Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экспериментальные подходы к разработке противотуберкулезной вакцины на основе дендритных клеток

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Петровская, Светлана Николаевна

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Введение.

2. Типы современных противотуберкулезных вакцин, их преимущества 14 и недостатки.

2.1. Вакцина BCG.

2.2. Цельноклеточные вакцины.

2.3. Субъединичные вакцины.

2.4. ДНК-вакцины.

3. Дендритные клетки и их роль в иммунитете против туберкулёза.

3.1. Фагоцитоз и размножение М. tuberculosis в дендритных клетках.

3.2. Распознавание М. tuberculosis Toll-like рецепторами.

3.3. Влияние М. tuberculosis на созревание дендритных клеток.

3.4. Роль ДК в индукции адаптивного иммунного ответа на 28 М. tuberculosis.

3.5. Изучение роли ДК при туберкулёзе in vivo.

4. Разработка новых противотуберкулёзных вакцин на основе ДК.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Выращивание дендритных клеток in vitro.

2. Способность дендритных клеток, выращенных in vitro, 51 стимулировать пролиферативный ответ Т-клеток.

3. Сравнение функциональной активности дендритных клеток, 53 выращенных в присутствии эмбриональной телячьей сыворотки

ЭТС) и мышиной сыворотки (МС), in vivo.

4. Сравнительная фенотипическая характеристика дендритных клеток, 56 выращенных в присутствии мышиной (МС) и эмбриональной телячьей (ЭТС) сыворотки.

5. Продукция цитокинов дендритными клетками, выращенными в 64 присутствии мышиной сыворотки (МС) и эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС).

6. Протекция против туберкулёзной инфекции при вакцинации ДК. 66 ОБСУЖДЕНИЕ 74 ВЫВОДЫ 80 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АПК - антигенпрезентирующая клетка

БСА - бычий сывороточный альбумин

ВИЧ - вирус иммунодефицита человека

ДК - дендритные клетки

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИЛ - интерлейкин

ИФН-у - интерферон гамма

КИ - клеточный иммунитет

КОЕ - колониеобразующая единица

ЛАМ - липоарабидоманнан

ЛПС - липополисахарид

МС - мышиная сыворотка мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота

ЭДТА - этилендиаминтетраацетат

ЭТС - эмбриональная телячья сыворотка

ABTS - 2,2'-азино-бис(3-этилбензотиазолин-6-сульфоновая кислота) диаммония соль (2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt)

Ag - антиген (antigen)

APC - аллофикоцианин (allophycocyanin)

BCG - бацилла Кальметта-Герена (bacillus Calmette-Guerin)

CCL - хемокин (chemokine ligand)

CCR - рецептор хемокинов (chemokine receptor)

CD - дифференцировочный антиген лейкоцитов (cluster of differentiation) cpm - количество импульсов в минуту (counts per minute)

ELISA - иммуноферментный анализ (enzyme-linked immunosorbent assay)

ELISPOT - ферментный иммуноспот (enzyme-linked immunospot)

ESAT - ранняя секретируемая антигенная мишень (early secreted antigenic target)

FCS - эмбриональная телячья сыворотка (fetal calf serum)

FITC - флуоресцеин-изотиоцианат (fluorescein isithiocyanate)

GM-CSF - колониестимулирующий фактор гранулоцитов и макрофагов granulocyte macrophage colony stimulating factor)

HEPES - М-2-гидроксиэтилпиперазин-Ы'-2-этансульфоновая кислота (N-2-hydroxyethylpiperazine-N-2-ethanesulphonic acid)

ICAM - межклеточная молекула адгезии (intercellular adhesion molecule) Ig - иммуноглобулин (immunoglobulin)

LAMP - ассоциированный с лизосомой мембранный белок (lysosome-associated membrane protein)

MCP - белок-хемоаттрактант моноцитов (monocyte chemoattractant protein) МНС - главный комплекс гистосовместимости (major histocompatibility complex)

MIP - воспалительный белок макрофагов (macrophage inflammatory protein) NK - естественные киллеры (natural killer) РЕ - фикоэритрин (phycoerythrin)

PerCP - перидинин белок хлорофилла (peridinin chlorophyll protein) RD - геномный участок делеции (region of deletion)

Rpf - фактор, способствующий "o>KHBneHHK)"(resuscitation promoting factor)

RPMI - среда для культивирования эукариотических клеток (Rockwill Park Medical Institute - создатели продукта)

PBS - фосфатный буферный раствор (phosphate buffered saline) PPD - очищенная белковая фракция туберкулина (purified protein derivative) ТАА - опухоле-ассоциированный антиген (tumor associated antigen) TCR - Т-клеточный рецептор (Т cell receptor)

TGF-P - трансформирующий фактор роста - бета (transforming growth factor -beta)

TLR - Toll- like рецептор (Toll-like receptor) Thl, Th2 - Т-хелперы I и II типа (T-helper)

TNF-a - фактор некроза опухолей - альфа (tumor necrosis factor - alpha)

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экспериментальные подходы к разработке противотуберкулезной вакцины на основе дендритных клеток"

Общая характеристика работы.

Данная работа посвящена изучению подходов к разработке вакцины на основе дендритных клеток на модели летальной туберкулёзной инфекции у мышей.

Актуальность проблемы.

По данным ВОЗ при исследовании причин гибели взрослого населения планеты от различных инфекционных болезней, смертность от туберкулеза составляет около 30% [Bloom В. R. et al., 1992]. Это определяет необходимость совершенствования мер борьбы и профилактики туберкулеза. К основным средствам борьбы с распространением туберкулеза относятся, прежде всего, активное обнаружение и эффективная лекарственная терапия больных, а также профилактическая вакцинация.

