Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ КЛЕТОК ДРОЖЖЕЙ К ДЕЙСТВИЮ ИОНИЗИРУЮЩИХ ИЗЛУЧЕНИЙ, РАЗЛИЧАЮЩИХСЯ ПО ЛПЭ, И ФАКТОР ПЛОИДНОСТИ

ВАК РФ 03.00.01, Радиобиология

Автореферат диссертации по теме "ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ КЛЕТОК ДРОЖЖЕЙ К ДЕЙСТВИЮ ИОНИЗИРУЮЩИХ ИЗЛУЧЕНИЙ, РАЗЛИЧАЮЩИХСЯ ПО ЛПЭ, И ФАКТОР ПЛОИДНОСТИ"



ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ РАДИОЛОГИИ ГОСАГРОПРОМА СССР

На правах рукописи

19-87-6 УДК 577.391:663.12/14

ЛОБАЧЕВСКИЙ Павел Николаевич

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ КЛЕТОК ДРОЖЖЕЙ К ДЕЙСТВИЮ ИОНИЗИРУЮЩИХ ИЗЛУЧЕНИЙ, РАЗЛИЧАЮЩИХСЯ ПО ЛПЭ, И ФАКТОР ПЛОИДНОСТИ

Специальность: 03.00.01 - Радиобиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Обнинск 1987

Работа шполнева в Объединенном институте ядерных исследований

Научный руководитель:

доктор биологических наук Е.А.Красавин

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук В.Г.Петин кшшстат биологических наук А.С.Шевченко

Ведущая организация — Институт цитологии АН СССР, Ленинград

".(^"фебрйНМЭЭ?- года вета по радиобиологии К 120.81.С

Защита диссертации состоится на заседании специализированного Совета по радиобиологии К 120.81.01 при Всесоюзна* научно-исследовательском институте сельскохозяйственной радиологии Госагропрсма ОССР (Москва-Центр, ул.Белинского, д.4, иом.300).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всесоюзного научно-исследовательского института сельскохозяйственной радиологии. Отзыва на автореферат просьба направлять до адресу: 249020, Калужская обл., г.Обнинск, ВНИИСХР, специализированный совет.

Автореферат разослан " 16 198?- г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических науи

Н.И.Санжарова

ОШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность тема

Закономерности летального действия ■иошэирухщос излучений о разной линейкой передачей энергии <ЛПЭ) на клетки обусловлены как физическими характеристиками излучений, так и биологическими свойствами самих клеток - прежде всего процессами репарации радиационных повреждений. Молекулярно-энзиматические механизмы репарационных процессов хорошо изучены у клеток прокариот, У эукариот, в частности,клеток дрожжей, эти вопросы изучены пока весьма слабо. Хорошо известно, что одним из важных факторов, определяющих особенности реакции дрожжевых клеток на облучение, является их шюидность. Диплоидные клетки отличаются .от гаплоидных величиной радиочувствительности, формой кривой вшивания, величинами относительной биологической эффективности (ОБЭ) плоткоионизируяцих излучений, проявлением мутаций, повышающих чувствительность к ионизирующим излучениям. Попытки интерпретации этих закономерностей привели к предположению о существовании у диплоидных клеток так называемой диплоидспецифической репарации повреждений.

Актуальность и важность исследования роли плоидности в радиобиологических реакциях клеток обусловлены широким кругом вопросов, решаемых радиобиологией, радиационной генетикой, биофизикой и рядом, других научных дисциплин. Следует заметить, что эта проблема имеет и важный общеОиологический аспект. Переход от гаплоидных организмов к диплоидным в процессе эволшии привел к существенному повышению надежности юс генетического аппарата к различным повреждающим воздействиям внешней среды.

Одним из экспериментальных подходов к расшифровке механизмов, обусловливавших надежность генетического аппарата клеток, является исследование закономерностей летального действия ионизирующих излучений с разной ЛПЭ. Оцнако систематического изучения влияния восстановительных и других процессов, свойственных только диплоидам, а также -роли генотипа в чувствительности клеток эукариот к действию ионизирующих излучений широкого диапазона ЛПЭ до последнего времени не проводилось.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы являлось изучение роли факторов, обусловленных диплоидным состоянием генома, в чувствительности дрожжевых клеток:о разным генотипом к действию иониэируших излучений, разлнча-шихся по ЛПЭ. Для атого необходимо <5ыло_ решить следующие основные задачи:

А-2&Ч£Ч

Ц^тралье^и . Научная '

Московской рчд-ва Г-еп^г

(.ель'кги в 1.

ьас. К. Д. 1к,*игн.1 ■

1. Разработать экспериментальные и теоретические подхода к определению вклада диплоидопецифических процессов в радиочувствительность клеток при действии излучений с разной ЛПЭ.

2. Изучить роль пострадиационного восстановления и эффекта дорастания в чувствительности диплоидных клеток к ^-облучению, определить их влияние на форму кривой выживания,-

3. Изучить влияние на даллоидспецифические процесса мутаций, приводящих к повышенной радиочувствительности клеток.

4. Исследовать рель диплоидспецифической репарации и эффекта дорастания в характере зависимости радиочувствительности клеток от ЛПЭ излучений.

Научная новизна

В работе показано, что.закономерности детального действия иони-эирушах излучений разного качества на диплоидные клетки дрожжей обусловлен«, по крайней мере, двумя диплоидспецифическими процессами; репарацией повреждений, лежащей в основе пострадиационного восстановления клеток, и процессами, определяющими аффект дорастания. Проведено исследование роли генов, контролирующих радиочувствительность, в процессах диплоидспецифической репарации и впервые. изучено влияние мутаций этих генов на эффект дорастания. Проведенные исследования позволили сделать вывод о взаимной независимости процессов репарации и реализации радиационных повреждений.

Впервые осуществлена оценка рели диплоидспецифической репарации в радиочувствительности клеток при действии излучений с высокой ЛПЭ и изучена зависимость эффективности репарационных процессов от качества излучения. Показано, что сигмоидная форма кривой выживания'диплоидных клеток при действии излучений с высокой ЛПЭ обусловлена исключительно эффектом дорастания.

Научно-практическая ценность работы

Исследование реши диплоидспецифической репарации в радиочувствительности клеток и изучение зависимости эффективности этого процесса от качества излучения, позволяют выдвинуть ряд положений, касающихся механизмов диплоидспецифической репарации радиационных повреждений _ и ее связи с веепекифической (общей для гаплоидных и диплоидных клеток) репарацией. Полученные экспериментальные и теоретические данные могут иметь важное значение для дальнейших исследований механизмов лучевой инактивации клеток эукариот.

Объем работы

Диссертация включает следушие главы: введение, обзор литерату-

материалы в метода исследования, результата в обсуждение, выводи; содержит 145 страниц машинописного текста, 22 рисунка и 8 таблиц. Список литературы включает 136 наименований, из них 53 на русском языке.

Апробация

Материалы диссертации доложены на I Все сошном биофизическом съезде (Москва, 1982), Биофизическом семинаре ОИЯИ (1985, 1986), У Всесоюзно* совещании по минродоэиметрии (Усть-Нарва, 1986), коллоквиуме "Дискуссионные проблемы количественной радиобиологии " (Чернигов, 1966),

Диссертационная работа апробирована на научной конференции физик о-хшического отдела ВНИИСХР.

На зашит? выносятся:

- Основные результаты теоретических исследований роли диплоид-специфических факторов в чувствительности клеток дрожжей к действию иониэярунцих излучений о разной ЛПЭ.

- Результаты исследования вклада дгаплоидепецифической репарации и эффекта дорастания в резистентность дагалоидкыг клеток дрожжей различных генотипов к ^-облучению.

- Результаты экспериментов по изучению зависимости радиочувствительности* гаплоидных клеток различных генотипов от ЛПЭ.

- Данные, демонотрирушше роль диплоидспецифической репарации •в характере зависимости радиочувствительности клеток дрожжей от ЛПЭ.

- Результаты исследования влияния эффекта дорастания на радиорезистентность и форму кривой шживания диплоидных клеток при действии излучений с высокой ЛПЭ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Штамщ ¡дрожжей Засс^азгшпусеа сегеу±а1аэ

В работе использованы следующие штамш дрожжей Зассьатотуеэз o«гвvtaiйв : 13 800 ("дикий" ТИП), 1Б 1006 (гей 50/га(1 50), 13 1698 (гай 52/га<1 52), 13 1889 (га! 53/гай 53), ХЗ 1935 (гай 55/тай 55), Т з (га<1 54Уга<1 54), В03-11а/<* егт 2 (вгя> г/вгш 2) ' (диплоидные штаммы и эгайо ("дикий" тип), е1бо-гл (га4 52), е151-1го (та 53), хэ 1аг8-Зо (га4 6), 803-11а (вгт г) {гаплоидные штаммы). В скобках указаны только те мутации, котодае влияют на радиочувствительность клеток. Полностью генотип большинства из указанных шташов приведен з работе Т.Саеки с соавторами*.

*5аек1 Т. 1к)М1№ ВеаеагсЬ, 1980, У.7Э, п.2, р.251-265.

Источники ионизирующих излучений

В работе использованы следующие вида ионизирунвдх излучений: -излучение, сЛ-частивд, ускоренные иош гелия и углерода. Источником "^-излучения служила установка« содержащая радиоактивный изотоп

. в качестве источника с< -частиц использовали радиоактивный

изотоп «эр«.

Облучение клеток ускоренными ионами гелия и углерода проводили На ускорителе 7-200 ОИШ. Для этих целей была специально создана установка с комплексом электронно-физической аппаратур!.

Применение указанных источников обеспечило широкий диапазон ЛПЭ использованных ионизирующие излучений (от 0,3 до 500 кэВ/мкм).

Определение выживаемости «"нулевого класса

Клетки перед облучением выращивали на агаризованной питательной среде ХЕРи (дрожжевой экстракт - 5 г/л, пептон - Ю г/л, глюкоза -20 г/л, агар - 25 г/л) в течение 5-7 суток при 28^(3. Методом центрифугирования в градиенте плотности сахарозы получали суспензию одиночных клеток, находящихся в стационарной фазе. Для облучения с<-частицами и ускоренными ионами готовили монослой клеток на поликарбонатном фильтре, который располагали на поверхности 6?-ного непитательного агара. После облучения клетки ресуспендировали в воде* V-квантами клетки облучала в водной суспензии.

Для определения выживаемости суспензию облученных клеток подходящей концентрации высевали в чаши Петри с агаризованной питательной средой УЕРи . Подсчет макроколоний производили через 5-7 суток инкубации при 28^С.

Определение доли клеток, не имеющих повреждений ("нулевой -класс"), проводили по специально разработанной для этой ссели методике. Дпя этого изучали кривые роста (зависимость концентрации клеток от времени) в жидкой питательной среде культур из облученных и необлученных клеток. Долю клеток нулевого класса определяли как отношение концентраций на экспоненциальных участках указанных кривых для облученных и необлученных клеток. Использовали жидкую питательную среду сле-дуицего состава: кн2ро4 - 2 г/л, Ые304 - I г/л, глюкоза - 20 г/л.

Дня изучения медленного пострадиационного восстановления облученные клетки перед посевом на питательную среду инкубировали в течение 48 часов в воде при 2В°С. С целью подавления быстрого пострадиационного восстановления клетки облучали в поздней С1 - фазе. Для этого подготовленные по стандартной методике клетки перед облучением 2 часа культивировали в жидкой питательной среде при 28 С.

^атодц статистяческоЦ рбуа^рткя данных

Обработка экспериментальных данных заключалась в расчете оптимальных значений параметров предложенной математической модели и построения расчетных кривых, описывающих ту- или иную экспериментальную зависимость. Расчет оптимальны* значений параметров производили путем минимизация нормированной суммы квадратов отклонений экспериментальных значений исследуемой зависимости от расчетных. Минимизацию указан- ■ ной суммы осуществляли с помощью метода градиентов. Все вычислительные операции выполняли на ЭВМ.

РЕЗУЛЬТАТ!! И ОБСУЖДЕНИЕ

Мат^м^т^еское описэдце кривых выживание

В диссертационной работе представлена математическая модель, позволяющая интерпретировать экспериментальные кривые вшивания с учетом роли факторов, обусловленных диллоиднш состоянием генош. Модель разработана исходя из изученных ранее закономерностей летального действия ионизирующих излучений на гаплоидные и диплоидные клетки, дроскжей* Основные из этих закономерностей следуйте: у диплоидных клеток наблюдается на порядок более высокая радиорезистентность, чем у гаплоидных; для диплоидных клеток характерна сигмоидная форма кривой вшивания, а для гаплоидных - экспоненциальная;.у дпигоидных клеток обнаружены такие явления, как пострадиационноо восстааовленке ,. жизнеспособности и эффект дораставдл, у гаплоидных клеток, находящихся в стационарной фазе, указанных явлений не наблюдается;.мутации, приводящие к повышенной чувствительности клеток дрожжей к облучению, . в большей степени влияют на радиочувствительность диплоидных клеток, чем гаплоидных. С учетом указанных закономерностей действия излучений на клетки дрожжей модельные представления спираются на следующие основные посылки.- \ *

I. Инактивация как гаплоидных, так и яаплоидных клеток обусловлена повреждениями одного типа (шв ктпвнруютю поврездония). Для инактивации гаплоидной клетки в стационарной фазе достаточно одного такого повреждения, и формировать колонии поело облучения способны только те гаплоидные клетки; которые но гологот ни одного ина котирующего повреждения. Кривую выживания гаплоидных клеток мо.ию представить в виде:

где Бь (В) - выживаемость, С - доза облучения, Й^ - наклон кривой выживания при ое представлении в полулогарифмических координатах, или

г

радиочувствительность -клеток (^^, где - доза, уменьшающая выживаемость в Q раз).

2. Инактивирующио повреждения образуются из первично индуцированных излучением повреждений. Процессы образования этих повреждений, в том числе и неспецкфическая (общая дня гаплоидных и диплоидных клеток) репарация первичных повреждений, происходят одинаково как в гаплоидных, так и в диплоидных клетках. При действии редкошнизирующего излучения радиочувствительность гаплоидных клеток 6^.представляет собой выход инактивпруишис повреждений на единицу дозы на гаплоидный геном. . -

3. Диплоидные клетки дрожжей, в отличие от, гаплоидных, способны с некоторой вероятностью репарировать инактивирующие повреждения. Репарация указанного Tima (диплоидспеццфическая) лежит в основе пострадиационного восстановления жизнеспособности диплоидное клеток. Это обусловливает более высокую радиорезистентность диплоидных клеток, определенную по дозовой кривой нулевого класса, по сравнению с радиорезистентностью гаплоидных клеток.

4. Диплоидные клетки с некоторой вероятностью способны формировать макроколонии, даже если у них имеются инактивирушше повреждения. Колонии, сформированные клетками, имеющими инактивирушше повреждения, определяют эффект дорастанин: они имеют меньшие размеры и вырастают в более поздние сроки, чем колония из неповрежденных клеток. Бели процесс диалоидспецифической репарации завершен, то вероятность формирования ыакрокшгошти определяется теш инактивирующими повреждениями, которые остались неотрепарироваиными.

Кривую выживания облученных диплоидных клеток можно представить в следующем виде:

saro-MDy+sxD), (2>

где Si (.£))- выживаемость днлдоидаых клеток, облученных в дозе Xl • S0(D)- дом клеток, не имеющих инактивирующих повреждений, или нулевой класс, S) (.В) - доля клеток, имеющих такие повреждения, но формирующих дакрокодонии.

ЭйЬотст noria ста няя. йго ренетичастси^ *онтеол> и вклад

Р -резиртдцуност^ шецоцщри клетдц ц у -облучению

Эффект дорастания заключается в том, что часть облученных диплоидных клеток формирует макрояолояии в более поздние сроки и меньших размеров, чем необлученные клетки. Это явление вносит существенный вклад в сишоидную форду кривой выживания дашгоилшх клеток и их высокую, по сравнению с гаплоидными клетками, радиорезистентность /Ка-

пульцевич Ю.Г., 1978/Г В диссертационной работе предложена методика экспериментального определения величины нулевого класса. Это позволило более точно определить эффект дорастания как разницу мвждг выживаемость» З4 (р) и нулевым классом б,, (р) - Такой подход дает возможность изучить эффект дорастания у радиочувствительных мутантов диплоидных дрожкей и в условиях, обеспечивающих различную степень пострадиационного восстановления; и тем самым исследовать те случаи, когда модафосация кривой выживания обусловлена изменением величины эффекта дорастания.

В основу интерпретации эффекта дорастания с позиций развитых модельных представлений положена: вероятностная модель радиационной инактиващш клеток /Капульцэвич Ю.Г., 1978/. В рамках этой модели формирование колоний клетками» имеющими повреждения, рассматривается как вероятностный процесс. Величина эффекта дорастания определяется значением параметра о( , представляющего собой вероятность отказа (неделания}клетки , имеющей одно повреждение, или вероятность.реали-■ заши повреждения. Выживаемость клетки есть вероятность неограниченного количества делений. Возможность экспериментального определения нулевого класса Ьо (,15) позволила' предложить усовершенствованный вариант вероятностной модели. Этот вариант учитывает сигмоидаую форму до-зовой кривой нулевого класса и позволяет однозначно и более точно, чем исходная модель, определить значение параметра <А - вероятности реализации повреждения.

Для исследования генетического контроля* к вклада эффекта дорастания в радиорезистентность диплоидных клеток бши поставлены спвци-■ ально спланированные опыты по одновременному определению выживаемости и кулевого класса при -облучении клеток дрожжей. На рис.1 изображены кривые выживания и нулевого класса при -облучении диплоидных клеток дрожжей "дикого" типа в условиях, обеспечивающих разную степень пострадиационного восстановления, и различных радиочувствительных мутантов. В таблице I приведены значения параметров, характеризующих эффект дорастания: Л (вероятность реализации повреждений и К. В рамках теоретической модели величина к представляет собой максимальное количество повреждений, при котором клетка способна сформировать мэкроколаки», Значения параметров с< и к рассчитаны на основании предложенного в работе варианта вероятностной модели радиационной инактивации клеток с использованием экспериментальных данных, представленных на рис.1.

Приведенные на рис.! и в таблице I результаты позволяют заклю-

*Капульцевич Ю.Г. Количественные закономерности лучевого поражения клеток. Ы., Атомиздат, 1978.

:V

• «о >*» It» too X* » 4» HI» VM

.....' IX 4;

М * 44 МА ЦО

Рис.1. Кривые.вшшвания (I) и нулевого класса (2) при •^-облучении различных штаммов диплоидных дрожжей: хз аоо ("дикий""тип), А - при условии подавления быстрого пострадиационного восстановления* Б -стандартные условия, В - при условии завершения медленного пострадиационного восстановления;

Г - XS 169Ü (rad 52/гай 52)j Д - из (rad 54/rad 54)¡ Е - xs 16S9 (rad 53/rad 53); К -xs .1935 (rad 55/rad 55).

чить следующее. Эффект дорастания не зависит от степени быстрого /Глазунов А,В., 1982/* и медленного /Корогодин В.И., 1966/** пострадиационного восстановления дрожжевых клеток. Значения параметра с* в случае подавления быстрого восстановления и при условии завершения медленного восстановления с учетом допустимых интервалов не отличаются от соответствующего значения для стандартных условий облучения клеток-хз 800. Практически не влияют на величину эффекта дорастания мутации гаЛ 52 и гва 54 : значения параметра для клеток, несудкх этя мутации, совпадают с соответствующим значением для клеток "дикого" типа. Эффект дорастания вносит существенный вклад в выживаемость клеток -

"Глазунов А.В.Радиобиология, 1982, т.22, внп.5, 0.633-636.

**Корогодин В .И. Проблема пострадиационного восстановления. М., Атом-издат, 1966.

Таблица Т. Значения параметров, характеризующих эффект дорастания при f -облучении различных штаммов диплоидных дрожжей. Условия А, Б, В - та же, что и на рис.Г.

Штамм

Генотип, & i ¿.(i

условия

ХЗ ВСЮ RAD/RAD,. А 0,153 - 0,02+

XS 800 RAD/RAD, Б 0,152 - 0,024

XS 800 RAD/RAD, В 0,198 ¿ 0,040

13 1398 rad 52/rad 52 0И5б-± 0,014

T3 rad 54/rad 54 0,192 ¿ 0,030

13 1889 , rad 53/rad 53 0,42 - 0,02 1

IS 1935 rad 55/rad 55 0,39 - 0,05 t

трех указанных штаммов: при выживаемости 10$ за счет дорастающих колоний обеспечивается 97 - 99% выживаемости. - Эффект дорастания в существенной мере блокируется мутациями rad 53 и rad 55 . Наиболее наглядно это отражается в значениях параметра ^: дня клеток "дикого" типа и мутантов rad 52/rad 52 И rad 54/rad 54 величина К составляет 3 + 4, а для мутантов rad 53/rad 53 И rad 55/rad 55 К* 1. При выживаемости IQ£ у клеток; несущих мутации rad 53 и rad 55 , за счет эффекта дорастания обеспечивается лишь 40 - 50% выживаемости. Повышенная по сравнению с клетками "дикого" типа радиочувствительность указанных мутантов в существенной мере обусловлена именно тем, что у них блокирован эффект дорастания.

Дкпяд^спепиДртчоскад тамарагшя. ее генетический контроль и вклад в радиочувствительность клеток той -у -облучении

■ С позиций развитых модельнкх представлений в работе проведен теоретический анализ возможных механизмов даплоидслецифической репарации. Анализ показал, что интерпретация радиочувствительности и формы кривой нулевого класса диплоидных клеток возможна в предположении существования дшплондспешфической репарации двух типов: независимого и зависимого. В процессе репарации независимого типа каждое инакгивиру-ющее повреждение может быть элиминировано независимо о некоторой вероятностью Т*в . Вероятность репарации отдельного повреждения системой второго типа зависит от количества повреждений в клетке или от дозы облучения. В свете'этих представлений кривую нулевого класса диплоидных клеток можно описать следующим уравнением:

SAD) * .-W<-r(l«D ,

где ba=2bh4-n)-

конечный наклон кривой нулевого класса, или радиочувствительность диплоидных клеток, V (jS)~ Функция, характеризующая репарацию зависимого типа; Г О прпВ-»оо .

Дня описания экспериментальных данных функцию ТГЦ>) представим в вида: ßD

где ß - свободный параметр, характеризующий дашлоидспеци^ичвскую репарацию зависимого типа.

На рис.2 изображены кривые нулевого класса при "J* -облучении диплоидных дрожжей "дикого" типа в условиях, обеспечивающих разную степень пострадиационного восстановления, и различных радиочувствительных мутантов.

Рис,2. Кривые нулевого класса при -облучении диплоидных дрожжей "дикого" типа 13 800 (А): I - при условии подавления быстрого пострадиационного восстановления, 2 -стандартные условия, 3 - при условии завершения медленного пострадиационного восстановления, и различных радиочувствительных мутантов СБ): I - ТЗ (гв4 54/га<1 54) , 2 -13.1898 (гаи 52/га4 52) , 3 - 1935 (гаЛ 55/га<1 55) , 4 - ХЗ 1889 (гай 53/гай 53) . 5 - 13 800 <НА1>/1Ш», 6 -803-11 а/Лагга 2 (апа 2/ад 2).

В таблице 2 приведены значения радиочувствительности дрожжей различных генотипов и величины параметров, характеризующих дипдояд-спеоифическую репарацию. Значения приведенных параметров рассчитаны _,по экспериментальным данным, изображенным на рис.2, в соответствии с

формулами (I), (3), (4), (5) и (6). Данные по радиочувствительности гаплоидных клеток дрожжей, необходимые для расчета значений параметра и приведенные в таблице.2 (bt,), для ряда мутантов (erm 2, rad 52, rad 53, RAD ) получены в диссертационной работе, а для других мутантов (rad 54» rad 55 ) взяты из литературы. Параметры &d(.fuD) я ft Vi 1В.А t>) представляют собой радиочувствительности клеток "дикого" типа (для диплоидных клеток - при стандартных условиях постановка эксперимента)..

Таблица 2. Радиобиологические характеристики дрожжей различных генотипов. Условия I, 2 и 3 - те же, что и на рио.2(А.

Мутация радио- Ьи Ьл ftj.io2 л.ю2 чувствительно- —^Ь— ..У* -г, i ' Р ? * Q сти, условия Ьщ^Ъм^Ь) _^ ^ *

RAD, 3 1 0,55 0,81-0,08 0,62 8,6±1,0

erm 2 1 0,42 0,85— 0,09 0,40 0,24 2,0*0,5

RAD, 2 1 1 0,65*0,05 1.13 0,64 1,8io,4

rad 53 1.4 1.4 0,66±0,09 1.51 1,08 1,4*0,3

rad 1.5 1,6 . 0,60*0,08 1.86 1,03 1,8*0,4

RAD, 1 1 1.6 0,42*0,03 1.35 10-З

rad 52 2,3 5,2 0 5,68 10-2

rad 5* 1.7 7.6 0 8,38 ю-2

Анализ значений параметров и р для ряда штаммов, имеющих сишоидвую кривую нулевого класса (шш/шш, гаа 53/гвА 53, гаа 55/ гад 55, аги г/вгт г) , свидетельствует о том,.что между этими величинами наблюдается пропорциональность, т.е. отношение 6^/ (У не изменяется от штамма к штамму. Это позволяет предположить, что репарация зависимого типа у четырех'указанных штатов происходит с одинаковой эффективностью.. Однако доля доступных для этой репарации повреждений зависит от количества повреждений Ь^П • остающихся после завершения репарации независимого типа. Поэтому наиболее общий вид представления функции Г (формула (5)) целесообразно конкретизировать:

ГЦЭ)= в 9 , <6>

где ^ — параметр, характериэуищй дашлоидспецифаческую репарацию зависимого типа.

Из приведенгшх в таблица 2 результатов следует, что мутации гad 53 я r&d 55 на эффективность диялоидспецифпчоской розарвдии практически не влшгот.-Значения параметров, описывающих репарацию независимого типа ("О и зависимого типа {ÇJ ), не отличаются, с учетом допустимых интервалов, от соответствующих значений для клеток "дикого" типа» Относительная радиочувствительность этих мутантов как у гаплоидов i\/ ). так и у даплоидав (64/ Ьdune)),приблизительно одинакова. Однако, так указывалось выше, указанные мутации в существенной мере блокируют эффект дорэстэняя. Следовательно, тот факт, что мутации rad 53 и rad 55 на выживаемость диплоидных клеток влийот в 4ольшеЗ степени, чем на выживаемость гаплоидных, обусловлен исключительно тем, что они блокируют процессы, ответственные за эффект дора-ствяия.

Мутации rad 52 и rad 54 полностью подавляют дшлоидспецифиче-скую репарацию как независимого, так и зависимого типа: значение параметра TV для них равно О, фушвдя TÎ.Û) такие практически равна 0. Подавление дйплоидслецифиче с кой репарации приводит к тому, что указанные мутации в большей степени влияют на радиочувствительность диплоидных клеток, чем на радиочувствительность гаплоидных. Однако, гак било показано выше, мутащш rad 52 и rad 54 не влияют на величину эффекта дорастают. ■

Более высокая, по сравнению с "диким" типом, радиорезистентность мутанта вто 2/вгга г обусловлена тем, что у клеток этого штамма большая эффективность даллоидспецифнчвекоц репарации независимого типа.

Ранее было провалено изучение эффективности быстрого /Глазунов А.В., 1982/ и медленного /Pettn v.o., 1979/'пострадиационного восстановления у различных мутантов длплоидных дрожжай. Показано, что у клеток, несущих мутации rad 52 и rad 54»отсутствует как быстрое, так и медленное пострадиационное, восстановление. Мутанты rad 53/rad 53 и rad 55/rad 55 способны в известной мера и к быстрому,и к медленному поирадиацианноыу восстановлении.

Сопоставление вышеуказанных данных с подученными в диссертационной работе материалами о генетическом контроле эффекта дорастания и дюиоидспецифи ческой репарации, о воличине эффекта дорастаная в условиях, обеслечиватюс разную степень пострадиационного восстановления,позволяет, заключить следующее. Закономерности летального действия излучений на диплоидные клетки дрожжей обусловлены по крайней «ере двумя даплоидсяецпфяческиш фокторами: репарацией повреждений и эффектом дорастания. Дяплоидспецифическая репарация и процессы, леяэ-

*ietin V.Gp-Mutatioa Research, 1979, v.69» п.1, р.43-49.

щиэ в основе эффекта доростанш, являются взашяо независимыми..

Проведенный в диссертационной рэйотэ анализ экспериментальных данных позволяет также предположить, что репарация независимого типа лежит в основе быстрого пострадиационного восстановления, а репарация зависимого типа - в основе медленного восстановления.

Теоретический анализ зависимости радиочувствительности

клеток ярожже^ от ЛПЗ излучения

Изложенные в предыдущих разделах диссертации материалы по ^ -облучению дрожжевых клеток послужили основой для анализа зависимости их радиочувствительности от ЛПЭ излучения. Известно, что зависимость радиочувствительности как гаплоидных, так и диплоидных дрожжей от ЛПЭ описывается кривой с максимумом. Такие кривые принято называть кривыми второго рода. Ряд фактов указывает на то, что характер зависимости радиочувствительности от ЛПЭ определяется не только физическими - характеристиками излучений и формой мишени, но ибяологиче-. сними свойствами клеток, в частности, их способностью репарировать радиационные, повреждения. Так, относительная биологическая эффективность (ОБЭ) излучений в области максимума кривой зависимости радиочувствительности от ЛПЗу диялоидгшх дрожжей почти в два раза выше,, чем у гаплоидных. У рэдиочувствительншс мутантов диплоидных дрожжей, дефектных.по репарации двушггевых разрывов <ДР) ДНК и неспособных к пострадиационному восстановлению,.ОБЭ меньие, чем у клеток "дикого" . типа. Эффективность быстрого пострадиационного восстановления после облучения <*»-частицам нижа, чем после облучения -квантами.

В настоящем разделе диссертации представлена материалы, касающиеся рола репарационные! процессов в формировании характера зависимости радиочувствительности дрожжевых клеток от ЛПЭ. На основе развитого подхода возможно описать указанную зависимость о учетом вклада как дадлоидспеаифической, так в, в определенной мере, неспецифической репарадаи. Э основе математического описания лежит учет Форш г размеров мишеней гаолошшнх и диплоидных клеток, а также предположение о том, что неспецифичесвая репарация повреждений происходит одинаково как а гаплоидных, так и в диплоидных клетках, но диплоидные клетки способны еше репарировать и инзктишрувщие повреждения.

Мишень гаплоидной {диплоидной) дрожжевой шатки, сходящейся в стационарной фазе, можно представать в виде сферического слоя радиусом Яц (Я^) и толщиной"ЦИ^)» в котором равномерно расположены чувствительные участки. Введем величину с^Щ- вероятность того, что при пересечения чувствительного участка ионизирующей частицей с ЛПЭ » й в нем образуется инактивцрующее повреждение. Тогда вероятность того, что в гаплоидной (диплоидной) клетке не образуется ш одного каак-

•гивирующего повреждения при пересечении мишени ионизирующей частицей poW(L ) (pe¿ {L)), можно представить следующим образом: s„v

PcK(U= \ {l- cvM^fw^V <7>

f к s

<8)

где ( S) (p¿ ( S )) - Функции распределения длин треков S ионизирующей частицы в мишени гаплоидной (диплоидной) клетки. Вид этой функции известен; Кц и VCd -количество чувствительных участков на единицу длины треха, и S^d - максимальный пробег частицы в мишени.

Произведя суммирование по всем частицам, пересекающим мишень,-можно рассчитать радиочувствительность гаплоидных и диплоидных (по кривой нулевого класса) клеток ft^ (Ь ) и 6,j{L ):

b¿ W =6d( l- ÍI0>

где - геометрические сеченая мишеней, p -

удельная масса вещества юшени.

Поскольку «галоидная клетка содержит вдвое больше.чувствительных участков, чем гаплоидная, справедливо следующее соотношение параметров, характеризующих мишени:

Численное интегрирование выражений (7) к (8) для ряда значений Q(L) от 0 до X позволяет установить соответствие между значениями pAtl* ) и p»d (U ),:относящимися к одному и тому же значению ЗЛЭ, независимо от вида функции ¿^(L). KaK показывают расчеты, соотношение вероятностей p«Vv (U) и оказывается зависят» только от двух

параметров: вероятности репарации повреждений Т„ и отношения радиусов мишеней

Ы ' К Г. > Rv, / , (12)

Если определить в эксперименте зависимость ). то на осно-

вании (9), (10) и (12) можно предсказать зависимость &d(L). Таким образом, предложенный математический подход устанавливает связь радиочувствительности диплоидных клеток с радиочувствительностью гаплоидных

клеток. Эта связь на зависит от вида функции (I.) и определяется двумя параметрами: Тв и ЙлУЛл* Это означает, что виводы, которые будут сделаны ниже относительно дишгоидспецифической репарации, не зависят от того, какое формальное математическое описание предложено для вида функции <у (Ь ). Математическое выражение для функции (Ь ) необходимо для описания экспериментальной зависимости >. Кроме

того, проведенный в работе анализ зависимости ) для гаплоидных

клеток "дикого" типа и радиочувствительного мутанта гаЛ 6 позволил не только математически описать функцию* (Ь ), но и сделать некоторые, заключения, касающиеся неспецифической репарации.

Зависимость радиочувствительности гаплоидных Клеток

различных генотипов от ЛПЭ излучения

Зависимость 6^(1*) второго рола можно интерпретировать, предполагая, что при облучении клеток образуются инактивирутощие повреждения, разные по своему происхождению. Установлено, что такими повреждениями для клеток являются двунитевые разрывы (ДР) ДНК. При этом ДР ДНК могут быть двух типов: прямые ДР ДНК, образующиеся при пересечении одной ионизирующей частицей двух нитей ДНК, и знзиштические ДР, которые могут образоваться из однонитевых разрывов (ОР) ДНК, на от-репарированных клеткой. Зависимость выхода прямых ДР ДНК от ЛПЭ излучения описывается кривой с максимумом, а выход ОР ДНК, как известно, уменьшается с увеличением ЛПЭ. Такой подход с разработкой детальной математической модели позволил интерпретировать зависимость радиочувствительности от ЛПЭ клеток "дикого" типа и репарационных мутантов Е. со11/Козубек С., Красавин Е.А,. 1984/*.

Предположим, что клетки радиочувствительного мутанта дрожжей отличаются от клеток "дикого" типа меньшей вероятностью успешной репарации ОР ДНК, т.е. большей вероятностью образования энзиматического ДР ДНК. На основании этого предположения в работе предложена соответствующие выражения для величины а (V.) и, посредством формул (7) и (9), дня

Возможен и альтернативный подкод к описанию кривых зависимости радиочувствительности гаплоидных югеток "дикого" типа и радиочувствительного мутанта от ЛПЭ. Он заключается в предположении о том, что клетки "дикого" типа способны, в отличие от клеток мутанта, репариро-вать с некоторой вероятностью инэктивирушще повреждения. ГЕа основе этого предположения в работе также получены соответствующие выражения для (I*) и клеток "дикого" типа и радиочувствительного мутанта.__

•Козубек С., Красавин Е.А. Радиобиология, 1964, т.24, вып.4,

С.462-467.

Для выбора одного из двух возможных вариантов интерпретации зависимости Ь^ (и) были поставлены опыты по определению чувствительности к облучению ускоренными ионами различных энергий гаплоидных клеток "дикого" типа и мутанта га<1 £ . На рис.3 приведены экспериментальные данные по радиочувствительности указанных пгташов гаплоидных дрожжей в зависимости от ЛПЭ излучения,и расчетные кривыо Ь).

Рис.3. Зависимость радиочувствительности гашгоиданх дрожжей "дикого" типа-(темные символы, кривые I, 3) и мутанта га4 6 (светлые символы, кривые 2, 4) от ЛПЭ излучения..

ЛПЭ,кэВ/мкн

Кривые I и 2 рассчитаны при предположении о существовании двух типов ДР ДНК - прямых и энзимэтических и изменении соотношения их выходов с увеличением ЛПЭ. Как видим, это предположение позволяет удовлетворительно описать экспериментальные зависимости радиочувствительности от ЛПЭ. Наблюдаемая в области шлих значений ЛПЭ разница в радиочувствительности клеток "дикого" типа и мутанта гай б обусловлена, в рамках указанных представлений, тем, что у клеток "дикого" типа энзиматические ДР образуются с меньшей вероятностью. С увеличением ЛПЭ эта разница уменьшается, поскольку возрастает доля нерепарируемых . прямых ДР ДНК.

На рмс.З приведены также кривые зависимости оЦЬ), рассчитанные на основании альтернативного предположения (кривые 3 и 4). Это предположение заключалось в том, что гаплоидные клетки "дикого" типа способны, в отличие от клеток радиочувствительного мутанта, репариро-вать с некоторой вероятностью инактивирующие повреждения. Такое предположение означает, что неспецифическая репарация эффективна в одинаковой степени при любых значениях ЛПЭ. Как видам ^ в области малых значений ЛПЭ разница между экспериментальными эначоншвдп радиочувствительности клеток "дшюго" типа и мутанта гш! 6 гораздо выше, чем между расчетными кривыми. В области высоких значений ЛПЭ расчетные кривые не дают нивелировки радиочувствительностей клеток указанных штампов, наблюдаемой в эксперименте.

Таким образом, проведенный в работе анализ зависимости радиочувствительности гаплоидных дрожжей различных генотипов от ЛПЭ излучения позволяет сделать следующие выводы. Характер зависимости радиочувствительности гаплоидных клеток от ЛПЭ в известной мере опредоля-

ется способностью клеток репаpupoвать радиационные повреждения. Вклад процессов неспецифической репарация в выживаемость гаплоидных клеток уменьшается с увеличением ЛПЭ. Возможно, что в основе этого явления лежит изменение соотношения выхода энзиматических и прямых ДР ДНК с увеличением ЛПЭ.,

Зз^ррмцр.ть гетиочувствитедьпзстд д^рлдюшюс клеток от ЛПЭ

На основании экспериментально полученной зависимости 6^(1*) с помощью соотношений (9), (10) и (12) в работе рассчитаны теоретические кривые зависимости радиочувствительности диплоидных клеток от ЛПЭ. Расчет этих кривых произведен для ряда значений параметра т^ , фиксированных для ■ каждой кривой, и разных значениях отношения в соответствия с условием (II). Проведенный в работе анализ указанных кривых позволяет заключить следующее. Вклад диплоидспецифической репарации - в радиочувствительность клеток уменьшается с увеличением ЛПЭ, даже если эффективность репарации не меняется. Положение максимума , кривой L) смещается в область более высоких значений ЛПЭ, а ОБЭ в области этого дак^имума увеличивается с увеличением значения параметра "TV, - характеризующего эффективность дишгоидспецифической репарации. Однако указанное влияние диплоидспецифической репарации на характер зависимости L ), связанное с уменьшением роли репарации с увеличением ЛПЭ,. является косвенным и обусловлено изменением характера распределения клеток по числу инактивируших повреждений с ростом ЛПЭ. t

Сравнение расчетных кривых b¿(L > с полученными в работе экспериментальными данными по радиочувствительности диплоидных дрожжей xs 800 при облучении ускоренными иона тли различных анергий показывает, что существует несколько вариантов интерпретации этих данных. Предполагая, .что параметр зависит от ЛПЭ, невозможно однозначно описать экспериментальные данные, т.е. определить отноиение R^ и вид

зависимости 7* от ЛПЭ. Возможны два крайних случая соотношения радиусов мишеней: R¿ » и P.<i • s/2 R^. При R.ц = Rj экспериментальные данные можно интерпретировать, считая, что т*<> = const при L -fi 200 кэВ/мкм, а при L ^ 200 кэД/мхм YV. уменьшается до 'О при 400-500 кэВ/шы. При предположении = ^fz R^ описание эксперимент тальнкх двннйк-возможно при допущения, что Ъ возрастает от 0,6 до 0,8 с увеличением ЛПЭ от 200 до 500 кэВ/мкм.

Таким образом, в зависимости от того, какое предположение сделано относительно соотношения радиусов мишеней гаплоидных и диплоидных клеток, интерпретация экспериментальных данных приводит к Противоположным выводам, касающимся зависимости У» от ЛПЭ. Для однозначного выбора отношения R^/ í^j в работе определено сечение кнактива-

ции в области плато для диплоидных клеток радиочувствительного мутон- ■ та rad 52/rad 52 . Поскольку для этого мутанта Т» = О (табл.2), сечение инактивации в области плато соответствует геометрическому сечению мишени диплоидных клеток. 11а основании кривых нулевого класса при облучении клеток штамма Jtз 1 s?e ионами углерода с ЛПЭ 310 кэй/мш и 500 каемки получено следующее соотношение: R 4 = 1,29 . Это приблизительно соответствует = îf^Rv т*9, случаю,. когда объем ядра диплоидной клетки вдвое больше объема ядра гаплоидной.

На рис.4 представлены экспериментальные данные по радиочувствительности диплоидных клеток хз всю в зависимости от ЛПЭ излучения и теоретическая кривая кривая рассчитана при предположении

V. = const = 0,65 (табл.2) и R.^ = \f"2 и, как видим,, удовлетворительно описывает экспериментальные данные.

ЛПЭ.кэВ/нкм

Рис.4. Зависимость радиочувствительности даплоидных дрожжей Jes 800 от ЛПЭ излучения.

Из трех предложенных вариантов интерпретации зависимости радао-чувствительности диплоидных клеток от ДПЭ последний является наиболее предпочтительным. Соотношение = У2 согласуется о экспериментальными данными. В пользу того, что днилоидспецифическая репарация достаточно эффективна при высоких ЛПЭ, т.е. Т*в 4 свидетельствует и тот факт, что экспериментально определенное сечение инактивации диплоидных клеток "дикого" типа в области плато достоверно меньше соответствующего сечения у радиочувствительного мутанта <1,06 и 1,7 мкм2 соответственно)..Предполагать же, что эффективность диплоидспецифической репарации увеличивается с ростом ЛПЭ, как это следует из анализа данных при ^ = у нас нет оснований.

Таким образом, проведенное в работе исследование-зависимости радиочувствительности диплоидаых клеток от ЛПЭ позволяет сделать следующие выводы. Диплоидспецифнческая репарация эффективна в равной степени при действии излучений о различной ЛПЭ вплоть до 500 кэД/икм. Следовательно, непосредственной роли в форлировании характера указанной зависимости данний тип репарации не играет. Наблюдаемый вклад ди-

плекдспецифической репарации в радиочувствительность клеток уменьшает' ся с ростом ЛПЭ. Однако это не связано со сниженном эффективности репарационных процессов, а обусловлено изменением характера распределения клеток по числу повреждений, т.е. физическим и геометрическим . факторами.

Вклад эдикта допзсташтя в выживаемость ллштотмит тосиатй

1ши действии излучений с высокий ДПЭ

Списание эффекта дорастания требует информации о характере распределения клеток по числу инактивирующих повреждений. Указанное распределение можно рассчитать для излучений с любой ЛПЭ на основе предложенного в работе математического подхода. Однако расчет этого распределения существенно упрощается для случая = I, что соответствует диапазону ЛПЭ от ЗОО кэВ/мюл и виде. В этом случае выживаемость и нулевой класс, как показано в работе, связаны следующим соотношением:

s ДО) * SAD)

64

Уи

£Э

7-

J41 4

И

(13)

iC| - сечение инактивация

в области плато, р'/ - вероятность того, что при пересечении шгаени ^-частицами в ней образуется я инактивирующих повреждений. Расчет этой величины производится аналогично расчоту величины рьа (Ь) (формула (В)).

На рис.5 приведены экспериментальные данные по выживаемости и нулевому классу диплоидных клеток хз еоо и хс 1398 при облучении ионами углерода различных энергий а кривые, рассчитанные по формуле (13) (кривые 2)., Для расчета этих кривых использованы значения параметра Л , полученные для случая -ойлученая (табл.1), при предположении, что вероятность реализации повреждений не зависит от ЛПЭ.

Рис.5.-Кривые выживания (2) я нулевого класса (I) при облучении диплоидных дрожжей XS 800 (RAD/RAD) (А,Б) И XS 1898 (rad 52/rad 52 ) (В) ионами углерода с энергиями 2,3 МэВ/н (А,В) И 4,0 МэВ/н(Б).

Как шдавд, кривые нулевого класса экспоненциальны, следовательно, снгмоидная форма кривых выживания обусловлена исключительно эффекте®* дорастанпя, Как было показано, при -облучении штаммы xs öoo и хз 1вЭ8 имеют одинаковую величину эффекта дорастания. Однако при действии излучений с высокой ЛПЭ у клеток xs 600 < Ras/Rad ) величина эф- ' фекта дорастания несколько выше, чем у клеток xs 13Э8 (rad52/raa 52). В работе показано, что это обусловлено разной эффективность» диплоид-спецкфической репарации у указанных итаммов.

Соответствие расчетных кривых экспериментальным данным достигнуто при предположении, что -величина параметра Л не зависит от ЛПЭ, Одаако это не означает, что наблюдаемый вклад эффекта дорастания в выживаемость не меняется с увеличением ЛПЭ. При выживаемости у диплоидных клеток хз 800 за счет эффекта дорастания обеспечивается 98$ выживаемости в случае ^ -облучения:(рис.1) и 47% выживаемости в случао облучения ионами углерода с ЛПЭ 500 кэВ/мкм. Доля клеток нулевого класса от всех выживших клеток составляет в этих случаях 2% и 23? соответственно. Это уменьшение с ростом ЛПЭ наблюдаемого вклада эффекта дорастания в выживаемость обусловлено изменением характера распределения клеток по числу инактивирутацих повреждений.

Таким образом, исследование величины аффекта дорастания при действии излучений о высокой ЛПЭ на диплоидные клетки дрожжей позволяет сделать следующие выводы. Эффект дорастания является единственным фактором, определяющим сишоидную форму кривых выживания длшхощщых дрожжей при действии излучений о высокой ЛПЭ. Вероятность реализации повреждений dk не зависит от типа излучений, индуцировавших эти повреждения. Наблюдаемый вклад эффекта дорастания в выживаемость диплоидных клеток уменьшается о ростом ЛПЭ, что обусловлено изменением характера распределения клеток по числу повреждений,

В1Ш0Д1

1. Закономерности лоталыюго действ!« излучений на диплоидные клетки дрожжей обусловлены, по крайней мере, двумя дкплоидспецифиче- _ сними фактораш: працоссом репарации повреждений и эффектом дорастания. Диплоидспецифичоская репарация и процессы, определяющие эффект дорастания, являются взага.пю независимыми.

2. Диплоидспецифкческал репарация и эффект дорасташ« контролируются рядом генов серии rad , мутации в которых обусловливают повышенную радиочувствительность клеток- Нутации серии rod в большой спешки влияют на радиочувствительность диплоидных клеток, чем гаплоидных, что обусловлено блокированием mm эффекта дораотапия или подавлением дкплоидспецифической репарации.

3. Диплоидспецифичесхая репарация повреждений в равной степени эффективна при действии излучений, различающихся по ЛПЭ в широком диапазоне. Прямого влияния на характер зависимости радиочувствительности клеток от ЛПЭ этот тип репарации не оказывает.

4. Эффект дорастания является единственным фактором, определяются сшмоидаую форму крявьос выживания диплоидных дрожжей при действии излучений с высокой ЛПЭ. Вероятность реализации повреждений, определяющая величину эффекта дорастания, не зависит от ЛПЭ.

5. Вклад диплоидспецифической репарации и эффекта дорастания в радиочувствительность клеток, регистрируемый на уровне выживаемости и нулевого класса, уменьшается с ростом ЛПЭ. Это обусловлено изменением характера распределения клеток по числу повреждений с увеличением ЛПЭ.

6. Эффективность неспецифической репарация уменьшается с увеличением ЛГО излучения, -что в известной мере определяет характер зависимости радиочувствительности от ЛПЭ у клеток дрожжей.

По теме диссертации опубликованы следующие работы!'

1. Amirtaev K.G., Lobachereky P.N., LokajiSek Ы., Pfidal I. Radiobiological mechanism in celle. Model analyele of DSB formation and their repair.

El9-82-792, JINR, Dubna, 1982. * :

2. ЛоОачэвский П.Н., Замолодчикова С.Ю. . Вта:ваомость дрожжей поело -облучения: эффект дорастания и определение доли неповрежденных клеток. Радаооиология, т.25, вып.4, с.483-488, 1985..

• 3. Лобачевский II,Н., Замолодчикова С.Ю, Вероятностная модель -радиационной инактивации клеток: учет скшоидноИ формы дозовой зависимости нулевого класса. Р1Э-вб-Зв,-ОДОИ, Дуоиа, 1586.

4. Лобачевский П.Н. Облучение длпловдшх дрожжей плотнопонизи-рующими частицами: аффект дорастания - определяющий фактор сютиоид-ной формы кривых выживания. Материалы У Всесоюзного совещания по микродозиметрии,Изд. ЫИШ, H., 1986, с.130-131.

5. Лобачевский П.П.Мишоиова B.L. Выживаемость диплоидных дрожжей после -облучения:: генетический контроль эффекта дорастания. PI9-86-I59, 011ЯИ, Дуста, Х9Й6.

Рукопись поступила в издательский отдел 9 января 1987 гола.

Редактор Б. Б.Колесова.

Макет Н. А. Киселевой.

Подписано • печет к 14.01.87. Формат ¿0x90/16. Офсетная печать, Уч.-изд.листок 1,5, Тираж 140. Заказ 38610.

Издательский отдел Объединенного института ядерных исследований, Дубна Московской области.