Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимические механизмы витамина К в поддержании гомеостаза кальция и энергетическом обмене

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимические механизмы витамина К в поддержании гомеостаза кальция и энергетическом обмене"

россшскля академия : даапсюи наук институт питания

На правах рукописи удк 577.161.5

с о к о Л ь к к ков

Андреи лк-;о-;:,ловпч

биохимические !.ехлвв® участия витамина к в поддерглкш г0ме0стазл кальция и энергетическом обмене (03.00.04 - .лпдая)

Авторе 0 срат диссертации на соискдгг'я ученой степени кандидата биолог/ оских на77:

Москва - 7УЭ4

рЩ Ой

1 Г" >- ■

Работа выполнена в лаборатории обмена витаминов и минеральных вещоств Института питания ГЛМН

Научный руководитель доктор биологических наук, профессор

В.Б.С11ИРИЧЕВ

Официальные оппонети: доктор медицинских наук, профоссор

II. Г. БОГДАНОВ

кандидат биологических наук В.Л.ДОЦКНКО

Ведущая организация: Институт биомедицинской химии РАМН

при Институте тг^ния РАМН по адресу: 109240 Москва, Устьинский проозд, 2/14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института

ттгтфйиия рамн

В

Ученый секретарь Специализированного сог>ота, кандидат медицинских 1.-.;..-.

В.М.ЖМИНЧШКО

ОБЩАЯ ХЛРЛКТЕРИСТШСЛ РАБОТЫ

Актуальность темы. Мотябсшгчоскоя роль витамина К, являидего-ся кофактором витамин K-зависимой 7-карбокоилазн, осуществляющей посттрансляционную модификацию глутэминовых остатков болков систо-мы свертывания кропи, достаточно хорошо изучена [Suttie ' J.W., 198'П. В последнее время появились датше о возможном участии витамина К в поддпржагпш гомеостаза кальция и остоогенозо. Его роль п зтих процессах может бить опосредована зависящими от него Са-связыватими белками (костимо остеокалыщн и матриксний GLa-оодоржаший Полок, рецептор гормональной формы витамина Р) I Сергеев ИЛ. 1909, Price P.A. о. а, 1985.1988]. Гогуляторноо воздействие витамин К. можот также осуществлять опосредованно через момбраны как их. природный минорный компонент [Богданов ][.]'.. Лидер В.Д., 1ЭвЬ,108С, Лидер Р..Л. I9G0; Олескин Л.В., Самуилов В.Д. 1988J. В то же время в поддержания гомеостаза кальция важная роль принадлежит реакциям энергетического обмена. Нодостаточность витамина К, сопровождаясь изменением белково-диттидного окружения мембранных ферментов знорготичоскогс метаболизма, можот оказывать влиятгие на их активность (нарушение окислительного фосфорилирова-ния и потгжение его зф)У)ктивнооти) (Погданов Н.Г., Лидер В.Л.. 1985 Л 986: Уласович И. И., Печетша М. И..1974]. Наряду с зтим в литературе описаны много'шелешшо факты снижения активности целого ряда цитоплазматических ферментов энергетического обмена (гоксоки-наза, кроатинкиназа) ]гри дефиците витамина Ii у х1гвоттшх (Матуемо U.M. с соапт.,1974; Матусис Л.1Д., 19701.

В связи с зтим по лгшоно основ'чпьТ предположение, что недостаточность витамина К можот быть одним из факторов, нарушающих нормальную регулянию кальциевого гомеостаза. Таким образом, исследование роли витамина 1С в процессах регуляции обмена кальция представляется восьма актуальным с точки зрония раскрытия . мехатзмов нарушений кальциевого гомеостаза, поиска новых подходов возможной корректировки зтих нарушений при различных заболеваниях.

Исследования проводились в соответствии с планяш 1ШР Института питания АМН СССР по томам 095, раздел I: Экспериментальное изучение, метаболических и Физиологических последствий недостаточного потребления витаминов (1905-88 гг.): П43: Изучение обмена, рецепции и механизма действия витамина D: обосноватшо применения активных метаболитов зтого витамина как иммуномодуляторов, регуляторов гтроли'!«ренин и диффоронщгрорки кмптк (7989-9Т гг.); Обще-

союзной научно-технической программой 0.30.06 "Создать и освоить производство ггродуктот! лот с кого питания и витаг.ншизировяншх продуктов на основе научных принципов рационального и сбалансированного питания", утвержденной постановлением ГК11Т СССР Л 555 от 30 октября 1985 г.

Цель и задачи исследов;.; л. Цель работы заключалась в исследовании влияния недостаточности витамина К на процессы остеогвнв-за, обмен кальция и некоторые форментныо системы энергетического обмена, участвующие в поддоркатш кальциевого гомоостаза при дефиците и нормальной обеспеченности витамином Б, а токжо в экспериментальной оценке возможности комбинированного применения витамина К и метаболитов витамина Б для коррекции нарушений обмена кальция при постменопаузном остоопорозе.

В соответствии с поставленной целью предполагалось решить следующие задачи:

1. Изучить состояние зависящих от витамина Б процессов кальциевого гомеостаза и остеогеноза в зависимости от обеспеченности организма экспериментальных животных витамином К.

2. Охарактеризовать состояние ферментных систем энергетического обмена, участвующих в поддержании гомоостаза кальция-, при дефиците витамина К

3. Изучить возможность комбинированного применения витамина К и метаболитов витамина Б для коррекции нарушений обмена кальция на модели постменопаузного остеопороза у крыс (овариэктомия)

4. Изучить и сопоставить метаболические изменения при алиментарном дефиците витамина К и введении антивитамина К - пелентана.

Научная новизна.

Впервые изучено влияние алиментарной недостаточности витамина К у крыс на обмен кальция. Показано, что пищевая недостаточность витамина К приводит к. снижению концентрации в сыворотке крови 2,5(0Н)Б, активности витамин Б 25-гидроксилазы, активного транспорта кальция и активности витаминБ зависимой щолочной фосфатазы в тонком кишочнико.

Впорвно показана роль витамина К в кальциовой регуляции сократительного аппарата сколотннх мышц крыс. Ллимоптарная недостаточность витамина К приводит к умоньшопию содержания тропонипа С на 25%, снижению сродства Со-АТРазы миофибрилл к ионам кальция и увеличению стопони ое активации этими ионами. Обнаружена избирательная чувствительность мышечного изозима растворимой креатинки-

нязы к алиментарной недостаточности этого витамина.

Впорвыо охарактеризован обмен кальция и состав костной ткани у овариэктомированных крыс после перелома большой берцовой кости.

