Экспрессия генов апоптоза в развивающемся мозге крыс

Баннова, Анита Васильевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Экспрессия генов апоптоза в развивающемся мозге крыс
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Экспрессия генов апоптоза в развивающемся мозге крыс"

РОССИЙСКАЯ А КА ДЕМИЯ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ Институт цитологии и генетики СО РАН

На правах рукописи

БАННОВА АНИТА ВАСИЛЬЕВНА

ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ АПОПТОЗА В РАЗВИВАЮЩЕМСЯ МОЗГЕ КРЫС: ЭФФЕКТЫ ГЛЮКОКОРТИКОИДОВ И КЛОНИ ДИНА

Специальность03.00.13 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск 2005

Работа выполнена в лаборатории функциональной нейрогеномики, Института цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Дыгало Николай Николаевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор Гуляева Людмила Федоровна

доктор биологических наук Гилинский Михаил Абрамович

Ведущее учреждение: Новосибирский государственный университет

Защита диссертации состоится «_у>СМЮ^£2005 г. наyfjotjf. заседании

диссертационного совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата биологических наук (Д 001.014.01) в Институте физиологии СО РАМН в конференц-зале института по адресу: 630117, г. Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 4, тел. (3833)34-89-61, факс (3833)32-42-54, e-mail: A.G.Yeliseveva@iph.ma.nsc.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии и генетики СО РАН.

Автореферат разослан » isCAOyiJi 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук

33L*<f

ZrrgfûZt

Актуальность проблемы. Программируемая гибель клеток путем апоптоза является фундаментальным биологическим процессом, используемым организмом для ликвидации невостребованных, закончивших свой жизненный цикл и потенциально опасных клеток. Апоптоз является неотъемлемым процессом нормального развития и нейродегенеративных процессов в нервной системе (Oppenheim, 1991; Yuan, Yankner, 2000). Основными внутриклеточными регуляторами апоптоза в головном мозге млекопитающих являются антиапоптозный белок Bcl-XL и проапоптозный белок Вах (Chao, Korsmeyer, 1998; Akhtar et al., 2004). Изменение уровней мРНК этих белков и их соотношения друг к другу может отражать степень готовности клеток к запуску апоптоза. Ключевую роль в реализации апоптоза нервных клеток играет каспаза-3 (Kuida et al., 1996; Yuan, Yankner, 2000). Влияние межклеточных сигнальных молекул, таких как гормоны и нейротрансмиттеры, на предрасположенность клетки к запуску программы самоуничтожения, остающиеся наименее изученным аспектом проблемы, является вместе с тем одним из наиболее актуальных. Интенсивность этих сигналов изменяется под влиянием разнообразных средовых и онтогенетических факторов, поэтому их модуляция может быть использована с терапевтическими целями.

Основные события нейрогенеза и элиминация избыточных нейронов в ЦНС млекопитающих происходят в фетальном и раннем постнатальном онтогенезе (Будко и др., 1985; Oppenheim, 1991). Перинатальный период является критическим в развитии головного мозга, когда он наиболее чувствителен к действию повреждающих факторов. Стрессорные воздействия в раннем онтогенезе вызывают долговременные изменения поведения, что, по-видимому, связано с действием гормонов стресса -глюкокортикоидов, на формирование мозга (Naumenko, Dygalo, 1980; Дыгало, 1993; Edwards, Burnham, 2001; Andrews et al., 2004; Leret et al., 2004). Не только гормоны, но и нейротрансмиттеры влияют на развитие мозга (Gould et al., 1999; Cameron et al., 1998; Contestabile, 2000). Одним из путей действия этих сигнальных молекул на формирование мозга может быть их влияние на жизнеспособность его клеток, что показано, по крайней мере, в патологических состояниях. Действительно, глюкокортикоид дексаметазон оказывал протекторное действие на клетки развивающегося мозга при гипоксии-ишемии (Liu et al., 1995; Tuor et al„ 1997), однако наблюдался и противоположный эффект этого препарата (Hassan et al., 1996; Matthews, 2000). Имитатор действия норадреналина, агонист альфа2-адренорецепторов (a2-AR) - клонидин, уменьшал область поражения неонатального мозга при ишемии (Yuan et al., 2001) и при токсическом повреждении (Laudenbach et al., 2002). Однако и антагонисты этих рецепторов также снижали постишемическое поражение нервной ткани (Gustafson et al., 1990; Martel et al., 1998: Bauer et al., 2003). Наряду с очевидной противоречивостью данных об эффектах стероидных гормонов стресса и адренергических препаратов,

остается неясным связано ли действие этих сигнальных молекул на формирующийся мозг с их возможным, хотя и малоизученным, влиянием на предрасположенность клетки к запуску программы самоуничтожения.

Поиск ответов на эти вопросы необходим, поскольку сигнальные молекулы гормонов и нейротрансмиттеров потенциально способны вызвать чрезмерную активацию или, наоборот, остановку программы апоптоза в развивающемся мозге, а ее сбой в период развития ЦНС может привести к изменению формирования мозга, что, в свою очередь, может быть элементом программирования свойств взрослого организма.

Цель и задачи исследования. Основная цель данной работы состояла в изучении влияния межклеточных сигнальных молекул стероидных гормонов стресса - глкжокортикоидов, и стимулятора альфа2-адренорецепторов — клонидина, на процесс апоптоза в развивающемся мозге крыс. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить онтогенетическую динамику уровней мРНК ключевых белков апоптоза - Вах, Вс1-Х[, и каспазы-3 в стволовом и фронтальном отделах головного мозга крыс;

2. Исследовать действие глюкокортикоидного гормона - гидрокортизона на уровень мРНК Вах, Вс1-Хь и каспазы-3 и на проявление классического признака апоптоза - фрагментацию ДНК в развивающемся головном мозге крыс;

3. Исследовать эффекты стимуляции альфа2-адренергических рецепторов клонидином на уровень мРНК каспазы-3 и фрагментацию ДНК в развивающемся головном мозге крыс.

Научная новизна. В работе впервые установлено влияние посредников межклеточной коммуникации глюкокортикоидных гормонов и адренергических рецепторов второго типа на уровни мРНК белков апоптоза и его ключевое проявление - фрагментацию ДНК в развивающемся головном мозге млекопитающих.

Разработан простой, воспроизводимый и чувствительный метод, позволяющий количественно оценить фрагментацию ДНК в тканях, клетки которых вступают в апоптоз не синхронно, а в соответствии с собственной программой развития.

Описаны региональные особенности онтогенетической динамики уровней мРНК белков апоптоза Вах, Вс!^ и каспазы-3 в стволе и коре головного мозга крыс. Их уровень высок в мозге плодов. Далее, в стволовой части мозга мРНК Вах увеличивается к 40 дню жизни и затем снижается, мРНК Вс1-Хь достигает взрослого уровня в течение месяца, содержание транскрипта каспазы-3 снижается в 2 раза к 1.5-месячному возрасту. Во фронтальной коре концентрация мРНК Вах снижается с 8 по 90 день жизни, а мРНК Вс1-Хь не меняется, как и остающаяся на высоком уровне мРНК

* - ч к I »г •»

каспазы-3. Характер изменения соотношения транскриптов анти- и проапоптозного белков Вс1-2 семейства, а также уровня мРНК каспазы-3 свидетельствует о более высокой готовности клеток коры по сравнению с клетками ствола головного мозга к запуску программы апоптоза.

Установлено, что последствия 6-часового воздействия гидрокортизона зависят от отдела мозга. В коре и гиппокампе гормон формирует соотношение мРНК белков апоптоза, препятствующее гибели клеток. В обеих этих структурах повышался уровень мРНК Bcl-XL, а в коре дополнительно снижалось и содержание мРНК каспазы-3. Напротив, в стволе мозга 6-часовое воздействие гидрокортизона, как у плодов, так и у неонаталъных крысят оказало проапоптозное действие: увеличивало уровень мРНК каспазы-3 и активировало фрагментацию ДНК. Двукратное введение гидрокортизона за 3 и 5 дней до исследования смещало соотношение уровней мРНК регуляторов апоптоза в пользу проапоптозных белков в головном мозге плодов и неонатальных крысят.

Показано, что агонист альфа2-адренорецепторов - клонидин, индуцирует увеличение уровня мРНК каспазы-3 и повышает фрагментацию ДНК в головном мозге плодов и новорожденных крысят. Эти эффекты не проявлялись в коре мозга крысят, имеющей низкую плотность рецепторов, но были отчетливыми в стволовом отделе мозга, в котором число этих рецепторов высоко. Влияние препарата на мРНК каспазы-3 зависело от его дозы. Проявление зависимого от дозы эффекта лишь в отделе мозга, демонстрирующем пик экспрессии рецепторов, а также способность йохимбина его блокировать свидетельствует о специфичности действия клонидина на исследованные показатели апоптоза через альфа2-адренорецепторы.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты работы расширяют теоретические представления о влиянии межклеточных сигнальных молекул стероидных гормонов стресса и стимуляторов мембранных рецепторов нейротрансмиттеров на предрасположенность клеток развивающегося мозга к запуску программы самоуничтожения. Кроме того, полученные данные могут иметь и определенное практическое значение, поскольку как глюкокортикоиды, так и клонидин применяются в перинатальной медицине.

Апробация работы. Материалы данной работы были доложены или представлены на XXXIV, XL и XLII Международных Студенческих конференциях (Новосибирск, 2001, 2002, 2004); IV Съезде Физиологов Сибири (Новосибирск, 2002), Международном симпозиуме «Neuron Differentiation and Plasticity - Regulation by Intercellular Signals» (Москва, 2003); Международной конференции «Targeting RNA: Artificial Ribonucleases, Conformational Traps and RNA interference» (Новосибирск, 2003); 6 конгрессе IBRO (Прага, 2003); 33 собрании общества нейронаук США (Новый Орлеан, 2003); Всероссийском съезде физиологического общества им. И.П. Павлова

(Екатеринбург, 2004); конференции «Нейрохимия: фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, 2005), VII всероссийской конференции «Нейроэндокринология - 2005» (Санкт-Петербург, 2005).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 работ, из них 3 статьи в отечественной и одна в зарубежной печати.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов, обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 139 страницах машинописного текста, содержит 22 рисунка и 2 таблицы. Список литературы включает 383 источника, в том числе 362 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В работе использовали 16-, 18-, 20- и 21-дневные плоды, а также 2-, 3-, 5-, 6-, 8-, 24-, 40- и 90-дневных крыс линии Вистар. Животных содержали в стандартных условиях вивария ИЦиГ СО РАН. Первым днем беременности считался день обнаружения спермы во влагалищном мазке, а день родов -первым денем жизни крысят.

Гидрокортизон (Гедеон Рихтер А.О., Венгрия) вводили самкам крыс подкожно двукратно на 16 и 18 дни или однократно на 20 день беременности в дозе 50мг/кг. Крысята получали этот гормон в дозе 5 мг/кг двукратно на 3 и 5 дни жизни или однократно на 8 день жизни. Клонидин (1.5 мг/кг; Sigma) вводили в ствол мозга 18-дневных эмбрионов крыс in utero, а крысятам - на 5 день жизни подкожно (0.1, 0.4 или 1 мг/кг). Часть крысят за 20 мин до введения 0.4 мг/кг клонидина получала подкожную инъекцию 2 мг/кг йохимбина. Контрольным животным вводили физиологический раствор или оставляли интактными. Животных, с однократным введением гидрокортизона забивали через 6 часов после, а с двукратным введением гормона - через 3 дня после последней инъекции, с введением клонидина и/или йохимбина через 1 или 3 дня после введения препаратов.

У животных определяли вес тела, головного мозга и надпочечников, в плазме крови - концентрацию глюкокортикоидов методом конкурентного белкового связывания (Тинников, Бажан, 1984). У плодов мозг рассекали по плоскости, проходящей от эпифиза к перекресту зрительных нервов, на фронтальную и стволовую части; у крысят выделяли гиппокамп, мозжечок, фронтальную кору и ствол, включающий продолговатый мозг и мост. О числе клеток в выделяемых образцах ткани судили по содержанию в них ДНК (Labarca, Paigen, 1980).

Уровни мРНК определяли методом полуколичественной ОТ-ПЦР в суммарной РНК, выделенной одностадийным гуанидин-изотиоционатным методом из образцов ткани мозга (Chomczynski, Sacchi, 1987). Для получения кДНК использовали Oligo-dT-праймеры и MuLV ревертазу (СибЭнзим, Россия). Амплификацию специфичных для каждого гена участков кДНК

проводили по стандартной методике (Калинина и соавт., 2001) с использованием специфических прямого и обратного праймеров для Вах (Tamatani et al., 1999), Bcl-XL (Shindler et al., 1997), каспазы-3 (Suzuki, Farbman, 2000) или ß-актина (Nudel et al., 1983). Уровень мРНК целевых генов оценивали относительно уровня мРНК ß-актина после сканирования в УФ продуктов ГЩР, разделенных электрофорезом в 1.5% агарозном геле, окрашенном бромистым этидием, с последующей денситометрией.

После выделения ДНК из ткани (Маниатис и соавт., 1984) ее фрагментацию определяли методом агарозного гель-электрофореза. На дорожку наносили 4.5 мкг ДНК, и на одну из дорожек каждого геля - маркер молекулярного веса (СибЭнзим, Россия). Свечение ДНК в геле сканировали в ультрафиолете и денситометрировали. Индекс фрагментации ДНК рассчитывали как сумму оптических плотностей ДНК-фрагментов, нормированную относительно высокомолекулярной ДНК того же образца, в процентах.

Количество a2-AR в мембранных препаратах ткани мозга определяли радиолигандным методом с использованием 0.4-6.4 нМ 3Н-клонидина (23.3 Ки/м моль; Sigma, США) или 0.1-1.6 нМ 3H-RX821002 (67 Ки/м моль; Amersham, Великобритания) в присутствии (неспецифическое связывание) или отсутствии (общее связывание) 100 мМ адреналина (Koch-Light, Великобритания). Специфичность связывания (фмоль/мг белка) определяли как разность неспецифического и общего связывания. Концентрацию белка определяли по Лоури (Lowiy et al. 1951). Расчет кинетических характеристик проводили по стандартной методике, используя линейное преобразование Скэтчарда (Bennet, Yamamura, 1985).

Достоверность результатов оценивали, используя однофакгорный дисперсионный анализ (ANOVA, пакет STAT1STICA 6.0, StatSoft Inc., США), достоверность различий между группами устанавливали согласно критерию множественных сравнений по Шеффе, либо по Ньюману-Кеулсу.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Динамика уровней мРНК Вах, Bcl-XL и каспазы-3 в коре и стволе головного мозга крыс в онтогенезе

Развитие головного мозга млекопитающих имеет каудо-ростральный градиент, и соответственно процесс физиологического апоптоза также идет асинхронно. Вместе с тем, предрасположенность клеток к запуску программы самоуничтожения зависит от экспрессии в них белков апоптоза. Мы исследовали онтогенетические динамики уровней мРНК белков апоптоза Вах, Bcl-XL и каспазы-3 в стволе и коре головного мозга крыс - структурах мозга различных по срокам созревания в онтогенезе.

В стволе мозга происходит нарастание количества мРНК Вах с максимумом на 40 день жизни, затем, к 90 дню оно снижается (Рис.1 А). В

коре содержание этого транскрипта в 1.5 раза увеличивается с 5 по 8 день, после чего снижается к 90 дню жизни. ОТ-ПЦР, выявил, хотя и небольшие, но отчетливые возрастные изменения концентрации мРНК Вах в мозге крыс, обнаружить которые методом гибридизации in situ не удавалось (De Bilbao et al., 1999). Наши результаты свидетельствуют, что в постнатальное снижение белка Вах как в коре мозга (Vekrellis et al., 1997), так и в головном мозге в целом (Krajewska et al., 2002), существенный вклад может вносить онтогенетическое изменение уровня мРНК Вах.

возрастом; # р<0.05 по сравнению с 8 днем жизни

Уровень мРНК Bcl-XL в коре мозга крыс в исследованный нами период онтогенеза не изменялся (Рис.1 Б), что согласуется с данными гибридизации in situ (De Bilbao et al., 1999). Данные также согласуются и с постоянством уровня белка Bcl-XL, описанным ранее в коре (Vekrellis et al., 1997) и головном мозге в целом (Krajewska et al., 2002). В стволе мозга выявленное полуторакратное повышение уровня мРНК Bcl-XL в ходе постнатального онтогенеза оставалось незамеченным при использовании метода гибридизации in situ (De Bilbao et al., 1999).