Несмотря на многочисленные попытки создания новых эффективных противотуберкулезных вакцин, единственной разрешенной к применению у человека остается вакцина BCG. Известно, что эта вакцина достаточно эффективна в детском возрасте. Вакцинация детей BCG защищает их от милиарного туберкулёза, препятствует диссеминации возбудителя инфекции и возникновению туберкулёзного менингита [Rodrigues L. С. et al., 1993; Colditz G. A. et al., 1994]. Однако данные по эффективности BCG при лёгочной форме туберкулёза у взрослых имеют весьма противоречивый характер. При клинических испытаниях в различных регионах мира было выявлено, что эффективность вакцины BCG колеблется от 0 до 80% [Sutherland I. et al., 1987; Fine P. E., 1995]. Все это свидетельствует о том, что одной из важнейших задач по борьбе с туберкулезом является создание новой более эффективной вакцины. Одним из подходов к вакцинации, которому сейчас уделяется серьезное внимание, является повышение эффективности уже существующей вакцины BCG с использованием стратегии первичной вакцинации и вторичных ревакцинаций [Feng С. G. et al., 2001; Ferraz J. С. et al., 2004]. Другой подход -это генетическая модификация вакцины BCG для повышения ее иммуногенности. Существует целый ряд данных о том, что вставка некоторых генов с одновременным выключением других генов может значительно усилить протективные свойства вакцины BCG [Conradt P. et al., 1999; Horwitz М. A. et al., 2000; Grode L. et al., 2005]. Этот подход, тем не менее, может дать неоднозначные результаты, если иметь ввиду безопасность людей с иммунодефицитами, в частности заражённых ВИЧ, при применении таких живых вакцин [Reynes J. et al., 1989; Elhay M. J. et al., 1997]. Весьма сомнительным этот подход также выглядит с точки зрения стабильности модифицированных штаммов BCG после генетических манипуляций.

Некоторые очищенные или рекомбинантные белки из М. tuberculosis по отдельности или в различных сочетаниях также индуцируют протективный иммунитет против туберкулёза в экспериментальных моделях [Yeremeev V. V., et al., 2003; Doherty Т. M. et al., 2004; Williams A. et al., 2005], но для генерации сильного иммунного ответа и протекции необходимы мощные адъюванты. Важно отметить, что единственным разрешённым для применения у человека адъювантом является гидроокись алюминия, индуцирующая преимущественно иммунный ответ Т-хелперов 2 типа, которые не участвуют в протективном иммунном ответе при туберкулёзе [Andersen Р., 1997]. Другой мощный адъювант — монофосфорил липид А, который активирует иммунный ответ Т-хелперов 1 типа, в настоящее время лишь рассматривается как потенциальный кандидат для применения у человека [Elhay М. J. et al., 1997].

Inaba, Steinman и другие [Inaba К. et al., 1990, 1993; Steinman R. M., 1991] показали, что инъекция дендритных клеток (ДК), нагруженных разными антигенами, способна индуцировать Т-клеточный ответ без добавления дополнительных адъювантов. Показано также, что ДК способны фагоцитировать аттенуированные и вирулентные микобактерии, что приводит к индукции антимикобактериального клеточного иммунитета [Inaba К. et al., 1993; Henderson R. A. et al., 1997; Demangel C. et al., 1999, 2000]. Важно, что при этом возникает ответ Т-клеток с фенотипом CD4+, который, как считается, является важным элементом резистентности к туберкулёзу [Flynn J. L. et al., 2001; North R. et al., 2004]. В лёгких незрелые ДК, располагающиеся рядом с воздушными путями и дистальными альвеолами, очень важны для запуска клеточного иммунного ответа против лёгочных патогенов [Cella М. et al., 1997; Banchereau J. et al., 1998]. Учитывая центральную роль ДК как профессиональных и сверхэффективных антиген-презентирующих клеток (АПК), представляется весьма перспективным использование этих клеток в качестве естественного, замещающего адъювант, компонента противотуберкулёзных вакцин. Кроме того, изучение ДК в экспериментальных системах крайне важно для понимания фундаментальных механизмов протективного иммунитета при туберкулёзе.

Цель исследования.

Целью настоящего исследования стало изучение возможности использования дендритных клеток, выращенных in vitro и нагруженных микобактериальными антигенами, для индукции протективного противотуберкулезного иммунитета у мышей.

Задачи исследования.

В настоящей работе мы ставили перед собой следующие задачи:

1) отработать метод получения ДК in vitro из костно-мозговых предшественников;

2) охарактеризовать фенотип полученных in vitro ДК по экспрессии поверхностных маркеров и продукции цитокинов;

3) исследовать функциональную активность полученных in vitro ДК, а именно - изучить способность ДК индуцировать ответ Т-клеток на сложную смесь микобактериальных антигенов (соникат М. tuberculosis H37Rv) in vitro и in vivo;

4) охарактеризовать различные показатели иммунного ответа, индуцированного ДК у мышей in vitro и in vivo;

5) определить оптимальную схему вакцинации и дозы нагруженных антигеном ДК для индукции максимальной защиты против последующего заражения М. tuberculosis в модели на мышах (исследовать динамику гибели мышей и бактериальную нагрузку в органах зараженных животных).

Научная новизна и практическая значимость.

• Усовершенствованы и оптимизированы ранее разработанные методы выращивания дендритных клеток in vitro из костно-мозговых предшественников и обработки ДК антигенами вирулентных микобактерий туберкулёза.

• Впервые изучена способность ДК индуцировать первичный и вторичный иммунные ответы Т-клеток на сложную смесь микобактериальных антигенов (соникат М. tuberculosis H37Rv) in vitro и in vivo и оценена специфичность этих ответов.

• Впервые выявлены фенотипические и функциональные различия между дендритными клетками, выращенными на сингенной (мышиной) и ксеногенной (эмбриональной телячьей) сыворотках, а именно различия в степени зрелости этих ДК и способности индуцировать Т-клеточный ответ.

