Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экспериментально-клиническая оценка биологической активности аналогов витамина D3

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Экспериментально-клиническая оценка биологической активности аналогов витамина D3"

аь

АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СССР ИНСТИТУТ ПИТАНИЯ

На правах рукописи

бабари ки н

Дмитрий Александрович

УДК 577.161.08:616-08-092

экспериментально-клиническая оценка

биологической активности аналогов витамина эз

(03.00.04 — биохимия)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

МОСКВА — 1990

Работа выполнена в Рижском медицинском институте

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук профессор СПИРИЧЕВ, В. Б. доктор биологических наук ПЕТРОВА Э. А. доктор биологических наук профессор НАУМОВА В. И.

Ведущая организация ■—

Институт биологической и медицинской химии АМН СССР

Защита диссертации состоится «_» _ 1990 г.

в _ ч. на заседании Специализированного совета (Д.001.02.01)

при Институте питания АМН СССР (109240, Москва, Устьинский пр., 2/14).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института питания АМН СССР.

Автореферат разослан «_»_ 1990 г.

Ученый секретарь Специализированного совета кандидат медицинских наук

ЖМИНЧЕНКО В. М.

ОНЦАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДИССЕРТАЦИИ

Актуальность темы.Перед проявлением своего физиологического действия молекула холекальциферола подвергается гидроксилирова-нию в печени и почках.Основные звенья этой метаболической цепи выглядят следующим образом: Ъ з —г» 25(0Н)Х>з—1,25(0Н)2Т>3 или 24,25(0Н)2Ъ 3-ъ- 1,24,25(0Н)ЗТ) 3 /витамин Т> з,25-гидрокси-витаминЭ 3,1,25-дигидроксивитамин 35 3,24,25-дигидроксивитамин X) 3,1,24,25-тригидроксивитамин з соответственно/.

Известно,что гормон 1,25(0Н)2ЪЗ является важнейшим регулятором транспорта Са в кишечнике,функций костной ткани,ряда эндокринных яелез и других процессов /Эе1ие.йг)<1<3:?5;Уо(,(пли) 1326/, хотя их тонкие механизмы во многом не ясны.Дискуссионным остается вопрос и о том.являются ли прочие три- и дигидроксипроизводные /в первую очередь 24,25(ОН)2®3/ продуктами инактивации витамина 35 з или они обладают какими-либо специфическими функциями.Теоретическая проблема связи структуры и функций аналогов витамина Т> з тлеет и практический аспект,поскольку ее решение позволит оценить целесообразность внедрения соответствующих соединений в медицинскую практику.С этой точки зрения особый интерес представляет группа 1-ОН-аналогов,синтезированных с целью модификации фармако-динамических характеристик 1,25(0Н)21>3 ,что необходимо для выбора магистральных направлений разработки новых соединений.В частности, актуально создание 1-ОН-аналогов витамина ,.]) з с пролонгированным действием,препаратов с преимущественным действием на минерализацию кости и т.п.

Благодаря синтезу дериватов витамина 3> з открылись новые возможности для коррекции расстройств фоефорно-кальциевого обмена при различных патологических состояниях человека,среди которых на первом месте стоит остеопороз.В странах Северной Америки на лечение остеопороза и связанных с ним переломов костей расходуется более I млрд долларов в год 50 ч, 15 26/.Кроме того, в некоторых ситуациях (почечная остеодистрофия,врожденные рахито-подобные заболевания) назначение 1-ОН-аналогов витамина 3? з является единственным методом патовенетического лечения.Тэтам образом,

потребности в лекарственных препаратах аналогов витамина 1 очень, велики,а необходимость их длительного применения дел особо важным пополнение знании о разных сторонах активност лекарств.

До недавнего времени активность аналогов холекальцифе в организме оценивалась лишь по их действию на показатели рального обмена.Однако,открытие у 1,25(0Н)2'РЗ функций per, тора созревания и дифференцировки клеток,иммунотропных эфф сделало актуальным изучение влияния аналогов витамина Ъ з : мунную систему,сопоставление различных эффектов стероидов.] ходимость такого род^а исследований определяется перспектив! рокого применения укйзанныхёпрепаратов в медицине и ветери] Диссертационная работа выполнялась в соответсвии с шк научных исследований Рижского медицинского института в рам] проблемы ШНГ СССР 0.69.03,а также по дополнительному зада] ГКНТ СССР (43.3.00.10):"Создать лекарственные средства для рекщш минерального обмена".

Цель работы заключалась в исследовании специфической с гической активности некоторых природных и синтетических анг витамина ])з с оценкой возможностей их клинического приме! Для достижения указанной цели были сформулированы' следующие дачи исследования :

-оценить в сравнительном аспекте биологическую активнс основных метаболитов витамина 1> з и их особенности в пле влияния на обмен Са,

-исследовать биологическую активность синтетических I-роксипроизводных витамина 2>з,

-выявить условия для достижения максимальной антирахит кой активности 1-гидроксипролзводных витамина £>з и 24,25(0 -оценить гшофосфатемическую активность фосфорсвязываю смеси (ФСС) у больных хронической почечной недостаточностью (ХПН) на гемодиализе, ,

-провести клиническую апробацию лекарственных препарат окскдевкг и диоксивиг у больных с витамин- Х> -зависимой па' глей минерального обмена. Научная новизна:

-описано неизвестное ранее явление накопления Са в ска ной мускулатуре на фоне глубокой гияокальцяемии при 2} -ави: нозе;устзновлено,что введение гормональной формы витамина 3

вызывает быстрое,в течение 3 часов,освобождение мышц от избытка Са;этот механизм обеспечивает подъем кальциемки в период,когда транспортная система кишечника еще не способна ускорить усвоение экзогенного Са,

-изучена биологическая активность природных метаболитов витамина 1> з в экспериментах на-птицах;полученные данные свидетельствуют о сходстве действия 1,25(0Н)21>3 и 24 , 25(0Н)2£>3 на показатели минерального обмена и иммунной систем¡впервые описано стимулирующее действие Ь/СОЮТЗз на созревание лимфоцитов сумки Фабрициуса у птиц;показано,что совместное введение 1,25(0Н)21)3 и 24,25(0Н)21)3 вызывает потенцирование их эффектов;

-впервые показана способность 24,25(0Н)-2!>3 модулировать действие 1-ОН-аналога витамина'Х> з на иммунную систему,

-установлена спосбность 24,25(0Н)2Г>3 ослаблять иле полносты снимать отрицательное действие высоких доз (более 390 пмоль) 1о<(0Н)В з,

-сделано заключение,что влияние 1,25(0Н)2Л>3 и 1</(0Н)"Ьз на костную ткань при рахите не сводится к процессу резорбции; препараты в физиологических (менее 195 шлоль/сут) дозах стимулируют минерализацию костной ткани цыплят,а в фармакологических -(более 390 пмоль) и токсических - тормозят образование остеокда; при интоксикации гиперкальциемия поддерживается как за счет снижения утилизации скелетом Са крови,так и в результате нарастания абсорбции катиона в кишечнике,

-впервые показано,что пролонгирование действия 1^(0Н)Ь з введением в молекулу остатка масляной кислоты позволяет более адекватно воспроизводить эффекты витамина£> з в организме; антирахитическая активность 1-бутират-Ь/(0Н)В з 'зависит от с.гго-. соба введения (перорально или парэнтерально) препарата,

-впервые изучена имтлунотропкэя активность Ь/(0Н)1> з у человека установлено, что при хроническом бронхите ]>(0Н)Е>з оказывает иммукорегуляторное действие;у больных бронхиальной астмой Ьа(0Н)Вз на фоне кортикоетероидной терапии стимулировал показатели неспецифической иммунной защиты. Практическое значение работы:

-изучена саецкфкческая активность новых биологически ептив-ных соединений,перспективных с точки зрения их клинического при-

менения,

-серия опытов по подбору оптимальных условий применения Ь*(0Н)Т> з и 24,25(0Н)2£>3 показала целесообразность их совмес: использования для коррекции минерального обмена,

-сделано заключение о возможности применения 24,25(ОН)21 для лечения отравлений 1-ОН-производныш витамина 3)з,

-проведена клиническая апробация лекарственных препарато] оксидевит /Ъл(0Н)1> з/ и диоксивит /24,25(0Н)2Е>3/;на основани] результатов испытаний последнего сделан вывод о необходимости продления сроков клинических испытаний,разработки новой лекаре

венной формы, ... - .....

-высокая эффективность оксидевита при лечении метаболичес ких остеопатий свидетельствует о целесообразности широкого кл! ческого применения этого препарата .-результаты экспериментальна и клинических исследований'Ъа(0Н)Е> з использованы при составлю соответствующей документации,связанной с внедрением новых- лекг венных средств,

-разработанный способ лечения гиперфосфатемии при ХПН обе чил возможность снижения концентрации Рн в крови уремических с ных и использования для лечения почечной остеодистрофии Х>-в1 минных препаратов,включая оксидевит, - • '

-предложен способ диагностики постменопаузального остеопс на ранних стадиях развития;способ позволяет подходить к выбору схемы лечения на основе объективных показателей. Положения диссертации.выносимые на защиту; -1,25(0Н)21>3 характеризуется наибольшей среди изученных г родных аналогов холекальциферола биологической активностыо;по1 шение кальциемии под действием 1,25(0Н)2ЬЗ осуществляется за счет стимуляции усвоения Са пищи,подавления роста органически матрикса кости и его минерализацию на тот период,пока всасывав катиона в кишечнике не адекватно потребностям организма;особен ностыэ токсических доз 1,25(0Н)22>3 и 1«<(0Н)1>з является их се собность подавлять остеогенез,

-1,25(ОН)2333 /1^(0Н)В з/ в условиях гиповитаминоза Т> яг ется мощным индуктором созревания лимфоцитов,а при вторичных л глунодефицитных состояниях - способствует нормализации как сяеи фических.так и не специфических иммунологических механизмов,

-24,25(0Н)2ЬЗ,малотоксичное соединение с низкой антирахитической активностью воспроизводит все изученные эффекты витамина Д) з и его гормональной формы,однако,выраженные в меньшей степени;24,25(ОН)2Ъ 3 является модулятором действия 1,25(0Н)2£>3, усиливающим эффекты физиологических доз поаледнего.и ослабляющего - избыточных,

-наибольший клинический эффект оксидевита достигается при лечении патологических состояний,характеризующихся подавлением всасывания Са в кишечнике;при ненарушенной экскреторной функции почек суточная кальциурия является информативным диагностическим показателем, корре-.вдрующим--е~изменениями - состояния -опорно-двига- -тельного аппарата больного. ' I

Апробация -работы:

Материалы диссертации доложены и обсуждены на У1 конференции биохимиков Прибалтийских республик,Белорусской ССР и Ленинграда (Рига,1981).Всесоюзной конференции "Современные проблемы гемодиализа и гемосорбции в трансплантологии" (Ташкент,1982), симпозиуме "Биохимия,фармакологическое и медицинское применение производных витаминов и других предшественников коферментов" (Иркутск,1983).конференции Белорусской ССР "Сорбционные методы детокськации в клинике" (Минск,1933).конференции эндокринологов Эстонской ССР (Тарту,1984),111 Всесоюзном симпозиуме "Трансплантация почки" (Рига,1984),Х Всесоюзной научной конференции по трансплантации органов и тканей (Киев, 1985) ,УШ объединенном симпозиуме биохимических обществ СССР-ГДР (Рига,1985),У11 Всесоюзной конференции по физиологии почек и водно-солевого обмена (Чернигов,1986),111 Всесоюзном съезде нефрологов (Киев,1986), II Всесоюзном симпозиуме "Научные основы витаминного питания сельскохозяйственных животных" (Юрмала,1987).Республиканской конференции эндокринрлогов Литовской ССР (Вильнюс,1987),1У Всесоюзной школе по физиологии почек и водно-солевого обмена (Иваново, 1986) .совещании по проблемам физиологии и патологии обмена кальция и его регуляции (Юрмала,1987),111 Всесоюзном съезде эндокринологов (Ташкент,1989),УП Всесоюзной конференции по физиологии почек и водно-солевого обмена (Харьков,1989),а также на заседаниях научных обществ биохимиков,фармацевтов,педиатров, стоматологов Латвийской ССР.

