Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биология и экология Anopheles plumbeus Steph. и Aedes geniculatus Oliv. в условиях Дагестана

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Биология и экология Anopheles plumbeus Steph. и Aedes geniculatus Oliv. в условиях Дагестана"

На правах рукописи

Алиева Заира Абдурахмановна

Биология и экология Anopheles plumbeus Steph. и Aedes geniculatus Oliv, в условиях Дагестана

03.00.19 — паразитология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Махачкала 2005

Работа выполнена на кафедре зоологии Дагестанского государственного педагогического университета

Научный руководитель доктор биологических наук, профессор

Исмаилов Шейих Ибрагимович доктор биологических наук, Гордеев Михаил Иванович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Абдулазизов Ахмед Ильясович кандидат ветеринарных наук, старший научный сотрудник Рашидов Аликбер Агавердиевич

Ведущая организация: Дагестанский государственный

университет

Защита диссертации состоится « 30 » ноября 2005 г. в 13 ч. _ мин на заседании диссертационного совета К 212.051.03 при Дагестанском государственном педагогическом университете по адресу: 367003, г Махачкала, ул. М. Ярагского, 57.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Дагестанского государственного педагогического университета

Автореферат разослан

, 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

111.К Алиев

nozm

2.0G2.6

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Комары (сем. Culicidae) составляют один из основных компонентов гнуса в Дагестане. Назойливое преследование и нападение их на людей вызывают сильное беспокойство и снижение производительности труда, у сельскохозяйственных животных снижается продуктивность. Они также являются переносчиками возбудителей опасных заболеваний человека и животных. Исследования биологии, экологии и физиологии всех фаз развития, фенологические наблюдения за сроками основных сезонных явлений дают необходимые сведения для решения ряда теоретических и практических задач. Поэтому исследование кровососущих комаров, распространённых в Дагестане, является актуальным в теоретическом и практическом аспектах.

Дагестан уникален по составу и качеству бальнеологических ресурсов, сконцентрированных на небольшой территории. Это даёт возможность развития индустрии отдыха и оздоровления. Многие рекреационные объекты находятся в лесных массивах, где дупляные водоёмы - один из основных «поставщиков» кровососущих комаров. В Дагестане комары распространены очень широко и не все виды хорошо изучены. Среди эк-зофильных видов большой интерес представляют дупляные комары Anopheles plumbeus Steph. и Aedes geniculatus Oliv.

Недостаточная изученность биологии и экологии кровососущих комаров региона, необходимость критического обобщения имеющихся сведений определили актуальность рассматриваемой проблемы.

Anopheles plumbeus Steph. является одним из основных переносчиков возбудителей трехдневной малярии (Plasmodium vivax) и тропической малярии (Plasmodium falciparum)

Цель и задачи исследований. Цель диссертации - изучение биологии и экологии дупляных комаров Anopheles plumbeus Steph и Aedes geniculatus Oliv , обитающих на территории Дагестана, исследование хромосомного набора кариотипа Anopheles plumbeus Steph. и хромосомных филогенетических связей, проведение молекулярного анализа изменчивости во втором внутреннем транскрибируемом спейсере рибосомной ДНК (ITS2) у Anopheles plumbeus Steph..

В соответствии с поставленной целью сформулированы следующие задачи:

1 Изучить биологические и экологические особенности предимаги-нальных и взрослых стадий дупляных комаров Anopheles plumbeus Steph и Aedes geniculatus Oliv. в условиях Дагестана

2. Провести анализ воды водоёмов в дуплах деревьев, обитаемых личинками Anopheles plumbeus Steph. и Aedes geniculatus Oliv. и определить условия их развития.

3. Проследить суточный ритм активности, сезонную динамику численности и зимовку Anopheles plumbeus Steph. и Aedes geniculatus Oliv. в условиях Дагестана. -—

РОС НАЦИОНАЛЬНАЯ

БИБЛИОТЕКА

---

4. Описать основные морфологические признаки местной популяции комаров An. plumbeus Steph. и A. geniculatus Oliv.

5. Изучить хромосомный набор кариотипа.

6. Провести молекулярный анализ изменчивости во втором внутреннем транскрибируемом спейсере рибосомной ДНК (ITS2) у Anopheles plumbeus Steph.

7. Изучить районирование региона по характеру обилия и плотности дупляных комаров An. plumbeus Steph. и A. geniculatus Oliv.

Научная новизна. В результате проведённых полевых и лабораторных исследований изучены биоэкологические особенности, отличия и сходства предимагинальных и взрослых стадий малярийных комаров Anopheles plumbeus Steph. и немалярийных Aedes geniculatus Oliv. Районирован регион исследований по характеру обилия и плотности дупляных комаров. Впервые изучен хромосомный набор кариотипа. Составлены карты политенных хромосом. Впервые проведён молекулярный анализ изменчивости во втором внутреннем транскрибируемом спейсере рибосомной ДНК (ITS2) у Anopheles plumbeus Steph. Этот анализ используют для более тонкого экологического типирования криптических, т.е. морфологически трудно различимых видов.

В работе представлены обобщенные сведения и новый фенологический материал по сезонной динамике численности комаров An. plumbeus Steph и A geniculatus Oliv Установлена зависимость колебаний динамики численности от количества выпавших атмосферных осадков.

Теоретическая и практическая значимость. Результаты исследований вносят определённый вклад в изучение биологии и экологии комаров рода Anopheles и Aedes в условиях Дагестана.

Материалы диссертации используются в качестве учебного материала студентами биологических, экологических и географических специальностей высших учебных заведений.

Результаты исследований рекомендуется использовать при планировании практических мероприятий направленных на борьбу с комарами.

Апробация. Основные положения диссертации, изложенные в научных публикациях автора обсуждались на ежегодных научных сессиях ДГПУ. На II международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в системе образования» (Тамбов, 2004); научной конференции «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями» (Москва, 2005). По теме диссертации опубликовано 4 работы.

Объём и структура работы.

Диссертация изложена на 147 страницах машинописного текста; состоит из введения, 7 глав, выводов; имеет 11 таблиц, 13 рисунков, 18 фотографий, 5 карт; список цитированной литературы из 174 наименований, в том числе 32 работы иностранных авторов. По диссертационной теме опубликовано 4 работы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава I. Физико-географическая характеристика района исследования

Нашими исследованиями были охвачены все физико-географические высотные пояса Дагестана.

Дагестан расположен на северо-восточном склоне Большого Кавказа и занимает площадь 50,3 тыс. км'. Климат в Дагестане умеренно-континентальный. Самые тёплые месяцы - июль, август (на низменности и в предгорье от +19° до +27°, а в средне- и высокогорной районах от +8° до +17°). Число дней с температурой выше +15°С - 120-150 дней. Средняя температура самого холодного месяца (январь) на низменности от -3° до +1°, а в горной части от -5° до -11°.

Относительная влажность воздуха в среднем составляет 74 % . Характерная черта климата Дагестана - преобладание испаряемости над осадками, но обилие дополнительных, помимо атмосферных осадков, источников увлажнения почвы - реки, оросительные системы, родники пополняют дефицит влажности.

Количество осадков в среднем за год выпадает в низменной части -200-300 мм, внутригорной - 400-600 мм, высокогорной - 600-1000 мм.

В диссертации представлена подробная характеристика каждого высотного пояса, почвенного состава, растительного и животного мира Дагестана.

Глава II. Материал и методика исследования

Полевые работы в Дагестане проводились в течение 2001-2005 гг. Для подтверждения наличия некоторых видов комаров использованы сборы за 1998-2000 гг Собрано и определено 26575 особей кровососущих комаров. Anopheles plumbeus Steph. собрано личинок - 2120, самок - 950, самцов — 680, Aedes geniculatus Oliv Личинок 12800, самок - 1670, самцов - 1450. Всего обследовано 254 дупел. Из них под контрольным наблюдением находилось 42 дупла.

Для выяснения видового состава летающих кровососов сочетали методы кошения в растительности и лова их энтомологическим сачком во время лёта.

С целью изучения суточного ритма активности и сезонной динамики численности, комаров отлавливали «на себе» в течение 20 минут пробирками-морилками по методу А.В. Гуцевича (1937,1943) и О.Н. Сазоновой (1959).

Дупла классифицировали по степени освещённости, диаметру входного отверстия и его расположения над поверхностью земли, глубине, ориентированию. В дуплах определяли глубину, количество воды, температуру и цвет воды.

Сбор личинок производился специальным выкачивателем или путем откачивания воды резиновым шлангом Рели позволяло входное отверстие, то водным сачком (диаметром 5 см).

По определителям А.А. Штакельберга (1937), А.С. Мо1гчадского (1951), А.В. Маслова (1967) проводили определение видового состава. Тщательно изучались морфологические признаки комаров рода Anopheles и Aedes. Основное внимание обращалось на величину сифонапьного индекса личинок (отношение длины сифона к его ширине у основания). Величина сифонального индекса измерялась на тотальных препаратах или спиртованных личинках с помощью окулярмикрометра под бинокуляром (окуляр 8, объектив 4). Для сохранения и дальнейшего изучения различных стадий развития комаров готовили постоянные препараты по методике Е.П. Павловского (1935), заключающейся в обезвоживании объекта и заключении его в канадский бальзам. Всего приготовлено 212 препаратов (гипопигий - 85, личинок- 127).

С целью более детального уточнения видового состава нами предпринята попытка изучения хромосомного набора исследуемых объектов. Для этого был проведен анализ хромосом с использованием чисто химических методов. Наиболее точным для выявления хроматина в раздавленных препаратах является метод с орсеином и уксусной кислотой.

Под бинокулярным микроскопом МБС-9 выделяют слюнные железы у личинок раннего IV возраста в растворе Карнуа (спиртово-уксусная смесь). Они окрашиваются в течении 30-40 мин. лактоацетоорсеином. Хроматин окрашивается в красный цвет. Затем краситель удаляют, раздавливают в 50% уксусной кислоте путем легкого постукивания приправальной иглой по покровному стеклу. При этом хромосомы различаются лучше. Цитоплазма в препарате окрашивается в бледно-зеленый цвет. Всего приготовлено 228 препаратов.

Глава III. Биология и экология водных фаз Anopheles plumbeus Stcph. и Aedes geniculatus Oliv.

Anopheles plumbeus Steph единственный в Дагестане вид из рода Anopheles, который выплаживается в дуплах деревьев вместе с Aedes geniculatus Oliv. Личинки обитают в водоёмах стволовых, прикорневых и пеньковых дупел таких видов деревьев как бук (Fagus orientalis Lipsky), дуб (Quercus robur L ), граб (Carpinus caucasica L), клён (Aser campestres), орех (Juglans), вяз (Ulmus laevis Pall), ясень (Tpaxinus exlesior 1.) и др. Вода в биотопах Ап plumbeus Steph. и A. geniculatus Oliv очень отличается от биотопов личинок других комаров. Для них харак1срны: небольшой объём воды, слабое освещение, тёмная окраска воды, умеренная, почти постоянная в течение суток температура, высокая концентрация органических веществ, щелочная реакция, отсутствие гниения растительности и большая кормность воды. Водный

режим в дуплах не постоянен, оно то заполняется дождевой водой, го пересыхает.

