Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимические механизмы участия витамина К в поддержании гомкостаза кальция и энергетическом обмене

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимические механизмы участия витамина К в поддержании гомкостаза кальция и энергетическом обмене"

российская ЛК/ДШ1Я мкдащшских наук

ИНСТИТУТ ПИТА!!ил

На пряпях рукописи УДК 577.161.5

СОКОЛЬНИКОВ АНДРЕИ АРНОЛЬДОВИЧ

БИОХИМИ11ECICV1К МИХАНИЗУЛ УЧАСТИЯ ВИТАМИНА К В ПОДДЕРЖАНИИ Г0МК0СТАЗА КАЛЬЦИЯ И ЭНКРГКТИЧКСКОМ ОБМЕНЕ (аз.00.04 - биохимия)

Автореферат дмссортацни на соискание ученой степени кандидата .биолоппоскнх наук

Woс im п - I9ÍM

Работа выполнена и лаборатории обмена витаминов и минеральных

веществ Института питания ГЛМЦ

Научный руководитель доктор биологических наук, профессор

В.Г-.СПИРИЧЕП

Официалъннп оггпонпти: доктор медицинских наук, профессор

И.Г.БОГДАНОВ

кандидат биологических наук Р. Л. ЛОЦИ КО

Ведущая организация: Институт биомедицинокой химии ГЛМН

'ся

Защита диссертации состоится "// " с&^&ел&^СсХл994 г.

на заседавши Специализированного совета (Д.001 .к--.01 ) при Институто питания РАМН по адресу: 109240 Москва> Устьинский проезд, 2/14.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института питя1шя РАМН. Автореферат разослан "

А - -Г1094 Г.

Ученый секретарь Специализированного совета, кандидат модицинских наук ^^^

Г(.М .ЖМИПЧЕИКО

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Метаболическая ро.ль витамина К, являющегося кофактором витамин K-зависимой 7-карбоксилазн, осуществляющей посттрансляционную модификацию глутаминових остатков белков системы свертывания крови, достаточно хорошо изучена [Suttle J.W., 1987). В последнее время появились данные о возможном участии витамина К в поддержании гомеостаза кальция и остеогенезе. Его роль в этих процессах может быть опосредована зависящими от кого Сз-связывакщими бедками (костные остоокалыцпт и матриксный СХа-содержащиЯ белок, роцептор гормональной формы витамина I)) (Соргеов ИЛ!. 1989, Price P.A. с.а, 1985,1983]. Рогуляторноо воздействие витамин К может тагако осуществлять опос.родованно через мембраны как их природный минорный компонент ГБогданов Я.Г., Лидер В.А., 1985,1986, Лидер В.А. 1930; Олеекин A.B., Самуилов В.Д. 1908]. В то же время в поддержания гомеостаза кальция важная роль принадлежит реакциям энергетического обмена. Недостаточность витамина К, сопровождаясь изменением белково-лилидного окружения мембранных ферментов энергетического метаболизма, может оказывать влияние на их активность (нарушение окислительного фосфорилирова-ния и понижение его эффективности) (Богданов II.Г., Лидер В.А., 1985,1986; Уласевич U.M., Печенина М.И.,1974]. Наряду с этим в литературе описаны многочисленные факты снижения активности целого ряда цитоплазмэтических ферментов энергетического обмена (гексоки-наза, креатинкиназа) тфи дефиците витамина К у животных [Матусис И.И. о соявт.,1974; Матусис Л.П., IT701.

В связи с этим не лишено оснований предположение, что недостаточность витамина К может быть одним из факторов, нарушающие нормальную регуляцию кальциевого гомеостаза. Таким образом, исследование роли витамина К в процессах регуляции обмена кальция представляется весьма актуальным с точки зрения раскрытия . механизмов. нарушений кальциевого гомеостаза, поиска новых подходов возможной корректировки этих нарутлешгй при различных заболеваниях.

Исследования проводились в соответствии с планами НИР Института питания АМН СССР по томам 095, раздел I: Экспериментальное изучение метаболических и физиологических последствий недостаточного потребления витаминов (1985-88 гг.); 043: Изучение обмена, рецептга и механизма действия витамина 1); обоснование примонош{я ' активных метаболитов этого витамшга как нммуномодуляторов, рогуля-торов лролифоряшт и диффоренцнровки клеток (1989-91 гг.); Обще-

союзной научно-технической программой О.ач.ОО ":озд.ать и освоить производство продуктов детского питания и витяминизировяшшх продуктов па основе научных принципов рационального и сбалансированного питания", утвержденной постановлением ГШГГ СССР № 555 от 30 октября 1985 г.

Цель и задачи исследования. Цель работы заключалась в 'исследовании влияния недостаточности витамина К на процессы остеогено-за, обмен кальция и некоторые Зорментныо системы энергетического обмена, участвующие в поддержании кальциевого гомеостаза при дефиците и нормальной обеспеченности витамином Г), а также в экспериментальной оценке возможности комбинированного применения витамина К и метаболитов витамина Б для коррекции нарушений обмена кальция при постменопаузнг' остеопорозе.

В соответствии с поставленной целью (гредполагалось решить следующие задачи:

1. Изучить состояние зависящих от витамина 0 процессов кальциевого гомеостаз" ч остеогенеза в зависимости от обеспеченности организма зксппримонталыгых кпнотных витамигном К.

2. Охарактеризовать состояние ферментных систем знергетичес-кого обмена, участвующих в поддержании гомеостаза кальция, п)>и дефиците витамина К.

3. Изучить возможность комбюгировашюго применения витамина К и метаболитов витамина Б япя коррекции нарушений обмена кальция на модели постменопаузного остеопороза у крнс (овариэктомия)

4. Изучить и сопоставить метаболические изменения при алиментарном дефиците витамина К и внодении антивитамина К - нелентана.

Научная новизна.

Впервые изучено влияние алиментарной недостаточности витамина К у крнс на обмен кальция. Показано, что питовая недостаточность витамина К ггриводит к снижению концентрации в сиворотко кропи 25(0Н)0, активности витамин Ь 25-тидроксилазы. активного транспорта кальция и активности витаминО зависимой щелочной фосфатазы в тонком кишечнике.

Впорвыо показана роль витамина К в кальциевой регуляции сократительного аппарата сколотннх мшц крнс. Алиментарная недостаточность витамина К ггриводит к уменьшению содержания тропонина С на 25%, снижению сродства Са -ДТРязы миофибрилл к; ионам кальция и увеличению степени со актива;;'-;- этими ионами. Обнаружоня избира- ' тельная чувствительность мышечного изозима растворимой кроатшпг.и-

nanu к алиментарной недостаточности этого витамина.