Публикации.По материалам диссертации опубликованы 54 печат-

ных работы,включая I авторское свидетельство.

Структура дис сертадии.Лис с ертадия.о бшим объемом 196 стра состоит из введения,обзора данных литературы,глав:материал и : тоды исследования (экспериментальные исследования и клиническ наблюдения)»результаты и их обсувдение,заключения,выводов,спи литературы (420 назв.).Работа иллюстрирована 24 рисунками и с держит 21 таблицу.

I.МАТЕРИМ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Для решения поставленных задач были проведены экспериме. на цыплятах' - классическом объекте подобных исследований и к нические наблюдения у больных.

1.1.Исследования на цыплятах.

Опыты проводили на петушках пород белый леггорн и хайсе: белый кросс.Цыплята выращивались на зерновом!) -авитаминном р ционе (ОР).содержавшем 0,87$ Са и 0,64^ Р.Общее поголовье цып методом аналогов распределяли на группы по 10-15 голов в кажд Препараты витамина Т> з вводили в виде раствора в пропиленглик Ниже приводится более детализированная схема экспериментов.

Биологическая активность природных метаболитов витамина -Десятидневным цыплятам (ц=315) в течение 10 дней в/м вводили витамин Л) з,25(0Н)1>з,1,25(0Н)2£>3,24,25(0Н)21>3 или 1,24,25(0Н)3£)3 в дозах 19,5-65-195-390 шоль/сут.Птиц забива. декапитацией и определяли прирост массы тела,Са,Рн,активность щелочной фосфатазы сыворотки крови (ЩФ),массу б.берцовой кост. ее зольность,относительную массу паращитовидных желез (ПЩЕ).

Механизм повышения кальциемии под действием витамина £> з и 1.25(0Н)2£>З.В двухнедельном возрасте птиц (и =165) распреде. ли на три группы: контрольная (0Р),на рационе с 100 МЕ/кг ил 500 МЕ/кг витаминаХ) з.Через неделю кроме перечисленных выше ; казателей определяли содержание Са и Р в мышцах конечностей.

На цыплятах 26 дневного возраста оценивали действие разо: доз витамина Т> з или 1,25(0Н)21)3 через 0-1-3-6-12-24 час п ле в/м инъекции.В течение 18-20 час до опыта птицы голодали.В сывание Са изучали ¡п ¿»¿М •

Сравнение биологической активности 1.25(0Н)21>3 к 1^(0Н)3 (п=88).С первых дней жизни цыплята получали по 65-130-260 шло.

аналогов или 260 пмоль витамина ДЭз.На 26-й день определяли показатели как в первом опыте.

Биологическая активность 5.6-транс-1.25(0Н)21>3. С^ =156). Рахитичным птица 20-дневного возраста в течение 10 дней в/м вводили 19,5-65-195-390 пмоль препаратов.Дополнительно к этому,проводили испытания стероидов на продолжительность физиологического действия (по динамике кальцийсвязывающего белка /СаСБ/ в слизистой кишечника) разовой в/м инъекции 2000 пмоль препаратов.

Биологическая активность 1-бутират-1о((0Н)х> з. (П=П4) .Трех-' недельным цыплятам 10 дней.в/м или перорально вводили по 650

пмоль 1^(0Н)1^..пли__эфирно1_формы^Биохши.ческиа_анализы. дсак. з_______

предыдущем оп^те.Изучали также динамику СаСБ кишечника после разовой в/м инъекции 3250 пмоль препарата (через 1-3-6-9 суток).

Сравнение биологической активности 1.25(0Н)2Т>3 и 24.25(0Н)21>3.01=173).Опыт проводился по схеме,аналогичной предыдущему. Стероиды вводили по 260 или 650 пмоль раздельно или в комбинациях.Продолжительность действия препаратов оценивали через 3-6-12-24 час.

Биологическая активность аналогов витамина Т>з на фоне высокостронциевого рахита.(п=210).Цыплята получали ОР,содержавший (%):Са - 0,51;Р - 0,63;5»*-0,01.В возрасте 10 дней поголовье делили на две части,одна из которых продолжала получать ОР,другая тот же рацион,но с добавкой 2,4$ СОз (0Р+5г).Каждая из групп распределялась на 7 подгрупп,которым вводили указанные в первом опыте природные соединения,а также 1</(0Н)Оз,в/м ,по 390 пмоль с 13-го по 20-й дни жизни.В дополнение к указанным выше анализам определяли содержание в крови.

Оптимизация антирахитического действия 1о<.(0Н)1>з и 24,25(0Н)2Р3.(П=480).Оценивали действие различных доз этих препаратов и холекальциферола,вводимых с I -го по 28-й дни жизни птиц.За три дня до окончания опыта проводили балансовые исследования (групповым методом,по 7 голов в группе),в которыхотдельно, по трем последовательным дням учитывали количество съеденного корма и выделенного помета.Кроме показателей первого опыта,определяли относительную массу улътимобранхиальных желез (УЕК).

Кроме того,изучалось действие ]>(0Н)Е>з и 24,25(ОН)2133 при их совместном введении (баланс минеральных веществ не определяли). Дополнительно к сказанному,исследовали биологическую активность

препаратов у птиц, обеспеченных витамином 'рз.

Действие ЗУ-С0Н)Т>з и 24.25( ОН) 2РЗ на иммунную систему, (п Десятидневным цыплятам в течение 18 дней перорально вводили в: тамин X) з или его аналоги (табл. 2 ).Кроме показателей мин рального обмена определяли массу сумки Фабрициуса,а также днф цировали клетки лнмфоидного ряда гистологических отпечатков с; ки у 3 цыплят из группы.

Токсическое действие 1ы(ОН)Р з и 24.25(0Н)21>3. (п=180). Интактных птиц двухнедельного возраста переводили на ОР.В теч ние 14 дней вводили по 650-6500-195000 пмоль витамина 1> з или аналогов.На 28-й день проводили балансовые исследования.Опреда ли показатели как в эксперименте "Оптимизация...", а также сода кание Са в золе мышц конечностей и в почках,массу сумки Фабри уса.Гистоморфометрически определяли толщину кортикального и диаметр фолликулов сумки Фабрициуса.

В дополнительном опыте сравнивали действие 390000 пмоль ] тамина 2) з, 24,25(0Н)2Л) 3 и 195000 пмоль Ь40Н)Ъз,в котором ] ме перечисленного выше определяли массу и толщину кортикально] слоя тимуса.

Методы.Содержание Са и 5 г* определяли методом атомноабсо] ционной спектрофотометр™ ( 403 ).рн -,моли<

ным методом ( Яла(>е) ),активность ЩФ - с использование:

-глицерофосфата натрия в качестве субстрата.Общую концент] цшо белка определяли по биуретовой реакции а СаСБ - разработанным нами ранее методом радиальной иммунодис фузии в агаре.

Для определения содержания минеральных веществ в тканях, корме и помете материал высушивали до постоянной массы,озолял] сухим способом при 600°С.

Всасывание Са Гп оценивали на дотированной петлб

двенадцатиперстной кишки (ВасАма^ еЬ з?4/

Для цитологических исследований сумки Фабрициуса перерезг и готовили по 6 отпечатков.С помощью люминесцентной (МЛ-2) и с товой микроскопии дифференцировали по 1000 клеток каждого пре1 рата.Итоговый результат подсчитывали как среднее количество ю ток каадого типа на 1000 таковых препарата и для группы пгиц I целом.

Кусочки сумки Фабрициуса и тимуса после окраски гематоксилином и эозином исследовали гистоморфометрически.Определяли толщину кортикального слоя и наружный диаметр лимфатических фолликулов тимуса и сумки,а также индекс :

2 х толщина кортикального слоя

- х 100.

наружный диаметр фолликула

Кристаллические витаминР з и его аналоги любезно предоставили в дар: холекальциферол - Р.И.Яхимович (Институт биохимии им.А.В.Палладина АН УССР) ;25(0Н)Х> з - П.О'Коннелл ("П»«. Ц^'сЬ^ Сськрснь^,- , США)-; 1,25 (ОН) 21)3 - А.Норман (Калифорнийский университет) ,24,25(ОН)23) 3 /смесь й- и 2- эпимеров/, Ьл(0Н)Ь з, 5,6-транс-1,25(ОН)2£>3 и 1-бутнрат-Ьл(0Н)1Э 3 - Н.А.Богословский (НПО "Витамины"). ;1,24,25(0Н)33)3 - М.Ускокович (^о^^ап 1-4 Ясе^^СМ). ''

Чистоту препаратов контролировали хроматографически на пластинках "Силуфол" или "Силуфол-254" с использованием системы растворителей бензол:ацетон (4:1).Концентрация наносимых образцов - 0,5-2,0 т/ил.Локализацию пятен устанавливали в УФ-свете" или проявлением 2,5$ раствором серной кислоты в воде с последующим нагреванием до П0-120°С.

1.2.Клинические наблюдения.

Клиническая часть включает в себя разработку метода лечения гиперфосфатеши у больных ХПН и апробацию лекарственных препаратов 140Н)Ъ з и 24,25 (0Н)2ЬЗ.

Материал.Лечение гипер&осшатемии.Проводилось двухлетнее изучение специфического действия фосфорсвязывающей смеси (ФСС) у 50 больных ХПН,в возрасте 18-53 лет (22 женщин,28 мужчин).Скорость клубочковой фильтрации у них была 4^2 мл/мин.

Для оценки влияния гемодиализа на фосфатемию у 30 больных определяли Рн сыворотки крови до и после сеанса гемодиализа.При этом учитывали число сеансов в неделю и прием больными препаратов глккокортикоццов.

ФСС готовили смешиванием гидроксида алюминия (40,3г), СаСОз (8,5г) и сорбита (ЮОг).Состав назначали больным с гппер-фосфатеглией,превышавшей 2,58 ммоль/л,перорально,пз расчета 30 г

в сутки,за 3-4 приема до еды.В случае диареи назначали ФСС бе сорбита Eftи с пониженным его содержанием.С помощью ФСС подцер вали преддиализный уровень Рн крови в пределах 2,26-2,42 ммол У всех больных рентгенологически исследовали кости кисти,таза стопы.Кроме Са и Рн, у 16 больных определяли, в крови концентр, цию иммунореактивного паратгормона (ПГГ) (С-фрагмент).

