Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Динамика эпимуральной колонизации спиралевидными бактериями слепой кишки морских свинок

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Динамика эпимуральной колонизации спиралевидными бактериями слепой кишки морских свинок"

«г* ^

п 7 у. ~ ' > РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ И МИКРОБИОЛОГИИ имени почётно™ амлемика Н.Ф>. ГАМАЛЕИ

на правах руттюи

РАЙГОСА ЛНЛЙЛ Мигель

динамика шмурдлыго! колонизации спирллеоий^ымн

баюйн слепой кишки морских свш

03.00.07 - Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Москва - 1393 г.

Работа выполнена в Научно-исследовательской институте эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РДМН.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор В.М. Бондаренко .доктор биологических наук, профессор X. Мора-Галиндо

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор А.С. Быков доктор биологических мук, профессор Т.А. Смирнова

Ведущая организация: Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н.Габричевского

Защита диссертации состоится " _1993 г.,в час.,.на

заседании специализированного Совета К00.07.01 в___зале НИИЭМ

им. Н.Ф.Гамалеи РАМН / 123098, Москва, ул. Гамалеи 18.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН.

Аатореферат разослан ^ " ^^^ 1993 г.

Ученый секретарь специализированного Совета, кандидат медицинских наук

Е.И. Коптелова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИК РА1СШ

; Актуальность проблемы. В настоящее время одной из ваиннзс роблем, разрабатываемых современной шкробкой экологией, явлл-тся изучение колонизационного процесса элшуралькьши предста-ителями нормальной микрофлоры пищеварительного тракта как вя~ отных, так и человека. Особвй интерес вызывает вопрос их учас-ия наряду с известными видали индигенных микробов в формировали колонизационной резистентности организма.

Б текущий моионт' исследователи ряда ведущих стран обращают эльиое внимание ж становление колонизационной' резистентности газистых различных открытых полостей организма хозяина и'тема-пса многих работ надавлена в сторону экспериментального иссле-зьания и оценки состояния наиболее изученного шнробиоценоза злудочно-нишечного тракта. Микробная,экологическая система га-зварительного тракта вклпчает многочисленных представителей ш-эобного мира, взаимодействующих между собой в определенной эко-)гической нише и составляющих мозаичнув структуру нормальной гарофлорн/van der Waaij D., 198?; №-ИЛЛер П., IS83/.

Известно, что нормальная микрофлора гастроинтестинального эакта разделяется на полостную, находлцуюся просвете кипгоч-гка, и пристеночную, ассоцированную с микроворсинками эпителия ¡изистой. Согласно данным литературы, представители пристеноч-(й ыикрофлорн активно принимают участие в формировании кологи-щионой резистентности слизистой, и их присутствие указывает i определённую стабильность развившегося микробного б,:о — ■ноза /Петровская В.Г., Марко О.П., 1976; Savage b.c., 1987/..

Среди известных ыорфотипов пристеночной микрофлоры, представленной кокковыми, падочкопидныыи и нитгвидными микробами, находятся и спиралевидные бактерии, которые не .гак.давно обнаружены у обычных лабораторных животных /крыс и мышей/, собак, обезьян, к пищеварительном тракте человека /Takcuchi а. , 1972; Coster ton J. W. ,1976; PhiLIips M., 1978/.БОЛЬШИНСТВО СПИраЛбВИД-ин микроорганизмов ассоцируется с зпителиоцитами при участии гликокаяикса энтзроцитов в механизме их прикрепления. Однако некоторые ажкробы, обнаруживающиеся в эгонлуральной зоне эпителия, взаимодействуют с клетками путём пряного контакта с щёточ ной каёмкой зпителиоцитов и, как правило, оккупируют небольшое пространство между микроворсинкаш. В месте плотного контакта эукариотиадской и прокариотической клеток микробами стимулируется образование специализированой структуры, которая, по-видимому, играет роль в стабилизации их популяционного уровня и формировании биоплёнки, выстилающей поверхность слизистой оболочки /Mora-Galintjo J., 1937; Savage B.C., 1987/.

Популяцноншй уровень спиралевидных бактерий у взрослых особей достигает высоких величин, и эти микроорганизмы, обнаруживаемые в эпкыуральной зоне слизистой эпителия,буквально наскщадаг собой поверхность слизистой слепой кишки. Однако, до настоящего временя нет данных об ультргструктуре этих'микроорганизмов, мало изучены их таксономические свойства, не известны сроки их появления в экологической нише и динамика заселения эпителия слизистой слепой кишки спиралевидными бактериями.

эль исследования;

Изучение динамики элиыуральной полонизации спиралевидными истериями эпителия слизистой кишки морских свинок в онтогенезе.

Для осуществления поставленной цели необходимо было решить юдущие задачи:

Р I Исследовать процесс колонизации спиралевидными бактериями эпителия слизистой слепой кишки морских свинок в динамике развития новорождённого.

№ 2 Установить закономерности формирования стабильного микробиоцзноза слизистой слепой -кишки о участием эпи-мургяьнкх спиралевидных микроорганизмов.

1Р 3 Уточнить тип прикрепления стфзшевкдннх бактерий к энтероцитам.

Р4 Идентифицировать спиралевидшэ бактерии, пыстклавщиэ слизистую слепой юшки, путей детального изучения юс ультраетруктуры и с помощью логических морфо-экологи-ческих подходов. '

учиая новизна работы:

- Впервые показано, что колонизационный процесс эпимураль-ной зоны слизистой эпителия слепой, кишки морских свинок происходит с участием спиралевидных бактерий" и начинается во входах крипт Либеркюна через 2 недели после рождения.

- Вчзрвые с помощью математической модели продемонстрированы количественные и качественные изменения популяции эпнлуралыызс представителей нормальной шкрофлоры, в том числе, спиралевидных бактерий, в период формирования слизистой эпителия слепой кишки морских свинок.

- Епязлено, что шшротрубочные и фибриллярные структуры,нахс дящиеся внутри щиоплазш спиралевидных бактерий,' принимай? участие не только при перераспределении генетического материала, но к в процесса .л "якорного" прикрепления к эпитегиоцитаы.

- 1&шрсбная кл тка спиралевидных бактерий, выстилающих слизистую эпителия слепой ха-шхи, имеет только одну пару аксиальных флагелд, расположенных по одаому на какдом из

её кондов.

- Впервые показано, что колонии стгс^евштых бактерий фор-¡¿»груют на поверхности эпителия слепой кишки оригинальную биоплёнку, покрытую электионноплоташ слоем, ограничивающим распространение этих микроорганизмов.

Практическая ценность:

- Полученные дан:зне использованы при разработке математической компьютерной модели, позволяющей прогнозировать динамику формирования колонизационного процесса слизистой кишчшка спиралевидными бактериями.

- Отработаны морфологические критерии идентификации спи- • ралевидкых эпимуральных бактэрий, которые могут быть использованы на практике.

- Предлагается учитывать наличие эпимуральных спиралевид-кых бактерий в биотопе слизистой в качестве одного из критериев стабильности нормального ыинробиоценоза. Отсутствие в микробном ценозе спиралевидных бактерий свидетельствует о нарушении экологического равновесия, т.е. о развившемся длсбактерисзе гастроинтестинапьного траста.

Апробация работы:

Основные положения диссертации доложены на First iclas Scientific Meeting on Laboratory Animal Science in the Central American and Caribbean Region (La Habana, Cuba., 1990); Ha International Symposium: Current Problems on Medical Gnotobio-logy ana Orogantrointestinal Microflora (Rosc.tock, Garmany., 1990); НЯ International Seminar: New Trends in Laboratory Animal science (Kiev, Ucraina., 1991); на Х1У Конференции по Электронной микроскопии в Черноголовке /Россия, 1992/; на ххш Congreso Nacional de Microbiología (Acapulco, México., 1992); Ha IX International Congress of Histochemistry and Citochernis-try (Maastricht, The Netherlands., 1992); на XXIV Congreso Ha-cional de Microbiología (Guadalajara, México., 1993); на I Congreso Estatal (Jalisco) de la Biología (Guadalajara, Pióxico.,

v

1993).

■ Диссертация апробирована на расширенной научной конференции лабораторий генетики вирулентности бактерий и генетики эписом НИИЭМ им Н.Ф. Гамалеи РАМН /протокол К? 8 о.1 I3.09.IS93 г./.

- б -

Публикации:

По теш диссертации опубликовало II работ. Лх список приводится в конце автореферата.

Структура и'оСъем работы.

Диссертация изложена на 127 страницах ышпинописн. текста и состоит из введения, обзора литературы /4 главы/, описания материалов и методов, 2 глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована б таблицами ' и 22 рисунками. Список литературы содержит 173 источника.

Автор выракает благодарность за продуктивное сотрудничество научным сотрудашкш России Боеву Б.В. и Мадакину A.A. и научным сотрудшкам Мексики Гонзаяес-Роб.пес А., Мора-Гелшщо X., Гарсия дэ Альба-Гарсик X. и Агилар-Бенавидес С. -----

Автор выражает глубокую признательность научному руководителю доктору медштннских; наук, профессору Бондаренко В.М. за постоянное внимание и консультативную помоць в процессе выполнения работы.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Материалы и методы

Экспериментальные яивоткые.

В качество биологической модели были использованы линейные (Dunklin-Hartley) и нелинейшз ыорские свинки, распределённые на 10 груш. В пернув группу входили самки в периода последней трети беременности," необходише для забора образцов эпителия слизистой слепой кишки птадсв и новорожденных. В остальные группы, забиваемое под наркозом на I, 2, 3, 10,__ 15, 30, 60, 90 и 120 дни после' рождения, входили особи разных полов. Низотные находились на грудной вскарешшании в течение 2-х недель после рождения, а далее находились на диете, составленной на рационе Apicone (Anderson aiayton, со.) с добавлением витамина С. Количество использованных особей и сроки забора образцов на исследование приведены в Табл. I.

Получение образцов.

У жиЕуТннх под наркозом после лапаротоши иссекали несколько кусочков ткани слепой кишки, интенсивно отмывали для удаления содержимого, а затем- полостной микрофлоры. Образцы слизистой разрезали вдоль тений, расправляли на пластинках и фиксировали по общепринятому для электронной микроскопии методу»

Табл. I Экспериментальные группа морских свинок, сроки исследования н количество использовадах животных, изученных образцов эпителия слизистой слепой кишки.

Группа животных Сроки /дни/ " забора образцов Морские свинки Число проб /§§/

линейные нелинейные

1-я 15 /§/ 3 3 18

2-я I 3 3 18

3-я 2 э 3 18

4-я 3 3 18

5-я 10 3 3 18

6-я / 15 3 3 18

7-я 30 3 3 18

8-я 60 3 3 18

л» 90 з Б . 18

10-я 120 3 3 18

Всего; 30 30 . 180

§/ Образцы, забираемые до рождения: приблизительно последняя треть беременности.

§§/ За исключением первой группы, все образца получены посла рождения готвоткых.

Микробиологические исследования.

Из образцов эпителия, отмытых от полостной микрофлоры, готовили гомогенаты для посева в чашках Петри с различными питательными средами, рекомендованными для выделения впиыуральных бактерий. В качестве добавки были использованы наборы аминокислот и

витаминов, сыворотка лошади, сердечно-мозговой экстракт и селективные антибиотики, необходимые для выделения спиралевидных бактерий, имеющих высокую резистентность п "лтягасину в и рифамлици-ejv (Вегдеу'з^мапиа1.193<1Услсвия, при которых были инкубированы пробы - анаэробиоз, шнроанаэробиоз и аэробиоз /37°С в течение 3-4 суток/. Посла появления колоний делали мазки, также как- и свежие препараты по типу висячей капли, которые просматривали ь цветовом микроскопе в условиях фазового контраста или в аёшюм тола, после чего быстро пересевала отобранные кологаш.

Электронная микроскопия.

При приготовление образцов для электронной микроскоп;« одно-зременно брали заготовки как для трансмиссивной, так и сканирующей микроскопии. При трансмиссивной электронной микроскопии ис-юльзовали два различных метода: I.- Классический /Еирэзова В.й. г др., 1963/, и 2.- Метод элеетронного молекулярного зондирова-

ШЯ, ПОЗВОЛЯЮЩИЙ ВЫЯВЛЯТЬ микробы ПО nick translation in situ

j

(Berdayan, 1984).

Анализ электроногра<м проводили согласно методу трехмерной, «конструкции с использованием матриц, ®> есть,, разделяли общую ¡лощадь фотографии на фрагменты определённого размере., чтобы у :аждого рисунка был собственный номер кода. Шределяли ноли-:естзо морфотгаюв к частоту их встречаемости, чтобы шааить все ;уществующиз варианты.

Математическое моделирование колонизационного процесса.

Математическое моделирование колонизационного процесса, в в котором участвуют сраоу несколько морфотшов бактерий, может стать одним из критериев и средств получения новой информации для прогнозирования динамики формирования стабильного микробиоценоза. Для более точного соответствия меаду математическим описанием и реально протекающим заселением эпителия слизистой слепой кишки элиыуральнши микроорганизмам«, наш составлена математические модели на база системы нелинейных дифференциальных уравнений типа Волмерра /1976/.

Числовое решение уравнений модели колонизационного процесса потребовало разработки компьютерной программы .основанной на использовании численных методов, описанных в работе Боева Б.В. и соавт. /МЭИ.-1993.-Р 4.-С. 41-46/.

Анализируя информацию, полученную при исследовании колонизационного процесса спиралевидными бактериями, мы выполнили следующие операции: № I / Оценку фактических данных; К? 2 / Формирование стадий развития томонкзацкоиного процесса; Р 3 / Прогнозирование динамики развития стабильного мшсробиоценоза с доминированием спиралевидных бактерий.

РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОШ И ИК ОВСУдаШ

I. Колонизация эпителия слизистой слепой кишки морских свинок бактериями в динамике развития новорожденного.

1.1 Разнообразие бактериальных ыорфотипов.

■ Как показали проведенные нами исследования в образцах зпи-елия слепой кишкк, полученных от плодов морских свинок з период ослсдней трети беременности, можно было различить лишь границы езрелых эпителиоцитов, не имекяцих щеточной каёмки. 3 раннем вонатальном периоде на 2-3-й дни после рождения морфологическое гроение эпителия слизистой слепой кишки уже было сходно с тако-да слизистой взрослых. В этот период электронно-микроскопичес-I обнаруживали . прикрепление к клеткам кокковых, бациллярных филаментозкых форм бактерий /Табл. 2/.

1бл. 2 ' Разнообразие микробных морфоткпов, колонизирующих эпителий слепой кишки морских свинок.

Размер /в км/

Морф о тип _____--

толщина длина

I. Кокки 0,46-0,50

0,56-0,58 : 0,63-0,66

[I. Бациллы 0,48-0,50 1,11-1,50

0,53-0,65 1,53-2,37

[I. Филаментознке 0,4^.-0,46 3,04-4,ОЬ

0,62-0,68 12., 04-13,63

[У. Спиралевидные 0,20-0,25 2,6.^-3,69

Касаясь разнообразия бактериальных гюрфотмтов в период первых 10 дне'! после рождения, ко ¿да процесс формирования микробного биоценоза происходит со сменой сообществ, получившей название сукцессии, следует отшгить, что доминирующими были бациллярные формы, со тавляяяцие 78 % популяции, далее располагались в убывающей порядке кокки - 17 55 и филаыенгозша микроорганизмы - 5 Присутствие указанных морфологических типов бактерий играет, по-видикому, важную роль в создан®: анаэробных условий в экологической нише.

К концу 2-ой недели посла рождения пристеночная зона слизистой эпителия слепой кишки покрывалась плотно прикрепившимися на поверхности эпигелиоцитов спиралевидными бактериями» Интересно отметить, что прикрепление бактерий происходит путей погружения /гакорпорации/ одного из концов микробной клетки в пространство меяду шп-;роворсинка.\ш и напоминает "якорный" тип фиксации, описанный ранее для спирохет (Пога-саИгАо о.. 1987). Бактерии, формирующие биоплёнку, выстилающую клетки эпителия и вхоцы крипт, вдавливав? мембрану згегаелиоцитов и постоянно присутствуют в слое муцина над криптами и шшроворсинкаыи в вида микроколоний. Обнаруженный тип "якорной" адгезии бактерий на эпителии создает впечатление стабильности высокого популяцион-ного уровня спиралевидных бактерий и позволяет отнести их к истинным представителям резидентной микрофлоры слизистой слепой кишки морских свинок. Б этот же период /15 дней! когда новорожденные животные переходили от молочного материнского вскармливания на самостоятельное питание, кроме спиралевидных бактерий, на слизистой обнаруживали филаментозные и фузифорыдае бактерии, типичные для толстой кишки грызунов, описанные ранее

(Davis с.p.' et al., 1973). В некоторых участках обнаруживались ■ бациллярные форш, налсминазяцив монологическим типом' лактоба-цилл, встречающихся, как правило, в эпителии лселудка /Трапезой Б.В. и др., 1990/. В более поздяиэ сроки наблюдения /30-й и 60-й дни/ на поверхности эпителия слепой киски доминировал« спиралевидные бактерии, выстплашиз биоплёнкой шпсроворсшпсгг ir входы крипт. В биоплёнке удавалось определить присуствие. спирохет, а таете фузкфоришх бактерий, ншсроккаков и бациллярных форм, представленных, по-видт.!о.му, фузо- я эубанторияыи, лактобацилла-ии, анаэробны?.!!! коквада и пропионио'актерпями и обнаруживаешь в полостной микрофлоре толстой кишки шшзй, крыс и морских сенной, ЧТО наблюдали И другие исследосатоли (Lee Л., 1378; Sniper, й. L., 1902).

Как это било продемонстрировано в настоящей работе, с ш*ей-та риздзния до 15-го дшг включительно отмечаются сначительнао изменения в популяциях бактерий, связанные с ходом сукцессии, До 15-го дня новорожденные свинки находились с их матерями и вскармливались материнским молоком. В период «езду 15-м и 30-м днём,, когда регистрировали значительного скещения микробных популяций спиралевидных бактерий, .колебания в количествах обнаружнваезгых морфологических типов бактерий естественны, так как это сочетается с физическим отделением детеннагей о? потери и переходом на самостоятельное питание, що слуз-иг стрессовой ситуацией, влияющей на микробиоценоз /Бондаренко В.М., Горская S.M., Г592/. После адаптации через 30 дней и болео спиралевидные бактерии выстилают не только входи крипт, но и большие участки, эпителия слизистой слепой кишки и являются определяющими в биотопо, стабильно coxpár*. няющимися в период зрзлосги животных /срок нг блюде ют, 120 .дней/.

1.2 Взаииооткопекия между популяцизми эпимуральвдх бактерий.

С целью систематизации полученных морфологических исследований и выявления определенных взаимоотношений между' обнаруживаемыми морфоткпамл бактерий и темпа колонизации, нами была применена математическая модель.

Проведенный математический анализ, представленный на диаграмме /Рис. I/, показал, что до прогрессирукяцегозаселения слизистой слепой кишки спиралевидными бактериями, популяционной уровень бациллярных мор^отипов увеличивался практически до насыщения поверхности онтероцитов.

Рис. I Концентрация бактериальных морфстипов в спителки слепой -. • кивну, морских свинок.

се!Ъз / (ппег* гтег)__;__■

0.50 //"

0.4 £

олег /

с/ _ 0.35 Г /

0.1',о* /

а.го К с __

0.15Р ,/./-

0.05/

г>.оо'----

['Й] кокки

бгщиллы

Ш

филаментозше

Гютэадекц.тя популяшакых уровней морфотипсв,

колонизирует^»« слизистую.

Для хоюссвных форс наблюдалась такая же тенденция, по про-

щался, но был пропорционально в 100 раз меньшим по сравнению о

мощью вшз указ шкй математической модели, также было установить прогноз развития колонизационного процесса /Рис. ?,/.

Рис. 2 Прогнозирование развития колонизационного процесса эпл-муральншш микробами.до поязленда спираловидкых бактерий в биотопе опигелия слизистой слепой кишки морских свинск.

ceHs/(rnier*micr)

1 2 3 4 5 6 7 • В 3 10 11 12 13 14 15 ' .'• days ' .

кокки

порцпонально в 10 раз меньшая, в i-o время как популкциеннкй уровень филаментозных морфоишоз скачала уменьшался, а затем новы-

популяционним уровнем бациллярных форм. С другой стороны, с ПО'

ф и л а м е н ? о з ч к е

бациллы

После 2-х недель в биотопе доминируют спиралевидные формы. По-зидимому, спиралевидные бактерии обладают более выраженными ■ конкурентно способными свойствам® к заселяют экологическую ницу благодаря шгогноыу взаимодействию с рецепторами на эпителии, сбеспечиьаащимк колонизацию, размножение и стабильность популя-

о

ционно^о уровня в биотопе, Эти наблюдения согласуются с концепций Джскера П. /1938/, анализирующей сосуществование трех разных типов микробного взшЕотдействия: конкуренции, сингрофиз-уа и адаптации, определяющих формирование- микробиоценозов,

К. Микробиологические и электронно-микроскопические ис-следоьгага спиралевидных микробов.

2.1 Получениз чистой культуры спиралевидных_ бактерий. ,

Безусловно, что выделении чистой культуры в лаборатории на искуистзюгкой питательной среде имеет существенное значение для послсду5г;их исследований таксономии к систематики изолятов. -Однако, получение частых культур некоторых микроорганизмов, например, возбудителя проказы я сифилиса, до скх пор представляет сосок одну из трудно разрешимых.проблем микробиологии.

Нами показано, что в лаборатории на искусственных питательных средах спиралевидные бактерии не культивируются. Тем нз ые-кзе, 5 Э'-.спеппсенгах временно удалось получить не типичную по известны; (1спиан ьжробкуы кололи» спира.' звидных микроорганизмов. Киурзнозтонми указанных ¡¿игроков формировали на поверхности се-лсктмзной питательной среды трехмерную биоплёнку, не обнаруживаемую невооруженным глазом • Тонкая, биоплёнка контрастировала в

Р 2 Колонизация ятытзлия слизистой слепой хипаси спчратезиднымк бактериями происходит с качала третьей недели после рождения, п начинается со входа кркпт Ляберхьла к стабильно сохраняется у взрослых ••квотных особей без сузць ¿твечннх количественных изменений в бгготопе.

Р 3 Математический расчёт показывает, что из выявленных 4 мор-фотипов, спиралевидный лехлг б ссноез формирования нормального мякроблоцепоза :: ого втаздзние указывает на михрсэко-• логическое благополучна изучаемого биотопа.

№ 4 Методом электронного молекулярного зондирования устан-.гло-но, ч-?о "якорный" тип гриьрепления сгагаадзгцдаЕЗс бактерии на эпителии- определяемся наличем шкротрубочных и фибриллярных с.труэтур, который участвуют тажэ в процессе пег/*-распределения генетического материала в микробной клетк?.

Р 5 С помощью проаачнвазлцеЯ и сканирующей э;;зктрокксй

яопии показано, что изучаемые мкхробы представляют, собой тонкие спиралевидные цшжгдры, окруженные 2-3 сферичасг.к.-.ги кольцами толатчюй 0,20-0,25 мхи к -длиной 2,65-3,56 г/.ч-у, обладают флагелла^м,располож(заныш» на обоих горцах скребкой клетки, имеют оридаальше мкхротрубечнке и фкбркллы>-нне структуры шириной 8,8 нм, разделённые лромёяуткаш в " 20 нм, и две аксмдярннх' плотные нити диаметром 17 нм, знл-вляемыз в средней части нарузшой меыСраны.

Г- б Данные ультраструк.уры ми|фобшх клеток, результата анализа, здеитронограмм, проведенного с помощью метода трехмерной реконструкции и примэнэкая матриц, позволяют рассматривать . сгкгралевиднне мжрсбы, выстилающие эпителий слизистой слепой кивки морских свякок>з качестве представителей нового вида семейства спирохет. .

СПЙСОК КАУЧШХ РАБОТ, СОШШОаШМХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Ráyyosa-An¿ya N., ¿'.ora-Galindo J., González-Robles A-, fionda-renko V.M. Descubrimiento de las Bacterias Kspirilavlas on el Epitelio Cecal del Cobayo durante las Etapas Neonatal y Postnatal. // Primera Reuní6.\ Científica del ICLAS sobre la Ciencia do los Animales de Laboratorio en el Area Centroamericana y del Caribe.-La Habana, Cuba.-1990.-C. 60-61.

2. Kaygoza-Anaya. y.., Mora-Calinda J., González-Robles A., Bonda-cenko '/.K. Discover/ of uho Baoillary and Spiral-Shaped Bacteria en the cecal Epithelium. // Abstracts of the International Svaposivm.- Currant Problems oír Medical Gnotobiolosv and Orag^strpir.testinai Ilicrof lora.-Rostock, Germany. -1990. -C. 23.

3. Райгоса-Анайа М., Бондаренко В.М., Мора-Галиндо X., Гонза-лес-Роблес А. Электронно-микроскопические находки спиралевидных бактерий, выстилающих слизистую слепой кишки морских свинок. // ЖШ.-199Г.-Н? S.-C.II-I5.

4. Райгоса-Анайа И., Бондаренко В.М., Маныкин А.А. Ультрас-труктуркые изменения спиралевидных бактерий, зысгилакщкх слизистую слепой кишки морских свинок. // Тезисы докладов Х1У Конференция по электронной микроскопии.-Черноголовка, I992.-C.65.

Ь. Raygoza-Anaya М.., ílora-Galindo J. Identificación Ultra i.-truc-tural de las Espiroquetas Epimuraies. // Resúmenos del XX17 T Congreso Nacional' de Microbiología.-Acapulco, México, 1992. C. 67.

6. Raygoza-Anaya M., Hanykin A.A. Análisis Ultra es truc tur al de

*

la Multiplicación Bacteriana esoclada a las Espiroqueta Fpi-murales. // Resúmenes del XXIII Congreso Nacional de Microbiología. -Acapulo, México, 1992.-C. 67.

7. Tetz V.V., Raygoza-Anaya M. Caracterización Multicelular de la Organización Colonial Bacteriana. 1/ Resúmenes del XXIII Congreso Nacional de Microbiología.-Acapulco, México.-1992.-0.68.

в. Raygoza-Anaya П., flanykin A.A-, Bcndaranko V.Í5. Investigation of Prokaryotic-Eukaryotic Coil Junction Between Spiral-Shapeek Bacteria and Epithelium of the Guinea Pig by in Situ Kick-Translation Reaction on Ultrastructural Level.//J. His-tochem.-1992.-V.24, K» 8.-C.527.

9. Мора-Галиндо X., Райгоса-Аиайа tí., Гонзалзс-Роблес А., Бон даренко В.М. Ультраструктура спиралевидных бактерий - представителей резидентной шшрофяоры толстой кшш. // Медицинские аспекты микробной экологии; Сб. научных тр.-1592.-Bun. 6.-С.21-23.

10. Raygoza -Anayñ Н*. Bondareníco V.M., Mtiiiykin A.A. Microbioce-nosis Cecal en el Cobayo, fl JRcsúiaen«s del XXIV Congreso Ha-cious,! d-s ñícrobiologia.-Guadalajara, México, 1993.-C.50

11. Ra^soza-Ariaya M., Mora-Gal indo J., Bondarenko V.K., Manykin A.A. Evolución da la Colonización EFimural en el Ciego del Cobayo. Ui beüómenes del I Congreso Estatal (en Jalisco) de la 3io,lcgía.-Gwaóalajara, México, 1993.-C.27.

"УyUpud fctyffff-