• Впервые показано, что дендритные клетки, выращенные на сингенной мышиной сыворотке, при адоптивном переносе активируют Т-клетки, специфически отвечающие на микобактерии. Дендритные клетки, выращенные на ксеногенной сыворотке, индуцируют неспецифический ответ Т-клеток.

• Разработана новая схема вакцинации выращенными in vitro дендритными клетками; оптимизированы сроки, дозы и пути введения вакцины.

• Впервые показана способность дендритных клеток, выращенных на мышиной сыворотке, вызывать значительную протекцию против последующего заражения туберкулёзом (снижение числа КОЕ, увеличение продолжительности жизни мышей).

• Впервые обнаружено, что вакцинация выращенными на мышиной сыворотке дендритными клетками приводит к значительному накоплению ИФН-у-продуцирующих клеток в органах животных.

Результаты исследования возможности разработки вакцины против туберкулёза на основе дендритных клеток в экспериментальных системах свидетельствуют о том, что выращенные in vitro дендритные клетки в перспективе можно использовать в качестве естественных адъювантов.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Введение.

После попадания микобактерий в организм хозяина через респираторный тракт возможны четыре варианта развития событий: 1) первичный ответ может убить все поступившие микобактерии, и туберкулез никогда не разовьется;

2) микобактерии могут начать размножаться, и у пациента проявятся клинические признаки заболевания, известного как первичный туберкулез;

3) бациллы могут остаться в "спящем" состоянии, и такая латентная инфекция выявляется только по кожному тесту на туберкулин; 4) спящие микобактерии могут возобновить размножение, результатом чего будет клиническое проявление так называемого реактивационного туберкулеза [Dannenberg А. М. etal., 1982, 1994].

Клеточный иммунитет (КИ) организма-хозяина определяет развитие инфекции. При адекватном КИ развитие инфекции может быть ограничено вскоре после попадания микобактерий в легкие. Если КИ не оптимален, макрофаги с поглощенными Mycobacterium tuberculosis могут выходить из гранулемы и распространяться по внутрилегочным лимфатическим и кровеносным сосудам, результатом чего может быть быстрая диссеминация. При не сбалансированном КИ иммунная система организма-хозяина постоянно борется с размножающимися микобактериями, избыточным и несвоевременным воспалением, что может сопровождаться разрушением легочной ткани и дальнейшим распространением микроорганизмов через лимфу и кровь.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Петровская, Светлана Николаевна

выводы

1. Показано, что ДК, выращенные в среде, содержащей эмбриональную телячью сыворотку (ДК-ЭТС) и GM-CSF (стандартная процедура), способны индуцировать Т-клеточный пролиферативный ответ in vitro и in vivo.

2. Иммунный ответ, вызванный ДК-ЭТС in vivo, не является антиген-специфическим, тогда как ДК, выращенные в присутствии мышиной сыворотки (ДК-МС), индуцируют высокоспецифичный ответ Т-клеток на микобактериальные антигены in vivo.

3. При оценке динамики иммунного ответа показано, что антиген-специфический ответ, вызванный однократным введением ДК-МС, нагруженных антигеном, сохранялся по крайней мере в течение 3 недель после подкожной иммунизации.

4. Дендритные клетки, выращенные в присутствии мышиной сыворотки, обладают фенотипом незрелых ДК, и лишь небольшой процент этих клеток экспрессирует молекулы CD11с и МНС II класса. Такие клетки не способны активировать Т-клеточный ответ in vitro.

5. При проведении сравнительного анализа ДК-ЭТС и ДК-МС показано, что в популяции ДК-ЭТС доля CDllc+ МНС П+ клеток была выше, чем в популяции ДК-МС, при этом культура ДК-ЭТС содержала больше нейтрофилов. В присутствии антигена число зрелых ДК в обеих популяциях увеличивалось. Кроме того, ДК-ЭТС продуцировали больше TNF-a, ИЛ-12, ИЛ-6, ИЛ-10.

6. Отработана оптимальная схема вакцинации мышей ДК. Показано, что эффективный протективный иммунный ответ против экспериментальной туберкулёзной инфекции развивался в результате трехкратного подкожного введения ДК.

7. Вакцинация мышей ДК-МС, нагруженными антигеном, приводила к увеличению числа клеток, продуцирующих ИФН-у, к снижению бактериальной нагрузки в лёгких и селезенке заражённых животных и к увеличению среднего времени их выживания после заражения.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Петровская, Светлана Николаевна, Москва

1. Albert M. L., Sauter В., Bhardwaj N. Dendritic cells acquire antigen from apoptotic cells and induce class I-restricted CTLs. Nature. 1998, v. 392, p. 8689.

2. Andersen P. Host responses and antigens involved in protective immunity to Mycobacterium tuberculosis. Scand. J. Immunol. 1997, v. 45, p. 115-131.

3. Apt A., Avdienko V., Nikonenko В. V., Moroz A. M., Skamene E. Distinct H-2 complex control of mortality, and immune responses to tuberculosis infection in virgin and BCG-vaccinated mice. Clin. Exp. Immunol. 1993, v. 94, p. 322-329.

4. Attanasio R., Pehler K., Mcclure H. M. Immunogenicity and safety of Mycobacterium tuberculosis culture filtrate proteins in non-human primates. Clin. Exp. Immunol. 2000, v. 119, p. 84-91.

5. Baldwin S. L., D'Souza C. D., Orme I. M., Liu M. A., Huygen K., Denis O., Tang A., Zhu L., Montgomery D., Ulmer J. B. Immunogenicity and protective efficacy of DNA vaccines encoding secreted and non-secreted forms of

6. Mycobacterium tuberculosis Ag85A. Tubercle Lung Dis. 1999, v. 79, p. 251259.

7. Banchereau J., Briere F., Caux C., Davoust J., Lebecque S., Yiu Y. J., Pulendran В., Palucka K. Immunobiology of dendritic cells. Annu. Rev. Immunol. 2000, v. 18, p. 767-811.