Клиническая апробация лекарственных препаратов аналогов витамина Т> з.Испытания оксидевита / 1^(0Н)"Ьз/ проводились в соответствии с постановлением Фармакологического комитета Упр; ления по внедрению новых лекарственных средств и медицинской техники Минздрава СССР от 2? января 1983 года,а диокснвита /24,25(ОН)2 3/ - от 25 февраля 1987 года.

Оксидевит в лекарственной форме желатиновые капсулы,соде] щие 1,0-0,5-0,25 мкг препарата (т.е.2600-1380-650 толь) и ди< сивит - 0,01% спиртовый раствор во флаконах с капельницей по ; мл были получены из НПО "Витамины".

■ Группы испытуемых по 227 и 12 человек для каждого препар; соответственно,включали пациентов с различными патологическим! состояниями (табл.1 ).Десять больных получали оба препарата.

Коррекцию фосфатемию у больных ХПН проводили с помощью ФС Доза оксидевита в среднем составляла 0,25-2,0 мкг/сут-: Пациент! хроническим бронхитом получали препарат по 2 или 4 мкг в тече I или 2 недель,а при бронхиальной астме 2 мкг на те же сроки.

Диоксивиг получали 7 больных с постменопаузальным остеопс зом (30-50 мкг/сут) и 5 - со страческим остеопорозом (до 60 и Длительность лечения - до 5 месяцев.Показатели определяли те я что указаны в табл.1.Десять больных со стероидным остеопорозог, получали по 20-30 мкг диоксивита в сочетании с 0,25-2,0 мкг с девита в течение 7 месяцев.

Частота проведения клинических и биохимических анализов е висела от характера патологического процесса и длительности не блвдений.Объективные показатели определяли до начала лечения г в ходе его.

Подобно аналогичным зарубежным исследованиям,эффект плаце не изучался,т.к. мы не сочли этичным оставлять без потенциальн эффективного лечения длительно болеющих пациентов.

Таблица I.Сведения о больных,получавших оксидевит.

Патологическое состояние, число больных,возраст, пол (К/М).

Максимальная длит-ть наблюдений

Показатели

ХПН.Лечение гемодиализом. (п =37).25-54,20/17

2,5 года

Са,Рн,ЩФ (общая и костн. из офермент), ППТ с.крови. Рентгенография-кисть, таз,стопа.

ХПН.Лечение пересадкой почки.О1=29).25-45.13/16

6 лет

Са,Рн,ЩФ,М с.крови. Клуб.фильтрация. Са,Рн, Мо. сут.мочи.Рентгеногр. тж же.

Стероидный остеопороз (бронх.астма .ревматоид. артрит,системн.краен, волчанка,хрон.гепатит) (п =54).46-68.54/0.

Са,Рн с.крови л сут.мочи.

3 года Клуб.фильтрация,тубуляр-

ная реабсорбция Фосфата (ТЕР)¿у больных бронх, астмой (зимой)-251ОН)за з с.крови.Рентгенография.

Постменвпаузальный остеопороз. (п=28). 48-65. 28/—.

4 года Са,Рн,ЩФ с.крови.Са.Рн,

гидроксипролин сут.мочи. Клуб.юильтр.ТВР.Кольпо-цитологяя.Рентгенография позвоночника и кистей „ гл.образом.

Старческий остеопороз. 6,5 лет (И=16).73-84.11/5.

Са,Рн с.крови и сут.мочи. Гидроксипролин сут.мочи. кальцитонин (КТ) с .крови. Рентгенография - гл. образом позвоночник.

Сивдром малабсорбции. 4 года (П=5).47-54.5/0.

Так же,кроме КТ.Дополнит. - ЩФ (костн.изоф.),

Врожденные рахитоподоб-ные заболевания. (п=5).1-14.4/1.

6 лет

Са,Рн,ЩФ с.крови.У 3 детей - рентгенография скелета в динамике.

Хронический бронхит. (И=64).26-53.32/32.

2 недели

Са,Рн,Щ> с.крови.Са.Рн сут.мочи.У 7 болъных-2б(0Н)т}3 летом, число лейкоцит.крови,лимфоциты и их субпопуляцин, иммуноглобулины Об А,

плмуногло«

Бронхиальная астма (п=П). 41-53.7/4. Лечение полькортолоном.

2 недели Иммуноглобулины,25(0Н)Вз, активк.лкзоцима плазьгы крови,фагоцитарная активность лейкоцитов.

Методы.Концентрацию Са в сыворотке крови и моче олредел тригонометрическим титрованием под контролем фотоэлектроколо метра /вхБд^яи.^г/.Рн _ молибдзтным методом,а - с по щью набора реактивов "Лахема".Суточную мочу собирали с испол зованием в качестве консерванта конц.соляной кислоты.

Активность костного изофермента 1ЦФ оценивали методом те. вой инактивации /Stefan '^^¿/.Гидроксипролин определял по и lejt-tew /Л9ЬЗ /,а креатинин - унифи

ванным методом.

Содержание ПГГ (С-фрагмент) в сыворотке крови определял: использованием набора реактивов для радиоиммунологического , лиза фирмы CIS bioittciwvbt. îe,S (Франция) ,КТ -fWCfiv

'Ktodt D.aoneiiic-cr (ФИ1),а 25(0Н)1>з - OhS^at Co^bovQÎîoh (СМ). ■ •

Выделение фракции лимфоцитов из гепаринизированной кров: производили в градиенте фиколла-верографина.После выделения фракции лимфоцитов в ней определяли количество Т- и В-клеток, Выявление "активных" розеткообразугацих клеток (аЕ-РОК) ,т.е. i пуляции Т-лимфоцитов,наиболее быстро взаимодействующих с эрж цитами барана,проводили по методу Смита и соавт./^^б" /,а идах розеткообразующих клеток (E-PÛK) - по Джондал и соавг./^ Субпопуляции Т-лимфоцитов выявляли,основываясь на числе теоф] чувствительных и -резистентных клеток /Li^iîèui t ibfz которые условно обозначали Т-супрессорами и Т-хелперами соответственно.

В-лимфоциты определяли путем оценки розеткообразования с комплексом зимозан-комплемент оЛ., /.иммуь

глобулины - методом радиальной иммунодиффузии / Г.А Kueiie, (ч^/.Лиэоцшл крови /хм.%^и фагоцитар! активность лейкоцитов /Б.с.Гост<4 и соvhrAtfy оценивали общещ нятыми методами.

Кольпоцитологические исследования проводили по методике, описанной М.Г.Арсеньевой / <934 /.

Рентгенологические исследования производили с использова аппарата " EDP- -750" на пленке "Oywô ",с усиливающими экранами.Кисти снимали без применения последних.Дифференциаль ную диагностику остеопатий осуществляли по И.Коциану / 6Г

. 2, ЭКСПЕР^ШТАЙЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ:

2Л.Биологическая активность природных метаболитов холекальциферола.

Проведенное сравнение биологической активности природных метаболитов витамина I) з у щплят показало,что дал всех показателей, за исключением параметров кости,была характерна прямая или обратная зависимость между "вводимой дозой и эффектом (рисЛ).

н*1си

ОБОЗНАЧЕНИЯ:

ДОЗА-роаа препаратов (о** Оз

м&/сут,вАя метаболитоа-жол. акеивалемты. см. текст I ПРИВЕС- прирост массы те да ЗОЛА К. - зольность В. берцовой кости МАССА К.-масса 6. берцовой кости Са СБ -кальций связывающий белок Са - концентрация кальиия сыворотки крови

Рн- концентрация неоргандоеско*о

фосфора сыаоротки крови ЩФ-. активность сывороточной щелочной фосфатаам ПШЖ-относительная масса ггврвщи-товкрньи желез

Рис.1.Влияние природных метаболитов витамина 3) з на показатели фосфорно-кальциевого обмена у цыплнт.Нике приводятся диапазоны каздого показателя (радиуса,от центра . круга) и (в скобках) цена деления (I см):привес-20-70 г (6,4);зольность б.берцовой кости - 20-35$ (1,92);мас-са б.берцовой кости - 500-700 мг (26);СаСБ-0-65 мкг/мг белка (8,33);Рн-1,61-2,26 шоль/л (0,08);Са-2-3 ммоль/л (0,13);ЩФ—30—15 ед (1,92);относит.масса ПИЩ-4-1 мг/100 г массы тела (0,38).

Более сложным оказался характер зависимости мевду дозой 1,25(0Н)21)3 и минерализацией костной ткани.Стероид в дозе 19,5 пмоль способствовал достижению такого же процента зольности,как

и 195 пмоль витамина Х> з.Однако,при дозе,превышавшей 65 шгол зольности начала снижаться. Эта тенденция сохранялась несмотря на падение относительной массы ЕЩЕ,повышение кальциемии и фос темии.

Подтверждают ли эти данные мнение,что в основе действия 1,25(0Н)2 3 на костную ткань лежит ее резорбция?Несмотря на сообщения о:.-резорбирующем действии кальцитриола на кость

19 22./,убедительных ; данных об этом эффекте \rfvo получено недостаточно.Во всяком случае,быстрое повышение конц рации Са в крови, после ¿введения рахитичному животному витамин и 1,25(0Н)2 3 не являемся аргументом в пользу резорбции (см. раздел 2.2.).Уместно откатить,что истинная резорбция (здесь » идет речь о резорбции кости,как составляющей процесса ее ремо; лирования) не ведет к снижению процента ^зольности .В нашем ел; чае,скорее речь может идти о нарушении минерализации органиче< кого матрикса,т.е.остеомаляции.Более тогоДок и соавт./ 4985" полагают,что фармакологические. дозы 1,25(0Н)21)3 стимулируют р< органического матрикса.что и объясняет снижение зольности.По-видимому, пониженная зольность костей у птиц,получавших 390 пмс 1,25(0Н)2^)3,является результатом избытка последнего,вызывающе торможение как роста кости в целом,так и торможение ее минерал зации.

Длительная дискуссия в литературе по вопросу о качествен! различиях в действии 1,25(0Н)2ВЗ и 24,25(0Н)2Х>3 на костную ткань сделала актуальным проведение специального опыта.Было ус новлено.что несмотря на более высокую,по сравнению с24,25(0Н)< активность 1,25(0Н)21>3,оба метаболита вызывают в организме цы лят все эффекты,характерные для витамина!) з.При совместном введении наблюдался синергизм в действии препаратов.Полученные нами данные свидетельствуют о том,что 24,25(0Н)2Х>3 обладает функцией модулировать эффекты 1,25(0Н)21> 3 на минеральный обме

Что касается вопроса о том,активен ли 24,25(0Н)2ВЗ или предварительно превращается в 1,24,25(0Н)ЗЛЗ,ш склоняемся к мнению о необходимости 1^-гсдроксилирования дигидроксианалога. Подтверждением этому стали результаты опыта с высокостронцкэвк: рационом,когда блокировалась способность организма синтезирова 1о<-0Н-дериваты витамина 33 .

