Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Эффективность пробиотиков на основе аэрококков в борьбе с гнойно-воспалительными заболеваниями

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Эффективность пробиотиков на основе аэрококков в борьбе с гнойно-воспалительными заболеваниями"

Дніпропетровська державна медична академія МОЗ

України

Інститут мікробіології та імунології ім. І.І. Мечникова

АМН України

' ' Ри^енко Сергій Анатолійович , -і **

' УДК 616-002.3-039.71-085:576.851.43

ЕФЕКТИВНІСТЬ ПРОБІОТИКІВ НА ТЛІ АЕРОКОКІВ У БОРОТЬБІ З ГНІЙНО-ЗАПАЛЮВАЛЬНИМИ ЗАХВОРЮВАННЯМИ

03.00.07 - мікробіологія

АВТОРЕФЕРАТ дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата медичних наук

Дніпропетровськ - 2000

Дисертацією є рукопис

Робота виконана на кафедрі мікробіології, вірусології та імунології Дніпропетровської державної медичної академії МОЗ України і в лабораторії протимікробних засобів Інституту мікробіології та імунології АМН України

Науковий керівник:

доктор медичних, наук, професор, заслужений працівник народної освіти України

Кременчуцький Геннадій Миколайович, Дніпропетровська державна медична академія,

зав. кафедрою мікробіології, вірусології та імунології

Офіційні опоненти:

доктор медичних наук Бабіч Євген Михайлович, Харківський науково-

дослідний інститут ім. 1.1.Мечникова, зав. лабораторією краплинних інфекцій;

доктор медичних наук, професор

Сидорчук Ігор Йосипович

Буковинська державна медична академія, зав. кафедрою імунології, алергології і ендокринології

Провідна установа: Київський науково-дослідний інститут

епідеміології та інфекційних захворювань ім. Л.В.Громашевського Академії медичних наук України.

Захист відбудеться " /Л" й 2000 року о 12 годині на

засіданні спеціалізованої Вченої 64.618.01 при Харківському

науково-дослідному інституті мікробіології та імунології ім. 1.1. Мечникова Академії медичних наук України за адресою: 61300, м. Харків, вул.Пушкінська, 14.

З дисертацією можна ознайомитись у бібліотеці Харківського науково-дослідного інституту мікробіології та імунології ім. І.Г Мечникова Академії медичних наук України, 61300, м. Харків, вул. Пушкінська, 14. .

Автореферат розісланий " " "7У_______________2000 р.

Вчений секретар спеціалізованої Вченої ради к.м.н., с.н.с.

І.Ю.Кучма

ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

Актуальність проблеми. Кінець XX і початок XXI століття знаменувалися інтенсифікацією наукових досліджень, присвячених іроблемі створення нового покоління пробіотиків і їхніх похідних. Цій іроблемі була присвячена перша в Україні науково-практична конференція Пробіотики XXI століття" (Харків, 2000). Відзначено актуальність і іерспективу створення нових пробіотиків, визначені напрямки розвитку ііотехнології і їхніх виробництв, важливість розширення показань до астосування цих препаратів.

Розвиток цього напрямку в медицині раніше було пов’язано зі творенням пробіотичних препаратів для перорального застосування з іетою корекції дисбактеріозів, боротьби з гострими і хронічними пінковими захворюзаннями, чи боротьби з бактеріоносінням (В.В.Смирнов аіп., 1994; І.Й.Сидорчук, 1986; І.Б.Сорокулова, 1996).

Питанням застосування пробіотиків для боротьби з гнійно-апапьними захворюваннями присвячена невелика кількість робіт Г.М.Ханіна та ін., 1986; В.О.Новокашнова та ін., 1987; Р.М.Молчанов, 992; В.І.Чуйко, 1995).

Разом з тим, проблема лікування і профілактики гнійно-запальних ахворювань вимагає нових підходів до її вирішення. На тлі великого рсеналу нозих антибіотиків і хіміопрепаратів широкого спектра дії все астіше виникають важкі ускладнення в хворих після оперативних тручань, хворих на соматичні й інфекційні захворювання. Більшість ослідників пов'язують цей процес із проблемою госпіталізації, ідпищенням питомої ваги умовно-патогенних мікробів серед збудників нійно-запальних захворювань, грамнегатнвннх бактерій, неспорових наеробів, полірезистентних до широковживаних у медичній практиці нтибіотичних препаратів (О.В. Люлько, 1980; О.Ф.Фролов, 1985;

і.А.Гречко, 1999).

У плані боротьби з гнійно-запальними захворюваннями усе більш и і' інтерес викликають мікроорганізми з роду Аегососсш, видовий представник яких А. уігісІапБ входить до складу нового пробіотика А-бактерину, що має широкий спектр антагоністичної дії на різні види патогенних і умовно-патогенних мікроорганізму. Попередніми дослідженнями була показана ефективність А-бактерина при лікуванні інфекцій стафілококової етіології (С.А.Галущенко, 1983). А-бактерин розроблено колективом співробітників кафедри мікробіології, вірусології та імунології Дніпропетровської державної медичної академії. Препарат дозволено для застосування в Україні, виробляється ЗАТ "Біолек" (м.Харків) і рекомендується для внутрішнього та зовнішнього застосування. Незважаючи на тс, що аерококи були відкриті 47 років тому, багато їхніх властивостей дотепер залишаються маловивченими чи невивченими. Особливо це стосується природи їхньої антагоністичної дії у відношенні збудників гнійно-запальних захворювань.

У зв'язку з цим проблема розробки нового покоління пробіотиків на тлі аерококів, продуктів їхньої життєдіяльності та синергійних хіміотерапевтичних препаратів у даний час є актуальною і її рішення дає можливість підвищити ефективність боротьби з гнійно-запальними захворюваннями.

Зв'язок роботи з науковими програмами, планами і темами.

Дисертаційна робота пов'язана з плановою науковою тематикою кафедри мікробіології, вірусології та імунології Дніпропетровської державної медичної академії " Розробка асоційованих препаратів на тлі аерококів та інших пробіотиків" (шифр 1 .Н. 14.00, № державної реєстрації 0100У003058), "Вивчення антагоністичних властивостей А-бактерину на патогенні кандиди, ізольовані при урогенітальних інфекціях" (№ державної реєстрації 0100У000073); з тематикою Інституту мікробіології й імунології ім. І.І.Мечникова "Вивчення чутливості до дії сучасних антибіотиків та інші

Зіологічні властивості госпітальних штамів - збудників гнійно-запальних нфекцій" (шифр ІДФ.4.28.99, № державної реєстрації 01994^003170);

Мета дослідження.

Оцінка ефективності нових аерококовіїх пробіотиків, продуктів 'хньої життєдіяльності та синергійтіх хіміотерапевтичних препаратів у боротьбі з гнійно-запальними захворюваннями.

Задачі дослідження.

1. Установити закономірності продукції водень пероксиду різними штамами аерококів і визначити ступінь його антагоністичного впливу на ібудників гнійно-запальних процесів у залежності від умов середовища.

2. Здійснити підбір хіміотерапевтичних препаратів і визначити їхні оптимальні дози, що підвищують антагоністичну дію аерококів у відношенні ібудників гнійно-запальних процесів.

3. Визначити ступінь продукції аерококами антагоністично активних зечовин неокислювальної природи, розробити методи їхнього виділення, тоділу й ідентифікації.

4. Оцінити ефективність антагоністично активних речовин іеокислювальної природи на моделях експериментальних інфекцій у тварин.

5. Розробити технологію одержання нового пробіотика, визначити

оптимальні концентрації його складових: аерококів, продуктів їхньої

«иттєдіяльності і синергійних хіміотерапевтичних препаратів з метою

іабезпечення високої антагоністичної активності у відношенні збудників 'нійно-запальних процесів.

6. Визначити ефективність пробіотика А-бактерину в комплексі із лшергійними хіміотерапевтичними препаратами при лікуванні і ірофілактиці гнійно-запальних захворювань.

Наукова новизна результатів дослідження. Доведено можливість створення пробіотика нового покоління на тлі аерококів і нових

<омпонентів, які забезпечують високу ефективність у боротьбі з гнійно-

запальними захворюваннями. Установлена а-гліцерофосфат оксидазн активність аерококів, що ініціює продукцію водень пероксиду. Вперші визначена активуюча дія йодистих з'єднань на антагоністичну активністі аерококів. Обґрунтовано можливість застосування аерококів в умова; відносного анаеробіозу. Доведено продукцію аерококами антагоністичне активних речовин неокислювальної природи, розроблений метод їхньоп виділення і проведена ідентифікація. Розроблено нову технологій одержання комплексного нового пробіотика на тлі аерококів, визначен оптимальні концентрації компонентів пробіотика. Доведена йогс ефективність на експериментальних моделях гнійно-запальних захворюваш у тварин.

Практичне значення отриманих результатів. Підібране компоненти для створення нового пробіотика на тлі аерококів. Виділено, розділено й ідентифіковано раніше невідомі в аерококів антагоністичне активні екзопродукти. Визначено вплив умов вирощування на антагоністичну активність аерококів, показана їх інгібуюча дія на анаероби її інші збудники гнійно-запальних інфекцій. Отримані результати стали основою звіту про доклінічні іспити нового пробіотика. Матеріали дисертації використовуються у Дніпропетровському державному університеті в навчальних програмах по мікробіології при читанні лекцій і проведенні практичних занять, присвячених нормальній мікрофлорі організму людини.

Особистий внесок здобувача. Дисертантом самостійно проведений аналіз даних літератури з фізіологічних, біохімічних, антигенних і антагоністичних властивостей бактерій роду Аегососсш, а також зроблений огляд з сучасних пробіоткчних препаратів і аспектів їхнього використання. Автором самостійно проведене вивчення аерококового екзогенного комплексу (АЕК), його антагоністичні властивості і розроблена технологія одержання нового пробіотичного препарату, що включає аерококи, АЕК і

:инергійні хіміотерапевтичні препарати (йодид калію, оксолінієву кислоту га етоній). Самостійно досліджена ефективність нового пробіотика "in vitro" і "in vivo". Автор самостійно виконав статистичну обробку отриманих результатів, проаналізував'їх і опублікував.

Апробація роботи. Основні положення дисертації повідомлені й обговорені на: науково-практичній конференції "Пробіотики XXI століття", Харків, 2000; " Пленуму УНМТМЕП ім. Д.К.Заболотного", Одеса, 2000; міжнародній конференції “Стратегія і тактика застосування антисептиків у медицині", Вінниця, 2000; "Нараді-семінарі з актуальних проблем епідеміології, діагностики та профілактики інфекційних хвороб", Тернопіль, 2000; науково-практичних конференціях Дніпропетровського обласного товариства епідеміологів, мікробіологів і паразитологів, 1998, 1999, 2000.

Публікації. По темі дисертації опубліковано 14 наукових праць, у тому числі 4 - у журналах, одна монографія (у співавторстві), дві методичні рекомендації, затверджені МОЗ України (у співавторстві).

Обсяг і структура роботи. Робота викладена на 125 сторінках, включає вступ, огляд літератури, розділ матеріалів і методів досліджень, три глави власних досліджень, розділ аналізу й узагальнення отриманих результатів, висновки і практичні рекомендації, список використаних літературних джерел (101 вітчизняних і 98 закордонних авторів). Робота ілюстрована 27 таблицями і 15 рисунками.

ОСНОВНИЙ ЗМІСТ РОБОТИ Матеріали, методи н обсяг досліджень. Основний обсяг робіт виконано на кафедрі мікробіології, вірусології та імунології Дніпропетровської державної медичної академії, мікробіологічної лабораторії обласної санітарно-епідеміологічної станції

м. Дніпропетровська, і в лабораторії протимікробних засобів Інституту мікробіології й імунології ім.І.І.Мечникова. Дослідження ефективності А-бактерину в комплексі з "етоксо" і антисептиками, що містять йод, було

проведено на базі обласної клінічної лікарні ім. 1.1.Мечникова разом з к.м.н. Р.М.Молчановим і 2-ї міської лікарні м. Дніпропетровська разом з к.м.н.

В.І.Чуйко.

Була вивчена біологічна активність 12 штамів аерококів. Перевірено їхню антагоністичну активність у відношенні збудників гнійно-запальних інфекцій (музейних культур, культур, виділених від хворих), 88 культур кандид, виділених при урогенітальних захворюваннях. Експериментальне (доклінічне) вивчення аерококового екзогенного антагоністичного комплексу (АЕК) для місцевого лікування гнійних ран було проведено на 80 білих мишах, ЗО кроликах.

Результати власних досліджень. На першому етапі вивчали розмноження аерококів і ступінь продукції ними перекису водню в умовах нестрогого анаеробіозу (40 мм рт.ст.) при посіві культури на м’ясо-пептонний бульйон, тому що саме умови нестрогого анаеробіозу найбільш характерні для порожнин організму, що сполучаються з зовнішнім середовищем.

Досліджувані аерококи відрізнялися різним рівнем продукції водень пероксиду. До групи Сі минулого включені аерококи з підвищеним рівнем утворення водень пероксиду (2-3 мкМ); до групи С2 - аерококи зі зниженою здатністю до продукції Н202 (0,1-0,5 мкМ).

Аерококи групи С] розмножувалися активно й в умовах нестрогого анаеробіозу, досягаючи кінцевої концентрації 2,3±0,3*106 (80% від контрольного посіву), виділяючи при цьому значні кількості водню пероксиду (1-1,5 мкМ), але завжди менше, ніж при нормальному парціальному тиску Ог. На відміну від групи сильних продуцентів Н202 на розмноження аерококів із групи слабких продуцентів Н202 (С2) і утворення ними Н202 умови обмеження доступу кисню практично не мали гнітючого впливу. Аерококи з групи С2 розмножувалися так само добре, як і в

контрольних посівах 4,7±0,7*10б, виділяючи при цьому водень пероксид майже в таких же кількостях, як і в умовах аеробіозу (0,1 -0,5 мкМ).

Була вивчена антагоністична активність аерококів двох груп у відношенні тест-культури V. NAG 2568 в аеробних умовах і в умовах нестрогого анаеробіозу (40 мм рт.ст.)(табл.1).

У культур аерококів групи Сь вирощених в умовах нестрого анаеробіозу, антагоністична активність трохи знижується. Про це свідчить зменшення діаметра зони затримки росту тест-мікроба. Він дорівнює 45,2+1,1 мм в анаеробних і 54,6±1,07 - в аеробних умовах. Розходження у величині зон антибактеріальної дії групи аерококів-міцних продуцентів Н202 в аеробних і анаеробних умовах істотно ( р<0,01).

На антагоністичну активність аерококів із групи слабких продуцентів Н2О2 (С2) нестрогий анаеробіоз не робив впливу. Зони антибактері&іьної дії культур, вирощених у даних умовах, були такими ж, як

і при нормальному атмосферному тиску (діаметри зон дорівнювали відповідно 14,3 і 14,4 мм). Розходження у величині зон зазначеної групи аерококів (32) у різних кисневих режимах несуттєві ( р>0,5).

Проведені дослідження дозволяють зробити висновок, що аерококи-антагоністи здатні розмножуватися і виділяти перекис водню і зберігати антагоністичну активність в умовах обмеженого доступу кисню.

Була уточнена схема утворення водень пероксиду в аерококів. До схеми, запропонованої Г.М.Кременчуцьким (1989) та Л.Г.Юргель (1997) була додана ділянка окислювання а-гліцерофосфату з утворенням супероксидного радикала і водень пероксиду при одно- і двохелектронному • відновленні 02 (рис.1).

Таблиця 1

Антагоністична активність культур аерококів-продуцентів Н202,

Аерококи Діаметри зон (мм) придушення Достовір-

росту У.ИАС при культивуванні в ність

умовах: відмінностей

Група № штаму 760 мм рт.ст. 40 мм рт.ст.

8 45,2±0,8 32,6+0,7

20 53,2±1,2 45,0+1,3

167 60,3±1,0 45,5+1,3

182 60,6±1,5 46,9+1,7

С, 190 58,1±0,9 47,5±1,3

193 44,8±1,0 40,6±0,6

195 47,0±1,0 42,6+0,8

196 ' 62,211,1 54,210,9

197 60,4+1,2 52,4±1,2

М±т 54,6±1,07 45,2+1,1 р<0,01

10 14,1+0,7 14,1 ±0,7

14 14,3±0,6 14,3±0,6

14а 14,0+0,6 14,1+0,7

с 167а 14,3±0,6 14,0+0,6

'-'2 110 14,0±0,5 14,0+0,5

104 15,0+0,6 14,8±0,6

188 15,3±0,7 15,1±0,7

189 14,7+0,7 16,3±1,7

194 12,7+0,6 12,9±0,5

М+т 14,3±0,6 14,4±0,73 р>0,5

глюкоза DL-тюеонін ос-гліцерофосфат

02

сс-гліцерофосфат

оксидаза

о2-

Н2 02

дигідроксиацетонфосфат

метилглюксаль

D-л; 02 <J—і

Лактатоксидаза

н2о2

ктат

<5—о2

У

пируват

Гліоксалаза I Гліоксалаза II

Лактатоксидаза

ог

Суперосиддисмутаза

Н202

Рис 1. Схема продукції аерококами Н202 та 02

Ми спробували встановити залежність антибактеріальної активності аерококів від вмісту в середовищі органічних і неорганічних з'єднань. Вивчалася залежність антагоністичної активності аерококів від вмісту в середовищі неорганічних з'єднань, які містять йод: йодиду калію, йодиду натрію, а також сполучна дія йодиду калію з крохмалем, дигідроксиацетоном, гліцерофосфатом; і органічних з'єднань, які містять йод: тироксину, ацетилхоліну йод, бутирилхоліну йод.

Також нами досліджувався вплив антисептиків, які містять йод: йодоформу, йодинолу, йодонату, полівідон-йоду, йодопирону на антагоністичну активність, аерококів. У якості тест-мікроорганізмів використовували штами: E.coli N 844, К.pneumoniae N 390, S.typhimurium N 866, S.flexneri, S.aureus N 209, Vibrio NAG P 6078, P.aeruginosa, C.albicans.

Як видно з даних, наведених у табл.2, при введенні в середовище МПА йодиду калію в концентраціях 10, 100 і 200 мкг/мл не спостерігається посилення антагоністичної активності аерококів у відношенні досліджуваних тест-мікроорганізмів. При концентрації йодиду калію в середовищі, що дорівнює 400 мкг/мл, значно зростає антагоністична активність у відношенні E.coli, K.pneumoniae, S.typhimurium, S.flexneri,

S.aureus, Vibrio NAG, P.aeruginosa і C.albicans. Очевидно, відбувається взаємодія йодиду калію з водень пероксидом при участі пероксидази з утворенням більш сильного антагоністично активного продукту -гіпойодиду. Та ж закономірність спостерігалася при введенні в живильне середовище речовин, які містять йод, у тому числі антисептиків, які містяті йод.

Ми досліджували чутливість аерококів до деяких антибіотиків хіміопрепаратів, які використовуваються для лікування інфекцій Установлено, що існує ряд препаратів, до яких у аерококів є природне стійкість: амфотерицин, поліміксин, грамурін, хіноксидін, диоксидин невиграмон, борна кислота, водню пероксид, димексид, етоній, хлорамін.

и

Таблиця 2

Вплив різної концентрації йодиду калію (Ю) на антагоністичну активність Аєгососсііб уігісіапз №167. Діаметр зон відсутності росту (мм).

Найме- нування мікроор- ганізму Контроль без Ю Концентрація KJ в МПА (мкг/мл)

10 100 200 400 800 1000

Е.соїі Р 6,1+0,2 6,11+0,2 >0,05 6,0+0,25 >0,05 6,0+0,25 >0,05 19,6+0,1 <0,01 27,0+0,2 <0,01 44,10+0,2 <0,01

K.pncu moniae Р 5,4+0,2 5,44+0,2 >0,05 5,1+0,17 >0,05 5,44+0,2 >0,05 18,2+0,2 <0,01 19,6+0,16 <0,01 43,9+0,2 <0,01

S.typhi -inuriu Р 9,4+0,2 9,4+0,2 >0,05 9,4+0,22 >0,05 9,4+0,22 >0,05 24,0+0,2 <0,01 44,7+0,15 <0,01 44,7+0,1 <0,01

S.flex- neri р 7,5+0,2 7,50+0,2 >0,05 7,2+0,3 >0,05 7,5+0,2 >0,05 44,1+0,2 <0,01 44,8+0,1 <0,01 44,8+0,1 <0,01

S.aureus P 11,9+0,2 11,9+0,2 >0,05 11,6+0,3 >0,05 11,9+0,2 >0,05 20,7+0,1 <0,05 26,5+0,15 <0,05 44,8+0,1 <0,01

Vibrio NAG P6078 P 28,3+0,2 28,3+0,2 >0,05 29,0+0,2 >0,05 28,3+0,2 >0,05 34,0+0,3 <0,05 44,5+0,16 <0,01 44,50+0,1( <0,01

P.aeru- ginosa P 7,0+0,2 7,0+0,21 >0,05 7,20+0,2 >0,05 7,20+0,2 >0,05 8,80+0,1 >0,05 9,7+0,21 <0,05 9,70+0,2 <0,05

C.albicans P 3,5+0,! 3,50+0,1 >0,05 3,70+0,2 >0,05 3,70+0,2 >0,05 5,50+0,2 >0,05 6,20+0,2 <0,05 6,80+0,2 <0,05 I

У результаті скринінгу найбільш ефективних у відношенні патогенної мікрофлори антибіотиків, хіміопрепаратів, антисептиків удалося підібрати антимікробну комбінацію грамурину і етоиію ("етоксо"), який володіє широким антибактеріальним спектром. У той же час дана комбінація не робить антимікробної дії на аерококи, що входять до складу А-бактерину,

що дає можливість одночасного застосування грамурину і етонію з А-бактерином.

У процесі роботи з культурами аерококів, вирощеними на рідкому і щільному живильному середовищах, було встановлено, що в культуральних рідинах, у супернатантах при їхніх змивах із твердих живильних середовищ накопичував екзопродукт, висолюваний при 70%-вому насиченні середовищ вмісту сульфатом амонію у вигляді пластівчастої маси. Пластівчаста маса володіє вираженою антагоністичною активністю у відношенні багатьох видів мікроорганізмів, у тому числі і у відношенні грамнегативних патогенних і умовно-патогенних бактерій, зокрема, протеїв, шигел, сальмонел та ін.

Виявилося, що кип'ятіння і виварювання розчинів АЕК не впливало на їхні антагоністичні властивості, а при діалізі речовина з антагоністичними властивостями проникала через целофанову напівпроникну мембрану, що свідчило про його низькомолекулярний склад. Високий вміст АЕК було виявлено в зразках лікувально-профілактичного препарату А-бактерину. Амінокислотний склад АЕК, позитивно зарядженого електродіалізату АЕК та виділеної активної фракції АЕК (АФ) (рис.2), визначався на автоматичному аналізаторі амінокислот ААА-881 /Мікротехніка, Прага/. У їхньому складі визначалися як вільні, так і зв'язані амінокислоти. Найбільша кількість амінокислот визначалася в АЕК, а найменша - в АФ. Зіставляючи концентрації зв'язаних амінокислот АЕК і АФ можна відзначити, що чотири амінокислоти: валін, фенілаланін, лізин і гістидін у зв'язаному виді переходять з АЕК в АФ з найменшим падінням концентрації. Антагоністична активність АЕК у відношенні чуттєвих тест-культур виявлялася в розведенні (1:10000).

Була перевірена терапевтична цінність АЕК і його похідних при експериментальній стафілококовій і синьогнійній інфекції в безпородних білих мишей при підшкірному зараженні. Чітко виражені симптоми

місцевого запалення (гіперемія, набряк тканин, ущільнення шкіри, наявність гною при розкритті) розвивалися в мишей, заражених Б/аигеиБ 209, на 2-гу-З-тю добу після зараження і зберігалися протягом 10-13 днів. 60 білим мишам уводилася підшкірно мінімальна доза стафілококу, що інфікує. З моменту зараження тварин починалося п/ш введення АЕК електродіалізату «+» і АФ у дозі 1 ОД, і культури аерококів (2 млрд клітин на одне введення). Проводилося спостереження за часом появи місцевій симптомів хвороби й інтенсивністю їх розвитку. АЕФ, електродіалізат"+", АФ і аерококи, введені під шкіру, після введеїшя стафілококів, перешкоджали розвитку інфільтрату в порівнянні з контрольною групою.

Для експериментального дослідження впливу біопрепаратів А-бактерину, АЕК і антибактеріального комплексу "етоксо" у порівнянні з пробіотнками балізом і томіцидом на загоєння ран ми використовували модель гнійної урологічної рани, розробленої Р.М.Молчановим (1992), на білих пацюках лінії \Vistar.

Аналіз отриманих нами результатів показав, що при використанні А-бактерину, АЕК і "етоксо" для місцевого лікування гнійних ран в експерименті спостерігається більш швидке загоєння ран, ніж у випадку застосування балізу та томіциду (у середньому на 5-6 днів).

Результати використання А-бактерину для лікування гнійно-запальних ускладнень післяопераційних ран показали, що для досягнення максимального антимікробного ефекту препарату необхідна попередня деконтамінація ран за допомогою розчину "етоксо". На початку протягом двох діб на рани хворих накладалися пов'язки, змочені в розчині "етоксо". Починаючи з третьої доби, використовували пов'язки, змочені в розчині А-бактерину (10 доз). При ускладненнях ран III ступеня їхні порожнини тампонували марлевими серветками, змоченими зазначеними антибактеріальними розчинами.

Рис 2. Хроматограма АФ АЕК штамів 167 та 167 VII. Біопроявлення УЛ^Ай р-6078

Лікування гнійно-запальних ускладнень післяопераційних ран здійснювали в 64 хворих: раневі ускладнення І групи констатували у 14 (21,9%) пацієнтів; II - у 18 (28,1%); ускладнення III групи розвилися в 32 (50,0%) хворих.

Після застосування "етоксо" протягом двох діб у всіх випадках відзначали очищення ран, що починається від гнійно-некротичних мас. При ускладненнях І і II ст. відзначалося зменшення гіперемії й інфільтрації у ділянці шва, кількості серозно-гнійного відокремленого.

З початком застосування А-бактерину на 3-тю - 4-ту добу іастосування препарату відбувалося повне очищення поверхні ран від гнійно-некротичного ексудату, поява соковитої грануляційної тканини в 20 хворих з ускладненнями І, 11 ст. На 5-ту добу очищення ран відбулося у 12 хворих з ускладненнями III ст. Очищення ран у хворих, що одержували традиційне лікування, відбулося лише на 8-му-9-ту добу. У пацієнтів, що одержували традиційне лікування, інфільтрати в ділянці ран зберігалися до 10-11-ї доби. У контрольній групі іноді ускладнення І ст. змінювалися II ст., що не спостерігалося в хворих, яких лікували А-бактерином.

Для мікробіологічного підтвердження колонізації ран аерококами, що входять до складу А-бактерину, робили висів раневого ексудату на селективно-індикаторне середовище (Г.М.Кременчуцький та співавт., 1989). Відзначено, що в 100% випадків після лікування А-бактерином аерококи з ран висівали до 7-ї доби після закінчення застосування препарату.

Отримані результати свідчать про доцільність комбінованого застосування "етоксо" і А-бактерину для лікування гнійних ран. При їхньому спільному використанні спостерігається не тільки виражене зниження патогенної мікрофлори в ранах, але і заселення раневої поверхні аерококами, що перешкоджають реінфікуванню рани.

У процесі комбінованого лікування гнійних ран "етоксо" і А-бактерин вироблялося гістологічне дослідження біоптатів тканин з ран до лікування, на 3-тю, 5-ту, 7-му і 14-ту добу з початку застосування препаратів.

Патоморфологічні дослідження підтвердили наявність прискорення репаративних процесів у гнійній рані у хворих, що одержували комбіноване лікування - "етоксо" та А-бактерин, у порівнянні з такими в пацієнтів, що отримували традиційну терапію.

У наших дослідженнях установлено, що представники роду Аегососсш колонізують слизову родових шляхів і зовнішніх статевих органів, маючи адгезію до піхвового епітелію. Це послужило підставою для

використання А-бактерину в лікувально-профілактичних цілях у вагітних перед пологами з вогнищами урогенітальної інфекції і наявністю дисбіозу в біоценозі родових шляхів.

Нами запропонована можливість деко>ггамінації родових шляхів за допомогою антибактеріального комплексу "етоксо", що володіє селективною дією у відношенні умовно-патогенної мікрофлори, з наступним внесенням у піхву аерококів (деконтамінаційно-замісний метод (ДЗМ).

ДЗМ проводили в ЗО вагітних жінок у термін 38-40 тижнів з вогнищами інфекції і наявністю декомпенсованих форм дисбіозу (2-га підгрупа). До 1-ї групи відносилися вагітні, котрі одержували традиційні методи профілактики. Контингенту вагітних (2-ї групи) із запальними захворюваннями сечовивідних шляхів після встановлення діагнозу і визначення чутливості виділених бактерій із сечі до антибактеріальних препаратів, санація сечовивідного тракту проводилася до етапу введення аерококів.

У породілей 2-ї підгрупи на початку післяпологового періоду в 1,5 разу зменшувалася частота дисбіозу, у порівнянні з 10-ю добою санації перед родами, і до кінця спостереженого пуерперію зниження дисбіозу досягало 2,3 разу. Прн цьому в 3,5 разу зростала частота компенсованих форм дисбіозу, що до 5-6-ї доби зустрічалися в 5,5 разу частіше. Отримані дані вказують на поліпшення в стані мікробіоценозу піхви в породілей, сапованих ДЗМ, за рахунок компенсованих форм дисбіозу, на відміну від групи вагітних, котрі одержували традиційні методи профілактики. Вивчення результатів санації родових шляхів у вагітних з УГІ і наявністю дисбіозів у мікробіоценозі піхви з використанням антибактеріального препарату "етоксо" і А-бактерину показало перевагу даного методу перед традиційними. Застосування препарату "етоксо" веде до прискореного очищення слизових від ПМ і УПМ, селективної дії у відношенні сапрофітної мікрофлори, а застосування аерококів створює сприятливий

мікробіологічний стан родових шляхів перед пологами з імуномодулючим ефектом, вираженим на місцевому рівні, що веде до зниженім ризику розвитку запальних ускладнень у післяпологовому періоді у вагітних інфекційного ризику.

Була вивчена чутливість до антибіотиків, А-бактерину і комплексу (А-бактерин, Ю, етоній) у 88 штамів кандид, виділених у хворих з кандидозами різної локалізації. Установлено, що найбільша антагоністігчна дія на кандиди робить комплекс (А-бактерин, КІ, етоній). Ефективність комплексу була підтверджена при лікуванні урогенітального кандидозу в 15 жінок.

Таким чином, використання аерококів у складі А-бактерину в комплексі з "етоксо", КІ, і етонієм дозволяє ефективно боротися з гнійно-запальними захворюваннями різної локалізації і різного генезу.

ВИСНОВКИ

1. Вивчені штами аерококів, у тому числі і виробничий штам № 167, зберігають продукцію водень пероксиду й антагоністичну активність в умовах відносного анаеробіозу (40 мм рт. ст.).

2. Виявлено ділянку додаткової продукції водень пероксиду в аерококів, де відбувається окислювання а-гліцерофосфату а-гліцерофос-фатоксідазою з одно- і двоелектронніїм відновленням 02.

3. Установлено природну стійкість аерококів до антибактеріального комплексу "етоксо". Показано потенціірующу дію "етоксо" на антагоністичну активність аерококів.

4. Антисептики, що містять йод, різко підсилюють силу і розширюють спектр антагоністичної активності аерококів, що є обгрунтуванням їхнього комплексного застосування з А-бактерином.

5. У процесі життєдіяльності аерококи продукують складний екзокомплекс (АЕК) із широким спектром антагоністичної активності, що зберігається в розведенні 1:10 000. Окремо взятий АЕК - ефективний при

лікуванні експериментальних стафілококової, синьогнійної і сальмонельозної інфекцій.

6. Метод деконтамінаційно-замісної терапії при лікуванні гнійно-запальних інфекцій різної локалізації і різного генезу з використанням А-бактерину, "етоксо", KJ та етонію є більш ефективним, ніж методи стандартної терапії. '

ПРАКТИЧНІ РЕКОМЕНДАЦІЇ

1. Для лікування і профілактики гнійно-запальних інфекцій А-бактерин доцільно застосовувати в комплексі з "етоксо", KJ та етонієм, використовуючи метод деконтамінаційно-замісної терапії.

2. Доцільна розробка лікарських форм пробіотика АЕК, який має широкий спектр антагоністичної дії на збудників гнійно-запальних захворювань, а також підвищення його вмісту в складі А-бактерину.

3. Доцільне застосування А-бактерину в комплексі з антисептиками, що містять йод, для лікування і профілактики гнійно-запальних інфекцій, у тому числі і кандидозних інфекцій.

СПИСОК РОБІТ, ОПУБЛІКОВАНИХ ПО ТЕМІ ДИСЕРТАЦІЇ

1. Свистун А.І., Риженко С.А., Федотов В.П. Актуальні проблеми епідеміології, діагностики, клінічних проявів захворювань, які передаються статевим шляхом у жінок, що страждають на запальні процеси сечостатевих органів//Український медичний альманах.-1999.-Том 2, № 1 (Додаток).-С. 104-105

2. Риженко С.А., Свистун А.І., Федотов В.П. Клінічні особливості, діагностика і стан імунного статусу у вагітних, які страждають на урогенітальний кандидоз//Український медичний альманах.-1999.-Том 2, № 1 (Додаток).-С.85-86.

3. Головкін В.В., Риженко С.А., Свистун А.І., Свєташов О.М. Фармакотехнологічні аспекти розробки і дослідження вагінального гелю на

існові гіалуронату цинку//Дерматовенерологія, косметологія, ексопатологія.-2000.-№ 1 (З).-С .12-1 б

4. Кременчуцький Г.М., Риженко С.А., Волянський А.Ю., Молчанов ’.М.,Чуйко В.І. А-бактерін у лікуванні і профілактиці гнійно-запальних [роцесів:Монографія.-Дніпропетровськ: Пороги, 2000.-150 с.

5. Кременчуцький Г.М., Риженко С.А., Кошева І.ГІ., Медінська О.М., [улішенко С.Г., Шарун А.В. Дослідження антагоністичних метаболітів, редукованих АегососсиБ - УІгіс1ап5//Вісник Вінницького державного іедичного університету.-2000.-Том 4, №2.- С.318-319.

6. Кременчуцький Г.М., Коростельова О.А., Боброва С.Е., иженко С.А. Мікробіологічний пейзаж клінічних ізолятів за даними ІБАКЛ за 1999 р.//Актуальні проблеми медиціши.-Том 1.-С.37-38.

7. Кременчуцький Г.М., Риженко С.А., Бицький В.В., Шарун Е.М, 'урлюн С.А., Дрозд Т.Е., Юргель Л.Г., Коніева І.П., Медінська О.М. астосування нового пробіотика А-бактеріну в лікуванні гнійно-септичних

з запалювальних хвороб кожи та слизкових оболонок нестерільних орожнин організму лгоди ни//Мате ріал н Пленуму УНМТМЕП ім. ^.К.Заболотного.-Одеса, 2000.-С.81 -82.

8. Риженко С.А., Смотрова Н.Г., Кременчуцький Г.М., Чуйко В.І., улішенко С.Г. Розробка індікаторних середовищ для мікрорганізмів, ающих оксидазну активність//Матеріали Пленуму УНМТМЕП ім. .ІС.Заболотного.-Одеса, 2000.-С.87-88.

9. Риженко С.А., Кременчуцький Г.М. Дослідження механізму гтикандидозної дії А-бактеринуа,//Актуальні проблеми медицини.-Том 1.. 43-44.

10. Риженко С.А., Кременчуцький Г.М., Прядко Л.О., Абросимова Н.О. ивчення поширення кандид у Дніпропетровській області//Матеріали )бочої наради-семінару з актуальних проблем епідеміології, діагностики та зофілактики інфекційних хвороб.-Тернопіль-Київ,-2000.-С.21

11. Риженко С.А., Ісаєв В.І., Курилов Є.М. Пріоритетні напрями профілактики інфекційних захворювань у Дніпропетровській області шляхи підвищення ефективності роботи фахівців епідвідділів//Матеріал! робочої наради-семінару з актуальних проблем епідеміології, діагностики т; профілактики інфекційних хвороб.-Тернопіль-Київ,-2000.-С.36-37.

12. Риженко С.А., Ісаєв В.І., Прядко Л.О., Лучкіна Т.М. Про заходи дш підвищення результативності санітарно-мікробіологічних досліджень/ Матеріали робочої наради-семінару з актуальних проблем епідеміології діагностики та профілактики інфекційних хвороб.-Тернопіль-Київ,-2000.

С.37-38

Методичні рекомендації, затверджені МОЗ України:

13. Лабораторна діагностика гнійнс-запальних захворювань обумовлених аспорогенними анаеробними мікроорганізмами,- Харків, 2000. 36 с. (у співавторстві).

14. Лабораторна діагностика та діагностичні критерії змішаних гостри? кишкових інфекцій:- Харків, 2000.- 52 с. (у співавторстві).

АНОТАЦІЯ

Риженко С.А. Ефективність пробіотиків на тлі аерококів і боротьбі з гнійно-запалювальними захворюваннями. Рукопис.

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата медичнії: наук за спеціальністю 03.00.07 - мікробіологія.- Харківський науково дослідний інститут мікробіології та імунології ім І.І.Мечнікова МОП Україші.Харків, 2000.

Дисертація присвячена оцінкі ефективності нових аерококовж пробіотиків та продуктів їхньої життєдіяльності і синергідни;

хіміотерапевтичніх препаратів у боротьбі з гнійно-запальними захворюваннями. В роботі установлена закономірность продукції водень пероксида різними штамами аерококів і визначена ступінь його антагоністичного впливу на збудників гнійно-запальних процесів у залежності від умов культівування. Здійснено підбор хіміотерапевтичних препаратів і визначено їхні оптимальні дози, що підвищують антагоністичну цію азрококков у відношенні збудників гнійно-запальних процесів. Визначена ступінь продукції азрококками антагоністично активних речовин неокислювальної природи, розробленії методи їхнього виділення, поділи й ідентифікації. Оцінена ефективність антагоністично активних речовин неокислювальної при роди на моделях експериментальних інфекційу тварин. Розроблена технологія одержання нового пробіотика, визначенії оптимальні концентрації його складових: аерококів, продуктів їхньої життєдіяльності і сінергідних хіміотерапевтичиіх препаратів з метою забезпечення високої антагоністичної активності у відношенні збудників гнійно-запальних процесів. Визначена ефективність пробіотіка А-бактеріна в комплексі із сінсргідними хіміотерапевтичними препаратами при лікуванні і профілактиці гнійно-запальних захворювань. Доведена можливість :творення пробіотика нового покоління на базі аерококів і нових компонентів, що забезпечують високу ефективність у боротьбі з гнійно-запальними захворюваннями. Установлена а-гліцерофосфат оксідазна активність азрококков, що ініціює продукцію водень пероксида. Уперше визначена дія йодистих з'єднань, що активує антагоністичну активність аерококів. Обґрунтована можливість застосування аерококів в умовах відносного анаеробіозу, ефективність на експериментальних моделях гнійно-запальних захворювань у тварин.

Ключові слова: А-бактерін, пробіотіки, аерококі, умовно-патогенні мікрорганізми, антагонізм, пероксід водню.

22 .

АННОТАЦИЯ

Риженко С.А. Эффективность пробиотиков на основе аерококко! в борьбе с гнойно-воспалительными заболеваниями. - Рукопись.

Диссертация на соискание ученой степени кандидат: медицинских наук по специальностью 03.00.07 микробиология. Харьковский научно-исследовательский институт микробиологии I иммунологи им. И.И.Мечникова М3 Укранны.Харьков, 2000.

Диссертация посвящена оценке эффективности новы> аэрококковых пробиотиков, продуктов их жизнедеятельности I

сннергидных химиотерапевтических препаратов в борьбе с гнойновоспалительными заболеваниями.

Установлены закономерности продукции водород пероксида разными штаммами аэрококков и определена степень его антагонистического воздействия на возбудителей гнойно-воспалительных процессов в зависимости от условий выращивания.

Осуществлен подбор химиотерапевтических препаратов и определены их оптимальные дозы, повышающие антагонистическое действие аэрококков в отношении возбудителей гнойно-воспалительных процессов. Определена степень продукции аэрококками антагонистически активных веществ неокислительной природы, разработаны методы их выделения, разделения и идентификации. Оценинена эффективность антагонистически активных веществ неокислительной природы на моделях экспериментальных инфекций у животных.

Разработана технология получения нового пробиотика, определены оптимальные концентрации его составляющих: аэрококков, продуктов их жизнедеятельности и синергидных химиотерапевтических препаратов с целью обеспечения высокой антагонистической активности в отношении возбудителей гнойно-воспалительных процессов. Определена

эффективность пробиотика А-бактерина в комплексе с синергидными

имиотерапевтическими препаратами при лечении и профилактике гнойно-оспалительных заболеваний.

Установлена а-глицерофосфат оксидазная активность аэрококков, нициирующая продукцию водород пероксида. Впервые определено ктивирующее действие йодистых соединений на антагонистическую ктивность аэрококков. Обоснована возможность применения аэрококков в словиях относительного анаэробиоза. Подобраны компоненты для создания гового пробиотика на базе аэрококков.

Была изучена чувствительность к антибиотикам, А-бактерину и :омплексу (А-бактерин, KJ, этоний) у 88 штаммов кандид, выделенных у вольных с кзндидозами разной локализации. Установлено, что наибольшее нтагонистическое действие на кандвды оказывает комплекс (А-бактерин, yj, этоний). Эффективность комплекса была подтверждена при лечении ■рогенитального кандидоза у 15 женщин.

Ключевые слова: А-бактерин, аэрококки, условно-патогенные бактерии, пробиотики, антагонизм, водород пероксид.

SUMMARY

Rigenko S.A. Efficiency of probiotics on a basis of aerococci in struggle vith purulent - inflammatory diseases. - Manuscript.

The dissertation on obtaining of scientific degree of the candidate of nedical sciences on a speciality 03.00.07 - microbiology.- Research institute of nicrobiology and immunology named by I.I.Mechnikov, Kharkov, 2000.

The dissertation is devoted to an estimation of efficiency new probiotics rom aerococci, products of their ability to live and synergic chemo-therapeutic reparations in struggle with purulent - inflammatory diseases.

The levels of production of hydrogen peroxide by different species of lerococci are established and the degree of its antagonistic influence on nicroorganisms induced purulently - inflammatory processes is determined iepending on conditions of cultivation. The selection chemo-therapeutic reparations is carried out and their optimum dozes raising antagonistic action of

aerococci concerning microorganisms induced purulent - inflammatory processes are determined. The degree of production by aerococci antagonistic substances of a not oxidizing nature is determined, the methods of their allocation, division and identification are developed. Efficiency antagonistic activity ol substances of a not oxidizing nature on models of experimental infections at an animal is established.

The sensitivity to antibiotics, A-bacterinum and complex (A-bacterinum, KJ, ethonium) at 88 species of candids, allocated at the patients with candidosis of different localization was investigated. Is established, that the greatest antagonistic action on candids renders a complex (A-bacterinum, KJ, ethonium). The efficiency of a complex was confirmed at treatment of urogenous candidosis at 15 women.

Key words: A-bacterinum, aerococci, antagonism, hydrogen peroxide, ' conditional-pathogenic bacteria, probiotics.