Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биосинтез липазы культурой Candida paralipolytica 739

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Вецозола, Анда Освалдовна

ВВВДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУШ

1.1. Липазы дрожжей

1.1.1. Характеристика микробных липаз

1.1.2. Методы определения липолитической 12 активности

1.1.3. Значение липаз в обмене лшшдов 16 у дрожжей

1.1.4. Дрожжи как продуцент липазы. Лока- 18 лизацил липазы в дрожжевой клетке

1.2. Влияние условий культивирования на 21 образование липазы

1.2.1. Состав сред для продуцентов лшоли- 21 тических ферментов

1.2.2. Активаторы и ингибиторы биосинтеза 24 липазы

1.2.3. Методы культивирования дрожжей

1.3. Получение и свойства .црожжевых липаз

1.3.1. Оптимальные температуры и рН для 33 действия препаратов дрожжевых липаз

1.3.2. Субстратная специфичность дрожжевых 33 липаз

1.3.3. Влияние поверхностно-активных веществ 36 на липолитическую активность дрожжей

1.3.4. Влияние ионов металлов на липолити- 39 ческую активность дрожжей

1.3.5. Влияние жирных кислот и фосфолипидов 42 на активность дрожжевых липаз

1.3.6. Выделение и очистка микробных липаз 43 1.4. Значение микробных липаз

1.4.1. Применение микробных липаз

1.4.2. Перспективы использования 50 ЭКСЖРШЕНГАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА П. 2.1. Материалы и методы исследований

2.1.1. Выращивание культуры дрожжей

2.1.2. Выделение и очистка липазы

2.1.3. Аналитические методы 55 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА Ш. 3.1. Влияние условий культивирования на биосинтез липазы культурой Candida paralipolytica

3.1.1. Влияние состава питательной среды

3.1.2. Влияние возраста посевного материала

3.1.3. Динамика роста культуры Candida 76 paralipolytica 739 и биосинтеза липазы

3.1.4. Влияние интенсивности аэрации на 81 биосинтез липазы

3.1.5. Влияние рН среды на рост культуры и биосинтез липазы

3.1.6. Подбор питательной среды дяя выра- 84 щивания посевного материала при полупроизводственном культивировании

3.1.7. Влияние растительных масел и поверх- 86 ностно-активных веществ на образование липазы

3.1.8. Фракционный состав липидов и фосфоли- 88 пидов в биомассе дрожжей Candida paralipolytica

3.1.9. Электронно-микроскопическое изучение 94 ультратонкого строения Candida paralipolytica 739 при различных условиях культивирования

ГЛАВА 1У. 4.1. Получение и свойства ферментного препарата липазы 4.1«I» Характеристика ферментного препарата 107 4.1.2. Субстратная специфичность препарата 112 липазы

ГЛАВА У. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОД!

РЖОШЩАШ

СПИСОК ЛИТЕРАТУШ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биосинтез липазы культурой Candida paralipolytica 739"

Актуальность проблемы. Синтез ферментов микроорганизмами для практического их использования привлекает внимание ученых и технологов многих стран и производство микробных ферментов в настоящее время расширяется.

В Советском Союзе разработка проблемы изучения ферментных препаратов, полученных с помощью микроорганизмов, а также и других препаратов микробного происхождения, ведется путем комплексных исследований с участием научных учреждений Академии наук СССР, республиканских академий, отраслевых институтов, высших учебных заведений и заводских лабораторий. В результате этих совместных исследований создана новая отрасль народного хозяйства - промышленная микробиология, все работы которой координирует Главное управление Микробиологической промышленности при Совете Министров СССР.

Ферменты микроорганизмов нашли применение в самых различных отраслях промышленности (хлебопекарной, пивоваренной, консервной, винодельческой, текстильной, кожевенной, меховой), в бытовой химии, в сельском хозяйстве, в медицине и препаративной биохимии.

Получение ферментов при использовании микроорганизмов имеет ряд преимуществ по сравнению с получением их из животного или растительного сырья. Микроорганизмы обладают высокой скоростью роста, могут развиваться на простых питательных средах; многие ферменты выделяются в культуральную жидкость, что значительно упрощает выделение активных белков и их химическую очистку. Наибольшее применение получили ферменты гидролитической функции гидролизующие пептидные, гликозидные и эфирные связи. В качестве продуцентов различных гидролаз используются культуры мицелиальных грибов, дрожжей и бактерий.

Применение дрожжей рода Candida дня получения ферментов представляет интерес в том отношении, что возможно использование не только ферментов, выделяющихся в культуральную жидкость, но и самих клеток дрожжей в качестве источника микробного белка и витаминов. В результате этого технологический процесс в целом становится безотходным производством.

Состояние вопроса, цель и задачи исследования. Липазы культур рода Candida изучены недостаточно. Возможность их получения в производственных условиях для использования в различных отраслях промышленности практически не исследована. В связи с этим целью работы являлось получение триглицерид-гидролазы (липазы) с помощью дрожжей Candida paralipolytica 739. Для этого было необходимо: I) подобрать питательную среду, оптимальную для биосинтеза липазы; 2) разработать условия культивирования микроорганизма, обеспечивающие максимальное накопление фермента в культуральной жидкости; 3) получить ферментные препараты и изучить их свойства.

Научная новизна. В результате проведенных исследований впервые в нашей стране получена липаза дрожжей C.paralipolyti-са с активностью 6000-10000 ед/мл (1500-2500 ед/мг белка). Показано, что фермент сохраняет активность при 37-40° и не теряет ее при длительном хранении (в высушенном состоянии не менее 1-2 лет при 20-22°). Установлены изменения ультраструктуры дрожжей С «paralipolytica в процессе активного биосинтеза липазы.

Практическая ценность. На основании результатов лабораторных исследований разработан технологический регламент получения липазы дрожжей С. рагаИро1^1са 739, предназначенной для изготовления лекарственных форм химико-фармацевтического препарата, применяемых при лечении расстройств пищеварения.

Полученные в настоящей работе экспериментальные данные по биосинтезу липазы также легли в основу лабораторного технологического регламента по производству липазного препарата "липолитин ГЗх". Технология этого регламента внедрена на экспериментальном заводе биохимических препаратов АН Латвийской ССР. Получаемые по этому методу препараты липазы могут быть использованы в кожевенной и меховой промышленности для обезжиривания кожи, шерсти и щетины. Применение липазы для обезжиривания овчины, проведенное на Алма-Атинском меховом комбинате им. 50-летия СССР, показало возможность ее использования в этой области.

Технический препарат липазы, полученный при высушивании культуральной жидкости вместе с биомассой, может быть использован в качестве добавок к кормам животных и птиц (поросята, телята, цыплята) для лучшего усвоения липидных компонентов корма.

Апробация работы. Результаты работы были доложены на конференции молодых ученых, посвященной 100-летию со дня рождения академика АН ЛатвССР А.М.Кирхенштейна (Рига, 1972); на Всесоюзной конференции "Разработка новых технологических процессов производства полиеновых антибиотиков и микробных ферментов медицинского назначения" (Ленинград, 1976); на Всесоюзной конференции "Методы получения и анализа биохимических препаратов"

Олайне, 1977); было представлено стендовое сообщение на П Всесоюзной конференции "Биосинтез и метаболизм липидов у микроорганизмов" (Москва, 1979).

Публикации» По теме диссертации опубликовано II работ. Объем и структура работы. Диссертация изложена на 147 страницах машинописного текста и содержит введение, обзор литературы, изложение экспериментального материала, обсуждение результатов и выводы. Работа иллюстрирована 25 рисунками и содержит II таблиц. Список литературы включает 213 названий.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Вецозола, Анда Освалдовна

ВЫВОДЫ

1. Подобрана оптимальная питательная среда и условия культивирования для продуцента липазы С.рагаИро1уЫса 739. Питательная среда должна содержать минеральные соли и 2$ соевой муки, 1Й среды - 8,0, температура культивирования 26-28°, аэрация по растворенному в культуральной жидкости кислороду -40$ от максимального насыщения.

2. Максимальный биосинтез липазы до 10000 ед/мл получен в ферментаторах объемом 100 л при вышеуказанной аэрации и перемешивании. Липолитическая активность культуральной жидкости при данных условиях составляет от 6000 до 10000 ел/т, что соответствует 1500-2500 ед/мг белка.

3. Оптимизация среды и подбор условий культивирования микроорганизма позволили повысить биосинтез липазы в 20 раз по сравнению с исходным.

4. Впервые показано, что биосинтез внеклеточной дрожжевой липазы активируется линолевой кислотой.

5. Условия культивирования влияют на формирование ультраструктуры дрожжевой клетки. При максимальном биосинтезе липазы наблюдается образование хорошо выраженного экзофибриллярного слоя и многочисленных инвагинаций цитоплазматической мембраны а также скопления внеклеточного вещества.

6. После очистки фермента получен препарат с активностью от 600 до 1200 ед/мг с содержанием белка 50$ и влаги 9$.

7. При изучении субстратной специфичности препарата липазы по отношению к различным растительным маслам, жирам, синтетическим триглицеридам и твинам, установлено, что лучше всего этим ферментом гидролизуется кукурузное и подсолнечное масла. Значительная активность отмечалась при использовании в качестве субстрата свиного жира. Препарат не обладает активностью при использовании твинов в качестве субстратов.

8. Лиофилизированный ферментный препарат проявляет максимальную активность при 34° и рН 8-8,5. Высушенный препарат сохраняет активность при хранении при 4° не менее двух лет.

9. Препараты липазы С.рагаИро1уЪ1са 739 могут быть использованы в капсулированной форме в медицине и в виде порошка в меховой промышленности для обезжиривания кожи и меха.

РЕКОМЕНДАЦИЯ

Препараты дрожжевой липазы, полученные предложенным нами способом, могут найти следующее применение:

1) в медицине для компенсации энзимной недостаточности желудочно-кишечного тракта. Для этой цели может быть использован очищенный, лиофилизированный препарат;

2) в меховой и кожевенной промышленности для обезжиривания кожи, шерсти и щетины - технический препарат, полученный при высушивании культуральной жидкости после отделения биомассы в распылительной сушилке;

3) в животноводстве в качестве корма - технический препарат, полученный при высушивании культуральной жидкости вместе с биомассой в распылительной сушилке, а также биомасса дрожжей, полученная при производстве двух предыдущих препаратов, содержащая после высушивания в распылительной сушилке около 20$ белка.

Предлагаемые наш препараты имеют ряд преимуществ по сравнению с опубликованными в литературе данными о грибных липазах (Рубан, 1977; Табак, 1979; Зубенко, 1980):

1) Высокая липолитическая активность;

2) короткий срок выращивания (21 час);

3) возможно создать безотходное производство;

4) стабильность фермента при хранении.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Вецозола, Анда Освалдовна, Рига

1. Антонов В.Ф. Липиды и ионная проницаемость мембран. М.: Наука, 1982, 150 е., ил.

2. Аре Р.Ю., Лусиня Б.Я., Плата М.Г. и др. Исследование некоторых свойств липазы Candida paralipolytica 739. Б кн.: Технология микробного синтеза. Рига: Зинатне, 1978,с.85-90.

3. Аре Р.Ю,, Плата М.Г. ,• Цибуль ска Э.К. и др. Очистка и свойства липазы Candida paralipolytica, Тез. докл. научной конференции "Методы получения и анализа биохимических препаратов". НИИТЭХИМ, 1977, с.74.

4. Аре Р.Ю., Пузака Я.Я., Озолинь С.Э., Сударева H.H. Исследование ультрафильтрации дрожжевой липазы. В кн.: Ферментационная аппаратура. Рига: Зинатне, 1980, с.112-120.

5. Аре Р.Ю., Репелис И.А. Возможности применения процесса ультрафильтрации при выделении микробной липазы. Тез. докл. симпозиума "Биотехнология и биоинженерия" »Рига: Зинатне, 1978, т.2, с.12-13.

6. Аренде И.М. Синтез липазы аспергиллами на средах с различными источниками углерода. Ферм, и спирт, пром., 1967,8, с.27-29.

7. Аренде И.М. Биосинтез липолитических ферментов культурой Aspergillus awamori на средах с различными источниками азота. Тр.ВНИИ продуктов брожения, 1970, вып.19,с.139-143.

8. Аренде И.М. Биосинтез липолитических ферментов культурой гриба Aspergillus awamori. Автореф. Дис. . канд. биол. наук М., 197I.

9. Аренде И.М. Синтез липазы культурой гриба Aspergillus awamori в глубинных условиях. В кн.: Ферменты микроорганизмов. М.: Наука, 1973, с.189-196.

10. Аренде И.М., Борисова Т.Г., Выборных С.Н., Володарская Н.С. Использование липазы для удаления липидов из культуральной жидкости Pénicillium nigricans. Прикл. биохим. и микро-биол., 1968, вып.З, с.340-342.

11. Аренде И.М., Дорохов В.В., Турочкина Т.М. Препараты липазы из глубинной культуры Aspergillus awamori 259 и их характеристика. Црикл. биохим. и микробиол., 1974, т. 10, вып.1, с.92-98.

12. Аренде И.М., Дорохов В.В., Турочкина Т.М., Борисова Т.Г. Питательные среды для биосинтеза липазы Aspergillus awamori Црикл. биохим. и микробиол., 1975, т.II, вып.5, с.691-696.

13. Аугустинавичус Бр., Виджюнас А., Марма Б. и др. Применение ферментных препаратов микробиологического происхождения при откорме мясных утят и получаемый экономический эффект.-В кн.: Материалы микробиол. конф. Вильнюс, 1972, с.28-30.

14. Безбородов A.M., Смирнова Л.М., Великанова Г.С. Биосинтез липазы Actinomyces aureofaciens.- Микробиол. пром., 1970, № 3, с.45-50.

15. Бекер М.Е., Кристапсшс М.К., Виестур У.Э. и др. Биотехнология микробного синтеза. / Под ред. М.А.Бекера. Рига: Зинатне, 1980, 350 е., ил.

16. Бирюзова В,И., Лобырева Л.Б. Локализация липазы Candida utilis. Микробиология, 1975, т.44, вып.6, с.1090-1093.

17. Бирюков В.В. Практическое руководство по применению математических методов планирования эксперимента для поиска оптимальных условий в многофакторных процессах. Рига: Зинатне, 1969, 80 с.

18. Богословская Е.П. Жирные кислоты как возможные противоопухолевые агенты. Изв. АН СССР, сер.бисш., 1976, $ 3,с.440-448.

19. Богословская Е.П., Каган В.Е., Глущенко H.H. и др. Сравнительное изучение противоопухолевого действия полиненасыщенной жирной кислоты (линоленовой) и продуктов ее автоокисления.-Изв. АН СССР, сер.биол., 1976,$ 5, с.734-741.

20. Брокерхоф X., Дженсен Р. Липолитические ферменты. М.: Мир, 1978, 396 с., ил.

21. Былинкина Е.С. Проблема перемешивания, массообмена и масштабирования в процессах биосинтеза. Тез. докл. симпозиума "Биотехнология и биоинженерия". Рига, 1978, т.1,с.25-26.

22. Верещагин А.Г. Биохимия триглицеридов. М.: Наука, 1972, -308 с., ил.

23. Виестур У.Э. Аэрация и перемешивание в процессах культивирования микроорганизмов. М.: ОНТИТЭИ Микробиопром., 1972, - 68 е., ил.

24. Виестур У.Э., Кристапсонс М.Ж., Былинкина Е.С. Культивирование микроорганизмов; Биоинженерные основы. М.: Пищевая промышленность, 1980, 232 е., ил.

25. Виестур У.Э., Прокопенко В.Д., Кристапсонс М.Ж. и др. Технические системы культивирования микроорганизмов. Рига: Зинатне, 1978, 32 е., ил.

26. Войнарская В.В. Определение активности липазы в культурах . плесневых грибов. Тр. ШШФС,, вып. 16, 1965, с.64-68.

27. Волкова И.М., Лебедева Ж .Д. Влияние липидного компонента среды на биосинтез липазы грибами. Микробиология, 1979, т.48, вып.4, с.653-657.

28. Глемжа A.A. Проблемы и перспективы производства высоко-очищенных ферментов. Тез. докл. III Всесоюзного научного симпозиума "Получение и применение иммобилизованных ферментов в научных исследованиях, промышленности и медицине".1. Л., 1980, с.7-8.

29. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов. М.: Пище. пром, 1975. 392 е., ил.

30. Гребешова Р.Н., Орещенко Л.И., Карапалкин О.В. Разработка способов применения ферментных препаратов в производстве шелка. Тез. Всесоюзного совещания "Биосинтез ферментов микроорганизмами". М., 1977, с.141-142.

31. Григорьева Т.А., Рожанская Т.И., Селезнева A.A. Изучение процесса ультрафильтрации растворов грибной липазы. -Црикл. биохим. и микробиол., 1977, т.13, вып.6, с.779-781.

32. Звягинцева И.О. Липазная активность некоторых дрожжей. -Микробиология, 1972, т.41, вып. I, с.24-28.

33. Звягинцева И.С., Дмитриев В.В. Локализация и секреция липазы у дрожжей. Тез. докл. на 6 съезде Всесоюзн. мик-робиол. общ-ва "На главных путях научно-технического прогресса", Рига, 1980, с.40.

34. Звягинцева И.С., Дмитриев В.В., Рубан Е.Л., Фихте Б.А. Локализация внеклеточной липазы у дрожжей Candida рага-lipolytica. -Микробиология, 1980, т.49, вып. 3,с.417-420.

35. Звягинцева И.О., Питрюк И.А. Липиды и липазы некоторых . . дрожжей. Микробиология, 1976, т.45, вып. 3, с.470-474.

36. Звягинцева И.С., Рубан Е.Л. Липазная активность протопластов дрожжей Candida lipolytica.- Микробиология, 1972,т.41, вып. 6, с.973-975.

37. Звягинцева И.О., Рубан Е.Л. Диссоциация культуры Candida paralipolyfcica и ее липазная активность. Микробиология, 1973, т.42, вып. 4, с.743-745.

38. Звягинцева И.С., Ушаков В.М. Некоторые данные о локализации липазы Candida lipolytica* Микробиология, 1972,т.41, вып. 4, с.713-716.

39. Зубенко Т.Ф. Условия биосинтеза липазы термотолерантным грибом EMzopus microsporus: Автореф. Дис. . канд. биол. наук. Ташкент, 1980. - 22 с. Ин-т микробиол.1. АН УзССР.

40. Калунянц К.А., Дорохов В.В., Лосякова Л.С., Величко Б.А. Направленный биосинтез ферментов микроорганизмами. Тр. ВНИИ синтезбелок, вып. 2. Ферменты. Получение и применение в народном хозяйстве. 1974, с.3-12.

41. Калунянц К.А., Голгер Л.И. Микробные ферментные препараты (технология и оборудование). М.: Пищепром, 1979, 304 е., ил.

42. Калунянц К.А., Макарова Т.Н., Ивановская H.A. Производство ферментных препаратов в США. М.: ОНТИТЭИ Микробио-пром, 1974, - 23 с.

43. Кейтс М. Техника липидологии. М.: Мир, 1975, 322 е., ил.

44. Классификация и номенклатура ферментов. Отчет Комис. по ферментам Междунар. биохим. союза 1961 / Под ред. Браун-штейна А.Е. М.: Изд. иностр. лит., 1962, 199 с.

45. Котельникова A.B., Звягильская P.A. Биохимия дрожжевых митохондрий. М.: Наука, 1973, 240 с.

46. Кретович В.Л. Основы биохимии растений. М.: Высшая школа, 1971. 474 е., ил.

47. Ксандопуло Г.Б. Влияние некоторых жиров и поверхностно-активных веществ на липазную активность грибов рода Geo-trichum. Микробиология, 1974, т.43, вып. 6,с.Ю01-Ю04.

48. Куимова Т.Ф., Шабанова Е.А., Казаков Г.А. Быстрый отбор микроорганизмов, образующих внеклеточные липазы. Микробиология, 1975, т.44, вып. 2, с. 365-366.

49. Левицкий А.П. Расщепление жиров липазной поджелудочной железы. Биохимия, 1965, т.ЗО, вып. I, с.45-49.

50. Левицкий А.П. Потенциометрический метод определения активности эстераз. Лаборат. дело, 1968, .fê 2, c.III-112.

51. Лобырева Л.Б. Влияние ионов металлов на липолитическую активность дрожжей Candida utilis 295t. Изв. АН СССР, сер. биол., 1973, № 4, с.581-584.

52. Лобырева Л.Б. Липолитическая активность дрожжей Candida utilis 295t. Изв. АН СССР, сер. биол., 1974, Л 6, с.885-891.

53. Лобырева Л.Б., Звягинцева И.С. Липазы и липиды дрожжей. -Успехи микробиологии, 1977, № 12, с.80-101.

54. Лобырева Л.Б., Марченкова А.И. Выделение и некоторые свойства липаз Pénicillium roqueforti. Микробиология, 1980, т. 49, вып. 6, с.924-930.

55. Лобырева Л.Б., Марченкова А.И. Очистка и характеристика липаз Pénicillium roqueforti. Тез. докл. 1У Всесоюзной конференции "Методы получения и анализа биохимических препаратов" Рига: НИЙТЭХИМ, Всесоюзный НИИ прикладной биохимии, 1982, ч.1, с.122.

56. Нестерин М.Ф., Скурихин И.М. Химический состав пищевых продуктов. М.: Пищепром, 1979, 247 с.

57. Патент. Франция № 2.199.974, 1974, Микробная липаза.

58. Патент. Швейцария. кл.С 11:3138, № 540335, 1973, Wer-fahren zur Herstellung von microbieller lipase,

59. Перт С.Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. М.: Мир, 1978, 331 е., ил.

60. Питргок И.А. Сравнительное исследование липидов почвенных и эпифитных дрожжей. Дис. . канд. биол. наук. М., 1977. МГУ.

61. Питрюкй.А., Звягинцева И.О., Бабьева И.П. Фракционный состав липидов некоторых видов дрожжей. Микробиология,1975, т.44, вып. 5, с.813-819.

62. Питрюк И.А., Звягинцева И.С., Бабьева И.П., Рубан Е.Л. Биосинтез липидов и гликогена дрожжами и их липазная активность. Микробиология, 1974, т. 43, вып.6,с.995-1000.

63. Работнова И.Л., Позмогова И.Н. Хемостатное культивирование и ингибирование роста микроорганизмов. М.: Наука, 1979, 208 е., ил.

64. Рубан Е.Л. Микробные липазы. Изв. АН СССР, сер. биол., 1972, Й.З, с.326-332.

65. Рубан Е.Л. Микробные липиды и липазы. М.: Наука, 1977, -216 с.

66. Рубан Е.Л. Микробные ферменты метаболизма липидов. Тез. докл. Всесоюзн. конференции ^Биосинтез и метаболизм липидов у микроорганизмов". М., 1979, с.102-105.

67. Рубан Е.Л. Синтез и гидролиз липидов у микроорганизмов. Прикл. биохим. и микробиол. 1980, т.16,вып.4,с.490-502.

68. Рубан Е.Л., Волкова И.М., Звягинцева И.С. и др. Зависимость липсшитической активности микроорганизмов от состава субстратов и эмульгаторов. Микробиология, 1976, т. 45, вып.2, с.275-279.

69. Рубан Е.Л., Лебедева Ж.Д., Волкова И.М. Липолитическая активность актиномицетов, проактиномицетов и микобакте-рий. Изв. АН СССР, сер. биол., 1974, Ш 4, с.580-583.

70. Рубан Е.Л., Ксандопуло Г.Б. Липазная активность некоторых видов грибов рода Geotriciium. Микробиология, 1973,т.42, & 4, с.688-692.

71. Рубан Е.Л., Ксандопуло Г.Б., Мурзина Л.П. Условия биосинтеза экзолипазы грибом Oospora fragrans. Прикл. биохим. и микробиол., 1978, т.14, вып. 6, с.849-857.

72. Рубан Е.Л., Лобырева Л.Б., Свириденко Ю.Я. и др. Липолитическая активность микроорганизмов, выделенных из различных источников. Црикл. биохим. и микробиол., 1978, т.14, вып. 4, с.499-503.

73. Свириденко Ю.Я., Лобырева Л.Б., Марченкова А.И. и др. Влияние состава среды на биосинтез и свойства экзолипаз микроорганизмов. Прикл. биохим. и микробиол., 1978, т.14, вып. 5, с.677-682.

74. Табак М.Я. Влияние условий культивирования на биосинтез липазы Oospora lactis: Автореф. Дис. . канд. биол. наук. Ташкент, 1979. - 24 с. Ин-т микробиол. Ш УзССР.

75. Фениксова Р.В. Получение концентрированных ферментных препаратов. М.: ЦИНТИ-пищепром., I960. 44 е., ил.

76. Фениксова Р.В. Промышленное получение микробных ферментов.-Тез. докл. на 3 съезде Всесоюзн. микробиолог, общ-ва. Киев, 1968, с.23-26.

77. Фениксова Р.В. Гидролитические ферменты микроорганизмови их применение в народном хозяйстве. 27-е Баховское чтение. М.: Наука, 1972, - 36 е., ил.

78. Шлегель Г. Общая микробиология. М.: Мир, 1972, 476 е.,ил.

79. Щелокова С.С., Табак М.Я., Закиров М.З. Влияние различных источников азота на биосинтез липазы Oospora lactis. -Прикл. биохим. и микробиол., 1978, т.14,вып.4, с.494-498.

80. Яровенко В.Л., Калунянц К.А., Голгер Л.И. Производство ферментных препаратов из грибов и бактерий. М.: Пищепром, 1970, - 444 е., ил.

81. Aisaka К., Terada О. Purification and properties of lipoprotein lipase from Rhlzopus japonicus.- Agric.Biol.Chem., 1980, v. 44, н 4, p.799-805.

82. Aldridge W.H. Some esterases of the rat.- Biochem. J., 195+, v.57, N 4, p.692-702.

83. Anderson M.M., McCarty R.-E,Rapid and sensitive assay for free fatty acids using rhodamine 6G. Analyt. Biochem., 1972, v.-45, N 1, p.260-270.

84. Arima K., Narasaki T., Nakamura Y., Tamura G, Production of lipoprotein lipases by microorganisms. Agric.Biol. Chem., 1966, v.50, IT 5, p.515-516.

85. Atev A.A., Markov K.I. Lipase biosynthesis by the Candidasp. Докл.Болг. AH, 1976, v,29, N 12, p.1809-1811.

86. Babin R., Babin Ph. Importance of the enzyme-substrate ratio in enzymic titrations. Bull.Soc.Bordeaux, 1973» v. 112, IT 4, p.144-148.

87. Barnholz Y., Roitman A., Gatt S. Enzymatic hydrolysis of sphingolipids. J.Biol.Chem., 1966, v*241, N 16,1. P.3731-3737.

88. Barrowman J. A* The activity of rat pancreatic juice enzymes towards naphthoi AS nonanoate. - Biochim.Bi'ophys. Acta, 1969, v*184, N 3, p.653-655.

89. Bartlett G.R. Phosphorus assay in column chromatography.-J.Biol.Chem., 1959, V.23+, N 3, p.466-468.

90. Benzonana G. Studie of bile salts micelles: Properties of mixed oleatedeoxycholate solutions at pH 9,0. Biochim. Biophys.Acta, 1969, v.176, N 4, p*836-848.

91. Benzonana G., Desnuelle P. Action of some effectors on the hydrolysis of long-chain triglycerides by pancreatic lipase. Biochim.Biophys.Acta, 1968, v.164, N 1, p.47-58.

92. Benzonana G., Espozito S. On the positional and chain specificities of Candida cylindracea lipase. Biochim. Biophys.Acta, 1971, v.231, IT 1, pé 15-22.

93. Berry G. Detection of microbial lipase by copper soap formation. J*Bacteriol., 1933, v.25, p.433-434.

94. Bier M. Lipases. In: Methods in Enzymology, 1955, v.l, p.627-642.

95. Boyer J.L1 Activité' lipolytique du tissu adipeux. -BiochLm. Biophys.Acta, 1967, v.137, N 1, p.59-69.

96. Brockerhoff H, Substrate specificity of pancreatic lipase,-Biochim.Biophys.Acta, 1968, v.159, p,296-303.

97. Brockerhoff ÏÏ. Esters of phends as substrates for pancreatic lipase. Biochim*Biophys,Acta, 1969, v.191, N 1, p.181-183.

98. Brockerhoff H,-> Régulation of enzyme activity by enzyme orientation, Bioorg.Chem,, 1974, v.3, p,176-181,

99. Brockerhoff H*, Hoyle R,J,, Hwang P.O. An assay of lipase based on the liberation of acetaldehyde from vinyl oleate.-Anal.Biochem.-, 1970, v.37, N 1, p.26-31.

100. Bucolo G,, Me Croskey E., Whittaker N* Lipase-triggered kinetic assay of serum triglycerides, Glin.Chem,, 1975» v. 21, IT 3, p*424-426.

101. Castberg H.B., Hernell O.Role of serum-stimulated lipase in lipolysis in human milk, Milchwissenschaft, 1975» Bd. 30, N 12, s.721-724.

102. Chakrabarty M.M., Bhattacharyya D., Kundu M.K.A simple photometric method for microdetermination of fatty acids in lipids. J.Amer. Oil Chem.Soc., 1969, v.46, N9,1. P.573-475.

103. Chung J., Scanu A.M. Continuous pH-stat titration method for the assay of lipoprotein lipase activity in vitro. -Anal.Biochem., 1974, v.62, N 1, p.134-148.

104. Desnuelle P. Pancreatic lipase. Adv. in Enzym., 1961, v.23, p.129-132.

105. Desnuelle P. La lipase pancreatique. Biochimie, 1971» v.53, N 8, p.841-852.

106. Downey W.K., Andrews P. Gel filtration applied to the study of lipases and other esterases. Biochem.J., 1965, V.94, N 5, p.642-650.

107. Duncombe W.G. The colorimetric micro-determination of long-chain fatty acids. Biochem. J., 1963, v.88, N 1, p.7-10.it

108. Eijkman C. Uber Enzyme bei Bakterien und Schimmelpilzen.-Z.Bakt.Parasiten., 1901, Abt. 1, Bd.29,N 3, s.841-848.

109. Entressangles B., Desnuelle P. Action of pancreatic lipase on agregated glyceride molecules in an isotropic system. Biochim. Biophys. Acta, 1968, v.159» N 2,p.285-295.

110. Ferroine E.P. Zur Kenntnis der Pettspaltung durch Pan-creassaft. Biochem. Z., 1910, Bd. 23, s.460.

111. Folch J., Lees M., Sloane-Stanley G. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues.-J.Biol.Chem.,1957,v.226, N 1,p.497-509.

112. Fryer T.F., Reiter B., Lawrence R.O. Lipolytic activity of lactic acid bacteria. J.Dairy Sci., 1967 a, v.50, N 3, p.388-389.

113. Fryer I.E., Lawrence R.O., Reiter B. Methods for isolation and enumeration of lipolytic organisms. J.Dairy Sci., 1967 b, v.50, U 4, p.477-484.

114. Fukumoto J. Industrial production of enzymes. In: Biochemical and industrial aspects of fermentation. Tokyo, 1971, p.91-103.

115. Fukumoto J., Iwai M., Tsujisaka J. Studies on lipase. -J.Gen.Appl.Microbiol., 1963, v.9, N 3, p.353-361.

116. Goodman J.J. Adaptive production of amylase and lipase by three species of fungi. Science, 1950, v.112,p.176-178.

117. Guilbault G.G., Hieserman J. Fluorometric substrate for sulfatase and lipase. Analyt.Chem., 1969, v.41, IT 14, p.2006-2009.

118. Gutfriend H. An introduction to the study of enzymes. Oxford 1965, 120 p.

119. Harrison D.E.F. Physiological effects of p02 and pH on growing populations of microorganisms. In: 5th Intern. Sympos. on Continuous Culture of Microorganisms. Oxford, 1971, P.37-38.

120. Hejtmanek M. Examination of human pathogenic fungi in the scanning electron microscope. Acta Universitatis palackianae olomncensis. Pacultatis medicae, 1975» v.76, p.21-24.

121. Hobson P.N., Summers R. Effect of growth rate on the lipase activity of a rumen bacterium. Nature, 1966, v.209, p.736-737.

122. Hofmann A.F., Borgstrom B. Hydrolysis of long-chain mo-noglycerides in micellar solution by pancreatic lipase.-Biochim.Biophys.Acta, 1963» v.70, N 3» p.317-331.

123. Ishinara H., Okuyma H., Ikenawa H. Studies on lipase from Mucor javanicus. Biochim.Biophys.Acta, 1975» v.388, N 3» p.413-422.

124. Iwai M., Okumura I., Tsujisaka Y. The comparison of the properties of two lipase from Penicillium cyclopium Westring. Agric.Biol.Chem.,1975, v.39, N 5» p.1063-1070.

125. Iwai M., Tsujisaka Y., Okamoto Y., Fukumoto J. Lipid requirement for the lipase production by Geotrichum candi-dum Link. Agric.Biol.Chem., 1973» v.37, N 4,p.929-931.

126. Jacks T.J., Kircher H.W. Fluorometrie assay for the hyd-rolytic activity of lipase using fatty acyl esters of4. methylumbelliferone.- Analyt.Biochem., 1967, v.21, p.279-285.

127. Kalle G.P., Gadkari S.V., Deshpande S.V. Ihducibility of lipase in Candida lipolytica. Indian J.Biochem. Biophys., 1972, v.9, N 2, p.171-175.

128. Kaplan A. A simple radioactive assay for triglyceride lipase. Anal.Biochem., 1970, v.33, N 2, p.218-225.

129. Kason C.M., Pavamani I.V.P., Nakai S. Simple test for milk lipolysis and ciianges in rancidity in refrigerated pasteurized milk. J.Dairy Sei., 1972, v.55,p.1420-1423.

130. Kelley T. Rapid assay of labeled free fatty acids in mixtures of labeled lipids. J.Lipid Res., 1968, v.9, N 6, p.799-800.

131. Korn E.D. Clearing factor, a heparin-activated lipoprotein lipase. J.Biol.Chem., 1955, v.215, p.1-14.

132. Kramer D.U., Guilbault G.G. A substrate for the fluoro-metric determination of lipase activity. Analyt.Chem., 1963, v.35, N 4, p.588-589.

133. Lawrence R.C., Fryer T.F., Reiter B. The production and characterisation of lipases from a Micrococcus anda Pseudomonas. J.Gen.Microbiol., 1967 a, v.48, Part 3, p.401-418.

134. Lawrence R.C., Fryer T.F., Reiter B. Rapid method for the quantitative estimation of microbial lipases. Nature, 1967 b, v.213, p.1264-1265.

135. Lu I.T., Liska B.J. Lipase from Pseudomonas fragi. -Appl.Microbiol., 1969, v.18, N 1, p.104-113.

136. Mac Kenzie R.D., Blohm T.R., Auxier E.M., Luther A.O. Rapid colorimetric micromethod for free fatty acids.- J. Lipid Res., 1967, v.8, N 6, p.589-597.

137. Mahadevan S., Dillard C.J., Tappel A.L. A modified colorimetric micro method for long-chain fatty acids and its application for assay of lipolytic enzymes. Anal. Biochem., 1969, v.27, N 3, p.387-396.

138. Marchis-Mouren G., Sarda L., Desnuelle P. Purification of hog pancreatic lipase. Arch.Biochem.Biophys., 1959, v. 83, N 1, p.309-319.

139. Marsh W.H., Fitzgerald P.J. Assay of nanogram levels of triglyceride lipase with radioactive substrate. J. Lipid Res., 1972, v.13, N 2, p.284-287.

140. Mates A., Sudakevitz D. Production of lipase by Staphylococcus aureus under various growth conditions, J. Appl.Bacteriol., 1973, v.36, N 2, p.219-226.

141. Mattson F.H., Volpenhein R.A. Hydrolysis of primary and secondary esters of glycerol by pancreatic juice. J. Lipid Res., 1968, v.9, N 1, p.79-84.

142. Melius P., Doster M.S. Studies on 4-methylumbelliferone caprylate as a substrate for hog pancreatic lipase. -Anal.Biochem., 1970, v.37, N 2, p.395-401.

143. Miller F. Elektronermiikroskopisch-histochemischer Nachweis von saurer Esterase in Lysosomen der Leber. Beitr. Path.Anat., 1964, bd. 150, s.253-261.

144. Moore J.H., Williams D.L. Studies on the composition and structure of the phosphatidylcholine, phosphatidylethano-lamine and triglyceride isolated from rabbit liver. -Biochim.Biophys.Acta, 1965, v.98, IT 1, p.137-150.

145. Morvai-Racz M. Method for the determination of lipase activity and its application to kinetic investigations. -Acta Aliment., 1973, v.2, N 1, p.29-35.

146. Nagaoka K., Yamada Y. Studies on Mucor lipases. Part II.-Agric.Biol.Ohem., 1969, v.33, N 7, p.986-993.

147. Nagaoka K., Yamada Y., Koaze Y. Studies on Mucor lipases. Part 1. Agric.Biol.Ohem., 1969, v.33, N 3, p.299-305*

148. Nakai S., Perrin J.J., Wright V. Simple test for lipolytic rancidity in milk. J.Dairy Sci., 1970, v.53, IT 5, p.537-540.

149. Nantel G., Proulx P. Lipase activity in Escherichia coli.-Biochim.Biophys.Acta, 1973, v.316, N 2, p.156-161.

150. Nurminen T., Suomalainen H. Changes in chemical and enzymatic composition during enzymatic digestion of isolated yeast cell walls containing plasma membrane. Antoneevan Leeuwenhoek. J. Microbiol, and Serol., 1969, v.35» suppl. 1, p.13»

151. Nurminen T., Suomalainen H. The lipolytic activities of the isolated cell envelope fractions of baker's yeast.-Biochem. J., 1970, v.118, IT 5» p.759-763.

152. Nyman M.A., Chargaff E. On the lipoprotein particles of yeast cells. J.Biol.Chem., 1949»v.l80, IT 2, p.741-746.

153. Ogiso P., Sugiura M. Studies on bile-sensitive lipase. Part Y. Ohem. Pharm. Bull., 1969 a, v.17, IT 5,p.1025-1033.

154. Ogiso T., Sugiura M. Studies on bile-sensitive lipase. Part YI. Ohem.Pharm.Bull., 1969 b, v.17,N 5, p.1034-1044.

155. Oi S., Sawada A., Satomura Y. Purification and some properties of two types of Penicillium lipase, I and II, and conversion of types I and II under various modification conditions. Agric.Biol.Chem., 1967, v.31» N 11» p.1357-1366.

156. Ota Y., Miyairu S., Yamada K. Sterol requirement for the lipase production by Candida cylindracea. Agric.Biol. Chem., 1968, v.32, N 12, p.1476-1478.

157. Ota Y., Nakamiya T., Yamada K. Lipase from Candida para-lipolytica. Part IY. Agric.Biol.Chem., 1970, v.34,1. 9, p. 1368-1378.

158. Ota Y., Yamada K. Lipase from Candida paralipolytica. Part I. Agric.Biol.Chem., 1966 a,v.30, N 4, p.351-358.

159. Ota Y., Yamada K. Lipase from Candida paralipolytica. Part II. Agric.Biol.Chem., 1966 b,N 10,p.1030-1038.

160. Ota Y., Yamada K. Lipase from Candida paralipolytica. Part III. Agric.Biol.Chem.,1967,v.31,N 7, p.809-816.

161. Ota Y., Yoshioka K., Minoda Y., Yamada K. Demonstration of the lipid lipase activators produced by Candida paralipolytica. Agric.Biol.Chem.,1973,v.37,N 12,p.2879-2883.

162. Oterholm A., Ordal Z.J., Witter L.D. Glycerol ester hydrolase activity of lactic acid bacteria. Appl.Microbiol., 1968, v.16, N 3, p.524-527.

163. Pancholy S.K., Lynd J.Q. Microbial esterase detection with ultraviolet fluorescence. Appl.Microbiol., 1971, v.22, N 5, p.939-9+1.

164. Parry E.M., Chandan R.C., Shahani K.M. Bapid and sensitive assay for milk lipase. J.Dairy Sci., 1966, v.49,1. N 4, p.356-360.

165. Pasero J., Thibaut J.E.C., Galanakis A. Production of lipase by Candida lipolytica. In:3rd Intern.Spec.Sympos. on Yeasts, Finland, 1973, p.129.

166. Perlman D., Peruzotti G. Microbial metabolites as potentially useful pharmacologically active agents. Adv.Appl. Microbiol., 1970, V.12, p.277-294.

167. Rattray J.B., Schibeci A., Kidby D.K. Lipids of yeasts. -Bact.Rev., 1975, v.39, N 5, p.197-231.

168. Reynolds E.S. The use of lead citrate at high pH as an electronopaque stain in electron microscopy. J.Cell Biol., 1963, v.17, N 1, p.208-212.

169. San Clemente C.L., Vadehra D.V. Instrumental assay of microbial lipase at constant pH. Appl.Microbiol., 1967, v.15, H 1, p.110-113.

170. Satouchi K., Mori T., Matsushita S. Characterisation of inhibitor protein for lipase in soybeen seeds. Agric. Biol.Ohem., 197+, v.38, N 1, p.97-101.

171. Schonheyder F., Volqvartz. Studies on the lipolytic enzyme action. Biochim.Biophys.Acta,1950,v.6,p.147-165.

172. Schousboe I. Triacylglycerol lipase activity in baker's yeast (Saccharomyces cerevisiae). Biochim.Biophys.Acta, 1976, v.424, H3, p.366-375.

173. Seitz E.W. Industrial application of microbial lipases.-J.Amer.Oil Chem.Soc., 1974, v.51, N 2, p.12-16.

174. Singer T.P., Hofstee B.H.J. Studies on wheat germ lipase. Part 1. Arch.Biochem., 1948 a, v.18, N 2, p.229-243.

175. Singer T.P., Hofstee B.H.J. Studies on wheat germ lipase. Part II. Arch.Biochem., 1948 b, v.18, N 2, p.245-259.

176. Sugiura M., Isobe M. et.al. Separate determination of enzymes. Tokyo Yakka Daigaku Kenkyu Nempo, 1971, v.21, p.28-54.

177. Sugiura T., Ota Y., Minoda Y., Yamada K. Detection of lipase-inhibiting substances in Candida paralipolytica and inhibition by phospholipids of C.paralipolytica lipase. Agric.Biol.Chem., 1975 a, v.39, N 1, p.51-56.

178. Sugiura T., Ota Y., Minoda Y. Effects of fatty acids, lipase activator, phospholipids, and related substances on the lipase production by Candida paralipolytica. -Agric.Biol.Chem., 1975 b, v.39, N 9, p.1689-1694.

179. Sugiura T., Ota Y., Minoda Y. Partial characterisation of cell-bound lipase of Candida paralipolytica. Agric. Biol.Chem., 1976, v.40, N 12, p.2479-2480.

180. Tanaka H., Tsuji K., Konishi K. Colorimetric determination of surfactants using lipase. Anal.Lett., 197+» v.7, N 6, p.425-436.

181. Terada 0. Process for producing lipase. US Pat., 1972, N 3692632.

182. Tomizuka N., Ota Y., Yamada K. Studies on lipase from Candida cylindracea. Part 1. Agric.Biol.Chem., 1966 a, v.30, N 6, p.576-584.

183. Tomizuka N., Ota Y., Yamada K. Studies on lipase from Candida cylindracea. Part II. Agric.Biol.Chem., 1966 b, v.30, N 11, p.1090-1096.

184. Tsuzurahara K. et.al. Biphasic effect of taurocholate on lipase activity in the presence of lecithin. J.Biochem. (Tokyo), 197+, v.75, N 3, p.663-665.

185. Ulimann U., Blasius C. Ein modifiziertes, einfaches Verfahren zur Bestimmung der Unterschiedlichen lipolytischen Aktivitäten von Mikroorganismen. Zentralbl.Bakteriol., Parasitenkd., Infektionskr, Hyg., Abt. 1, 1974-, Bd*229,1. N 2, s.265-268.

186. Umemoto Y.A method for the detection of weak lipolysis of dairy lactic acid bacteria on double-layered agar plates.-Agric.Biol.Chem.,1969, v,33, N 11, p.1651-1653.

187. Underkoffler L.A,, Barton H.H., Rennert S.S. Microbiological process report production of microbial enzymes and their applications. Appl.Microbiol., 1958, v.6, N 3» p.212-221.

188. Yamada K., Ota Y. Identification of a new strain and it's lipase activity. J.Agric.Ohem.Soc.Japan, 1963» v.37»1. H 11, p.649-651.

189. Yamaguchi T., Muroya H., Isobe M., Sugiura M. Production and properties of lipase from a newly isolated Chromobac-terium. Agric.Biol.Chem., 1973»v.37» N 5» p.999-1005.

190. Yoshida P., Motai H., Ichishima E. Physical and chemical properties of lipase from Torulopsis ernobii. Biochim. Biophys.Acta, 1968 a, v.154, N 3, p.586-588.

191. Yoshida P., Motai H., Ichishima E. Effect of lipid materials on the production of lipase by Torulopsis ernobii.-Appl.Microbiol., 1968 b, v.16, N 6, p.845-847.

192. Weetall H.H. Storage stability of water-insoluble enzymes covalently coupled to organic and inorganic carriers. -Biochim.Biophys.Acta, 1970, v.212, N 1, p.1-7.

193. Wills E.D. The effect of surface-active agents on pancreatic lipase. Biochem.J., 1955, v.60, N 4,p.529-534.

194. Wills E.D. Lipases. Adv Lipid Res., 1965, v.3, N 4, p.197-201.

195. Zieve F.J. A rapid and sensitive lipase assay using triethylaminoethyl cellulose columns. Anal.Biochem., 1973, v. 51, N 2, p.436-442.