Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эколого-географические особенности накопления биологически активных веществ кипрея узколистного (Chamerion angustifolium (L.)Holub), произрастающего на территории Красноярского края

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Эколого-географические особенности накопления биологически активных веществ кипрея узколистного (Chamerion angustifolium (L.)Holub), произрастающего на территории Красноярского края"

На правах рукописи

Полежаева Ирина Викторовна

ЭКОЛОГО-ГЕОГРАФИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ НАКОПЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

КИПРЕЯ УЗКОЛИСТНОГО (CHAMERION ANGUSTIFOLШM (Ь.) НОШВ), ПРОИЗРАСТАЮЩЕГО НА ТЕРРИТОРИИ КРАСНОЯРСКОГО КРАЯ

03 00 16 - экология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 3 МАЙ 2007

Красноярск - 2007

003063089

Работа выполнена на кафедре товароведения и экспертизы продовольственных товаров ГОУ ВПО «Красноярский государственный торгово-экономический институт»

Научный руководитель

доктор биологических наук, профессор Меняйло Лидия Николаевна

Официальные оппонент

доктор биологических наук, профессор Машанов Александр Иннокентьевич

доктор биологических наук, профессор Степень Роберт Александрович

Ведущая организация

Институт естественных и гуманитарных наук ФГУО ВПО Сибирского федерального университета

Защита диссертации состоится «23» мая 2007 г в 9— часов на заседании диссертационного совета Д 220 037 01 при ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет» по адресу. 660049, г Красноярск, пр Мира, 90 Факс (3912)27-86-52

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет»

Автореферат разослан «23» апреля 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета Полонская Д Е

Актуальность темы. Огромный резерв растений с повышенным содержанием различных ценных веществ представляет флора Сибири, в том числе такой регион, как Красноярский край (Лагерь А А , 1992)

Особенности климатических и экологических условий, разнообразие географических зон обусловливают специфику обменных процессов, протекающих в растениях, способствуют синтезу и накоплению в них биологически активных веществ (Минаева В Г , 1991, Телятьев В В 1987)

Исследование дикорастущих лекарственных растений и возможности их использования продолжают оставаться актуальными Одним из таких растений является кипрей узколистный (СЬатепоп агщиБийЯшт (Ь ) Но1иЬ) В народной медицине экстракты этого растения используются для лечения и профилактики заболеваний желудочно-кишечного тракта, они также оказывают капилляро-укрепляющее действие (Махов А А , 1986, Лебедев В П , 2003)

Основанием для проведения данного исследования явилось недостаточная изученность химического состава кипрея узколистного

Работа выполнена при поддержке Красноярского краевого фонда науки (14С042)

Цель работы - изучение химического состава кипрея узколистного, произрастающего в разных эколого-географических условиях Красноярского края

Основные задачи:

1 Изучить химический состав кипрея узколистного, собранного в трех почвенно-климатических зонах Красноярского края подтайга предгорий (Саянского района), Красноярская лесостепь (Емельяновский район), тайга низменности (Северо-Енисейский район)

2. Определить условия выделения биологически активных веществ путем экстракции группой растворителей из кипрея, в зависимости от района его произрастания

3 Исследовать возможности утилизации послеэкстракционного шрота кипрея узколистного методом биоконверсии.

4 Изучить фармакологические свойства полученных экстрактов Научная новизна. Исследованы особенности химического состава кипрея

узколистного в зависимости от места произрастания, на территории Красноярского края

Изучен аминокислотный и минеральный состав кипрея узколистного, произрастающего в разных экологических условиях Красноярского края Определен компонентный состав эфирных масел кипрея

Проведена экстракция и изучен химический состав экстрактов зеленой биомассы кипрея, полученных с использованием группы растворителей с возрастающей полярностью и сжиженной СОг

Установлены иммунотропные и антигипоксические свойства водного и углекислот ного экстрактов кипрея Предложен способ утилизации послеэкстракционных остатков после выделения экстрактивных веществ

Защищаемое положепие. Автор выносит на защиту исследование химического состава кипрея узколистного в зависимости от эколого-географических особенностей произрастания.

Практическая значимость. Полученные результаты исследований позволяют провести оценку накопления биологически активных веществ кипрея узколистного на территории Красноярского края Результаты работы используются в учебном процессе кафедры «Экспериментальной и клинической фармакологии с курсом ПО» Красноярской государственной медицинской академии

Апробация работы. По теме диссертации опубликовано 32 печатных работы, в том числе 1 в изданиях, определенных ВАК РФ Основные результаты работы докладывались и обсуждались на межвузовской научной конференции «Молодежь и наука — третье тысячелетие» (Красноярск, 2003), научной конференции аспирантов «Актуальные проблемы современной науки и пути их решения» (Красноярск, 2004 - 2006), Всероссийской конференции молодых ученых «Актуальные проблемы экологии и охраны окружающей среды» (Уфа, 2004), международной научно-практической конференции «Потребительский рынок качество и безопасность товаров и услуг» (Орел, 2004), Всероссийской научно-практической конференции аспирантов (Екатеринбург, 2005), Н-ой Всероссийской научно-практической конференции «Окружающая среда и здоровье» (Пенза, 2005), региональной научно-практической конференции «Непрерывное экологическое образование и экологические проблемы» (Красноярск, 2005), I (IX) Международной конференции молодых ботаников (Санкт-Петербург, 2006), IV-ой Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ» (Сыктывкар, 2006), международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы современной химии в исследованиях молодых ученых» (Астрахань, 2006), международной научной конференции «Химия, химическая технология и биотехнология на рубеже тысячелетий» (Томск, 2006), международной научно-практической конференции «Биоэлементы» (Оренбург, 2007)

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, четырех глав, выводов, списка использованной литературы и приложения Работа изложена на 116 страницах машинописного текста, содержит 29 рисунков, 21 таблицу Список литературы включает 169 источников, в том числе 18 иностранных

Личный вклад. Эксперименты, обработка и интерпретация полученных результатов выполнены лично автором

Благодарности. Автор выражает глубокую благодарность научному руководителю д б н , профессору Меняйло Л Н , к х н , доценту Полежаевой Н И , к м н , доценту Веселовой О Ф и м н с Смирновой М А

Глава 1 Литературный обзор

Дана характеристика исследуемого растения, приведены имеющие в литературе данные о химическом составе биологически активных веществ кипрея узколистного Изложены сведения о методах выделения экстрактивных веществ из растительного сырья и изучение их биологической активности

Глава 2

Объекты и методы исследования

Объектом исследования служила надземная часть Chamerion angustifolium (L ) Holub Заготовку осуществляли в период массового цветения кипрея (июль-август) Для изучения химического состава использовали верхнюю часть растений длиной 50 см Сырье сушили в тени до воздушно-сухого состояния и измельчали до размера частиц 1-3 мм

Территория Саянского района Красноярского края относится к подтайге предгорий Рельеф представляет собой слабохолмистую предгорную равнину Своеобразие природных условий обусловило формирование выщелоченных, оподзоленных, обыкновенных черноземов и серых лесных почв Основные типы растительности представлены лесами, лугами, степями, болотами, кустарниковой и водной растительностью Климат резко континентальный с холодной продолжительной зимой и коротким жарким летом На степень увлажненности оказывают влияние отроги Восточного Саяна, являющиеся преградой для влагоносных воздушных течений западного направления [Климат и воды , 1980, Русанов В И , 1973]

Емельяновский район относится к Красноярской лесостепи Рельеф холмисто-увалистый Из почв преобладают выщелоченные черноземы, встречаются обыкновенные и оподзоленные черноземы глинистого механического состава Почвы, в основном, имеют нейтральную реакцию среды Растительность представлена древесными растениями, которые образуют лесную подстилку - основной источник органического вещества почвы Сенокосы и пастбища представлены богатым разнотравием [Бугаков П С , 1995] Климат Емельяновского района резко континентальный с жарким летом и холодной зимой [Зубоилова Г И , 1986]

Северо-Енисейский район относится к тайге низменности В зимний период на территории формируется континентальный умеренный воздух с низкими температурами и незначительным влагосодержанием [Средняя Сибирь , 1964] Минимальные зимние температуры (декабрь, январь) достигают - 61°С, максимальные летние +34°С (июль) Безморозный период короткий - 89-95 дней [Зубоилова ГИ, 1986] Среднегодовая температура составляет -5°С Почвы преимущественно подзолистые, луговые и болотные глинистого и суглинистого механического состава с кислой и слабокислой реакцией среды В Северо-Енисейском районе распространены лиственнично-сосновые леса [Бугаков ПС, 1995]

Исследования химического состава кипрея проводили по общепринятым методикам Содержание влаги и зольность определяли весовым методом