Соотношение мРНК Bcl-XL/Bax в стволе составляло 0.5-0.8 у плодов и 5-дневных крысят, с 8 по 40 день было около единицы, а к 90 дню увеличивалось до полутора. В коре в период с конца эмбриогенеза и в ходе первых 3 недель жизни соотношение мРНК" BcI-XL/Bax составляло всего 0.10.5, далее оно постепенно возрастало примерно до единицы к 90 дню жизни.

В перинатальный период мРНК каспазы-3 в головном мозге крыс находится на высоком уровне (Рис.2). В стволе мозга снижение уровня мРНК каспазы-3 происходит на фоне практически постоянного числа клеток (Рис.2А). В коре мозга ее содержание остается высоким до 1.5-месячного возраста, в то время как в первую неделю жизни крысят происходит резкое снижение числа клеток (Рис.2Б). В дополнение к данным гибридизации in situ (De Bilbao et al., 1999) наши результаты свидетельствуют о высоком уровне мРНК каспазы-3 в головном мозге плодов. Относительно высокий уровень

мРНК каспазы-3 и практически постоянное количество клеток в коре в период с недельного до 1.5-месячного возраста свидетельствуют о том, что каспаза-3 находится в клетках коры, вероятно, в неактивном состоянии.

Рис. 2. Уровень мРНК каспазы-3 (сплошная линия; левая ось ординат) и содержание ДНК (пунктирная линия; правая ось ординат) в стволе (А) и коре (Б) мозга крыс в онтогенезе; * р<0.05; # р<0.1 по сравнению с предыдущим возрастом

Характер изменения соотношения мРНК Bcl-XL/Bax и динамика уровня мРНК каспазы-3 свидетельствует о снижении в ходе онтогенеза склонности клеток ствола мозга к запуску программы апоптоза, в то время как клетки коры имеют в неонатальном периоде и сохраняют до взрослого состояния более высокую, чем клетки ствола мозга, готовность к самоуничтожению. Действительно, согласно современным данным, в коре мозга взрослых млекопитающих сохраняются незрелые полипотентные клетки, способные к пролиферации и, соответственно, к апоптозу (Gould et al., 1999). В целом изменение уровней мРНК Вах, Bcl-XL и каспазы-3 в стволе и коре головного мозга в ходе онтогенеза крыс имеют ярко выраженные региональные особенности. Эти особенности в раннем онтогенезе, очевидно, обусловлены асинхронным созреванием исследованных структур мозга. В более зрелом возрасте региональные различия могут быть связаны также и с сохранением в коре вплоть до взрослого состояния зон пролиферации и, следовательно, необходимости элиминировать избыточные клетки в этой структуре, и, напротив, присутствием в стволе жизненно важных регуляторных центров, клетки которых должны обладать повышенной устойчивостью к воздействиям, провоцирующим их гибель.

Эффекты гидрокортизона на уровень мРНК Вах, Bcl-XL, каспазы-3 и на фрагментацию ДНК в развивающемся головном мозге крыс

Стрессорные воздействия в раннем онтогенезе вызывают долговременные изменения поведения, что связано с действием гормонов стресса - глюкокортикоидов на формирование мозга. Одним из путей действия этих сигнальных молекул на формирующийся мозг может быть их влияние на предрасположенность клетки к запуску программы апоптоза.

Введение гидрокортизона самкам крыс на 20 день беременности уже спустя 6 часов после инъекции более, чем в два раза увеличивает уровень мРНК каспазы-3 в стволовом и фронтальном отделах мозга (Рис.ЗА) и повышает фрагментацию ДНК в стволовом отделе мозга их плодов (Рис.ЗБ). Аналогичные эффекты 6-часового действия гормона на клетки ствола мозга были получены и у 8-дневных крысят.

ег

^ интагтные

стволовая часть мозга

фронтальная часть мозга

часть мозга

фронтальная часть мозга

Рис. 3. Влияние однократного введения гидрокортизона самкам на 20-й день беременности на уровень мРНК каспазы-3 (А) и фрагментацию ДНК (Б) в головном мозге их 20-дневных плодов; * р<0 05 по сравнению с интактной группой

Следует отметить, что повышение уровня мРНК каспазы-3 наблюдалось совместно с активацией этого фермента при травматическом повреждении мозга (Chen et al., 1998; Harrison et al., 2000). Кроме того, повышенный уровень мРНК каспазы-3 индуцирует гибель клеток (Ni et al., 1997), и наоборот, уменьшение количества этого транскрипта рибозимом снижает предрасположенность нейронов к вступлению в апоптоз (Eldadah et al., 2000). Следовательно, происходящее при 6-часовом действии гормона повышение уровня мРНК каспазы-3 в мозге способно повысить предрасположенность клеток к вступлению в апоптоз. Степень фрагментации ДНК отражает количество клеток, запустивших программу самоуничтожения (Steinfelder et al., 2000; Калинина и соавт., 2002). Поэтому, выявленное повышение фрагментации ДНК в стволе мозга плодов и неонатальных крысят при 6-часовом действии гормона может указывать на увеличение в этом отделе мозга количества клеток, запустивших программу апоптоза.

В гиппокампе 8-дневных крысят 6-часовое действие гормона в полтора раза повышало уровень мРНК антиапоптозного белка Bcl-XL и почти в два раза снижало отношение мРНК Bax/Bci-XL (Рис.4А). В коре гидрокортизон в полтора раза увеличил уровни мРНК Bcl-XL и Вах, а также на треть снизил содержание транскрипта каспазы-3 (Рис. 4Б). Изменения в уровнях мРНК исследуемых белков апоптоза в коре и гиппокампе 8-дневных крысят, получавших инъекцию физиологического раствора, совпадающие по направлению с эффектом гормона, обусловлены тем, что сама процедура

введения препарата вызывает у животных стресс, сопровождающийся у крысят повышением содержания глюкокортикоидов в плазме крови.

I I интактные I 1физ раствор ■■гормон

Bcl-XL/Мктии 8ах/р-актин Bax/Bcl-XL

Bd-XL/мктин

Рис. 4 Влияние однократного введения гидрокортизона на уровень мРНК белков апоптоза в гиппокампе (А) и коре (Б) 8-дневных крыс; * р<0.05 по сравнению с интактной группой; # р<0.05 по сравнению с контрольной группой

Согласно данным литературы, повышенная экспрессия антиапоптозного белка Bcl-XL блокирует апоптоз, индуцированный повышенной экспрессией Вах в культуре симпатических нейронов (Vekrellis et al., 1997). Кроме того, повышенная экспрессия Bcl-XL предотвращает апоптоз симпатических нейронов в отсутствии трофических факторов (Gonzalez-Garcia et al., 1995), а также нейронов коры, стриатума и гиппокампа при ишемии неонатального мозга (Parsadanian et al., 1998). Следовательно, 6-часовое действие гидрокортизона формирует во фронтальной коре и гиппокампе 8-дневных крысят соотношение мРНК белков апоптоза, препятствующее гибели клеток.

Неоднозначность 6-часового действия гидрокортизона на структуры головного мозга может быть связана с гетерохронией в их дифференцировке и пролиферации (Будко и соавт., 1985). Так, в структурах с незавершенной на момент гормонального воздействия дифференцировкой - фронтальной коре и гиппокампе 6-часовое действие гидрокортизона изменило уровни мРНК регуляторов апоптоза в пользу антиапоптозных белков. Однако в стволе мозга, структуре, где дифференцировка практически завершена, 6-часовое действие гормона оказало проапоптозный эффект.

Кроме того, неоднозначность действия глюкокортикоидов на структуры мозга может быть связана с реализацией эффектов этих гормонов через различные типы глюкокортикоидных рецепторов. Глюкокортикоидные рецепторы (GR) широко экспрессируются во всех структурах, в то время как минералокортикоидные (MR) - преимущественно в лимбических структурах мозга (De Kloet et al., 1998; Sanchez et al., 2000). Проапоптозное действие глюкокортикоидов связывают с реализацией их эффектов через GR, а антиапоптозное - с MR (Almeida et al., 2000; Abraham et al., 2001).

Действительно, дексаметазон стимулирует апоптоз нейронов гиппокампа, в то время как кортикостерон, аффинность которого к MR в 10 раз выше, чем к GR, блокирует дексаметазон-индуцированный апоптоз в гиппокампе (Hassan et al., 1996). В связи с этим, неоднозначность действия гидрокортизона может быть связана и с различием в онтогенетической динамике и соотношении этих двух типов рецепторов в ходе развития головного мозга.

Введение гидрокортизона на 3 и 5 дни жизни увеличило уровень мРНК Вах в стволе мозга, в гиппокампе, и в мозжечке 8-дневных крысят (Рис.5) и таким образом сместило соотношение транскриптов регуляторов апоптоза в этих структурах в пользу мРНК проапоптозного белка Вах.

Рис. 5. Влияние введения гидрокортизона на 3 и 5 дни жизни на уровень мРНК Вах в стволе мозга, гиппокампе и мозжечке 8-дневных крыс; * р<0.05 по сравнению с интактной группой, # р<0.05 по сравнению с контрольными группами

Показано, что хроническое введение кортикостерона вызывает повреждения нейронов гиппокампа (Cobum-Litvak et al., 2004). Вместе с тем, отсроченного эффекта гормона на фрагментацию ДНК выявлено не было. Одной из возможных причин этого может быть то, что клетки, запустившие программу апоптоза после гормонального воздействия, к моменту исследования, происходящему через 3 дня после последней из 2-х инъекций препарата, уже были элиминированы.

В целом, результаты данного раздела работы свидетельствуют, что стероидные гормоны стресса - глюкокортикоиды, способны регулировать уровни мРНК белков апоптоза в развивающемся мозге крыс. При этом, если кратковременные эффекты глюкокортикоидов в зависимости от структуры мозга могут быть как про- так и антиапоптозными, то продолжительное повышение уровня глюкокортикоидов смещает экспрессию генов апоптоза в большинстве исследованных отделов мозга в пользу проапоптозных белков.

Эффекты клонидина на уровень мРНК каспазы-3 и фрагментацию ДНК в развивающемся головном мозге крыс

Важную роль в формировании головного мозга млекопитающих играют такие молекулы межклеточной сигнализации как нейротрансмитгеры. Показано, что воздействия на развивающуюся норадренергическую систему мозга вызывают длительные функциональные нарушения (Levitt et al., 1997). Одним из процессов, способных принимать участие в реализации этих длительных эффектов, может оказаться программируема гибель клеток.

В стволе перинатального мозга крыс найдена высокая плотность связывающих сайтов агониста a2-AR 3Н-клонидина (Табл. 1). Возрастные

ствол мозга тплокамл I I иктактньм I 1фиа раствор I

изменения количества этих сайтов связывания соответствуют изменениям в плотности сайтов связывания антагониста а2-А1* 3Н-ЯХ821002. Плотность сайтов связывания 3Н-клонидина и 3Н-ЯХ821002 в стволе мозга 7-дневных крысят в 2-3 раза выше, чем у 21-дневных плодов и взрослых животных. Во фронтальной коре 7-дневных крысят плотность сайтов связывания этих лигандов была значительно ниже, чем в стволе и коре мозга взрослых крыс. Эти результаты согласуются с данными о плотности а2-АЯ в развивающемся

Табл 1 Плотность сайтов связывания лигандов альфа2-адренорецепторов (фмоль/мг белка) в головном мозге крыс, * р<0 001 по сравнению с плодами и взрослыми, ** р<0 001 по сравнению со взрослыми и со стволом 7-дневных крысят

Лиганд Регион мозга Возраст крыс

21 -дневные 7-дневные 3-месячные

плоды крысята крысы

3Н клокидин Ствол мозга 61 9±43 132 2 ±93* 44 0± 8 1

Фронтальная кора 18 7±2 9** 56 2 ± 4 7

'H-RX821002 Ствол мозга 58 6 ± 6 5 183 4 ±86* 95 7 ± 9 2

Фронтальная 90 8 ± 7 6** 159 8±7 1

головном мозге млекопитающих (Дыгало и соавт., 2000; Happe et al., 2004). Важным свойством RX821002 является отсутствие связывания этого лиганда с имидазолиновыми рецепторами и очень низкая аффинность к любым другим сайтам связывания за исключением a2-AR (Clarke, Harris, 2002). Константы диссоциации этих лигандов (1.9 нМ для 3Н-клонидина и 0.64 нМ для 3H-RX821002) находились в диапазоне их специфического связывания с a2-AR (Дыгало и соавт., 2000; Happe et al., 2004) и были практически идентичны для всех исследуемых возрастов и регионов мозга.

Введение в головной мозг 18-дневных плодов крыс in utero клонидина в два раза увеличивает уровень мРНК каспазы-З и повышает индекс фрагментации ДНК в стволовом и фронтальном отделах их головного мозга спустя 3 дня после инъекции препарата (Рис.6)

* so J

стволовая часть фронтальная часть мозге мозга

I_{интактныа

I физ раствор

стволовая часть мозга

фронтальная часть мозга

Рис 6 Втеяние интрацеребрального введения клонидина 18-дневным плодам крыс на уровень мРНК каспазы-З (А) и на фрагментацию ДНК (Б) в головном мозге на 21 день эмбриогенеза; * р<0.05 по сравнению с интактной группой

Использованное в работе введение клонидина непосредственно в мозг плодов исключает возможность происхождения наблюдаемых эффектов за счет действия препарата на организм матери, поскольку плоды контрольных групп находились в утробе тех же самок, что и плоды, которым вводили клонидин. Небольшое и не достигающее достоверного уровня увеличение фрагментации ДНК в стволовом отделе головного мозга плодов с введением физиологического раствора по сравнению с интактными плодами может быть последствием локальной травмы, обусловленной уколом непосредственно в область ствола мозга.

Подкожное введение 5-дневным крысятам 1 или 10 мкг клонидина также зависимо от дозы повышало уровень мРНК каспазы-3 в стволе мозга 8-дневных крысят (Рис.7А), что свидетельствует о специфичности эффекта препарата. Вместе с тем, введение обеих доз клонидина спустя 3 дня после инъекции препарата увеличивало фрагментацию ДНК в стволе мозга животных примерно в одинаковой степени (Рис.7Б).

А Б

Усл. ед.

Рис. 7 Влияние подкожного введения клонидина на 5 день жизни на уровень мРНК касгшы-3 (А) и на фрагментацию ДНК (Б) в стволе (сплошная линия) и коре (пунктирная линия) головного мозга 8-дневных крысят; * р<0.05 по сравнению с контролем

В механизме реализации уже начавшегося процесса апоптоза важной является стадия активации исполнительных протеаз, в том числе и каспазы-3. Автокаталитическое развитие процесса может привести к одинаковой выраженности гибели клеток и фрагментации ДНК после более или менее выраженного повышения экспрессии фермента выше уровня, необходимого для преодоления порога вступления в апоптоз. Повышение элиминации клеток наиболее чувствительных к вступлению в апоптоз должно, очевидно, ограничивать накопление их маркера, такого как фрагментированная ДНК (81етГеЫег е! а!., 2000).

Данные по плотности а2-АЯ в развивающемся головном мозге, и отсутствие эффектов клонидина на клетки коры 8-дневных крысят

свидетельствуют, что эти рецепторы, очевидно, являются главными участниками действия клонидина. Эффект клонидина на клетки ствола и коры головного мозга плодов при плотности a2-AR в их мозге в 2-3 раза более низкой, чем в стволе крысят, очевидно, объясняется высокой локальной концентрацией препарата. После введения 5 мкг клонидина непосредственно в мозг плодов его концентрация в фетальном мозге должна быть значительно выше, чем в мозге 8-дневных крысят после подкожной инъекции 1 мкг или даже 10 мкг препарата. При высокой концентрации клонидина плотность рецепторов в стволе и фронтальной коре мозга плодов оказалась достаточной, для обеспечения эффекта препарата.

Для подтверждения специфичности действия клонидина через a2-AR была исследована возможность предотвращения его эффекта на мРНК каспазы-3 предварительной блокадой a2-AR антагонистом этих рецепторов йохимбином (Рис.8). Клонидин и в этих опытах повышал мРНК каспазы-3. Сам по себе йохимбин влияния не оказывал, однако существенно снижал эффект клонидина на мРНК каспазы-3.

