Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экофизиологические и молекулярно-генетические свойства микроскопических грибов представителей группы Aspergillus versicolor, выделенных из разных местообитаний

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Экофизиологические и молекулярно-генетические свойства микроскопических грибов представителей группы Aspergillus versicolor, выделенных из разных местообитаний"

На правах рукописи

Фомичева Галина Михайловна

ЭКОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ И МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ГРИБОВ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ГРУППЫ ASPERGILLUS VERSICOLOR, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ РАЗНЫХ

МЕСТООБИТАНИЙ

Специальность 03 00 07 — микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

□ОЭОБВ23В

Москва 2007

003066236

Работа выполнена на кафедре биологии почв факультета почвоведения Московского государственного университета им М В Ломоносова

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущее учреждение:

доктор биологических наук ОЕ Марфенина

доктор биологических наук ИИ Сидорова

кандидат биологических наук ГА Кочкина

Институт физико-химических и биологических проблем почвоведения РАН

Защита диссертации состоится 16 октября 2007 года в 15 часов 30 минут в аудитории 199 на заседании Диссертационного совета К 501,001 05 при МГУ им МВ Ломоносова, 119992, Россия, Москва, ГСП-2, Ленинские горы, МГУ имени М В Ломоносова, факультет почвоведения, Ученый совет

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке факультета почвоведения МГУ

Автореферат разослан « 14 » сентября 2007г

Приглашаем Вас принять участие в обсуждении диссертации на заседании Диссертационного совета Отзывы на автореферат в двух экземплярах просим направлять по адресу 119992, Россия, Москва, ГСП-2, Ленинские горы, МГУ имени М В Ломоносова, факультета почвоведения Ученый совет

Ученый секретарь Диссертационного совета,

доктор биологических наук профессор ГМ Зенова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Микроскопические грибы рода Aspergillus Mich, широко распространены в наземных экосистемах, но преимущественно являются типичными обитателями южных почв (Domsch et al., 1993) В результате антропогенных изменений в современной биосфере грибы рода Aspergillus приобретают более широкое распространение в почвах северных и умеренных широт, в первую очередь, в городских экосистемах, рекреационных территориях, агроценозах (Марфенина, 2005) В последние десятилетия установлено, что многим видам рода Aspergillus принадлежит важная роль в заболеваниях человека, тк они могут быть аллергенами, возбудителями микозов, а также способны образовывать микотоксины Представители рода Aspergillus не являются облигатными патогенами человека и животных, а проявляют свойства оппортунистов, те могут развиваться во внешней среде как сапротрофы, но одновременно обладают способностью вызывать вторичные микозы

Для прогноза развития и предотвращения негативных эффектов от распространения грибов рода Aspergillus в окружающей среде важно знать особенности их роста и репродукции в разных экологических условиях Однако специфика прохождения их жизненных циклов в разных средах обитания, в первую очередь в почвах, условия спорообразования, исследованы явно недостаточно и для небольшого числа видов (Иванушкина, 1984; Попова, 1990) Безусловный интерес представляют и сведения о варьировании различных свойств (экологических, физиологических, молекулярно-генетических) штаммов видов микроскопических грибов, выделенных из различных местообитаний, в том числе из клинического материала

Среди практически неисследованных с этих позиций широко распространенные в окружающей среде и известные как опасные для здоровья человека виды группы Aspergillus versicolor (Raper, Fennell, 1965), относимые по современной классификации (Samson, 1993) к роду Aspergillus, подроду Nidulantes, секции Versicolores - A versicolor (Vuill.) Tiraboschi и A sydown (Banner & Sar-tory) Thorn & Church

Цель работы

Изучение и сравнительный анализ экофизиологических и молекулярно-генетических свойств микроскопических грибов представителей группы Aspergillus versicolor, выделенных из разных местообитаний

Задачи исследования

1 Определение влияния температуры на рост и спорообразование штаммов видов A versicolor, A sydown, выделенных из разных природных местообитаний и клинического материала

2 Выяснение влияния влажности среды на рост и спорообразование штаммов видов A versicolor, A sydown

4 Определение молекулярно-генетических свойств и их отличий у штаммов видов A versicolor, A sydown, выделенных из разных природных местообитаний и клинического материала

Научная новизна

Описаны экологические условия роста и спороношения двух широко распространенных и экотоксикологически значимых микромицетов A versicolor, A sydown Впервые показаны отличия этих двух близких видов по экологическим свойствам - температурным оптимумам и интервалам роста, выявлено, что вид A sydown является более термотолерантным Впервые, на примере А sydown установлены отличия сапротрофных и клинических штаммов грибов рода Aspergillus по экофизиологическим свойствам Исследованные клинические штаммы были способны активно расти в более широком интервале температур при пониженной влажности по сравнению с сапротрофными

Получены данные о молекулярно-генетических свойствах (последовательности участков ITS 1-5 8S-ITS2, D1/D2 28S рДНК) штаммов видов A versicolor и A sydown, выделенных из разных местообитаний Выявлен уровень внутривидовой и межвидовой молекулярно-генетической гетерогенности исследованных видов

Практическая значимость

Получены новые экологические и молекулярно-генетические данные, важные для идентификации видов A versicolor и A sydowu

Международные базы генетических данных GenBank/EMBL/DDJB пополнены полученными последовательностями локусов рДНК для исследованных микроскопических грибов Дня вида A versicolor полученные данные составили 40% всех имеющихся в международных банках генетических данных (GenBank) последовательностей для участков ITS1-5 8S-ITS2 этого вида и 50% на участке D1/D2 28S рДНК, для A sydowu 30% и 40% соответственно

Показано, что вид A sydowu обладает большим патогенным потенциалом (способность роста при 37°С), чем A versicolor, что необходимо учитывать при оценке присутствия опасных микроскопических грибов в окружающей среде Результаты работы используются в курсе лекции «Почвенная микология»

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 13 работ, из них в реферируемых журналах - 2.

Апробация работы

Материалы диссертации изложены на V, VII, VIII, IX Научно-практических конференциях по медицинской микологии (Санкт-Петербург, 2002, 2004, 2005, 2006), XIV Конгрессе европейских микологов (Украина, Ялта, 2003), Юбилейной конференции посвященной 85-летию кафедры микологии и альгологии МГУ им М В Ломоносова (Москва, 2004), II, III, IV, V Всероссийских конгрессах по медицинской микологии (Москва, 2004, 2005, 2006, 2007)

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов, результатов и их обсуждения, выводов и списка цитируемых литературных источников, приложения Работа изложена на 147 страницах текста,

иллюстрирована 31 рисунком, включает 9 таблиц Список литературы состоит из 232 источников, в том числе 197 на иностранных языках

Автор выражает искреннюю признательность научному руководителю д б н О Е Марфениной за неоценимую помощь и поддержку на всех этапах работы, вне ГНЦ РАМН к б н О В Василенко, который принимал участие в руководстве при выполнении молекулярно-генетических анализов, за полученные знания, практические навыки и ценные научные консультации в этой области, к б н А Е Ивановой, д б н И И Судницыну, д б н И Ю Чернову, к б н A M Юркову, к б н M В Горленко, а так же всему коллективу кафедры биологии почв МГУ за поддержку и ценные советы

Автор выражает благодарность н с кафедры микологии и альгологии МГУ к б н AB Александровой, с н с ВКМ РАН к б н НЕ Иванушкиной, с н с МНПЦБТ к б н А Б Кулько, сотруднику РКПГ к б н Т С Богомоловой за предоставление штаммов, использованных в работе

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты и методы исследования

В работе были использованы 11 штаммов вида A versicolor и 8 штаммов A sydowii Большинство сапротрофных штаммов были выделены нами из различных типов почв, другие, сапротрофные и клинические, были получены из российских и зарубежных коллекций (табл 1) Культуральные и морфологические свойства исследованных штаммов были описаны в соответствии со стандартными рекомендациями (Raper, Fennel 1965; Klich, Pitt, 1992, )

В качестве показателя интенсивности роста штаммов определялась радиальная скорость роста колонии Kr=Ar/At (мм/сут) Диаметр колонии измерялся в двух перпендикулярных направлениях в течение 10 суток

Для изучения спорообразования у исследованных штаммов в разных условиях культивирования производили посев 1 мл споровой суспензии (концентрация спор 1*106 спор/мл) на твердую среду Чапека в плоскодонные

Табл. 1.

Штаммы A, versicolor и A sydowii, использованные в работе.

В номерах штаммов, полученных из коллекций префиксы означают название коллекции ВКМ—Всероссийская коллекция микроорганизмов, Москва, РКПГ— Российская коллекция патогенных грибов НИИ медицинской микологии ГОУ ДПО СПбМАПО, Санкт-Петербург, NRRL—National Center for Agricultura] Utilization Research, Agricultural Research Service Culture Collection, USDA Peona, Illinois, USA

Вид Номер штамма Рабочий номер Выделен из: Географическое положение Коды доступа в GenBank

20 1 E43 Выщелоченный чернозем Воронежская область AJ937749

Е60 E60 Городская почва (урбанозем) г Ростов-на-Дону AJ937750

Е61 E61 Погребенная почва древнего города, 2,2 тыс лет AJ937751

o u ВКМ FW-681 E75 Многолетнемерзлые грунты, возраст - 100 тыс лет Колымская низменность, устье р Чукочья AJ937752

§ AI E76 AJ937753

A2 E77 Торф, возраст - 7 тыс лет о Шемья, Алеутские о-ва, США AJ937754

A3 E78 AJ937755

E79 E79 Бурая полупустынная солонцеватая почва Астраханская область AM883Í55

E80 E80 Аллювиально-дерновая почва, погребенный палеогуму- Смоленская область, археологический комплекс АМ883156

E99 E99 совый горизонт, возраст -1,2 тыс лет Гнездово

NRRL 238 (Type strain) E87 Нет данных Нет данных AF454143 AF453926

FCO 14 C14 Клинический изолят, легкие человека Москва, Гематологический Научный Центр РАМН AI937748

s BKMF-441 E84 Дерново-подзолистая почва Московская область АМ883157

1 BKMF-968 E85 Вода Черное море AM8831S8

BKMF-2488 E86 Лед Антарктика АМ883159

NRRL 254 (Type strain) C93 Клинический изолят Вейкросс, Джорджия, США АМ883160

FC095 C9S Клинический изолят, БАЛ Московский городской научно-практический центр борьбы с туберку- АМ883161 АМ883162

FC096 C96 Клинический изолят, БАЛ АМ883163

РКПГ 1241/797 ClOO Клинический изолят, слуховой канал Санкт-Петербург АМ883154

колбы После 14 суток инкубации споры смывали 50 мл воды с 0 05% Tween80 и подсчитывали их количество в камере Горяева

Скорости роста колоний исследовали при различных значениях температуры 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 37, 40, 42°С, и влажности 0,99, 0,95, 0,90, 0,85, 0,80 а„ (что соответствует давлению влаги -1,4, -7,0, -14,4, -22,3, -30,6 МПа) Интенсивность спороношения исследовали при тех же значениях влажности при температурах 15, 20, 25, 30°С Для создания заданных условии активности воды использовали среду Чапека с добавлением глицерина (Pitt, Hocking, 1977)

Статистическую обработку данных проводили с использованием пакетов Microsoft Excel 2002 (Microsoft Office XP) and Statistica 6 0 (StatSoft, Inc, 19842001), в качестве алгоритма кластеризации использовали метод попарного вычисления расстояния арифметическим средним (UPGMA)

Для характеристики молекулярно-генетических свойств исследованных штаммов анализировали локусы ITS1, ITS2, и 5 8S, а так же D1/D2 регионы 28S рибосомальной ДНК, которые являются основными объектами молекуляр-но-филогенетического анализа на видовом уровне ПЦР проводили с прайме-рами ITS1F (Gardes, Bruns, 1993) NL4 (O'Donnell, 1993) Секвенирование осуществляли с праймерами ITS3, ITS4 (White et al, 1990), ITS1F, NL4

Выделение ДНК, ПЦР и секвенирование производили согласно описанной стандартной процедуре (Фомичева и др , 2006) Анализ полученных последовательностей и сборку общих контигов проводили с использованием программы Chromas 2 3 Кладистический анализ проводили методом ближайших соседей (neighbor-joming), доверительные значения для узлов вычисляли бутстрап-пинг-анализом с количеством повторов 1000 при помощи программы ClustalX 1 83 Для визуализации кладограмм использовали программу TreeView 16 6В качестве внешней группы при построении кладограмм использовали последовательность локусов рДНК Emericella mdulans (штамм FE064 (Е64), код доступа в GenBank AJ937756 1) Поиск и ранжирование гомологичных нуклеотид-ных последовательностей в международных базах данных (GenBank/EMBL/

б

DDJB, 2006) проводили в программе BLAST (NCBI, 2007)

Работа с клиническим штаммами и молекулярно-генетический анализ проводились на базе Гематологического Научного Центра РАМН

Результаты и обсуждение Исследования штаммов вида Aspergillus versicolor

Культурально-морфологические признаки (окраска колоний, наличие растворимых пигментов, характер поверхности, размер и форма конидиеносца, апикального расширения, стеригм, конидий) исследованных штаммов A versicolor соответствовали характерным для данного вида и варьировали в описанных пределах (Билай, Коваль, 1998, Raper, Fennel 1965, Klich, Pitt, 1992)

Экологические условия роста. При определении радиальной скорости роста штаммов A versicolor при различных сочетаниях температуры и влажности было установлено, что все исследованные штаммы, выделенные из разных местообитаний, имеют температурный оптимум роста 25-27°С (рис 1 А, Б) Температурные оптимумы роста у штаммов, выделенных из разных географических регионов не отличались Минимальная температура, при которой был возможен рост 5°С, что наблюдалось только для одного штамма (штамм Е78 из торфа Алеутских островов), при 10°С отмечалось развитие всех исследованных штаммов Верхний температурный предел роста A versicolor составил 39°С, однако уже около трети исследованных штаммов не развивалось при 37°С

В целом все исследованные штаммы показали сходные реакции на изменение температуры культивирования, однако можно отметить некоторые особенности отдельных штаммов по отношению к температурному фактору Наиболее устойчивыми к повышению температуры были штаммы Е87, Е99 — они были способны к росту при 39°С и сравнительно активно развивались при 37°С Для штамма Е87 (типовой штамм A versicolor) было характерно некоторое смещение кривых роста в сторону повышенных температур, хотя оптимум его роста так же отмечался при 25°С Наиболее чувствительными к неблагоприятным температурам были штаммы из черноземных почв (Е43, Е60,

М 15 20

30 35 40 5 Температура, °С

15 16 20 25 30 Й АО

Кг. mm/cvt I_|0 _¡0,25 I_|0.50 ¿30,75__11 ГЮ МИ 2й §.1г!1.50 —1,75 ЯШ?..00

Рис. I. Л. Радиальные скорости роста йсслсдовациых штаммов A. versicolor при равных температурах культи вироааШЙ И активностях воды и среде.

Е61). при 10°С и 35"С их рост существенно замедлялся, а при 7°С и 37°С развитие КОЛОНИЙ не наблюдалось.

По отношению к влажности среды исследованные штаммы можно разделить на 2 группы. I группа: • г.там мы Е43. ЕбО, Е61. Е79, выделенные из южных почв с засушлилым режимами увлажнения, штамм Е75 из многолетнемерчлых

к

Е76 Е77

OSO ----

5 10 (5 20 25 30 35 ¿0

Температура, "С

Рис. 1. Б. Радиальные скорости pocja исследованных штаммов A. versicolor при разных температурам культивирования и активностях воды я среде,

грунтов н штамм JI80 из палеогу.чусового горизонта алшовиальн о-дерновой почвы — имели довольно четко выраженные оптимумы роста при активности воды 0.95 (рис. LA).

I! группа (рис. 1. Б) - штаммы, выделенные Hi более влажных местообитаний: из глубоких слоев многолетнего торфа Алеутских островов (F.76, R77, F78). штамм Е99 из палеогумусовогй горизонта часто переувлажняемой пой-

менной почвы, и типовой штамм Е87 имели максимальные скорости роста при более высокой влажности 0,97-0,99 aw Однако при неблагоприятных температурных условиях (10-15°С, 35-37°С) оптимум влажности для штаммов II группы, как и для группы I, составлял 0,95 aw

Разделение штаммов A versicolor на две выраженные группы по отношению к активности воды подтверждается результатами кластерного анализа (рис 2)

Минимальная влажность, при которой был возможен рост исследованных штаммов A versicolor - 0,83-0,85 aw При активности воды 0,80 прорастание спор и развитие колоний не наблюдалось

Штаммы из разных местообитаний отличались по скоростям роста II группа штаммов из влажных местообитаний, по сравнению с группой I имела более высокие скорости роста при оптимальных условиях температуры и влажности Таким образом, ростовые характеристики штаммов A versicolor, выделенных из разных почв и грунтов, в основном, соответствовали экологическим условиям местообитаний

Спорообразование. Так как распространение микроскопических грибов в окружающей среде происходит преимущественно в виде спор (Gorny et al, 2001), для оценки возможности создания пула спор в определенных местообитаниях и/или распространения микромицетов, важно знать экологические условия, способствующие их спороношению Оптимальные условия спороноше-ния также важно знать и с точки зрения здоровья человека, так как чем выше

ю

Е43 Е60 Е61 Е75 Е79 Е80 Е76 Е78 Е77 Е99 Е87

h

100

80 60 40 Сходство, %

20

Рис. 2. Кластерный анализ штаммов A versicolor, основанный на сравнении радиальных скоростей роста при различных сочетаниях температуры и активности воды I -штаммы с оптимумом влажности 0,95, II - штаммы с оптимумом влажности 0,97-0,99

о

\С я \о р

Репродуктивный потенциал, кол-во образованных спор на одну посеянную

I

и Е Кс

I

И

р О

5 §

I

уровень накопления спор в окружающей среде, тем выше вероятность их попадания в организм человека

Для исследованных штаммов A versicolor было показано, что оптимальным для спороношения этого вида является температура 20-25°С (рис 3) Максимальные уровни репродуктивного потенциала при этих температурах для разных штаммов составляют от 60 до 370 вновь образованных спор на одну материнскую Наименьшие уровни спороношения отмечались у штаммов Е75 и Е43, наибольшие у штаммов Е99, Е76, Е79 Четкой связи между местом изоляции штаммов и интенсивностью спороношения не прослеживалось

При повышении температуры до 30°С или понижении до 15°С репродуктивный потенциал штаммов A versicolor резко снижался, что было особенно выражено для штаммов с наибольшим спорообразованием

Оптимальная для образования спор влажность была 0,99 aw, несколько меньшие уровни спороношения наблюдались при aw 0,90 В то время как при влажности, оптимальной для роста мицелия части штаммов (0,95 aw) их репродуктивный потенциал был существенно ниже, чем при 0,9 и 0,99 aw

Таким образом наиболее активный рост и максимальное спорообразование штаммов A versicolor отмечались при разных уровнях активности воды в среде Температурный оптимум спорообразования (20-25°С ) также отличался от температурного оптимума роста (25-27°С)

Молекулярно-генетические свойства. Для исследования различий штаммов на генетическом уровне были проанализированы последовательности участков ITS1, 5 8S, ITS2 и регионы D1/D2 28S рДНК Для сравнительного анализа также использованы последовательности типового штамма Е87, представленные в международном банке генетических данных (AF453926, AF454143 для участков ITS и AF454194 региона D1/D2 28S)

На исследованных участках выявленные нами различия между штаммами A versicolor наблюдались исключительно на локусах ITS1, ITS2, последовательности же более консервативного 5'-конца гена 288-субъединицы рибосом были идентичны

Е9Э Е76 Е78 Е77

Е80

Е75 Е87

Е79

III

E61 E43 E60

E64 E mdulans

Последовательности локусов ITS1-5 8S-ITS2 рДНК штаммов из южных почв Европейской части России (чернозема - Е43, древнего урбанозема - Е61 и современного урбанозема - Е60) полностью идентичны между собой (рис 4) Также сходны последовательности участков ITS штаммов из древнего торфа Алеутских островов (Е76, Е77, Е78) и штамма из погребенной почвы (Е99) Всего на 1 нуклеотид от этих штаммов отличается другой штамм из погребенной почвы (Е80) В целом эта группа штаммов (рис 4) отличается от I группы на 2 нуклеоти-да на локусах ITS1-5 8S-ITS2 (сходство составляет 99,6%)

Последовательности участков ITS1-5 8S-ITS2 штамма из многолетнемерз-лых грунтов (Е75) и типового штамма (Е87) также полностью совпадают (группа III) Штамм из засоленной почвы (Е79) отличается от этих двух штаммов всего на 1 нуклеотид Сходство этой клады с группой I составляет 98 4%, а с группой II - 97 9%

Таким образом, по участкам ITS рДНК для исследованных штаммов А versicolor, были выделены сходные клады, что и по экологическим признакам -первая включает штаммы из южных почв, вторая - из погребенного торфа и из палеогумусового горизонта аллювиально-дерновой почвы

Сравнительный анализ полученных последовательностей участков ITS изученных штаммов A versicolor с последовательностями участков ITS этого вида, представленными в GenBank (рис 5) показал, что часть полученных на-

Рис. 4. Кладограмма, построенная на основе последовательностей ITS1-5 8S-ITS2 рДНК штаммов A versicolor Шкала соответствует 10 нуклеотидным заменам на 1000 нуклеотидных позиций

. Е64 £ nidulans

-AY373882 -AY373881

E80

E99 E76 E78 E77

AY728196 E75

EF125026

DQ093658

E43

E61

E60

DQ426532 DQ865103

E87

DQ426511 AY373883

I-DQ335982

E79

AM158226 AM158229 AM158227

0,01

Рис 5. Кладограмма, построенная на основе последовательностей ITS1-5 8S-ITS2 рДНК штаммов A versicolor Для последовательностей из GenBank представлены коды доступа Шкала соответствует 10 нуклеотидным заменам на 1000 нуклеотидных позиций

ми последовательностей поддерживает клады, образованные последовательностями из банка генетических данных Последовательности участков ITS штаммов из погребенных почв и торфа образует новую самостоятельную кладу Последовательности регионов D1/D2 28S штаммов A versicolor, представленные в GenBank идентичны между собой и совпадают с последовательностями этих участков изученных нами штаммов

Интересно отметить, что идентичные последовательности участков ITS принадлежат штаммам из географически отдаленных регионов Так сходны по данным моле-

кулярно-генетического анализа штаммы A versicolor из современных почв Европейской территории России (Е43, Е60, Е61), Литвы (DQ093658), Испании (DQ865103), из воздуха помещения в Ирландии ( DQ426532)

С другой стороны прослеживается сходство генетических свойств штаммов выделенных из местообитаний со сходными экологическими условиями Гомогенную кладу по участкам ITS составляют штаммы из местообитаний с повышенным содержанием солей из засоленной почвы Астраханской области (Е79) и штаммы из осадочных отложений различных частей Тихого океана (АМ158229, АМ158227, АМ158226) Близок к ним галотолерантный штамм из

солнечных солеварен Пуэрто-Рико ( DQ335982), а также штамм Е75 из много-летнемерзлых морских отложений

В отдельную группу входят штаммы из погребенных почв и торфов штаммы из торфа Алеутских островов и погребенной почвы Смоленской области (Е76, Е77, Е78, Е80, Е99)

Таким образом, штаммы, выделенные из определенного типа местообитаний (различных современных почв, погребенных почв возрастом несколько тысяч лет, засоленных субстратов), были генетически сходны между собой

Исследования штаммов вида Aspergillus sydowh

При исследовании второго вида из группы A versicolor - A sydown было установлено, что при высоком сходстве культурально-морфологических признаков, он отличается от вида A versicolor по своим экологическим характеристикам Культуральные признаки этих видов — окраска колоний, растворимых пигментов, характер поверхности — очень близки, и указываемые в определителях различия заключаются лишь, как правило, в налили серо-синих оттен-

ÎÇ-

ков в окраске колоний A sydown и отсутствии таковых -у A versicolor (Râper, Fennel 1965, Klich, Pitt, 1992) Морфологические характеристики также сходны — близки формы и характер поверхностей конидий и конидиогенных структур, а их размеры конидиогенных структур в перекрывающихся интервалах

Культурально-морфологические признаки исследованных нами штаммов A sydown варьировали в пределах, описанных для данного вида (Билай, Ковачь, 1998, Raper, Fennel 1965, Klich, Pitt, 1992, de Hoog et al, 2000)

Экологические условия роста. Температурный интервал, при котором был возможен рост исследованных штаммов A sydown, составлял 7°С - 41°С Максимальные скорости роста штаммов достигались при 27-30°С (рис 6) В отличие от штаммов A versicolor все исследованные штаммы A sydown росли при 37°С Рост при 40°С наблюдался для 3 штаммов из 8 исследованных

Минимальный уровень влажности, при котором было возможно развитие колоний A sydown составлял 0,83-0,85 aw Максимальные скорости роста штаммов отмечались при 0,97-0,99 aw

5 10 15 20 25 30 &5 40 ' в 10 15 20 25 33 35 ¿0

Температура, "С

Кг, мм/сут . I ¡0 ¡0.25 П0,50 ЕЗВ-75 (ЦДт.СЮ Ш"! .25 И1.75 И|2.00

Г'ис. 6. Радиальная скорость роста штаммов Л. $у(1о\\'п в исследованных интервалах Темпершуры и активности воды. Г: 84, Е86. Н86—сапротрофные штаммы; С14, С95, С'96, С100. С93 клинические штаммы.

Е84 1 Е85

L E86

ctoo

С14 C95

С9б

C93

100 80 60 40 20 О

Сходство, %

Сопоставление экологических свойств сапротрофных и клинических штаммов. Одной из актуальных проблем современной микологии является определение отличий свойств сапротрофных и клинических штаммов одних и тех же видов грибов Нами впервые был установлен ряд различий экофизиологических свойств сапротрофных и клинических штаммов грибов рода Aspergillus на приме-

Рис. 7. Кластерный анализ штаммов А ре вида д Хус/смп У клинических яуйстп, основанный на сравнении

радиальных скоростей роста при штаммов, имевших обычно меньшие

пониженной влажности), по сравнению с сапротрофными Для сапротрофных штаммов при понижении уровня активности воды до 0,90-0,85 а^ интервал температур, благоприятных для роста, был более узким (30±2°С), в то время как клинические штаммы при такой влажности сохраняли способность к активному росту в широком интервале температур (25-35°С)

Кластерный анализ на основе Кг для исследованных штаммов А хуЛслми в разных условиях температуры и влажности также выделяет сапротрофные штаммы в отдельную кладу (рис 7)

Спорообразование. Для исследованных штаммов А яуйоч/и не было отмечено общих оптимальных условий влажности и температуры для наибольшего спороношения Высокий репродуктивный потенциал отмечался у разных штаммов в интервале 20-30°С и активности воды 0,85-0,99 а„

При сравнении спорообразования у исследованных клинических и сапротрофных штаммов А ъуЖяуи, для клинических штаммов (С 14, С95, С96, С93)

различных сочетаниях температуры и активности воды I - группа сапротрофных штаммов

скорости роста (рис 6), проявилась способность лучше развиваться в более неблагоприятных условиях (при

—C14 »»« -C83 ~-*~~С9б - * "С9в а»

Ряд 1

Ряд 2 —Е84 —*—Е85 ♦ Е86

Рис 8. Репродуктивный потенциал штаммов A sydowu при температуре 25 °С Ряд 1 - клинически е штаммы, ряд 2 - сапротрофные штаммы

был выявлен более высокий уровень репродукции при прочих равных условиях (рис 8) Подобное явление представляется важным при оценке возможности накопления и распространения в окружающей среде грибов потенциально опасных для человека

Молекулярно-генетические свойства. Для исследования молекулярно-генетических свойств нами были секвенированы последовательности участков ITS и Dl/Dl 28S рДНК изучаемых штаммов A sydowu

Сравнение полученных нуклеотидных последовательностей участков ITS1-5 8S-ITS2 показало, что последовательности этих генов у штаммов Е85, Е86, С96 идентичны между собой Так же полностью совпадают между собой последовательности этих участков у штаммов С14, Е84, С95, С93, С100 и отличаются на 3 нуклеотида от последовательностей первой группы

В результате сравнения прочитанных нами'ITS штаммов A sydowu с последовательностями, представленными для этого вида в GenBank построена кладограмма (рис 9), на которой видно, что штаммы A sydowu разделяются на две основные гомогенные клады Последовательности исследованных нами

штаммов Е85, Е86, С96 полностью совпадают с большинством последовательностей, представленных в GenBank для этого вида (12 из 16, дублированные последовательности для одного и того же штамма не рассматривались, так же исключены явно ошибочные последовательности). Таким образом, эти штаммы образуют центральную по количеству объектов кладу—группа I (рис 9)

Нуклеотидные последовательности участков ITS штаммов С14, Е84, С95, С93, С100 идентичны между собой и совпадают с последовательностью из GenBank (AY373869) - группа II (рис 9) Таким образом полученные нами данные подтверждают существование этой клады, которая отличается на 4 нуклео-

Е64 £ rttdulans тида от группы I В международном банке генетических

AY373869 Е84 С93 С95 С14 С100 AY373868 АМ176660 АВ267812 Е86 Е85 С96

AJ312219 AJ312220 AM 176727 АМ176661 DQ401544 DQ401552 DQ401536 DQ411552 AJ312225

II

- DQ401546

-AJ312222 -DQ335981

0.01

Рис. 9. Кладограмма, построенная на основе последовательностей 1Т81-5 88-1Т82 рДНК штаммов А ¡.уйоут Для последовательностей из вепВапк представлены коды доступа Шкала соответствует 10 нуклеотидным заменам на 1000 нуклеотидных позиций

данных также представлено несколько последовательностей участков ITS A sydown, которые не попадают в эти две клады и пока представляют самостоятельные монообъектные клады

При этом важно отметить, что ни клинические, ни сапро-трофные штаммы, отличающиеся по своим экофизиологи-ческим свойствам, не составляют единой клады, а образуют смешанные группы по изученным молекулярно-генети-ческим признакам

Сопоставление последовательностей участка D1/D2 гена 288-субъединицы рибосом также показало наличие двух

групп штаммов По этим участкам исследованные нами штаммы разделяются на те же клады, что и по участкам ITS Отличие между кладами составил 1 нуклеотид, что на данном участке расценивается как весьма значительное (Hinnkson et al ,2005) Таким образом A sydowu можно рассматривать как генетически гетерогенный вид

Сравнение свойств видов A. versicolor и A. sydowii

В результате исследования и сопоставления свойств штаммов A versicolor и A sydowu установлено, что эти два близких и морфологически трудно отличимых вида различаются по экологическим свойствам Температурный оптимум роста штаммов A versicolor составляет 25-27°С, в то время как для A sydowu он составляет 37-30°С

Способность к росту при температуре человеческого тела (37°С) иногда рассматривают как «патогенный потенциал» (Teixeira et al., 2005), те необходимое условие для развития штамма как патогена теплокровных животных и человека Для штаммов вида A sydowu нами показана способность к активному росту при 37°С, в то время как штаммы A versicolor при этой температуре

1 5 1 0 -

н о 5 2

05 -

00*08

Рис. 10. Радиальные скорости роста при 37°С видов А versicolor (п=11) и A sydowu (п=8), среднее для исследованных штаммов

A versicolor

A sydowu

Е43-Е60-Е61 -Е75-Е79-Е80-Е76-Е78-Е77-Е99-. Е87 " С14 С95 С96 Е84-Е85-Е86 С100 . С93

100

20

80 60 40 Сходство, %

Рис 11. Кластерный анализ штаммов A versicolor и A sydowu, основанный на сравнении радиальных скоростей роста при различных сочетаниях температуры и активности воды

растут плохо или не развиваются вообще (рис 10) Таким образом, можно предположить, что вид A sydowu может обладать большим патогенным потенциалом чем A versicolor Следует отметить, что все проанализированные нами клинические штаммы, выделенные в России (табл 1), по молекулярно-генетическим свойствам были идентифицированы как A sydowu

В целом эти виды занимают несколько отличающиеся экологические ниши по отношению к температуре и влажности, что подтверждает кладограмма (рис 11), на которой четко прослеживается разделение штаммов по радиальным скоростям роста на две группы, соответствующие отдельным видам

Уровни спорообразования исследованных видов A versicolor и A sydowu в условиях эксперимента были сопоставимы

Получены новые данные о молекулярно-генетических различиях видов А versicolor и A sydowu По регионам D1/D2 28S рДНК эти виды различаются на

Е64Е nidulans

AF454180

AF454179

AF454181

AF454182

AF454178

AF454177

AF433102

AF433065

E85

E86

C96

AF433066

C14

C93

E84

C95

E75 E80 E78 E79 E60 E76 E43 E77 E87 E61

AF433062 AF433064 AF433105 AF433108 AF454195 AF454194 AF454193 AF454196 AF433092 AF433059

0 01

A sydowii

A versicolor

Рис. 12. Кладограмма, построенная на основе последовательностей D1/D2 28S рДНК штаммов A versicolor и A sydowii Для последовательностей из GenBank представлены коды доступа Шкала соответствует 10 нуклеотидным заменам на 1000 нуклеотидных позиций

4-5 нуклеотидов, сходство составляет 99,0-99,2% (рис 12) Штаммы вида А versicolor по этим участкам образуют гомогенную группу, в то время как штаммы A sydowii распадаются на две клады По регионам ITS1-5 8S-ITS2 сходство двух исследованных видов составляет 97,7%-98,6%

Таким образом виды A versicolor и A sydowii отчетливо различаются по экофизиологическим и молекулярно-генетическим свойствам

выводы

1 Показано, что близкие по культурально-морфологическим свойствам виды A versicolor и A sydown отличаются по экофизиологическим свойствам Штаммы A sydowu имеют наибольшие скорости роста при более высокой температуре (30°С), чем A versicolor (25°С) и способны к активному росту при 37°С, т.е. обладают большим патогенным потенциалом

2 У исследованных штаммов A versicolor и A sydown не установлено температурной адаптации к условиям местообитания Для штаммов одного вида выделенных в разных климатических зонах (арктическая — степная зона для A versicolor, Антарктика — субтропики, организм человека для A sydowu) показан один температурный оптимум роста

3 В изученном интервале активности воды (0,80-0,99aw) показатели роста са-протрофных штаммов A versicolor коррелировали с условиями влажности местообитания штаммов Штаммы, выделенные из более влажных местообитаний имели оптимумы роста при более высокой влажности по сравнению со штаммами из южных и засушливых почв

4. По молекулярно-генетическим свойствам (участки ITS рДНК) штаммы А versicolor, выделенные из определенного типа местообитаний (разнообразных современных почв, погребенных почв возрастом несколько тысяч лет, засоленных местообитаний) были сходны между собой

5 Установлены отличия сапротрофных и клинических штаммов A sydowu, которые выражались в более низких скоростях роста у клинических штаммов при исследованной температуре и влажности, но более высоких уровнях спорообразования, чем у сапротрофных штаммов При этом по молекулярно-генетическим свойствам (ITS, D1/D2 28S рДНК) сапротрофные и клинические штаммы образуют смешанные группы

6 Подтверждено, что по молекулярно-генетическим свойствам (последовательностям участков D1/D2 28S рДНК) вид A versicolor пред-

ставляет гомогенную группу, в то время как вид A sydowu - гетерогенен Исследованные штаммы A sydowu по данному участку разделяются на две клады

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Marfenma О Е., Ivanova А Е, Kislova Е Е, Fomicheva G М What do we know about fungi of ancient cultural layers9 / XIV СЕМ Abstracts XIV Congress of European Mycologists. Katsiveh, Yalta, Crimea, Ukraine 22-27 September 2003 P 49-50 2. Marfenma О E, Ivanova AE, Gorbatovskaja EV, Fomicheva G M Prospects for mycological indication of ancient culture layers // Botamca Lithuamca 2003 Vol 9 N 2 P 121-126 3 Фомичева ГМ Сравнительные молекулярно-морфологические исследования штаммов вида Aspergillus versicolor / Микология и альгология - 2004 Материалы юбилейной конференции посвященной 85-летию кафедры микологии и альгологии МГУ им MB Ломоносова - М «Прометей» МПГУ, 2004 С 141-142 4. Василенко О В., Фомичева ГМ, Марфенина О Е Сравнительные молекулярно-морфологические исследования штаммов вида Aspergillus versicolor /Успехи медицинской микологии ТЗ. Материалы второго Всероссийского конгресса по медицинской микологии М Национальная Академия Микологии, 2004 С 11-12 5 Марфенина ОЕ, Василенко ОВ, Фомичева ГМ Сравнение эколого-трофических свойств патогенного и сапротрофных штаммов Aspergillus versicolor И Проблемы медицинской микологии 2004 Т 6 №2 С 98 6. Марфенина О Е., Фомичева ГМ, Кулько А Б Экологические условия развития потенциально патогенных мицелиалвных грибов / Успехи медицинской микологии Т5 Материалы третьего Всероссийского конгресса по медицинской микологии М Национальная Академия Микологии 2005 С 74-77

7 Марфенина ОЕ, Фомичева ГМ Эволюция терморегуляции у животных и

патогенные свойства грибов // Проблемы медицинской микологии 2005 Т 7 №2 С 106

8 Фомичева ГМ, Василенко О В , Марфенина О Е Сравнительные морфологические. экологические и молекулярные исследования штаммов Aspergillus versicolor (Vuill) Tiraboschi, выделенных из разных местообитаний // Микробиология 2006 Т 75 №2 С 228-234

9 Марфенина О Е , Наумова Е М , Фомичева ГМ Рост клинического и са-протрофного штаммов Aspergillus sydowu при различных температурных режимах//Проблемы медицинской микологии 2006 Т 8 №2 С 64-65

10 Василенко О В , Фомичева ГМ, Кулько А Б, Кузьмин Д Е , Марфенина О Е Проблемы использования высоковариабельных локусов ITS для идентификации и генотипирования патогенных грибов на примере аспергил-лов, близких к A versicolor / Успехи медицинской микологии Т8 Материалы четвертого Всероссийского конгресса по медицинской микологии М Национальная Академия Микологии М Национальная Академия Микологии, 2006 С 106-107

11 Марфенина О Е , Фомичева ГМ Потенциально патогенные грибы в среде обитания человека (анализ современных данных) // Успехи медицинской микологии Т 9 Материалы пятого Всероссийского конгресса по медицинской микологии М Национальная Академия Микологии М Национальная Академия Микологии, 2007 С 57-59

12. Марфенина О Е , Наумова Е М, Фомичева ГМ Динамика популяций клинического и сапротрофного штаммов Aspergillus sydowu в почвах // Проблемы медицинской микологии 2007 Т 9 №2 С 78

Подписано в печать 10 09 2007 г Исполнено 11 09 2007 г Печать трафаретная

Заказ № 688 Тираж 100 экз

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш , 36 (495) 975-78-56 www autoreferat ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Фомичева, Галина Михайловна

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. Свойства и распространение микроскопических грибов группы Aspergillus versicolor

1.1. Свойства и распространение вида Aspergillus versicolor (Vuill.) Tirab. 1908 .И

1.2. Свойства и распространение вида Aspergillus sydowii (Bain, et Sart.) Thorn et Church

ГЛАВА 2. Микроскопические мицелиальные грибы как возбудители заболеваний человека.

2.1. Общие представления.

2.2. Свойства оппортунистических микроскопических грибов-возбудителей заболеваний человека и животных, на примере Aspergillus fumigatus Fresen.

2.3. Особенности организма человека как среды обитания оппортунистических грибов.

2.4. Свойства сапротрофных и клинических штаммов одного вида микроскопических грибов, на примере видов рода Aspergillus.

ГЛАВА 3. Основные направления популяционных исследований почвенных микромицетов.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 4. Объекты и методы исследования.

4.1. Объекты исследования.

4.2. Методы исследования.

РЕЗУЛЬТАТЫ.

ГЛАВА 5. Исследования штаммов вида Aspergillus versicolor

5.1. Исследование культурально-морфологических свойств.

5.2. Экологические условия роста.

5.3. Исследование спорообразования.

5.4. Изучение молекулярно-генетических свойств.

ГЛАВА 6. Исследования штаммов вида Aspergillus sydowii

6.1. Исследование культурально-морфологических свойств.

6.2. Экологические условия роста.

6.3. Сопоставление экологических свойств сапротрофных и клинических штаммов.

6.4. Исследование спорообразования.

6.5. Изучение молекулярно-генетических свойств.

ГЛАВА 7. Сравнение свойств видов Aspergillus versicolor и Aspergillus sydowii.

ОБСУЖДЕНИЕ

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экофизиологические и молекулярно-генетические свойства микроскопических грибов представителей группы Aspergillus versicolor, выделенных из разных местообитаний"

Микроскопические грибы рода Aspergillus Mich, широко распространены в наземных экосистемах, но преимущественно являются типичными обитателями южных почв. Однако в результате антропогенных изменений современной биосферы грибы рода Aspergillus приобретают более широкое распространение в северных и умеренных широтах, в первую очередь, в городских экосистемах, рекреационных территориях, агроценозах, во внутренней среде помещений (Марфенина, 2005). В последние десятилетия установлено, что многим видам рода Aspergillus принадлежит важная роль в заболеваниях человека, т.к. они способны образовывать микотоксины, могут быть аллергенами и возбудителями микозов.

Представители рода Aspergillus не являются облигатными патогенами человека и животных, а проявляют свойства оппортунистов, т.е. могут развиваться во внешней среде как сапротрофы, но одновременно обладают способностью вызывать вторичные микозы.

Поэтому для прогноза развития и предотвращения негативных эффектов от распространения грибов рода Aspergillus в окружающей среде важно знать особенности их роста и репродукции в разных экологических условиях. Однако специфика прохождения их жизненных циклов в разных средах обитания, особенно в почвах, условия спорообразования, исследованы явно недостаточно и для небольшого количества видов (Иванушкина, 1984; Попова, 1990).

Безусловный интерес представляют и сведения об объеме варьирования свойств отдельных штаммов видов микроскопических грибов, известных как опасные для здоровья человека, выделенных из различных местообитаний.

Среди практически неисследованных — широко распространенные в окружающей среде и известные как экотоксикологически значимые — виды группы Aspergillus versicolor (Raper, Fennell, 1965) по современной классификации (Samson, 1994): род Aspergillus, подрод Nidulantes, секция Versicolors - A. versicolor (Vuill.) Tirab. и A. sydowii (Bain, et Sart.) Thorn et Church.

Цель работы

Изучение и сравнительный анализ экофизиологических и молекулярно-генетических свойств микроскопических грибов представителей группы Aspergillus versicolor, выделенных из разных местообитаний.

Задачи исследования

1. Определение влияния температуры на рост и спорообразование штаммов видов A. versicolor, A. sydowii, выделенных из разных природных местообитаний и клинического материала.

2. Выяснение влияния влажности среды на рост и спорообразование штаммов видов A. versicolor, A. sydowii.

4. Определение молекулярно-генетических свойств и их отличий у штаммов видов A. versicolor, A. sydowii, выделенных из разных природных местообитаний и клинического материала.

Научная новизна

Описаны экологические условия роста и спороношения двух широко распространенных и экотоксикологически значимых микромицетов А. versicolor, A. sydowii. Впервые показаны отличия этих двух близких видов по экологическим свойствам - температурным оптимумам и интервалам роста, выявлено, что вид A. sydowii является более термотолерантным. Впервые, на примере A. sydowii установлены отличия сапротрофных и клинических штаммов грибов рода Aspergillus по экофизиологическим свойствам. Исследованные клинические штаммы были способны активно расти в более широком интервале температур при пониженной влажности по сравнению с сапротрофными.

Получены данные о молекулярно-генетических свойствах (последовательности участков ITS1-5.8S-ITS2, D1/D2 28S рДНК) штаммов видов A. versicolor и A. sydowii, выделенных из разных местообитаний. Выявлен уровень внутривидовой и межвидовой молекулярно-генетической гетерогенности исследованных видов.

Практическая значимость

Получены новые экологические и молекулярно-генетические данные, важные для идентификации видов A. versicolor и A. sydowii.

Международные базы генетических данных GenBank/EMBL/DDJB пополнены полученными последовательностями локусов рДНК для исследованных микроскопических грибов. Для вида A. versicolor полученные данные составили 40% всех имеющихся в международных банках генетических данных (GenBank) последовательностей для участков ITS1-5.8S-ITS2 этого вида и 50% на участке D1/D2 28S рДНК; для A. sydowii 30% и 40% соответственно.

Показано, что вид A. sydowii обладает большим патогенным потенциалом (способность роста при 37°С), чем A. versicolor, что необходимо учитывать при оценке присутствия опасных микроскопических грибов в окружающей среде. Результаты работы используются в курсе лекции «Почвенная микология».

Благодарности

Автор выражает искреннюю признательность научному руководителю д.б.н. О.Е. Марфениной за неоценимую помощь и поддержку на всех этапах работы, в.н.с. ГНЦ РАМН к.б.н. О.В. Василенко, который принимал участие в руководстве при выполнении молекулярно-генетических анализов, за полученные знания, практические навыки и ценные научные консультации в этой области, к.б.н. А.Е. Ивановой, д.б.н. И.И. Судницыну, д.б.н. И.Ю. Чернову, к.б.н. A.M. Юркову, к.б.н. М.В. Горленко, а так же всему коллективу кафедры биологии почв МГУ за поддержку и ценные советы.

Автор выражает благодарность н.с. кафедры микологии и альгологии МГУ к.б.н. А.В. Александровой, с.н.с. ВКМ РАН к.б.н. Н.Е. Иванушкиной, с.н.с. МНПЦБТ к.б.н. А.Б. Кулько, сотруднику РКПГ к.б.н Т.С. Богомоловой за предоставление штаммов, использованных в работе.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Фомичева, Галина Михайловна

выводы

1. Показано, что близкие по культурально-морфологическим свойствам виды A. versicolor и A. sydowii отличаются по экофизиологическим свойствам. Штаммы A. sydowii имеют наибольшие скорости роста при более высокой температуре (30°С), чем A. versicolor (25°С) и способны к активному росту при 37°С, т.е. обладают большим патогенным потенциалом.

2. У исследованных штаммов A. versicolor и A. sydowii не установлено температурной адаптации к условиям местообитания. Для штаммов одного вида выделенных в разных климатических зонах (арктическая — степная зона для A. versicolor; Антарктика — субтропики, организм человека для A. sydowii) показан один температурный оптимум роста.

3. В изученном интервале активности воды (0,80-0,99aw) показатели роста сапротрофных штаммов A. versicolor коррелировали с условиями влажности местообитания штаммов. Штаммы, выделенные из более влажных местообитаний имели оптимумы роста при более высокой влажности по сравнению со штаммами из южных и засушливых почв.

4. По молекулярно-генетическим свойствам (участки ITS рДНК) штаммы А. versicolor, выделенные из определенного типа местообитаний (разнообразных современных почв, погребенных почв возрастом несколько тысяч лет, засоленных местообитаний) были сходны между собой.

5. Установлены отличия сапротрофных и клинических штаммов A. sydowii, которые выражались в более низких скоростях роста у клинических штаммов при исследованной температуре и влажности, но более высоких уровнях спорообразования, чем у сапротрофных штаммов. При этом по молекулярно-генетическим свойствам (ITS, D1/D2 28S рДНК) сапротрофные и клинические штаммы образуют смешанные группы.

6. Подтверждено, что по молекулярно-генетическим свойствам (последовательностям участков D1/D2 28S рДНК) вид A. versicolor представляет гомогенную группу, в то время как вид A. sydowii -гетерогенен. Исследованные штаммы A. sydowii по данному участку разделяются на две клады.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Фомичева, Галина Михайловна, Москва

1. Абызов С.С., Белякова JT.A. Мицелиальные грибы из толщи ледника центральной Антарктики // Известия АН СССР. сер. биологическая. 1982. № 3. С. 432-436.

2. Антропова А.Б. Микромицеты как источник аллергенов в жилых помещениях г. Москвы. Автореф. дис. к.б.н. М., 2005. 24с.

3. Аравийский Р.А., Климко Н.Н., Васильева Н.В. Диагностика микозов. Санкт-Петербург: Издательский дом СПбМАПО, 2004.186с.

4. Асланиди К.Б., Иванова А.Е., Блажеевская Ю.В., Жданова Н.Н., Белозеркая Т.А, Резистенстность микроскопических грибов к окислительному стрессу //Доклады АН. 2003. Т. 392. № 1. С. 119-122.

5. Бабьева Е.Н. Сравнительно-экологическое исследование микромицетов из почв отдаленных географических районов. Дисс. к.б.н. М. 1983.158с.

6. Билай В.И., Коваль Э.З. Аспергиллы. Киев: Наукова думка, 1988. 204с.

7. Богомолова Т.С., Васильева Н.В., Горшкова Г.И. Микобиота некоторых жилых помещений в г. Санкт-Петербурге и Ленинградской области // Проблемы медицинской микологии. 1999. № 3. С. 41-43.

8. Буркутбаева Т.Н., Тастанбекова Л.К. Частота выделения и соотношение Aspergillus species при микозах лор-органов // Проблемы медицинской микологии. 2004. Т. 6. № 3 с. 14-16.

9. Горбов С.Н. Почвы урболандшафтов г. Ростов-на-Дону, их экологическое состояние и оценка загрязнения. Автореф. дис. . к.б.н. Ростов-на-Дону, 2002. 25с.

10. Дьяков Ю.Т. Популяционная биология фитопатогенных грибов. М.: ИД "Муравей", 1998. 384с.

11. Блинов Н.П. Краткий микологический словарь. Санкт-Петербург: MEDEM, 2004.174с.

12. Блинов Н.П. Токсигенные грибы в патологии человека // Проблемы медицинской микологии. 2002. Т. 4. № 4. С. 3-7.

13. Жданова Н.Н., Васильевская А.И. Меланинсодержащие грибы в экстремальных условиях. Киев: Наукова думка, 1988.196с.

14. Иванушкина Н.Е. Влияние температуры и водного потенциала на рост и развитие почвенных грибов. Дисс. к.б.н. М., 1984. 218с.

15. Козловский А.Г., Марфенина О.Е., Винокурова Н.Г., Желифонова В.П., Аданин В.М. Микотоксины микроскопических грибов рода Penicillium, выделенных из почв естественных и антропогенно нарушенных экосистем // Микробиология. 1997. Т. 66. № 2. С. 206-210.

16. Конопленко Л.А., Сизова Т.П. Значение температурного фактора для некоторых почвенных грибов // Вестник МГУ. сер. биология. 1978. № 3. С. 31-34.

17. Кураков А.В. Грибы в круговороте азота в почвах. Дисс. .д.б.н. М., 2003. 289с.

18. Лихачев А.Н. Грибы рода Botrytis Micheli (Fungi, Deuteromycota). Биология, экология, микроэволюция. Автореф. дисс. д.б.н. М., 2000. 37с.

19. Мирчинк Т.Г. Почвенная микология. М.: Изд-во МГУ, 1988. 220с.

20. Мишустин Е.Н. Ассоциации почвенных микроорганизмов. М.: Наука, 1975.102с.

21. Мюллер Э., Леффлер В. Микология. М.: Мир, 1995. 343с.

22. Науменко А.Ф. Экологические особенности микроорганизмов подземных горных выработок северной фенноскандии. Автореф. дис. . к.б.н. Петрозаводск, 2002. 34с.

23. Сергеев А.Ю., Жарикова Н.Е., Сергеев Ю.В., Маликов В.Е. Новые возбудители онихомикоза // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2002. Т. 4. Приложение 1. С. 38-39.

24. Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Грибковые инфекции. Руководство для врачей. М.: Бином, 2003. 440с.

25. Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В. Кандидоз. Природа инфекции, механизмы агрессии и защиты, лабораторная диагностика, клиника, лечение. М: Триада-Х, 2001.472с.

26. Сизова Т.П., Бабьева Е.Н. Экологические и морфологические особенности почвенных микромицетов из разных природных зон // Микология и фитопатология. 1981. Т. 15. № 3. С. 197-199.

27. Славошевская Л.В., Светличная В.А., Лебедева Е.В. Микромицеты в музее // Проблемы медицинской микологии. 2002. Т. 4. № 2. С.71.

28. Томилин Б.А. Адаптация грибов к условиям существования в Арктике и микофлора тундр // Микология и фитопатология. 1974. Т.8. № 6. С. 465470.

29. Юрков A.M. Сравнительный анализ структуры дрожжевых сообществ в березняках европейской части России и Западной Сибири. Автореф. дис. . к.б.н. М., 2005.24с.

30. Abba I.T. Are indoor molds causing new diseases? // J. Allergy Clin. Immunol. 2004. February. P. 221-226.

31. Abdalla M.H., EI-Tayeb N.M. Spoilage of stored cotton fibre from Sudan Gezira // Mycopathologia. 1981. 75. P. 173-177.

32. Abdel-Hafez S.I.I., Abdel-Kader M.I.A. Cellulose-decomposing fungi of barley grains in Egypt // Mycopathologia. 1980. N. 70. Vol. 2. P. 77-82.

33. Abdel-Sater M.A., Eraky S.A. Bulbs mycoflora and their relation with three stored product mites // Mycopathologia. 2001. N. 153. P. 33-39.

34. Ali-Shtayeh M.S., Arda H.M., Hassouna M., Shaheen S.F. Keratinophilic fungi on sheep hairs from the West Bank of Jordan // Mycopathologia. 1989. N. 106. P. 95-101.

35. Alker A.P., Smith G. W., Kim K. Characterization of Aspergillus sydowii (Thom et Church), a fungal pathogen of Caribbean sea fan corals // Hydrobiologia. 2001. N. 460. P. 105-111.

36. Alonso-Monge R., Navarro-Garcia F., Roman E., Eisman В., Nombela C., Pla J. Strategies for the identification of virulence determinants in human pathogenic fungi // Curr. Genet. 2003. 42. P. 301-312.

37. Atherton G. (2005) Secondary metabolites trivial name versicolorin A. The Aspergillus Website. WWW document. URL http://www.aspergillus.man.ac.uk.

38. Aufauvre-Brown A., Brown J.S., Holden D.W. Comparison of virulence between clinical and environmental isolates of Aspergillus fumigatus II Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1998.17. P. 778-780.

39. Autrup J.L., Schmidt J., Seremet T. et al. Determination of exposure of aflotoxins among Danish workers in animal-feed production through the analysis of aflotoxin B1 adducts to serum albumin // Scand. J. Work Environm. Health. 1991. V. 17. P. 436-440.

40. Barnes S.E., Dola T.P., Bennett J.W., Bhatnagar D. Synthesis of sterigmatocystin on a chemically defined medium by species of Aspergillus and Chaetomium // Mycopathologia. 1994. N. 125. P. 173-178.

41. Bart-Delabesse E., Humbert J.-F., Delabesse E., Bretagne S. Microsatellite markers for typing Aspergillus fumigatus isolates // J. Clin. Microbiol. 1998. V. 36. N. 9. P. 2413-2418.

42. Beguin H., Nolard N. Mould biodiversity in homes I. Air and surface analysis of 130 dwellings //Aerobiologia. 1994.10. P. 157-166.

43. Beguin H., Nolard N. Relationship between mycobiota in wall-to-wall carpet dust and age of carpet //Aerobiologia. 1999.15. P. 299-306.

44. Benezet H., Knowles C.O. Microbial degradation of thidiazuron and its photoproduct //Arch. Environm. Contain. Toxicol. 1982.11. P. 107-110.

45. Bhabhra R., Askew D.S. Thermotolerance and virulence of Aspergillus fumigatus: role of the fungal nucleolus // Medical Mycology. 2005. 43. 1. P. S87-S93.

46. Bhattacharyya D., Basu S., Chattapadhyay J. P., Bose S. K. Biocontrol of Macrophomina root-rot disease of jute by an antagonistic organism, Aspergillus versicolor//Plant and Soil. 1985. 87. P. 435-438.

47. Bidochka M.J., Menzies F.V., Kamp A.M. Genetic groups of the insect-pathogenic fungus Beauveria bassiana are associated with habitat and thermal growth preferences //Arch. Microbiol. 2002.178. P. 531-537.

48. Birch M., Denning D.W., Robson F.D. Comparison of extracellular phospholipase activities in clinical and environmental Aspergillus fumigatus isolates // Medical Mycology. 2004. 42. P. 81-86.

49. Bjurman J., Kristensson J. Volatile production by Aspergillus versicolor as a possible cause of odor in houses affected by fungi I I Mycopathologia. 1992. 118. P. 173-178.

50. Bouchara J.P., Tronchin G., Larcher G., Chabasse D. The search for virulence determinants in Aspergillus fumigatus // Trends in Mycrobiology. 1995. 3 (8). P. 327- 330.

51. Brakhage A.A., Liebmann B. Aspergillus fumigatus conidial pigment and cAMP signal transduction: significans for virulence // Medical Mycology. 2005. 43.1. P. S75-S82.

52. Butler M.J., Day A.W. Fungal melanins: A review // Canadian Journal Mycrobiolgy. 1998. V. 44. P. 1115-1136.

53. Carlile M. J., Watkinson S.C., Gooday G.W. The Fungi. 2nd Ed. Academic press. San Diego. San Francisco. New York. Boston, 2001.588p.

54. Casadevall A. Fungal virulence, vertebrate endothermy, and dinosaur extinction: is there a connection? // Fungal Genetics and Biology. 2005. V. 42. P. 98-106.

55. Casadevall A., Pirofski L.-A. Host-Pathogen interactions: basic concepts of microbial commensalism, colonization, infection, and disease // Infection and Immunity. 2000. V. 68. N. 12. P. 6511-6518.

56. Casadevall A., Pirofski L.-A. Host-pathogen interactions: redefining the basic concepts of virulence and pathogenicity // Infection and Immunity. 1999. V. 67. N. 8. P. 3703-3713.

57. Chavant L., Bars J. L., Sancholle M. Metabolisme lipidique chez VAspergillus versicolor (Vuill.) Tiraboschi. Relations avec la biogenese de la sterigmatocystine // Mycopathologia. 1977. V. 60.3. P. 151-155.

58. Chiu Y.L., Liaw S.J., Wu V.C., Hsueh P.R. Peritonitis caused by Aspergillus sydowii in a patient undergoing continuous ambulatory peritoneal dialysis // J. Infect. 2005. 51(3). P. 159-161.

59. Ciferri O. Microbial Degradation of paintings // Appl. Environ. Microbiol. 1999. V. 65. N. 3. P. 879-885.

60. Denning D.W., demons K.V., Hanson L.H., Stevens D.A. Restriction endonuclease analysis of total cellular DNA of Aspergillus fumigatus isolates of geographically and epidemiological^ diverse origin // J. Infect. Dis. 1990. 162 (5). P. 1151-1158.

61. Dhar A.K., Bose S.K. studies on versicolin, a new antifungal antibiotic from Aspergillus versicolor II. Isolation and purification // Applied Microbiology. 1968. V. 16. N. 5. P. 749-752.

62. Domsch K.H., Gams W., Anderson T.-H. Compendium of soil fungi . Vol. I. IHW- Verlag reprint, 1993.180p.

63. Duchaine C., Meriaux A. The importance of combining air sampling and surface analysis when studying problematic houses for mold biodiversity determination //Aerobiologia. 2001.17. P. 121-125.

64. El-Shanawany A.A., Mostafa M. E., Barakat A. Fungal populations and mycotoxins in silage in Assiut and Sohag governorates in Egypt, with a special reference to characteristic Aspergilli toxins // Mycopathologia. 2005. 159. P. 281-289.

65. Ezeonu I.M., Noble J.A., Simmons R.B., Price D.L., Crow S.A., Ahearn D.G.

66. Effect of relative humidity on fungal colonization of fiberglass insulation. // Appl. Environ. Microbiol. 1994a. 60 (6). P. 2149-2151.

67. Ezeonu I.M., Price D.L., Crow S.A, Ahearn D.G. Effects of extracts of fiberglass insulations on the growth of Aspergillus fumigatus and A. versicolor // Mycopathologia. 1995.132. P. 65-69.

68. Ezeonu I.M., Price D.L., Simmons R.B., Crow S.A., Ahearn D.G. Fungal production of volatiles during growth on fiberglass //Appl. Environ. Microbiol. 1994b. 60 (11). P. 4172-3.

69. Fenice M., Selbmann L., Zucconi L., Onofri S. Production of extracellular enzymes by Antarctic fungal strains // Polar Biol. 1997.17. P. 275-280.

70. Fischer G., Schwalbe R., Miiller Т., Ostrowski R., Dott W. Species-specific production of microbial volatile organic compounds (MVOC) by airborne fungi from a compost facility // Chemosphere. 1999. V. 39. N. 5. P. 795-810.

71. Freire F.C.O., Kozakiewicz Z., Paterson R.R.M. Mycoflora and mycotoxins in Brazilian black pepper, white pepper and Brazil nuts // Mycopathologia. 2000. 149. P. 13-19.

72. Fujii K., Kurata H., Odashima S., Hatsuda Y. Tumor induction by a single subcutaneous injection of sterigmatocystin in newborn mice // Cancer research. 1976. 36. P. 1615-1618.

73. Galimberti, R., Kowalczuk A., Parra I.H., Ramos M.G., Flores V. Cutaneous aspergillosis: a report of six cases // Brit. J. Dermatol. 1998.139. P. 522-526.

74. Gardes M., Bruns T.D. ITS primers with enhanced specificity for basidiomycetes application to the identification of mycorrhizae and rusts // Mol. Ecol. 1993.2. P.113-118.

75. Geiser D., Taylor J., Ritchie K., Smith G., Cause of sea fan death in the West Indies // Nature. 1998. 394. P. 137-138.

76. GenBank/EMBL/DDJB (2006). International Nucleotide Sequence Database Collaboration. Database. URL http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/collab/

77. Ghisalberti E.L., Sivasitamparam K. Antifungal antibiotics produced by Trichoderma spp. // Soil. Biol. Biochem. 1991. 23 (11). P. 1011-1020.

78. Girardin H., Sarfati J., Traore F., Camet D.J., Derouin F., Latge J. P. molecular epidemiology of nosocomial invasive aspergillosis // J. Clin. Microbiol. 1994. V. 32. N. 3. P. 684-690.

79. Gopinath S.C.B., Anbu P., Hilda A. Extracellular enzymatic activity profiles in fungi isolated from oil-rich environments // Mycoscience. 2005. 46. P. 119— 126.

80. Gorny R.L., Reponen Т., Grinshpun S.A., Willeke K. Source strength of fungal spore aerosolization from moldy building material // Atmospheric Environment. 2001. 35. P. 4853^1862.

81. Gorny R.L., Reponen Т., Willeke K., Schmechel D., Robine E., Boissier M., Grinshpun S.A. Fungal fragments as indoor air biocontaminants // Appl. Environ. Microbiol. 2002. 68. P. 3522-3531.

82. Gravesen S., Nielsen P.A., Iversen R., Nielsen K.F. Microfungal Contamination of damp buildings-examples of risk constructions and risk materials // Environ. Health. Perspect. 1999.107.3. P. 505-508.

83. Gu J.D., Mitton D.B., Ford Т.Е., Mitchell R. Microbial degradation of polymeric coatings measured by electrochemical impedance spectroscopy // Biodegradation. 1998. 9. P. 39^15.

84. Hasan H.A. Fungal utilization of organophosphate pesticides and their degradation by Aspergillus flavus and A. sydowii in soil // Folia Microbiol. (Praha). 1999.44 (1). P. 77-84.

85. Henry Т., Iwen P.C., Hinrichs S.H. Identification of Aspergillus species using1.ternal Transcribed Spacer regions 1 and 2 // J. Clin. Microbiol. 2000. 38 (4). P. 1510-1515.

86. Hicks J.B., Lu E.T., De Guzman R., Weingart M. Fungal types and concentrations from settled dust in normal residences // J. Occup. Environm. Hygiene. 2005. 2. P. 481-492.

87. Hitokoto H., Morozumi S., Wauke Т., Sakai S.,Yoshikawa S. Chemically defined medium for high yields of sterigmatocystin // Mycopathologia. 1982. 78. P. 99-105.

88. Holden D.W., Tang C.M., Smith J.M. Molecular genetics of Aspergillus pathogenicity //Antonie van Leeuwenhoek. 1994. 65(3). P. 251-255.

89. Hunter C.A., Grant C., Flannigan В., Bravery A.F. Mould in buildings: the air spora of domestic dwellings // Internatinal Biodeterioration. 1988. 24. P. 81101. (Цит. no Beguin, Nolard, 1994).

90. Hyvarinen A., Vahteristo M., Meklin, T. Jantunen M., Nevalainen A., Moschandreas D. Temporal and spatial variation of fungal concentrations in indoor air //Aerosol Science and Technology. 2001. 35. P. 688-695.

91. Jacobson E.S. Pathogenic roles for human melanins // Clinical Microbiological

92. Revue. 2000. V.13. P. 708-717.

93. Jarvis J.Q., Morey P.R. Allergic respiratory disease and fungal remediation in a building in a subtropical climate. //Appl. Occup. Environ. Hyg. 2001 16 (3). P. 380-388.

94. Kakde U.B., Kakde H.U., Saoji A.A. Seasonal variation of fungal propagules in a fruit market environment, Nagpur (India) // Aerobiologia. 2001. 17. P.177-182.

95. Kamei K., Watanabe A. Aspergillus mycotoxins and their effect on the host // Medical Mycology. 2005. 43.1. P. S95-S99.

96. Keegan K.G., Dillavou C.L., Turnquist S.E., Fales W.H. Subcutaneous mycetoma-like granuloma in a horse caused by Aspergillus versicolor // J. Vet. Diagn. Invest. 1995. 7. P. 564-567.

97. Keller N., Bok J., Chung D., Perrin R.M., Shwab E.K. LaeA, a global regulator of Aspergillus toxins // Medical Mycology. 2006. 44. S83-S85.

98. Kim K., Harvell C.D., Kim P.D., Smith G.W., Merkel S.M. Fungal disease resistance of Caribbean sea fan corals (Gorgonia spp.) // Marine Biology. 2000. 136. P. 259-267.

99. Kis-Papo Т., Oren A., Wasser S.P., Nevo E. Survival of filamentous fungi in hypersaline Dead sea water // Microb. Ecol. 2003.45. P.183-190.

100. Mich M.A. Biogeography of Aspergillus species in soil and litter I I Mycologia. 2002. 94 (1). P. 21-27.

101. Mich M.A. Morphological studies of Aspergillus Section Versicolores andrelated species // Mycologia. 1993. V. 85. N. 1. P. 100-107.

102. Klich M.A., Mullaney E. J., Daly С. B. Analysis of intraspecific and interspecific variability of three common species in Aspergillus section Versicolores using DNA restriction fragment length polymorphisms // Mycologia. 1993. V. 85. N. 5. P. 852-855.

103. Klich M.A., Pitt J.I. A laboratory guide to a common Aspergillus species and their teleomorphs. Commonwealth scientific and industrial research organisation, division of food processing. 1992.116p.

104. Korpi A., Kasanen J.-P., Raunio P., Pasanen A.-L. Acute effects of Aspergillus versicolor aerosols on murine airways I I Indoor Air. 2003.13. P. 260-266.

105. Kosalec I., Pepeljnjak S. Mycotoxigenicity of clinical and environmental Aspergillus fumigatus and A. flavus isolates // Acta. Pharm. 2005. 55. P. 365375.

106. Kozel T.R. Activation of the Complement System by Pathogenic Fungi // Clinical Microbiology Reviews. 1996. V. 9. N. 1. P. 34-46.

107. Kupfahl C., Michalka A., Lass-Florl C., Fischer G., Haased G., Ruppert Т., Geginat G., Hof H. Gliotoxin production by clinical and environmental Aspergillus fumigatus strains // Int. J. Med. Microbiol. 2007. doi:10.1016/ j.ijmm.2007.04.006.

108. Kurtzman C.P., Robnett C.J. Identification of clinically important ascomycetous yeasts based on nucleotide divergence in the 5' end of the large-subunit (26S) ribosomal DNA gene // J. Clin. Microbiol. 1997. 35 (5). P.1216 -1223.

109. Lafont P., Lafont J. Production de nidulotoxine par des Aspergillus appartenant a differentes especes // Cellular and Molecular Life Sciences. 1970. 26. 7. P. 807-808.

110. Latge J.-P. Aspergillus fumigatus and Aspergillosis // Clinical Microbiology Reviews. 1999. V. 12. N. 2. P. 310-350.

111. Latge J.-P. The pathobiology of Aspergillus fumigatus // Trends in Microbiology. 2001. V. 9. N. 8. P. 382-389.

112. Lepom P., Kloss H. Production of sterigmatocystin by Aspergillus versicolor isolated from roughage // Mycopathologia. 1988.101 (1). P. 25-29.

113. Levetin E., Shaughnessy R., Rogers C. A., Scheir R. Effectiveness of germicidal UV radiation for reducing fungal contamination within air-handling units //Appl. Environ. Microbiol. 2001. V. 67. N. 8. P. 3712-3715.

114. Liebmann В., Gattung S., Jahn В., Brakhage A. A. // cAMP signaling in Aspergillus fumigatus is involved in the regulation of the virulence gene pksP and in defense against killing by macrophages // Mol. Gen. Genomics. 2003. 269. P. 420^35.

115. Liu, Z., Hou Т., Shen Q., Liao W., Xu H. Osteomyelitis of sacral spine caused by Aspergillus versicolor with neurologic deficits I I Chin. Med. J. (Engl). 1995. 108. P. 472-475.

116. Lugauskas A., Krikstaponis A., Sveistyte L. Airborne Fungi in industrial environments potential agents of respiratory diseases // Ann. Agric. Environ. Med. 2004. N.ll.P.19-25.

117. Maggi O., Persiani A.M., Gallo F., Valenti P., Pasquariello G., Sclocchi M.C., Scorrano M. Airborne fungal spores in dust present in archives: proposal for a detection method, new for archival materials //Aerobiologia. 2000. 16. P. 429

118. Marin M., Castro В., Gaitan A., Preisig 0., Wingfield B. D., Wingfield M. J. Relationships of Ceratocystis fimbriata isolates from Colombian coffee-growing regions based on molecular data and pathogenicity. // J. Phytopathology. 2003.151. P. 395-405.

119. McGinnis M.R. Pathogenesis of indoor fungal disease // Medical Mycology. 2004. V. 42. P. 107-118.

120. Mehrad В., Paciocco G., Martinez F.J., Ojo T.C., Iannettoni M.D., Lynch J.P. Spectrum of Aspergillus infection in lung transplant recipients: case series and review of the literature // Chest. 2001.119. P. 169-175.

121. Meneau I., Sanglard D. Azole and fungicide resistance in clinical and environmental Aspergillus fumigatus isolates I I Medical Mycology. 2005. 43. Suppl. 1. P. S307-S311.

122. Mishra P.K., Fox R.T., Culham A. Restriction analysis of PCR amplified nrDNA regions revealed intraspecific variation within populations of Fusarium culmorum // FEMS Microbiol. Lett. 2002. 215 (2). P. 291-306.

123. Misra N. Influence of temperature and relative humidity on fungal flora of some spices in storage // Z. Lebensm. Unters. Forsch. 1981.172. P. 30-31.

124. Mojtahedi H., Rabie C.J., Lubben A., Steyn M., Danesh D. Toxic aspergilli from pistachio nuts // Mycopathologia. 1979. V. 67. 2. P. 123-127.

125. Molla A.H, Fakhru'l-Razi A., Abd-Aziz S., Hanafi M.M., Alam M. Z. In-vitrocompatibility evaluation of fungal mixed culture for byconversion of domestic wastewater sludge I I World Journal of Microbiology & Biotechnology. 2001. 17. P. 849-856.

126. Mondon P., De Champs C., Donadille A., Ambroise-Thomas P., Grillot R. Variation in virulence of Aspergillus fumigatus strains in a murine model of invasive pulmonary aspergillosis // J. Med. Microbiol. 1996.45(3). P. 186-91.

127. Morey P.R., Hull M.C., Andrew M. El Nino water leaks identify rooms with concealed mould growth and degraded indoor air quality // Int. Biodeter. Biodegrad. 2003.52. P. 197-202.

128. Moubasher A.H., Abdel-Hafez S.I. Further study on seasonal fluctuations of egyptian soil fungi // Mycopathologia. Vol. 63, L: LI 19,1978.

129. Moubasher A.H., Abdel-Kader M.I.A., El-Kady I.A. Toxigenic fungi isolated from roquefort cheese // Mycopathologia. 1978.vol. 66. 3. P. 187-190.

130. Mullen K.M., Harvell C.D., Alker A.P., Dube D., Jordan-Dahlgren E., Ward J.R., Petes L.E. Host range and resistance to aspergillosis in three sea fan species from the Yucatan // Marine Biology. 2006.149. P. 1355-1364.

131. Muller J. Requirements for establishing a country-wide diagnostic service in medical mycology // International Society for Human and Animal Mycology. 13 Congress, Salsomaggiore Terme, Parma, Italy. 1997. S. 94. P.64.

132. Naumov G.I., Naumova E.S., Hagler A.N., Mendonka-Hagler L.C., Louis E.J. A new genetically isolated populations of the Saccharomyces sensu stricto complex from Brazil. //Antonie van Leeuwenhoek. 1995a. 67. P. 351-355.

133. Naumov G.I., Naumova E.S., Louis E.J. Two new genetically isolated populations of the Saccharomyces sensu stricto complex from Japan. // J. Gen. Appl. Microbiol. 1995b. 41. P. 499-505.

134. NCBI (2007.04.13) Basic Local Alignment Search Tool (BLAST). On-line search query. URL http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/Blast.cgi

135. Nielsen K.F., Gravesen S., Nielsen P.A., Andersen В., Thrane U., Frisvad J.C. Production of mycotoxins on artificially and naturally infested building materials // Mycopathologia. 1999.145. P. 43-56.

136. Nierman W.C., May G., Kim H.S., Anderson M.J., Chen D., Dennind D.W. What the Aspergillus genomes have told us // Medical Mycology. 2005. 43. Suppl. 1. P. S3-S5.

137. Nilsson A., Kihlstr E., Lagesson V., Wess В., Szponar В., Larsson L., Tagesson

138. C. Microorganisms and volatile organic compounds in airborne dust from damp residences. // Indoor Air. 2004.14. P. 74-82.

139. O'Donnell K. Fusarium and its near relatives / The fungal holomorph: mitotic, meiotic and pleomorphic speciation in fungal systematics. Edited by Reynolds

140. D.R., Taylor J.W. United Kingdom. Wallingford. CAB International. 1993. P.225-233.

141. Olutiola P.O., Cole O.O. Some environmental and nutritional factors affecting growth and sporulation of Aspergillus sydowii I I Physiologia Plantarum. 1977. 39.3. P. 239-242.

142. Oyeyiola G.P. Fermentation of millet to produce kamu a Nigerian starch-cake food // World Journal of Microbiology and Biotechnology. 1991. 7. P. 196-201.

143. Parekh T.V., Chhatpar H.S. Effect of salt stress on the respiratory activity of Aspergillus sydowii II Current Microbiology. 1989. V. 19. P. 297-301.

144. Pasanen P., Korpi A., Kafliokoski P., Pasanen A.L. Growth and volatile metabolite production of Aspergillus versicolor in house dust. // Inveronment International. 1997. 23 (4). P. 425-432.

145. Pathogenic Fungi in Humans and Animals. Second Edition. Ed. by Howard D.H. New York, Basel: Marcel Dekker Inc., 2002. 790p.

146. Perkhofer S., Speth C., Dierich M.P., Lass-Florl C. In vitro determination of phagocytosis and intracellular killing of Aspergillus species by mononuclear phagocytes// Mycopathologia. 2007.163. P. 303-307.

147. Perri P., Campa C., Incorvaia C., Parmeggiani F., Lamberti G., Costagliola C., Sebastiani A. Endogenous Aspergillus versicolor endophthalmitis in an immuno-competent HIV-positive patient // Mycopathologia. 2005.160. P. 259261.

148. Phillips S.I., Wareing P.W., Dutta A., Panigrahi S., Medlock V. The mycoflora and incidence of aflatoxin, zearalenone and sterigmatocystin in dairy feed and forage samples from Eastern India and Bangladesh // Mycopathologia. 1996. 133. P. 15-21.

149. Pieckova E., Wilkins K. Airway toxicity of house dust and its fungal composition //Ann. Agric. Environ. Med. 2004.11. 67-73.

150. Piercey M.M., McPherson M.A., GrahamS.W., Currah R.S. Genetic heterogeneity in Phialocephala fortinii populations along a latitudinal transect. / The 7th International Mycological Congress. Book of abstracts. Oslo. 2002. P.ll.

151. Pitt J.I. A laboratory guide to common Penicillium species. 2nd ed. CSIRO Division of Food Processing. North Ryde. NSW. Australia. 1988.187p.

152. Pitt J. I., Hocking A. D. Influence of solute and hydrogen ion concentration on the water relations of some xerophilic fungi // J. Gen. Microbiol. 1977. 101. P. 35-40.

153. Pivkin M.V. Filamentous fungi associated with holothurians from the sea of Japan, off the Primorye coast of Russia // Biol. Bull. 2000.198. P. 101-109.

154. Prasad S., Nema H.V. Mycotic infections of cornea // Ind. J. Ophth. 1982. 30. P. 81-85.

155. Price D.L., Simmons R.B., Ezeonu I.M., Crow S.A., Ahearn D.G. Colonizationof fiberglass insulation used in heating, ventilation and air conditioning systems//J. Industr. Microbiol. 1994.13. P. 154-158.

156. Rabie C. J., Lubben A., Steyn M. Production of sterigmatocystin by Aspergillus versicolor and Bipolaris sorokiniana on semisynthetic liquid and solid media // Appl. Environ. Microbiol. 1976. V. 32. N. 2. P. 206-208.

157. Rainer J., Peintner U., Poder R. Biodiversity and concentration of airborne fungi in a hospital environment // Mycopathologia. 2000.149. P. 87-97.

158. Raper K.B., Fennell D.I., The genus Aspergillus. Baltimore: The Williams & wilkins company, 1965.453p.

159. Rhodes J., Bode R., McCuan-Kirsch C. Elastase production in clinical isolates of Aspergillus //Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 1988. 10. P. 165-170. (Цит. no Holden et al., 1994).

160. Richardson M.D. Effect of Lamisil and azole antifungals in experimental nail infection // Dermatology. 1997.194. Suppl. 1. P. 27-31.

161. Rinyu E., Varga J., Ferenczy L. Phenotypic and genotypic analysis of variability in Aspergillus fumigatus // J. Clin. Microbiol. 1995. V. 33. N. 10. P. 2567-2575.

162. Rizzo A., Eskola M., Atroshi F. Ochratoxin A in cereals, foodstuffs and human plasma // Eur. J. Plant Pathol. 2002.108. P. 631-637.

163. Rosehart K., Richards M.H., Bidochka M.J. Microsatellite analysis of environmental and clinical isolates of the opportunist fungal pathogen

164. Aspergillus fumigatus // J. Med. Microbiol. 2002. V. 51. P. 1128-1134.

165. Rotoli M., Sascaro G., Cavalieri S. Aspergillus versicolor infection of the external auditory canal successfully treated with terbinafine // Dermatology. 2001. 202. P. 143.

166. Rowan N.J., Johnstone C.M., Mclean R.C., Anderson J.G., Clarke J. A. Prediction of toxigenic fungal growth in buildings by using a novel modelling system //Appl. Environ. Microbiol. 1999. Vol. 65. No. 11. P. 4814-4821.

167. Sandhu D.K., Sandhu R.S. Survey of aspergillus species associated with the human respiratory tract // Mycopathologia et mycologia applicata. 1973. V. 49. 1. P. 77-87.

168. Scheff P.A., Paulius V.K., Curtis L., Conroy L.M. Indoor air quality in a middle school, part II: development of emission factors for particulate matter and bioaerosols //Appl. Occup. Environm. Hygiene. 2000. V. 15 (11). P. 835-842.

169. Schroeder H.W., Kelton W.H. Production of sterigmatocystin by some species of the genus Aspergillus and its toxicity to chicken embryos // Applied Microbiology. 1975. V. 30. N. 4. P. 589-591.

170. Shukla P.K., Jain M., Lai В., Agrawal P.K., Srivastava O.P. A study on keratomycoses caused by the species of Aspergillus // Biol Mem. 1985. 11. P. 161-166. (Цит. no Summerbell 2002).

171. Simeray J., Mandin D., Mercier M., Chaumont J.P. Survey of viable airborne fungal propagules in French wine cellars // Aerobiologia. 2001.17. P. 19-24.

172. Simmons R.B., Noble J.A., Rose L., Price D.L., Crow S.A., Ahearn D.G. Fungal colonization of automobile air conditioning systems. // J. Industr. Microbiol. Biotechnol. 1997.19. P. 150-153.

173. Singh A., Gangal S.V., Singh A.B. Airborne fungi in the hospitals of metropolitan Delhi //Aerobiologia. 1994. 10. P. 11-21.

174. Singh A., Singh A.B. Aspergillus spp. as an important occupational risk factor among susceptible individuals//Aerobiologia. 1999.15. P. 233-240.

175. Sneyers M. (1998) List of fungi presenting at the wild state a biological risk for immunocompetent humans and/or animals and corresponding maximum biological risk WWW document. URL http://www.biosafety.be/ RA/Class/ListFungi.html

176. Sugiura Y., Sugita-Konishi Y., Kumagaij S., Reiss E. Experimental murine hyalohyphomycosis with soil-derived isolates of Fusarium solani // Medical Mycology. 2003.41. P. 241 -247.

177. Sumi Y., Nagura H., Miyakawa M. Induction of pituitary tumors in germ-free rats exposed to Aspergillus versicolor // Cancer Res. 1990.50 (2) P. 400-402.

178. Sumi Y., Nagura H., Takeuchi M., Miyakawa M. Granulomatous lesions in the lung induced by inhalation of mold spores // Virchows Archiv. 1994. 424. P. 661-668.

179. Summerbell R. Ascomycetes Aspergillus, Fusarium, Sporothrix, Piedraia, and Their Relatives / Pathogenic Fungi in Humans and Animals. Second Edition. Ed. by Howard D.H. New York, Basel: Marcel Dekker Inc., 2002. P. 236-497.

180. Summerbell R.C., Kane J., Krajden S. Onychomycosis, tinea pedis and tinea manuum caused by non-dermatophytic filamentous fungi // Mycoses. 1989. 32 (12). P. 609-619.

181. Sur В., Bihari V., Sharma A., Basu K. Survey of termite-inhabited soil and mosquito breeding sites in Lucknow, India for potential mycopathogens of Anopheles stephensi // Mycopathologia. 1999.144. P. 77-80.

182. Tang C.M., Cohen J., Rees A.J., Holden D.W. Molecular epidemiological study of invasive pulmonary aspergillosis in a renal transplantation unit // Eur. J. Clin.

183. Microbiol. Infect. Dis. 1994. V. 13. P. 318-321.

184. Tell L.A. Aspergillosis in mammals and birds: impact on veterinary medicine // Medical Mycology. V. 43. Suppl. 1. 2005. P. 71 73.

185. Thau N., Monod M., Crestani В., Rolland C., Tronchin G., Latgi J.-P., Paris S. Rodletless mutants of Aspergillus fumigatus I I Infection and Immunity. 1994. V. 62. N. 10. P. 4380-4388.

186. Venugopal P.V., Venugopal T.V., Thiruneelakantan K., Subramanian S., Shetty B.M. Cerebral aspergillosis: report of two cases // Sabouraudia. 1977. 15 (3). P. 225-230.

187. Vinokurova N. G., Khmel'nitskaya I. I., Baskunov B. P., Arinbasarov M. U.

188. Occurrence of Indole Alkaloids among Secondary Metabolites of Soil Aspergillus spp. //Appl. Biochem. Microbiol. 2003. V. 39. N. 2. P. 192-196.

189. Wanqing L., Hai W., Yuchong C., Qian L., Zhilong Y., Jianghua W., Hong X., Deqian X. The first case of obstructing bronchial aspergillosis caused by Aspergillus sydowii // Int. J. Infect. Dis. 2004. 8 (2). P. 132-133.

190. Warris. A, Verweij P.E. Clinical implicants of environmental sources for Aspergillus I/ Medical Mycology. 2005.43. Suppl. 1. P. S59-S65.

191. Watanabe A., Kamei K., Sekine Т., Higurashi H., Ochiai E., HashimotoY., Nishimura K. Cytotoxic substances from Aspergillus fumigatus in oxygenated or poorly oxygenated environment // Mycopathologia. 2004.158. P. 1-7.

192. Weig M., Reichard U., Grab U. Aspergillus fumigatus virulence or opportunism I I Mycoses. 2001.44. P. 351-355.

193. Weir-Brush J.R., Garrison V.H., Smith G.W., Shinn E.A. The relationship between gorgonian coral (Cnidaria: Gorgonacea) diseases and African dust storms //Aerobiologia. 2004.20. P. 119-126.

194. Wheeler K.A., Hocking A.D. Water relations of Paecilomyces variotii, Eurotium amstelodami, Aspergillus candidus and Aspergillus sydowii, xerophilic fungi isolated from Indonesian dried fish // Int. J. Food. Microbiol. 1988. 7 (1). P. 73-78.

195. Zucconi L., Pagano S., Fenice M., SelbmannL., Tosi S., Onofri S. Growth temperature preferences of fungai strains from Victoria Land, Antarctica // Polar Biol. 1996.16. P. 53-61.