Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биотехнологическое получение стабильно-меченых препаратов антибиотика семейства зервамицина из Emericellopsis salmosynnemata

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата химических наук, Рогожкина, Елена Алексеевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР "АНТИБИОТИКИ-ПОЛИПЕПТИДЫ"

2.1. История исследования и классификация полипептидных антибиотиков.

2.1.1. История исследования и классификация линейных полипептидных антибиотиков семейства пептаиболов.

2.2. Исследования структуры и механизма действия полипептидных антибиотиков.

Применение изотопно-меченых антибиотиков-полипептидов.

2.2.1. Исследование структуры и механизма действия пептаиболов.

2.3. Получение полипептидных антибиотиков.

2.3.1. Биотехнологические методы получения полипептидных антибиотиков.

2.3.1.1. Методы скрининга продуцентов полипептидных антибиотиков.

2.3.1.2. Методы селекции высокоактивных продуцентов полипептидных антибиотиков.

2.3.1.3. Биосинтез полипептидных антибиотиков, как вторичных метаболитов.

2.3.1.4. Биотехнологические методы получения изотопно-меченых полипептидных антибиотиков. •

2.3.2. Химические методы получения полипептидных антибиотиков.

2.3.2.1. Методы модификации аминокислот, входящих в состав полипептидных антибиотиков.

2.3.2.2. Методы для изменения аминокислотного состава антибиотиков.

2.3.2.3. Химические методы получения изотопно-меченых полипептидных антибиотиков.

2.4. Методы выделения полипептидных антибиотиков.

2.4.1. Выделение полипептидных антибиотиков после химического синтеза.

2.4.2.Выделение полипептидных антибиотиков, синтезированных микроорганизмами.

3. ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЧАСТЬ. 47 3.1. Разработка экспресс-метода анализа пептаиболов семейства зервамицинов в биомассе Emerecellopsis salmosynnemata.

3.1.1. Выбор оптимальных условий ВЭЖХ анализа зервамицинов. 5 О

3.1.2. Количественные измерения.

3.1.3. Подбор оптимальных условий для экстракции зервамицинов из биомассы.

3.2. Оптимизация препаративного выделения зервамицина IIB из биомассы Emerecellopsis salmosynnemata

3.3. Подбор условий культивирования с применением экспресс-метода.

3.3.1. Изучение динамики накопления зервамицинов при культивировании Е. salmosynnemata на полноценной среде.

3.3.2. Изучение влияния аминокислот на синтез зервамицинов при культивировании Е. salmosynnemata

3.4. Получение препаратов тотально-меченого зервамицина IIB.

3.4.1. Получение тотально-1 ^-меченого зервамицина IIB.

3.4.2. Получение тотально-1SN, 13С-меченого зервамицина IIB.

3.4.3. Разработка метода получения тотально-дейтерированного зервамицина IIB.

3.5. Спектральные исследования тотально-151М-меченого зервамицина IIB в липидных бислоях.

4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

5. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биотехнологическое получение стабильно-меченых препаратов антибиотика семейства зервамицина из Emericellopsis salmosynnemata"

Биологически активные соединения, меченные стабильными изотопами H(D), 13С, 15N, все шире используются в различных биохимических, структурно-функциональных и диагностических исследованиях как альтернатива соответствующим радиоактивным аналогам. Интерес к применению стабильно-меченых биологически активных соединений с различными степенями изотопного обогащения вызван интенсивным развитием изотопно-чувствительной аналитической техники, и, прежде всего, спектроскопии ядерного магнитного резонанса. Один из наиболее распространенных методов получения меченых биологически активных соединений - биосинтетический, заключающийся в культивировании микроорганизмов, способных, ассимилируя наиболее доступные и дешевые стабильномеченые ростовые субстраты, синтезировать целевые вещества.

В последнее время возрос интерес к полипептидным антибиотикам -каналообразователям. Это связано с тем, что они губительно действуют на многие микроорганизмы, резистентные к другим видам антибиотиков. Следовательно, их можно использовать в качестве новых лекарственных средств. Антибактериальное действие полипептидных антибиотиков такого класса обусловлено изменением проницаемости мембраны клетки-мишени за счет формирования потенциал-зависимых ионных каналов. К настоящему времени уже накоплены данные о целых семействах линейных полипептидных антибиотиков, которые способны формировать ионные каналы в мембране клетки-мишени. Одно из таких семейств - пептаиболы.

Ac Trp Не Gin ZMva Thr Aib Leu Aib Hyp Gin Aib Hyp Aib Pro Phi

Структура зервамицина IIB.

К этому семейству относиться объект данного - зервамицин IIB, продуцируемый грибом Emericellopsis salmosynnemata. Как и многие представители семейства линейных полипептидных антибиотиков, он способен образовывать потенциалзависимые ионные каналы. Согласно существующим на сегодняшний день моделям, каналы формируются из агрегатов молекул антибиотика, стабилизированных

11 1Я водородными связями между остатками Gin и Hyp . Однако все эти модели основаны на данных о кристаллической структуре антибиотика и на эмпирических молекулярных расчетах.

Чтобы получить более полную информацию о механизме каналообразования данного антибиотика, необходимо изучить его структуру и динамику при ассоциировании с фосфолипидными мембранами. Для проведения подобных исследований используют препараты, меченные стабильными изотопами. Данная работа посвящена разработке биотехнологического метода получения тотально-меченых препаратов зервамицина IIB.

Представленная работа является частью исследований, проводимых в Московской Государственной академии тонкой химической технологии им. М.В.Ломоносова на кафедре биотехнологии по теме № 1Б-22-866 «Разработка методов получения природных и синтетических амфифильных веществ и их использование как компонентов лекарственных средств и инструментов моделирования мембранных биологических процессов», в рамках гранта Минобразования РФ № 1М-131-В66 по программе «Фундаментальные исследования в области химических технологий» по теме «Разработка биохимических методов получения стабильно меченных биологически активных соединений и использование их в исследовании функционирования биологических мембран», а также при участии Лейденского королевского университета (Нидерланды) в рамках проекта Нидерландской организации научных исследований (NWO) № 047.006.009.

Цель работы. Разработка биотехнологического метода получения препаратов полипептидного антибиотика семейства зервамицинов, меченных дейтерием, 15N, а также с двойной меткой по 13С и 15N, с максимально высокой степенью изотопного обогащения.

В связи с тем, что содержание зервамицина IIB в клетках продуцента -E.salmosynnemata, не является постоянной величиной (после достижения максимального содержания зервамицина ИВ наблюдается резкое снижение его концентрации в клетках), было необходимо разработать метод, позволяющий контролировать содержание зервамицина ИВ в клетках продуцента.

Так как существующие методы выделения зервамицина IIB из биомассы штамма-продуцента не обеспечивают получения препаратов зервамицина IIB 90% чистоты, а также требуют значительных материальных затрат и времени, то возникла необходимость в оптимизации метода препаративного получения зервамицина IIB.

Научная новизна и практическая ценность работы.

Разработан биотехнологический метод получения тотально- 15N -меченого зервамицина IIB и тотально-I5N, 13С-меченого зервамицина IIB. В ходе работы установлено, что автолизаты стабильно-меченых биомасс метилотрофных бактерий могут обеспечивать хороший рост культуры Е. salmosynnemata и продуцирование полипептидного антибиотика зервамицина IIB. Приготовленные полноценные среды для культивирования Е. salmosynnemata на основе автолизатов стабильно-меченых биомасс метилотрофных бактерий позволяют получать тотальный уровень включения метки в зервамицине IIB.

Показана принципиальная возможность применения данного биотехнологического подхода для получения высокодейтерированных препаратов зервамицина ИВ.

Разработан метод экспресс-анализа зервамицина IIB с использованием ВЭЖХ. С помощью предложенного метода определена кинетика накопления зервамицина IIB в биомассе в ходе культивирования продуцента на полноценных средах, в том числе -стабильно-меченых. Показано наличие корреляции между уровнем накопления целевого продукта и рН среды.

Тотально-15М-меченный зервамицин IIB был передан в институт Макса Планка (Германия), что позволило детально изучить встраивание зервамицина IIB в фосфолипидные мембраны и сделать предположение относительно наиболее возможного механизма каналообразования.

На защиту выносятся следующие положения.

1. Разработка биотехнологического метода получения препаратов зервамицина IIB с высокими степенями изотопного обогащения из биомассы штамма-продуцента -Е. Salmosynnemata.

2. Разработка метода экспресс-анализа с применением ВЭЖХ для количественной оценки содержания зервамицина ИВ в биомассе штамма-продуцента.

3. Изучение динамики накопления зервамицина ИВ в биомассе Е. salmosynnemata, а так же изучение влияния аминокислот на синтез зервамицинов в клетках штамма-продуцента.

Публикации. По материалам диссертационной работы оформлено четыре печатные работы.

Структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы,

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Рогожкина, Елена Алексеевна

5. ВЫВОДЫ.

1. Разработан биотехнологический метод получения тотально-1 ^-меченого зервамицина IIB, а так же тотально-1^,13С-меченого зервамицина IIB, синтезируемого культурой Emericellopsis salmosynnemata, с использованием автолизатов стабильно-меченых биомасс метилотрофных бактерий в составе полноценных питательных сред.

2. Показана принципиальная возможность использования предложенного биотехнологического метода для получения тотально-дейтерированного зервамицина IIB.

3. Разработан метод экспресс-анализа с использованием ВЭЖХ, позволяющий ежедневно контролировать содержание зервамицина IIB в клетках штамма-продуцента.

4. Оптимизирован метод препаративного выделения зервамицина IIB из клеток гриба E.salmosynnemata.

5. Показано, что добавление в ростовую среду при культивировании гриба E.salmosynnemata аминокислот, входящих в состав пептаиболов, приводит к значительному упрощению получающейся смеси родственных соединений.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата химических наук, Рогожкина, Елена Алексеевна, Москва

1. Харкевич Д.А. Фармакология.// М.: Медицина, 1993.

2. Франклин Т. Биохимия антимикробного действия.// М.: Мир. 1984.

3. Waksman S., Woodruff Н. A new antibiotoc actinomicine prodUsed by Streptomyces sp. //Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1940. v.45 p.609-614.

4. Eagle H., Foley G. Actinomicine D: Investigations of biological activities. //Cancer Res. 1958. v.18. p.1017-1021.

5. Планельес X.X. Аурантин противоопухолевый антибиотический препарат из группы актиномицинов. // М.: Мир. 1962.

6. Терентьева Т.Г. Противоопухолевая активность препаратов группы актиномицина. .//Хим.-Фармацевт. Журн. 1977. т.11. с.143-146.

7. Frei Е. Anticancer activity of actinomicine D. .//Chemother. Rep. 1974. V.58 part I. p. 4954.

8. Hotchkiss R.D., Dubos R.J. Antibacterial compound from Вас. Brevis. .//J. Biol. Chem. 1940. V.132.

9. Гаузе Г.Ф. Грамицидин С и его применение. // М., 1952.

10. Кожибски Т., Ковшик-Гиндифер 3. Антибиотики, происхождение, природа, свойства. //Варшава, T.I, Т.2,1969.

11. Gross Е., Morell J.L. Structure of peptide antibiotic nisine. //J. Amer. Chem. Soc. 1970. V.92. p.2919

12. Charney J., Fisher W.P. et al. Peptidolactones, structure and properties. //Antibiot. And Chemother. 1953 v.3 p. 1285

13. Bartz Q.R., Standiford J. et al. Antibacterial ativities of peptidolactones. //Antibiot. Ann. 1954-1955. p.777.

14. Sheehan J.C., Mania D., Nakamura S. et al. Structure and properties of antibiotics peptidolactones. //J. Amer. Chem. Soc. 1968. V.90. p.462.

15. Шемякин M.M., Хохлов A.C., Колосов M.H. и др. Химия антибиотиков. //М., 1961

16. Maeda К., Kosaka Н., Yagishita К. et al. Asaserine, a new antitumor antibiotic. //J. Antibiot. 1956. V.9. p.82-85.

17. McCormick M.H., Stark W.M. et al. Structure elucidation of new antibiotic netropsine. //Antibiot. Ann. 1955-1956. p.606-611.

18. Aoyagi T. et.al. Poststatin, a new inhibitor of prolylendopeptidase. //J.Antibiot. 1991. V.44(9) p.949-955.

19. Woo J.T. et al. Cathestatins, new cysteine protease inhibitors prodused by Penicillium ctrinum. //Biosci. Biotech. Biochem., 1995. v.59(2). p.350-352.

20. Hagano Y., Takeuchi N. et. al. Improved production of phenomycin by a Genetically Engineered Escherichia coli. //J. Antibiot. 1996. Vol.49(I). p.81-85.

21. Chatterjee S. et al. Mersacidin, a novel antibiotic from Baciilus. //J. Antibiot. 1992. V.45(6). p.832-838.

22. Komiyama S., Omoguro S. et al. A new antibiotic cypemicin. //J. Antibiot. 1993. V.46(ll). p.166-171

23. Егоров H.C. Антибиотики полипептиды. //M., 1987

24. Grafe U., Ihn W. et al. Helioferins; novel antifungal lipopeptides from Mucogone rosea. //J. Antbiot. 1995. v.48(2). p. 126-133.

25. Kumazava S. et al. Structural elucidation of aibellin, a new peptide antibiotic. //J. Antibiotic. 1994. V.47(10). p.l 136-1144.

26. Chikanihi T. et al. Clonostachin line tetradecapeptide antibiotic. //J. Antibiotic. 1997. V.50(2). p. 105-110.

27. Kalmokoff M.L., Lu D, Witford M.F. Evidence for production of a new lantibiotic (butyrivibroicin OR79A) by Butyrivibreo Jibrisolvens OR79. //Appl. Environ. Microbiol. 1999. V.65(5). p.2128-2135.

28. Shimanaka K. et al. Novel antibiotics amithiamicins. //J. Antibiot. 1994. V.47(6). p.668-674.

29. Bong-Sik Yun et al. Genintiocin, a novel thiopeptide produced by Streptomices sp. DD84. //J. Antibiot. 1994. V.47(9). p.969-975.

30. Bong-Sik Yun et al. Promotiocins A and B, novel tiopeptides with A typA promoter inducing activity produced by Streptomices sp. SF2741. IIJ. Antibiot. 1994. V.47(4). p.510-514.

31. Carnio M.C. et al. The macricyclic peptide antibiotic mocrococcin P(I) is secreted by the food-born bacterium staphilococcus equorum WS 2733. //App. Environ. Microbiol. 2000. V.66(6). 2378-2384.

32. Selva E. et al. Antibiotics A21459 A and B, new inhibitors of bacterial protein synthesis. J. Antibiot. 1996. Vol.49(2). p.145-148.

33. Blond A., Peduzzi J. The cyclic structure of microcin J25. //Eur.J.Biochem. 1999. V.259(3). P.747-755.

34. Quarta C. et al. Isolation and structure detrmination of a novel complex of the teicoplanin family. //J.Antibiot. 1996. V.49(6). p.644-650.

35. Vertesy L. et al. New 4-oxovancosamine-containing glycopeptide antibiotics from Amycolatopsis sp. Y-86,21022. //J.Antib. 1996. V.49(l). p.115-117.

36. Borghi A. et al. Deacylation of the glycopeptide antibiotic A40926 by Actinoplanes teichomiceticus ATCC 31121. //J.Antib. 1996. V.49(6). p.607-608.

37. Tanaka H. et al. A new antibiotic amphamicine. //Biochem. Biophis. Res. Comm. 1979. V.86. p.902.

38. Inoue T. et al. Isolation of plactins A,B,C and D, novel cyclic polypeptides. //J.Antib. 1996. V.49(l). p.45-49.

39. Ogava T. et al. Res-701-2, -3 and -4, novel and selective endothelin type b receptor antagonist produced by Streptomices sp. //J.Antib. 1995. V.48(ll). p.1213-1215.

40. Nakamura M. et al. Stachibocins, novel endothelin receptor antagonists. //J.Antib. 1995. V.48(12). p.1389-1395.

41. Sahl H.G. et al. Voltage-dependent depolarization of bacterial membranes by the peptide antibiotic nisin. //Arch. Microbiol. 1987. V.149(2). p.120-124.

42. Gao F.H. et al. Mechanism of action of the peptide antibiotic nisin in liposomes. //Appl. Environ. Microbiol. 1991. V.57(8). p.2164-2170.

43. Chan W.C. et al. Structure-activity relationship in the peptide antibiotic nisin; role of dehydroalanine-5. //Appl. Environ. Microbiol. 1996. V.62(8). P.2966-2969.

44. Hasumi K. et al. Inhibition of Acyl-Co: cholesterol acyltransferase by isohalobacyllin. //J.Antibiot. 1995. V.48(12). p.1419-1424.

45. Hochlowski J.E. et al. Aselacins, novel compounds that inhibit binding of endothelin to its receptor. //J.Antibiot. 1994. V.47(5). p.528-535.

46. Morino T. et al. Stevastelins, novel immunosuppressants produced by Penicilinum. //J.Antibiot. 1994. V.47(ll). p.1341-1343.

47. Yoshikawa Y. et al. Isolation, structures and antifungal activities of new aureobasidins. //J.Antibiot. 1993. V.46(9). p.1347-1354.

48. Kimomyo A. Use of a-aminoisobutyric acid and isovalin as marker aminoacids for the detection of fungal polypeptied antibiotics. /Dissertation Н98-494/. //Japan. 1997.

49. Becker D. Protein mass spectrometry: application to analitical boitechnology. /Dissertation H97-162/.//Germany. 1996.

50. Tomio Morino et al. Structural Determination of Stevastelins, Novel Decipeptides from Penicillium sp. //J.Antibiot. 1996. V.49(6). p.564-572.

51. John E. Leet et al. Himistatin, a new Antitumor Antibiotics from Streptomices hygroscopicopicus. //J.Antibiot. 1996. V.49(3). p.299-304.

52. E. Попов и др. Проблема белка. //М. Наука. 1996. Т.2.

53. Rodriguez М. J. et al. Relationship between Structure and Biological Activity of Novel R 106 Analogs. //J.Antibiot. 1996. V.49(4). p.386-389.

54. Yosikava Y. et al. Isolation, structure and antifunginal activities of new aureubasidins. //J.Antibiot. 1996. V.49. p.1347-1354

55. Takesako К et al. Preparation of antibacterial antibiotic R 106. //патент JP 03044398, 1989.

56. Takesako К et al. Biological properties of aureobasidin A. //J.Antibiot. 1993. У.46. p. 1414-1420.

57. Lociuro S. et al. Antimicrobial activity of chemically mondified thiazol peptide antibiotic GE2270A. //J.Antibiot. 1997. V.50(4). p.344-349.

58. Heffron S.E., Jurnak F. Structure of an EF-Tu complex with thiazol peptide antibiotic determined at 2.35 A resolution. //Biochemistry. 2000. 39(1) p.37-45.

59. A.Y.Pavlov et al. Carboxamides and hidraside of glycopeptide antibiotic eremomicin. //J.Antibiot. 1996. V.49(2). p.194-198.

60. Hermann R. et al. Synthesis and antibacterial activity of derivtives of the glycopeptide antibiotic A-40926 and its aglycone. //J.Antibiot. 1996. V.49(12). p. 1236-1239.

61. Cooper R.D.G. et al. Reductive alkylation of glycopeptide antibiotics. //J.Antibiot. 1996. V.49(6). p.575-581.

62. Chamoney W.S. Reductive methods for isotopic labeling of antibiotics. //An. Biochem. 1989. V.181 p.90-95.

63. Breukink E. et al. Use of the cell wall precursor lipid II by a pore-forming peptide antibiotic. //Science 1999, Dec 17,286(5448): 2361-2364.

64. Grdadolnik S.G. Mierke D.F. Structural characterization of the molecular dimer of the peptide antibiotic vancomycin. //J. Chem. Inf. Comput. Sci. 1997. Nov-Dec; 37(6): 10441047.

65. Linsdell H. et al. Dimerization of A82846B, Vancomycin and Ristocetin. //J.Antibiot. 1996. V.49(2). p.181-186.

66. Tsuda M. et al. Stereospecific synthesis of a novel protein transferase inhibitor, valinoctinA and its analogues. //J.Antibiot. 1996. V.49(10). p.1031-1035.

67. Tsitsumi S. et al. Syntesis and structure-activity relationship of peptydil alfa-keto heterocycles as novel inhibitors of prolyl endopeptidase. //J.Med. Chem. 1994, 37(21):3492-3502.

68. Tsuda M. et al. Poststatin: N-cycloalkylamide analogues. //J.Antibiot. 1996. V.49(9). p.909-911.

69. Tsuda M. et al. Poststatin, a new inhibitor or prolyl endopeptidase. //J.Antibiot. 1996. V.49(10). p. 1022-1025.

70. Yee A.A., D.J.O'Neil. Uniform 15N labeling of fungal peptide: the structure and dynamics of an alamethicin by 15N and 'H NMR spectroscopy. //Biochem. 1992. V.31. p.3135-3143.

71. Esposito G., Carver J., Boyd J., Campbell I. High-resolution 'H-NMR study of the solution structure of alamethicin. //Biochemistry, 1987, Y.26, p. 1043-1050.

72. Sansom P. Alamethicin and related peptaibols model ion channels //Eur Biophys. J., 1993, V.22, P.105-124.

73. You S., Peng S., LienL., Breed J., Sansom P. Engineering stabilized ion channels: Covalent dimers of alamethicin. //Biochemistry, 1996, V.35, p.6225-6232.

74. Molle G., Duclohier H., Julien S., Spach G. Synthetic analogues of alamethicin: effect of C-terminal residue substitutionand chain length on the ion channel lifetimes. //Biochim. Biophys. Acta, 1991, V. 1064(2), p.365-369.

75. Molle Q., Davoust D., Brachais L. Influence of the conformation of alamethicin on channel lifetimes.//Int. J. Pept. Protein Res., 1995,V.47, P.159-164.

76. Kaduk C., Duclohier H., Dathe M., et. al. Influence of proline position upon the ion channel activity of alamethicin. //Biophys. J., 1997, V.72, P.2151-2159.

77. Kaduk C., Dathe M., Bienert M. Functional modifications of alamethicin ion channels by substitution of glutamine 7, glicine 11 and proline 14. //Biochim. Biophys. Acta, 1998, V.1373(l), P. 137-146.

78. Isabella L., Karle I., Iudith L., et al. Crystal structure of Leu-Zervamicin, a membrane ion channel peptide.// Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1991, V.88, P.5307-53011.

79. Sanson M.S.P., Balaram P., Karle I. Ion channel formation by zervamicin IIB. //Eur. Biophys.J.,1993, V.21 ,,P.369-383.

80. Nilges M., Brunger A. Automated modeling of coiled coils: application to the GCN4 dimerization region. //Prot. Engineer., 1997,V.4, P.649-659.

81. Karle I., Agarwalla S., Balaram P. Agating mechanism of channels formed by zervamicins. //Biopolymers, 1994, V.34, P.721-735.

82. Chul M.-C.et al. MR-387A and B, new aminopeptidase N inhibitors. //J.Antibiot. 1996. V.49(l). P.99-102.

83. Hook D.J. et al. Integrated byological-physicochemocal system for the identification of antitumor compounds in fermentation broths. //J.Cromatogr. 1987. V.385(l) p.99-108.

84. Burkhardt K., Fiedler H.-P. New cineromicins and musacins obtained by metabolite pattern analysis of Streptomices griseoviridis (FH-S 1832). //J.Antibiot. 1996. V.49(5). P.432-437.

85. Marinelli F. et al. Antibiotic GE37468A a new inhibitor of bacterial protein synthesis. //J.Antibiot. 1996. V.49(9). P.880-885.

86. Егоров H.C., Олескин A.B. Биотехнология: проблемы и перспективы. //М.:Высшая школа, 1987.

87. Bierbaum G. et al. Cloning, sequensing and production of the lantabiotic mersacidin. //FEMS Microbiol. Lett. 1995. 15; 127(1-2). P.121-126.

88. Arroyo-Flores B.L. et al. Biosyntesis of glicoproteins in Candida albcans. //PMID:9850415, UI:99067401

89. Kang Y. et al. Characterisation of genes involved in byosinthesis of as novel antibiotic from Burkholderia cepacia ВС 11 and their role in biological control of Rhosoctonoa solani. //Appl.Env.Microbiol. 1998.64(10). P.3939-3947.

90. Bu'Lock J.D. Industrial aspects of biochemistry. // North Holland Publ., 1974, V.l, pp.293-342.

91. Vining L.C. Secondary metabolism. //Biotecnology, 1986, Y.4, pp. 20-38.

92. O'Sullivan J., Ball C. Biochemistry and genetic regulation of commercially important antibiotics. // Addison-Wesley Publ., Massachusets, 1985, pp. 1 -15

93. Omura S. Trends in the search for bioactive microbial metabolites. //J. of Industrial Microbiology, 1992, V.10, pp.135-156.

94. Borchert S., Patil S.S., Marahiel M.A. Identification of putative multifunctional peptide synthetase genes using highly conserved oligonucleotide sequences derived from known synthetases. //FEMS Microbiol.Lett., 1992,71(2), 175-80.

95. Marahiel M.A., Nakano M.M., Zuber P. Regulation of peptide antibiotic production in Bacillus. //Mol.Microbiol., 1993,7(5),631-36.

96. Fuma S., Fujishima Y., Corbell N. Nucleotide sequence of 5' portion of srfA that contains the region required for competence establishment in Bacillus subtilus. //Nucleic Acids Res.,1993,21(1),93-97

97. Kleinkauf H. Nonribosomal biosynthesis of peptide antibiotics. //Eur.J.Biochem., 1990, V.192(l), p.1-15.

98. Stachelhaus Т., Marahiel M.A. Modular structure of genes encoding multifunctional peptide synthetases required for non-ribosomal peptide synthesis. //FEMS Microbiol.Lett., 1995,125( 1 ),3-14

99. Schwartz D., Alijah R. The peptide synthetase gene phsA from Streptomyces viridochromogenes is not juxtaposed with other genes involved in nonribosomal biosynthesis of peptides. //Appl.Environ.Microbiol., 1996,62(2),570-77.

100. Пшеничникова А.Б., Карнаухова Е.Н., Звонкова Е.Н., Швец В.И. Методы получения дейтерированных аминокислот. /Обзорная статья/. //Биорганическая химия, 1995, т.21, No.3, с. 163-178.

101. Griffiths, D. V., Feeney, J., Roberts, G. С. K., and Burgen, A. S. V. Preparation of selectively deuterated aromatic amino acids for use in 'H NMR studies of proteins. //Biochim. et Biophys. Acta, 1976, V. 446, p. 479-485.

102. Мосин О. В, Складнее Д. А., Егорова Т.А., Швец В. И. Методы получения0 1Я 1 ^аминокислот и белков, меченных стабильными изотопами ZH, 1JC, N, 100. //Биотехнология, 1996, т.22, No. 10, с.24-40.

103. Egorova-Zachernuk Т.A., Shvets V.I. et al. Preparation of site-specific isotopically labelled zervamicins. //J.Pept.Sci. 1996. V.2(6). P.341-350.

104. Liu K., White L.R. et al. Biosyntesis of armetomicin. //J.Antibiot. 1995. V.48(4). P.347-348.

105. O'Hagan D., Rogers S.V. The biosynthesis of monensin-A. //J.Antibiot. 1995. V.48(ll). P.1280-1287.

106. Kuo M.S. et al. Biosynthesis of macrofortine-A. //J.Antibiot. 1996. V.49(10). P.1006-1013.

107. Staley A.S., Rinehart K.L. Biosyntesis of the streptovaricins. //J.Antibiot. 1991. V.44(2). P.218-224.

108. Trani A. et al. Deaminoteicoplanin and its derivatives. //J.Med.Chem. 1989. V.32(2). P.310-314.

109. Herrin T.R. et al. Preparation of biologically active ristocetin derivatives: replacements of the Г-amino group. //J.Med.Chem. 28(9). 1371-1375.

110. Римави В. Химический синтез изотопно-меченого зервамицина IIB. /Диссертация на соискание ученой степени кандидата наук/. //Москва, 2000.

111. Akaji К., Tamai Y., Kiso Y. Efficient synthesis of peptaibol using a chloroimidazolidium coupling reagent. //Tefrahedron, 1997, V.53, P.567-584.

112. Slomczynska U., Zarbrocki J., Kaczmarek K. Facilitated synthesis of peptaibpls: alamethicin via enzymatic segment condensation. //Biopolymers, 1992, V.32(l 1), P.1461-1470.

113. Ogrel A., Bloemhoff W., Lugtenburg J., Raap J. Total synthesis of zervamicin IIB and its deuterium-labelled analogues. //J. Pept. Sci., 1997, V.3(3), P. 193-208.

114. Ogrel A., Bloemhoff W., Lugtenburg J., Raap J. Synthesis of the isotibically labelled C-terminal fragment of zervamicin IIB: Approach to the synthesis of Aib-containing peptides. //Liebigs Ann. Chem., 1997, V.12, p.41-47.

115. Ogrel A., Ogrel S., Shvets V., Raap J. Synthesis of the 15N-Gln labelled peptaibol antibiotic zervamicin IIB. //Letters in Peptide Science, 1998, V.5 (2-3), P.175-178.

116. Хеншен A. M. ВЭЖХ в биохимии. //Мир, 1988.

117. Kajimura Y, Kaneda M. Fusaricidin A, a new depsipeptide antibiotic produced by Bac.polymyxa KT-8. //J.Antibiot. 1996. V.49(2) P.129-135.

118. Argoudelis A.D., Dietz A., Johnson L.E., Zervamicins I and II, polypeptide antibiotics produced by Emericellopsis salmosynnemata. //J. Antibiotics. 1974. Vol. 27(5), p. 321 -328.

119. Argoudelis A.D., Dietz A., Johnson L.E. Antibiotics Zervamicins I and II and process for preparing the same. //C.A 84:15685k, Patent USA, №3.907.990, 1975.

120. Krishna K., Balaram P. Structural chemestry and membrane modifying activity of fungal polypeptides zervamicins, antiamoebins and efrapeptins. //Appl.Chem., 1990,62(7),1417-20.

121. Hermodson M., Mahoney W.C. Separation of Peptides by Reversed-Phase HPLC. //Methodsi n enzymology. 1983. Vol. 91, p.352 359.

122. Mant C.T. Optimization of peptide separation in HPLC. //J.Chromatography. 1989. Vol. 12,p.l39- 172.

123. Рогожкииа E.A., Еремин C.B., Швец В.И., Складнев Д.А. Биотехнологическое получение стабильносеменных препаратов зервамицина IIB. //Хим.-Фарм. Журнал.-2000.-т.34.-№6.-с.37-40.

124. Kumazawa. S. et all. Structual elucidation of aibellin. //J.of Antibiotics. 1994. Vol. 47(10), p.l 136-1144.

125. Ogrel A.A. Total synthesis of specifically stable isotope labeled zervamicin IIB, an antibiotic peptaibol produced by Emericellopsis salmosynnemata. //Proefschrift ter verijging van de graad van Doctor Leiden. 1965.

126. Flaumenhaft E., Bose S., Crespi H.L. Deuterium isotope effects in cytology. /Int.Rev/. //Cytol. 1965. Vol.18, p. 313-361.

127. Рогожкина E.A., Еремин C.B., Швец В.И.,. Складнев Д.А. Метод экспресс-анализа зервамицина ИВ в биомассе E.salmosynnemata. //Хим.-Фарм. Журнал.-2000.-т.34.-№6.-с.50-53.

128. Leclerc G. et al. Directed biosynthesis of peptaibol antibiotics in two Trichoderma strains. //J.Antibiot. 1998. Vol. 51(2).- p.170-177.

129. Рогожкина E.A., Пономарёва E.B., Швец В.И., Овчинникова Т.В., Складнев Д.А., Раап Я. Получение препарата пептидного антибиотика зервамицина, тотально-меченого стабильными изотопами углерода и азота.// Биотехнология. 2001, в печати.

130. Nona D.A., Blake M.I., Crespi H.L. Effects of deuterium oxide on the culturing of Penicillum janczewskii //J.Pharm.Sci. 1968. V.57, No.6, p.975-979.

131. Crespi H.L., Marmur J., Katz J.J. Use of fully deuterated algae extracts for the isolation of nucleic acids. // Contribution from the Argonne National Laboratory and the Graduate Department of Biochemistry, Brandes university, 1962.

132. Crespi H.L. The isolation of deuterated bacteriorhodopsin from fully deuterated Halohacterium halobium. //Methods in Enzymology. 1982 V.88, p. 1-12.

133. Мосин О. В, Складнев Д. А., Юркевич А. М., Швец В. И. Исследование процесса адаптации бактерий к тяжелой воде. // Биотехнология. 1996 № 9, с.105-109.

134. Мосин О. В, Складнев Д. А., Швец В. И. Изучение биосинтеза аминокислот штаммов Brevibacterium methylicum при росте на средах, содержащих тяжелую воду и дейтерометанол. //Биотехнология. 1996 № 3, с.3-12.

135. Мосин О. В, Казаринова JI. А., Преображенская Е. С., Складнев Д. А., Рост бактерии Bacillus subtilis и биосинтез инозина на высокодейтерированной среде. // Биотехнология, 1996, № 4, с.85-94.

136. Крылов И.А., Красноштанова А.А., Манаков М.Н. Кислотный гидролиз белковых веществ биомассы промышленных микроорганизмов. 3. Кинетика кислотной экстракции белковых веществ из клеток дрожжей и бактерий. //Биотехнология, 1996, No.3, с.50-55.

137. Березин И.В., Рабинович М.Л., Синицын А.П. Исследование возможностей кинетического метода определения глюкозы. //Биохимия, 1977, т.24, No9, с. 16311636.