8. Banchereau J., Palucka A. K. Dendritic cells as therapeutic vaccines against cancer. Nat. Rev. Immunol. 2005, v. 5, p. 296-306.

9. Banchereau J., Steinman R. Dendritic cells and the control of immunity. Nature. 1998, v. 392, p. 245-252.

10. Barnes P. F., Fong S. J., Brennan P. J., Twomey P. E., Mazumder A., Modlin R. L. Local production of tumour necrosis factor and IFN-y in tuberculosis pleuritis. J. Immunol. 1990, v. 145, p. 149-152.

11. Barnes P. F., Mistry S. D., Cooper C. L., Primez C., Rea Т. H., Modlin R. L. Compartmentalization of a CD4+ T lymphocyte subpopulation in tuberculosis pleuritis. J. Immunol. 1989, v. 142, p. 1114-1119.

12. Bennouna S., Bliss S. K., Curiel T. J., Denkers E. Y. Cross-talk in the innate immune system: neutrophils instruct recruitment and activation of dendritic cells during microbial infection. J. Immunol. 2003, v. 171, p. 6052-6058.

13. Bennouna S., Denkers E. Y. Microbial antigen triggers rapid mobilization to the surface of mouse neutrophils transforming them into inducers of high-level dendritic cell TNF-a production. J. Immunol. 2005, v. 174, p. 4845-4851.

14. Bhatt K., Hickman S. P., Salgame P. A new approach to modeling early lung immunity in murine tuberculosis. J. Immunol. 2004, v. 172, p. 2748-2751.

15. Bloom B. R , Murray C. J . Tuberculosis: commentary on a reemergent killer. Science. 1992, v. 257, p. 1055-1064.

16. Bodnar К. A., Serbina N. V., Flynn J. A. Fate of mycobacterium tuberculosis within murine dendritic cells. Infect. Immun. 2001, v. 69, p. 800-809.

17. Boom W. H. y8 T cells and Mycobacterium tuberculosis. Microbes Infect. 1999, v. l,p. 187-195.

18. Boom W. H., Canaday D. H., Fulton S. A., Gehring A. J., Rojas R. E., Torres M. Human immunity to M. tuberculosis'. T cell subsets and antigen processing. Tuberculosis. 2003, v. 83, p. 98-106.

19. Brandt L., Elhay M., Rosenkrands I., Lindblad E. В., Andersen P. ESAT-6 subunit vaccination against Mycobacterium tuberculosis. Infect. Immun. 2000, v. 68, p. 791-795.

20. Calmette A., Guerin C., Negre L., Bocquet A. Sur la vaccination preventive des enfants nouveau-nes contre la tuberculose par le BCG. Ann. Inst. Pasteur. 1927, v. 3, p. 201.

21. Caragol I., Raspall M., Fieschi C., Feinberg J., Larrosa M. N., Hernandez M., Figueras C., Bertran J.-M., Casanova J.-L., Espanol T. Clinical tuberculosis in 2of 3 siblings with interleukin-12 pi deficiency. Clin Infect. Dis. 2003, v. 37, p. 302-306.

22. Cella M., Sallusto F., Lanzavecchia A. Origin, maturation and antigen presenting function of dendritic cells. Curr. Opin. Immunol. 1997, v. 9, p. 1016.

23. Chen С. H., Wang T. L., Hung C. F., Yang Y., Young R. A., Pardoll D. M., Wu Т. C. Enchancement of DNA vaccines potency by linkage of antigen gene to an HSP70 gene. Cancer Res. 2000, v. 60, p. 1035-1042.

24. Colditz G. A., Brewer T. F., Berkey C. S., Wilson M. E., Burdick E., Fineberg H. V., Mosteller F. Efficacy of BCG vaccine in the prevention of tuberculosis. Meta-analysis of the published literature. JAMA. 1994, v. 271, p. 698-702.

25. Conradt P., Hess J., Kaufmann S. H. E. Cytolytic T cell responses to human dendritic cells and macrophages infected with Mycobacterium bovis BCG and recombinant BCG secreting listeriolysin. Microbes Infect. 1999, v. 1, p. 753764.

26. Cranmer L. D., Trevor К. Т., Hersh E. M. Clinical applications of dendritic cell vaccination in the treatment of cancer. Cancer Immunol. Immunother. 2003, v. 53, p. 275-306.

27. Dannenberg A. J. Pathogenesis of pulmonary tuberculosis. Am. Rev. Respir. Dis. 1982, v. 125, p. 25-29.

28. Dannenberg A. J. Roles of cytotoxic delayed-type hypersensitivity and macrophage-activating cells-mediaeted immunity in the pathogenesis of tuberculosis. Immunobiology. 1994, v. 191, p. 461-473.

29. Del Hoyo G. M., Martin P., Vargas H. H., Ruiz S., Arias C. F., Arvadin C. Characterization of a common precursor population of dendritic cells. Nature. 2002, v. 415, p. 1043-1047.

30. Demangel C., Bean A. G. D., Martin E., Feng C. G., Kamath А. Т., Britton W. J. Protection against aerosol Mycobacterium tuberculosis infection using Mycobacterium bovis BCG-infected dendritic cells. Eur. J. Immunol. 1999, v. 29, p. 1972-1979.

31. Demangel C., Britton W. J. Interaction of dendritic cells with mycobacteria: where the action starts. Immunol. Cell. Biol. 2000, v. 78, p. 318-324.

32. Dhodapkar M. V., Steinman R. M., Krasovsky J., Munz C., Bhardwaj N. Antigen-specific inhibition of effector T-cell function in humans after injection of immature dendritic cells. J. Exp. Med. 2001, v. 193, p. 233-238.

33. Dillon S. M., Griffin J. F., Hart D. N. Watson J. D., Baird M. A. A long-lastinginterferon-gamma response ic induced to a single inoculation of antigen-pulced dendritic cells. Immunology. 1998, v. 95, p. 132-140.

