms of alcohol-oxidizing enzymes and drinking: patterns and alcohol-related problems among Asians// Alcohol Res. 1997. -Vol.2.-No.l.-P.3-8.

161. Higuchi S., Matsushita S., Imazeki H. et al. Aldehyde dehydrogenase genotypes in Japanese alcoholics// Lancet. 1994. - Vol. 343. - P. 741 - 742.

162. Higuchi S., Matsushita S., Murayama M., Takagi S.T., Hayashida M. Alcohol and aldehyde dehydrogenase polymorphisms and the risk for alcoholism//Am. J. Psychiatry. 1995. - Vol. 152. - P. 1219 - 1221.

163. Hull S., Boris-Lawrie K. Analysis of synergy between divergent simple retrovirus posttranscriptional control elements// Virology. 2003. - Vol. 317(1).-P. 146- 154.

164. Hull S., Boris-Lawrie K. RU5 of Mason-Pfizer monkey virus 5' long terminal repeat enhances cytoplasmic expression of human immunodeficiency virus type 1 gag-pol and nonviral reporter RNA// J. Virol. 2002. - Vol. 76. -No.20.-P.102H - 10218.

165. Humphries M. J. Towards a structural model of an integrin// Biochem. Soc. Symp. 1999. - Vol. 65. - P. 63 - 78.

166. Humphries M.J. Integrin Structure// Biochem. Soc. Trans. 2000. - Vol. 1. -№.28.- P. 311 -339.

167. Hunsman G., Flugel R.M., Walder R. Retroviral antibodiws in Indians// Nature. 1990.- Vol. 345.-P. 120.

168. Hynes R.O. Integrins: a family of cell surface receptops// Cell. 1987. -Vol. 48.-P. 549-554.

169. Hynes R.O. Integrins: versatile, modulation and signaling in cell adhesion// Cell. 1992. -Vol. 69. - P. 11 - 25.

170. Ikari Y., Yee K.O., Hatsukami T.S., Schwartz S.M. Human carotid artery smooth muscle cells rarely express alpha(v)beta3 integrin at sites of recent plaque rupture// Thromb. Haemost. 2000. - Vol. 84. - P. 338 - 344.

171. Isse T., Oyama T., Kitagawa K., Matsuno K. et al. Diminished alcohol preferance in transgenic mice lacking aldehyde dehydrogenase activity// Pharmacogenetics. 2002. - Vol. 12. - P. 621 - 626.

172. Ivaska J., Heino J. Adhesion receptors and cell invasion: mechanisms of integrin-guided degradation of extracellular matrix// Cell. Mol. Life Sci. -2000. Vol. 20. - №. 57. - P. 16 - 24.

173. Iwahashi K., Matsuo Y., Suwaki H. et al. CYP2E1 and ALDH2 genotypes and alcohol dependence in Japanese // Alcohol Clin. Exp. Res. 1995. -Vol.19.-P. 564-566.

174. Iwahashi K., Suwaki H. Ethanol metabolism, toxicity and genetic polymorphism// Addiction biology. -1998. Vol. 3. - P.249 -259.

175. Jemal A., Murray T., Samuels A., Ghafoor A., Ward E. and Thun M. Cancer statistics, 2003. CA Cancer// J. Clin. 2003. - V. Vol. 53.- P. 5 - 40.

176. Jemal A., Thomas A., Murray T. and Thun M. Cancer statistics, 2002. CA Cancer// J. Clin. 2002. - Vol. 52. - P. 23 - 56.

177. Jenkins A. L., Nannizzi-Alaimo L., Silver D., Sellers J. R. Et al. Tyrosine phosphorylation of ß3 cytoplasmic dornen mediates integrin-cytoskeletal interaction// J. Biol. Chem. 1998. - Vol. 273. - P. 13875 - 13885.

178. Jenne D. E., Tinschert S., Stegmann E., Reimann H., Nürnberg P., Horn D., Naumann I., Buske A., Thiel G. A common set of at least 11 functional genes are lost in the majority of NF1 patients with gross deletions// Genomics. -2000.- Vol. 66.-P. 93-97.

179. Jensen E.M., Zelljadt H.C., Chopra H.C., Mason M.M. Isolation and propagation of a virus from a a spontaneous mammary carcinoma of a rhesus monkey// Cancer Res. 1970. - Vol. 30. - P. 2388 - 2393.

180. Jensen M.K., De Nully Brown P., Lund B.V., Nielsen O.J., Hasselbalch H.C. Increased platelet activation and abnormal membrane glycoprotein content and redistribution in myeloproliferative disorders// Br. J. Haematol.-2000.-Vol. 110. № 1. - P. 116-124.

181. Jiang G., Giannone G., Critchley D. R. Fukumoto E., Sheetz M.P. Two-piconet slip bond between fibronectin and the cytoskeleton depends on talin// Nature. 2003. - Vol. 424. - P. 334 - 337.

182. Jiang H., Cho Y.G., Wang F. Structural, functional, and genetic comparisons of Epstein-Barr virus nuclear antigen 3A, 3B, and 3C homologues encoded by the rhesus lymphocryptovirus// J. Virol. 2000. - Vol. 74. - №.13. -P. 5921 - 5932.

183. Johannsen, E., C. L. Miller, S. R. Grossman, E. Kieff. EBNA-2 and EBNA-3C extensively and mutually exclusively associate with RBPJ in Epstein-Barr virus-transformed B lymphocytes// J. Virol. 1996. - Vol. 70. - P. 4179 -4183.

184. Johannsen, E., E. Koh, G. Mosialos, X. Tong, E. Kieff, S. R. Grossman. Epstein-Barr virus nuclear protein 2 transactivation of the latent membrane protein 1 promoter is mediated by J kappa and PU.l// J. Virol. 1995. - Vol. 69.-P. 253-262.

185. Johnson K.G., Bromley S.K., Dustin M.L., Thomas M.L. A supramol^cular basis for CD45 tyrosine phosphatase regulation in sustained T cell activation // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. -2000. Vol. 29. - P. 10138 - 10143.

186. Jox A., Rohen C., Beige G., Bartnitzke S., Pawlita M. et al. Integration of Epstein-Barr virus in Burkitt's lymphoma cells leads to a region of enhanced chromosome instability// Ann. Oncol. 1997. - Vol. 8. - Suppl. 2. - P. 131 -135.

187. Juliano R. L., Haskill S. Signal transduction from the matrix// J. Cell Biol. -1993. Vol.120. - P. 577 - 585.

188. Kaiser, C., G. Laux, D. Eick, N. Jochner, G. W. Bornkamm, B. Kempkes. The proto-oncogene c-myc is a direct target gene of Epstein-Barr virus nuclear antigen 2//J. Virol. 1999. - Vol. 73.-P. 4481 - 4484.

189. Kamel D., Paakko P., Pollanen R. et al. Human papillomavirus DNA and abnormal p53 expression in carcinoma of the urinary bladder// APMIS. 1995. - Vol. 103. -P. 331 -338.