Впервые выявлено модифицирующие действие витамина К на кинетические параметры Na,К- и спектринзависимой АТРаз посредством из-монопия белкового и литшдпого состава мембран эритроцитов.

Вперпно изучено и экспериментально доказано различие метаболических изменений при алиментарном дефиците витаMim а К и при введении антивитамина К - полентана.

Впервые сформулирована концепция о момбряноопосредовапном и об опосредованном через гормональную систему витамина D действии витамина К на гомеостаз кальция и энергетический обмен.

Научно-практическая значимость.

Полученные в работе результаты расширяют представления о роли витамина К в гомеостазе кальция, остеогенезе и энергетическом обмене и были использованы фирмой "Roche" (Австрия) при разработке в 1992 г. мульттитаминного препарата "Cal-C-Vlta", содержащего витамины К, D3, С, Bg и кальций, предназначенного для профилактики остеопорозя.

Апробация диссертации. Материалы диссертации доложены на XII Всесоюзном совещании по транспортным АТРазэм (Иркутск, 1987), 18 научной конференции молодых ученых биологического факультета МГУ (Москва, 1987), VIIT Всесоюзном симпозиуме "Биофизика и биохимия биологической подвижности" (Пущине, Т987), научной конференции молодых ученых "Медико-биологические аспекты науки о питании" (Алма-Ата, Казахстан, 1987), 7 and 9 Workshop on vitamin D (California, 1988; Florida, 1994, USA), VT Всесоюзной конференции по биохимии мышц (Тбилиси, 1989), Всесоюзной конференции по клинической витаминологии (Москва, 1991), I Соп^тезз "Vitamins and Blofactors in Life Science" (Kobe, Japan, 1991) и конференции отдела витаминологии Института питания АМН CCCF (T989.I994).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 22 работы.

Структура диссертации. Диссертация, общим объемом 155 стр., состоит из введения, обзора литоратурн, описания материала и методов исследования, пяти глав результатов собственных исследований, зашшчения, выводов, библиограф!гческого указателя (344 источника). Работа содоржнт 21 таблицу и иллюстрирована 4 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

материал и методы исследования

В опытах по моделированию алиментарного (первичного) дефицит витаминов К и Р использовали крыс-самцов порода Вистар с исходно массой толя SO г, которые находились в точение четырех недель и полусинтотичоском рационе, лишенном витаминов К и I) [В.Б.Спиричов Э.Л.Петрова, 19791. Для предотвращения конро^огии животных содор жали в индивиду-. >ных клетках с решетчатым дном. В опытах с иг. пользованном антивитаминов К животным на фоне нормальной обоспо ченности витамином К и точение 18-2,1 дня до забоя ожедлонно плоди ли пероряльно полонтан в виде водной суспензии в дозе 4 мг на 10 г массы тела [Богданов if.Г., 1979, Suttle J.W., J984 J. СодержанИ' кальция и Фоо1юра п рационе составляло 0,02 и 0,53 %.

В качестве экспериментальной модели постменопяузног остеопороза использовали овариэктомировашшх крыс-самок 1к>род1 Нистар с исходной массой тола 200 г (Kalu D.N. е.а., 1984; SavJ) Li P.D. 19ьг'; Altkon J.M. е.a., 1972). У контрольных животных пропо дили ложную операцию. Мороз I год производили перелом большой бор цовой кости левой задной конечности. Все операции проводили по, эфирным наркозом. В течение всего опыта животные находились на ра цлоно вивария Института питания, содержание кальция и ij)oo<l>opa i котором составляло 0,74 и 0,47 %, соответственно.

Состояние костной ткани оценивали по содержанию кальция, фосфора и гидрокеипролина в ди'лФизах и эпифизах бодренной кости и и: плотности IFlr.cke С.Н., Subbarow y.. 19?,Г>; Bergman J. е. a., 1903; Galklrin K.P.K. e.a. ,1956; Лрхапчев К).П. с соавт..19801.

Активный транспорт кальция в топком кишечнике крыс In vlt.n

Aci

измеряли по разности можду поглощением "Са дисками )?.-перс.тно1 кишки в атмосфере 0? и n? (H.O.Kendrlck о.а., 1981; КаЬякоГГ H.D о.а., 19Я- ).

Концентрацию в сыворотке крови общего кальция определяли ком плексонометричоским титрованием [Вичев К.И. с соавт., 19001, i'fi-гидроксивитамина I) - методом радиокотурентного болкопого связывания с использованием набора "Vitamin D^ Screening KU" фирм! "Bnhlmann [,aborator1en" (Швейцария).

Активность щелочной г^сфатлзы и I'1 п витрофонилфосфат-.знун активносп. На, К АТРазы определяли но гидролиз!

п-нитро<1<!нилфосфатл. Для расчета активности Фермента использовала

КОРффИЦИПНТ молярной ВКСТИНКЦНИ П-ННТрофе!и)ЛЯ равный I8D00.

Протромбиповое время определяли гю методу Quick Л..f., 1044 с использованием тромбогтластила, выделенного из мозга кролика [Вялуда В.П. с солвт., 19001.

Активность бозллыюй и спектрипзлвиснмой ЛТРяз в тпнях эритроцитов определяли гто методу Mlrcevova 1,. o.a., 1979; СгаЛкег W.U. o.a., 1<Э7Г>. Активность Na.K-ATPaou в топях эритроцитов определяли по нарастатпо п сроде инкубации неорганического фосфата по методу Bat.hbun W.В., Botlach M.V., 1969. Активность Na.K-ATPanH рассчитывали по разнице между сухарной лгсптпостью АТРазы и активностью в присутствии t мМ уабаиня. Величину T^q определяли из

полулогарифмического графика зависимости скорости гидролиза

-Я -О

п-нитрофопилфосфлта от концентрации уаблинл (ТО '-10 * М).

Активность кроптшгкиплзн определяли по снижению оптической плотности при 340 им за счет окисления восстановленного NADU п сопряженной с ггнрувлткнназой и ляктлтдегидрогенлзой системе. Активность растворимой менлдионродуктази в печени определяли по Кгпз'.сг Г,, o.a., 1 9'V, 19V?.

Активноетт. витамин Г) 25-гидроксиллзы измеряли с использованном срезов почени при нленщлющих концентрациях субстратов гидрокси-лирования Kirny H.W. o.a., 1903; Dahlbac.k II. o.a., 19861. Очистку и определенно 2Г>(0П)ГЦ осуществляли методом высокоэффективной чеид-костной хроматографии (Архапчев т.п. с солвт., 1980; Сергеев H.H. с сопит., 19041.

Микросом» выделяли но методу Кярузиной И.И.. • Лрчакова Л.И., 1977. Содержание питохромоп Р-450 и Ь,- определяли по методу Отита Т., Sato и., 1' «'м ; Клрузина 11.11., Арчакоп A.M., 1977.

Выделение миофибри.нл проводили по методу J'erry S.V., С го у Т.е. 1956. АТРазную активность миофибрилл измеряли по методу {'ort:'.!-hl ¡1. e.n.. 1961"».

Электрофорез болкоп миофиОрилл проводили в 12,5 % по.тиакрил -амидном геле в присутствии додецилсу.пьф'лтл натрия по метолу laornml1 U.K., 1070. Рель окрашивали красителем Кумасси П-250 по методу Тярлсившил Л.А.. 1985 и сканировали на спектрофотометре "ll'l.aoh! 5,05" -(Япония) в двухволновом режиме ¡ю равнине поглощения при <Т,о и 450 пм. Относительное содержание Полков определяли по площади пика соответствующего белка па допситограмме.

Содержание ка.ш.ция в скелетных мышцах и миофибриллах, клльпня и фосфора и казеине и рационе определили по В.Б.Слиричов,

3.Л.Петрова. 1979; 1'Часке С.П., ЗиЬЬагсод Y. 19Р5. Концептратт белка опродолями биуретовым методом [Сота11 Л. <5. е.а., 19491.

РЕЗУЛЬТАТУ И ОБСУЖДЕНИЕ

I. Влияние витамина К ня зависящие от витамина И процессы кальциевого обмена и остеогенозя у крыс. Лишенио животных витамина К приводило к упеличоним протром-Ошового яремеш на 35%, витамина Р - снижетло концентрации 25(011)0 и активности щелочной фосфзтаэы в сыворотке тсрови, слабой гипокальциемии при отсутствии изменений в костях (табл.1).

Таблица I. Показатели обеспеченности крыс витаминами К и Г) и активность витамин Б 25-гидроксилазн печени (М ±.ш).

протром- 25(ОН)Б

группа биновоо

животных время, с иг/мл

(П-10) (п=Ю)

витамин В 25-гидрокси.лаза, нмольА'О мин на I г печени (п-5)

Са. мМ (п=10)

Т.(+В+К)

13.8

18.9

2.(+Б-К)

3.(-Ш-К) 18,0 ± Г

4.(-Б-К) 19,0 + I*

5.(-ШК)+'0 Iсут 17,2 ± I*

6.(-П-К)+0 Тсут 18 5 ± I*

7.(-Б*К)+0 5сут 10,7 + I*

8.(-0-К)+П 5сут 18,0 * I*

27,3±1,3 14,3+2,0* 4,0*0,6* 3.0±0,6* 5,6+0,2* 4,7±1,8* 18,I±1,2* 14,6*1,6*

5.5 ¿0.3 4,2 ¿0,4* 4,9 +0,4 3,1 +0,1*

14,3 +0,5* Г3,6 ¿0,6

4.6 ±0,1* 3,4 ¿0,6*

** ** *. **

2,50+0,05

2,40+0.05

2,12+0,07*

2,05¿0,07*

2,40+0,07

2,45+0.07

2,60+0.07*

2,52+0,05

Примечание. Здесь и в табл.?. одна звоздочка достоворноо отлично (р<0,05) от 1-й ~->упггы, две звездочки - от 2-й группы.

Как следует из табл. I, дефицит витамина К у крыс, получавших физиологические дозы витамина Б на протяжении всого опыта, приводил к снижению в 2 раза уровня 25(0Н)Р в сыворотке крови по сравнен*™ с контрольной группой, обеспочонной обоими витаминами, а также замедлял его восстановлонио под влияниом вводония физиологических доз витамина в течение как I, так и 5 суток у животных с дефицитом витамина П. Это может укапывать на замедленно синтеза или ускорение дальнейших превращений 25(ОН)О при недостаточности витамина К. Активность витамин и 25-гидроксилазы достоверно снижалась на 24% у животных, лгалонных витамина К (гругпга ?,). Введение животным витамина в точение 5 суток до забоя на фоне недостаточности витамина К но восстанавливало активность этого фермента

до нормы (группа 0).

Поскольку образовать 25-ОН В катализируется монооксигеназной системой, содержащей цитохром Р-450 (ОаИХЬаск П., №1куа11 К., 1988], было опроделопо содержание этого белка п микросомах печени. При алиментарном дофиците витамина К оно снижалось на 30% по сравнению с контрольной группой (табл.7).

Таким образом, стскение содержания 25(0Н)В в сыворотко крови крыс до нижней границы нормы (5 нг/мл (Сггиричев В.Б., Конь И.Я., 19891) ггри недостаточности витамина К, по-видимому, является следствием нарушения системы гидроксилирования витамина Б, что может приводить к изменениям параметров, зависящих от витамина Б.

Активный транспорт кальция в тонком кишечнико при дефиците витамина К снижался на 23% (р<0,05) по сравнению с контролом. Но — достаточность витамина К оказывала однонаправлентшй и сопоставимый по вол1гтино с дефицитом витамина В эффект (на 36%,р<0,05). Сочетавшая недостаточность обоих витаминов но вызывала аддитивного уменьшения всасывания этого катиона, что указывает на одинаковый механизм воздействия на этот процесс гшговитаминозов К и Б.

Дефицит витамина К сопровождался снижением активности неспе-1Шфической щелочной фосфатазы слизистой тонкой кишки на 24% (табл. 2), что согласуется с данными Лидера В.Л., Богданова Н.Г..Т984. При недостаточности витамина В активность этого Фермента снижалась на 33% и восстанавливалась практически до исходного уровня при введении этим животным физиологических доз витамина В в точение I или 5 суток до забоя, обнаруживая известную из литературы зависимость от витамина В ¡Пауман В.К. ,1989; Кр1г.1сЦеу У.В., Бегрееу Т.N.,19881. При сочотянной недостаточности обоих витаминов их дой-етвио на щелочную фосфатазу слизистой тонкой кишки но суммировалась, что указывает на идентичность механизмов воздействия недостаточности как витамина В, так и витамина К. Обращает нэ себя внимание тот факт, что на фоне недостаточности витамина К актшз-ность этого ферметтта но зависит от витамина В, что, по-видимому, обусловлено сниженной кошдентрацией 25(0Н)В при дефиците витамина К. Величина кажущейся Км этого Фермента не зависела от обеспеченности организма как витамином Э, так и витамином К. Таким образом, обнаруженные изменеття воличиш максшяльной активности по-видимому, отражают изменение содержания щелочной фосфатазы в клетках слизистой тонкого китечтта.

Суммируя получонныо результаты, отметим, что уморенный дефи-

Таблица 2. Активность щелочной фосфатазы при различной обеспеченности крыс витаминами К и 1) (М ± т).

группа животных

слизистая тонкого кишечника (п = 3)

Лмакс' имоль/мин на I мг белка

км-мМ

сыворотка крови, мкмоль/мин на I л

(п=Ю)

I. (+Б4-К) 565 51 I ,32+0,12 187+27

2. (+Б-К) 430 71 I ,51+0,12 218+11

3. (-Б+К) 375 72* I , 10+0,08** 216±17

4. (-В-К) 400 58* I ,17+0,05** 191+12

5. (-В+К)+П I сут 613 13** Т ,47+0,15 1881:29

6. (-Б-Ю+Б I сут 390 112 I ,47+0,17 201+32

7. (-ГМ-Ю+Б 5 сут 502 48 I ,25+0,20 254+20

8. (-В-Ю+В 5 сут 438 81 I ,31+0.20 223+25

цит витамина К приводит к нарушению метаболизма витамина Б (снижение концентрации 25(0Н)В в сыворотке крови и активности витамин Б 25-гидроксилазы) и, как результат, к изменению некоторых витамин В-зависимых процессов. И, наоборот, дефицит витамина Б оказывал влияние на процессы, зависящие от обеспеченности витамином К. Так, протромбшювое время у дефицитных по витамину Б крыс увеличивалось до величин, характерных для животных, лишенных витамина К. Причем введение в течение 5 суток физиологических доз витамина В^ на (Тоне нормальной обеспеченности витамином К приводило к нормализации этого параметра.

2. Состав и кальциевая чувствительность миофибрилл скелетных мышц при недостаточности витамина К Исследовало зависимости Са-АТРазной активности миофибрилл от концентрации Са2+ показало влияние на ноо недостаточности витаминов Б и К (табл.3). Величина рСа, соответствующая 50% активации

21-

Са-АТРазы миофибрилл и отражающая их сродство к Со ' , при недостаточности витамина о снижалась незначительно: с 6,96 в норме до 6,85. Е5 случао дефицита витамина К такое снижение сродства, было более выраженным, рСа 6,73. При сочетанной недостаточности обоих витаминов наблюдалась аддитиппость их дойствия, рСа 6,37. Изменения содержания кальция в препаратах миофибрилл при дефиците витаминов Б и К повлиять на изморенную нами кальциевую чувствительность миофибрилл не могли, так как абсолютная величина изменений

концентрации кальция в миофибрилллх была мала по сравнению с концентрацией экзогоштого кальция, используемого in vitro.

Степень активации АТРазы ион' ггл Ca*'f увеличивалась при дефиците каждого витаминов примерно на 20%, а при их сочотанной недостаточности - па 65%. Учитывая лапше литературы об увеличении со-доржапия кальция в мышцах при дефиците витамина D, можно рассматривать снижение кальциевой чувствительности миофибрилл как компенсаторный механизм, нормализующий мкшочноо сокращение. Процосс взаимодействия Ca2f с миофибриллами, сохранял свою положительную коо-перат;гоность (коэффициент Хилла n > I) как при раздельном, так и при сочотанном дефиците витаминов К и D (табл.3).

Таблица 3. Содержание кальция и параметры активации Са-АТРазы миофибрилл.

группа животных Са-АТРаза ЭГТА-АТРаза рСа п Сз, мкмоль на I г болка миофибрилл

I. (fD+K) 5,61 ± 0,17 6,9^ 1,15 25,1 ± 0.5

2. (+D-K) G,89 ± 0,20 6.7L, 1,82 28,1 ± 2,0

3. (-D+K) 6,77 ± 0,52 6,85 2,аз 22,3 ± 0,5

4. (-D-K) 9,28 ± 0,11 6,37 1,33 22,0 ± 2,3

В сократатолъном аппарате скелетных мышц позвоночных тропош-ну С принадлежит ведущая роль в кальциевой регуляции АТРазы миофибрилл [Johnaon J.D. е.а., 1978, Koham К.,1980, Potter J.D. е.п.,19771. Анализ ботового состава миофибрилл с помощью электрофореза в присутствии додоцилсульфата натрия выявил снижение на 25% содержания тропонина С на фоне постоятшого содержания основного миофибриллярпого белка - актина кок при раздельном, ток и щм со-четапном дефиците витаминов К и D. У'нгтывая тот факт, что тропотш С является Са-связывающим . белком, но содержащим остатки 7-карбоксиглутаминовой кислоты. мог . предположить, что снижение содержания этого белка при недостаточности витамина К носит витамин D-зависимый характер.

Полученные результата позволяют сдолать вывод, что наблюдаемое в случае исследованных дефицитов витаминов у крыс снижение содержания тропотпша С в миофибриллах сопровождается изменениями регуляции сократительного аппарата. Однако, механизм этих, изменений при недостаточности витамина D или ~о-видимому, неодинаков.

3. Обмен кальция и состав костной ткяни у овариэктомированных крыс с переломом большой берцовой кости.

Влияние витамина К и метаболитов витамина Р.

У овариэктомированных крыс в большой берцовой и бедренной костях, а также в проксимальном эпифизе бедренной кости, наблюдалась тенденция к уменьшен™ плотности костной ткани и содержания в ней кальция и фосфора, концентрация кальция и фосфора в сыворотке крови но изменялась, при этом активность «¡елочной фосфатаэы увеличивалась на 33%.

Перелом ловой большой берцовой кости у локнооперированных крыо сопровождался существенным снижением плотности, содержания кальция и фосфора (на 41, 50, 47% соответственно) без изменения этих параметров в правой кости, что согласуется с данными Архапчева Ю.П., 1986. Аналогичные изменения, хотя и значительно менео выраженные, наблюдались в левой бедренной кости. Возмокной причиной этого может быть частичная иммобилизация всей левой конечности в результате перелома. Сходные изменения в ловой конечности наблюдались и у овариэктомированных животных.

Иную картину при переломе имели показатели проксимального эпифиза бодренной кости. У локнооперированных иивотных эти показатели в правом проксимальном эпифизе достоверно снижались (р<0,0Ь), а в левом эти изменения прослеживались лишь в виде тенденции. В отличие от этого, у овариэктомированных животных перелом приводил не к снижонию, как у локнооперированных, а к повышению плотности, содержания кальция и фосфора в правом проксимальном эпифизе. При этом в ловом проксимальном эпифизе изменений не наблюдалось. Можно предположить, что и в этом случае изменения в правом, а не в ловом, проксимальном эпифизе обусловлены уволичонием нагрузки на правую конечность и вследствие этого интенсификацией минерального обмена в проксимал, ..ом эпифизе при иммобилизации ловой.конечности. Достоверных изменений плотности и состава диафиза и дистального эпифиза ловой и правой бедронных костей но наблюдалось.

Введение витамина К оваризктомкровашшм животным с переломом не влияло на иссл' ^ омыв парамотры берцовой и бедренной костей. При этом витамин К оказывал слабое розорбирующео действие на проксимальный эпифиз бедренной кости.

24П,25(ОН^Й'} в использованных дозах но оказывал влияния на плотность и состав борцовой и бодренной костей, тогда как в проксимальном эпифизе бедренной кости высокая доза этого препарата

несколько усиливала дешторализацию. Аналогичное резорбирующее действие на проксимальный эпифиз оказывал la(OH)Dg. Комбинированное введение животным 24R,2r)(0H)2D3 и витамина К сопровождалось нокоторнм ухуд1пе1шем показателей в борцовой кости, тенденцией к улучшению в бодренной, но но оказывало влияния на проксимальный эпифиз последней. Совместное введение 24R,25(0H)?Dg и Ia(0H)D3 приводило к спижешто плотности и минерализации левой борцовой кости, содержания фосфора в проксимальном эпифизе бедренной кости, без изменения соответствующих показателей в бодренной кости. Такая же картина наблюдалась и при совместном введении 24Н,25((Ж)2Бд, Ia(OH)D^ и витамина К.

Таким образом, в этом исследовании мы не наблюдали положительного влияния введения в течение I мое. Ia(0H)D3, 24R,25(0H)?Dg и витамина К на состояние костной ткани при данной патологии. Тем но моное полученные результаты не дают оснований отвергать возможность положительного эффекта при применении производных витамина Dg и витамина К в иных дозах и в точенио более длительного срока.

4. Ферментные системы энергетического метяболязыа при различной обеспеченности экспериментальных животных витамином К.

Дефицит витамина К приводит к птаетт активности рядя мом-бранннх и цитоплазматических фермоптов энергетического обмена [Богданов Н.Г., Лидер В.Л.,1985,1986; Уласевич И.И., Почоиина М.И.,19741. С целью приблизиться к пониманию природы этого воздействия было исследовано влияние недостаточности этого витамина на активность как цитоплазматических (растворимых), так и момбрено-свяяанннх фермоптов энергетического метаболизма у крыс.

4.1. Изменение кинетичест-с™ свойств некоторых цитоплазматическхпс -рментов.

Алиментарный дефицит витамина К приводил к изменению кинетических параметров креатинкиназной реакции в постмитохондриальных Фракциях скелетных мышц (ММ-изозим). Кажущаяся величина Км фермента для АТР возрастала в 1,45 раза (табл.4). Само по себо такое снижение сродства вряд ли можно признать значительным, но, учитывая, что дефицит витамина К сопровождается снижением концентрации АТР в скелетных мышцах [Матусис И.И., 1974), можно предположить, что эти два фактора могут существенно сказываться на активности ММ-изозима кроатишеиназы. При этом сродство к креатину осталось неизменным (1^=7,2-7,7). Для MB- (сердце) и ВВ-изозимов (мозг, почки) не было обнаружено достоверные изменений Км для АТР и креа-

тина (К^-7,2-7,7, ,.ри дефиците витамина К (тобл.4).

Таблица 4. Кгоютичоскио параметр» изозимов растворимой креатинкиназы для АТР при различной обеспеченности крыс витамином К

орган контроль -К

К.,, мм м ^lax V мМ Лиях

скелетная мышца, ММ изозим 0,40+0,02 4,12*0,32 0,58+0,02* 3,12+0,16*

сердце, MB изозим 0,30+0,02 0,32±0,03 0,31±0,02 0,26+0,09

мозг, ВВ изозим 0,12*0,02 0,34±0,01 0,14±0,02 0,31+0,03

почки, 0,14±0,03 0,040*0,003 0,14+0,02 0,034+0,002

90% ВВ изозим

Примечание. Здесь и в табл.5-8 одна звездочка достоверное отлично (р^0,05) от 1-й группы (контроль).

Суммируя полученные данные, можно сделать вывод, что к недостаточности витамина К избирательно чувствителен ММ-изозим, а одной из причин, приводящих, к снижению активности креатинкиназы скелетных мышц, являотся увеличение для АТР. Учитывая, что витамин К-зэвисимая 7-глутамилкарбоксилаэа в скелетных мышцах отсутствует [Vermeer С. е.а., 19821, можно предположить, что влияние дефицита витамина К на ММ-изозим креатинкиназы не опосредовано системой витамин К-зависимого 7-карбоксилирования.

4.2. Модифицирующее действие витамина К на активность На.К-и спектринзависимой АТРяэ эритроцитов.

Уморенный алиментарный дефицит витамина К но влиял на активность как зависимой, так и не зависимой от споктрина М^АТРазы, выраженной в расчете на I мл теней эритроцитов (табл. 5). В то ^ же время удольная активность споктринзависимой АТРлзы в расчете на I мг мембранного белка тоной эритроцитов у животных, лишенных витамина К, достоверно превыше..':- соответствующие величины у животных контрольной группы болео, чо,.-. на 40 %, что обусловлено существенным (до 25-34 %) уменьшением содержания болка в тонях эритрощггов, полученных от животных с де".:;;лтом витамина К. При этом пул проч-носвязашшх с мембраной белков в обоих группах оставался неизменным, а значительна уменьшение происходило за слот пула слабосвязанных с мембраной болков, что хорошо согласуется с данными об

уменьшении при дефиците витамина К в тонях эритроцитов количества экстрагируемой водой спектриновой Фракции [Бронштейн Л.М. с соэвт.,19871. В таком случае увеличение удельной активности спек-тринзависимой АТРазы, по-видимому, может объясняться либо уменьшением количества балластных по отношению к данному ферменту лабиль-носвязанних с мембраной эритроцитов белков, либо возрастанием прочности взаимодействия спектрина с мембраной эритроцитов при недостаточности витамина К.

.Удельные активности Na.K-АТРазы при использовании в качество субстрата как АТР, так и свободно проникающего чорез мембраной п-нитрофенилфосфата, и базальной МдАТРазы в тенях эритроцитов жи-вот1шх исследовашшх групп существенно но различались (табл.6). Это подтверждает сделанное вьппо заключение о том, что при дефиците витамина К но происходит количественного изменения прочносвязанных с момбраной белков.

При исследовании чувствительности К^-п-нитрофенилфосфатазн к уабаину было установлено, что величина IГ)0 в группах животных с алиментарным дефицитом витамина К достоверно увеличивалась почти в 3 раза по сравнению с показателем у контрольной группы (табл.6). Снижение чувствительности На.К-АТРазы теней эритроцитов к уабаину у животных, по-видимому, может быть обусловлено изменением непосредственного липидного окружения молекулы фермента вследствие количественного изменения состава и содержания липидов эритроцитлр-ной мембраны при дефиците витамина К [Богданов Н.Г., Лидер В.А.,1986; Бронштейн Л.М. с соавт.,1987]. Поскольку известны эндогенные уабаитшодобнне вещества, регулирующие активность Na.K-АТРазн и транспорт ионов [Болдырев A.A., Мельгунов В.И.. 1985], можно предположить, что изменение чувствительности Na.K-АТРязы к уабаину при недостаточности витамина К может иметь физиологическое значение.

Суммируя полученные даннио, можно заключить, что даже умерон-1шй алимонтярный дефицит витамина К, сопровождающийся лишь незначительным увеличением протромбинового времени, приводит к существенным биохимическим изменениям. В частности наблюдается увеличение удельной активности спектринзависимой АТРазы теней эритроцитов, по-видимому, обусловленное уменьшением лабильносвйзанной с мембраной фракции белков, а также снижение чувствительности Na.K-ЛТРазн к уабаину.

Тзбпица 5. Активность зависимых и нэ зависимых от спектрина Мд-АТРаз теней эритроцитов при различной обеспеченности крь.с витамином К (М ± т; п = 8)

г руппа животных

спек тринззвисимая

Са,Мд-АТРаза теней эритроцитов

| Мд-АТРазная активность | теней эритроцитов, | экстрагированных зодой

мкмсль/ч на 1 мл

балок,

мг УМЛ

нмоль/ч| на I мг ! бело

нмоль/и на I мл

белок, нмоль/и мг/мл на 1 мг белк а

количество экстрагированного водой белк а, мг /мл

контроль -К

2,18±0,06 2,08+0,16

23,0+3,6 83+11

а

15,1+1 ,4 115+2

0,52+0,07 10,1±1,4 0,59+0,12 3,1+1,2

51+ 7 13,0+2,2

я

65+13 6,0+1 ,2

Таблица 6. Чувствительная и не чувствительная к уабаину АТРазная (нмоль/ч на 1 мг белка) и К -п-нитрофенилфосфатазная (мкчоль/ч на 1 мг белка) активности мембран теней эритроцитов при различной обеспеченности крыс витамином К (М + т; п=4) .

субстрат АТР п- нитрофенилфосфат

Группа животных 1 Базальная | Уабаин-Мд-АТРазная¡чувствительная активность ( Ыа,,<-АТРаза | Базальная активность | Уабаин- | ¡чувствительная| | активность | | г Ч для уабаина, мкМ

контроль 24,5+7,5 1,5+0,7 19,4+3,9 2,6±0,9 50,9+13,0

-К 20,5+9,0 1 И±0,6 24,1+7,5 4,3±0,5 15Э,0±42,1

5. сравнение биохимических иг«.'--..»кчЛ при алиментарном дефиците витамина К и при введении п°лентана на фоне нормальной обеспеченности витямшом К.

Если помимо участия в системе 7-карбок.еилирования витамин К выполняет в организме какко-то другие, по запиоянцте от этой системы функции, то очевидно, что при подавлении 7-карбоксшшрования антивитаминами К эти "внокоагуляциотшо" функции этого витамина не будут затронуты.

Для выявления и отдифференцирования функций этого витамина, но связанных с его участиом в 7-карбоксилирояании, в общей картине нарушений, возникающих при алиментарном дефиците витамина К, был исследован и сопоставлен ряд параметров состояния организма при алимонтярном дефиците виташша К (протром^тговое время уволичтея-лось на 30%) и при введении полонтана (протромбшювое вромя увеличивалось на 60%).

Алиментарный дефицит витамина К у крыс в этом экспорименто приводил к снижению уровня 25(0H)D в сыворотке крови и активности витамин D 25-гидроксш1азн приблизительно на 50%. тогда как введение полонтана Fia них не отражалось.

Алиментарный дефицит витамина К, ' ракпгшски но отражаясь на содержании цитохрома Ь^, приводил к достоверному снижению содергания цитохрома Р-450 на 30%. Введонио полентпиа увеличивало содержание цитохрома но атаяя на содержание цитохрома Р-450 (табл.7).

Таблица 7. Влияние алиментарной недостаточности витамина К и

введения полонтана при нормальной обеспеченности крыс витамином К на содержание и свойства мембранных Ферментов.

группа животных

содержание цитохрома, пмоль на Г мг болтса микросом почо1ти

Ь5 (п--3)

Р-450 (П=5)

тони эритроцитов

Na.K-ЛТГазя,

для уабаина. мкМ

(Г1-4)

ЯКТ1ГПН0СТ7-

споктринзаписимой

АТРазы, пмоль/ч но I мг белка

(п=8)

контроль 0,359+0,012 0,334+0,056 U),0 + 13,0 83+11

* * *

-К 0,394+0,005 0,237 + 0,031 159,042,1 115+ 2

полентан 0,459+0,019* 0,353+0,041 45,5+17.0 80±14

В отлито от алиментарного дефицита витамина К пводотю полонтана на параметры других мембранных 'Лермонтов - Na,K-ATPa3H и споктринзависимой Ca.Mg-АТРязы - влияния но оказывало (табл.7).

1С»

Удольная активность монзднонредуктапн, одного из ферментов цикла нитимшьч К, а расчоте на I мг белка тюстмитохондриалыюй Фракции, пндплпнноП из ночони тавотных, лишенных витамина К, пыла повытона приблизительно на 40%, по сравнению с животными контрольной группы (табл.В), что, вероятно, носит адаптационный характер, позволяя п условиях недостаточного поступления витамина К поддерживать концентрацию ого гидрохинона на достаточно высоком уронно. Введение пелентана но влияло на его активность.

Таблица в. Влияние алиментарной недостаточности витамина 1С и вподения пелентана при нормальной обеспеченности крыс витамином К на активность растворимой монадионродуктазн почони и кинетические параметры растпорпмой креятинкиназн сколотннх мышц.

группа животных кроатинкиназа (п-4) менадионродуктазя

)СМ, т Лмакс.• мкмоль/мин на нмоль/мин на 1 мг белка (л-5)

1 мг белка

контроль О.Ю'О.ПЛ 4, [2*0,3?. 70? 18

* *

-К 0.58*0,02 3,12+0,К, IÍO±J7

пелентан 0,42+0,02 3,08i0,38 8G+I9

Активность креятинкиназн в скелетных мышцах снижалась как при алиментарном дефиците витамина К, так и при введении полонтана (табл.8). Однако, введение животным пелентана, в отлично от алиментарного дефицита витамина К, но приводило к изменению (по сравнению с нормой) величины К для АТР. Сродство к кроатипу во всех трох группах оставалось неизменным (К -7,2-7,7 мМ). Снижение активности ММ-изппима кроатинкиназы после введения пелентана rio;« щ-менения величины К.,, по-видимому, может указывать Tía уменьшение количества зтого формонтя. Это дает основание полагать, что механизм изменения я ■ пносги этого фермента при алимонтарном дефиците витамина К и введении антивитамина К различон.

Подытоживая, можно заключить, что по целому ряду показателе!! состояние организма при алиментарном дефиците яитяминя К и вппдо-нии пелентана па (¡оно нормального поступления витамина К <■ пищей существетшо различается, а функции витамина К не ограничиваются системой 7-карбоксилирования. Введение антивитаминов 1С позичляет избирательно выявить лишь изменения, обусловленные нарушением Т-карбокоидирпнапия белков, но не может быть иаюльзорпно в ка

ЧООТНО ПОЛНОИОИНОЙ модели ялшдат го Д'Ч'НЦИТа И11Т.1МИН.'. К, л спя-пи о чем использование применитольн" к этпд модели термина "вторичный дефицит витамина К" предста-.плотей не вполне корректным.

ЗАКЖЛГ-ГгГ.ТЙ

Кя основании полученных данных можно выделить несколько гтуп'й участия витамина К в регуляции гомоостаза кальция.

Один ив них опосредован изменением метаболизма витамина 0 и рецепции его активных метаболитов. Г( пользу этого говорят такие факты как снижение при дефиците витамина К концентрации в снворот-ке крови основной транспортной Формы витамина Б - 25(ОН)Г), активности 25-гидроксилпзы витамина Г^, активного транспорта кальция и активности витамин Ь-зависимой щелочной Фосфатязы в тонком гаг,печнике, а также то, что сочетапная недостаточность обоих витаминов не вызывала аддитивного уменьшения активного транспорта кальция, содержания тропонина С в миофибриллах скелетных шлиц. Это, по-видимому. указывает на одинаковый механизм воздействия гилолитами-нозов К и П на эти процессы.

Другой путь регуляторного воздействия витамина К на гомоостпз кальция может осуществляться опосредованно через мембраны. Подтверждением атому можот служить уменьшение чувствительности Ма.К-ЛТРазы эритроцитов крыс при недостаточности витамина К к спе-цифшескому ингибитору - уабяину, сродство к которому зависит от непосредственного окружения фермой:а в мембране. П полном соответствии с этим находятся и данные об увеличении удельной активности спектрипзависгтмой ЛТРазы вследствие уменьшения количества лабильно связанных с мембраной эритроцитов болков.

РНВОДН

1. Алиментарная недостаточность витамина К у крыс, получавших физиологические дозы витамина 1), сопровождалась снотением кончен-тратт в сывоуютко крови основной транспортной Формы витамина Г) -25(0Н)В, активности 25-гидроксилазы витамина Пд, активного транспорта кальция и активности витамин о зависимой щелочной фосфатази п Т01ГК0М кишечнике. Обеспеченность интамином К не влияла на состояние костной ткани у крыс, получав- ;•••; рацион с оптимальным соотношением Са и Р.•

2. Алиментарная нодостаточносу,- аптамнна К приводит к изменении) кальциевой регуляции сократительного аппарата скелетных мыгоц крыс, что выражается в уменьшении 'а ■держания тропонина О на 25™,

снижонии сродства ЛТРазы мио<1ч1брилл к Ca"4(рСа уменьшалось с G.9S в норме до G,73), увеличении степони ое активации Ca'''* на

3. Впервые охарактеризованы показатели обмена кальция и состав костной ткани у овариэктомированных крыс в возрасте 15 месяцев после перелома большой берцовой кости. Вводоние в течение I месяца витамина К но оказывало положительного влияния на минерализацию перелома.

4. К алимонтарной недостаточности витамина К чувствитолон только мышечный изозим растворимой креатинкиназы, что проявляется в уменьшении А_„,. и увеличении величины К,, для АТР. Кинетические

НМЛ м

параметры мозгов о и сордечного изозимов но изменяются.

5. Уменьшение сродства Na.K-АТРазы эритроцитов крыс с недостаточностью витамина К к уабаину (специфическому ингибитору Na.K-АТРазн) по сравнению с нормально обоспочошшми этим витамином животными, а та}—" увеличение удельной активности споктринзпвиси-мой ЛТРазы вследствие уменьшения количества лабильно связанных с мембраной белков свидетельствуют о модифицирующем действии витамина К на активность этих ферментов посредством изменения белкового и лгатидного состава момбран эритроцитов.

6. Ипмопонио активности растворимых креатинкиназы и монадион-родуктазы, момбранных Na,К- и спектринзависимой АТРаз, количества цитохромя Р-450 в мккросомах печени, наблюдаемые при алиментарной недостаточности витамина К, но обнаруживаются при введении антивитамина К - пелонтана. Это дает основания полагать, что указанные изменения опосредованы но витамин K-зависимой системой 7-карбоксилирования, а обусловлены иными биохимическими механизмами.

7. ОТюрмулирована концепция о момбранооиосродованном и об опосредованном через гормональную систему витамина D действии витамина К на процоссы рогуляции остоогоноза, обмона кальция и Фер-ментто системы энергетического обмена, участвующие в поддержании кальциового гомеостаза, согласно которой роль витамина К но ограничивается витамин K-зависимой посттрансляциошюй модификацией Glu-остатков Са-связнвающих белков.

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ !

I. Соколынпсов A.A., Коденцова P.M., Климова O.A. Влияние алиментарной недостаточности витамина К у крыс на Ферменты энергетического обмена // Пробломч современной биологии: Труды Ю научной конференции молодых ученых биологичоского факультета МГ'У.-М., I9H7. Леи. в ВИНИТИ J4.09.i37 - В-«7.

2. Коденцова ß т., Рисник B.B., >:околыпгков Л.Л., С'.глрцчев

B.Б.Изменение Ca*1 активации ЛТФазной активности миофибрилд скелетных мышц крысы при алиментарной витамин D и витамин К недостаточности // Тезисы докладоп vni Всесоюзного симпозиума "Биофизика и биохимия биологической подвижности". - Пушно, 1987.

C. 106-1(7/

3. Колесова Г.М., Сокольников Л.Д., Кодетюва В.М., Климова

0.Д., Соргеев И.П., Спиричев В.Б. Влияние недостаточности витамина К у крыс на некоторые ферментные системы, участвующие в энергообеспечении // Вопр. мод. химии,- 1988. - Т.34, вып. 4. -С.46-50

4. Kodentsova V.M., Risnlk V.V., Sokolnlkov Л.Л., Sergeev

1.N., Splrlchev V.B. Vitamin D effecta on Ca-otimulated ЛТГ'аяе activity and protein composition of t,Jie rats skeletal muscle mioílbrills // Abstracts oí the Seventh Workshop on vitamin D. -Rancho Mirage, USA, 1988. - P.762

5. Сокольников A.A., Коденцова B.M., Соргеев И.Н., Струнил С.Е., Климова O.A., Спиричев В.Б. Обмен кальция при недостаточности витаминов D и К // Вопр. питания. - 1989, J6 I.

С.56-60

6. Коденцова В.М., Сокольников A.A. Активность некоторых Формонтов энергетического обмона почок и кишечника крыс при дефиците витаминов D и К // Укр. биохим. журнал. - 1989. - Т.61, * 4. - С. 77-82.

7. Соколыптков A.A., Климова O.A., Коденцова В.М., Алексеева У!.А. Влияние алиментарной недостаточности витаминов Bg, С и К на

зависимость активности щелочной фосфатазы слизистой оболочки топкого кишечника крыс и морских свинок от витамина D // Труде научной конференции молодых учоных ""едико-биологическио аспекты науки о питании". -Алма-Ата, 1987. - Деп. в КазНИИНТМ 10.05.89.2480.

8. Коденцова В.М., Риспик В.В., Сокольников A.A.. Спиричев

B.Б. Са-стимулируемая АТФазная активность и содержание тропонина С в миофибриллах сколотных мышц крыс: зависимость от обеспеченности витамином D // Тезисы докладов VI Всесоюзной конференции по биохимии мышц. - Тбилиси, 1989. - С.65-6ь

9. Сокольников A.A., Коденцова В.М. Сравнение биохимических изменений при алиментарном дефиците витамина К и введении антивитамина К - пелонтана // Тозисы докладов Всесоюзной конференции "Клиническая витаминология". - М., 1991. - С.29

10. Сокольников A.A., Коденцова В.М. Роль витамина К в регуляции активности формонтов энергетического метаболизма // Тезисы докладов Всесоюзной конференции "Клиническая витаминология". - М., 1991. - С.59

11. Сокольников A.A. Влияние витамина К и метаболитов витамина D на обмен кальция и костную ткань у овариэктомироватгых крыс с пороломом большой борцовой кости // Тозисы докладов Всесоюзной конференции "Клиническая витаминология". - М., 1991. -

C.60

12. Сокольников A.A., Вржесинская O.A. Различная чувствительность изозимов icpoaT¡ >- ^чазы к недостаточности питяминоп к и Л // Тезисы док.¡г., ;н Нсосоюзной конференции

"Клиническая витаминология". M.f 1991. - С.Gl

13. Ютсник B.B., Сокольников A.A. Зависимость от обеспеченности витаминами К и D Ca-стимулируемой АТФазной активности и содержания тропонина С в миофиориллах скелетных мышц крысы // Тезисы докладов Всесоюзной конференции "Клиническая витаминология". - М., 1991. - С.62

14. Кодонцова В.М., Сокольников Л.Л., Вржосинскяя O.A., Спиричов В.В. Гиги01 «и о обеспеченности крыс витамином К и введения полонтано на Na,К- и спектринзаяисимую ЛТРазы тоней эритроцитов // Биохимия. -- J991. - Т.Ьб, вып.4. - С.727 732

15. Таяиня О.В., Сокольников Л.Л., Жарова Т.В., Кодонцор.л В.М., Дейкин Ш.И., Спиричон В.В. Метаболические функции изолированных митохондрий печени irpn различной обеспеченности крыс витаминами 0 и К • введении пелонтана // Вопр. мод. химии. - 1991. - Т.37, Ji 4. - С. „,--69

1С. Сокольников Л.А., Жарова Т.В., Тюлипл О.В., Коденцова

В.М., Лейкин К).И. Состояние митохондрий печени и активность кроатинкиназы тканей крысы при вводо|ши антивитамина К // Укр. биохим. журнал. - 1991. - Т. 63. № 5. - С.10?-106

17. Kodent.sova V.M., Sokolnlkov Л.A., Rlsnlk V.V., Splrlohev V.В.Vitamin К biological functions unoonneetcri with vitamin К - dependent 7-carboxylatlon system // Abstracts of the first International congress on "Vitamins and blofactors In life science". - Kobe. Jap,an, 1991.- P.105

18. Сокольников А.А., Лврамова Л.В., Кодонцова B.M., Вржосинскля о.А., Гончарова H.iO., Спиричов В.В. Кинетические характеристики кроатинкиназн и гоксокиназн сколетных. мышц крысы при гппцором дефиците витамина К и введении пелонтана // Укр. биохим. журнал. - J992. - Т.64, # Т. - С.72-77

19. Сокольников А.А., Кодонцова В.М., Сниричов В.В. Содержание кальция и Фосфора в костной ткани у онаризктомиров'шных. крнс с переломом оолыиой борцовой кости: влияние витамина К и метаболитов витамина D // Физиологический журнал. - 1992. - Т.30, И 2. С.29-06

20. Сокольников Л.А., Шинкопич Т.]')., Кодопцоня В.М., Вркесипская О.А., Спиричов В.В. Активность монадионродуктази и содержание цитохромов 1ц и Р-450 в печени при различной

обеспеченности крыс витамином К и вводонии пелонтана // Вопр. мед. химии. - 1.902. - Т..ОН, » 5. - С. 15-17

21. Kock-nt.novn V.. Sokolnlkov A., RlnnJk V. Diet Ca/T' mtlo alters the sens 1 tivu.y of rnl BB creatine kinase activity to vitamin 1) supply. // Abstracts oi the ninth workshop on vitamin D.- Florida, USA, 1994.- P.10)

22. Sokolnlkov д., Kodentsova V., Sp!rlch"v V. Calcliuni and phosphorus content in bone tissue of ovnrlectomlsed rats with a fracture of the shlnbone: effect of vitamin К and vitamin D metabolites // Abstracts of the ninth workshop on vitamin I).-Florlda, USA, 1994.- 1'.210