Избыток 5 г в корме резко затормозил ростостимулирующее действие стероидов (рис.2).Лишь 1-ОН-аналоги смогли обеспечить синтез СаСБ,а также достоверное повышение минерализации костной ткани.Однако,при этом усилилась и стронциевая интоксикация,вызвавшая падение массы тела.Это объясняется тем,что вследствие сходства физико-химических свойств ионов Са и ЗЬ и повышенного содержания последнего в корме,СаСБ начинает функционировать в качестве переносчика 5 г через эпителий кишечника.способствуя преимущественному усвоении этого элемента.

60

40

N

»- 20

В

о. 0

Ё

20

«

х N 40

*

< 20

<-><

шш

ош 0

36

л

»- О о 32

28

со

оо

24

1 1 < > 1 О

т т t

П

А

| •

> >

* Т

Рис.2.Действие витамина X) з и его аналогов (390 пмоль/ сут) на недельный прирост массы тела,СаСБ слизистой оболочки кишечника и зольность кости в зависимости от содержания в рационе.

° Ъ 5 I ?

о-ОР • -ОР»Бг

1

I

О

о

г

24,25(0Н)2ЭЗ на фоне избытка стронция ке оказал антирахитического действия,что подтверждает необходимость Зк-гкдроксилиро-вания стероида перед проявлением биологического действия.

По-видимому,все кальцитрнолзависимые процессы в организме

»

являются,в определенном смысле,зависимыми и от 24,25(0Н)2£>3 который обеспечивает тонкую модуляцию действия 1,25(0Н)21>3. 24,25(0Н)21> 3 обнаруживается в крови даже при недостатке 25((

Можно сделатьеще одно заключение о функциях 24,25(0H)2t¡ Полученные данные позволяют цровести-аналогию с "грубой" /1,25(0Н)2Э 3/ и "плавной" /24,25(0Н)2ЬЗ/ регуляцией . обме! Са.Усиление синтеза кальцитриола,скорее всего с помощью 1ГГГ i качестве основного стимула,Происходит в периоды резкого возрг тания потребности организма в Са (рост,беременность и т.п.),£ необходимый базальный уровень активности витамин- -зависимь процессов обеспечивается 24,25(0Н)2Х> 3,превращающегося в I,24,25(0H)3D3 под контролем того же фермента,что катализирз синтез 1,25(0Н)21>З.Тригидроксиметаболит,подобно кальцитриолз обладает,как известно,меньшим сродством к витамин 2К связывак щему белку крови,что способствует повышению доступности I-0H-' аналогов к эффекторным механизмам.С другой стороны,1,24,25(ОЕ с меньшим,чем у гормональной формы сродством к рецептору,вызи ет и менее выраженные биологические эффекты.

Следует подчеркнуть и еще один аспект данного вопроса. Бл годаря 24-гидроксилироваюго не только предупреждается гиперяр дукция 1,25(0Н)2ЭЗ,но и обеспечивается ослабление е-е во'змоян отрицательных последствий (см.раздел 2.5.).

2.2.."еханизм повышения кальциемии под действием витамина 1> з и I,25(0H)2l>3.

В качестве источника повышения уровня Са в крови рахитичн животных после введения 1,25(0Н)2ЭЗ в тот период,пока Са СБ е не синтезируется,обычно рассматривалась костная ткань /ТаелЬс

(зт? /.

"В проведенном оште,рахит у 4-хнедельных вдплят характер зовался гипокальциемией,нарушением минерализации кости,отсутс ем в слизистой кишечника СаСБ.Перевод птиц на рацион,содержащ 100 МЕ/кг витамина з ослабил,а рацион с 500 МЕ/кг холекаль: ферола привел к излечению рахита.

В скелетных мышцах Э -авитаминозных цыплят обнаружено высокое содержание Са,в 1,6 раза превосходящее контрольный ypi

вень .Доза витамина Л) з в 100 МЕ/кг корма снизила содержание Са в мышцах,но не до нормального уровня.Изучение динамики содержания Са в мышцах показало,что разовая инъекция 1300 пмоль 1,25(0Н)2Х>3 вызвала резкое падение этого показателя через 3 часа (рис.3).Параллельно возрастала концентрация 0а в крови.В слизистой оболочке кишечника стали выявляться лишь через 6 часов, В случае введения витаминаТ> з динамика рассмотренных параметров была аналогичной,однако все эффекты развивались медленнее.

Часы

Рис.3.Снижение содержания Са в шщах рахитичных щшшт

после разового в/м введения 1300 пмоль 1,25(0Н)21>3.

Анализ кривых на рис.3 свидетельствует,что повышение кальци-емии происходило раньше,чем стимуляция всасывания Са в кишечнике. Исходя из того,что скелетные мышцы составляют примерно 2Ъ% от массы тела цыпленка,можно подсчитать,что за первые 6 часов после инъекции 1,25(ОН)23) 3 в кровь перешло около 2,5 мг Са.что достаточно для подъема кальциемии.и обеспечения начальных стадий минерализации кости.Позднее,поступление Са обеспечивается СаСБ из экзогенных источников.

Механизм описанного' феномена неясен.Можно предположить,что эффект не был опосредован через рецепторшй аппарат,а связан с

изменениями проницаемости мембран.

Таким образом,скелетные мышцы могут выполнять роль истот повышения кальциемии после введения витамина Т> з и 1,25(0Н)2 рахитичному животному.

2.3.Биологическая активность синтетических I -ОН-производных витамина з

Сравнение биологической активности 1,25(0Н)21>3 и 1<*(0Н)3 показало,что последний активнее,в отношении подавления гкперпа тиреоза,что совпадает со мнением о более длительном сохранена эффекта L/(0H)I>3 после прекращения его введения по сравнению кальцитриолом А т. орп t¿ о/-, ¿5 F6 /.В максимальной дозе прир ный аналог вызвал большую стимуляцию синтеза СаСБ.чем синтеют кий стероид,что,вероятно,связано с необходимостью гидроксилиро вания последнего в 25-м положении.Принципиальных различий в би логическом действии I^(0H)D3 и 1,25(0Н)2ЭЗ у цыплят мы не наблюдали.

Биологическое действие 5,6-транс-1,25(0Н)23>3 у птиц .оказ лось существенно ниже,чем у кальцитриола.Очевидно,для проявлен высокой активности необходима 5,6-цис конфигурация кольца А,ха рактерная для природных витаминов О и их метаболитов.Определен ную функциональную роль в молекуле,видимо,играет стереохимичес кая позиция метиленовой группы у Сjg,которая изменяется при 5,6-транс-изомеризации.Следует подчеркнуть,что активность 5,6-транс-1,25(0Н)2Л)3 в нашем эксперименте была пониженной в равн мере относительно всех изученных органов-мишеней.

Более интересными оказались результаты изучения 1-бутидрат Io¿(0H)£> з.Нам впервые удалось показать наличие у этого оригинального соединения биологической активности,превосходящей по ряду параметров гормональную форму витамина Т) з (синтетический аналог).Показано,что при парэнтеральном введении,когда нивелир; ются различия во всасывании L¿(0H):D з и его эфирной формы,продолжительность биологического действия разовой дозы последней увеличивается по крайней мере в три раза (рис.4),что благоприятно сказалось на изученных биохимических показателях к прирос

массы тела.

Са СБ, мкг/мг белка 100 "

1 3 6 9 дни

□ иОНРз

Ц 1-бутират-1.гОН 03

□ о3

Рис.4.Содержание СаСБ в слизистой оболочке кишечника в различное время после разового в/м 'введения рахитичным"цыплятам 3250 пмоль витамина Ъ з,1-бутират-М0Н)В3 и М0Н)ЛЗ з.

Пролонгированность действия 1-бутират-1</(0Н)Г) з сравнительно с 1Л0Н)Г>з можно объяснить более медленным катаболизмом и большей устойчивостью в организме эфирной формы по сравнению со свободной.

2.4.Действие 1Д0Н)Вз и 24,25(0Н)2Г>3 на иммунную систему.

Как и в опыте с природными дигидроксиметаболитами,введение 1<Д0Н)ИЗ и 24,25(0Н)2Е>3 одновременно характеризовалось синергизмом эффектов.С другой стороны,24,25(0Н)2Г>3 ослаблял или полностью снимал отрицательное действие токсических доз аналога гормональной формы холекальциферола на прирост массы тела.пре-

Таблица 2,..Действие аналогов витамина Из на созревание лимфоцитов сумки Фабрициуса у цыплят.

Группа,пре- Доза, парат пмоль Лимфо- Пролим-бластыД ^оцитн, Зрелые лимфоциты (боль- шие+средние), % Малые лимфоциты, $ Относительная масса сумки Фабрициуса, г/100 г массы тела

I.Контроль(рахит) - 20 13 55 12 0,28+0,02

2.b¿(0H)í>3 160 10 24 48 18 0,34+0,09

3.-"- 650 13 16 ' 61 10 0,42+0,02

4.-"- 1300 13 18 57 12 0,45+0,04

5.24,25(ОН) 2 03 160 13 19 52 16 0,33+0,03

6.-"-. 650 12 16 54 18 0,31+0,03

7.-"- 1300 8 18 53 21 0,37+0,03

8.1^(ОЮОЗ + 160 А 24,25(OH)2D3 160 + 2 6 55 37 0,37+0,05

9.-"- 650 . 160 + 13 18 46 23 0,36+0,03

10.-"- 650 . 650 + 8 13 45 34 0,38+0,03

II.-"- 650 . 1300 + 4 7 47 42 0,35+0,03

12.-"- 1300 . 1300 + 2 4 44 50 0,38+0,04

I3.D з 650 3 2 40 .55 0,37+0,Oi

дупреждал гиперкальциемию и др.

1>-витаминный статус существенно влиял на относительную массу сумки Фабрициуса (табл. ).Этот показатель для рахитичных цыплят составил 1Ъ% от нормы.Ь>г(0Н)1> 3 в дозах 650 и 1300 пмоль вызвал ложную гипертрофию сумки.24,25(011)23)3 способствовал нормализации ее массы,а в сочетании с Ьс.(0Н)Х>3 ослаблял способность высоких доз последнего стимулировать гипертрофию органа.

В отличие от массы,динамика цитологической картины сумки Фабрициуса была более сложной.Рахит характеризовался задержкой созревания лимфоцитов на стадии лимфобластов.Миндальная доза 1е<.(0Н)Г>з стимулировала повышение числа малых лимфоцитов,не достигшего, однако, уровня интактных птиц.Повышение дозы Ь*(0Н)1> з до субтоксической и токсичнской вызывало падение числа малых лимфоцитов на фоне ложной гипертрофии сумки.Эффект 24,25(0Н)21)3 на созревание В-лимфоцитов также зависел от дозы.

Какие факторы имели решающее значение в процессе созревания лимфоцитов в наших опытах? Определенное значение в этом могло принадлежать Са и ПЗТ /Ргт-г^ с*1- >/.ПТГ играет ведущую роль в транзиторном повышении кальциемии,которая является одним из звеньев цепи событий,связывающих действие антигена с пролиферацией клеток в лимфоидных тканях /Ре1е.х^,Те*>«и1юи ^

Наибольший интерес представляют данные о совместном введении аналогов витамина 1>з на сотношение лимфоцитов,находящихся на разных стадиях созревания.В целом,можно сказать,что характер влияния стероидов на созревание В-лимфоцитов был аналогичным тому,что наблюдалось в отношении показателей минерального обмена.