190. Kanegane H., Bhatia K., Gutierrez M., Kaneda H. et al. A syndrome of peripheral blood T-cell infection with Epstein-Barr virus (EBV) followed by EBV-positive T-cell lymphoma// Blood. 1998. - Vol. 91. - №.6. - P. 2085 -2091.

191. Kang, Y., Bogerd, H., P., Cullen, B., R. Analysis of Cellular Factors That Mediate Nuclear Export of RNAs Bearing the Mason-Pfizer Monkey Virus Constitutive Transport Element// Journal of Virology. 2000. - Vol. 74. - № 13.-P. 5863-5871.

192. Kawa K. Current diagnosis and prognostic importance of EBV-associated neoplasm// Nippon. Rinsho. 1997. - Vol. 55. - №.2. - P. 446 - 451.

193. Kaye K.M., Kief E. Epstein-Barr virus. Infectious Deseases, VIII. 1998. Gorbach, Bartlett, Blacklow. P. 2067-2081.

194. Kaykas, A., B. Sugden. The amino-terminus and membrane-spanning domains of LMP-1 inhibit cell proliferation//Oncogene. 2000. - Vol. 19.-P. 1400- 1410.

195. Kent, W. J., Sugnet, C. W., Furey, T. S., Roskin, K. M., Pringle, T. H., Zahler, A. M., Haussler, D. The Human Genome Browser at UCSC// Genome Research. 2002. - Vol. 12. - №. 5. - P. 996 - 1006.

196. Kereiakes D.J., Runyon J.P., Broderick T.M., Shimshak T.M. lib's are not lib's // Am. J. Cardiol. 2000. - Vol. 27. - №. 85. - P. 23 - 31.

197. Key T. Risk factors for prostate cancer // Cancer Surv. 1995. - Vol. 23. -P. 63 - 77.

198. Khan G., Norton A. J, Slavin G. Epstein-Barr virus in Reed-Sternberg-like cells in non-Hodgkin's lymphomas// J. Pathol. 1993. - Vol. 169. - №.1. - P. 9-14.

199. Khanim F., Yao Q.Y., Niedobitek G. et al. Analysis of Epstein-Barr virus gene polymorphisms in normal donors and virus-assotiated tumors from different geographic locations// Blood. 1996. - Vol. 88. - №.9. - P. 3491 -34501.

200. Kieff E. Epstein-Barr virus and its replication. In Field B.N., Knipe D.M., Howley P.M. (eds): fields Virology, ed.3. Philadelphia, Lippincot-Raven, 1996, pp. 2343-2396.

201. Kieff, E., and A. Rickinson. Epstein-Barr virus and its replication, p. 25112573. In D. Knipe, P. Howley, D. Griffin, R. Lamb, M. Martin, B. Roizman, and S. Straus (ed.), Fields virology, 4th ed. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa. 2001.

202. Kim H.O., Jin Y., Kickler T. S. et. al. Gene frequencies of the five major platelet antigens in African American, white, and Korean populations// Transfusion. 1995. - Vol. 35. - P. 863 - 867.

203. Kimura S., Okabayashi Y. Inushima K. et.al. Alhol and aldehyde dehydrogenase polymorphisms in japanase patients with alcohol-induced chronic pancreatitis// Digestive diseases and Sciences. 2000.- Vol. 45. -№.10.-p.2013 -2017.

204. Kishimoto R., Ogishi Y., Ueda M., Matsusaki M., Amako K. et al. Gender-related differences in mouse hepatic ethanol metabolism// J. Nutr. Sci. Vitaminol. 2002. - Vol. 48. - P. 216 - 224.

205. Klaes R. Overexpression of pl6 (INK4) as a specific marker for dysplastic and neoplastic epithelial cells of the cervix uteri// Int. J. Cancer. 2001. - Vol. 92. - P. 276 - 284.

206. Klein E . The complexity of the Epstein-Barr virus infection in humans// Pathol. Oncol. Res. 1998. - Vol. 4. - №. 1. - P. 3 - 7.

207. Koutsky L. A., Kiviar N. B. Genital human papillomavirus. In: Sexual Transmitted Diseases/ Ed. K.K. Holmes et al. 3- ed. NcGrow. - Hill. - New York, 1999.-P. 160-347.

208. Kucick D.F., O'Tool T. E., Zheleznyak A. et al. Actinstion-enchanced aIIbß3-Integrin-Cytoskeleton interactions outside of focal contacts require a-subunit// Mol. Biol. Cell. 2001. - Vol. 12. - P. 1509 -1518.

209. Kwang H.S., Pedersen N.C., Lerche N. W., Osborn P.A. et al. Viremia, antigenemia, and serum antibodies in rhesus macaques infected with simian retrovirus type 1 and their relationship to disease course// Lab. Investig. -1987.- Vol.56. P. 591 -597.

210. Kzhyshkowska J.G., Kiselev A.V., Gordina G. A., Kurmashov V. I. et al. Markers of type D retrovirusea in children with Berkitt's type lymphoma// Immunology Letters. - 1996. - Vol. 53. - P. 101 -104.

211. Lanza F., Kieffer N., Phillips D.R., Fitzgerald L. A. Haracterization of the human platelet glycopreytein Ilia gene: comparison with the fibronectinreceptor beta- subunit gene// J. Biol. Chem. 1990. - Vol. 265. - P. 18098 -18103.

212. Laser M., Willey C.D., Jiang W., Cooper I., Menick D.R., Zile M.R., Kuppuswamy D. Integrin activation and focal complex formation in cardiac hypertrophy // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 24. - P. 10283 - 10295.

213. Law D.A., De Guzman F.R., Heiser P., Ministri-Madrid K. et al. Integrin cytoplasmic tyrosine motif is required for outside-in a2p3 signaling and platelet function//Nature. 1999. - Vol. 401. - P. 808 - 811.

214. Lebrun P., Baron V., Hauck C.R., Schlaepfer D.D., Van Obberghen E. Cell adhesion and focal adhesion kinase regulate insulin receptor substrate-1 expression // J. Biol. Chem.- 2000. Vol. 24. - P. 11312 - 11320.

215. Lee M. A., Diamond M. E., Eates J.L. Genetic evidence that EBNA-1 is needed for efficient, stable latent infection by Epstein-Barr virus// J. Virol. -1999. Vol. 73. - P. 2974 - 2982.

216. Lefkovits J., Plow E.F., Topol E. J. Platelet glycopreytein Ilb/IIIa receptors in cardiovascular medicine// New Eng. J. Med. 1995. - Vol. 332. - P. 1553 -1559.

217. Leibowitz D, Kieff E. In human herpesviruses. New-York, Raven Press, 1993.-P. 107-172.

218. Lessey B.A., Castelbaum A.J., Wolf L. et al. Use of integrins to date the endometrium// Fertil. Steril. 2000. - Vol.73. - P. 779 - 787.

219. Levesque L., Guzik B., Guan T., Coyle J., Black B.E. et al. RNA export mediated by tap involves NXT1-dependent interactions with the nuclear pore complex//! Biol. Chem. 2001. - Vol. 276. - No.48. - P. 44953 - 44962.

220. Li R., Mistra N., Gratkowsky H., Villaire G. et al. Activation of integrin alpha-II-beta-3 by modulation of transmembrane helix associations// Science. -2003. Vol. 300. - P. 795 - 798.