Впервые охарактеризован обмен кальция и состав костной ткани у оваризктомирояпнных крыс после перелома большой борцовой кости.

Ппорпно выявлено модифищгрующио действие витамина К на кинетические параметры Na,К- и споктринзависимой АТРаз посредством изменения блокового и литшдного состава мембран эритроцитов.

Впервые изучено и экспериментально доказано различие метаболических измононмй при алиментарном дофшшто витамина К и при введении антивитамина К - полентана.

Впорвые сформулирована копцоиния о мембраноопосредованном и об опосредованном чероз гормональную систему витамина D действии витамина К на гомоостаз кальция и энергетический обмен.

Научно-практическая значимость.

Полученные в работе результат» расширяют представления о роли витамина К в гомеостозе кальция, остоогоиозо и энергетическом обмене и были использованы фирмой "Rocho" (Австрия) при разработке в 199?, г. мультивитяминного препарата "Cal-0-Vita", содержащего витамины К, D^, С, Dg и кальций, предназначенного для профилактики остоопороза.

Апробация диссертации. Материалы диссорташш доложены на XII Всесоюзном совещании по транспортным ДТРазам (Иркутск, 1987), 18 научной конференции молодых учоных биологического факультета МГУ (Москва, 1907), VJ ] Т Всесоюзном симпозиума "Биофизика и биохимия биологической подвижности" (Пущино, Т987), научной конференции молодых ученых "Медико-биологические аспекты науки о питании" (Ллма-Лта, Казахстан, 1987), 7 and 9 Workshop on vitamin D (California, I988; Florida, 199-1, USA), VI Всесоюзной конференции по биохимии мышц (Тбилиси, 1989), Всесоюзной конференции по клиничоской витаминологии (Москва, 1991), I Congress "V5 i.amlns awl Biolactors in Life Science" (Kobe, Japan, 19Э1) и конкуренции отдела.витаминологии Института питания АМН СССР (1989,1994).

Публикации. По теме диссорташш опубликовано 22. работы.

Структура диссертации. Диссертация, общим объемом 155 стр., состоит из вводония, обзора литературы, описания материала и методов исследования, пята глав розультатоп собственных исслодоватгй, заключения, выводов, библиографического указателя (344 источника). Работа содержит 21 таблицу и иллюст^тгроппна 4 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИЛ?- -ТЗТОДН ИССЛВЛОРл.им

В опытах по мододиро) • . -.-) алиментарного (порвичного) дефицита витаминов К и Г) использовали крыс-самцов порода Вистар с исходной массой тела 50 г, которые находились в течение четырех недоль на полусинтетичоском рационе, лишенном витаминов К и D ÍB.Б.Спиртов, Э.Л.Петрова, 1979J. Для предотвращения коггрофагии животных содержа™ в индивидуальных клетках с решетчатым дном. В опытах с использованном антивитаминов К животнш на фоне нормальной обеспеченности витамином К в точение 18-21 дня до забоя ежедневно вводили перорально полентан в виде водной суспензии в дозе 4 мг на 100 г массы тела [Богданов И.Г., 1979, Suttle J.W., 19841. Содержание кальция и фосфора в рационе составляло 0.G2 и 0,53 %.

В качество экспериментальной модели лостмонопаузного остеопорозэ использовали опариэктомированных крнс-самок порода Вистар с исходно?, массой толп 200 г IKalu D.N. е.а., 1984; SavlJle P.D. 1969; Altken J.M. е.a., 19721. У контрольных животных проводили ложную операцию. Через I год производили перелом большой берцовой кости левой задней коночности. Всо операции проводили под эфирным наркозом В течоние всего опыта животные находились на рационе вивария Ив.. 1'итута питания, содержание кальция и фосфора в котором составляло 0,74 и 0,47 %, соответственно.

Состояние костной тката оценивали по содержанию кальция, фосфора и гидрокемпролиня в дмаФизах и этф\зах бедренной кости и их плотности ÍFlscke С.H., Subbarow Y., 1925; Bergman J. e.a., I9G3; Galklns E.D.K. е.a.,1956; Лрхяпчев Ю.П. с соапт.,19861.

Активный транспорт кальция в тонком кишечнике крыс In vitro

4Г>

изморяли по разности можду поглощением Са дисками 12-порстной кишки в атмосфере 0? и N2 [N.C.Kendrlck е.а., 1981; Kabakoff B.D. е.а., 19821.

Концентрацию в сыворотке крови общего кальция определяли ком-пдвксонометричоским титрованием Шичев F..11. с соапт., I960), 25-гидроксивитамина О - методом ;адиоконкурентного белкового связывания с использованием набора "Vitamin Dg - Screening Kit" фирмы "Buhlmann Laboratories" (Швейцария).

Активность щелочной фосфатазы и к^-п-питрофонилфосфатязиую активность Ыа.К-АТРазы определяли но гидролизу

п-нитрофенилфосфата. Для расчета активности форментя использовали

ko:«Wmnnf»it молярной ркстилкции п-нитро^юлола pnnimft J8f<00.

Протромяипопоо лромя оггродоляли iio методу Quick А.Л.. 1944 с иеполыюпаниом трлмГюштястиля, шдолонпого из мопгя кродтт Шялуда В.П. с ооапт., 70801.

активность оапяльпой и СЛОКТрнПСаРИОНМОЙ АТРаз п тонях г»рп-троп.итоп определяли ¡то мотоду Mlrccvovj4 К. o.a., 19T9; Omtzor W.B. о. я., 19Т5. Аитигчгость Na.K-ATPanu п тонях эритрощггов опрп-до ляли по нарастанию п сроде инкубации лооргсшичоского ФосФятя по мотоду Itathbun W.B., Potlach M.V., 1969. Актиллость Мя,К-ЛТРаг>и расслаивали но рагшицо можду суммарной актигиюотью АТРяац и а;<~ ТИПМОСТЫП Л нриоутегрин 1 мМ уабашя. Яоли'пгну Ir?Q ОПрОДОЛЯДИ 1Г>

полулогарифмического гряфикп зависимости скорости гидролиза

П- ПИТрофоИИ.П(1по1>П7?1 ОТ КОЛЦОИТрЭДЦт уяЯяИНО (ItT^-JO-'* М).

AKTUIWOCTb КрОЯТИПКИЛЯЗН ОПрОДОЛЛЛИ ПО СИШКЧПТЮ ептичпекой ПЛОТНОСТИ ГТри 340 нм зя слот окисл01шя лосстяноплотюго n'adh п со-пряжотюй о тфуатппшяпоЯ и лякгятдогидрогонягюП системе. Активность растворимой меллдионродуктаэм в лочоли определяли по Krnator г,, о. я.. ........ •.''(•.\

Активность питамил í) 25-гидроксиляэи поморялл с лепольооояни-ом оропоп почони при нясьтаяющих концонтрллиях субстрчтот» пшрокси-.торопалия 1С»my H.W. п.я., i°>43; Dahibaok I!. о.я., 1986). Очистку и олродолотгио ?,f>(0H)D.? осуществляли методом писокоэЭДюктиялой жидкостной хроматографии (Архапчов Ю.П. с сопит., Í90G; Соргоов IT.К. с соя ИТ., Т'.'ВД].

Микрпс.ом» ридплл.лп i го мотоду КярупилоИ 'Л.й., • Арчаковя Л.И., 1977. Содоржялио цитохромоп Г-450 и br, определяли по мотоду Отппга Т.. Sato П. ,lrj0'i: Кпруздта И. ¡Т., Лрчякоп А.и., т;>77.

Видодопио ммофилрилл проводили по методу Terry S.V., Г.ГОУ Т.О. 19!')6. АТРагшую активность мпоФибридд ипморяли по мотоду PorUoh] Н. о.я.. lOí.o.

Эдоктро^юроп бОЛКОП МП0фНЛрк.1Ц) проводили VI 12,5 % ПОЛПЯКрНЛ-амидлом ro.no в присутствии долонилсу.тАата натрия по мотоду f.nrmmJ 1 U.K., VJi'O. Роль окрашивали красителем Кумасси В-250 по мотоду Тарасишина Л.A., Т085 и сканировали на спектрофотометре "Hltnohl-íbW (Иноння) л дпухлолиопом рожимп ¡¡о разлило ноглощолил ¡три fif-O и 450 пм. Относительное содоржаиио белков определяли по площади тлея соответствующего полка па дплситограммо.

Содержание кальция п сколотнлх мышцах л мноФибриллях, кальция и фосфора н каношт и ранионо определяли по В.Б.Слиричов,

G

3.Л.Петрова. 1979; i'lacke C.H., Subbarow Y. 19Я5. Концентрацию белка определяли биуретовым методом (Gornall A.C. o.a., 1949!.

РЕЗУЛЬТАТУ И ОБСУЖДЕНИЕ

I. Влияние витакина К кя зависящие от жстамина D процессы кальциевого обмана и остеогенезя у крыс. Лхглонио животных витамина К приводило к увеличению протром-бшового времезш на 35%, витамина D - снижению концентрации 25(0H)D и активности молочной фосфятазы в сыворотке крови, слабой гкпокальциемии при отсутствии изменений в костях (тобл.1).

Таблица I. Показатели обеспеченности 1фыс витаминами К и I) и активность витамин D 25-гид'рокскласш печени (М ± т).

ггротром- 25(ОН)D витамин D

группа бшювое 25-пигпоксилаза; нмоль/ЙО мин на Пл,

животных время, с иг/мл ММ

(п=Ю) <п=Ю) I г почет! (п-5) (n-J 0)

I. (+D+K) 13,8 I 27,3±1,3 5,5 ±0,3 2,50+0,05

2. (+D-K) 18,9 ± I* 14,3*2,0* 4.2 ±0,4* 2,40*0.05

3. (-D+K) 18,0 ± I* 4,0+0,6*' ** 4,9 ±0,4 2,12+0,07*'

4. (-D-K) 19,0 ± I* 3,0+0,6*' ** 3,1 ±0,1*'** 2,05+0,07*'

5. (-D+K)+D Iсут 17,2 I* 5,6+0,2*' ** 14,3 +0,5*'** 2,40*0.07

6. (-D-K)+D 1сут 18,5 I* 4,7+1,8*' ** 13,6 +0.6*'** 2,45+0*07

7. (~D+K)+D 5сут 13,7 £ I* 18,1*1,2* 4,6 +0,1* 2,60+0,07**

8. (-D-K)-t-D 5сут 18,0 I* 14,6*1,6* 3,4 +0,6* 2,52+0,05

Примечание. Здесь и в табл.?. одна звоздочка достоверное отлитое (р$0,05) от 1-й группы, две звездочки - от 2-й группы-.

Как следует г табл. I, дефицит витамина К у крыс, получавших физиологические дозы витамина В на протяжении всего опыта, приводил к снижению в 2 раза уровня 25(0Н)В в сыворотке крови по сравнению с контрольной группой, обеспеченной обоими витаминами, а также замедлял ег^ зосстоновлешо под влиянием введения физиологи- ' ческих доз витамин в точение как I, так и 5 суток у животных с дефицитом витамина Б. Это мокет указывать на замедление синтеза или ускорение дальнейших превращений 25(ОН)0 при недостаточности витамина К. Активность витамин В 25-гкдроксилазы достоверно снижалась на 24% у животных, лишенных витамина К (груттэ 2). Введение животным витамина Од в течение 5 суток до забоя на фоне недостаточности витамина К не восстанавливало активность этого <1юрмоита

до нормы (грунт Я).

Поскольку образованно 25--0Н 0 ката.иизируотся моноокснгеназной системой, содержащей цитохром Р-450 ЮаЫЬаск Н., WlkvaП К., 19801, было определено содержание этого белка в микросомах печени. При алиментарном дефиците витамина К оно снижалось на 30% но сравнению с контрольной группой (табл.7).

Таким образом, сшшенио содержания 25(0Н)В в сыворотке крови крыс до нижней границы нормы (5 нг/мл IСпиртов В.Б., Конь И.Я., 19891) при недостаточности витамина К, по-видимому, является следствием нарушения системы гидроксилировяния витамина 0, что молот приводить к изменениям параметров, зависящих от витамина В.

Активный транспорт кальция в тонком кшочнико при дефиците витамина К снижался на 23% (р-$0,05) по сравнению с контролем. Недостаточность витамина К оказывала однонаправленнный и сопоставимый по величине с дефицитом витамина Р эффект (на 36%,р<£),05). Со-четашия недостаточность обоих витаминов но вызывала аддитивного уменьшения всасывания этого катиона, что указывает на одинаковый механизм воздействия на этот процесс гиповитаминозоп К и В.

Дефицит витамина К сопровождался еттжениом активности носпе-цифической щелочной фосфатазы слизистой тонкой кишки на 24% (табл. 2), что согласуется с данными Лидера В.Л., Богданова Н.Г.,1984. При недостаточности витамина Б активность этого фермента снижалась на 33% и восстанавливалась практически до исходного уровня при введении этим животным физиологических доз витамина 0 в точетго I или 5 суток до забоя, обнаруживая известную из литературы зависимость от витамина Г) [Бауман В.К.,1989 ; 5р1г1сЬеу У.В., Бе^еоУ Т.Н.,19881. При сочеташгой недостаточности обоих витаминов их действие на щелочную фосфатазу слизисто" тонкой кишки не суммировалась, что указывает на идентичность шшшизмов воздействия недостаточности как витамина 0, так и витамина К. Обращает на себя вниманио тот факт, что на фоне недостаточности витамина К активность этого фермента но зависит от витамина что, по-видимому, обусловлено сниженной концентрацией 25(011)0 при дефиците витамина К. Воличина кажущейся Км этого фермонта но зависела от обеспеченности организма как витамином Б, тпк и витамином К. Таким образом, обнаруженные изменения величины максимальной активности по-видимому, отражают изменение содержания щелочной фосфатазы в клетках слизистой тонкого кшечшта.

Суммируя полученные результаты, отметим, что умеренный дефи-

Таблица 2. Активность щелочной ФосФэтаэи при различной обеспеченности крыс витаминами К и О (М ± ш).

группа животных слизистая тонкого (п = 3) кишечника сыворотка крови, мкмоль/мин на I л

"^макс* нмоль/мин V

на I мг белка мМ (п=10)

I. (+ГМ-К) 565 51 I,32*0,12 187*27

2. (+Б-К) 430 +; 71 1,51*0,12 218*11

3. (-Б+К) 375 * 72* 1.1010,08** 216*17

4. (Ч)-К) 400 * 58* I,17*0,05** 191*12

5. 1 сут 613 + 13** 1,47*0,15 188*29

6. (-б-ю+о I сут 390 * 112 1,47*0,17 201¿32

7. (-ГМ-Ю+1) 5 сут 502 * 48 1,25*0,20 * 254*20

8. (-Б-Ю+Б 5 сут 430 * 81 1,31*0,20 223±25

цит витамина К приводит к нарушению метаболизма витамина Б (снижение концентрации 25(ОН)В в сыворотко крови и активности витамин Г) 25-гидроксилазы) и, как результат, к изменению некоторых витамин Б-зависимых процессов. И, наоборот, дефицит витамина Б оказывал влияние на процессы, зависящие от обоспочонности витамином К. Так, протромбшювоо время у дефицитных по витамину Э крыс увеличивалось до величин, характерных для животных, лишенных витамина К. Причем введение в течение 5 суток физиологических доз витамина на фоне нормальной обеспеченности витамином К приводило к нормализации этого параметра.

2. Состав и кальциевая чувствительность миофибрилл скелетных мыпгц при недостаточности витамина К

Исследование зависимости Са-АТРазной активности миофибрилл от р 1

концентрации Са показало влияние на ноо недостаточности витаминов И и К (табл.3). Величина рСа, соответствующая 50% активации Са-АТРазы миофибрилл и отражающая их сродство к Се2+, при недостаточности витамина Б снижалась незначительно: с 6,96 в норме до 6,85. В случае дефицита витамина К такое снижение сродства О^ло более выраженным, рСа 6,73. При сочетанной недостаточности обоих витаминов наблюдалась аддитивность га действия, рСа 6,37. Изменения содержания кальция в препаратах миофибрилл при дефиците витаминов В и К повлиять на измеренную нами кальциевую чувствительность миофибрилл не могли, так как абсолютная воличина изменений

концентрации кальция в миофибриллах была мала по срявногопо с концентрацией экзогенного кальция, используемого In vitro.

Степень активации АТРазы ион;ми Са"' увеличивалась при дефиците каждого витаминов примерно на 20%, а при их сочетанной недостаточности - на 65%. Учитывая данные литературы об увеличении содержания кальция в мышцах при дефиците витамина D, можно рассматривать снижение кальциевой чувствительности миофибрилл как компенсаторный мехаггизм, нормализующий мышечное сокращенно. Процесс взаимодействия Са'''4" с, миофиОриллами, сохранял свою положительную коо-поративность (коэффициент Хилла n > I) как при раздольном, так и при сочотанном дефиците витаминов К и D (табл.3).

Таблпща 3. Содержание кальция и параметр» активации Се-АТРази миофибрилл.

группа животных Са-АТРаза ЭГТА-АТРаза рСа п Ca, мкмоль на I г болка миофибрилл

I. (Ю+К) 5,61 ± 0,17 6,96 1,15 25,1 ± 0,5

2. (+D-K) G,89 ± 0,20 6,73 1,82 28,1 ± 2,0

3. (-D+K) 6,77 t 0,52 6,85 2,08 22,3 ± 0,5

4. (-D-K) 9,28 ± 0,11 6,37 1,33 22,0 ± 2,3

В сократительном аппарате скелетных мышц позвоночных тропони-ну С принадлежит ведущая роль в кальциевой регуляции АТРазн миофибрилл (Johnson J.D. е.а., 1973, Koharna К. ,1980, ■ 'Potter J.D. o.a.,1977). Анализ белкового состава миофибрилл с помощью электрофореза в присутствии додоцилсульфата натрия выявил снижоние на 25% содержания тропонино С на (Jone постоянного содержания основного миофмбрилляртгого белка - актина как при раздольном, так и при сочотанном дефиците витаминов К и D. Учитывая тот факт, что тропошш С является Са-связыващим . белком, не содержание остатки 7-карбоксиглутаминовой кислоты, можно предположить, что снюнегшо содержатшя отого белка при недостаточности витамина К носит витамин D-зависимый характер.

Полученные результаты позволяют сделать вывод, что наблюдаемое в случае исследоватшх дефицитов витаминов у крыс еншкенио содержатшя тропонша С в миофибриллах сопровождается изменениями регуляции сократительного аппарата. Однако, механизм этих изменений при недостаточности витамина D или К, по-видимому, ноодинаков.

3. Обмен кальция к состав костной , ...:»ци у овариэктомированных крыс с переломом большой берцовой кости. ( Влияние витамина 1С и метаболитов витамина Б.

У овариэктомироваяннх кр«о в большой берцовой и бодренной костях, а также в проксимальном эпифизе бедренной кости, наблюдалась тенденция к уменьшению плотности костной ткани и содержания в ней кальция и фосфора, концентрация кальция и фосфора в сыворотке крови не изменялась, при этом активность щелочной фосфатаэы увеличивалась на 33%.

Перолом левой большой берцовой кости у локнооперированных крыс сопровождался существенным снижением плотности, содержат« кальция и фосфора (на 41, 50, 47% соответственно) без изменения этих параметров в правой кости, что согласуется с данными Архапчева Ю.П., 1986. Аналогичные изменения, хотя и значительно менее выраженные, .-. блюдались в левой бедренной кости. Возможной причиной этого может быть частичная иммобилизация всой ловой конечности в результате перелома. Сходные изменения в ловой конечности наблюдались и у овариэктомировагашх животных.

Иную картину при переломе имели показатели проксимального эпифиза бодренной кости. У ложноопориропакных животных эти показатели в правом проксимальном впифизе достоверно снижались (р«0,05), а в левом эти изменения прослог,твались лишь в видо тенденции. В отличие от этого, у онариэктомированных животных перелом приводил не к снижонию, как у ложнооперировашмх, а к повышению плотности, содержания кальция и фосфора в правом проксимальном эпифизе. При этом в ловом проксимальном эпифизе измононий не наблюдалось. Можно предположить, что и в этом случае изменения в правом, а но в левом, проксимальном гмшфтое обусловлены увеличением нагрузки на правую конечность и вследствие зтого интенсификацией минерального обмонз в проксимальном эпифизо при иммобилизации ловой коночности. Достоверных изменений плотности и состава диафмза и дистального . эпифиза ловой и правой бедренных костей не наблюдалось.

Вводонио витамина К овприэктомировашшм животным с пороломом но влияло на исслодуемые параметры берцовой и бодронной костей. При этом витамин К оказывал слабое резорбирующее действие на проксимальный эпифиз бедренной кости.

24И,25(ОН)21''5 в использованных дозах но оказывал влияния нл плотность и состав берцовой и бодронной костей, тогда как в проксимальном эпифизе бодренной кости высокая доза этого препарата

несколько усиливала демтюрализанн«!. Аналогичное резор^ируюгцое действие на проксималышй эпифиз оказнпал la(OH)D3„ Комбинированное вводенно животным 24R,25(0H)2D3 и витамина К сопровождалось некоторым ухудшением показателей в берцовой кости, тенденцией к улучшению в бодренной, но но оказывало влияния на проксимальный эпифиз последней. Совместное введение 24R,25(0H)?D3 и Ia(OH)D3 1триводило ic ошжению плотности и миттрализации левой борцовой кости, содержания фосфора в проксимальном эпифпзе бодренной кости, без изменения соответствующих показателей в бедрешюй кости. Такая же картина наблюдалась и при совместном введении 24R,25(0H)2D3, Ia(OH)D^ и витамина К.

Таким образом, в этом исследовании мы не наблюдали положительного влияния введения в течение I мес. Ia(0H)D3, 24R,2,5(0H)2Dg и витамина К на состоягае костной ткани при дашюй патологии. Том но меноо получонные результаты не дают оснований отвергать возможность положительного эффекта при прдаенетш производных витамина Dg и витамина К в mmх дозах и в точение более длительного срока.

4. Ферментные систекн энергетического ыетяболизиа при различной обеспеченности экспериментальных кивотных витамином К.

Дефицит виташша К приводит к снижению активности ряда мем-братшх и цитоплазматичоских ферментов энергетического обмена [Богданов Л. Г., Лидер В.Л. ,1985,19Я('; Уласевич И.И., Почетна М.И.,19741. С целью приблизиться к пониманию природа этого воздействия было исследовано влияние недостаточности этого витамина на активность как цитоплазматичоских (parтворимых), так и мембрано-связатшх ферментов энергетического метаболизма у крыс.

4.Т. Изменение кинетических свойств некоторых цитоплазмэтяческих ферментов.

Алиментарный де^шит витамина К приводил к измонешт гаетети-ческих параметров креатипкиназной реакции в лостмитохондриалышх Фракциях скелетных мышц (ММ-изозим). :(пжущаяся велагпша К фермента для ЛТР возрастала в 1,45 раза (табл.4). Само по себо такое снижение сродства вряд ли можно признать значительным, но, учитывая. что дефицит витамина К сопровождается снижением концентрации ЛТР в скелетных мышцах [Мятусис И.И., Hi74), можно предположить, что эти два фактора могут существенно сказываться на активности да-изозима креатинкинаэн. При этом сродство к креатину осталось неизметшм (Км-7,2-7,7). Для MB- (сердце) и ВВ-изозимов (мозг, почки) не о».по обнаружено достоверных изменений Км для ЛТР и кроа-

тина (1^=7,2-7,7) при дефиците витамина К (табл.4).

Таблица 4. Кинетические параметры изозимов растворимой креатинкиназн для АТР при различной обеспечотюсти крыс витамином К

орган контроль -К

Км, мм ^ах Км- мМ Ашах '

скелетная мышца, ММ изозим 0,40*0,02 4,12*0,32 0,58*0,02* 3,12*0,16*

сердце, MB изозим 0,30*0,02 0,32*0,03 0,31±0,02 0,26*0,09

мозг, ВВ изозим 0,12*0,02 0,34*0,01 0,14*0,02 0,31*0,03

почки, 0,14*0,03 0,040*0,003 0,14*0,02 0,034*0,002

90% ВВ изозим

Примечание. Здесь и в табл.5-8 одна звездочка достоверное отлично (р^0,05) от 1-й группы (контроль).

Суммируя полученные данные, мокно сделать вывод, что к недостаточности витамина К избирательно чувствителен ММ-изозим, а одной из причин, приводящих к снижению активности креатинкиназн скелетных мышц, являотся увеличение К,, для АТР. Учитывая, что витамин К-зявисимая 7-глутямшгкпрбоксилаза в скелетных мышцах отсутствует [Vermeer С. е.а., 1982 3, можно предположить, что влияние дефицита витамина К на ММ-изозим креатинкиназн но опосредовано системой витамин K-зависимого 7-карбоксилировани.я.

4.2. Модифицирующее действие витамина К на активность Na.K-и спектринзависимой АТРаз эритроцитов.

Уморенный алиментарный дефицит витамина К но влиял но активность как зависимой, так и но зависимой от спектрина WgATPasu, выраженной в расчете на I мл теней эритроцитов (табл. 5). В то жо время удельная активность спектринзависимой АТРазы в расчете на I мг мембранного белка тоной эритроцитов у животных, лишенных витамина К, достоверно превышала соответствующие величины у животных контрольной группы болео, чем на 40 %, что обусловлено существенным (до 25-34 %) уменьшением содержания болка в тонях эритроцитов, полученных от животных с дефицитом витамина К. При этом пул проч-носвяэашшх с мембраной болтсов в обета группах оставался неизменным, а значительное) уменьшение происходило за счет пула слабосвязанных с момбраной белков, что хорошо согласуется с данными об

уменьшении гтри дефтдито витамина К в топях эритроцитов количества экстрагируемой водой спектриновой фракции [Бронштейн Л.М. с соавт. Д9071. В таком случае увеличение удольной активности спок-тринзависимой АТРазн, по-видимому, может объясняться либо уменьшением количества балластных по отношению к данному ферменту лабиль-носвязаншх с момбраной эритроцитов болкоп, либо возрастанием прочности взаимодействия спектрина с мембраной эритроцитов при недостаточности витамина К.

•Удельные активности Na,K-ATPa3H при использовании в качестве субстрата как АТР, так и свободно проникающего через мембрану;»» п-нитрофенилфосфята, и базальной МдАТРязы в тенях эритроцитов зта-вотанх исследовашшх групп существенно но различались (табл.в). Это подтверждает сдолянное вше заключение о том, что при дофицито витамина К но происходит количественного изменения прочносвязатшх с мембраной белков.

При исследовании чувствительности К^-п-нитрофенилфосфатазы к уабаину было установлено, что величина I^ в группах животных с алиментарным дефицитом витамина К достоверно увеличивалась почти в 3 раза по сравнению с показателем у контрольной группы (табл.6). Снижение чувствительности Na,К-АТРазн теней эритроцитов к уабаину у животных, по-видимому, может быть обусловлено изменением непосредственного л1пп1дного окружения молекулы Фермента вследствие ко-личестветюго изменения состава и содержания липидов эритроцитар-ной мембраны ¡три дефиците витамина К ГБогданов Н.Г., Лидер B.A.,I9afi; Брошптойи Л.М. с соявт.,19071. Поскольку известны эндогенные уабатшодобнно вещества, регулирующие активность Na.K-АТРззы и транспорт ионов [Болдырев A.A., Мельгунов В.И., 19851, можно предположить, что изменение чувствительности Na.K-АТРпзи к уабаину при недостаточности витамина К может имоть физиологическое значение.

Суммируя полученные данные, можно заключить, что даже умеренный алиментарный дефицит витамина К, сопровождающийся лишь незначительным увеличенном протромбинового вромони, приводит к существенным биохимичоским изменениям. В частности наблюдается увеличение удольиой ЯКТ1ГППОСТИ спектринзависимой АТРазн тоней эритроцитов, по-видалому, обусловленное уменьшением лабилъносвязанной с мембраной фракции белков, а такле снижение чувствительности Ма,К-АТРазн к уабаину.

Таблица 5. Активность зависимых и нэ зависимых от спектрина Мд-АТРаз теней эритроцитов при различной обеспеченности крыс витамином К <М ± т; п = 8)

группа животных

спек тринзависимая'

Са,Мд-АТРаза теней эритроцитов

мкмоль/ч на 1 мл

белок, мг / мл

нмоль/ч на I мг бел<з

Пд-АТРазная активность

теней эритроцитов, экстрагированных водой

~г

НМОЛь/Ч

на 1 мл

белок, нмоль/ч мг/мл на 1 мг белка

количество зкстраги-рсэанного водой бел* э, мг / мл

контроль 2,1810,06 -К 2,08+0,16

23,0+3,6 83+11

»

15,1±1,4 115+2

0,52+0,0? 10,1 il,4 0,59+0,12 9,1 ±1,2

51+ 7 13,0+2,2

<

65+13 6,0+1,2

Таблица 6. Чувствительная и не чувствительная к уабаину АТРазная (нмоль/ч на 1 мг белка) и К -п-нитрофенилфосфатазная (мкмоль/ч на 1 мг белка) активности мембран теней эритроцитов при различной обеспеченности крыс витамином К < М + т; п=4) .

субстрат | ATP j п-нитрофенилфосфат

-1-~т-1-i-1-

Группа I Базальнзя | Уабаин- |5азальная | Уабг-^.н- | I животных¡Mg-ЯТРазная¡чувствительная ¡активность ¡чувствительная¡для узбаина, | активность | Ыа,К-АТРаэа j | активность | мкМ

_L_1__1_1_ I__

контроль 24,5+7,5 1,5+0,? 19,4+3,9 2,б±0,Э ' 50,9+13,0

м

-К 20,5+8,0 1,4+0,6 24,1+7,5 4,3+0,5 153,0+42,1

5. Сраготвя* биохимических из;;..:;при элякентаряом дефиците витамина К и при вяедвяак пе.п^итчна нэ фона портальной обеспеченности тгтаунном к.

Если помимо участия п системе 7-карбокашфовапия витамин К выполняет в организме какио-то другие, но зависящие от этой системы функции, то очевидно, что при подавлении 7-нзрбоксилировяшгя антивитаминами К эти "внекоогуляциотше" Футгкции этого витамина не будут затронуты.

Для выявления и отдифференцирования функций этого витамина, не связанных с ого участием в 7-кярСоксилировэнии, в общей картине нарушений. возникающих при алимонтарном дефиците витамина К, бил исследован и сопоставлен ряд параметров состояния организма при алиментарном дефиците витамина К (протромбиновоо время упялкчивя-лось на 30%) и при введении полонтана (протромбивовое время увеличивалось на 60';?).

Алиментаршй дефицит витамина К у ¡(рас в этом эксперименте приводил к снижению уровня 25(0H)D в сыпоротке крови и активности витамин D 25-гидроксилязы приблизительно на 50$, тогда как введение пелентана на них но отражалось.

Алиментарный дефицит витамина К, практичестси но отражаясь на содержат™ цитохрома ЬГ). приводил к достоверному снижению содеряа-ния цитохрома Р-450 на 30%. Введение пелентана увеличивало содержание цитохрома Ц, но влияя на "одоржанио цитохрома Р-450 (табл.7).

Таблица 7. Влияние алиментарной недостаточности витамина К и

введения пелентана при нормальной обеспечоштости крыс витамином К на содержание и свойства мембранных Ферментов.-

группа животных соде ржаггпо цитохрома, нмоль на I мг Оо.пка шпсросом почете тени ¡эритроцитов

Nn.K-АТРаза, L50 для уапяина, мкМ (л-4) активность споктринзовисимой АТРазы, нмоль/ч на I мг белка (п-8)

Ъ5 (П-3) Р-450 (П-5)

контроль 0,359+0,012 0,334i0,056 5О,Э±13,0 83¿II

-К 0,394*0,005 0,237±0,03I* I59,0t42,I* II5i ?*

пелентан 0,459+0,019* 0,353*0,041 45.5+17,0 80+14

В отлично от алиментарного дофицитп витамина К введотш полонтана ¡ra параметры других мембранных ферментов - Яа.К-ЛТРазн и споктринзапиоимой Ca.Mg-ЛТРазн - влиятгил но оказывало (табл.7).

Удельная активность монадионредуктазы, одного ип Сюрмонтоп цикла витамина К, в расчете на ] мг Солка лостмитохондрияльной фракции, выделенной иг* печени животных, лишенных витамина К, была повышена приблизительно по 40", по сравнению с животными контрольной группы (табл.ъ,. что, вероятно, носит адаптационный характер, позволяя в условиях недостаточного поступления витамина К поддерживать концентрацию ого гидрохинона на достаточно высоком у^юнно. Введение пелонтана но влияло на ого активность.

Таблица О. Влил иг алиментарной недостаточности. витамина К. и введен,,,, пелонтана при нормальной обеспеченности крыс витамином К г/а активность растворимой менодпочродуктагш печени и кинотическио параметры растворимой кроатинкиназн скелетных мышц.

группа животных

кроатшгкиназа

(п-4) мо надионподуктаза

V

мМ

I М8КС.*

мкмоль/мин на ! I мг белка

нмодь/мш! на 1 мг болка

контроль 0,40*0,02 4,12*0,32 7011В

♦ ■к -К 0,58*0.02 3,12*0.ТБ ПО« 17

полентам 0,42*0.02 3,08*0,38 86+19

Активность кроятшшшазы в скелетных мышцах снижалась как при алиментарном дефиците витамина К, так и при введении подпитана (табл.8). Однако, пводепио животным пелонтана, в отличио от алиментарного дефицита витамина К, но приводило к измопонию (по сравнению с нормой) В0ЛИЧ1ШЫ К для АТР. Сродство к креатину во нсох трех группах оставалось неизменным (К =7,2-7,7 мМ). Снижши» активности ММ-изпзима креаппгкиняэы после введения пелонтана г>оз изменения величины К , по-видимому, можот указывать на уменьшение количества этого формонта. Ото дает основание полагать, что механизм изменения активности этого фермента при алиментарном дефиците витамина К и введении антивитамина К различоп.

Подытоживая, можно заключить, что по целому ряду показателей' состояние оргатшма при алиментарном дефиците витамина К и пепдо-нии пелонтана на фоне нормального поступления витамина К с нитей существенно различается, а Функции витамина К но ограничиваются системой 7-карбоксилирования. Введение антивитаминов К позволяет избирательно выявить лишь изменения, обусловленные нарушением 7-карбокеилирования белков, но но может быть использовано в ка-

честно полноценной модели алиметарного дефицит л витамина К, в связи с чем использование применительно к л той модели термина "вто-ричтшй дефицит витамина К" представляется не вполно корректным.

злютотагля

На основании полученных дашшх можно выделить несколько путей участия витамина К в регуляции гомоостаза кальция.

Один из них опосредован изменением метаболизма витамина В и ренетом его активных мотаболитов. В пользу этого говорят такио факты как снижтше при дефиците витамина К концентрации в сыворотке крови основной транспортной формы витамина В - 25(0Н)В, активности 25-гидроксилазы витамина ГЦ, активного транспорта калышл и активности витамин ])-зависимой ' • •-,.'» ^осфятазы в тонком кишоч-нике, а также то, что сочатзпная .^....остато'пюсть обота витаминов не вызывала аддитивного уменьшения активного транспорта кальцгш, содержания тропотиш С в миофибриллах скелетных мшц. Это, по-видимому, указывает на одинаковый механизм воздействия гиповитами-нозов К и I) на эти процессы.

Другой путь регуляторного жпдеяствия витамина К на гомеостаз кальция может осуществляться опое, анпо чореэ мембраны. Подтверждением этому монет служить уменьшение чувствительности Мя.К-ЛТРазы эритроцитов крыс при недостаточности витамина К к специфическому ингибитору - уабаину, сродство к которому зависит от непосредственного окружения фермента в мембрана. В полном соответствии с этим находятся и даштыо об увеличении удельной активности спектринзависимой ЛТРазы вследстп.. .уменьшения количества лабильно связанных с мембраной эритроцитов болков.

ркг

1. Алиментарная недостаточность витамш!я К у крыс, получавших физиологические дозы витамина 0, сопровождалась стосением концентрации в сыворотко крови основной транспортной формы витамина В -25(0И)В, активности 25-гидроксилазы витамина акцизного транспорта кальция и активности витамин П-зависимой щелочной фосфчтазы в тошеом кишечнике. Обеспеченность :--птамином К но влияла на состояние костной ткани у крыс, получавппа рацион с оптимальным соотношением Са и Г.-

2. Алиментарная недостаточность витамина К приводит к изменению кальциевой рогулянми сократите-ого аппарата сколот1ШХ мышц крыс, что выражаотся в уменьшении содержания тропотша С на 25%,

снижении сродства ЛТРазн миофибрилл к Ся^ (рСя уменьшалось с Г,,96 в норме до 6,73), увеличении степени ее активации Со2+ на ?,Ггг..

3. Впервые охарактеризованы показатели обмена калЬция и состав костной ткани у овариоктомированных крыс в возрасте 15 месяцев поело перелома большой борцовой кости. Введение в точение I месяца витамина К но оказывало положительного влияния на минерализацию перелома.

4. К алимен .; рной недостаточности витамина К чувствителен только мышечный изозим растворимой кроатинкиназы. что проявляется в уменьшении А___. и увеличении величины К., для АТР. Кинетические

Ш'*»Л. м

параметры мозгового и сердечного изозимов но изменяются.

5. Умоньшог* сродства Ма.К-ЛТГазы эритроцитов крыс с недостаточностью витамина К к уабаину (специфическому ингибитору Na.K-АТРазы) по сравнению с нормально обеспеченными этим витамином животными, а также увеличение удельной активности спектринзависи-мой АТРазы вследствие уменьшения количества лабильно связанных с мембраной белков свидетельствуют о модифицирующем действии витамина К на активность этих Формонтов посредством изменения белкового и липидного состава мембран эритроцитов.

6. Изменение активности растворимых кроатинкиназы и монядион-редуктазы, монбраттых Na,К- и спектринзависимой АТРаз, количества цитохрома Р-450 в микросомах печени, иаблюдаомно при алиментарной недостаточности витамина К, но обнаруживаются при вволокли антивитамина К. - полонтана. Это даот основания полагать, что указанные изменения опосредованы не витамин K-зависимой систомой 7-карбоксилирования, я обусловлены иными биохимическими механизмами.

7. Сформулирована концопция о мембраноопосродованном и об опосредованном через гормональную систему витамина Ü действии витамина К на процессы регуляции ос.тоогоноза, обмена кальция и Фер-.ментные системы энергетического обмена, участвующие в поддержании кальциевого гомеостаза, согласно которой роль витамина К но ограничивается витамин K-зависимой посттрэнсляционной модификацией Glu-остатков Са-спязнващих белков.

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

I. Сокольников A.A., Коденцова В.М., Климова O.A. Влияние алиментарной недостаточности витамина К у крыс на фпрмонты энергетического обмена // Проблемы современной биологии: Труды 18 научной конференции молодых учоных биологического факультета МГ.У.-М., 1987. Доп. в МШЮЧ; 14.09.87 - В--87.

2. Кодонцова В ^ М., Рисник В. В.. .'келыппсов Л. Л., Стфичев

B.Б.Изменение Са^ активации ЛТ'Х'лзной активности миофибрилл сколотых мышц крысы при алиментарной витамин D и витамин К недостаточности // Тезисы докладов VIII Всесоюзного симпозиума "Биофизика и биохимия биологической подвижности".- Пушино, 1987.

C.106-107

3. Колосова P.M., Сокольников Л.Л.. Кодонцова В.М., Климова

0.Л., Сергеев И.11., Спиричев В.Б. Влияние недостаточности витамина К У крыс на некоторые форментныо системы, участвующие в энергообеспечении // Вопр. мед. химии.- 1988. - Т.34, вып. 4. -С.46-50

4. Koilentnova V.M., П1зп1к V.V., r.okolntkov Л.Л., Serpeov

1.N., Splrlehev V.B. Vitamin D effeotn on Cn-stlmulated ATF'ane activity anrl protein composition oi the rats skeletal muncle mloflbrJlls // Abntracts of the Seventh Workshop on vitamin D. -Rancho Mirage, USA, 1988. - P.76,?

5. Сокольников А.А., Кодонцова P.M., Сергеев И.Н., Струнvni С.E., Климова U.Л., Спиричев в.Б. Обмен кальция при недостаточности витаминов D и К // Bonn, питания. - 1989, >1.

С.56-60

п. Кодонцова В.М., Сокольников Л.Л. Активность некоторых ферментов энерготичоского обмена почек и кишечника крыс при дефиците витаминов D и К // Укр. биохим. журнал. - 1989. - Т.61, * 4. - С. 77-82.

7. Сокольников А.А., Климова О.Д., Кодонцова В.М., Алексеева И.Л. Влияние алиментарной недостаточности витаминов В?, С и К на

зависимость активности щелочной ф-ч-фатазы слизистой оболочки тонкого кишечника крыс и морских свинок от витамина I) // Труды научной конкуренции молодых ученых "Мчдико-биологичоские аспекты науки о питании". -Алма-Ата, 1987. - Дон. в КазНИИНТИ 10.05.89.2480.

8. Кодонцова В.М., Рисник В.В.. Сокольников А.А., Спиртов В.Б. Са-стимулируемая АТФазняя активность и содоржанио трононина С в миофибриллах скелетных мышц крыс: зависимость от обеспеченности витамином D // Тезисы докладов VI Всесоюзной конференции по биохимии мышц. - Тбилиси, 1909. - C.bs-f>t',

9. Сокольников А.А., Кодонцова В.М. Сравнение биохимических изменений при алиментарном дефиците витамина К и оведонии антивитамина К - полонтана // Тезисы докладов Всесоюзной конференции "Клиническая витаминология". - М., 1991. - С.29

10. Сокольников А.А., Кодонцова R.M. Роль витамина К в регуляции активности ферментов энергетического метаболизма // Тезисы докладов Всесоюзной конференции "Клиническая витаминология". - М., 1991. - С.59

11. Сокольников А.А. Влияние витамина К и метаболитов витамина В на обмен кальция и костную ткань у овариэктомированннх крыс с переломом большой берцовой когти // Тозисн докладов Всесоюз}юй конференции "Клиническая ; нтаминология''. - М-, 1991. -

С. 60

12. Сокольников А.Л., чувствительность изозимов крое витаминов К и П // Тознсы д<

чокая О.А. Различная ты к недостаточности Неесоюзной конференции

"Клиническая витаминология". M.t 1991. - С.в!

13. Рисник В.В., Сокольников Л.Л. Зависимость от обеспеченности витаминами К и D Са-стимулируемой АТФлзной активности и содержания тропотшэ С в миофибрштах скелетных мышц крысы // Тезисы докладов Всесоюзной конференции "Клиническая витаминология". - М., 1991. - C.G2

14. Коденцов.. В.М., Сокольников А. Л., Вржосинская о.д., Спиринев В.Б. Клиянио обеспеченности крыс витамином К и введения полентана на Na,K- и спектринзависимую АТРазы тоней эритроцитов // Биохимия. - 1991. - Т.56, вып.4. - С.727-732

15. Тмина О.В., Сокольников Л.А., Жарова Т.В., Кодонцова В.М., Лейкин РЧ., Спиричов В.Б. Метаболические функции изолированных ми. .ондрий печени при различной обеспеченности крыс витаминами D и К и вводонии полентана // Вопр. мод. химии. - 1991. - Т.37, И 4. - С.65-69

IG. Сокольников А.А., Жарова Т.В., Тишина О.В., Кодонцова В.М., Лейкин Ю.Н. Состояние митохондрий почени и активность креатинкиназн тканой крысы при вводонии антивитамина К // Укр. Оиохим. журнал. - 1991. - Т.63, * 5. - С.102-106 '

Т7. Kodentsova V.M., Sokolnlkov A.A., Rlonlk V.V., Spirtchev V.в.Vitamin К biological functions unconnected with vitamin K-dependent 7-carboxylatlon system // Abstracts of the first international congress on "Vitamins and blofactors in life science". - Kobe, Japan, 1991.- P.105

18. Сокольников A.A.,

характеристики кроатюпашазн и гоксокиназы скелетных мышц крысы при пищевом дефиците витамина К и вводонии полентана // Укр. Оиохим. журнал. - 1992. - Т.64, № I. - C.Y2-7T

19. Сокольников А.А., Кодонцова В.М., Спиртов В.Б. Содержание кальция и фосфора в костной ткани у овариэктомироватмх крыс с пероломом большой берцовой кости: влияние витамина К и метаболитов витамина D // Физиологический журнал. - 1992. - Т.38,

* 2. С.29-36

20. Сокольников А.А., Шинкович Т.Е., Кодепцова Н.М., Вркесинскяя О.А., Спиричов В.Б. Активность монадионродуктазы и содержание 1щтохромов bs и Р-4ЬО в почони при различной

обеспеченности крыс витамином К и введении полентана // Вопр. мед. химии. - 1992. - Т.38, * 5. - С.15-17

21. Kodentsova V., Sokolnlkov А., Rltmlk V. Diet Са/Р ratio altera the sennitlvlty of rat BB creatine kinase activity to vitamin D supply. // Abstracts of the ninth workshop on vitamin D.- Florida, USA, 1994.- P.101

22. Sokolnlkov A., Kodentsova V., Spirlehev V. Calclnm and phosphorus content In bone tissue of ovarlectomlzed rats with a fracture of the shlnbone: effect of vitamin К and vitamin D metabolites // Abstracts of the ninth workshop on vitamin D.-Florlda, USA, 1994.- P.210 .

Вржесинская О.А., Гончарова