Следовательно,для оптимальной регуляции как минерального обмена,так и функций иммунной системы в организме необходимо введение по крайней мере двух основных дигидроксилированных метаболитов холекальциферола.Эти факты свидетельствуют об универсальном характере взаимодействия 1,25(0Н)2ЭЗ и 24,25(0Н)2Е>3 на уровне различных систем организма.

2.5.Оптимизация антирахитического действия 1°с(0Н)£> з и 24,25(0Н)21>3.

Планируемые клинические испытания препаратов ЬЧОЩ^З и 24,25(0Я)21)3 поставили на повестку дня необходимость более де-

тального изучения их токсического действия,а также выявления условий для достижения макисмального терапевтического эффекта.

На рис.5 показаны относительные величины 12 параметров,сс поставленных с данными цыплят,получавших 650 пмоль витамина35 (норма).Этот рисунок позволяет сделать два вывода..Во-первых, по токсичности изученные вещества в порядке убывания можно пре ставить в виде ряда: 1<Д0Н)Ъ 3 24,25(0Н)21>З.Во-вторы

качественно,токсическое действие 24,25(0Н)2Т)3 а 0Н)Хз 3 на показатели обмена Са и органов иммунной системы было одинаковы

Р ™иУС* ПРИВЕС

03

1«: (ОН) Оз 24,25 (ОН)2 Оз

Рис.5.Влияние витамина Т> з,М0Н)Э з и 24,25( ОН) 21) 3 в дозах 390000-195000-390000 тюль соответственно.Показатели для интактных птиц приняты за 100^ и обозначены внешней окружностью.Символ Р обозначает диаметр лимфоидного фолликула соответствующего органа.

Какова роль скелета в развитии гиперкальциемии при интокс; кации витамином Э и его метаболитами? Падение массы и зольное ти кости свидетельствуют о ее резорбции.Однако,индуктором этогс процесса не обязательно является метаболит (метаболиты) холека; циферола.Вероятно,мобилизация Са из скелета происходит в резул!

тате влияния ПТГ,секретируемого гипертрофированными ПЩЕ (рис.5). Пониженная масса кости у птиц,получавших Ь<(0Н)1>з,является отражением торможения роста скелета (растущие животные!),о чем свидетельствует сниженная длина б.берцовой кости.

Наиболее адекватной нам представляется точка зрения,в соответствии с которой при гипервитаминозе I) костная ткань теряет способность к минерализации вседствие подавления функций остеобластов (резкое снижение активности ЩФ,см.рис. 5) и дех1ствия другое факторов.

Если токсические дозы Ь<(0Н)1> з|и 24,25(0Н)2£>3 характеризует однонаправленность действия на изученные параметры,лишь выраженного в различной степени,то при введении нарастающих от физиологических до .субтоксических количеств стероидов особенности динамики эффекторных процессов различались.Так,в отличие от витамина I) з и 24,25(0Н)2£> 3, 1^(0Н)Е> з характеризуется весьма узким диапазоном терапевтических доз,что представляется закономерным.При введении последнего в качестве основного источника витамина X) з организм лишается возможности регулировать некоторые процессы соответственно своим потребностям,поскольку в подобной ситуации "не срабатывают" основные элементы системы контроля синтеза активного метаболита холекальциферола.

С этой точки зрения становится понятным тот факт,что яри введении Ь/(0Н)Оз птицам,обеспеченным витамином з,токсичность аналога повышается.

Указанные обстоятельства дают основания для вывода о том, что с лечебной целью 1о4(0Н)£з следует назначать лишь при наличии показаний,не устраняемых витамином ,во избежание токсических эффектов.Стероид не целесообразно применять для профилактики рахита.В отличие от других витаминов,ошибки в клиническом применении оксидевита могут иметь такие же тяжелые последствия,как при передозировке некоторых других гормональных препаратов.

В предыдущих разделах уже говорилось о синергизме действия основных дигидроксиметаболитов витамина Л) з в отношении параметров кости.Оба препарата взаимодополняют друг друга.Сочетанное введение 162 или 650 шлоль 24,25(0Н)2£3 с 65 пмоль 1ы(0Ы)1^3 значительно услилило биологическую активность дигццроксиакалога.

С другой стороны,24,25(0Н)22>3 достоверно (Р< 0,01) ослаблял угетакхцее действие 1^(0Н)В з на активность ЩФ.что позволяло под держивать этот показатель на уровне тэкоеого интактных .дтиц.К i му же,у цыплят,получавших оба стероида,произведение концентращ Са х Рн (mi$> х мг%) сыворотки крови превышало 75,в то время,Kai от 24,25(0Н)23)3 - только 53.Это и явилось причиной недостаток ной минерализации органического матрикса кости у птиц,получавпи дигидроксиметаболит.Необходимо было дополнительное действие дрз гого метаболита /1,25(0Н)21> 3 или КОН)£>3/,который бы обеспечил насыщение крови минеральными веществам.

В заключение подчеркнем интересный факт: оптимальным cooti шением вводимых 3>40Н)1>з и 24,25(0Н)22> 3 оказалось 1:10,что с< падает с соотношением количеств 1,25(0Н)2£> 3 и 24,25(0H)2D 3, синтезирующихся за сутки в организме человека

/.Полученные результаты позволяют говорить о 24,25(0Н); как об антагонисте 1,25 (ОН) 2 £3, подобно тому,как ПТГ и КТ.буд антагонистами в отношении концентрации Са крови,дополняют дейс: вие друг друга на уровне разных систем и оба необходимы для жизнедеятельности.

3.КЛИНИЧЕСКИЕ НАБПВДЕНШ.

3.1.Лечение гиперфосфатемии у больных ХПН

В течение двух лет изучалось действие ЗСС у больных ХПН.В отличие от гемодиализа,использование ФСС дозволяло достичь неО' ходимый уровень фосфатемии.Эффект развивался в среднем через 3 дней после начала лечениякоторое было безрезультатным лишь у 4 пациентов

ФСС в качестве энтеросорбента Рн была использована в тера истинной фосфатурии у больной с коралловидными почечными камня

Абсолютная непереносимость была отмечена у пациентов,кото были особенно чувствительны к антацидному действию смеси.У 6 б ныхразвивалась гиперкальциемия,сопровождавшаяся кожным зудом.

Учитывая токсичность алюминия,мы солидарны с мнением /S'eA xi f Сд7з / онеобходимости,насколько это возможно,снижать до сорбентов Рн,содержащих алюминий.Очевидно и другое - полный от от последнего и использование только СаСОз для лечения гиперфо

фатемии не реален из-за гиперкальциеши, которая была проблемой у наших больных,получавших половину от рекомендуемого при таком подходе количества препарата Са.

Назначать препарат при наличии показаний следует еще до начала- лечения ХПН гемодиализом.

3.2.Клиническая апробация препаратов оксидевит /ЪД0Н)Ъ з/ и диоксивит /24,25(0Н)2Х>3/.

ХПН.Лечение гемодиализом.Примерно у половины больных действие оксидевита выражалось в ослаблении и полном прекращении клонических судорог и болей в мышцах конечностей,повышении работоспособности. В отношении уменьшения болей в костях препарат был более эффективен при остеомаляции с признаками гиперпарати-реоза.

К наиболее ранним биохимическим проявлениям действия оксидевита относится повышение концентрации Са крови,отмечалась тенденция к повышению фосфатемии.Падение активности ЩФ сыворотки крови происходило,главным образом,за счет костного изофермента (рис.6.).

ШФ, е/л

Рис.о.Динамика активности костного изофермента" у

19 больных ХПН под влиянием лечения оксидевитом.

Динамика активности ЩФ - важнейшего диагностического показателя фиброзного остеита (гилерпаратиреоза) при ХПН - согласуется с результатами рентгенологического исследования.Однако,до( татчоные основания говорить о способности црепарата стимулиров; рентгенологически верифицированную реминерализацию скелета имеются только для одной больной.Усиления метастатической кальциф: кации мы не наблюдали.

Женщины оказались более чувствительными к действию ЬаСОН)1 С другой стороны,почечная остеодистрофия у женщин выражена сша нее,чем.у.Мужчин.Вероятно,повышенная чувствительность женщин с ХПН к гиповитаминозу ЛГ) связана с нарушением секреции и функций половых гормонов.

ХПН.Больные после трансплантации почки.получавшие оксидев) отмечали ослабление болей со стороны опорно-двигательного аппа] та.Прекращение приема препарата на 2-4 недели приводило к возо< новлению болей.Этот факт представляется закономерным,т.к. на ф( не непрерывной кортикостероидной иммуносупрессии лечение окси-девигом имеет характер заместительной терапии.

Лечение больных с далеко зашедшим асептическим остеонекро-зом не дало клинического улучшения. ¡,

У всех больных развивались положительные изменения биохим] ческих показателей: повышение кальциемии и суточной экскреции Са с мочой,отражавшие усиление всасывания катиона в кишечнике, где соответствующая транспортная система была подавлена иммуно-супрессантами /Сиьс!^ , /.

Для анализа динамики показателей обработки Рн в нефронах были отобраны 16 пациентов,у которых на протяжении 6 месяцев т< рапии оксидевитом клиренс эндогенного креатинина был стабильны! и схема иммуносупрессии не менялась.Для большинства больных бы: характерной стабильность или некоторое уменьшение экскреции Р] с мочой.Данный факт можно рассматривать как свидетельство' улучшения утилизации Рн в организме,поскольку антифосфатурическое действие препарата развивалось на фоне повышения ТРР и снижена фосфатного клиренса.

Выявленные изменения в обмене М^ согласуются с сообщениям] о способности 1,25(0н)203 стимулировать абсорбцию М^ в кишечнике /Кгер е^то^ / .

Стероидный остеопороз.Эффективность оксидевита у больных бронхиальной астмой была намного большей,чем при системной красной волчанке и ревматоидном артрите.Лечение пациентов с бронхиальной астмой позволило достичь столь высокого уровня' реабилитации,что удавалось отменить анальгетические препараты.При других патологических состояниях,рассматриваемых в данном разделе, доза последних уменьшалась,но. без полной отмены.

Из объективных параметров наиболее выраженным изменениям подвергался уровень фосфатемии (повышение),а также экскреции минеральных веществ с мочой..После, назначения-Оксидевита кальциу-рия повышалась,причем улучшение клинического состояния коррелировало с подъемом экскреции Са с мочой.Особенно хорошим клинический эффект был у пациентов с гипокальциурией.у которых нормализация этого параметра позволяла прогнозировать положительный исход лечения.