221. Lila S. Jonsdottir, Reynir Arngrimsson, R.T. Geirsson, H. Sigvaldason, N. Sigfusson. Death rates from ischemic heart disease in woman with a history of hypertension in pregnancy// Acta. Obstet. Gynecol. Scand.- 1995. Vol.74. - P. 772 - 776.

222. Lillehoj E.P., Ford G.M., Bachmann S., Schroder J. et al. Serum antibodies reactive with non-human primate retroviruses identified in acute onset schizophrenia// J. Neirovirol. 2000. - Vol. 6. - P. 492 - 497.

223. Lin J., Johannsen E., Robertson E., Kieff E. Epstein-Barr virus nuclear antigen 3C putative repression domain mediates coactivation of the LMP1 promoter with EBNA-2//J. Virol. 2002. - Vol. 76. - №. 1. - P. 232 - 242.

224. Liston W. A., Kilpatrick D. C. Is genetic susceptibility to pre-eclampsia conferred by homozygosity for the same single recessive gene in mother and fetus?// British Jornal of Obstetrics and Gynaecology. 1991. - Vol. 98. - P. 1079- 1086.

225. Liu Q, Ohshima K, Masuda Y, Kikuchi M. Detection of the Epstein-Barr virus in primary gastric lymphoma by in situ hybridization// Pathol. Int. -1995.- Vol. 45.-№.2.-P. 131 136.

226. Lopez-Beltran A., Escudero A.L. Human papillomavirus and bladder cancer//Biomed. Pharmacother. 1997. - Vol. 51. - P. 252 -257.

227. Ludwig M., Kochel H.G., Fisher C et. al. Human papilloma virus in tissue of bladder and bladder carcinoma spesimens// Eur. Urol. 1996. - Vol. 30. - P. 96-- 102.

228. Maezawa Y., Yamauchi M., Toda G. et al. Alcohol metabolizing enzyme polymorphisms and alcoholism in Japan// Alcohol Clin. Exp. Res. 1995. -Vol. 19.-P. 951 -954.

229. Magnusson P. K., Sparen P., Gyllensten U. B. Genetic link to cervical tumours// Nature. 1999. - Vol. 400. - P. 29 - 30.

230. Maitra N., Flink I.L., Bahl J.J., Morkin E. Expression of alpha and beta integrins during terminal differentiation of cardiomyocytes// Cardiovasc Res. -2000. Vol. 1. - №. 47. - P. 715 - 725.

231. Manhardt B., Weinzimer S. A., Wagner M. et al. Human papillomavirus Type 16 E7 oncoprotein binds and inactivates growth-inhibitory insulin-like growth factor binding protein 3// Mol. Cell. Biol. 2000. - Vol. 20. - P. 6483 -6495.

232. Maragoudakis M.E., Tsopanoglou N.E., Andriopoulou P., Maragoudakis M.M. Effects of thrombin/thrombosis in angiogenesis and tumour progression.// Matrix. Biol. 2000. - Vol. 1. - №. 19. - P. 345 - 351.

233. Marshall D., C. Sample. Epstein-Barr virus nuclear antigen 3C is a transcriptional regulator// J. Virol. 1995. - Vol. 69. - P. 3624 - 3630.

234. Maruo S., Johannsen E., Illanes D., Cooper A., Kieff E. Epstein-Barr Virus Nuclear Protein EBNA3A Is Critical for Maintaining Lymphoblastoid Cell Line Growth.// J. Virol. 2003. - Vol. 77. - P. 10437 - 10447.

235. McDonald, W. H., Ohi, R., Smelkova, N., Frendewey, D., Gould, K. L. Myb-related fission yeast cdc5p is a component of a 40S snRNP-containing complex and is essential for pre-mRNA splicing// Mol. Cell. Biol. 1999. -Vol. 19.-№8.-P. 5352 -5362.

236. McDowall A., Invald D., Leitinger B., Jones A., Liesner R., Klein N., Hogg N. A novel form of integrin dysfunction involving beta-1, beta-2, and beta-3 integrins// J. Clin. Invest. 2003. - Vol. 111. - P. 51 - 60.

237. McGeoch D. J. Molecular evolution of the gamma-Herpesvirinae// Philos. Trans. R. Soc. Lond. B Biol. Sci. 2001. - Vol. 356. - №.1408. - P. 421 -435.

238. Menegatti M., Asselta R., Duga S., Malcovati M. et al. Identification of four novel polymorphisms in the Alpha and gamma fibrinogen genes and analysis of association with plasma levels of the protein// Thromb. Res. 2001. - Vol. 103.-P. 299-301.

239. Meter T.D., Weaver D.D. Concerns about the Genetics of Pre-eclampsia// Am. J. Hum. Genet. 1993. - Vol. 52. - P. 1012 - 1013.

240. Miller W. E., Edwards R. E., Walling D. M., Raab-Traub N. Sequence variations in Epstein-Barr virus latent membrane protein// J. Gen. Virol. -1994.- Vol. 75.-P. 2729.

241. Minami J., Todoroki M., Ishimitsu T. et al. Effects of alcohol intake on ambulatory blood pressure, heart rate, and heart rate variability in Japanese men with different ALDH2 genotypes// J. Hum. Hypertens. 2002. - Vol. 16. -P. 345-351.

242. Moazed T. C., Thouless M.E. Viral persistence of simian type D retrovirus (SRV-2/W) in naturelly infected pigtailed macaques (Macaca nemestrina)// J. Med. Primatol. 1993. - Vol. 22. - P. 382 - 389.

243. Moon U.Y., Park S.J., Oh S.T., Kim W.U. et al. Patients with systematic lupus erythematosus have abnormally elevated Epstein-Barr virus load in blood// Arthritis Res. Ther. 2004. - Vol. 6. - P. 295 - 302.

244. Morozov V.A., Lagaye S., Lyakh L., Meulen J. Type D retrovirus markers in healthy Africans from Guinea // Res. Virol. 1996. - Vol. 147. - №.6. - P. 341 -351.

245. Morozov V.A., Sal F., Gessian A., Terrinha A., Purius J. Antibodies to gag gene coded polypeptides of type D retrovirus in healthy people from GuineaBissau //Intervirology. 1991.- Vol. 32. - №.4. -P. 253-257.

246. Munch M. Epstein-Barr virus strain characterization// APMIS. 1998. -Vol. 106.-№.4.-P. 425 - 433

247. Mustafa F., Lew K.A., Schmidt R.D., Browning MT, Rizvi TA. Mutational analysis of the predicted secondary RNA structure of the Mason-Pfizer monkey virus packaging signal// Virus Res. 2004. - Vol. 99. - No. 1. - P. 35 - 46.

248. Mustafa F., Phillip P.S., Jayanth P., Ghazawi A. et al. Close proximity of the MPMV CTE to the polyadenylation sequences is important for efficient function in the subgenomic context// Virus Res. 2004. - Vol. 105. - No.2. -P. 209-218.

249. Mvula M., Iwasaka T., Iguchi A. Do human papillomavirus have a role in the pathogenesis of bladder carcinoma// J. Urol. 1996. - Vol. 155. - P. 471 -474.

