Комбинированный пробиотический препарат Бактистатин и его эффективность при желудочно-кишечных болезнях сельскохозяйственных животных

Волков, Михаил Юрьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Комбинированный пробиотический препарат Бактистатин и его эффективность при желудочно-кишечных болезнях сельскохозяйственных животных
ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Комбинированный пробиотический препарат Бактистатин и его эффективность при желудочно-кишечных болезнях сельскохозяйственных животных"

На правах рукописи

Волков Михаил Юрьевич

Комбинированный пробиотический препарат Бактистатин и его эффективность при желудочно-кишечных болезнях сельскохозяйственных животных

03.00.23 - биотехнология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва - 2006

Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (ФГОУ ВПО МГАВМиБ)

Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Тихонов Игорь Владимирович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Мирзаев Микаиль Нурбагандович;

доктор биологических наук Ярыгина Елена Игоревна;

доктор технических наук, профессор, академик РАЕН, Нугманова Татьяна Алексеевна

Ведущая организация: Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Защита состоится^Й^сд 2006 года в «У?' » часов на за-

седании диссертационного совета Д.220.042.01 при ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23; тел. (495) 377-93-83.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО МГАВМиБ.

Автореферат разослан « ^» 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Грязнева Т.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Болезни, связанные • с нарушениями деятельности пищеварительного тракта животных и птиц, занимают одно из основных мест среди причин отхода молодняка. В этой связи разработка и внедрение в практику ветеринарии новых отечественных высокоэффективных биологических препаратов для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней (ЖКБ) животных и птиц является одной из наиболее актуальных задач биотехнологии (Панин А.Н., 2005; Самуйленко А Я., 2003).

Перспективным направлением в данной области, по мнению многих отечественных и зарубежных специалистов, является конструирование пробиотиков нового поколения, разработка и совершенствование технологии их производства: изучение питательных потребностей перспективных пробиотических штаммов с целью подбора питательных сред для их культивирования; выяснение роли продуктов метаболизма и биологически активных веществ (БАВ) микробной клетки для определения-природы адгезинов, механизма колонизации слизистой и антагонизма; разработка технологий изготовления комплексных препаратов на основе консорциумов бактерий с широким спектром антагонистической активности (Воронин Е.С., 2003; Малик Н.И., 2002; Fuller R., Gibson., 2000 идр.).

К пробиотикам нового поколения ученые относят биопрепараты с иммобилизованными пробиотическими штаммами и их метаболитами, а также синтетические композиции препаратов-аутостимуляторов, конструируемых на основе принципа "Quorum Sensing".

По мнению Бондаренко В.М. (2005), одним из наиболее современных направлений в конструировании и совершенствовании пробиотиков является применение метаболитов бактерий, иммобилизованных на ионообменной матрице, при этом микроорганизмы и БАВ длительно сохраняют свою активность в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ) животных.

Из представителей экзогенной микрофлоры бациллы и их метаболиты имеют ряд преимуществ, которые позволяют считать их наиболее перспективными в качестве основы пробиотиков нового

поколения (Сорокулова И.Б., 2000; Грязнева Т.Н., 2005). Эти бактерии (кроме B.anthracis и B.cereus), как правило, являются безвредными для организма животных даже в высоких концентрациях, обладают антагонистической активностью к широкому спектру патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, характеризуются высокой ферментативной активностью, что может обусловить существенное регулирование и стимулирование пищеварения; способны оказывать противоаллергенное и антитоксическое действие; технологичны в производстве и стабильны при хранении.

В связи с этим конструирование препаратов на основе метаболитов бацилл, комбинаций их с ионообменными матрицами и питательными компонентами для профилактики ЖКБ сельскохозяйственных животных представляет собой актуальную проблему.

Цель работы. Создание комбинированного препарата с пробио-тическим действием на основе безотходной технологии и оценка его лечебно-профилактической эффективности при желудочно-кишечных болезнях сельскохозяйственных животных.

Задачи исследования.

1. Обосновать компонентный состав препарата с пробиотическим действием и оценить биологические свойства его компонентов.

2. Выбрать метод выделения и концентрирования экзопродук-тов микробного синтеза B.subtillis ТПИ 13 по безотходной технологии.

3. Приготовить лабораторные образцы препарата и изучить его биологические свойства.

4. Усовершенствовать существующую технологию пробиотиков на основе бактерий рода Bacillus и определить методы контроля качества препарата.

5. Изучить лечебно-профилактическую эффективность препарата Бактистатин при ЖКБ разных видов сельскохозяйственных животных.

6. Рассчитать экономическую эффективность безотходной технологии препарата Бактистатин и его применения при ЖКБ животных.

7. Разработать и утвердить нормативную документацию на препарат Бактистатин и внедрить его в ветеринарную практику.

Научная новизна. Впервые на основе инактивированного фуга-та культуральной жидкости спорообразующего штамма B.subtilis ТПИ 13, иммобилизованного на природном цеолите в смеси с гид-ролизатом соевой муки и аэросилом, получен отечественный комбинированный препарат с пробиотическим действием Бакгистатин широкого спектра лечебно-профилактической эффективности, для ветеринарии.

Обоснована возможность использования в составе препарата эк-зопродуктов микробного синтеза B.subtilis, природного цеолита, гидролизата соевой муки (ГСМ) и аэросила.

Создана промышленная безотходная технология производства пробиотического препарата Бактистатин и пробиотиков Биоспорин и БИОД-5 на единой аппаратурно-технологичсской линии, за один технологический цикл, в различных лекарственных формах (сухой, таблетированной, капсулированной), с использованием отечественного технологического оборудования и материалов.

Определены биологические свойства-, препарата Бактистатин, отличающие его от существующих пробиотиков возможность его применения в комплексе с антибиотиками при инфекционных болезнях животных и птиц, в том числе при особо опасных зооантро-понозных заболеваниях; способность подавлять размножение сальмонелл, кандид и стафилококков; стимулировать рост лакто-бацилл и; бифидобактерий in vitro и в ЖКТ животных; улучшать перевариваемость кормов; проявлять адсорбционное, противовирусное, антитоксическое, иммуностимулирующее и адъювантное действия.

Показана высокая (96-100 %) лечебно-профилактическая эффективность готовых лекарственных форм препарата Бактистатин при ЖКБ телят, поросят, кур.

Научная новизна работы подтверждена положительным решением Российского агентства по патентам и товарным знакам по заявке № 2005138934 от 15.12.2005 г. «Препарат для лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта «Бактистатин».

Практическая значимость работы. В практику ветеринарии Российской Федерации внедрен первый отечественный комбинированный пробиотический препарат Бактистатин, обладающий

широким спектром лечебно-профилактической эффективности.

Разработаны и утверждены ТУ 9384-002-71368318-06 на препарат Бактистатин; промышленный регламент производства препарата Бактистатин в сухой, таблетированной и капсулированной формах (12.01.2006 г. № 3457); разработана инструкция по применению препарата Бактистатин для лечения и профилактики дисбакте-риозов ЖКТ и повышения естественной резистентности организма сельскохозяйственных животных.

В соответствии с порядком регистрации ветеринарных препаратов в Российской Федерации, нормативная документация и отчеты об испытании препарата Бактистатин прошли экспертизу в профильной лаборатории ФГУ ВГНКИ. Регистрационные испытания подтвердили соответствие показателей качества препарата Бактистатин требованиям ТУ (экспертное заключение от 11.09.2006).

На аппаратурно-технологической линии пробиотиков Биоспо-рин и БИОД-5 в Центре военно-технических проблем биологической защиты НИИ микробиологии МО РФ (ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ, г. Екатеринбург) создана безотходная технология производства препарата Бактистатин в различных лекарственных формах (акт внедрения от 20.12.2005 г.).

На телятах, поросятах и курах изучен механизм действия препарата Бактистатин. Дана оценка его влияния на микробиоценоз кишечника, обменные и иммунные процессы организма животных, показана высокая лечебно-профилактическая эффективность, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств Московской и Челябинской областей.

Протективное действие препарата Бактистатин на микрофлору организма животных при комплексном применении его с антибиотиками позволяет существенно снизить последствия химиотерапии.

Установленные противовирусные адсорбционные свойства препарата Бактистатин значительно расширяют спектр его лечебно-профилактической эффективности.

продуктах при помощи кондуктометричсского анализатора «Маль-тус~У» (МИ 2467-98) и «Хроматографическис параметры бактерий в биологических жидкостях, смывах и (Продуктах питания. Методика идентификации по количественному содержанию жирных кислот при помощи газовых хроматографов «Кристалл-2000М», «Хромпак СР 2002» и аналогичных» (МИ 2468-98), в которых изложены количественные и качественные методы исследований нормофлоры, выявления и идентификации патогенных микроорганизмов, для диагностики ЖКБ и дисбактериозов, а также оценки физиологического состояния по выявлению метаболизма жирных кислот (липидный обмен).

Разработаны и утверждены Комитетом по здравоохранению правительства Санкт-Петербурга методические рекомендации «Коррекция нарушений кишечного микробиоценоза пробиотиком на основе природного адсорбента» (от 26.04.2005 г.).

Результаты исследований по усовершенствованию технологии пробиотиков БИОД-5 и Биоспорини созданию безотходной технологии препарата с пробиотическим действием Бактистатин используются в учебном. процессе по дисциплине «Биотехнология» в ФГОУ ВПО МГАВМиБ имени К.И. Скрябина.

На защиту выносятся следующие положения и результаты.

1. Теоретическое и экспериментальное обоснование компонентного состава и формы выпуска препарата Бактистатин на основе инактивированной культуральной жидкости, содержащей экзопро-дукты метаболизма В.эиЫШэ ТПИ-13, иммобилизованные на природном адсорбенте-цеолите в смеси с гидролизатом соевой муки и аэросилом.

2. Промышленная безотходная технология производства пробиотиков Биоспорин, БИОД-5 и пробиотического препарата Бактистатин за один технологический цикл производства, на единой ап-паратурно-технологической линии.

3. Результаты лечебно-профилактической эффективности'комбинированного препарата с пробиотическим действием Бактистатин при желудочно-кишечных болезнях разных видов сельскохозяйственных животных.

4. Протективное действие препарата Бактистатина при ком-

плексном его применении с антибиотиком на модели острого инфекционного процесса.

Апробация результатов диссертации. Основные результаты диссертационной работы доложены и представлены в материалах IV Международной научной конференции «Методы кибернетики химико-технологических процессов» (Москва, 1994); научной конференции «Медико-биологические и профилактические проблемы адаптации населения к современным экологическим условиям жизни» (Архангельск, 1994); Всероссийской научной конференции «Диагностика, лечение и профилактика опасных инфекционных заболеваний» (Биотехнология. - Киров, 1998); Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 75-летию НИИ микробиологии МО РФ (Киров, 2003); научно-практической конференции, посвященной 55-летию образования Центра ВТП БЗ НИИ микробиологии МО РФ «Диагностика, лечение и профилактика инфекционных заболеваний. Эпидемиология. Микробиология. Биотехнология. Экология» (Екатеринбург, 2004); ГГ1 съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (Москва, 2005); Г1 Международной научно-практической конференции Медбиотек «Перспективы развития биотехнологии в России» (Пущино, 2005); VIII Международного Славяно-Балтийского научного форума "Санкт-Петербург — Гастро-2006"; Российской научно-практической конференции, посвященной 110-летию кафедры инфекционных болезней Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (Санкт-Петербург. 2006); Международном симпозиуме по ядерной, биологической и химической безопасности (Тампере, Финляндия, 2006).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 25 научных работ, из них 9 статей в научных журналах, 13 - в материалах научных конференций; методические рекомендации, утвержденные Комитетом по здравоохранению правительства Санкт-Петербурга; 2 главы книги «Питание, микробиоценоз и интеллект человека».

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 375 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию

научных выводов, список использованной литературы (362 источника, из которых 259 отечественных и 103 иностранных). Работа содержит 161 таблицу, 27 рисунков, 42 страницы приложений.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследований

Работа выполнена в период с 1994 по 2006 годы на кафедре биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ; в Центре ВТП БЗ НИИ микробиологии МО РФ (г.Екатеринбург); ФГОУ ВПО'«Уральская государственная академия ветеринарной медицины» (УГАВМ); научно-исследовательском испытательном центре медико-биологической защиты государственного научно-исследовательского института военной медицины МО РФ (НИИЦ МБЗ ГНИИ ВМ МО РФ, г.Санкт-Петербург); научно-производственной фирме ООО «Лаборатория технологии оздоровительных препаратов» (г. Санкт-Петербург). Эксперименты на животных проводили в ООО «Агрофирма-Ариант» (Еткульского района Челябинской области); СПХ «Новый мир» (Троицкого района Челябинской области); СПК «Птицефабрика Челябинская» (г.Челябинск), ЗАО СП «Медвежьи озера» (Московская область).

В работе была использована культура B.subtillis ТПИ 1307.06.21 - ДЕП/ВГНКИ, выращенная в биореакторах способом глубинного культивирования в жидкой питательной среде (ПС), и ее метаболиты.

Для определения антагонистической активности препарата Бак-тистатин использованы вакцинный штамм B.anthracis 71/12 Цен-ковского, 4 штамма E.coli, 3 - Lactobacillus, 2 - Bifidobacterium, 7 -Salmonella, 4 - S.aureus, 2 - Shigella, 2 - P.aeruginosa, 5 - Proteus, 2 - K.pneumoniae, 1 - C.freundii, 2 - Candida albicans, 2 - Campilobac-ter, M.luteus 109, штаммы ротавирусов Тиверваль и HRV-134 на культуре клеток почек зеленых мартышек.

Эксперименты проведены на 1340 белых беспородных мышах-самцах массой 10-12 г, 18-20 г, 20-24 г; 140 белых мышах линии Balb/C массой 18-20 г; 148 крысах-самках массой 130-150 г; 72 крысах-самцах линии ВИСТАР массой 145-150 г; 15 кроликах массой 2,0-2,5 кг; 40 телятах в возрасте 15-30 дней; 248 телятах в воз-

расте от I до 20 дней, 56 поросятах-сосунах, 165 поросятах-отъемышах; 58 ООО курах-несушках породы ломан белый 400-дневного возраста со средней живой массой более 2 кг. Исследовано более 400 гистосрезов органов и тканей экспериментальных животных при определении острой и хронической токсичности. Исследовано 235 проб фекалий животных (110 - телят, 95 - поросят. 30 - белых мышей) и 827 проб крови животных (143 - телят, 64 -поросят, 500 - кур, 70 - белых мышей и 50 крыс).

Культивирование B.subtillis проводили во флаконах (объемом 0,1 дм3) на качалках New Brunswick (США, модель G-53) в биореакторе марки «БИОР-0,1» при глубинном методе культивирования в течение 24 и 48 часов.

Концентрирование B.subtillis осуществляли с использованием сепараторов АСГ-ЗМБ, "Альфа-Лаваль" и "Вестфалия".

Приготовление кислотных гидролизатов белкового сырья проводили в эмалированных аппаратах объемом 0,15, 0,3, и 1,6 м3.

Сушку питательных основ (ПО) и ПС осуществляли на распылительных сушильных установках типа РСЛ-10, А1-ФМУ, УСП-2.

Анализ аминокислотного состава, содержание антибиотиков и ферментов проводили с использованием метода обращенно-фазовой ВЭЖХ системы LC-I0A фирмы „Shimadzu" (Япония).

Кинетику и температурные интервалы термического разложения ПО изучали на дериватографе фирмы „Shimadzu".

Для иммобилизации фугата применяли установку гранулирования и сушки типа 524Р-АК или сушильный шкаф LUC-1000.

Бактериологические исследования проводили по методу Блохи-ной И.Н.. Воронина Е.С. и др. (1990); антагонистическую активность определяли по Егорову Н.С. (1999); общее состояние экспериментальных животных, их активность, состояние шерстного покрова, массу тела, относительную массу внутренних органов изучали по методу Трахтенберга И.М. (1978); биохимические показатели сыворотки крови, мочи, органов и тканей животных, а также гематологические показатели определяли методами, описанными Западнюк И.В. с соавт. (1962); уровень клеточного и гуморального иммунитета, а также иммуностимулирующие свойства препарата изучали по методам Рыковой М.П. (1997); адсорбционную актив-

ность исследовали по ГОСТ 4453-74; острую, хроническую токсичность и адъювантные свойства препарата определяли по Соро-куловой И.Б. (1998); фагоцитарную активность нейтрофилов крови исследовали по Косту Е.А. (1999); бактерицидную активность сыворотки крови животных определяли по методу Кашкиной В.Н. (1999); лечебно-профилактическую эффективность препарата определяли в контролируемых опытах на различных видах животных по общепринятым методам; функционирование B-системы иммунитета у животных изучали по методу Федорова Ю.Н. (1981).

Экспериментальные данные обрабатывали методами корреляционного, вариационного и факторного статистического анализа с использованием пакета компьютерных программ «Statgraphics Plus for Windous», «Statistica 6,0» и анализом результатов по Ашмарину И.П. и Воробьеву A.A. (1962).

Особую признательность автор выражает ректору ФГОУ ВПО МГАВМиБ, академику РАСХН Воронину. Е.С. и заместителю начальника ЦВТП БЗ НИИ микробиологии МО РФ, доктору биологических наук, полковнику Рогожину А.З. за действенную помощь в планировании исследований и организации производства препарата.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Характеристики компонентного состава препарата Бактистатнн

Биологическая активность фугата культуральной жидкости штамма-продуцента Bacillus subtilis Высокая антагонистическая активность к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам является наиболее значимым свойством, определяющим выбор пробиотических штаммов и их метаболитов для конструирования пробиотиков.

Биологические свойства фугата В. subtilis в полной мере соответствуют свойствам микроорганизмов-продуцентов. Синтезируемые ими биологически активные вещества концентрируются в процессе ферментации в культуральной жидкости, а после отделения живых клеток зачастую не используются (табл. I).

Таблица 1 - Основные биохимические характеристики фугата В.виЬиНв ТПИ 13

Наименование показателя Кол-во

Остаточная концентрация В.зиЫШБ ТПИ 13, клеток/мл 107

Протеолитическая активность (ПА), ед. ПА/дм' 8,7

Амшюлитическая активность (АА), ед. АА/дм' 42,7

Содержание белка. мкг/см') 541,5

рН, ед.рН 5,6

Концентрация общих аминокислот, мкг/см3 568,8

Концентрация свободных аминокислот, мкг/см"1 60,8

Концентрация общих, м к г/см3 Гексозаминов 104,9

Глюкозаминов 95,6

Диаминопимелиновой кислоты 19,6

Концентрация свободного глюкозамина, мкг/см3 6,5

Концентрация свободных азотистых оснований, мкг/см3 Аденина 12,2

Ха^ 3,2

Хг* 16,3

Тимина 8,2

Урацила 11,4

Ху- 8,6

Хц* 12,1

Примечание: Ха, Хг, Хт, Ху, Хц - неидентифишрованные производные аденина, гуанина, тимина, урацила и цитозина в пересчете на основное вещество.

Данные, представленные в табл. 1, свидетельствуют о достаточно высоком содержании свободных гексозаминов и диаминопиме-линовой кислоты в фугате культуральной жидкости В.зиЫлПя.

Изучаемые фугаты культуральной жидкости В. зиЫШв ТПИ 13 характеризуются отсутствием гемолитической активности, у них не обнаружены ферменты, которые могут обуславливать патогенные свойства (лецитиназа, гиалуронидаза).

Методами высокоэффективной жидкостной хроматографии и хромато-масс-спектрометрии в фугате В.эиЫШз ТПИ 13 идентифицировали 8 видов антибиотиков (субтилин, микосубтилин, итурин, бациллии, эндосубтилизин, глобицин, обутин, бацилизин) (рис.1) и 6 видов ферментов (нитратредуктаза, а-амилаза, пируваткиназа, рибонуклеаза, аминопептидаза, субтилопептидаза) (рис.2).

5-1-3-Г

1 £ в мын

1 - бацилизин

2 - субтилин

3 - итурин

4 - глобицин

5 - микосубтилин

6 - бациллин

7 - обутин

8 - эндосубтилизин

Рис. 1. Хроматограмма идентифицированных антибиотиков в фугате В.зиЫННв ТПИ 13

1 - нитратредуктаза

2 - а-амилаза

3 - пируваткиназа

4 - рибонуклеаза

5 - аминопсптидаза

6 - субтилопептидаза

10 12 ч'л 1в 1а ЯО 22 Мин,

Рис. 2. Хроматограмма идентифицированных ферментов в фугате В.зиЫПНя ТПИ 13

При изучении иммуномодулирующей активности В.виЫШз ТПИ 13 и ее фугатов было установлено, что на фоне их применения фагоцитарная активность макрофагов у экспериментальных животных увеличилась в среднем на 5 % для бацилл и на 3,2 % для фугатов по сравнению с контрольными животными (табл. 2).

Таблица 2 - Показатели иммуномодулирующей активности

Группа животных Фагоцитарный индекс макрофагов, % Бактерицидность сыворотки крови, %

I опытная группа (В.виЫШвТПИ 13) II опытная группа (фугат) Контрольная группа 22,9 ±1,4 22,1 + 1,2 17,9 + 0,7 0,75 ± 0,08 0,7+ 0,08 1,00 + 0,01

Вместе с тем существенного влияния на бактерицидность сыворотки крови животных бациллы и фугаты не оказывали.

Фугат, как и В. эиЫлНз ТПИ 13, характеризовался высокой антагонистической активностью в отношении тест-штаммов грамполо-жительных и грамотрицательных микроорганизмов (табл. 3).

Таблица 3 - Антагонистическая активность фугата

Материал Зона угнетения роста тест-культур, мм

S. aureus 2091 S. typhimunum 11 S sonnei 659 С. albicans 690

Фугат В. subtilis 8-11 7-10 8-10 ! 7-11

Результаты исследований, позволяют аргументировать целесообразность использования фугатов культур B.subtilis ТПИ 13 для создания на их основе пробиотиков ветеринарного назначения.

Свойства цеолита как компонента препарата

Цеолиты - микропористые силикатные минералы. Скелет кристаллической решётки цеолита состоит из тетраэдр, в полости которых находятся ионы, например: натрия, калия, кальция, легко обменивающиеся между собой и с окружающим субстратом.

Фазовый состав в %: клиноптилолит - 55, монтмериллонит - 5, кварц, кристобалат — 10, вулканическое стекло - 5, гидрослюда - 5, обломки пород и кристаллов — 20.

Химический состав цеолита Холинского месторождения в %: Si20 - 66,42-66,5; СаО - 1,89; Ti20 - 0,086-0,09; MgO - 0,23-0,59; А12Оз - 12,24-12,5; К20 - 2.2-2,69; Fe203 - 1,39-1,51; Na20 - 1,751,98; FeO - 0,04-, 12; MnO - 0,19-0,2; СаО - 1,61-1,65; H20 - 10,0, а также титана 0,06-0,13, марганца 0,12-0,18, молибдена до 0,0002, меди до 0.0005, свинца до 0,0054, цинка до 0,006.

Токсиколого-гигиенические исследования цеолита проведены на крысах-самцах линии ВИСТАР с исходной массой 145-150 г, которым цеолит вводили перорально в дозах 35 мг/кг и 350 мг/кг.

На протяжении всего эксперимента общее состояние животных всех групп было удовлетворительным. Внешний вид, поведение, состояние шерстного покрова, двигательная активность крыс опытных групп не отличались от контроля.

Установлено, что при введении в суточный рацион крыс цеолита в дозе 35 мг на кг веса масса крыс не отличалась от контроля. При введении в суточный рацион крыс цеолита в дозе 350 мг на кг веса наблюдалось статистически достоверное снижение массы тела крыс через 2, 3 и 4 недели с начала постановки опыта на 10, 14 и 9,3% соответственно.

Включение в суточный рацион цеолита в дозе 35 и 350 мг/кг не оказало влияния на такие показатели мочи, как относительная плотность, рН, суточный диурез, содержание креатинина.

Учитывая, что цеолиты обладают ионообменными свойствами, проведено изучение минерального состава органов, мочи, кала и сыворотки крови крыс опытных и контрольной групп (табл. 4).

Таблица 4 - Содержание микро- и макроэлементов в моче крыс

при включении в их рацион цеолита

Название Группа животных

элемента Контрольная I опытная II опытная

Натрий: г/л 2,8*0,85 1,9*0,68 3,9*0,55

мг/сутки 21,0*6,5 9,3*3,5 ' 16,3*5,1

Калий:1 г/л 13,7*1,8 1б,1±Г,б' 8,2*0,8 **

мг/сутки 102,7*35,6 91,8*21,6 34,4*7,0

Кальций: мг/л 80,4*16,4 75,1*17,6 28,9*4,1 **

мг/сутки 0,74*0,24 0,36*0,09. 0,12*0,01 **

Магний: г/л 1,2*0,3 1,8*0,2 0,37*0,12**

мг/сутки 10,9±3,8 9,6*2,2 1,58*0,63**

Железо: мг/л 0,259±0,02 0,222*0,03 0,152*0,01 **

мкг/сутки 1,9±0,40 1,1*0,16 0,65*0,16**

Медь: мг/л 0,29б±0,03 0,319*0,03 0,273*0,05

мкг/сутки 2,15*0,22 1,9*0,43 1,2*0,22**

Цинк: мг/л 5,88*0,91 7,93*1,01 7,75*0,90

мкг/сутки 5,3*1,4 4,85*0,26 4,00*0,76

Свинец: мг/л 0,024 0,028 0,098

мг/сутки 0,00018 0,00013 0,00041

Кадмий: мг/л 0,003 0,006 0,008

мкг/сутки 0.02 0,03 0,03

Примечание: ** - отличия от контроля статистически достоверны при

р < 0,05, в остальных случаях р > 0,05.

Определено, что введение в рацион крыс цеолита в дозе 35 мг и 350 мг на кг массы крысы в сутки не привело к существенному из-

менению содержания микроэлементов в моче крыс.

Иммунологические показатели организма животных определяли содержанием иммуноглобулинов основных классов в сыворотке крови крыс. Установлено, что концентрации иммуноглобулинов в сыворотке крови крыс трех сравниваемых групп практически не отличались друг от друга.

Для определения гематологических показателей крови крыс изучали концентрацию гемоглобина, общее количество эритроцитов, лейкоцитов, гематокритную величину, лейкоцитарную формулу и вычисляли среднее содержание гемоглобина в одном эритроците, средний объем одного эритроцита.

I Гри изучении лейкоцитарной формулы у крыс, получавших цеолит, выявлено статистически достоверное увеличение относительного количества лимфоцитов у I группы, при этом абсолютное количество лимфоцитов у животных этой группы не отличалось от контроля.

Выявленные изменения гематологических показателей у животных II опытной группы (увеличение концентрации гемоглобина, относительного содержания лимфоцитов) находились в пределах физиологических норм для данного возраста крыс.

В эксперименте установлено, что включение в рацион крыс цеолита не оказывает эмбриотоксического действия (табл. 5).

Таблица 5 - Показатели пренатального развития крысят при включении в рацион родительского поколения цеолита (р>0,05)

Показатель Группа животных

Контрольная I опытная II опытная

Размер плода, мм 28,2±0,1 28,4±0,2 28,1±0,2

Масса плода, г 2,5±0,9 2,6±0,4 2,4±0.6

Гибель эмбрионов до имплантации, % 4,2±0,4 4,2±0,9 5,0±0,8

Гибель эмбрионов после имплантации, % 5,0±0,9 4,0±1,1 5,1±1,3

Общая гибель эмбрионов, % 9,2±0,6 8,2±0,8 10,0±0,9

При исследовании плодов на серии сагиттальных срезов аномалий развития не обнаружено.

Для определения возможности использования цеолита в качес-

тве компонента препарата Бактистатин изучили характер и механизм влияния его на организм: способность цеолита активировать фагоциты, оказывать цитотоксический эффект, вызывать гемолиз эритроцитов, обуславливать каталитическую трансформацию активных форм кислорода, усиливать перекисное окисление липидов, провоцировать гипертрофию фагоцитов, производить мутагенные изменения в соматических клетках. Отрицательного воздействия выявлено не было.

Было установлено, что цеолит не обладает гемолитической активностью, как в воздушной, так и бескислородной среде (табл. 6).

Таблица б - Гемолитическая активность цеолита

Образец Гемолиз эритроцитов, %

Кислородная среда Бескислородная среда

Цеолит 0,0 0,0

Уголь 2.3 ±0.01 1,5 ±0,04

Асбест 82,0 ±2,1 ' • 32,0 ±0,12

Исследования адсорбционной активности цеолита по отношению к различным физиологическим-веществам проводили в плазме крови и в панкреатическом соке при соотношении раствора и сорбента 10:0,3.

Установили, что цеолит сорбирует из биологических растворов в значительной степени холестерин, мочевину, креатин и в меньшей степени - общие липиды, белки и глюкозу.

Следующим этапом установили способность цеолита сорбировать болезнетворные микроорганизмы. Для этого 5 мл взвеси, содержащей в 1 мл 10 млн. клеток E.coli, смешивали с 0,5-1* г цеолита. Количество несорбированных клеток в фильтрате подсчитывали под микроскопом в камере Горяева и по разности содержания их в исходной смеси и после контакта ее с цеолитом вычисляли сорбционную способность препарата.

Установлено, что 1 г цеолита сорбирует: Esherihia coli - 7-8 млн кл., B.subtillis— 2-3 млн кл.>, Candida albicans - 0,4-0,5 млн кл.

Результаты исследований установили высокую адсорбционную, ионообменную способность цеолита и физиологический тип активации фагоцитирующих клеток, обуславливающий бактерицидный

эффект в просвете кишечника, что определило использование его в составе разрабатываемого препарата.

Исследование свойств гидролизатов соевой муки

Одним из наиболее богатых источников полноценного белка является соевая мука, широко используемая в биотехнологии как основа ПС при культивировании микроорганизмов.

Для удовлетворения питательных потребностей В.^иЫШз выбрали кислотный гидролиз соевой муки с максимальной степенью расщепления белка.

Пробное выращивание культуры В.яиЫШэ в ПС, содержащей соевую муку, мел и крахмал, показало, что данная среда дает высокий выход биомассы бацилл с необходимым уровнем спорообразования.

Принятые условия гидролиза:

соотношение соевой муки и воды 1:5;

концентрация соляной кислоты, % 3,0;

температура гидролиза, градус С 127±1;

продолжительность процесса гидролиза, мин. 20.

Оценку ростовых свойств ПС для выращивания В.БиЬпНз на основе ГСМ с различной степенью расщепления белков проводили в среде, приготовленной по прописи ПС с исключением из состава кукурузного экстракта и гидролизата казеина и введением ГСМ.

Установлено, что ПС на основе 3%-ного солянокислотного ГСМ пригодны для выращивания В.зиЫШэ и обеспечивают к 24 ч культивирования 95% терморезистентных клеток.

Выбор режима сушки ГСМ осуществляли на основе данных о термоустойчивости продукта, характеризующейся процессами денатурации белка и карамелизации углеводов.

С этой целью на дериватографе фирмы "5Ытас1ги", позволяющем одновременно фиксировать изменение температуры образца, его массы и энтальпии, определена кинетика теплового разложения ГСМ, ферментативного гидролизата мяса (ФГМ) и кислотного гидролизата казеина (КГК) (табл. 7).

Таблица 7 - Показатели термогравиметрического анализа ПО

Белковый гидролизах Масса навески, МГ' Термостойкость, "С Скорость нагрева, °С/мин Температура инактивации, °С Энергия инактивации, .1

ГСМ 6,386 126,48 10 452,65 19,82

ФГМ 15,04 179,90 10 569,21 11,99

КГК 13,59 200,26 10 560,81 10,07

Установлено, что образцы белковых гидролизатов относятся к термолабильным препаратам и оптимальные температурные режимы для обезвоживания белковых гидролизатов находятся в диапазоне температур 12б-200°С при кратковременном контакте.

Для сушки ГСМ использовали технологический режим, обеспечивающий максимальный выход продукта по сухому весу: температура теплоносителя 130°С, скорость подачи жидкого гидролизата 8 дм/ч,

Опытные образцыТСМ оценивали по показателям: концентрация аминного и общего азота, водородных.ионов, хлоридов.

Установленные удовлетворительные ростовые свойства экспериментальных ПС позволили сделать вывод, что сухие ПО ГСМ и сухие ПС из ГСМ отвечают питательным потребностям В.зиЫШз и пригодны для выращивания данных культур глубинным способом культивирования в биореакторах.

Изучено общетоксическое действие ГСМ на беспородных белых мышах массой 18-22 г по б животных на дозу для каждого пути введения.

Установлено, что ГСМ при пероралыюм введении относятся к разряду малотоксичных соединений, а при введении внутрибрю-шинно - относительно безвредных и мо1уг без ограничений использоваться в кормовых и пищевых целях, а также при конструировании пре- и пробиотиков.

Усовершенствование технологии производства препарата

Концентрирование нативной культуры В.тЫШв ТЛИ 13 и отделение фу готов

Для исследований по концентрированию биомассы бацилл и отделению фугатов был использован сепаратор АСГ-ЗМБ.

Установили, что наибольшая эффективность разделения достигается при скорости подачи нативной культуры (НК) в барабан сепаратора не более 30 дм3/ч и обеспечивает выход целевого продукта по БК — 79,2 % и фугата (для Бактистатина) по ферментативной активности - 96,7 %, что является приемлемым показателем.

Концентрирование с использованием сепараторов АСГ-ЗМБ обеспечивает возможность получения концентрированной микробной суспензии (KMC) с концентрацией живых клеток (60±10) млрд. в см3, что отвечает регламентным требованиям по производству основного пробиотика БИОД-5 и максимальным накоплением биологически активных метаболитов в фугате.

Наряду с сепарированием была испытана возможность получения KMC B.subtilis и фугата с применением мембранных методов на ультрафильтрационной установке УГШ-0,6.

Было установлено, что концентрация спор в KMC, полученных ультрафильтрацией, примерно в 2 раза меньше, чем в KMC, полученных сепарированием, при этом значительно увеличивается объем фугата за счет промывок и снижается концентрация БАВ.

Таким образом, в основе разработанной безотходной технологии серийного производства пробиотика БИОД-5 и препарата Бакти-статин лежит использование ранее утилизируемого фугата, получаемого разделением НК B.subtilis, при применении боксированно-го сепаратора АСГ-ЗМБ.

Выбор способа обезвоживания компонентов препарата

Полученные в ходе экспериментов активные компоненты препарата Бактистатин представляют собой высоковлажные материалы (96-98% -ный фугат культуральной жидкости B.subtilis ТЛИ 13). Выбор способа обезвоживания этих материалов затруднен, т.к. они являются термолабильными материалами за счет содержащихся в них пептидных антибиотиков, ферментов и аминокислот.

Гранулирование во взвешенном (псевдоожиженном) слое является технически совершенным и перспективным методом обезвоживания, так как позволяет совместить операции смешивания, гранулирования, сушки и опудривания в одном аппарате и организовать непрерывное производство с высокой производительностью.

Типовым представителем является сушилка-гранулятор 524Р-

AK, разработанная Ленинградским НПО «Прогресс»,

Проведенные эксперименты по иммобилизации фугатов в агрегате 524Р-АК показали возможность использования его для серийного выпуска препарата Бактистатин с производительностью 10 кг/цикл.

Приготовление опытных образцов препарата

В качестве оценки выбора комбинаций ингредиентов в препарате использовали адсорбционную способность цеолита по фугату культуральной жидкости. При этом контролировали антоганисти-ческую и ферментативную активность препарата.

На первом этапе готовили смеси цеолита с культуральной жидкостью с шагом 10%.

Установлено, что оптимальными являются соотношения цеолита и фугата 50:50,40:60, 60:40.

Для определения достоверности полученных результатов были изготовлены 8 лабораторных серий препарата с выбранными соотношениями цеолита и фугата, при этом в каждую серию добавили ГСМ из расчета приведения массы одной дозы препарата до 0,5 г и изучена их антагонистическая и ферментативная активность.

Оптимальное соотношение сухой смеси цеолита и фугата с ГСМ составило - 65:35.

Стерилизацию Бактистатина проводили в Курчатовском институте Проблем безопасного использования ядерной энергии пучком электронов с дозой 15 кГр.

Определение безвредности и биологической активности ¡n vivo 4 экспериментальных серий препарата Бактистатин проведены при экспериментальном дисбактериозе белых мышей, вызванным путем интрагастрального введения ампиокса в дозе 4 мг в сутки, в течение 5 дней.

Лечение мышей препаратом Бактистатин проводили в сравнении с коммерческими лактобактерином и буфидумбактерином. Препараты вводили мышам перорально 1 раз в день в течение 7 суток по 2-10б м.к.

У животных изучали количественный и качественный состав микрофлоры в фекалиях до постановки опыта и через 8 дней после

постановки опыта в сравнительном аспекте.

Установлено, что у мышей разных групп общее количество аэробных и анаэробных бактерий в 1 г кишечного содержимого до постановки опыта находилось, практически, на одном уровне, условно-патогенных энтеробактерий и кандид содержалось незначительное количество на фоне высокой концентрации лакто- и бифи-добактерий.

После применения антибиотика у мышей развился дисбактериоз.

Установлено, что в кишечнике мышей, которых лечили Бакти-статином, обнаруживали сбалансированные концентрации общего количества аэробной и анаэробной микрофлоры и выделяли незначительное количество условно-патогенных энтеробактерий и кандид.

У мышей, которых лечили лактобактерином и бифидобактери-ном, нормализации бактериального состава кишечника не наблюдалось.

Концентрация лакто- и бифидобактерий была наивысшей у мышей тех групп, которые получали Бактистатин.

В результате проведенных экспериментов установлено, что компоненты Бактистатина обладают синергидным действием в отношении лакто- и бифидобактерий.

Изучение биологической активности препарата

Острая и хроническая токсичность

Острую токсичность препарата Бактистатин с пробиотическим действием изучали на двух сериях препарата, которые вводили белым мышам внутрибрюшинно и перорально.

Установлено, что все мыши, получавшие разные серии препарата Бактистатин с пробиотическим действием в различных дозах за весь период наблюдений оставались клинически здоровыми, хорошо поедали корм, их поведенческие реакции не нарушались.

Хроническую токсичность определяли путем перорального введения белым мышам суспензии двух серий препарата Бактистатин с пробиотическим действием, в течение 15 дней ежедневно по 40 мг (табл. 8).

Таблица 8 - Результаты проверки хронической токсичности препарата Бактистатин

Доза, Курс Кол-во Заболело, Пало, Выжило,

Название мг введения, животных гол. гол. гол.

сут.

Бактистатин (с.5) 40 15 10 0 0 10

Бактистатин (с.б) 40 15 10 0 0 10

Установлено, что все мыши опытных групп были клинически здоровы, активны и хорошо поедали корм на протяжении периода наблюдений, клинических симптомов интоксикации организма не отмечалось.

Макроскопические обследования внутренних органов мышей патологических изменений не выявили.

Через 1 и 7 суток после 15-кратного орального введения препарата признаков патологических реакций в месте введения и во внутренних органах мышей не обнаружено.

Установлено, что препарат Бактистатин не проявляет острую и хроническую токсичность на организм экспериментальных животных.

Влияние препарата Бактистатин на физиологические показатели периферической крови животных

Изучение влияния препарата Бактистатин на морфологический состав и свойства крови было проведено на 15 кроликах массой 22,5 кг. Кроликам I опытной группы перорально вводили Бактистатин по 1 дозе (0,5 г препарата) в виде суспензии в физиологическом растворе в течение 10 дней ежедневно, а кроликам II опытной группы — в той же дозе в течение 30 дней ежедневно, после чего брали кровь на исследование.

Изучаемые показатели крови как через 10, так и через 30 дней после введения препарата существенно не отличались от соответствующих показателей контрольных животных.

Таким образом, препарат Бактистатин не влияет на состав и свойства крови животных, не оказывает побочного действия на организм, не вызывает осложнений и аллергических реакций, хорошо переносится животными.

Влияние препарата на микрофлору кишечника животных

Исследования проводили на мышах линии СВА весом 18-20 г. Животным ежедневно в течение 15 дней вводили перорально с помощью катетера суспензию препарата Бактистатин в количестве 0,04 г. До начала исследования, а также на 3 и 7 дни применения препарата и через 3 дня после окончания применения препарата проводили бактериологические исследования содержимого кишечника экспериментальных животных.

Установлено, что Бактистатин не влияет отрицательно на количественный и качественный составы нормальной микрофлоры кишечника животных.

Отмечено, что у мышей опытных групп, имеющих дефицит би-фидо- и лактобактерий до начала опыта, на 3 день после применения препарата наблюдалось увеличение концентрации полезных бактерий и уменьшение концентрации условно-патогенных бактерий.

Изучение иммуногенных и адъювантных свойств препарата Бактистатин

Иммуногенные свойства препарата оценивали по активности естественных киллеров (ЕК) у мышей, которым однократно перорально вводили суспензию препарата в 1/10 дозы (0,05 г).

Установлено, что у мышей наблюдается достоверное увеличение активности ЕК по сравнению с контролем, причем увеличение наблюдается на 3 сутки после введения Бактистатина, что совпадает со временем нахождения препарата в полости толстого отдела кишечника* и свидетельствует о стимуляции препаратом неспецифической защиты организма животных.

Адъювантные свойства препарата Бактистатин изучали при комбинированном применении его с коммерческими вакцинами -инактивированной вакциной против энтерита плотоядных (ВЭ) и аттенуированной вакциной против чумы плотоядных (ВЧП);

Как следует из результатов исследований, при введении вакцин с препаратом Бактистатин более чем в 2 раза повышается про л и-феративная активность спленоцитов в сравнении с контролем, что проявляется с первых суток постановки опыта.

У животных опытных групп на 21 сутки после иммунизации ак-

тивность спленоцитов была достоверно выше, чем в контрольных группах, что свидетельствует о повышении эффективности вакцинации (р <0,05).

Установлено, препарат Бактистатин обладает адъювантными свойствами и может применяться для повышения эффективности специфической профилактики инфекционных болезней животных.

Изучение антивирусной активности препарата

Изучение антивирусной активности препарата Бактистатин проведено на 40 телятах в СХП «Новый мир» Челябинской облас ти.

У всех животных до начала постановки опыта, а также на 7 и 14 дни с начала постановки опыта были проведены серологические исследования сыворотки крови на инфекционный ринотрахеит (ИРТ), рота-корона вирусные инфекции (РКВИ), аденовирусную инфекцию (АИ), вирусную диарею (ВД) и парагрипп-3 (ПГ-3) в лаборатории вирусологии УГАВМ.

Через 7 дней после постановки опыта было установлено, что у телят опытной группы титр антител против вирусов ИРТ, ПГ-3 и РКВИ уменьшился в 2 раза, антитела против ВД не были обнаружены.

Через 14 дней после постановки опыта титр антител против вирусов ИРТ, РКВИ и ПГ-3 уменьшился в 4 раза. Антитела против ВД и АИ не обнаружились (рис. 3).

Рис. 3. Титр антител в сыворотке крови телят

Телята опытной группы за весь период наблюдений были кли-

нически здоровы; температура у животных была в пределах физиологической нормы, аппетит хороший.

Адсорбционную противовирусную активность Бактистатина изучили с использованием референтных штаммов ротавирусов, способных вызывать ротавирусные гастроэнтериты.

Во флаконы с различными навесками Бактистатина вносили 10,0 мл вируссодержащей жидкости. Надосадочную жидкость исследовали методом титрования в культуре клеток по ЦПД вирусных антигенов в РИГА.

Установлено, что при внесении Бактистатина в концентрации 15,0 мг/мл количество адсорбированного вируса для штамма НЮ/134 составило 89,4±0,4 %, для штамма Тиверваль - 95,5±0,3 %.

Оценка эффективности протективного действия препарата Бактистатин в комплексе с антибиотиком доксициклином

при сибирской язве экспериментальных животных Протективное действие Бактистатина оценивали при совместном применении с антибиотиком при лечении сибиреязвенной инфекции у лабораторных животных, вызванной заражением штаммом 71/12 второй вакцины Ценковского (рис. 4).

Рис. 4. Средняя продолжительность жизни животных на фоне приема доксициклина и Бактистатина

Примечания:

1 - средняя продолжительность жи лш контрольных групп зараженных животных (сутки); 24-48 — время начала введения препаратов после заражения животных (часы); А - средняя продолжительность жизни опытных групп заряженных животных, которым вводили только доксиниклин;

А + В - средняя продолжительность жизни опытных групп зараженных животных, которым вводили доксиниклин и Бактистатин,

Выбрана оптимальная схема совместного применения Бактиста-тина и антибиотика по изменению средней продолжительности жизни лабораторных животных при различных дозах заражения на фоне 10 дней энтерального применения доксициклина и Бактиста-тина.

Установлено, что: при всех заражающих дозах возбудителя (от 10 до 1000 [Л>5о) энтеральное введение лабораторным животным доксициклина в сочетании с препаратом Бактистатин достоверно (р<0,05) увеличивало продолжительность жизни лабораторных животных в сравнении с использованием одного доксициклина; наиболее эффективной оказалась схема комбинированного применения доксициклина и препарата Бактистатин, предусматривающая предварительный (за сутки) трехкратный прием Бактистатина в дозе 1,5 мг/мышь в сутки и введения комбинации Бактистатина с антибиотиком в дозах 1,5 мг/мышь и 0,15 мг/мышь соответственно, через 24 ч после заражения три раза в день в течение 10 суток.

Разработка методов контроля препарата Бактистатин

Контроль подлинности, безвредности, стандартности и биологической активности препарата Бактистатин должен осуществляться общепринятыми методами и обеспечивать исчерпывающую информацию о его свойствах. С этой целью были разработаны методы контроля Бактистатина по следующим органолептическим, физико-химическим и биологическим показателям: внешний вид. запах, цвет, безвредность, массовая доля влаги, адсорбционная активность, массовая доля цеолита (клиноптилолита), амилолитическая и протеолитическая активность, массовая доля аминного азота, антагонистическая активность к тест-культурам и микробиологическая чистота.

Разработанный состав Бактистатина: цеолит - 65 %; гидролизат соевой муки - 33 %; сухой фугат В. эиЫШз ТПИ 13 - 1 %; аэросил- 1 %.

Препарат Бактистатин разработан в лекарственных формах в виде порошка или гранулята в желатиновых капсулах и таблетках.

Исследование стабильности свойств препарата Бактистатин в процессе хранения

На хранение в течение 2 лет было отобрано по 20 образцов упа-

ковок от 3 серий препарата для каждой исследуемой температуры, Через каждые 6 месяцев хранения от каждой серии отбирали по 5 упаковок и определяли'влажность, амилолитическую, протеоли-тическую активности и микробиологическую чистоту.

Для эксперимента было выбрано 4 температуры хранения: 5±2°С, 10±3°С, 25±5°С, 35±б°С и две лекарственные формы: порошок и наполненные твердые желатиновые капсулы.

Анализ результатов исследований позволяет с уверенностью констатировать факт, что температура хранения и лекарственная форма Бактистатина не оказывают существенного влияния на показатели качества препарата в процессе хранения в течение 2-х лет.

Экспериментальные и производственные испытания препарата Бактистатин при патологии органов пищеварения молодняка сельскохозяйственных животных

Лечебно-профилактическая эффективность препарата Бактистатин при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят На первом этапе были определены дозы, кратность и продолжительность применения препарата новорожденным телятам/

Установлено, что использование препарата Бактистатин в дозе 1,0 г 2 раза в день в течение б дней обеспечивало высокий профилактический эффект при ЖКБ новорожденных телят (90 %).

У телят опытных профилактических групп привесы составили от 510,0 до 600,0 г в сутки, тогда как в контроле привесы не превышали 400,0 г (от 370,0 до 400,0). В динамике оценивали гематологические показатели телят опытных и контрольных групп и выработку иммуноглобулинов класса Миб,

Установлено, что применение препарата Бактистатин с целью профилактики ЖКБ телят, предотвращает интенсивное размножение условно-патогенных и патогенных микроорганизмов с последующим их вытеснением из ЖКТ и способствует размножению лакто-и бифидобактерий.

Оценку терапевтической эффективности препарата Бактистатин для новорожденных телят 2-5-дневного возраста провели на 5 опытных группах животных, которым препарат давали в различ-

ных дозах 2 раза в день в течение 6 дней.

Установлена 100% -ная терапевтическая эффективность препарата Бактистатин в дозе 2 г 2 раза в день в течение 6 дней.

Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что препарат Бактистатин способствует повышению уровня общего белка и альбуминов в сыворотке крови новорожденных телят в результате лучшей усвояемости корма и не оказывает негативного воздействия на биохимические показатели крови животных.

Применение Бактистатина восстанавливает нормальный биоценоз пищеварительного тракта телят за счет подавления размножения и элиминации патогенных и условно-патогенных бактерий и повышения концентрации лакто- и бифидобактерий.

Эффективность Бактистатина при желудочно-кишечных

болезнях поросят

Установлено, что профилактическая эффективность препарата Бактистатин для поросят-сосунов составила 100 % при даче препарата в дозе 0,5 г на голову 1 раз в день 3 дня подряд, а для поро-сят-отьемышей — 93,3 % при даче препарата в дозе 1,0 г на голову 1 раз в день 3 дня подряд.

При исследовании микрофлоры фекалий поросят опытных групп в динамике отмечали исчезновение из содержимого кишечника условно-патогенных и патогенных микроорганизмов и увеличение концентрации полезной микрофлоры (бифидо- и лакто-бактерий).

Гематологические исследования поросят-сосунов и поросят-отъемышей опытных и контрольных групп до начала постановки опыта, а также через 3 и 10 дней с начала постановки опыта показали, что при профилактике ЖКБ поросят-сосунов более эффективной является доза препарата в количестве 0,5 г на голову.

Анализ лейкограмм поросят-отъемышей указывает, что наименьшие отклонения от нормы в динамике исследований наблюдались в группе поросят-отъемышей, которым препарат Бактистатин давали в дозе 1,0 г на голову 1 раз в день 3 дня подряд.

У животных, получавших Бактистатин, в крови было достоверно меньше на 21,9% количество аминного азота, что свидетельствует об интенсивных анаболических реакциях и белковом обмене, со-

провождающихся активной-мобилизацией из крови аминокислот на биосинтез белковых молекул, что согласуется с более высокими показателями среднесуточных приростов у поросят опытных групп.

При оценке, терапевтического действия препарата Бактистатин была установлена 100 % -ная. эффективность препарата в терапевтической дозе для поросят-сосунов - 0,5 г/гол 2 раза в день б дней подряд и для поросят-отьемышей - 1,0 г/гол 2 раза в день б дней подряд.

У идентифицированных бактерий фекалий определяли биохимические, гемолитические, адгезивные и патогенные свойства.

Выделенная от поросят до постановки опыта условно-патогенная микрофлора обладала вирулентными свойствами. Такие микроорганизмы как P.mirabiüs, E.coli и Salmonella образовывали зоны гемолиза на кровяном агаре. Особенно четко эти свойства были выражены у энтеропатогенной E.coli (преобладал, в основном, ß - гемолиз).

Изучено влияние Бактистатина на интенсивность роста поросят-отьемышей опытных групп, поставленных на откорм, при внесении в комбикорм поросятам опытных групп препарата в дозе 1 г на голову в сутки в течение 1 месяца (табл. 9).

Таблица 9 - Зоотехнические показатели эффективности Бактистатина при откорме свиней

Показатель Группа животных

опытная контрольна*

Живая масса, кг:

в начале откорма 39,б±0,23 39,4±0,25

в конце откорма 11б,0±0,69 108,0±0,78

Среднесуточный прирост, г 735±5,97 660±7,57

% к контрольной группе 111,4 100,0

Среднесуточное потребление комбикорма, кг 2,30 2,30

Затрачено комбикорма на 1 кг прироста, кг 3,13 3,48

% к контрольной группе 89,9 100,0

Установлено, что Бактистатин способствует усвоению корма животными и приросту живой массы.

Анализ результатов убоя подопытных животных показал, что у

поросят опытной группы наблюдалось увеличение убойной массы на 9.7% по сравнению с поросятами контрольной группы.

Профилактическая эффективность препарата Бактистатин при нарушениях обменных процессов у кур Производственный опыт проведен в двух птичниках вместимостью по 29000 голов в каждом.

Курам-несушкам опытной группы скармливали корма с добавлением препарата Бактистатин из расчёта 30 мг на 1 кг живого веса птицы в течение 30 дней.

Данные гематологических и клинических исследований констатируют, что препарат Бактистатин обладает высокой антагонистической активностью в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, способствует повышению уровня нормомикрофлоры в пищеварительном тракте кур, повышает иммунитет, очищает ЖКХ от токсинов и продуктов разложения, способствует перевариванию кормов и усвоению питательных субстратов, тем самым улучшает обменные процессы птиц.

В результате изучения лечебно-профилактической эффективности Бактистатина при желудочно-кишечных болезнях телят, поросят и кур были определены дозы препарата для разных видов животных (табл. 10).

Таблица 10 - Рекомендуемые дозы препарата Бактистатин для животных разных видов

Вид животного Готовая лекарственная форма препарата

Порошок Капсула

Профилактич Терапевтии. Профилактич Терапевтия

Телята 1 г/гол 2 раза в день 7 дней 2,0 г/гол 2 раза в день 6 дней 2 капс./гол 2 раза в день 7 дней 4 капе /гол 2 раза в день 6 дней

Поросята-сосуны 0,5 г/г 1 раз в день 3 дня 0,5 г/гол 2 раза в день 6 дней - -

Поросята-отьемыши 1,0 г/гол I раз в день 3 дня 1,0 г/гол 2 раза в день 6 дней 2 калс./гол 1 раз в день 3 дня 2 капе /гол. 2 раза в день 6 дней

Куры-несушки 30 мг/кг живого веса птицы 30 дней

Исследования профилактической и терапевтической эффективности Бактистатина позволяют рекомендовать препарат к приме-

нению в ветеринарной практике скотоводства, свиноводства и птицеводства.

Экономическая эффективность технологии производства препарата Бактистатин

Годовой экономический эффект от внедрения.безотходной технологии препарата Бактистатин составил 14 140 513,18 руб.

Экономическая эффективность применения препарата Бактистатин при желудочно-кишечных болезнях животных

Экономический эффект на рубль затрат при применении препарата Бактистатин составляет 52,4 руб., что в б раз выше, чем при использовании бифидумбактерина.

Использование Бактистатина в составе полнорационных комбикормов^ при откорме поросят обеспечило экономический эффект в расчете на 1 голову в среднем 400,0 руб. за счет дополнительно полученного прироста.

выводы

1. Разработан комбинированный пробиотический препарат, имеющий многокомпонентный состав, включающий метаболиты В.зиЫШз штамм ТПИ 13, иммобилизованные на природном ионо-обменнике цеолите, в смеси с питательным компонентом - гидро-лизатом соевой муки и аэросилом, имеющий срок годности 2 года при температуре хранения от минус 20 до плюс 40 °С.

2. Метаболиты В.виЫШз (ТПИ 13) обеспечивают поддержание рН среды ЖКТ животных в границах физиологической нормы, способствуют подавлению размножения патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, улучшают физиологические функции кишечника, восстанавливают нормофлору и способствуют усвоению кормов в соотношении сухой смеси цеолита и фугата с гидролизатом соевой муки и аэросилом 65:35.

3. Природный цеолит способствует пролонгированному действию препарата Бактистатин, адсорбирует низкомолекулярные соединения, токсины, вирусы и проявляет ионообменные свойства.

4. Гидролизат соевой муки, с соотношением аминного азота к общему 1:2, входящий в состав Бактистатина обеспечивает поступ-

ление в организм комплекса аминокислот для поддержания роста нормофлоры организма. Питательные среды на основе гидролизата соевой муки содержат 32 % ростостимулирующих фракций пептидов с молекулярной массой от 500 до 1000 Дальтон, от общего содержания пептидов, отвечают питательным потребностям B.subtilis и могут использоваться для глубинного культивирования.

5. Сыпучесть и улучшение реологических свойств порошковой лекарственной формы препарата обеспечиваются 1% -ным содержанием аэросил 300 Pharma.

6. Режим разделения культуральной жидкости B.subtilis методом сепарирования со скоростью подачи суспензии 30±5 дм3/ч в асептических условиях концентрирования позволяет одновременно получать на сепараторе АСГ-ЗМБ биомассу бацилл для производства пробиотика БИОД-5 и фугат — компонент препарата Бактистатин по безотходной технологии.

7. Препарат Бактистатин является безвредным для сельскохозяйственных животных, проявляет антагонистическую активность в отношении широкого спектра патогенной и условно-патогенной микрофлоры животных и повышает уровень лакто- и бифидобак-терий в 2 раза, при абсолютном уменьшении и элиминации из кишечника энтеропатогенных микроорганизмов.

8. Биологически активные компоненты Бактистатина активизируют факторы неспецифической резистентности организма животных: фагоцитарная активность макрофагов повышается на 5 %, фагоцитарный индекс — на 2,5 %, активность естественных киллеров - на 25 %.

9. Бактистатин обладает адъювантным действием - в 2 раза повышает пролиферативную активность спленоцитов в комплексе с противовирусными вакцинами у экспериментальных животных и адсорбционной активностью в отношении ротавирусов.

10. Комплексное применение антибиотика доксициклина и Бактистатина при лечении смоделированной сибиреязвенной инфекции усиливает протективное действие на микрофлору и снижает токсический эффект антибиотикотерапии. Средняя продолжительность жизни лабораторных животных для 10 LD50 увеличивается на 20 %, для 100 LD50 на 23 % и для 1000 LD50 на 67 % в сравнении с

контролем.

11. Существующая технология пробиотиков Биоспорин,' и БИОД-5 усовершенствована введением в аппаратурно-технологическую линию сушилки-гранулятора 524Р-АК, обеспечивающей одностадийное обезвоживание, иммобилизацию и гранулирование препарата Бактистатин с производительностью 10 кг/ч. Полученные по безотходной технологии серии препарата Бактистатин отвечают требованиям нормативной документации.

12. Схема применения препарата Бактистатин для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней телят, поросят и птицы, апробированная в условиях хозяйств, показала 96-100%-ную лечебно-профилактическую эффективность Бактистатина в* рекомендуемых дозах при длительности применения препарата от 3 до 7 суток.

13. Препарат Бактистатин способствует повышению аппетита, перевариваемое™ корма и увеличивает прирост живой массы новорожденных поросят в среднем на 150 г в сутки по сравнению с контролем;

14. Затраты на 1000 руб. товарной продукции, произведенной по разработанной технологии, меньше на 71 %, в сравнении с суще-стующей. Годовой экономический эффект от внедрения безотходной технологии препарата Бактистатин составил 14140513,18 руб. Экономический эффект от применения Бактистатина при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят составляет 52,4 руб. на рубль затрат.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ

РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Бактистатин, обладающий протективными и пробиотически-ми свойствами, рекомендуется использовать в качестве лечебно-профилактического препарата при ЖКБ сельскохозяйственных животных.

2. Разработаны и утверждены технические условия на сухую форму препарата «Бактистатин (ТУ 9384-002-71368318-06) на опытную партию».

3. Разработана «Инструкция по применению препарата «Бактистатин» (порошок) для лечения и профилактики дисбактериозов

ЖКТ и повышения естественной резистентности сельскохозяйственных животных».

4. Разработан и утвержден регламент производства препарата «Бактистатин» № 3457.

5. В соответствии с порядком регистрации ветеринарных препаратов в Российской Федерации, нормативно-техническая документация на препарат «Бактистатин» прошла экспертизу в профильной лаборатории ФГУ ВГНКИ. Регистрационные испытания подтвердили соответствие показателей качества препарата «Бактистатин» требованиям ТУ (экспертное заключение от 11.09.2006).

6. На аппаратурно-технологической линии пробиотиков Био-спорин и БИОД-5 в ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ создана безотходная технология производства препарата Бактистатин в различных лекарственных формах (акт внедрения от 20.12.2005 г.).

7. Разработаны и утверждены Департаментом Министерства здравоохранения и социального развития технические условия (ТУ 9384-004-71368318-04) и технологическая инструкция (ТИ 10-00471368318-04) на биологически активную добавку к пище «Бактистатин» в таблетированной и капсулированной формах, санитарно-эпидемиологическое заключение № 77.99.19.003.Т.001778.10.04 от

12.10.2004 г. и свидетельство о государственной регистрации № 77.99.19.3.У.4177.10.04 от 12.10.2004 г.

8. По результатам исследований разработаны и утверждены Комитетом по здравоохранению правительства Санкт-Петербурга методические рекомендации «Коррекция нарушений кишечного микробиоценоза пробиотиком на основе природного адсорбента» (от

26.04.2005 г.).

9. Разработаны и утверждены ВНИИМС методики «Активность микроорганизмов (бактерий и грибов) метаболическая. Методика экспресс-обнаружения в продовольственном сырье и пищевых продуктах при помощи кондуктометрического анализатора «Мальтус—У» (МИ 2467-98) и «Хроматографические параметры бактерий в биологических жидкостях, смывах и продуктах питания. Методика идентификации по количественному содержанию жирных кислот при помощи газовых хроматографов «Кристалл-2000М», «Хромпак СР 2002» и аналогичных» (МИ 2468-98).

10. Результаты исследований по усовершенствованию технологии пробиотиков БИОД-5 и Биоспорин и созданию безотходной технологии препарата с пробиотическим действием Бактистатин используются в учебном процессе по дисциплине «Биотехнология» в ФГОУ ВПО МГАВМиБ имени К.И. Скрябина.

11. Получено положительное решение Российского агенства по патентам и товарным знакам по заявке № 2005138934 «Препарат для лечения заболеваний ЖКТ «Бактистатин».

РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Препарат Бактистатин рекомендуется зооветспециалистам и владельцам животных в качестве лечебно-профилактического средства при ЖКБ телят, поросят, птицы, вызванных энтеропато-генными микроорганизмами и их ассоциациями, а также для совместного приема с антибиотиками при острых инфекционных заболеваниях бактериальной природы и для профилактики вирусных инфекций.