Рис. 8. Влияние подкожного введения 5-дневным крысятам клонидина (4 мкг) на фоне йохимбина (20 мкг) на уровень мРНК каспазы 3 в стволе головного мозга на 6 день жизни. + - группы, получавшие указанные под осью X препараты; * р<0 01 по сравнению с группами, не получавшими инъекции клонидина; # р<0.05 по сравнению с группой, получавшей только инъекцию клонидина

Сходство эффектов клонидина на мозг плодов и неонатальных крысят свидетельствует, что, несмотря на значительные возрастные различия в плотности a2-AR, внутриклеточные механизмы, при помощи которых препарат индуцирует увеличение в уровне мРНК каспазы-3 и повышает фрагментацию ДНК, существенно не изменяются в течение исследованного периода перинатального развития.

Эффекты агонистов a2-AR на жизнеспособность клеток ствола головного мозга в течение нормального развития или после его повреждения ранее описаны не были. В данной работе показано, что в отличие от нейропротекторного эффекта этих препаратов при повреждениях переднего мозга (Yuan et al., 2001; Laudenbach et al., 2002), в стволе развивающегося мозга клонидин увеличивает проявление отличительных признаков программируемой гибели клеток. В стволе мозга a2-AR экспрессируются норадренергическими нейронами как ауторецепторы, а также нейронами других нейрохимических специализаций как гетерорецепторы (Lee et al,

200-

50-

йохимбин клонидин

1998). Нейроны ствола мозга вовлечены в регуляцию физиологических функций, нейроэндокринного ответа на стресс и поведения (Дыгало и соавт., 2002; Yates Stocker, 1998; Shishkina et al., 2002). Индуцированная клонидином потеря нейронов ствола мозга может изменить развитие этих функций. В подкрепление данного предположения в ряде работ были описаны долговременные эффекты неонатального введения клонидина на нейрохимию мозга, физиологические функции и поведение (Feenstra et al., 1992; van Veldhuizen et al., 1994; Thomas et al., 2000).

В целом, в работе впервые установлено влияние глюкокортикоидов и альфа2-адренорецепторов на процесс апоптоза в формирующемся мозге крыс. Это влияние проявлялись как изменениями уровней мРНК ключевых белков апоптоза - Вах, Bc1-XL и каспазы-3, так и проявлением классического признака апоптоза - фрагментацией ДНК в развивающемся головном мозге крыс. Подобные эффекты, определяющие жизнеспособность клеток, обеспечивают возможные механизмы, при помощи которых стероидные гормоны стресса, а также норадреналин и его рецепторы в течение критических периодов раннего развития способны изменить формирование мозга, что, в свою очередь, может быть элементом программирования последующей нейрохимии, физиологических функций, поведения и других свойств зрелого организма.

ВЫВОДЫ

1. Разработан метод количественной оценки фрагментации ДНК в тканях, клетки которых вступают в апоптоз в соответствии с их собственными программами развития асинхронно.

2. Уровни мРНК регуляторов апоптоза Вах, Bcl-XL и каспазы-3 в головном мозге имеют характерные для каждого гена и отдела мозга особенности онтогенеза. Их уровень высок в мозге плодов. Далее, в стволовой части мозга мРНК Вах увеличивается к 40 дню жизни и затем снижается, мРНК Bcl-XL достигает взрослого уровня в течение месяца, содержание транскрипта каспазы-3 снижается в 2 раза к 1.5-месячному возрасту. Во фронтальной коре концентрация мРНК Вах снижается с 8 по 90 день жизни, а мРНК Bcl-XL не меняется, как и остающейся на высоком уровне мРНК каспазы-3.

3. Снижение мРНК каспазы-3 в стволе в онтогенезе происходит на фоне относительно постоянного числа его клеток. В коре число клеток снижается, а мРНК каспазы-3 остается на высоком уровне. Изменение соотношения транскриптов Bcl-XL/Bax и уровня мРНК каспазы-3 в ходе онтогенеза свидетельствует о более высокой готовности клеток коры по сравнению с клетками ствола головного мозга к запуску программы апоптоза.

4. Последствия 6-часового воздействия гидрокортизона зависят от отдела мозга. В коре и гиппокампе гормон формирует соотношение мРНК белков

апоптоза, препятствующее гибели клеток. В обеих этих структурах повышался уровень мРНК Bcl-XL, а в коре дополнительно снижалось и содержание мРНК каспазы-3. Напротив, в стволе мозга 6-часовое воздействие гидрокортизона, как у плодов, так и у неонатальных крысят оказало проапоптозное действие: увеличивало уровень мРНК каспазы-3 и активировало фрагментацию ДНК.

5. Двукратное введение гидрокортизона за 3 и 5 дней до исследования смещало соотношение уровней мРНК регуляторов апоптоза в пользу проапоптозных белков в головном мозге плодов и неонатальных крысят.

6. Агонист альфа2-адренорецепторов - клонидин, индуцирует увеличение уровня мРНК каспазы-3 и повышает фрагментацию ДНК в головном мозге плодов и новорожденных крысят. Эти эффекты не проявлялись в коре мозга крысят, имеющей низкую плотность рецепторов, но были отчетливыми в стволовом отделе мозга, в котором число этих рецепторов высоко. Влияние препарата на мРНК каспазы-3 зависело от его дозы. Проявление зависимого от дозы эффекта лишь в отделе мозга, демонстрирующем пик экспрессии рецепторов, а также способность йохимбина его блокировать свидетельствует о специфичности действия клонидина на исследованные показатели апоптоза через альфа2-адренорецепторы.

7. В целом, результаты работы свидетельствуют о влиянии посредников межклеточной коммуникации глюкокортикоидных гормонов и адренергических рецепторов второго типа на уровни мРНК белков апоптоза и его классическое проявление - фрагментацию ДНК в развивающемся головном мозге млекопитающих.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Калинина Т.С., Баннова A.B., Дыгало H.H. Уровень мРНК фермента апоптоза - каспазы-3 в стволе и коре головного мозга крыс в постнатальном онтогенезе. // Бюлл. Эксп. Биол. Мед., 2001, Г. 131, № 8, С. 161-163.

2. Калинина Т.С., Баннова A.B., Дыгало H.H. Количественное определение степени фрагментации ДНК. // Бюлл. Эксп. Биол. Мед., 2002, Т. 134, № 12, С. 641-644.

3. Dygalo N.N., Bannova A.V., Kalinina T.S., Shishkina G.T. Clonidine increases caspase-3 mRNA level and DNA fragmentation in the developing rat brainstem. // Dev. Brain Res., 2004, Vol. 152, P. 225-231.

4. Баннова A.B., Меньшанов П.Н., Ильиных Ф А., Калинина Т.С., Дыгало H.H. Уровень мРНК белков апоптоза - Вах и Bcl-XL в стволе и коре головного мозга крыс в онтогенезе. // Бюлл. Эксп Биол Мед., 2005, Т. 139, № 6, С. 669671.

5. Баннова А В. Экспрессия мРНК каспазы-3 в стволе и коре головного мозга неонатальных крысят. // Материалы XXXIX МНСК «Студент и научно-технический прогресс», Новосибирск, 2001, С 91.

6. Баннова А.В. Экспрессия мРНК каспазы-3 и ее индукция апоптогенами в головном мозге плодов крыс. // Материалы XL МНСК «Студент и научно-технический прогресс», Новосибирск, 2002, С. 160-161.

7. Калинина Т.С, Баннова А.В., Дыгало Н.Н. Уровень мРНК фермента апоптоза - каспазы-3 и ее индукция в онтогенезе головного мозга крыс. // IV Съезд Физиологов Сибири, Новосибирск, 2002, № 196, С. 108.

8. Dygalo N, Shishkina G., Kalinina Т., Yushkova A., Bannova A , Chernolovskaya E. Functional consequences of inhibition of gene expression in mammalian brain by short interfering RNA. // Int. Conf. "Targeting RNA: Artificial Ribonucleases, Conformational Traps and RNA interference", Novosibirsk, 2003, P. 34

9. Bannova A., Kalinina Т., Dygalo N. Alpha2-adrenoceptors activation increases caspase-3 mRNA expression and activates DNA fragmentation in the developing brain. // Abstracts of International Symposium "Neuron Differentiation and Plasticity - Regulation by Intercellular Signals", Moscow, 2003, P. 48-49.

10. Dygalo N., Shishkina G., Kalinina Т., Yushkova A., Bannova A. Short Interfering RNA (siRNA) is Able to Inhibit Gene Expression in Mammalian Brain and Behavioral Functions of the Targeted Gene. // 6th 1BRO Congress, Prague, Czech Republic, 2003.

11. Dygalo N., Shishkina G., Kalinina Т., Yushkova A., Bannova A. RNA interference and antisense knock-down revealed acute and long-lasting programming functions of alpha2a-adrenoceptors in developing brain. // Society for Neuroscience 33rd Annual Meeting, New Orleans, USA, 2003, 9265.

12. Меньшанов П.Н., Баннова А.В Эффекты глюкокортикоидов на уровень мРНК белков апоптоза в головном мозге неонатальных крыс. // Материалы XLII МНСК «Студент и научно-технический прогресс», Новосибирск, 2004, С. 91.

13. Баннова А.В., Меньшанов П.Н., Дыгало Н.Н. Экспрессия мРНК белков апоптоза в развивающемся мозге: эффекты глюкокортикоидов. // Рос. Физиол. Журнал, 2004, Т. 90, № 8, С. 83-84.

14. Дыгало Н.Н., Калинина Т.С, Шишкина Г.Т., Баннова А.В. Ген альфа2А-адренорецептора участвует в процессах неонатальной пластичности мозга. // Тезисы конф «Нейрохимия- фундаментальные и прикладные аспекты», Москва, 2005, С. 54.

15. Баннова А.В., Меньшанов П.Н., Дыгало Н.Н Эффекты глюкокортикоидов на показатели апоптоза в развивающемся головном мозге крыс. // VII всероссийская конференция «Нейроэндокринология - 2005», Санкт-Петербург, 2005, С. 19.

Подписано к печати 16.06.2005 г.

Формат бумаги 60X90 1/16. Печ. л. 1. Уч. изд. л. 0,7

Тираж 100 экз. Заказ 83

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН 630090, Новосибирск, пр. ак. Лаврентьева, 10.

05-

U01

РНБ Русский фонд

2006Д 9284

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Баннова, Анита Васильевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Влияние межклеточных сигнальных молекул на процесс программируемой гибели клеток путем апоптоза в головном мозге.

1.1. Роль апоптоза в поддержании тканевого гомеостаза и его молекулярные механизмы.

1.1.1. Молекулярные механизмы апоптоза.

1.1.1.1. Семейство цистеиновых протеаз - каспаз.

1.1.1.2. Семейство BCL-2-подобных белков.

1.1.1.3. Запуск программы апоптоза.

1.2. Значение апоптоза в развитии центральной нервной системы.

1.2.1. Эффекты модуляции экспрессии ключевых белков апоптоза на программируемую гибель клеток ЦНС методами генетической рекомбинации.

1.3. Влияние межклеточных сигнальных молекул на процесс апоптоза в головном мозге.

1.3.1. Глюкокортикоидные гормоны, ЦНС и апоптоз.

1.3.1.1. Эффекты глюкокортикоидов в раннем онтогенезе.

1.3.1.2. Глюкокортикоиды и апоптоз.

1.3.2. Межнейронная сигнализация и апоптоз.

1.3.2.1. Норадреналин, ЦНС и апоптоз.

1.3.2.2. Эффекты адренергических препаратов на апоптоз.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Животные и экспериментальные воздействия.

2.1.1. Животные.

2.1.2. Введение гидрокортизона.

2.1.3. Инъекция клонидина.

2.2. Выделение образцов ткани мозга.

2.3. Определение содержания ДНК в ткани.

• 2.4. Выделение РНК.

2.5. Определение количества мРНК каспазы-3, Вах и Bcl-XL методом полуколичественной ревертивной полимеразной цепной реакции.

2.6. Выделение ДНК.

2.7. Анализ фрагментации ДНК.

2.8. Определение плотности альфа2А-адренорецепторов в мозге.

2.9. Реактивы.

2.10. Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1. Разработка метода количественной оценки фрагментации ДНК.

3.2. Экспрессия мРНК Вах, Bcl-XL и каспазы-3 в коре и стволе головного мозга крыс в онтогенезе.

3.3. Изменение числа клеток и уровня мРНК каспазы-3 в коре и стволе головного мозга крыс в онтогенезе.

3.4. Влияние гидрокортизона на вес тела, мозга и надпочечников крыс в перинатальный период развития.

3.5. Эффекты гидрокортизона на уровень мРНК Вах, Bcl-XL, каспазы-3 и на фрагментацию ДНК в развивающемся головном мозге крыс.

3.5.1. Внутриутробный период.

3.5.2. Неонатальный период.

3.5.2.1. Однократное введение гидрокортизона.

3.5.2.2. Двукратное введение гидрокортизона.

3.5.3. Эффекты гидрокортизона на фрагментацию ДНК в головном мозге в перинатальный период развития крыс.

3.6. Эффекты клонидина на уровень мРНК каспазы-3 и фрагментацию ДНК в развивающемся головном мозге крыс.

3.6.1. Число мест специфического связывания альфа2-адренергических лигандов.

3.6.2. Уровень мРНК каспазы-3.

3.6.3. Фрагментация ДНК.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экспрессия генов апоптоза в развивающемся мозге крыс"

Актуальность проблемы. Программируемая гибель клеток путем апоптоза является фундаментальным биологическим процессом, используемым организмом для ликвидации невостребованных, закончивших свой жизненный цикл и потенциально опасных клеток. Апоптоз является неотъемлемым компонентом нормального развития и нейродегенеративных процессов в нервной системе млекопитающих (Oppenheim, 1991; Yuan, Yankner, 2000). Основными внутриклеточными регуляторами апоптоза в головном мозге млекопитающих являются антиапоптозный белок Bc1-Xl и проапоптозный белок Вах (Chao, Korsmeyer, 1998; Akhtar et al., 2004). Изменение уровней мРНК этих белков и их соотношения друг к другу может отражать степень готовности нервных клеток к запуску программы апоптоза. Ключевую роль в реализации молекулярных механизмов апоптоза нервных клеток играет каспаза-3 (Kuida et al., 1996; Yuan, Yankner, 2000). Влияние межклеточных сигнальных молекул, таких как гормоны или нейротрансмштеры, на предрасположенность клетки к запуску программы самоуничтожения, остающиеся наименее изученным аспектом проблемы, является в месте с тем одним из наиболее актуальных. Интенсивность этих сигналов изменяется под влиянием разнообразных средовых или онтогенетических факторов, поэтому их модуляция может быть использована с терапевтическими целями.

Основные события нейрогенеза и элиминация избыточных клеточных элементов в ЦНС млекопитающих происходят в фетальном и раннем постнатальном онтогенезе (Будко и др., 1985; Oppenheim, 1991; Yuan, Yankner, 2000). Перинатальный период является критическим в развитии головного мозга, когда он наиболее чувствителен к действию повреждающих факторов. Стрессорные воздействия в раннем онтогенезе вызывают долговременные изменения поведения, что, по-видимому, связано с действием гормонов стресса — глюкокортикоидов, на формирование мозга (Naumenko, Dygalo, 1980; Дыгало, 1993; Edwards, Bumham, 2001; Andrews et al., 2004; Leret et al., 2004). He только гормоны, но и другие молекулы межклеточной сигнализации — нейротрансмиттеры, влияют на развитие мозга (Gould et al., 1999; Cameron et al., 1998; Contestabile, 2000). Действительно и гормоны, и нейротрансмиттеры влияют на жизнеспособность клеток мозга, по крайней мере, в патологических состояниях. На модели неонатальной гипоксии-ишемии продемонстрировано нейропротекгорное действие дексаметазона на клетки развивающегося мозга (Liu et al., 1995; Tuor et al., 1997), вместе с тем, есть данные и о противоположном эффекте этого препарата (Hassan et al., 1996; Matthews, 2000). Нейротрансмиттеры также влияют на жизнеспособность клеток мозга. Имитатор действия норадреналина, агонист альфа2-адренорецепторов - клонидин, уменьшает область поражения неонатального мозга при ишемии (Yuan et al., 2001) и при токсическом повреждении мозга (Laudenbach et al., 2002). Однако и антагонисты этих рецепторов также снижают постишемическое поражение нервной ткани (Gustafson et al., 1990; Martel et al., 1998; Bauer et al., 2003). Наряду с очевидной противоречивостью данных об эффектах стероидных гормонов стресса и адренергических препаратов, остается совершенно неясным связано ли действие этих сигнальных молекул на формирующийся мозг с их возможным, хотя и малоизученным, влиянием на предрасположенность клетки к запуску программы самоуничтожения.