250. Nakagawa S., Huibregtse J.M. Human scribble (Vartul) is target for ubiquiyin-mediated degradation by high risk papillomavirus E6 protein and the E6AP ubiquitin-protein ligase// Moll. Cell. Biol. 2000. - Vol. 20. - P. 8244 -8253.

251. National Cancer Institute sponsored study of classifications of non-Hodgin lympoma// Cancer. 1982 - Vol.49. - P. 2112 - 2135.

252. Nermut M. V., Bron P., Thomas D., Rumlova M. et al. Molecular organization of Mason-Pfizer monkey virus capsids assembled from Gag polyprotein in Escherichia coli//J. Virol. 2002. - Vol. 76. - No.9. - P. 4321 -4330.

253. Nerurkar A.Y., Vijayan P., Srinivas V., Soman C. S, Dinshaw K. A., et al. Discrepancies in Epstein-Barr virus association at presentation and relapse ofclassical Hodgkin's disease: impact on pathogenesis// Ann. Oncol. 2000. -Vol. 11.-№.4.- P. 475-478.

254. Newman P.J. Nomenclature of human platelet alloantigenes: a problem with the HPA system?// Blood. 1994. - Vol. 83. - P. 1447 - 1451.

255. Newman P.J., Seligsohn U., Lyman S., Coller B.S. The molecular genetic basis of Glanzmann thrombasthenia in the Iraqi-Jewish and Arab population in Israel//Proc. Nat. Acad. Sci 1991.- Vol. 88.-P. 3160-3164.

256. Newman P.J., Seligsohn U., Lyman S., Poncz M., Coller B.S. The molecular genetic basis of Glanzmann thrombasthenia in the Iraqi-Jewish and Arab population in Israel// Clin. Res. 1990. - Vol. 38. - P. 467A.

257. Nguen S. N., Frenk J. Health polycies in transition economies. Oxford textbook of public health. 4th. Ed. Oxford University Press. 2001.- Vol. 1. -Ch.3.4.-P. 297-308.

258. Nicolas J.C., Marechal V., Dehee A. Epstein-Barr virus// Bull. Acad. Natl. Med.-1997.- Vol. 181.-N.6.-P. 981 -996.

259. Niedobitek G. The role of Epstein-Barr virus in the pathogenesis of Hodgkin's disease// Ann. Oncol. 1996. - Vol. 7. - Suppl. 4. - P. 11 - 17 .

260. Nitsche F., A. Bell, A. Rickinson. Epstein-Barr virus leader protein enhances EBNA-2-mediated transactivation of latent membrane protein 1 expression: a role for the W1W2 repeat domai.// J. Virol. 1997. - Vol. 71. -P. 6619-6628.

261. Noma T., Kou K., Yoshizawa I., Kavano Y. et al. Monoclonal proliferation of Epstein-Barr virus-infected T-cells in a patient with virus-assotiated haemophagocytic syndrome // Eur. J. Pediatr. 1994. - Vol. 153. - P. 734 -738.

262. O'Connor D.P., Bennet M.A., Murphy G.M. et al. Do human papillomaviruses cause cancer //Curr. Diagn. Pathol. 1996. - Vol. 3. - P. 123 -125.

263. O'Connor M.J. Targeting of transcriptional cofactors by the HPV E6 protein: another tale of David and Goliath // Trends. Microbiol. 2000. - Vol. 8. .p. 45-47.

264. Ogurtsov P.P., Nuzny V.P., Garmash I.V., Moiseev V.S. Mortality in Russia//Lancet. -2001. Vol. 358. - P. 669 - 670.

265. Ohshima K, Suzumiya J, Kanda M, Kato A, Kikuchi M. Integrated and episomal forms of Epstein-Barr virus (EBV) in EBV associated disease// Cancer. Lett. 1998. - Vol. 122. - P. 43 - 50.

266. Ohshima K., Suzumiya J., Ohga S., Ohgami A., Kikuchi M. Integrated Epstein-Barr virus (EBV) and chromosomal abnormality in chronic active EBV infection.// Int. J. Cancer. 1997. - Vol. 71. - №.6. - P. 943 - 947.

267. Ohtsubo H., Arima N., Tei C. Epstein-Barr virus involvement in T-cell malignancy: significance in adult T-cell leukemia.// Leuk. Lymphoma. 1999. -Vol. 33.-P. 451 - 458.

268. Pan L., Diss T.C., Peng H., Lu Q. et al. Epstein-Barr virus (EBV) in enteropathy-associated T-cell lymphoma (EATL).// J. Pathol. 1993. - Vol. 170.- №.2. -P. 137-143.

269. Parise L.V. Integrin a2|33 signaling in platelet adhesion and agregation.// Curr. Opin. Cell Biol. 1999. - Vol. 11.-P. 597-601.

270. Park T.W., Fujiwara H., Wright T.C. Molecular biology of cervical cancer and its precursors.// Cancer. 1995. - Vol. 76. - P. 1902 - 1913.

271. Parker S.D., Hunter E. Activation of the Mason-Pfizer monkey virus protease within immature capsids in vitro.// Proc. Natl. Acad. Sci. US A.-2001.- Vol. 98. No.25. - P. 14631 - 14636.

272. Parker S.D., Wall J.S., Hunter E. Analysis of Mason-Pfizer monkey virus Gag particles by scanning transmission electron microscopy.// J. Virol. 2001. - Vol. 75.-No. 19.- P. 9543 -9548.

273. Pasquinelli A. E., Ernst R., K., Lund, E., Grimm, C. .et al. The constitutive transport element (CTE) of Mason-Pfizer monkey virus (MPMV) accesses a cellular mRNA export pathway.// EMBO. 1997. - Vol.16. - №. 24. - P. 7500 -7510.

274. Pastino G.M., Flynn E.J., Sultatos L.G. Genetic polymorphism in ethanol metabolism: issues and goals for physiologically based pharmacokinetic modeling.// Drug. Chem. Toxicol. 2000. - Vol. 23. - P. 179 -201.

275. Patel D., Huang M., Baglia L.A., McCance D. J. The E6 protein of human papillomavirus type 16 binds to and inhibits co-activation by CBP and p300// EMBO J. 1999. - Vol. 18. - P. 5061 - 5072.

276. Peng R., A. V. Gordadze, E. M. Fuentes Panana, F. Wang et al. Sequence and functional analysis of EBNA-LP and EBNA2 proteins from nonhuman primate lymphocryptoviruses// J. Virol. 2000. - Vol. 74. - P. 379 - 389.

277. Peng R., J. Tan, P. D. Ling. Conserved regions in the Epstein-Barr virus leader protein define distinct domains required for nuclear localization and transcriptional cooperation with EBNA2// J. Virol. 2000. - Vol. 74. - P. 9953-9963.

278. Peyruchaud O., Bourre F., Morel-Kopp MC. et al. HPA-lOw(b) La (a): genetic determination of a new platelet-specific alloantigen on glycoprotein Ilia and its expression in COS 7 cells// Blood. - 1997. - Vol. 89. - №1. - P. 2422 - 2428.