Наиболее удобным способом определения возраста младших фаз личинок An. plumbeus Steph. является измерение воротника, для IV фазы общих размеров тела и соотношение между шириной головы и груди. Возраст личинок А. geniculatus Oliv, определяется по сифону: на I стадии он склеро-тизирован с дистальной стороны на 14 и не пигментирован; на II стадии тёмная пигментация доходит до середины; на III и IV стадии он темно пигментирован и склеротизирован до основания. Для личинок характерно явление сте-реокинеза, а для An. plumbeus Steph. также и отрицательный фототаксис (бегство от света). При усыхании водоёма личинки продолжают жить в иле и жидкой грязи.

Основными способами питания An. plumbeus Steph. и А. geniculatus Oliv, являются безвыборочная фильтрация и обскрёбывание субстрата.

Дыхание личинок происходит двумя способами: кожно-жаберным и стигмальным. У личинок I-III стадии преобладает кожiio-жабер! 1ый тип дыхания, у личинок IV стадии - стигмальный, так как физиологическая деятельность жабер у них прекращается. Личинки An. plumbeus Steph. и А. geniculatus Oliv, любого возраста способны жить в воде бедной кислородом и с большим количеством свободной углекислоты.

III.1. Аиализ воды биотопа из дупла

Из рода Anopheles наименее чувствительны к содержанию большого количества органических веществ личинки Anopheles plumbeus Steph. Также это не вредит и личинкам Aedes geniculatus Oliv. Дупляная вода отличается высоким коэффициентом содержания минеральных и органических веществ в растворенном виде и в виде взвешенных частиц.

Проведенный нами химический анализ воды из дупла дуба дает ряд новых сведений, подтверждающих специфичный характер химизма среды.

Вода приобретает темно-коричневый цвет вследствие присутствия большого количества гуминовых веществ. Интенсивность цвета зависит от PH-среды. При высоком значении РН цветность усиливается. В проведенном анализе РН - 7,05, а цветность - 980 (град), при норме МДУ (максимально допус 1 имый уровень) - 20, т. е. превышает в 50 раз.

При неоднократном проведении анализа на РН реакция всегда щелочная (РН>7) за счет значительного избытка в воде солей К, Na, Ca, Mg. Железо почти отсутствует так как образует с дубильными веществами нерастворимые соли.

Температура воды не выше 20°С, существенных колебаний ночной и дневной температур (2°-3°) не наблюдается.

Величина сухого остатка при современном анализе характеризует содержание растворенных в воде нелетучих минеральных примесей. Сухой остаток - 558 мг/дм3, что является очень высоким показателем.

Колоссально содержание органических веществ специально гуминовых 9,8 г/дм1. Особенный химизм воды обусловлен характером ложа водо-

емов. Это настойка из органических веществ, экстрагируемых в скопившуюся воду из органического субстрата (древесины дупла), представляющего собой составляющего впадину с застоявшейся водой.

Таблица №1

Результаты химического анализа воды из дупла дуба

Наименование Единица Обнаруженная МДУ НД на метод из-

показателей измерения концен!рация мерения

РН 7,05 6-9

Сухой остаток мг/дм 558 1000 ГОСТ 18164-72

Общая жесткость ммоль/дм3 6,0 7,0 ГОСТ 4151-72

Запах баллы 2 2 ГОСТ 3351-74

Цветность град. 980 20 -

Мутность ЕМФ 15

Осадок Коричневого цвета

Окисляемость 67,2

Щелочность 7,2

Нитраты мг/дм3 0,5 45

Нитриты мг/дм3 0,010

Ионы аммония мг/дм 8,8

Хлориды мг/дм 30 350

Сульфаты мг/дм3 72 500

Фториды мг/дм3 0,14 ГОСТ 4386-89

Железо мг/дм3 0,1 0,3 ГОСТ 4011-72

Мышьяк мг/дм Менее 0,005 0,05 ГОСТ 4152-89

Марганец мг/дм3 0010 ГОСТ 4974-72

Медь мг/дм3 Менее 0,001 ГОСТ 4388-72

Свинец мг/дм3 Менее 0,001 ГОСТ Р 51309-99

Ртуть мг/дм3 Менее 0,00005 ГОСТ Р 51212-98

Кадмий мг/дм Менее 0,001 МВИ№ 001-87-99

Кальций мг/дм3 70

Магний мг/дм3 30

БПК (биохимическое потребление кислорода) 02/;| 86

Общее количество неорганических веществ 211 мг/дм3, Са -70 мг/дм3, С1 - 30 мг/дм3, сульфатов - 42 мг/дм3, М§ - 30 мг/дм3, высокое содержание К и Ыа.

Это не характерно для полигумозных (богатых гуминовыми веществами) и дистрофных (бедных электролитами) вод.

Вследствие пониженных процессов фотосинтеза (отсутствие авто-трофов) в водоеме значительно содержание свободной СОг - 1,52% в 1 л воздуха, что превышает норму на 1 %.

Впервые проведен анализ на биохимическое потребление кислорода (БПК) - 86 мг 02/л при норме - 20. Свободный кислород расходуется при

процессе окисления органических веществ и не поступает в воду при ассимиляционных процессах.

Если содержание NH, и БУЖ выше нормы - это показатели присутствия в воде органических веществ животного происхождения. В рассматриваемых водоемах создаются условия, приводящие к дефициту кислорода и обогащению углекислотой Сопоставляя химический анализ воды и население биотопа, можно отменить специфичность данного биотопа. Характерная черта - высокая концентрация органических и неорганических веществ. В таких условиях могут обитать лишь стенотропные организмы, приспособленные к различным условиям (эвритопные формы). Большинство водных организмов не переносят высокой концентрации органических веществ.

Обычно население этих биотопов характеризуется присутствием гетеротрофных организмов, питающихся органическим сестоном. Из растительных организмов присутствует бесцветный флагеллат, неспособный к фотосинтезу. Такие биотопы характеризуются качественно бедным и физиологически высоко специализированным населением, чю указывает на особенность химизма воды.

При проведении анализа воды в испытательно-лабораторном центре ЦГСЭН (санэпиднадзор) использовались современные методы, применяемые в лабораториях.

III.2. Зимовка

Зимовка в состоянии диапаузы, способствует переживанию неблагоприятного времени года. An. plumbeus Steph. и A. geniculalus Oliv, зимуют в двух фазах онтогенеза - яйца и личинки. Яйцевая диапауза у комаров рода Anopheles встречается редко. Из видов, обитающих в Дагестане, она характерна только для дупляного малярийного комара An. plumbeus Steph.

Основной критерий состояния диапаузы - стойкое торможение процессов метаморфоза При яйцевой диапаузе это длительная задержка от-рождения личинок из основной массы яиц. При личиночной диапаузе отсутствует окукление.

У зимующих личинок наблюдаются изменения в поведении и активности питания, накоплении жировых запасов и повышении холодостойкости.

Зимующие личинки An plumbeus Steph. способны выжить после полного промерзания воды. Вмёрзшие в лёд, они переносят 5-7 - дневное пребывание при температуре -5° -8°С и сохраняют жизнеспособность после оттаивания. Наступление диапаузы у личинок определяется световым режимом предшествующего периода Световой режим - главный фактор и в процессе реактивации диапаузируюших личинок.

По нашим наблюдениям в лесных ландшафтах северной части Предгорного Дагестана зимовка личинок дупляных комаров продолжается 4-5

месяцев, а по мере продвижения к югу сё длительность сокращается до 2-3 месяцев.

Холодную зиму и сухие периоды сезона А. geniculatus Oliv переживают в фазе яйца. После окончания эмбрионального развития личинка впадает в состояние диапаузы (покоящиеся яйца). Зимняя яйцевая диапауза А geniculatus Oliv, выражается стойкой и длительной задержкой отрождения личинок. Реактивация зимних диапаузирующих яиц происходит только после некоторого пребывания их в условиях умеренно низких и отрицательных температур.

Яйцо является наиболее устойчивой фазой по отношению к замерзанию и иссушению.

Глава IV. Молекулярно-генетический анализ внутреннего транскрибируемого спейсера рисомной ДНК у дупля-ного малярийного комара Anopheles plumbeus Steph.

Эффективным методом диагностики видов-двойников является по-лимеразная цепная реакция (ПЦР). В настоящее время для выявления межвидовых различий изучается структура рДНК. Рибосомная ДНК малярийных комаров, как и у других эукариот, представлена в геноме множеством копий тандемно повторяющихся транскрибционных единиц. Каждая транскрибционная единица состойi из областей, кодирующих три рибо-сомные субъединицы - 18S, 5,8S и 28S. Эти области разделены двумя внутренними транскрибируемыми спейсерами: 1 и 2. Структура и длина второго внутреннего транскрибируемого спейсера ITS2 различна у разных видов малярийных комаров (Porter, Collins, 1991).

Задачей настоящей работы было изучение структуры 1TS2 у An. plumbeus Steph. и разработка специфических праймеров для молекулярной диагностики данного вида.

В работе использовали фиксированных в спирте личинок An. plumbeus Steph. Молекулярный анализ выполняли в лаборатории популяцион-ной генетики Института общей генетики им. Н.И. Вавилова, РАН.

Для выделения ДНК использовали набор DlAtomTM DNA Prep (Isogene, Москва), принцип действия которого основан на использовании лизирующего реагента с гуанидинтиоцианатом. В реакцию амплификации брали 0,1 мкг, выделенной тотальной ДНК.

ПЦР с образцами ДНК An. plumbeus Steph. проводили с использованием праймеров, описанных ранее (Porter, Collins, 1991; Collins, Paskewit?, 1996) Последовательность прямого праймера была комплементарна консервативной обласIи 5.8S рДНК (5'-IGTGAACTGCAGGACACATG-3'), обратный праймер был выровнен против консервативной области 28S рДНК (5'-ATGCTTAAATTTAGGGGGTA-3'). ПЦР проводили по условиям, описанным ранее (Profit et all., 1999) на термоциклере GeneAmpR PCR

System 2700 (Applied Biosystems, USA). Результаты полимеразной цепной реакции проверяли электрофорезом в 1-2% геле (Agarose Type I, Sigma).

Для секвенирования продукты амплификации выделяли из геля, используя набор JETQUICK Gel Spin Kit (Genomed). Секвенирование продуктов амплификации проводили на автоматическом секвенаторе ABI 373 (Applied Biosystems, USA) с использованием ABI PRISM Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit. Последовательность, полученная в результате секвенирования продуктов амплификации, была зарегистрирована в GeneBank. Выравнивание полученных нуклеотидных последовательностей с последовательностями базы данных GeneBank и филогенетический анализ проводили с использованием пакета филогенетических программ CLUSTAL X 1,8 (Thompson et al., 1997) и Genebe.

В результате ПЦР с праймерами, специфичными к генам 5,8S и 28S рРНК, были получены продукты амплификации (область второго транскрибируемого спейсера, фланкированного участками 5,8-и 28S рДНК) для An. plumbeus Steph. Размеры продуктов амплификации представлены в таблице 2. Для сравнения в таблице приведены размеры продуктов амплификации, полученных у родственных видов малярийных комаров.

Таблица № 2

Продукты амплификации, полученные в результате ПЦР с праймерами, специфичными генам 5,8S и 28S рДНК

Вид Размер продукта, нуклеотидных последовательностей (н.п.)

An. maculipennis Mg. -390

An. messeae Fall. -410

An. beklemishevi Steg. -750

An. claviger Mg. -500

An. plumbeus Steph. -400

Продукт амплификации был секвенирован. Нуклеотидная последовательность ITS2 An. plumbeus Steph. была зарегистрирована в GeneBank под номером AJ555483 (Рис. 1). Область второго внутреннего транскрибируемого спейсера у An. plumbeus Steph. определена впервые.

1 TATAAGTTGA ACGCATATTG CGCATCGTGC GACACAGCAT GATGCACACA TTTTTGAGTG 61 CCTATATTTA TACTATCATT CAAACTACGA GGTGGGGCCC CCGCCGGGTT CCATCGCGTG 121 CATATTGATG CGTTGACCTT CTGCTAGCAG ААТСГСАААС АТГСААААСС GCGTAGCATG 181TTCTCGCATC TGGGTGGCTT CGGCCTACCC GCTTGCTTGC GTGTGCCAGT CCAACGCCTC 241ACCAACGTCC CGTTGGATCG TGTGCGTTCG GTACTGGAGT ACTGCAGCTT GCAGCAGGAT 301 GTAGCAGAAC GGCAACACGC CAAGACCGGG GAAAGATAGT AGCCCTCAAA TAATAATGCC 361 GGCCAAAA

Рис. 1. Нуклеотидный состав второго внутреннего транскрибируемого спейсера ITS2 рДНК у An. plumbeus Steph.

Нуклеотиды 1-80 относятся к участку гена 5.88 рДНК; нуклеотиды 81-329 - второй внутренний транскрибируемый спейсер 1ТБ2 (выделен жирным шрифтом); нуклеотиды 330-368 - участок гена 288 рДНК.

У Ап ркппЬеив 81ерЬ. процентный состав ОС достигает 53,6%. Гомология 1ТБ2 у Ап. р1итЬеш 8ТерИ. с 1ТБ2 у Ап тасиПрепшБ составила 54%.

Анализ нуклеотидного- состава выявил значительные различия в структуре 1Т82 у сравниваемых видов малярийных комаров и впервые позволил подобрать видоспецифичные праймеры для Ап. р1итЬеш 81ерЬ. (табл.3). В таблице 3 приводится обратный праймер. В качестве прямого праймера использовался универсальный праймер, предложенный ранее Ргой е1 а!. (1999).

Таблица № 3

Специфический праймер для диагностики An. plumbeus Steph.

Вил О сз К С- 3 * о » Нуклеотидная последовательность Температура отжига о а, с с «1 Я Ё

.Я о. И е

An.plumbeus Steph Ар! 5' -cgaagccacccagatgcgagaacat-З' 59 226

В результате амплификации с видоспецифичным праймером для Ап. р1итЬеия 81ерЬ. был получен фрагмент 226 нуклеотидной последовательности. В опытах с этим примером для чужих видов ДНК не амплифици-ровалась.

Глава V. Характеристика кариотипа. Хромосомный набор Anopheles plumbeus Steph.

В данной главе изложена краткая характеристика кариотипа. Диплоидное число хромосом 2П = 6 универсальна для всех представителей семейства Culicidae. Наличие двух длинных пар аутосом и короткой пары половых хромосом является общей характеристикой кариотипа.

Рис. 2. Кариотип самки An. plumbeus Steph. Аутосомы объединены общим хро-моцентром Справа внизу - хромосома XL (отделилась от аутосом в процессе приготовления давленного препарата) Состоит из двух гомологов, центромерный район находится вверху

Анализ хромосомного фабора малярийного комара An. plumbeus Steph. выполнен нами впервые. В результате цитогенетического изучения слюнных желез личинок IV-ro возраста было установлено, что, как и у других представителей рода Anopheles, кариотип An. plumbeus Steph. представлен 3 парами хромосом. Гомологичные хромосомы каждой пары тесно сконъюгированы. Половая политенная хромосома XL короткая и одноплечая (рис.2). Второе плечо половой хромосомы недореплидируется и на микрофотографиях отсутствует В клетках слюнных желез самцов хромосома XL состоит только из одного гомолога и выглядит значительно тоньше, чем аутосомы (рис.3). Политенная Y-хромосома характеризуется очень маленьким (всего несколько дисков) диффузным плечом, и на микрофотографиях практически не видна.

Рис. 3. Кариотип самца Ail. plumbeus Steph. Слева плечо 2R, хромосома XL и плечо 2L (сверху вниз по часовой стрелке, объединены общим хромоцентром) Хромосома XL тоньше аутосом, поскольку состоит из одного гомолога. Справа - хромосома 3 (плечи 3R и 3L).

Две пары аутосом, обозначенные в порядке возрастания их длины цифрами 2 и 3, - двуплечие. Длинные плечи обозначены буквой R, короткие - буквой L (Стегний, 1991). Центромерные участки всех 5 плеч поли-тенных хромосом соединены общим хромоцентром. У изученных нами особей An. plumbeus Steph. не выявлены флуктуирующие хромосомные перестройки - инверсии, которые широко распространены у ряда палеарк-тических видов малярийных комаров, таких как An. beklemishevi Steg., An. messeae Fall., An. hyrcanus Pall. По-видимому, An. plumbeus Steph. является хромосомно мономорфным видом.

Глава VI. Морфология и поведение взрослых Anopheles plumbeus Steph. и Aedes geniculatus Oliv., действие на них внешних факторов

VI.1. Окрыление и первые дни имагинальной жизни

Результаты полевых и лабораторных исследований показали, что вы-лупление An. plumbeus Steph. и А. geniculatus Oliv, из куколок происходит в любое время суток. У An. plumbeus Steph., вылупившихся в природе, со-

отношение полов либо 11, либо с небольшим преобладанием самок. В лабораторных условиях при недостаточном питании личинок среди окрыляющихся особей резко преобладают самцы, так как самки менее устойчивы к голоданию. Установлено, чго влияние низких температур на куколок вызывает их значительную смертность, а среди вылупившихся комаров увеличивается количество самок.

Самцы А. geniculatus Oliv, вылупляются почти на сутки раньше, чем самки В первые часы после отрождения, до затвердевания кутикулы, комары мало подвижны. На 1-2 сутки они оседают в зарослях вблизи биотопа. В этот период у них происходит рассасывание личиночных и куколоч-ных органов и гканей. А у самцов, помимо этого, происходит поворот последних сегментов брюшка на 180° и расправление антенн. До завершения этих процессов самцы не способны к роению и копуляции.

Новорожденная самка имеет контрастную окраску из-за целостного чешуйчатого покрова. С возрастом покров темнеет. Яичники у новорожденных самок соответствуют стадиям развития N, I и I-1I. У крупных, хорошо питавшихся самок, яичники развиты лучше.

VI.2. Поиски добычи. Питание

По характеру поведения An. plumbeus Steph. специализирован на питании за счёт крупных стадных животных. Они способны совершать дальние полёты по направлению к более крупным скоплениям добычи. Нахождение добычи голодной самкой An. plumbeus Steph. состоит из двух этапов:

1) поиск крупного скопления добычи (при этом комар руководствуется обонянием);

2) выбор добычи на близком расстоянии (благодаря тепловому чувству).

Самки А. geniculatus Oliv, питаются в основном за счёт мелких млекопитающих и птиц диффутнс 'распрсделённых по местности. Для них характерен подстерегающий тип охоты, вблизи мест выплода. В поиске добычи и при нападении у А geniculatus Oliv, основную роль играет зрение Они воспринимают быстрое мелькание предметов и подстерегают очень подвижную добычу.

Количество выпитой крови An. plumbeus Steph обычно превосходит первоначальный вес тела В связи с питанием на очень подвижной добыче у А. geniculatus Oliv, часто наблюдается прерванное кровососание и повторное нападение самок с кровью в желудке При приеме полной порции крови вес тела увеличивайся в 6-7 раз. Самки, помимо крови, пьют воду и сахаристые жидкости. Последние являются единственной пищей самцов.

Слюна комаров содержит фермент, который не позволяет крови свора-чивагься и способствует её прохождению в желудок комара. Укол комара А. geniculatus Oliv, гораздо болезненнее, чем укол An. plumbeus Steph. и кожная реакция на укус, вызванная секретом слюнных желёз, более выражена.

VI.3. Созревание и откладка яиц

Большое значение имеет изучение гонотрофического цикла того или иного вида комаров, так как это помогает выяснить эпидемиологическую роль каждого вида.

Жизнь взрослой самки комара состоит из ритмично повторяющихся, последовательно сменяющихся гонотрофических циклов. Каждый цикл состоит из трёх периодов:

1) поиск добычи и нападение;

2) переваривание крови и созревание яиц;

3) поиски водоёма и откладка яиц.

У окрылённых самок в течение летнего сезона гонотрофический цикл протекает по двум направлениям: гонотрофическая гармония - достаточность одной порции крови для полного созревания яиц; гонотрофическая дисгармония - одной порции крови недостаточно для полного созревания яиц. Самки А. geniculatus Oliv, способны к развитию и откладке не полной порции яиц, при приёме не полной порции крови. Яйца развиваются только вчасти яйцевых трубочек, соответственно выпитому количеству крови. Это высшая форма гонотрофической гармонии.

Гонотрофическая дисгармония у самок An. plumbeus Steph. обуславливается неполным кровососанием, которое недостаточно для развития яиц

Процесс созревания яиц протекает делением на фазы, предложенные Кристоферсом (1911), с дополнениями, внесёнными Мером (1936):

Фаза I.

Фолликулы состоят из маленьких групп недифференцированных клеток.

Фолликул становится овальным. Ядро яйцевой клетки отличается от ядер фолликулярных клеток.

Фаза II.

В протоплазме яйцевой клетки появляется вокруг ядра венец из мелких желточных зёрен.

Желточные зёрна становятся более крупными и многочисленными. Яйцо увеличивается до половины размеров фолликула.

Фаза III.

Яйцо занимает последовательно 1/2; 2/3; 3/4 фолликула. Ядро скрыто массой желтка и невидимо.

Фаза IV.

Фолликул удлиняется. Питательные клетки едва заметны.

Фаза У.

Структура хориона становится заметна. Происходит откладывание

яйца

В естественных условиях самки An. plumbeus Steph. и А. geniculatus Oliv, откладывают яйца на шероховатых вертикальных поверхностях дупла у воды. При поисках водоёма они руководствуются в основном восприятием

влажности воздуха. У зкое шсное отверстие входа в дупло привлекает внимание самки. Температурное чувство также играет важную роль. Самки предпочитают биотоп с температурой воды от 1-17 до +20 С.

VI.4. Онтогенез летней самки

В зависимости от гемперапуры окружающей среды и способа питания продолжительность жизни самок An. plumbeus Steph. и A. geniculatus Oliv, различна. При более высокой температуре и питании кровью, жизненные циклы самки проходят интенсивнее и продолжительность жизни сё укорачивается. При оптимальных условиях (влажность не менее 75%, температура 1-20° С) и углеводном питании самки An. plumbeus Steph. живут в среднем 55 дней, самцы - 35-40 дней. Продолжительность имагинальной жизни А. geniculatus Oliv, значительно больше - от 50 до 76 дней.

К числу опасностей, подстерегающих самок в природе, относятся:

- истощение при откладке яиц;

- неблагоприятные условия микроклимата дневок;

- недостаточно быстрое нахождение отложившей самкой добычи и смерть от голода;

- рассеяние комаров (залёт по направлениям);

- враги и паразиты.

Интенсивность выплода и смертность определяют возрастной состав комариной популяции. Повторность кладок каждой самки, при неодновременности их у разных особей, создаёт сплошной поток размножения.

Наилучший метод определения физиологического возраста комаров — метод Детиновой (1953) - по числу расширений на яйцевых трубочках. Число кладок соответствует числу расширений в концевой части яйцевой трубки.

В условиях Дагестана, в зависимости от климатических факторов, самка An. plumbeus Steph. за период спорогонии успевает проделать 3-4 гоно-трофических цикла в течение 20 дней.

VT.5. Типология мест выплода и дневок Anopheles plumbeus Steph. и Aedes geniculatus Oliv.

Результаты исследований в различных районах Дагестана показали, что классическими местами выплода An. plumbeus Steph. и А. geniculatus Oliv, являются дупла деревьев с накопившейся в них после дождей водой. В засушливый период - выбоины скалистого русла ручьев и рек, мелкие водоёмы в густозатенённых растительностью местах. В населённых пунктах в такой период местами выплода служат искусственные водовместилища с твердыми стенками (канализационные системы, колодцы, цистерны, бочки). В места выплода дупляных комаров также могут превратиться, посаженные человеком, лесополосы у дорог, у посевных полей, у искусственных прудов и озёр. Обилие деревьев с водоёмами в дуплах в городских парках отдыха, в садах, сельской местности способствует контакту людей с комарами An. plumbeus Steph. и А. geniculatus Oliv.

Сам человек создаёт благоприятные условия для выплода комаров вблизи своего жилья. Так осваивая леса, искусственно отягощает обстановку в отношении малярии и других инфекций.

В данном разделе приводится также подробная характеристика дневок An plumbeus Steph. и А geniculatus Oliv Все установленные дневки можно разделить на следующие типы-

1) однодневные;

2) многодневные;

3) смешанные.

Распределение дупляных комаров по различным i ипам дневок в условиях природы и населённых пунктов зависш от трёх факторов: относительная влажность воздуха; температура; расстояние между местами выплода и дневки.

V1.6. Суточный ритм активности и сезонная динамика численности

Активный лёт и нападение An. plumbeus Steph. и А. geniculatus Oliv, подчинены суточной периодичности. Суточный режим активности слагается из чередующихся в течение суток периодов нападения и покоя

В различных районах Дагестана по мере изменения метеорологических условий наблюдается смещение периодов активности в течение суток.

В Низменных районах Дагестана комары наиболее активны вечером с

1 оОО ^ 100 сОО -т00 г-.

18 до 21 час и утром в 5 -7 тас В это время дупляные комары появляются на безлесных открытых территориях. Днем активность подавляется ярким освещением, с б00 до 1400 час. на открытых ландшафтах нападение единичное. В гуще леса, в густых зарослях поймы рек интенсивное нападение наблюдается и днём. Дневное нападение отмечается и в пасмурную тёплую погоду. Ночью с 2300 до 400 час. комары малоактивны вследствие понижения температуры воздуха (15°-14°С) и повышения влажности воздуха до 75%-85%.

В Предюрных районах также наблюдается два периода активности: с

800 1 г\00 . г.00 -пОО TJ

до 10 часов утра и с 17 до 21 час. вечера. Из-за низких ночных температур воздуха происходит смещение активности на дневное время.

При сопоставлении данных с температурным порогом активности An. plumbeus Steph и А geniculatus Oliv и по нашим наблюдениям в весенний и осенний период активны днем, так как максимальная месячная температура, соответствующая зоне активности, наблюдается в дневное время (1300-lб00 час ) В летние месяцы активность наблюдается в вечерние часы

Данные по фенологии и сезонной динамике численности An. plumbeus Steph и А geniculatus Oliv в условиях Дагестана в отечественной литера1уре очень незначительны Лишь 3 С Кривоносова исследовала сезонные изменения численности An plumbeus Steph. с 1945 г по 1947 г.

Таблица № 4

Биологический сооав комаров на дневках различного типа (средние данные за 2002 г.)

Тип дневки

Различные • категории комаров

Однодневные многодневные или временные

По нашим наблюдениям для территории Дагестана характерно два подъема численности комаров An. plumbeus Steph - позднее-весенний и максимальный осенний, и два спада - летний и позднее-осенний. При изучении динамики вылета А. geniculatus Oliv, из отдельных дупел отмечены три волны вылета В темных дуплах картина такая же, но с отставанием на 2 декады. Появление окрылённых комаров в предгорье, в сравнении с низменностью,

весной задерживается на 10-15 суток и, соответственно, осенью раньше на этот срок исчезают.

При сопоставлении литературных данных и наших наблюдений отмечается значительное разнообразие типов сезонного хода численности в разные годы, так как численность подвержена значительным колебаниям от года к году, в зависимости от выпадаемых осадков.

VII. Эпидемиологическое значение Anopheles plumbeus Steph. и Aedes geniculatus Oliv, и меры борьбы с ними

Комары (сем. Culicidae) с давних пор привлекают к себе внимание ученых как переносчики возбудителей опасных заболеваний протозойной, бактериальной и вирусной природы.

Объектом вредоносного действия этих кровососов выступает человек и домашние животные. Комары - временные паразиты, так как их контакт с хозяином бывает кратковременным. Срок контакта определяется временем, потребным для прокалывания кожи и насыщения кровью. Через питание (кровь, соки растений, нектар цветов) комары осуществляют контакт с большим кругом позвоночных животных и жидкими выделениями растений. При этом они могут получать различные микроорганизмы: гельминты, грибки, простейшие, бактерии и вирусы.

В работе рассматриваются основные факторы влияющие на эпидемиологическое значение данных видов комаров:

1) степень восприимчивости к заражению плазмодиями;

2) численность;

3) продолжительность сохранения комарами спорозоитов в слюнных железах;

4) связь с человеком;

5) способ охоты.

В наших исследованиях, для анализа состава и закономерностей распространения комаров An plumbeus Steph. и A. geniculatus Oliv, на территории Дагестана, использован банк данных DIPKAV и картографическая система ZOOMAP (ГМ. Абдурахманов, Ш.И Исмаилов, А. Л. Лобанов, 1995). Использованы карты, позволяющие выявить потенциальные очаги заболеваний.

ВЫВОДЫ

1. В условиях Дагестана нам удалось достаточно полно изучить биологию и экологию An. plumbeus Steph. и A. geniculatus Oliv.

2. Проведенный химический анализ воды из биотопов в дуплах деревьев, обитаемых личинками, показывает специфичный характер химизма воды. Реакция воды - щелочная (РН>7), цвет - темно-коричневый (из-за высокого содержания гуминовых кислот). Впервые проведенный анализ на БПК (биохимическое потребление кислорода) объясняет дефицит кислорода и из-

быток углекислоты. Высокая концентрация органических и неорганических веществ.

3. Местами выплода An. plumbeus Steph. и A. geniculatus Oliv, являются дупла деревьев со скоплениями воды. В засушливый период - выбоины скалистого русла ручьев и рек, мелкие водоемы в густозатененных растительностью местах. В населенных пунктах в такой период местами выплода служат искусственные водовместилища с твердыми стенками (канализационные системы, колодцы, цистерны, бочки и др.).

4. An. plumbeus Steph. и А. geniculatus Oliv, зимуют в двух фазах онтогенеза яйца и личинки. Яйцевая диапауза у комаров рода Anopheles, обитающих в Дагестане, наблюдается только у дупляного малярийного комара An. plumbeus Steph. Личинки, вмерзшие в лед, переносят 5-7 -дневное пребывание при температуре -5° - 8°С и сохраняют жизнеспособность после оттаивания. В лесных массивах северной части Предгорного Дагестана длительность диапаузы 4-5 месяцев, а по мере продвижения к югу длительность сокращается до 2-3 месяцев.

5. Проведен молекулярно-генетический анализ внутренного транскрибируемого спейсера рисомной ДНК у Anopheles plumbeus Steph. В результате полимеразной цепной реакции (ПЦР) с праймерами, специфичными к генам 5,8S и 28S рРНК, были получены продукты амплификации (область второго транскрибируемого спейсера, фланкированного участками 5,8-и 28S рДНК) для An plumbeus Steph. У An. plumbeus Steph. процентный состав GC достигает 53,6% Анализ нуклеотидного состава выявил значительные различия в структуре ITS2 и впервые позволил подобрать видоспецифичные праймеры для An. plumbeus Steph.

6. Определение кариотипа позволило провести цитодиагностику дупляного малярийного комара An. plumbeus Steph. Гомологичные хромосомы каждой пары тесно сконъюгированы. Половая политенная хромосома XL короткая и одноплечая. В клетках слюнных желез самцов хромосома XL состоит только из одного гомолога и выглядит значительно тоньше, чем ауто-сомы. Политенная Y-хромосома характеризуется очень маленьким (всего несколько дисков) диффузным плечом. Две пары аутосом - двуплечие. Цен-тромерные участки всех 5 плеч политенных хромосом соединены общим хромоцентром Не выявлены флуктуирующие хромосомные перестройки -инверсии. An plumbeus Steph. является хромосомно мономорфным видом.

7. Для территории Дагестана характерно два подъема численности комаров An. plumbeus Steph. - позднее-весенний и максимальный осенний, и два спада - летний и позднее-осенний.

8 В динамике вылета A. geniculatus Oliv, отмечены три волны (июнь, июль, август) В темных дуплах прослеживается отставание вылета на 2 декады. Появление окрылённых комаров в предгорье, в сравнении с низменностью, весной задерживается на 10-15 суток и, соответственно, осенью раньше на этот срок исчезают.

9. Численность подвержена значительным колебаниям по годам в зависимости от выпадаемых осадков. Поэтому в наших наблюдениях отмечается значительное разнообразие типов сезонного хода численности в разные годы.

10. Многократные исследования, проведенные с целью определения суточной активности комаров An. plumbeus Steph. и А. geniculatus Oliv, в низменных районах Дагестана показали, что наибольшая активность в летнее время наблюдалась вечером с 1800 до 21°°ч. и утром с 500 до 700 часов. В это время дупляные комары появляются на безлесных открытых территориях, а в предгорных районах, в связи с более низкими ночными температурами, комары данных видов наиболее активны в дневное время.

Практические рекомендации

Дагестан является эпидемиологически неблагоприятной территорией, так как граничит с мировым ареалом трехдневной малярии, где паразитарные системы наиболее устойчивы. В уничтожении дупляных комаров - переносчиков инфекций и инвазий человека и животных, - наиболее эффективным является цементирование дупел для ликвидации мест выплода. Обработку мест выплода рекомендуется проводить в период максимальной плотности личинок, т.е. после выпадения атмосферных осадков.

Исследования хромосомного набора кариотипа открывают дополнительные возможности для борьбы с дупляными комарами новыми генетическими методами. Наиболее перспективным считается генно-инженерный подход с целью получения трансгенных комаров, интродуцируя в геном «антипаразитарные гены», приводящие к снижению плодовитости и фертильно-сти, а также к увеличению летальности при скрещивании с исходной популяцией

Список опубликованных работ:

1. Алиева ЗА Гидробиологический очерк мест развития водных фаз Anopheles plumbeus Steph // Интеграция науки и образования - важнейший фактор развития высшей школы' Тезисы докладов научной сессии преподавателей и сотрудников Даггоспедуниверситета Вып. 8 Ч. 2. - Махачкала 2003. - С.58-59.

2 Алиева ЗА К биологической характеристике биотопа, населяемого личинками Anopheles plumbeus Steph. и Aedes geniculatus Oliv, по анализу воды из дупла дуба (Guercus robur L.). // Фундаментальные и прикладные исследования в системе образования: Материалы II международной научно-практической конференции. Ч. 1. - Тамбов 2004. - С. 13-15.

3 Алиева ЗА К экологии и биологии дупляных комаров Anopheles plumbeus Steph и Aedes geniculatus Oliv, в условиях Предгорного Дагестана // Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями' Материалы научной конференции. - Москва. ВИГИС 2005. - С 7-9.

4 Алиева ЗА Яйцевая и личиночная диапауза Anopheles plumbeus Steph и Aedes geniculatus Oliv и их реактивация // Сборник научных работ, посвященный B.C. Бессонову. Нальчик 2005 - С 19-22.

Подписано в печать 20.10 05 Формат 60x84 1/16

Печать офсетная. Усл.п.л. 1,4. Уч.-изд.л 1,4.

Тираж 100 экз. Заказ №

Издательско-полиграфический центр ДГУ г. Махачкала, ул. М. Ярагского, 59 е

#20782

РНБ Русский фонд

2006-4 20626

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Алиева, Заира Абдурахмановна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. Физико-географическая характеристика района исследования.

ГЛАВА II. Материалы и методика исследований.

ГЛАВА III. Биология и экология водных фаз Anopheles plumbeus

Steph. и Aedes geniculatus Oliv.

3.1. Условия существования яиц.

3.2. Личиночное развитие.

3.3. Поведение личинок и куколок.

3.4. Питание личинок.

3.5. Дыхание личинок и куколок.;.

3.6. Влияние абиотичных факторов.

3.7. Зимовка.

ГЛАВА IV. Молекулярно-генетический анализ внутреннего транскрибируемого спейсера рисомной ДНК у дупляного малярийного комара Anopheles plumbeus Steph.

ГЛАВА V. Характеристика кариотипа. Хромосомный набор Anopheles plumbeus Steph.

ГЛАВА VI. Морфология и поведение взрослых Anopheles plumbeus " Steph. и Aedes geniculatus Oliv. Действие внешних факторов

6.1. Окрыление и первые дни имагинальной жизни.

6.2. Поиск добычи, питание, пищеварение.

6.3. Созревание и откладка яиц.

6.4. Онтогенез летней самки.

6.5. Суточный ритм активности и сезонная динамика численности.

6.6. Типология мест выплода и дневок Anopheles plumbeus Steph. и Aedes geniculatus Oliv.

ГЛАВА VII. Эпидемиологическое значение Anopheles plumbeus

Steph., Aedes geniculatus Oliv. и меры борьбы с ними.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биология и экология Anopheles plumbeus Steph. и Aedes geniculatus Oliv. в условиях Дагестана"

Актуальность исследования. Комары, малярийные и немалярийные, составляют основной компонент гнуса в Дагестане. Они являются наиболее распространёнными насекомыми из группы назойливых кровососов. Благоприятные природные и климатические условия Дагестана способствуют их массовому выплоду и развитию. Назойливое преследование и нападение комаров на людей вызывают не только сильное беспокойство, но и снижают производительность труда работающих на открытом воздухе (Калмыков. 1955). У сельскохозяйственных животных заметно понижается продуктивность (надои молока, прирост массы тела). От многочисленных укусов и токсического действия слюны кровососущих комаров особенно сильно страдает молодняк, который как следствие худеет и прекращает рост (Павлов, 1973). Помимо этого комары являются переносчиками возбудителей многих тяжелых инфекционных инвазионных болезней как человека так и животных. Установлено 45 видов комаров - переносчиков возбудителей болезни человека, из комаров выделено-143 вируса. Вирусы могут циркулировать в природе независимо от существования человека. По мере обнаружения новых вирусов число видов-переносчиков увеличивается из года в год.

Изучение комаров - переносчиков трансмиссивных заболеваний на Кавказе началось ещё в конце XIX века. Первое, по времени, сообщение о комарах Дагестана было сделано П.С. Палласом (1771), описавшим новый вид An. hyrcanus.

После установления роли комаров в распространении малярии и их значение в эпидемиологической цепи плазмодий - комар - человек Д. Россом (1895) и Б. Грасси (1898) анофелогенная фауна Дагестана пополнилась новыми видами: В.В. Фавр (1903) обнаружил An. maculipennis tipicus и An. maculipennis sacharovi; A.B. Гаккот и M.A. Барбор - An. maculipennis messeae; C.K. Еникалопов (1928-1948) - An. maculipennis subalpinus, An. plumbeus, An. bifurcatus, An. algeriensis, An. superpictus. Из немалярийных видов в пределах

Дагестана С.К. Ениколоповым (1928-1948) было обнаружено: 8 видов Aedes, 6 видов Gulex, 4 вида Theobaldia и по одному виду Mansonia и Uranotaenia.

Первое обширное исследование по малярии и малярийным комарам в России принадлежит В.В. Фавру (1903). В своей книге он впервые привёл статистические данные о заболеваемости малярией в Дагестане:

Более подробные исследования по комарам в Дагестане начались лишь с 1928 года, когда по инициативе А.Я. Тер-Джаньяна в Махачкале был основан Тропический институт. В 1932 году к работе подключился Московский тропический институт возглавляемый Е.И; Марциновским. Все исследования велись работниками малярийных станций. Позже в 1933 году И.Н.Пикуль назначается'директором Дагестанского тропического института. Уже к 1936 году под его руководством было организовано 13 малярийных пунктов и 18 малярийных станций; Была изучена биология и фенология малярийных комаров, эпидемиология малярии в республике, разрабатывались и внедрялись в практику различные противомалярийные мероприятия. Всё это отразилось в его докторской диссертации «Эпидемиология малярии в Дагестане и перспективы её ликвидации».

Фауне и экологии кровососущих комаров Кавказа и смежных регионов посвящены работы: А.А.Штакельберга (1927), А. Месса: (1929), А.Гуцевича (1932), Н.Олсуфьева (1939), В:Беклемишева (1944, 1949) Г.Багирова (1953), Г.Канчавели (1955), А.Мончадский (1956), Г.Нагиева (1962), В.Морозова (1965), В.Стегния, Н.Сиповича (1991).

Неоценимый вклад в изучение комаров в Дагестане внесли: А.П. Мар-чевский (1938), А.П.Гасанов (193 8), С.К.Ениколопов (1930, 1931, 1937, 1947, 1948,, 1954, 1956). В частности, это изучение возрастного состава комариной популяции, распространение отдельных видов комаров; их естественные биотопы и фенологические наблюдения в различных пунктах Дагестана. Результаты этих работ были опубликованы в сборниках «Учёные записки Дагестанского института эпидемиологии, микробиологии и медицинской паразитологии» (1947, 1956).

В тот же период в Дагестане З.Ф.Кривоносова (1946) занималась изучением биологии, экологии и эпидемиологической роли Anopheles plumbeus Steph. Ею были опубликованы статьи «К вопросу о продукции Anopheles plumbeus Steph. в дуплах деревьев», «Копуляция Anopheles plumbeus Steph.».

Всвоей работе «К вопросу об экологии Anopheles plumbeus Steph. и его эпидемиологической роли»(1947) З.Ф.Кривоносова указывает на высокий ооцистный индекс (3%) An. plumbeus Steph. В 1967 году издается работа Г.Н.Волика «Кровососущие комары в Кизлярском районе Дагестана». Большой вклад в изучение биологии и экологии кровососущих на Кавказе внёс профессор Ш;И.Исмаилов, что нашло отражение в его многочисленных работах (1967-1996 гг.).

Исследования, проведенные ранее, показали, что видовой состав и соотношение основных компонентов гнуса, их сезонная динамика численности, суточный ритм активности, биологическое и ландшафтное распределение значительно меняются от низменности до верхних поясов гор. И эти вопросы требуют дальнейших исследований.

Дагестан - уникальный регион России - взморье, горы и предгорные районы которого по составу и качеству бальнеологических ресурсов, сконцентрированных на относительно небольшой территории, не имеет себе аналогов. Всё это даёт возможность развития индустрии отдыха и оздоровления. Многие рекреационные объекты находятся в лесных зонах, где дупляные водоёмы - один из основных «поставщиков» кровососущих комаров. Не у всех представителей кровососущих комаров хорошо изучены биология, экология и особенно эпидемиологическое значение. В частности, недостаточно исследованы такие виды,как An. plumbeus Steph., An. claviger, An. bifurcates, An. superpictus, Aedes geniculatus Oliv. Каждый из них может быть более или менее опасен в определённых условиях. Это обусловлено не только морфо-физеологическими особенностями, но и сложным взаимодействием их со средой, частотой встречаемости и численностью. Среди экзофильных видов большой интерес представляют дупляные комары An. plumbeus Steph. и

V.

Aedes genigulatus Oliv.

Дагестан входит в зону устойчивого риска, так как все три условия, необходимые для распространения малярии, здесь присутствуют. Во-первых, наличие переносчиков-комаров Anopheles. Во-вторых, число дней с температурой выше 15 °С (120-150 дней), т. е. наличие подходящих температур для развития комаров и паразитов в их организме. В-третьих, наличие источника - больных или паразитоносителей, что весьма вероятно в результате миграции населения (сезонные рабочие, беженцы, коммерсанты, туристы и.т.д).

Локальные вспышки малярии в Дагестане (Нижнее Викри в 1982-1983 гг.; Избербаш, 1996-1998 гг.) и туляремии (Тарумовский и Буй-накский районы, 1989-1992 гг.) от завозных источников показывают недостаточную изученность фауны кровососущих комаров региона.

В связи с этим актуальность данной темы становится бесспорной.

В задачу наших исследований входило:

1. Изучить биологические и экологические особенности дупляных комаров An. plumbeus Steph. и Aedes genigulatus Oliv. в условиях Дагестана (предимагинальных и взрослых стадий).

2. Описать основные морфологические признаки местной популяции An. plumbeus Steph. и Aedes genigulatus Oliv.

3. Произвести анализ воды биотипа, характерного только для дупляных комаров.

4. Проследить суточный ритм активации, сезонную динамику, их численность, определить особенности зимовки An. plumbeus Steph. и Aedes genigulatus Oliv.

5. Изучить хромосомный набор кариотипа и хромосомные филогенетические связи.

6. Выяснить влияние абиотических факторов на рост и развитие личинок.

7. Провести молекулярный анализ.

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Алиева, Заира Абдурахмановна

выводы

1. В условиях Дагестана нам удалось достаточно полно изучить биологию и экологию An. plumbeus Steph. и A. geniculatus Oliv.

2. Проведенный химический анализ воды из биотопов в дуплах деревьев, обитаемых личинками, показывает специфичный характер химизма воды. Реакция воды - щелочная (РН>7), цвет - темно-коричневый (из-за высокого содержания гуминовых кислот). Впервые проведенный анализ на БПК (биохимическое потребление кислорода) объясняет дефицит кислорода и избыток углекислоты. Высокая концентрация органических и неорганических веществ.

3. Местами выплода An. plumbeus Steph. и A. geniculatus Oliv. являются дупла деревьев со скоплениями воды. В засушливый период - выбоины скалистого русла ручьев и рек, мелкие водоемы в густозатененных растительностью местах. В населенных пунктах в такой период местами выплода служат искусственные водовместилища с твердыми стенками (канализационные системы, колодцы, цистерны, бочки и др.).

4. An. plumbeus Steph. и A. geniculatus Oliv. зимуют в двух фазах онтогенеза яйца и личинки. Яйцевая диапауза у комаров рода Anopheles, обитающих в Дагестане, наблюдается только у дупляного малярийного комара An. plumbeus Steph. Личинки, вмерзшие в лед, переносят 5-7 -дневное пребывание при температуре - 5° - 8°С и сохраняют жизнеспособность после оттаивания. В лесных массивах северной части Предгорного Дагестана длительность диапаузы 4-5 месяцев, а по мере продвижения к югу длительность сокращается до 2-3 месяцев.

5. Проведен молекулярно-генетический анализ внутренного транскрибируемого спейсера рисомной ДНК у Anopheles plumbeus Steph. В результате по-лимеразной цепной реакции (ПЦР) с праймерами, специфичными к генам 5,8S и 28S рРНК, были получены продукты амплификации (область второго транскрибируемого спейсера, фланкированного участками 5,8-и 28S рДНК) для An. plumbeus Steph. У An. plumbeus Steph. процентный состав GC достигает 53,6%. Анализ нуклеотидного состава выявил значительные различия в структуре 1TS2 и впервые позволил подобрать видоспецифичные праймеры для An. plumbeus Steph.

6. Определение кариотипа позволило провести цитодиагностику дупля-ного малярийного комара An. plumbeus Steph. Гомологичные хромосомы каждой пары тесно сконъюгированы. Половая политенная хромосома XL короткая и одноплечая. В клетках слюнных желез самцов хромосома XL состоит только из одного гомолога и выглядит значительно тоньше, чем аутосомы. Политенная Y-хромосома характеризуется очень маленьким (всего несколько дисков) диффузным плечом. Две пары аутосом - двуплечие. Центромерные участки всех 5 плеч политенных хромосом соединены общим хромоцентром. Не выявлены флуктуирующие хромосомные перестройки - инверсии. An. plumbeus Steph. является хромосомно мономорфным видом.

7. Для территории Дагестана характерно два подъема численности комаров An. plumbeus Steph. - позднее-весенний и максимальный осенний, и два спада-летний и позднее-осенний.

8. В динамике вылета A. geniculatus Oliv. отмечены три волны (июнь, июль, август). В темных дуплах прослеживается отставание вылета на 2 декады. Появление окрылённых комаров в предгорье, в сравнении с низменностью, весной задерживается на 10-15 суток и, соответственно, осенью раньше на этот срок исчезают.

9. Численность подвержена значительным колебаниям по годам в зависимости от выпадаемых осадков. Поэтому в наших наблюдениях отмечается значительное разнообразие типов сезонного хода численности в разные годы.

10. Многократные исследования, проведенные с целью определения суточной активности комаров An. plumbeus Steph. и A. geniculatus Oliv. в низменных районах Дагестана показали, что наибольшая активность в летнее время наблюдалась вечером с 1800 до 2100ч. и утром с 500 до 700 часов. В это время дуп-ляные комары появляются на безлесных открытых территориях, а в предгорных районах, в связи с более низкими ночными температурами, комары данных видов наиболее активны в дневное время.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Алиева, Заира Абдурахмановна, Махачкала

1. Абдурахманов Г.М. Восточный Кавказ глазами энтомолога. Махачкала: Дагкнигоиздат, 1988. 136 с.

2. Абдурахманов Г.М., Исмаилов Ш.И., Лобанов А.Д. Новый подход к проблеме объективного зоогеографического районирования. Махачкала: Изд. Даггоспедуниверситета, 1995. С. 87-95.

3. Авдеева Т.Я. Встречаемость Plasmodium в теле Anopheles и её изменения с возрастом комара. // Вопросы физиологии и экологии маляр. Комара. 1939. Вып. 1.С. 100-108.

4. Акаев Б.А. Физическая география Дагестана. Москва, «Школа». 1996. С. 15-18, 177-220.

5. Алёкин О.А. Основы гидрохимии. Ленинград. 1970. С. 89-125.

6. Алексеев А.Н. Перспективы использования генетических методов борьбы с кровососущими двукрылыми переносчиками болезней человека.// Паразитология, 1967. т. 10. Вып. 2, С. 126-135.

7. Алиев Ф.Ф. Кровососущие двукрылые насекомые, нападающие на копытных в районах Кавказа.// В кн.: Пробл. паразитологии. Киев, 1963. С. 304-306.

8. Алтухов Ю.П. Генетические процессы в популяциях. М.: Наука, 1983. 279с.

9. Ю.Амбарцумян Г.Г. Материалы по изучению гнуса.и меры борьбы с ним в Араратской равнине. // Тр. Всесоюзн. н-иссл. инст. вет. санит. № 26, Тюмень, 1965. С. 307-318.

10. Ананян С.А. Новые для СССР, передающиеся комарами возбудители вирусных инфекций. // Матер. XII науч. сессии инст. полиомиелита и вирусных энцефалитов. М., 1965. С. 194-195.

11. Артемьев М.М. Комары анофелес переносчики малярии в СССР. // Борьба с малярией экологически безопасными методом. М. 1984, часть 2 . С. 44-60.

12. Багиров Г.А., Алирзаев Т.У., Зиновьева А.Ф., Абдуллаев Р.А., Касумо-ва З.Б. Влияние изменений экологических условий на фауну кровососущих комаров Баку и Апшеронского полуострова. // Мед. паразитол. и паразитар. болезни. 1986.№ 1, С. 16-18.

13. Н.Бардош В., Даниелова В. Вирус Tahuna вирус, выделенный из комаров в Чехословакии. // Журнал гигиены, эпидемиол., микробиол., иммунолог. (Прага). 1959. т. 3, № 2, С. 182-183.

14. Бардош В., Чупкова Е. Вирус Chalovo второй арбовирус, выделенный из комаров в Чехословакии. // Журнал гигиены, энтомологии, микробиологии, иммунологии. (Прага). 1962. № 6, С. 255-260.

15. Беззубова В.П., Ваншток А.П. Сезонные явления в жизни массовых видов комаров Aedes в Новосибирской области. // Мед. паразит, и парази-тарн. болезни, 1965. Вып. 1. С. 19-22.

16. Беклемишев В.Н. Круг естественных переносчиков трансмиссивных болезней, поражающих человека. // Зоол. ж., 1955, т. 34. Вып. 1, С. 316.

17. Беклемишев В.Н. Планировка населенных пунктов и проблема малярии. М., организации на новом этапе. // Мед. паразитол. и паразит, болезни. 1952. т. 3. Вып. 6., С. 460-480.

18. Беклемишев В.Н. Экология малярийного комара. М. 1944. 299 с.

19. Беклемишев В.Н., Виноградская О.Н. и Митрофанова Ю.Г. О гонотро-фическом цикле Anopheles. Мед. паразит. 1943. Т. III, 460 с.

20. Беклемишев В.Н., Сергиев П.Г. Противомалярийная рационализация сельского хозяйства и населённых пунктов сельских местностей. Мед. паразит. 1942, т. XI. 3.

21. Беклемишев В.Н., Шипицина Н.Х. Сезонные явления в жизни малярийных комаров в Советском Союзе. Медгиз. Москва. 1957.

22. Благовещенский Д.И., Брегетова Н.Г., Мончадский А.С. Активность нападения комаров в природных условиях и её суточный ритм. // Зоол. журн. 1943. т. 22. Вып. 3. С. 138-153.

23. Брук Р. К вопросу о питании личинок комаров. // Тр. гр. общества ес-теств. 1930. Вып. 1. С. 15-28.

24. Бучацкий Л.П. Вирусные болезни кровососущих комаров; Киев, 1975.

25. Вейсиг С.Я. О зимовке личинок Anopheles plumbeus Steph. // Гидро-биол. отд. Тропическ. ин-та. Аз.ССР. Мед. паразитол. 1935. Вып. 4.5 С. 392-393, Вып. 4.6 С. 481-485.

26. Виноградова Е.Б. Влияние фотопериодизма на наступление имаги-нальной диапаузы у кровососущих комаров. // The ontogeny of insects. Praha, 1960. С. 257-259.

27. Виноградова Е.Б. Диапауза у кровососущих комаров и её регуляция. Л., Зоол. инст. АН СССР, 1987. 169 с.

28. Виноградова Е.В. Роль фотопериодизма в сезонном развитии дупляно-го малярийного комара Anopheles plumbeus Steph. (Diptera, Culicidae). //ДАН СССР, 1962. Т. 142. № 2. С. 481-483.

29. Виноградская О.Н. Географическое распространение комаров переносчиков инфекций. М., 1969, 164 с.

30. Виноградская О.Н. Морфология и физиология дыхательного аппарата и водный баланс окрылённых комаров в связи с условием обитания. Докт. дисс.1959. С. 123-125.

31. Виноградская О.Н. О связи географического распространения насекомых с морфологическими особенностями видов (на примере кровососущих комаров).// Тезисы докл. IV съезда Всесоюз. энтомол. общ-ва. М-Л., 1959. С. 209-210.

32. Волик Г.Н. Изучение гнуса и меры борьбы с ними на Кизлярских пастбищах Дагестана. М., дисс. канд. наук. 1966.

33. Волик Г.Н. Кровососущие комары (Diptera, Culicidae) в Кизлярском районе Дагестана. //Труды Всес. научн.- исслед. инст-та вет. санитарии, 1967. 28 с.

34. Зб.Гасанов А.П. Новый биологический метод борьбы с малярийными комарами в стадии яиц с помощью болотного прудовика. // Мед. паразитология. 1938, т. 7. Вып. 4. С. 57-59.

35. Гвоздецкий Н.А. Основные проблемы физической географии. М.: Высшая школа, 1979. 222 с.

36. Глущенко П.А., Гуцевич А.В., Дудкина М.С. Исследование комаров как переносчиков вируса лимфоцитарного хориоминенгита на западе Украины.//Докл. АН СССР. 1957. т. 113., №5. с. 1181-1183.

37. Гордеев М.И. Отбор и взаимодействие хромосомных перестроек в ка-риотипах малярийных комаров.// Тез. докл. II науч. чтений памяти акад. Д.К. Беляева. Известия СО АН СССР. Сер. биол. наук. 1991. № 2. 47 с.

38. Гордеев М.И. Хромосомный полиморфизм и плодовитость в природных популяциях малярийного комара Anopheles messcae (Diptera, Culi-cidae). // Материалы XVIII Всесоюзн. научн. студен, конф. Биология. Новосибирск: Изд. Новосиб. ун-та, 1980. С. 34-42.

39. Гордеев М.И., Сибатаев А.К. Возрастной отбор и способность к кани-бализму у личинок малярийных комаров с разными кариотипами. 1995. Генетика. Том 31, № 7, С. 939-946.

40. Гордеев М.И., Стегний В.Н. Инверсионный полиморфизм малярийного комара Anopheles messcae.// Генетика, т. XXIII ,№ 12. 1987. С. 21692173.

41. Гординский O.K. Биология и экология наиболее распространённых видов кровососущих комаров (Diptera, Culicidae) в условиях Львовской области. Львов. 1966. Канд. дисс. С. 91-94.

42. Государственный доклад о состоянии здоровья населения и санитарно-эпидемиологической обстановке в республике Дагестан в 1996г. Махачкала. 1997. С Л17-119, 174, 175.

43. Гуцевич А.В. Новые малоизвестные формы комаров. // Тр. Зоол. ин-та АН СССР. 1955. т. 18. С. 320-324.

44. Гуцевич А.В., Мончадский А.С., Штакельберг А.А. Комары семейства Culicidae. // Фауна СССР. Насекомые двукрылые. Т.З. Вып. 4, Л., Наука, 1970. 384 с.

45. Данилевский А.С., Глиняная Е.И. Зависимость гонотрофического цикла и имагинальной диапаузы кровососущих комаров от изменений длины дня. //Уч. зап. Ленингр. ун-та. 1958, 240 сер. биол., 46. С. 34-51.

46. Детинова Т.С. Влияние развития яичников на скорость переваривания крови самкой. Мед. паразит.1953 е, т. XXII. 337с.

47. Детинова Т.С. Возрастной состав и эпидемиологическое значение популяции An. maculipennis в условиях Московской области. //Мед. пара-зитол. и паразитар. болезни. 1953. Т. 22. Вып. 6. С. 486-495.

48. Детинова Т.С. Возрастной состав комаров Anopheles как критерий оценки эффективности противокомариных мероприятий. Новости медицины, 1952 в. 57 с.

49. Детинова Т.С. Изучение физиологического возраста переносчиков трансмиссивных болезней в связи с оценкой эффективности истребительных мероприятий. Мед. паразит. 1957, т. XXVI. 637с.

50. Долуханов А.Г. Растительный покров. // Кавказ. М.: Наука, 1967. С. 223-256.

51. Дубицкий A.M. Кровососущие комары (Diptera, Culicidae) Казахстана. Алма-Ата. «Наука», 1670. 221с.

52. Ениколопов С.К. Материалы по сезонному ходу численности комаров в различных пунктах Дагестана. // Учёные зап. Дагестан. Инст-та эпидемиологии, микробиологии и медиц. Паразитологии. Махачкала. 1948. С. 19-23.

53. Ениколопов С.К. Краткая эпидемиологическая характеристика Дагестана. // Мед. паразитол. и паразитарные болезни. 1935. т. Вып. 1-2. С. 33-36.

54. Ениколопов С.К., Марчевский А.П. Эндемичные очаги малярии в выс-сокогорном Дагестане. // Мед. паразит, и паразитарн. болезни. 1938, т. VII. Вып. 1.С. 43-45.

55. Зима Г.Г., Ершова И.Ф. Опыт борьбы с комарами осенней обработки водоёмов. // Мед. паразитол. и паразитарные болезни. 1956. т. XXV. Вып. 1. С. 27-28.57.3онн С.В. Почвы Дагестана. // Сельское хоз-во горного Дагестана. Изд. АН СССР. 1940. С. 28-32.

56. Иванова Л. Зависимость поведения личинок An. maculipennis и Anopheles plumbeus Steph. от условий существования вида. // М. «Медгиз». 1958.

57. Исимбеков Ж.М. Кровососущие комары бассейна р. Иль. // Автореф. дисс. канд. биолог, наук. Алма-Ата. 1966. 18 с.

58. Исмаилов Ш.И. К фауне и экологии кровососущих комаров Дагестана. // Уч. Зап. МОПИ им. Н.К. Крупской. 1969. т. 224. Вып. 7. С. 131-144.

59. Исмаилов Ш.И. Кровососущие двукрылые Дагестана и их распределение по высотным поясам. // Автореф. дисс. канд. биолог, наук. 1970. 19 с.

60. Исмаилов Ш.И. Влияние антропогенного фактора на распределение кровососущих двукрылых насекомых. // Мат. межвуз. научн. конф. «Фауна и экология членистоногих Сев. Кавказа. Махачкала. 1990 в. С. 26-39.

61. Исмаилов Ш.И. Влияние гидрорежима на численность и видовой состав кровососущих комаров низменности Дагестана. // Мат. науч. сессии энтомологов Дагестана. Махачкала. 1988 д. С. 13-15.

62. Исмаилов Ш.И. Генезис фауны комаров Восточного Кавказа. // Мат. межвуз. научн. конф. «Фауна и экология членистоногих Сев. Кавказа. Махачкала. 1990. С. 26-39.

63. Исмаилов Ш.И. Зоогеографический анализ фауны комаров ( сем. Culi-cidae) Дагестана. // Конф. Украин. респуб. научн. об-ва паразитологов. Львов. 1980. С. 127 с.

64. Исмаилов Ш.И. Итоги изучения кровососущих двукрылых восточной части Большого Кавказа. // Успехи энтомологии в СССР. Двукрылые:систематика, экология, медицинское и ветеренарное значение. СПб. 1992. С. 136-137.

65. Исмаилов Ш.И. К биологии и экологии малярийного комара An. maculipennis Meig на Северном Кавказе. // Мат. науч. сессии энтомологов Дагестана. Махачкала. 1988 е. С. 15-16.

66. Исмаилов Ш.И. Места выплода комаров (Diptera, Culicidae) на Низменном Дагестане. // Тезисы научн.-практ. конф. мол. учёных. Махачкала, 1978 б, 108 с.

67. Исмаилов Ш.И. Места выплода кровососущих комаров в субальпийском поясе (на примере северного склона Главного Кавказского хребта). // Мат. всоюзной конф. «Биолог, ресурсы высокогорий». Махачкала, 1988 а. С. 38-39.

68. Исмаилов Ш.И. Распределение кровососущих двукрылых насекомых в различных высотных поясах Дагестана. // Мат. науч. конф. Даг. фил. геогр. общ. Махачкала. 1971 а. Вып. 3. 27 с.

69. Исмаилов Ш.И. Состав и закономерности распределения фауны кровососущих двукрылых насекомых восточной части Большого Кавказа. Санкт-Петербург, дисс. док. биол. наук, 1996. С. 5-268.

70. Исмаилов Ш.И., Караев Ш.К. Места выплода комаров ( сем. Culicidae) на низменности Дагестана. //Мат. науч. сессии энтомологов Дагестана. Махачкала. 1972. С. 64-66.

71. Кабанова В.М., Карташова Н.Н., Стегний В.Н. Кариологическое исследование природных популяций малярийного комара в Среднем При-обье. 1. Характеристика кариотипа An. maculipennis messeae Fall. // Цитология. 1972. т. 14. № 5, С. 630-636.

72. Кабанова В.М., Новиков Ю.М. Адаптивная ассоциация инверсий в природных популяциях малярийного комара An. messeae. // Генетика. 1979 и. 15. №6. С. 1033-1045.

73. Кабилов Д.Р. К экологии кровососущих комаров города Душанбе. // Сб. тр. рес. научн.-практич. кон. мол. учёных и спец. Тадж. ССР (Душанбе) 12-14 апреля 1989. Тезисы докл. секц. биологии. Душанбе. 1989. С. 170-171.

74. Калмыков Б.С. Влияние кровососущих двукрылых на производительность труда. //Мед. паразитолог, и паразитарные болезни. 1955. Т. 24. Вып. 1.С. 46-48.

75. Карстенс Э.Э., Павловский Е.Н. Анализы воды из водоёмов в дуплах ясеня, обитаемых личинками Anopheles plumbeus Steph. // ДАН-А СССР. 1927. С. 293.

76. Кикнадзе И.И. Функционирование хромосом. // Руководство по цитологии, т. 2, М-Л.: Наука, 1965. С. 329-346.

77. КикнадзеИ.И. Функциональная организация хромосом. Л.: Наука, 1972. 211 с.

78. Кончавели Г.И. Малярийные комары в Грузии и пути рационализации борьбы с ними. // Автореф. дисс. канд. биол. наук. Тбилиси. 1955. 28 с.

79. Краткий определитель кровососущих комаров Мурманской области. Петрозаводск. 1989.

80. Кривоносова З.Ф. К вопросу об экологии Anopheles plumbeus Steph. и его эпидемиологической роли. // Учёные записки Даг. ИЭМ. Махачкала. 1948. С. 25-27.

81. Кривоносова З.Ф. К вопросу о продукции Anopheles plumbeus Steph. в дуплах деревьев. // Мед. паразит, и паразитарн. болезни. 1946, т. 15. Вып. I. С. 18-20.

82. Кривоносова З.Ф. Копуляция Anopheles plumbeus Steph. . // Мед. паразит. и паразитарн. болезни. 1946, т. 15. Вып. I, С. 55-57.

83. Кривошеина Н.П. Строение головы личинок и естественная система отряда двукрылых (Diptera); // Зоол. журн. 1964, т. 43. Вып. 3. С. 193205.

84. Кровососущие насекомые переносчики трансмиссивных заболеваний и проблемы генетической безопасности. // Материалы Первой Международной Школы - семинара. М., РИИС ФИАН, 2003, 76 с.

85. Кудрявцева Г.А. К вопросу о биологии комаров рода Aedes. // Уч. зап. Якутского ун-та , 1960 б, вып. 8, С. 177-221.

86. Кудрявцева Г.А. К вопросу о токсичности слюны комаров рода Aedes для животных.// Зоол. ж., 1956, т. 35. Вып. 12, С. 1853-1860.

87. Кудрявцева Г.А, Материалы по паразитированию комаров рода Aedes на крупном рогатом скоте и лошадях. // Автореф. канд. дисс. М., 1955. 16 с.

88. Лейте В.Н. Определение органических загрязнений питьевых и природных вод. Москва. 1975. С. 44-50.

89. Лопатин О.Е. Развитие кровососущих комаров при высокой плотности. // Тр. ин-та зоол. АН Каз. ССР. 1986, С. 73-84.

90. Малярийные комары и борьба с ними на территории РФ. Методические указания. // М. Минздра. России. 2000. 56 с.

91. Минх А.А. Методы гигиенических исследований. Медгиз. 1954. 149 с.

92. Мончадский А.С. Личинки кровососущих комаров СССР и сопредельных стран (подсем. Culicidae). //Определители по фауне СССР. 1951. М-Л.:№7, 290 с.

93. Мончадский А.С. Нападение комаров на человека в приморской части дельты Волги. // Паразитол. сб. ЗИН АН СССР. 1956 б. Вып. 16. С. 89144.

94. Мончадский А.С. Нападение комаров на человека в природных условиях Субарктики и факторы его регулирующие. // Паразитол. сб. ЗИН АН СССР. 1950. Вып. 12. С. 126-166.

95. Мончадский А.С. Некоторые личинки Aedes (F) из дупел деревьев. // Паразит, сб. зоол. ин-та. АН СССР. 1949 б. Вып. 11. С. 253-261.

96. Муканов С.М. Кровососущие комары Удмуртии. // Мед. паразитол. и паразитар. болезни. 1989. № 3. С. 89-91.

97. ЮО.Муканов С.М., Шумихин В.В. Видовой состав и численность кровососущих комаров (Diptera, Culicidae), нападающих в зелёной зоне г. Устинова Удмуртской АССР. // Мед. паразитол. и паразитар. болезни. 1987. № 1. С. 21-22.

98. Набоков В.А. Механизированные способы борьбы с кровососущими двукрылыми в СССР. // Мед. паразитол. и паразитар. болезни. 1957, т. 26. Вып. 6. С. 658-666.

99. Набоков В.А., Шлёнова М.Ф. Гнус. Биология и меры борьбы с ним.// М. «Медгиз». 1955. С. 9-80.

100. Нагиев Г.М. Фауна и экология кровососущих комаров Ленкоранской природной области Азербаджанской ССР.// Автореф. дисс. канд. биол. наук. Баку. 1962. 16 с.

101. Наглова Т.И., Лукшина Р.Г. Места выплода комаров в пригородных и антропогенных водоёмах Украины и их влияние на санитарно-эпидемиологическую обстановку. // Кровососущие двукрылые и их контроль. Л. 1987. С. 90-92.

102. Некрасова Л.С. Материалы по фауне и экологии кровососущих комаров (Culicidae) северной тайги Свердловской области. //Паразитология. 1983. № 1.С. 80-83.

103. Николаев Н.В. Фауна кровососущих комаров полярного Урала. // Фауна и экология насекомых Урала. Пермь. 1990. С. 50-61.

104. Николаев Н.В. Экология кровососущих комаров (Diptera, Culicidae) Южного Ямала. // Автореф. дисс. канд. биол. наук. Л., 1979. 20 с.

105. Олсуфьев Н.Г. Видовой состав и сезонная динамика численности кровососущих двукрылых в дельте Волги и их возможная роль в эпидемиологии туляремии. // Зоол. ж., 1939, т. 18. Вып. 5. С. 786-798.

106. Олсуфьев Н.Г. Роль комаров в передаче и хранении туляремии. // Труды отд. паразитол. Всесоюз. ин-та эпидем. и микробиолог, им. A.M. Горького. 1938, т. 3. С. 213-246.

107. Остроушко Т.С. Кровососущие комары Большеземельной тундры. // Кровососущие двукрылые и их контроль. Л.: 1987. С. 102-104.

108. Ш.Павловский Е.Н. Методы изучения кровососущих комаров (Culicidae). Изд. 2-е; М-Л., 1935. С. 1-170.

109. Перельман А.И. Геохимия природных вод. Москва. 1982. С. 68-72.

110. ПЗ.Плешкова Г.Н. Распределение точек разрывов радиационно-индуцированных хромосомных перестроек у политенных хромосом An. messeae.// Генетика, 1983, т. 19. №9. С. 1437-1462.

111. Плешкова Г.Н., Плевако Н.Г. Типы, частота и межхромосомное ра-диационно-индуцированных хромосомных перестроек у малярийного комара An. messeae. //Цитология. 1982. т. 24. № 2. С. 206-210.

112. Потапова Н.К. Кровососущие комары (Diptera, Culicidae) Пяданского нагорья. // Насекомые луг-таеж. биоценозов Якутии. Якутск. 1988.

113. Пб.Ремм Х.Н. Материалы по фауне и экологии комаров (Diptera, Culicidae) Эстонской ССР.// Энтомол. обозр. 1957, т. 36. Вып.1. С. 48-160.

114. Рибых Л.В. К экологии и сезонной динамике кровососущих комаров сем-ва Culicidae в условиях Воронежской области. // Автореф. дисс. канд. биол. наук. Воронеж. 1952. С. 87-88.

115. Розит В.А. Учёные записки Даг. ин-та эпидемиологии и мед. паразитологии. Махачкала. 1948. С. 27-29.

116. Сазонова О. Н. Комары рода Aedes лесной зоны европейской части РСФСР и биологические основы борьбы с ними. // Автореф. докт. дисс. Л.,.1960. 15 с.

117. Сазонова О.Н. Кровососущие комары (Diptera, Culicidae).// Переносчики возбудителей природноочаговых болезней. М. 1962. Медгиз. С.19-64.

118. Сазонова О.Н. Материалы по фауне и биологии комаров северной части Рыбинского водохранилища. М. 1953. С. 187-211.

119. Сазонова О.Н. Фауна и экология комаров юга Московской области.// Бюлл. Моск. Общ-ва исп. Природа. Отд. биол.,.т. 63. Вып.2. 1968. С.63-80.

120. Сафьянова В.М. Материалы по экологии кровососущих комаров Владимирской.//Зоол. журнал. 1960, т. 39. Вып.2. С.236-243.

121. Сезонные явления в жизни малярийных комаров в Советском Союзе. Под редакцией Беклемишева В.Н. и Шипициной Н.К. 1957.

122. Сергеев А.Ф. Кровососущие комары Адыгеи.// Геб. статей по зоологии, научн. тр. Краснодар. Гос.пед. ин-та. Вып. 6. Краснодар. 1967. С. 55-66.

123. Сергиев В., Малышев Н., Дрынов И. Инфекционные болезни и цивилизация. Врач. 2000, № 8. С. 8-10.

124. Серполко А.А. Обзор фауны кровососущих комаров Киргизии. // Эн-томол. исслед. В Киргизии. Фрунзе. 1989. № 20. С. 56-61.

125. Сичинова Ш.Г. Биология, экология кровососущих комаров (Diptera, Culicidae) и меры борьбы с ними в Абхазской АССР. Тбилиси. 1970.Дисс.на соис. учен. степени биол. наук.

126. Соколова Э.И. Кровососущие двукрылые Приуральской тайги. // Автореф. дисс. канд. биол. наук. М., 1967. 14 с.

127. Стегний В.Н. (1993) Архитектоника генома, системные мутации и эволюция. Новосибирск: Изд-во Новосиб. ун-та. 111 с.

128. Стегний В.Н. Популяционная генетика и эволюция малярийных комаров. Томск: Изд-во Томск. Ун-та. 1991. 136 с.

129. Тарасов В.В. Экология кровососущих насекомых и клещей. Изд. Московского ун-та 1988. С. 61-79,101.

130. Трухан М.Н. Кровососушие комары (Diptera, Culicidae).// Берез. Гос. биосфер, заповедник БССР.- Минск, 1991, С. 56-61.

131. Труханов М.Н., Баркович Э.Я., Короткова М.А., Болотовский Я.Н. и др. Кровососушие комары (Culicidae) территории Могилевской области. Ред. Журн. «Изв. АН БССР. Сер. биол. н.» Минск. 1987. 16с.

132. Фишкис И.С. Определитель малярийных комаров по фазе яйца. Воронеж. 1938. С. 5-11.

133. Чагин К.П. Активность нападения комаров на человека и её суточный ритм в природных условиях Приморского края ( в очаге японского энцефалита). //Энтомол. обозр. 1948, т. 30. Вып. 1-2, С. 109-123.

134. Шахмарданов З.А. Охрана природы в Дагестане. Махачкала. 1976. С. 78-81, 106-109.

135. Шевченко А.К., Попович А.П. К фауне комаров Каховского водохранилища. // Кровососущие двукрылые и их контроль. Л., 1987. 148 с.

136. Шлёнова М.Ф. Биология и эпидемиологическая роль в Абхазии. // Мед. паразитол. и паразитарн. болезни. 1941 а, т. 10. Вып. 1, С. 34.

137. Шлёнова М.Ф. О степени восприимчивости некоторых видов комаров к вирусу энцефаломиелита лошадей. // Мед. паразит, и паразитарн. болезни. 1949, № 4. С. 362-368.

138. Штакельберг А.А. Кровососущие комары (сем. Culicidae) Союза ССР и сопредельных стран. // Определитель по фауне СССР. Вып. 1, М-Л.: Изд. АН СССР, 1927.170 с.

139. МЗ.Эльдаров М.М. Физическая география Низменного Дагестана. Махачкала, 1972. ДГУ. 172 с.

140. A. Brito da Cunha. Chromosomal variation and adaptation in insects. Ann. Rev Entomol. 5, 85. 1960.

141. Blacklock В., Carter H.F. Further experiments with Anopheles plumbeus Stephens, its infection with P. falciparum in England; also notes on the apparatus and technique employed.// Annals of Tropical Medicine and Parasitology. 1920. V. 14. P. 275-282.

142. Blacklock В., Carter H.F. The experimental infection in England of Anopheles plumbeus Stephens and Anopheles bifurcatus L., with Plasmodium vivax.// Annals of Tropical Medicine and Parasitology 1920. V. 13. P. 431-420.

143. Bryan J.H.,Akiyama J., Chalkley J. Cytogenetic observation of translocations in species. A of the Anopheles gambiae complex. // Ann. Trop. Med. And Parasitol 1977. V. 71. № 2., P.227-237.

144. Clements, A.N. Anopheles plumbeus Steph. and Theobaldia morsitans Theob. (Dipt., Culicidae) in Somerset.// Entomologists Monthly Magazine.1946. V.82. P. 64.

145. Collins, F.H., Paskewitz, S.M. A review of the use of ribosomal DNA (rDNA) to differentiate among cryptic Anopheles species. // Insect Molecular Biology. 1996. 5. P. 1-9.

146. Costcomparison of DDT and alternative insecticides for malaria control / Walker К.// Med. and vet. Entomol.- 2000.- 14 № 4 P. 345-354.

147. Craig G. В., R.C. Vandekey. Genetic variability in Aedes aegupti. I Mutations affecting color pattern. Entomol. Soc. America; 35, 47, 1962.

148. Dobzhansky Th. Genetics and the origin of species. Columbia Univ, Press. 1951.

149. Fraccaro M., Laudani U., Marchi A., Tiepolo L. Kariotype, DNA replication and origin of sex chromosoma (Bert.) 1976. N. 55, P. 27-36.

150. Frizzi G. Salivary gland chromosomes of Anopheles. // Nature (London).1947. V. 160. № 4059. P. 226-227.

151. Frizzi G., M. Holstein. Etude cytogenetique d Anopheles gambiae. Bull. Wild HJth. Org. mond. Sante, 15, 425.1956.

152. Giepolo L., Fraccaro M., Laudani U., Diaz G. Homologous bands of the long arms of the X- and Y- chromosomes of Anopheles artroparvus. I I Chromosoma (Berl.) 1975. V. 49. P. 371-374.

153. Holstein M. Cytogenetics of Anopheles gambiae. Bull. Wild HJth. Org. mond. Sante, 16, 456. 1957.

154. IChawaled K., Barak z., Zarisky A. Feeding behaviore of Aedes aegupti larvae and foxicity of dispersed and naturally encapsulated Bacillus thur-ingiensis var. israelensis. // J. Inverter. Pathol. 1988. V. 52. № 3 P. 419-426.

155. Kitzmiller J. B. Mosquito cytogenetics. // Genetics of insect vectors of dis-eas. Amsterdam: Elsevier. 1967. P. 133-150.

156. Kitzmiller J. В., R.H. Baker. The salivary chromosomes of Anopheles freebormi. Mosquito News, 23, № 3, 254. 1963.

157. Krida Chazi, Rhaiem Adel, Jarraya Abderrahmane, Bouattour Ali. // Bull Soc. entomol: Fr. 1998.- 103, № 1. C. 5-10.- Фр.; рез. англ. Сравнение морфологических признаков личинок 4 возрастов комаров Culex pipens из Туниса.

158. MacGregor M;E. The ova of Aedes (Finlaya) geniculatus Olivier. // Parasitology. V. 24. P. 183-184.

159. MacGregor M.E. The structural differences in the ova of Anopheles maculipennis, A. bifurcates and A. plumbeus.// Annals of Tropical Medicine and Parasitology. 1921. V. 15. P. 417-424.

160. Marchant P., Eling W., van Gemert G.-J., Leake, C.J. Curtis, C.F. Could British mosquitoes transmit falciparum malaria? // Parasitology Today. 1998. 14. P. 344-345.

161. Marinucci M., Romi R., Mancini P., Di Luca M. Severini C. Phylogenetic relationships of seven Palearctic members of the maculipennis complecs inferred from ITS2 sequence data. // Insect Molecular Biology.l999, 8. P. 469480.

162. Profit J., Maier W.A. Kampen H. Identification of six sibling species of the Anopheles maculipennis complex (Diptera: Culicidae) by a polymerase chain reaction assay. // Parasitology Research. 1999. 85. P. 837-843.

163. Roubaud J., Colas-Belcour. Bull. Soc. pathol. exot., 1934. V. 27. P. 546.

164. Stechmcken, mit Bti (Bacillus thuringiensis israelensis) bedenkenlos bekampfen. /Brumeister Ernst-Gerhard // Naturschutzarb. Mecklenburg-Vorpommern. 2000/ 43. - C. 48-55.

165. Thompson J.D., Gibson T.G., Plewniak F. Jeanmougin F. Jiggins D.G. The Clustal X windows interface flexible strategies for multiple sequence alignment aided by quality analysis tools. // Nucleic Acids Research. 1997. 24. P. 4876-4882.