Поиск ответов на эти вопросы необходим, поскольку сигнальные молекулы гормонов и нейротрансмитгеров потенциально способны вызвать чрезмерную активацию или, наоборот, остановку программы апоптоза в развивающемся мозге, а ее сбой в период развития ЦНС может привести к изменению формирования мозга, что, в свою очередь, может быть элементом программирования свойств взрослого организма.

Цель и задачи исследования. Основная цель данной работы состояла в изучении влияния межклеточных сигнальных молекул стероидных гормонов стресса -глюкокортикоидов и стимулятора альфа2-адренорецепторов — клонидина, на процесс апоптоза в развивающемся мозге крыс. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить онтогенетическую динамику уровней мРНК ключевых белков апоптоза — Вах, Bc1-Xl и каспазы-3 в стволовом и фронтальном отделах головного мозга крыс;

2. Исследовать действие глюкокортикоидного гормона - гидрокортизона на уровень мРНК Вах, Bcl-XL и каспазы-3 и на проявление классического признака апоптоза - фрагментацию ДНК в развивающемся головном мозге крыс;

Описаны региональные особенности онтогенетической динамики уровней мРНК белков апоптоза Вах, Bcl-XL и каспазы-3 в стволе и коре головного мозга крыс. Их уровень высок в мозге плодов. Далее, в стволовой части мозга мРНК Вах увеличивается к 40 дню жизни и затем снижается, мРНК Bcl-XL достигает взрослого уровня в течение месяца, содержание транскрипта каспазы-3 снижается в 2 раза к полуторамесячному возрасту. Во фронтальной коре концентрация мРНК Вах снижается с 8 по 90 день жизни, а мРНК Bcl-XL не меняется, как и остающейся на высоком уровне мРНК каспазы-3. Характер изменения соотношения транскриптов анти- и проапоптозного белков Вс1-2 семейства, а также уровня мРНК каспазы-3 свидетельствует о снижении в ходе онтогенеза склонности клеток ствола головного мозга к запуску программы апоптоза, в то время как клетки коры, наоборот, имеют в раннем постнатальном периоде и сохраняют до взрослого состояния более высокую, чем клетки ствола мозга, готовность к самоуничтожению.

Установлено, что последствия 6-часового воздействия гидрокортизона зависят от отдела мозга. В коре и гиппокампе гормон формирует соотношение мРНК белков апоптоза, препятствующее гибели клеток. В этих структурах повышался уровень мРНК Bcl-Хц а в коре дополнительно снижалось и содержание мРНК каспазы-3. Напротив, в стволе мозга 6-часовое воздействие гидрокортизона, как у плодов, так и у неонатальных крысят оказало проапоптозное действие: увеличивало уровень мРНК каспазы-3 и повышало фрагментацию ДНК. Двукратное введение гидрокортизона за 3 и 5 дней до исследования смещало соотношение уровней мРНК регуляторов апоптоза в пользу проапоптозных белков, что способно повысить предрасположенность клеток развивающегося мозга к запуску программы апоптоза.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты работы расширяют теоретические представления о влиянии межклеточных сигнальных молекул стероидных гормонов стресса и стимуляторов мембранных рецепторов нейротрансмиттеров на предрасположенность клеток развивающегося мозга к запуску программы самоуничтожения. Кроме того, полученные данные могут иметь и определенное практическое значение, поскольку как препараты глюкокортикоидов, так и клонидин применяются в перинатальной медицине.

Апробация работы. Материалы данной работы были доложены или представлены на XXXIV, XL и XLII Международных Студенческих конференциях (Новосибирск, 2001, 2002, 2004); IV Съезде Физиологов Сибири (Новосибирск, 2002), Международном симпозиуме «Neuron Differentiation and Plasticity - Regulation by Intercellular Signals» (Москва, 2003); Международной конференции «Targeting RNA: Artificial Ribonucleases, Conformational Traps and RNA interference» (Новосибирск, 2003); 6 конгрессе IBRO (Прага, 2003); 33-м собрании общества нейронаук США (Новый Орлеан, 2003); Всероссийском съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (Екатеринбург, 2004); конференции «Нейрохимия: фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, 2005), VII всероссийской конференции «Нейроэндокринология - 2005» (Санкт-Петербург, 2005).

По теме диссертации опубликовано 14 работ, из них 2 статьи в отечественной и одна в зарубежной печати.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Баннова, Анита Васильевна

ВЫВОДЫ

2. Уровни мРНК регуляторов апоптоза Вах, Bcl-XL и каспазы-3 в головном мозге имеют характерные для каждого гена и отдела мозга особенности онтогенеза. Их уровень высок в мозге плодов. Далее, в стволовой части мозга мРНК Вах увеличивается к 40 дню жизни и затем снижается, мРНК Bc1-Xl достигает взрослого уровня в течение месяца, содержание транскрипта каспазы-3 снижается в 2 раза к 1.5-месячному возрасту. Во фронтальной коре концентрация мРНК Вах снижается с 8 по 90 день жизни, а мРНК Bcl-XL не меняется, как и остающейся на высоком уровне мРНК каспазы-3.

3. Снижение мРНК каспазы-3 в стволе в онтогенезе происходит на фоне относительно постоянного числа его клеток. В коре число клеток снижается, а мРНК каспазы-3 остается на высоком уровне. Изменение соотношения транскриптов Bcl-Xx/Bax и уровня мРНК каспазы-3 в ходе онтогенеза свидетельствует о более высокой готовности клеток коры по сравнению с клетками ствола головного мозга к запуску программы апоптоза.

4. Последствия 6-часового воздействия гидрокортизона зависят от отдела мозга. В коре и гиппокампе гормон формирует соотношение мРНК белков апоптоза, препятствующее гибели клеток. В обеих этих структурах повышался уровень мРНК Bcl-XL)а в коре дополнительно снижалось и содержание мРНК каспазы-3. Напротив, в стволе мозга 6-часовое воздействие гидрокортизона, как у плодов, так и у неонатальных крысят оказало проапоптозное действие: увеличивало уровень мРНК каспазы-3 и активировало фрагментацию ДНК.

В целом, результаты работы свидетельствуют о влиянии посредников межклеточной коммуникации глюкокортикоидных гормонов и адренергических рецепторов второго типа на уровни мРНК белков апоптоза и его классическое проявление - фрагментацию ДНК в развивающемся головном мозге млекопитающих.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Баннова, Анита Васильевна, Новосибирск

1. Будко К.П., Гладкович Н.Г., Максимова Е.В., Раевский В.В., Шулейкина К.В. Основные этапы дифференцировки нервных клеток. Нейроонтогенез. — М: Наука. 1985. - стр. 186-205.

2. Дыгало Н.Н. Действие гидрокортизона в период эмбриогенеза на реактивность гипофизарно-надпочечниковой системы взрослых крыс: Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 1981. 16с.

3. Дыгало Н.Н., Науменко Е.В. Модификация гидрокортизоном в период внутриутробного развития активности тирозингидроксилазы мозга взрослых белых крыс. // Онтогенез. 1988. - Т. 19. - стр. 319-322.

4. Дыгало Н.Н. Эмоциональная реактивность в течение жизни крыс и у их потомства после гормональной модификации внутриутробного развития. // Журн. высш. нервн. деят. 1988. - Т. 38. - стр. 710-714.

5. Дыгало Н.Н., Милова А.А., Шишкина Г.Т. Онтогенез альфа2- и бета-адренорецепторов мозга после воздействия кортикостероном в период внутриутробного развития. // Онтогенез. — 1991а. Т. 22. - стр. 606-611.

6. Дыгало Н.Н., Калинина Т.С., Науменко Е.В. Катехоламиновая система мозга плодов крыс при нарушении баланса кортикостероидов. // Бюлл. эксп. биол. и мед.-1991b.-Т. 112.-стр. 353-355.

7. Дыгало Н.Н. Гормональный механизм модификации стрессорной реакции: Автореф. дис. докг. биол. наук. М., 1991. 33с.

8. Дыгало Н.Н. Приобретение стероидами гормональных функций в эволюции и их эффекты в раннем онтогенезе. // Усп. совр. биол. 1993. - Т. 113. - стр. 162175.

9. Дыгало Н.Н., Калинина Т.С. Эффекты взаимодействия генотипа и глюкокортикоидов на активность тирозингидроксилазы мозга плодов крыс. // Генетика. 1993. - Т. 29. - стр. 1453-1459.

10. Дыгало Н.Н., Сахаров Д.Г., Калинина Т.С., Шишкина Г.Т. Поведенческие эффекты однократного неблагоприятного воздействия в ряду поколений крыс:роль глюкокортикоидов матери. // Жури. высш. нервн. деят. — 1999. Т. 49. -стр. 489-494.

11. Дыгало Н.Н., Юшкова А.А., Калинина Т.С., Сурнина Н.Ю., Мельникова Л.Б., Шишкина Г.Т. Онтогенетическая корреляция уровня норадреналина и плотности адренергических рецепторов в головном мозге крыс. // Онтогенез. -2000.-Т. 31.-стр. 53-56.

12. Калинина Т.С., Дыгало Н.Н. Онтогенез мозга и пресинаптических маркеров катехоламинной системы крыс. // Сиб. биол. журн. 1991. - Вып.2. - стр. 61-65.

13. Калинина Т.С., Сурнина Н.Ю., Шишкина Г.Т., Дыгало Н.Н. Применение метода ОТ-ПЦР для анализа экспрессии а2А-адренергических рецепторов в головном мозге крыс. // Мол. биол. 1998. — Т. 32. - Вып. 2. - стр. 367.

14. Н.Калинина Т.С., Баннова А.В., Дыгало Н.Н. Уровень мРНК фермента апоптоза -каспазы-3 в стволе и коре головного мозга крыс в постнатальном онтогенезе. // Бюлл. эксп. биол. и мед.-2001. Т. 131.-стр. 161-163.

15. Калинина Т.С., Баннова А.В., Дыгало Н.Н. Количественное определение степени фрагментации ДНК. // Бюлл. эксп. биол. и мед. — 2002. Т. 134. - стр. 641-644.

16. Маниатис Т., Фринч Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Пер. с англ. М: Мир. - 1984.

17. Раевский В.В. Онтогенез медиаторных систем мозга. — М: Наука. — 1991. стр. 20-51.

18. Самуилов В.Д., Олескин А.В., Лагунова Е.М. Программируемая клеточная гибель. // Биохимия. 2000. - Т. 65. - Вып. 8. - стр. 1029-1046.

19. Тинников А.А., Бажан Н.М. Определение глюкокортикоидов в плазме крови и инкубатах надпочечников методом конкурентного связывания гормонов белками без предварительной экстракции. // Лабораторное дело. 1984. - Т. 12. -стр. 709-713.

20. Шишкина Г.Т., Дыгало Н.Н., Молекулярная физиология адренергических рецепторов. // Усп. физиол. наук. —1997. Т. 28. - стр. 61-74.

21. Юшкова А.А., Дыгало Н.Н. Изменение числа алъфа2 и бета-адренорецепторов ствола и коры головного мозга крыс в онтогенезе. П Физиол. журнал. — 1995. — Т. 82.-стр. 7-11.

22. Abraham I.M.A, Harkany Т., Horvath К.М., Luiten P.G.M. Action of glucocorticoids on survival of nerve cells: promoting neurodegeneration or neuroprotection? // J. Neuroendocrinol. 2001. - Vol. 13. - P. 749-760.

23. Adams J.M. Ways of dying: multiple pathways to apoptosis. // Gen. Dev. 2003. — Vol. 17.-P. 2481-2495.

24. Adams J.M., Cory S. The Bcl-2 protein family: arbiters of cell survival. // Science. -1998.-Vol. 281.-P. 1322-1326.

25. Adams J.M., Cory S. Apoptosomes: engines for caspase activation. // Cur. Op. Cell Biol. 2002. - Vol. 14. - P. 715-720.

26. Adrain C., Creagh E.M., Martin S.J. Apoptosis-associated release of Smac/DIABLO from motochondria requires active caspases and is blocked by Bcl-2. // EMBO. -2001. Vol. 20. - P. 6627-6636.

27. Ahmed F.A., Hegazy K., Chaudhary P., Sharma S.C. Neuroprotective effect of alpha(2) agonist (brimonidine) on adult rat retinal ganglion cells after increased intraocular pressure. // Brain Res. 2001. - Vol. 913. - P. 133-139.

28. Akhtar R.S., Ness J.M., Roth K.A. Bcl-2 family regulation of neuronal development and neurodegeneration. // Biochim. Biophys. Acta 2004. - Vol. 1644. - P. 189-203.

29. Albright T.D., Jessell T.M., Kandel E.R., Posner M.J. Neural science: a century of progress and the mysteries that remain. // Cell. 2000. - Vol. 100. - P. 1-55.

30. Almawi W.Y., Melemedjian O.K., Jaoude M.M. On the link between Bcl-2 family proteins and glucocorticoid-induced apoptosis. // J. Leukoc. Biol. 2004. - Vol. 76. -P. 7-14.

31. Anderson D.K., Rhees R.W., Fleming D.E. Effects of prenatal stress on differentiation of the sexually dimorphic nucleus of the preoptic area (SDN-POA) of the rat brain. // Brain Res. 1985. - Vol. 332. - P. 113-118.

32. Andrews M.H., Kostaki A., Setiawan E., McCabe L., Matthews S.G. Developmental regulation of 5-HT1A receptor mRNA in the fetal limbic system: response to antenatal glucocorticoid. // Brain Res. Dev. Brain Res. — 2004. Vol. 149. - P. 39-44.

33. Annis M.G., Yethon J.A., Leber В., Andrews D.W. There is more to life and death than mitochondria: Bcl-2 proteins at the endoplasmic reticulum. // Biochim. Biophys. Acta.-2004.-Vol. 1644.-P. 115-123.

34. Ansermino M., Basu R., Vandebeek C., Montgomery C. Nonopioid additives to local anaesthetics for caudal blockade in children: a systematic review. // Paediatr. Anesthesiol. 2003. - Vol. 13. - P. 561-573.

35. Antonsson В., Montessuit S., Lauper S., Eskes R., Martinou J.-C. Bax oligomerization is required for channelforming activity in liposomes and to trigger cytochrome с release from mitochondria. // Biochem. J. 2000. - Vol. 345. — P. 271278.

36. Antonsson В., Martinou J.-C. The Bcl-2 Protein Family. // Exp. Cell Res. 2000. -Vol. 256.-P. 50-57.

37. Apte S.S., Mattei M.G., Olsen B.R. Mapping of the human BAX gene to chromosome 19ql3.3-ql3.4 and isolation of a novel alternatively spliced transcript, BAX delta. // Genomics. 1995. - Vol. 26. - P. 592-594.

38. Arai Y., Nakamura Y., Inoue F., Yamamoto K., Saito K., Furusawa S. Glucocorticoid-induced apoptotic pathways in eosinophils: comparison with glucocorticoid-sensitive leukemia cells. // Int. J. Hematol. 2000. - Vol. 71. - P. 340349.

39. Aranda A., Pascual A. Nuclear hormone receptors and gene expression. // Physiol. Rev.-2001.-Vol. 81.-P. 1269-1304.

40. Ashe P.C., Berry M.D. Apoptotic signaling cascades. // Progress Neuro-Psychopharm. Biol. Psych. 2003. - Vol. 27. - P. 199-214.

41. Ashkenazi A., Dixit V.M. Death receptors: signaling and modulation. // Science. — 1998. Vol. 281. - P. 1305-1308.

42. Ashwell J.D., Lu F.W.M., Vacchio M.S. Glucocorticoids in T cell development and function. // Annu. Rev. Immunol. 2000. - Vol. 18. - P. 309-345.