[Оболенская В А., 1991], легкогидролизуемые полисахариды - титрованием по методу Кизеля и Семигановского [Шарков В И, 1968] Лигнин определяли с помощью обработки растительного сырья хлоридом цинка в соляной кислоте по методу, разработанному ИД Поповым [Попов ИД, 1956], клетчатку -обработкой азотной кислотой в этиловом спирте, дубильные вещества -титрованием водного экстракта перманганатом калия с применением индигосульфокислоты в качестве индикатора [Оболенская В А, 1991], белковые вещества - по методу Кьельдаля Количественное содержание аскорбиновой кислоты из подкисленного водного экстракта устанавливали титриметрически по реакции Тильманса [Методы биохимического исследования , 1972] Количественное определение рутина проводилось методом перманганатометрии [Лещук Р И, 2002] Каротин определяли спетрофотометрией бензиновых экстрактов проб сырья [Плешков Б П , 1985] Определение антоцианов проводили спектрофотометрическим методом путем измерения оптической плотности кислотного извлечения [Лещук Р И, 2002] Спектрофотометрическое определение суммы хлорофиллов проводили по методу Вернона [Практикум по физиологии , 1990]

Качественный и количественный анализ свободных аминокислот осуществляли с помощью аминокислотного анализатора KLA-3B (Hitachi, Япония) Макро- и микроэлементы определяли методом масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой с использованием спектрометра серии ELAN 9000 (Perkin Elmer, США) Компонентный состав эфирных масел кипрея узколистного, полученных методом гидродистилляции, определяли на газовом хроматографе (Hewlett Packard GCD Plus, США) с квадрупольным масс-спектрометром (HP MSD)

Исчерпывающую и последовательную экстракции проводили с использованием аппарата Сокслета Методами УФ- и ИК-спектроскопии получены сведения о химическом составе экстрактов, выделенных из кипрея узколистного различными растворителями Экстракцию сжиженной углекислотой проводили на лабораторной установке ООО «Экспро» (г Железногорск)

Определение острой токсичности водного и углекислотного экстрактов кипрея узколистного, их иммунотропных эффектов и антиоксидантной активности проводили на белых беспородных половозрелых мышах массой 20,0-25,0 г, которые содержались в условиях лабораторного вивария в соответствии с Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных Определение токсичности с расчетом ЛД50 осуществляли по [Иванов ЮИ, 1986] с использованием прилагаемых к методике программ, таблиц и формул Наличие иммунотропных свойств устанавливали путем анализа изменений относительной массы тимуса (отношение массы органа к массе животного) Антигипоксические свойства выявляли по оценке уровня физической работоспособности животных при нагрузке аэробно-анаэробного типа [Аулик И В , 1990]

Глава 3

Изучение химического состава СЬатепоп аи^^МоНит (Ь.) Но1иЬ

3.1 Сравнительная оценка химического состава кипрея узколистного из разных мест произрастания

Полученные результаты химического состава надземной части кипрея узколистного приведены в таблице 1

Таблица 1 - Химический состав надземной части кипрея узколистного

Определяемые показатели Почвенно-климатические зоны

Подтай га предгорий Красноярская лесостепь Тайга низменности

1 2 3 4

Белковые вещества, % 13,00 + 0,30 16,40 ±0,42 12,21 ±0,28

Легкогидролизуемые полисахариды (слизи), % 8,83 ±0,19 14,06 ± 0,30 10,07 ±0,26 19,37 ±0,32

Дубильные вещества, % 8,00 ±0,12 9,63 ±0,17 7,20 ±0,12 10,10 + 0,21 6,12 ±0,10 10,06 ±0,20

Клетчатка, % 17,09 ±0,33 23,81 ±0,40 16,26 ± 0,35 26,01 ±0,46 13,13 ±0,22 21,96 ±0,31

Лигнин, % 9,27 ±0,17 13,80 ±0,28 8,67 ± 0,13 10,31 ±0,21 10,09 + 0,20 12,85 ±0,24

Антоцианы, % 1,01 ±0,02 1,81 + 0,03 1,25 ± 0,02

Хлорофилл а, мг/л 7,16 ±0,11 8,02 ±0,13 5,11 ±0,09

Хлорофилл Ь, мг/л 10,05 ±0,21 13,56 ±0,28 9,34 ± ОД 8

Аскорбиновая кислота, мг% 129,5 ± 1,3 56,38 ± 0,69 209,1 ±3,6 90,10 ±0,92 225,1 ±3,9 76,70 ±0,84

Рутин, мг% 15,68 ±0,29 27,72 ±0,46 16,00 + 0,31

Каротин, мг% 4,16 ±0,08 7,59 ±0,13 3,64 ± 0,06

1 2 3 4

Влажность, % 8,37 ±0,08 8,60 ±0,11 7,58 + 0,09 8,03 ±0,07 6,77 ±0,08 7 40 ±0,10

Зольность, % 5,71 ±0,12 4,05 ±0,10 6,40 ±0,11 3,56 ±0,09 538 + 0,11 3,05 ±0,08

Примечание содержание компонентов в числителе для листьев и цветков, в знаменателе - для стеблей

Кипрей узколистный, произрастающий в Красноярской лесостепи, характеризуется максимальным содержанием белков и клетчатки, и минимальным - лигнина Количество хлорофиллов а и Ь в биомассе этого кипрея было более высоким, что, вероятно, обеспечило растениям большую активность фотосинтеза, лучшую обеспеченность фотоассимилятами и максимальную продуктивность

Наибольшая концентрация легкогидролизуемых полисахаридов (слизей) установлена в листьях кипрея Красноярской лесостепи Возможно, активный синтез этих полисахаридов является тем биохимическим механизмом защиты растений, позволившим поддерживать высокий осмотический потенциал тканей, максимальную активность биосинтетических ростовых процессов в условиях меньшего количества осадков и большего дефицита влаги, которыми характеризовалась в исследуемые годы Красноярская лесостепь

Различия по содержанию дубильных веществ между растениями разных местопроизрастаний были несущественны Максимальные содержания антоцианов, рутина и каротина определены в сырье кипрея Красноярской лесостепи, а аскорбиновой кислоты - тайги низменности

В заготавливаемой части кипрея установлено присутствие 17 из 18 протеиногенных свободных аминокислот (табл 2)

Таблица 2 - Аминокислотный состав белков биомассы кипрея узколистного

Содержание, % в пересчете на а с с Почвенно-климатические зоны

Подтайга предгорий Красноярская лесостепь Тайга низменности

1 2 3 4

Лизин 0,46±0,01 0,48±0,01 0,31±0,01

Гистидин 0,26±0,01 0,31±0,01 0,20±0,01

Аргинин 0,58±0,01 0,56±0,01 0,49±0,01

Аспарагиновая кислота 1,29±0,03 1,32±0,04 1,21 ±0,03

1 2 3 4

Треонин 0,49±0,01 0,50±0,01 0,34±0,01

Серии 0,52±0,01 0,54±0,01 0,43±0,01

Глутаминовая кислота 1,77±0,03 1,83±0,03 1,63±0,03

Пролин 0,62±0,02 0,64±0,02 0,58±0,01

Глицин 0,55±0,01 0,53±0,01 0,42±0,01

Аланин 0,60±0,02 0,61 ±0,02 0,53±0,01

Валин 0,61±0,02 0,65±0,02 0,60±0,02

Метионин + цистеин 0,13±0,01 0,15±0,01 0,09±0,01

Изолейцин 0,50±0,01 0,55±0,01 0,47±0,01

Лейцин 0,80±0,02 0,87±0,02 0,80±0,02

Тирозин 0,31±0,01 0,35±0,01 0,27±0,01

Фенилапанин 0,58±0,01 0,54±0,01 0,54±0,01

Концентрации аминокислот не зависят от экологических условий обитания растений Достойным внимания фактором явилось сравнительно высокое содержание четырех незаменимых аминокислот - лейцина, валина, фенилаланина и изолейцшга

Зольность характеризует валовое содержание всех макро- и микроэлементов, поступающих в растениях Максимальный уровень золы определен в биомассе кипрея, произрастающего в Красноярской лесостепи, минимальное в тайге низменности

В кипрее узколистном было определено 26 химических элементов На рисунке 1-8 представлены данные о содержании макро- и микроэлементов в листьях, стеблях и цветках кипрея узколистного, собранного в разных районах Красноярского края

Образцы кипрея узколистного, собранные в разных районах Красноярского края, имеют одинаковый качественный состав, но существенно отличаются по количественному содержанию элементов Химические элементы распределены по органам растения неравномерно Установлено, что независимо от зоны произрастания, растения накапливают большое количество кальция, бария, меди, железа, калия, магния, марганца, натрия и цинка Алюминий, кальций, селен, хром, медь, железо, калий, магний, марганец, натрий, никель и стронций больше накапливаются в листьях и стеблях Барий, висмут и селен преобладают в цветках Содержание бериллия и галлия во всех образцах незначительно

s s

Рис.5.

Рис.6.