34. Donnelly J. J., Ulmer J. В., Shiver J. W., Liu M. A. DNA vaccines. Ann. Rev. Immunol. 1997, v. 15, p. 617-648.

35. Dow S. W., Roberts A., Vyas J., Rodgers J., Rich R. R., Orme I., Potter T. A. Immunization with f-Met peptides induces immune reactivity against Mycobacterium tuberculosis. Tubercle Lung Dis. 2000, v. 80, p. 5-13.

36. Elhay M. J., Andersen P. Immunological requirements for a subunit vaccine against tuberculosis. Immunol. Cell. Biol. 1997, v. 75, p. 595-603.

37. Emoto M., Emoto Y., Buchwalow I. B. Induction of IFN-gamma-producing CD4+ natural killer T cells by Mycobacterium bovis bacillus Calmette-Guerin. Eur. J. Immunol. 1999, v. 29, p. 650-659.

38. Engelmayer J., Larsson M., Subklewe M., Chahroudi A., Cox W. I., Steinman R. M., Bhardwaj N. J. Immunol. 1999, v. 163, p. 6762-6768.

39. Fanger N. A., Wardwell K., Shen L., Tedder T. F., Guyre P. M. Type I (CD64) and type II (CD32) Fcg receptor-mediated phagocytosis by human blood dendritic cells. J. Immunol. 1996, v. 157, p. 541-548.

40. Feng C. G., Palendira U., Demangel C., Spratt J. M., Malin A. S., Britton W. J. Priming with DNA immunization augments protective efficacy of Mycobacterium bovis bacille Calmette-Gurin against tuberculosis. Infect. Immun. 2001, v. 69, p. 4174-4176.

41. Figdor C. G., van Kooyk Y., Adema G. J. C-type lectin receptor on dendritic cells and Langerhans cells. Nat. Rev. Immunol. 2002, v. 2, p. 77-84.

42. Fine P. E. Variation in protection by BCG: implications of and for heterologous immunity. Lancet. 1995, v. 346, p. 1339-1345.

43. Finkelman F. D., Lees A., Bimbaum R., Gause W. C., Morris S. C. Dendritic cells can present antigen in vivo in a tolerogenic or immunogenic fashion. J. Immunol. 1996, v. 157, p. 1406-1414.

44. Flesch I. E., Kaufmann S. H. Role of cytokines in tuberculosis. Immunobiology. 1992, v. 189, p. 316-339.

45. Flynn J. L., Chan J. Immunology of tuberculosis. Ann. Rev. Immunol. 2001, v. 19, p. 93-129.

46. Forster R., Schubel A., Breitfield D., Kremmer E., Renner-Muller I., Wolf E., Lipp M. CCR7 coordinates the primary immune response by establishing functional microenvironments in secondary lymphoid organs. Cell. 1999, v. 99, p. 23-33.

47. Fortsch D. M., Rollinghoff M., Stenger S. IL-10 converts human dendritic cells into macrophage-like cells with increased antibacterial activity against virulent Mycobacterium tuberculosis. J. Immunol. 2000, v. 165, p. 978-987.

48. Gantner B. N., Simmons R. M., Canavera S. J., Akira S., Underhill D. M. Collaborative induction of inflammatory responses by Dectin-1 and Toll-like receptor 2. J. Exp. Med. 2003, v. 197, p. 1107-1117.

49. Geijtenbeek Т. В. H., Torensma R., van Vliet S. L., van Duijnhoven G. C., Adema G. J., van Kooyk Y. Identification of DC-SIGN, a novel dendritic cell-specific ICAM-3 receptor that supports primary immune responses. Cell. 2000, v. 100, p. 575-585.

50. Geijtenbeek Т. В. H., van Vliet S. L., Koppel E. A., Sanchez-Hernandez M., Vandenbroucke-Grauls M. J. E., Appelmelk В., van Kooyk Y. Mycobacteria target DC-SIGN to suppress dendritic cell function. J. Exp. Med. 2003, v. 197, p. 7-17.

51. Gonzalez-Juarrero M., Shim Т. S., Kipnis A., Junqueira-Kipnis A. P., Orme I. Dynamics of macrophage cell populations during murine pulmonary tuberculosis. J. Immunol. 2003, v. 171, p. 3128-3135.

52. Good M. F., Zevering Y., Currier J., Bilsborough J. "Original antigenic sin", T cell memory, and malaria sporozoite immunity: an hypothesis for immune evasion. Parasite Immunol. 1993, v. 15, p. 187-193.

53. Gumperz J. E., Brenner M. B. CDl-specific T-cells in microbial immunity. Curr. Opin. Immunol. 2001, v. 13, p. 471-478.

54. Gunn M. D., Tangemann K., Tam C., Cyster J. G., Rosen S. D., Williams L. T. A chemokine expressed in lymphoid high endothelial venules promotes the adhesion and chemotaxis of naive T lymphocytes. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 1998, v. 95, p. 258-263.

55. Hanekom W. A., Mendillo M., Manca C., Haslett P. A., Siddiqui M. R., Barry III C., Kaplan G. Mycobacterium tuberculosis inhibits maturation of humanmonocyte-derived dendritic cells in vitro. J. Infect. Dis. 2002, v. 188, p. 257266.

56. Harshyne L. A., Watkins S. C., Gambotto A., Barratt-Boyes S. M. Dendritic cells acquire antigens from live cells for cross presentation to CTL. J. Immunol. 2001, v. 166, p. 3717-3723.

57. Hawiger D., Masilamani R. F., Bettelli E., Kuchroo V. K., Nussenzweig M. C. Immunological unresponsiveness characterized by increased expression of CD5 on peripheral T cells induced by dendritic cells in vivo. Immunity. 2004, v. 20, p.695-705.

58. Henderson R. A., Watkins S. C, Flynn J. L. Activation of human dendritic cells following infection with Mycobacterium tuberculosis. J. Immunol. 1997, v. 159, p. 635-643.

59. Hertz C. J., Kiertscher S. M., Bouis D. A., Norgard M. V., Roth M. D., Modlin R. L. Microbial lipopeptides stimulate dendritic cell maturation via Toll-like receptor 2. J. Immunol. 2001, v. 166, p. 2444-2450.

60. Holt P. G., Degebrodt A., O'Leary C., Krska K., Plozza Т. T cell activation by antigen-presenting cells from lung tissue digests: suppression by endogenous macrophages. Clin. Exp. Immunol. 1985, v. 62, p. 586-593.

61. Holt P. G., Haining S., Nelson D. J., Sedgwick J. S. Origin of steady-state turnover of class II МНС-bearing dendritic cells in the epithelium of the conducting airways. J. Immunol. 1994, v. 153, p. 256-261.

62. Honekom V. A., Mendillo M., Manca C., Haslett P. A., Siddiqui M. R., Barry III C., Kaplan G. Mycobacterium tuberculosis inhibits maturation of human monocyte-derived dendritic cells in vitro. J. Infect. Dis. 2002, v. 188, p. 257266.

63. Horwitz M. A., Harth G., Dillon B. J., Maslesa-Galic S. Recombinant bacillus

64. Huebner R. E. BCG vaccination in the control of tuberculosis. Curr. Top. Microbiol. 1996, v. 215, p. 263-282.

65. Inaba K., Inaba M., Naito M., Steinman R. M. Dendritic cell progenitors phagocytose particulates, including bacillus Calmette-Guerin organisms, and sensitize mice to mycobacterial antigens in vivo. J. Exp. Med. 1993, v. 178, p. 479-488.

66. Inaba K., Metlay J. P., Crowley M. Т., Steinman R. M. Dendritic cells pulsed with protein antigens in vitro can prime antigen-specific, МНС-restricted T cells in situ. J. Exp. Med. 1990, v. 172, p. 631-640.

67. Inaba K., Steinman M. Protein specific helper T lymphocyte formation initiated by dendritic cells. Science. 1985, v. 229, p. 475-479.

68. Inaba EC., Steinman M. Resting and sensitized T lymphocytes exhibit distinct stimulatory (antigen presenting cell) requirements fpr growth and lymphokine release. J. Exp. Med. 1984, v. 160, p. 1717-1735.

69. Ingulli E., Mondino A., Khoruts A., Jenkins M. K. In vivo detection of dendritic cell antigen presentation to CD4+ T cells. J. Exp. Med. 1997, v. 185, p. 21332141.

70. Iwashiro M., Messer R. J., Peterson К. E., Stromnes I. M., Sugie Т., Hasenkrug K. J. Immunosuppression by CD4+ regulatory T cells induced by chronic retroviral infection. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001, v. 98, p. 9226-9230.

71. Iyonaga K., McCarthy К. M., Schneeberger. E. S. Dendritic cells and recruitment of granulomatous immune response in the lung. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2002, v. 26, p. 671-679.

72. Jackson M., Phalen S. W., Lagranderie M., Ensergueix D., Chavarot P., Marchal G., McMurray D. N., Gicquel В., Guilhot C. Persistence and protective efficacy of a Mycobacterium tuberculosis auxotroph vaccine. Infect. Immun. 1999, v. 67, p. 2867-2873.

73. Jacobs D. M. Immunomodulatory effects of bacterial lipopolysaccharide. J. Immunopharmacol. 1981, v. 3, p. 119-132.

74. Jarossay D., Napolitani G., Colonna M., Sallusto F., Lanzavecchia A. Specialization and complementarity in microbial molecule recognition byhuman myeloid and plasmaeytoid dendritic cells. Eur. J. Immunol. 2001, v. 31, p. 3388-3393.

75. Jiang W. W., Swiggard L., Heufler C., Peng M., Mirza A., Steinman R. M., Nussenzweig M. C. The receptor DEC-205 expressed by dendritic cells and thymic epithelial cells is involved in antigen processing. Nature. 1995, v. 375, p. 151-155.

76. Jiao X., Lo-Man R., Guermonprez P., Fiette L., Deriaud E., Burgaud S., Gicquel В., Winter N., Leclerc C. Dendritic cells are host cells for mycobacteria in vivo that trigger innate and acquired immunity. J. Immunol. 2002, v. 168, p. 12941301.

77. Kadowaki N., Antonenko S., Lau J. Y., Liu Y. J. Natural interferon-a/p-producing cells link innate and adaptive immunity. J. Exp. Med. 2000, v. 192, p. 219-226.

78. Kadowaki N., Ho S., Antonenko S., de Waal Malefyt R., Kastelein R. A., Bazan F., Yong-Liu J. Subsets of human dendritic cells express different Toll-like receptors and respond to different microbial antigens. J. Exp. Med. 2001, v. 194, p. 863-869.

79. Kim T. W., Hung C. F., Boyd D., Juang J., He L., Kim J. W., Hardwick J. M., Wu Т. C. Enchancing DNA vaccine potency by combining a strategy to prolong dendritic cell life with intracellular targeting strategies. J. Immunol. 2003, v. 171, p. 2970-2976.

80. Kim T. W., Hung C. F., Ling M., Juang J., He L.,., Hardwick J. M., Kumar S., Wu Т. C. Enchancing DNA vaccine potency by coadministration of DNA encoding antiapoptotic proteins. J. Clin. Investig. 2003, v. 112, p. 109-117.

81. Kleindienst P., Brocker T. Endogenous dendritic cells are required for amplification of T cell responses induced by dendritic cell vaccines in vivo. J. Immunol. 2003, v. 170, p. 2817-2823.

