Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ДОПОЛНЕННЫЕ ЛИНИИ КАК МОДЕЛЬ ИНТРОГРЕССИИ ЧУЖЕРОДНОГО МАТЕРИАЛА S. LYCOPERSICOIDES В ГЕНОМ КУЛЬТУРНОГО ТОМАТА

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "ДОПОЛНЕННЫЕ ЛИНИИ КАК МОДЕЛЬ ИНТРОГРЕССИИ ЧУЖЕРОДНОГО МАТЕРИАЛА S. LYCOPERSICOIDES В ГЕНОМ КУЛЬТУРНОГО ТОМАТА"

На правах

авах рук>

КНЯЗЕВ АНДРЕЙ НИКОЛАЕВИЧ

ДОПОЛНЕННЫЕ ЛИНИИ КАК МОДЕЛЬ ИНТРОГРЕССИИ ЧУЖЕРОДНОГО МАТЕРИАЛА £ ЬУСОРЕШСОЮЕБ В ГЕНОМ КУЛЬТУРНОГО ТОМАТА

03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-2007 ^

а»

Работа выполнена на кафедре генетики Российского государственного аграрного университета - МСХА имени К А Тимирязева

Научный руководитель:

доктор биологических наук, академик РАН, академик РАСХН, профессор Александр Александрович Жученко

Официальные оппоненты:

доктор сельскохозяйственных наук Светлана Ильинична Игнатова кандидат биологических наук Роман Александрович Комахин

Ведущее учреждение: Всероссийский научно-исследовательский институт селекции и семеноводства овощных культур РАСХН

Защита состоится «20» июня 2007 г в__на заседании диссертационного

совета Д 220 043.10 при Российском государственном аграрном университете - МСХА имени К А Тимирязева по адресу 127550, г Москва, >л Тимирязевская, 49 Факс: (495)-97б-0894

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библис имени Н И. Железнова РГАУ-МСХА имени К А Тимирязева

Автореферат разослан «_» мая 2007 г

и размещен на сайте http //www timacad ru

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук

j РГАУ-МСХА--

i „г""ениК-А. Тимирязева ? ЦНБ имени Н.И. Железнова Общая характеристика ф»6й*ьК2-учнын литературы

Актуальность темы. Использование^.'дикорастущих видов -сородичей культурных - является необходимым * вследствие ^эрозии—" генетического материала возделываемых видов. Адаптации к абиотическим и биотическим факторам внешней среды, возникшие у диких видов в процессе эволюции, являются мощным резервом для улучшения культурных видов растений. В то же время интрогрессия чужеродного генетического материала зачастую затруднена вследствие стерильности гибридов. Подобная проблема существует и при использовании вида Solanum lycopersicoides, обладающего рядом ценных признаков ■ -толерантностью к пониженным температурам, устойчивостью к возбудителям некоторых болезней (Botrytis cinerea, Phytophtora parasítica, вирусу мозаики огурца (CMV), Xanthomonas campestris pv. vesicatoria, Ftisarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici) (Rick, Yoder, 1988, Rick et al., 1995). Одним из возможных путей интрогрессии являются моносомно дополненные линии с добавлениями отдельных хромосом этого вида (Chetelat, 1998). Важным критерием оценки интрогрессии может служить конъюгация хромосом и цитогенетическая стабильность мейотического деления у данных линий.

Цели и задачи исследований. Целью настоящего исследования являлась оценка возможности интрогрессии генетического материала S. lycopersicoides в геном культурного томата с использованием моносомно дополненных линий. Исходя из цели, были поставлены следующие задачи:

• Идентифицировать дополненные линии культурного томата с хромосомами S. lycopersicoides.

• Оценить степень гомо- и гомеологии хромосом S. lycopersicoides и культурного томата.

• Определить частоту передачи хромосом S. lycopersicoides в потомстве дополненных линий.

• Выявить влияние дополненной хромосомы на мейотическое деление.

• Оценить влияние дополненной хромосомы на мейотическую рекомбинацию.

• Определить возможность применения ПЦР-анализа для идентификации чужеродного генетического материала.

Научная новизна и практическая значимость. Выполнен цитогенетический анализ пяти моносомно дополненных линий томата с хромосомами Solanum lycopersicoides. Анализ мейотического деления показал, что дополнительные хромосомы в целом вызывают нарушения мейотического деления. Впервые ппк-я.ганп, дтп, рачны£_гр.омосомь1 S. lycopersicoides обладают специфическими эффектами У нк\ Ucóiteroгацию хромосом. Так, хромосомы II и IV S. I lycoríkysiéóidés ЛлоТум вртуп#г& в хромосомные ассоциации в виде тривалентов fc'xpOMOCONtóviií TóbíaTftííK>£$% как хромосома XI представлена во веек клетках ¡тояыкыв уни^здертшу.!

! м ■ ' ""

i i™í

состоянии Наличие конъюгации хромосом свидетельствует о гомологии хромосом и возможности интрогрессии генов 5 /усорем!сокЛ25 в культурный томат. Пахитенный анализ позволил установить особенности конъюгации хромосом гомеологичной группы II Применение молекулярных маркеров позволило ускорить идентификацию интрогрессии генетического материала 5" ¡\copersicoides

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на научной конференции «Памяти Грегора Менделя» (Москва, 2001), ХЫ Международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс» (Новосибирск, 2003), на 2-й конференции МОГиС «Актуальные проблемы генетики» (Москва, 2003), на научной конференции молодых ученых и специалистов, посвященной 140-летию РГАУ-МСХА имени К А Тимирязева (Москва, 2005), на научной конференции молодых ученых по агрономии в г Чачак (Сербия, 2005), на научной конференции молодых ученых Ломоносов-2006 (Москва, 2006)

Публикации результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 8 работ

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена

на страницах, включает_таблиц,_приложений Состоит из введения,

обзора литературы, результатов и обсуждения, выводов и _предложений

Список использованных литературных источников содержит_источников,

в том числе_иностранных

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Материал. Материалом дня исследований служили расшептяюшиеся популяции растений моносомно дополненных линий (МДЛ) с хромосомами II, IV, V, X, XI 5 ¡усоретсогЛез, любезно предоставленные Р Четелатом из центра генетических ресурсов томата (США, Калифорнийский Университет)

Методы. Семена расщепляющихся популяций проращивали в чашках Петри при температуре 28°С Проростки высаживали в кассеты (6 х 12) объемом 50 см3 Опытные растения выращивали в сосудах объемом 7 л в закрытом грунте при естественном освещении

Дополненные растения из расщепляющихся популяций выделяли подсчетом числа хромосом в меристемах корешков мотодых растений Фиксацию материала проводили в утренние часы в уксусном алкоголе Препараты готовили методом распластывания клеток и окрашиванием красителем Гимза (Пухальский и др , 2004)

Для изучения мейотического деления у томата использовали небольшие (0,1-0,25 мм) бутоны Отобранные бутоны фиксировали в уксусном алкоголе (3.1) и хранили в холодильнике при +-4°С Исследования мейоза проводили на временных препаратах пыльников, окрашенных ацетокармином

Пахитенный анализ выполняли на постоянных препаратах, приготовленных методом распластывания клеток В качестве стандарта

использовали стандартную пахитенную карту культурного томата (Жученко, 1978).

При работе с расщепляющимися популяциями с дополненными хромосомами II, X и XI для выявления чужеродного генетического материала использовали CAPS-маркеры: TG91, TG361, СТ240, СТ203, СТ113 и SCAR-маркер TG608 (Bai et al., 2004; Alpert et al., 1996; Canady et al., 2005) (табл.1).

Выделение ДНК осуществляли из молодых листьев сеянцев томата по стандартной методике (Fulton et al., 1995). Для амплификации использовали праймеры, представленные в таблице 1.

Таблица 1

Молекулярные маркеры для идентификации интрогрессий_

Маркер Хромосома Последовательность праймера 5*-3' Размер ампликонов, п.н. Рестриктаз a

TG91 II tgcagagctgtaatatttagac cggtctcagttgcaactcaa 400 Dra I

TG361 II gtacaggagtcctctgagatgatc caacgacaagcattccagtc 600 Аро I

TG608 II gaagctttcttaagcaggttgttg tcattagtgttaggcaagtggaag 1000 (1200 SI.)* —

СТ240 X atcccaagtaccctcgcattagt agccttctttgtcccatcag 850 HaelII

СТ203 X tagaatatgggaagcgaaatgga gaggaggcgtaatagg 650 НаеШ

СТ113 XI acaacgggcaacagacgcaacc agctcgaggatggccgcacttt 352 Mbo И, BstENII

♦Примечание: 1200 п.н. размер ампликона у S. lycopersicoides

Условия ПЦР: денатурация при температуре 94°С - 1 минута, отжиг праймеров - 50°С 1 минута, синтез - 72°С 2 минуты. Рестрикцию ампликонов осуществляли с использованием рестриктаз - Dra I, Аро I, Mbo I (Bai et al., 2004; Alpert et al., 1996; Canady et al., 2005). Электрофорез проводили в 2% агарозном геле (Alpert et al., 1996).

Результаты исследований и обсуждение 1. Числа хромосом как прямой метод идентификации растений с дополненными хромосомами

Основным методом идентификации моносомно дополненных линий является подсчет числа хромосом в метафазе митоза или мейоза. Проведение этой работы требует достаточно много времени, особенно при анализе больших по численности популяций. Необходимость постоянного цитологического анализа моносомно дополненных линий существенно ограничивает их использование. Однако именно этот метод является самым надежным при выделении дополненных линий.

з

Анализ числа хромосом в расщепляющихся популяциях показал сходный процент моносомно дополненных растений Доля растений с числом хромосом 2п=25 (рис 1) составила около 10% по хромосомам II и XI, что значительно ниже теоретически ожидаемой Это может быть обусловлено пониженной жизнеспособностью мужских гамет с дополнительной хромосомой п=12+1 Однако появление растений с числом хромосом 2п=26 свидетельствует о том, что эти гаметы могут быть жизнеспособны

j/P* jf

v*

. f

Рис 1 Метафазная пластинка растения с дополненной хромосомой II (МДЛ И) 2п=25

Для доказательства того, что дополнительная хромосома действительно принадлежит другому виду, была проведена геномная гибридизация in situ которая показала, что речь идет именно о хромосоме этого вида Для второй хромосомы томата, ядрышкообразующей, возможна визуализация ядрышкоорганизующего региона методом флуоресцентной гибридизации in situ — FISH Сочетание этого метода с геномной гибридизацией in situ показало, что дополните1ьная хромосома является хромосомой II S lycopersicoides (Соловьев и др , 2001)

2. Пахитенный анализ как метод идентификации хромосом S. lycopersicoides

Пахитенный анализ, несмотря на его трудоемкость, является эффективным инструментом идентификации хромосом, особенно видов с небольшим числом морфологически сходных метафазных хромосом Для томата этот метод успешно применяется и в настоящее время

Выполненный на моносомно дополненных растениях пахитенный анализ позволил провести идентификацию хромосом, а также установить факт конъюгации между хромосомами культурного томата и S lycopersicoides На рис 2 представлены хромосомы моносомно дополненного растения на стадии пахитены и схемы хромосомы II обоих видов

Отмеченная конъюгация между длинными плечами хромосомы II свидетельствует о наличии гомологии между ними и о возможности интрогрессии генетического материала S lycopersicoides в хромосому культурного томата в резутьтате рекомбинации между гомеологичными

хромосомами.

Пахитенный анализ выявил морфологические различия коротких плеч хромосомы II культурного томата и Я. 1усорег$1со1с1е$. Так, короткое плечо хромосомы культурного томата содержит ■ гетерохроматиновый регион значительно большего размера в сравнении с хромосомой 5. ¡усорегя1со1(1е$ (рис. 2).

Рис. 2. Хромосома II культурного томата и S. lycopersicoides в стадии пахитены у моносомно дополненного растения, а - пахитена моносомно дополненного растения, 6 — схемы хромосомы II культурного томата (справа) и S. lycopersicoides (слева).

3. Молекулярные маркеры для идентификации интрогрессий и чужеродных хромосом

Молекулярные маркеры, специфические для хромосом определенного вида, могут быть использованы для выявления дополнений чужеродных хромосом. Применение маркеров значительно сокращает затраты времени и труда на идентификацию растений с чужеродным генетическим материалом. Совместное использование маркеров и цитологического анализа значительно сокращает объем цитологических исследований.

При использовании маркера СШЗ, локализованного в коротком плече хромосомы XI, показан полиморфизм по наличию сайта рестрикции у культурного томата и дикорастущих видов (Bai et al., 2004). Анализ исходных форм и расщепляющейся по хромосоме XI популяции показал, что маркер Ctl 13 может быть использован для выявления растений с генетическим материалом хромосомы XI S. lycopersicoides. На рисунке 36 видно, что у образца 2 (Х-3-37) помимо двух рестрикционных фрагментов присутствует и нерестрицированный ампликон. Это свидетельствует о присутствии у данного растения хромосомы S. lycopersicoides. Цитологический анализ этого растения подтвердил ее наличие.

По локусам TG91 получен фрагмент длиной 400 п.н. (рис. 4). Рестрикция продуктов амплификации этого маркера рестриктазой Dral не выявила различий между культурным томатом и видом S. lycopersicoides по этому локусу. Так же было установлено отсутствие полиморфизма по локусу TG608.

а)

I 2 3 4 5 6 7 8

1 2 3 4 5 б

Рис 3 Элекгрофореграмма чокусаОПЗ а) ампликоны 1 - XI-1-25 2 - Х1-1-2, 3 - Х1-3-37, 4 - Х1-3-13, 5 - Х1-1-7, б - маркер мотекутярных размеров 100 Ьр 7 ~ XI-1 8, 8 - Х1-3-4. 6) после рестрикции 1 - Х1-1-5, 2 - Х1-3-37, 3 - Х1-3-11, 4 - Х1-3-47, 5 - XI 3-34, 6 -маркер чолекутярного размера 100 Ьр

1 2 3 4 5

Рис 4 Элекгрофореграмма локуса ТС91 1 - ампликон кутьтурного гомата УКЗб 2 -•гоае рестрикции культурного томата, 3 - ампликон .V 1усорег$1саи1е.ч 4 - после рестрикции 5 ¡усорегкстЛез, 5 - маркер молекулярного размера 100 Ьр

Анализ локуса ТС361 выявил различия между культурным томатом и 5 1усорегягсо1с1ез У дикорастущего вида сайт рестрикции отсутствовал (рис 5), что свидетельствует о возможности применения этого маркера для идентификации генетического материала хромосомы II в культурном томате Анализ расщепляющейся популяции по хромосоме II показал, что у всех проанализированных растений данный маркер отсутствует Это может свидетельствовать как об отсутствии хромосомы II 5 /усоретсо/с/аг, так и о возможной рекомбинантной природе этой хромосомы у анализируемых растений Об этом свидетельствуют и результаты пахитенного анализа дополненных растений, показавшие конъюгацию дчинных плеч хромосом культурного томата и 51 ¡усорегягсо^ея Это может служить основой появления рекомбинантных хромосом

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 И 12 13

Рис 5 Электрофореграмма токуса ТС361 1 - 6 - растения популяции МДЛ-И, 7, 8 -кутыурный томат, 9, 10-5 1усорег$1Сок1ех П, 12 - растение популяции МДЛ-П (нечетные - ампликоны, четные - рестрикты) маркер молекулярного размера 100 Ьр

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Рис б Электрофореграмма локуса СТ203 Ампликоны 1 1усорег$1сок1е$, 2 -ку тьтурный томат, 3 - 7 - растения популяции МДЛ-Х Рестрикты 8 - V 1усирегх1С01с1е.?, 9 - культурный томат, 10 - 14 - растения популяции МДЛ-Х, 15 -маркер молекулярного размера Х-Вте 181

Для токуса СТ203, локализованного в хромосоме X, показан полиморфизм для дикорастущих видов томата В то же время не установлено различий между культурным томатом и 5 lycopersicoid.es< что делает невозможным применение этого маркера для выявления дополнений данной хромосомы (рис 6)

1 2 3 4 1 2 3 4

Рис 7 Электрофореграмма локуса СТ240 а) посче амплификации 1 - S lycopersicoides 2 3 - ку тьтурный томат, 4 - маркер молекулярного размера 100 Ьр б) после рестрикции 1 lycopersicoides, 2 3 - культурный гомат, 4 - маркер молекулярного размера 100 Ьр

Маркер СТ240 показал наличие полиморфизма между культурным томатом и S Ivcoperstcoides, который заключается в наличии сайта рестрикции у последнего На электрофореграмме (рис 7) 1 фрагмент (длиной 850 п н ) у культурного томата и 2 фрагмента (200 пни 650 п н ) у S lycopersicoides Это свидетельствует о возможности применения

7

данного маркера для выявления генетического материала хромосомы X, что и было осуществлено в данном исследовании.

4. Конъюгация хромосом в профазе I — метафазе I как критерий оценки интрогрессии чужеродного генетического материала

Доказательство конъюгации между хромосомами томата и 5. \ycopersicoides имеет важное значение для объяснения частоты интрогрессии и прогноза вероятности интрогрессии генетического материала 5. lycopersicoid.es в геном культурного томата. Выполненные исследования первого мейотического деления на линиях с дополнениями хромосом II, IV и XI 5. Iycopersicoides свидетельствуют, что разные хромосомы ¡ycopersicoides обладают разной степенью гомологии с хромосомами культурного томата и обладают разным влиянием на поведение других хромосом в мейозе.

Формирование тривалентов в метафазе I свидетельствует о наличии гомологичных участков у хромосом культурного томата и .У. lycopersicoides, что показано для хромосом II и IV. Частоты клеток с тривалентами у линий с дополнениями хромосом II и IV оказались сходными — 27,9 и 23,0% соответственно. В то же время установлено влияние этих хромосом на конъюгацию других. Так, в случае хромосомы II на стадии метафазы I отмечены клетки с 3 унивалентами (12,0%), с 5 унивалентами (2,2%), а так же с тривалентом и двумя унивалентами (3,8%). Это свидетельствует, что хромосома II может не только участвовать в образовании тривалентов, но и вызывать нарушения конъюгации других хромосом, что согласуется с преждевременным расхождением хромосом у этих растений.

У растений с дополнением хромосомы IV 5. \ycopersicoides выявлено, что она представлена либо в унивалентном состоянии, либо ассоциирована в тривалент - 23,0% и 73,0% соответственно. Появление дополнительных унивалентов у этих образцов сравнительно редко - лишь 4 % МКП имели 3 унивалента.

Особенно показательны результаты, полученные на дополненных растениях с хромосомой XI, у которых триваленты не образуются. Хромосома XI lycopersicoides не вступает в конъюгацию с хромосомами томата. В то же время она вызывает нарушения конъюгации хромосом культурного томата у 21,6% МКП, у которых выявлено присутствие 3 унивалентов.

5. Особенности мейотического деления у дополненных растений

Моносомно дополненные растения отличаются пониженной фертильностью пыльцы, что обусловлено нарушениями мейотического деления. Характер этих нарушений для форм томата с хромосомами 5. lycopersicoides практически не известен. Цитологический анализ моносомно дополненных растений с хромосомами II, IV, V, XI выявил, что разные хромосомы обладают разными эффектами на ход

мейотического деления

Преждевременное расхождение хромосом на стадии метафазы I в большей степени отмечено у МДЛ-И - более 60% (табл 2) В то же время, для дополненных растений с хромосомами V и XI этот показатель был значительно ниже - 8,8 и 15,4% соответственно

Таблица 2

Характеристика метафазы I моносомно дополненных растений

Образец в метафазе I МДЛ-И МДЛ-У МДЛ-Х1

Норма, шт 38 93 ПО

с нарушениями, шт % 70 64,8% ± 9,2% 9 8,8% (4,1%-15,1%) 20 15,4% (9,8%-22%)

Всего, шт 108 102 130

Во время анафазы I дополнительная хромосома в большинстве случаев вызывает отставания хромосом и образование мостов (табл 3) Доля всех клеток с нарушениями составила 41,4% Преимущественно встречались ктетки с нарушениями в виде отставаний хромосом

Таблица 3

Характеристика анафазы I моносомно дополненной формы МДЛ-11

Проанализировано клеток, всего Клеток с нормальным делением Клеток с отставанием хромосом Клеток с мостами

шт шт % шт % шт %

130 76 58.6 53 40,65 1 0.75

В метафазе II у 15% клеток отмечено нерасхождение одной хромосомы (табл 4) У моносомно дополненной линии с хромосомой V в метафазе-И 16,19% МКП имечи нарушения

Таблица 4

Характеристика метафазы И моносомно дополненной формы МДЛ-Н

Проанализировано клеток,всего К теток с расхождением хромосом 12- -13 Клеток с расхождением хромосом 12- -12- -1

шт шт % шт %

20 17 { 85 3 , 15

Анафаза второго детения, где чроматиды расходятся к полюсам, протекает в детом нормально, 18,3% клеток имеют нарушения в виде отставаний как одной, так и нескольких (рис 8, табл 5)

Характеристика анафазы

Таблица 5

Проанализировано клеток, всего Клеток с нормальным делением Клеток с отставанием,

шт. шт. % шт. %

109 89 81,7 20 183 (11,7-26)

а) бК.Ч^Ж." Г '•' в)|_

Рис. 8. Нарушения во втором делении мейоза. а) - отставания хромосом в анафаз<Л отставания хромосом в анафазе II в двух клетках, в) - отдельно лежащая хромосома в телофазе И.

В телофазе II моносомно дополненной линии с хромосомой II выявлена отдельно лежащая хромосома (рис. 8, в), других нарушений не обнаружено. На стадии тетрад в 10,8% случаях отмечено образование пентад (табл. 6, рис. 9). При этом не обнаружено клеток с микроядрами, что обычно часто встречается у отдаленных гибридов.

Таблица 6

Всего Количество тетрад Количество пентад

шт. шт. % шт. %

111 99 89,2 12 10,8 (7,9-14,1)

I л •>■«

V •

а)кк» ''V * Мшш. 'лбу^ЗТ^^Я

Рис. 9. Тетрада (а) и пентада (б) у моносомно дополненного растения с хромосомой И.

6. Частота рекомбинации у дополненных линий с хромосомой II £ 1усорег51соШех

Для оценки влияния хромосомы II 5 IусоретсогЫез на частоту рекомбинации использовали гибриды между дополненным растением с хромосомой II и маркерной формой Мо755 (с мутациями аа - отсутствие антоциана, с1 - карликовый рост, от - желтая пятнистость, локализованными во второй хромосоме) Анализ расщепления ^ и И» по маркерным признакам показал существенные различия частот рекомбинации у диплоидных и дополненных линий по всем изученным парам признаков Выявлено значительное увеличение показателя ^ у моносомно дополненных растений в сравнении с контролем - гибридами между диплоидными растениями Значение этого показателя у дисомно дополненных было близко к значению у гибридов между диплоидными растениями (табл 7)

Таблица 7

Частота гГу диплоидных растений, моносомно и дисомно дополненных

линий

1 I ДЛ МДЛ ДДЛ

\w-aa | 4,3 31,2 5,6

' аа -а | 24,5 24,8 28,5

! с1— Н>У I 24,7 43,5 30

Примечание ДЛ - диплоидные -тании, МДЛ - моносомно дополненные линии ДДЛ -дисомно дополненные тании

Эти изменения являются следствием как конъюгации хромосомы II 5 ¡\copersicoides с гомеологами культурного томата, так и наблюдаемых нарушений во время всего мейотического деления

Выводы

1 Характер конъюгации хромосом в профазе I - метафазе I может служить критерием для оценки возможности интрогрессии генетического материала 5 1усорегз1Сои1е$ в геном культурного томата

2 Хромосомы 5 /усоретсснс/ез имеют разную степень гомеологии с хромосомами культурного томата, что проявляется в характере конъюгации Хромосомы II и IV частично гомологичны, между хромосомами XI культ} рного томата и 5 1усоретсо1с1ех гомология недостаточна для образования тривалентов

3 Дополненные хромосомы 5 1усорегзгсо1с1ев вызывают нарушения конъюгации негомологичных хромосом культурного томата

5 Дополненные хромосомы 5 1усорегпсспс1ез вызывают нарушения мейотического деления, которые проявляются на всех стадиях от профазы I до тетрад

6 Изменения частоты рекомбинации между маркерными признаками могут бьгть обусловлены как влиянием дополнительных хромосом на конъюгацию, так и на мейотическое деление в целом

7. Использование ПЦР-анализа для идентификации чужеродного генетического материала позволяет значительно сократить время на выделение дополненных форм из расщепляющейся популяции.

Список опубликованных работ

¡.Кирюхова О.Б., Локтионов А.Н., Князев А.Н. Характеристика моносомно дополненных форм культурного томата с хромосомами Solanum lycopersicoides И Материалы научной конференции- "Памяти Грегора Менделя". - М., 2001. - С. 48-49.

2.Князев А.Н., Соловьев АА. Моносомно дополненные линии томата с хромосомами Solanum lycopersicoides и возможности их использования И Сборник студенческих научных работ, выпуск 9. - М., 2003. - С. 16-20.

3.Князев А.Н., Соловьев A.A. Характеристика мейотического деления моносомно дополненной линии культурного томата со 2-й хромосомой Solanum lycopersicoides II Материалы 2-й конференции Московского общества генетиков и селекционеров им. Н.И. Вавилова «Актуальные проблемы генетики». - М., 2003. - Т. 2. - С. 289-290.

4.Князев А.Н. Моносомно дополненные линии томата с хромосомами Solanum lycopersicoides: возможности использования // Материалы XLI Международной научной студенческой конференции "Студент и научно-технический прогресс". - Новосибирск, 2003. - Серия биология. - С. 21.

5.Князев А.Н., Александров О.С. Особенности мейотического деления моносомно дополненных линий томата с хромосомами IV и XI Solamim lycopersicoides (Features meiosis division of monosomic alien addition lines of tomato with chromosomes IV and XI from Solanum lycopersicoides /I Review of scientific papers of the students of agronomy. — Cacak, 2005, - P.23. (на английском языке).

6.Князев А.Н., Александров О.С. Характеристика мейоза моносомно дополненных линий томата с хромосомами Solamim lycopersicoides II Материалы международной конференции молодых ученых и специалистов, посвященной 140-летюо РГАУ-МСХА имени К. А. Тимирязева. - М., 2006. - С. 366-371.

7.Александров О.С., Князев А.Н. Цитогенетическая характеристика мейоза дополненных линий как модель ишрогрессии генетического материала Solanum lycopersicoides в геном культурного томата // Тезисы докладов XIII международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов - 2006». - М., 2006. - С. 10

8.Соловьев A.A., Князев А.Н., Александров О.С. Цитогенетическая характеристика дополненных форм культурного томата с хромосомами Solanum lycopersicoides Dun II Генетика. - M., 2007. - Т. 43. - С. 1-5.

<£Д> , /£ - ^Сои СОиО-^-

Г-о/ ' / ^^Г. Л? - &С.'и?

/7 С Г-. г^-'Ь

^ г

о -л [-.гу;^^£'^

¿г/ я. г / ■' ; ' ^ ''

/ V г*- - -

* \

КО '

0,75 печ л

Зак 468

Тир 100 экз

Центр оперативной полиграфии ФГОУ ВПО РГАУ - МСХА имени К А. Тимирязева 127550, Москва, ул Тимирязевская, 44