Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Дифференциация микобактерий на сухих натрийсалициловокислой и паранитробензойной средах средах Левенштейна-Иенсена

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Дифференциация микобактерий на сухих натрийсалициловокислой и паранитробензойной средах средах Левенштейна-Иенсена"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ КЫРГЫЗСКОЙ РЕСПУБЛИКИ КЫРГЫЗСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

РГ 5 СЯ

1 5 ДВ НА ПРАВАХ РУКОПИСИ

СОКОЛОВА ИРИНА АЛЕКСАНДРОВНА

УДК 576.809.33:616-078

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ МИКОБАКТЕРИЙ НА СУХИХ НАТРИЙСАЛШЩЛОВОКИСЛОЙ И ПАРАНИТРОБЕНЗОЙНОЙ СРЕДАХ ЛЕВЕНШТЕЙНА-ИЕНСЕНА

СПЕЦИАЛЬНОСТЬ 03.00.07 - МИКРОБИОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

БИШКЕК - 1996

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ КЫРГЫЗСКОЙ РЕСПУБЛИКИ КЫРГЫЗСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

НА ПРАВАХ РУКОПИСИ

СОКОЛОВА ИРИНА АЛЕКСАНДРОВНА

УДК 576.809.33:616-078

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ МИКОБАКТЕРИЙ НА СУХИХ 1АТРИЙСАЛИЦИЛОВОКИСЛОЙ И ПАРАНИТРОБЕНЗОЙНОЙ СРЕДАХ ЛЕВЕНШТЕЙНА-ИЕНСЕНА

СПЕЦИАЛЬНОСТЬ 03.00.07 - МИКРОБИОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

БИШКЕК - 1996

Работа выполнена в лаборатории микробиологии Кыргызск« НИИ туберкулеза ( директор - доктор медицинских наук А.] Алишеров ).

Научный руководитель - доктор медицинских наук, професс Е.А. Финкель.

Официальные оппоненты:

1. Доктор медицинских наук A.B. Колодин.

2. Кандидат медицинских наук, доцент Г.А. Бестужева. •

Ведущее учреждение - Институт биохимии и физиологс Национальной академии наук Кыргызской Республики.

Защита состоится 19Q6 в j£^_4aC0B г

У

заседании Специализированного Совета К14.96.50 по защит диссертаций на соискание ученой степени кандидата биологически наук при Кыргызском Государственном научно-исследовательско институте туберкулеза по адресу: 720000, г. Бишкек, ул. Раззаков; 43, научно-производственная лаборатория.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кыргызско; Государственной медицинской академии.

Автореферат разослан "_" ^_1996 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета кандидат медицинских наук

М.А. Сабодаха

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы В микробиологической диагностике еркулеза дифференциация возбудителя этого заболевания от уберкулезных (условно-патогенных) микобактерий остается [более сложным и трудоемким исследованием (Макаревич Н.М., 3; Вейсфейлер Ю.К., 1975; Благодарный Я.А., с соавт., 1981; ен Т.Ф., Ильина Т.Б.,1985; Сосновская А.В.,1991; Коваль .,1993; Demato et al. 1984; Tsukamura M., 1987; Jagursky et 1990). Для дифференциации нетуберкулезных микобактерий меняются комплексы разнообразных методов исследования раускене Л.Н.,1976; Зыков М.П., Ильина Т.Б.Д978; Лотоцкая .. с соавт.,1986; Толстенно Н.Г. с соавт.,1994; Dawson et al.,1979; ox et al.,1981; Janowiec M. et al.,1987). Одновременно не кращаются поиски новых более доступных и, вместе с тем, говерных методов (Пинчук Л.Н., Лазовская А.Л.,1980; Девятова [.,1986; Ломанченков В.Д. с соавт.,1992; Хоменко А.Г. с соавт., 3; Оттен Т.Ф.Д994; Damato I.I. et al.,1984;Mayall B.C.,1985; togi N. et al.,1989; Barclay et al.,1993).

В условиях повсеместных массовых исследований весьма /альным является использование для выявления нетуберкулезных обактерий высококачественных дифференциально-

гностических питательных ' сред, длительно сохраняющих югическую активность. Такие возможности консервирования 1тельных сред открывает метод сублимации.

Накопленные в Кыргызском НИИ туберкулеза многочисленные гые по изготовлению сублимированных питательных сред для эления микобактерий и определения лекарственной ;твительности (Финкель Е.А. с соавт.,1977,1987,1991,1993; айлова Л.В.Д977; Погребинская Ю.Б.Д977; Давлетова P.M.,1985; ашова А.Ф.Д986), а также полученные хорошие результаты атания их (Макаревич Н.М. с соавт.,1985; Хоменко А.Г. с т.,1986) послужили основанием и для использования метода

сублимации при изготовлении стандартных питательных сред , выявления нетуберкулезных микобактерий.

Цель исследования. Целью настоящей работы являл дифференциация микобактерий на специальных питательных сред полученных методом сублимации: оценка качества восстановленн сред и основных свойств, выросших на этих средах нетуберкулезн микобактерий.

Задачи. 1. Исследовать влияние сублимационного высушивал на специфические свойства питательной среды Левенштейна-Иенсе: в состав которой включены салициловокислый натрий и паранитробензойная кислота для выявления нетуберкулезн] микобактерий.

2. Изучить ростовые качества, специфическую чувствительное полученных новых вариантов сухих питательных сред и длительное сохранения в них активности добавленных ингредиентов, в качест ингибиторов роста микобактерий туберкулеза.

3. Изучить морологические, культурные и биохимическ: свойства штаммов нетуберкулезных кшкобактерий, выросших на этг средах.

Научная новизна. Получены методом сублимации -сух] дифференциально-диагностические питательные сред!

предназначенные для выявления нетуберкулезных микобактерий.

Показано, что ростовые качества и основные свойстз нетуберкулезных микобактерий не изменяются при культивировали на восстановленных сухих дифференциально-диагностически питательных средах.

- Установлено, что в процессе длительного - (в течение года) хранени в различных температурных условиях '(+4°С - +22°С), получении среды не снижали свои специфические качества.

Практическое значение работы определяется получением апробацией и внедрением в практику новых сухих дифференциально диагностических питательных сред, позволяющих повысить качеств исследований в любых бактериологических лаборатория:

1ротивотуберкулезных учреждений. Сухие среды имеют хродолжителышй срок годности, стандартны, экономичны, жачительно сокращают затраты труда.

Внедрение результатов исследования в практику.

1. В научно-производственной лаборатории Кыгрызского НИИ •уберкулеза организовано изготовление вариантов сухой среды 1евенштейна-Иенсена с набором ингредиентов для нетуберкулезных шкобактерий и централизованное снабжение ими бактериологических лабораторий республики.

2. На сухих питательных средах в лабораториях [ротивотуберкулезных учреждений республики исследовано 16000 культур с целью выявления нетуберкулезных микобактерий.

3. Изданы методические рекомендации-по использованию набора тандартных питательных сред для дифференциации [етуберкулезных микобактерий.

На защиту выносятся следующие основные положения:

1. Специфические свойства полученных методом сублимации ухих дифференциально-диагностических натрийсалициловокислой и аранитробензойной питательных сред Левенштейна- Иенсена.

2. Продолжительность использования сухих дифференциал ьно-иагностических питательных сред для выявления роста етуберкулезных микобактерий. Длительность сохранения вгибирующего действия на микобактерии туберкулеза, добавленных среду ингибиторов роста.

3. Сохранение нетуберкулезными микобактериями при ыращивании на восстановленных сухих дифференциальяо-иагностических средах основных морфо-биологических свойств.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены а конференции молодых ученых институтов КГМИ, КНИИТ, .кушерства и педиатрии 1979, 1989, совместной научной сессии [НИИ туберкулеза и КыргНИИТ, - Фрунзе, 1980, I съезде агиенистов, эпидемиологов, инфекционистов Киргизии, Фрунзе, 986, ГУ съезде фтизиаторов Казахстана, Алма-Ата, 1992,

Республиканской научно-практической конференции реформировании противотуберкулезной службы в Республш Бишкек, 1996. Диссертация апробированна и рекомендована к занц на Ученом Совете Кыргызского НИИ экологии и профилакти инфекционных заболеваний, 1990.

Объем и сруктура работы. Диссертация написана на 1 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзс литературы, трех глав собственного исследования, заключен! выводов, указателя литературы. Работа иллюстрирована таблицами, 6 рисунками, 8 фотографиями. В списке литерату] приведено 278 источников, в том числе 141 отечественных и 1 иностранных авторов.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано работа.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

При изготовлении сухих питательных сред с ингредиентами д. дифференциации нетуберкулезных микобактерий за основу взя яичная среда Левенштейна-Иенсена, рекомендованная Всемирн< Организацией Здравоохранения для бактериологичесш исследований при туберкулезе. Эта среда широко использует лабораториями потивотуберкулезных учреждений во всех стран! мира.

Готовили среду Левенштейна-Иенсена в полном соответствии методическими указаниями, (Козулицина Т.Н. с соавт.,1978 г.). качестве ингибиторов роста использовали 5% NaC

салициловокислый натрий (500 и 1000 мкг/мл) паранитробензойную кислоту (1000 мкг/мл).

Питательные среды с салициловокислым натрием ларанитробензойной кислотой служат для дифференциаци микобактерий человеческого и бычьего вида, не растущих на эти средах от остальных микобактерий, дающих обильный рост в и присутсвии. На среде с хлоридом натрия хорошо растз быстрорастущие микобактерии IV группы, М. triviale (Ш группы Все остальные микобактерии чувствительны к 5% NaCl.

Оптимальная (нейтральная или слабощелочная) концентрация сороднык ионов (pH) питательных сред с различными градиентами устанавливалась с помощью 4% раствора NaOH или '/о Hcl.

Смесь питательной среды с добавленными в нее ингредиентами шивали в бутылки по 200 мл. и высушивали в сублимационном 1арате LZ-45 чешского производства до достижения 1% остаточной шсности. Определение ее проводили вакуумным методом с ¡ушиванием при высокой температуре (Долинов К.Е., 1969).

Полученные сухие питательные среды Левенштейна-Иенсена с гредиентами, используемыми для дифференциации микобактерий, гдетавляют собой мелкопористую сухую массу светло-зеленого ;та. После окончания высушивания бутылки вынимали, закрывали i соблюдении асептики стерильными пробками, сверху надевали галлические колпачки и завальцовывали.

Сохранение в процессе высушивания специфических свойств ■отовленных сред определяли путем установления их гностического эффекта в бактериологических исследованиях. Для >ведения исследований бутылку со средой вскрывали и добавляли в ! до 200 мл. стерильной дистилированной воды, после растворения :ой массы полученную жидкую среду разливали во флаконы по 5 . и затем уплотняли при температуре 85°С 45 минут.

В качестве контроля применяли нативную среду Левенштейна-ясена, изготовленную накануне исследования, с теми же гредиентами, а также нативную питательную среду, не ержащую их.

Для посева использовали международные музейные вирулентные аммы туберкулезных микобактерий: "H37RV" человеческого вида; ivenel", "Bov 8", "Valle"- бычьего вида; нетуберкулезные кдународные культуры, представители всех четырех групп по шсификации Раньона: фотохромогенные (M.kansasii); >тохромогенные (M.scrofulaceum, M.gordone); нефотохромогенные (леннорастущие (М. intracellulare, М. avium, М. triviale, М. xenopi)

и быстро растущие (М. phlei, М. fortuitum), а также дикие культур] микобактерий, выделенные от больных туберкулезом.

Для того, чтобы можно было проводить сопоставлени полученных результатов, видовая принадлежность, количеств культур, повторность и сроки исследований, дозы посеянног материала полностью были идентичны во всех опытах при изученш сухих питательных сред Левенштейна-Иенсена с дифференциально диагностическими ингредиентами. При оценке полученных данныз отмечали наличие полного совпадения результатов на сравниваемы} средах, а также устанавливали процент культур, обнаруживши? чувствительность или устойчивость к используемым ингредиентам. Изучали биологические свойства международных культуг нетуберкулезных микобактерий, выросших на сухих средах, i сопоставлении с биологическими свойствами тех же культур, полученных на нативной среде Левенштейна-Иенсена, содержащей аналогичные ингредиенты. При этом использовали современные общепринятые методы исследования (Ильина Т.Б., 1980; Козулицина Т.Н. с соавт., 1984; Сосновская A.B., 1991; Оттен Т.Ф., 1994; Gaschi А., 1977).

Морфологию микобактерий изучали в мазках, приготовленных из первично выделенных культур, окрашенных по Циль-Нильсену. Для определения кислотоустойчивости мазки обесцвечивали в 3% солянокислом спирте и 20% серной кислоте в течение 2 и 15 минут.

Пигментообразование культур проверяли в темноте и после освещения при выращивании их на сухой питательной среде параллельно с посевами на контрольную нативную среду Левенштейна-Иенсена.

Скорость роста учитывали при появлении хорошо видимого глазом роста: для быстро растущих культур в течении 2-3 дней, а для остальных культур через 2-4 недели.

Влияние температуры на рост микобактерий определяли при 25°. 37°, 45° и 52°С, При этом исходили из того, что фотохромогенвые микобактерии растут при 37°, скотохромогенные и

нефотохроиогенные при 25°, 37° и 45°, быстрорастущие при 25°, 37°, 45°, а также при 52°С.

Для идентификации культур использовали биохимические методы.

Содержание ниацина устанавливали после экстракции его из микобактерий дистиллированной водой с помощью бумажных полосок, пропитанных соответствующими реактивами по методу I.O.Kilburn, G.P.Kubica (1968) в модификации Л.П. Бараускене (1974), а также Я.А.Благодарного с соавт. (1981,1982).

Активность нитроредуктазы устанавливали по количеству восстанавливаемого нитрата, который дает цветную реакцию с параметиламикобензальдегидом (Tsucamura М. et al, 1968,1987).

Об окислительно-восстановительных ферментах судили по их каталазной активности с оценкой термостабильности каталазы по методу R. Sato,О. Satake (1961) в модификации Н.М. Макаревич [1968).

Для дифференциально-диагностического исследования культур знутри II и III групп по Раньону использовали реакцию гидролиза гвин-80 (Wayne L. J. et al,1964).

Амидазную активность определяли бактериологическим методом Tacquet A. F. et al,1967) в модификации Е.А. Финкель, С.И. Луцкой '1986). Для выполнения работы изготовлено 54 серии сухой среды Певенштейна-Иенсе'на с различными препаратами. Для оценки их шецифической активности в научной и практических лабораториях испытано 8369 культур, из них 14 международных' тест-штаммов туберкулезных и нетуберкулезных микобактерий. Выполнено 24073 тсследования.

Статистическую обработку полученных данных производили с зычислением средних ошибок для средних арифметических М±ш).Степень достоверности различия вычисляли на основании критерия Стьюдента. При этом результат считали статистически юстоверным, при р=0.05.Оценку полученных показателей проводили

также путем расчета доверительных границ (Беленький М.Л.,1963 Стрелков Р.Б.,1982).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Высушенные питательные среды отличаются хорошим! внешними качествами, соответствующими требованиям предъявляемым к сухим лиофилизированным питательным средам Они полностью восстанавливаются при добавлении необходимой объема стерильной дистиллированной воды.

Проведенные исследования показали, что сухая питательна* среда с 5% хлоридом натрия (хороший сухой конечный продукт < остаточной влажностью до 1% и полной растворимостью) пс результатам проверки специфической ингибиторной активности оказалась совершенно не пригодной для использования I дифференциально-диагностических целях.

При испытании варианта сухой питательной среды с 500 мкгДи салициловокислого натрия выявилось, что после высушивание полученный препарат не сохранял в 100% случаях сво1: дифференциально-диагностические свойства. Эту среду мы также не могли рекомендовать для практического использования.

Наиболее эффективными оказались разработки вариантов среды Левенштейна-Иенсена, содержащие 1000 мкг/мл салициловокислогс натрия и 1000 мкг/мл паранитробензойной кислоты.

На сухих восстановленных питательных средах, содержащих салициловокислый натрий в дозе 1000 мкг/мл, со 100% результативностью обычно ' отсутствовал рост туберкулезных микобактерий, как международных тест-штаммов, так и всех без исключения диких культур человеческого и бычьего вида, выделенных от больных (табл.1), - свидетельство полного сохранения ингибиторного эффекта дифференциально-диагностического препарата в сухой питательной среде.

Отмеченные качества полученного варианта сухой питательной среды Левенштейна-Иенсена с 1000 мкг/мл салициловокислого натрия в одинаковой степени были выявленны и при испытании сухой паранитробензойной (1000 мкг/мл) среды Левенштейна-Иенсена.

На содержащей этот препарат сухой восстановленной среде, как равило, полностью задерживался рост всех испытанных музейных и иких культур туберкулезных микобактерий человеческого (72 :сследования) и бычьего вида (53 исследования) (табл.1).

Таблица 1

Результаты посевов культур туберкулезных микобактерий на восстановленные сухие питательные среды Левенштейна-Иенсена с салициловокислым натрием и паранитробензойной кислотой

вид микобактерий кол-во исследований яатнвпая сухая •

abs % ± tm abs % ± tm

Среда с салициловокислым натрием 1000 мкг/мл

[. tuberculosis 72 0 0.0+8.8 0 0.0±8.8

I. bovis 53 0 0.0+8.8 ! 0 0.0+8.8

Среда с паранитробензойной кислотой 1000 мкг/мл

I. tuberculosis 72 0 0.0+8.8 0 0.0±8.8

I. bovis 53 0 0.0+8.8 0 0.0+8.8

1римечание: abs- число выросших колоний htm- доверительные границы при р= 0.05

В тоже время, международные тест-штаммы нетуберкулезных .шкобактерий (основные представители всех четырех групп по классификации Раньона) в 100% 'случаях давали рост на испытанных зредах (табл.2).

С закономерным потоянством (100% результативность) обнаруживался рост нетуберкулезных микобактерий всех групп по Раньону на восстановленных средах с салициловокислым натрием и паранитробензойной кислотой. Интенсивность роста нетуберкулезных микобактерий на средах с салициловокислым натрием и паранитробензойной кислотой как правило соответствовала тем показателям, которые имели место в параллельных исследованиях на контрольных нативных питательных средах с испытуемыми ингредиентами (рис. 1^2.)

Таблица 2

Показатели выявления роста культур нетуберкулезных микобактерий на восстановленных сухих дифференциально-диагностических питательных средах

кол-во салициловокислый парапитробевзойная

Гр5'ппа Вид нссле- иатрий 1000 мкг/мл кислота 1000 мкг/мл

по микобактерий дова- патнвная сухая пативпая сухая

Раньопу ПИЙ аЬв % + ^ аЬ§ %± 1,т аЬз %+ 1т вЬв %± ^т

I М, каиБазп 10 10 100+23.4 10 100+23.4 10 100+23.4 10 100+23.4

11 М. *сгс>!иЬкеит 62 62 100+ 4.6 62 100±4.6 62 100+4.6 62 100+4.6

М. ^огс!опе 31 31 100+ 8.8 31 100+8.8 31 100+8.8 31 100+8.8

М. т1гасс!1ц1аге 31 31 100+ 8.8 31 100+ 8.8 31 100+_8.8 31 100+8.8

III М. аушт 31 31 100+. 8.8 31 100+ 8.8 31 100+ 8.8 31 100+8.8

М. 1п\-1а1е 21 21 100+12.8 21 100+12.5 21 100+ 12.5 21 100+12.5

М. xencpi 15 15 ЮО+16.6 15 100+16.6 ■ 15 100+ 16.6 15 100+16.6

IV М. рЫе. 9 9 100±25.4 9 100+25.4 9 100+ 25.4 9 100+25.4

М. {отЧиЦит 21 21 100+12.5 21 100x12.5 21 100+ 12.5 21 100+12.5 |

Примечание: аЬэ- число выросших культур

%±_1ш- доверительные границы при р=0.05

Проведенные исследования убедительно показали, что полученные варианты сухой питательной среды Левенштейна-Иенсена с 1000 мкг/мл салициловокислогослого натрия, а также с 1000 мкг/мл паранитробензойной кислотой вполне пригодны для использования в качестве стандартных дифференциально-диагностический питательных сред.

Через 12 месяцев (табл. 3) после изготовления и хранения при 22°С результаты исследования на сухих питательных средах не отличались от данных, полученных на нативных средах с аналогичными ингредиентами.

У культур нетуберкулезных микобактерий, выросших на восстановленной среде Левенштейна-Иенсена, содержащей как салициловокислый натрий, так и паранитробензойную кислоту, четко сохраняются морфологические особенности микобактерий разных штаммов, характер роста на питательных средах и биохимические свойства: не выявляется ниацин, обнаруживается термостабильность каталазы, сохраняются присущие штаммам особенности редукции нитратов, гидролиза твин-80 и амидазной активности (табл.4).

Таблица 3

Результаты посевов туберкулезных и нетуберкулезных микобактерий на восстановленные сухие питательные среды Левенштейна-Иенсена с салициловокислым натрием и паранптробензойкой кислотой, хранившиеся 12 месяцев при +22° С

Исследованные количество салнцнловокнслый патрнн, 1000 мкг/мл парапитробепзойпая кислота, 1000 мкг/мл

культуры исследований с р е а ы

нативная сухая пативяая сухая

количество положительных результатов

уберкулезпые 60 0 0 0 . 0

птепсивлость роста 0 0 0 0

количество положительных результатов

етуберкулезпые 27 27 27 27 27

итеисивкость роста + + + + 4- + 4- + + + + +

[римечание: "О"- отсутствие роста

"+ + +"-несосчитываемое количество колоний

Таблица 4

Биохимические свойства нетуберкулезных микобактерий, выросших на нативной и восстановленной натрийсалициловокислой (1000 мкг/мл) и паранитробензойной (1000 мкг/мл) средах Левенштейна-Иенсена

2СТЫ MYCOBACTERIUM

kansasii ffordone serofulaceum inracelulare avium fortuitum

Н С Н С II С Н С Н С Н С

лячие' ацяна - - - - - - - - — - — —

нунция тратов + + - - - - - - — — + ±

!фОЛИЗ ¡ип-80 + + - - - — - - — — + +

шоста-ньпость галазы + + + + + + + + + + + +

идазпая гивиость 3,5 3,5 3 3 3,5,6 3,5,6 5,6 5,6 5,6 5,6 1,3,8 1,3,8

жмечание: Н- нативная среда; С- сухая среда;

1- ацетамид, 3- мочевина, 5- никотинамид, 6- пиразинамид, 8- аллантоин, 9- сукцинамид.

ОРПДА ЛЕВЕН1ШЕЙНА-ИЕНСЕИА

САЛИЦИЛОВОКИСЛЫЙ НАТРИЙ, 1000 мкпмл

M.kaiisasil U Kerofula<*eum U gordone M.lntracrllulure U.avium M.*í"lviale

U.senúpl U.phleL M.fortultum

*rmtiuFr.im> колоний

СРЕДА ЛЕВЕНШТЕЙНА-ИЕНСЕНА САЛИЦИЛОВОКИСЛЫЙ НАТРИЙ. 1000 МКПМЛ

350 300 350 200 150 -100 50 0

VIТ]

I.

S* 'ft

i i

' i

-I f i'

P jg

12 С

СРОК ХРАНЕНИЯ, MED.

ПАРАНИТРОБЕНЗОЙНАЯ КИСЛОТА, 1000 МКПМЛ

U.kansaftü М Kcrofulaceum -

М aordone U intracellulare M-ftviUtil U.trlvlale -

M.Xenopl M.phlel

M tortultum

сухая среда

Рис. 1 Показатели (%) выявления роста культур нетубер-

количесгао колоний

ПАРА11ИТРОБЕНЗОЙНАЯ КИСЛОТА, 1000 МКПМЛ

СРОК ХРАИЕНИЯ.МЕС,

С

Ы к в ese «И Ё==3 M.scrc¿u)»ceu)u

ц Inirncrllulnre ЕПЗ Mftvivim о U ¿ordon-

fMt. 2 Им1ч»оиан««ть рос ra м«*дуиародны* 1шам>*ов мнуШркулммых

uUKOiijKiepiiH.

И матионая среда С - сухап среда

В настоящее время натрийсалицпловокислая и транитробензойная среды Левенштейна-Иенсена, содержащие по 1000 мкг/мл названных ингредиентов, изготавливаются научио-фоизводственной лабораторией Кыргызского НИИ туберкулеза и ими 1ентрализовано обеспечиваются Республиканская референс-шборатория, а также бактериологические лаборатории противотубер-сулезных учреждений Республики и за ее пределами.

При исследовании на этих средах 8288 культур, выделенных от юльных, нетуберкулезные микобактерии были выявлены в 1.28% лучаях (106 культур). В Ошской и Жалал-Абадской областях гетуберкулезные микобактерии обнаружены в 57.5% случаев (к чилу 1ыделенных нетуберкулезных культур). Большая часть 58.3% их 1тнесена к сапрофитам. В Чуйской области нетуберкулезные шкобактерии были установлены в 18.9% случаях. Реже (етуберкулезные микобактерии обнаруживались в г. Бишкеке и "аласской области (8.5%, 10.0% соответственно), в Иссык-Кульской бласти они были выделены в 4.7%. В Нарынской области [етуберкулезные микобактерии обнаружить не удалось.

• Из выделенных 106 культур нетуберкулезных микобактерий [аиболее часто. (28.3%) обнаруживались медленнорастущие гефотохромогенные микобактерии.

ВЫВОДЫ •

1. Для повышения качества, унификации методики сследования и облегчения процесса выявления нетуберкулез .ых сикобактерий созданы сухие стандартные варианты питательной реды Левенштейна-Иенсена, содержащие в своем составе алициловокислый натрий (1000 мкг/мл) и паранитробензойную ислоту (1000 мкг/мл).

2. Сухие питательные среды с салициловокисльм натрием и аранитробензойной кислотой обеспечивают в обычные сроки нкубирования ингибирующий эффект по отношению к

\

инкубирования ингибирующий эффект по отношению I туберкулезным микобактериям и не задерживают рос нетуберкулезных культур.

3. На предложенных сухих натрийсалициловокислой 1 паранитробензойной питательных средах результаты дифференциацш нетуберкулезных микобактерий, принадлежащих ко всем четырег группам по классификации Раньона, с высокой степень* достоверности подтверждаются параллельными контрольным! исследованиями на нативных питательных средах с теми ж ингредиентами.

4. При идентификации нетуберкулезных микобактерий выросших на сухих дифференциально-диагностических питательны: средах Левенштейна-Иенсена с салициловокислым натрием ] паранитробензойной кислотой, выявлено, что нетуберкулезньг микобактерии всех четырех групп Раньона полностью сохранил) присущие им морфологические, биологические и биохимически свойства.

5. Хорошо выраженные ростовые качества по отношению ] нетуберкулезным микобактериям и ингибирующий эффект направленный на туберкулезные микобактерии, предложенные сухи натрийсалициловокислая и паранитробензойная среды обнаружили : течение года после изготовления и хранения при + 4° : + 22сС.

6. Сухие питательные среды, содержащие 1000 мкг/м. салициловокислого натрия и 1000 мкг/мл паранитробензойно; кислоты, могут широко использоваться для дифференциацш

.нетуберкулезных микобактерий в бактериологических лабораториях.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Предлагаются сухие сублимированные питательные среды среда Левенштейна-Иенсена, содержащая салициловокиелый натри; (1000 мкг/мл) и среда Левенштейна-Иенсена с содержание: паранитробензойной кислоты (1000 мкг/мл) для дифференциапи! туберкулезных микобактерий от нетуберкулезных - возбудителе]

икобактернозов и от широко распространенных кислотоустойчивых апрофитов.

2. Рекомендуется использовать обе питательные среды в течение вда после изготовления и хранения при температуре от + 4° С до + 2°С.

3. По своим качествам, отсутствию при выращивании на них 1ких-либо изменений их морфологических, биологических и юхимических свойств нетуберкулезных микобактерий сухие 'блимированные питательные среды Левенштейна-Иенсена, держащие в своем составе салициловокислый натрий (1000 мкг/мл)

паранитробензойную кислоту (1000 мкг/мл) предлагаются в лестве стандартных сред для унификации методики, повышения [чества исследования • и облегчения процесса выявления туберкулезных микобактерий.

СПИСОК

работ, опубликованных по материалам диссертации

1. Использование стандартных питательных сред для выявления [шичных микобактерий. // Сб. докл. кояфер. мол. ученых статутов КНМИ, эппд. противоч. ст. КНИИТ. Фрунзе 1979. 3-1.

2. Изготовление и применение сухих питательных сред для явления атипичных микобактерий. // Тезисы докладов совместной гчной сессии ЦНИИТ МЗ СССР и КыргНИИТ.- Фрунзе,1980.-С. 1-142.

3. Некоторые результаты испытания набора сухих питательных д, предназначенных для выявления атипичных микобактерий. Сборник докладов конференции молодых ученых института чнер.ства и педиатрии. Фрунзе,1989,2с.

4. Стандартные питательные среды в диагностическом гвлении атипичных микобактерий. //Отчет лаборатории на тему: ¡стога распространения туберкулеза бычьего вида среди больных в ельных сельских районах Киргизской ССР". 1981.-Б-970473,-III. 1981.- С.1-36. (соавторы: Финкель Е.А., Тумашова А.Ф., 1ченко З.К., Соколова И.А., Ким Л.С., Денисова Л.Т.)

5. Опыт стандартизации питательных сред для выявления и нтификации атипичных микобактерий. //Сборник внедрения МЗ (гизской ССР. 1982.- 2с. (соавторы: Финкель Е.А., Погребинская 3., Тимченко З.К., Тумашова А.Ф.)

6. Создание комплекса стандартных питательных сред для териологической диагностики туберкулеза и опыт их внедрения в ктику. // В кн.: История организации и развития зиатрической службы в Узбекистане. Ташкент,- 1982.- С.105-108.

7. Диагностический набор для выявления атипичных микобактерий. // Рацпредложение от 7.10.1980. Библиографический указатель изобретений, (соавторы: Финкель Б-А.).

8. Разработка и изучение лиофилизированной среды Левенштейна-Иенсена с антибактериальными препаратами' для определения лекарственной чувствительности микобактерий туберкулеза. // Заключительный отчет, № 02830081432.1983.- 20 с. (соавторы: Финкель Е.А., Погребинская Ю.Б., Михайлова Т.В., Тумашова А.Ф., Мильчевская А.И., Денисова Л.Т., Давлетова P.M.).

9. Выявление и идентификация атипичных микобактерий с помощью дифференциально-диагностических питательных сред. // Актуальные проблемы туберкулеза и смежной паталогии в Кыргызской ССР.- Фрунзе.1984.- С.150-154.

10. Использование сухих стандартных питательных сред для совершенствования методов выявления нетуберкулезных микубактерий. // Совершенствование и стандартизация бактериологических исследований при туберкулезе.- Фрунзе,-1986.-С.35-42.

11. Совершенствование питательных сред для выявления нетуберкулезных микобактерий. // I съезд гигиенистов, эпидемиологов, инфекционистов Киргизии.-Фрунзе,-1986.-С. 218-219.

12. Разработка и создание стандартных питательных сред, способствующих совершенствованию методики выявления возбудителя бычьего вида и нетуберкулезных микобактерий. // Заключительный отчет. 1986. (соавторы: Финкель Е.А., Гончарова З.К., Давлетова P.M., Денисова Л.Т., Мильчевская А.И., Погребинская Ю.Б.).

13. Набор стандартных питательных сред для диагностики туберкулеза. // Методические рекомендации.- Фрунзе.19 .-14с. (соавторы: Финкель Е.А., Погребинская Ю.Б., Михайлова Л.В., Тумашова А.Ф., Гончарова З.К., Луцкая С.И., Мильчевская А.И., Давлетова P.M.).

14. Nutrient mediums for tuberculosis and chronic nonspecific lung gisease diagnosis - питательные среды для диагностики туберкулеза и хронических неспецифических заболеваний легких. // Amer. Rev. of respiratory disease,1990. (соавторы- ФинкельЕ.А., Тумашова А.Ф., Гончарова З.К., Соловкина В.Г.).

15. The nutrient medium for diagnosis of infections diseases -питательные среды для бактериологической диагностики инфекционных заболеваний. // Тезисы на международном конгрессе по бактериологии и микологии в Японии - Осака. 1990.- сентябрь 1622 (соавторы- Финкель Е.А., Соловкина В.Г., Мырзакулова А.Ж., Матвеева Г.Е.). • ' '

16. Получение сухих питательных сред с амидами для идентификации микобактерий. // Заключительный отчет инв. № 02910033032.-Бишкек. 1991.-36 с. (соавторы- Финкель Е.А., Тумашова А.Ф., Гончарова З.К., Соловкина В.Г.).

17. Некоторые бактериологические аспекты изучения нетуберкулезных микобактерий. // Тезисы докладов IV съезда фтизиатров Казахстана, Алма-Ата,1992.-С. 126-127. (соавторы-Финкель Е.А., Михайлова JI.В.,Соловкина В.Г.).

18. Разработка методики получения сухих питательных сред с амидами для. идентификации микобактерий. // Окружающая среда и здоровье человека том 1 - Бишкек, 1993.-С. 294-297 (соавторы-Финкель Е.А., Тумашова А.Ф., Гончарова З.К., Соловкина В.Г.).

19. Стандартные сухие питательные среды для дифференциации туберкулезных и нетуберкулезных микобактерий. // Сборник научных трудов "Туберкулез", 1993 - том 2-С. 10-14.

20. Сухие питательные среды для диагностики тубер сулеза, выпускаемые научно-производственной лабораторией КНИИТ. // Тезисы докладов Республиканской научно-практической конференции "О реформировании противотуберкулезной службы в Республике". 1996.-С. 126-127. (соавторы: Финкель Е.А., Михайлова Л.В., Гончарова З.К., Матвеева Г.Е..Соколова И.А., Мырзакулова А.Ж., Соловкина В.Г.).

21. Пищевое сырье животного и растительного происхождения из .экологически чистых регионов республики как источник получения новых эффективных противотуберкулезных средств // Международная конференция "Высокогорные исследования: изменения и перспективы в XXI веке". 1996. - С. 381-382. (соавторы: Финкель Е.А., Михайлова Л.В., Мусаева A.M., Матвеева Г.Е., Гончарова З.К., Мырзакулова А.Ж., Соколова И.А., Соловкина В.Г.).

АННОТАЦИЯ

Туберкулез змее жанз туберкулез микобакгерияларды айырмалоо максатында ишжургузулгондо, кургак стандарттых дифференциялоо-диагностикапык'чойросундо паранитробензойный кислотасы жана солициловокычкыл натрий и табылган Сублимация методу аркылуу чойрону консервалоо жургузулгон, буп туберкулездун микобактерияларынын осушуно таасир зткен заттын оптималдык концентрацияынын сакталышына комок борет.

Алтаган чойронун спецификапык аюгивдуулугу 31 тажырыйбапык сернясында 5385 себилуучу, 148 остурулуучу микобактериялардз жургузулул изилденген, алардын ичинен 14ту эл аралык штамга таандык

Изилдоолор корсоткондой, бул сунуш кылынган кургак. аш болумду чойролоо жогорку информативдуулугу менен айырмаланат Дозалары 1000 мкгмп 100°о те бопгон сапициповохычкыл жана паранитробензойный кислотасык камтылган чойродо туберкулез микобактериялардын осушу жокко эссе болгон.

Ушул эле убактз туберкулез эмес микобакгериялаоды алып жур.уучулордун баардыкгруплрлары Раньона классификациясы боюнча Ш0"о ти ос-ууто мумкунчулуктору бар. Булардын лайда болушунун /оакгысы жана интенсивдуулугу нативдуу чойродогу

корсоткучторуно дал келет Рурмк. ■»■агымдуу чойродо оскон ¡уьеркулез .г-гис-с микобактерипг.ару озулоруно тзандык болгон морфологиялык, Ьиоясппль:!с;капа биохямяялыккаспоттерин толуксактап калыижан.

Микбактерияпардыжиктоо учун ларанитробензойлуу кургак, «агымдуу чойропор Кыгрыз Туберкулез Ипимий Институтунда илимий-ондурушп'к лабораюрияларында жонго салынган.

Буп чойропор мрнен Респубпиканын туберкулезго каршы курошуучу мокемрпрри боргюрлоштурулган.

Оорулардан болунгон 6288 микробактерияларды, алынган чсйропсрдо изилдегенде 106 туберкулез эмес микобактериялардын осумдугу алынды.

Булардын копчулугу сэлрофигтерди тузушот. Булар кобунчо реслубликанын туштугундо кобуроок кездешишет.

ANNOTATION

The dry standard differentia!-diagnostic mediums with paranitrobenzcic acid and sodium salicylate were made to differentiate nontuberculosis v myccbacterium from verus ones.

The pieservation of mediums was made by.sublimation inainUnniMii substances optimal concentrations and inhibiting tubercolosis myoobactenum

The specific activity of 3 1 experimental series of above mentioned medium's was studied in 5385 inoculations of 148 cultures, 14 woro international strains.

The studies showed that these dry nutritious mediums were informative The human and bovis tubercolosis mycobauterium growth was aosent in the recovered mediums, containing sodium salicylate ana paranitrobc-riiuio asicl in doses 1000 mkg tnl/ While, the nontubercolosis myr.obacterium--representatives of all groups according to Ramon classification showed marked growth formation time corresponded to similar indicps in the native medium.

, " Nontubercolosis mycobactenum, cultivating in the dry nutritious * mediums maintained all their morphological, biological,and biochcmic.il properties." •' • -

The sientific production laboratory of Kyrgyz Research tuboicoio-,3 friitituta organized the production.of salvcylio and paranitrobenzoic. ut v

nutritious mediums for mycobacterium differentiation. Afltubercolosis hospitals are provided with these mediums.

106 nontubercolosis mycobacterium cultures /1.28% / were obtained luring the studies of 8298 cultures on these media. The prodominant culture lumber are saprophytes. They were of then found in the south of our Republic.