Биологические свойства штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, при дисбактериозах кишечника у детей с бронхолегочной патологией

Очилова, Рагна Амирьяновна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биологические свойства штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, при дисбактериозах кишечника у детей с бронхолегочной патологией
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Биологические свойства штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, при дисбактериозах кишечника у детей с бронхолегочной патологией"

На правахрукописи

Очилова Рагна Амирьяновна

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ШТАММОВ K.PNEUMONIAE И SAUREUS, ВЫДЕЛЕННЫХ В ВИДЕ МОНОКУЛЬТУР И АССОЦИАЦИЙ, ПРИ ДИСБАКТЕРИОЗАХ КИШЕЧНИКА У ДЕТЕЙ С БРОНХОЛЕГОЧНОЙ ПАТОЛОГИЕЙ

03.00.07 - микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Уфа-2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ» и в Республиканской детской клинической больнице

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Габидуллин Зайнулла Гайнулинович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,профессор

Киреева Наиля Ахняфовна доктор медицинских наук, профессор Немцева Наталья Вячеславовна

Ведущая организация: Челябинская государственная медицинская академия

Защита диссертации состоится « £ 2004 г. в часов

на заседании Регионального диссертационного совета КМ 002.12401 при Президиуме Академии наук Республики Башкортостан по адресу: 450014, г. Уфа, ул. Новороссийская, 105.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке филиала ФГУП НПО «Микроген» МЗ РФ в г. Уфе «Иммунопрепарат» по адресу: 450014, г. Уфа, ул. Новороссийская, 105.

Автореферат разослан « ^^_2004 года

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

lETTß

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

ß3o7#c/

В структуре детской патологии лидируют болезни органов дыхания, проблема успешного лечения которых остается нерешенной до настоящего времени [Несте-ренко В.Н. и др., 1995, Чучалин А. Г. и др., 2000]. Интенсивная медикаментозная терапия, в частности применение антибиотиков при бронхолегочных заболеваниях у детей, часто приводит к количественным и качественным изменениям микробиоценоза кишечника, способствующим отягощению течения основного заболевания. [Шендеров Б. А., 2000, Леванова Л. А. и др., 2001, Шамсиев Ф. М и др., 2001].

Дисбактериоз кишечника у детей раннего возраста характеризуется выраженными нарушениями нормальной микрофлоры толстой кишки и часто протекает в ассоциированных вариантах [Лыкова Е. А., Воробьев А. А., 2003]. Возбудители этих инфекций, как правило, принадлежат к группе условно-патогенных бактерий, среди которых в последнее годы доминируют Staphylococcus spp. и представители семейства Enterobacteriaceae, в частности Klebsiella spp. Им же принадлежит значительная роль в развитии дисбактериоза кишечника, поскольку достаточно часто колонизация слизистых оболочек различных биотопов организма ребенка стафилококками и клебсиеллами является стадией предшествующей локальной или системной инфекции [Сурикова Е. В., 1999, Бухарин О.В., 2000].

Сведений о клинической картине кишечных инфекций, вызванных клебсиел-лами и о свойствах штаммов, выделенных в монокультуре, или в ассоциации с условно-патогенными бактериями, в т. ч. стафилококками, весьма немногочисленны [Красноголовец В. Н., Киселева Б. С, 1996]. Одновременное развитие нескольких возбудителей приводит не только к суммированию болезнетворных возможностей, но и вызывает взаимное усиление вирулентности ассоциантов. Наряду с этим в популяциях взаимодействующих микроорганизмов увеличивается число

особей, устойчивых к антибиотикам

Подтверждением этиологической значимости условно-патогенных микроорганизмов, в частности культур выделенных в микробных ассоциациях, является изучение их патогенного потенциала и биологических свойств. К ведущим факторам патогенности, особенно на начальном этапе развития инфекционного процесса, относят синтез гемолизинов различных типов, адгезивную, антикомплементарную (АКА), антиинтерфероновую (АИА), антилизоцимную (АЛА), ДНК-азную, энтеро-токсигенную активности [Бондаренко В. М., 2000, Бухарин О. В. и др., 2001]. Исследования, направленные на изучение биологических свойств микробных ассоциаций позволят в каждом конкретном случае провести целенаправленную профилактику и лечение инфекционных процессов, в частности вызванных ассоциациями и монокультурами бактерий родов Klebsiella и Staphylococcus.

Исходя из вышеизложенного, изучение этиологической роли клинических штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде ассоциаций и монокультур, в возникновении дисбиотических нарушений кишечника детей, страдающих бронхолегочными заболеваниями, требует всестороннего исследования их биологических свойств.

Цель работы. Изучение некоторых биологических свойств клинических штаммов Klebsiella pneumoniae и Staphylococcus aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, при дисбактериозе кишечника у детей с бронхолегочной патологией.

Задачи исследования:

1. Изучить качественный и количественный состав микрофлоры кишечника у детей, находившихся на стационарном лечении в пульмонологическом отделении Республиканской детской клинической больницы Республики Башкортостан.

2. Выявить роль K.pneumoniae и S.aureus в структуре дисбактериозов кишечника у детей раннего возраста с бронхолегочной патологией.

3. Выяснить частоту проявления адгезивной, гемолитической (а-, тиолза-висимой, энтеро-) антилизоцимной, антикомплементарной, антиинтерфероно-вой, ДНК-азной, ЛТ-энтеротоксигенной активностей у фекальных штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций.

4. Изучить спектр лекарственной устойчивости клинических штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций.

5. Обосновать возможность применения комплексного препарата «Ли-некс» и функционального питания «Буза» в коррекции нарушений микроэкологии кишечника у детей с заболеваниями органов дыхания.

Научная новизна. Дан анализ состояния микрофлоры кишечника у детей раннего возраста с патологией органов дыхания. Впервые проведено сравнительное изучение факторов патогенности (адгезивной, альфа-гемолитической, энтерогсмолитичсской, тиолзависимой гемолитической, антилизоцимной, антикомплементарной, антиинтерфероновой, ДНК-азной, ЛТ-энтеротоксигенной активностей), чувствительности к антибиотикам у штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций из кишечника детей, больных пневмонией и бронхитом.

Выявлены различия в выраженности факторов патогенности и антибиотикоре-зистентности K.pneumoniae и S.aureus в зависимости от степени дисбиотических нарушений кишечника у детей с бронхолегочной патологией. Запатентован штамм Enterobacter gergoviae ГНИИСК № 259, обладающий комплексом факторов патогенности (патент № 2161197, 2000 г.), который был выделен в ассоциации с K.pneumoniae и S.aureus из кишечника детей с бронхолегочными заболеваниями.

Практическая значимость..Показана необходимость лабораторных исследований фекалий на дисбактериоз у детей раннего возраста с патологией органов дыхания для выявления ранних нарушений микробиоценоза кишечника при применении медикаментозной терапии, особенно антибактериальной.

Представлена информация об этиологической роли факторов патогенности (адгезивная, гемолитическая (а-, энтеро-, тиолзависимая), антилизоцимная, антикомплементарная и антиинтерфероновая, ДНК-азная, ЛТ-энтеротокси-генная активности) фекальных штаммов K.pneumoniae и S.aureus, как критериев развития дисбиотических нарушений микрофлоры кишечника у детей.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Качественный и количественный состав микрофлоры кишечника у детей с бронхолегочными заболеваниями.

2. Высокая частота выделения ассоциаций штаммов K.pneumoniae и S.aureus из кишечника детей с бронхолегочной патологией.

3. У фекальных штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в ассоциации, чаще проявляется высокая степень адгезивной, гемолитической (а-, тиол-зависимой, энтеро-), антилизоцимной, антикомплементарной, антиинтерферо-новой, ДНК-азной, ЛТ-энтеротоксигенной активности, чем у монокультур.

4. Прием бактерийного препарата «Линекс», функционального напитка «Буза» способствует восстановлению видового состава микробиоценоза кишечника.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Российской научно-практической конференции «Актуальные проблемы материнства в медицине труда» (Уфа, 2001), межрегиональной научно-практической конференции «Мать и дитя у народов Башкортостана» (2001), на конференции бактериологов г. Уфы (2002), на совместном заседании кафедр микробиологии, вирусологии и иммунологии, инфекционных болезней Башкирского государственного медицинского университета и ведущих научных сотрудников ГУП «Иммунопрепа-рат» и Башкирского отделения Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (ЭМП) (протокол № 1 от 18.03.2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, из них 2 методические рекомендации, один патент на изобретение № 2161197,2000 г.

Объем и структура диссертационной работы. Диссертация изложена на 147 страницах, иллюстрирована 14 таблицами и 18 рисунками. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, двух глав собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы и приложения. Библиографический список включает 108 отечественных и 85 иностранных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы. Провели ретроспективный анализ результатов микробиологических исследований фекалий детей на дисбактериоз кишечника (2565 проб, 28215 исследований), осуществлявшихся баклабораторией Республиканской детской клинической больницы (РДКБ) г. Уфы. Состояние микробиоценоза кишечника у детей с заболеваниями органов дыхания изучали по методу Эпштейн-Литвак, (1997) (381 проб, 4191 исследований).

Количество микроорганизмов выражали в абсолютных значениях числа колоний образующих единиц (КОЕ) на 1 г испражнений и десятичных логарифмах (^ КОЕ/г). Степень дисбактериоза кишечника оценивали по микробиологической классификации И. Б. Куваевой и К. С. Ладодо (1991). Для обоснования комплекса реабилитационных мероприятий при нарушениях микроэкологии кишечника детей использовали комплексный препарат-пробиотик «Ли-некс» и продукт функционального питания - национальный напиток «Буза».

Проводили изучение биологических свойств 40 клинических штаммов Крпеишотае, 40 штаммов 8.аигеш, выделенных в виде монокультур (1 группа) и 40 штаммов К.рпеишошае, 40 штаммов 8.аигеш выделенных в ассоциации друг с

другом (2 группа) из фекалий детей пульмонологического отделения РДКБ. Всего проведено 4812 исследований. В качестве эталонных культур использовали музейные штаммы K.pneumoniae (ATCC 13883) и S.aureus (ATCC 25923), полученные из ГНИИСК им. Л. А. Тарасевича Идентификацию микроорганизмов проводили по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам общепринятыми методами и с помощью тест-систем (Нижний Новгород, «Lacheraa» Чехия).

При изучении биологических свойств фекальных штаммов К. pneumoniae и S. aureus определили их антилизоцимную (АЛА), антиинтефероновую (АИА), ан-тикомплементарпую (АКА) активности по методу О.В.Бухарина (1984, 1990, 1992). Для выделения из исследуемого материала стафилококков с комплексом персистентных характеристик (АЛА, АИА, АКА) использовали селективную питательную среду [Бухарин О.В. и др., 1999]. Альфа-гемолитическую активность изучали по методу 3. Г. Габидуллина (Рац. предл. № 168, 1978), энтерогемолити-ческую по методу Beutin L. Et al (1988). Тиолзависимый гемолизин определяли по методу Н. С. Appelbaum, О. W. Prozecky (1973), а адгезивную активность в реакции гемагглютинации (РГА) с эритроцитами цыпленка [Габидуллин 3. Г. и соавт,

A. с. № 1312098, 1987]. Количественную оценку адгезивности проводили по

B. И. Брилису с соавт. (1986). Определение токсигенности культур проводили в тесте «отек лап» мышей по методу Ю. П. Вартанян и соавт., (1978), ДНК-азную активность определяли по методу C.D. Jeffries (1957). Изучение антибиотикоре-зистентности выделенных штаммов проводили диско-диффузионным методом с помощью стандартных коммерческих дисков (НПФ, Санкт-Петербург) в соответствии с рекомендациями и критериями NCCLS (1998). Для определения лизиса штаммов бактериофагами использовали коммерческие клебсиеллезный и стафилококковый бактериофаги производства ГУЛ «Иммунопрепарат» (г. Уфа). Бактериологическое обследование проводили при научной консультационной помощи кандидата биологических наук Р.Ф. Хуснаризановой. Статистическую обработку данных проводили общепринятыми методами вариационной статистики [Ашма-рин И. П., Воробьев А. А., 1962] и по программе «Statistica для Windows».

Результаты исследований и их обсуждение

Анализ результатов бактериологических исследований фекалий детей, находившихся на стационарном лечении в Республиканской детской клинической больнице, показал, что большая часть исследований приходилась на детей с бронхолегочной патологией в возрасте до года. Их доля составила 36,7% всех

стационарных больных или 74,2% больных из пульмонологического отделения. Общая картина состояния микроэкологии кишечника детей с бронхолегочной патологией представлена в таблице 1.

Таблица 1

Содержание некоторых представителей кишечной микрофлоры (в ^ КОЕ/г),

в фекалиях детей находившихся на лечении в различных отделениях РДКБ

Микроорганизмы Ig КОЬ/г

норчн f отделения

пульмонологическое прочие

Bifidobacterium spp. 8-10 5,9+0,7 • 8,1+0,4

Lactobacillus spp. 6-7 5,7±0,6 6,0±0,6

Ь coli. 7-8 7,8±0,6 7,5±0,4

в т. ч. лакто »негативные не>4 5,6±0,3 3,1±0,3

гемолизирующие 0 5,3±0,4 2,2±0,1

Proteus spp не >4 3,6±0,3 2,1 ±0,2

Klebsiella spp не ">4 5,9±0,3 2,5±0,1

Enterobacter spp. не>4 4,3±0,4 3,2±0,2

Прочие УИЭ не >4 4,3±0,4 3,1±0,2

Staphylococcus spp не >5 5,6±0,6 4,7±0,3

S. aureus не>3 4,3±0,3 2,1 ±0,1

Entcrococcus spp 6 7 6,1±0,7 6,5±0,4

Candida spp. не >3 4,2±0,3 2,0±0,2

C. perfringens не >3 2,5±0,1 2,8±0,2

HI ОБ не >5 3,7±0,2 2,4±0,2

Чаще всего первые признаки нарушения микробиоценоза кишечника проявлялись снижением числа его облигатных представителей и повышением по-нуляционного уровня условно-паюгенных микроортанизмов (Klebsiella, Proteus, Citrobacter, Enterobactcr, Staphylococcus, Clostndium и др.), содержание которых при нормально сложившемся микробиоценозе кишечника не должно превышать 41gKOE/r, что согласуется с исследованиями многих авторов [Ку-ваева И. Б., Ладодо К. С, 1991, Лсванова Л. А., Воробьев А. А., 2001].

В числе УПО в количестве >41gKOE/r в среднем в 17,1% случаев обнаруживали Klebsiella spp.: из них у детей пульмонологическою отделения в 31,5% случаев, а у детей из прочих отделений в 3,1 раза реже, т.е. 10,0% (р>0,01) случаев

(рис.1) Основную долю (85,2%) всех выделенных клебсиелл, независимо от основного диагноза составили K.pneumoniae. У детей пульмонологического отделения S.aureus, в количестве превышающей нормальные значения (>31gKOE/r), был выделен в 23,8% случаев, а у детей из других отделений - в 15,3% случаев.

Рис. 1. Частота обнаружения условно-патогенных микроорганизмов в фекалиях у детей различных отделений, %

Из содержимого толстого кишечника детей условно-патогенные микроорганизмы выделялись не только в виде монокультур, но и в виде ассоциаций из 2 и более представителей, что характеризует дисбиоз кишечника третьей и четвертой степени [Парфенов А. И., 2000]. У детей с бронхолегочной патологией ассоциации микроорганизмов обнаруживали в 1,8 раза больше, чем при других заболеваниях. Чаще из кишечника детей совместно выделяли K.pneumoniae и S.aureus, в среднем удельный вес их в пульмонологическом отделении составлял 34,9%, а в других отделениях 17,2%. Enterobacter spp. встречали в ассоциации с другими условно-патогенными микроорганизмами в 13,3% случаев, из них с K.pneumoniae в 3,3% и с S.aureus 5,1% случаев.

В ассоциации с K.pneumoniae и S.aureus из кишечника детей с бронхоле-гочными заболеваниями выделили штамм Enterobacter gergoviae ГНИИСК №259, который обладал комплексом факторов патогенности и запатентован (патент № 2161197,2000 г).

Степень проявления дисбиоза кишечника у детей из пульмонологического и других отделений показан на рис. 2.

Рис. 2. Степени дисбактериоза кишечника у детей из разных отделений

При дисбиозс первой степени выделяли K.pncumoniac в 4,2% и S aureus в 6,8% случаев в количестве до 31gKOE/i, при второй степени в количестве до 51gKOE/r и более соответственно в 7,9 и 12,8% случаев, при дисбиозе третьей и четверюй степени характерны были ассоциации условно-натотенных микроорганизмов, в том числе 34,9% ассоциаций K.pneumonme и S aureus.

Для выявления -этиологической роли данных микроорганизмов в возникновении дисбиотических состояний, провели изучение некоторых биолот ических свойств клинических штаммов K..pneumoniae и S aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, из кишечника детей с бронхолет очной паюлогией.

В основе развития любого инфекционного процесса лежат сложные взаимоотношения между макро- и микроорганизмами, тде возбудитель для преодоления защитных механизмов организма использует все свои потенциальные возможности - факторы натотенноети.

По мнению многих исследователей, адгезивность является важным моментом в начальном -этапе развития инфекционного процесса, обеспечивающим бактериям прикрепление к чувствительным клеткам макроорт анизма.

При постановке реакции гемагглютинации (РГА) с целью изучения гемагглю-шнирующей сиособности штаммов клебсиелл, установлено, что маннозочуветви-тельную реакцию гемагглютинации (MS1IA) давали Ю (25,0%) штаммов К pneumoniae, выделенные в виде монокультур, 14 (35,0%) штаммов К pneumoniae, выделенные в виде ассоциаций, маннозорезистентную реакцию гемагглютинации (MRHA) давали соответственно 3 (7,5%) и 6 (15,0%) штаммов, реакцию гемагглютинации смешанно! о типа (MS и MR) давали соответственно 6 (15,0%) и 11 (27,5%)

штаммов. Высокую адгезивную активность в реакции гсман'люгшации с эритроцитами цыпленка проявили штаммы K.pncumoniac, выделенные в виде ассоциаций в 2,1 раза чаще, чем штаммы, выделенные в виде монокультур.

Изучение степени адгезивной активности (В.И. Брилис и соавтор., 1986) штаммов К. pneumoniae и S. aureus, показало, что штаммы К. pneumoniae, выделенные в ассоциации проявляли высокую адгезивную активность в большей степени (в 1,8 раза), чем монокультуры К. pneumoniae, а штаммы S.aurcus выделенные в ассоциации с К. pneumoniae (1,7 раза), чем монокультуры S.aureus (табл. 2).

Для оценки степени адгезивности более адекватным показателем является индекс адгезивности микрорганизмов (ИАМ) — среднее количество микробных клеток на одном участвующем в адгезивном процессе эритроците. Для штаммов K.pneumoniae, изолированных в виде монокультур и ассоциаций с S.aureus он равнялся соответственно 4,0 и 4,4, в связи с чем они были отнесены к сред-неадгезивным и высокоадгезивным штаммам. Штаммы стафилококков были отнесены к низкоадгезивным (1 группа) и среднеадгезивным (2 группа) на основании индекса их адгезивности 2,5 и 2,9. Установили, что все штаммы K.pneumoniae, имеющие высокий СПА в реакции гемагглютинации с эритроцитами I (0) группы крови человека давали положительную Д — маннозорези-стентную реакцию с эритроцитами цыпленка.

Таблица 2

Частота проявления адгезивной активности штаммами K.pneumoniae и S.aureus

Характер выделения культуры Количество штаммов с различной степенью адгезивности Показатели

нулевая абс, % низкая абс, % средняя абс, % высокая абс, % СПА К ИАМ

K.pneumoniae (моно) 14 35,0% 8 20,0% 8 20,0% 10 25,0% 3,0 74,0 4,0

K.pneumoniae (ассоциации) 4 10,0 4 10,0% 14 35,0% 18 45,0% 3,5 79,3 4,4

S.aureus (моно) 24 60,0% 5 12,5% 7 17,5% 4 10,0% 2,01 78 2,5

S.aurcus (ассоциации) 12 40,0% 8 20,0% 13 32,5% 7 17,5% 2,2 76 2,9

Примечание. СПА - средний показатель адгезии, К - коэффициент участия эритроцитов Я адгезивном процессе, ИЛМ - индекс адгезивности микроорганизма.

В целях сохранения возбудителя от бактерицидных факторов макроорганизма, бактериальная клетка располагает средствами дистанционного действия, направленными на инактивацию механизмов иммунитета организма.

К таким средствам О.В.Бухарин с соавторами (2000) относит антилизо-цимную, антиинтерфероновую, антикомплементарную активности.

Исходя из этого, мы сочли необходимым изучить у штаммов K.pncumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, при дисбактериозс кишечника у детей с бронхолегочной патологией антилизоцимную, антиинтер-фероновую, антикомплементарную активности.

Изучение проявления признаков персистенции у клинических изоляюв K.pncumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, показало, что антилизоцимной активностью обладали все изученные штаммы K.pneumoniae 1,2 групп и соответственно 38 (95,0%), 39 (97,5%) штаммов S.aureus, антиинтерфе-роновой активностью обладали 38 (95,0%) моноштаммов K.pncumoniae, 39 (97,5%)- ассоциаций, и соответственно 36 (90,0%), 38 (95,0)% штаммов S.aureus, антикомплементарной активностью обладали все изученные штаммы K.pneumoniac 1,2 групп и соответственно 38 (95%), 39 (97,5%) штаммов S.aureus.

Следует отметить, что в зависимости от способности K.pneumoniae и S.aureus инактивировать лизоцим, интерферон или комплемент в той или иной концентрации, все исследуемые штаммы можно разделить на высоко-, средне-, низкоактивные и неактивные.

Установили, что 17 (42,5%) штаммов K.pneumoniae в виде монокультур и 5 (12,5%) ассоциаций, выделенных от детей с бронхолегочной патологией, обладали средней (3-4 мкг/мл), 18 (45,0%) и 33 (82,5%) - высокой (10 мкг/мл) антилизоцимной активностью (рис. 3). Среди штаммов S.aureus средней антилизоцимной активностью обладали 18 (45,0%) штаммов из 1 группы, 16 (40,0%) из 2 группы, высокой — 7 (17,5%) и 13 (32,5%) соответственно. Количество штаммов, не обладающих АЛА составляло 5,0% и 2,5%.

Высокая способность к инактивации бактерицидного компонента интерферона - антиинтерфероновая активность была отмечена у штаммов, выделенных в виде ассоциаций - 47,5% у К. pneumoniae и 32,5% у S.aureus, а у штаммов, выделенных в виде монокультур - 25,0 и 17,5%. Низкие значения АИА обнаружены у 25,0% штаммов К. pneumoniae в виде ассоциаций и 42,5% в виде монокультур, а у штаммов S.aureus - 32,5 и 47,5% (рис. 4).

При этом количество штаммов, обладающих высокой (более 2,1 ед.) ЛИА среди штаммов К. pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде ассоциаций было соответственно в 1,9 и 1,8 раза больше, чем среди штаммов, выделенных в виде монокультур (р<0,05).

«.pneumoniae «.pneumoniae S.aureus (моно) S.aureus

(моно) (ассоциации) (ассоциации)

В отсутствие активности ■ низкая Передняя В высокая

Рис. 3. Распространенность и уровни АЛА у штаммов К. pneumoniae и S. aureus 1,2 групп, в %

K.pneumoniae «.pneumoniae S.aureus (моно) S.aureus (моно) (ассоциации) (ассоциации)

В отсутствие активности В низкая Передняя В высокая

Рис. 4. Распространенность и уровни АИЛ у штаммов К. pneumoniae и S. aureus 1,2 групп, в %

Следует ошегшь, чю были усыновлены некоюрые различия в распределении штаммов К. pneumoniae 1, 2 групп по характеру проявления ЛКЛ. Низкий уровень АКА обнаруживали у 10 (25,0%) штаммов клебсиелл 1 группы, у 5 (12,5%) штаммов 2 группы. Доля штаммов К. pneumoniae, обладающих высокой АКА, наоборо! была выше во 2 группе (у 27 (67,5%)) в 1,8 раза, чем в 1 группе (17(37,5%)) (р<0,05) (рис. 5).

У золотистого стафилококка низкие значения АКА обнаруживался у 9 (22,5%) штаммов стафилококков 1 группы, 8 (20,0%) штаммов 2 группы. Доля штаммов S.aurcus, обладающих высокими значениями АКА, наоборот была выше во 2 группе (17 (45,0%)) в 1,6 раза, чем в 1 группе (11 (27,5%)).

К pneumoniae (моно) «.pneumoniae S.aureus (моно) S.aureus

(ассоциации) (ассоциации)

В отсутствие активности В низкая Передняя В высокая

Рис. 5. Распространенность и уровни АКА у штаммов K.pneumoniae и S.aureus 1,2 групп, в %

Таким образом, штаммы К. pneumoniae и S.aureus, выделенные в виде ассоциаций, чаще обладают высокими значениями АКА, чем штаммы, выделенные в виде монокультур.

Как известно, нуклеиновые кислоты являются основным субстратом для действия ДНК-аз и РНК-аз, которые относятся к ферментам патогенное™ бактерий.

Исходя из этого, мы сочли необходимым изучить частоту встречаемости ДНК-азной активности среди клинических штаммов K.pneumoniae и S.aureus,

выделенных в виде монокулыур и ассоциаций, при дисбиозах кишечника у детей с бронхолегочной патологией.

Рсзульгаты проведенных исследований показали наличие различий в ДНК-азной активности штаммов, выделенных в виде монокультур и ассоциаций. Штаммы К. pneumoniae и S.aurcus, выделенные в ассоциации обладали высокой степенью ДНК-азной активности чаще, чем монокультуры К. pneumoniae и S .aureus.

Многие исследователи считают гемолитическую активность одним из основных факторов патогенности бактерий. Исходя из этого, нами проведено сравнительное изучение способности штаммов К. pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, продуцирован» гемолизины различных типов: а—, тиолзависимый гемолизин и онтерогемолизин.

Результаты проведенных исследований на наличие а- гемолизина у клинических штаммов К. pneumoniae и S.aurcus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, на 5% дефибринированной крови человека 1(0) группы показали, что а-гемолитической активностью обладают 13 (32,5%) монокультур K.pneumoniae и 24 (60,0%) культур выделенных в ассоциации с S.aureus. Среди монокультур K.pneumoniae высокую активность проявляют 3 (23,1%) штамма, среднюю - 6 (46,2%) и слабую 4 (30,7%), среди К. pneumoniae, выделенных в ассоциации с S.aurcus соответавенно 9 (37,5%), 12 (50,0%) и 3 (12,5%) штаммов.

Одним из дифференциальных признаков S.aureus является его а-1емолитическая активность, которая проявлялась у 21 (52,5%) моноштамма S.aureus, у 34 (85,0%) - ассоциаций. У монокультур S.aurcus обнаруживалось 10 (25,0%) высокоактивных, 5(12,5%) средиеактивных, 6 (15,0%) низкоактивных и 19 (47,5%) гемолитически неактивных штаммов, у штаммов S.aureus в ассоциации с K.pneumoniae соответственно 20 (50,%), 10 (20,0%), 6 (15,0%), 6 (15,0%) штаммов. Стафилококки в ассоциации обладали в 2,0 раза чаще высокой альфа гемолитической активностью, чем монокультуры.

Изучение способности K.pneumoniae и S.aureus синтезировать тиолзависимый гемолизин показало, что для изолятов K.pneumoniae, выделенных в виде монокультур характерна низкая степень тиолзависимой гемолитической активности, а для штаммов, выделенных в ассоциации с S.aurcus практически с той же частотой встречаемости характерна высокая активность, т.е. штаммы, выделенные в ассоциациях в 2,2 раза высокоактивнее, чем монокультуры (табл. 3).

Таблица 3

Частота и степень проявления тиолзависимой гемолитической активности

K.pneumoniae, в %

Группа и характер выделения Степень гемолитической активности

+++ ++ + 0

1. K.pneumoniae (монокультуры) 20,8 25,6 45,9 7,7

2. K.pneumoniae (ассоциации с S.aureus) 46,8 26,3 21,3 5,6

Примечание. +++ — высокая, ++ - средняя, + — низкая, 0 - отсутствие активности

Из клинических изолятов S.aureus в среднем 10 (12,5%) культур обладали способностью синтезировать тиолзависимые гемолизины. Среди активных 3 (7,5%) моноштаммов, среднюю активность проявляли 2 (65,6%) штамма, слабую - 1 (34,4%), а из 8 (20,0%) активных штаммов S.aureus в ассоциации с K.pneumoniae проявили высокую активность 4 (50,0%) штамма, среднюю - 3 (37,5%) и слабую - 1 (12,5%).

Способность продуцировать энтерогемолизин (Beutin L, 1988), который является ведущим в развитии диарейного синдрома, мы определяли на среде содержащей 5% дефибринированной крови барана. В ходе исследований установили, что зону двойного лизиса давали 9 (22,5%) штаммов K.pneumoniae выделенных в виде ассоциаций и 7 (17,5%) штаммов - в виде монокультур. Следует отметить, что в условиях нашего опыта среди клинических изолятов S.aureus не обнаружено штаммов, обладающих энтерогемолитической активностью, что согласуется с данными В. М. Бондаренко, 3. Г. Габидуллина (2000).

Опыты количественного определения энтерогемолитической активности позволили выявить среди штаммов K.pneumoniae, выделенных в виде ассоциаций, обладающих энтерогемолитической активностью, 3 штамма проявляющих высокую активность, 4 - среднюю и 2 - низкую, а среди штаммов K.pneumoniae, выделенных в виде монокультур - 1 штамм, проявляющий высокую активность, 3 - среднюю, 3 - низкую.

Сравнительный анализ гемолитической активности штаммов K.pneumoniae, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, показал, что одновременная продукция всех трех гемолизинов выявлена у 7 ассоциированных и 4 моноштаммов K.pneumoniae, а- и энтерогемолизина - у 2 и 1, энтеро- и ти-олзависимого гемолизина-у 7 и 6. У штаммов S.aureus одновременная продук-

ция а— и тиолзависимого гемолизина выявлена у 7 штаммов, выделенных в ассоциации с K.pneumoniae и у 2 моноштаммов.

Результаты наших исследований показывают, что штаммы K.pneumoniae и S.aureus, выделенные в виде ассоциации, при дисбактериозах кишечника у детей с бронхолегочной патологией, чаще обладают способностью продуцировать а-гемолизин, синтезировать тиолзависимый и энтерогемолизин, по сравнению со штаммами, изолированными в виде монокультур.

Способность бактерий вызывать инфекционный процесс зависит or наличия у возбудителя многих факторов патогенности, но токсигенность при этом является определяющим в развитии заболевания (Габидуллин 3. Г., 1990). Согласно данным последних лет патогенность различных видов условно-патогенных энтеро-бактерий и стафилококков зависит от их способности выделять термолабильные и термостабильные энтеротоксины (Бондаренко В. М, 1999).

Проведенные нами опыты по изучению способности клинических штаммов K.pneumoniae и S.aureus, продуцировать Л Т - энтеротоксин показали, что 9 (22,5%) штаммов K.pneumoniae, 7 (17,5%) - S.aureus, выделенных в виде монокультур и 15 (37,5%) и 11 (27,5%) штаммов соответственно в виде ассоциаций, оказались способными давать отек лап мышей.

При введении гретого до 85°С центрифугата 18-20 часовой бульонной культуры разница между опытными и контрольными лапками была в пределах не более 35мг, что указывало на термолабильность токсического вещества.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют, что штаммы K.pneumoniae и S.aureus выделенные в виде ассоциаций в 1,6 раза чаще способны синтезировать термолабильное токсическое вещество, чем штаммы, выделенные в виде монокультур, обуславливающее отек лап, в связи с чем плантар-ный тест может быть использован в качестве биологической модели для выявления ЛТ-энтеротоксигенности бактерий К. pneumoniae.

В последнее время отмечено увеличение популяции антибиотикорезистентных штаммов среди условно-патогенных микроорганизмов, выделенных при различных инфекциях (Николаева И. В. и др., 2001). В -этой связи цами была изучена антибио-тикоустойчивость стафилококков и клебсиелл, изолированных в виде монокультур и ассоциаций при дисбактериозах кишечника с бронхолегочной патологией.

При определении резистентное! и штаммов к антибиотикам выявлено, что множественная лекарственная устойчивость к трем и более препаратам была характерна для 42,5% клебсиелл в монокультурах, для 75,0% в ассоциации

K.pneumoniae c S.aureus. Отмечалась резистентность монокультур к гентамици-ну - 47,5%, канамицину - 50,0%, левомицитину - 60,0%, ассоциаций к ампициллину - 92,5%, карбенициллину - 92,5%, эритромицину - 100%.

Стафилококки, выделенные при дисбактериозе кишечника у детей, обладали довольно высокой чувствительностью практически ко всем изученным антибиотикам. Множественной устойчивостью к трем и более препаратам обладали в среднем 17,5% штаммов S.aureus в монокультурах, и 32,5% штаммов S.aureus в ассоциации с K.pneumoniae. 52,5% монокультур S.aureus и 27,5% в ассоциации с K.pneumoniae чувствительны ко всем антибиотикам.

Анализ чувствительности выделенных штаммов K.pneumoniae и S.aureus к бактериофагам продемонстрировал, что к K.pneumoniae, выделенные в ассоциации, лизировались клебсиеллезным бактериофагом в 25,0% случаев, т. е в 1,8 раза реже, чем моноизоляты K.pneumoniae - 45,0% случаев (р<0,05). Стафилококковым бактериофагом лизировались 35 (87,5%) штаммов S.aureus выделенных в виде монокультур и 34 (85,0%) штамма, выделенных в виде ассоциаций.

Проанализированы результаты лабораторных исследований до и после применения, в условиях стационара РДКБ, препарата-пробиотика «Линекс» и национального напитка «Буза», рекомендованного в качестве продукта функционального питания.

Установили, что до приема препарата «Линекс» у всех обследованных детей имели место выраженные сдвиги в микробиоценозе кишечника. Эти сдвиги проявлялись в снижении количества нормальной Е. coli, в повышении количества условно-патогенных бактерий, грибов рода Candida, в повышении уровня E.coli с гемолизирующей и лактозонегативной активностью, снижении концентрации бифидо- и лактобактерий. Повторные исследования спустя 2 месяца после завершения лечения показали увеличение уровня лактобацилл до 71gKOE/r у 83,3% пациентов, бифидобактерий до 91gKOE/r у 95,8% пациентов. Высев УПЭ и стафилококков отмечался в единичных случаях. Из числа бактериальных контаминантов сохранялся высев клостридий и дрожжеподобных грибов, однако их величина не превышала допустимых титров.

Результаты лабораторных исследований показали, что курс приема «Бузы» улучшил показатели микрофлоры у 71,4% обследованных детей с дисбактерио-зом кишечника. Установили, что под влиянием напитка улучшаются показатели содержания облигатной анаэробной микрофлоры на 2-3 порядка, уровень содержания условно-патогенных энтеробактерий также снижался до 2,81gKOE/r,

клебсиелл - при этом ни в одном случае

их содержание не превышало нормы (до 41gKOE/r). Эти изменения носили длительный характер, т.к. через 1 месяц после окончания приема напитка результаты микробиологических исследований свидетельствовали об отсутствии у всех обследованных детей лактозонегативных и гемолизирующих Е. coli, клебсиелл, протея, золотистого стафилококка.

Таким образом, совокупность полученных результатов позволяет сделать заключение, что у 89,2% детей с бронхолегочной патологией наблюдаются микроэкологические нарушения в кишечнике с выделением условно-патогенных микроорганизмов (в частности, штаммы бактерий K.pneumoniae и S.aureus в виде ассоциаций и монокультур). Ассоциированные штаммы чаще обладают множественной лекарственной устойчивостью, комплексом факторов патогенности (адгезивная, антилизоцимная, антиинтерфероновая, антикомплементарная, гемолитическая, ДНК-азная и ЛТ-энтеротоксигенная активности), что свидетельствует об их высокой возможности к колонизации и этиологической роли в возникновении дисбиоза. Высокие значения факторов патогенности ассоциированных штаммов коррелируют с выраженностью дисбактериоза кишечника у детей с бронхолегочными заболеваниями.

Выводы

1. Показано, что у детей, находившихся на стационарном лечении в пульмонологическом отделении РДКБ, выявляются нарушения микробиоценоза кишечника. Дисбиотическое состояние кишечника отмечается у 89% обследованных детей с бронхолегочной патологией, среди которых 74% дети в возрасте до 1 года

2. Изменение микробиоценоза кишечника у детей с пневмонией и бронхитом проявляются в виде дисбактериоза 1 степени - 9,5%, 2 степени - 54%, 3 степени -14%, 4 степени — 12%. При 2 степени дисбактериоза, среди условно--патогенных микроорганизмов, чаще выделялись штаммы K.pneumoniae - 27,5% и S.aureus -43% в виде монокультур, а при 3 и 4 степенях - их ассоциации - 35%.

3. Штаммы K.pneumoniae и S.aureus, изолированные из испражнений детей с бронхолегочной патологией в асесоциации, часто обладают адгезивной, гемолитической (а-, тиолзависимой, энтеро-), антилизоцимной, антикомплементарной, антиинтерфероновой, ДНК-азной и ЛТ-энтеротоксигенной активностями, чем штаммы, выделенные в виде монокультур.

4. У штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в ассоциации из испражнений детей с бронхолегочными заболеваниями, чаще обнаружена множественная лекарственная устойчивость к трем и более широкоприменяемым в практике антибиотикам, чем изолированные в виде монокультур.

5. Регулярный прием комплексного бактерийного препарата «Линекс» и продукта функционального питания — напитка «Буза» способствует нормализации кишечной микрофлоры, в результате чего происходит вытеснение условно-патогенных микроорганизмов в т. ч. и штаммов К. pneumoniae и S.aureus и оптимизация характера взаимоотношений между различными группами микробиоценоза кишечника..

6. В ассоциации с культурами бактерий K.pneumoniae и S.aureus выделен приоритетный штамм Enterobacter gergoviae ГНИИСК № 259, обладающий комплексом факторов патогенности, который запатентован (патент № 2161197) и может быть использован как эталонная культура при идентификации бактерий данного семейства.

Практические рекомендации

1. Полученные результаты о биологических свойствах исследуемых штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных при дисбактериозах кишечника у детей с бронхолегочной патологией следует использовать для оценки их этиологической значимости.

2. Для решения проблемы антибиотикорезистентности, рекомендуется проводить надзор, направленный на мониторирование и сбор информации о назначении антибиотиков в стационаре.

3. При коррекции дисбиозов кишечника рекомендуется применение препарата-пробиотика «Линекс» и продукта функционального питания - напитка «Буза».

4. При идентификации выделенных от больных штаммов в качестве эталонной культуры рекомендуется использовать запатентованный штамм Entero-bacter gergoviae ГНИИСК № 259.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации.

1. ОчиловаР. А. Микроэкология кишечника у детей раннего возраста с синдромом дисбиоза: линекс как решение проблемы / Нижевич А. А., Мута-лов А. Г., Хасанов Р. Ш., Мельникова 3. М., Очилова Р. А., Нуртдинова Н. М.,

КоценкоТ. М., Кальметьева Л. Р. // Здоровье детей и подростков' в современных социально-экономических и экологических условиях: Материалы межрегиональной научно-практической конференции. - Уфа, 1999. - С. 167-169.

2. Состояние микрофлоры кишечника у детей с бронхолегочной патологией /Очилова Р. А., Габидуллин 3. Г., ХуснаризановаР. Ф: // Дерматологической службе Республики Башкортостан 80 лет: Юбилейный сборник. - Уфа, 2000. - С. 68-69.

3. Влияние национального напитка „Буза" на микробиоценоз кишечника. / Хуснаризанова Р. Ф., Масятутова Л. М., Очилова Р. А., Баширова Р. М. // Материалы III Международной конференции по восстановительной медицине (реа-билитологии). - М., 2000. - С. 435.

4. Влияние башкирского национального напитка «Буза» на состав микрофлоры кишечника / Хуснаризанова Р. Ф., Гайнуллина М. К., Масягутова Л. М., Очилова Р. А., Баширова Р. М. // Итоги биологических исследований: С6./БГУ. Вып. 6. - Уфа, 2000. - С. 92-94.

5. Состояние кишечного микробиоценоза у детей с заболеваниями органов дыхания и желудочно-кишечного тракта / Хуснаризанова Р. Ф., Очилова Р. А., Га-бидуллин 3. Г. //Актуальные проблемы материнства в медицине труда: Материалы Российской научно-практической конференции. -Уфа, 2001. - С. 180-182.

6. Изучение микрофлоры кишечника у детей с заболеваниями органов дыхания / Очилова Р. А., Габидуллин 3. Г., Хуснаризанова Р. Ф. // Актуальные проблемы обеспечения санэпидблагополучия в регионах центральной России. Научные труды Федерального научного центра гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана. -Липецк, 2001. - Вып. 2, ч. II. - С. 210-212.

7. Оценка литической активности бактериофагов / Хуснаризанова Р. Ф., Очилова Р. А, Габидуллин 3. Г. // Материалы VIII всероссийского съезда эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М., 2002. - С. 269-270.

8. Нарушения микроэкологии кишечника в условиях техногенного воздействия и пути их коррекции / Бакиров А. Б., Симонова Н. И., Масягутова Л. М., Очилова Р. А. и др. // Методические рекомендации. - Уфа, 2002. - 14 с.

9. Биологические свойства клебсиелл и стафилококков, выделенных при дисбактериозах кишечника у детей раннего возраста с бронхолегочной патологией / Очилова Р. А., Хуснаризанова Р. Ф., Габидуллин 3. Г. // Материалы конференции «Гомеостаз и инфекционный процесс». - Сочи, 2003. - С. 65.

10. Дисбиоценоз (дисбактериоз) кишечника у детей: микроэкологическая характеристика, рациональная коррекция и профилактика / Нижевич А. А.,.

Нуртдинова Н. М., Очилова Р. Л., Логиновская В. В. // Методические рекомендации. - Уфа, 2003. - 58 с.

11. Штамм бактерий ЕйегоЬайег gergoviae ГНИИСК № 259, обладающий комплексом факторов патогенности. Патент № 2161197, 2000 г. / Ахтариева А. А., Алсынбаев М. М., Габидуллин 3. Г., Хананова Р. К., Булгаков А. К., Кулагин В. Ф., Суфиярова Р. 3., Габидуллин Ю. 3., Гафаров М. М., Очилова Р. А.

12. Факторы патогенности бактерий рода ЕМегоЬайег / Ахтариева А. А., Очилова Р. А., Савченко Т. А., Саляхов Р. 3., Камалова А. А. // Проблемы развития и охраны здоровья детей и подросткового возраста. Сборник научных трудов. - Уфа, 2003. - С. 16-20.

Очилова Рагна Амирьяновна

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ШТАММОВ K.PNEUMONIAE И S.AUREUS, ВЫДЕЛЕННЫХ В ВИДЕ МОНОКУЛЬТУР И АССОЦИАЦИЙ, ПРИ ДИСБАКТЕРИОЗАХ КИШЕЧНИКА У ДЕТЕЙ С БРОНХОЛЕГОЧНОЙ

ПАТОЛОГИЕЙ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Издательская лицензия № 06788 от 01.11.2001 г. ООО «Издательство «Здравоохранение Башкортостана» 450077, РБ, г. Уфа, ул. Ленина, 3, тел. (3472) 22-73-50, факс 22-37-51.

Подписано в печать 25.10.2004 г. Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman. Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе. Усл. печ. л. 1,4. Уч.-изд. л. 1,5. Тираж 100. Заказ №140.

»21 475

РНБ Русский фонд

2005-4 22773

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Очилова, Рагна Амирьяновна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Роль нормальной микрофлоры кишечника в поддержании здоровья у детей.

1.2.Микроэкология кишечника у детей с заболеваниями органов дыхания.

1.3. Роль Klebsiella spp. и Staphylococcus spp. в инфекционной патологии.

1.4. Рациональные подходы к проблеме коррекции микробиоценоза кишечника у детей.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 3. ОСОБЕННОСТИ МИКРОФЛОРЫ ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА У ДЕТЕЙ ПРИ БРОНХОЛЕГОЧНОЙ ПАТОЛОГИИ.

3.1. Оценка кишечного микробиоценоза у детей, находившихся на стационарном лечении в РДКБ.

3.2. Микробиоценоз кишечника у детей раннего возраста с острыми заболеваниями органов дыхания.

ГЛАВА 4. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА КЛИНИЧЕСКИХ ШТАММОВ KLEBSIELLA PNEUMONIAE И STAPHYLOCOCCUS AUREUS, ВЫДЕЛЕННЫХ В ВИДЕ МОНОКУЛЬТУР И АССОЦИАЦИЙ, ИЗ КИШЕЧНИКА У ДЕТЕЙ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ.

4.1 Биохимическая характеристика клинических штаммов бактерий родов Klebsiella и Staphylococcus.

4.2. Адгезивная активность штаммов K.pneumoniae и S.aureus.

4.3. Персистентные свойства у штаммов K.pneumoniae и S.aureus.

4.4. ДНК-азная активность штаммов K.pneumoniae и S.aureus.

4.5. Гемолитическая активность штаммов K.pneumoniae и S.aureus.

4.6. Лекарственная устойчивость штаммов K.pneumoniae и S.aureus.

4.7. Изучение токсигенности штаммов K.pneumoniae и S.aureus методом «отек лап».

4.8. Обоснование лечебно-реабилитационных мероприятий для коррекции показателей неспецифической резистентности.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологические свойства штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, при дисбактериозах кишечника у детей с бронхолегочной патологией"

Актуальность проблемы. Неуклонный рост числа заболеваний, связанных с нарушением биологического равновесия между макроорганизмом и разнообразными популяциями микробной флоры его отдельных органов и систем, сложившегося в процессе эволюции, привлекает внимание врачей различных специальностей: педиатров, гастроэнтерологов, неонатологов, инфекционистов и др. Наиболее уязвимы в этом отношении дети, состояние здоровья которых вызывает тревогу во всех регионах Российской Федерации [6, 29, 49]. В структуре детской патологии лидируют болезни органов дыхания, проблема успешного лечения которых остается нерешенной до настоящего времени [71, 101]. Интенсивная медикаментозная терапия, в частности применение антибиотиков при бронхолегочных заболеваниях у детей, часто приводит к количественным и качественным изменениям микробиоценоза кишечника, способствующим отягощению течения основного заболевания [56, 102, 103].

Дисбактериоз кишечника у детей раннего возраста характеризуется выраженными нарушениями нормальной микрофлоры толстой кишки и часто протекает в ассоциированных вариантах [59]. Возбудители этих инфекций, как правило, принадлежат к группе условно-патогенных бактерий, среди которых в последнее годы доминируют Staphylococcus spp. и представители семейства Enterobacteriaceae, в частности Klebsiella spp. Им же принадлежит значительная роль в развитии дисбактериоза кишечника, поскольку достаточно часто колонизация слизистых оболочек различных биотопов организма ребенка стафилококками и клебсиеллами является стадией предшествующей локальной или системной инфекции [19, 90].

Сведений о клинической картине кишечных инфекций, вызванных клебсиеллами и о свойствах штаммов, выделенных в монокультуре, или в ассоциации с условно-патогенными бактериями, в т.ч. стафилококками, весьма немногочисленны [51]. Одновременное развитие нескольких возбудителей приводит не только к суммированию болезнетворных возможностей, но и вызывает взаимное усиление вирулентности ассоциантов. Наряду с этим в популяциях взаимодействующих микроорганизмов увеличивается число особей, устойчивых к антибиотикам [8].

Исследования, направленные на изучение биологических свойств микробных ассоциаций позволят в каждом конкретном случае провести целенаправленную профилактику и лечение инфекционных процессов, в частности вызванных ассоциациями и монокультурами бактерий родов Klebsiella и Staphylococcus.

Исходя из вышеизложенного, оценка этиологической роли клинических штаммов Klebsiella pneumoniae и Staphylococcus aureus, выделенных в виде ассоциаций и монокультур, в возникновении дисбиотических состояний кишечника детей, страдающих бронхолегочными заболеваниями, требует всестороннего исследования их биологических свойств.

Цель работы. Изучение некоторых биологических свойств клинических штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, при дисбактериозе кишечника у детей с бронхолегочной Ж патологией.

Задачи исследования:

3. Выяснить частоту проявления адгезивной, гемолитической (а-, тиолзависимой, энтеро-) антилизоцимной, антикомплементарной, антиинтерфероновой, ДНК-азной, JIT-энтеротоксигенной активностей у фекальных штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций.

5. Обосновать возможность применения комплексного препарата „Линекс" и функционального питания „Буза" в коррекции нарушений микроэкологии кишечника у детей с заболеваниями органов дыхания.

Научная новизна. Дан анализ состояния микрофлоры кишечника у детей раннего возраста с патологией органов дыхания. Впервые проведено сравнительное изучение факторов патогенности (адгезивной, гемолитической (а-, энтеро-, тиолзависимой), антилизоцимной, антикомплементарной, антиинтерфероновой, ДНК-азной, ЛТ-энтеротоксигенной активностей), чувствительности к антибиотикам у штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций из кишечника детей, больных пневмонией и бронхитом.

Выявлены различия в выраженности факторов патогенности и антибиотикорезистентности K.pneumoniae и S.aureus в зависимости от степени дисбиотических нарушений кишечника у детей с бронхолегочной патологией.

Запатентован штамм Enterobacter gergoviae ГНИИСК №259, обладающий комплексом факторов патогенности (патент №2161197, 2000г), который был выделен в ассоциации с K.pneumoniae и S.aureus из кишечника детей с бронхолегочными заболеваниями.

Практическая значимость. Показана необходимость лабораторных исследований фекалий на дисбактериоз у детей раннего возраста с патологией органов дыхания для выявления ранних нарушений микробиоценоза кишечника при применении медикаментозной терапии, особенно антибактериальной.

Представлена информация об этиологической роли факторов патогенности (адгезивная, гемолитическая (а-, энтеро-, тиолзависимая), антилизоцимная, антикомплементарная и антиинтерфероновая, ДНК-азная, JIT-энтеротоксигенная активности) фекальных штаммов K.pneumoniae и S.aureus, как критериев развития дисбиотических нарушений микрофлоры кишечника у детей.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Качественный и количественный состав микрофлоры кишечника у детей с бронхолегочными заболеваниями.

3. У фекальных штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в ассоциации, чаще проявляется высокая степень адгезивной, гемолитической (а-, тиолзависимой, энтеро-), антилизоцимной, антикомплементарной, антиинтерфероновой, ДНК-азной, JIT-энтеротоксигенной активности, чем у монокультур.

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Российской научно-практической конференции „Актуальные проблемы материнства в медицине труда" (Уфа,2001), межрегиональной научно-практической конференции „Мать и дитя у народов Башкортостана" (2001), на конференции бактериологов г.Уфы (2002г), на совместном заседании кафедр микробиологии, вирусологии и иммунологии, инфекционных болезней Башкирского государственного медицинского университета и ведущих научных сотрудников ГУП „Иммунопрепарат" и Башкирского отделения Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (ЭМП) (протокол №1 от 18.03.2004).

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Очилова, Рагна Амирьяновна

ВЫВОДЫ

2. Изменение микробиоценоза кишечника у детей с пневмонией и бронхитом проявляются в виде дисбактериоза 1 степени - 9,5%, 2 степени - 54%, 3 степени - 14%, 4 степени - 12%. При 2 степени дисбактериоза, среди условно-патогенных микроорганизмов, чаще выделялись штаммы K.pneumoniae - 27,5% и S.aureus - 43% в виде монокультур, а при 3 и 4 степенях - их ассоциации - 35%.

3. Штаммы K.pneumoniae и S.aureus, изолированные из испражнений детей с бронхолегочной патологией в асссоциации, часто обладают адгезивной, гемолитической (а-, тиолзависимой, энтеро-), антилизоцимной, антикомплементарной, антиинтерфероновой, ДНК-азной и ЛТ-энтеротоксигенной активностями, чем штаммы, выделенные в виде монокультур.

5. Регулярный прием комплексного бактерийного препарата «Линекс» и продукта функционального питания - напитка «Буза» способствует нормализации кишечной микрофлоры, в результате чего происходит вытеснение условно-патогенных микроорганизмов в т. ч. и штаммов К. pneumoniae и S.aureus и оптимизация характера взаимоотношений между различными группами микробиоценоза кишечника.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

4. При идентификации выделенных от больных штаммов в качестве эталонной культуры рекомендуется использовать запатентованный штамм Enterobacter gergoviae ГНИИСК № 259.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Очилова, Рагна Амирьяновна, Уфа

1. Абатуров А.Е. Фазовые особенности структуры статуса микробиоценоза кишечника при заболеваниях органов дыхания у детей. // Национ. конгресс по болезням органов дыхания, 5-й: Сб. резюме. Москва. -1995.-С.887.

2. Акатов А.К., Зуева B.C. Стафилококки. М.: Медицина. - 1983. - 256с.

3. Алексахина Н.Н., Мирясова Л.В., Баснакьян И.А. Влияние оксидов металлов на рост, гемолитические и серологические свойства Klebsiella pneumoniae. // Журнал микробиологии. 2002. - №6. - С.3-9.

4. Ахтареева А.А. Характеристика некоторых биологических свойств бактерий рода Enterobacter, выделенных при инфекционных процессах различной локализации. Автореф. дис. .к.м.н. Уфа.-2000.

5. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л., Изд-во Мед.литературы.1. Ш 1962.180с.

6. Барановский А.Ю., Кондрашина Э.А. Дисбактериоз и дисбиоз кишечника,-СПб: Питер.2002.-224с.

7. Белокрысенко С.С. Бажина Е.В. Неконтролируемое формирование микрофлоры кишечника новорожденных в условиях стационара и его последствия. // Всесоюзный семинар по антибиотикотерапии: Тезисы. -М.,1988. ч1. - С.30-33.

8. Бельский В.В., Шаталова Е.В. Взаимное влияние возбудителей при смешанной инфекции ожоговой травмы.// Журн. микробиол.- 1999. -№ 4.-С.З^.

9. Березина Л.А., Ценева Т.Я., Бойков С.Г., и др. Частота встречаемости и характеристика штаммов Klebsiella pneumoniae при инфекциях новорожденных.// Журнал микробиологии.-1993.-№5.-С. 18-22.

10. Бондаренко В.М., Голубева А.В. Гемолизины энтеробактерий и их связь свирулентностью возбудителя. //Ж.микробиол.- 1988.- №11.- С.102-109.

11. Бондаренко В.М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса.// Ж. микробиол.-1999.- №5.-С.34-39.

12. Бондаренко В.М., Баркус М.М., Бондаренко Вл.М. Энтеротоксигенная способность штаммов родов Klebsiella и Enterobacter, выделенных при острых кишечных заболеваниях у детей.//Ж.микробиол.-1990.-№10.-С.28-32.

13. Бондаренко В.М., Мавзютов А.Р., Габидуллин З.Г. Темостабильные энтеротоксины условно-патогенных представителей Enterobacteriaceae. //Ж.микробиол.- 1998. №3.- С.104-107.

14. Бондаренко В.М., Петровская В.Т., Яблочков A.JI. Антилизоцимный фактор Klebsiella pneumoniae: природа, биологические функции и генетический контроль. // Журнал микробиологии.- 1994.-№5.-Приложение.- С.22-27.

15. Бочков И.А. Особенности формирования аутомикрофлоры у новорожденных в раннем неонатальном периоде (эпидемиологические и микробиологические аспекты). Автореф. дисс. . докт. мед. наук. М., 1998. 243с.

16. Брилис.В.И., Брилене Т.А., Ленцнер Х.П., Ленцнер А.А. Методика изучения адгезивного процесса микроорганизмов.// Лабораторное дело.-1986.- №4.-С.210-212.

17. Брудастов Ю.А., Валышев А.В., Брудастов А.Н. Антикомплементарная активность.// Журнал микробиологии. 1996.-№3. - С.91-93.

18. Бухарин О.В., Матюшина С.Б., Чернова О.Л. Питательная среда для выделения стафилококков с персистентными характеристиками.//Ж.Клиническая лаб.диагностика. 1999.-№8. - С.35-36.

19. Бухарин О.В. Биомедицинские аспекты персистенции бактерий .//Журнал микробиологии. 1994.- №4.-Приложение.- С.4-13.

20. Бухарин О.В., Брудастов Ю.А., Дерябин Д.Г. Изучение антикомплементарной активности стафилококков.// Ж. Клин. лаб. диагн.-1992.-№3.-С.43-46.

21. Бухарин О.В., Брудастов Ю.А., Валышев А.В., Брудастов А.Н. Антикомплементарная активность производственного штамма Bacillus cereusIP 5832 и энтеробактерий при их совместном культивировании.//Журн. микробиол.-1996.-№3.-С.91-93.

22. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. Екатеринбург. УрО РАН, 1999. С. 12-23.

23. Бухарин О.В., Соколов В.Ю. Способ определения антиинтерфероновой активности микроорганизмов. А.с. 1564191 СССР//№ 18.-1990.

24. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Хуснутдинова JI.M. Межбактериальные взаимодействия.//Журнал микробиологии.-2003.-№4.-С.З-8.

25. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Малышкин А.П., Немцова Н.В. Определение антилизоцимной активности.// Журнал микробиологии.- 1984. -№2.- С.27-28.

26. Валышев А.В., Гильмутдинова В.Г., Фомичева С.В. Факторы персистенции энтеробактерий фекальной флоры при дисбактериозе кишечника.//Ж. микробиол.-1996.-№3.-С.96-98.

27. Вартанян Ю.П., Северцева М.К., Введенская О.И., и др. Отек лап белых мышей — тест для оценки активности энтеротоксинов Escherichia coli.// Бюлл. Эксп. биол. и медицины.-1978.-№2. -С.150-152.

28. Вертиев Ю.В. Бактериальные токсины: биологическая сущность и происхождение.//Журнал микробиол.- 1992.- №3.-С.43-46.

29. Воеводин Д.А., Розанова Г.Н., Стенина М.А., Чередеев А.Н. Роль дисбактериоза в формировании хронической неинфекционной патологии у детей. //Журнал микробиол.- 2001.-№6.-С.88-93

30. Воробьев А.А., Иноземцева JI.O., Буданова Е.В., Пашков Е.П., Несвижский Ю.В. и др. Изменения микробиоценоза толстой кишки у больных различными заболеваниями. // Вестн. РАМН. 1995.- №5.-С.59-64.

31. Воробьев А.А., Лыкова Е.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции.// Журн. микробиологии. -1999.-№6.- С. 102-105.

32. Габидуллин З.Г. Биологическая характеристика штаммов Proteus, выделенных при инфекционных процессах различной локализации. Автореф. дис. . д-ра. мед. наук,- Саратов.-1990.

33. Габрилович И.М., Бозиев В.Б., Габрилович М.И., Нагоев Б.С., Накова Л.В., Усаева Я.С. Гетерогенность антилизоцимной активности в популяциях условно-патогенных энтеробактерий. //Журнал микробиол.- 1994.- №5 (приложение). С.32-33.

34. Газиев Г.М., Батуро А.П. Характеристика штаммов клебсиелл, выделенных от больных острыми кишечными заболеваниями. // Журнал микробиол. -1986.- №5.- С.32-34.

35. Гашимова Д.Т. Биологические свойства клинических штаммов Morganella, выделенных от больных с инфекционными процессами различной локализации.- Автореф. дис. . к-та. мед. наук.-Уфа.-1995.

36. Гостева В.В., Бондаренко В.М., Корягина И.П., Клицунова Н.В. Адгезия Klebsiella pneumoniae на эпителиоидных клетках in vitro. Журнал микробиол. 1984.- №3. - С.32-35.