Рис.7. Ри(=.8.

Рис. 1-8. Диаграммы распределения химических элементов в листьях (1,4,7), стеблях (2,5,8) и цветках (3,6,9) Скатегюп ап%ти/о1шт (Ь.) Но1иЬ в зависимости от зоны произрастания: 1-3 - тайга предгорий; 4-6 - тайга низменности; 7-9 - Канеко-Храсноярская лесостепь

Установлена следующая закономерность содержания элементов: Ca>K>Mg>Na>Mл>Fe>Sr>Zn>Ba>Лi>Cu>Ti>Sb>Лs>Se>N^>V>Ce> Сг.

Изменчивость и варьирование содержания элементов определяется совокупностью биогеохимических факторов и отражает особенности экологии района произрастания, лесостепи, что объясняется близостью расположения к г ороду Красноярску.

Показано наличие во всех образцах кипрей необходимых для организма человека макро- и микроэлементов: Са, К, Ре, Мп, Хп, Мц и Си. Из токсичных элементов установлено присутствие С(3, РЬ, Щ. Наибольшее их содержание наблюдается в кипрее, собранном в Красноярской.

3.2. Определение химического состава эфирного масла килрея

узколистного

Данные о компонентном составе эфирных масел кипрея узколистного приведены в таблице 3.

В эфирном масле обнаружены 20 компонентов, 15 из которых идентифицированы. Среди них можно назвать представителей ациклических монотерпенов (линалоол), моноциклических монотерпенов (лимонен), б и циклических монотерпенов (сх-гшнен, камфен), ароматические соединения (бензоацетоальдегид, эвгенол). Довольно широко представлен ы кислородсодержащие соединения (3-гексен-1 -ол, бензальдегид камфора, терпинеол, эвгенол).

Таблица 3 - Основные компоненты эфирного масла кипрея узколистного

Содержание компонентов, % Почвенно-климатические зоны

Подтай га предгорий Красноярская лесостепь Тайга низменности

З-гексен-1-ол 16,5 14,0 15,8

3-туйен - 1,5 1,8

а-пинен 2,8 1,4 3,2

камфен 0,4 0,1 0,6

бензальдегид 1,3 2,1 1,5

А3-карен 0,7 0,4 0,7

4-этил-1,2-диметил-бензол - - 0,7

лимонен 1,3 1,5 1,7

бензоацетоальдегид 20,2 31,4 21,4

фелландрен - 1,2 1,7

линалоол 11,9 10,3 10,6

камфара 1,0 0,8 1,2

терпинеол 1Д 2,0 2,1

линалил пропиат 6,1 8,1 8,4

эвгенол 25,1 15,2 20,4

Не идентифицировано 11,6 10,0 8,2

Преобладающими компонентами эфирных масел является бензоацетоальдегид, эвгенол и З-гексен-1-ол, причем наибольшее содержание бензоацетоальдегида (31,4%) наблюдается в кипрее, собранном в Емельяновском районе В этом же образце содержание З-гексен-1-ола (14,0%) и эвгенола (15,2%) - наименьшее Сравнительный анализ образцов эфирных масел кипрея узколистного, собранного из различных местообитаний, показывает, что по набору основных компонентов исследуемые образцы растений очень близки между собой, различия же наблюдаются в соотношении основных компонентов Наибольшее содержание терпенов обнаружено в кипрее, произрастающем в тайге низменности Эфирные масла, прежде всего, выполняют в организме растений защитную функцию, защищая растения от болезней, вредителей, предохраняют их от колебания температур, затягивают раны Заслуживает обсуждения выявленное высокое содержание трех кислородсодержащих соединений в зеленой массе кипрея из наиболее неблагоприятной по температурному режиму зоне исследования - тайге низменности Здесь растения могут испытывать стресс из-за резкого колебания температур, а компоненты эфирных масел могут выполнять защитную функцию в качестве антиоксидашов

Глава 4

Выделение н изучение экстрактивных веществ СЬашепоп а^ивНМшт

(Ь.) Но1иЬ

4.1. Экстракция надземной части кипрея узколистного различными

растворителями

Для выделения содержащихся в кипрее узколистном экстрактивных веществ проводили исчерпывающую и последовательную экстракции группой растворителей с возрастающей полярностью диэтиловый эфир, этилацетат, изопропиловый спирт и вода Полученные данные представлены в таблице 4

Наибольший выход экстрактивных веществ достигается при экстракции водой биомассы кипрея, собранной в подтайге предгорий - 46,07%, Красноярской лесостепи - 54,11%, тайге низменности - 40,48%, Установлено, что общий выход экстрактивных веществ составил для кипрея, произрастающего в подтайге предгорий, Красноярской лесостепи и тайге низменности соответственно % 45,15, 53,90, 47,79 Выход экстрактивных веществ из биомассы надземной части кипрея зависит о г района произрастания

Таблица 4 - Выход экстрактивных веществ при экстракции надземной части кипрея узколистного, произрастающего в подтайге предгорий (1), Красноярской лесостепи (2) и тайге низменности (3) Красноярского края

Растворители Выход (в % от а с н )

при последовательной при исчерпывающей

экстракции экстракции

1 2 3 1 2 3

Диэтиловый эфир 4,10 6,20 5,05 4,10 6,20 5,05

Этилацетат 3,24 2,32 2,61 10,06 13,54 11,77

Изопропанол 11,50 10,97 12,65 22,84 23,32 28,73

Вода 26,31 34,41 27,48 46,07 54,11 40,48

Общий выход 45,15 53,90 47,79

Наибольшее содержание экстрактивных веществ наблюдается при экстракции кипрея, собранного в Красноярской лесостепи Красноярского края, что обусловлено более благоприятными климатическими условиями (осадки, температура), по сравнению с двумя другими районами

Методами УФ- и ИК-спектроскопии были получены данные о составе экстрактов, выделенных из кипрея растворителями различной полярности при последовательной экстракции Анализ частотных характеристик показал, что полученные экстракты содержат биологически активные вещества диэтиловый экстракт - терпеноидные соединения, а также фенольные, жирные и смоляные кислоты, этилацетатный - катехины и лейкоантоцианы, изопропанольный и водный - сахара, полиглюкозиды флавоноидов, олигомерные лейкоантоцианы и конденсированные фенольные соединения

4.2. Оптимизации процесса экстракции сжиженной углекислотой

Для планирования экспериментов и математической обработки использовали симплекс - решетчатый метод планирования эксперимента (неполная кубическая модель) Параметром оптимизации выбран выход экстрактивных веществ - у (% от а с с ) В качестве независимых переменных были взяты следующие факторы, влияющие на выход экстрактивных веществ XI - размер частиц сырья (от 3 до 7), мм, х2 - продолжительности экстракции (от 1 до 6), ч, х3 - температура (от 20 до 30), °С Получено следующие уравнение регрессии

у = О 63 х, + 1,87 х2 + 1,30 х3 + 0,48 х,х2 + 0,54 х,х3 + 0,91 х2х3 + 2,12 х,х2х3 На основании данных уравнения регрессии был построен треугольник, отражающий влияния трех параметров на выход экстрактивных веществ (рис 9).

Рис 9 Выход экстрактивных веществ в зависимости от размера частиц сырья (х|), продолжительности экстракции (х2) и температуры (хз)

По полученным данным установлен следующий оптимальный режим экстракции

размер частиц сырья — 3 мм, продолжительности экстракции — 5 ч, температура — 22 °С

4.3. Экстракция надземной части кипрея узколистного сжиженной

углекислотой

Одним из современных экстрагентов, используемых при переработке является сжиженная углекислота Сжиженные газы имеют низкую температуру

кипения, что позволяет сохранить термолабильные биологически активные вещества На основании проведенной оптимизации процесса экстракции кипрея сжиженной СОг достигаются максимальные извлечения экстрактивных веществ из биомассы кипрея, собранного в подтайге предгорий - 1,44%, Красноярской лесостепи - 1,92%, тайге низменности - 1,23% Углекислотные экстракты кипрея узколистного, полученные при этих условиях, характеризуется высоким содержанием липидов, хлорофилла и витамина Е

4,4. Утилизация послеэкстракционного остатка кипрея узколистного микробиологическим методом

Утилизацию послеэкстракционных остатков проводили методом биоконверсии Для этого использовали дереворазрушающий гриб ПеигоШБ 051геаП15 Полученный в результате микробиологической обработке ферментированный остаток характеризуется повышенным содержанием легкогидролизуемых полисахаридов - 14,12%, и лигнина - 8,40 % Ферментированный остаток характеризуется высокой перевариваемостыо (33,20 %) и может быть рекомендован в виде кормовой добавки для сельскохозяйственных животных

4.5. Исследование биологической активности экстрактов кипрея

узколистного

Перспективность использования препаратов растительного происхождения определяется тем, что в них содержится комплекс биологически активных веществ с различными механизмами действия