279. Pim D., Thomas M., Cardiol D., Banks L. HPV E6 target degradation of the discs large protein: evidence for the involment of a novel ubiquitin ligase// Oncogene. 2000. - Vol. 19. - P. 710 -725.

280. Pisani P., Bray F., Parkin D. M. Estimates of the world-wide prevalence of cancer for 25 sites in the adult population// Int. J. Cancer. 2002. - Vol. 97. -P. 72-81.

281. Popescu N.C., DiPaolo J.A., Amsbaugh S.C. Integration sites of human papillomavirus 18 DNA sequences on HeLa cell chromosomes// Cytogenet. Cell Genet. 1987. - Vol. 44. - No 1. - P. 58 - 62.

282. Potter J.C., Hogg N. Integrins.// Trends in Cell Biology. 1998. - Vol.8. -P. 390-398.

283. Preciado M.V., Matteo E.De., Diez B. et. al. Epstein-Barr virus and strain type assinment in Argentine Childhood Hodgkin's desease.// Blood. -1995. -Vol. 86. -№.10. P. 3922 - 3929.

284. Pronko P., Bardina L., Satanovskaya V., Kuzmich A., Zimatkin S. Effect on chronic alcohol consumption on ethanol- and acetaldehyde-metabolizing systems in the rat gastrointestinal tract.// Alcohol. Alcohol. 2002. - Vol. 37. -P.229 - 235.

285. Pullan S., Wilson J., Metcalfe A. et al. Requirement of basement membrane for the suppression of the programmed cell death in mammary epithelium.// J. Cell Sci.- 1996. Vol. 109.-P. 631 -642.

286. Quertemont E. Genetic polymorphism in ethanol metabolism: contribution to alcohol abuse and alcoholism.// Mol. Psychiatry. 2004. - Vol. 9. - P. 570 -578.

287. Raab-Traub N., Flynn K. et al. The structure of the termini of the Epstein-Barr virus as a marker of clonal cellular proliferation. //Cell. 1986. - Vol. 47. -P. 883-889.

288. Radkov S. A., M. Bain, P. J. Farrell, M. West, M. Rowe, M. J. Allday. Epstein-Barr virus EBNA3C represses Cp, the major promoter for EBNAexpression, but has no effect on the promoter of the cell gene CD21.// J. Virol. 1997.- Vol. 71.-P. 8552-8562.

289. Radkov, S. A., R. Touitou, A. Brehm, M. Rowe, M. West, T. Kouzarides, M. J. Allday. Epstein-Barr virus nuclear antigen 3C interacts with histone deacetylase to repress transcription.// J. Virol. 1999. - Vol. 73. - P. 5688 -5697.

290. Rajpert-de Meyts E., Hording U., Nielsen H.W., Skakkeback N.E. Human papillomavirus and Epstein-Barr virus in the aetiology of testicular germ cell tumrs.// APMIS. 1994. - Vol. 102.-P. 38-42.

291. Rao C.R., Gutierrez M.I., Bhatia K., Fend F., Franklin J. et al. Association of Burkitt's lymphoma with the Epstein-Barr virus in two developing countries.// Leuk. Lymphoma. 2000. - Vol. 39. - P. 329 - 337.

292. Ravi R., Mookerjee B., Bhujwalla Z.M., Sutter C.H., Artemov D. et al. Regulation of tumor angiogenesis by p53-induced degradation of hypoxia-inducible afctor 1 alpha.//Genes. Dev. 2000. - Vol. 14. - P. 34 -44.

293. Reya T., Clevers H. WNT signaling in stem cells and cancer.// Nature. -2005. (in press).

294. Reya T., Morrison S.J., Clarke M.F., Weissman I.L. Stem cells, cancer, and cancer stem cells.// Nature. 2001. - Vol. 414. - P. 105 - 111.

295. Reynolds L.E., Wyder L., Lively J.C., Taverna D. et al. Enhanced pathological angiogenesis in mice lacking beta-3 integrin or beta-3 and beta-5 integrins.// Nature Med. 2002. - Vol. 8. - P. 27 - 24.

296. Rickinson A.V. Epstein-barr virus and AIDS lymphomas.// Abstracts 14-th International Conference" AIDS, Cancer and Public Health", S.-Pbs.- 2005.- P. 123.

297. Rickinson A.V., Kieff E. Epstein-Barr virus, in Fields B.N., Knipe D.M., Howley P.M. (ed.3), Vol.2. New York, №.4, Lippincot-Raven, 1996, p. 2397.

298. Ridker P.M., Hennekens C.H., Schmitz C., Stampfer M.J., Lindpaintner K. PLA1/A2 polymorphism of platelet glycoprotein Ilia and risks of myocardial infarction, stroke, and venous thrombosis.// Lancet. 1997. - Vol. 349. - P. 385 -388.

299. Robertson, E. S., J. Lin, E. Kieff. The amino-terminal domains of Epstein-Barr virus nuclear proteins 3A, 3B, and 3C interact with RBP-Jk.// J. Virol. -1996. Vol. 70. - P. 3068 - 3074.

300. Rosendorff, A., Illanes, D., David, G., Lin, J., Kieff, E., Johannsen, E. EBNA3C Coactivation with EBNA2 Requires a SUMO Homology Domain.// J. Virol. 2004. - Vol. 78. - P. 367 - 377.

301. Rotola A., Monini ., Di Luca D. et al. Presence and physica state of HPV DNA in prostate and urinary-tract tissues. // Int. J. Cancer. 1992. - Vol. 52. -P. 359-365.

302. Rout U.K., ArmantD.R. Expression of genes for alcohol and aldehyde metabolizing enzymes in mouse oocytes and preimplantation embryos.// Reprod. Toxicol. 2002. - Vol. 16. - P. 253 - 258.

303. Roychoudhury A. K., Nei M. Human Polymorphic Genes: World Distribution. New York: Oxford Univ. Press (pub.)., 1988.

304. Rumlova M., Ruml T., Pohl J., Pichova I. Specific in vitro cleavage of Mason-Pfizer monkey virus capsid protein: evidence for a potential role of retroviral protease in early stages of infection.// Virology. 2003. - Vol. 310. -No. 2.- P. 310-318.

305. Ruoslahti E., Pierschbacherb M. Arg Gly - Asp: a versatile cell recognition sequence.//Cell. - 1986.- Vol. 44.-P. 517-518.

306. Saito K., Yokoyama T., Yoshiiki N., Date C. et al. Do the ethanol metabolizing enzymes modify the relationship between alcohol consumption and blood pressure?// J. Hypertens. 2003. - Vol. 23. - P. 1097 - 1105.

307. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular Cloning: A laboratory Manual. Cold Spring Harbor Lab. Press, 1989.

308. Sample J., Young 1., Martin B., Chatman T., Kieff E., Rickinson A. Epstein-Barr virus type-1 (EBV-1) and 2 (EBV-2) differ in their EBNA3A, EBNA3B and EBNA3c genes.// J. Virol. 1990. - Vol. 64. - P. 4084 - 4085.

309. Sandberg, M. L., A. Kaykas, B. Sugden. Latent membrane protein 1 of Epstein-Barr virus inhibits as well as stimulates gene expression.// J. Virol. -2000. Vol. 74. - P. 9755 - 9761.

310. Schmidt R.D., Mustafa F., Lew K.A. et al. Sequences within both the 5' untranslated region and the gag gene are important for efficient encapsidation of Mason-Pfizer monkey virus RNA.// Virology.- 2003. Vol. 309. -No.l. -P.166 - 178.

311. Schneider M.-J. Introduction to public health. Aspen Publ.2000.

312. Schwippert-Houtermans B., Strapatsakis S., Roesen et al. Evaluation of an antibody-based genotype classification of the platelet fibrinogen receptor (GPIIb/IIIa).// Cytometry. 2001. - Vol.46. - P. 238 - 242.

313. Senti M., Aubo C., Bosch M., Pavesi M., Pena A. et al. Platelet glycoprotein Ilb/IIIa genetic polymorphism is associated with plasmafibrinogen levels in myocardial/ Clin. Biochem. 1998. - Vol. 31. - P. 647 -651.

314. Sfakianos J.N., Hunter E. M-PMV capsid transport is mediated by Env/Gag interactions at the pericentriolar recycling endosome.// Traffic.- 2003. Vol. 4. -No. 10. - P. 671 -680.

315. Sfakianos J.N., LaCasse R.A., Hunter E. The M-PMV cytoplasmic targeting-retention signal directs nascent Gag polypeptides to a pericentriolar region of the cell.// Traffic. -2003. VoU(lO). - P. 660 - 670.

316. Shaw L.M. Integrin function in breast carcinoma progression. // J. Mammary Gland. Biol. Neoplasia. 1999. - Vol. 4. - №. 4. - P. 367 - 376.

317. Simon C., Moreno C., Remohi J., Pellicer A. Molecular interactions between embrio and uterus in the adhesion phase of human implantation.// Hum. Reprod. 1998. - Vol.13. - №. 3. - P. 219 - 232.

318. Sinclair A.J., Fenton M., Delikat S. Interactions between Epstein-Barr virus and the cell cycle control machinery.// Histol. Histopathol. 1998. - Vol. 13. -P. 461 -467.

319. Sloan S.M., Brown E.B., Liu Q., Frojmovic M.M. Glycoprotein Ilb-IIIa-liposomes bind fibrinogen but do not undergo fibrinogen-mediated aggregation.// Platelets. 2000. - Vol. 11.- № 2. - P. 99 - 110.

320. Snasel J., Krejcik Z., Jencova V., Rosenberg I. et al. Integrase of Mason-Pfizer monkey virus.// FEBS J.- 2005.- Vol. 272. No. 1. - P. 203 - 216.

321. Snasel, J., Shoeman., R., Horejsn, M., Hruskova-Heidingsfeldova, O., Sedlacek, J., Ruml, T., Pichova, I. Cleavage of vimentin by different retroviral proteases.// Arch. Biochem. Biophys. 2002. - Vol. 377. - № 2. - P. 241• 245.

322. Sommerfelt M.A., Harkestad N., Hunter E. The endogenous langur type D retrovirus PO-l-Lu and its exogenous counterparts in macaque and langur monkeys.// Virology. 2003. - Vol. 315. -No.2. - P. 275 - 282.

323. Sommerfelt, M. A. Retrovirus receptors.// Journal of General Virology. -1999.-Vol. 80.-P. 3049-3064.

324. Song C., Dubay S.R., Hunter E. A tyrosine motif in the cytoplasmic domain of mason-pfizer monkey virus is essential for the incorporation of glycoproteininto virions .//J. Virol. 2003. - Vol. 77. -No.9. - P. 5192 - 5200.

325. Song C., Hunter E. Variable sensitivity to substitutions in the N-terminal heptad repeat of Mason-Pfizer monkey virus transmembrane protein.// J. Virol. -2003.-Vol. 77.- No.14.-P. 7779 7785.

326. Song S., Pitot H.C., Lambert P.F. The human papillomavirus type 16 E6 gene alone is sufficient to induce carcinomas in transgenic animals// J. Virol. -1999. Vol. 73. - P. 5887 - 5893.

327. Sonigo, P., Barker,C., Hunter, E., Wain-Hobson,S. Nucleotide sequence of Mason-Pfizer monkey virus: an immunosuppressive D-type retrovirus// Cell. -1986. Vol. 45. - №.3. - P. 375 - 385.

328. Stansell E., Tytler E., Walter M.R., Hunter E. An early stage of Mason

329. Pfizer monkey virus budding is regulated by the hydrophobicity of the Gag matrix domain core// J. Virol.- 2004. Vol. 78. - No. 10. - P. 5023 - 5031.

330. Stattil S.J. Signaling through platelet integrin alphallb beta3: inside-out, outside-in, and side aways// Thromb. Haemost. 1999. - Vol. 82. - P. 318 -325.

331. Schukit M. A., Edenberg H.J., Kalmijn J., Flury L. et al. A genome-wide search for genes that relate to alow level of response to alcohol.// Alcohol Clin. Exp. Res.-2001.- Vol. 25.-P. 323-329.

332. Stricler H. D., Burk R., Shah K. et al. A multifaceted study of human papillomavirus and prostate cancer// Cancer. 1998. - Vol.82. - P. 1118 -1125. '

333. Stupack D.G., Puente X.S., Boutsaboualoy S. et al. Apoptosis of adherent cells by recruitment of caspase-8 to unligated integrins// J. Cell. Biol. 2001. -Vol.155.-P. 459-470.

334. Subramanian C., Cotter M.A., Robertson E.S. Epstein-Barr virus nuclear protein EBNA-3C interacts with the human metastatic suppressor Nm23-Hl: a molecular link to cancer metastasis// Nat .Med. 2001. - Vol.7. - №.3. - P. 350 -355.

335. Svec M., Bauerova H., Pichova I.Konvalinka J. et al. Proteinases of betaretroviruses bind single-stranded nucleic acids through a novel interaction module, the G-patch.// FEBS Lett. 2004.- Vol. 576. - No. 1. - P. 271 - 276.

336. Tamaki H., Byron K .S., Sullivan J.L., Somasundaran M. Detection and differentiation of Epstein-Barr virus strains by in situ polymerase chain reaction//Mol. Cell. Probes.-1997.- Vol. 11.-№.3. V.237 - 241.

337. Tanaka F., Shiratory Y., Yokosuko O. et al. High incidence of ADH2* 1/ALDH2* 1 genes among Japanese alcohol-dependents and patients with alcoholic liver disease// Hepatology. 1996. - Vol. 23. - P. 234 - 239.

338. Tekin M.I., Tuncer S., Aki F.T., Bilen C.Y., Augun C., Ozen H. Human papillomaviruses are associated with bladder carcinoma// Int. J. Urol. 1999. -Vol.6.-P. 184-186.

339. Tenti P., Zappatore R., Romagnoli S. et al.p53 overexpression and human papillomavirus infection in transitional cell carcinoma of the urinary bladder: correlation with histologycal parameters// J. Pathol. 1996. - Vol. 78. - P. 65 -70.

340. The international Human Genome Mapping Consortium. A physical map of the human genome // Nature. 2001. - Vol. 409. - P.934 - 941

341. Thomasson H.R., Crabb D.W., Edenberg H.J. et al. Low frequency of the ADH2*2 allele among Atayal natives of taiwan with alcohol use disoders// Alcohol Clin. Exp. Res. 1994. - Vol. 18. - P. 640 - 643.

342. Thomasson H.R., Edenberg H.J., Crabb D.W. et al. Alcohol and aldehyde dehydrogenase genotypes and alcoholism in Chinese men// Am. J. Hum. Genet.-1991.- Vol.48.-P. 677-681.

343. Thompson D.A., Zacny V., Belinsky G.S., et al. The HPV E7 oncoprotein inhibits tumor necrosis factor alpha-mediated apoptosis in normal human fibroblasts//Oncogene. 2001. - Vol. 20. - P. 3629-3640.

344. Thomsen P., van Deurs B., Norrild B., Kayser L. The HPV 16 E5 oncogene inhibits endocytic trafficking// Cell. 2000. - Vol. 19.- N.2. - P. 6023 - 6032.

345. Thornton M. A., Poncz M., Korostishevsky M., Yakobson E. et al. The human platelet alpha-lib gene is not closely linked to its integrin partner beta-3// Blood. 1999. - Vol. 94. - P. 2039 - 2047.

346. Tomkinson, B., E. Robertson, E. Kieff. Epstein-Barr virus nuclear proteins EBNA-3A and EBNA-3C are essential for B-lymphocyte growth transformation.//J. Virol. 1993. -Vol. 67. - P. 2014 - 2025.

347. Tong, X., R. Drapkin, D. Reinberg, E. Kieff. The 62- and 80-kDa subunits of transcription factor IIH mediate the interaction with Epstein-Barr virus nuclear protein 2.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. -Vol. 92. - P. 3259 -3263.

348. Tong, X., R. Drapkin, R. Yalamanchili, G. Mosialos, E. Kieff. The Epstein-Barr virus nuclear protein 2 acidic domain forms a complex with a novel cellular coactivator that can interact with TFIIE.// Mol. Cell. Biol. 1995. - V. Vol. 15.-P. 4735-4744.

349. Touitou R., M. Hickabottom, G. Parker, T. Crook, M. J. Allday. Physical and functional interactions between the corepressor CtBP and the Epstein-Barr virus nuclear antigen EBNA3C.// J. Virol. 2001. - Vol. 75. - P. 7749 - 7755.

350. Triantos D., Leao J.C., Porter S. R., Scully C.M., Teo C.G. Tissue distribution of Epstein-Barr virus genotypes in hosts coinfected by HIV.//AIDS.- 1998.-Vol. 12.-№.16.- P. 2141 -2146.

351. Trikha M., Raso E., Cai Y., Fazakas Z., Paku S. et. al. Role of alphall(b)beta3 integrin in prostate cancer metastasis// Prostate. 1998. - Vol. 35.-No.3.-P. 185-192.

352. Trikha M., Timar J., Zacharek A., Nemeth J.A., Cai Y. et. al. Role for beta3 integrins in human melanoma growth and survival// Int. j. Cancer. 2002. -Vol. 101.-No.2.-P. 156- 167.

353. Varner J. A., Cheresh D. A. Integrins and cancer.// Curr. Opin. Cell Biol. -1996.- Vol. 8.-P. 724-730.

354. Veldman T., Horikawa I., Barret J.C. Schlegel R. Transcriptional activation of the telomerase hTERT gene by human papillomavirus type 16 E6 oncoprotein.// J. Virol. 2001. - Vol. 75. - P. 4467 - 4472.

355. Vercauteren S.M., Sutherland H. C. Constitutively active Notch4 promotes early human hematopoietic progenitor cell maintenence while inhibioting differentiation and causes lymphoid abnormalities in vivo./I Blood. 2004. -Vol. 1.-P.3-5.

356. Veverka V., Bauerova H., Zabransky A., Lang J. et al. Three-dimensional structure of a monomeric form of a retroviral protease.// J. Mol Biol. 2003. -V.333.-No.4.-P. 771 -780.

357. Veverka V., Bauerova H., Zabransky A., Pichova I., Hrabal R. Backbone resonance assignment of protease from Mason-Pfizer monkey virus.//J. Biomol. NMR. 2001. - Vol. 20. -N.3. - P. 291 - 292.

358. Virmani A., Muller K., Rathi A. et al. Aberrant methylation during cervical carcinogenesis.// Clin. Cancer. Res. 2001. -Vol. 7. - P. 584 - 589.

359. Vogelstein B. Cancer. A deadly inheritance.// Nature. 1990. - Vol. 348. -P. 681 - 682.

360. Volpi A. Epstein-Barr virus and human herpesvirus type 8 infections of the central nervous system.// Herpes. 2004. -Vol. 11. - P. 120A - 127A.

361. Walling D. M., Ling P. D., Gordadze A.V. et al. Expression of Epstein -Barr virus latent genes in oral epithelium: determinants of the pathogenesis of oral hairy leukoplakia.// J. Infect. Dis. 2004. -Vol. 190. - P. 396 - 399.

362. Waltzer L. M., Perricaudet, A. Sergeant, E. Manet. Epstein-Barr virus EBNA3A and EBNA3C proteins both repress RBP-JK-EBNA2-activated transcription by inhibiting the binding of RBP-Jk to DNA.// J. Virol. 1996. -Vol. 70.-P. 5909-5915.

363. Wang D., D. Liebowitz, E. Kieff. An EBV membrane protein expressed in immortalized lymphocytes transforms established rodent cells.// Cell. 1985. -Vol.43. - P. 831 -840.

364. Wang L., S. R. Grossman, E. Kieff. Epstein-Barr virus nuclear protein 2 interacts with p300, CBP, and PCAF histone acetyltransferases in activation of the LMP1 promoter.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000. - Vol. 97. - P. 430 -435.

365. Ward R. J., Coutelle Ch. Women and alcohol susceptibility: could differences in alcohol metabolism predispose women to alcohol-related diseases?// Arh. Women. Ment. Health. 2003. -Vol. 64. - P. 231 - 238.

366. Webster K., Parish J., Pandya M., Stern P. L. et al. The human papillomavirus (HPV) 16 E2 protein induses apoptosis in the absence of other HPV proteins and via a p53-dependent pathway. // J. Biol. Biochem. 2000. -Vol. 275. - P. 87 - 94.

367. Weiss E. J., Goldschmidt-Clermont P. J., Grigoryev D. et al. A monoclonal antibody (SZ21) specific for platelet GPIIIa distinguishes P1A1 from P1A2.// Tissue Antigens. 1995. - Vol. 46. - P. 374 - 381.

368. Weldon R.A. Jr., Sarkar P., Brown S.M., Weldon S.K. Mason-Pfizer monkey virus Gag proteins interact with the human sumo conjugating enzyme, hUbc9.// Virology. -2003.- Vol. 314. -No.l. P. 62-73.

369. Weldon, R., A., Parker, W., B., Sakalian, M., Hunter, E. Type D assembly and release are active events requiring ATP.// Journal of Virology. 1998. -Vol. 72.-№4.-P. 3098-3106.

370. West K.A., Anderson D. R., McAlister V.C., Hewlett T.J.C. et al. Alloimmune thrombocytopenia after organ transplantation.// New Eng. J. Med. -1999.- Vol. 341.-P. 374-381.

371. West M. J., Webb H. M., Sinclair A. J., Woolfson, D. N. Biophysical and Mutational Analysis of the Putative bZIP Domain of Epstein-Barr Virus EBNA 3C.// J. Virol. 2004. -Vol. 78. - P. 9431 - 9445.

372. Whitfield J. B. Meta-Analysis of the effects of alcohol dehydrogenase genotype on alcohol dependence and alcoholic liver disease// Alcohol Alcohol. -2001.- Vol. 32. -No.5.- P. 613-619.

373. Wodrich H., Schambach A., Krausslich H.G. Multiple copies of the Mason-Pfizer monkey virus constitutive transport element lead to enhanced HIV-1 Gag expression in a context-dependent manner.// Nucleic Asids Rec. 2000. -Vol. 28. -No.4. - P. 901-910.

374. Woods D., Cherwinski H., Venetsanakos E. et al. Induction of (33-Integrin Gene Expression by Activation of the Ras Regulatet Raf MEK - Extracellular Signal Regulated kinase Signaling Pathway.// Moll. Cell. Biol. - 2001. -Vol. 21. -P. 3192-3205.

375. Wu H.C., Lu T.Y., Lee J.J. et al. MDM2 expression in EBV-infected nasopharengeal carcinoma cells.// Lab. Invest. 2005. - (Epub. ahead of print).

376. Xiong J.-P., Stehle T., Diefenbach B., Zhang R. et al. Crystal structure of the extracellular segment of integrin alpha-V-beta-3.// Sciense. 2001. -Vol. 294.-P. 339-345.

377. Xiong J.-P., Stehle T., Zhang R., Joachimiak A., Freeh M. et al. Crystal structure of the extracellular segment of integrin alpha-V-beta-3 in complex with Arg-Gly-Asp ligand.// Sciense. 2002. - Vol. 296. - P. 151 - 155.

378. Yamada Y., Sun F., Tsuritani I., Honda R. Genetic differences in ethanol metabolizing enzymes and blood pressure in Japanese alcohol consumers.// J. Hum. Hypertens. 2002. - Vol. 16. - P. 479 - 486.

379. Yamauchi M., Maezawa Y, Mizuhara Y, Ohata M, Hirakawa J, Nakajima H, et al. Polymorphisms in alcohol metabolizing enzyme genes and alcoholic cirrhosis in Japanese patients: a multivariate analysis.// Hepatology. 1995. -Vol. 22. -P.l 136-1142.

380. Yamauchi M., Freitag B., Khan C., Berwin B., Barklis E. Stem cell factor binding to retrovirus binding site silencers.// J. Virol. 1995. - Vol. 69. - P. 1142-1149.

381. Yang J., Zhan C.-Y., Dong X., Yang K., Wang F. Interaction of human fibrinogen receptor (GPIIb-IIIa) with desorsin// Acta. Pharmacol. Sin. 2004. -Vol. 8.-P. 1096- 1104.

382. Yasuda J., Hunter E., Nakao M., Shida H. Functional involvement of a novel Nedd4-like ubiquitin ligase on retrovirus budding//EMBO Rep. 2002. -Vol. 3(7).-P. 636-640.

383. Yasuda J., Hunter, E. Role of matrix protein in the type D retrovirus replication cycle: importance of the arginine residue at position 55// Virology. -2000.- Vol. 268, №2.-P. 533-538.

384. Yokoyama A., Muramatsu T., Ohmori T., Higuchi S., Hayashida M., Ishii H. Esophageal cancer and aldehyde dehydrogenase-2 genotypes in Japanese males// Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 1996. - Vol. 5. - P. 99 - 102.

385. Yoshida A., Hsu L., Yasunami M. Genetics of human alcohol-metabolizing enzymes// Prog. Nucleic Acid. Res. Mol. Biol. 1991. - Vol. 40. - p.255 -287.

386. Zabransky, A., Andreansky, M., Hruskova-Heidingsfeldova, O., Havlicek, V., Hunter, E., Ruml, T., Pichova, I. Three active forms of aspartic proteinase from Mason-Pfizer monkey virus // Virology. 1998. - Vol. 245.- № 2. - P. 250 - 256.

387. Zhang B., Spandau D.F., Roman A. S. E5 protein of human papillomavirus type 16 protects human foreskin keratinocytes from UB-irradiation-induced apoptosis.//J. Virol. -2002.- Vol. 76.-P. 220-231.

388. Zhang X., Uthaisang W., Hu L., Ernberg I.T. et al. Epstein-Barr virus-encoded latent memebrane protein lpromotes stress-induced apoptosis upstream of caspase-2- dependent mitochondrial perturbation.// Int. J. Cancer. 2004. -Vol. 34. - P.352 - 361.

389. Zhang Z., Vuori K., Reed J.C., Ruoslahti E. The a5pi integrin supports survival of cells on fibronectin and upregulates bcl-2 exprsion.// Mol. Biol. Cell.-1995.-Vol. 6.-P. 841 -850.

390. Zhang, K., Smouse, D., Perrimon, N. The crooked neck gene of Drosophila contains a motif found in a family of yeast cell cycle genes.// Genes Dev. -1991.-Vol. 5.- №.6.-P. 1080- 1091.

391. Zhao B., D. M. Marshall, C. E. Sample. A conserved domain of the Epstein-Barr virus nuclear antigens 3A and 3C binds to a discrete domain of Jk.// J. Virol. 1996. -Vol. 70. - P. 4228 - 4236.

392. Zhou Y., Damsky C.H., Chiu K., Roberts J.M., Fisher S.J. Preeclampsia is associated with abnormal expression of adhesion molecules by invasive cytotrophoblasts // J. Clin. Invest. 1993. - Vol. 91. - P. 950 - 960.

393. Zhou Y., Damsky C.H., Fisher S.J. Preeclampsia is associated with failure of human cytotrophoblasts to mimic a vascular adhesion phenotype// J. Clin. Invest.- 1997. Vol. 1. - № 99. - P.2152 - 2164.

394. Zimmermann H., Degenkolbe R., Bernard H.U., O'Connor M.J. The human papillomavirus type 16 E6 oncoprotein can down-regulate p53 activity by targeting the transcriptional coactivator CBP/p300 // J. Virol. 1999. - Vol. 73.- P. 6209-6219.

395. Zwerschke W., Mannhardt B., Massimi P., Nauenburg S. et al. Allosteric activation of acid alpha-glucosidase by the human papillomavirus E7 protein// J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275. - P. 9534 - 9541.

Информация о работе

Мяндина, Галина Ивановна
доктора биологических наук
Москва, 2005
ВАК 03.00.15

Диссертация

Элементы генома, ответственные за развитие основных групп генетически детерминируемых болезней человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы