Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Динамика экспрессии пероксиредоксина VI в коже при механических и термических травмах

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Барышникова, Лариса Михайловна

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

1.1 Актуальность проблемы.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Пероксиредоксины - новое семейство белков-антиоксидантов.

2.1.1. Общие свойства.

1.1.2. Представители подкласса 2-Cys Ргх.

2.1.3. Нетипичные представители 2-Cys пероксиредоксинов.

2.1.4. Представители 1-Cys пероксиредоксинов.

2.1.5. Секреторный 28-кДа пероксиредоксин VI.

2.1.6. Локализация пероксиредоксинов в тканях крыс и культуральных клетках.

2.1.7. Функционирование пероксиредоксинов в клетке.

2.2. Регенерация ран.

2.2.1. Признаки фаз регенерации.

2.2.2. Роль факторов роста в процессе регенерации ран.

2.2.3. Замедленная регенерация ран при сепсисе.

2.3. Исследование влияния антиоксидантных и других веществ на процесс-регенерации ран и другие патологические процессы в коже.

2.4. Исследования динамики экспрессии пероксиредоксинов при различных патологиях.

3. ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

4.1. Материалы.

4.2. Методы.

4.2.1. Характеристика экспериментов.

4.2.2. Иммуногистохимический анализ.

4.2.3. Иммунофлуоресцентный анализ.

4.2.4. Мечение коньюгата флуоресцентным красителем.

4.2.5. Приготовление гистологических препаратов кожи.

4.3. Определение ферментативной активности.

4.3.1. Определение ферментативной активности пероксиредоксина VI.

4.3.2. Определение ферментативной активности каталазы.

4.3.3. Определение ферментативной активности глутатионпероксидазы.

4.4. Определение общего белка в ранах кожи после механических и термических травм.

5. РЕЗУЛЬТАТЫ.

5.1. Исследование динамики экспрессии и секреции пероксиредоксина VI в процессе регенерации ран.

5.1.1. Модель хирургического надреза.

5.1.2. Модель ожога кожи.

5.2. Активность других ферментов-антиоксидантов в коже в норме и в процессе регенерации ран после механических и термических травм.

5.3. Исследование влияния аппликации пероксиредоксина VI на процесс регенерации ран кожи после надреза.

5.4. Сравнение лечебного эффекта пероксиредоксина VI с лечебным эффектом обычных средств, применяемых для обработки ран.

5.4.1. Модель хирургического надреза.

5.4.2. Модель травмы.

6. ОБСУЖДЕНИЕ.

7. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Динамика экспрессии пероксиредоксина VI в коже при механических и термических травмах"

1.1. Актуальность проблемы

В процессе метаболизма в организме постоянно образуются активные формы кислорода (АФК), которые в избыточном количестве способны вызывать повреждение биологических макромолекул, мембран, ДНК, что может приводить к развитию патологических состояний. Для эффективной нейтрализации АФК в клетках присутствуют антиоксидантные ферменты: супероксиддисмутаза, каталаза и глутатионпероксидаза. Кроме того, в защите клеток от негативного действия АФК участвует недавно открытый класс белков-антиоксидантов - пероксиредоксинов, один из представителей которых, пероксиредоксин VI (Prx VI), идентифицирован и изучается в лаборатории механизмов рецепции ИБК РАН [Андреева С.Г. и др., 1998; Новоселов В.И. и др., 1998а, 1999, 1999а; Новоселов С.В. и др., 1998, 1998а; Камзалов С.С. и др., 1998]. Этот белок способен нейтрализовать как органические, так и неорганические перекиси и, как было показано ранее, Prx VI экспрессируется в эпителиальных тканях воздухоносных путей и коже, где его вклад в антиоксидантную защиту клеток от АФК составляет 70%. Показано, что нормальное функционирование этих тканей связано с Prx VI [Peshenko, I.V. et al, 1998; Novoselov S.V. et al., 1999; Novoselov V.I. et al., 1999; Новоселов В.И. и др., 2000]. При различных патологиях кожи (ожоговые травмы, ранения, рак кожи и хронические язвы ног) наблюдается, во-первых, накопление в ткани метаболитов клеток, находящихся в состоянии некроза или апоптоза, причем АФК составляют значительную часть среди этих метаболитов; во-вторых, в месте поражения развивается воспалительный процесс, который сопровождается инфильтрацией нейтрофилов и макрофагов, продуцирующими АФК и усиливающих окислительный стресс [Brigham PA, McLoughlin Е., 1996; Kreis R.W., 1996; U.S. markets for wound management products., 1997; Phan T. et al., 2002; James T. et al., 2003]. Повреждение клеток и клеточных органелл происходит как результат прямого действия АФК или образования перекисей и продуктов их распада. Таким образом, проблема нейтрализации АФК при различных патологических процессах в коже является очень актуальной.

По имеющимся статистическим данным в США приблизительно 2,5 млн. человек ежегодно обращаются с ожоговыми повреждениями из них 80 тыс. необходима госпитализация и 12 тыс. умирают [Phan Т. et al., 2002]. Ежегодно

6,5 млн. страдают от хронических язв ног, возникающих из-за сдавления при травмах, болезней вен или диабета [Brigham Р.А., McLoughlin Е., 1996; U.S. markets for wound management products. 1997; Boulton A., 1998]. Ежегодно около

1 млн. человек в США заболевают раком кожи. Рак кожи может быть вызван как повышенной радиацией, так и длительным воспалительным процессом. В воспалительном процессе участвуют лейкоциты, которые продуцируют избыточное количество АФК, их длительное действие вызывает окислительный стресс, также приводящий к раку кожи. Для лечения ожогов в США тратится 5 биллионов долларов ежегодно [Kreis R.W., 1996]. В Англии затраты на лечение хронических язв ног оцениваются 236 млн. долларов в год. Язвы ног - обычная причина госпитализации среди больных диабетом на Западе, и уход за такими пациентами представляет основной компонент расходов, который оценивается свыше 500 млн. долларов в США и 15 млн. долларов в год в Англии [Boulton А., 1998]. Одна из проблем пациентов с большой поверхностью раны является медленное раневого затягивания раны и предотвращение долговременного стягивания и формирования рубца. Для того чтобы снизить процент больных с ожогами и улучшить качество жизни пациентов с проблематичными ранами необходимо ускорить заживление ран и процесс регенерации. За последние два десятилетия много сделано в установлении молекулярных и клеточных механизмов регенерации ран, а также в биохимии, физиологии и патологии лечения ран. В настоящее время разрабатывается применение прогрессивных технологий (тканевая инженерия кожи, рекомбинантные факторы роста, генная терапия и др.) в лечении ран. Имеющиеся статистические данные по США и Восточной Европе свидетельствует, что возрастает процент выживающих и улучшается качество жизни многих пациентов с большими ожоговыми повреждениями и долго незаживающими, хроническими ранами [Brigham Р.А., McLoughlin Е., 1996; U.S. markets for wound management products. 1997; Boulton A., 1998; Phan T. et al., 2002]. Однако широкое клиническое применение этих технологии все еще ограничивается их стоимостью [Peacock Е. et al., 1983].

2. Обзор литературы

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Барышникова, Лариса Михайловна

7. Выводы.

1. В первую неделю регенерации кожи после надреза увеличивается экспрессия и секреция Prx VI молодыми фибробластами, что приводит к локальному увеличению количества Prx VI в ране и окружающем ее внеклеточном матриксе дермы.

2. В первую неделю регенерации кожи после ожога увеличивается экспрессия и секреция Prx VI молодыми фибробластами во внеклеточном матриксе: дермы, клетчатки, послеожоговом пузыре и подкожной соединительной ткани.

3. Ферментативная активность Prx VI увеличивается через 2 суток после надреза в среднем в 3 раза, через 2 суток после ожога в 8 раз. Ферментативная активность каталазы снижается в процессе регенерации ран после надреза. Ферментативная активность глутатионпероксидазы также снижается в процессе регенерации ран после надреза и ожога.

4. Использование Prx VI для лечения ран кожи привело к сокращению воспалительной фазы, увеличению скорости эпителизации поверхности раны и способствовало образованию меньшего рубца.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Барышникова, Лариса Михайловна, Пущино

1. Андреева С.Г., Меркулова М.И., Шуваева Т.М., Новоселов В.И., Пешенко И.В., Новоселов С.В., Фесенко Е.Е., Липкин В.М. Структурные исследования секреторного 28-к Да белка из обонятельного эпителия крысы. Биоорганическая химия, 1998;24(11):816-821.

2. Болдырев А.А. Карнозин. Биологическое значение и возможности применения в медицине. Монография. М.: Изд-во МГУ, 1998.

3. Большая медицинская энциклопедия. Под редакцией академика Петровского Б.В. Москва 1977.

4. Бондарь А.А., Софин А.Д., Барышникова Л.М., Меркулова М.И. Сравнительная характеристика натурального и рекомбинантного 1-Cys Prx VI. Биология наука 21 века, V Пущинская конференция молодых ученых, 2001.

5. Буданова Е.Н., Барышникова Л.М. Действие липополисахаридов на эпителий трахеи крыс. Материалы X Международной научнойконференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов 2003, стр. 12.

6. Бурлакова Е.Б., Алесеенко А.В., Молочкина Е.М. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном росте. М.:Наука, 1975.

7. Бурлакова Е.Б., Шишкина JI.H. и др. Тез. Всесоюз. совещ. "Биоантиоксидант". Черноголовка, 1986;2,99-100.

8. Ефимов Е. Факторы, влияющие на полноту регенерации кожи у млекопитающих. Извест. Акад. Наук. Сер. Биол. 1999;4:488-492.

9. Камзалов С.С., Новоселов С.В., Евдокимов В.А., Пешенко И.В. Идентификация секреторного 28-к Да белка из обонятельного эпителия крысы как тиол-специфического антиоксиданта. III Пущинская конференция молодых ученых, 1998;153-154.

10. Кравченко И.Н. Диссертационная работа "Исследование антиоксидантных систем эпителиальных тканей млекопитающих" на соискание ученой степени кандидата биологических наук. Пущино. 2001.

11. Машковский М. Лекарственные средства. Москва "Медицина". 1993;2:359.

12. Новоселов В.И., Пешенко И.В., Евдокимов В.А., Камзалов С.С., Новоселов С.В., Николаев Ю.В., Быстрова М.Ф., Фесенко Е.Е. Свойства каталитического центра секреторного 28-кДа из обонятельного эпителия крысы. Биофизика. 1998;43(4):610-616.

13. Новоселов В.И., Пешенко И.В., Новоселов С.В., Камзалов С.С., Быстрова М.Ф., Евдокимов В.А., Николаев Ю.В., Фесенко Е.Е. Протекторные свойства 28-к Да пероксиредоксина определяются его пероксидазной активностью. Биофизика. 1999;44,568-570.

14. Новоселов В.И., Амелина С.Е., Кравченко И.Н., Новоселов С.В., Янин В.А., Садовников В.Б., Фесенко Е.Е. Роль пероксиредоксина VI в антиоксидантной системе органов дыхания. ДАН РАН. 2000;375, 831-833.

15. Новоселов В.И. и др. "Композиция с антиоксидантным свойством и способ лечения болезней млекопитающих". Патент 2002129774. 10 ноября, 2002.

16. Новоселов С.В., Пешенко И.В., Новоселов В.И. О возможной физиологической функции секреторного 1-Cys пероксиредоксина крысы28.к Да пероксиредоксин) в секретирующих органах. "Рецепция и внутриклеточная сигнализация ", 1998;105-107, Пущино.

17. Новоселов С.В., Камзалов С.С., Попов В.И., Новоселов В.И. О возможной физиологической функции секреторного тиол-специфичного белка антиоксиданта 28-к Да из крысы. III Пущинская конференция молодых ученых. 1998а; 162-163,Пущино.

18. Пешенко И.В., Новоселов В.И., Попов В.И., Николаев Ю.В., Евдокимов В.А., Шуваева Т.М., Липкин В.М.Фесенко Е.Е. Выделение и биохимический анализ нового секреторного 28 кДа белка из обонятельного эпителия крысы. Сенсорные системы. 1996; 10,97-109.

19. Хэм А. и Кормак Д. Гистология. Москва, Мир, 1983.

20. Шапошников Ю.Г. с соавторами. Огнестрельная рана. Москва, 2002.

21. Эмануэль Н.М., Липчина Л.П. Докл. АН СССР. 1958; 121,1,141 -144.

22. Эмануэль Н.М. Первичные механизмы биологического действия ионизирующих излучений. М., 1963;73-83.

23. Anal. Biochem. 1978;86,142.

24. Andreeva S.G., Merkulova M.I., Shuvaeva T.M., Novoselov V.I., Peshenko I.V., Bystrova M.F., Novoselov S.V., Fesenko E.E., Lipkin V.M. Structure of 45 kDa secretory protein from rat olfactory epithelium. FMBL/GENE BANK, AJI32352. 1998.

25. Araki M., Nanri H., Ejima,K., Murasato Y., Fujiwara Т., Nakashima Y., and1.eda M. Antioxidant function of the mitochondrial protein SP-22 in thecardiovascular system. J. Biol. Chem. 1999;274, 2271-2278.

26. Bae Y. S, Kang S. W, Seo M. S, Baines I. C, Tekle E., Chock P. В., and Rhee S. C. Epidermal growth factor (EGF)-induced generation of hydrogen peroxide. Role in EGF receptor-mediated tyrosine phosphorylation. . Biol. Chem. 1997;272, 217-221.

27. Barthel L. and Raymond P. Improved method for obtaining 3-p.m cryosections for immunocytochemistry. J. Histochem. Cytochem. 1990;38, 1383-1388.

28. Bauerova K., and Bezek A. Role of reactive oxygen and nitrogen species in etiopathogenesis of rheumatoid arthritis. Gen. Physiol. Biophys. 1999; 18, 15-20.

29. Black HS. The defensive role of antioxidants in skin carcinogenesis. In: Oxidative Stress in Dermatology (Fuchs f. Packer L, eds). New York: Marcel Dekker, 1993; 243-69.

30. Blevins F. Т., Djurasovic M., Flatow E. L., and Vogel K. G. Biology of the rotator cuff tendon. Orthop. din. North Am. 1997;28, 1-16.

31. Boulton A., Background, epidemiology and aetiology of diabetic foot ulcerstbabs 7. 8 Annual Meeting of the European Tissues Repair Society. 1998; Aug 27-30; Copenhagen, Denmark.

32. Boyle R. The reaction of dimethyl sulfoxide and 5-dimethylaminonapthale-1 -sulfonyl chloride. J. Org. Chem. 1966;31, 3880-3882.

33. Braun S., Hanselmann C., Gassmann C., Keller U., Born-Berclazc., Chan K.,

34. KanY. and Werner S. Nrf2 Transcription Factor, a novel Target of

35. Keratinocyte Growth Factor Action Which Regulates Gene Expression and112.1.flammantion in the Healing Skin Wound. Molecular and Cellular Biology. 2002;22(15), 5492-5505.

36. Brigham PA, McLoughlin E. Burn incidence and medical care use in the United States: estimate, trends, and data sources. J Burn Care Rehabil 1996;17, 95-107.

37. Chae H.Z, Kang S.W, Rhee S.G: Lsoforrns of mammalian peroxiredoxin that reduce peroxides in presence of thioredoxin. Methods Enzymol. 1999a;300, 219—226.

38. Chae H.Z, Kim, I.H, Kim, K, and Rhee, S.G. Cloning, sequencing, and mutation of thiol-specific antioxidant gene of Saccharomyces cerevisiae. J. Biol. Chem. 1993;268,16815-16821.

39. Chae H.Z., Chung, S.J., and Rhee, S.G. Thioredoxin-dependent peroxide reductase from yeast. J. Biol. Chem. 1994;269, 27670-27678 .

40. Chae H.Z., Kim, H.J., Kang, S.W., and Rhee, S.G. Characterization of three isoforms of mammalian peroxiredoxin that reduce peroxides in the presence of thioredoxin. Diabetes Res. Clin. Pract. 1999;45, 101-112.

41. Chae H.Z., Robison, K., Poole, L.B., Church, G., Storz, G., and Rhee, S.G.

42. Cloning and sequencing of thiol-specific antioxidant from mammalian brain:aliyl hydroperoxide reductase and thiol-specific antiox idant define a largefamily of antioxidant enzymes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1994; 91, 70177021.

43. Chae H.Z., Uhm T.B., and Rhee S.G. Dimerization of thiol-specific antioxidant and the essential role of cysteine 47. Proc. Natl. Acad.Sci. USA. 1994;91, 7022-7026.

44. Chandra J., Samali A., and Orrenius S. Triggering and modulation of apoptosis by oxidative stress. Free Radic. Biol. Med. 2000;29, 323-333.

45. Chard M.D., Gresham A, and Hazleman B.L. Age related changes in the rotator cuff. Br. J. Rheum. 1989;28, 19.

46. Choi H.J., Kang S.W., Yang C.H., Rhee S.G., and Ryu S.E. Crystal structure of a novel human peroxidase enzyme at 2.0 A resolution. Nat. Struct. Biol 1998;5, 400-406.

47. Chuchalin AG, Novoselov VI, Shifrina ON, Soodaeva SK, Yanin VA, Barishnikova LM. Peroxiredoxin VI in human respiratory system. Respir Med. 2003;97(2), 147-51.

48. Clement-Lacroix P, Michel L, Moysan A, Morliere P, Dubertret L: UVA-induced immune suppression in human skin: protective effect of vitamin £ in human epidermal cells in vitro. Br J Dermatol. 1996; 134, 77-84.

49. Comhair S., Thomassen M. et al. Differential induction of extracellular glutathione peroxidase and nitric oxide synthase 2 in airway of healty individuals exposed to 100% 02 or cigarette smoke. Am. J. Respir. Cell Mol Biol 2000;23,350-4.

50. Cornelissen A., Von den Hoff J.W., Maltha J.C., Kuijpers-Jagttman A.M. Effects of locally injected interferon-P on palatal mucoperiosteal wound healing. Journal of Oral Pathology and Medicine. 2002;31(9), 518.

51. Dang C., Beanes S., Soo C., Lorenz H. Decreased expression of fibroblast and keratinocyte growth factor isoforms and receptors during scarless repair. PlastReconstr Surg. 2003; 11(6), 1969-79.

52. Darr D, Combs S, Dunston S, Manning T, Pinnell S: Topical vitamin С protects porcine skin trom ultraviolet radiation-induced damage. Br. J. Dermatol. 1992; 127, 247—253.

53. Degim Z., Celebi N., Sayan H., Babul A., Erdogan D., Take G. An investigation on skin wound healing in mice with a taurine-chitosan gel formulation. Amino Acid. 2002; 22(2), 187-98.

54. Dhalla N.S., Ternsah R.M., and Netticadan T. Role of oxidative stress in cardiovascular diseases. J. Hypertens. 2000; 18, 655-673.

55. Droge W. Free Radicals in the Physiological Control of Cell Function. Physiol Rev. 2002;82, 47-95.

56. Erden M., Kahraman A. and Koken T. Benefical effects of quercetin on oxidative stress induced by ultraviolet A. Clinical and Experimental dermatology. 2001;26, 536-539.

57. Erzurum S., Danel C. et al. In vivo antioxidant gene in human airway epithelium for normal individuals exposed to 100% O2. J. Appl. Physiol. 1993;75, 1256-62.

58. Fini M. Keratocyte and fibroblast phenotypes in the repairing cornea. Prog. Retinal Eye Res. 1991 ;18, 529-551.

59. Finkel T. Oxygen radicals and signaling. Curr. Opin. Cell Biol. 1998; 10, 248-253.

60. Fisher A.B., Dodia C., Manevich Y, Chen J.W., and Feinstein S.I. Phospholipid hydroperoxides are substrates for non-selenium glutathione peroxidase. J. Biol. Chem. 1999;274, 21326-21334.

61. Frank S., Munz B. and Werner S. The human homologue of a bovine non-selenium glutathione peroxidase is a novel keratinocyte growth factor-regulated gene. Oncogene. 1997; 14,915-921.

62. Fuchs J, Packer L. Photooxidative strew in the skin. In: Sies H (ed.). Oxidative Stress Oxidants and Anti-oxidants. London: Academic Press, 1991; 559—583.

63. Fujii Т., Fujii J., and Taniguchi N. Augmented expression of peroxiredoxin VI in rat lung and kidney after birth implies an antioxidative role. Eur. J. Biochem. 2001 ;268,218-225.

64. Ghazarian A., Garner W. and Ehrlich H. Memory of past exposure to thee chemokine IL-8 inhibits the contraction of flbroblast-populated collagen latties. Experimental and Molecular Pathology. 2000;69(3), 242-247.

65. Gomathi K., Gopinath D., M.Rafiuddin Ahmed and RJayakumar. Quercetin incorporated collagen matrices for dermal wound healing processes in rat. 2003. Biomaterials. 2003;24(16), 2767-72.

66. Hursting SD, Slaga TJ, Fischer SM et d. Mechanism-based cancer prevention approaches: targets, examples, and the use of trans-genie mice. / Nat/ Cancer Itist. 1999; 91, 215-25.

67. Ishii Т., Yamada M., Sato H., Matsue M., Taketani S., Nakayama K., Sugita Y, and Bannai S. Cloning and characterization of a 23-kDa stress-induced mouse peritoneal macrophage protein. J. Biol. Chem. 1993;268, 18633-18636.

68. Ishii Т., Yamada M., Sato H., Matsue M., Taketani S., Nakayama K., Sugita Y, and Bannai S. Cloning and characterization of a23-kDa stress-induced mouse peritoneal macrophage protein. Biol. Chem. 1993;268,18633-18636.

69. Iwahara S., Satoh H., Song D. X., Webb J., Burlingarne A. L., Nagae Y, and Muller-Eberhard U. Purification, characterization, and cloning of a heme-binding protein (23 kDa) in rat liver cytosol. Biochemistry 1995;34, 1339813406.

70. James T.J., M. A.Hughes, G.W. Cherry, R.P.Taylor. Wound Repair and Regeneration. 2003; 11(3), 172.

71. Jeong J.S., Kwon S.J., Kang S.W., Rhee S.G., and Kim K. Purification and characterization of a second type thioredoxin peroxidase (type II TPx) from Saccharomyces cerevisiae. Biochemistry. 1999;38, 776-783.

72. Jin D-Y, Chae HZ. Rhee SG, Jeang K-T. Regulatory role for a novel human thioredoxin peroxidase in NF-icB activation. Biol Chem. 1997;272, 30952-61.

73. Kampfer H., Brautigam L., Geisslinger G., Pfeilschifter J, Frank S. Cyclooxygenase-1-coupled prostaglandin biosynthesis constitutes an essential prerequisite for skin repair. J Invest Dermatology. 2003; 120(5), 880-90.

74. Kang S.W., Baines I.C., and Rhee S.G. Characterization of a mammalian peroxiredoxin that contains one conserved cysteine. J. Biol. Chem. 1998;273, 6303-6311.

75. Kang S.W., Chae H.Z., Seo M.S., Kim K., Baines I.C. and Rhee S. G. Mammalian peroxiredoxin isoforms can reduce hydrogen peroxide generated in response to growth factors and tumor necrosis factor-a. J. Biol. Chem. 1998;273, 6297-6302.

76. Kawai S., Takeshita S., Okazaki M., Kikuno R., Kudo A., and Amann E. Cloning and characterization of OSF-3, a new member of the MER5 family, expressed in mouse osteoblastic cells. J. Biochem. (Tokyo) 1994; 115, 641-643.

77. Kerimova A.A., Atalay M., Yusifov E.Y., Kuprin S.P. and Kerimov T.M. Antioxidant enzymes; possible mechanism of gold compound treatment in rheumatoid arthritis. Pathophysiology 2000;7, 209-213.

78. Khan K.M., Cook J.L., Bonar F., Harcourt P. and Astrom M. Histopathology of common tendinopathies. Update and implications for clinical management. Sports Med. 1999;27, 393-408.

79. Kim I.H., Kim К. and Rhee S.G. Induction of an antioxidant protein of Saccharomyces cerevisiae by 02, Fe , or 2-mercaptoethanol. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989;86, 6018-6022.

80. Kinnula V., Lehtonen S., Kaarteenaho-Wiik R., Lakari E., Paakko P. Oxydants and antioxidants in alveolar epithelial type II cell: in situ, freshly and cultured cells. Am. J. Physiol 1992;262, 69-77.

81. Kinnula V., Lehtonen S., Kaarteenaho-Wiik R., Lakari E., Paakko P., Kang S., Rhee S. and Soini Y. Cell specific expression of peroxiredoxins in human lung and pulmonary sarcoidosis. Thorax 2002;57, 157-164.

82. Kinnula V., Yankaskas J. Primary and immortalized human bronchial epithelial cells have significant antioxidative capacity in vitro. Am. J. Respir Cell mol Biol. 1994;11, 568-76.

83. Klaunig J.E., Xu Y., Isenberg J.S., Bachowski S., Kolaja K.L., Jiang J., Stevenson D.E. and Walborg E.F. The role of oxidative stress in chemical carcinogenesis. Jr. Environ. Health Perspect. 1998; 106, 289-295.

84. Knight J.A. Reactive oxygen species and the neurode-generative disorders. Ann. Clin. Lab. Sci. 1997/27, 11-25.

85. Kreis R.W. Contradictions in topical wound therapy (abs 1). State of the Art Simposium of the European Burns Association:Control of the Burn Scar. 1996; Oct 2-4; Amsterdam, The Netherlands.

86. Lavrovsky Y., Chatterjee В., Clark R.A. and Roy A.K. Role of redox-regulated transcription factors in inflammation, aging and age-related diseases. Exp. Gerontol. 2000;35, 521-532.

87. Lee J., Yun S., Chae H., Won Y., Ki Y., Lee S. Expression of peroxiredoxin and thioredoxin in dermatological disorders. British Association of Dermatologists, British. Journal of Dermatology. 2002; 146, 705-718.

88. Lee S.R., Kim J.R., Kwon K.S., Yoon H.W., Levine R.L., Ginsburg A. and Rhee S.G. Molecular cloning and characterization of a mitochondrial selenocysteine-containin g thioredoxin reductase from rat liver. J. Biol. Chem. 1999; 274,4722-4734.

89. Lee S-C, Chae HZ, Lee J-B. Peroxiredoxin is ubiquitously expressed in rat skin: isotypes-specific expression in the epidermis and hair follicle. J Invest Dermatol 2000; 115,1108-14.

90. Lee Seung-Chul, Lee Jung Eun, Lee Jee-Bum, Kim Young Pio and Chae Ho Zoo. Expression of Peroxiredoxin in the Skin and Change of Peroxiredoxin by Ultraviolet В Irradiotion. Annals New York Academy of Sciences. 2001 ;928, 359-360.

91. Maggio D., Barabani M., Pierandrei M., Polidori M.C., Catani M., Mecocci P., Senin U., Pacifici R., Cherubini A. J. Clin. Endocrinol Metab. 2003;88(4),1523-7

92. Manevich J., Held K.D. and Biaglow. J.E. Radiat. Res. 1997; 148, 580591.

93. Manevich J., T. Sweitzer, J.H.Pak, S.I.Feinstein, V. Muzykantov and A.B.Fisher. 1 Cys peroxiredoxin overexpression protects cells against phospholipid peroxidation-mediated membrane damage. PNAS. 2002;99(18), 11599-11604.

94. Mates J.M. and Sanchez-Jimenez F. Antioxidant enzymes and their implications in pathophysiologic processes. Front Biosci. \999\4, 339-345.

95. Mates J.M., Perez-Gomez C. and Nunez de Castro, I. Antioxidant enzymes and human diseases. Clin. Biochem. 1999;32, 595-603.

96. Matsumoto A., Okado A., Fujii Т., Fujii J., Egashira M., Niikawa N., and Taniguchi N. Cloning of the peroxiredoxin gene family in rats andcharacterization of the fourth member. FEBS Lett. 1999; 443,246- 250.121

97. McDonald R., Berger E. Alveolar macrophage antioxydants prevent hydrogen peroxyde mediated lung damage. Am. Rev. Respir. Dis. 1991; 143, 1088-91.

98. Melov S. Mitochondrial oxidative stress. Physiologic consequences and potential for a role in aging. Ann. N.Y. Acad. Sci. 2000;908, 219-225.

99. Mignotte B. and Vayssiere J. L. Mitochondria and apoptosis. Eur. J. Biochem. 1998;252, 1-15.

100. Moulin V. and M. Plamond. Differential expression of collagen integrin receptor on fetal vs. adult skin fibroblasts: implication in wound contraction during healing. British Journal of Dermatology. 2002; 147(5), 886.

101. Murrell G.A., Jang D. and Williams R.J. Nitric oxideactivates metalloprotease enzymes in articular cartilage. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995;206, 15-21.

102. Osiewacz H.D. and Borghouts C. Mitochondrial oxidative stress and aging in the filamentous fungus Podospora anserina. Ann. N.Y. Acad. Sci. 2000;908, 31-39.

103. Park S.G., Cha M.K., Jeong W. and Kim I.H. Distinct physiological functions of thiol peroxidase isoenzymes in Saccharomyce s cerevisiae. J. Biol. Chem. 2000;275, 5723-5732.

104. PeacockE. Jr. Wound healing. In :Peters RM, PeacockE E Jr, Benfield JR, editors. The Scientific Management of Surgical Patients. Boston: Little Brown, 1983.

105. Pedrajas J.R., Miranda-Vizuete A., Javanmardy N., Gustafsson J.A. and Spyrou G. Mitochondria of Saccharomyce s cerevisia e contain one- conserve d cysteine type peroxiredoxin with thioredoxin peroxidase activity. J. Biol. Chem. 2000;275, 16296-16301.

106. Peshenko I.V., Novoselov V.I., Evdokimov V.A., Nikolaev Yu.V., Shuvaeva T.M., Lipkin V.M., Fesenko E.E. Novel 28-kD secretory protein from rat olfactory epithelium. FEBSLetts. 1996;381,12-14.

107. Phan Т., Lee S., Chan S., Hughes M., Cherry G. Investigating Plant -besed Medicines for Wound Healing with the Use of Cell Culture Technologies and In vitro Models: A review. Ann Acad Med Singapore. 2002; 29, 27-36.

108. Phan Т., See P., Lee S., Chan S. Protective Effects of Curcumin against Oxidative Damage on Skin Cells in vitro: Its Implication for Wound Healing. J Trauma. 2001;51, 927-931.

109. Phan Т., Wang L., See P., Grayer R., Chan S and Lee S. Phenolic Compounds of Chromolaena odorata Protect Cultured Skin Cells from Oxidative Damage: Implication for Cutaneous Wound Healing. Biol. Pharm. Bull. 2001;24(12), 1373-1379.

110. Pietarinen P., Raivio K., et al. Catalase and glutathione reductase protection of human alveolar macrophages during oxydant exposure in vitro. Am. J. Respir. CellMol. Biol. 1995; 13, 434-41.

111. Prosperi M.T, Ferbus D., Karczinski I. and Goubin G. A human cDNA corresponding to a gene overexpresse d during cell proliferation encodes a product sharing homology with amoebic and bacterial proteins. J. Biol. Chem. 1993;268,11050-11056.

112. Radyuk S.N., Klichko V.I, Spinola B, Sohal R.S. and Orr W.C. The peroxiredoxin gene family in Drosophila melanogaster. Free Radio. Biol. Med. 2001.

113. Reim M., Kottek A. and Schrage N. The cornea surface and wound healing. Prog. Retinal Eye Res. 1997; 16, 183-225.

114. Rhee S.G. Hydrogen peroxide: a key messenger that modulates protein phosphorylation through cysteine oxidation. Science's STKE. 2000.

115. Rhee S.G., Kang S.W., Chang T.S. Critical review: Peroxiredoxins. Life.2001;52:35-41.

116. Riley G.P., Harrall R.L., Constant C.R., Chard M.D., Caw-ston Т.Е. and Hazleman B.L. Glycosaminoglycans of human rotator cuff tendons: Changes with age and in chronic rotator cuff tendinitis. Ann. Rheum. Dis. 1994;53, 367-376.

117. Roberts C.R., Roughley P.J. and Mort J.S. Degradation of human proteoglycan aggregate induced by hydrogen peroxide. Protein fragmentation, amino acid modification and hyal- uronic acid cleavage. Biochem. J. 1989;259, 805-811.

118. Rostan E., DeBuys H., Madey D., Pinnell S. Evidence supporting zinc as an important antioxidant for skin. Int. J. Dermatol. 2002;41(9), 606-11.

119. Rozell B, Hansson H-A, Luthman M, Holmgren A: Immunohistochemical localization of thioredoxin and thioredoxin reductase in adult rats. EurJ Cell Biol. 1985;38, 79-86.

120. Sen C., Khanna S., Gordillo G. Oxygen, oxidant, and antioxidants in wound healing: an emerging paradigm. Ann N YAcad Sci. 2002;957, 239-49.

121. Seo M.S., Kang S.W., Kim K., Baines I.C., Lee Т.Н., and Rhee S.G. Identification of a new type of mammalian peroxiredoxi n that forms an intramolecular disulfide as a reaction intermediate. J. Biol. Chem. 2000;275, 20346-20354.

122. Shau H., and Kim A. Identification of natural killer enhancing factor as a major antioxidant in human red blood cells. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994;199, 83-88.

123. Shindo Y, Win E, Han D, Packer L: Dose-response effects of acute ultraviolet irradiation on anti-oxidants and molecular markers of oxidation in murine epidermis and dennis. J Invest Dermatol. 1994; 102,470-475.

124. Sidhu G., A.K. Singh, K. Banaudha, J. Gaddipati, G. Patnaik and R. Maheshwari. Arnebin-1 accelerates normal and hydrocortisone-induced impaired wound healing. Journal of Investigative Dermatology. 1999; 113(5), 773.

125. Singer A. and Clark R. Cutaneous Wound Healing. The New England

126. Journal of Medicine. 1999;341(10), 738-746.

127. Singh A. and Shichi H. A novel glutathione peroxidase in the eye: sequence analysis, mRNA level and translation. J. Biol Chem. 1998;273, 26171-26178.

128. Singh A. and Shichi H. Peroxiredoxin in Bovine Ocular Tissues: Immunohistochemical Localization anln situ Hybridization. Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics. 2001 ;17(3), 279-286.

129. Spyrou, G., Enmark, E., Miranda-Vizuete, A., and Gustafsson, S. Cloning and expression of a novel mammalian thioredoxin. J. Biol Chem. 1997;272, 2936-2941.

130. Suguna L., Singh S et all. Influence of Terminalia chebula on dermal wound healing in rats. Phytother Res. 2002; 16 (3), 227-31.

131. Sundaresan, M., Yu, Z. X, Ferrans, V J, Irani, K, andFinkel, T. Requirement for generation of H202 for platelet-derived growth factor signal transduction. Science. 1995;270, 296-299.

132. Tiku, M. L., Gupta, S., and Deshmukh, D. R. Aggrecan degradation in chondrocytes is mediated by reactive oxygen species and protected by antioxidants. Free Radic. Res. 1999;30, 395-405.

133. Tiku, M. L., Shah, R., and Allison, G. T. Evidence linking chondrocyte lipid peroxidation to cartilage matrix protein degradation. Possible role in cartilage aging and the pathogenesis of osteoarthritis. J. Biol. Chem. 2000;275, 20069-20076.

134. Titus J., Haugland R., Sharrow D. And Segal J. Texas Red, ahydrophilic, a red-emitting fluorophore for use with fluorescein in dual12?parameter flow microfluorometric and fluorescence microscopic studies. J. Immunol. Meth. 1982;50, 193-204.

135. U.S. markets for wound management products. Irvine, Calif.: Medical Data International, August 1997.

136. Vessey DA. The cutaneous antioxidant system. In: Oxidativa Stress in Dermatology (Fuchs J, Packer L. eds). New York: Marcel Dekker. 1993; 81-103.

137. Wang M., Wei A., Yuan J., Clippe A., Bernard A., Knoops B. and Murrell G. Antioxidant Enzyme Peroxiredoin 5 is Upregulated in degenerative Human Tendon. Biochemical and Biophysical ReseachCommunications. 2001; 284, 667-673.

138. Wang Z., Inokuchi Т., Nemoto Т., Uehara M., Baba T. Antisense Oligonucleotide against collagen-specific molecular chaperone 47-kDa heat shock protein suppresses scar formation in rat wounds. Plast Reconstr Surg. 2003;111(6), 1980-7.

139. Watabe, S., Kohno, H., Kouyama, H., Hiroi, T, Yago, N., and Nakazawa, T. Purification and characterization of a substrate protein for mitochondrial ATP-dependentproteasein bovine adrenal cortex.JBiochem. (Tokyo) 1994;115, 648654.

140. Wright, R. M., McManaman, J. L., and Repine, J. E. Alcohol-induced breast cancer: A proposed mechanism. Free Radic. Biol. Med. 1999; 26, 348-354.

141. Wu C-H., G-Y.Chang, C-T. Hu and R-S.Chen. Wound healing effects oi porcine placental extracts on rats with thermal injury. British Journal oj Dermatology. 2003; 148(2), 236.

142. Yamamoto, T, Matsui, Y, Natori, S., and Obinata, M. Cloning of a housekeeping-type gene (MER5) preferentially expressed in murine erythroleukemia cells. Gene. 1989;80, 337-343.

143. Yang J., Lam E.M.N., Hammad H.M., Oberley T.D., Oberley L.M. Antioxidant enzyme levels in oral sguamous cell carcinoma and normal human oral epithelium. J Oral Pathol Med. 2002;31, 1120-1128.

144. Yu, B. P. Cellular defenses against damage from reactive oxygen species. Physiol Rev. 1994;74,139-162.

145. Zhang, P., Liu, В., Kang, S. W., Seo, M. S., Rhee, S. G., and Obeid, L. M. Thioredoxi n peroxidas e is a novel inhibitor of apoptosi s with a mechanism distinct from that of Bcl-2. J. Biol Chem. 1997;272, 30615-30618.