Острую токсичность водного и углекислотного экстрактов кипрея оценивали по клиническим симптомам отравления, физиологическим тестам и выживаемости животных в течение 2-х недель путем введения внутрижелудочно с помощью металлического зонда ЛД50 водного и углекислотного экстрактов кипрея узколистного установить не удалось, так как гибели животных при приеме не наблюдалось Можно утверждать, что она составляет выше 250 г/кг На основании проведенного токсикологического исследования водный и углекислотный экстракты кипрея узколистного отнесены к 4 классу малотоксичных веществ

Для определения иммунотропных свойств экстрактов кипрея узколистного животных разделили на четыре группы В первой группе проводили иммунносупрессию мышей путем введения азотиоприма в дозе 50 мг/кг Второй и третьей группе мышей (опытные) вводили экстракты кипрея узколистного по 0,3 мл, приготовленного из расчета ГЗО, один раз в сутки в течение семи дней Четвертая группа, контрольная, получала по 0,3 мл дистиллированной воды по той же схеме, что и опытная

В первой группе относительная масса тимуса составила 0,70%, во второй группе - 0,20%, в третьей - 0,18%, в четвертой - 0,14% Полученные данные по относительной массе тимуса позволяют говорить о Т-лимфотропном эффекте кипрея

Результаты проведенных экспериментов по выявлению антигипоксических свойств экстрактов кипрея свидетельствуют, что уровень физической работоспособности мышей в контрольной группе достоверно снижался вследствие ежедневных чрезмерных нагрузок по сравнению с исходным значением на 83,45%, достигая минимума на 21-й день наблюдения

Ежедневное введение водного и углекислотного экстрактов кипрея опытным животным приводило к увеличению продолжительности плавания животных в режиме тестирующей нагрузки Работоспособность мышей повышалась по сравнению с контрольной группой уже на 7-й день Прирост средней продолжительности плавания составил по сравнению с исходным уровнем на 14-й день на 28,9% при введении водного экстракта и на 37,5% приведении углекислотного экстракта, на 21-й день — на 48,9% и 89,0% соответственно Полученные результаты свидетельствуют, что водный и углекислотный экстракты кипрея обладают антигипоксическим действием и способствуют оптимизации резервных возможностей организма при выполнении интенсивных физических нагрузок

4.6 Использование кипрея узколистного в качестве функциональной добавки в продукты питания

При подборе оптимальных вносимых дозировок растительного сырья учитывались органолептические и физико-химические показатели Был проведен сравнительный анализ образцов черного байхового чая высшего сорта с добавлением ферментированных листьев кипрея узколистного в количестве 0,1, 02, 0,3; 0,4, 0,5%. При введении растительных добавок происходило изменение органолептических показателей - улучшались вкусовые характеристики Согласно полученным данным, с увеличение концентрации вводимых добавок увеличивается содержание витаминов в чайных напитках (витамина С от 5,40 до 21,20 мг%, витамина Р от 9,92 до 13 4 мг%)

В хлеб из ржано-пшеничной муки добавляли измельченные листья кипрея в количестве 1,0; 2,0 и 3,0 % Добавление кипрея узколистного в дозировках 1,0 % и 2,0 % оказывает положительное влияние на качество готовых изделий Повышение концентрации вносимой добавки до 3,0 % приводит к появлению слабой горечи во вкусе и увеличению кислотности до 10,5° Кроме того, при введении кипрея увеличивается пористость хлеба, что ведет к увеличению срока хранения

Практические рекомендации

1 На основании проведенных исследований по содержанию биологически активных веществ в лекарственно-техническом сырье кипрея узколистного предпочтительным районом для проведения заготовок следует назвать Красноярскую лесостепь, увеличив радиус удаленности места сбора растений от краевого центра

2 Фармакологические исследования кипрея узколистного позволяют рекомендовать водный и углекислотный экстракты как иммунотропные, антигипоксические и общеукрепляющие средства

3. Целесообразно использовать кипрей узколистный в качестве функциональной добавки для расширения ассортимента и повышения биологической ценности чайных напитков и хлебобулочных изделий.

4 Возможна утилизация шрота кипрея узколистного после выделения экстракционных веществ методом биоконверсии с получением кормового продукта

Выводы

1 В результате комплексного исследования химического состава кипрея узколистного, произрастающего в разных экологических условиях Красноярского края, в заготавливаемом сырье количественно определены белки, клетчатка, лигнин, слизистые и дубильные вещества, антоцианы, каротин, витамины С и Р, минеральные вещества, свободные аминокислоты, эфирное масло

2 Кипрей, заготовленный в зоне Красноярской лесостепи (Емельяновский район), отличается наиболее высоким содержанием белков, клетчатки, слизистых веществ, антоцианов, зеленых пигментов, каротина, рутина Кипрей, собранный в зоне подтайги предгорий (Саянский район) и зоне тайга низменности (Северо-Енисейский район), характеризуется наиболее высоким накоплением лигнина

3 Установлено наличие в кипрее узколистном 17 свободных протеиногенных аминокислот, 8 из которых являются незаменимыми Выявлено высокое содержание валина, изолейцина, лейцина и фенилаланина

4 В кипрее обнаружено содержание 26 химических элементов В образце кипрея из зоны Красноярской лесостепи отмечается повышенное содержание кальция, меди, железа, калия, никеля, сурьмы и селена, из зоны тайги низменности - бария, кобальта и марганца, из зоны подтайги предгорий -висмута, магния, натрия и ванадия

5 Определены состав и количество эфирных масел кипрея узколистного Преобладающими компонентами являются бензоацетоальдегид, эвгенол и 3-гексен-1-ол

6 Установлено, что при последовательной экстракции растворителями с возрастающей полярностью диэтиловый эфир, этилацетат, изопропиловый спирт и вода удается извлечь экстрактивных веществ из надземной части кипрея для зоны подтайги предгорий - 45,15%, Красноярской лесостепи -53,90%, тайги низменности - 47,79%

7 Методами УФ- и ИК-спектроскопии показано, что основными компонентами диэтилового экстракта являются жирные кислоты и терпеновые соединения, а этилацетатный, изопропанольный и водный экстракты содержат преимущественно фенольные соединения, среди которых - ауроны, катехины, лейкоантоцианы

8 При экстракции кипрея узколистного сжиженной углекислотой основными компонентами углекислотных экстрактов, независимо от района произрастания, являются липиды, хлорофилл и витамин Е Максимальное содержание липидов установлено в экстракте кипрея из Красноярской лесостепи, витамина Е - из тайги низменности

Основные положения диссертации опубликованы в работах:

1 Полежаева, И В Кипрей узколистный как источник ценных биологически активных веществ /ИВ Полежаева, Л Н Меняйло // Молодежь и наука -третье тысячелетие сб материалов межвуз науч конф - Красноярск, 2003 -С 185-186

2 Полежаева, И В Химический состав кипрея узколистного / ИВ Полежаева // Актуальные проблемы современной науки и пути их решения материалы 1У-ой межвуз науч конф аспирантов - Красноярск, 2004 - С 146148

3 Полежаева, И В Изучение химического состава Скатепоп аг^и,\11/оЬит (Ь) Но1иЬ, произрастающего в разных районах Красноярского края /ИВ Полежаева // Актуальные проблемы экологии и охраны окружающей среды сб тр Всерос конф молодых ученых и студентов - Уфа, 2004 - С 38-39

4 Полежаева, И В Растительные добавки в черный байховый чай /ИВ Полежаева // Потребительский рынок качество и безопасность товаров и услуг материалы междунар науч -практ конф - Орел, 2004 - С 96-98

5 Полежаева, ИВ Выделение экстрактивных веществ из вегетативной части Скатепоп angustlfohum (Ь) Но1иЬ /ИВ Полежаева // Материалы Всероссийской научно-технической конференции студентов и аспирантов материалы Всерос науч -технич конф студентов и аспирантов Екатеринбург, 2005 - С 167

6 Полежаева, И В Изучение иммунотропных свойств водного экстракта вегетативной части кипрея узколистного /ИВ Полежаева, Н И Полежаева, О Ф Веселова // Окружающая среда и здоровье сб материалов И-ой Всерос науч -практ конф - Пенза, 2005 - С 79-80

7 Полежаева, И В Исследование минерального комплекса вегетативной части СИатепоп а^изП/оЬит (Ь ) Но1иЬ, произрастающего в разных районах Красноярского края / ИВ Полежаева, НИ Полежаева // Непрерывное экологическое образование и экологические проблемы сб ст регион науч -практ конф - Красноярск, 2005 - Т 2 - С 25-29

8 Полежаева, И В Изучение исчерпывающей экстракции вегетативной части Скатепоп оп^иян/окит (Ь) Но1иЬ /ИВ Полежаева // Актуальные проблемы современной науки и пути их решения, материалы У-ой межвуз науч конф аспирантов - Красноярск, 2005 - С 181-186

9 Полежаева, И В Сравнительное исследование химического состава кипрея узколистного (СИатепоп а^жп/окит (Ь ) Но1иЬ) /ИВ Полежаева, Н И Полежаева, В А Левданский // Вестник Красноярского государственного университета Естественные науки -2005 -№2 - С 130-133

10 Полежаева, ИВ Изучение экстрактивных веществ Chamerion angustifolium (L ) Holub /ИВ Полежаева, Н И Полежаева, J1 Н Меняйло, Н И Павленко, В Л Левданский // Химия растительного сырья - 2005 - № 1 - С 2529

11 Полежаева, ИВ Исследование минерального комплекса вегетативной части Chamerion angustifolium (L ) Holub /ИВ Полежаева, Н И Полежаева, JIН Меняйло // Химия растительного сырья - 2005 - № 4 - С 67-70

12 Полежаева, И В Биологически активные вещества вегетативной части Chamerion angustifolium (L) Holub /ИВ Полежаева, Н И Полежаева // Материалы I (IX) Международной конференции молодых ботаников- сб материалов I (IX) Междун конф. молодых ботаников - Санкт-Петербург, 2006. -С 268

13 Полежаева, ИВ Фармакологическое изучение наземной части кипрея узколистного /ИВ Полежаева, JI Н Меняйло И Эколого-экономические проблемы региональных рынков, товаров и услуг сб материалов Межрег науч -практ конф - Красноярск, 2006 - С 225-227

14 Полежаева, ИВ Антиоксидантные свойства водного экстракта вегетативной части кипрея узколистного / И.В. Полежаева, О.Ф. Веселова Н И Полежаева // Химия и технология растительных веществ сб тезисов докладов IV-ой Всерос науч конф - Сыктывкар, 2006 - С 274

15 Полежаева, И В Выделение и исследование биологически активных веществ надземной части кипрея узколистного / ИВ Полежаева // Фундаментальнее и прикладные проблемы современной химии в исследованиях молодых ученых сб материалов Междун науч конф -Астрахань, 2006 - С 82-84

16 Полежаева, ИВ Иммунотропные свойства водного экстракта вегетативной части кипрея узколистного / ИВ Полежаева, НИ Полежаева, ОФ. Веселова // Химия, химическая технология и биотехнология на рубеже тысячелетий сб материалов Междун науч конф -Томск, 2006 -С 419-420

17 Полежаева, И В Экстракция сжиженной углекислотой надземной части Chamerion angustifolium (L) Holub /ИВ Полежаева // Актуальные проблемы современной науки и пути их решения материалы VI-ой межвуз науч конф аспирантов - Красноярск, 2006 - С 189-193.

18 Полежаева, И В Макро- и микроэлементный состав кипрея узколистного, произрастающего на территории Красноярского края / ИВ Полежаева // Биоэлементы материалы И-ой междунар науч.-практ конф -Оренбург, 2007 - С 25-28

19 Полежаева, ИВ Аминокислотный и минеральный состав вегетативной части Chamerion angustifolium (L) Holub / И.В Полежаева, Н И Полежаева, JIH Меняйло // Химико-фармацевтический журнал - 2007 Т 41 - № 3 - С 104-106

Сдано в производство 20 04 07 Формат 60x84 1/16 Уел печ л 1,0 Заказ № 2059 Тираж 100 экз

Редакционно-издательский центр СибГТУ 660049, г Красноярск, пр Мира, 82

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Полежаева, Ирина Викторовна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1. Систематика семейства Onagraceae.

1.2. Характеристика исследуемого растения.

1.3. Биологически активные вещества, содержащиеся в растительном сырье.

1.4. Выделение экстрактивных веществ.

1.5. Биологическая активность экстрактов растения.

1.6. Использование кипрея узколистного в качестве функциональных добавок в продуктах питания.

ГЛАВА II. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Методика отбора проб растительного сырья.

2.2. Краткая характеристика природно-климатических условий мест произрастания.

2.3. Методики исследования химического состава сырья.

2.4. Методика выделения эфирного масла.

2.5. Методы получения и исследования экстрактивных веществ растительного сырья.

2.6. Утилизация послеэкстракционного остатка.

2.7. Методы исследования биологической активности экстрактов растения.

ГЛАВА III. ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА

CHAMERION ANGUSTIFOLIUM (L.) HOLUB.

3.1. Сравнительная оценка химического состава кипрея узколистного из разных мест произрастания.

3.2. Определение химического состава эфирного масла кипрея узколистного.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Эколого-географические особенности накопления биологически активных веществ кипрея узколистного (Chamerion angustifolium (L.)Holub), произрастающего на территории Красноярского края"

В настоящее время на основании многочисленных исследований и тщательного изучения достижений народной медицины все большее признание находит применение в лечении и профилактики трудноизлечимых заболеваний растительные лекарственные препараты. Огромный резерв полезных растений с повышенным содержанием различных ценных веществ представляет флора Сибири, в том числе такой регион, как Красноярский край. На его территории произрастает более 100 видов лекарственных растений, которые используются или могут быть использованы в качестве источников ценных биологически активных веществ для обогащения ими продуктов питания, а также в лечении и профилактике трудноизлечимых заболеваний.

Известно, что сапонины, флавоноиды, витамины и другие биологически активные вещества в растениях находятся в определенных состояниях, создавшихся в процессе взаимодействия организма с окружающей средой. Очевидно, в этом и заключается преимущество растительных препаратов по сравнению с лекарственными средствами, полученными путем химического синтеза. Будучи сложными по составу они содержат много ингредиентов, которые придают им ценные свойства и обеспечивают многостороннее действие на организм, более сильное, чем действие каждого из них в отдельности. Особенности климатических и экологических условий, разнообразие географических зон обусловливают специфику обменных процессов, протекающих в растениях, влияют на синтез и накопление в них биологически активных веществ. В этой связи возникает необходимость поиска наиболее перспективных лекарственных растений, отбора из природной флоры видов, популяций, обладающих высоким потенциалом как по синтезу биологически активных веществ, так и по доступности их заготовки и отсутствию особых нежелательных эффектов.

Таким перспективным лекарственным растением является кипрей узколистный (Chamerion angustifolium (L.) Holub). Основанием для проведения данного исследования явилось недостаточная изученность химического состава кипрея узколистного.

Целью настоящей работы является изучение химического состава кипрея узколистного, произрастающего в разных эколого-географических условиях Красноярского края.

Основные задачи исследования:

1. Изучить химический состав кипрея узколистного, собранного в трех почвенно-климатических зонах Красноярского края: подтайга предгорий (Саянского района), Красноярская лесостепь (Емельяновский район), тайга низменности (Северо-Енисейский район).

2. Определить условия выделения биологически активных веществ путем экстракции группой растворителей из кипрея, в зависимости от района его произрастания.

3. Исследовать возможности утилизации послеэкстракционного шрота кипрея узколистного методом биоконверсии.

4. Изучить фармакологические свойства полученных экстрактов.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Полежаева, Ирина Викторовна

выводы

1. В результате комплексного исследования химического состава кипрея узколистного, произрастающего в разных экологических условиях Красноярского края, в заготавливаемом сырье количественно определены белки, клетчатка, лигнин, слизистые и дубильные вещества, антоцианы, каротин, витамины С и Р, минеральные вещества, свободные аминокислоты, эфирное масло.

2. Кипрей, заготовленный в зоне Красноярской лесостепи (Емельяновский район), отличается наиболее высоким содержанием белков, клетчатки, слизистых веществ, антоцианов, зеленых пигментов, каротина, рутина. Кипрей, собранный в зоне подтайги предгорий (Саянский район) и зоне тайги низменности (Северо-Енисейский район), характеризуется наиболее высоким накоплением лигнина.

3. Установлено наличие в кипрее узколистном 17 свободных протеиногенных аминокислот, 8 из которых являются незаменимыми. Выявлено высокое содержание валина, изолейцина, лейцина и фенилаланина.

4. В кипрее обнаружено содержание 26 химических элементов. В образце кипрея из зоны Красноярской лесостепи отмечается повышенное содержание кальция, меди, железа, калия, никеля, сурьмы и селена; из зоны тайги низменности - бария, кобальта и марганца; из зоны подтайги предгорий -висмута, магния, натрия и ванадия.

5. Определены состав и количество эфирных масел кипрея узколистного. Преобладающими компонентами являются бензоацетоальдегид, эвгенол и 3-гексен-1-ол.

6. Установлено, что при последовательной экстракции растворителями с возрастающей полярностью: диэтиловый эфир, этилацетат, изопропиловый спирт и вода удается извлечь экстрактивных веществ из надземной части кипрея для зоны подтайги предгорий - 45,15%; Красноярской лесостепи -53,90%; тайги низменности - 47,79%.

7. Методами УФ- и ИК-спектроскопии показано, что основными компонентами диэтилового экстракта являются жирные кислоты и терпеновые соединения, а этилацетатный, изопропанольный и водный экстракты содержат преимущественно фенольные соединения, среди которых - ауроны, катехины, лейкоантоцианы.

8. При экстракции кипрея узколистного сжиженной углекислотой основными компонентами углекислотных экстрактов, независимо от района произрастания, являются липиды, хлорофилл и витамин Е. Максимальное содержание липидов установлено в экстракте кипрея из Красноярской лесостепи, витамина Е - из тайги низменности.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Полежаева, Ирина Викторовна, Красноярск

1. Определитель растений Новосибирской области/ Под ред. Красноборова И. М. и др. Новосибирск: Наука, 2000. - 492 с.

2. Определитель растений Кемеровской области/ Под ред. Красноборова И. М. и др. Новосибирск: Наука, 2001. - 477 с.

3. Ученые записки КГПИ. Вып. 4. Красноярск: 1963. 326 с.

4. Андреева Е. Б., Антипова Е. М., Сонникова А. Е. Список растений юга Красноярского края. Чтения памяти JI. М. Черепнина. Материалы 4-й Российской конференции «Флора и растительность Сибири и Дальнего Востока». Т. 1. Красноярск: КГПИ, 2006. - С. 72-158.

5. Флора СССР. T.XV. М. Л.: 1949. - С.621-627.

6. Минаева В. Г. Лекарственные растения Сибири. 5-е изд. Новосибирск: Наука. Сиб. Отделение, 1991. -431 с.

7. Mercier S., Langlois C.-G. Relationships between Epilobium angustifolium phenology and picea glauca seed maturation // For. Ecol. And Manag. 1993. V. 59. №1-2. P. 115-125.

8. Aiken S. G., Dallwitz M. J., Consaul L. L. Flora of Canadian Arctic Archipelago, http: www. mun. ca/ biology/delta/articf/

9. Лавренова Г. В. Лекарственные травы: Травы, дарующие здоровье: В 2 кн. Кн. 2.-М.: Терра, 1996. 480 с.

10. Сало В. М. Зеленые друзья человека.- М.: Наука, 1975. 272 с.

11. Лагерь А. А. Лечение растениями (Фитотерапия). -Красноярск: Алис, 1992.-384 с.

12. Жизнь растений. Т. 5. Ч. 2. Цветковые растения. М.: Просвещение, 1981.-514 с.

13. Etherington J. Comparative studies of plant growth and distribution // J. Ecology.1984. № 2. P. 389-404.

14. Харитонова JI. Ф. Биология цветения и нектаропродуктивность Chamerion angustifolium (L.) Holub. // Растительные ресурсы. 1982. t.XVII. №2. С. 207-213.

15. Телятьев В. В. Полезные растения центральной Сибири- Иркутск: Восточно-Сибирское книжное издательство, 1987. 395 с.

16. Leiss К. A., Vrieling К., Klinkhamer P. G. L. Heritability of nectar production in Echium vultage. // Heredity. 2004. V. 92. № 5. P. 446-45

17. Freudenberg K. Tannin, cellulose, lignin. Berlin. 1933. P.197.

18. Биологически активные вещества растительного происхождения. В 3 т. Т.1, 2./ Головкин Б. Н., Руденская P. Н.-М.: Наука, 2001.-350 с.

19. Химическая энциклопедия. В 5-ти томах. Т.5.-М.: БРЭ, 1995. 783 с.

20. Мавлянов С. М., Исламбеков Ш. Ю., Исмаилов А. И. Растительные дубильные вещества. //Химия природных соединений. 2001. №1.С. 3-22.

21. Куркин В. А. Современные аспекты химической классификации биологически активных соединений лекарственных растений // Фармация. 2002. № 12.-С. 8-16.

22. Nonaka G. et. al. Tannins and related compounds // Chem. And. Pharm. Bull. 1984. V. 32. № 2. -P. 483-489.

23. Гаммерман А. Ф., Гром И. И. Дикорастущие лекарственные растения СССР. М.: медицина, 1976. - 288 с.

24. Захаров В. П., Либизов Н. И., Асланов X. А. Лекарственные вещества из растений и способы их производства. Ташкент: ФАН, 1980. - 232 с.

25. Duke J. A. CRC handbook of medical herbs. Boca Raton (Fla.): CRC press, 1986.-677 p.

26. Chorpa R. N., Nayar S. L., Chorpa I. C. Glossary of Indian medicinal plants. New Dehli, 1956.-330p.

27. Растения-целители /Сост. Казарина Т. А.- Смоленск: Русич, 1997. 608 с.

28. Шретер А. И. Поиски и изучение новых лекарственных растений. М.: Знание, 1980.-64 с.

29. Богаевская Н. И., Бутенко JI. И., Фролова JI. М., Доркина Е. Г. Бандюкова В. А. Гепатопротекторный препарат из растения хамерион семейства кипрейные. Тез. докл. 3 Рос. Нац. Конгр. "Человек и лекарство". МЛ 6-20. 04.1996.

30. Бандюкова В. А., Богаевская Н. И. Химико-технологическое исследование хамериона узколистного и хамериона кавказского. // Изв. вузов. Сев.-Кавк. регион, сер. техн. н. 1993. № 1-2. С. 16-20.

31. Сасов С. А., Петрова М. Ф., Ярцева И. В. Фенолкарбоновая кислота из дубильных веществ Chamerion angustifolium // Химия природных соединений. 1986. № 1. с. 106-107.

32. Киселева Т. Л., Ермакова В. А., Петрова М. Ф., Гатинская Л. Г. К вопросу стандартизации сырья соцветия кипрея узколистного // Фармация. 1984. № 5. С. 12-13.

33. Сыркин А. Б., Коняева О. И. Фармацевтические исследования некоторых новых противоопухолевых средств // Химико-фармацевтический журнал. 1984. № 10.-С. 1172-1180.

34. Киселев В. Е. Биологические активные соединения растений сибирской флоры. Новосибирск.: Наука, 1974. - 94 с.

35. Куцик Р. В., Зузук Б. М. Энотера двухлетняя, http:// www. provisor. com. ua.

36. Минаева В. Г. Флавоноиды в онтогенезе растений и их практическое использование. Новосибирск: Наука, 1978. - 256 с.

37. Блажей А., Шутый Л. Фенольные соединения растительного происхождения. -М.: Мир, 1977. 239 с.

38. Запрометов М. Н. Основы биохимии фенольных соединений. М.: Высшая школа, 1974. - 214 с.

39. Барабой В. А. Растительные фенолы и здоровье человека. М.: Наука, 1984. -160 с.

40. Барабой В. А. Биологическое действие растительных фенольных соединений. Киев: Наук, думка, 1976. - 260 с.

41. Weglarz М. A., Kawashty S. A., Skiba S. A. Phenolic constitutions of fireweed (Epilobium angustifolium L.) herb. // Ann. Warsaw. Agr. Univ. hortic. 2002. №23. P. 11-15.

42. Зелепуха С. И. Антимикробные вещества растений, употребляемых в пищу. Киев: Наук, думка, 1973. -192 с.

43. Семенов А. А. Природные противоопухолевые соединения. -Новосибирск: Наука, 1979. 223 с.

44. Лавренов В. К., Лавренова Г. В. Полная энциклопедия лекарственных растений. Т. 1.Спб.: Издательский дом «Нева», М.: ОЛМА-Пресс, 1999. 736 с.

45. Рабинович А. М. Фитотерапия против рака // Экология и жизнь. 2001. №5. С. 78-81.

46. Химическая энциклопедия. В 5-ти томах. Т.2.-М.: БРЭ, 1995. 783 с.

47. Георгиевский В. П., Комисаренко Н. Ф., Дмитрук С. Е. Биологические активные вещества лекарственных растений. Новосибирск: Наука, 1990. -350 с.

48. Киселева А. В., Волхонская Т. А., Киселев В. Е. Биологически активные вещества лекарственных растений Южной Сибири. Новосибирск: Наука, 1991.-136 с.

49. Галактирков С. Г. Биологически активные вещества. М.: Мир, 1988. -270 с.

50. Siegfried Н. Uber die unverseifbaren neutralanteile aus Chamaenerion angustifolium (L.) scop und Epilobium obscurum. // Phytochemistry. 1967. V. 6. №8. P. 1149-1150.

51. Hiermann A., Radl B. Analysis of aromatic plant acids by capillary zone electrophoresis. //J. of Chromatography. 1998. V. 803. № 1-2. P. 311-314.

52. Богаевская H. И., Бандюкова В. А. Химическое изучение некоторых растений семейства кипрейных. Аминокислотный состав видов Chamerion b Oenothera molissima // Химия природных соединений. 1990. № 2. С. 285-287.

53. Березовский В. М. Химия витаминов. М.: Пищепромиздат, 1959. - 600 с.

54. Матусис И. И. Витамины и антивитамины. М.: Сов. Россия, 1975. -238 с.

55. Химический анализ лекарственных растений / Гринкевич Н. И.-М.: Высшая школа, 1983 245 с.

56. Химическая энциклопедия. В 5-ти томах. T.l.-М.: БРЭ, 1995. 783 с.

57. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1982. - 752 с.

58. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э. Основы биохимии. В 3-х томах. Т. 3. -М.: Мир, 1981.- 726 с.

59. Полинг JI. Витамин С и здоровье. М.: Наука, 1974. - 80 с.

60. Махов А. А. Зеленая аптека: Лекарственные растения Красноярского края. -Красноярск: Красноярское кн. изд., 1986.-352 с.

61. Лесная аптека / Под ред. Солодухина Е. Д. -Харьков: Региональное отделение С А ДПР, 1991.-192 с.

62. Подколзин А. А., Гуревич К. Г. Действие биологически активных веществ в малых дозах. М.: КМК, 2002.- 170 с.

63. Мальгин М. А., Пузанов А. В., Ельчинова О. А. Тяжелые металлы и мышьяк в дикорастущих лекарственных растениях Алтая. // Сиб. экол. журнал. 1995. № 6. С. 510-514.

64. Кощеев А. К. Дикорастущие съедобные растения в нашем питании. -М.: Пищевая промышленность. 1981.-256 с.

65. Ушанова В. М., Репях С. М. Исследование влияния полярности растворителя на состав экстрактивных веществ после экстрактивных остатков коры Abies sibirica // Химия природных соединений. 1996. № 1. С. 42-45.

66. Губаненко Г. А. Технология ароматизаторов из некоторых представителей пряно ароматических растений Сибири. Автореф. дис.канд. техн. наук. - Красноярск, 1999. - 22 с.

67. Yazquer G., Antorrena G., Para jo J. I. Wood Sci. and Tecnol. 1987. № 1. -P. 65-74.

68. Чумбалов Т. К., Пашинина JI. Т., Лейман 3. А. Флавоноиды коры Larik sibirica // Химия природных соединений. 1973. № 2. С. 284.

69. Черняева Г. Н., Долгодворова С. Я., Степень Р. А. Утилизация1.древесной биомассы. Красноярск: ИлиД, 1987. - 168 с.

70. Запрометов М. Н. Достижения и перспективы биохимии фенольных соединений. Фенольные соединения и их биологические функции. М.: Наука, 1968.-С. 108-128.

71. Аникина Е. В. Физико химическая характеристика экстрактов из некоторых видов лекарственных растений как пищевых добавок // растительные ресурсы. 1996. Вып. 4. - С. 30-34.

72. Фенгел Д., Вегенер Г. Древесина. Химия, ультраструктура, реакции. -М.: Лесная пром-ть, 1988. 512 с.

73. Ягодин В. И. Основы химии и технологии переработки древесной зелени. Л.: Изд-во ЛГУ, 1981.-224 с.

74. Пономарев В. Д. Экстрагирование лекарственного сырья. М.: Медицина, 1976.-202 с.

75. Касьянов Г. И., Нематуллаев И. ССЬ-экстракты натуральные пищевые ароматизаторы // Пищевая промышленность. 1992. № 1. - С. 32.

76. Касьянов Г. И. Исследование технологии получения и применения СОг-экстрактов пряностей для ароматизации рыбных продуктов. Автореф. дис.канд. техн. наук. Краснодар, 1975. - 28 с.

77. Пехов А. В. Исследование экстракции растительного сырья сжиженными газами и использование полученных продуктов в промышленности. Автореф. дис.канд. техн. наук. Харьков, 1968. - 22 с.

78. Пехов А. В., Пономаренко И. Я. Экстракция растительного сырья сжиженными газами // Масло жировая промышленность. 1968. № 6. - С. 2528.

79. Квасенко О. И. Совершенствование технологии получения и применения экстрактов растительного сырья а пищевой промышленности. Автореф. дис.канд. техн. наук. -М.: 1996. -23 с.

80. Куркин А. В., Ежков В. Н., Барабаш С. В. И др. Родиола розовая: комплексная переработка сырья // Фармация. 2006. № 1. С. 40-42.

81. Латин Н. Н., Стасьева О. Н., Банашек В. М. Вниманию технологов -С02-экстракты. // Пищевые ингредиенты. Сырье и добавки. 2006. № 1. С. 22-23.

82. Naturliches Rosmarinextrakt als Basis zur wirksamen Verhinderung von Ranzidital in Lebensmitten // Alimenta. 1995. V. 34. № 6. S. 117.

83. Weinreich B. Rosmarinexiracte erhalten produktqualitat // Emahrungsindustrie. 1995. V. 5. № 10. S. 34-36.

84. Молчанов Г. И. Интенсивная обработка лекартвенного сырья. М.: Медицина, 1981. -205 с.

85. Алаева Зыкова Н. А., Пшуков Ю. Г. Разработка ресурсосберегающей технологии экстракта чабреца жидкого // Фармация. 1989. №5. - С. 22-25.

86. Пат. 2119399 Великобритания, МКИ В 01 D. Extraction of Plant Material by using carbon dioxid / Evans B. R., Panzer E. 1983.

87. Морозов С. С., Шинков Г. 3., Пехов А. В. и др. Получение С02-экстракта из череды трехраздельной и его химический состав // Растительные ресурсы. 1981. Т. XVII. № 1.-С. 102-105.

88. Шафтан Э. А., Михайлова Н. С., Дюбанькова Н. Ф. и др. О получении биологически активных экстрактов из Achillea Millefolium L. сжиженными газами // Растительные ресурсы. 1981. Т. XVII. № 1. С. 105-109.

89. Тюкавкина Н. А., Руленко И. А., Колесник Ю. А. Природные флавоноиды как пищевые антиоксиданты и биологические добавки // Вопросы питания. 1996. № 2. С. 33-38.

90. Александрова А.Е. Антигипоксическая активность и механизмы действия некоторых синтетических и природных соединений // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2005. Т. 68. № 5. С. 72-78.

91. Лапинский А. Г., Горбачев В. В. Антирадикальная активность экстрактов из некоторых дикоросов северного Охотоморья // Химико-фармацевтический журнал. 2006. Т. 40. № 6. С. 27-29.

92. Одинцов В. В. Забытый напиток. // Наука и жизнь. 1989. № 7. С. 109.

93. Даньшин Е. А., Емельянов В. И. Способ производства чая из кипрея узколистного. Пат. Ru. № 2226059. 20.01.1999.

94. Емельянов В. И., Емельянов Д. В., Никитин А. Н. Способ производства чая из кипрея. Пат. Ru. № 2124843. 08.06.98.

95. Нахметов Ф. Г.-о., Кольцова Т. П., Логвинчук Т. М. Способ производства чая из кипрея (иван-чая) (варианты). Пат. Ru. 98104996/13. 27.03.98.

96. Логвинчук Т. М., Нахмедов Ф. Г. Основные критерии создания композиций чайных напитков // Чай и кофе. 2002. № 2. С. 10-11.

97. Квасов М. В., Селезнева Г. А., Селезнев А. Г. Антиалкокольный фиточай в комплексной терапии пациентов, страдающих алкоголизмом. // Мед. исследования. 2001. Т. 1. № 1. С. 71-72

98. Булдаков А. С. Пищевые добавки. Справочник. Спб.: Изд-во «Ut», 1996.-240 с.

99. Ермолаева Г. А., Колчева Р. А. Технология и оборудование производства пива и безалкогольных напитков. Пат. Ru. № 2226062. 27.07.2001.

100. Даньшин Е. А. Напиток безалкогольный газированный "Легна иван-чай". Пат. Ru. № 2226063.10.10.2001.

101. Маюрникова Л. А., Поздняковский В. М., Гореликова Г. А. Научно-практические аспекты обогащения продуктов питания. // Пиво и напитки. 2002. № 3. С. 30-32.

102. Даньшин Е. А. Технология и оборудование производства пива и безалкогольных напитков. Пат. Ru. № 2226062. 27.03.2004.

103. Данилин В. Н. Докторский бальзам «Здоровья для». Пат. Ru. № 2004137180/15. 27.05.2006.

104. Грищенко И. Г., Козлов В. В., Шитикова Н. Н. Композиция ингредиентов для бальзама. Пат. Ru. № 2148632. 10.05.2000.

105. Парфенов Т. В., Цибулько Е. И., Юдина Т. П. Композиция ингредиентов для бальзама. Пат. Ru. № 2124558. 10.01.1999.

106. Емец Ю. А., Мазурин В. Г., Колей О. Н. Композиция ингредиентов для настойки горькой «Сюрприз России». Пат. Ru. № 1120982. 27.10.1998.

107. Даньшин Е. А. Экстракт спиртовой «Легна Иван чай». Пат. Ru. № 2247512.10.03.2005.

108. Юловский В. М. Способ приготовления хлебобулочных изделий профилактической направленности. Пат. Ru № 2206997. 27.06.2003.

109. Рева М. Л. Растения в быту. Донецк: Донбасс, 1982. - 289 с.

110. ИЗ. Свиридонов Г.М. Лесной огород. М.: Молодая гвардия, 1987. - 223 с.

111. Зайцев Г. Н. Математический анализ биологических данных. М.: 1991.-340 с.

112. Государственная фармакопея СССР. М.: 1989. - 11-е изд. - т. 2. -389 с.

113. Климат и воды Сибири. Новосибирск: 1980. 112 с.

114. Русанов В. И. Методы исследования климата для медицинских целей. -Томск: Изд-во ТУ, 1973. -132 с.

115. Бендерский Ю. Г., Варфоломеев И. В., Лопатин А. П. Проблемы экономической оценки природно-ресурсного потенциала Красноярского края. Красноярск: Кларетианум, 2001. -108 с.

116. Бугаков П. С., Чупрова В. В. Агрономическая характеристика почв земледельческой части Красноярского края. Красноярск, 1995. -С. 62.

117. Зубаилова Г. И. Оценка метеорологических условий года и климатических ресурсов территории. Метод, указания. Красноярск, 1986. -52 с.

118. Альтергот В. Ф. Действие повышенных температур на растения в эксперименте и природе. -М.: 1981. С. 25.

119. Средняя Сибирь. Природные условия и естественные ресурсы СССР / Под ред. Герасимовой И. П. М.: Наука, 1964. - 479 с.

120. Безруких В. А., Кириллов М. В. Физическая география Красноярского края и республики Хакасия. Уч. Пособие. Красноярск: Красноярск, книж.изд-во, 1993. -192 с.

121. Оболенская В. А., Ельницкая А. А., Леонович А. А. Лабораторные работы по химии древесины и целлюлозы. М.: Экология, 1991. - 320 с.

122. ГОСТ 24027.2 80. Сырье лекарственное растительное. Методы определения влажности, содержания золы, экстрактивных и дубильных веществ, эфирного масла. - М.: 1980. - С. 19-30.

123. Kiesel A, Semiganowsky N. Вег. 1927. Р. 565.

124. Шарков В. И., Куйбина Н. И., Соловьева Ю. П. Количественный химический анализ растительного сырья. М.: Лесная промышленность, 1968. - 62 с.

125. Попов И. Д. Определение лигнина в древесной коре // Изв. института биологии. София: Изд. Болг. АН, 1956. № 1.

126. Методы биохимического исследования растений./ Ермаков А. И., Арасимович М. И. JL: Колос. 1972. - 456 с.

127. Лещук Р. И., Вайшля О. Б., Войцеховская С. А. Практикум по биохимии. Томск. 2002. -192 с.

128. Плешков Б. П. Практикум по биохимии растений. М.: Колос, 1985. -255 с.

129. Пустовалова Л.М. Практикум по биохимии. Ростов-на-Дону: Феникс, 1999.-540 с.

130. Практикум по физиологии растений. /Третьяков Н. Н. М.: Агропромиздат, 1990. - 272 с.

131. Практическая химия белка / Под ред. Дарбе А. М.: Мир, 1989. - С. 158-163.

132. Хавезов И., Цалев Д. Атомно-абсорбционный анализ. Л.: Химия 1983. -144 с.

133. Горяев М. И., Плива И. Методы исследования эфирных масел. Алма -Ата: 1962. -752 с.

134. Руководство по анализу душистых веществ и эфирных масел методом газовой хроматографии. М.: 1982. - 262 с.

135. Замуреенко В. А. Идентификация компонентов эфирных масел методом хромато масс - спектрометрии. Автореф. дис.канд. хим. наук. -М.: 1982.-22 с.

136. Kates М., Hansoer A. S. Chromatography. -Madison: USDA Forest service, 1977. -177 p.

137. McLafferty F.W., Stauffer D. B. The Wiley/ NSB Registry of Mass Spectral Data. Wiley, Interscience, 1989.-563 p.

138. ГОСТ 14618 78. Масла эфирные, вещества душистые и полупродукты их синтеза. Правила приемки, отбор проб и методы органолептических исследований. -М.: 1980. С. 47-103.

139. Эфирные масла, их состав и анализ / Под ред. Демьянова Н. Я. М. -л.: Госуд. изд-во. 1930. - 315 с.

140. Долгодворова С. Я., Перышкина Г. И., Черняева Г. Н. Фракционирование экстрактивных веществ древесины: Сборник трудов «Исследование биологических ресурсов средней тайги Сибири». -Красноярск. 1973. С. 75-85.

141. Иванов Ю. И., Погорелюк О. Н. Вычисление эффективных и летальных доз методом наименьших квадратов на микрокалькуляторах по программам. -М, 1986.

142. Аулик И. В. Определение физической работоспособности в клинике и спорте. -М.: 1990.-42 с.

143. Беленький JI. М. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. JL: 1963. -124 с.

144. Пашенных О. К. Лесные пищевые травянистые растения Средней Сибири. Дис.канд. биол. наук. Красноярск. 1989. - 241 с.

145. Манивчук Ю. В. Кормовая ценность Chamaenerion angustifolium (L.) Scop, в Восточных Карпатах. // Раст. ресурсы. 1971. Т. VII. Вып. 2. С. 208 -214.

146. Старковский Б. Н. Разработка агроприемов при воздействии кипрея узколистного на кормовые цели. Дис.канд. с. х. наук. СПб.: 2004. - 140 с.

147. Капустин Н. И., Старковский Б. Н. Способ возделывания кипрея узколистного (Иван чая) на кормовые цели в условиях культуры. Пат. Ru. 2004123032.20.02.2006.

148. Скальный А. В. Химические элементы в физиологии и экологии человека. М.: Оникс 21 век, 2004. -216 с.

149. Тутельян В. А., Спиричев В. Б., Суханов Б. П. и др. Микронутриенты в питании здорового и больного человека. М.: Колос, 2002. - 423 с.

150. Ginnis G. D., Parikh S. The chemical constituents of loblolly pine bark // Wood Sci. 1975. V. 7. № 4. P. 295-297.

151. Сильверстейн P., Басслер Г., Моррил Т. Спектрометрическая идентификация органических соединений. М.: Мир, 1977. - 590 с.

152. Штерн Э., Тиммонс К. Электронная абсорбционная спектроскопия в органической химии. М.: Мир, 1974. - 295 с.

153. Бранд Дж., Эгментон Г. Применение спектроскопии в органической химии. М.: Мир, 1967. 279 с.

154. Казицина JI.A., Куплетская Н.Б. Применение УФ-, Ж- и ЯМР-спектроскопии в органической химии. М.: Высшая школа, 1971. 263 с.

155. Смит А. Прикладная ИК-спектроскопия. М.: Мир, 1982. 327 с.

156. Беллами JL Инфракрасные спектры сложных молекул. М.: Иностранная литература, 1963. 560 с.

157. Величко Н. А., Ушанова В. М. Кормовые добавки из пихтовой коры // Лесная промышленность. 1994. № 5 6. С. 20.

158. Медников Ф. А. Комплексное использование древесной зелени для получения лечебных препаратов и кормовых продуктов // Лесной журнал. 1976. №3.-С. 116-118.

159. Мосичев С. М., Складнев А. А., Котов В. Б. Общая технология микробиологических производств. М.: Легкая и пищева пром-ть, 1982. -264 с.

160. Шарпенак А. 3., Конышев В. А. Практикум по биологической химии. Уч. Пособие. М.: Выш. школа, 1969. - 304 с.

161. Николаева И. Г., Асеева Т. А. и др. Химико-фармакологическое изучение экстракта пятилистника кустарникового сухого // Химико-фармацевтический журнал. 1999.Т. 33. №7.-С. 36-37.

162. ГОСТ 1938-90 «Чай черный байховый. Технические условия».- М.: 1990.-28 с.

163. Чепелева Г. Г. Функциональные добавки в хлебопечении. Уч. пособие. Красноярск: КГТЭИ, 2004. - 70 с.

164. Экспериментальных данных по исследованию экстрактов кипрея узколистного для определения иммунотропных и антигипоксических свойств.

165. Проведенные исследования показали, что водный и углекислотный экстракты кипрея малотоксичны и проявляют иммунотропные и антигипоксические свойства.

166. Полученные препараты растительного происхождения, водный и углекислотный экстракты кипрея узколистного, благодаря своим иммунотропным и антигипоксическим свойствам, могут быть рекомендованы для разработки на их основе недорогих лекарственных

167. Председатель комиссии Члены комиссии1. Гребенникова В.В.

168. Веселова О.Ф. Иванова О.Ю.