Учитывая постулируемую рядом авторов с-Ь /

спосбность 24,25(0Н)2 3 повышать тубулярную реабсорбцию Са, десяти больным,из них 5 - с гиперкальциурией,назначали диокси-вит по 20-30 мкг в сутки.Объективные показатели под действием стероида не изменились,хотя у одной больной уменьшились боли в костях.Наши данные не позволяют определенно говорить о терапевтическом действии диоксивита и согласуются с сообщением об отсутствии эффекта от 60 мкг/сут 24,25(0Н)2£>3 у больных после пересадки почки,получавших преднизолон и азатиоприн /ГгГ-ег/€аи(/г.т. £-~Ь

Определение содержания в сыворотке крови 25 (ОН)ВЗ у больных бронхиальной астмой выявило признаки X) -витаминной недостаточности,т.к. концентрация метаболита холекальциферола составляла 6,3*2,2 при норме 12-62 нг/мл.Этот факт объясняется,скорее, недостатком инсолчции (зимнее время года.длительное пребывание в помещениях стационара),чем нарушением гидроксилирования витамина I) в печени.Через 2 недели лечения оксидевитом уровень 25 (ОН)Л) 3 в крови возрос до 57,9*21,4 нг/мл.

Проведенные исследования не выявили отрицательного влияния оксидевита на выделительную функцию почек.Ш не склонны поддерживать точку зрения ряда участников длительной дискуссии в литературе, что Ь<(0Н)1) 3 ускоряет падение выделительной функции

почек при нефритах.

Достменопаузальный остеопороз.Все больные при первом обрг нии предъявляли жалобы на выраженные боли в отдельных костях I по всему скелету,скованность и огранические объема движений, вплоть до почти полной адинамии (4 больных).патологические пе] ломы,снижение трудоспособности и т.п.

Рентгенологические исследования,проведенные 2 года после начала систематического наблюдения и лечения у 25 больных коне тировали затухание (торможение) патологического процесса в кос Большая часть больных практически не предъявляла -к этому време прежних жалоб,отмечая значительное ослабление болей,улучшение психо-эмоционального статуса. I

Особенно эффективным было применение комбинированной терг пии,о чем говорит динамика экскреции гидроксипролина с мочой: через 2 года этот показатель у больных,получавших оксидевит,у1 с 93 до 74 мг/сут,а при сочетании с эстрогенными препаратами -с 97,3±20,1 до 45,7-10,8 мг/сут.

Успешное использование эстрогенов и с инт отческого аналоге гормональной формы витамина С цри лечении постменопаузальногс остеопороза обусловлено двумя важными аспектами действия эстрс нов: влиянием непосредственно на процессы метаболизма выкоси ткани и на обмен витамина Х> -Как свидетельствуют наши данные, известная спосвбность эстрогенов стимулировать синтез 1,25(0Н) не является единственным фактором,способствующим лечению остес порэзаЛрием оксидевита приводит к быстрой стимуляции всасыва! Са и Рн в кишечнике.Комбинированное применение оксидевита с эс трогенами способствует лучшей утилизации минеральных веществ, поступивших из кишечника,что подтверждается положительной динг кой показателей обработки Рн в нефронах.В наших наблюдениях ш нический эффект был достигнут благодаря применению тех соедине ний,синтез которых нарушен при постменопаузальном-остеопорозе: КТ,1,25(0Н)2£> 3 и эстрогенов,но не 24,25(0Н)21>3 ■с-Ь оХ.^Э?^" /.Несомненно,действие эстрогенов на минеральный с мен реализуется во взаимодействии с другими гормонами,что объя няет неэффективность использованных нами подходов к лечению ос патий у больных с посткастрационным синдромом.

Как известно,величина кальциурии является важным показать лем в комплексе мероприятий по диагностике характера остеопат!

/■Н. а /,Цри наличии грубых поражений ске-

лета на фоне гиперкальциурии эстрогензависимый ее характер устанавливается, основываясь на факте снижения выделения Са с мочой после назначения препаратов эстрогенов.Однако,при остеопорозе с нормо- и,особенно,гипокальциурией оценить зависимость остеопатии от эстрогенов рассмотренным путем не удается,т.к. кальциурня существенно не изменяется.

Суть предложенного нами способа диагностики постменопаузаль-ного остеопороза состоит в том,что больным с гипокальциурией назначают оксидевит для повышения зкскреции -Са с мочой-до-верхней границы нормы или некоторого ее превышения,д затем оцениваются изменения кальциурии после назначения эстрогенов: существенное (не менее 5 ммоль) падение кальциурии свидетельтсвует в пользу эстрогензависимого характера остеопатии.Использование пробы с ок-сидевитом и эстрогенным препаратом позволяет патогенетически обосновать назначение больным половых гормонов.

Старческий остеопороз.В отличие от других видов патологии, рассматриваемых в настоящей работе,больше старческим остеопо-розом характеризовались особенно высокой эффективностью лечения оксидевитом.Клиническое улучшение состояния больных сопровождалось нормализацией (повышением) суточной экскреции Са с мочой, что косвенно подтверждает наличие у этих больных вторичной О -витаминной недостаточности.За 6 месяцев лечения экскреция гид-роксипролина с мочой снизилась с 86,5+20,4 до 42,3+17,8 мг/сут.

Нам не удалось наблюдать повышения концентрации в крови КТ в ответ на лечение оксидевитом,несмотря на подъем содержания Са с 2,28+0,16 до 2,60+0,08 ммоль/л.

Наблюдения у больных старческого возраста позволяют заключить, что витамин £> -зависимые нарушения в патогенезе остеопороза у них тлеют больший "удельный вес",чем при постменопаузаль-ном остеопорозе.Действительно,с возрастом зависимость всасывания Са в кишечнике крыс от эстрогенов падает £ /.

Это частично объясняет столь высокую эффективность лечения стра-ческого остеопороза.

Трое пациентов до назначения оксидевкта получали дпоксквит по 18-20 мкг/сут в течение 1-2 месяцев.Однако,изученные показатели и субъективное состояние больных не изменилось.Это,видимо, связано с тем,что в старческом возрасте нет дефицита 24,25(0Н)2ЬЗ.

У старых крыс на фоне подавления продукции Т,25(0Н)21>3 возрас тает синтез 24,25(0Н)2Л> 3. /Аъ^-с-сеН ** <&>-х УЗ? г. /.

Отсутствие клинического эффекта у обследованных в нашей I • боте больных может быть объяснено неадекватностью дозировок,а также возможной видовой специфичностью 24,25(0Н)2БЗ,более акт ного у животных. В экспериментальной части данной работы препарат испытывался на растущих птицах и показал определенную биол гическую активность,тем самым подтвердив известный факт о боле высокой чувствительности молодых животных к' витамину Ъ .

Синдром малабсорбдии.Из объективных показателей больных к концу первого года лечения повысились кальциемш,фосфатемия,ре ко упала активность ЩФ (с 485+96 до 285+103 Е/л),причем на 64, 24,8$ за счет костного изофермента.Подъем экскреции Са и Рн с мочой происходил)медленнее,чем при других остеопатиях.Следует подчеркнуть,что данные больные нуждались в самой большой дозе оксидевита-до 6 мкг/сут,вероятно,вследствие неполного всасывай препарата в кишечнике.

V VII IX XI I III 1985 г. 1986 г

Рис.7.Динамика биохимических показателей больной с осте маляцией на фоне синдрома малабсорбции в ходе лечен оксццевитом.Доза препарата показана над осью абсцис

На рис.7 показана динамика некоторых показателей минерального обмена у больной 43 лет,в течение 10 лет болеющей хроническим энтероколитом.

Следует отметить,' что в результате лечения оксидевитом степень реабилитации больных с малабсорбцией и остеомаляцией не достигала такого высокого.уровня,который отмечался при терапии остеопороза.Это закономерно,потому что поражение скелета при патологии кишечника связано не только с нарушением всасывания минеральных веществ.

Врожденные -рахитоподобные заболевания.Исходные биохимические данные у детей с ВДЗР были типичны для данного заболевания: концентрация Са сыворотки крови 1,84-2,01, а Рн - 1,14-1,28 ммоль/л,активность ЩФ - 387-421 Е/л.К концу шестого месяца лечения оксидевитом уровень кальциемии нормализовался,содержание Рн повысилось на 11-24^,а фосфатазная активность упала до 274311 Е/л.

Эффект терапии этих пациентов был весьма наглядным - через 1-1,5 месяца дети начали самостоятельно вставать на ноги.позднее-ходить.

С помощью оксидевита не удавалось полностью нормализовать минеральный обмен у детей с фосфатдиабетом.Однако,положительный эффект препарата свидетельствует о целесообразности его применения в сочетании с о-фосфатами,лактозой,препаратами при данной патологии.Так,за год лечения скорость роста одной из больных (14 лет) увеличилась в два раза.Динамика активности ЩФ сыворотки крови была такой: П.03.85 - 462; 27.08.86 - 218;8.09.88 -176 Е/л,при верхней границе нормы 170 Е/л.

Действие на иммунную систему.Наблюдения у больных хроническим бронхитом,получавших оксидевит ,позволили показать,что для изученных показателей клеточного иммунитета была характерна обзая особенность динамики,заключавшаяся в приближении к норме независимо от типа исходных отклонений (рис.8),т.е.речь идет об имму-номодулирувдих свойствах ^(ОЮи 3.

При сопоставлении данных о влиянии 1Л0Н)0 3 на обмен Са и Рн и иммунную систему человека выявляется определенный параллелизм в характере получэных результатов.

1у.%

е-рок.%

35 30 25 20

/„_/______50

1 40

77

аЕ-РОК.% тче-рок.%

\

\

в-рок.%

тре-рок. %

2МКГ 4 МИ"

«1 < ш ш X X

2 ш X X <4

2 тег 4М1:г 5 ¡3 ¡5

XX XX

Рис.8.Влияние оксидевита на показатели иммунной системы больных хроническим бронхитом.Обозначения: Ьу -лимфоциты,Е-РОК-общие розеткообразующие клетки, аЕ-РОК-активные розеткообразующие клетки,В-РОК-В-лшфоциты,ТЧЕ-РОК-теофиллЕнчувствительные Т-лим-фоциты,ТРЕ-РОК-теофиллинрезистентные Т-лимфоциты . Пунктирными линиями показан диапазон нормальных значений перечисленных параметров.

Проведенное у больных хроническим бронхитом г бронхиальной астмой изучение влияния оксидевита на показатели специфзче! кой и не специфической иммунной защиты у человека ¡ь

дало новую информацию,имеющую принципиальный характер.В отличие от ряда работ по нммунотропным эффектам 1,25(0Н)2Е>3 ^'¿со / я.Ьсй^еъз^ ; /,где,в основном,прояв-

лялось угнетающее на большинство соответствующих параметров действие,в условиях целого организма 1</(0Н)Х>3 проявил выраженную иммуномодулиругащую активность как в отношении клеточного,так 2 гуморального иммунитета.Выраженность иммуномодулирующих эффектов оксидевита была большей у больных с х> -гиповитаминозом,о степени которого судили по концентрации 25(0Н)х>3 в крови.Оптшальной из изученных была доза 2 мкг/сут препарата,т.е.равная средней суточной дозе,примененной нами при лечении остеопатии.

Пока преждевременно говорить о конкретных иммунологических показаниях к назначению метаболитов витамина Т> .Однако,следует помнить » об их иммунотропных эффектах у пациентов с 3) -витаминной недостаточностью и патологией минерального обмена.

Таким образом,подобно ПГГ,обладающему способностью регулировать разнонаправленные процессы (резорбция кости и стимуляция образования остеоида ) ,1,25(0Н)2Г>3 /1<*.(0Н)О 3/ может модулировать стимуляцию и подавление иммунных реакций,тормозить минерализацию и оказывать анаболическое действие на скелет."Логику" витамин X) -зависимых процессов в организме можно понять лишь с эндокринологических позиций.

В заключение отметим,что несмотря на высокую терапевтическую эффективность оксидевита,разовыми введениями 1*(0Н)Е>3 трудно полностью воспроизвести естественные эффекты кальцитриола во всем их многообразии и динамике.История создания фармакологических препаратов инсулина и их клинического применения является примером подобной ситуации.

ВЫВОД!

I.Результаты оценки биологического действия природных аналогов холекальциферола в дозах 19,5-390 пмоль у рахитичных цыплят позволяют представить активность стероидов в виде следующего убывающего ряда: 1,25(ОН)23)3^25(ОН)35 3^1,24,25(0Н)31>3^ 24,25(0Н)2|)З.На фоне высокостронциевого рациона антирахитическую активность проявили только 1-0Н-аналоги (включая Ьк(0Н)15 3),

причем действие 24,25(0Н)2Е> 3 было самым слабым.В отличие от других препаратов,для 1,25(0Н)21)3 /Ы(0Н)1) 3/ характерно торможение остеогенеза при дозировке 195 пмоль и выше.По остальнк изученным показателям биологического действия дериваты витамш-1) з отличаются количественно.

2: I) -авитаминоз у цыплят характеризуется избыточным нал лением' Са в скелетных мышцах несмотря на глубокую гипокальциеи Введение 1,25(0Н)2"Е>з пли витамина з вызывает освобождение мышц от избытка Са и обеспечивает повышение кальциемии в тот е риод.пока СаСБ в слизистой кишечника не выявляется.Позднее,по! шение уровня Са крови обеспечивается за счет пищи.

3.1°<(0Н)Т?3 обладает антирахитической активностыо,равной таковой 1,25(ОН) 21)3. Изменение пространственной конфигурации * ца А молекулы последнего сказывается на функциях стероида: биологическая активность 5,6-транс-1,25(0Н)2ЬЗ у цыплят была пониженной относительно всех изученных органов-мишеней.По ростостимулирующему действию и спосябсности индуцировать синте СаСБ' 5,6-транс-1,25(0Н)2£>3 был в 10-12 раз,а по влиянию на ь нерализацию костной ткани - в 2 раза слабее кальцитриола.

4.Наличие остатка бутириловой кислоты при оксигруппе у С] молекулы ЬД0Н)£ 3 модулирует временные характеристики эффекте стероида,не снижая в целом его биологической активности.В слу^ в/м введения цыплятам 1-бутират-1л(0Н)1> 3 оба препарата обладг ют примерно одинаково высокой антирахитической активностью,£ при преоральном - эфирная форма по индукции СаСБ в два раза мг нее активна,чем Ъл(0Н)Ь З.Для эфирной формы характерна пролош рованнойть биологического действия.

5.24,25(0Н)2Х>3 вызывает в организме цыплят те же эффект! что Ьа(0Н)1>3 и 1,25(0Н)2л>3,но в 2-5 раз менее выраженные ка! по действию на фосфорно-калъциевый обмен,так и созревание лимс; цитов.Обладая меньшей способностью снижать активность ЩФ (фуш ции остеобластов),24,25(0Н)21)3 с точки зрения стимуляции обрг зования остеоида у растущих птиц имеет преимущества перед МОИ) 1)3.

6.1Д0Н)ЬЗ в дозе 390 пмоль (соответствующей для витамина 1)3 суточной потребности цыпленка) и выше оказывает при в! дении рахитичным птицам токсическое действие.Источником гипер-кальциемии при интоксикации Ъ<.(0Н)Ъ 3 являются избыточное вс;

сывание Са в кишечнике,стижение утилизации катиона костной-тканью,ее резорбция.По токсичности препараты можно представить в виде ряда: И(ОН)Т) 3>1)з /- 24,25(0Н)2В з.в условиях полной обевпеченности витамином П> з различия в биологическом действии 24,25(0Н)2С 3 и 1(0Н)1»3 нивелируются,но при этом возрастает токсичность последнего.Ь<(0Н)С>3 не целесообразно использовать для профилактики рахита,вызванного недостатком витамина Х> • '

7.При совместном введении физиологических доз (до 195 пмоль) 1,25(0Н)2Х>3 или 1^(0Н)Е>3 и 24,25(0Н)2©3 последний вызывает потенцирование эффектов стероидов.Отмечается "опережающий"рост костной ткани^сравнительно с ростом всей массы тела.Оптимальным соотношением доз вводимых 1</(0Н)Т> 3 и 24,25(ОН)2X8 для нщлят является 1:10.Оказывая мощное антидотное действие,24,25(ОН)2^3 ослабляет или полностью снимает отрицательные эффекты токсических доз 1°<(0Н)1> 3 по всем изученным параметрам. Эти факты свидетельствуют об универсальном характере взаимодействия 1,2£>(0Н)2Л)3 и 24,25(0Н)22> 3 на уровне различных систем организма.

8.Лечение больных ХПН с помощью ФСС,состоящей из. гидрокси-да алюминия,углекислого Са и сорбита в большинстве случаев позволяет Эффективно корригировать фосфатемию.Назначение оксидевита больным с почечной остеодистрофией способствует повышению каль-циемии и ослаблению болей со стороны опорно-двигательного аппарата.Максимальный эффект препарата получен у пациентвв с рентгенологически подтвержденным гиперпаратиреозом.

Э.Оксидевит является эффективным лекарственным средством , позволяющим замедлить развитие стероидного остеопороза у больных после трансплантации почки и с аутоиммунными заболеваниями. Препарат стимулирует всасывание Са в кишечнике,нормализует обработку Рн в нефронах,существенно ослабляет боли в костях,что, однако,не сопровождается рентгенологически верифицированным улучшением костной структуры.Оксидевит целесообразно принимать в течение всего периода терапии глюкокортикоидами.

10.При лечении оксидевитом остеомаляции на фоне синдрома малабсорбции,старческого остеопороза,ВДЗР достигается высокий уровень реабилитации больных,а в случае фосфатдиайета - удается

замедлить развитие деформаций скелета.Максимальный терапевтический эффект оксидевита при постменопаузальном остеопорозе-с резорбтивным типом гиперкальциурии достигается лишь в сочетаь с эстрогенными препаратами.Лечение указанных патологических состояний оксидевитом имеет характер заместительной терапии.

11.Назначение больным хроническим брьнхитом оксидевита I дозе 2 мкг/сут кроме изменений минерального обмена вызывает ь дуляцию показателей клеточного'иммунитета,стимулируя их прис жение к норме независимо от характера исходных отклонений.Пор затели,находившиеся в пределах нормальных колебаний в ходе д чения практически не изменялись.На фоне иммуносупрессивной те пин кортикостероидами при бронхиальной астме оксидевит стимул ровал фагоцитарную активность лейкоцитов,а также способствовг нормализации активности лизоцима сыворотки крови.

12.Клинические испытания диоксивита /24,25(0Н)2Ь 3/ у бс ных с остеопорозом не позволили выявить лечебное действие пре парата.В то же время,наличие определенной антирахитической активности у 24,25(0Н)2Ь>3 при введении его растущим животный антидотное действие и низкая токсичность делают целесообразным продление клинических испытаний препарата,предварительно разработав лекарственную форму,обеспечивающую введение ¿олее высоких доз больным с различной патологией,включая детей.

СПИСОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕЛЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Способ лечения постменопаузального остеопороза//Авт. свидет. H37974I Совместно с Рейснер H.A..Розенталь Р.Л..Ворона И.Г..Озолиня А.Ж..Бергман A.C.

2.Действие 1,25- и 24,25-диоксивитаминов Д3 на биосинтез калышйсвязывающего белка и минерализацию костной ткани цыплят /Аез.докл.У1 конф. биохимиков Прибалтийских республик,Белорусской ССР ж Ленинграда.Рига: Зинатне, 1981. С. 475-476. Совместно с Бауман В.К. .Валшшеце 1Л.Ю." ' • - ----- •

3.Сходство антирахитического действия 1,25- и 24,25-диоксивитаминов Д3 у цыплят/Дим.фарм.журн. 1982. Jé 3. С. 19-23. Совместно с Бауман В.К. .Валиниеце М.Ю. .Розенталь Р.Л.

4.Сравнение антирахитической активности 1,25-диоксивитамкна Д3 и I -оксивитамина Д3 у цыплят//Вопр.мед.хим. 1982. Jé 2. С. 6466. Совместно с Розенталь Р.Л..Валиниеце M.D..Бауман В.К.

5.Проблемы длительной выживаемости больных на гемодиализе //Современные проблемы гемодиализа и гемосорбции в трансплантологии.Ташкент. 1982. С. 12-14. Совместно с Розенталь Р.Л.,Черневс-кис Х.И. .Смелтерс Г.Ф.

.6.The' treatment of uremic prurit i s//XVT Int.congr.of internai medicine//XIV International congress of internal medicine/ Praha: 1982. P.454. Совместно с Розенталь Р.Л..Чернеьскис Х.И.

7.Сравнительная биологическая активность витаминов Д21Й3 и их 1</-оксианалогов в организме цыплят/Дим. фарм.журн. 1982.

Jê II. С.76-81. Совместно с Бауман В.К. .Валиниеце М.Ю. .Богословский H.A.

8.Действие 1,25-,24 ,25-диоксивитаминов Д3 и I -оксиЕитачк-на Д3 при введении преднизолона у цыплят//Симп.Биохимия,фармакологическое и медицинское применение производных витаминов к других предшественников ко^ерментов.Иркутск. 1983. С.12-13. Совместно с Валиниеце М.Ю.

9.Сравнение антлрахитической активности 1,25- и 24 ,25-диоксивитаминов Д3 у цкплят//Симп.Биох1жия,с1лрмакологическое к медицинское применение производных витаминов и других предшественников коперментов.Иркутск. 1Э83. С.15-16. Совместно с Бауман В.К.

10.Similarity and differences in I,25(0H)2D3 and 24,25(OH) antirachitic effects//Vitamin Ds Chemistry,biochemistry and clin cal endocrinology of calcium metabolism/Eds. Norman A.et al.Berl New Jfork: Walter de Gruyter, 1982. P. 120Г-1203. Совместно с Баут, B.K. .Валшниеце М.Ю. .Розенталь Р.Л.

П.The effekt of vitamin D3 and I,25(OH)D3 on calcium cxmti in chick's skeletalmycle/'/Vitamin D: Chemistry,biochemistry ana clinical endocrinology of calcium metabolism/Eds. Norman A.et a. Berlin-New York: Walter de Gruyter, 1982. P. 1205-1207. СовмесТЕ с Бауман B.K. .Валиниеце М.Ю.

12.Применение оральных сорбентов для коррекции гиперфосфач мии при хронической почечной недостаточности/Дез. докл. конф.Белс русской ССР "Сорбционные метода детоксикации в клинике". Минск.

1983. С. 65. Совместно с Розенталь Р.Л..Черневскис Х.И..Соболев В.В.,Шульман О.М.'.Гредитор Х.С.

13.Глюкокортикоиды и регуляция обмена кальция// Тер.архив.

1984. В 3. С I37-I4I.

14.Современные представления о механизме действия Са-регу-лирующих гормонов/Дез.конф.Х эндокринологов.Вопросы эндокринолс гии. Тарту. 1984. С. 135-136.

15.Разработка оральных сорбентов неорганического фосфора// Сорбционные методы детоксикации и иммунокоррекции в хирургии. Мат.II Всес.конф. Ташкент: Медицина Уз.ССР. 1984. С. 265-266. Совместно с Розенталь Р.Л.,Соболев В.В..Черневскис Х.И.

16.Лечение гиперфосфатемии при хронической почечной недостаточности// Тер.архив. 1984. 7. С. 64-65. Совместно с Афанасьева Г.А.,Шульман 0.1.1. Дусе Л.Я. .Розенталь Р.Л.

17.Vitamin D3 and 1,25-dihydroxyvitamin D3 stimulate the skeletal muscle-calcium mobilization in rachitic chick's// Arch Biochem.Biophys. 1984. Vol. 231. N. I. P. 2II-2I6.Совместно с

Бауман B.K. .Валиниеце М.Ю.

18.Длительное применение препарата "оксидевит"(1 -оксихоле кальциферол) у больных после трансплантации почки// Трансплантация почки.Тез.Ш Всес.симп. Рига. 1984. С. 48-49.

19.Диагностика нарушений фосфорно-кальциевого обмена/Д1ето, рекомендации. Рига: МЗ Латв.ССР. 1984. 19 с. Совместно с Розенталь Р.Л.

20.Коррекция оксидевитом фэсфорно-кальциевого обмена у больных после трансплантации почки/Дез.докл.Х Всес.научной конф.по транспл.органов.Трансплантация органов. Киев. 1985. С. 21-22. Совместно с Соболев В.В..Рейснер Н.А..Репников D.A.

21.Содержание цинка в плазме больных хронической почечной недостаточностью до и после трансплантации почки/Дер.архив. 1985. № 6. С. 101-103. Совместно с Шульман О.М..Берзинь Н.И. .Черневскис Х.И.

22.Почки и интеграция функций Са-регулирующих гормонов// Тез.докл.УИ Всес.конф.по физиологии почек и водно-солевого обмена, поев. 90-летию ср дня ровденпя А.Г.Гинецинского._Нернигов._-----

1985. С. 16. '

23.Действие препарата оксидевит(1 -оксихолекальциферол) у больных хронической почечной недостаточностью//Тез.докл.У11 Всес.конф.по физиологии почек и водно-солевого обмена,поев. 90-летию со дня рождения А.Г.Гинецинского. Чернигов. 1985. С. I90-I9I. Совместно с Розенталь Р.Л..Соболев В.В..Рябуха А.Н., Рейснер Н.А.

24.Synthesis and biological activity of Г -hydroxyvitamin D3 I-butiratе//Abstracts.Sixth Workshop on vitamin D. Italy,Me-rano. X985. P. 87. Совместно с Богословских Н.А. .Соболева Т.Е., Самохвалов Г.И..Бауман В.К.

25

•Effect of Г -hydroxycholecalciferol on patients with transplanted kidney//Abstracts.Sixth Workshop on vitamin D. Italy,Merano. 1985. P. 470. Совместно с Соболев В.В..Розенталь Р.Л.

26.Почечная остеодистрофпя и вожможности ее коррекции у больных,находящихся на хроническом гемодиализе/Дер.архив. 1986. № I. С. 105-108. Совместно с Розенталь Р.Л..Тихомирова Т.Е., Ильинский И.М.,Черневскис Х.И.

27.Сравнительная биологическая активность 1,25-диоксивкта-мина Д3 и его 5,6-транс-изомера//&ол.сЕарм.курн. 1986. !Ь 3. С. 263-268. Совместно с Валпниеце I.i.10. .Бауман В.К. .Богословский Н.А..Кисельникова Т.А.

28.Effect of I -hydroxycholecalciferol on T- and B-irmauni-ty in man//Abstracts.XXIII Congress of the EDTA; XV Annual Conf. of the EDTNA. Budapest, Hungary. 1986. P. 87. Совместно с Засппа С..Гинтере Г..Розенталь Р.

29. Effect of I -Hydroxycholecalciferol oil calcium metabolism in patients with kidney graft//АЪstracts.XXÏIT Congress, of the EDTA; XV Annual Conf.of the EDTNA. Budapest, Hungary. 1986. P. io. Совместно с Розенгаль Р.Л..Черневскис Х.И.,Соболев Б.В.

30.Клиническое изучение активности I -оксихолекальциферо-ла/Дез.докл.3-го Всес.Съезда нефрологов. Киев. 1986. T. II. С. 123-124. Совместно с Соболев В.В..Рябуха А.Н..Рейснер H.A..Розенталь Р.Л.

31.Антирахитическая активность различных аналогов витамин! Д//Научные основы витаминного питания сельско-хозяйственных животных. Тез.докл.2-го Всес.симпозиума. Рига. 1987. С. 54-57. Совместно с Валиниеце М.Ю. .Бауман В.К. .Андрушайте P.E.

32.Сравнительная оценка действия I -оксивитаиина Дд и его бутирилового эфира на минеральный обмен цыплят//Ассимиляция питательных веществ в организме животных. Рига: Зинатне. 1986. С. I09-II6. Совместно с Валиниеце М.Ю. .Бауман В.К. .Кузнецова И.Я., Богословский H.A.

33.Стабилизация течения хронической почечной недостаточности с помощью энтеросорбентов неорганического фосфора/Дрол. нефрол. 1987. Jê 2. С. 55-56. Совместно с Розенталь Р.Л.,Бицанс Я.Б..Шульман О.М.

34.Эндокринологические аспекты патогенеза и лечения ги-перкальциурии//Вопросы эндокринологии,XI,Тез.докл.Респ.конф. эндокринологов,поев.25-летию общества эндокринологов Лит.ССР. Вильнюс. 1987. С. 147. Совместно с Рейснер H.A..Рябуха А.Н., Розенталь Р.Л.

35.Диагностика,лечение и профилактика постменопаузального и сенильного остеопорозов/Л!етод.рекомендации. Рига: МЗ Латв. ССР. 1987. 12 С. Совместно с Рейснер H.A..Ворона И.Г. .Штифт А.И

36.Синтез и биологическая активность I-бутирата I -окси-витамина Дд/Дим.фарм.журн. 1987. I 7. С. 819-823. Совместно с Богословский H.A. .Бауман В.К. .Валиниеце М.Ю. .Кисельникова Т.А.

37.Действие различных доз витамина Дд, I -оксивитамина Дд и 24.25-диоксивитамина Дд на регуляцию обмена кальция в ор-ганизме//Питание и пищеварение. Рига: Зинатне. 1987. С. 53-68. Совместно с Валиниеце М.Ю..Бауман В.К..Андрушайте P.E.

38.'Биологическая активность природных метаболитов витамина Дд//Регуляция фосфорно-кальцкевого обмена в норме и патологии. Рига: ГШ. 1987. С. 66-74. Совместно с Валиниеце ы.Ю.,

Бауман В.К.,Рябуха А.Н.

39.Пятилетний опыт клинического применения I -оксивитамина Дд (оксидёвита)//Регуляция фосфорно-кальциевого обмена в норме

и патологии. Рига: РМИ. 1987. С. 146-160. Совместно с Васина С.В., Гинтере Г.Б. .Соболев В.В. .Рейснер Н.А..Жилевич А.В. .Страздань З.К., Розенталь Р.Л.

40.Некоторые аспекты патогенеза,диагностики и лечения ги-перкальциурш//Регуляция фосфорно-кальциевого обмена в норме и патологии. Рига: ШИ. 1987. С. 234-244. Совместно с Розенталь Р.Л., Рейснер Н.А. .Рябуха А.Н..

41.Clinical use ofjI -hydrojcyvitamin D3//The Fifth International congress of bone morphometry.(Interface between cell and tissue biology of bone) Niigata, Yapan. 1988. P. Г40.

42.Hypercalciuria at osteoporosis.Diagnostic meaning//The Fifth International congress of bone morphometry.(Interface between cell and tissue biology of bone) Niigata, Yapan. 1988. P. 125. Совместно с Рейснер Н.А..Рябуха А.Н..Розенталь Р.Л.

43.Иммунокорригирующие свойства и влияние на фосфорно-каль-циевый обмен оксидевита (I -гидроксивитамин Дд)//Вопр.мед.хшии. 1988. № 4. С. 104-108. Совместно с Васипа С.Б..Гинтере Г.Б.,Би-гестан В.Я.

44.Действие стронция на антирахитическую активность витамина Дд и его гидроксилированных аналогов//Вопр.мед.химии. 1988.

]ё 4. С. 26-32. Совместно с Бауман В.К..Валиниеце М.Ю.

45.Профилактика и лечение постклимактерического остеопороза //Актуальные проблемы диагностики и лечения эндокринных заболеваний.Тез. докл. 'симп.Латв.научного общества эндокринологов. Рига. 1988. Т. 2. С. 166-167. Совместно с Штифте А.К. .Крушня Г.А. .Рейснер Н.А.

46.Оптимизация антирахитического действия I -оксивитамина Дд и 24,25-диоксивитамина Дд при их совместном введении//Известия АН Латв.ССР. 1988. J* 6. С. 75-84. Совместно с Валиниеце М.Ю..Бауман В.К..Андрушайте Р.Е..Кузнецова U.K.

47.24,25-дигидроксивитамин Дд модулирует действие X -гидрокси-витамина Дд на созревание В-лимфоцитов у цыплят//Зопр.мед.химии. 1988. В 6. С. 82-86. Совместно с Смилтниекс Э.Х. .Валиниеце М.Ю., Бауман В.К.

48.Лечение тяжелого постменопаузального остеопороза//Пробл. ■эндокринологии. 1988. №4. С. 13-16. Совместно с Рейснер Н.А.,

Ворона К.Г.,Рябуха А.Н..Розенталь Р.Л.

49.Влияние 24,25-диоксивитамина Д3 на гшеркалыщемическо< действие I -оксивитамина Дд/ДшлТарм.журн. 1988. Л 12. С. I42I-1427. Совместно с Бауман В.К.»Валшшеце М.Ю..Андрушайте P.E.

50.Регуляция кальциевого обмена и гиперкальцмурия/Дер. архив. 1989. И 3. С. 132-135. Совместно с Рейснер H.A.,Рябуха А,

51.Иммунорегулирующая роль метаболитов витамина Дд//Йзвес-тия АН Латв.ССР. 1989. J£ 3. С. I09-II4. Сошестно с Еилевич А.В, Гранте Х.Я.

52.Гормональная система витамина Д/Дез. докл.III Всес.съе: эндокринологов. Ташкент: Медицина. 1989. С. 19.

53.Витамин Д.Проблемы и открытия последних лет/Д11 Всес. конф. по физиологии почек и водно-солевого обмена. Харьков. 198! С. 26-27. Совместно с Бауман В.К.

54.Действие различных аналогов витамина Д на обмен кальцш и развитие неорокальциноза//У11 Всес.конй.по физиологии почек и водно-солевлго обмена. Харьков. 1989. С. 40-41. Совместно с Ва-линиеце М.Ю.,Баклан В.К.