82. Klinman D. M. Adjuvant activity of CpG oligodeoxynucleotides. Int. Rev. Immunol. 2006, v. 25, p. 135-154.

83. Lanzavecchia A., Sallusto F. Regulation of T-cell immunity by dendritic cells. Cell. 2001, v. 106, p. 263-266.

84. Latchumanan V. K., Balkhi M. Y, Sinha A., Singh В., Sharma P., Natarajan K. Regulation of immune responses to Mycobacterium tuberculosis secretory antigens by dendritic cells. Tuberculosis. 2005, v. 85, p. 377-383.

85. Lowrie D. B. DNA vaccines for therapy of tuberculosis: where are we now? Vaccine. 2006, v. 24, p. 1983-1989.

86. Lukas N. W., Chensue S. W., Strieter R. M., Latchumanan V. K., Singh В., Sharma P., Natajaran K. Inflammatory granuloma formation is mediated by TNF-alpha-inducible intracellular adhesion molecule-1. J. Immunol. 1994, v. 152, p. 5883-5889.

87. Lutz M. В., Kukutsch N., Ogilvie A. L. G., Rossner S., Koch F., Romani N., Schuler G. An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow. J. Immunol. Meth. 1999, v. 223, p. 77-92.

88. Mahairas G. G., Sabo P. J., Hickey M. J., Singh D. C., Stover С. K. Molecular analysis of genetic differences between Mycobacterium bovis BCG and virulent M. bovis. J. Bacteriol. 1996, v. 178, p. 1274-1282.

89. Manabe Y. C., Scott C. P., Bishai W. R. Naturally attenuated, orally administered Mycobacterium microti as a tuberculosis vaccine is better than subcutaneus Mycobacterium bovis BCG. Infect. Immun. 2002, v. 70, p. 15661570.

90. Mansour Haeryfar S. M. The importance of being a pDC in antiviral immunity: the IFN mission versus Ag presentation. Trends Immunol. 2005, v. 26, p. 311317.

91. McWilliam A. S., Nelson D., Thomas J. A., Holt P. G. Rapid dendritic cell recruitment is a hallmark of the acute inflammatory response at mucosal surfaces. J. Exp. Med. 1994, v. 179, p. 1331-1336.

92. Means Т. K., Wang S., Lien E., Yoshimura A., Golenbrock D. Т., Fenton M. J. Human Toll-like receptors mediate cellular activation by Mycobacterium tuberculosis. J. Immunol. 1999, v. 163, p. 3920-3927.

93. Moll H. Epidermal Langerhans cells are critical for immunoregulation of cutaneous leishmaniasis. Immunol. Today. 1993, v. 14, p. 383-387.

94. Mostowy S., Inwald J., Gordon S., Martin C., Warren R., Kremer K., Cousins D., Behr M. A. Revisiting the evolution of Mycobacterium bovis. J. Bacteriol. 2005, v. 187, p.6386-6395.

95. Nelson D. J., Holt P. G. Defective regional immunity in the respiratoty tract of neonates is attributable to hyporesponsiveness of local dendritic cells to activation signals. J. Immunol. 1995, v. 155, p. 3517-3524.

96. Nikonenko В. V., Averbakh M. M., Lavebratt C., Schurr E., Apt A. S. Comparative analysis of mycobacterial infections in susceptible I/St and resistant A/Sn inbred mice. Tuber. Lung. Dis. 2000, v. 80, p. 15-25.

97. North R., Jung Y.-J. Immunity to tuberculosis. Ann. Rev. Immunol. 2004, v. 22, p. 599-623.

98. Oukka M., Manuguerra J. С., Livaditis N., Tourdot S., Riche N., Vergnon I., Cordopatis P., Kosmatopoulos K. Protection against lethal viral infection by vaccination with nonimmunodominant peptides. J. Immunol. 1996, v. 157, p. 3039-3045.

99. Pelicic V., Jackson M., Reyrat J. M. Efficient allelic exchange and transposon mutagenesis in Mycobacterium tuberculosis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997, v. 94, p. 10955-10960.

100. Peters W., Ernst J. D. Mechanisms of cell recruitment in the immune response to Mycobacterium tuberculosis. Microbes Infect. 2003, v. 5, p. 151-158.

101. Peters W., Scott H. M., Chambers H. F., Flynn J. L., Charo I. F., Ernst J. D. Chemokine receptor 2 serves an early and essential role in resistance to Mycobacterium tuberculosis. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001, v. 98, p. 79587963.

102. Pym A. S., Brodin P., Majlessi L., Brosch R., Demangel C., Williams A., Griffiths К. E., Marchal G., Leclerc C., Cole S. T. Recombinant BCG exporting ESAT-6 confers enhanced protection against tuberculosis. Nat. Med. 2003, v. 9, p. 533-539.

103. Reis e Sousa C., Stahl P. D., Austyn J. M. Phagocytosis of antigens by Lngerhans cells in vitro. J. Exp. Med. 1993, v. 178, p. 509-519.

104. Reynes J., Perez C., Lamaury I., Janbon F., Bertrand A. Bacille Calmette-Guerin adenitis 30 years after immunization in a patient with AIDS. J. Inf. Dis. 1989, v. 160, p. 727-731.

105. Ribi E., Meyer T. J., Azuma I., Parker R., Brehmer W. Biologically active components from mycobacterial cell walls. IV. Protection of mice against aerosol infection with virulent Mycobacterium tuberculosis. Cell. Immunol. 1975, v. 16, p. 1-10.

106. Robbiani D. F., Finch R. A., Jager D., Muller W. A., Sartorelli A. C., Randolph G. J. The leukotriene C4 transporter MRP1 regulates CCL19 (MIP3beta, ELC)-dependent mobilization of dendritic cells to lymph nodes. Cell. 2000, v. 103, p. 757-768.

107. Rodrigues, L.C., Divan, V.D., Wheeler, J.G. Efficacy of BCG vaccine in the prevention of tuberculosis. Meta-analysis. Int. J. Epidemiol. 1993, v. 22, p. 1154-1158.

