Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Экологический анализ грамотрицательной микрофлоры грунтов, воды и европейского угря (Anguilla anguilla L.) Вислинского залива (Балтийское море)
ВАК РФ 03.00.16, Экология
Автореферат диссертации по теме "Экологический анализ грамотрицательной микрофлоры грунтов, воды и европейского угря (Anguilla anguilla L.) Вислинского залива (Балтийское море)"
На правах рукописи
КАЗИМИРЧЕНКО Оксана Владимировна
ЭКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ ГРУНТОВ ВОДЫ И ЕВРОПЕЙСКОГО УГРЯ (ANGUILLA ANGUILLA L ) ВИСЛИНСКОГО ЗАЛИВА (БАЛТИЙСКОЕ МОРЕ)
03 00 16-Экология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических на> к
Калининград - 2008
003170959
Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Калининградский государственный технический университет»
Научный руководитель: кандидат биологических наук, доцент
Авдеева Елена Витальевна
Официальные оппоненты- доктор биологических наук, профессор
Никитина Светлана Михайловна
доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник ФГУП «АтлантНИРО» Архипов Александр Геральдович
Ведущая организация ГОУ ВПО «Московский государственный
университет технологий и управления»
Защита состоится 19 июня 2008 г в 15 00 часор на заседании диссертационного совета Д 212 084 04 при ФГОУ ВПО «Российский государственный университет им И Канта» по адресу 236040, г Калининград, ул Университетская, 2, ауд 143
Факс (4012) 53-37-07, (4012) 53-37-75
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского государственного университета им И Канта
¿вТ 2008 г
Автореферат разослан «.
Ученый секретарь диссертационного совета,
кандидат биологических наук, доцент * И Ю Губарева
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Aktj алыюсть темы Антропогенное воздействие на водоем приводит к увеличению биомассы микроорганизмов, изменению их видового состава С ухудшением качества воды связано высокое обсеменение рыбы условно-патогенными бактериями При неблагоприятных для хозяина условиях внешней среды бактерии выделяются в ассоциациях и становятся причиной септических инфекций рыб [Snieszko, 1974, Ведемейер, 1981, Конев, 1997, Щелк> нов, 1998, Ларцева, 2000,2004]
В последние два десятилетия повсеместно наблюдается тенденция снижения численности \ гря, в том числе европейского (Anguilla anguilla L ) В странах Европейского Союза встушпа в сту Директива по мерам сохранения и восстановления запасов этой ценной промысловой рыбы, которая обязывает страны Евросоюза подготовить планы Управления численностью угря (Eel Management Plans), включающие мероприятия по уменьшению смертности данного промыслового объекта от антропогенного воздействия [Draft European Parliament legislative resolution , 2006] Вислинский залив - один из важнейших внутренннх водоемов, в который угорь заходит естественным путем На протяжении ряда лет и по настоящее время в рыбопромысловых уловах отмечают особей угря с нарушениями целостности кожных покровов Подобные патологические изменения могут быть связаны с воздействием условно-патогенной микрофлоры Исследования по установлению этиологии этих изменений на коже угря не проводились В связи с этим актуальной является цель настоящей работы экологический анализ видового состава 'рамотрицательных бактерий грунтов, воды и европейского угря Вислинского залива, путей проникновения и распространения бактерий в системе «внешняя среда - угорь»
Нами были поставлены следующие задачи
1 Установить бактериальную обсемененность грунтов, воды и угря по сезонам года и районам Вислинского залива,
2 Иссаедовать количественный и видовой состав грамотрицательной микрофлоры грунтов, воды и угря по сезонам года,
3 Сравнить видовой состав микрофлоры угря и среды его обитания по районам Вислинского залива,
4 Провести анализ путей проникновения и распространения бактерий в организме >гря,
5 Выявить степень патогениости микрофлоры для европейского угря Вислинского залива
Основные положения, выносимые на защиту
1) Бактериальная обсемененность грунтов, воды и европейского угря определяется сезоном года и районами Вислинского залива,
2) Видовой состав грамотрицательной микрофлоры, доминирующей у угря Вислинского залива, формируется под влиянием микробиоценозов воды и грунта,
3) Условно-патогенные бактерии родов Aeromonas и Pseudomonas могут иметь эпизоотическое значение для угря Вислинского залива
Научная новизна Данная работа явтяется первой по комплексному изучению условно-патогенной микрофлоры угря, воды и грунтов Вислинского залива, ее зависимости от некоторых факторов внешней среды и оценке роли этих бактерий для европейского угря Вислинского залива
Теоретическое и практическое значение работы Данные по количественным показателям, видовому составу микрофлоры }гря, воды и грунтов, патогенным свойствам и антибиотикорезистентности изученных бактерий применимы при культивировании угря в установках с замкнутым циклом водообеспечения (УЗВ) и описании санитарно-эпизоотической ситуации в заливе Теоретически значимо установление видового состава грамотрицательной микрофлоры европейского угря, воды и грунтов Вислинского залива Результаты работы могут быть использованы при чтении курсов «Ихтиопатология», «Инфекционные и инвазионные болезни рыб» и при подготовке специалистов по направлению 110900 62 - Водные биоресурсы и аквакультура
Апробация работы. Основные результаты диссертации были представлены на VIII съезде Гидробиологического общества РАН (Калининград, 2001), Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы патологии, иммунологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов» (Москва, 2003), II международных чтениях, посвященных памяти и 85-летию со дня рождения С С Шульмана «Современные проблемы паразитологии, зоологии и экологии» (Калининград, 2004), научно-практическом международном семинаре «Новые энергосберегающие технологии в зоотехнии и ветеринарии» (Калининград, 2005), IX съезде Гидробиологического общества РАН (Тольятти, 2006), VI региональной конференции «Экологические проблемы Калининградской области и Балтийского региона» (Калининград 2007), Международной научно-практической конференции «Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов - 2» (Борок, 2007)
Декларация личного участия автора Автором самостоятельно в полевых и лабораторных условиях собран, обработан и проанализирован материал по изучению микробиоценоза угря, воды и грунтов Вислинского залива
Публикации По теме диссертации опубликовано 12 работ
Объем и структура работы Диссертация состоит из введения, 5 глав, выводов, списка литературы Работа изложена на 171 странице, включает 39 таблиц, 60 рисунков Список литературы содержит 168 источников, из них 74 - иностранных авторов
КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Глава 1 Абиотические и некоторые биотические характеристики условий существования европейского угря (литературный обзор)
В главе рассмотрена гидрологическая, гидрохимическая характеристика и экологическая обстановка в российской части Вислинского залива Балтийского моря Описана биология европейского угря с учетом экологических особенностей его обитания в заливе
Бактериальные инфекции европейского угря, в том числе язвенные поражения на коже, многие исследователи связывают с высокими органическими нагрузками на водоемы, стимулирующие развитие условно-патогенной микрофлоры (аэромонад и псевдомонад) [Einszpom-Orecka, 1976, Jensen et al, 1983, Halsband et al, 1985, Dalsgaard, 1987, Orecka-Grabda, 1993, Nikolauz et al, 1999, Teles et al, 2004, Ribeiro et al, 2005] Практически не изучена условно-патогенная микрофлора в воде и грунтах Вислинского залива и ее роль при патологических изменениях у европейского угря, что и определило цель и задачи данного исследования
Глава 2 Материал н методика исследований
Объектами исследований послужили грамотрицательные бактерии, выделенные из органов европейского угря и среды его обитания - воды и грунтов Вислинского залива Отбор проб угря, воды и грунта сопровождался измерением температуры воды Сбор материала осуществляли на различных рыбопромысловых участках залива (рисунок 1) в течение 2001 - 2006 гг Объем собранного и проанализированного материала представлен в таблице 1
Отбор материала осуществляли в лаборатории от живых угрей Ихтиопатологические исследования соответствовали общепринятым в ихтиопатологии методам [Мусселиус, 1983] Для бактериологического исследования рыбы брали кожу, жабры, кровь из сердца, содержимое желчного пузыря, печень, селезенку, содержимое заднего отдела кишечника, почки Для определения общей бактериальной обсемененности органов угря первичные бактериологические посевы проводили на рыбо-пептонный агар Бактерий семейства Enterobactenaceae выявляли на среде Эндо и инкубировали при температуре 37°С [Лабинская, 2004] По дифференциально-диагностическому агару
дифференцировали бактерий родов Aeromonas, Vibrio, Pseudomonas [Временная инструкция по борьбе с вибриозом рыб, 1998]. Для выявления пигментообразующих бактерий рода Pseudomonas использовали псевдосельагар (BBL Pseudosel ™ Agar), для накопления вибрионов - пептонную воду и щелочной агар [Методические указания...,1976: Elliot, 2001]. Первичные посевы инкубировали при температуре 25°С.
Неполный бактериологический анализ угрей в полевых условиях включал изучение микробного пейзажа кожи, кожных язв и содержимого желудочно-кишечного тракта. Исследование кожи и кожных язв проводили при помощи стерильных бактериологических печаток (ПО «Ленмедполимер») с селективными питательными средами. Содержимое желудочно-кишечного тракта отбирали стерильными пастеровскими пипетками с последующим их погружением в пробирки с физиологическим раствором. Отобранные пробы кожи, язв и кишечника помещали в сумку-холодильник и доставляли в лабораторию. Из пробирок с посевами содержимого кишечника высевали по 0,1 мл суспензии в чашки с селективными питательными средами. Бактериологические печатки и чашки с посевами помещали в термостат и инкубировали при температуре 25°С.
IV - Приморская бухта
Рисунок 1 - Районы сбора проб материала в Вислинском (Калининградском) заливе
Условные обозначения:
II - Центральная зона
III - Юго-западная зона
I - угорь ® - вода А - грунт
Таблица 1 - Объем собранного и проанализированного материала
Показатель Годы исследований Вид материала весна лето осень Всего исследований
л о. с а £ н 2 и 1 л о. о « Н Л а о к ! о
Объем материала 2001 Угорь экз Вода, проб Гр^нт проб 4 5 1 5 1 4 1 7 2 7 1 36 7
2002 > горь экз Вода, проб Гр\нт проб 5 5 1 7 2 5 5 3 6 38 8
2003 Угорь экз Вода, проб Гр\»гг проб 7 8 3 5 3 5 6 1 3 31 10 3
2005 Угорь экз Вода, проб Грчнт проб 5 2 3 5 2 3 5 3 5 2 6 3 2 2 1 26(87') 14 9
2006 Угорь экз Вода, проб Гр\нт проб 5 2 3 5 5 3 3 - - 15(905') 5 6
Всего Рыбы экз Воды проб Грунта проб 1138 44 18
Первичных бактериологических посевов 2001 Рыбы Воды Грмгга 160 6 '60 200 6 200 6 160 6 280 12 280 6 1440 42
2002 Рыбы Воды Грунта 200 12 200 200 6 280 12 200 200 18 240 1520 48
2003 Рыбы Воды Грунта 18 280 320 18 200 18 200 240 6 15 * 1240 60 15
2005 Рыбы Волы Гр\нта - 200 12 15 200 12 Ь 700 18 200 12 240 18 10 12 5 1040' 348 84 45
2006 Рыбы Волы Гр>нта - 200 12 15 200 200 18 15 - - - 600/3620 30 30
Всего первк «ных посевов Рыба Вода Грунт 5840/3968" 264 90
Штаммов бактерий 2001 РыОы Воды Гру »па 53 47 59 10' 78 141 104 172 115 96 123 37 144 661 611
2002 Рыбы Воды I р>нта 68 53 23 44 108 142 132 186 75 90 10 618 383
2003 Рыбы Воды Гру нта 41 67 119 137 127 110 93 77 94 93 - 483 382 93
2005 Рыбы Воды Гр>нта ■ 59 135 403 7Ь 160 269 770 252 1017 231 146 120 47 102 172 2705 1000 891
2006 Рыбы Воды Грунта п 64 874 844 120 65 158 - - 1041 129 1032
Всею штаммов бактерий из рыбы - 5508 из воды 2505 из ф\!Ш1- 2016
- количество угрей, подвергнутых неполному бактериологическому анализу
Пробы воды из различных участков залива отбирали в стерильные стеклянные бутылки Отбор проб грунта производили с помощью дночерпателя Петерсена (площадь захвата 0,025 м2) Грунт переносили и упаковывали в чистые полиэтиленовые пакеты Санитарно-бактериологические анализы воды и грунтов выполняли с использованием метода десятикратных серийных разведений Общую бактериальную обсемененность воды и грунтов определяли на агаре Рябова Накопление бактериальной массы, учет характера роста бактерий в жидкой питательной среде проводили на рыбо-пептонном бульоне Свежее фекальное загрязнение воды регистрировали на лактозном бульоне с борной кислотой при температуре 44°С [Антипчук, 1979, Лабинская, 2004] Выделение и дифференциацию грамотрицагельных бактерий проводили на аналогичных селективных питательных средах при тех же температурах инкубирования
Общую бактериальную обсеменность рассчитывали по количеству выросших колоний и выражали в колониеобразующих единицах (КОЕ) на 1 г органа (грунта) или 1 мл жидкого содержимого органа (воды) [Мусселиус, 1983, Антипчук, 1979, Лабинская, 2004] Колонии бактерий пересевали на первично-дифференцирующую среду Клиглера или скошенный агар При изучении штаммов бактерий использовали методы, принятые в ихтиопатологии и санитарной микробиологии [Мусселиус, 1983, Лабинская, 2004, Поздеев, 2002, Юхименко, 1979, Elliot et а], 2001, Методы общей бактериологии, 1984]
Родовую и видовую идентификацию выделенных бактерий проводили по Определителю бактерий Берджи [Опредечитель , 1997] Руководству по клинической лабораторной диагностике [Руководство , 1992], Руководству по определению грамотрицательных потенциально-патогенных бактерий (1984) Виды вибрионов идентифицировали по Элиот [Elliot et al, 2001], псевдомонад - по Шлейфер [Schleifer, 1975], энтеробактерий - по Сиволодскому (1999)
У всех выделенных штаммов бактерий анализировали факторы пагогенности и чувствительность к антибиотикам Протеолитическую активность бактерий проверяли по разжижению желатина Гемолитическую активность штаммов бактерий выявляли по гемолизу на 5%-ном кровяном агаре, лецитиназную активность - на чашках с желточным агаром [Методы общей бактериологии, 1984, Лабинская, 2004] ДНК-азную активность бактерий рода Aeromonas определяли по ДНК-агару (Difco) Результат оценивали согласно Методическим указаниям по определению патогенности аэромонад по степени ДНКазной активности (1998) Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам применяли диско-диффузионный метод [Лабинская, 2004, Справочник , 1982] Степень чувствительности бактерий к антибиотикам определяли по Красильникову (1999) Статистическая обработка данных проводилась в пакете программ Microsoft Office Excel
2003 (Корпорация Майкрософт, 2003) применяли 1-критерий Стьюдента, вычисляли доверительный интервал для среднего с вероятностью 0,95, сравнивали две совокупности по регрессионно-корреляционному анализу с вычислением коэффициента корреляции Пирсона
Глава 3 Эколого-микробиологическая характеристика европейского угря
3 1 Общая бактериальная обсемспеипость грунтов, воды и угря Вислинского залива
Нами было установлено сезонное изменение общей бактериальной обсемененностн грунтов, воды и угря Вислинского залива. Пик численности сапрофитной микрофлоры в грунтах залива отмечали весной (в среднем 1,2x105 КОЕ/г) Летом и осенью в грунтах происходило существенное снижение численности бактерий (в среднем 4,6х102 и 1,9х102 КОЕ/г соответственно)
С повышением температуры воды и увеличением содержания взвешенного вещества в заливе весной количество сапрофитной микрофлоры увеличивалось (в среднем 4,8x103 КОЕ/мл) с максимумом в июне (в среднем 6,9x104 КОЕ/мл) и с последующим изменением численности сапрофитных бактерий в июле и августе (1,1х104 КОЕ/мл и 0,96x103 КОЕ/мл соответственно) Осенью в заливе происходило увеличение численности водных гетеротрофных микроорганизмов (в среднем 4,9х103 КОЕ/мл) Сезонная динамика содержания сапрофитных бактерий в воде совпадает с процессами ветроволного взмучивания осадков в заливе [Чечко, 2002, 2006]
Районы юго-восточной части Приморской бухты и Центральная зона залива отличались минимальными значениями содержания сапрофитных бактерий в течение года, как в грунтах, так и в воде Максимальные величины общей бактериальной обсемененности грунтов и воды приурочены к Эстуарной зоне залива На повышенные значения сапрофитных бактерий в этой зоне оказывают влияние вынос осадочного материала рек, интенсивность осадконакопления и низкая степень биотурбации [Чечко, 2006]
Отмечена сезонная динамика общей бактериальной обсемененности органов угря Экологические особенности обитания угрей у дна, вероятнее всего, определяли общую бактериальную обсемененность кожи угрей весной Обсеменение кишечника и жабр проходило через воду при вымывании бактериальной флоры из грунтов залива Через жабры и стенки кишечника бактерии расселялись по всем органам рыбы, однако численность сапрофитов в органах была незначительной Летом происходило дальнейшее увеличение сапрофитной микрофлоры на коже, жабрах и в кишечнике угрей Повышение микробной контаминации крови привело к увеличению бактериальной обсемененности печени, желчного пузыря, селезенки и почек рыбы Осенью значения общей бактериальной обсемененности жабр, крови, печени и селезенки оставались практически такими же, как
летом. Некоторое снижение бактериальной обсемененности отмечено в кишечнике угря. Наибольшие показатели бактериальной обсемененности органов летом и осенью были выявлены у угрей, выловленных в Эстуарной части залива (районы г. Светлый - Ушаково, пос. Комсомольский, пос. Береговое и район Морского канала).
3.2 Исследование количественного и видового состава грамотрицательной
микрофлоры угря и среды его обитания по сезонам года 3.2.1 Грамотрицательная микрофлора воды и грунтов
В микрофлоре воды было выделено 24 вида грамотрицательных бактерий, относящихся к 7 родам (рисунок 2). В микрофлоре грунтов идентифицировали 20 видов грамотрицательных бактерий, относящихся к 6 родам (рисунок 3).
PS ■ . 1!' Ч
Ps .j PS arftrv/1
PS
PS Mferac. PS т.1 il."«
3 Eichonchc» coli
□ Entorobicter ■gfjlonwrans
Рисунок 2 - Видовой состав грамотрицательной микрофлоры воды Вислинского залива
ja Pseudomonas
Ps acidovorans Ps alcaigenes \ Ps cepacia j Ps. drrinuta Ps menttocina Ps pubda Ps putrefaciens
! Ps stutter*
a Vibrio fluvialis
□ Aeromonas
A. eucrenophila A hydrophila A schubertii
Рисунок 3 - ьидовой состав грамотрицательной микрофлоры грунтов Вислинского залива
В микрофлоре воды и грунтов по количеству выделенных штаммов доминировали условно-патогенные бактерии родов Pseudomonas и Aeromonas. Значительное число штаммов дали сапрофитные бактерии рода Alcaligenes. Во все сезоны преобладающими в воде были бактерии рода Pseudomonas. Весной численность псевдомонад составляла
0 Escherichia coli
Л Citrobacter
С arrolanaticus х ____[_____
С. /reurxlu ез Alcaligenes laecalis
35,4±4,38% штаммов, летом и осенью количество данных бактерий в воде бьшо высоким и практически не изменялось (67,5±5,41% и 68,1±5,08% штаммов бактерий соответственно)
В микрофлоре грунтов весной и летом псевдомонады были доминирующими (69,6±9,38% - 66,9±14Д9% штаммов) Осенью количество псевдомонад в грунтах резко снижалось - 18,6±5,88% штаммов
Условно-патогенные бактерии рода Aeromonas максимальной численности в микрофлоре воды залива достигали весной (40,9±б,07% штаммов) В микрофлоре грунтов численность аэромонад весной была минимальной (16,4±7,37% штаммов) Летом в грунтах численность аэромонад увеличивалась до 29,7±3,93% штаммов, напротив, в воде отмечено резкое снижение их численности до 3,2±0,24% штаммов К осени количество аэромонад в микрофлоре воды незначительно возрастало (18,0±1,12% штаммов), в грунтах эта группа бактерий достигала максимальной численности (72,7±10,85% штаммов)
Максимальное количество сапрофитных бактерий рода Alcahgenes в микрофлоре воды было летом (27,5±2,24% штаммов) Вибрионов в малых количествах высевали из воды только в весенне-тетние месяцы (4,9±0,73 и 1,2±0,12% штаммов соответственно) В микрофлоре грунтов вибрионы присутствовали летом (3,3±1,2% штаммов) Из бактерий семейства Enterobactenaceae наибольшее число штаммов в микрофлоре воды приходилось на энтеробактеров при максимальной численности весной (6,7±1,18% штаммов) Кишечных палочек и протеусов высевали из воды единичными штаммами в течение года В микрофлоре грунтов весной по числу штаммов преобладали цитробактеры (9,7±4,24% штаммов)
В работе приводится видовой состав микрофлоры воды и грунтов по сезонам года с указанием частоты выделения каждого вида бактерий Значительных изменений видового состав грамотрицательноп микрофлоры воды и грунтов в течение периода исследований не выявлено
3 2 2 Грамотрнцатетьная микрофлора угря
За весь период исследований количество угрей с патологическими изменениями на коже и во внутренних органах составило 72,8% Патологические изменения отмечали как у мелких (55,08±0,41 см), так и у крупных экземпляров угрей (73,98±0,45 см) Основное количество патологических признаков у угрей залива отмечали летом - ранней осенью язвы и геморрагии на коже, воспаление печени и кишечника, скопление экссудата в полости тела
Грамотрицательная микрофлора угря Вислинского залива была представлена 31 видом бактерий, относящихся к 8 родам (рисунок 4) В микрофлоре угря, как и в среде его обитания, доминировали условно-патогенные бактерии родов Aeromonas и Pseudomonas Численность бактерий рода Aeromonas была наибольшей весной (46,9±0,46% штаммов), несколько меньше летом (31,9±0,37% штаммов) и осенью (2,2±2,36% штаммов)
Рисунок 4 - Видовой состав грамотрицательной микрофлоры угря Вислинского залива
Весной в микрофлоре угря отмечено 16,3±0,17% штаммов бактерий рода Pseudomonas. Летом и осенью численность псевдомонад в микрофлоре рыбы различалась незначительно (30,9±0,29% и 28,6±0,54% штаммов). В ассоциации с псевдомонадами во все сезоны из микрофлоры угрей выделяли сапрофитных бактерий рода Alcaligenes, количество которых постепенно нарастало к осени (26,8±0,89% штаммов).
Количество галофильных бактерий рода Vibrio в микробном пейзаже угря незначительно увеличивалось только летом (4,6±0,08% штаммов). Наибольшее количество цитробактеров в микробном пейзаже угря отмечали весной (29,2±0,37% штаммов), энтеробактеров - летом (9,1±0,24% штаммов). Численность бактерий родов Escherichia и Proteus была единичной.
В работе даны характеристики родов и видов грамотрицательных бактерий, обсеменяющих угря, проанализирована встречаемость видов бактерий по сезонам, а также приведены литературные данные об их эпизоотической и санитарно-экологической значимости.
3.2.3. Зависимость видового состава микрофлоры угря от температуры воды
За период исследования температура воды весной изменялась от 6 до 15 °С, летом -от 13 до 22 °С, осенью - от 7 до 19 °С. Для установления зависимости видового состава грамотрицательной микрофлоры угря и среды его обитания от сезонного изменения температуры воды в Вислинском заливе был проведен регрессионно-корреляционный анализ. Формирование видового состава микрофлоры грунтов весной не зависело от изменения температуры воды (R=0,14). Летом существовала прямая зависимость увеличения количества видов грамотрицательных бактерий, обсеменяющих фунты, от повышения температуры воды в заливе (R=0,58). Осенью при незначительном понижении температуры воды в заливе в грунтах выявили увеличение количества видов грамотрицательной микрофлоры, что подтверждается обратной линейной зависимостью (R—0,54).
Весной при постепенном увеличении температуры воды залива в водной микрофлоре происходит уменьшение количества видов грамотрицательных бактерий (R=-0,88) Летом выявили прямую линейную зависимость видов бактерий в воде и повышением температуры (R=0,85) Осенью зависимость видового состава водной грамотрицательной микрофлоры и температуры воды не отмечена (R=0,08)
Полученные низкие коэффициенты корреляции Пирсона зависимости видового состава бактерий, обсеменяющих некоторые органы угря, от температуры воды весной (кожа R=0,11, жабры R=0,20, печень R=0,0) указывают на отсутствие влияния температурного фактора на формирование видового состава бактерий данных структур рыбы В этот сезон нами была, установлена средняя степень связи видового состава микрофлоры кишечника от повышения температуры воды в заливе (R=0,46) Летом для анализируемых органов угря зависимость видового состава микрофлоры от повышения температуры воды в заливе выявлена не была Осенью также не установили влияния температуры воды на видовой состав микрофлоры кишечиика (R=0,16) н микрофлоры кожи угря (R=0,41) Однако в этот сезон при незначительном понижении температуры воды в заливе в микрофлоре жабр и печени отметили уменьшение количества видов бактерий (при R=0,57 и R=0,83 соответственно)
3 3 Микробный пейзаж европейского угря н среды его обитания по районам Вислннского залива
Анализ обсемененности угря по зонам залива имеет относительный характер с учетом того, что угорь постоянно перемещается по заливу Условно-патогенные бактерии рода Pseudomonas доминировали в микрофлоре грунтов во всех районах залива, в микрофлоре воды - в Центральной и Эстуарной зонах Наибольшее число штаммов псевдомонад изолировали из микрофлоры угря в Центральной зоне залива Условно-патогенные бактерии рода Aeromonas в микрофлоре воды и грунтов в наибольших количествах присутствовали в юго-восточной части Приморской бухты и в Центральной зоне залива Высокое обсеменение угрей условно-патогенными аэромонадами выявили в Эстуарной зоне и в юго-восточной части Приморской бухты Галофильных бактерий рода Vibrio обнаруживали в микрофлоре грунтов только в Центральной зоне залива, в воде -только в Эстуарной У угрей, выловленных в Эстуарной зоне и юго-восточной части Приморской бухты, количество вибриофлоры единично, максимально - в Центральной зоне Санитарно-показательные бактерии семейства Enterobactenaceae в наибольших количествах присутствовали в микрофлоре грунтов в Эстуарной зоне В этой же зоне и в юго-восточной части Приморской бухты в микрофлоре угрей доминировали кишечные группы бактерий В микробном пейзаже воды наибольшее число штаммов энтеробактерий выделили в
Центральной зоне при их отсутствии в микрофлоре грунтов Поступление в залив аллохтонных бактерий кишечной группы связано с речными водами или хозяйственно-бытовыми стоками с берегов
Проведен анализ видового состава грамотрицательных бактерий грунтов, воды и угря по зонам Вислинского залива. В Эстуарной зоне залива в микрофлоре угря и среды его обитания выделили наибольшее количество видов грамотрицательных бактерий
В Эстуарной зоне и юго-восточной части Приморской бухты наиболее часто встречали угрей с кожными поражениями
3 4 Пути проникновения и распространения грамотрицательных бактерий в органах угря
В работе проанализировано обсеменение органов угрей различными видами грамотрицательных бактерий в разные сезоны, проведено сравнение видового состава органов угря и среды его обитания Отмечена одновременная высеваемость нескольких видов условно-патогенных аэромонад и псевдомонад нз одного органа рыбы
Проникновение различных таксономических групп бактерий в угря происходит двумя путями 1) с водой через жаберные капилляры в кровь, 2) с водой и пищей через кишечник Выявили обсеменение грамотрицательными бактериями кожных покровов рыбы Источники бактериальной флоры и пути проникновения бактерий во внутренние структуры угря в зависимости от сезона года подтверждаются проведенным корреляционно-регрессионным анализом На рисунках представлены зависимости доминирующих видов штаммов бактерий, встреченных в микрофлоре угря и среде его обитания Высокое значение коэффициента корреляции Пирсона между видовым составом микрофлоры грунтов и кожи (11=0,84), грунтов и кишечника (11=0,89) свидетельствует о том, что формирование грамотрицательной микрофлоры кожи весной зависит от содержания этих же групп бактерий в грунтах (рисунок 5, 6), что объясняется обитанием угря в придонных слоях воды
Значение коэффициента корреляции Пирсона между видовым составом грамотрицательной микрофлоры воды и кожи было несколько ниже (у= 0,3302х + 8,4503, 11=0,50, Р<0,05), что еще раз подтверждает роль грунтов в качестве основного источника концентрирования бактериальной флоры Вынесенная из [рунтов микрофлора весной в воду обсеменяла жабры и кишечник угрей (рисунки 7, 8)
О 50 100 150 200 250 300 350 400 Кожа
Рисунок 5 - Зависимость видового состава грамотрицательной микрофлоры грунтов и кожи весной Зависимость аппроксимирована линейным уравнением
Кишечник
Рисунок 6 - Зависимость видового состава грамотрицательной микрофлоры грунтов и кишечника весной Зависимость аппроксимирована линейным уравнением
Кишечник
Рисунок 7 - Зависимость видового состава грамотрицательной микрофлоры воды и кишечника весной Зависимость аппроксимирована линейным уравнением
у = 1 4561х + 5,7224
R = 0 65 Р<0 05
♦
♦ ^
♦ ♦
О 2 4 6 8 10 12
Жабры
Рисунок 8 - Зависимость видового состава воды и жабр весной Зависимость аппроксимирована линейным уравнением
Летом среда обитагия перестает играть основную роль в формировании видового состава грамотрицателыгой микрофлоры угря, о чем свидетельствуют низкие или отрицательные значения коэффициентов корреляции Пирсона Летом благоприятные условия в заливе (повышение температуры воды, взвешенное органическое вещество, усиление интенсивности питания угрей) способствую! размножению микрофлоры, попавшей на рыбу весной В органах, вследствие интенсивного размножения, бактерии создают присущий для этого органа комплекс видов Взаимосвязь видового состава бактерий выявили только между микрофлорой печени и экссудата (рисунок 9) 12 ■
Рисунок 9 - Зависимость видового состава грамотрицательной микрофлоры печени и • экссудата летом Зависимость аппроксимирована линейным уравнением
Активизация микрофлоры летом как на поверхности, так и во внутренних органах приводит к развитию инфекционных процессов у угря Данные корреляционного анализа зависимости видового состава микрофлоры угря и среды его обитания позволяют предположить, что накопление основных видов бактерий - A hydrophila и Р cepacia, которые
участвуют в развитии кожных язв, происходит весной в грунте Затем бактерии из грунтов попадают на кожу угря и при достижении определенной численности летом вызывают язвы и геморрагии на коже
Осенью активность микрофлоры постепенно снижается Корреляционный анализ данных не выявил влияния видового состава бактерий грунтов на его формирование в воде Обратная линейная зависимость видового состава бактерий грунтов и кожи (у= 0,4441х + 21,093, К—0,13, Р<0,05) и низкие значения корреляции между видовым составом воды и кожи (у= 1,899х + 12,448, 11=0,32, Р<0,05), указывают, что привнесение бактерий на кожу угрей осенью практически не происходит Можно предположить, что часть бактерий, попавших на кожу рыбы весной, активно размножающиеся летом, остаются на поверхности угрей осенью Часть бактериальной грамотрицательной флоры уходит с поверхности угря через воду в грунт Связь воспаления стенок кишечника и скопления в полости тела экссудата осенью подтверждается корреляционной зависимостью видового состава экссудата и кишечника (у= 0,5349х + 11,313, К=0,48, Р<0,05) Осенью кишечник угря вновь становится ведущей структурой, через которую осуществляется обмен бактериальной флорой между угрем и грунтом (рисунок 10)
90
у = 0 ТОБх - 8 шга п = п яч Р<П,П5
60 Кишечник
Рисунок 10 - Зависимость видового состава грамотрицательной микрофлоры грунтов и кишечника осенью Зависимость аппроксимирована линейным уравнением
При проведении корреляционно-регрессионного анализа для изучения взаимосвязи микрофторы внутренних органов было выявлено, что осенью существует тесная зависимость между видовым составом бактерий печени и кишечника (11=0,99) (рисунок 11)
60 50 АО
л
|3 0 с
20 10 О
О 10 20 30 40 50
Кишечник
Рисунок 11 - Зависимость видового состава грамотрицательной микрофлоры печени и
кишечника осенью Зависимость аппроксимирована линейным уравнением
Глава 4 Факторы патогенности грамотрицательной микрофлоры угря, воды и грунтов Вислииского залива
4.1 Ферментная активность микрофлоры и чувствительность к антимикробным препаратам
Одним из важных факторов патогенности явтяются некоторые ферменты бактерий (гемолизины, протеазы, лецитиназы, ДНК-азы) с помощью которых они способны проникать в организм рыбы В течение года происходило изменение гемолитической активности бактерий с максимумом ее проявления летом Весной и осенью гемолитическую активность бактерии в основном проявляли при попадании на жабры и кожу при практическом отсутствии гемолитических штаммов бактерий в воде Летом повышение гемолитической активности наблюдали как у водных штаммов бактерий, так и у бактерий, обсеменяющих угря Гемолитическая способность бактерий отмечена практически во всех внутренних органах рыбы
Во все сезоны выделенная грамотрицательная микрофлора, обсеменяющая угря, воду и грунты, проявляла достаточно высокую лецитиназную активность с незначительным повышением лецитиназаположительных штаммов летом Наибольшее количество лецитиназаположительных штаммов в течение года отмечали в микрофлоре воды и на коже угрей
ГГротеолитическая активность грамотрицательной микрофлоры угря, воды и грунтов Вислинского залива в течение весны и осени была низкой Летом протеолигически активные штаммы отмечали среди всех таксономических групп бактерий В большинстве случаев протеолитическая активность микрофлоры проявлялась только при попадании бактерий на кожу, жабры и в кишечник
Анализ ДНК-азной активности бактерий рода Aeromonas, обсеменяющих угря, показал ее нарастание к лету В микрофлоре воды и грунтов во все сезоны года отмечали высокую ДНК-азную активность аэромонад Циркуляция в воде и грунтах вирулентных и высоковирулентных аэромонад в течение года приводила к попаданию ДНК-азаположительных бактерий в основном на кожу и в кишечник угрей Летом аэромонады при проникновении во внутренние органы угря сохраняли активность дезоксирибонуклеазы
Выявлена множественная антибиотикорезистентность грамотрицательной микрофлоры угря, воды и грунтов Вислинского залива Среди условно-патогенных бактерий родов Aeromonas и Pseudomonas отметили чувствительных к рифампицину, стрептомицину, ампициллину, карбенициллину и олеандомицину отдельных штаммов, особенно при их попадании на угря Множественная антибиотикорезистентность грамотрицательной микрофлоры способствует длительному выживанию бактерий в окружающей среде, в организме рыбы и проявляется при увеличивающейся антропогенной нагрузке на водоем
4 2 Роль некоторых условно-патогснных бактерий в развитии патологических изменений у европейского угря Вислинского залива
Заслуживает внимание следующий комплекс признаков доминирование в микрофлоре угря условно-патогенных бактерий родов Aeromonas и Pseudomonas, обсеменение ими как поверхностных, так и внутренних структур рыбы, высокая их ферментная активность, развитие патологических изменений у угря летом
Учитывая различное действие ферментных групп, выявленных у аэромонад и псевдомонад, и контаминацию ими рыбы с патологическими процессами, выявили отдельные виды этиологически значимых условно-патогенных бактерий В возникновении геморрагических явлений принимают участие A caviae, A schubertu, A sobna, Р alcahgenes и Р putrefaciens, кожных язв - A hydrophila и Р cepacia В воспалительном процессе стенок кишечника и печени с последующим проникновением в экссудат возможными участниками могут быть все выделенные виды аэромонад, а также Р alcahgenes, Р putida и Р putrefaciens
Глава 5 Обсуждение результатов
Нами установлено, что основным источником микробного обсеменения угря и воды являются грунты Вислинского залива, максимальная концентрация бактерий в которых отмечается весной Попадание бактерий на кожу угрей происходит непосредственно из грунтов, что может быть связано с экологическими особенностями обитания этого вида рыбы у дна С ростом численности бактерий в воде наступает момент, когда организм рыбы перестает справляться с растущей агрессивностью среды, в результате чего бактерии появляются в паренхиматозных органах [Амин, 1974, Каховский, 1991, Обухова, 2005]
Увеличение показателей общей бактериальной обсемененности органов угря, в том числе и паренхиматозных, происходило с повышением общего количества сапрофитных бактерий в воде, что свидетельствует об усилении агрессивности среды его обитания и ослаблении защитных свойств организма
При оценке эпизоотологического состояния популяции рыб в отношении бактериальных инфекций особое внимание следует обратить на группу условно-патогенных бактерий, являющихся постоянньми обитателями водной среды и организма рыбы и способных проявлять свою вирулентность в неблагоприятных для хозяина условиях [Ведемейер, 1981, Конев, 1996, Бычкова, 2000, Юхименко, 2007] У европейского угря Вислинского залива условно-патогенная грамотрицательная микрофлора представлена преимущественно бактериями родов Aeromonas и Pseudomonas Эти же таксономические группы бактерий населяют воду и грунты залива
Доля галофильных бактерий рода Vibrio в микробиоценозе угря и среды его обитания исключительно мала При заходе в залив у угря происходит смена галофильной микрофлоры на микрофлору, с преобладанием пресноводных видов бактерий Небольшая численность энтеробактерий в микрофлоре угря и среде его обитания в Вислинском заливе обеспечивается постоянным перемешиванием пресных и морских вод Однако их обнаружение служит санитарным показателем качества речной воды, которая определяет санитарное благополучие залива
Корреляционным анализом нами было установлено, что в микрофлоре воды и грунтов увеличение видов грамотрицательных бактерий происходит летом при повышении температуры воды в Вислинском заливе На видовой состав микрофлоры структур рыбы температура существенного влияния не оказывает Температурная зависимость отражает сезонные особенности видового состава бактерий и сезонную динамику температур в Вислинском заливе За период исследований температурный режим в заливе с апреля (весна) до октября (осень) не выходил за границы толерантного диапазона роста и развития видов грамотрицательных бактерий, выявленных в микрофлоре угря и среде его обитания
Обсеменение поверхностных и внутренних структур угря грамотрицательной условно-патогенной микрофлорой свидетельствует о возможности их участия в развитии эпизоотий в популяции угря Вислинского залива Однако взаимодействие между микро- и макроорганизмом, реализующееся в определенных условиях внешней среды, не всегда заканчивается инфекционным процессом или гибелью макроорганизма Ведущую роль, с одной стороны, играет способность макроорганизма противостоять постоянным атакам микробов, с другой стороны, исход инфекционного заболевания зависит от степени патогенности микроорганизма, которая проявляется при контакте с малоустойчивым к нему
хозяином [Ведемейер, 1981, Лукьяненко, 1989] Анализ ферментной активности видов грамотрицательных бактерий, обсеменяющих различные органы угрей, выявил, что в большинстве случаев бактерии сохраняли активность при обсеменении кожи, жабр и кишечника Особенно четко это проявлялось в микрофлоре угря в весенне-осенние сезоны Попадая во внутренние органы, многие виды бактерий теряли ферментную активность Летом, при отмеченном увеличении обсемененности, во внутренних органах ферментная активность бактерий сохранялась Следует также указать, что проявление ферментативных свойств наиболее активно было у доминирующих видов условно-патогенных бактерий родов Aeromonas и Pseudomonas При контаминации кожи с геморрагическими явлениями, кожных язв, кишечника и экссудата отдельные виды аэромонад и псевдомонад проявляли несколько ферментных активностей, что могло способствовать разрушению клеточных мембран и проникновению бактерий в цитоплазматическую часть клеток определенной структуры угря Патологические процессы на коже угря можно разделить на две группы - язвенные и геморрагические поражения Одновременно воспалительные процессы отмечены во внутренних структурах угрей - кишечнике и печени
На основании полученных данных, с учетом проведенного корреляционного анализа, в виде следующей схемы (рисунок 12) можно показать пути проникновения и перемещения грамотрицательных бактерий в организме угря и среде его обитания
Вода
Жабры
Кровь
Почки
► Селезенка
J Печень "!-
L _ „ ____1
Желчный пузырь
Вода
I
Грунт
I Кожа | - язвы и геморрагии
3
Примечания Г Г Г .Г* " органы с ферментоактивной микрофлорой и патологией,
-► - направление проникновения и перемещения
грамотрицательной микрофлоры
Рисунок 12 - Пути проникновения и перемещения грамотрицательной микрофлоры в организме европейского угря Вислинского залива
Первый путь - проникновение бактерий через жабры угря ведет к изменению обсемененности почек и селезенки, в которых не выявлено патологии Второй путь проникновения бактерий в кишечник рыбы с пищей и водой - это единственный путь, вызывающий патологические изменения в кишечнике и печени, и, как следствие, скопление экссудата в полости тела В желчном пузыре, при наличии его обсеменения грамотрицательными бактериями, патологические изменения не выявлены Развитие бактерий на коже угря ведет к изменению целостности кожных покровов, проявляющиеся в виде язв и геморрагий
Существование сезонности видимых клинических патологических изменений на коже угря (без значительной его гибели) позволяет предположить, что смешанная бактериальная инфекция угрей, в развитии которой участвуют условно-патогенные бактерии аэромонадно-псевдомонадного комплекса, протекает в хронической форме Увеличение количества особей в популяции угря с язвенными или геморрагическими поражениями, происходящее в летний сезон, является результатом повышенной органической нагрузки на залив Установленная нами связь между условно-патогенной микрофлорой и наружными и внутренними патологиями угря свидетельствует о том, что грамотрицательная микрофлора, также как и угорь, являются составной частью экосиртемы Вислинского залива Отсутствие ферментной активносш у ряда видов грамотрицательных бактерий, поселившихся во внутренних органах угря, незначительная летальность при визуально-наблюдаемых патологиях, вызванных условно-патогенной аэромонадно-псевдомонадной группой бактерий, свидстел^твует на наш взгляд, о достаточно сильной иммунной системе угря, которая могла выработаться только в результате очень длительною существования комплекса «угорь - условно-патогенные бактерии»
ВЫВОДЫ
1 Общая бактериальная обсемененность угря, воды и грунтов зависит от сезона года и района Вислинского залива Обсеменение угря весной происходит как непосредственно из воды, так и при вымывании бактерий из грунтов Максимальное количество сапрофитной микрофлоры, обсеменяющей угря, воду и грунты выявлено в Эстуарной зоне залива
2 В микробиоценозе угря и среде его обитания в Вислинском заливе во все сезоны доминировали условно-патогенные бактерии родов Aeromonas и Pseudomonas С учетом сезонной динамики, грамотрицательная микрофлора грунтов представлена 8-20 видами, относящихся к 6 родам, микрофлора воды - 18-24 видами, 7 родов бактерий В микрофлоре угря обнаружен 31 вид бактерий, принадлежащих к 8 родам
Незначительную долю во все сезоны в микробном пейзаже рыбы, воды и грунтов составляли галофильные вибрионы и бактерии семейства Enterobactenaceae В составе грамотрицательных бактерий, обсеменяющих угря и среду его обитания, в сезонном аспекте происходило изменение численности видов бактерий с максимумом их развития летом На количество видов бактерий в микрофлоре угря, воды и грунтов может оказывать влияние изменение температуры воды в Вислинском заливе
3 По всем районам исследования в микрофлоре рыбы, воды и грунта постоянно прису тствовшга \словно-патогенные бактерии аэромонадно-псевдомонадного комплекса Наибольшее количество видов бактерий, обсеменяющих угря, воду и грунты, отмечено в Эстуарной зоне залива с донными иловыми отложениями и наибольшим содержанием взвешенного вещества в воде Наименьшее число видов микрофлоры угря и среды его обитания приурочено к Центральной зоне залива с влиянием морских вод и низким содержанием взвешенного вещества в воде
4 Установлено, что весной формирование грамотрицательной микрофлоры кожи угрей зависит от содержания этих же групп бактерий в грунтах и воде Проникновение во внутреннюю среду угря весной осуществляется с водой и пищей через кишечник и с водой через жаберные капилляры и кровь Летом среда обитания практически не оказьгвает влияния на формирование микрофлоры угря Во внутренних органах рыбы создается собственный комплекс видов бактерий Обмен флорой происходит только между кишечником, печенью и экссудатом Осенью доминирует связь между микрофлорой кишечника и грунтов
5 Патогенное действие грамотрицательных бактерий обусловлено наличием ферментных групп (гемолизины, лецитиназы, протеазы и ДНК-азы) и устойчивостью к ряду антибиотиков Проявление патологических процессов у европейского угря Вислинского залива летом связано с ферментной активностью доминирующих в его микрофлоре условно-патогенных бактерий родов Aeromonas и Pseudomonas
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1 Барсукова (Казимирченко) OB Состав микрофлоры угря Вислинского залива / OB Барсукова // Тезисы докладов VIII съезда Гидробиологического общества РАН (Калининград, 16-23 сентября 2001 г) - Калининград, 2001 -Т 3 -С 16-17
2 Казимирченко О В Роль водной среды в формировании состава микрофлоры угря Вислинского залива /ЕВ Авдеева, О В Казимирченко // Проблемы патологии, иммунологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов тез докл Всероссийской научно-практич конф 16-18 июля 2003 г -М Россельхозакадемия, 2003 - С 10-11
3 Казимирченко О В Микрофлора угря и воды Вислинского залива / О В Казимирченко // Современные проблемы паразитологии, зоологии и экологии матер I и II международных чтений, посвященных памяти и 85-летию со дня рождения С С Шульмана,-Калининград КГТУ, 2004 -С 268-277
4 Казимирченко О В Микробный пейзаж Калининградского залива и его экологическая оценка /ЕВ Авдеева, О В Казимирченко // Успехи современного естествознания - M, 2005 -№11 -С 80
5 Казимирченко О В Мониторинг состояния европейского угря Anguilla anguilla L Вислинского (Калининградского) залива по бактериологическим параметрам /ЕВ Авдеева, О В Казимирченко // Фундаментальные исследования - M, 2005 - № 8 - С 50
6 Казимирченко О В Эпизоотическое значение микрофлоры европейского угря Anguilla anguilla L Вислинского залива / О В Казимирченко // Новые энергосберегающие технологии в зоотехнии и ветеринарии Материапы международного научно-практического семинара 10-11 ноября, 2005 г - Калининград изд-во КГТУ, 2005 - С 38-48
7 Казимирченко О В Итоги бактериологических исследований рыб в рыбоводных хозяйствах различного типа и естественных водоемах Калининградской области /ЕВ Авдеева, О В Казимирченко // Успехи современного естествознания - M, 2006 - №1 -С 29
8 Казимирченко О В Влияние микробного пейзага воды на формирование микрофлоры рыбы в естественных и искусственных водоемах /ЕВ Авдеева, О В Казимирченко, M Ю Котлярчук // Тезисы докладов IX съезда Гидробиологического общества РАН (Тольятти, 18-22 сентября2006г) -Тольятти ИЭВБРАН,2006 - Т1 -С 3
9 Казимирченко О В Роль условно-патогенных бактерий в возникновении патологических изменений у европейского угря (Anguilla anguilla L ) Вислинского залива / О В Казимирченко//Рыбное хозяйство -2006 -№6 - С 90-91
10 Казимирченко О В Изучение возбудителей инфекционной патологии европейского угря (Anguilla anguilla L ) Калининградского залива / О В Казимирченко // Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов - 2 расширенные материалы Межд науч -практич конференции, Борок, 17-20 июля 2007 г -M Россельхозакадемия, 2007 - С 343-345
11 Казимирченко О В Микробиологический мониторинг европейского угря в условиях антропогенной нагрузки /ЕВ Авдеева, Т А Берникова, О В Казимирченко, H H Нагорнова // Экологические проблемы Калининградской области и Балтийского региона
Сб науч трудов / под ред В В Ортенка - Калининград изд-во РГУ им И Канта, 2007 -С 129-134
12 Казимирченко О В Экологическая значимость условно-патогенных бактерий, выделенных из микрофлоры европейского угря (Anguilla anguilla L) и среды его обитания в российских водах Вислинского залива (Балтийское море) / О В Казимирченко // Вестник РГУ им И Канта Серия «Естественные науки» (в печати)
Подписано к печати 12 05 2008 г
Формат бумаги 60*84 (1/16)
Объем 1,6 п л Тираж 100 экз Заказ № 01
ФГОУ ВПО «Калининградский государственный технический университет» 236000 г Калининград Советский проспект 1
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Казимирченко, Оксана Владимировна
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1 АБИОТИЧЕСКИЕ И НЕКОТОРЫЕ БИОТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ УСЛОВИЙ СУЩЕСТВОВАНИЯ ЕВРОПЕЙСКОГО УГРЯ
ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР)
1.1 Гидрологическая и гидрохимическая характеристика Вислинского залива
1.2 Биологическая характеристика европейского угря Anguilla anguilla L.
1.3 Роль грамотрицательной микрофлоры в возникновении бактериальных инфекций у угря естественных водоемов и при его искусственном разведении
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ
ГЛАВА 3 ЭКОЛОГО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЕВРОПЕЙСКОГО УГРЯ
3.1 Общая бактериальная обсемененность грунтов, воды и угря Вислинского залива
3.2 Исследование количественного и видового состава грамотрицательной микрофлоры угря и среды его обитания по сезонам года
3.2.1 Грамотрицательная микрофлора воды и грунтов
3.2.2 Грамотрицательная микрофлора угря
3.2.3 Зависимость видового состава микрофлоры угря и среды его обитания от температуры воды
3.3 Микробный пейзаж европейского угря и среды его обитания по районам
Вислинского залива 74 3.4 Пути проникновения и распространения грамотрицательных бактерий в органах угря
ГЛАВА 4 ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ
УГРЯ, ВОДЫ И ГРУНТОВ ВИСЛИНСКОГО ЗАЛИВА
4.1 Ферментная активность микрофлоры и чувствительность к антимикробным препаратам
4.1.1 Гемолитическая активность бактерий
4.1.2 Лецитиназная активность бактерий
4.1.3 Протеолитическая активность бактерий
4.1.4 ДНК-азная активность бактерий рода Aeromonas
4.1.5 Антибиотикочувствительность грамотрицательной микрофлоры
4.2 Роль некоторых условно-патогенных бактерий в развитии патологических изменений у европейского угря Вислинского залива
ГЛАВА 5 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
Введение Диссертация по биологии, на тему "Экологический анализ грамотрицательной микрофлоры грунтов, воды и европейского угря (Anguilla anguilla L.) Вислинского залива (Балтийское море)"
•
Перспективным планом развития хозяйства страны предусматривается дальнейший рост производства рыбной продукции. В связи с этим значительно возрастает необходимость создания мощной, высокоденной, управляемой сырьевой базы во внутренних рыбохозяйственных водоемах. В настоящее время на стадии интенсивного развития находится аквакультура, которая включает широкий круг научных исследований и производственных процессов, связанных с активной деятельностью человека и направленных на товарное выращивание, естественное и искусственное воспроизводство рыбных запасов. В некоторых странах Европы, Азии и в Японии развита товарная аквакультура угря. Предназначенные для выращивания молодые особи угря должны быть выловлены в естественных водоемах (в прибрежных районах), так как до сих пор практических результатов по получению половозрелых угрей и их размножению не получено. Рыбу выращивают в специальных, приспособленных для этого мелких прудах, в озерах, прибрежных морских водах, отгороженных заливах и морских прудах, а также в установках с замкнутым циклом водообеспечения (УЗВ) [1, 2, 3].
Однако на успешное угреводство и аквакультуру других рыб, на природные экосистемы влияет состояние водоемов, без сохранения чистоты которых нельзя рассчитывать на ее большие масштабы. Негативное влияние на водную среду оказывает загрязнение водоема остатками кормов, метаболитами выращиваемых гидробионтов, токсическими веществами. Это ведет к возникновению множества заболеваний, которые могут охватить все хозяйство и прилежащие воды. Болезни рыб, возникающие как в естественных, так и в искусственных водоемах, наносят значительный ущерб рыбному хозяйству. Меняющиеся условия обитания рыб приводят к возникновению новых болезней и изменению клинических признаков уже известных заболеваний. Таким образом, важным направлением становится разработка методов выявления источника и механизма передачи возбудителя инфекции, изучение эпизоотического процесса в водоемах, определение иммунного статуса популяции рыб [4, 5].
Данные о состоянии природной среды в последние годы приобретают все большее значение. Окружающая среда под воздействием хозяйственной деятельности человека испытывает огромную многофакторную нагрузку. В этих условиях биосфера не успевает перерабатывать огромное количество поступающих в нее химических соединений. Возрастающие масштабы загрязнения внешней среды приводят к нарушению исторически сложившегося в природе круговорота веществ, т. е. к нарушению структуры биоценозов и экосистем. Наиболее уязвимы среди элементов биосферы водные экосистемы. Для поверхностных водоемов мощными источниками токсикантов являются сточные воды промышленных, коммунально-бытовых и сельскохозяйственных предприятий. Также на первый план выдвинулась проблема загрязнения водоемов тяжелыми металлами, радиоактивными элементами, ядохимикатами, нефтью и нефтепродуктами. Особенно высокие уровни загрязнения характерны для водных экосистем средних широт в северном полушарии, где уже 20-30 лет тому назад были сосредоточены основные районы индустриальной и аграрной деятельности и откуда поступали основные потоки загрязняющих веществ в водоемы [6, 7, 8, 9].
Жизнь в водной среде предопределяет тесную связь жизнедеятельности гидробионтов с факторами среды. При ухудшении гидрохимического режима в водоеме наблюдается сокращение видового разнообразия» фауны беспозвоночных, изменение структуры и численности их сообществ. У рыб под воздействием загрязняющих веществ происходят нарушения ферментативных систем, работы систем кровоснабжения, снижается темп роста и размеры организма, коэффициент упитанности и ингибируется репродуктивная способность. Вследствие скелетных аномалий, язв, опухолей, различных патологий внутренних органов снижается сопротивляемость рыб к заболеваниям, что отражается на эпизоотическом состоянии водоемов [б, 10, 11, 12, 13].
В водной экосистеме с неблагоприятной экологической ситуацией также происходят устойчивые изменения в структуре и функционировании микробиоценозов. Антропогенное воздействие на водоем приводит к увеличению биомассы микроорганизмов, изменению их видового состава. Массовое развитие получают микроорганизмы, ферментативная система которых приспособлена к определенным загрязнителям и антибиотикоустойчивые формы бактерий. Такие микробные популяции выступают в качестве индикаторов изменяющихся химических условий в водоеме [14, 6]. С ухудшением качества воды при ее загрязнении тяжелыми металлами, полихлорфенилами, хлорорганическими пестицидами, ароматическими углеводородами многие исследователи связывают высокое обсеменение рыбы условно-патогенными бактериями, участвующими в развитии инфекционных заболеваний рыб. Эти бактерии способны длительно сохраняться в воде и грунте водоема, не утрачивая своих патогенных свойств. В микробном пейзаже тканей и органов рыбы чаще обнаруживают доминирование аэромонад, псевдомонад и энтеробактерий. При неблагоприятных для хозяина условиях внешней среды эти группы бактерий выделяются в ассоциациях и становятся причиной септических инфекций рыб [14, 15, 16, 17, 18, 19]. Широкое распространение и видовой состав условно-патогенных микроорганизмов в рыбах, патогенность многих ее представителей делает возможным использование микрофлоры рыбы как индикатора изменяющихся условий в водоеме. Мониторинговые микробиологические исследования необходимы при прогнозировании эпизоотической ситуации в отношении бактериальных инфекций в популяции рыбы и могут использоваться при санитарно-эпидемиологической оценке ихтиофауны и среды ее обитания [20, 18, 21, 22].
Калининградская область отличается богатством водоемов, многие из которых имеют рыбохозяйственное значение. К высоко рыбопродуктивным водоемам относится российская часть Вислинского залива - Калининградский залив, видовой состав ихтиофауны которого насчитывает более 40 видов рыб. Сохранение рыбных запасов залива на современном этапе - актуальная проблема рыбного хозяйства Калининградской области. Негативное влияние на экосистему залива оказывают промышленно-бытовые сточные воды от населенных пунктов, загрязненные речные воды и наносы, накопление веществ из атмосферных осадков, развитие нефтедобычи [23, 24, 25].
Европейский угорь Anguilla anguilla L. — один из ценных промысловых видов рыб в Вислинском заливе. Мясо угря содержит значительное количество хорошо усвояемых жиров и белков, большой комплекс минеральных элементов и витаминов. Благодаря этому угорь во всех видах (свежем, копченом, консервированном) высоко ценится на рынке. Ценным качеством угря как пищевого продукта является и то, что в его мясе нет мышечных костей, съедобная часть у угря составляет в среднем около 70% [26,27].
В последние два десятилетия повсеместно наблюдается тенденция снижения численности запасов европейского угря. Общие причины происходящего связаны с загрязнением водной среды, выловом молоди, перекрытием путей миграции угря из-за строительства гидросооружений на реках, а также болезнями [2, 28, 29, 27]. В странах Европейского Союза вступила в силу Директива по мерам сохранения и восстановления запасов европейского угря. Директива обязала страны Евросоюза подготовить планы Управления численностью угря (Eel Management Plans), включающие мероприятия по уменьшению смертности данного промыслового объекта от антропогенного воздействия [30].
В связи с сокращением естественных запасов угря и загрязнением водоемов возрастает интерес к его искусственному выращиванию. Культивированием этого вида рыбы в настоящее время занимаются в Азии и ряде европейских стран. Товарное угреводство -доходная статья в рыбном хозяйстве, его рентабельность признана во многих странах. В Калининградской области разработан проект по разведению угря в УЗВ, целью которого является выращивание товарного угря и зарыбление молодью заливов области для поддержания промысловой популяции [3].
Вислинский залив является одним из важнейших внутренних водоемов, в который, угорь заходит естественным путем. На протяжении ряда лет и по настоящее время в рыбопромысловых уловах отмечают особей угря с нарушениями целостности кожных покровов. Подобные патологические изменения могут быть связаны с воздействием условно-патогенной микрофлоры. Исследования по установлению этиологии этих изменений на коже угря не проводились. В связи с этим актуальной является цель настоящей работы: экологический анализ видового состава грамотрицательных бактерий грунтов, воды и европейского угря Вислинского залива, путей проникновения и распространения бактерий в системе «внешняя среда - угорь».
Нами были поставлены следующие задачи:
1) Установить бактериальную обсемененность грунтов, воды и угря по сезонам года и районам Вислинского залива;
2) Исследовать количественный и видовой состав грамотрицательной микрофлоры грунтов, воды и угря по сезонам года;
3) Сравнить видовой состав микрофлоры угря- и среды его обитания* по районам Вислинского залива;
4) Провести анализ путей проникновения и распространения бактерий в организме угря;
5) Выявить степень патогенности микрофлоры для европейского угря Вислинского залива.
Основные положения, выносимые на защиту:
1) Бактериальная обсемененность грунтов, воды и европейского угря определяется сезоном года и районами Вислинского залива;
2) Видовой состав грамотрицательной микрофлоры, доминирующей у угря Вислинского залива, формируется под влиянием микробиоценозов воды и грунта;
3) Условно-патогенные бактерии родов Aeromonas и Pseudomonas могут иметь эпизоотическое значение для угря Вислинского залива.
Научная новизна. Данная работа является первой по комплексному изучению условно-патогенной микрофлоры угря, воды и грунтов Вислинского залива, ее зависимости от некоторых факторов внешней среды и оценке роли этих бактерий для европейского угря Вислинского залива.
Теоретическое и практическое значение работы. Данные по количественным показателям, видовому составу микрофлоры угря, воды и грунтов, патогенным свойствам и антибиотикорезистентности изученных бактерий применимы при культивировании угря в
I I установках с замкнутым, циклом водообеспечения (УЗВ) и описании санитарно-эпизоотической ситуации в заливе. Теоретически значимо установление видового' состава грамотрицательной микрофлоры европейского угря, воды и грунтов Вислинского залива. Результаты работы могут быть использованы при чтении курсов «Ихтиопатология», «Инфекционные и инвазионные болезни рыб» и при подготовке специалистов по направлению 110900.62 - Водные биоресурсы и аквакультура.
Апробация. работы. Основные результаты диссертации были представлены на VIII съезде Гидробиологического общества РАН (Калининград, 2001), Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы патологии, иммунологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов» (Москва, 2003), П международных чтениях, посвященных'памяти и 85-летию со дня рождения С. С. Шульмана «Современные проблемы паразитологии, зоологии и экологии» (Калининград, 2004), научно-практическом международном семинаре «Новые энергосберегающие технологии в зоотехнии и ветеринарии» (Калининград, 2005); IX съезде Гидробиологического общества РАН1 (Тольятти, 2006); VI региональной конференции «Экологические проблемы Калининградской области и Балтийского региона» (Калининград, 2007); Международной научно-практической конференции «Проблемы иммунологии, патологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов - 2» (Борок, 2007).
Декларация личного участия автора. Автором самостоятельно в ' полевых и лабораторных условиях собран, обработан и проанализирован материал по изучению микробиоценоза у1ря, воды и грунтов Вислинского залива. '
Благодарности. Автор выражает признательность своему научному руководителю ; канд. биол. наук, доценту Елене Витальевне Авдеевой. За помощь в обеспечении рыбой выражаю глубокую благодарность A.JL Скобелеву, канд. биол. наук, доценту Е.И. Хрусталеву, главному технологу рыболовецкого колхоза «За Родину» Д.В. Волчковой. Благодарю коллектив Лаборатории ихтиопатологии КГТУ, научных сотрудников Лаборатории лиманов АтлантНИРО Л.В. Рудинскую, Т. А. Белову, Лаборатории гидробиологии АтлантНИРО А.А. Гусева за помощь при отборе проб воды и грунтов.
Заключение Диссертация по теме "Экология", Казимирченко, Оксана Владимировна
выводы
1) Общая бактериальная обсемененность угря, воды и грунтов зависит от сезона года и района Вислинского залива. Обсеменение угря весной происходит как непосредственно из воды, так и при вымывании бактерий из грунтов. Максимальное количество сапрофитной микрофлоры, обсеменяющей угря, воду и грунты выявлено в Эстуарной зоне залива.
2) В микробиоценозе угря и среде его обитания в Вислинском заливе во все сезоны доминировали условно-патогенные бактерии родов Aeromonas и Pseudomonas. С учетом сезонной динамики, грамотрицательная микрофлора грунтов представлена 8-20 видами, относящихся к 6 родам; микрофлора воды - 18-24 видами 7 родов бактерий. В микрофлоре угря обнаружен 31 вид бактерий, принадлежащих к 8 родам. Незначительную долю во все сезоны в микробном пейзаже рыбы, воды и грунтов составляли галофильные вибрионы и бактерии семейства Enterobacteriaceae. В составе грамотрицательных бактерий, обсеменяющих угря и среду его обитания, в сезонном аспекте происходило изменение численности видов бактерий с максимумом их развития летом. На количество видов бактерий в микрофлоре угря, воды и грунтов может оказывать влияние изменение температуры воды в Вислинском заливе.
3) По всем районам исследования в микрофлоре рыбы, воды и грунта постоянно присутствовали условно-патогенные бактерии аэромонадно-псевдомонадного комплекса. Наибольшее количество видов бактерий, обсеменяющих угря, воду и грунты, отмечено в Эстуарной зоне залива с донными иловыми отложениями и наибольшим содержанием взвешенного вещества в воде. Наименьшее число видов микрофлоры угря и среды его обитания приурочено к Центральной зоне залива с влиянием морских вод и низким содержанием взвешенного вещества в воде.
4) Установлено, что весной формирование грамотрицательной микрофлоры кожи угрей зависит от содержания этих же групп бактерий в грунтах и воде. Проникновение во внутреннюю среду угря весной осуществляется с водой и пищей через кишечник и с водой через жаберные капилляры и кровь. Летом среда обитания практически не оказывает влияния на формирование микрофлоры угря. Во внутренних органах рыбы создается собственный комплекс видов бактерий. Обмен флорой происходит только между кишечником, печенью и экссудатом. Осенью доминирует связь между микрофлорой кишечника и грунтов.
5) Патогенное действие грамотрицательных бактерий обусловлено наличием ферментных групп (гемолизины, лецитиназы, протеазы и ДНК-азы) и устойчивостью к ряду антибиотиков. Проявление патологических процессов у европейского угря Вислинского залива летом связано с ферментной активностью доминирующих в его микрофлоре условно-патогенных бактерий родов Aeromonas и Pseudomonas.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Казимирченко, Оксана Владимировна, Калининград
1. Бардач, Дж. Культивирование угрей / Дж. Бардач, Дж. Ритер, У. Макларни // Аквакультура (Разведение и выращивание пресноводных и морских организмов). М.: Пищевая промышленность, 1978.— С. 177-182.
2. Генци, Я: Угорь /Я. Генци, Б. Тахи. М.: Агропромиздат, 1989. - С. 138-141.
3. Стрелков, Ю.А. Концепция охраны здоровья рыб в современной аквакультуре / Ю.А. Стрелков // Проблемы охраны здоровья рыб в аквакультуре: тез. докл. научно-практической конференции, Москва, 21-22 ноября 2000. М., 2000. - С. 16-18.
4. Израэль, Ю.А. Экология и контроль состояния природной среды / Ю.А. Израэль. — М.: Гидрометеоиздат, 1984.-С. 519-529.
5. Патин, С.А. Эколого-токсилогические аспекты аквакультуры / С.А. Патин // Биологические основы аквакультуры в морях европейской части СССР. М.: Наука, 1985.-С. 65-72.
6. Лукьяненко, В.И. Экологические аспекты ихтиотоксикологии / В.И. Лукьяненко. — М.: Агропромиздат, 1987. 239 с.
7. Душкина, Л.А. Новое научное и рыбохозяйственное направление — марикультура / Л.А. Душкина // Биологические основы марикультуры. М.: ВНИРО, 1998. - С. 7-28.
8. Sindermann C.J. Pollution-associated diseases and abnormalities of fish and shellfish: a review // Fish. Bull. 2001. - V. 76. Issue 4. - P. 717-749.
9. Vethaak A.D. Fish disease and marine pollution: a case study of the flounder (Platichthys flesus) in Dutch coastal and estuarine waters. Amsterdam, 1993. - P. 7-33.
10. Богданова, E.A. Паразитофауна и заболевания рыб крупных озер Северо-Запада России в период антропогенного преобразования их экосистем / Е.А. Богданова. — СПб., 1995. — 140 с.
11. Snieszko S.F. The effects of environmental stress on outbreaks of infectious diseases of fishes // J. Fish Biol. 1974. - No б - P. 197-208.
12. Ведемейер, Г.А. Стресс и болезни рыб / Г.А. Ведемейер, Ф.П. Мейер, JI. Смит. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981. - 128 с.
13. Конев, Н.В. Нормальная микрофлора рыб и ее роль в возникновении бактериальных заболеваний, вызванных стрессом / Н.В. Конев // Научные тетради.- СбП: ГосНИОРХ, 1996. Вып. №4.-46 с.
14. Щелкунов, И.С. Болезни гидробионтов в марикультуре и их профилактика / И.С. Щелкунов, А.Е. Гаевская, Л.Н. Юхименко, Л.И. Бычкова // Биологические основы марикультуры. -М.: ВНИРО, 1998. С. 268-279.
15. Ларцева, Л.В. Проблема аэромонадной обсемененности воды и рыбы в дельте Волги / Л.В. Ларцева // Проблемы охраны здоровья рыб в аквакультуре: тез. докл. научно-практической конференции, Москва, 21-22 ноября 2000. М., 2000. — С. 82-83.
16. Ларцева, Л.В. Микрофлора промысловых рыб и рыбной продукции в Волго-Каспийском регионе / Л.В. Ларцева, Я.М. Болдырева // Рыбное хозяйство. 2004. - №3. - С. 48-49.
17. Liebmann Н. Fish as an indicator of water pollution // Bull. Off. int. Epiz. — 1966. No 85 (5-6).-P. 565-569.
18. Ларцева, Л.В. Микробиологический мониторинг при антропогенном загрязнении дельты Волги / Л.В. Ларцева, И.А. Лисицкая, О.В. Обухова // Болезни рыб: сб. науч. тр.- М.: Компания Спутник +, 2004. Вып. 79. - С. 114-120.
19. Обухова, О.В. Бактериоценоз воды и судака (Stizostedion lucioperca) в дельте Волги: Автореф. дисс., М., 2004. -23 с.
20. Краснов, Е.В. Экология Калининградской области/ Е.В. Краснов, А.И. Блажчишин, В.А. Шкицкий. Калининград: Янтарный сказ, 1999. - С. 21-23.
21. Кропинова, Е.Г. Зонирование территории Калининградской области для целей охраны природы / Е.Г. Кропинова // Экологические проблемы Калининградской области: сб. науч. тр. Калининград: Калинингр. ун-т, 1997. - С. 47-54.
22. Богданов, Н.А. Тенденции химического загрязнения и динамика Калининградского залива / Н.А. Богданов, А.А. Воронцов, JI.H. Морозова // Водные ресурсы. 2004. - Т. 31(5).-С. 576-590.
23. Кохненко, С.В. Европейский угорь / С.В. Кохненко. М.: Пищевая промышленность, 1969.-107 с.
24. Klinkhardt М. Less glass eels, reduced stocking, falling catches. Is the European eel on the drink of collapse? // Eel market report. FAO, 2004. - 5 p.
25. Ульянов, А.Г. Угорь: проблемы и возможности / А.Г. Ульянов, И.И. Шкилев // Вопросы рыболовства. 2001. - Т. 2, №1 (5). - С. 182-184.
26. Скурат, Э.К. Болезни угря в Беларуси / Э.К. Скурат, С.М. Дегтярик // Проблемы патологии, иммунологии и охраны здоровья рыб и других гидробионтов: тез. докл. Всероссийской научно-практической конференции, Москва, 16-18 июля 2003. М., 2003. - С. 119-120.
27. Draft European Parliament legislative resolution «Proposal for a Council regulation establishing measures for the recovery of the stock of European Eel» COM (2005)0472 C6-0326/2005 - 2005/0201 (CNS))/ Committee on Fisheries, 27 Jan., 2006. - 11 P.
28. Беренбейм, Д.Я. Балтийское море / Д.Я. Беренбейм, JI.A. Маркова, С.И. Нечай // Калининградская область: Очерки природы. Калининград: Янтарный сказ, 1999. — С. 92-123.
29. Беренбейм, Д.Я. Гидрометеорологическое описание Вислинского залива / Д.Я. Беренбейм // Экологические рыбохозяйственные исследования в Вислинском заливе Балтийского моря. Калининград: АтлантНИИ рыбного хозяйства и океанографии, 1992.-С. 5-14.
30. Дубравин, В.Ф. Придонные течения Калининградского залива / В.Ф. Дубравин, В.Д. Егорихин, Б.В. Чубаренко // Экологические проблемы Калининградской области: сб. науч. тр. Калининград: Калинингр. ун-т, 1997. - С. 90-92.
31. Чечко, В.А. Процессы современного осадкообразования в Вислинском заливе Балтийского моря: Автореф. дисс., Калининград, 2006. -23 с.
32. Чечко, В.А. Анализ пространственно-временной изменчивости взвешенного вещества Калининградского залива Балтийского моря / В.А. Чечко // Водные ресурсы. 2002. - Т. 29, №4. - С. 425-432.
33. Коршенко, А.Н. Качество морских вод по гидрохимическим показателям. Ежегодник 2003. / А.Н. Коршенко, И.Г. Матвейчук, Т.Н. Плотникова, В.П. Лучков. — М.: Гидрометеоиздат, 2005. С. 76-83.
34. Никольский, Г.В. Частная ихтиология. Учебник / Г.В. Никольский. М.: Высшая школа, 1971.-С. 275-279.
35. Промысловые рыбы СССР. Атлас. М., 1949. - 786 с.
36. Кохненко, С.В. Биология и хозяйственное использование угря / С.В. Кохненко // Рыбоводство и рыболовство. 1983. - №5. - С. 25-27.
37. Апполова, Т.А. Об» угре Курского залива / Т.А. Апполова // Запасы и биология промысловых рыб южной части Балтийского моря и его лиманов. Калининград, 1969. -С. 185-191.
38. Апполова, Т.А. Морфо-биологическая характеристика угря Курского и Вислинского заливов / Т.А. Апполова // Сырьевая база курского залива и пути ее рационального использования Калининград, 1971. - Вып. XLVI. - С. 154-171.
39. Кохненко, С.В. Эколого-физиологическая пластичность европейского угря / С.В. Кохненко, В.А. Безденежных, С.Л. Горовая. — Минск: Наука и техника, 1977. — С. 19-38.
40. Хлопников, М.М. Кормовая емкость Вислинского залива для бентосоядных рыб: Автореф. дисс., М., 1990. -24 с.
41. Хлопников, М.М. Пищевые отношения бентосоядных рыб в Вислинском заливе / М.М. Хлопников // Экологические рыбохозяйственные исследования в Вислинском заливе Балтийского моря. Калининград: АтлантНИИ рыбного хозяйства и океанографии, 1992.-С. 172-173.
42. Карасева, Е.М. Рыбные ресурсы Калининградской области / Е.М. Карасева, В.Н. Фельдман, М.М. Хлопников, К.В. Тылик // Природные ресурсы Калининградской области. Калининград: Янтарный сказ, 1999. - С. 129-140.
43. Болезни угрей, культивируемых в Китае // Рыбное хозяйство. Серия: Болезни гидробионтов в аквакультуре. 2000. - Вып. 2. — С. 18-20.
44. Промышленное производство угря / К.Б. Хайновский, Е.И. Хрусталев // Индустриальное рыбоводство: учеб. пособие. — Калининград: изд-во КГТУ, 2004. С. 157-185.
45. Orecka-Grabda Т. A preliminary evaluation of health condition of eel (Anguilla anguilla L.) from the Szczecin Lagoon in 1971-1973 and 1982-1983 // Acta Ichthyologica et Piscatoria. -1993. Vol. XXIII, Fasc. 2.-P. 113-129.
46. Spazier E., Storch V., Braunbeck T. Cytopathology of spleen in eel Anguilla anguilla exposed to a chemical spill in the Rhine river // Dis. Aquat. Org. 1992. - Vol. 14. - P. 1-22.
47. Teles M., Santos M., Pacheco M. Responses of European eel (Anguilla anguilla L.) in two polluted environments: in situ experiments // Ecotoxicology and Environmental safety. -2004. Vol. 58, Issues 3. - P. 373-378.
48. Ribeiro C.A. et al. Bioaccumulation and the effects of organochlorine pesticides, PAH and heavy metals in the Eel (Anguilla anguilla) at the Camargue Nature Reserve, France // Aquat. Toxicol. 2005. - No 74 (1). - P. 53-69.
49. Jensen N.J., Larsen J.L., Christensen N.O. Spring ulcer disease in eel, Anguilla anguilla // Rapp. P: V. Reun. Cons. Perm. Int. Expor. Mer 182,1983 - P. 106-110.
50. Dalsgaard J. Spring ulcer disease in eels // Identif. Leafl. Diseases and Parasites Fish and Shellfish. Int. Counc. Explor. Sea. 1987. - No 39. - P. 1-6.
51. Ларцева, Л.В. Рыбы и гидробионты резервенты грамнегативной неферментирующей микрофлоры. Ее санитарно-эпизоотическая и эпидемиологическая значимость / Л.В. Ларцева. - Рыбное хозяйство. Сер. Аквакультура. Информ. пакет. —1997. — Вып. 1. - С. 1-16.
52. Andersen S.R., Sandaa R.A. Distribution of tetracycline resistance determinants among gram-negative bacteria isolated from polluted and unpolluted marine sediments // Appl. Environ. Microbiology. 1994. - Vol. 60, No 3. - P. 908-912.
53. Goni-Urriza M. et al. Impact of an urban influent on antibiotic resistance of riverine Enterobacteriaceae and Aeromonas spp. // Appl. and Environ. Microbiology. — 2000. Vol. 66, No l.-P. 125-132.
54. Sousa J. Bacterial community associated'with fish andwater from Congonhas river, Sertaneja, Parana, Brazil // Brazilian Archives of Biology and Technology. 2001. - V. 77, No 7. - P. 373-381.
55. Мамонтова, Л.М. Условно-патогенные микроорганизмы и их распространение в водных экосистемах Сибири / Л.М. Мамонтова; Е.Д. Савилов, Ю.А. Рахманин // Гигиена и санитария: Медицина. — 2005. №3. — С. 13-17.
56. Thune R.L., Stanley L.A., Cooper R.K. Pathogenesis of gram-negative bacteriaLinfections in warmwater fish // Annual Review of Fish Diseases. 1993. - V. 3. - P. 37-68.
57. Arkoosh M.R., Casillas E., Clemons E. Effect of pollution on fish diseases: Potential impacts on salmonid populations // J. of Aquatic Animal Health. 1998. - V. 10, No 2. - P.182-190.
58. Красильников, А.П. Микробиологический, словарь-справочник / А.П. Красильников, Т.Р. Романовская: Минск: Асар, 1999. - С. 341-343, 371-374.
59. Поздеев, O.K. Медицинская микробиология / O.K. Поздеев, под ред. В.И. Покровского. М.: ГЕОТАР - МЕД, 2002. - С. 140-149, 265-268.
60. Болезни рыб. Справочник / под ред. B.C. Осетрова. М.: Колос, 1989. - С. 94-96.
61. Actis L.A., Tolmasky М. Е., Crosa J.H. Vibriosis // Fish diseases and disorders. Vol. 3: Viral, BacteriaL and Fungal Infections (eds P. Т. K. Woo, D. W. Bruno). USA: CAB INTERNATIONAL, 1999. - P. 523-557.
62. Ляйман, Э.М. Курс болезней рыб / Э.М. Ляйман. — М.: Высшая школа, 1966. — С. 87-90.
63. Ugur A., Yilmaz F., Sahin N. Microflora on the skin of European eel (Anguilla anguilla L., 1758) sampled from Creek Yuvarlakcay, Turkey // Isr. J. Aquaculture. 2002. - No 54 (2). -P. 89-94.л г
64. Апполова, T.A. Биология и промысел угря Курского и Вислинского заливов Балтийского моря: дисс. .канд. биол. наук. Калининград, 1968. — С. 135-137.
65. Казимирченко, О.В. Роль условно-патогенных бактерий в возникновении патологических изменений у европейского угря (Anguilla anguilla L.) Вислинского залива / О.В. Казимирченко // Рыбное хозяйство. 2006. — №6. - С. 90-91.
66. Авдеева, Е.В. Мониторинг состояния европейского угря Anguilla anguilla L. Вислинского (Калининградского) залива по бактериологическим параметрам / Е.В. Авдеева, О.В. Казимирченко // Фундаментальные исследования. 2005. - № 8. - С. 5051.
67. Ихтиопатология / под ред. Н.А. Головиной, О.Н. Бауера. — М.: Мир, 2003. — С. 147-149.
68. Bullock G.L. Vibriosis in fish // Fish disease leaflet 77. Washington, 1987. - 12 P.
69. Найденова, H.H. Бактериальные болезни рыб, выращиваемые в морской воде / Н.Н Найденова, В.А. Захалева. Севастополь, 1988. - 37 с.
70. Fouz В. et al. Evidence that water transmits the disease caused by the fish pathogen Photobacterium damselae subsp. damselae // J. of Applied Microbilogy. — 2000. No 88. — P.531.535.
71. Amaro C. et al. Isolation of Vibrio vulnificuns serovar E from aquatic habitats in Taiwan // Appl. and Environ. Microbiology. 1999. - Vol. 65, No 3. - P. 1352-1355.
72. Hoi L. et al. Heterogeneity among isolates of Vibrio vulnificuns recovered from eels (Anguilla anguilla) in Denmark // Appl. and Environ. Microbiology. 1998. - Vol. 64, No 12. — P. 4676-4682.
73. Amaro C. et al. Evidence that water transmits Vibrio vulnificus biotype 2 infections to eels // Appl. and Environ. Microbiology. 1995. - Vol. 61, No 3. - P. 1133-1137.
74. Fouz В., Larsen J., Amaro C. Vibrio vulnificus serovar A: an emerging pathogen in European anguilliculture // J. of Fish Diseases. 2006. - Vol. 29, Issue 5. - P. 285.
75. Biosca E.G. et al. Phenotypic and genotypic characterization of Vibrio vulnificus: proposal for the substitution of the subspecific taxon biotype for serovar // Appl. And Environ. Microbiology. 1997. - Vol. 63, No 4. - P. 1460-1466.
76. Marco-Noales E. et al. Transmission to eels, portals of entry, and putative reservoirs of Vibrio vulnificus serovar E (biotype 2) // Appl. and Environ. Microbiology. 2001. - Vol. 67, No 10. -P. 4717-4725.
77. Jores J. et al. Isolation of Vibrio vulnificus and atypical Vibrio from surface water of the Baltic Sea in Germany// Berl. Munch. Tierarztl. Wochenscher., Sept.-Oct., 2006, 116. P. 910.
78. Marco-Noales E., Biosca E.G., Amaro C. Effects of salinity and temperature on long-term survival of the eel pathogen Vibrio vulnificus biotype 2 (Serovar E) // Appl. and Environ. Microbiology. 1999. - Vol. 65, No 3. - P. 1117-1126.
79. Amaro C., Biosca E.G. Vibrio vulnificus biotype 2, pathogenic for eels, is also an opportunistic pathogen for humans // Appl. and Environ. Microbiology. 1996. - Vol. 62, No 4.-P. 1454-1457.
80. Biosca E.G. et al. Presence of'a capsule in Vibrio vulnificus biotype 2 and its relationship to virulence for eels // Infect. Immun. 1993. - Vol. 61, No 5. - P. 1611-1618.
81. Biosca E.G. et al. Siderophore-mediated iron acquisition mechanisms in Vibrio vulnificus biotype 2 // Appl. and Environ. Microbiology. 1996. - Vol. 62, No 3. - P. 928-935.
82. Fouz B. et al. Utilization of hemin and hemoglobin by Vibrio vulnificus biotype 2 // Appl. and Environ. Microbiology. 1996. - Vol. 62, No 8. - P. 2806-2810.
83. Biosca E.G., Amaro C. Toxic and enzymatic activities of Vibrio vulnificus biotype 2 with respect to host specificity // Appl. and Environ. Microbiology. 1996. - Vol. 62, No 7. - P. 2331-2337.
84. Biosca E.G. et al. Effect of low temperature on starvation-survival of the eel pathogen Vibrio vulnificus biotype 2 // Appl. and Environ. Microbiology. 1996. - Vol. 62, No 2. - P. 450455.
85. Alcaide E., Blasco M-D., Esteve C. Occurrence of drug-resistant bacteria in two European eel farms // Appl. and Environ. Microbiology. 2005. - Vol. 71, No 6. - P. 3348-3350.
86. Aoki T. Motile aeromonads (Aeromonas hydrophila) // Fish diseases and disorders. Vol. 3: Viral, Bacterial and Fungal Infections (eds P. Т. K. Woo, D. W. Bruno). USA: CAB INTERNATIONAL, 1999. - P. 427-453.
87. Yavnzcan Y.H. et al. Some blood parameters in the eel (Anguilla anguilla) spontaneously infected with Aeromonas hydrophila // Israel Journal of veterinary medicine. — 2005. Vol. 60 (3). - P. 91-92.
88. Esteve C. et al. Pathogenic Aeromonas hydrophila serogroup 0:14 and 0:81 strains with an S Layer // Appl. and Environ. Microbiology. 2004. - Vol. 70, No 10. - P. 5898-5904.
89. Pedersen K., Garsia J.A., Larsen J.L. Aeromonas salmonicida a potentional pathogen in modern eel (Anguilla anguilla) farming? // Bull. Eur. Ass. Fish Pathology. 1999. - 19 (3). -P. 127-129.
90. Toshihiro N. et al. The tissue distribution of atypical Aeromonas salmonicida in. artificially infected Japanese eels, Anguilla japonica // Fish Pathol. 1989. - Vol. 24, No 1. - P. 23-28.
91. Daly J.G. Other bacterial pathogens // Fish diseases and disorders. Vol. 3: Viral, Bacterial and Fungal Infections (eds P. Т. K. Woo, D. W. Bruno). USA: CAB INTERNATIONAL, 1999. -P. 577-598.
92. Haenen O.L., Davidse A. First isolation and pathogenicity studies with Pseudomonas anguilliseptica from diseased European eel Anguilla anguilla (L.) in The Netherlands // Aquaculture. -2001. Vol. 196, Issues 1-2. - P. 27-36.
93. Haenen O.L.M., Davidse A. New problems with pseudomonas anguilliseptica in Dutch eel culture // VIIIth International conference «Diseases of fish and shellfish. Abstracts book. -Edinburgh: Heriot-Watt university, 1997. P. 43.
94. Austin B. Fish need doctoring too! // Microbiology today. 2002. - Vol. 27. - P. 171-173.
95. Consuelo E., Esperanza G. Heterotrophic bacterial flora associated with European eel Anguilla anguilla reared in freshwater // Bull. Jap. Soc. Sci. Fish. 1991. - Vol. 37, No 7. — P. 1369-1375.
96. Tiews K. European inland fisheries advisory commission. Federal republic of Germany // National reports of EIFAC member countries for the period Jan. 1984- Dec. 1985. EIFAC Occasional Paper No 16. - 4 p.113114115116117118119120121122123124125126127128
97. Savvidis G.K. Enterobacteriaceae in fresh fishes // Bull. Hell. Vet. Med. Soc. 1990. -No 1, 41.-P. 18-30.
98. Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований: Учебное пособие / под ред. А. С. Лабинской, Л. П. Блинковой, А. С. Ещиной. — М.: Медицина, 2004. 576 с.
99. Антипчук, А.Ф. Микробиологический контроль в прудовых хозяйствах / А.Ф. Антипчук. М.: Пищевая промышленность, 1979. - 145 с.
100. Юхименко, Л.Н. О методике бактериологической диагностики аэромонад, псевдомонад и вибрионов у рыб / Л.Н. Юхименко, В.Ф. Викторова // VH Всесоюзное совещание по паразитам и болезням рыб. Л.: Наука, 1979. - С. 122-123.
101. Определение грамотрицательиых потенциально-патогенных бактерий — возбудителей внутрибольничных инфекций. М., 1984. - 36 с.129130131132133134135136137138139140141142
102. Schleifer K.H., Kloos W.E. Identification schemes // J. Clinical Microbiology. 1975. - No 1. -P. 345-369.
103. Сиволодский, Е.П. Систематика и идентификация энтеробактерий / Е.П. Сиволодский. СПб: НИИ им. Пастера, 1999. - 36 с.
104. Методические указания по определению патогенности аэромонад по степени ДНКазной активности // Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб. — М.: Отдел маркетинга АМБ-агро, 1998. Ч. 1.-С. 150-151.
105. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / Под ред. М.О. Биргера. М.: Медицина, 1982. - 464 с.
106. Рокицкий, П.Ф. Биологическая статистика / П.Ф. Рокицкий. Минск: Высшая школа, 1973.-320 с.
107. Перетрухина, А.Т. Микробиология .сырья и продуктов водного происхождения / А.Т. Перетрухина, И.В. Перетрухина. СПб: ГИОРД, 2005. - 320 с.
108. Тылик, K.B. Рыбы и круглоротые / К.В. Тылик // Калининградская область: очерки природы. — Калининград: Янтар. сказ, 1999. С. 185-188.
109. Аристова, Г.И. Бентос Куршского и Вислинского заливов Балтийского моря и его значение в питании рыб: Автореф. дисс., JL, 1973. 23с.
110. Чубаренко, Б.В. Анализ зон вторичного загрязнения акваторий Калининградского и Куршского заливов / Б.В. Чубаренко // География и природные ресурсы. — 1994. №3. — С. 33-40.
111. Sugita Н. et al. The intestinal microflora of carp Cyprinus carpio, grass carp Ctenopharyngodon idella and tilapia Sarotherodonniloticus // Bull, of the Japanese Soc. of Scien. Fisheries. 1985. - Vol. 51 (8). - P. 1325-1329.
112. Sugita H. et al. Distribution of Aeromonas species in the intestinal tracts of river fish // Appl. and Environ. Microbiology. 1995. - Vol. 61, No 11. -P. 4128-4130.
113. Voveriene G. et al. Hydrocarbon-degrading bacteria in the digestive tract of fish, their abundance, species composition, and activity // Acta Zoologica Lituanica. — 2002. Vol. 12, No 3.-P. 333-340.
114. Лукьяненко, В.И. Иммунобиология рыб. Врожденный иммунитет / В.И. Лукьяненко. — М.:Агропромиздат, 1989.-271 с.
115. Ларцева, Л.В. Судак тест-объект санитарного состояния водоема / Л.В. Ларцева // Паразиты и болезнифыб: сб. науч. тр. - М.: ВНИРО, 2000. - С. 97-99:
116. Niewolak S., Tucholski S. Sanitary and bacteriological evalution of common carp, tench and crucian carp reared in a pond supplied with biologically treated sewage // Archuves of Polish Fisheries. 2000. - Vol. 8, Fasc. 1. - P. 35-48.
117. Zmyslowska I. Bacterial microflora in the contents of Baltic herring (Clupea harengus) intestinal tracts during spawning in the polluted Vistula Lagoon // Bull, of the Sea Fishiries Institute. 2001. - No 3 (154). - P. 83-90.
118. Науменко, E.H. Зоопланктон Вислинского залива / E.H. Науменко. — Калининград: ФГОУ ВПО «КГТУ», 2007. С. 80-102.
119. Лебедева, Н.Е. Слизь кожи рыб индикаторная система их физиологического статуса / Н.Е. Лебедева. - Рыбное хозяйство. Сер. Болезни гидробионтов в аквакультуре. -2001. -Вып. 2.-С. 1-21.
120. Nielsen М.Е., Esteve-Gassent M.D. The eel immune system: present knowledge and the need for research // J. Fish Diseases. 2006. - Vol. 29, No 2. - P. 65-78.
121. Мавзютов, A.P. Факторы патогенности оппортунистических энтеробактерий и их роль в развитии диареи / А.Р. Мавзютов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2007. - №1. - С. 89-97.
122. Сбойчаков, В.Б. Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований / В.Б. Сбойчаков. СПб: СпецЛит, 2007. - С. 168177, 516-524.
123. Колычев, Н.М. Ветеринарная микробиология и иммунология / Н.М. Колычев, Р.Г. Госманов. М.: КолосС, 2006. - С. 116-130.
124. Юхименко, Л.Н. Биологические свойства аэромонад, их изменчивость и влияние на развитие инфекционного процесса / Л.Н. Юхименко, Н.В. Гусева // Паразиты и болезни рыб: сб. науч. тр. -М.: ВНИРО, 2000. С. 152-156.
125. Юхименко, Л.Н. Биологические свойства аэромонад и их роль в патологии рыб / Л.Н. Юхименко, Г.С. Койдан, Л.И. Бычкова, Л.П. Смирнов. Рыбное хозяйство. Сер. Болезни гидробионтов в аквакультуре. - 2001. - вып. 1. - С. 1-10.
126. Vethaak A.D. et al. Skin and liver diseases induced in flounder (Platichthys flesus) after long-term exposure to contaminated sediments in large-scale mesocosms // Environmental Health Perspectives. 1996. - Vol. 104, No 11. - P. 1218-1229.
127. Крылов, O.H. Бактериальная флора рыб p. Камы и Камского водохранилища при краснухоподобном заболевании / О.Н. Крылов // Инфекционные болезни рыб и борьба с ними. Известия ГосНИОРХ. Л., 1969. - Т. 69. - С. 138-165.
128. Saeed М.О., Alamoudi М.М., Al-Harbi А.Н. A Pseudomonas associated with disease in cultured rabbitfish Siganus rivularus in the Red Sea // Diseases of Aquatic organisms. 1987. -Vol. 3.-P. 177-180.
129. Esteve C. et al. Virulence of Aeromonas hydrophila and some other bacteria isolated from European eels Anguilla anguilla reared in fresh water // Diseases of aquatic organisms. -1993. Vol. 16.-P. 15-20.
130. Rahman M. et al. Identification and characterization of pathogenic Aeromonas veronii biovar sobria associated with epizootic ulcerative syndrome in fish in Bangladesh // Appl. and Environ. Microbiol. 2002. - Vol. 68, No 2. - P. 650-655.
131. Cipriano R.C. Aeromonas hydrophila and motile aeromonad septicemias of fish // Fish diseases leaflet 68. USA, 2001. - 25 p.
132. Егоров, H.C. Основы учения об антибиотиках / Н.С. Егоров. М.: Высшая школа, 1986. -448 с.
133. Spanggaard В. et al. Antibiotic resistance in bacteria isolated from three freshwater fish farms and an unpolluted stream in Denmark // Aquaculture. 1993. - Vol. 115, Issues 3-4. - P. 195207.
-
Казимирченко, Оксана Владимировна
-
кандидата биологических наук
-
Калининград, 2008
-
ВАК 03.00.16
- Эколого-фаунистический анализ паразитофауны рыб Вислинского залива, рек Преголи и Прохладной
- Характеристика рыболовства и управление рыбными ресурсами Вислинского залива
- Функционирование планктона и бентоса Куршского и Вислинского заливов Балтийского моря в связи с их экологическими различиями
- Влияние экологических факторов на онтогенез и распределение мизид Neomysis integer Leach, 1815 (Crustacea: Mysidacea) Вислинского залива Балтийского моря
- Процессы современного осадкообразования в Вислинском заливе Балтийского моря