2. Элементы безотходной технологии, технологические параметры и режимы производства препарата Бактистатин в сухой, таблетированной и капсулированной лекарственных формах с использованием отечественного сырья и оборудования рекомендуются для приготовления биопрепаратов на основе других микроорганизмов.

3. Результаты исследований по созданию безотходной технологии препаратов на основе B.subtilis и оценке их эффективности на разных видах животных рекомендуется использовать в учебном процессе по дисциплине «Биотехнология» в высших учебных заведениях.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бессарабов A.M. Моделирование процессов термообработки гвдролизатов белкового сырья / Бессарабов А.М., Волков М.Ю., Малышев Р.М., Чепуренков Н.Я. //Сб. науч. тр. «Методы кибернетики химико-технологических процессов». - М.: РХТУ, 1994. - Т. 2. - С. б.

2. Волков М.Ю. Разработка технологии распылительной сушки основ микробиологических питательных сред, полученных из отходов мясо- и молокоперерабатывающих предприятий / Волков М.Ю., Чепу-

ренков Н.Я., Хмелев С.Р., Мякишев A.B., Мартыненко В.А. //Сб. науч. тр. «Медико-биологические и профилактические проблемы адаптации населения к современным экологическим условиям жизни». - Архангельск: АГМА, 1994. - С. 36.

3. Рогожин А.З. Термогравиметрическое изучение белковых питательных основ - потенциальных объектов распылительной сушки / Рогожин А.З., Дремин Е.А., Волков М.Ю., Маслов С.А. //Сб. науч. тр. «Диагностика, лечение и профилактика опасных инфекционных заболеваний. Биотехнология». - Киров.: НИИМ МО РФ, 1998. - С. 329.

4. Рогожин А.З. Разработка технологии получения сухих питательных сред в различных формах для использования в производстве препарата «Биод-5» / Рогожин А.З., Васильев П.Г., Тихонов И.В., Грязнева Т.Н., Лиморенко А.П., Волков М.Ю., Коломейцев A.B., Коробейников A.JL, Гулькова О.В., Сирик М.С., Вишняков A.B. //Сб. науч. тр. науч. конф., посвященной 75-летию НИИ микробиологии МО РФ. — Киров: НИИМ МО РФ, 2003. - С. 164-165.

5. Васильев А.П. История и перспективы применения пробиотиков в медицине и ветеринарии / Васильев А.П., Забокрицкий А.Н., Васильев П.Г., Котельников Р.В., Шапошникова М.Ю., Тихонов И.В., Грязнева Т.Н., Волков М.Ю., Литусов Н.В.. Грачев А.Ю., Щелгачев В.В. //Сб. науч. тр. науч. конф., посвященной 55-летию ЦВТП БЗ НИИ микробиологии МО РФ. - Екатеринбург: ЦВТП БЗ НИИМ, 2004. - С. 69-76.

6. Ткаченко Е.И. Эрадикационная терапия, включающая пробиотики: консенсус эффективности и безопасности / Ткаченко Е.И., Авапуева Е.Б., Успенский ЮЛ., Волков М.Ю., Сказываева EJB.. Барышникова И.В., Може-лис Ю.В., Захарченко ММ. // Клиническое питание, 2005. № 1. - С. 14-20.

7. Воробейчиков Е.В. Методологические аспекты применения пробиотиков и антибиотиков для экстренной профилактики инфекционных заболеваний / Воробейчиков Е.В., Василенко А.Ж., Синица A.B., Волков М.Ю. //Сб. науч. тр. Ш съезда Общества биотехнологов России- М.: МаксПресс, 2005. - С. 35-36.

8. Ткаченко ЕЛ Питание в XXI веке и биотехнологии: взгляд клинициста / Ткаченко Е.И., Успенский ЮЛ, Волков М.Ю. //Сб. науч. тр. Ш съезда Общества биотехнологов России - М: МаксПресс, 2005. - С. 159-160.

9. Волков М.Ю. Применение пребиотика Бактистатин в животноводстве /Волков М.Ю., Акимочкин А.И. //Сб. науч. тр. «Перспективы раз-

вития биотехнологии в России» - Пущино: МаксПресс, 2005. - С. 64-65.

10. Волков М.Ю. Новый пробиотик Бактистатин продукт современных биотехнологий / Волков М.Ю. //Сб. науч. тр. «Перспективы развития биотехнологии в России» - Пущино: МаксПресс, 2005. - С. 21-22.

11. Успенский Ю.П. Коррекция нарушений кишечного микробиоценоза пробиотиком на основе природного адсорбента / Успенский Ю.П., Авалуева Е.Б., Орешко Л.С., Барышникова Н.В., Льнявина В.М., Захарченко М.М., Волков М.Ю., Ситкин С.И. //Метод, реком. - Утв. комитетом по здравоохранению правительства Санкт-Петербурга, СПГМА им. И.И. Мечникова, 2005. - 16 с.

12. Синица A.B. Биотехнологический подход в коррекции питания здорового И( больного человека / Синица A.B., Тихонов И.В., Волков М.Ю. //В кн.: «Питание, микробиоценоз и интеллект человека». -СПб.: СпецЛиг, 2006. - С. 272-348.

13. Волков М.Ю. Взаимоотношения инфекции и питания / Волков М.Ю., Тихонов И.В. //В кн.: «Питание, микробиоценоз и интеллект человека». - СПб.: СпецЛит, 2006. - С. 235-253.

14. Волков М.Ю. Коррекция нарушения микробиоценоза человека с помощью пробиотиков / Волков М.Ю., Сигошз A.B., Ткаченко Е.И., Успенский Ю.П., Тихонов И.В. //Вопросы питания, 2006, № 4. - Т. 75. - С. 32-34.

15. Волков М.Ю. Новые продукты функционального питания на основе биотехнологий / Волков М.Ю., Захарченко М.М., Синица A.B., Ткаченко Е.И., Успенский Ю.П. //Военно-медицинский журнал, 2006, №5.-С. 69-70.

16. Воробейников Е.В. Пути повышения эффективности схем экстренной профилактики и лечения инфекционных заболеваний / Воробейников Е.В., Волков M.IO.j Синица A.B., Василенко А.Ж. //Антибиотики и химиотерапия, 2006, № 3-4. - Т.51. - С. 3-6.

17. Волков М.Ю. Современные биотехнологии ветеринарных препаратов /Волков М.Ю. //Ветеринария, 2006, № 5. - С, 7-9.

18. Волков М.Ю. Токсикологические исследования нового пробио-тика на основе метаболитов бацилл и природного цеолита/Волков М.Ю. // Известия высших учебных заведений Северо-Кавказский регион «Актуальные проблемы гастроэнтерологии», Естественные науки, 2006. Спецвыпуск. - С. 23-26.

19. Волков МДО. Перспективы применения пробиотиков при

особо опасных инфекциях / Волков М.Ю., Воробейников Е.В., Добрынин В.М., Захарченко М.М., Синица A.B., Степанов A.B. //Клиническое питание, 2006, № 1-2. - С. 38-39.

20. Минушкин О.Н. Опыт применения пробиотика Бактистатин в терапии хронического панкреатита / Минушкин О.И., Ардатская М.Д., Сергеев A.B., Волков М.Ю., Синица A.B. //Фармация, 2006, № 3. - С. 39-42.

21. Волков М.Ю. Комбинированное применение антибиотиков и пробиотиков на животных, инфицированных вакцинным штаммом возбудителя сибирской язвы / Воробейников Е.В., Василенко А.Ж., Синица A.B., Степанов A.B., Волков М.Ю. //Сб. науч. тр. науч.-практ. конф., посвященной 110-летию кафедры инфекционных болезней BMA им. С.М.Кирова - Санкт-Петербург: BMA, 2006. - С. 339.

22. Воробейников Е.В. Оценка применения Бактистатина при лечении опасных инфекционных заболеваний бактериальной этиологии / Воробейников Е.В., Степанов A.B., Синица А.В, Волков М.Ю., Добрынин В.М., Захарченко М.М. //Сб. науч. тр. 8-го Меж-дун. Славяно-Балтийского форума «Гастро-2006» — Санкт-Петербург: ООО «Гастро», 2006, № 1-2. - С. 28.

23. Минушкин О.Н. Эффективность Бактистатина в коррекции внутриполостной кишечной среды у больных хроническим панкреатитом с внешнесекреторной недостаточностью поджелудочной железы / Минушкин О.Н., Ардатская М.Д., Сергеев A.B., Синица A.B., Волков М.Ю. //Сб. науч. тр. 8-го Междун. СлавяноБалтийского форума «Гастро-2006» - Санкт-Петербург: ООО «Гастро», 2006, № 1-2. - С. 97.

24. Волков М.Ю. Влияние нового пробиотика на обменные процессы и показатели иммунитета кур /Волков М.Ю., Тухбатов И.А. //НИВА УРАЛА, 2006, № 7. - С. 14-15.

25. Vorobeychikov Е. Evaluation of efficacy of antibiotics and pro-biotics combined use in animals infected with the vaccine strain of Anthrax agent / Vorobeychikov E., Vasilenko A., Sinitsa A., Stepanov A., Volkov M. //Symposium on chemical, biological, nuclear and radiological threats — a safety and security challenge. Tampere. Finland 2006. -P. 386-390.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник*» ПД№> 1-00007 от25.09.2000 г. Подписано,в печать 17.10,06 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 2,44 Печать авторефератов (095) 730-47-74, 778-45-60

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Волков, Михаил Юрьевич

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ,

СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Современные принципы коррекции нарушений микробиоценоза пищеварительного тракта животных и птиц.

1.2. Микробиологические и технологические аспекты конструирования препаратов с пробиотическим действием.

1.3. Критерии отбора микроорганизмов и их метаболитов в состав пробиотиков.

1.4. Биологически активные вещества, синтезируемые бактериями рода Bacillus subtilis.

1.4.1. Антибиотики, продуцируемые аэробными спорообразующими бактериями.

1.4.2. Биосинтез бактериями рода Bacillus ферментов, аминокислот и других биологически активных веществ.

1.5. Перспективы применения в ветеринарии пробиотиков, иммобилизованных на цеолитах

1.6. Применение аэросилов для улучшения реологических свойств пробиотиков.

1.7. Использование в составе пробиотиков гидролизатов белкового сырья.

1.8. Характеристика пробиотиков в различных лекарственных формах.

1.9. Эффективность применения пробиотиков при желудочно-кишечных болезнях животных и птиц.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1.1. Микроорганизмы.

2.1.2. Экспериментальные животные.

2.1.3. Материалы, питательные среды, растворы, реактивы.

2.1.4. Технологическое оборудование

2.1.5. Методы исследований.

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.2.1. Характеристика компонентного состава препарата Бактистатин.

2.2.1.1. Биологическая активность фугата культуральной жидкости штамма-продуцента Bacillus subtilis.

2.2.1.2. Свойства цеолита, как компонента препарата.

2.2.1.3. Исследование свойств гидролизатов соевой муки.

2.2.2. Усовершенствование технологии производства препарата.

2.2.2.1. Концентрирование нативной культуры B.subtilis ТЛИ и отделение фугатов.

2.2.2.2. Выбор способа обезвоживания компонентов препарата.

2.2.3. Приготовление опытных образцов препарата.

2.2.4. Изучение биологической активности препарата.

2.2.4.1. Острая и хроническая токсичность.

2.2.4.2. Влияние препарата Бактистатин на физиологические показатели периферической крови животных.

2.2.4.3. Влияние препарата на микрофлору кишечника животных.

2.2.4.4. Изучение иммуногенных и адъювантных свойств препарата Бактистатин.

2.2.4.5. Изучение антивирусной активности препарата.

2.2.4.6. Оценка эффективности протективного действия препарата Бактистатин в комплексе с антибиотиком доксициклином при сибирской язве экспериментальных животных.

2.2.5. Разработка методов контроля препарата Бактистатин.

2.2.6. Исследование стабильности свойств препарата

Бактистатин в процессе хранения.

2.2.7. Экспериментальные и производственные испытания препарата Бактистатин при патологии органов пищеварения молодняка сельскохозяйственных животных.

2.2.7.1. Лечебно-профилактическая эффективность препарата Бактистатин при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят.

2.2.7.2. Эффективность Бактистатина при желудочно-кишечных болезнях поросят.

2.2.7.3. Профилактическая эффективность препарата

Бактистатин при нарушениях обменных процессов у кур.

2.2.8. Экономическая эффективность технологии препарата Бактистатин.

2.2.9. Экономическая эффективность применения препарата Бактистатин при желудочно-кишечных болезнях животных.

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4. ВЫВОДЫ.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ

ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ

НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Комбинированный пробиотический препарат Бактистатин и его эффективность при желудочно-кишечных болезнях сельскохозяйственных животных"

Актуальность темы.

Болезни, связанные с нарушениями деятельности пищеварительного тракта животных и птиц, занимают одно из основных мест среди причин отхода молодняка. В этой связи, разработка и внедрение в практику ветеринарии новых отечественных высокоэффективных биологических препаратов для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней (ЖКБ) животных и птиц является одной из наиболее актуальных задач биотехнологии /3-6, 47-49, 53, 57, 59, 91, 108, 125, 141,

Перспективным направлением в данной области, по мнению многих отечественных и зарубежных специалистов /1, 31, 49, 97, 100, 106, 139, 155, 164, 206, 209, 224, 252, 255/ является конструирование пробиотиков нового поколения, разработка и совершенствование технологий их производства: изучение питательных потребностей перспективных пробиотических штаммов с целью подбора питательных сред для их культивирования; выяснение роли продуктов метаболизма и биологически активных веществ (БАВ) микробной клетки для определения природы адгезинов, механизма колонизации слизистой и антагонизма; разработка технологий изготовления комплексных препаратов на основе консорциумов бактерий с широким спектром

К пробиотикам нового поколения ученые /44/ относят биопрепараты с иммобилизованными пробиотическими штаммами и их метаболитами, а также синтетические композиции препаратов-аутостимуляторов, конструируемых на основе принципа "Quorum Sensing".

Матрицей для иммобилизации бактерий-антагонистов могут быть природные цеолиты, обладающие уникальными свойствами /36, 37, 60, 67, 271,285, 326, 343/.

Эффективность использования цеолитов в рационах сельскохозяйственных животных неоспоримо доказана работами отечественных и зарубежных специалистов /24, 27, 30, 46, 84, 137, 157, 160, 163,168, 169,173, 226, 238, 243, 271, 326-328, 343, 353/.

В своих исследованиях многие ученые /37, 60, 67, 144, 183-186, 227, 228, 258/ установили способность цеолитов к иммобилизации ферментов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), повышая их активность и стабильность, перевариваемость питательных веществ корма, усвоение азота, кальция и фосфора.

Цеолиты благоприятно влияют на морфологическое состояние слизистой оболочки кишечника, усиливают функционирование микроворсинок, что улучшает пищеварение и всасывание, регулируют содержание свободной жидкости в кишечнике, тем самым, способствуя нормализации пищеварения.

Перспективными также являются исследования лечебного действия экзометаболитов пробиотически активных и неактивных штаммов бактерий, иммобилизованных на цеолите; идентификация сигнальных молекул, ответственных за "Quorum Sensing"; изучение их влияния на состав микрофлоры кишечника и возможность ее стабилизации.

Преимущества препаратов-аутоиндукторов заключаются в том, что эти низкомолекулярные соединения характеризуются высокой специфичностью взаимодействия с микробной клеткой-мишенью, они способны проникать через клеточную мембрану, их легко модифицировать /43-45, 198, 201, 230/.

По мнению Бондаренко В.М. /44/, одним из передовых направлений в конструировании и совершенствовании пробиотиков является применение метаболитов бактерий, иммобилизованных на ионообменной матрице, при этом микроорганизмы и БАВ длительно сохраняют свою активность в ЖКТ животных.

Из экзогенной микрофлоры, бациллы и их метаболиты характеризуются рядом преимуществ, которые позволяют считать их наиболее перспективными в качестве основы пробиотиков нового поколения. Эти бактерии (кроме B.anthracis и B.cereus), как правило, являются безвредными для организма животных даже в высоких концентрациях; обладают антагонистической активностью к широкому спектру патогенных и условно-патогенных микроорганизмов; характеризуются высокой ферментативной активностью, что может обусловить существенное регулирование и стимулирование пищеварения; способны оказывать противоаллергенное и антитоксическое действие; технологичны в производстве и стабильны при хранении /8, 10-16,19,21,42,53,56,58,65,66,69,85, 105, 111, 117, 120,121, 122, 125, 143, 150, 177, 179, 180, 182, 195, 196, 198, 209, 213, 236, 240, 275, 277, 284,288,295, 305, 316, 317, 323, 324, 342/.

На основе аэробных спорообразующих бактерий уже получены суперпродуценты различных БАВ, таких как колицин Е2 и др., что открывает перспективу конструирования штаммов-продуцентов БАВ широкого спектра действия на микро- и макроорганизм /19, 42, 53, 58, 65, 69, 85, 111, 117, 120, 121, 122, 143, 177, 180, 182, 196, 198, 209, 236, 241, 277, 288, 295, 305, 316, 317, 323, 324/.

По данным специалистов /55, 204, 235, 239, 240/, самыми востребованными лекарственными формами пробитиков медицинского назначения являются порошок и таблетки. Однако пробиотики на основе живых микроорганизмов практически не выпускаются в таблетках по причине высокой их инактивации в процессе получения и хранения, а капсульная форма пока не востребована ветеринарной практикой.

Вместе с тем пробиотики на основе метаболитов бактерий можно капсулировать и таблетировать без потери эффективности препаратов /235, 240/.

Многие отечественные и зарубежные специалисты высказывают мнение, что применение пробиотиков при инфекционных болезнях человека и животных в будущем позволит отказаться от антибиотиков и других химиотерапевтических препаратов /47, 99,223, 237, 307, 349, 357/.

Цель работы.

Создание комбинированного препарата с пробиотическим действием на основе безотходной технологии и оценка его лечебно-профилактической эффективности при желудочно-кишечных болезнях сельскохозяйственных животных.

Задачи исследования.

2. Выбрать метод выделения и концентрирования экзопродуктов микробного синтеза B.subtillis ТПИ 13 по безотходной технологии.

3. Приготовить лабораторные образцы препарата и изучить его биологические свойства.

Научная новизна.

Впервые на основе инактивированного фугата культуральной жидкости спорообразующего штамма B.subtilis ТПИ 13, иммобилизованного на природном цеолите в смеси с гидролизатом соевой муки и аэросилом, получен отечественный комбинированный препарат с пробиотическим действием Бактистатин широкого спектра лечебно-профилактической эффективности для ветеринарии.

Обоснована возможность использования в составе препарата экзопродуктов микробного синтеза B.subtilis, природного цеолита, гидролизата соевой муки (ГСМ) и аэросила.

Создана промышленная безотходная технология производства пробиотического препарата Бактистатин и пробиотиков Биоспорин и БИОД-5 на единой аппаратурно-технологической линии, за один технологический цикл, в различных лекарственных формах (сухой, таблетированной, капсулированной), с использованием отечественного технологического оборудования и материалов.

Определены биологические свойства препарата Бактистатин, отличающие его от существующих пробиотиков: возможность его применения в комплексе с антибиотиками при инфекционных болезнях животных и птиц, в том числе при особо опасных зооантропонозных заболеваниях; способность подавлять размножение сальмонелл, кандид и стафилококков; стимулировать рост лактобацилл и бифидобактерий in vitro и в ЖКТ животных; улучшать перевариваемость кормов; проявлять адсорбционное, противовирусное, антитоксическое, иммуностимулирующее и адъювантное действия.

Практическая значимость работы.

В практику ветеринарии Российской Федерации внедрен первый отечественный комбинированный пробиотический препарат Бактистатин, обладающий широким спектром лечебно-профилактической эффективности.

Разработаны и утверждены ТУ 9384-002-71368318-06 на препарат Бактистатин; промышленный регламент производства препарата Бактистатин в сухой, таблетированной и капсулированной формах (12.01.2006 г. № 3457); разработана инструкция по применению препарата Бактистатин для лечения и профилактики дисбактериозов ЖКТ и повышения естественной резистентности организма сельскохозяйственных животных.

На аппаратурно-технологической линии пробиотиков Биоспорин и БИОД-5 в Центре военно-технических проблем биологической защиты НИИ микробиологии МО РФ (ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ, г. Екатеринбург) создана безотходная технология производства препарата Бактистатин в различных лекарственных формах (акт внедрения от 20.12.2005 г.).

Разработаны и утверждены ВНИИМС методики «Активность микроорганизмов (бактерий и грибов) метаболическая. Методика экспресс-обнаружения в продовольственном сырье и пищевых продуктах при помощи кондуктометрического анализатора «Мальтус-V» (МИ 2467-98) и «Хроматографические параметры бактерий в биологических жидкостях, смывах и продуктах питания. Методика идентификации по количественному содержанию жирных кислот при помощи газовых хроматографов «Кристалл-2000М», «Хромпак CP 2002» и аналогичных» (МИ 2468-98), в которых изложены количественные и качественные методы исследований нормофлоры, выявления и идентификации патогенных микроорганизмов, для диагностики ЖКБ и дисбактериозов, а также оценки физиологического состояния по выявлению метаболизма жирных кислот (липидный обмен).

Результаты исследований по усовершенствованию технологии пробиотиков БИОД-5 и Биоспорин и созданию безотходной технологии препарата с пробиотическим действием Бактистатин используются в учебном процессе по дисциплине «Биотехнология» в ФГОУ ВПО МГАВМиБ имени К.И. Скрябина.

Личный вклад соискателя.

Автору принадлежат организация и непосредственное осуществление исследований по выделению и инактивации фугатов-метаболитов культуральной жидкости штаммов B.subtilis (ВКПМ №В-2335(3), ТПИ 13), по выбору и обоснованию иммобилизирующей матрицы и питательного субстрата, по разработке безотходной технологии Бактистатин в различных лекарственных формах и подбору оборудования ATJI, по обоснованию принципов аппаратурного оформления созданной ATJ1, по испытанию безопасности и стабильности пробиотика Бактистатин, по разработке схем совместного применения с антибиотиком и проведению испытаний на животных на модели инфекционного процесса, по испытанию противовирусной активности, по испытанию лечебно-профилактической эффективности пробиотика Бактистатин при ЖКБ разных видов животных, по разработке методик оценки, выявления и идентификации микроорганизмов, по анализу и теоретическому обобщению полученных данных, по разработке научно-технической документации на препарат.

В работе использованы материалы, полученные лично автором, а также в соавторстве с:

- Маевским Е.И. (Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН - изучение препарата БАД «Бактистатин» на «острую» токсичность);

- Рогожиным А.З. (ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ - разработка технологии обезвоживания фугатов-метаболитов штаммов B.subtilis и элементов безотходной технологии пробиотиков Биоспорина и Бактистатина, проведение термогравиметрических испытаний гидролизатов белкового сырья, наработки опытных и контрольных серий пробиотика Бактистатин);

- Грачевым А.Ю. (ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ - исследования свойств фугатов культуральной жидкости штаммов B.subtilis, цеолитов Холинского месторождения, разработка режимов таблетирования и капсулирования Бактистатина, условий и режимов хранения пробиотика Бактистатин, стабильности при хранении);

- Вешняковым А.В. (ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ - разработка гидролизатов соевой муки, исследования их свойств и наработка опытных и контрольных серий);

- Грязневой Т.Н. (кафедра биотехнологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ имени К.И. Скрябина - проведение исследований на безопасность, стабильность и эффективность препарата Бактистатина, обобщении результатов испытаний лечебно-профилактической эффективности пробиотика Бактистатин);

- Степановым А.В. (НИИЦ МБЗ ГНИИИ ВМ МО РФ - исследования пробиотика Бактистатин для повышения эффективности схем экстренной профилактики и лечения инфекционных заболеваний, разработке и апробации схем совместного применения пробиотика и антибиотика на модели инфекционного заболевания и противирусной активности пробиотика в отношении ротавирусов человека и животных);

- Овчинниковым А.А. (ФГОУ ВПО УГАВМ - проведения испытаний пробиотика Бактистатин на различных видах животных и птице).

Результаты экспериментальных исследований, полученные совместно с другими исполнителями, приводятся с согласия соавторов.

Всем соавторам выражаю глубокую благодарность.

Особую признательность автор выражает ректору ФГОУ ВПО МГАВМиБ, академику РАСХН Воронину Е.С. и заместителю начальника ЦВТП БЗ НИИ микробиологии МО РФ, доктору биологических наук, полковнику Рогожину А.З. за действенную помощь в планировании исследований и организации производства препарата, ценные советы при подготовке настоящей диссертации.

На защиту выносятся следующие положения и результаты:

1. Теоретическое и экспериментальное обоснование компонентного состава и формы выпуска препарата Бактистатин на основе инактивированной культуральной жидкости, содержащей экзопродукты метаболизма B.subtilis ТПИ-13, иммобилизованные на природном адсорбенте-цеолите в смеси с гидролизатом соевой муки и аэросилом.

2. Промышленная безотходная технология производства пробиотиков

Биоспорин, БИОД-5 и пробиотического препарата Бактистатин за один технологический цикл производства, на единой аппаратурно-технологической линии.

3. Результаты лечебно-профилактической эффективности комбинированного препарата с пробиотическим действием Бактистатин при желудочно-кишечных болезнях разных видов сельскохозяйственных животных.

4. Протективное действие препарата Бактистатина при комплексном его применении с антибиотиком на модели острого инфекционного процесса.

Апробация результатов диссертации.

Основные результаты диссертационной работы доложены и представлены в материалах IV Международной научной конференции «Методы кибернетики химико-технологических процессов» (Москва, 1994); научной конференции «Медико-биологические и профилактические проблемы адаптации населения к современным экологическим условиям жизни» (Архангельск, 1994); Всероссийской научной конференции «Диагностика, лечение и профилактика опасных инфекционных заболеваний» (Биотехнология. - Киров, 1998); Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 75-летию НИИ микробиологии МО РФ (Киров, 2003); научно-практической конференции, посвященной 55-летию образования Центра ВТП БЗ НИИ микробиологии МО РФ «Диагностика, лечение и профилактика инфекционных заболеваний. Эпидемиология. Микробиология. Биотехнология. Экология» (Екатеринбург, 2004); III съезда Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (Москва, 2005); II Международной научно-практической конференции Медбиотек «Перспективы развития биотехнологии в России» (Пущино, 2005); VIII Международного Славяно-Балтийского научного форума "Санкт-Петербург - Гастро-2006"; Российской научно-практической конференции, посвященной 110-летию кафедры инфекционных болезней Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (Санкт-Петербург, 2006); Международном симпозиуме по ядерной, биологической и химической безопасности (Тампере, Финляндия, 2006).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 25 научных работ, из них 9 статей в научных журналах, 13 - в материалах научных конференций; методические рекомендации, утвержденные Комитетом по здравоохранению правительства Санкт-Петербурга; 2 главы книги «Питание, микробиоценоз и интеллект человека».

Объем и структура диссертации.

Материалы диссертации изложены на 375 страницах машинописного текста и включают введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, данные о практическом использовании научных результатов, рекомендации по использованию научных выводов, список использованной литературы (362 источника, из которых 259 отечественных и 103 иностранных).

Работа содержит 161 таблицу, 27 рисунков, 42 страницы приложений.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Волков, Михаил Юрьевич

4. ВЫВОДЫ

1. Разработан комбинированный пробиотический препарат, имеющий многокомпонентный состав, включающий метаболиты B.subtilis штамм ТПИ 13, иммобилизованные на природном ионообменнике цеолите, в смеси с питательным компонентом - гидролизатом соевой муки и аэросилом, имеющий срок годности 2 года при температуре хранения от минус 20 до плюс 40 °С.

2. Метаболиты B.subtilis (ТПИ 13) обеспечивают поддержание рН среды ЖКТ животных в границах физиологической нормы, способствуют подавлению размножения патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, улучшают физиологические функции кишечника, восстанавливают нормоф-лору и способствуют усвоению кормов в соотношении сухой смеси цеолита и фугата с гидролизатом соевой муки и аэросилом 65:35.

4. Гидролизат соевой муки, с соотношением аминного азота к общему 1:2, входящий в состав Бактистатина обеспечивает поступление в организм комплекса аминокислот для поддержания роста нормофлоры организма. Питательные среды на основе гидролизата соевой муки содержат 32 % ростости-мулирующих фракций пептидов с молекулярной массой от 500 до 1000 Дальтон, от общего содержания пептидов, отвечают питательным потребностям B.subtilis и могут использоваться для глубинного культивирования.

6. Режим разделения культуральной жидкости B.subtilis методом сепарирования со скоростью подачи суспензии 30±5 дм /ч в асептических условиях концентрирования позволяет одновременно получать на сепараторе АСГ-3МБ биомассу бацилл для производства пробиотика БИОД-5 и фугат - компонент препарата Бактистатин по безотходной технологии.

7. Препарат Бактистатин является безвредным для сельскохозяйственных животных, проявляет антагонистическую активность в отношении широкого спектра патогенной и условно-патогенной микрофлоры животных и повышает уровень лакто- и бифидобактерий в 2 раза, при абсолютном уменьшении и элиминации из кишечника энтеропатогенных микроорганизмов.

8. Биологически активные компоненты Бактистатина активизируют факторы неспецифической резистентности организма животных: фагоцитарная активность макрофагов повышается на 5 %, фагоцитарный индекс - на 2,5 %, активность естественных киллеров - на 25 %.

10. Комплексное применение антибиотика доксициклина и Бактистатина при лечении смоделированной сибиреязвенной инфекции усиливает протек-тивное действие на микрофлору и снижает токсический эффект антибиоти-котерапии. Средняя продолжительность жизни лабораторных животных для 10 LD50 увеличивается на 20 %, для 100 LD50 на 23 % и для 1000 LD50Ha 67 % в сравнении с контролем.

11. Существующая технология пробиотиков Биоспорин и БИОД-5 усовершенствована введением в аппаратурно-технологическую линию сушилки-гранулятора 524Р-АК, обеспечивающей одностадийное обезвоживание, иммобилизацию и гранулирование препарата Бактистатин с производительностью 10 кг/ч. Полученные по безотходной технологии серии препарата Бактистатин отвечают требованиям нормативной документации.

12. Схема применения препарата Бактистатин для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней телят, поросят и птицы, апробированная в условиях хозяйств, показала 96-100%-ную лечебно-профилактическую эффективность Бактистатина в рекомендуемых дозах при длительности применения препарата от 3 до 7 суток.

13. Препарат Бактистатин способствует повышению аппетита, перевари-ваемости корма и увеличивает прирост живой массы новорожденных поросят в среднем на 150 г в сутки по сравнению с контролем.

14. Затраты на 1000 руб. товарной продукции, произведенной по разработайной технологии, меньше на 71 %, в сравнении с сущестующей. Годовой экономический эффект от внедрения безотходной технологии препарата Бактистатин составил 14140513,18 руб. Экономический эффект от применения Бактистатина при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят составляет 52,4 руб. на рубль затрат.

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ

РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Бактистатин, обладающий протективными и пробиотическими свойствами, рекомендуется использовать в качестве лечебно-профилактического препарата при ЖКБ сельскохозяйственных животных.

3. Разработана «Инструкция по применению препарата «Бактистатин» (порошок) для лечения и профилактики дисбактериозов ЖКТ и повышения естественной резистентности сельскохозяйственных животных».

4. Разработан и утвержден регламент производства препарата «Бактистатин» № 3457.

6. На аппаратурно-технологической линии пробиотиков Биоспорин и БИОД-5 в ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ создана безотходная технология производства препарата Бактистатин в различных лекарственных формах (акт внедрения от 20.12.2005 г.).

7. Разработаны и утверждены Департаментом Министерства здравоохранения и социального развития технические условия (ТУ 9384-004-7136831804) и технологическая инструкция (ТИ 10-004-71368318-04) на биологически активную добавку к пище «Бактистатин» в таблетированной и капсулиро-ванной формах, санитарно-эпидемиологическое заключение № 77.99.19.003.Т.001778.10.04 от 12.10.2004 г. и свидетельство о государственной регистрации № 77.99.19.3.У.4177.10.04 от 12.10.2004 г.

9. Разработаны и утверждены ВНИИМС методики «Активность микроорганизмов (бактерий и грибов) метаболическая. Методика экспресс-обнаружения в продовольственном сырье и пищевых продуктах при помощи кондуктометрического анализатора «Мальтус-V» (МИ 2467-98) и «Хромато-графические параметры бактерий в биологических жидкостях, смывах и продуктах питания. Методика идентификации по количественному содержанию жирных кислот при помощи газовых хроматографов «Кристалл-2000М», «Хромпак CP 2002» и аналогичных» (МИ 2468-98).

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Препарат Бактистатин рекомендуется зооветспециалистам и владельцам животных в качестве лечебно-профилактического средства при ЖКБ телят, поросят, птицы, вызванных энтеропатогенными микроорганизмами и их ассоциациями, а также для совместного приема с антибиотиками при острых инфекционных заболеваниях бактериальной природы и для профилактики вирусных инфекций.

2. Элементы безотходной технологии, технологические параметры и режимы производства препарата Бактистатин в сухой, таблетированной и кап-сулированной лекарственных формах с использованием отечественного сырья и оборудования рекомендуются для приготовления биопрепаратов на основе других микроорганизмов.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Волков, Михаил Юрьевич, Москва

1. Абрамов Н.А. Перспективы создания промышленной технологии микрокапсулированных препаратов эубиотиков /Абрамов Н.А., Иванов Д.Г., Ланских А.Г. //Дисбактериозы и эубиотики.- Москва, 1996.- С. 2-8.

2. Авцин А.П. Микроэлементозы человека /Авцин А.П., Жаворонков

3. A.А., РишМ.А., Страчкова Л.С.-М.: Медицина, 1991.-С. 128.

4. Антипов В.А. Эффективность и перспективы применения пробиотиков /Антипов В.А., Субботин В.М. //Ветеринария. 1980. - № 12. - С. 55.

5. Антипов В.А. Биологические препараты симбионтных микроорганизмов и их применение в ветеринарии /Антипов В.А. //Сельское хозяйство за рубежом.-1981.-№ 2.-С. 43-47.

6. Антипов В.А. Отечественные пробиотики для животноводства /Антипов В.А., Мартынов Т.Н. //Биологические основы высокой продуктивности сельскохозяйственных животных. Москва, 1990. - Т. 2. - С. 109-110.

7. Антипов В.А. Использование пробиотиков в животноводстве /Антипов

8. B.А. // Ветеринария. 1991. - № 4. - С. 55-58.

9. Антонов B.C. Динамика классов иммуноглобулинов и других сывороточных белков у крупного рогатого скота в онтогенезе /Антонов B.C., Кленина Н.В., Михайлова С.А. //Проблемы ветеринарной иммунологии.- М.: Агропромиздат, 1985.- С. 49-50.

10. Аркадьева З.А. Факторы, влияющие на жизнеспособность и свойства микроорганизмов при различных методах хранения /Аркадьева З.А. //Биологические науки.- 1993.- № 4.- С. 93-104.

11. Артюхин В. И. Белковые гидролизаты в производстве питательных сред. Производство и применение продуктов микробиологических производств /Артюхин В. И., Шепелин А. П., Киселева Н. В./ Обзорн. информ.- М., 1990.-Вып.10.-С.12, 45.

12. А.с. 1235896 А 1 СССР, МКИ4 С 12 0 1/02 А 61 L 9/00. Способ предупреждения распространения госпитальной инфекции /В.И.Никитенко,

13. О.Б. Бухарин, И.К. Никитенко (СССР). 4 е.: ил. 2.

14. А.с. 1398868, МКИ4 А 61 К 35/74. Способ лечения гнойно-септических послеродовых заболеваний /В.В.Смирнов, С.Р. Резник, И.Б.Сорокулова, В.А. Вьюницкая, С.В. Афонская, В.Я. Голота, Е.Н. Афиногенова, Л.Г.Голота, С.О. Иванюта, В.А. Грохольский (СССР). 2 с.

15. А.с. 1645299, МКИ5 С 12 N 9/22, 1/20. Штамм бактерий Bacillus cereus продуцент эндонуклеазы Все 751 1 /В.В.Смирнов, С.Р.Резник, И.Б.Сорокулова, В.М.Крамаров, В.В.Смолянинов, Н.И. Матвиенко (СССР). - 2 с.

16. А.с. 1648975 А1, МКИ4 С 12N 1/20, А 61 К 35/74. Штамм бактерий Bacillus subtilis, используемый для получения молочного продукта, предназначенного для лечения диатеза, дисбактериоза и бактериальных инфекций / В.И.Никитенко (СССР). 2 с.

17. А.с. 1710575 А1, МКИ5 С 12 N 1/29, А 61 К 35/74. Штамм бактерий Bacillus sp.-компонент лечебно-профилактического препарата против дисбактериозов и аллергии /Л.И.Никитенко, В.И.Никитенко (СССР). 3 с.

18. А.с. 1723116 А1, МКИ5 С 12 N 1/20, А 61 К 35/74. Штамм бактерий Bacillus subtilis, используемый для получения препарата для профилактики и лечения воспалительных процессов и аллергических заболеваний /В.И.Никитенко, И.К.Никитенко (СССР). 4 е.: ил. 1.

19. А.с. 1723117 А1, МКИ5 С 12 N 1/20, А 61 К 35/74. Штамм бактерий Bacillus pulvifaciens, используемый для изготовления лечебно-профилактического препарата против бактериальных инфекций у животных /В.И.Никитенко, И.К.Никитенко, С.М.Пау (СССР). 3 с.

20. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях /Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Л.: Гос. из-во мед. литературы, 1962.-С.290.

21. Бабенко Г.А. Применение микроэлементов в медицине /Бабенко Г.А., Решетникова JI.П. Киев: Здоровье, 1971. -С.276.

22. Бабенко Ю.С. Ростстимулирующая активность лизоэнзимногокомплекса, синтезируемого S.recifensis var. lyticus 2435 /Бабенко Ю.С., Кукушкина Н.В., Черногор Н.П. //Микробиол. журн. -1990.- № 1.- С.15-19.

23. Бабин В.Н. Биохимические и молекулярные аспекты симбиоза человека и его микрофлора /Бабин В.Н., Доморадский И.В., Дубинин А.В. //Российский химический журнал. 1994. - № 6. - С. 66-78.

24. Бакулина Л.Ф. Пробиотики на основе спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus и их использование в ветеринарии / Бакулина Л.Ф., Тимофеев И.В., Перминова Н.Г. // Биотехнология. 2001. - № 2. - С. 48-56.

25. Бгатов В.И. Эффективность использования альтернативных цеолитов минеральных комплексов/Бгатов В.И., Мотовилов К.Я., Ван А.В.// Сибирская минералогия народному хозяйству. Новосибирск, 1990. - С. 9-24.

26. Бгатов В.И. Подходы к изучению литофагии /Бгатов В.И.//Природные минералы на службе человека. Сборник тезисов международной научно практической конференции 23-24 октября 1997 г. Новосибирск, - С. 3-5.

27. Бгатов В.И. Подходы к экогеологии / Бгатов В.И.// Новосибирск. Новосибирский государственный университет, 1993. - С. 267.

28. Бгатов В.И. Природные сорбенты и животный мир /Бгатов В.И.,

29. Бгатов А.В., Bait А.В., Паничев A.M. //Материалы международного симпозиума, Новосибирск, 1995. С. 25-28.

30. Бгатов В.И. Функции природных минералов в обменных процессах сельскохозяйственной птицы /Бгатов В.И., Спешилова М.А.// Сельскохозяйственная биология, 1987, №7. С.98-102.

31. Белицкий И. А. Сорбционные и молекулярно ситовые свойства природного клиноптилолита /Белицкий И. А., Щербатюк Н.Е., СмирноваЛ.В., НовенкоЛ.М., Быков В. Т. - Известия СО АН СССР, Новосибирск, Наука. 1971. № 12.-С. 138-140.

32. Белявская В.А. Пробиотики из рекомбинантных бацилл новый класс лечебно-профилактических препаратов и способ доставки лекарственных белков в организм /Белявская В.А. //Сб. науч.тр. сотр. НИКТИ БАВ.-Новосибирск.- 1996.-С. 90-197.

33. Беляков Н.А. Энтеросорбция /Под. ред. Н.А Белякова. — Л. 1991. — С.336.

34. Бергер М.О. Методы общей бактериологии / Под ред. М. О. Бергера. -М., 1983. С.23-56.

35. Бергер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследований / Под ред. М. О. Бергера. М., 1982.-С.23, 56, 67, 84, 97, 122, 234.

36. Березин И.В. Иммобилизованные ферменты /Под ред. И.В.Березина, В.К. Антонова и К.Мартинека. М.,Изд-во МГУ, 1976. - С. 14-42.

37. Березин И.В. Иммобилизованные ферменты /Березин И.В., Клячко H.JL, Левашов А.В. и др. //Биотехнология /Под ред. Н.С.Егорова и В.Д.Самуилова.- М., Высш.шк.,1987.- Кн.7. С. 12-67.

38. Благитко Е.М. О способах естественной регуляции гомеостаза/Благитко Е.М., Новоселов Я.Б.// Материалы III национального конгресса по курортному делу и натуральной терапии 22-24 июня 1998 г. Санкт Петербург, 1998. - С. 53-53.

39. Бовкун Г.Ф. Лечебное действие бифинорма при микроэкологических нарушениях кишечника у телят /Бовкун Г.Ф., Семенихина В.Ф., Ткачев Н.Ф. // Ветеринария. 1999. - № 4 . - С. 38 - 40.

40. Бойко Н.В. Антагонистическое действие культур Bacillus subtilis на бактерии рода Klebsiella /Бойко Н.В., Туряница А.И., Попович Е.П. // Микробиол. журн. 1989. - № 1. - С. 87-91.

41. Бондаренко В.М. Ранние этапы развития инфекционного процесса и двойственная роль нормальной микрофлоры / Бондаренко В.М., Петровская В.Г. //Вестник РАМН. 1997. - № 3. - С. 7-10.

42. Бондаренко В.М. Проблемы стабилизации нормальной микрофлоры человека /Бондаренко В.М. //Гастроэнтерология Санкт-Петербурга.-2005. №1.2. С.М15.

43. Бондаренко В.М. Иммуностимулирующее действие лактобактерий, используемых в качестве основы препаратов пробиотиков /Бондаренко В.М., Рубакова Э.И., Лаврова В.А. //Микробиол. журн.-1998. № 4. С. 107 -111.

44. Бородин Ю.И. Использование природных сорбентов для выведения радиоактивного цезия из организма экспериментальных животных /Бородин Ю.И., Бгатов В.И., Селятицкая В.Г. и др.// Радиационная биология. Радиоэкология, 1995. Т.35, Вып. 6. С.791-796.

45. Брилис В.И. Антибиотики и адгезивность микроорганизмов / Брилис В.И., Бриленс Т.А, Ленцнер Х.П. //Сб. науч. тр. ВНИИ антибиотиков.-М., 1988.- С. 147-151.

46. Бродов Л.Е. Диагностика и лечение острых кишечных инфекций /Бродов Л.Е., Ющук Н.Д., Малеев В.В. //Эпидемиол. и инфек. болезни. -1997.-№4.-С. 4-6.

47. Будагов Р.С. Микробные биопрепараты нового поколения для раннего лечения радиационных и комбинированных радиационно-термических поражений /Будагов Р.С., Ульянова Л.П., Поспелова В.В. // Дисбактериозы и эубиотики: Сб. науч. тр.- М., 1996.- С. 4.

48. Быков В.А. Расчет процессов микробиологических производств /Быков В.А., Винаров А.Ю., Шерстобитов В.В.- Киев: Техшка, 1985. С.245.

49. Быков В.А. Микробиологическое производство биологически активных веществ и препаратов /Быков В.А., Крылов И.А., Манаков М.Н. -М.: Высшая школа, 1987.-С.143.

50. Ван А.В. Биологическая роль минералов /Ван А.В.// Природные минералы на службе человека. Сборник тезисов международной научно практической конференции 23-24 октября 1997 г. Новосибирск. - С. 14-15.

51. Венгеров Ю.Я. Опыт применения биоспорина при лечении некоторых инфекционных болезней /Венгеров Ю.Я., Ефремова Л.В., Бургасова О.А.

52. Перспективы использования эубиотика «Биоспорин» в практике здравоохранения и военно-медицинской службы: Сб.науч.тр /ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ.- Екатеринбург, 1997.- С. 19 20.

53. Вилыпанская Ф.Л. Микрофлора кишечника и методы выявления дисбактериоза /Вилыпанская Ф.Л. //Медицинская сестра.-1987. № 10.- С. 1216.

54. Войчишина Л.Г. Применение спорообразующих бактерий в лечении больных дисбактериозом /Войчишина Л.Г., Чаплинский В .Я., Вьюницкая В.А. // Врачебное дело. 1991. - № 6. - С. 73 - 75.

55. Воробьев А.А. Дисбактериозы актуальная проблема медицины /Воробьев А.А., Абрамов Н.А., Бондаренко В.М. // Вестник РАМН - 1997. -№ 3. - С. 4-7.

56. Воробьев А.В. Опыт применения пробиотика биоспорин для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней молодняка /Воробьев А.В., Фадеев А.А. //Актуал. пробл. произв. продуктов жив-ва: Сб.науч.тр. -Самара, 2001. С. 86-88.

57. Воронин Е.С. Этиология и профилактика желудочно-кишечных заболеваний телят /Воронин Е.С., Девришов Д.А., Ставцева Л .Я. //Вестник с.-х. науки.-1989,- № 9.-С. 105-116.

58. Вудворд Дж. Иммобилизованные клетки и ферменты /Под ред. Дж.Вудворда . М., Мир, 1988. - С.6-14.

59. Гончарова Г. И. Микробная экология кишечника в норме и при патологии /Гончарова Г. И., Дорофейчук В. Г., Смолянская А.З.// Антибиотики и химиотерапия. 1989. - № 6. - С. 462-466.

60. Горская Е.М. Повышение неспецифической резистентности макроорганизма при пероральном применении эубиотиков из лактобацилл /Горская Е.М. // Иммунобиологические препараты: Сб.науч.тр.-М., 1989. С. 181-185.

61. Горская Е.М. Механизмы развития микроэкологических нарушений в кишечнике и новые подходы к их коррекции: Автореф. дис. докт. мед. наук /Е.М.Горская.- М., 1994.- С.53.

62. Готтшлак Г. Метаболизм бактерий /Готтшлак Г.-М.: Мир, 1982.-С.310.

63. Грачева Н.М. Эффективность нового бактерийного препарата биоспорина при лечении острых кишечных инфекций /Грачева Н.М., Гаврилов А.Ф., Соловьева А.И. // Журн. микробиол. 1996. - № 1. - С. 75-77.

64. Грачева Н.М. Применение препаратов из метаболитов нормальной микрофлоры в лечении больных острыми кишечными инфекциями /Грачева Н.М., Партий О.С., Леонтьева Н.И. //Эпидемиология и инфекционные болезни. 1996. - № 3. - С. 30-32.

65. Дворкин Г.А. Дисбактериоз и токсинообразование при диарее телят /Дворкин Г.А. //Сб. науч.тр. Белорусского НИИ животноводства.-Минск, 1986.-Вып. 16.-С. 146-147.

66. Джупина С.И. Факторные инфекционные болезни животных

67. Джупина С.И. //Ветеринария.- 2001.- № 3.- С. 6.

68. Донченко А.С. Индукторы интерферона и перспективы применения в медицине и ветеринарии /Донченко А.С., Аликин Ю.С.-Новосибирск, 1990.-С. 109-111.

69. Драверт П. О литофагии /Драверт П.// Сибирская природа. 1992. № 1. -С. 3-6.

70. Дрыгина Е.С. Оборудование биотехнологических производств за рубежом /Дрыгина Е.С., Ципенюк ИЛ. //Процессы и аппараты микробиологических производств: Сб.науч.тр. М.: Мир, 1987.- С. 23.

71. Егоров Н.С. Бактериоцины. Образование, свойства, применение /Егоров Н.С., Баранова И.П. //Антибиотики и химиотерапия.- 1999.- № 6.- С. 33.

72. Ельшин А.И. Сгущение суспензий микробиологических производств и способы интенсификации процесса /Ельшин А.И.- М.: Агропромиздат, 1987.-С.225.

73. Ефимов А.А. Клинико-гематологические и ферментативные исследования у здоровых и больных диспепсией телят /Ефимов А.А., Щербаков Г.Г., Ширяев Г.Г. //Сб. науч.тр. Ленинградского вет. ин-та.- Л., 1990.-Т. 62.- С.-31-34.

74. Жданов П.И. Применение споробактерина жидкого поросятам /Жданов П.И. // Ветеринария.- 1994. № 7.- С. 41-44.

75. Жданов П.И. Биологические и эпизоотологические аспекты производства и применение нового пробиотика из бактерий рода Bacillus в свиноводстве: Автореф. дис. . канд. вет. наук / П.И.Жданов; ПГАВМ СПб, 1997.- С.21.

76. Жданов П.И. Опыт и перспективы применения нового пробиотика «Споробактерин» в животноводстве и ветеринарной практике /Жданов П.И., Мешков В.М., Лепский А.И. /ЛОбилейн. сб.тр.ученых Оренбург.гос.аграр.ун-та.- Оренбург, 2000. С. 4-7.

77. Жужиков В.А. Фильтрование. Теория и практика разделения суспензий /Жужиков В.А. М.: Химия, 1980,- С.400.

78. Западнюк И.В. Лабораторные животные, их разведение, содержание и использование в эксперименте /Западнюк И.В.Западнюк В.П. Захаров Е.А. Киев: 1962.

79. Запруднов A.M. Микробная флора кишечника и пробиотики /Запруднов A.M., Мазанкова Л.Н.- М.: Высшая школа, 1999.- С.258.

80. Зароза В.Г. Меры борьбы с диареей телят раннего возраста /Зароза В.Г. //Достижения с.-х. науки и практики: Сб.науч.тр.-М., 1984.-№ 6.-С. 9-20.

81. Ивановский А.А. Новый пробиотик бактоцеллолакт при различных патологиях у животных /Ивановский А.А. //Ветеринария.-1996.-№ 11.-С. 3435.

82. Иноземцев В.П. Новое эффективное средство для профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней телят (Ветом 1.1) /Иноземцев В.П., Балкова И.И., Ноздрин Г.В. // Ветеринария. -1998. № 1. - С. 47-51.

83. Интизаров М.М. Возможности гнотобиологического эксперимента при изучении механизмов бактериального антагонизма и симбиоза /Интизаров М.М. //Теоретические и практические основы гнотобиологии: Сб.науч. тр.- М.: Агропромиздат, 1986.- С. 22-29.

84. Исаева Н.П. Механизмы воздействия пробиотиков на функциональное состояние лимфоцитов при остром шигеллезе /Исаева Н.П., Шахмарданов М.З., Земскова Л.Н. //Микробиол., эпидемиол. и иммунобиология 1994.- № 6. - С. 107-108.

85. Искова Д.И. Пробиотик руменолакт для молодняка крупного рогатогоскота/Искова Д.И. // Молочное и мясное скотоводство.-1993.-№ 1.-С. 17-19.

86. Исмаилов М.А. Профилактическое и терапевтическое действие биоспорина-В при диареях телят и поросят /Исмаилов М.А., Девришов Д.А., Бедоева З.М. //Вопросы физико-химической биологии в ветеринарии: Сб.науч. тр.-М., 1997.-С. 12-13.

87. Каллимулина Р.Г. Профилактика и лечение заболеваний телят /Каллимулина Р.Г. /УИнформ. бюл. МСХ и продов.- Башкортостан.-2002,- № 1.- С. 31-34.

88. Калунянц К.А. Оборудование микробиологических производств /Калунянц К.А., Голгер Л.И., Балашов В.Б.- М.: Агропромиздат, 1987.- С.398.

89. Кантере В.М. Теоретические основы технологии микробиологических производств /Кантере В.М. М.: Агропромиздат, 1990. -С.271.

90. Карпов A.M. Сушка продуктов микробиологического синтеза /Карпов A.M., Улумиев А.А. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. -С.216.

91. Карпов A.M. Состояние и перспективы мембранной техники в микробиологической, медицинской и пищевой отраслях промышленности /Карпов A.M., Лялин В.А., Свитцов А.А. / Биотехнология.-1989.- № 3.- С. 260-275

92. Каулина И.В. Разработка состава и технологии лекарственных форм композиционного сорбента /Каулина И.В. //Материалы республиканской научной конференции студентов и молодых ученых медвузов России: Тез.докл.—Самара, СамГМУ, 1999. — С. 98.

93. Каширская Н.Ю. Значение пробиотиков и пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры /Каширская Н.Ю. //Русский медицинский журнал. -2000.-№ 13-14.-С. 38-42.

94. Клименко В.В. Применение пробиотиков в ветеринарии //Биотехнология, экология, медицина /Клименко В.В.-Киров: Экспресс, 2002.-С. 32-34.

95. Ковалев В.Ф. Некоторые проблемы применения антибиотиков в животноводстве и ветеринарии /Ковалев В.Ф. //Антибиотики и медбиотехнология.-1989.- № 10.-С. 725-729.

96. Коган А.С. Применение иммобилизованных бактериальных протеаз для пролонгированной энзимотерапии гнойных хирургических заболеваний /Коган А.С., Салганик Р.И., Ефимов Ю.М. //Вестник хирургии.-1982. № 4. -С. 60-63.

97. Коденцова В.М. Прикладная биохимия и микробиология/ Коденцова В.М., Вржесинская О.А., Рисник В.В., Сокольников А.А., Спиричев В.Б. -М.: 1994. Т.ЗО, №4-5. С.603-609.

98. Колчинская М.Д. Продукты ферментативного гидролизата казеина и эластина протеазой B.subtilis /Колчинская М.Д., Васильев В.Н., Качан А.Ф.// Микробиол. журнал. 1983. - № 9. - С. 13-16.

99. Королюк A.M. Конструирование новых препаратов и лечебных продуктов для направленной коррекции микроэкологического статусаорганизма /Королюк A.M. //Инфектология, достижения и перспективы: Сб.науч.тр.- Санкт-Петербург, 1996.- С. 125.

100. Костенко Т.С. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии /Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И.- М.: Колос, 2001.-350 с.

101. Котов В. Б. Состояние и тенденции развития биотехнологии за рубежом /Котов В. Б., Беляева Т.А. //Итоги науки и техники. Биотехнология: Сб.науч.тр.-М.: Мир, 1991.-С. 156.

102. Кощеенко К.А. Иммобилизация клеток микроорганизмов /Кощеенко К.А., Суходольская Г.В. // Иммобилизованные клетки в биотехнологии. Сб.научн.трудов.- Пущино, 1987.- С.4-15.

103. Краморенко Ю.С. Микрометод комплексного определения Т- и В-лимфоцитов в капиллярной крови /Краморенко Ю.С., Урашева С.М., Байсалбаева В.К. //Лабораторное дело. 1990. - № 5. - С. 16-18.

104. Кругл иков В. Д. Возможность приживления Lactobacillus acidophilus в кишечнике белых мышей на фоне бактериальной терапии /Кругликов В.Д., Цураева Р.И., Рыжков И.В. //Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол.-1997.-№ 1.-С. 67-69.

105. Кудрявцев В.А. Подбор состава среды для оптимизации аминосинтетической активности аэробных бацилл /Кудрявцев В.А., Сафронова Л.А., Осадчая А.И. //Микробиол. журн. 1991, т.53, № 4, С. 6872.

106. Кудрявцев В.А. Влияние живых культур Bacillus subtilis на неспецифическую резистентность организма /Кудрявцев В.А., Сафронова

107. JI.A., Осадчая А.И. //Микробиол. журн. 1996. - № 2.- С.46-55.

108. Куриленко А.Н. Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных /Куриленко А.Н., Крупальник В.Л.- М.: Колос, 2000.-387 с.

109. Ленцнер А.А. Лактофлора и колонизационная резистентность /Лен-цнер А.А., Ленцнер Х.П., Микельсаар М.Э. //Антибиотики и мед. биотехнол.аг»« ■» <■ л < «л < «лiye/.-j№ j.-u. 1 /j-i/у.

110. Литвин В.П. Бактерин-СЛ при острых желудочно-кишечных болезнях /Литвин В.П., Резник С.Р., Вьюницкая В.А. //Проблемы диагностики, терапии и профилактики незаразных болезней с.-х. животных: Сб.науч.тр.- ВЗВИ .-Воронеж:, 1986. С. 76 -78.

111. Литвина Л.А. Перспективы использования пробиотиков в животноводстве /Литвина Л.А., Мотовилов К.Я. //Проблемы стабилизации и развития с.-х. пр-ва Сибири, Монголии и Казахстана в XXI в: Сб.науч.тр,-Новосибирск, 1999. ч. 2. - С. 220-222.

112. Лопатина Т.К. Иммуномодулирующее действие препаратов эубиотиков /Лопатина Т.К., Бляхер М.С., Николаенко В.Н. //Вестн. РАМН. -М.: «Медицина», 1997. № 3. - С. 30-34.

113. Лукин А.А. Защитная функция пептидных антибиотиков бацилл /Лукин А.А. //Антибиотики и медицинская биотехнология.-1987,- № 7,- С. 538-541.

114. Мазанкова Л.Н. Перспективы применения споровых пробиотиков при заболеваниях желудочно-кишечного тракта у детей /Мазанкова Л.Н., Курохтина И.С. // Педиатрия. 2002. - № 4. - С. 56-61.

115. Малик Н.И. Антилизоцимные свойства молочно-кислых бактерий, выделенных из кишечника поросят и птицы /Малик Н.И. //Совершенствование методов контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов: Сб.науч.тр.- ВГНКИ.- М., 2001.- С. 98-99.

116. Малик Н.И. Ветеринарные пробиотические препараты /Малик Н.И., Панин А.Н. // Ветеринария. 2001. - № 1. - С. 46-51.

117. Малик Н.И. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения: Автореф. дис.докт. биол. наук: 16.00.03 / Н.И Малик; ВГНКИ,-М., 2002. 53 с.

118. Матвеев В.Е. Научные основы микробиологической технологии. Кинетика развития и инактивация микробных популяций, септика, масштабирование /Матвеев В.Е.- М.: Агропромиздат, 1985. 224 с.

119. Медицинские иммунобиологические препараты для профилактики и лечения инфекционных и других заболеваний: Справочник — М.: ФГУП ИНТЕРСЭН, 1998. —С.320.

120. Методические указания по атомно-абсорбционным методам определения токсичных элементов в пищевых продуктах и пищевом сырье, ГОСТ № 26929-94, ГК СЭН РФ № 01-19/47-11.

121. Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков. М.: МЗ СССР, 1983. - 15 с.

122. Методические рекомендации к контролю питательных сред по биологическим показателям. М., 1986.

123. Методика идентификации по количественному содержанию жирных кислот при помощи газовых хроматографов «Кристалл-2000М», «Хромпак CP 2002» и аналогичных. -М.: 1998. МИ 2468-98.

124. Мишурнова Н.В. Препарат СТФ-1/56 при выращивании бройлеров /Мишурнова Н.В., Киржаев Ф.С. //Птицеводство. 1987. - № 2. - С. 40-41.

125. Мишурнова Н.В. Антагонистические свойства препарата СТФ-1/56относительно сальмонелл и кишечной палочки /Мишурнова Н.В., Киржаев Ф.С. //Ветеринария. 1988. - № 10. - С. 34-36.

126. Молохова Е.И. Лекарственные препараты пробиотики на российском фармацевтическом рынке /Е.И. Молохова, В.Н. Тарасевич //Фармация. — 2000. — Т.49. №3. — С.55—58.

127. Молохова Е.И. Пробиотики на Российском рынке /Молохова Е.И. /'/'Фармация. - 2000. - № 3. - С. 55-58.

128. Мосичев М.С. Общая технология микробиологических производств /Мосичев М.С., Складнев А.А., Котов В.Б.- М.: Агропромиздат, 1982.- 185 с.

129. Мотовилов К.Я. Эффективность применения в птицеводстве высококремнистых природных комплексов /Мотовилов К.Я.// Ресурсы и проблемы использования агрохимического сырья Западной Сибири. Новосибирск: Наука, 1988. С. 169-173.

130. Неклюдов А.Д. Получение и очистка белковых гидролизатов /Неклюдов А.Д., Иванкин А.Н., Бердутина А.В. //Прикл. биохимия и микробиол-2000-№ 4.-С.371-379.

131. Несчисляев В.А. Пробиотики: ретроспектива, проблемы и достижения научно-производственной практики НПО «Биомед» /Неклюдов А.Д., Иванкин А.Н., Бердутина А.В. //Журн. микробиол.-1998. № 2.- С. 100102.

132. Никитенко В.И. Взаимоотношения макроорганизма и бактерий в ране и тканях человека и животных /Никитенко В.И. //Хирургия.-1990.- № 9.-С. 94-98.

133. Никитенко В.И. Вместо лекарств бактерии /Никитенко В.И. //Наука в СССР,-1991.-№4.-С. 116-121.

134. Никитенко В.И. Споробактерин новый препарат для лечения дисбактериозов и гнойно-воспалительных процессов /Никитенко В.И., Горбунова Н.Н., Жигайлов А.В. //Дисбактериозы и эубиотики: Сб.науч.тр.-М.,1996. - С. 26-28.

135. Никитенко В.И. Некоторые новые данные о механизме действия спорообразующих пробиотиков /Никитенко В.И., Бородин М.В. //Актуальные вопросы военной и практической медицины. Оренбург, 2000. -с. 79-80.

136. Новоселов Б.Я. О некоторых вопросах технологии изготовления биологически активных пищевых добавок на основе минералов/Новоселов Б.Я./7 Сборник тезисов Международной конференции «Природные минералы на службе человека». Новосибирск, 1997. С. 32-33.

137. Новоселова Т.И. Аспекты программы создания продукции на основе природных минералов/Новоселова Т.И.// Природные минералы на службе человека. Сборник тезисов международной научно практической конференции 23-24 октября 1997 г. Новосибирск. - С. 32-33.

138. Ноздрюхина JI. Р. Нарушение микроэлементного обмена и пути его коррекции /Ноздрюхина JI. Р., Гринкевич Н.И. М.: Наука, 1980. - С. 374.

139. Ноздрюхина JI.P. Иммунопатология. Микроэлементы. Атеросклероз /Ноздрюхина J1.P., Семенович И.И., Юренев П.Н. М.: Наука, 1973. - С. 189.

140. Огарков В.И. Основные биотехнологические проблемы микробиологической промышленности /Огарков В.И. // Биотехнология.-1986.-№ 4.-С. 5.

141. Определитель бактерий Берджи //Под ред. Дж. Хоулта, Н.Крига, П.Спита, Дж.Стейли, С.Уильямса (9-е издание в 2-х томах) /Пер. с англ. под ред. Г.А. Заварзина.- М.: Мир, 1997. 799 с.

142. Орлова М.В. Антибактериальная активность Bacillus laterosporus /Орлова М.В., Смирнова Т.А., Шамшина Т.Н. //Биотехнология.-1995.-№ 1-2,-С. 23-26.

143. Осипова И.Г. Некоторые аспекты механизма защитного действия колибактерина и споровых эубиотиков и новые методы их контроля: Автореф. дис.канд. биол. наук: 16.00.03 /И.Г.Осипова М., 1997. - 25 с.

144. Осипова И.Г. Изучение безопасности бактерий рода Bacillus, составляющих основу некоторых пробиотиков /Осипова И.Г., Сорокулова И.Б. //Журн. микробиол., эпидемиологии. 1998. - № 6. - С. 68-71.

145. Панин А.Н. Иммунобиология и кишечная микрофлора /Панин А.Н., Малик Н.И., Малик Е.В.- М.: Аграрная наука, ИК «Родник», 1988. 48 с.

146. Панин А.С. Пробиотические препараты в ветеринарии /Панин А.С., Серых Н.Е. /ТВетинформ. 1993.- № 2.- С. 9-10.

147. Панин А.С. Принципы и перспективы применения пробиотиков в ветеринарии /Панин А.С., Малик Н.И. //Пробиотики и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека: Сб.науч.тр.- М., 1999,- С. 70.

148. Панин А.Н. Биотехнологические аспекты изготовления сухих пробиотических препаратов /Панин А.Н. //Научные основы пр-ва вет. биол. препаратов: Сб.науч.тр. / ВНИТИБП.- Щелково, 2000. С. 343-345.

149. Паничев A.M. Литофагия в мире животных и человека /Паничев A.M. М.: Наука, 1990.- С.420.

150. Паничев A.M. Литофагия в мире животных и человека /Паничев A.M. М.: Наука, 1990. - С.206, 224.

151. Пат. 1722502, МКИ5 А 61 К 39/02, 35/74. Препарат биоспорин для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний человека /В.В.Смирнов, С.Р.Резник, И.Б. Сорокулова (РФ).- 7 с.

152. Пермаков Н.И. Лечение телят профилакторного периода /Пермаков Н.И. // Ветеринария. 1995. - № 4.- С. 51.

153. Перетц Л. Г. Значение нормальной микрофлоры для организма человека /Перетц Л. Г. М.: Медицина, 1955. - 435 с.

154. Петров В.Ф. Получение природных биологических активных препаратов новое направление исследований в НПО «Биомед» /Петров В.Ф., Сафонова Г.М. // Журн.микробиол. - 1998. - № 2. - С. 95-98.

155. Петровская В.Г. Микрофлора человека в норме и патологии /Петровская В.Г., Марко О.П. М.: Медицина, 1976. - 231 с.

156. Пирузян Л.Ф. Сапрофитная микрофлора в качестве продуцента биологически активных веществ для целей микробной сапротрофной фармакотерапии /Пирузян Л.Ф., Михайловский Е.М. //Изв. Академии наук. Сер. «Биология».-1992.-№ 6.-С. 860 869.

157. Покровский А.А. Биохимические методы исследования в медицине/ Под ред. Покровского А.А.- М.: Медицина, 1969. -С. 164-169.

158. Покровский А.А. Биохимические методы исследования в клинике/ Под ред. Покровского А.А. -М.: Медицина, 1969. С. 116-119.

159. Попова Ж.П. Новый пробиотик для животноводства /Попова Ж.П., Никонорова А.К. //Зоотехния. 1995. - № 11. - С. 21-22.

160. Прегер С.М. Микроэлементы и иммунологическая реактивность организма / Прегер С.М. Томск. Томский университет, 1979. - С.347.

161. Проскурин Ю.Н. Пробиотические препараты для профилактики и лечения коров, больных маститом и новорожденных телят желудочно-кишечными заболеваниями: Автореф. дис. . канд. вет.наук: 16.00.03 / Ю.Н. Проскурин. М., 2000. - 25 с.

162. Раскин Г.И. Микроскопическая техника / Раскин Г.И. Левинсон Л.Б. -Москва, 1957.

163. Регистр лекарственных средств России //Энциклопедия лекарств.-М.:РЛС, 2000/1999.- 1006 с.

164. Резник С.Р. Биологические свойства споровых аэробных бактерий, выделенных из организма человека и животных /Резник С.Р., Вьюницкая В.А., Сорокулова И.Б. //Фитонциды. Киев: Наукова думка, 1981. - С. 35-40.

165. Резник С.Р. Влияние перитонеального введения бактерий рода Bacillus на фагоцитарную активность лейкоцитов крови /Резник С.Р., Смирнов В.В., Волынец А.К. //Микробиол. журн. 1982. - № 4. - С. 51-54.

166. Резник С.Р. Ассоциированный препарат из живых микробных культур рода Bacillus /Резник С.Р., Харченко С.Н., Вьюницкая В.А. //VI съезд Укр. микробиол. об-ва: Сб.науч.тр. /Киев: Наукова думка, 1984. С. 92-93.

167. Резник С.Р. Некоторые биологические свойства бактерий рода Bacillus, выделенных из организма людей /Резник С.Р., Слабоспицкая А.Т., Смирнов В.В. //Микроб, журн. 1985. - Т. 47, № 3. - С. 53-59.

168. Резник С. Р. Гематологические и цитохимические показатели телят при даче препарата Бактерин-СЛ /Резник С. Р., Шуст И. И. //Биохимия сельскохозяйственных животных и продовольственнаяпрограмма: Сб.науч.тр. Киев, 1989. - С. 25-27.

169. Решетников В.И. Разработка лекарственных форм препаратов с иммунобиологической и сорбционной активностью /Решетников В.И. //Фармация. 2002. №5. — С. 40-44.

170. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ — М, 2000. — С. 340—345.

171. Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней /Под ред. М. А. Жукова Вережникова.- М., Медгиз.1962.

172. Сайтов М.М. О роли дисбактериоза в развитии хирургической инфекции /Сайтов М.М., Никитенко В.И., Есипов В.К. //Дисбактериозы и эубиотики: Сб.науч.тр. М., 1996. - С.32-34.

173. Самуйленко А.Я. Основы технологии производства ветеринарныхбиологических препаратов /Самуйленко А.Я., Рубан Е.А.- М.: Россельхозакадемия.- Т 1.- Т 2.- М.: РАСХН, 2000,- 781 с.

174. Саноцкий И.В. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм /Саноцкий И.В., Фоменко В.Н. М., Медицина, 1979, -С. 231.

175. Сидоров М.А. Основы профилактики желудочно-кишечных заболеваний новорожденных животных /Сидоров М.А., Субботин В.В. //Ветеринария.-1998.-№ 1,- С. 3-6.

176. Сидоров М.А. Нормальная микрофлора животных и ее коррекция пробиотиками /Сидоров М.А., Субботин В.В. //Ветеринария. 2000. - № 11. -С. 17-22.

177. Слабоспицкая А.Т. Гиалуронидазная активность споровых аэробных бактерий, выделенных из различных экологических источников /Слабоспицкая А.Т. //Микробиол. журн. 1985.- Т. 47, № 4. - С. 71 - 74.

178. Слабоспицкая А.Т. Ферментативная активность бацилл, перспективных для включения в состав биопрепаратов /Слабоспицкая А.Т., Крымовская С.С., Резник С.Р. // Микробиол. журн. 1990. - Т. 52, № 1. - С. 914.

179. Смирнов В.В. Бактерии рода Bacillus продуценты антибиотиков /Смирнов В.В., Резник С.Р. //Проблемы изыскания и биотехнологии новых антибиотиков: Сб.науч.тр. - М.: Медицина, 1982. - С. 53 - 57.

180. Смирнов В.В. Методические рекомендации по выделению и идентификации бактерий рода Bacillus из организма человека и животных /Смирнов В.В., Резник С.Р., Сорокулова И.Б. Киев: БИ, 1983. - 50 с.

181. Смирнов В.В. Спорообразующие аэробные бактерии-продуценты биологически активных веществ /Смирнов В.В., Резник С.Р., Василевская И.А. Киев: Нукова Думка, 1982. - 278 с.

182. Смирнов В.В. Дискуссионные вопросы создания и применения бактериальных препаратов для коррекции микрофлоры теплокровных

183. Смирнов В.В., Резник С.Р., Сорокулова И.Б. //Микробиол. журн.- 1992.- № 6.-С. 82-94.

184. Смирнов В.В. Рост и спорообразование Bacillus subtillis в различных условиях аэрации /Смирнов В.В., Осадчая А.И., Кудрявцев В.А. //Микробиол.журн. 1993. - № 3. - С. 38-43.

185. Смирнов В.В. Современные представления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus /Смирнов В.В., Резник С.Р., Вьюницкая В.О. //Микробиол. журн.-1993. -№ 4. -С. 92-112.

186. Смирнов В.В. Чувствительность к антимикробным препаратам штаммов бацилл, составляющих основу некоторых пробиотиков /Смирнов В.В., Руденко А.В., Самгородская Н.В. //Антибиотики и химиотерапия.-1994.- № 4.-С. 23-28.

187. Смирнов В.В. Влияние комплексного пробиотика споролакта на микробиоценоз кишечника теплокровных /Смирнов В.В., Резник С.Р., Вьюницкая В.А. //Микробиол. журн. 1995. - № 4. - С. 42-49.

188. Смирнов А.О. Разработка технологии получения таблеточной формы препарата биоспорин /Смирнов А.О., Харечко А.Т., Садовой Н.В. //Биотехнология. 1996. - № 11. - С. 51-55.

189. Смирнов В.В. Новый пробиотик эндоспорин для лечения и профилактики эндометритов животных /Смирнов В.В., Кудрявцев В.А., Осадчая А.И. //Дисбактериозы и эубиотики: Сб.науч.тр,- М., 1996.- С. 32-38.

190. Смирнов В.В. Пробиотики на основе живых культур микроорганизмов /Смирнов В.В., Коваленко Н.К. // Микробиол. журн.-2002.-№ 4.-С.62-80.

191. Сорокина Е.Ю. Изучение отдаленных последствий при воздействии цеолитов на организм лабораторных животных/ Сорокина Е.Ю., Аксюк И.Н., Левицкая А.Б.//Вопросы питания. 1995, №3, С.16-18.

192. Сорокулова И.Б. Сайтспецифические эндонуклеазы бактерий рода

193. Bacillus /Сорокулова И.Б., Крамаров В.М., Резник С.Р. // Микробиол. журн.-1990.- № 5.-С.8-11.

194. Сорокулова И.Б. Перспективы применения бактерий рода Bacillus для конструирования новых биопрепаратов /Сорокулова И. Б. //Антибиотики и химиотерапия. 1996. -№ 10. - С. 13-15.

195. Сорокулова И.Б. Сравнительное изучение биологических свойств биоспорина и других коммерческих препаратов на основе бацилл /Сорокулова И.Б. //Микробиол. журн.- 1997,- № 6.- С. 43-49.

196. Сорокулова И.Б. Рекомбинантные пробиотики: проблемы и перспективы использования в медицине и ветеринарии /Сорокулова И.Б., Белявская В.А. // Вестник РАМН. 1997. - № 3. - С. 46-49.

197. Сорокулова И.Б. Изучение безопасности и реактогенности нового пробиотика субалина на добровольцах /Сорокулова И.Б. //Микробиол. журн.-1998.-№ 1.-С. 43-46.

198. Сорокулова И.Б. Влияние пробиотиков из бацилл на функциональную активность макрофагов /Сорокулова И.Б.//Антибиотики и химиотерапия,- 1998 № 2. - С. 20-23.

199. Спасская Т.А. Повышение резистентности телят под влиянием пробиотических препаратов /Спасская Т.А. //Известия Тимирязевской с.-х. академии. М., 1998. - Вып. № 4. - С. 169-179.

200. Субботин В.В. Биотехнология пробиотика лактобифадола (бифацидобактерина) и его лечебно-профилактическая эффективность: Автореф. дис. докт. вет. наук: 16.00.03 /Субботин В.В; МГУПБ. М., 1999. -41 с.

201. Субботин В.В. Профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с симптомокомплексом диареи /Субботин В.В., Сидоров М.А. //Ветеринария. 2001. - № 4. - С. 3-7.

202. Тарабукина Н.П. Морфологические, культуральные и биологические свойства Bacillus subtilis «ТНП-3» /Тарабукина Н.П. //Научное обеспечение ветеринарных проблем в животноводстве: Сб.науч.тр. Новосибирск, 2000. -С. 264-266.

203. Тараканов Б.В. Использование микробных препаратов и продуктов микробиологического синтеза в животноводстве /Тараканов Б.В.-М.: ВНИИТЭИагропром, 1987.-48 с.

204. Тараканов Б.В. Новые биопрепараты для ветеринарии /Тараканов Б.В., Николичева Т.А. //Ветеринария. 2000. - № 7. - С. 45-50.

205. Темный Н.В. Профилактика и лечение при диарее новорожденных телят /Темный Н.В. // Ветеринария. 1990. - № 10. - С. 15 -17.

206. Теоретические и клинические аспекты науки о питании/ -М. 1987. -Т.8, -С.217.

207. Тец В.В. Влияние антибиотиков на популяционную изменчивость бактерий /Тец В.В., Борисова Л.Б. //Антибиотики и химиотерапия.-1988.- № 4.-С. 299-303.

208. Тихонов И.В. Проблемы и перспективы биотехнологии /Тихонов И.В. Гаврилов В.А. //Ветеринарная медицина.-М.: Агровет,- № 3.-2003.- С. 26-27.

209. Трапезов Е.В. Микробная экология пищеварительного тракта у больных острыми кишечными инфекциями /Трапезов Е.В., Леонтьева Н.И., Бондаренко В.М. //Микробиол. эпидемиол. и иммунобиол.-1992.-№ З.-С. 2528.

210. Трахтенберг И.М. Показатели нормы у лабораторных животных в токсикологическом эксперименте /Трахтенберг И.М., Сова Р.Е., Шефтель В.О. М.: Медицина, 1978.

211. Тривен М. Иммобилизованные ферменты /Тривен М.- М., Мир, 1983. С.56-87.

212. Тутов И.К., Ситьков В.И. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов: Учеб.пособ. /Тутов И.К., Ситьков В.И.- Ставрополь: СГСХА, 1997.- С.251.

213. Уголев A.M. Физиология и патология пристеночного (контактного) пищеварения /Уголев A.M. Л,:, 1967. - С.54-1-03.

214. Урбан В.П. Болезни молодняка в промышленном животноводстве /Урбан В.П., Найманов И.Л. М.: Колос, 1984. - С.207.

215. Филиппова С.Ю. Влияние технологии лекарственной формы активированного угля на его адсорбирующую способность /Филиппова С.Ю.//Фармация. 1996. — Т. 45, — №4. — С. 21—24.

216. Филонов А.Е. Стабильность плазмид и конкуренция плазмидсодержащих и бесплазмидных штаммов в условиях непрерывного культивирования /Филонов А.Е., Воронин A.M. //Антибиотики и химиотерапия.-1990.- № 5.- С. 46-50.

217. Фомченко Н.В. Прогнозирование сепарируемости микробных суспензий в центробежном поле /Фомченко Н.В., Бирюков В.В., Красильникова Н.В .//Биотехнология 1997. - № 4. - С. 22-26.

218. Фукс П.П. Разработка новой технологии получения сухого пробиотика /Фукс П.П., Петренчук Э.П. //Вет.медицина.-1997.-Вып. 73.-С. 24-28.

219. Харечко А.Т. Полифункциональность лечебно профилактического действия нового эубиотика биоспорина /Харечко А.Т., Поберий И.А., Литусов Н.В. //Человек и лекарство: Сб.науч.тр. - М., 1997. - С. 208-210.

220. Чахава О. В. Гистобиология о микрофлоре организма хозяина и антибиотикотерапии /Чахава О. В. //Антибиотики и мед. биотехн.- 1987.-№ 3. -С. 170-173.

221. Черновский Л.А. Цеолит и продуктивное действие корма/Черновский Л.А., Жуковский И.Ю.// Ресурсы и проблемы использования агрохимического сырья Западной Сибири. Новосибирск: Наука, 1988. С. 166-169.

222. Чернущенко Е.В. Процессы пищеварения и усвоения питательных веществ при скармливании сухой живой бактериальной культуры /Чернущенко Е.В. //Бюл. ВНИИФБИП с.-х. животных. 1988. - № 3. - С. 36-38.

223. Чугунова Н.К. Разработка способов стабилизации биомассы при изготовлении лекарственных форм лактобактерина /Чугунова Н.Н., Несчисляев В.А., Вдовина Г.П. и др. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1997. — №2. — С. 102—104.

224. Чудновская И.В. Антивирусная активность пробиотиков из бацилл /Чудновская И.В., Рыбалко С.Л., Сорокулова И.Б. //Доповщ Н.ацюнальжн академп наук Украши. 1995. - № 2. - С. 124-126.

225. Шагам Н.Л. О физико-химических методах стандартизации микробиологических питательных сред /Шагам Н.Л., Раскин Б.М., Мельникова В.А. //Микробиол. эпидемиол. и иммунобиол.- 1981.- № 4.-С.24-29.

226. Шадрин A.M. Природные цеолиты в животноводстве, ветеринарии и охране окружающей среды /Шадрин A.M.// Природные минералы на службе человека. Сборник тезисов международной научно -практической конференции 23-24 октября 1997 г. Новосибирск. С. 161-162.

227. Шайхаманов М.Х. Профилактика диспепсии новорожденных телят /Шайхаманов М.Х., Грамолин В.П., Авакянц Б.М. //Ветеринария.-1994.-№ 3.1. S 1 ^s л1. С. Zl-ZJ.

228. Шалыгин Г.К. Ферменты кишечника в норме и патологии /Шалыгин Г.К.-Л.: Медицина, 1967.-C.27l.

229. Шевелева С.А. Пробиотики, пребиотики и пробиотические продукты. Современное состояние вопроса /Шевелева С.А. //Вопр. питания.-1999. № 2. - С. 32-40.

230. Шевелуха B.C. Сельскохозяйственная биотехнология /Шевелуха В. С., Калашникова Е.А., Воронин Е.С. и др.- М.: Высшая школа, 2003.- 469 С.

231. Шендеров Б.А. Антимикробные препараты и нормальная микрофлора. Проблемы и возможные пути их решения /Шендеров Б.А. //Антибиотики и химиотерапия. 1988. - № 12. - С. 921-926.

232. Шендеров Б.А. Эубиотики как основа функционального питания человека /Шендеров Б.А., Манвелова М.А. //Актуальные проблемы инфекционной патологии: Сб.науч.тр. -М.: С-Пб., 1993. С. 47.

233. Шендеров Б.А. Значение колонизационной резистентности в патогенезе инфекционных заболеваний /Шендеров Б.А.- М.: Высшая школа, 1994.-С. 112-121.

234. Шендеров Б.А. Пробиотики и функциональное питание /Шендеров Б.А., Манвелова М.А., Степанчук Ю.Б. //Антибиотики и химиотерапия1997.- №7.-С. 30-34.

235. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание /Шендеров Б.А. -М.: Грангь, 1998. Т. 1-2. - 288 с.

236. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и ее роль в поддержании здоровья человека /Шендеров Б.А. //Росс. журн. гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 1998. - №1. - С. 61-65.

237. Шимкус А.Ю. Применение пробиотиков при выращивании телят /Шимкус А.Ю. //Актуал. вопросы зоотехн. науки и практики как основа улучшен, продуктов, качеств и здоровья с.-х. животных: Сб.науч.тр. М.: Колос, 2001.-С. 81-83.

238. Щербаков П.Н. Профилактика и лечение при желудочно-кишечных болезней телят /Щербаков П.Н., Гусев А.Г. //Ветеринария.- 2002.- № 3.- С. 15.

239. Щербакова Э.Г. Новый препарат Бифилиз (ВИГЭЛ) и опыт его применения /Щербакова Э.Г., Грачева Н.М., Растунова Г.А. //Дисбактериозы и эубиотики: Сб.науч.тр.- М., 1996.- С. 41-43.

240. Экологическая биотехнология / Под ред. К.Ф.Фостера и Д.А.Вейза / Пер с англ. под ред. А.И.Гинака .- М., Химия , 1990. -С. 166-189.

241. Эпштейн-Литвак Р.В. Дисбактериоз кишечника: Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследований /Эпштейн-Литвак Р.В.- М., 1973. С. 229-234.

242. Axelsson L. Lactobacillus reuteri, a member of the gut bacterial flora /Axelsson L. //Microb.Ecol.Health and Disease, 1989.-Vol.2.- № 2 pp. 466-468.

243. Bansal S. Probiotics in healyh and diseasts /Bansal S. //J. Assoc physicians.- 2001.- № 7.- P. 735-741.

244. Barrow P. Probiotics "The scientific basis" /Barrow P. //Edd by R.Fuller. First edition 1992. Published by Chapman and Hall. 2-6 Boundary Row.London SE 1 8HN.-1980.-p. 225-257.

245. Behrens G. Aufzuchtleistung abgesetzter Ferkel mit dem Probiotikum PACIFLOR /Behrens G. // Schweinewelt. 1994. - 19, N6. - p. 219.

246. Benedettini G. Immunomodulation by Bacilllus subtilis spores /Benede-ttini G., Delibero C., Pierotti R. //Boll. 1st. Sieroter.Milan.-1983.- № 6.-p. 509-516.

247. Bengmark S. Colonic food: pre- and probiotics /Bengmark S. //Am J Gastroenterol 2000; 95 (1) SuppI: S 5-7.

248. Benno J. Bifidoflora and microflora /Benno J., Mitsuoka T. // Development of intestinal microflora in human and animals. 1986. - 5., № 1.- p. 13-25.

249. Berg R.D. Probiotics, prebiotics, or conbiotics /Berg R.D. // Treds Microbiol 1998. - Vol. 6. - p. 89-92.

250. Bmer G.W. Biotherapeutic Agents and Infection Diseases /Bmer G.W., Me Farland L.W. Surawicz СМ.- Human Press. 1999: 316 p.

251. Bonomi A. Probiotics in swine feeding: The use of Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis (experimental contribution) /Bonomi A. // Riv. della Soc. Italianadi Scienza Dell'Alimentazione. — 1992. 21, N 4. - p. 481-499.

252. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding /Bradford M.M. // Anal.Biochem. Vol.72, 1976, 248-254.

253. Carlisle E. M. A silicon requirements for normal skull formation in chicks. J.Nutr., 1980, 110,352-359.

254. Chauviere G. Competitive exclusion of diarrhoeagenic Escherichia coli ETEC from human enterocyte-like Caco-2 cells by "heat-killed Lactobacillus" /Chauviere G. // FEMS Microbiol. Lett. 1992. - N 91. - p. 213-218.

255. Cheng C.C. Effect ofpeptides and amino acid prodused by Lactobacillus casei in milk on the acid production of bifidobacteria /Cheng C.C., Nagasawa T. // Japanise I of Zootechical Sci. -1984. 55(5). - p. 339-349.

256. Christopher F. Environmental biotechnology /Christopher F. New York. - 1990.-p. 265-270.

257. Cipradi G. Effect of an adjunative treatment with Bacillus subtilis for foodallergy /Cipradi G. // Chemioterapia.-1986.- 5, N6.- p. 408-410.

258. Clarke R. J. T. Microbial ecology of the gut /Clarke R. J. T. // Bauchop. London etc. 1977.

259. Coppi F. Results of treatment with Bacillus subtilis spores (Entero-germina) after antibiotic therapy in 95 patients with infection calculosis /Coppi F. // Chemotherapia. 1985.-4, № 6. - p. 467 - 470.

260. Collins M.D. Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut /Collins M.D. -Am J Clin Nutr, 1999; 69 (suppi): 1052S-7S.

261. Davies M. Bacterial cells as antitumor agents in man /Davies M. // Rev.Environ Health. 1982.- 4.- № 1.- p.31-36.

262. De Valdez G.F. Effect of drying medium on residual moisture content and viability of freere dried lactic acid bacteria /De Valdez G.F., De Jion G.S., De Rmz Holgado A.P., Oliver G. //Appl. Environ. Microbiol. 1985. - № 2.- P. 413-415.

263. De Simone C. Effect of Bifidobacterium longum and Lactobacillus acidophilus on gut mucosa and peripheral blood B-lymphocytes /De Simone C., Ciardi A., Grassi A. //Immunopharmacol. 1992. -Vol. 14, N 1-2 -p.- 41-43.

264. Dityatkovskaja E.G. Biosporin white allergietching dermatosis treatment /Dityatkovskaja E.G., Chaplinsky V.Y. //1-st Int. Conf. Immunoreabilitation "Reabilitation oe Immune system". Dagomys, 1-5 Juli, 1992 / Tsk. 1992. P. 97.

265. Dona V. Papagni M J.ltal. Chim. Clin. 1987, v. 12, p 205-211.

266. Dove P. M. Silica-water interactions. In Heany P.J., Prewitt C.T., Gibbs G.V., (eds): Silica, Physical Behavior/ Dove P. M., Rimstidt J. D. // Geochemistry and Materials Application. Reviews in Mineralogy 1994, 29, 259-301.

267. Drago L. Inhibition of in vitro growth of enteropathogens by new Lactobacillus isolates of human intestinal origin /Drago L., Gismondo M.R.,1.mbardi A., de Haen C., Gozzini L. //FEMS Microbiol. Lett. -1997. -N 153(2). -Pp.-455-463, Aug 15.

268. Dubos R. Staphylococcus and infection immunity /Dubos R. //Amer. J. Dis. Child. -1963, -N 105. -Pp.-643-645.

269. Dunny G.M. Cell-cell communication in gram-positive bacteria /Dunny G.M., Leonard B.A. //Ann. Rev Microbiol. -1997, -N51. -Pp.-527-564.

270. Eden C.S. Escherichia coli: natural colonizanion and extraintestinal invasion /Eden C.S., Lindstendt R., Lomberg H. // XIY Int. Simp, on Maicrobial Ecology and Disease. San Antonio. Texas. USA. - 1989. - p. 175-177.

271. Elkins C.A. Identification of genes encoding conjugated bile salt hydrolase and transport In Lactobacillus johnsonii 100-100 /Elkins C.A., Savage D.C. //J. Bacteriol. -1998. -N 180. -Pp.-4344-4349.

272. Evaldson I. The normal Human anaerobic microflora /Evaldson I., Heimdaki A, Kagar L., Nord C.E. // Scand. J. Infect. Dis. Suppl. 1982. - v. 35. -p.9-15.

273. Ewe K. Effect of lactose, lactulose and bysacodyl on gastrointestinal transit studied by metal detector /Ewe K., Ueberschaer В., Press A.G. //Aliment Pharmacolther 1995; 9 (1): 69-73.

274. Fais S. Lymphocyte activation by Bacillus subtilis spores /Fais S. // Boll. 1st. Sieroter. Milan. 1987. - 66, N 5. - P. 391-394.

275. Farkas-Himsley H. Sensitivity it bactericin of murine leukemia's withvarying oncogenic potency /Farkas-Himsley H. //Microbios.Lett. -1980, -N 15. -Pp.-89-96.

276. Flanagan P. A silicate mineral supplement, Microhydrin, traps reduced hydrogen providing in vitro biological antioxidant properties / Flanagan P., Purdy-Lloyd К.// Proceedings National Hydrogen Association, 1999,10, 595-610.

277. Fuller R. Bacteria associated with the gastric epithelium of neonatal pigs /Fuller R., Barrow P.A., Brooker B.E. /'/' Appl. Environ. Microbiol., 1978, vol. 35, N3.-p. -582-591.

278. Fuller R. History and development of probiotics /Fuller R. // Probiotics. The scientific basis. London: Chapman a. Hall. - 1992. - p. 29-53.

279. Fuller R. Probiotics in man and animals /Fuller R. // J. Appl. Bacter. -1989.-66 №5.-p. 365 -378.

280. Fuller R. Probiotics in human medicine /Fuller R. // Gut., 1991. 32 p.

281. Fuller R. Probiotics: the scientific basis /Fuller R. London: Chapman S Hall, 1992, p. 216-226.

282. Fuller R. Probiotics 2. Application and practical aspects. Introduction: Development of commercial preparations. Factors affecting the response /Fuller R.-1997.-153 p.

283. Fuller R. Probiotics and prebiotics: microtlora management for improved gut health /Fuller R., Gibson G.R. //Clin Microbiol Infect 1998: 4: 477-480.

284. Foran C. Bacillus secreted IgA /Foran C. //Chimioterapia.-1989.-6.-P. 218-231.

285. Gauhe A.P. Bifidus factor. Preparations obtained from human milk. /Gauhe A.P., Gyorgy PA, Hoover J.R.E. //Arch Biochem 1954; 48.- P. 214-24.

286. Ganz T. Defensives and other endogenous peptide antibiotics of vertebrates /Ganz Т., Martin, E., Lehrer R.I. //AI. Leu k. Biol. -1995. P. 128-136.

287. Garlson H. Deference mechanisms of the avian gastrointestinal tract /Garlson H. //Poltry Sci. -1982. -V.61, № 7. P. 1268-1272.

288. Garvie E.L. The effect of yogurt on some components of the gutmicroflora and the metabolism of lactose in the raV /Garvie E.L, Coif C.B., Fuller R. //J.Appl.Microbiol., 1984, N 56. P. -237-245.

289. Gibson G.R. Selective stimulation of bifidobacteria in the human colon by oligofructose and inulin. /Gibson G.R., BeattyE.B., Wang X., Cummings J.H. //Gastroenterology 1995; 108: 975-82.

290. Gibson G.R. Dietary modulation of the human gut microflora using the prebiotics oligofwtose and inulin /Gibson G.R. //J Nutr 1999; 129 (7) Suppl: 1438S-41S.

291. Gissen A.S. Off probiotics, prebiotics and synbiotics /Gissen A.S.// ISS VRP'S Inc. Vit Res. Prod. Newsletters. USA. - 1995. - P. 111-117.

292. Goldin B.R. Probiotics for humans /Goldin B.R., Gorbach S.L. //In: Probiotics. The Scientific Basis (Fuller, R., ed.), Chapman & Hall, London. -1992. -Ch. 13, p. 366.

293. Goldberg I. Stability of lactic acid bacteria to freezing as related to their fatty acid compositions /Goldberg I., Eschar L. //Appl. Environ. Microbiol.-1977.-vol. 33.-N3.-P. 489-496.

294. Gordon J.I. Interactions between epithelial cells and bacteria /Gordon J.I., Hooper L.V., Bry 1., Midtvedt Т., Falk P.G. //Science.-1997.-N 276.- P.-965.

295. Green D.H. Characterization of two Bacillus probiotics /Green D.H.// J. Appl. and Environ.Microbiol. 1999. - Sept. - P. 4288-4291.

296. Gupta M. Lytic effect of Bacillus subtilis elastase on gram-positive and negative bacteria /Gupta M., Kaur M., Gupta K.G. // Indian J. Exp. Biol.-1992.-30, N5.- P. 380-383.

297. Hansson H.B. Controlled comparison ofnalidixc acid or lactulose with placebo in shigellosis /Hansson H.B., Barkenius G., Cronberg S., Juhlin I. //Scand J Infect Dis 1981:13:191-3.

298. Hatch R. C. Effect of adding Bacillus acidophilus to milk fed baby calves /Hatch R. C., Thomas R.O., Thayne W. V. // J.Daiiy Sci.-1973.-56, N 4. P.682-687.

299. Heckly R.J. Protection kinetics of additives on survival of lyophilized bacteria /Heckly R.J., Dimmick P.L. //Cryoliology. -1978.- vol. 15.-N6.- P. 654658.

300. Impey C.S. Competitive exclusion of Salmonellas from the chicken caecum using a defined mixture of bacterial isolates from the caecal microflora of the adult bird /Impey C.S., Mead G.C., George S.M. //J. Hygiene (Camb.). 1982. - 89, N 2. - P. 479-490.

301. Iwama T. Resistance of lactic acid bacteria products (Streptococcus faecalis) Against Artificial Gastric Acid and a Number of Anti-bacteria /Iwama T. // Pharmacy. 1970. - Vol. 21(5). - P. 69.

302. Jenny K. Biosurfactants from Bacillus licheniformis: structural analysis and characterization /Jenny K., Kappeli O., Fiechter A. //Appl. Microbiol. Biotechnol.-l991.-36.- P. 5-13.

303. Jiraphocakul S. Influence of dried B.subtilis cultura and antibiotics on performanct and intestinal microflora in turkeys /Jiraphocakul S. // Poultry Science.- 1990.-69, N 11.-P. 1966-1973.

304. Jorgensen J. H. Probiotika till svin. En litterfturoversing og en afprovning at 2 probiotikas effekt under forskellige produktionsformer /Jorgensen J. H. // Dansk Vet. Tidskr.-1988. 71. - P. 1211 -1221.

305. Keller W. D., Balgord W. D., Reesman A. L Dissolved products of artificially pulverized silicate minerals and rocks / Keller W. D., Balgord W. D., Reesman A.L.// Part.l. Journal of Sedimentary Petrology, 1963, 33, 191-204.

306. Keller W. D. Argillation and direct bauxitization in terms of concentrations of hydrogen and metal cations at surface of hydrolyzing aluminum silicates /Keller W. D.// Bulletin of the American Association of Petroleum Geologists, 1958, 42,233-245.

307. Keller W. D. Drinking Water: A Geochemical Factor in Human Health / Keller W. D.// Geological Society of America Bulletin, 1978, 89, 334-336.

308. Keller S. J Immunology Meth / Keller S. Schleifer S. Me Keghey F. 1981, v.51,p.287-291. 14.Stigllc N Vlohovic V., Vlohovic S et al. Acta.Med.Fac. flumin-1978, v.l5,p. 15-17.

309. Landsudvalget for svin. Bioplus 2B till smagrise // Den rullende Afprofning af staid- og produktionssystemer.- Copenhagen, Meddelse, 1989.-P.162.

310. Lilley D.M. Probiotics: growth promoting factors produced by microorganisms /Liiiey D.M., Stiiiweil R.J. /'/' Science. 1965. - 147. - p. 747-748.

311. Mc Farland L.V. Saccharomyces boulardii. A review of an innovative biotherapeutic agent /Mc Farland L.V., Berhasconi P. // Microbial ecology in health and disease. -1993.- N 6.- p. 157-171.

312. Microbial metabolism in the digestive tract//(ed. M.J.Hill) CRC PRESS, Boca Raton, Fl., 1994. 346 p.

313. Mitsuoka I. Comparative studies on lactobacilli from faeces of man, sivine and chickens /Mitsuoka I. //Zbl. Bacteriol., parasitenk. infections krankh. Ung. Hyg. -1969. -210, № 1. p. 52 - 64.

314. Mitsuoka T. Lactic acid bacteria and human health /Mitsuoka T. //4th Intern. Symp.- 1985. Seul.

315. Morishita Y. The effects of various dietary substances on the intestinal microflora /Morishita Y. // J. Germfree Life Gnotobiol. 1991. - Vol. 21. - N 1. -p. 344-346.

316. Mulder R.W. Probiotics as a tool against Salmonella contamination /Mulder R.W. // World Poultry. 1991. - 7.- N 3. - p. 36-37.

317. Mc Farland L.I. Biofherapeutic agents: past, present and future /Me Farland L.I., Elmer G.W. //Microecology Ther 1995; 23: p. 46-73.

318. Mc Farland L.V. Biotherapeutic agents: boon or bane? /Mc Farland L.V. // Microbil. Ecol. Health and Disease.- 1994.-7, N1. P.585-586.

319. Malih K.A. A new freze-drying methods for preservation of nitrogen-fixing and other fragile /Malih K.A. // J. Microbiol. Methods. 1988. - Vol. 8. - № 5.-P. 259-271.

320. Maruta Kiyoshi. Probiotics or antibiotics /Maruta Kiyoshi. //World Poultry.-1999.N3.-P. 112-127.

321. Mazza P. The use of Bacillus subtilis as an Antidiarrhoeal microorganism MazzaP. //Boll. Chem. Farm. -1994.-133,N.l -P.3-18.

322. Mukherjee J. N., Chatterjee В., Ray A. Liberation of Yf, AI3+ and Fe3+ ions from pure clay minerals on repeated salt treatment and desaturations / Mukherjee J. N., Chatterjee В., Ray A. /7 J. Colloid Science, 1948, May, 437-445.

323. Neilson F. H. Ultratrace Minerals. In Shils M.E., Young V.R. Modern Nutrition in Health and Disease 7tn ed. Lea and Febiger, Philadelphia, 1988, 286288.

324. Nosaki-Renard J. Induction interferon par Bacillus subtilis /Nosaki-Renard J. Ann Microbiol., 1978,129 a, № 4, p. 525-542.

325. Nurmi E.V. Process For the production of a bacterial preparation for the prophylaxis of intestinal disturbances in poultry /Nurmi E.V., Schneits J.E., Makela P.H. // U.S. Patent, august 25. - 1987, N 4.689.226, p. 287-346.

326. Prokesova L. Effect of Bacillus firmus and other sporulating aerobic microorganisms on in vitro stimulation of human lymphocytis /Prokesova L., Novakova M., Mara M. // Folia Microbiol. 1994. - 39. - p. 501-504.

327. Roberfroid M.B. Prebiotics and probiotics: are they functional foods? /Roberfroid M.B. //Am J Clin Nutr 2000: 71(6) Suppl: 1682-87.

328. Roffe C. Biotherapy for antibiotic-associated and other diarrhoeas /Roffe CM J. Infect.-1996.- N 32. P. 1 -10.

329. Roth F.X. Nutritive Wirksamkeit von Toyocerin.l. Mitteilung: Ferkelaufzucht /Roth F. X., Kirchgessner M. // Landwirtsch.Forsch.-1988.-41, N.l.-P. 58-62.

330. Schilman D.A. Antagonism by gram-negativt bacteria to growth of Yersinia enterocolitica in mixed cultures /Schilman D.A., Olson S.A. // Appl. Environ. Microbiol. 1984. - 48, № 3. - p. 539 - 549.

331. Shan Varsha. Bacterial degradation of antinutritional factors: isolation oftrypsin inhibitor and hemagglutinin degrading bacteria from rat small intestine /Shan Varsha, Perekh L.J. // Indian. J. Microbiol. 1984. - 24, N 3-4. - P. 149-151.

332. Shirahata S. Electrolyzed-reduced water scavenges active oxygen species and protects DNA from oxidative damage / Shirahata S., Kabayama S. Nakano M. et al.// Biochemical and Biophysical Research Communications, 1997, 234, 269274.

333. Senna V. The intestinal microtiora of infants: composition of fecal flora in breast-led and bottle-fed infants /Senna V., Sawada K., Mitsuoka T. //Microbiol. Immunol., 1984, P. 975-86.

334. Simon L.L. Intestional microflora /Simon L.L., Lorbach S.L. // Med. Clin. North. Amer. -1982. v. 66. - p. 557 - 574.

335. Spreafico F. L'effetto immunostimolatore dell spore di B. subtilis: aspetti sperimentali /Spreafico F., Polentarutti N., Vecchi A. //Chemioter. Antimicrob.-1980.-4.- P. 259- 261.

336. Surawicz C.M. Prevention of antibiotic associated diarrhoea by Saccharomyces boulardii: a prospective study /Surawicz C.M., Elmer G.W., Speelman P. // Gactroenterology.-1989.- 96. p. 981-988.

337. Tanaka R. Probiotics: prospects of use in opportunistic infections /Tanaka R.- Microbiol. Biochem. 1995. - № 7.- P. 123-127.

338. Thach P.N. Le Bacillus subtilis en therapeutique et dans la prophilaxie /Thach P.N., Vu T.C., Nguen Т.Н. // Rev. Immunol. 1968. - 72, N 1/2. - p. 53-58.

339. Vanbelle M. New probiotiki and application of them in veterinary science and medicine /Vanbelle M. // Ann. Microbiol. 2000. - 140a, N 8. - P. 251-253.

340. Van Loo. Functional food properties of non-digestible oligosaccharides: a consensus report from the HVDO project (DGXII AIRII-CT94-1095) /Van Loo, J.A Cummings, J.A Delzenne, N.A Englyst // BrJNutr.- 1999: 81(2): 121-32.

341. Wood T.N. Probiotics shown to change bacterial community structure in the avian gactrointestinal tract /Wood T.N. //J.Appl. and Environ. Microbiol.-1999.-Nov.-p. 134-138.

Информация о работе

Волков, Михаил Юрьевич
доктора биологических наук
Москва, 2006
ВАК 03.00.23

Диссертация

Комбинированный пробиотический препарат Бактистатин и его эффективность при желудочно-кишечных болезнях сельскохозяйственных животных - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы