Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Динамика гонадотропной активности сыворотки крови жеребых кобыл под влиянием генетических факторов и окружающей среды

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Динамика гонадотропной активности сыворотки крови жеребых кобыл под влиянием генетических факторов и окружающей среды"

На правах рукописи

Федоров Игорь Владимирович

ДИНАМИКА ГОНАДОТРОПНОЙ АКТИВНОСТИ

СЫВОРОТКИ КРОВИ ЖЕРЕБЫХ КОБЫЛ ПОД ВЛИЯНИЕМ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

03.00.13 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа - 2005

Работа выполнена в лаборатории ветеринарной медицины ГНУ Башкирский НИИ сельского хозяйства РАСХН.

Научный руководитель - доктор биологических наук

Шириев Вакиль Миргалиевич

Официальные оппоненты - доктор биологических наук

Таирова Альфия Рахимовна кандидат биологических наук Мишуковская Галина Сергеевна

Ведущая организация - Всероссийский ГНИИ животноводства

Защита состоится «08» декабря 2005 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета К.220.066.01. в Уральской юсударсгвенной академии ветеринарной медицины в ауд. №1 по адресу: 457100, Челябинская обл., г Троицк, ул. Гагарина 13.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уральской государственной академии ветеринарной медицины.

Автореферат разослан «03» ноября 2005 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета О.В. I орелик

1&473

1. Общая характеристика работы.

Лктуачьность темы В зооветеринарной практике, наряду с другими биологически-активными веществами, широкое применение нашли препараты, облачающие гонадотропной активностью. Их действие основано на стимуляции роста и овуляции фолликулов за счет действия входящих в состав фолликулостимулирую-щего и лютеинизирующего гормонов или веществ, обладающих свойствами этих гормонов.

Одним из наиболее доступных гонадотропных препаратов является гонадо-тропин сыворотки крови жеребых кобыл (ГСЖК) H. Gole, G. Hart. 1930: M.M. Заво-довский, 1934, 1935. Уникальность этого препарата обусловливается тем. ню этот гликопротеид объединяет свойства лютеинизирующего и фолликулостимулнрую-щего гормонов, причем при введении животным процент прихода в охоту может достигать 90-100%, а оплодотворяемость 60-70%. Благодаря особенностям строения молекулы, ГСЖК длительное время сохраняется в организме, что увеличивает возможности его применения и снижает себестоимость обработок (М.И. Прокофьев и др.; 1983: B.C. Шипилов, A.M. Семиволос 1986; S.N. Lennard et.al.,1998; H. Cao et.al., 1994; Ю.Д. Клинский, A.M Чомаев 1999; T.Silva et.al., 2001; A.M Чомаев и др. 2002).

Единственным источником этого гонадотропина является сыворотка крови жеребых кобыл (СЖК). Биологическое предназначение ГСЖК - стимуляция функции желтого тела и поддержание достаточного уровня прогестерона до периода времени, когда развитие плаценты сможет обеспечить потребности организма в прогестероне и других стероидах. Этим объясняется то, что гонадотропная активность сыворотки проявляется в период беременности приблизительно с 30-го по 120-й день жеребости и зависит от индивидуальных особенностей кобыл-доноров. При этом, интенсивное использование кобыл-доноров сопровождается резким снижением гонадотропной активности сыворотки их крови. Вопросы отбора потенциальных продуцентов содержащих в крови высокую гонадотропную активность для получения качественного сырья также до настоящего времени остаются окончательно невыясненными и требуют научного решения. В связи с этим возникает необходимость поиска методов, позволяющих оптимизировать получение ГСЖК и замедлить снижение гонадотропной активности при многократном взятии крови и большом объеме.

Цель и задачи исследований Закономерности изменения гонадотропной активности сыворотки крови жеребых кобыл на фоне влияния генетических фактором и окружающей среды.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

• Определить гонадотропную активность сыворотки крови жеребых кобыл в зависимости от их индивидуальных особенностей.

• Выяснить влияние сроков и кратности взятия крови на гонадотропную активность сыворотки кобыл-доноров.

• Изучить влияние трансфузии форменных элементов и применения различных биологически активных веществ на повышение гонадотропной активноегн СЖК в период взятия крови.

• Провести сравнительную •3ффгкт'-|"ип'"гм "Г'""'"рии'' различных препаратов ГСЖК при дисфункции яичник<ЙР£.кнрОД|онА. ьн,

з I библиотека ;

! ^ЖЛ^'.

1/чИ2 ?

Научная новизна исспеоований Изучены особенности проявления гонадо-тропной активности сыворотки крови жеребых кобыл башкирской породы, ее взаимосвязь с генетическими и средовыми факторами. Применены различные методы трансфузии форменных элементов крови и определена эффективность применения различных биологически активных веществ с целью повышения гонадотропной активности СЖК.

Практическая значимость работы Предложены методы повышения гонадотропной активности у кобыл-доноров башкирской породы, способствующие повышению качества сырья для производства гонадотропинов, усовершенствованы приемы коррекции функции яичников у коров и телок.

Апробация работы Материалы диссертации были доложены и одобрены на мседаниях Ученых советов и конференциях молодых ученых ГНУ БНИИСХ РАСХН: ВПО ФГУ БГАУ; на Всероссийской научно-практической конференции г. Уфа - 2005 г ; в межрегиональной научно-практической конференции ГНИ УГНИ-ИСХ г. Ижевск 2005 г. Основные научные результаты, включенные в диссертацию, опубликованы в пяти научных работах.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 118 страницах, содержит 12 таблиц, 6 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений. Список литературы включает 270 источников, из них на иностранном языке - 215

Основные положения, выносимые на защиту.

• Закономерности проявления гонадотропной активности сыворотки у кобыл-продуцентов башкирской породы, её взаимосвязь с возрастом, живой массой и физиоло! ическим состоянием животных.

• Влияние интенсивного использования кобыл доноров на морфологические, биохимические показатели крови и уровень гонадотропной активности сыворотки

• Применение трансфузии форменных элементов крови как способа повышения гонадотропной активности СЖК и эффективность различных биологически активных веществ в повышении гонадотропной активности сыворотки.

• Сравнительная оценка результативности применения различных сывороточных гонадотропинов при коррекции дисфункции яичников у коров.

2. Собственные исследования 2.1 Материалы и методики исследований

Исследования проводились в лаборатории ветеринарной медицины Башкирского НИИ сельского хозяйства, на базе конефермы ООО «Башагроген» и животноводческих хозяйствах Республики Башкортостан в период с 2002-2005 г.г. в соответствии со схемой исследований предйЧ&вленной на рисунке 1.

Объектом исследований служили кобылы-продуценты СЖК башкирской породы лошадей. Кормление и содержание животных осуществляли по нормам ВШИИЖ.

В работе изучены особенности проявления гонадотропной активности у жеребых кобыл башкирской породы в зависимости от их возраста, живой массы, жеребца-производителя и кратности взятия крови, влияние интенсивности взятий кро-

ви на ее физико-химические показатели и содержание форменных элементов. Была изучена эффективность применения трансфузии форменных элементов и применения некоторых биологически активных веществ для повышения гонадотропной активности СЖК при многократном отборе крови.

Жеребость устанавливалась методом ректального исследования по характерным изменениям матки и яичников, продолжительность жеребости уточнялась данными журната случки кобыл. Отбор крови с целью получения СЖК производили с 30-го - 45-го дня жеребости, предварительно определив гонадотропную активность так называемой «малой» крови (20 мл). Средний выход крови на одно взятия крови составляет 6 литров, выход сыворотки составляет 67,7%. Суммарную гонадотропную активность определяли с помощью биопробы, проводимой по методике в ВГНИИЖ в (1980 г.) на инфантильных самках белых мышей массой 6-8 грамм в возрасте 17-21 дней. Для точного определения гонадотропной активности СЖК использовали иммуноферментный анализ (ИФА) в микроварианте, по Voller А. (1980). Регистрацию результатов проводили с использованием восьмиканального спектрофотометра с вертикальным ходом луча при длине волны 492 нм. Концентрации исследуемых лигандов определяли по калибровочной кривой зависимости экстинции субстратной смеси от концентрации стандартного лиганда.

Определение физико-химических показателей крови и содержание форменных элементов крови проводилось в ЦАЛ БашНИИСХ и Башкирской республиканской ветеринарной лаборатории. При определении физико-химических характеристик применялись следующие методы: удельный вес цельной крови - пикнометри-ческим методом Шмальца; скорость свертывания крови - по Бюркеру; вязкость крови - метолом Гесса; скорость оседания эритроцитов по Паченкову; содержание билирубина в сыворотке - методом Казакова; содержание гемоглобина - по Салли. Форменные элементы подсчитывались в камере Горяева.

Статическая обработка экспериментальных данных проводилась по стандартным методикам на персональном компьютере.

В некоторых случаях детальное описание методик экспериментов сочли целесообразным приводить по ходу текста.

Рис 1 Общая схема исследований.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Изменение гонадотропной активности сыворотки крови у кобыл разного возраста и живой массы.

Бьпи из>чены образцы СЖК полученные от 107 кобыл (от 4-х до 10-ти лет), разбитых в зависимости от возрасга на 7 групп. Отбор проб для определения активности сыворотки животных во всех группах производили на 50-й день жеребости, (табл. 1).

Табл. 1. Возраст кобыл и гонадотропная активность сыворотки

! № ! п/п 1 Возраст кобыл, лет Число животных в группе Средняя гонадотропная активность сыворотки крови в 1 мл, ИЕ

! 1. 10 1 6 32,9±2,1

: 2. 9 ! 5 33,2±8.63

1 3. 8 15 41,72±3,88**

1 4. 7 I 32 52,56±2,62*

1 5. 6 11 51,03±3,83*

1 6' 5 25 52,58±4,79*

! 7. 4 13 52,7±3,78*

примечание: *Р<0.001; **Р<0,05

Установлено, что гонадотропная активность у кобыл разного возраста имеет существенные различия. С увеличением возраста наблюдается тиенпия к снижению гонадотропной активности сыворотки. Причем в возрасте кобыл от 4 до 7 лег разница в гонадотропной активности сыворот ки незначительна, однако начиная с 8-ми летнего возраста происходит резкое снижение значений показателя. Уровень гонадотропной активности у кобыл в возрасте 4-7 лет колебался от 51,03 ИЕ/мл до 52,7 ИЕ/мл. Наибольшее снижение средней гонадотропной активности на 18,13-19,8 ИЕ в 1 мл. сыворо1ки по сравнению с животными 4-7 лет произошло у десятилетних кобыл (Р>0.001). Активность сыворотки у восьмилетних кобыл также снижается на достоверную величину и составляет 41,72 ИЕ/мл, что на 9,31-10,98 ИЕ ниже средних значений показателя молодых кобыл до семи лет. Разница между восьми и десятилетними кобылами выражена несколько меньше, но, гем не менее, на достоверна величин) - 8,82 ИЕ/мл.

Изучение взаимосвязи между гонадотропной активностью сыворогки крови и живой массой кобыл проводили на основании ретроспективного анализа, в ходе которого животные были разбиты на группы. В 1-ую группу включили кобыл живой массой до 350 к!: во 2-ую - 350-400 кг; в 3-ую -400-450 кг; в 4-ую группу - 450-500 К1: 5-\ю гр> пп\ - жеребые кобылы с живой массой свыше 500 кг. (табл. 2):

Табл. 2. Гонадотропная активность сыворотки крови у кобыл с различной

живой массой

№ п/п т~ Живая масса, кг менее 350 Число животных в группе 23 Средняя гонадотропная активность сыворотки крови в 1 мл. ИС 53.0±1.72*

2. 350-400 44 50.7±3.33

3. 400-450 30 49.3x2.79

4. 450-500 4 43.5x13,6

5. свыше 500 ! 6 44.2±9.02

примечание: *Р<0,05

Максимальная Iонадотропная активность сыворотки крови - 53.0 ИЬ/мл. выявлена у кобыл с живой массой менее 350 кг. (Р<0,05). С увеличением массы тела животных происходит достоверное снижение значений показателя. Так. \ кобыл живой массой 350-400 кг она составила >же 50,7 ИЕ/мл, при массе тела 400-450 кг -49,3 ИЕ/мл, а у кобыл живой массой 450-500 кг средняя гонадотропная активность сыворотки составила 43,5 ИЕ/мл. 1аким образом, уровень гонадотропной активности СЖК находится в обратной зависимости от массы тела. Максимальная активность СЖК выявлена у кобыл с живой массой 320-380 кг. Но мере возрастания живой массы активность сыворо!ки снижается. На основании полученных результатов следует констажровать, что интенсивный обмен веществ характерный для молодых животных и особей с небольшой живой массой и обусловливает более высокую го-надотропную активность сыворотки продуцентов. Оптимальный возраа кобыл лтя использования в качестве донора от 4 до 7 лет, с живой массой до 450 кг

Влияние жеребца-производи геля, использованного для случки на уровень гонадотропной активноеI и сыв0р01ки жеребых кобыл, изучено на 67 животных идентичных по вофасгу и живой массе. С этой целью было сформировано 7 гр\пп кобыл с подбором определенного производителя. Методом биопробы на инфантильных самках крыс определяли среднюю юнадотропную активность сыворотки за весь период взятия крови по группам кобыл (габл. 3).

Табл. 3. Влияние жеребца-производи геля на юнадотропную активность СЖК

№ п/п Кличка жеребца Число животных в группе Средняя!онадотропная активность сыворотки крови в 1 мл. ИЬ

1. Май 8 42.21 ±6.10

2. Адмирал 8 44.86±7.67

3. Кристалл 1 6 47.40±5.19

4. 0-21 9 40.95±7.37

5. 0-31 18 53.92±5.74

6. Орлик ! 6 57,66±3.06*

7. Рома 12 44.04i2.96

примечание: *Р<0,05

Максима.п.пая активность сыворотки была у кобыл, оплодотворявшихся жеребцами О-З! (53.92 ИЕ/мл) и Орликом (57.66 ИЕ/мл). Так у кобыл, оплодотворенных Орликом, гонадотропная активность 1 мл сыворотки была выше на 15,45 ИЕ, чем у кобыл, оплодотворенных жеребцом Май, на 16,71 ИЕ по сравнению с кобылами. оплодотворенными жеребцом 0-21 и на 13,62 ИЕ жеребцом Рома, при этом разница достоверна (Р<0,05). В остальных случаях разница не достоверна. У кобыл, опло.'клворенных жеребцами Май, Адмирал, Кристалл. 0-21 и Рома, средняя активность сыворотки колебалась в пределах 42.21 -47,4 ИЕ/мл.

Таким образом, основываясь на полученных данных, можно сделать вывод, что жеребец-производигель может оказывать влияние на гонадотропную активность сыворотки крови жеребой кобылы. Вероятно, что основную роль при этом играют 1 енежческие особенности, передаваемые по наследству, но данная гипотеза требует более глу боких исследований.

3.2. Уровень гонадотропной активности сыворотки при интенсивном использовании кобыл доноров

11ами было изучено влияние кратности взятия крови на активность СЖК. С этой целью от 10 кобыл брали кровь с интервалом в 7 дней, начиная с 40 дня жеребости. Всего было проведено 5 взятий крови. После каждого отбора крови определялась гонадотропная активность сыворотки, и рассчитывали средние показатели по каждой партии крови. Активность СЖК определялась методом биопробы на инфантильных самках мышей. Динамика изменения уровня гонадотропной активности при интенсивном использовании доноров представлена на рисунке 2.

Взяше крови

Рис. 2. Динамика снижения гонадотропной активности при увеличении кратности

взя гия крови

После первого взятия крови средняя гонадотропная активноеib составляла 72,6 ИЕ/мл, после второго - 61.6 ИЕ/мл. г.е. на 15.2% меньше чем гонадотропная активность сыворо1ки после первого взятия крови (Р*"0,01). В последующем происходит снижение активности сыворотки приблизительно на 6 НЕ. и ко времени 4-го и 5-го наблюдается некоторая стабилизация значений показателя.

Таким образом, при увеличении продолжительное!и ишенсивного использования доноров гонадотропная активность сыворотки крови жеребых кобыл снижается в среднем на 15%. Снижение гонадотропной активности замедляется после четвертого взятия крови.

3.3. Динамика и гонадотропная активность сыв0р01кн у кобыл в разные сроки беременности

Кровь для определения гонадотропной активности брали \ 10 кобыл с интервалом 20 дней, начиная с 30-го по 150 день жеребости. 1 онадотропную активность сыворотки определили методом иммуноферментного анализа. После установления индивидуальной для каждого продуцента активности сыворотки на каждый период срока беременности устанавливали среднюю активное ib по труппам. (Рис. 3).

Рис. 3. Динамика изменения гонадотропной активности СЖК на разных этапах

жеребост и

Интенсивный рост гонадотропной активности сыворотки крови у жеребых кобыл происходит с 30-го но 45-й день беременности на 37.6 ИР/мл или на 78.9% (Р<0,01). Далее, с 45-го по 60-й дни повышение акшвности сыворотки сосинила 14,08% (12 ИЬ/мл сыворотки). С 60-ю по 75-й на 17.2 %. и с 75-го по 90-й день жеребости - на 7,6 ИЕ/мл или на 6,64% (Р0.01). В период с 90-ю по 105-й день значения показа1еля начинает постепенно снижайся на 11.8 ИР/'мл или на 9.67%. Во

время последнею взятия крови (130-й день), уровень гонадотропной активности снизился на 29% или на 35 ИЬ/мт (Р>0,05) по сравнению с пиковыми значениями показателя, установленного на 90 день жеребости.

Таким образом, гонадотропная активность СЖК возрастает до 90-го дня жеребости, при этом рост активности более интенсивен с 30-1 о по 45-й дни жеребости.

3.4. Морфологические и биохимические показатели крови кобыл при их интенсивном использовании в качестве доноров

Изучение физико-химических показателей крови животных в период интенсивного испольювания доноров показало, что после первого взятия физико-химические параметры крови, а также количество и соотношение форменных элементов находятся в пределах физиологической нормы. Во время второго сбора наблюдалось снижение скорости свертывания крови до 19 минут, при 15.5 минутах после первого взятия крови. При этом количество эритроцитов и лейкоцитов остается приблизительно на одинаковом уровне, наблюдается тенденция к изменению лейкоцитарной формулы. Юные нейтрофилы составляют 1,1% от общего количества лейкоцитов, в то время как после первого взятия крови этот показатель составил 0.5%. что свидетельствует о включении компенсаторных механизмов на большую потерю крови. Кроме того увеличилось содержание базофи.юв - 1,1% против 0,7 % после первою взятия крови, и незначительно уменьшилось содержание сегментоя-дерных нейтрофилов и лимфоцитов - на 0,7% и 0,1% соответственно.

После третьего взятия крови произошло снижение её удельного веса до 1,048 г/см1, что на 0,004 меньше, чем после первого сбора крови. Уменьшилась и скорость свертывания крови - в среднем по группе она составила 20,4 минуты, или на 4,9 меньше исходных показателей. Вязкость крови снизилась на 0,5 по сравнению с этим показателем после первого взятия крови и составила 5,1 Па. (Р^0,001). Хотя СОЭ по сравнению с этим показателем после первого взятия крови несколько возросла и составила 54,5 мм/час против 54,1 мм/час при первом взятии крови, но разница не достоверна. Содержание билирубина снизилось на 1,4 мг. %. а 1емоглобина - на 0,9 г. % (Р<0,001). Содержание эритроцитов в крови достоверно снизилось до 9.4 млн./мм1, что на 1,1 млн./'мм3 меньше, чем после первою взятия крови. Достоверное снижение наблюдалось и при подсчете лейкоцитов - на 0.7 тыс./мм3 (Р<0,001). Продолжатось увеличение содержания юных нейтрофилов до 5,8% от общего количества лейкоцитов и снижение содержания сегментоядерных нейтрофилов и лимфоцитов до 45,5 % и 38.4% соответственно, что на 3,4% и 2,3% меньше, чем после первого взятия крови.

После четвертого сбора удельный вес крови снизился до 1,045 г/см3" (Р<0,01). Скорости свертывания крови составила 23,5 минуты, что на 8 минут больше, а вязкость крови - 4,6 или на 1 меньше, чем после первого взятия крови (Р<0,1). СОЭ изменилась незначительно и не показала достоверной разницы по сравнению с первым взятием крови. Уровень билирубина был на 2,05 мг. % меньше, чем после первого взятия крови и эта разница достоверна (Р<0,001). Уровень гемоглобина также снизился и составил 11,84 г. %, что на 1,8 г. % меньше. Содержание эритроцитов к четвертому сбор}' крови по сравнению с предыдущим показателем уменьшилось на 1.0 млн./мм3 и на 2,1 млн./мм3 по сравнению с первоначатьными значениями показателя. Количество лейкоцитов также снизилось и составило 8,7 тыс./мм3, что на 0.9 тыс./мм3 меньше, чем их количество после третьего взятия крови и на 1,6

и

тыс 'мм3, чем после первого взятия крови. Юные нейфофилы составили уже 10% от общего количества лейкоцитов, а уровень сегментоядерных нейфофилов и лимфоцитов уменьшился до 42,1 и 35,7% от общего количества лейкоциюв соответственно. Содержание базофилов возросло до 1,5%, что на 0.8% выше, чем после первою взятия крови.

После пятого взятия крови удельный вес крови составил 1.4 i'cm'. чго на 0.012 меньше, чем после первого взятия крови, но эта разница не достоверна. Скорость свертывания крови продолжала снижаться она была равна 25.6 минутам, что на 10,1 минуты дольше, чем после первою взятия крови, разница досюверна. Вязкость крови также снизилась и составила 4,4 Па, что на 1,2 меньше, чем после первого взятия крови и эта величина досюверна. СОЭ осталась на том же уровне, что после четвертого взятия крови. Уровень билирубина в сыворотке по сравнению с четвертым взятием крови повысился на 0.65 мг.%, но оставался на тостоверную величину ниже, чем после первого взятия крови на 1,4 мг. % (Р0.001) Уровень icmo-глобина продолжал снижаться и составил 10,44 г. %, что на 3,2 г. % меньше, чем после первого взяшя крови, при этом разница достоверна. Содержание форменных элементов прбдолжало снижаться - количество эритроците снизилось до 7.5 млн./мм3, т.е. на 3 млн./мм3 меньше, по сравнению с их уровнем после первого взятия крови; количество лейкоцитов снизилось до 7,9 тыс./мм3. В обоих случаях разница достоверна (Р0,001). Уровень юных нейтрофилов достиг 16% от общего количества лейкоцитов, количество базофилов не изменилось и осталось на уровне четвертого взятия крови. Количество сегментоядерных нейтрофилов понизилось до 39,7%, а лимфоцитов то 32.5%. что на 9.2% и 8.1% соответственно меньше, чем после первого взятия крови. Уровень моноцитов практически не изменялся на протяжении наших исследований и колебался в пределах 0.1-0.3%.

Таким образом, при взятии крови в большом объеме происходит изменение физико-химических показателей крови: уменьшение удельного веса, увеличение скорости свертывания, снижение вязкое!и, скорости оседания эритроцитов уменьшение содержания билирубина и гемоглобина. Одновременно происходит снижение числа форменных элементов крови, причем увеличивается юля юныч и палоч-коядерных нейтрофилов.

3.5. Трансфузия форменных элементов крови после получения сыворотки от жеребых кобыл

Для определения оптимального способа трансфузии форменных элементов было сформировано пять групп кобыл с учетом принципа аналогов по уровню кормления, типу содержания и возрастных параметров. Кобылам первой фунпы форменные элементы вводились с добавлением физраствора в соотношении 1:1. Кобылам второй фуппы форменные элементы вводились с добавлением физраствора в соошошении 1:1,5. Кобылам третьей группы форменные элементы вводились с добавлением физраствора в соотношении 1:1 и дополнительно к этому в раствор добавлялось 150 мл кальция борглюконата. Животным четвертой группы, как и животным второй группы форменные элементы вводили с фи зрас! вором в соотношении 1:1,5, но кроме этого в раствор добавлялось 150 мл кальция борглюконата Пятая группа была контрольной, животным этой группы не делали трансфузии форменных элементов после взятия крови. Кобылам всех опытных групп вводились собственные форменные элементы через сутки после взятия крови, гонатогропная активноеib сыворотки определялась после каждого взятия крови. (ta6.i.4)

Посте трансфузии форменных элементов активность СЖК во всех опытных группах превышала активность ГСЖК в контрольной фуппе. Так. iонадотропная активность СЖК к следующему сбору крови в кошроле составляла 62,8 ИЕ/мл, а в четырех опытных группах от 68,8 ИЕ/мл до 71.6 ИЕ/мл, что на 8,72-11,24% соответственно больше, чем в контроле. В среднем по опытным группам гонадотропная активность соаавила 70,12 ИЕ/мл и было на 10,4% больше значений показателя в контрольной группе. Во всех случаях разница достоверна.

Посте третьего взятия крови в группах, где применялась трансфузия форменных элементов, гонадотропная активность СЖК оставалась выше кош рольной. Так в контроле она составила 53,3 ИЕ/мл, а в 1-й опытной группе 59,3 ИЕ/мл; во 2-й -59.1 ИЕ/мл: в 3-ей ipynne - 61,6 ИЕ/мл; в 4-й группе - 62,0 ИЕ/мл, ню соответственно на 10.11; 9.8: 13,5 и 14,03% больше, чем в контроле. В среднем но опытным группам iонадотропная активность сыворотки составила 60.5 ИЕ/мл, что на 11,9% выше контрольной. Во всех случаях, кроме животных 2-й группы, разница достоверна.

Уровень гонадотропной активности СЖК после четвертого взятия крови про-дотжал снижаться, но в опытных группах он превышал показатели контрольной гр>ппы (47.4 ИЕ/мл)' в 1-й группе активность СЖК соствила 52,7 ИЕ/мл; во 2-й ipynne - 51.8 ИЕ/мл; в 3-ей группе - 53,4 ИЕ/мл; в четвертой - 54,1 ИЕ/мл, что на 10.05; 8.5; 11.2 и 12,4% соответственно выше, чем в контрольной группе. В среднем по опытным группам гонадотропная активность после четвертого взятия крови составила 53 ИЕ/мл, что на 10,5% превышало показатель контрольной группы. Следует отмет и I ь, ч то разница между активностью СЖК в контроле 3-ей и 4-ой групп, а также средним показателем по 1руппам достоверна (Р<0.01).

После пятого взятия крови гонадотропная активность в контрольной группе составила 46.9 ИЕ/мл. что говорит о замедлении темпов снижения гонадотропной активности. Такая же тенденция наблюдалась и в опытных группах, но активность СЖК в них была выше, чем в контроле. Так в 1-й опьнной группе гонадотропная активность составила 51,3 ИЕ/мл; во второй группе - 53,9 ИЕ/мл, в третьей группе -54,9 ИЕ/мл; в 4-ой группе - 53,9 ИЕ/мл, что на 8,6; 12,9; 14.6; 12,9% соответственно выше, чем в контроле. Средняя гонадотропная активность в опытных группах составила 53.5 ИЕ/мл, что на 12.3% выше, чем в контроле. Во всех случаях, кроме 1-й группы. разница достоверна.

Степень разбавления форменных элементов физраствором после трансфузии не оказывала существенного влияния на гонадофопную активность сыворотки. 11ри разбавлении 1:1 она превышала активность в контрольной группе на 8.6-10,11%, а при разбавлении 1:1,5 - колебалась на уровне от 8.5 до 12,9. но разница между опытными группами при этом не достоверна. Введение 150 мл катьция борглюко-ната совместно с форменными элементами повышаю гонадотронную активность СЖК независимо от степени разбавления физраствором. Так при разбавлении 1:1 активность СЖК была выше контрольной на 11.2 - 14,6%, а при разбавлении 1:1,5 -на 11.4 - 14.03%. но разница между опытными группами не достоверна.

Таким образом, после трансфузии форменных элементов уровень гонадотропной активности остается на 8.5 - 14,6% выше, чем без трансфузии. Введение совместно с форменными элементами 150 мл кальция борглюконата позволяет повысить активность СЖК на 11,2 - 14,6%. Степень разбавления форменных элементов физраствором не влияет на уровень гонадотропной активности после их введения.

Табл. 4. Уровень гонадотропной активности СЖК после трансфузии форменных элементов

Группа Активность СЖК в зависимости от кратности взятия, ИЕУмл

1 -е взятие крови i%K контролю 2-е взятие крови ±%к контролю 3-е взятие крови ±%к контролю 4-е взятие крови ±%к контролю 5-е взятие крови ± % X контролю

1 72,8*2,47 +0,68 68,8*1,65** +8,72 59,3±2,63* +10,11 52,7+2,58 +10,05 51.3-tl.6S -8,6

2 72,3±2,49 0 69,2± 1,71** +9,24 59,1±2,64 +9,8 5!,8±2,37 +8,5 53,9+1,17" + 12,9

3 74.5±1,65 г2.95 71,6±1,81*" ■42,3 6l,6i2,?6" +13,5 53.4+1,59" + 11,2 54,9*1,66" + 14,6

4 72,8+1.38 +0,68 70,9+1,57** 1,4 62,0+2,24** — ¡4,03 54.ldrl.25** + 12.4 53,9+1,57** + 12,9

Средняя 1 онадо-1ропная активность 73.1±0,55 + 1,09 70,110,77** + 10,4 60.5+0,87** + 11,9 53.0+0,57" -10,5 53,5+0,89" + 12,3

Контроль 72.3-t2.49 62,8+1,46 - 53.3+1.91 47,4+2.03 - 46.9i 1,89

примечание. *Р<0,1,**Р<0,01; ***Р<0,001;

3.6. Применение биологически активных веществ с целью повышения гонадотропной активности сыворотки крови жеребых кобыл

По принцип) аналогов было создано четыре опытных групп жеребых кобыл по 15 голов в каждой. Кобылам 1 группы в день первого взятия крови внутримышечно в область крупа вводили по 4 мл сурфагона (20 мкг ДВ). Кобылам 2 группы аналогичным образом в день первого взятия крови вводили по 10 мл масляного раствора ретинола с содержанием в 1 мл раствора 25000 МЕ действующею вещества. Животным 3 группы перед взятием крови вводили по 60 мг йодистого калия в 5 мл физраствора (в/м. в область крупа). Жеребым кобылам 4 группы, как и животным остальных опытных групп, перед первым взятием крови вводили внутримышечно в облает ь кр\ па одновременно 10 мл ретинола и 60 мг йодистого калия. В дальнейшем обработки животных повторялись перед каждым отбором крови для контроля служили кобылы-аналоги по возрасту и живой массе, не подвергавшиеся обработкам. Все! о было осуществлено по 5 взятий крови от каждой кобылы. За каждое взя-ше крови в среднем отбиралось по 6.8 л крови на кобылу, после чего методом биопробы на инфантильных крысах определялась гонадотропная активность сыворотки. (рис. 4).

Группы

Рис. 4. Динамика изменения гонадотропной активности СЖК при использовании биологически активных веществ.

Гонадотропная активность СЖК после первою взятия крови во всех группах была примерно одинаковой - 86,0-90,6 ИЕ/мл. Различия в средней гонадотропной активности по труппам стали заметны после второго сбора крови. При введении сурфагона активность СЖК практически не отличалась от таковой в контрольной гр\ппе на протяжении всего периода исследований. В труппе, кобылам которой

инъецировали юлько йодистый калий, юнадофонная активность также приблизительно равнялась контрольной.

После введения ретинола активность СЖК была несколько выше, чем в контроле и группах, получавших сурфагон и йодистый калий, но после пяшю в!ятия крови она практически равнялась активности СЖК в >ти\ ipynnax.

Максимальная гонадотропная активность СЖК наблюдалась в ipynne. ые кобылам одновременно инъецировали ретинол и йодистый калий на протяжении всех пяти взятий кро&и активность сыворотки в этой группе на достоверную величину превышала активность СЖК в контроле и группах, получавших сурфаюн и йодистый калий. Очевидно, что при совместном введении ретинола и йодистою калия они повышают эффективность действия друг друга. При эюм после вюрого взятия крови активность СЖК при совместном введении этих препаратов была выше, чем после введения только ретинола на 2,7%, после третье1 о - на 12,7%. после четвертого на 14,5%, а после пятого - на 24,2%.

Таким образом, из полученных данных можно сдела1ь вывод, что для повышения гонадотропной активности СЖК целесообразно использовать ретинол в дозе 10 мл внутримышечно однократно. Комплексное применение ретинола и йодистого калия в дозе 60 мг позволяет пролош ировать период высокой активности СЖК и усиливает действие ретинола.

3.7. Оценка эффективности применения фоллимага, фоллиюна и нативной СЖК в сочетании с диамолом при гипофункции яичников у коров-первотелок

Целью данного исследования являлось определение сравнительной эффективности нативной СЖК и гонадотронных препаратов на основе ГСЖК - фоллимага и фоллигона при гипофункции яичников у коров-первогелок. Все они применялись в сочетании с простагландином - магэстрофаном на фоне предварительной i есгаге-низации диамолом.

Гонадотропную активность как нативной СЖК, так и стандартизированных препаратов, контролировали посредством иммуно-ферментного анализа.

Гипофункцию яичников выявляли путем кратного ректального исследования первотелок с длительной анафродизией. По мере выявления животных формировали три опытные группы по числу исследуемых препаратов. Группы формировались из первотелок живой массой 520 - 550 кг, средней упитанности и примерно одинаковой продуктивности. В качестве контроля служили животные - аналоги (по возрасту, живой массе, продуктивности и условиям содержания) со спонтанной охотой не подвергавшиеся обработке.

Протестаген вводился внутримышечно в область крупа однократно, в до je 50 мг. Через 168 часов после введения прогестагена вводили исследуемые препараты в сочетании с магэстрофаном. Все юнадотропины вводились внутримышечно, в дозе 1000 ИЕ. магэстрофан - 3 мл (0,75 мг клопростенола).

Проявление животными признаков половой охош наблюдался через 24 - 120 часов после применения испытываемых препаратов. Пик прихода в охоту наб подался через 24 - 48 часов после применения испытываемых препаратов. Половая охота коров, получавших нативную СЖК и фоллигон. наблюдался в течение ия1и суток, а в группе, где использовали фоллимаг в течение семи суток с пиком охоты чере! 48 часов после применения препарат (табл. 5).

I абл. 5. Сравнительная эффективность применения гонадотропных препаратов в сочетании с диамолом и мапстрофаном

m с. Г р> ппы о О s 3- Пришло в охоту после обработки Стельных после первого осеменения Стельных после второго осеменения Сервис-период, М + ш Индекс осеменения

Гол. М ± m Гол. М ± m 1 Гол. М ± m

Нативная СЖК - 3 мл магэсг-, 40 рофана 33 82,5±6,0 14 42,4±8,6 31 93,3±14,7 121,5+2,8 2,6

Фоллш он 1000 HF (-3 мл магэ-' 40 ci рофана 36 90,0±4,7 17 47,2±8,3 35 97,2±13,9 115,3±1,5 2,2

Фоллимаг 1000' ИЕ^Змлмагэ- 40 1 строфана 32 80,0+7,06 13 I 40,1+8.2' 30 93,7±9,3 119±2,3 2.3

КонфОЛЬ (спонтанная 40 охота) - - 14 35,0±7,5 j 34 85,0+5,6 122,5±2,7 2,4

Комплексное применение фоллигопа с простаг ландином позволило вызывать охоту наибольшего количества животных - 36 голов (90,0%), при использовании нативной СЖК - 33 головы (82,5%), фоллимага- 32 головы (80 %). Окончательным критерием оценки эффективности испытуемых композиций биорауляторов является уровень плодотворных осеменений в I - индуцированную, после длительной дисфункции яичников, половую охоту. После применения фоллигона были плодотворно осеменены наибольшее количество первотелок - 17 голов или 47,2%; после нативного препарата - 14 голов или 42, 4%; при использовании фоллимага остались аельными 13 первотелок или 40% из числа пришедших в охоту. В контроле было стельных после первого осеменения 14 голов (35,0%).

Результаты осеменений живошых за два цикла стельность была наибольшей также при использовании фоллш она - 97%; в группе коров обработанных нативной СЖК и фол.шгоном по 93% из общего числа пришедших в охоту. В контроле стали стельными за два цикла 34 головы из 40, пришедших в охоту (85,0%). Сервис-период в опытных и контрольной ipynnax отличался незначительно. Наименьший сервис-период в опытных группах был в группе, получавшей фоллигон - 115 дней.

Таким образом, применение гонадотропных препаратов через 168 часов после инъекции диамола позволяет эффективно выводить яичники из состояния гипофункции с хорошим синхронизирующим эффектом и оплодотворяемостью. При использовании нативной СЖК уровень стельности и сервис-период был выше, чем при использовании фоллимага и незначительно уступал фоллигону.

3.8. Экономическая эффективность повышения гонадотропной активности СЖК

На примере использования ретинола в комплексе с йодистым калием эффективность методов повышения гонадотропной активности сыворотки крови у лошадей определяется как сюимоаь дополнительной продукции полученной в результате применения этих препаратов, за вычетом затрат на и\ приобретение и обработку живошых.

Для определения обшей юнаюгропной активности СЖК. полученной за весь период взятия крови, необходимо учитывав общее количество полученной сыво-ро!ки и ее среднюю гонадотропную ак1ивность. Средний выход сыворотки за период взятия крови от животных всех фупп составляет 67.7 %, а ее средняя гонадо-тронная активность - 61 ИЕ/мл при применении испытуемой композиции 75 ИЕ, что на 13,2 ед. больше чем в контроле. Если учесть, что от кобьпы производится по пять взя гий крови, а средний выход от одного взятия крови составляет 6 литров, го за полный период взятия крови будет получено около 20,3 литра сыворотки, общая гонадотропная активность которой составит 1522500 ИЕ. Без обрабо!ки лошадей активность их сыворотки составляет 61,8 ИЕ, а суммарная активность полученного от них гонадотропина 1254540 ИЕ. (61,8*20300). Разница между обшим количеством гонадотропной активности по группам животных обработанных комплексом ретинол + Ю составляет 267,8 тыс. ИЕ. При стоимости одной тысячи единиц гона-дофопина 18 рублей общая сумма полученной сыворотки составит 4820 рубля (267,8 тыс. ИЕ. 18 рублей).

Стоимость затрат на приобретение использованных препаратов и обработку ими животных составляет 575 рублей. Таким образом применение собственных методов повышение и сохранения гонадотропной активности сыворотки крови у кобыл доноров позволяет получить дополнительный препарат на сумму 4245 рублей

4. Выводы

1. Гонадотропная активность сыворотки крови жеребых кобыл находится в зависимости от возраста и массы тела, а также использованного в случке жеребца-производителя. Интенсивный обмен веществ характерен для особей с небольшой живой массой и молодых животных, что обусловливает более высокую гонадотроп-ную активность сыворотки продуцентов. Оптимальный возраст кобыл для использования в качестве донора от 4 до 7 лет, а живая масса до 450 кг.

2. Увеличение кратности использования доноров оказывает негативное влияние на уровень гонадотропной активности их сыворотки. Максимальное значение показателя - 72,6 ИЕ. при первом взятии крови на 40-60 дни жеребости в последующем снижаются на 15-18% и стабилизируется ко времени 4-5-го сбора крови.

3. Гонадотропная активность СЖК возрастает до 90-го дня беременности, при этом рост активности более интенсивен с 40-го по 50-й дни жеребости и составляет 78,9%. Максимальное значение показателя - 123 ИЕ на 90-й день в дальнейшем снижается на 11-30% и к 130 дню жеребости составляет 70% от пиковых значений.

4. Интенсивное использование кобыл доноров при взятии крови в большом объеме обусловливает изменение физико-химических показателей крови: уменьшение удельного веса на 0,001-0,009 г/см3, увеличение скорости свертывания на 5-10 мин., снижение вязкости на 0,01—1,2 Па, скорости оседания эритроцитов на 0,6-1,4 мм/час, уменьшение содержания билирубина и гемоглобина на 16-23%. Эти изменения происходят на фоне снижение числа форменных элементов крови на 2530%, сдвиге лейкоцитарной формулы в сторону юных и палочкоядерных нейтрофи-лов.

5. Для повышения гонадотропной активности СЖК целесообразно использовать ретинол в дозе 10 мл внутримышечно, однократно. Комплексное применение ретинола и йодистого калия в дозе 60 мг способствует удлинению периода высокой активности СЖК и усиливает действие ретинола. При этом гонадотропная активность сыворотки на 12-24% выше показателей животных в контрольной группе. Трансфузии форменных элементов крови оставшихся после отделения сыворотки, позволяет поддерживаггь уровень гонадотропной активности на 8,5 - 14,6% выше, чем в контроле.

6. Применение гонадотропных препаратов через 168 часов после инъекции диамола позволяет эффективно выводить яичники из состояния гипофункции с хорошим синхронизирующим эффектом и оплодотворяемостью коров.

5. Практические рекомендации

С целью оптимизации производства сыворотки крови жеребых кобыл и повышения ее гоналотропной активности у кобыл башкирской породы рекоменд>ется:

1. Отбор крови для получения сыворотки у жеребых кобыл проводить в период 40-И 0 дней жеребости. Для поддержания высокого уровня гоналотропной активности и профилактики отклонений в течении жеребости интервал между взятиями крови должен составлять не менее 10-14 дней.

2. С целью повышения гонадотропной активности при животным перед началом периода отбора крови, кобылам рекомендуется однократно внутримышечное однократно с введением масляного раствора ретинола в дозе 10 мл (с содержанием в 1 мл 25000 МЕ действующего вещества) в комплексе с 60 мг йодистого калия. В период интенсивного использования доноров применять трансфузию форменных элементов через 24-36 часов после взятия крови, предварительно разбавив их физраствором в соотношении 1:1,5с добавлением 150 мл кальция борглюконата.

6. Список опубликованных работ:

1. И.В. Федоров, В.М. Шириев, М.В. Вареников. Способы повышения гона-дотропной активности сыворотки крови жеребых кобыл //Актуальные проблемы научно-инновационной и внедренческой деятельности в АПК// Материалы Международной научно-практической конференции., поев. 55-летию ГНУ УГНИИСХ (27 июля 2005 г., п. Первомайский) - 2005 - С. 171 -173.

2. И.В. Федоров, В.М. Шириев. Содержание форменных элементов в крови кобыл-доноров СЖК в зависимости от кратности крововзятий //Повышение эффективности и устойчивости развития агропромышленного комплекса// Материалы Всероссийской научно-практической конференции. В 4-х частях. - Уфа: БашГАУ. -2005.-С. 310-312.

3. И.В. Федоров, В.М Шириев. Трансфузия форменных элементов крови как способ повышения гонадотропной активности сыворотки жеребых кобыл //Экономическая безопасность агробизнеса в преддверии вступления России в ВТО: Сборник// материалов Всероссийской научно-практической конференции. 28-30 апреля 2005 года, г. Уфа /Башкирский институт переподготовки и повышения квалификации кадров агропромышленного комплекса. - Уфа: БИППКК АПК: информ-реклама, 2005. - Ч. 2. - С. 149-154.

4. И.В Федоров, В.М Шириев. Уровень гонадотропной активности сыворотки крови жеребых кобыл башкирской породы в зависимости от сроков беременности //Экономическая безопасность агробизнеса в преддверии вступления России в ВТО: Сборник// материалов Всероссийской научно-практической конференции. 28-30 апреля 2005 года, г. Уфа /Башкирский институт переподготовки и повышения квалификации кадров агропромышленного комплекса. - Уфа: БИППКК АПК: информ-реклама, 2005. - Ч. 2. - С. 154-157.

5. И.В. Федоров, В.М Шириев, A.M. Чомаев. Применение биологически активных веществ с целью повышения гонадотропной активности сыворотки крови жеребых кобыл // Человек и животные// Материалы III Международной научно-практической конференции. 12-13 мая 2005 г.Астрахань: Издательский дом «Астраханский университет», 2005. - С. 137-138.

На правах рукописи

Федоров Игорь Владимирович

ДИНАМИКА ГОНАДОТРОПЦОЙ АКТИВНОСТИ

СЫВОРОТКИ КРОВИ ЖЕРЕБЫХ КОБЫЛ ПОД ВЛИЯНИЕМ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ

03.00.13 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа 2005

Сдано в набор 02.11.2005 г. Подписано в печать 02.11 2005 г. Формат 60x84/16. Объем 1 печ. л. Тираж 100 экз. Заказ №103 Гарнитура Times New Roman

Издательский ценip УГАВМ.^ицензия ЛР №01252 от 31 октября 1997 г. 457100. г. Троицк, Челябинская обл., >л. Гагарина 13 Тел.(35163)2-6475

23

№2 167*

РНБ Русский фонд

2006-4 18473

▼

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Федоров, Игорь Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

2.0. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Роль фолликулостимулирующего й лютеинизирующего гормонов в регуляции воспроизводительной функции.

2.2. Физико-химическая характеристика гонадотропинов.

2.3. Динамика содержания гонадотропина в сыворотке крови жеребых кобыл.

2.4. Способы применения гонадотропинов.

2.5. Методы определения гонадотропной активности СЖК.25:

2.6. История образования и краткая характеристика башкирской породы лошадей.

3.0. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1.1. Характеристика хозяйства.

3.1.2. Содержание кобыл-продуцентов.

3.1.3. Взятие крови от кобыл-доноров.

3.1.4. Исследование крови.

3.2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.2.1. Факторы, влияющие на гонадотропную активность СЖК.

3.2.1.1. Изменение гонадотропной активности сыворотки крови у кобыл разного возраста.^.

3.2.1.2. Связь между гонадотропной активностью сыворотки крови и живой массой жеребых кобыл.

3.2.1.3. Влияние жеребца на гонадотропную активность СЖК.

3.2.1.4. Уровень гонадотропной активности сыворотки при интенсивном использовании кобыл-доноров.

3.2.1.5. Динамика и гонадотропная активность сыворотки у кобыл в разные сроки беременности.

3.2.2. Морфологические и биохимические показатели крови при их г* интенсивном использовании в качестве доноров.

3.2.3. Повышение гонадотропной активности СЖК.

3.2.3.1. Трансфузия форменных элементов крови после получения сыворотки от жеребых кобыл.

3.2.3.2. Применение биологически активных веществ с целью (У повышения гонадотропной активности сыворотки крови жеребых кобыл.

3.2.4. Оценка эффективности применения фоллигона и нативной СЖК в сочетании с диамолом при гипофункции яичников у коров-первотелок.

3.2.5. Экономическая эффективность повышения гонадотропной активности СЖК.

4.0. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

5.0. ВЫВОда.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Динамика гонадотропной активности сыворотки крови жеребых кобыл под влиянием генетических факторов и окружающей среды"

В зооветеринарной практике, наряду с другими биологически активными веществами, широкое применение нашли препараты, обладающие го-надотропной активностью. Их действие основано на стимуляции роста и овуляции фолликулов за счет действия входящих в их состав фолликулостимулирующего и лютеинизирующего гормонов.

Одним из наиболее доступных гонадотропных препаратов является гонад отропин сыворотки крови жеребых кобыл (ГСЖК) Н. Gole. G. Hart, 1930; М.М. Заводовский, 1934, 1935. Уникальность препарата обусловливается тем, что этот гликопротеид объединяет свойства лютеинизирующего и фолликулостимулирующего гормонов, причем при введении животным процент прихода в охоту может достигать 90-100%, а оплодотворяемость 60

70%. Благодаря особенностям строения молекулы, ГСЖК длительное время сохраняется в организме, что увеличивает возможности его применения и снижает себестоимость обработок (М.И. Прокофьев и др.; 1983; B.C. Шипи-лов, A.M. Семиволос 1986; S.N. Lennard et.al., 2001; Ф.М. Чомаев и др. 2002).

Единственным источником этого гонадотропина является сыворотка крови жеребых кобыл (СЖК). Биологическое предназначение ГСЖК - стимуляция функции желтого тела с целью поддержания достаточного уровня прогестерона до периода времени, когда развитие плаценты сможет обеспечить потребности организма в прогестероне и других стероидах. Этим объясняется то, что гонадотропная активность сыворотки проявляется приблизительно в период с 30-го по 120-й день жеребости и зависит от индивидуальных особенностей кобыл-доноров. При этом, интенсивное использование ко-был-доноровсопровождается резким снижением гонадотропной активности сыворотки их крови. Вопросом отбора потенциальных продуцентов содержащих в крови высокую гонадотропную активность для получения качественного сырья так же до настоящего времени остаются окончательно невыясненными и требуют научного решения. В связи с этим возникает необходимость поиска методов, позволяющих оптимизировать получение ГСЖК и замедлить снижение гонадотропной активности при многократном взятии крови в большом объеме.

Цель и задачи исследований

Исходя из вышеизложенного, целью исследований является изучение закономерности изменения гонадотропной активности сыворотки крови жеребых кобыл на фоне влияния генетических факторов и окружающей среды.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

• Определить гонадотропную активность сыворотки крови жеребых кобыл в зависимости от их индивидуальных особенностей.

• Выяснить влияние сроков и кратности взятия крови на гонадотропную активность сыворотки кобыл-доноров.

• Изучить влияние трансфузии форменных элементов и применения различных биологически активных веществ на повышение гонадотропной активности СЖК в период взятия крови.

• Провести сравнительную оценку эффективности применения различных препаратов ГСЖК при дисфункции яичников у коров.

Научная новизна исследований

Изучены особенности проявления гонадотропной активности у жеребых кобыл башкирской породы, ее взаимосвязь с генетическими и средовы-ми факторами. Применены различные методы трансфузии форменных элементов крови и определена эффективность применения различных биологически активных веществ с целью повышения гонадотропной активности СЖК.

Практическая значимость работы

- Предложены методы повышения гонадотропной активности у кобыл-доноров башкирской породы лошадей, способствующие повышению качества сырья для производства гонадотропинов, усовершенствованы приемы коррекции функции яичников у коров.

Апробация работы

Материалы диссертации были доложены и одобрены на заседаниях ученых Советов и конференциях молодых ученых ГНУ БНИИСХ РАСХН; ВПО ФГУ БГАУ; на Всероссийской научно-практической конференции г. Уфа - 2005 г.; в межрегиональной научно-практической конференции ГНИ УГНИИСХ г. Ижевск 2005 г. Основные научные результаты, включенные в диссертацию, опубликованы в пяти научных работах.

Структура и объем работы

Диссертация изложена на 113 страницах, содержит 12 таблиц, 6 рисунков, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследований, обсуждения, выводов, практических предложений. Список литературы включает 270 источников, из них на иностранном языке -215.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Федоров, Игорь Владимирович

5.0. ВЫВОДЫ

1. Гонадотропная активность сыворотки крови жеребых кобыл находится в зависимости от возраста и массы тела, а также использованного в случке жеребца-производителя. Интенсивный обмен веществ характерен для особей с небольшой живой массой и молодых животных, что обуславливает более высокую гонадотропную активность сыворотки продуцентов. Оптимальный возраст кобыл для использования в качестве донора от 4 до 7 лет, а живая масса до 450 кг.

2. Увеличение кратности использования доноров оказывает негативное влияние на уровень гонадотропной активности их сыворотки. Максимальное значение показателя - 72,6 ИЕ. при первом взятии крови на 40-60 дни жеребости в последующем снижаются на 15-18% и стабилизируется ко времени 4-5-го сбора крови.

3. Гонадотропная активность СЖК возрастает до 90-го дня беременности, при этом рост активности более интенсивен с 40-го по 50-й дни жеребости и составляет 78,9%. Максимальное значение показателя - 123 ИЕ на 90-й день в дальнейшем на 11-30%) и к 130 дню жеребости составляет 70% от пиковых значений.

4. Интенсивное использование кобыл-доноров при взятии крови в большом объеме обусловливает изменение физико-химических показателей крови: уменьшение удельного веса на 0,001-0,009 г/см3, увеличение скорости свертывания на 5-10 мин., снижение вязкости на 0,01-1,2 Па, скорости оседания эритроцитов на 0,6-1,4 мм/час, уменьшение содержания билирубина и гемоглобина на 16-23%. Эти изменения происходят на фоне снижение числа форменных элементов крови на 25-30%, сдвиг лейкоцитарной формулы в сторону юных и палочкоядерных нейтрофилов.

5. Для повышения гонадотропной активности СЖК целесообразно использовать ретинол в дозе 10 мл внутримышечно, однократно. Комплексное применение ретинола и йодистого калия в дозе 60 мг способствует удлинению периода высокой активности СЖК и усиливает действие ретинола. При этом гонадотропная активность сыворотки на 12-24% выше показателей животных в контрольной группе. Трансфузии форменных элементов крови, оставшихся после отделения сыворотки, позволяет поддерживать уровень гонадотропной активности на 8,5 - 14,6% выше, чем в контроле.

6. Применение гонадотропных препаратов через 168 часов после инъекции диамола позволяет эффективно выводить яичники из состояния гипофункции с хорошим синхронизирующим эффектом и оплодотворяемостью коров.

6.0. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

С целью оптимизации производства сыворотки крови и повышения ее гонадотропной активности у кобыл башкирской породы рекомендуется:

1. Отбор крови для получения сыворотки у жеребых кобыл проводить в период 40-110 дней жеребости. Для поддержания высокого уровня гонадотропной активности и профилактики отклонений в течение жеребости интервал между взятиями крови должен составлять не менее 10-14 дней.

2. С целью повышения гонадотропной активности животным перед началом периода отбора крови рекомендуется однократно внутримышечное введение масляного раствора ретинола в дозе 10 мл (с содержанием в 1 мл 25000 ME действующего вещества) в комплексе с 60 мг йодистого калия. В период интенсивного использования доноров применять трансфузию форменных элементов через 24-36 часов после взятия крови, предварительно разбавив их физраствором в соотношении 1:1,5 с добавлением 150 мл кальция борглюконата.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Федоров, Игорь Владимирович, Уфа

1. Алпатов В.В. Сперматозоидная реакция бесхвостых амфибий как метод ранней диагностики беременности. //Акушерство и гинекология. -1950. №2-с. 24-25.

2. Атабек А.А. К оценке диагностики беременности по сперматозоидной реакции озерных лягушек. //Акушерство и гинекология. 1952. - №4 -с. 21-23.

3. Баранникова И.А, Боев А.А, Буковская О.С. и др. Анализ созревания осетра (Acipenser queldenstaedti Brandt) под действием люлиберина в связи с возможностью использования этого препарата в рыбоводстве. //Воспр. ихтиологии. 1989 - т. 29. - №3. - с.439-447.

4. Баранникова И.А, Боев А.А, Буковская О.С, Ефимова Н.А. Гормональная регуляция репродуктивной функции у осетровых и биотехника стимуляции созревания в осетроводстве. //Биологические основы осетроводства. -М.: Наука, 1983. - с. 22-42.

5. Барминцев Ю.Н, Ковешников B.C., Нечаев И.Н. Продуктивное коневодство. //М.: Колос. 1980. - с. 34-35.

6. Бахитов К. И. Проявление анэструса у новотельных коров разной продуктивности. //Зоотехния. 1998. - №9. - с. 28 - 30.

7. Бычкова Р.А. Гормональная активность СЖК. //Ветеринария. 1967. -№4.-с. 19-20.

8. Вагнер Л.Б. О методике реакции на беременность, проводимой на лягушках-самцах. //Акушерство и гинекология. 1966. - №2 - с. 18-20.

9. Вареников М. В., Чомаев А. М., Артюх В. М. Применение различных прогестагенов при гипофункции яичников у первотелок. //Зоотехния. -2002. №8. с. 25 - 27.

10. Виксне А.Е., Гайметис К.О., Лоде З.О., Стиканс П.А. Изучение гормональной активности СЖК в зависимости от породы лошадей и производства сыворотки в условиях Латвийской ССР. //Тр. Латв. института животноводства. Рига. - 1968. - т. 21.

11. Витт В.О., Желиговский О.А., Красников А.С., Шпайер Н.М. Коневодство и конеиспользование. //М. Колос. - 1964. - с. 155-157.

12. Власов С. А. Содержание белков в крови коров при гипофункции яичников и воздействие СЖК. //Ветеринария. 1991. - №7. - с.52 - 54.

13. Воробьев Н. Н. Оплодотворяемость и показатели крови у коров с гипофункцией яичников. //Ветеринария. 1980. - №4. - с. 43 - 44.

14. Годович П.Л., Никитина М.М., Виноградов В.К., Розен В.Б. Динамика половых стероидов в крови половозрелых самок и самцов карпа в период размножения. //Докл. АН СССР, 1982. - т. 263. - №6. - с. 1502 -1506.

15. Горев Э.Л. Значение лютеинизирующего фактора в гормональных препаратах СЖК. //Ветеринария. 1966. - №5. - с.23-27.

16. Дивеева Г.М., Полынцев Ю.В., Новикова Т.Г. Динамика половых гормонов в крови песцов в постнатальном онтогенезе. //Науч. труды НИИ пушного звероводства и кролиководства. М.: 1982. - т.27. - с. 88-94.

17. Дьяконов Е.Ф. Содержание фолликулстимулирующего и лютеинизирующего гормонов в сыворотке коров в течение полового цикла. //Биолог, основы размножения и искусственного осеменения Сю-хю животных. -1968.

18. Завадовский Б.М. Зоотехническая эндокринология в СССР. //В сб. «Проблемы зоотехнической экспериментальной эндокринологии» т. 1, 1934.

19. Завадовский Б.М. Новая ускоренная гиперемнйная реакция яичников белых мышей в практике акушерства и гинекологии. //Акушерство и гинекология №4. - 1951.

20. Завадовский М.М. Нельзя ли, вызывая искусственную овуляцию у овец, достигнуть многоплодия. // Труды по динамике развития. т. 9, -1935.

21. Кабак Я.М. Практикум по эндокринологии. //Изд. МГУ 1968.

22. Кабак Я.М., Соколова Е.В. содержание лютеинизирующего гормона в гипофизе крыс с длительной течкой. //Бюл. экспер. биологии и мед. -1962.-№7. с. 32-33.

23. Киршенблат Я.Д. Гонадотропные гормоны. //Проблемы эндокринологии и гормонотерапии. 1956. - №6. - т.11.

24. Кленова И.Ф., Яременко Н.А. Ветеринарные препараты в России. //М. -Сельхозиздат. 2001. - с. 321, 396.

25. Клинский Ю. Д., Чомаев А. М. Методические рекомендации по применению диамола в комплексе с другими биологически активными веществами для активации половой функции коров при глубокой гипофункции яичников. // "Луч", Дубровицы. 1999. - 9 с.

26. Клинский Ю.Д. Требования к изготовлению, стандартизации и хранению препарата СЖК. //Материалы зоотехнической секции научно-технического совета МСХ СССР от 14-15 сентября. 1966.

27. Лазарев Н.И. Гормональная терапия злокачественных опухолей. //Москва. 1968.

28. Левин К.И. Влияние КЖК на спермопродукцию хряков. //Ветеринария. -1964.-№4.-с.13-16.

29. Логинова Н.В., Лопырин А.И. Увеличение многоплодия овец воздействием сыворотки крови жеребых кобыл. //Проблемы животноводства -№10- 1938.

30. Лоде 3.0. Изучение гормональной активности СЖК в зависимости от породы лошадей и производства сыворотки в условиях Латвийской ССР. /Наука животноводству 1968. - вып. 8.

31. Лопырин А.И. Увеличение многоплодия овец гормональным воздействием. //Успехи зоотехнической науки. Вып. 5- 1937.

32. Мандельштам А.Э. Симптоматика и диагностика женских болезней. /Медицина, Ленинград. 1964.

33. Минкина А.И. Иммунохимическая характеристика гонадотропных гормонов. //Биохимия, т. 29, вып. 2 1964.

34. Николайчук С.Н. Определение гонадотропинов передней доли гипофиза. //Врачебное дело. 1951. - №7.

35. Новикова Т. Г., Соболь А. В., Дивеева Г. М. Уровень половых гормонов у самок песцов в период размножения // Науч. труды НИИ пушного звероводства и кролиководства. М., 1983. - т. 29. - с. 81-87.

36. Осадчук Л. В., Красс П. М., Иванова Л. Н. Эндокринная функция гонад у серебристо-черных лисиц на разных стадиях репродуктивного цикла //Изв. СО АН СССР. 1977. - № 5. - Сер. биол. Вып. 1. - с. 118-121.

37. Плодовская Л.А. Опыт использования лягушек в течение года для диагностики беременности. //Акушерство и гинекология. 1953. - №5 - с. 14-15.

38. Полынцев Ю. В., Дивеева Г. М., Розен В. Б. Сезонные изменения эндокринной функции яичников клеточных соболей // Науч. технич. бюл. Укр. НИИ физиологии и биохимии с.-х. животных. 1980. - № 1/4. - с. 42—43.

39. Помытко В.Н., Дивеева Г.М., Уткин Л.Г., Юдин В.К. Пушное звероводство и кролиководство. //М.: Колос, 1982. 239 с.

40. Савченко О.Н. Гормоны яичника и гонадотропные гормоны. // «Медицина» Ленинград - 1967.

41. Самойлова Е.Е. Гормональная диагностика беременности на лягушках. //Акушерство и гинекология. 1951. - №4 - с. 12-13.

42. Свечин К.Б. Содержание фолликулярного и гонадотропного гормонов в моче и крови ослиц. //Тр. Башкир, с.-х. ин-та т. 3 - 1938.

43. Солдатенков П.Ф. Содержание гонадостимулятора в кровяной сыворотке жеребых кобылиц. //Сб. раб. Ленинградского зоотехнического ин-та НКЗ СССР 1939. - вып. 2. - с. 36-38.

44. Черемисинов Г. А. Изучение гистофункциональных изменений в яичниках у коров. //Ветеринария. 1974. - №2. - с. 88 - 91.

45. Чомаев А. М., Клинский Ю. Д., Колодиев Ч. Б. Мероприятия по улучшению воспроизводства стада КРС в хозяйствах. //М.: Мосагроген. -2002.-е. 83.

46. Шаляпина В.Г. Эндокринология репродукции. /Наука. 1991. - 192 с.

47. Шаталов П.И., Крибулько В.И., Акимов Э.Р. Гормональная активность крови жеребых кобыл. //Ветеринария. 1966. - №5. - с. 25-27.

48. Шипилов В. С., Семиволос А. М. Восстановление плодовитости у ремонтных телок при гипофункции яичников. //Известия ТСХА. 1986. -№1. - с. 142-151.

49. Штамлер С.М. Содержание гормонов полового цикла в моче и крови беременных кобыл. //Проблемы зоотехнической экспериментальной эндокринологии. 1935.

50. Эйбер И.С. Биологическая реакция на беременность с самцами лягушек. // Акушерство и гинекология. 1951. - №4 - с. 32-35.

51. Aggarwal В.В., Farmer S.W., Papkoff Н., Stewart F., Allen W.R. Purification and characterization of donkey chorionic gonadotrophs. //Journal of Endocrinology. 1980. - v. 85 - pp. 449-455.

52. Albert A. Human urinary gonadotrophins. //Rec. progr. horm. res. 1956. — 12.-p.227.

53. Albert A., Bennett D., Carl C. Assay characteristics of tannate complexes of PMS. //Endocrinology. 1965. - v. 76. - pp. 506-513.

54. Albert A., Paulsen C.A., Maddock W.O. Collaborative assay of two local standards for human pituitary gonadotropin. //J. Clin. End. and metabol. -1952.-v. 18-p. 1428.

55. Albrecht B.A., MacLeod J.N., Daels P.F. Differential transcription of steroidogenic enzymes in the equine primary corpus luteum during diestrous and early pregnancy. //Biol. Reprod. 1997. - 56. - pp. 821-829.

56. Allen W.R. A quantitative immunological assay for pregnant mare serum gonadotrophin. // J. Endocrinol. 1969. - 43 - pp.581-591.

57. Allen W.R. Factors influencing pregnant mare serum gonadotrophin production. //Nature. 1969 - v. 223 pp. 64-65.

58. Allen W.R., Moor R.M., The origin of the equine endometrial cups. I. Production of PMSG by fetal trophoblast cells. //J. Reprod. Fertil. 1972. - v. 29.-pp. 313-316.

59. Almeida A.P., Fo C., Livestock G., Superovulatory response in dairy cows repeatedly treated with PMSG, Theriogenology 27 (1987) 205.

60. Amoroso E.C. Endocrinology of pregnancy. //Brit. Med. Bull. 1955. - v. 11.-pp. 117-125.

61. Anselmino K.J, Hoffman F. Handbuch der experimentellen pharmakologie. //Berlin, bd. 9.-1941.

62. Apostalakis M. Detection and estimation of pituitary gonadotrophins in human plasma. //Endocrinology. 1959. - v. 19. - p 377.

63. Apostalakis M, Voigt K. Bioassay of various gonadotrophins. //Acta endo-crinol. 1958. - v. 28.-p. 54-68.

64. Ascheim S, Zondek B. Hypophysenfor der lappen and ovarial hormone in harn von Schwangeren. //Klin Wsehr. 1927. - 6.

65. Avrameas S, Antoine J.C, Ternynck T, Petit C, Development of immunoglobulin and antibody- forming cells in different stages of the immun response. //Ann. Immunol. 1976-v. 127-pp. 551-571.

66. Barnes, F.L. The effects of the early uterine environment on the subsequent development of embryo and fetus. //Theriogenology. 2000. - v. 53 - pp. 644-658.

67. Beckers J.F, Wouters P, Ectors F, Derivaux J, Induction de Posstrus chez les genisses en anoestrus fonctionnel. //Ann. Med. Vet. 1978. - v. 122 -pp. 597-605.

68. Bell E.T, Loraine J.A, Jennings S, Weaver A.D. Serum and urinary go-nadotrophin levels in pregnant ponies and donheys. //Quart. J. Exptl. Physiol. 1967. - v. 1, 52. - pp. 68-75.

69. Bell E.T, Lunn S.T. Studies on gonadotrophin induced ovulation in the immature raf. //Endocrinology. 1968. - v. 41. - pp. 171-177.

70. Benveniste R, Speeg K.V.J, Carpenter G, Cohen S., Lindner J, Rabi-nowitz D. Epidermal growth factor stimulates secretion of human chorionicgonadotropin by cultured human choriocarcinoma cells. //J. Clin. Endocrinol. Metab. 1978. - v. 46. - pp. 169-172.

71. Bergfelt D.R., Pierson R.A., Ginther O.J. Resurgence of the primary corpus luteum during pregnancy in the mare. //Anim. Reprod. Sci. 1989. - v. 21. -pp. 261-270.

72. Biclaski W., Ewy Z., Pigoniowa H. Differences in endocrine secretion of тагу pregnant with stallion or jack. //Bull Acad. Polonaise Sci. cl. 1955. -v.ll.-p. 111.

73. Bodemer C.W., Rummery R.E., Blandein R.J. Studies on induced ovulation in the intact immature hamster. //Fert. Steil. 1959. - v. 10. - p. 350.

74. Bonrillon R. In Leclereg. M. //Bull. Soc. Chun. Biol. 1959. - v. 41. - p. 493.

75. Bourdillon A., Chmitelin F., Jarrin D., Parez V., Rouiller H., Effect of PMSG treatment on breeding result of artificial inseminated rabbits. // J. Appl. Rabb. Res. 1992. - v. 15 - pp. 530-537.

76. Bousfield G.R, Butnev V.Y, Gotschall R.R., Baker V.L., Moore W.T. Structural features of mammalian gonadotropins. //Mol. Cell. Endocrinol. -1996.-v. 125-pp. 3-19.

77. Brown P.S. Human urinary gonadotrophins assayed by different responses in the same animal. //Acta Endocrinol. Kbh. 1960. - v. 34. - pp 375-389.

78. Brown P.S. In human pituitary gonadotrophins. //Ed. A. Albert. Springfield Thomas.-1961.-p. 138.

79. Brown P.S. The assay of gonadotrophin from urine of nonpregnant subjects. //Endocrinology. 1955. - v. 13. - pp. 59-64.

80. Brown P.S., Billiwicz W.Z. The respons of immature mice to mixtures of gonadotrophins. // Endocrinology. 1962. - v. 24. - pp. 65-75.

81. Brown P.S., Wells M. Factors which influence assays of gonadotrophins based on the induction of ovarian in mice. // Endocrinology. 1965. - v.33. -pp. 507-514.

82. Burgos M.H., Ladman A.J. Effect of purified gonadotrophins upon release of spermatozoa in the frog rana pipiens. //Proc. Soc. Exptl. Biol. And Med. -1955.-v. 88.-pp. 484-487.

83. Butt W.P., Crooke A.C., Cuipninjham F.J. The use of the ion-exchange materials in the practionation of gonadotrophins from urine. //Acta Endocrinol. 1959.-v. 32.-pp. 509-518.

84. Butt W.P., Crooke A.C., Cuipninjham F.J., Anneliese W. Preparation of an-tisera to human folliclestimulating hormone. //Nature Enjl. 1963. - 197, -4865.-pp. 388-389.

85. Butt W.P., Crooke A.C., Ingramt D., Round B.B. FSH in the urine of pregnant women. //Endocrinology. 1957. -v. 16,1.-pp. 107-113.

86. Carbonero Bravo D. Heat synchronization in spanich sheep breeds using progestagen administered vaginally. // Inst. Nation de la Recher, Agron., Paris, 1968.

87. Casida L.E. The preparation, properties and use of gonadostimulating hormones. //J. Dairy Su. 1938. - v. 21 - p. 101.

88. Catchpole H.R., Cole H.H., Pearson P.B. Studies on the rate and fate of mare gonadotropic hormone following intravenous injection. //Amer. J. physiology.- 1935.-v. 112.-p.21.

89. Catchpole H.R., Lyons W.R. The gonadal hormones of pregnant mares. // Amer. J. anatomy 1934. - v. 55. - pp. 167-227.

90. Catchpole H.R., Lyons W.R. The gonadotrophs hormone of pregnant mares. //Anatomic record. Supp. 1933. - v. 55. - p. 48.

91. Catchpole H.R., Lyons W.R. The gonodal stimulating hormone of pregnant mares. //Amer. J. anatomy 1939. - v.55 - pp. 167-227.

92. Cerne F, Schilling E. Unduction synchroner Rauchen und Ovulationen beim Schwein. // In: VII-е Congres Intern de reproduction animale et d,insemination artificielle. Munchen, Juni. 1972. - II - pp. 1039-1043.

93. Chavatte P., Holtan D., Ousey J.C., Rossdale P.D. Biosynthesis and possible biological roles of progestagens during equine pregnancy and in the newborn foal. //Equine Vet J 1997.- Suppl. 24 - pp. 89-95.

94. Chopineau M., Stewart F. Cloning and analysis of the cDNA for the common a-subunit of the donkey pituitary glycoprotein hormones. //Journal of Molecular Endocrinology. 1996. - v. 16 - pp. 9-13.

95. Chopineau M., Stewart F., Allen W.R. Cloning and analysis of the cDNA encoding the horse and donkey luteinizing hormone a-subunits. //Gene. -1995.-v. 160-pp. 253-256.

96. Christie W.B., Newcomb R., Rowson L.E.A., Ovulation rate and egg recovery in cattle treated repeatedly with PMSG and prostaglandin. //Vet. Rec. -1979.-v. 31- pp. 281-283.

97. Clariglold P.S., Lamond D.R. Optimum for the biological assay of gonad-otrophins. //Endocrinology. 1957. - v. 16. - p. 86.

98. Cognie I. Utilisation du FGA admisictre par vole orale pour la synchronization de 1,oestrus et 1,insemination artificielle. //In: VII-е Congres Intern de reproduction animale et d,insemination artificielle. Munchen, Juni. 1972. -II-pp. 971-972.

99. Cole H.H. High gonadotropic hormone concentration in pregnant ponies. //Proc. J. Exptl. Biol, and Med. 1938. - v.38. - p. 193.

100. Cole H.H., Bigelow M., Finkel J., Rupp G.R. Biological half-life of endogenous PMS following hysterectomy and studies on losses in urine and milk. //Endocrinology. 1967. - v. 81 - pp. 927-930.

101. Cole H.H., Erwey Y. 48-hours assay test for eguine gonadotropin wich results expelsed in international units. //Endocrinology. 1941. - v.29. - p. 514.

102. Cole H.H., Hart G.H. The potency of blood serum of mares in progressive stages of pregnancy in effecting sexual maturity of the immature rat. //Amer. J. physiology- 1930-v. 93.-p. 57.

103. Cole H.H., Saunders F.J. The concentration of gonad-stimulating hormone in blood serum and of oestrin in the urine throughouf pregnancy in the mare. // Endocrinology. 1935 - v. 19. - p. 199.

104. Combarnous Y. Molecular basis of the specificity of binding of glycoprotein hormones to their receptors. //Endocrine Reviews 1992. - v. 13 - pp. 670691.

105. Combarnous Y., Salesse R., Gamier J. Physicochemical properties of pregnant mare serum gonadotropin. //Biochim. Biophys. Acta. 1981 - v. 667. -pp. 267-276.

106. Daels P.F., DeMoraes J.J., Stabenfeldt G.H., Hughes J.P., Lasley B.L. The corpus luteum: source of oestrogen during early pregnancy in the mare. //J. Reprod. Ferti.l 1991. - Suppl. 44. - pp. 501-508.

107. Day F.T., Rowland Z.W. Serum gonadotrophin in welah and fland ponies. / Endocrinology. 1947. - v.5.

108. Day F.T., Rowland Z.W. The time and rafe appenrancl of gonadotrophin in the serum of pregnant mares. // Endocrinology. 1940. - v. 2. - pp. 254257.

109. Diezifalusy E., Loraine J.A. Sources of error in clinical bioassays of serum chorionic gonadotropin. //J. clinical. Endocrine. And metabol. 1955. - v. 15.-p. 424.

110. Donaldson E.M., Hunter G.A. Induced final maturation, ovulation and spermiation in cultured fish. /Fish physiology. //Eds. W.S. Hoar, D.J. Randal, E.M. Donaldson. New York: Acad. Press. 1983. - v. 9. - pt. В -pp. 223-291.

111. Dorner G., Dierschke F., Glegg M.T. Studies on the relation ship of serum and pituitary gonadotrophin levels to ovulation in the ewe. //J. Reprod. Fert. 1968.-v. 15.-pp. 321-324.

112. Dorner G., Hohlweg W. Zur frage der FSH und JCSH aktivat von stuten serum gonadotropins. //Kein. Wochensch №10 - 1961.

113. Dresser, B.L., Sehlhorset, C.S., Wachs, K.B., Keller, G.L., Gelwicks, E.J. and Turner, J.L. Hormonal stimulation and embryo collection in the domestic cat (Felis catus). Theriogenology. 1987. - v. 28 - pp. 915-927.

114. Ectors F., Derivaux K.J. Influence of medroxyprogrsterone on the pituitary gland and the genital tract of the sow. // Inst. Nation de la Recher, Agron., Paris, 1968.-pp.31-33.

115. Evans H., Penchard R.G., Simpson M.E. Maintenance and repair reproductive system of hypophisectimized male rats by hypophis lal synergist, pregnancy prolan and combinators therfor. //Endocrinology. 1934. - v. 18. - p. 607.

116. Evans H.M., Hines L., Varney R., Koch F.C. The comparative assay of gonadotrophs substances on rats mice and chicks. // Endocrinology. 1940. -v. 25.-p. 1005.

117. Evans Н.М, Kohls C.L, Wonder D.H. Gonadotropic hormone in blood and urine of early pregnancy, normal occurance transient extremely high levels. //J. Amer. Med. ass. 1937. - v. 108. - p. 287.

118. Evans H.M, Simpson M.E. Physiology of the gonadotrophins. //In editors Pincus G, Thiman K.V. The hormones. Ac. Press New York 1955. - v. 2 -pp. 351-404.

119. Evans H.M, Simpson M.E, Folksdorf S. Biological studies of the gonad-otrophic principles in sheep pituitary substance. // Endocrinology 1939. -v. 25. - p. 525.

120. Evans H.M, Simpson M.E, Lyons W.P, Turpeinen K. Anterior pituitary hormones which favor the production of frumatic uterine placentomata. //Endocrinology. 1941. - v. 28. - pp. 933-945.

121. Evans J.S, Dutt R.H, Simpson E.C. Breeding perforenance in ewes after synchronis estrus by feeding 6-methyl-17 acetoxyprogesterone. //J. Animal Sci.- 1962.-21.-pp. 804-808.

122. Fevold H.L, Fiscke V.M. The inhibition of the folliclestimulating hormone by the pituitary. //Endocrinology 1939. - v. 24. - p. 585.

123. Fontaine M. Hormonal control of reproduction in aquaculture. //Fish. Res. Board Canada. 1976. - v. 33 - №4. - pp. 422-439.

124. Franlcel-Conrat H.5 Li C.H., Simpson M.E., Evans H.M. Interstitial-cell stimulating hormone. //J. Biol. Properties Endocrinology 1940. - v. 27. -p.793.

125. Gall-Manini C. Pregnancy test using the maie toad. //J. Clin. Endocrin. and Metabol. 1947. - v. 7. - pp. 653-657.

126. Gentry L. R., Thompson Jr D. L. and Stelzer A. M. Responses of seasonally anovulatory mares to daily administration of thyrotropin-releasing hormone and(or) gonadotropin-releasing hormone analog./ J. of Anim Science, 2002. -Vol 80, pp. 208-213

127. Ginther O.J. Reproductive Biology of the mare: Basic and applied aspects. 2nd Edition, Equiservices, Cross Plains, Wisconsin. 1992. - pp. 333-417.

128. Ginther O.J., Pineda M.H., Wentworth B.C., Nuti L. Rate of disappearance, of exogenous LH from the blood in mares. //J. Anim. Sci. 1974. — v. 39 -pp. 397-403.

129. Ginther O.J. Endocrinology of pregnancy. //In: Reproductive Biology of the Mare, Basic and Applied Aspects, 2nd ed. Cross Plains: Equiservices. -1992.-pp. 419-456.

130. Goodrowe K.L., Howard J.G. and Wildt D.E. Embryo recovery and quality in the domestic cat: natural versus induced oestrus. //Theriogenology. -1986. v. 25,-p. 156.

131. Gordon I. Effect of ram on response of anoestrous sheep to progestogen. // Inst. Nation de la Recher, Agron., Paris, 1968.

132. Gospodarowicz D., Papkoff H. A simple method for the isolation of pregnant mare serum gonadotropin. //Endocrinology. 1967. - v.80. - pp. 699702.

133. Graham, L.H., Swanson W.F. and Brown J.L. Chorionic gonadotrophin administration in domestic cats causes an abnormal endocrine environment that disrupts oviductal embryo transport. //Theriogenology. 2000. - v. 54. -pp. 117-131.

134. Greep R.O., Dyke H.B., Chow B.F. Use of autorior lobe of prostate gland in the assay of metakantrin. //Proc. Soc. exptl. biol. and medicine. 1941. -v.46. - pp. 644-649.

135. Guillou F., Combarnous Y. Purification of equine gonadotropins and comparative study of their acid-dissociation and receptor-binding specificity. //Biochim. Biophys. Acta 1983. - v. 755 - pp. 229-236.

136. Hamburger C. The assay of gonadotropic hormonis. //Acta Endocrinol. Sup. 1957.-v. 31-pp. 59-74.

137. Hays E.E., Steelman S.L. Chemestry of the anterior pituitary hormones in editor pincusg. //Thimann K.V. The Hormones. 1955. - v.2 - pp. 201-234.

138. Henriksen S.A. Under solgelsen vedrorende biologick dreiegtighed diagnostic nos nopper. //Nord. Veterinar. 1967. - v.19. - pp. 585-591.

139. Hinrichs K., Mattews G.L., Freeman D.A. and Torello E.M. Oocyte transfer in mares. J. Am. Vet. Med. Assoc. 1998. - v. 212 - pp. 982-986.

140. Hoffmann F. Sexual hormone therapie in der Gynakologie. /Lepzig. 1955.

141. Holtan D.W., Houghton E., Silver M., Fowden A.L., Ousey J.C., Rossdale P.D. Plasma progestagens in the mare, fetus and newborn foal. //J. Reprod Fertil. 1991. - Suppl. 44.-pp. 517-528.

142. Holtan D.W, Squires E.L., Lapin D.R., Ginther O.J. Effect of ovariectomy on pregnancy in mares. //J. Reprod. Fertil. 1979. - Suppl. 27. - pp. 457463.

143. Hunter R.H.F. Response de l,ovarine de la trule a de hormones gonadotropes injectes a differens du cycle oestrien. // In: VII-е Congres Intern de reproduction animale et d,insemination artificielle. Munchen, Juni. 1972. - II -pp. 1053-1057.

144. Huot R.I., Foidart J.M., Nardone R.M., Stromberg 1С. Differential modulation of human chorionic gonadotropin secretion by epidermal growth factor in normal and malignant placental cultures. //J. Clin. Endocrinol. Metab. -1981 -v.53.-pp. 1059-1063.

145. Jainudeen H.R., Hafez E.S.E., Gollmick P.D., Moustafa L.F., Antigonad-® otropins in the serum of cows following repeated therapeutic pregnant mareserum injections. //Am. J. Vet. Res. 1966. - v. 27 - pp. 669-675.

146. Keller P.S. Expression of folliclestimulating and luteinizing hormone during lactation. //Acta endocrin. 1968. - v. 57. - pp. 529-535.

147. Klinefelter H.E., Albrig H.F., Griswold G.C.J. Experience wich quantitativetest for normal or decreased amounts of follicle stimulating hormone in endocrinological diagnosis. //Clin. Endocrinol. 1943. - v. 3. - p. 529.

148. Kment A., Wohlzogen F.X. Eine neul quantitative gonadotrophin bestim-munge methode. //Wener. Tierarztlieche Monut. - 1950. - v. 37 - p. 10.

149. Lammond D.R. Fertillity in ewes following controlled breeding technigues. //Procedings of the Austr. Soc. Animal Product. 3. - 1960.

150. Lammond D.R. Gonadotrophins in rabbit serum after intravenous injection. //J. Phisial. 1960. - 151 - v. 3. - pp. 403-409.

151. Lammond D.R., Emmens C.W. The effect of hypophysectomy on the mous uterine respouse to gonadotrophins. //Endocrinology. 1959. - v. 18. - p. 251.

152. Lang D.R., Lamond D.R. Some factors affecting the response of the immature mouse to pregnant mare serum gonadotrophin and human chorionic go-nadotrophin. //Endocrinology. 1966. - v. 34. - pp. 41-50.

153. Lebas F., Theau-Clement M., Remy В., Drion P.V., Beckers J.F., Production of anti-PMSG antibodies and its relation to the productivity of rabbit does. //World Rabbit Sci. 1996. - v. 4 - pp. 57-62.

154. Leclerg M., Derivan X.I. Considerationes sur certaines proprietes de la go-nadotropine du serum de jment gravide. //Bull. Acad. Veterin. France -1965. v. 38. - 8 - pp. 357-359.

155. Leganet-Demare I., Clauser I., Lusticz M. A new method for the purificica-tion of the gonadotrophin of PMS. //Biochim. Acta 1958. - v. 30 - pp. 169-181.

156. Leganet-Demare I., Clauser I., Lusticz M. Purificication of pregnant mare serum gonadotrophin (PMSG) by counter. //Bull Soc. Chun. Biol. 1961 -v. 43-p. 897.

157. Lennard S.N., Gerstenberg С., Allen W.R., Stewart F. Expression of epidermal growth factor and its receptor in equine placental tissues. //J. Reprod. Fertil. 1998. - pp. 112:49-57.

158. Levin L., Tundal H.H. Quantitative assay of follicle stimulating substances. // Endocrinology. 1937. - v. 21. - p.5.

159. Li C.H., Geschwing I., Evans H.M. The effect of grouth hormone on the inorganic phoaphorus levels in the plasma. //Endocrinology. 1949. - V. 44. -p. 67.

160. Li С. H., Simpson I., Evans H.M. Interstitial cell stimulating hormone. Method of preparation and some physico-chemical stadies. //Endocrinology.- 1940. v.27, - pp. 803-808.

161. Licht P., Gallo A.B., Aggarwal B.B., Farmer S.W., Castelino J.B., Papkoff

162. H. Biological and binding activities of equine pituitary gonadotrophins and pregnant mare serum gonadotrophin. //J. Endocrinol. 1979. - v. 83 - pp. 311-322.

163. Loraine I.A. Brown I.B. Some observation on the estimation of gonadotrophin in human urine. //Acta Endocrin. 1954 - v. 17 - p.250.

164. Loraine I.A. Human chorionic gonadotropins (HCG). /Academ. Press New York and London. //Hormones in blood 1961. - pp. 285-301.

165. Martinat F., du Mesni L., du Buisson F., Bariteau F. Synchronisation de1.oestrous post-sevrage de trules par injection de PMSG. // In: VII-е Congres Intern de reproduction animale et d,insemination artificielle. Munchen, Juni.- 1972.-II-pp. 1021-1025.

166. Matteri R.L., Baldwin D.M., Lasley B.L., Papkoff H. Biological and immunological properties of zebra pituitary gonadotropins: comparison with horse and donkey gonadotropins. Biology of Reproduction. 1987. - v. 36 - pp. 1134-1141.

167. Mauleon P., Rey J., Mariana J.C. control of the oestrus cycle of the cow with vaginal sponges impregnant with fluopogestone acetate and possible su-perovulation obtention. //Inst. Nation de laRecher, Agron., Paris, 1968.

168. Mc. Arthur I.W. The Bioassay of pituitary ICSH in human urine. //J. Clinic.endocrin.and metabolisen. 1952. - v. 12, - p.914.

169. Mc. Arthur I.W. The identification of pituitary interstitial cell stimulating hormone in human urine. //J.Endocrinol 1952. - v.50 - p. 304.

170. Mc. Arthur I.W.,Ingersoll I.M., Worcester Y. Urinary excretion of interstitial cell stimulating hormone by normal males and females of varios ages. //J.Clin.endocrin and metabol. 1958. - v. 18. - p.460-469.

171. McKinnon, AO, JL Voss, EL Squires and EM Carnevale. Reproductive examination of the mare: diagnostic ultrasonography. //In: A. O. McKinnon and J. L. Voss (eds.). Equine reproduction, Lea and Febiger, Philadelphia. -1993.-pp. 266-302.

172. Miller K.F., Berg S.L., Sharp D.C., Ginther O.J. Concentrations of circulating gonadotropins during various reproductive states in mares. //Biol Re-prod. 1980.-v. 22-pp. 744-750.

173. Morris C.J. Chemistry of the gonadotrophins. //Brit. Medical. Bullet. 1955. - 2. -pp.24-25.

174. Nagaoka T, Takegawa K. and Maekawa A. The relationship between endocrine imbalance and alteration of rat vaginal epithelium. J. Toxicol. Pathol. -2002. 15,-pp. 103-109.

175. Nolbandov A.W. Reproductive Physiology. //W.H. Foeman. San-Francisco and London. - 1964. - pp.37-38.

176. Ober K.G. Ln. Labhart klinik der inner secretion. //Berlin-Gotingen. Hedel-berg. Springer. 1957. - p. 67.

177. Otel V. Brunstsynchronisation au(3erhalb der Zuchtsaison bei Schafen. //In: VII-е Congres Intern de reproduction animale et d,insemination artificielle. Munchen, Juni. 1972. - II - pp. 982-987.

178. Paesi F.J.A, Wijhaus, Le Jough. The FSH-content of the hypophysis as influenced dy low concentrations of oestrogen. //Acta endocrinol. 1951. - v. 8. - p. 251.

179. Parlow A.F. A repid bioassay method for LH and factors stimulating LH secretion. //Federal proceding. 1958. - v. 17. - p. 402.

180. Parlow A.F. Bioassay of pituitary luteinizing hormone by depletion of ovarion ascorbic acid. //In editor Albert A. Human pituitary gonadotrophins. -1961.

181. Perez Y. и Perez F. Brunstsynchronisation und Pertilitatsbehandlund mit Chlomiphenzitrat bei Schafen. //In: VII-е Congres Intern de reproduction animale et d,insemination artificielle. Munchen, Juni. 1972. - II - p. 955.

182. Pierce J.G, Parsons T.F. Glycoprotein hormones: structure and function. //Annual Review of Biochemistry. 1981. - v. 50 - pp. 465-495.

183. Pigoniowa H. Badahia nad wydzielaniem hormonow gonadotropowich u z'rebnych caozy. //Med. weter. 1962. - v. 6. - pp. 361-363.

184. Pittman R.H., Clay C.M., Farmerie T.A., Nilson J.H. Functional analysis of the placenta-specific enhancer of the human glycoprotein hormone alpha subunit gene. Emergence of a new element. // J. Biol. Chem. 1994. - v. 269.-pp. 19360-19368.

185. Polge C. Control of oestrus, ovulation and artificial insemination in pigs. // Inst. Nation de la Recher, Agron., Paris, 1968. - pp. 43-45.

186. Provost F.L., Thimonier J., Nauleon P. Out of - season pregnancies in various breeds of French ewes following FGA treatment admisistered in-travaginally. // Inst. Nation de la Recher, Agron., Paris, - 1968.

187. Rafelson M.E. In "Hormonis in blood." Academic press. New York and London. //Bioch. Biophys. Acta 1961. - v.47 - p. 406.

188. Reichert L.F., Nolbandov A.V. An ovarion axcorbic acid depleting factor in the plasma of adenohypophysectomized cockerels. // Endocrinology 1965. -v.77.-p. 651.

189. Roberts E.M., Endar D.M. Timin of injection of pregnant mares serum for the anaestrous breeding of ewes. //Nature. 1966. - v. 50. - p. 212.

190. Rosemberg E., Solod E.A. Biologic characterization of ACG obtained from urine of men and postmenopausal women. //J. Clin. Endocrine, and me-tabol. 1964. - v. 24. - pp. 644-650.

191. Rosenberg E., Engel J. Biological characterization of human gonadotrophins obtained from the urine of men, postmenopausul women and cunuchs. //J. Clin. Endocrine, and metabol. 1962. - v. 22, - pp. 377-379.

192. Roser J.F., Kiefer B.L., Evans J.W., Neelly D.P., Pacheco C.A. The development of antibodies to human chorionic gonadotropin following its repeated injections in the cyclic mare. //J. Reprod. Fertil. 1979. - v. 27 - pp. 173-179.

193. Rowlands G.W. Production of ovulation in the immature rat. //Endocrinology. 1944. v. 3. - pp. 384-391.

194. Rowlands I.M. Serum gonadotrophin and ovarian activity in the immature rat. // Endocrinology. 1949. - v. 6. -p 184.

195. Rowson L.E.A., Tervit P., Brand A. Brunstsynchronisation bei Rindern mit Hilfe von prostaglandin F2a. //In: VII-е Congres Intern de reproduction ani-male et d,insemination artificielle. Munchen, Juni. 1972. - II - pp. 865859.

196. Saint-Dizier M., Foulon-Gauze F., Lecompte F., Combarnous Y. and Cho-pineau M. Cloning and functional expression of the equine luteinizing hor-mone/chorionic gonadotrophin receptor. // Endocrinology. 2004. - 183, -pp. 551-559.

197. Santamarina E., Joves L.L. Factors influencing accuracy of gonadotrophin test for pregnancy in ares. //J. Amer. Veterin. Med. Assoc. 1960. - v. 137, 9. -pp 522-524.

198. Santamarina E., Joves L.L. The effect of time and temperature on the gonadotrophs patency of the pregnant mare serum. //Amer. J. Vetrin. Res. -1960/-v. 21, 83.-pp. 585-590.

199. Schmidt-Elemendorff, Loraine I.A., Bell E.T. The effect of 6 m. urea on the foliclestimulating and luteinizing hormone activaties of varions gonadotrophin preparations. // Endocrinology 1962. - v. 24 - pp. 153-158.

200. Schwetzen F.L., Bas J.A. La semana medica. 1948. - v. 40. - p. 703

201. Segaloff A. The physiology of the luteinizing hormone. //J. Pituitary gland. Buterworths London. - 1966. - p. 518.

202. Segaloff A., Steelman S.H., Flores A. Human gonadotrophins. //Resent progress hormone research. 1959. - 15.

203. Sherman G.B., Wolfe M.W, Farmerie T.A., Clay C., Threadgill D.S., Sharp D.C., Nilson J.H. A single gene encodes the a-subunits of the equine luteinizing hormone and chorionic gonadotropin. //Molecular Endocrinology. 1992-v. 6-pp. 951-959.

204. Siegler S.J. Futher exrerience wich the hormone of pregnant mare. //Endocrinol. 1940. - v. 27 - pp. 387-391.

205. Silver M. Placental progestagens in the sheep and horse and the changes leading to parturition. //Exp. Clin. Endocrinol. 1994. 102. - pp. 203-211.

206. Simpson M.E. In human pituitary gonadotropins. //Ed. Albert, 1961. - p. 352.

207. Simpson M.E., Li C.H., Evans H.M. Sensitivity of the reproductive system of hypophysectomized 40 day male rats to gonadotropic substances. //Endocrinology. 1944. - v. 35. - pp. 96-104.

208. Slebodzinski A. Zarys endokrinologii zwierzat uzytkowych. // PWN. -1983.-495 p.

209. Smith P.E. Engle E.T. Experimental evidence regarding the rol of the anterior pituitary in the development and regulation of the genital system. //Amer. J. Anatomy. 1927. - v. 40, - p. 159.

210. Snook R.B., Cole H.H., Geschwind I.I. Furter studies on mare serum gonad-otrophins secretion in response to immunization with HGC or crude ovine FSH. //J. Reprod. Fertil. 1968. - v. 15, 2. - pp. 239-257.

211. Squires EL. Endocrinology of pregnancy. //In: Mc Kinnon AO, Voss JL (eds.), Equine Reproduction. Philadelphia: Lea and Febiger. - 1993. - pp. 495-500.

212. Squires, E.L. Maturation and fertilization of equine oocytes. //Vet. Clin. N. Am.: Equine Pract. 1996. - 12. - pp. 31-60

213. Squires E.L, Wentworth B.C., Ginther O.J. Progesterone concentration in blood of mares during the estrous cycle, pregnancy and after hysterectomy. //J Anim. Sci. 1974. - 39. - pp. 759-767.

214. Steelman S.L, Poley F.M, Florence M. Assey of the FSH based on the augmentation with human chorionic gonadotrophin. // Endocrinology -1953.-v.53.-p. 604.

215. Stewart F, Allen W.R. Biological functions and receptor binding activities of equine chorionic gonadotrophins. //J. Reprod. Fertil. 1981. - v. 62 - pp. 527-536.

216. Stewart F, Allen W.R. The binding of FSH, LH and PMSG to equine gonadal tissues. //J. Reprod. Fertil. 1979. - Suppl 27 - pp. 431-440.

217. Stewart F, Maher J.K. Analysis of horse and donkey gonadotrophin genes using Southern blotting and DNA hybridization techniques. //Journal of Reproduction and Fertility 1991. - v. 44 - pp. 19-25.

218. Stewart F, Thomson J.A, Leigh S.E, Warwick J.M. Nucleotide (cDNA) sequence encoding the horse gonadotrophin alpha-subunit. //J Endocrinol. -1987.-v. 115-pp. 341-346.

219. Thorburn G.D. A speculative review of parturition in the mare. //Equine Vet J. 1993. - Suppl.; 14. - pp. 41-49.

220. Talmadge K., Vamvakopoulos N.C., Fiddes J.C. Evolution of the genes for the a subunits of human chorionic gonadotropin and luteinizing hormone. //Nature. 1984. - v. 307 - pp. 37-40.

221. Uberoi N.K., Meyer R.K. Standartization of pregnant mares serum. //J. Re-prod. Fertil. 1966. - v. 12 - pp. 587-589.

222. Urwin V.E., Allen W.R. Pituitary and chorionic gonadotrophic control of ovarian function during early pregnancy in equids. //J. Reprod. Fertil. -1982.-32.-pp. 371-381.

223. Van Viekerk C.H. and Gerneke W.H. Persistence and parthenogenetc cleavage of tubal ova in the mare. //Onderstepoort J. Vet. Res. 1966. - 31 -pp. 195-232.

224. Vanderwall, D.K. Early embryonic development and evaluation of equine embryo viability. //Vet. Clin. N. Am.: Equine Pract. 1996. - 12 - pp. 6184.

225. Voller A. Heterogenous enzyme-immunoassays and their applications. //(In: Enzyme immunoassay (Eds. E.T. Magio), CRG Press, Inc. Boca Paton, Florida, 1980.-pp. 181-197.

226. Weber JA, Freeman D.A., Vanderwall D.K. and Woods G.L. Prostaglandin E2 hastens oviductal transport of equine embryos. //Biol. Reprod. 1991. -45-pp. 544-546.

227. Weil C., Fostier H., Horvath L. et al. Profiles of plasma gonadotropin and 17f3-estradiol in the common carp, Cyrpinys carpio L., as related to spawning induced by hypophysation or LH-RH treatment. //Reprod. Nutr. Dev. -1980.-v. 20.-pp. 1041-1050.

228. Wells M., Khosla Т., Brown P.S. An investigation of the assay of gonadotroph^ by the induction of ovulation in immature mice. //Endocrinology. -1964.-v. 29.-pp. 311-322.

229. Wilkinson J.F., Fremery A. In Nolbandov. //Nature London - 1940. - v. 141.-p. 491.

230. Willett E.L. Egg transfer and superovulation in farm animals. //Jowa St. Coll. J. Sci. 1953. - v. 28. - p. 83.

231. Williams P.S. Studies biological action of serum gonadotrophin. Decline in ovarian response after hypophysectomy. //Endocrinology. 1945. - v.4. -pp. 127-130.

232. Williams R.H. textbook of endocrinology. //Philadelphia London - 1955.

233. Wislocki G.B., Bennett H.S. The hormones. //Amer. J. Anat. 1943. - v.73 -p. 335.

234. Woods G.L., Hilman R.B. and Scalfer D.H. Recovery and evaluation of embryos from normal and infertile mares. //Cornell Yet. 1988. - 76 -pp.386-394.

235. Zarrow M.X., Caliwell A.L., Hafes E.S., Pincus G. Superovulation in the immature rat as a possible assay for LH and HCG. //Endocrinology. 1958. -v. 63.-pp. 748-758.

236. Zarrow M.X., Clark J.H. Gonadotrophin regulation of ovarian sholestirol levels in the rat. // Endocrinology. 1969. - v. 84, 2 - pp. 340-346.

237. Zondek B. Hormonale schwangerschafts reaction sus dem hen dei mensch und tied. //Klin. Wochschr. 1930. - v. 49,

238. Zondek В., Frirdmann M. Are there cyclic changes in human vaginal mi-cosa? //Jama. 1936. - v. 106. - p. 1051.