43. Auphan N., DiDonato J.A., Rosette C., Helmberg A., Karin M. Immunosuppression by glucocorticoids: inhibition of NF-kappa В activity through induction of I kappa В synthesis. // Science. 1995. - Vol. 270. - P. 286-290.

44. Azmitia E. C. Modern views on an ancient chemical: serotonin effects on cell proliferation, maturation, and apoptosis. // Brain Res. Bull. 2001. - Vol. 56. - P. 413-424.

45. Bakker J.M., van Bel F., Heijnen C.J. Neonatal glucocorticoids and the developing brain: short-term treatment with life-long consequences? // TRENDS in Neurosci. -2001. Vol.24. - P. 649-653.

46. Balazs R., Hack N., Jorgensen O.S. N-methyl-D-aspartate promotes the survival of cerebellar granule cells in culture. // Neuroscience. 1988. - Vol. 27. - P. 437—451.

47. Becker E.B.E., Bonni A. Cell cycle regulation of neuronal apoptosis in development and disease. // Prog. Neurobiol. 2004. - Vol. 72. - P. 1-25.

48. Behar T.N., Scott C.A., Greene C.L., Wen X., Smith S.V., Marie D., Liu Q.-Y., Colton C.A., Barker J.L. Glutamate acting at NMDA receptors stimulates embryonic cortical neuronal migration. // J. Neurosci. 1999. - Vol. 19. - P. 4449 - 4461.

49. Bennet J.P., Yamamura H.I. Neurotransmitter, hormone or drug receptor binding methods. // Neurotransmitter Receptor Binding, Eds.: H.I. Yamamura et al., 1985. -P. 61-89.

50. Bergeron L., Yuan J. Sealing one's fate: control of cell death in neurons. // Cur. Op. Gen. Dev. 1998. - Vol. 8. - P. 55-63.

51. Bibel M., Barde Y.-A. Neurotrophins: key regulators of cell fate and cell shape in the vertebrate nervous system. // Genes Dev. 2000. - Vol. 14. - P. 2919-2937.

52. Bickler P.E., Hansen B.M. Alpha 2-adrenergic agonists reduce glutamate release and glutamate receptor-mediated calcium changes in hippocampal slices during hypoxia. // Neuropharmacology. 1996. - Vol. 35. - P. 679-687.

53. Blaschke A J., Staley K., Chun J. Widespread programmed cell death in proliferative and postmitotic regions of the fetal cerebral cortex. // Development. 1996. - Vol. 122.-P. 1165-1174.

54. Bohm I., Schild H. Apoptosis: the complex scenario for a silent cell death. // Mol. Imaging Biol. 2003. - Vol. 5. - P. 2-14.

55. Boise L.H., Gonzalez-Garcia M., Postema C.E., Ding L., Lindsten Т., Turka L.A., Мао X., Nunez G., Thompson C.B. bcl-x, a bcl-2-related gene that functions as a dominant regulator of apoptotic cell death. // Cell. 1993. - Vol. 74. - P. 597-608.

56. Borner C. The Bcl-2 protein family: sensors and checkpoints for life-or-death decisions. // Mol. Immunol. 2003. - Vol. 39. - P. 615-647.

57. Bortner C.D., Cidlowski J.A. Cellular mechanisms for the repression of apoptosis. // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2002. - Vol. 42. - P. 259-281.

58. Bouillet P., Strasser A. ВНЗ-only proteins — evolutionarily conserved proapoptotic Bcl-2 family members essential for initiating programmed cell death. // J. Cell Sci. -2002.-Vol. 115.-P. 1567-1574.

59. Budihardjo I., Oliver H., Lutter M., Luo X., Wang X. Biochemical pathways of caspase activation during apoptosis. // Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. 1999. — Vol. 15. -P. 269-290.

60. Bullrich F., Fernandes-Alnemri Т., Litwack G., Alnemri E.S., Croce C.M. Cromosomal mapping of cell death proteases CPP32, MCH2, and MCH3. // Genomics. 1996. - Vol. 36. - P. 362-365.

61. Burek M.J., Oppenheim R.W. Programmed cell death in developing nervous system. // Brain Pathol. 1996. - Vol. 6. - P. 427-446.

62. Biischer R., Volker H., Insel P.A. Human adrenoceptor polymorphisms: evolving recognition of clinical importance. //TiPS. 1999. - Vol. 20. - P. 94-99.

63. Callado L.F., Stamford J.A. Spatiotemporal interaction of alpha2 autoreceptors and noradrenaline transporters in the rat locus coeruleus: implications for volume transmission. // J. Neurochem. 2000. - Vol. 74. - P. 2350-2358.

64. Cameron H.A., Hazel T.G., McKay R.D. Regulation of neurogenesis by growth factors and neurotransmitters. // J. Neurobiol. 1998. - Vol. 36. - P. 287-306.

65. Carson R.P., Robertson D. Genetic manipulation of noradrenergic neurons. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2002. - Vol. 301. - P. 410-417.

66. Chalmers D.T., Kwak S.P., Mansour A., Akil H., Watson S.J. Corticosteroids regulate brain hippocampal 5-HT1A receptor mRNA expression. // J. Neurosci. 1993. - Vol. 13.-P. 914-923.

67. Chang T.C., Hung M.W., Jiang S.Y., Chu J.T., Chu L.L., Tsai L.C. Dexamethasone suppresses apoptosis in human gastric cancer cell line through modulation of bcl-x gene expression. // FEBS Lett. 1997. - Vol. 415. - P. 11-15.

68. Chang H.Y., Yang X. Proteases for cell suicide: functions and regulation of caspases. // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2000. - Vol. 64. - P. 821-846.

69. Chao D.T., Korsmeyer S.J. Bcl-2 family: regulators of cell death. // Annu, Rev. Immunol. 1998. - Vol. 16. - P. 395-419.

70. Chao H.M., Sakai R.R., Ma L.Y., McEwen B.S. Adrenal steroid regulation of neurotrophic factor expression in the rat hippocampus. // Endocrinology. — 1998. -Vol. 139.-P. 3112-3118.

71. Chao H.M., Chidlow G., Melena J., Wood J.P., Osborne N.N. An investigation into the potential mechanisms underlying the neuroprotective effect of clonidine in the retina. // Brain Res. 2000. - Vol. 877. - P. 47-57.

72. Chao H.M., Osborne N.N. Topically applied clonidine protects the rat retina from ischaemia/reperfiision by stimulating alpha(2)-adrenoceptors and not by an action on imidazoline receptors. // Brain Res. 2001. - Vol. 904. - P. 126-136.

73. Chauhan D., Pandey P., Ogata A., Teoh G., Treon S., Urashima M., Kharbanda S., Anderson K.C. Dexamethasone induces apoptosis of multiple myeloma cells in a JNK/SAP kinase independent mechanism. // Oncogene. 1997. - Vol.15. - P. 837843.

74. Chauhan D., Hideshima Т., Rosen S., Reed J.C., Kharbanda S., Anderson K.C. Apaf-1/cytochrome c-independent and Smac-dependent induction of apoptosis in multiple myeloma (MM) cells. // J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276. - P. 24453-24456.

75. Chen J., Nagayama Т., Stetler R.A., Zhu R.S., Graham S.H., Simon R.P. Induction of caspase-3-like protease may mediate delayed neuronal death in the hippocampus after transient cerebral ischemia. // J. Neurosci. 1998. - Vol. 18. - P. 4914-4928.

76. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium-thiocyanate-phenol-chloroform extraction. // Analytical. Biochem. — 1987. Vol.162. - P. 156-159.

77. Clarke R.W., Harris J. RX 821002 as a tool for physiological investigation of alpha(2)-adrenoceptors. // CNS Drug Rev. 2002. - Vol. 8. - P. 177- 192.

78. Communal C., Singh K., Sawyer D.B., Colucci W.S. Opposing effects of betal- and beta2-adrenergic receptors on cardiac myocyte apoptosis. Role of a pertussis toxin-sensitive G protein. // Circulation. 1999. - Vol. 100. - P. 2210-2212.

79. Contestabile A. Roles of NMD A receptor activity and nitric oxide production in brain development. // Brain Res. Brain Res. Rev. 2000. - Vol. 32. - P. 476-509.

80. Costas M.A., Muller Igaz L., Holsboer F, Arzt E. Transrepression of NF-kappaB is not required for glucocorticoid-mediated protection of TNF-alpha-induced apoptosis on fibroblasts. // Biochem. Biophys. Acta. 2000. - Vol. 1499. - P. 122-129.

81. Cox G., Austin R.C. Dexamethasone-induced suppression of apoptosis in human neutrophils requires continuos stimulation of new protein synthesis. // J. Leukoc. Biol.- 1997. Vol. 61. - P24-230.

82. Cryns V., Yuan J. Proteases to die for. // Genes Dev. 1998. - Vol. 12. - P. 15511570.

83. Culmsee C., Semkova I., Krieglstein J. NGF mediates the neuroprotective effect of the b2-adrenoceptor agonist clenbuterol in vitro and in vivo: evidence from an NGF-antisense study. // Neurochem. Int. 1999. - Vol. 35. - P. 47-57.

84. D'Mello S. R., China-Yi Kuan, Flavell R. A. and Rakis P. Caspase-3 required for apoptosis associated DNA fragmentation but not for cell death in neurons deprived of potassium. // J. Neurosci. Res. - 2000. - Vol. 59. - P.24-31.

85. D'Sa-Eipper C., Roth K.A. Caspase regulation of neuronal progenitor cell apoptosis. // Dev. Neurosci. 2000. - Vol. 22. - P. 116-124.

86. D'Sa-Eipper C., Leonard J.R., Putcha G., Zheng T.S., Flavell R.A., Rakic P., Kuida K., Roth K.A. DNA damage-induced neural precursor cell apoptosis requires p53 andcaspase 9 but neither Bax nor caspase 3. // Development. 2001. - Vol. 128. - P. 137-146.

87. Danial N.N., Korsmeyer S.J. Cell death: critical control points. // Cell. 2004. - Vol. 116.-P. 205-219.

88. Datta S.R., Brunet A., Greenberg M.E. Cellular survival: a play in three Akts. // Genes Dev. 1999. - Vol. 1. - P. 2905-2927.

89. De Bilbao F., Guarin E., Nef P., Vallet P.„ Giannakopoulos P., Dubois-Dauphin M. Postnatal distribution of cpp32/ caspase 3 mRNA in the mouse central nervous system: an in situ hybridization study. // J. Сотр. Neurol. 1999. - Vol. 409. - P. 339-357.

90. De Kloet E.R., Vreugdenhil E., Oitzl M.S., Joels M. Brain corticosteroid receptor balance in health and disease. // Endocr. Rev. 1998. - Vol. 19. - P. 269-301.

91. Deckwerth T.L., Elliott J.L., Knudson C.M., Johnson E.MJr., Snider W.D., Korsmeyer S.J. Bax is required for neuronal death after trophic factor deprivation and during development. // Neuron. 1996. - Vol. 17. - P. 401-411.

92. Degterev A., Boyce M., Yuan J. The channel of death. // J. Cell Biol. 2001. -Vol. 155.-P. 695-697.

93. Degterev A., Boyce M., Yuan J. A decade of caspases. // Oncogene. — 2003. -Vol. 22.-P. 8543-8567.

94. Desagher S., Martinou J.-C. Mitochondria as the central control point of apoptosis. // Trends Cell. Biol. 2000. - Vol. 10. - P. 369-377.

95. Deshmukh M., Du C., Wang X., Johnson E.M. Exogenous smac induces competence and permits caspase activation in sympathetic neurons. // J. Neurosci. — 2002. Vol. 22. - P. 8018-8027.

96. Deveraux Q.L., Reed J.C. LAP family proteins-suppressors of apoptosis. // Genes Dev. 1999. - Vol. 13. - P. 239-252.

97. Distelhorst C.W. Recent insights into the mechanism of glucocorticosteroid-induced apoptosis. // Cell. Death Differ. 2002. - Vol. 9. - P. 6-19.

98. Donepudi M., Grutter M.G. Structure and zymogen activation of caspases. // Biophys. Chem.-2002.-Vol. 101-102.-P. 145-153.

99. Dygalo N.N., Kalinina T.S. Tyrosine hydroxylase activities in the brains of wild Norway rats and silver foxes selected for reduced aggressiveness towards humans. // Aggr. behav. 1994. - Vol. 20. - P. 453-460.

100. Dygalo N.N., Kalinina T.S., Sournina N.Y., Shishkina G.T. Effects of testosterone on alpha2A-adrenergic receptor expression in the rat brain. // Psychoneuroendocrinology. 2002. - Vol. 27. - P. 585-592.

101. Earnshaw W.C., Martins L.M., Kaufmann S.H. Mammalian caspases: structure, activation, substrates and functions during apoptosis. // Annu. Rev. Biochem. 1999. -Vol. 68.-P. 383-424.

102. Edwards H.E., Burnham W.M. The impact of corticosteroids on the developing animal. // Pediatr. Res. 2001. - Vol. 50. - P. 433-440.

103. Eldadah B.A., Yakovlev A.G., Faden A.I. A new approach for the electrophorelic detection of apoptosis. // Nucleic Acids Res. 1996. - Vol. 24. - P. 4092-4093.

104. Eldadah B.A., Ren R.F., Faden A.I. Ribozyme-mediated inhibition of caspase-3 protects cerebellar granule cells from apoptosis induced by serum-potassium deprivation. // J. Neurosci. 2000. - Vol. 20. - P. 179-186.

105. Ellis H.M., Horvitz H.R. Genetic control of programmed cell death in thenematode C. Elegance. // Cell. 1986. - Vol. 44. - P. 817-829.

106. Esposti M.D., Dive C. Mitochondrial membrane permeabilisation by Bax/Bak. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003. - Vol. 304. - P. 455-461.

107. Evans-Storms R.B., Cidlowski J.A. Delineation of an antiapoptotic action of glucocorticoids in hepatoma cells the role of nuclear factor-kB. // Endocrinology. -2000.-Vol. 141.-P. 1854-1862.

108. Feenstra M.G., van Galen H., Boer G.J. Early postnatal clonidine treatment results in altered regional catecholamine utilisation in adult rat brain. // Psychopharmacology (Berl.). 1992. - Vol. 106. - P. 19-25.

109. Feng Z., Marti A., Jehn В., Altermatt H.J., Chicaiza G., Jaggi R. Glucocorticoid and progesterone inhibit involution and programmed cell death in the mouse mammary gland. //J. Biol. Chem. 1995. - Vol. 131. - P. 1095-1103.

110. Flagel S.B., Vazquez D.M., Watson SJJr., Neal C.R.Jr. Effects of tapering neonatal dexamethasone on rat growth, neurodevelopment, and stress response. // Am. J. Physiol. Regul. Integr. Сотр. Physiol. 2002. - Vol. 282. - P. 55-63.

111. Fujioka Т., Sakata Y., Yamaguchi K., Shibasaki Т., Kato H., Nakamura S. The effects of prenatal stress on the development of hypothalamic paraventricular neurons in fetal rats. //Neuroscience. 1999. - Vol. 92. - P. 1079-1088.

112. Gao H., Qiao X., Cantor L.B., WuDunn D. Up-regulation of brain-derived neurotrophic factor expression by brimonidine in rat retinal ganglion cells. // Arch. Ophthalmol. 2002. - Vol. 120. - P. 797-803.

113. Gascoyne D.M., Kypta R.M., Vivanco M.d.M. Glucocorticoids inhibit apoptosis during fibrosarcoma development by transcriptionally activating Bcl-XL. // J. Biol. Chem. 2003. - Vol. 278. - P. 18022-18029.

114. Gibbs M.E., Summers R.J. Role of adrenoceptor subtypes in memory consolidation. // Prog. Neurobiol. 2002. - Vol. 67. - P. 345-391.

115. Giguere V. Orphan nuclear receptors: from gene to function. // Endocr. Rev. — 1999. Vol. 20. - P. 689-725.

116. Globus M.Y., Busto R., Dietrich W.D., Martinez E., Valdes I., Ginsberg M.D. Intra-ischemic extracellular release of dopamine and glutamate is associated with striatal vulnerability to ischemia. // Neurosci. Lett. 1988. - Vol. 91. - P. 36-40.

117. Globus M.Y., Busto R., Dietrich W.D., Martinez E., Valdes I., Ginsberg M.D. Direct evidence for acute and massive norepinephrine release in the hippocampus during transient ischemia. // J. Cereb. Blood Flow Metab. 1989. - Vol. 9. - P. 892896.

118. Glucksmann A. Local factors in the histogenesis of hypertrophic scars. // Br. J. Plast. Surg. 1951. - Vol. 4. - P. 88-103.

119. Goldberg J.L., Barres B.A. The relationship between neuronal survival and regeneration. // Annu. Rev. Neurosci. 2000. - Vol. 23. - P. 519-612.

120. Goping I.S., Gross A., Lavoie J.N., Nguyen M., Jemmerson R., Roth K., Korsmeyer S.J., Shore G.C. Regulated targeting of Bax to mitochondria. // J. Cell Biol.- 1998.-Vol. 143.-P. 207-215.

121. Gorter J.A., Kamphuis W., Huisman E., Bos N.P., Mirmiran M. Neonatal clonidine treatment results in long-lasting changes in noradrenaline sensitivity and kindling epileptogenesis. // Brain Res. 1990. - Vol. 535. - P. 62-66.

122. Gould E., Cameron H.A. Early NMDA receptor blockade impairs defensive behavior and increases cell proliferation in the dentate gyms of developing rats. // Behav. Neurosci. 1997. - Vol. 111. - P. 49-56.

123. Gould E., McEwen B.S., Tanapat P., Galea L.A., Fuchs E. Neurogenesis in the dentate gyrus of the adult tree shrew is regulated by psychosocial stress and NMDA receptor activation. // J. Neurosci. 1997. - Vol. 17. - P. 2492-2498.

124. Gould E. Serotonin and hippocampal neurogenesis. // Neuropsychopharmacology. 1999.-Vol. 21.-P. 46S-51S.

125. Gould E., Reeves A.J., Graziano M.S., Gross C.G. Neurogenesis in the neocortex of adult primates. // Science. 1999. - Vol. 286. - P. 548-552.

126. Green D.R., Reed J.C. Mitochondria and apoptosis. // Science. 1998. - Vol. 281. -P. 1309-1312.

127. Greenstein S., Ghias K., Krett N.L., Rosen S.T. Mechanisms of glucocorticoid-mediated apoptosis in hematological malignancies. // Clin. Cancer Res. 2002. - Vol. 8.-P. 1681-1694.

128. Grillot D.A., Gonzalez-Garcia M, Ekhterae D., Duan L., Inohara N., Ohta S., Seldin M.F., Nunez G. Genomic organization, promoter region analysis, and chromosome localization of the mouse bcl-x gene. // J. Immunol. 1997. - Vol. 158. -P. 4750-4757.

129. Gross A., Jockel J., Wei M.C., Korsmeyer S.J. Enforced dimerization of BAX results in its translocation, mitochondrial dysfunction and apoptosis. // EMBO J. -1998. Vol. 17. - P. 3878-3885.

130. Gross A., McDonnell J.M., Korsmeyer S.J. Bcl-2 family members and the mitochondria in apoptosis. // Genes Dev. 1999. - Vol. 13. - P. 1899-1911.

131. Gustafson I., Miyauchi Y., Wieloch T.W. Postischemic administration of idazoxan, an alpha2-adrenergic receptor antagonist, decreases neuronal damage in theф rat brain. // J. Cereb. Blood Flow Metab. 1989. - Vol. 9. - P. 171-174.

132. Hacker G. The morphology of apoptosis. // Cell Tiss. Res. 2000. - Vol. 301. -P.5-17.

133. Halonen Т., Kotti Т., Tuunanen J., Toppinen A., Miettinen R., Riekkinen P.J. Alpha2- adrenoceptor agonist, dexmedetomidine, protects against kainic acid-induced convulsions and neuronal damage. // Brain Res. 1995. - Vol. 693. - P. 217-224.

134. Ham J., Eilers A., Whitfielld J., Stephen J.N., Shah B. C-jun and the transcriptional control of neuronal apoptosis. // Biochemical Pharmacology. 2000. -Vol. 60.-P. 1015-1021.

135. Нарре H.K., Bylund D.B., Murrin L.C. Alpha-2 adrenergic receptor functional coupling to G proteins in rat brain during postnatal development. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1999. - Vol. 288. - P. 1134-1142.

136. Нарре H.K., Coulter C.L., Gerety M.E., Sanders J.D., O'Rourke M., Bylund D.B., Murrin L.C. Alpha-2 adrenergic receptor development in rat CNS: an autoradiographic study. // Neuroscience. 2004. — Vol. 123. - P. 167-178.

137. Harrison D.C., Medhurst A.D., Bond B.S., Campbell C.A., Davis R.P., Philpott K.L. The use of quantitative RT-PCR to measure mRNA expression in a rat model of focal ischemia-caspase-3 as a case study. // Mol. Brain Res. 2000. - Vol. 75. - P. 143-149.

138. Hassan A.H.S., Von Rosenstiel P., Patchev V. K., Holsboer F., Almeida O. F. X. Exacerbation of apoptosis in the dentate gyrus of the aged rat by dexamethasone andф the protective role of corticosterone. I I Exp. Neurol. — 1996. — Vol. 140. P. 43-52.

139. Heidenreich K.A. Molecular mechanisms of neuronal cell death. // Ann. NY Acad. Sci.- 2003. -Vol. 991.-P. 237-250.

140. Helmberg A., Auphan N., Caelles C., Karin M. Glucocorticoid-induced apoptosis of human leukemia cells is caused by the repressive function of the glucocorticoid receptor. // EMBO J. 1995. - Vol. 14. - P. 452-460.

141. Hengartner M.O., Horvitz H.R. C. elegans cell survival gene ced-9 encodes a functional homolog of the mammalian proto-oncogene bcl-2. // Cell. 1994. - Vol. 76.-P. 665-676.

142. Hengartner M.O. Genetic control of programmed cell death and aging in the nematode Caenorhabditis elegans. // Exp. Gerontol. 1997. - Vol. 32. - P. 363-374.

143. Hengartner M.O. The biochemistry of apoptosis. // Nature. 2000. - Vol. 407. -P. 770-776.

144. Hengartner M.O. Apoptosis. DNA destroyers. // Nature. 2001. - Vol. 412. - P. 27-29.

145. Hickey M.A., Chesselet M.-F. Apoptosis in Huntington's disease. // Progress Neuro-Psychopharm. Biol. Psych. 2003. - Vol. 27. - P. 255-265.

146. Hirai K., Yoshioka K., Kihara M., Hasegawa K., Sakamoto Т., Sawada Т., Fushiki S. Inhibiting neuronal migration by blocking NMDA receptors in the embryonic rat cerebral cortex: a tissue culture study. // Dev. Brain Res. — 1999. Vol. 114. — P. 63— 67.

147. Hockenbery D., Nunez G., Milliman C., Sehreiber R.D., Korsmeyer S.J. Bcl-2 is an inner mitochondrial membrane protein that blocks programmed cell death. // Nature. 1990. - Vol. 348. - P. 334-336.

148. Hoijman E., Viegas L.R., Sarmiento M.I.K., Rosenstein R.E., Pecci A. Involvement of Bax protein in the prevention of glucocorticoid-induced thymocytes apoptosis by melatonin. // Endocrinology. 2004. - Vol. 145. - P. 418-425.

149. Huang E.J., Reichardt L.F. Neurotrophins: Roles in neuronal development and function. // Annu. Rev. Neurosci. 2001. - Vol. 24. - P. 677-736.

150. Huang Yi, W. Stamer D., Anthony T.L., Kumar D.V., John P.A.St., Regan. J.W. Expression of alpha2-adrenergic receptor subtypes in prenatal rat spinal cord. // Dev. Brain Res. 2002. - Vol. 133. - P. 93-104.

151. Huang E.J., Reichardt L.F. Trk receptors: roles in neuronal signal transduction. // Annu. Rev. Biochem. 2003. - Vol. 72. - P. 609 -642.

152. Iwai-Kanai E., Hasegawa K., Araki M., Kakita Т., Morimoto Т., Sasayama S. Alpha- and beta-adrenergic pathways differentially regulate cell type-specific apoptosis in rat cardiac myocytes. // Circulation. 1999. - Vol. 100. - P. 305-311.

153. Jin K.L., Graham S.H., Мао X.O., He X., Nagayama Т., Simon R.P., Greenberg D.A. Bax kappa, a novel Bax splice variant from ischemic rat brain lacking an ART domain, promotes neuronal cell death. // J. Neurochem. — 2001. Vol. 77. - P. 15081519.

154. Johnston M.V., Trescher W.H., Ishida A., Nakajima W. Neurobiology of hypoxic-ischemic injury in the developing brain. // Pediatr. Res. 2001. - Vol. 49. - P. 735741.

155. Jolkkonen J., Puurunen K., Koistinaho J., Kauppinen R., Haapalinna A., Nieminen L., Sivenius J. Neuroprotection by the alpha2-adrenoceptor agonist, dexmedetomidine, in rat focal cerebral ischemia. // Eur. J. Pharmacol. 1999. — Vol. 372.-P. 31-36.

156. Jiirgensmeier J.M., Xie Z., Deveraux Q., Ellerby L., Bredesen D., Reed J.C. Bax directly induces release of cytochrome с from isolated mitochondria. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - Vol. 95. - P. 4997-5002.

157. Kable J.W., Murrin L.C., Bylund D.B. In vivo gene modification elucidates subtype-specific functions of alpha(2)-adrenergic receptors. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2000. - Vol. 293. - P. 1-7.

158. Kamibayashi Т., Maze M. Clinical uses of alpha2-adrenergic agonists. // Anesthesiology. 2000. - Vol. 93. - P. 1345-1349.

159. Karasinska J.M., George S.R., O'Dowd B.F. Family 1 G protein-coupled receptor function in the CNS. Insights from gene knockout mice. // Brain Res. Brain Res. Rev. -2003.-Vol. 41.-P. 125-152.

160. Karten Y.J., Stienstra C.M., Joels M. Corticosteroid effects on serotonin responses in granule cells of the rat dentate gyrus. // J. Neuroendocrinol. 2001. - Vol. 13. - P. 233-238.

161. Kerr J.F.R., Wyllie A.M., Currie A.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implication in tissue kinetics. // Br. J. Cancer. 1972. - Vol. 26. -P. 239-257.

162. Kevin H.H., Bylund D.B., Murrin L.C. Alpha-2 adrenergic receptor functional coupling to G proteins in rat brain during postnatal development. // JPET. 1999. -Vol. 288.-P. 1134-1142.

163. Khan Z.P., Ferguson C.N., Jones R.M. Alpha-2 and imidazoline receptor agonists. Their pharmacology and therapeutic role. // Anesthesia. — 1999. Vol. 54. - P. 146165.

164. Kobilka B.K. Amino and carboxyl terminal modifications to facilitate the production and purification of a G protein-coupled receptor. // Anal. Biochem. -1995. Vol. 231. - P. 269-271.

165. Komuro H., Rakic P. Modulation of neuronal migration by NMDA receptor. // Science. 1993. - Vol. 260. - P. 95-97.

166. Konstandi M., Johnson E., Lang M.A, Malamas M., Marselos M. Noradrenaline, dopamine, serotonin: different effects of psychological stress on brain biogenic amines in mice and rats. // Pharmacol. Res. 2000. - Vol. 41. - P. 341-346.

167. Korsmeyer S.J. Regulators of cell death. // Trends Genet. 1995. - Vol. 11. - P. 101-105.

168. Kuan C.-Y., Roth K.A., Flavell R.A., Rakic P. Mechanisms of programmed cell death in the developing brain. // Trends Neurosci. 2000. - Vol. 23 - P. 291-297.

169. Kuhmonen J., Pokorny J., Miettinen R., Haapalinna A., Jolkkonen J., Riekkinen P.Sr., Sivenius J. Neuroprotective effects of dexmedetomidine in the gerbil hippocampus after transient global ischemia. // Anesthesiology. 1997. - Vol. 87. — P. 371-377.

170. Kuhmonen J., Haapalinna A., Sivenius J. Effects of dexmedetomidine after transient and permanent occlusion of the middle cerebral artery in the rat. // J. Neural. Transm. -2001. Vol. 108. - P. 261-271.

171. Kuida K., Zheng T.S., Na S., Kuan C., Yang D., Karasuyama H., Rakic P., Flavell R.A. Decreased apoptosis in the brain and premature lethality in CPP32-deficient mice. // Nature. 1996. - Vol. 384. - P. 368-372.

172. Labarca C., Paigen K. A simple, rapid and sensitive DNA assay procedure. // Analyt. Biochem. 1980.-Vol. 102.-P. 344-353.

173. Lahdesmaki J., Sallinen J., E.MacDonald, Kobilka B.K., Fagerholm V., Scheinin M. Behavioral and neurochemical characterization of alpha-2A-adrenergic receptor knockout mice. // Neuroscience. 2002. - Vol. 113. - P. 289-299.

174. Lai RK, Chun T, Hasson D, Lee S, Mehrbod F, Wheeler L. Alpha-2 adrenoceptor agonist protects retinal function after acute retinal ischemic injury in the rat abstract. // Vis. Neurosci. 2002. - Vol. 19. - P. 175-185.

175. Lawen A. Apoptosis an introduction. // Bioessays. - 2003. - Vol. 25. - P. 888896.

176. Lazebnik Y.A., Kaufmann S.H., Desnoyers S., Poirier G.G., Earnshaw W.C. Cleavage of poly(ADF-ribose)polymerase by a proteinase with properties like ICE. // Nature 1994. - Vol. 371. - P. 346-347.

177. Lee A., Rosin D.L., Van Bockstaele E.J. AIpha2A-adrenergic receptors in the rat nucleus locus coeruleus: subcellular localization in catecholaminergic dendrites, astrocytes, and presynaptic axon terminals. // Brain Res. 1998. - Vol. 795. - P. 157169.

178. Lee A.L., Ogle W.O., Sapolsky R.M. Stress and depression: possible links to neuron death in the hippocampus. // Bipolar Disord. — 2002. Vol. 4. - P. 117-128.

179. Leret M.L., Peinado V., Suarez L.M., Tecedor L., Gamallo A., Gonzalez J.C. Role of maternal adrenal glands on the developing serotoninergic and aminoacidergic systems of the postnatal rat brain. // Int. J. Dev. Neurosci. 2004. - Vol. 22. - P. 8793.

180. Lev N., Melamed E., Offen D. Apoptosis and Parkinson's disease. // Progress Neuro-Psychopharm. Biol. Psych. 2003. - Vol. 27. - P. 245-250. • 210. Levi-Montalcini R. The nerve growth factor 35 years later. // Science. - 1987.1. Vol. 237.-P. 1154-1162.

181. Levitt P., Harvey J.A., Friedman E., Simansky K., Murphy E.H: New evidence for neurotransmitter influences on brain development. // TINS. 1997. - Vol. 20. - P. 269-274.

182. Liang H., Fesik S.W. Three-dimensional structures of proteins involved in programmed cell death. // J. Mol. Biol. 1997. - Vol. 274. - P. 291-302.

183. Lipton P. Ischemic cell death in brain neurons. // Physiol. Rev. 1999. - Vol. 79. ш -P. 1431-1568.

184. Liu Y., Wada H., Takada S., Uetani Y., Itoh H., Nakamura H. Preventive effects of dexamethasone on hypoxic-ischemic brain damage in the neonatal rat. // Brain Dev.- 1995.-Vol. 17.-P. 186-192.

185. Liu X., Kim C.N., Pohl J., Wang X. Purification and characterization of an interleukin-1 beta-convertig enzyme family protease that activates cysteine protease p32 (CPP32). // J. Biol. Chem. — 1996. Vol. 271. - P. 13371-13376.

186. Liu X., Zou H., Slaughter C., Wang X. DFF, a heterodimeric proteine that functions downstream of caspase-3 to trigger DNA fragmentation during apoptosis. // Cell. 1997. - Vol. 89. - P. 175-184.

187. Liu Q.A., Hengartner M.O. The molecular mechanism of programmed cell death in C. elegans. // Ann N Y Acad. Sci. 1999. - Vol. 887. - P. 92-104.

188. Liu W., Wang G., Yakovlev A.G. Identification and functional analysis of the rat caspase-3 gene promoter. // J. Biol. Chem. -2002. Vol. 277. - P. 8273-8278.

189. Losel R.M., Falkenstein E., Feuring M., Schultz A., Tillmann H.-C., Rossol-Haseroth K., Wehling M. Nongenomic steroid action: controversies, questions, and answers. //Physiol. Rev.-2003.-Vol. 83.-P. 965-1016.

190. Lossi L., Merighi A. In vivo cellular and molecular mechanisms of neuronal ^ apoptosis in the mammalian CNS. // Prog. Neurobiol. 2003. - Vol. 69. - P. 287312.

191. Lowry O.H., Rosbrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent. // J. Biol. Chem. 1951. - Vol.193. - P. 265-275.

192. Ma D., Hossain M., Rajakumaraswamy N., Arshad M., Sanders R.D., Franks N.P., Maze M. Dexmedetomidine produces its neuroprotective effect via the alpha2A-adrenoceptor subtype. // Eur. J. Pharmacol. 2004. - Vol. 502. - P. 87-97.

193. MacDonald E., Scheinin M. Distribution and pharmacology of alpha 2-adrenoceptors in the central nervous system. // J. Physiol. Pharmacol. 1995. - Vol. 46.-P. 241-258.

194. MacDonald E., Kobilka B.K., Scheinin M. Gene targeting—homing in on alpha 2-adrenoceptor-subtype function. // Trends Pharmacol. Sci. 1997. — Vol. 18. - P. 211219.

195. Machaalani R., Waters K.A. Increased neuronal cell death after intermittent hypercapnic hypoxia in the developing piglet brainstem. // Brain Res. 2003. - Vol. 985.-P. 127-134.

196. Magarinos A.M., McEwen B.S. Stress-induced atrophy of apical dendrites of hippocampal САЗс neurons: involvement of glucocorticoid secretion and excitatory amino acid receptors. // Neuroscience. 1995. — Vol. 69. — P. 89-98.

197. Magarinos A.M., McEwen B.S., Flugge G., Fuchs E. Chronic psychosocial stress causes apical dendritic atrophy of hippocampal CA3 pyramidal neurons in subordinate tree shrews. // J. Neurosci. 1996. - Vol. 16. - P. 3534-3540.

198. Magarinos A.M., Verdugo J.M.G., Mcewen B.S. Chronic stress alters synaptic terminal structure in hippocampus. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - Vol. 94. -P. 14002-14008.

199. Manolagas S.C. Birth and death of bone cells: basic regulatory mechanisms and implications for the pathogenesis and treatment of osteoporosis. // Endocrine Rev. -2000.-Vol. 21.-PP. 115-137.

200. Mansouri J., Panigrahy A., Assmann S.F., Kinney H.C. Distribution of alpha 2-adrenergic receptor binding in the developing human brain stem. // Pediatr. Dev. Pathol. 2001. - Vol. 4. - P. 222- 236.

201. Martel J.C., Chopin P., Colpaert F., Marien M. Neuroprotective effects of the alpha2-adrenoreceptor antagonists (+)-efaroxan and (±)-idazoxan, against quinolinic acid-induced lesions of the rat striatum. // Exp. Neurol. 1998. - Vol. 154. - P. 595601.

202. Matsumoto M., Zornow M.H., Rabin B.C., Maze M. The alpha 2 adrenergic agonist, dexmedetomidine, selectively attenuates ischemia-induced increases in striatal norepinephrine concentrations. // Brain Res. 1993. - Vol. 627. - P. 325-329.

203. Matthews S.G. Antenatal glucocorticoids and programming of the developing CNS. // Pediatr. Res. 2000. - Vol. 47. - P. 291-300.

204. Mayer В., Oberbauer R. Mitochondrial regulation of apoptosis. // News Physiol. Sci. 2003. - Vol. 18. - P. 89-94.

205. Mazarakis N. D., Edwards A. D., Mehmet H. Apoptosis in neural development and disease. // Arch. Dis. Child. Fetal Neonatal Ed. 1997. - Vol. 77. - P. 165-170.

206. McCarthy M.M., Davis A.M., Mong J.A. Excitatory neurotransmission and sexual differentiation of the brain. // Brain Res. Bull. 1997. - Vol. 44. - P. 487^95.

207. McEwen B.S. Stress and hippocampal plasticity. // Annu. Rev. Neurosci. — 1999. -Vol. 22.-P. 105-122.

208. Meier P., Finch A., Evan G. Apoptosis in development. // Nature. 2000. - Vol. 407.-P. 796-801.

209. Merry D.E., Korsmeyer S.J. Bcl-2 gene family in the nervous system. // Annu. Rev. Neurosci. 1997. - Vol. 20. - P. 245-267.

210. Meyer-Franke A., Wilkinson G.A., Kruttgen A., Ни M., Munro E., Hanson M.G. Jr., Reichardt L.F., Barres B.A. Depolarization and cAMP elevation rapidly recruit TrkB to the plasma membrane of CNS neurons. // Neuron. 1998. - Vol. 21. - P. 681-693.

211. Michelin S., Perez M.R., Dubner D., P Gisone P. Increased activity and involvement of caspase-3 in radiation-induced apoptosis in neural cells precursors from developing rat brain. // NeuroToxicol. 2004. - Vol. 25. - P. 387-398.

212. Mikhailov V., Mikhailova M., Pulkrabek D.J., Dong Z., Venkatachalam M.A., Saikumar P. Bcl-2 prevents Bax oligomerization in the mitochondrial outer membrane. // J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276. - P. 18361-18374.

213. Mitchell I.J., Cooper A.J., Griffiths M.R., Barber D.J. Phencyclidine and corticosteroids induce apoptosis of a subpopulation of striatal neurons: A neural substrate for psychosis? // Neuroscience. 1998. - Vol. 84. - P. 489-501.

214. Mittelstadt P.R., Ashwell J.D. Inhibition of AP-1 by the glucocorticoid-inducible protein GILZ. // J. Biol. Chem. 2001. - Vol. 276. - P. 29603-29610.

215. Miyashita Т., Nagao K., Krajewski S., Salvesen G.S., Reed J.C., Inoue Т., Yamada M. Investigation of glucocorticoid-induced apoptotic pathway: Processing of caspase-6 but not caspase-3. // Cell. Death Differ. 1998. - Vol. 5. - P. 1034-1041.

216. Mooney S.M., Miller M.W. Expression of Bcl-2, Bax and caspase-3 in the brain of the developing rat. // Dev. Brain Res. 2000. - Vol. 123. - P. 103-117.

217. Motoyama N., Wang F., Roth K.A., Sawa H., Nakayama K., Nakayama K., Negishi I., Senju S., Zhang Q., Fujii S., et al. Massive cell death of immature hematopoietic cells and neurons in Bcl-x-deficient mice. // Science. 1995. - Vol. 267.-P. 1506-1510.

218. Muneoka K., Mikuni M., Ogawa Т., Kitera K., Kamei K., Takigawa M., Takahashi K. Prenatal dexamethasone exposure alters brain monoamine metabolism and adrenocortical response in rat offspring. // Am. J. Physiol. — 1997. Vol. 273. — P. R1669-1675.

219. Namura S., Zhu J., Fink K., Endres M., Srinivasan A., Tomaselli K.J., Yuan J., Moskowitz M.A. activation and cleavage of caspase-3 in apoptosis induced by experimental cerebral ischemia. // J. Neurosci. 1998. — Vol. 18. - P. 3659-3668.

220. Nechushtan A., Smith C.L., Hsu Y.-T., Youle RJ. Conformation of the Вах C-terminus regulates subcellular location and cell death. // EMBO J. 1999. - Vol. 18. -P. 2330-2341.

221. Nechushtan A., Smith C.L., Lamensdorf I., Yoon S.-H., Youle RJ. Bax and Bak coalesce into novel mitochondria-associated clusters during apoptosis. // J. Cell. Biol. -2001.-Vol. 153.-P. 1265-1276.

222. Nicholas A.P., Hokfelt Т., Pieribone V.A. The distribution and significance of CNS adrenoceptors examined with in situ hybridization. // Trends Pharmacol. Sci. -1996. Vol. 17. - P. 245-255.

223. Nicholls D.G., Budd S.L. Mitochondria and neuronal survival. // Physiol. Rev. -2000. Vol. 80. - PP. 315-360.

224. Nicholson D.W. Caspase structure, proteolytic substrates, and function during apoptotic cell death. // Cell. Death Differ. 1999. - Vol. 6. - P. 1028-1042.

225. Norbury C.J., Zhivotovsky B. DNA damage-induced apoptosis. // Oncogene. — 2004. Vol. 23. - P. 2797-2808.

226. Nudel U., Zacut M., Neuman S., Levy Z., Yaffe D. The nucleotide sequence of the rat cytoplasmic beta-actin gene. // Nucleic Acids Res. 1983. - Vol. 11. - P. 17591771.

227. Nutt L.K., Chandra J., Pataer A., Fang В., Roth J.A., Swisher S.G., O'Neil R.G., McConkey D.J. Bax-mediated Ca2+ mobilization promotes cytochrome с release during apoptosis. // J. Biol. Chem. 2002. - Vol. 277. - P. 20301-20308.

228. Obrietan K., van den Pol A.N. GABA neurotransmission in the hypothalamus: developmental reversal from Ca2+ elevating to depressing. // J. Neurosci. 1995. — Vol. 15.-P. 5065-5077.

229. Oltvai Z.N., Milliman C.L., Korsmeyer S.J. Bcl-2 heterodimerizes in vivo with a conserved homolog, Bax, that accelerates programmed cell death. // Cell. — 1993. -Vol. 74.-P. 609-619.

230. Oltvai Z.N., Korsmeyer S.J. Checkpoints of dueling dimers foil death wishes. // Cell. 1994. - Vol. 79. - P. 189-192.

231. Oppenheim R.W. Cell death during development of the nervous system. // Annual. Rev. Neurosci. 1991. - Vol. 14. - P.453-501.

232. Orchinik M., Carroll S.S., Li Y.H., McEwen B.S., Weiland N.G. Heterogeneity of hippocampal GABA(A) receptors: regulation by corticosterone. // J. Neurosci. — 2001.-Vol. 21.-P. 330-339.

233. Osborne N.N., Cazevieille C., CarvalhoA.L., Larsen A.K., DeSantis L. In vivo and in vitro experiments show that betaxolol is a retinal neuroprotective agent. // Brain Res. 1997. - Vol. 751. - P. 113-123.

234. Osborne N.N., DeSantis L., Bae J.H., Ugarte M., Wood J.P., Nash M.S., Chidlow G. Topically applied betaxolol attenuates NMDA-induced toxicity to ganglion cells and the effects of ischaemia to the retina. // Exp. Eye Res. 1999. - Vol. 69. - P. 331-342.

235. Papaioannou A., Dafni U., Alikaridis F., Bolaris S., Stylianopoulou F. Effects of neonatal handling on basal and stress-induced monoamine levels in the male and female rat brain. // Neuroscience. 2002. - Vol. 114. - P 195-206.

236. Parsadanian A.S., Cheng Y„ Keller-Peck C.R., Holtzman D.M., Snider W.D. Bcl-XL is an antiapoptotic regulator for postnatal CNS neurons. // J. Neurosci. 1998. — Vol. 18.-P. 1009-1019.

237. Petros A.M., Olejniczak E.T., Fesik S.W. Structural biology of the Bcl-2 family of proteins. // Biochim. Biophys. Acta. 2004. - Vol. 1644. - PP. 83- 94.

238. Pettmann В., Henderson C.E. Neuronal cell death. // Neuron. 1998. - Vol. 20. -P. 633-647.

239. Pham K., Nacher J., Hof P.R., McEwen B.S. Repeated restraint stress suppresses neurogenesis and induces biphasic PSA-NCAM expression in the adult rat dentate gyrus. // Eur. J. Neurosci. 2003. - Vol. 17. - P. 879-886.

240. Planey S.L., Litwack G. Glucocorticoid-induced apoptosis in lymphocytes. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2000. - Vol. 279. - P. 307-312.

241. Popovik E., Haynes L.W. Survival and mitogenesis of neuroepithelial cells are influenced by noradrenergic but not cholinergic innervation in cultured embryonic rat neopallium. // Brain Res. 2000. - Vol. 853. - P. 227-235.

242. Prabhu S.D., Wang G., Luo J., Gu Y., Ping P., Chandrasekar B. Beta-adrenergic receptor blockade modulates Bcl-XS expression and reduces apoptosis in failing myocardium. //J. Mol. Cell. Cardiol. 2003. - Vol. 35. - P. 483-493.

243. Prunell G.F., Troy C.M. Balancing neuronal death. // J. Neurosci. Res. 2004. -Vol. 78.-P. 1-6.

244. Putcha G.V., Deshmukh M., Johnson E.M. BAX translocation is a critical event in neuronal apoptosis: regulation by neuroprotectants, Bcl-2, and caspases. // J. Neurosci. 1999. - Vol. 19. - P. 7476-7485.

245. Putcha G.V., Harris C.A., Moulder K.L., Easton R.M., Thompson C.B., Johnson E.M. Intrinsic and extrinsic pathway signaling during neuronal apoptosis: lessons from the analysis of mutant mice. // J. Cell Biol. 2002. - Vol. 157. - P. 441-453.

246. Raff M.S., Barres B.A., Burne J.F., Coles H.S., Ishizaki Y., Jacobson M.D. programmed cell death and the control of cell survival: lessons from the nervous system. // Science. 1993. - Vol. 262. - P. 695-700.

247. Raff M. Cell suicide for beginners. // Nature. 1998. - Vol. 396. - P. 119-122.

248. Raina A.K., Hochman A., Ickes H., Zhu X., Ogawa O., Cash A.D., Shimohama S., Perry G., Smith M.A. Apoptotic promoters and inhibitors in Alzheimer's disease: Who wins out? // Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 2003. - Vol. 27. -P. 251-254.

249. Reagan L. P., McEwen B. S. Controversies surrounding glucocorticoid-mediated cell death in the hippocampus. // J. Chem. Neuroanat. 1997. - Vol. 13. - P. 149-167.

250. Reed J.C. Mechanisms of apoptosis. // Am. J. Pathol. 2000. - Vol. 157. - PP. 1415-1430.

251. Reznikov A.G., Nosenko N.D., Tarasenko L.V. Prenatal stress and glucocorticoid effects on the developing gender-related brain. // J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. -1999.-Vol. 69.-P. 109-115.

252. Rinkerberger J.L., Korsmeyer S.J. Errors of homeostasis and deregulated apoptosis. // Cur. Op. Gen. Dev. 1997. - Vol. 7 - P. 589-596.

253. Rong P., Bennie A.M., Ruwan Epa W., Barrett G.L. Nerve Growth Factor determines survival and death of PC 12 cells by regulation of the Bcl-X, Bax, and caspase-3 genes. // J. Neurochem. 1999. - Vol. 72. - P. 2294-2300.

254. Roth K.A., Kuan C., Haydar T.F., D'Sa-Eipper C., Shindler K.S., Zheng T.S., Kuida K., Flavell R.A., Rakic P. Epistatic and independent function of caspase-3 and

255. Bcl-X(L) in development programmed cell death. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -2000. Vol. 97. - P. 466-471.

256. Roth K.A., D Sa C. Apoptosis and brain development. // Ment. Retard. Dev. Disabil. Res. Rev. 2001. - Vol. 7. - P. 261-266.

257. Roy M., Sapolsky R.M. The exacerbation of hippocampal excitotoxicity by glucocorticoids is not mediated by apoptosis. // Neuroendocrinology. — 2003. — Vol. 77.-P. 24-31.

258. Ruiz G., Wheeler L., WoldeMussie E., Schwartz M. Time course of pre or post treatment by brimonidine on neuroprotection in rat optic nerve injury model abstract. // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2000. - Vol. 41. - P. S830.

259. Saito S., Hiroi Y., Zou Y., Aikawa R., Toko H., Shibasaki F., Yazaki Y., Nagai R., Komuro I. Beta-adrenergic pathway induces apoptosis through calcineurin activation in cardiac myocytes. // J. Biol. Chem. 2000. - Vol. 275. - P. 34528-34533.

260. Sanchez M.M., Young L.J., Plotsky P.M., Insel T.R. Distribution of corticosteroid receptors in the rhesus brain: relative absence of glucocorticoid receptors in the hippocampal formation. // J. Neurosci. 2000. - Vol. 20. - P. 4657 - 4668.

261. Sapolsky R.M., Romero L.M., Munck A.U. How do glucocorticoids influence stress responses? Integrating permissive, suppressive, stimulatory, and preparative actions. // Endocr. Rev. 2000. - Vol. 21. - P. 55-89.

262. Sasson R., Winder N., Kees S., Amsterdam A. Induction of apoptosis in granulosa cells by TNF alpha and its attenuation by glucocorticoids involve modulation of Bcl-2. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2002. - Vol. 294. - P. 51-59.

263. Sastry P.S., Rao K.S. Apoptosis and the nervous system. // J. Neurochem. 2000. -Vol. 74.-P. 1-20.

264. Savino W., Dardenne M. Neuroendocrine control of thymus physiology. // Endocr. Rev. 2000. - Vol. 21. - P. 412-443.

265. Schaaf M.J.M., Cidlowski J.A. Molecular mechanisms of glucocorticoid action and resistance. // J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2003. - Vol. 83. - P. 37-48.

266. Scheinin M., Lomasney J.W., Hayden-Hixson D.M., Schambra U.B., Caron M.G., Lefkowitz R.J., Fremeau R.T.Jr. Distribution of alpha 2-adrenergic receptor subtype gene expression in rat brain. // Brain Res. Mol. Brain Res. 1994. - Vol. 21. - P. 133-149.

267. Schinzel A., Kaufmann Т., Borner C. Bcl-2 family members: intracellular targeting, membrane-insertion, and changes in subcellular localization. // Biochim. Biophys. Acta. 2004. - Vol. 1644. - P. 95- 105.

268. Schmidt M., Lugering N., Lugering A., Pauels H.G., Schulze-Osthoff K., Domschke W., Kucharzik T. Role of the CD95/CD95 ligand system in glucocorticoid-induced monocyte apoptosis. // J. Immunol. 2001. - Vol. 166. - P. 13444-1351.

269. Schmidt S., Rainer J., Ploner C., Presul E., Riml S., Kofler R. Glucocorticoid-induced apoptosis and glucocorticoid resistance: molecular mechanisms and clinical relevance. // Cell Death Differ. 2004. - Vol. 11. - P. S45-S55.

270. Schwartzman R.A., Cidlowski J.A. Apoptosis: The biochemistry and molecular biology of programmed cell death. // Endocr. Rev. 1993. - Vol. 14. - P. 133-151.

271. Scorrano L., Korsmeyer S.J. Mechanisms of cytochrome с release by proapoptotic Bcl-2 family members. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003. - Vol. 304. - P. 437-444.

272. Segal R.A. Selectivity in neurotrophin signaling: theme and variations. // Annu. Rev. Neurosci. 2003. - Vol. 26. - P. 299-330.

273. Sendtner M., Pei G., Beck M., Schweizer U., Wiese S. Developmental motoneuron cell death and neurotrophic factors. // Cell Tiss. Res. 2000. - Vol. 301. -P. 71-84.

274. Sharpe J.C., Arnoult D., Youle R.J. Control of mitochondrial permeability by Bcl-2 family members. // Biochim. Biophy. Acta. 2004. - Vol. 1644. - P. 107-113.

275. Shi В., Rabin S.J., Brandoli C., Mocchetti I. Dexamethasone induces hypertrophy of developing medial septum cholinergic neurons: potential role of Nerve Growth Factor. // J. Neurosci. 1998. - Vol. 18. - P. 9326-9334.

276. Shi В., Triebe D., Kajiji S., Iwata K.K., Bruskin A. and Mahajna J. Identification and characterization of baxepsilon, a novel bax variant missing the BH2 and the transmembrane domains. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999. - Vol. 254. -P. 779-785.

277. Shi Y. Mechanisms of caspase activation and inhibition during apoptosis. // Mol. Cell 2002. - Vol. 9. - P. 459-470.

278. Shindler K.S., Latham C.B., Roth K.A. Bax deficiency prevents the increased cell death of immature neurons in Bcl-X-deficient mice. // J. Neurosci. 1997. - Vol. 17. -P. 3112-3119.

279. Shindler K.S., Yunker A.M., Cahn R., Zha J., Korsmeyer S.J., Roth K.A. Trophic support promotes survival of bcl-x-deficient telencephalic cells in vitro. // Cell Death Differ. 1998.-Vol. 5.-P. 901-910.

280. Sircar R. Developmental maturation of the N-methyl-D-aspartic acid receptor channel complex in postnatal rat brain. // Int. J. Dev. Neurosci. 2000. - Vol. 18. - P. 121-131.

281. Slotkin T.A., McCook E.C., Ritchie J.C., Carroll B.J., Seidler F.J. Serotonin transporter expression in rat brain regions and blood platelets: aging and glucocorticoid effects. // Biol. Psychiatry. 1997. - Vol. 41. - P. 172-183.

282. Slotkin T.A., Zhang J., McCook E.C., Seidler F.J. Glucocorticoid administration alters nuclear transcription factors in fetal rat brain: implications for the use of antenatal steroids. // Dev. Brain Res. 1998. - Vol. 111. - P. 11-24.

283. Smets, L.A., Salomons G., van den Berg J. Glucocorticoid induced apoptosis in leukemia. // Adv. Exp. Med. Biol. 1999. - Vol. 457. - P. 607-614.

284. Sousa N., Paula-Barbosa M.M., Almeida O.F. Ligand and subfield specificity of corticoid-induced neuronal loss in the rat hippocampal formation. // Neuroscience. — 1999. Vol. 89. - P. 1079-1087.

285. Steinfelder H.J., Quentin I., Ritz V. A fast and sensitive technique to study the kinetics and the concentration dependencies of DNA fragmentation during drug-induced apoptosis. // J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 2000. - Vol. 43. - P. 79-84.

286. Strasser A., O'Connor L., Dixit V.M. Apoptosis signaling. // Annu. Rev. Biochem. 2000. - Vol. 69. - P. 217-245.

287. Sun W., Gould T.W., Vinsant S., Prevette D., Oppenheim R.W. Neuromuscular development after the prevention of naturally occurring neuronal death by Bax deletion. // J. Neurosci. 2003. - Vol. 23. - P. 7298-7310.

288. Suzuki Y., Farbman A.I. Tumor necrosis factor-alpha-induced apoptosis in olfactory epithelium in vitro: possible roles of caspase-1 (ICE), caspase-2 (ICH-1), and caspase-3 (CPP32). И Exp. Neurol. 2000. - Vol. 165 - P. 35-45.

289. Talke P., Bickler P.E. Effects of dexmedetomidine on hypoxia-evoked glutamate release and glutamate receptor activity in hippocampal slices. // Anesthesiology. -1996.-Vol. 85.-P. 551-557.

290. Thomaidou D., Mione M.C., Cavanagh J.F., Parnavelas J.G. Apoptosis and its relation to the cell cycle in the developing cerebral cortex. // J. Neurosci. 1997. -Vol. 17.-P. 1075-1085.

291. Thornberry N.A., Lazebnik Y. Caspases: enemies within. // Science. 1998. -Vol. 281.-P. 1312-1316.

292. Tsuruta F., Masuyama N., Gotoh Y. The phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)-Akt pathway suppresses Bax translocation to mitochondria. // J. Biol. Chem. 2002. — Vol. 277.-P. 14040-14047.

293. Vekrellis K., McCarthy M.J., Watson A., Whitfield J., Rubin L.L., Ham J. Bax promotes neuronal cell death and is downregulated during the development of the nervous system. // Development. 1997. - Vol. 124. - P. 1239-1249.

294. Verhagen A.M., Coulson E.J., Vaux D.L. Inhibitor of apoptosis proteins and then-relatives: IAPs and other BIRPs. // Genome Biol. 2001. - Vol. 2. - P. 1-10.

295. Vidal-Sanz M., Lafuente M.P., Mayor S., Miralles De Imperial J., Villegas-Perez M.P. Retinal ganglion cell death induced by retinal ischemia: neuroprotective effects of two alpha-2 agonists. // Surv. Ophthalmol. 2001a. - Vol. 45. - P. S261-S267.

296. Viegas L.R., Vicent G.P., Baranao J.L., Beato M., Pecci A. Steroid hormones induce Bcl-X gene expression through direct activation of distal promoter P4. // J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279. - P. 9831-9839.

297. Wang R.-X., Limbird LJE., Distribution of mRNA encoding three alpha 2-adrenergic receptor subtypes in the developing mouse embryo suggests a role for the alpha 2A subtype in apoptosis. // Mol. Pharmacol. 1997. - Vol. 52. - P. 1071-1080.

298. Wang K.K.W. Calpain and caspase: can you tell the difference. // Trends Neurosci. 2000. - Vol. 23. - P. 20-26.

299. Wang X. The expanding role of mitochondria in apoptosis. // Genes Dev. — 2001. -Vol. 15.-P. 2922-2933.

300. Wang, Z., Malone, M.H., He, H., McCoil, K.S., Distelhorst, C.W. Microarray uncovers the induction of the proapoptotic ВНЗ-only protein Bim in multiple modelsof glucocorticoid-induced apoptosis. // J. Biol. Chem. 2003. - Vol. 278. - P. 2386123867.

301. Watanabe Y., Gould E., McEwen B.S. Stress induces atrophy of apical dendrites of hippocampal CA3 pyramidal neurons. // Brain Res. 1992. - Vol. 588. — P. 341345.

302. Welberg L.A.M., Seckl J.R. Prenatal stress, glucocorticoids and the programming of the brain. // J. Neuroendocrinol. 2001. - Vol. 13.-P. 113-128.

303. Wellman C.L. Dendritic reorganization in pyramidal neurons in medial prefrontal cortex after chronic corticosterone administration. // J. Neurobiol. 2001. - Vol. 49. -P. 245-253.

304. Wen R., Cheng Т., Li Y., Cao W., Steinberg R.H. Alpha 2-adrenergic agonists induce basic fibroblast growth factor expression in photoreceptors in vivo and ameliorate light damage. // J. Neurosci. 1996. - Vol. 16. - P. 5986-5992.

305. Wheeler L.A., Gil D.W., WoldeMussie E. Role of alpha-2 adrenergic receptors in neuroprotection and glaucoma. // Surv. Ophthalmol. 2001. - Vol. 45. - P. S290-S294.

306. Wheeler L.A., Woldemussie E. Alpha-2 adrenergic receptor agonists are neuroprotective in experimental models of glaucoma. // Eur. J. Ophthalmol. 2001. -Vol. 11.-P. S30-S35.

307. Wheeler L., WoldeMussie E., Lai R. Role of alpha-2 agonists in neuroprotection. // Surv. Ophthalmol. 2003. - Vol. 48. - P. S47-S51.

308. White F.A., Keller-Peck C.R., Knudson C.M., Korsmeyer S.J., Snider W.D. Widespread elimination of naturally occurring neuronal death in Bax-deficient mice. // J. Neurosci. 1998. - Vol. 18. - P. 1428-1439.

309. White L.D., Barone S.Jr. Qualitative and quantitative estimates of apoptosis from birth to senescence in the rat brain. // Cell Death Diff. 2001. - Vol. 8. - P. 345-356.

310. Whitelaw A., Thoresen M. Antenatal steroids and the developing brain. // Arch. Dis. Child. Fetal Neonatal Ed. -2000. Vol. 83. - P. 154-157.

311. Willems E.W., Valdivia L.F., Villalon C.M., Saxena P.R. Possible role of alpha-adrenoceptor subtypes in acute migraine therapy. // Cephalalgia. 2003. - Vol. 23. -P. 245-257.

312. Willis S., Day C.L., Hinds M.G., Huang D.C.S. The Bcl-2-regulated apoptotic pathway. // J. Cell Sci. 2003. - Vol. 116. - P. 4053-4056.

313. Wood J.P., DeSantis L., Chao H.M., Osborne N.N. Topically applied betaxolol attenuates ischaemia-induced effects to the rat retina and stimulates BDNF mRNA. // Exp. Eye Res. 2001. - Vol. 72. - P. 79-86.

314. Wyllie A.H. Glucocorticoid-induced thymocyte apoptosis is associated with endogenous endonuclease activation. // Nature. 1980. - Vol. 284. - PP. 255-256.

315. Wyllie A.H., Kerr J.F.R., Currie A.R. Cell death: the significance of apoptosis. // Int. Rev. Cytol. 1980. - Vol. 68. - P. 251-306.

316. Wyllie A. An endonuclease at last. // Nature. 1998. - Vol. 391. - P. 20-21.

317. Xue D., Shaham S., Horvitz H.R. The Caenorhabditis elegans cell-death protein CED-3 is a cysteine protease with substrate specificities similar to those of the human CPP32 protease. // Gen. Dev. 1996. - Vol. 10. - P. 1073-1083.

318. Yates B.J., Stocker S.D. Integration of somatic and visceral inputs by the brainstem: functional considerations. // Exp. Brain Res. 1998. — Vol. 119. — P. 269275.

319. Yin X.M., Oltvai Z.N., Korsmeyer S.J. BH1 and BH2 domains of Bcl-2 are required for inhibition of apoptosis and heterodimerization with Bax. // Nature. -1994. Vol .369. - P. 321-323.

320. Yuan J., Yankner B.A. Apoptosis and nervous system. // Nature. 2000. -Vol.407.-P. 802-809.

321. Yuan S.Z., Runold M., Hagberg H., Bona E., Lagercrantz H. Hypoxic-ischaemic brain damage in immature rats: effects of adrenoceptor modulation. // Eur. J. Paediatr. Neurol. 2001. - Vol. 5. - P. 29-35.

322. Yudt M.R., Cidlowski J.A. The glucocorticoid receptor: coding a diversity of proteins and responses through a single gene. // Mol. Endocrinol. — 2002. — Vol. 16. — P. 1719-1726.

323. Zaidi A.U., D'Sa-Eipper С., Brenner J., Kuida K., Zheng T.S., Flavell R.A., Rakic P., Roth K.A. BcI-XL caspase-9 interactions in the developing nervous system: evidence for multiple death pathways. // J. Neurosci. - 2001. - Vol. 21. - P. 169-175.

324. Zha H., Aime-Sempe C., Sato Т., Reed J.C. Proapoptotic protein Bax heterodimerizes with Bcl-2 and homodimerizes with Bax via a novel domain (BH3) distinct from BH1 and BH2. //J. Biol. Chem. 1996. - Vol. 271. - P. 7440-7444.

325. Zhang Y. Clonidine preconditioning decreases infarct size and improves neurological outcome from transient forebrain ischemia in the rat. // Neuroscience. — 2004. Vol. 125. - P. 625-631.

326. Zheng T.S., Hunot S., Kuida K., Flavell R.A. Caspase knockouts: matters of life and death. // Cell Death Differ. 1999. - Vol. 6. - P. 1043-1053.

327. Zhou M., Demo S.D., McClure T.N., Crea R., Bitler C.M. A novel splice variant of the celldeath-promoting protein BAX. // J. Biol. Chem. 1998. - Vol. 273. - P. 11930-11936.

328. Zhou H., Li X.-M., Meinkoth J., Pittman R.N. Akt regulates cell survival and apoptosis at a postmitochondrial level. // J. Cell Biol. 2000. - Vol. 151. - P. 483494.

329. Zimmermann К. C., Bonzon C., Green D. R. The machinery of programmed cell death. // Pharm. Ther. 2001. - Vol. 92. - P. 57 - 70.

330. Zou H., Henzel W.J., Liu X., Lutschg A., Wang X. Apaf-1, a human protein homologous to C. elegans CED-4, participates in cytochrome c-dependent activation of caspase-3. // Cell. 1997. - Vol. 90. - P. 405-413.

Информация о работе

Баннова, Анита Васильевна
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2005
ВАК 03.00.13

Диссертация

Экспрессия генов апоптоза в развивающемся мозге крыс - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Экспрессия генов апоптоза в развивающемся мозге крыс ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Экспрессия генов апоптоза в развивающемся мозге крыс"

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Баннова, Анита Васильевна

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экспрессия генов апоптоза в развивающемся мозге крыс"

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Баннова, Анита Васильевна

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Баннова, Анита Васильевна, Новосибирск

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Экспрессия генов апоптоза в развивающемся мозге крыс
ВАК РФ 03.00.13, Физиология