108. Roper W., Waring J. J. Primary serofibrinous pleural effusion in military personnel. Am. Rev. Tuberc. 1955, v. 71, p. 616-634.

109. Rubartelli A., Poggi A., Zocchi M. R. The selective engulfment of apoptotic bodies by dendritic cells is mediated by the a(v)p3 integrin and requires intracellular and extracellular calcium Eur. J. Immunol. 1997, v. 27, p. 18931900.

110. Sallusto F., Schaerli P., Loetscher P., Schaniel P., Lenig D., Mackay C. R., Qin S., Lanzavecchia A. Rapid and coordinated switch in chemokine receptor expression during dendritic cell maturation. Eur. J. Immunol. 1998, v. 28, p. 2760-2769.

111. Sertl К. Т., Takemura Т., Tschachler E., Ferrans V. J., Kaliner M. A., Shevach E. M. Dendritic cells with antigen-presenting capability reside in airway epithelium, lung parenchyma, and visceral pleura. J. Exp. Med. 1986, v. 163, p. 436-451.

112. Siegal F. P., Kadowaki M., Shodell P. A., Fitzgerald-Bocarsly P. A., Shah K., Ho S., Antonenko S., Liu Y. J. The nature of the peripheral type I interferon-producing cells in human blood. Science. 1999, v. 284, p. 1835-1839.

113. Steinman R. M. Dendritic cell and the control of immunity: enchancing the efficiency of antigen presentation. Mt. Sinai J. Med. 2001, v. 68, p. 106-166.

114. Steinman R. M. The dendritic cell system and its role in immunogenicity. Annu. Rev. Immunol. 1991, v. 9, p. 271-296.

115. Steinman R. M., Cohn Z. A. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphological, quantitation, tissue distribution. J. Exp. Med. 1973, v. 137, p. 1142-1162.

116. Steinman R. M., Moran Т. M. Dendritic cells, p. 269-284. In W. M. Rom and S. M. Garay (ed.), Tuberculosis. 2004. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa.

117. Steinman R. M., Nussenzweig M. C. Avoiding horror autotoxicus: the importance of dendritic cells in peripheral T-cell tolerance. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002, v. 99, p. 351-358.

118. Stenger S., Niazi K. R., Modlin R. L. Downregulation of CD1 on antigen-presenting cells by infection with Mycobacterium tuberculosis. J. Immunol. 1998, v. 161, p. 3582-3588.

119. Sutherland I., Springett V. H. Effectiveness of BCG vaccination in England and Wales in 1983. Tubercle. 1987, v. 68, p. 81-92.

120. Tan M. C., Mommaas A. M., Drijfhout J. W., Jordens R., Onderwater J. J., Verwoerd D., Mulder A. A., van der Heiden A. N., Scheidegger D., Oomen L.

121. С., Ottenhoff Т. Н., Tulp A., Neeijes J. J., Koning F. Mannose receptor-mediated uptake of antigens strongly enhances HLA class II-restricted antigen presentation by cultured dendritic cells. Eur. J. Immunol. 1997, v. 27., p. 24262435.

122. Tascon R. E., Soares C. S., Ragno S., Stavropoulos E., Hirst E. M. A., Colston M. J. Mycobacterium tuberculosis-activated dendritic cells induce protective immunity in mice. Immunology. 2000, v. 99, p. 473-480.

123. Thurnher M., Ramoner R., Gastl G., Radmayr C., Bock G., Herold M., Klocker H., Bartsch G. Bacillus Calmette-Guerin mycobacteria stimulate human blood dendritic cells. Int. J. Cancer. 1997, v. 70, p. 128-134.

124. Turley S. J., Inaba K., Garrett W. S., Ebersold M., Unternaehrer J., Steinman R. M., Mellman I. Transport of peptide-МНС class II complexes in developing dendritic cells. Science. 2000, v. 288, p. 522-527.

125. Ulrichs Т., Kaufmann S. H. E. Cell mediated immune response, p. 251-262. In W. M. Rom and S. M. Garay (ed.), Tuberculosis. 2004. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa.

126. Underbill D., Ozinsky A. Toll-like receptors: key mediators of microbe detection. Curr. Opin. Immunol. 2002, v. 14, p. 103-110.

127. Underbill D., Ozinsky A., Smith K. D., Aderem. A. Toll-like receptor 2 mediates mycobacteria-induced proinflammatory signaling in macrophages. Proc. Natl. Acad. Sci. 1999, v. 96, p. 14459-14463.

128. Urban В. C., Ferguson D. J., Pain A., Wilcox N., Plebanski M., Austyn J. M., Roberts D. J. Plasmodium falciparum-infected erythrocytes modulate the maturation of dendritic cells. Nature. 1999, v. 400, p. 73-77.

129. Van Gisbergen K. P. J. M., Geijtenbeek Т. В. H., van Kooyk Y. Close encounters of neutrophils and DCs. Trends Immunol. 2005, v. 26, p. 626-631.

130. Xiang Z., Ertl H. C. J. Manipulation of the immune response to a plasmid-encoded viral antigen by coinoculation with plasmids expressing cytokines. Immunity. 1995, v. 2, p. 129-135.

131. Yeremeev V. V., Lyadova I. V., Nikonenko В. V., Apt A. S., Abou-Zeid C., Inwald J., Young D. B. The 19-kD antigen and protective immunity in a murine model of tuberculosis. Clin. Exp. Immunol. 2000, v. 120, p. 274-279.

132. Yoneyama H., Matsuno K., Matsushimaa K. Migration of dendritic cells. Int. J. Hematol. 2005, v. 81, p. 204-207.

133. Zhu X., Venkataprasad N., Ivanyi J., Vordermeier H. M. Vaccination with recombinant vaccinia viruses protects mice against Mycobacterium tuberculosis infection. Immunology. 1997, v. 92, p. 6-9.