37. Государственный доклад о состоянии здорвья населения Российской Федерации в 2001 году .//Здравоохранение Российской Федерации.-2003.-№4.-С.З-17.

38. Дещекина М.Ф., Коршунов В.И., Демин В.Ф. и др. Новые возможности защиты новорожденных детей от контаминации условно-патогенными микроорганизмами. //Педиатрия. 1993.-№4.~ С.9-12.

39. Джамали Н.Ф., Бонн Е.Г. Становление биоценоза кишечника у здоровых и больных новорожденных детей. //Педиатрия. 1991.- №2.- С.88-91.

40. Дмитриева С.Н. Функциональное состояние желудочно-кишечного тракта и коррекция дисбактериоза кишечника у новорожденных и детей первых месяцев жизни. Автореф. дисс. . канд. мед. наук. Запорожье. 1990. С.20.

41. Дорофейчук В.Г., Леканцева Г.А. Дисбактериоз кишечника у детей в период новорожденности и его последствия.//Педиатрия.-1982.-№1.-С.72-77.

42. Заикина О.Л. Клиническое значение антилизоцимного признака возбудителей инфекции мочевой системы у детей. Автореф.дис. .к.м.н. Оренбург, 1995.

43. Запруднов A.M., Мазанкова Л.Н. Микробная флора кишечника и пробиотики. М. 1999.117с.

44. Каганов С.Ю., Розинова Н.Н., Нестеренко В.Н., Мизерницкий Ю.Л. Хронические бронхолегочные болезни у детей как проблема современной педиатрии. //Рос.вестн.перинатол.педиатр. -1998. №43(1).-С.10-17.

45. Калюжная Л.Д., Балезина Т.А. и др. Бактериологическая характеристика микробной флоры кишок у детей раннего возраста при пневмонии с кишечным синдромом. // Кишечные инфекции: Респ. межвед.сб. Киев. -1985.- С.62-65.

46. Киселева Б.С., Красноголовец В.Н. Роль Klebsiella pneumoniae в этиологии бактериального сепсиса. // Журнал микробиологии. 1983.- №2.- С.20-22.

47. Коротяев А.И., Бабичев С.А., Медицинская микробиология, иммунология и вирусология.//С.-П., Специальная литература.- 1998.-592с.

48. Коршунов В.М., Радакова Е.Д., Дугашева Л.Г. Влияние подкожной контаминации стафилококками на состояние микрофлоры кишечника у животных. Автореферат.//Ж.микробиол.-1990.-№3.- С. 105-105.

49. Коршунов В.М., Володин Н.Н., Ефимов Б.А. и др. Микроэкология желудочно-кишечного тракта. Коррекция микрофлоры при дисбактериозах кишечника. М. 1999.178с.

50. Красноголовец В.Н., Киселёва Б.С. Клебсиеллезные инфекции. М.-1996.-256с.

51. Куваева И.Б., Ладодо К.С. Микроэкологические и иммунные нарушения у детей. М.-1991.- 224с.

52. Кузнецова Т.А., Катосова Л.К., Акуратова Л.Л. Клинико-этиологическая характеристика и оценка эффективности антибиотикотерапии острых осложненных пневмоний у детей. // Вопросы охраны материнства и детства.-1989.-№7.-C.33-36.

53. Кулинич Д.Г., Абатуров А.Е., Герасименко О.Н. Взаимосвязь состояния иммунитета и микробиоценоза кишечника у детей раннего возраста, больных острыми заболеваниями органов дыхания. // Педиатрия. 1990.-№10.- С.15-17.

54. Кушнарева М.В., Черноног М.Н., Дементьева Г.М. и др. Микрофлора кишечника и её коррекция биопрепаратами при пневмонии у новорожденных детей. // Национ. конгресс по болезням органов дыхания,5-й: Сб. резюме Москва 14-17 марта 1995.-№.940.

55. Леванова Л.А., Алёшкин В.А., Воробьев А.А., Афанасьев С.С., и др. Становление микрофлоры кишечника у детей первого года жизни. //Журнал микробиол.- 2001.-№4.-С.47-50.

56. Литяева Л.А. Микроэкологические подходы профилактики инфекционных заболеваний новорожденных. //Педиатрия. 1993.-№3.-С.32-35.

57. Лучшее В.И., Бондаренко В.М., Шахмарданов В.М. Дисбактериозы у больных шигеллёзами: причины развития и пути коррекции. // РМЖ.-2000.-№3.-С.35-38.

58. Лыкова Е.А., Воробьев А.А., Боковой А.Г., Каражае Н.В., Евсеева Л.Ф. Ассоциативная инфекция при острых бронхолегочных заболеваниях у детей. //Вестник РАМН .-2003.-№ 4. -С.50-53.

59. Маянский А. Н. Микробиология для врачей. Дисбактериоз: иллюзии и реальность.// И-во НГМА Н.Новгород. 1999. - С.264-281.

60. Меньшиков Д.Д., Енилеев Р.Х., Кумачева Е.Г. Актуальные проблемы нозокомиальных инфекций и лекарственная устойчивость микроорганизмов. Минск.- 1986.- С. 173-174.

61. Методические рекомендации. Определение чувствительности к имипенему диско-диффузионным методом. Смоленск, 1997.-22с.

62. Минушкин О.Н., Ардатская М.Д., Бабин В.А., Домарадский И.В., Дубинин А.В. Дисбактериоз кишечника.// Российский медицинский журнал.- 1999.- №3.- С.40^Ф4.

63. Митрохин С.Д., Минаев В.И., Зайцева О.Н. Факторы персистенции условно-патогенных микроорганизмов при дисбактериозе желудочно-кишечного тракта.// Ж.микробиол.-1997.-№4.-С.84-87.

64. Мнацаканов С.Т., Коцинян М.Е. D-Маннозорезистентная гемагглютинация у условно-патогенных энтеробактерий при диареях у детей.// Журнал микробиол.-1984. №3.- С.46-48.

65. Мороз А.Ф., Бабаева Е.У., Бойков С.С. Частота встречаемости грибов рода Candida albicanc в сочетании со штаммами Staphylococcus и Klebsiella при дисбактериозе кишечника.// Клиническая лабораторная диагностика. -2001.11.- С. 37.

66. Мощич Г.С., Чернышева Л.И. Особенности становления микрофлоры у новорожденных в раннем неонатальном периоде. // Вопросы охраны материнства и детства. 1988.- №1.- С.29.

67. Мухина Ю.Г. Диагностика и коррекция дисбактериоза у детей.// Российский медицинский журнал.- 1999, том 7.- №11.- С.487-494.щ

68. Навроцкий В.А. Особенности клиники и лечения гнойно-септических заболеваний, осложненных дисбактериозом, у детей раннего возраста: Афтореф. Дисс. . к.м.н. Киев.- 1986.- 23с.

69. Науменко З.С., Розова Л.В., Клюшин Н.М. Динамика устойчивости к лекарственным препаратам S.aureus, выделенных от больных хроническим остеомиелитом.//Ж.микробиол.-2003.-№2.-С.70-72.

70. Нестеренко В.Н., Каганов С.Ю. Пневмонии у детей. Под ред. С.Ю.Каганова, Ю.Е.Вельтищева. М: Медицина. -1995.- С.257-269.

71. Николаева И.В, Бондаренко В.М., Анохин В.А., Галеева О.П. Частота колонизации стафилококками кишечника у детей с явлениями дисбактериоза.//Ж.микробиол -2000.-№ 1 .-С. 17-21.

72. Николаева И.В., Анохин В.А., Бондаренко В.М., Галеева О.П.Щ

73. Лекарственная устойчивость штаммов S.aureus, выделенных у детей с дисбактериозом кишечника.//Ж.микробиол.-2001.-№1.- С.9-13.

74. Орпеделитель бактерий Берджи. Т.1: Пер. с англ./ Под ред. Дж. Хоулта, Н.Грига, П. Сита, С. Уилльямся.- М.: Мир, 1997.-432 с.

75. Парфенов А.И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз.// Русский медицинский журнал. 2000, том 6.- №18.-С.

76. Петровская В.Г., Бондаренко В.М. Адгезины энтеротоксигенных кишечных палочек: роль в патогенезе диарей и генетический контроль.// Ж. микробиол.- 1990.-№5.-С.110-116.

77. Петровская В.Г., Бондаренко В.М., Маринова Р., Корягина И.П., Афанасьева С.М. Характеристика штаммов рода Proteus, Klebsiella, Enterobacter и Citrobacter, выделенных при уроинфекциях. // Журнал микробиологии. 1983.- №2.- С.25-31.

78. Постникова Е.А., Пикина А.П., Кафарская Л.И., Ефимов Б.А. Изучениекачественного и количественного состава микрофлоры кишечника уклинически здоровых детей в раннем возрасте.//Журнал микробиол. -2004.-№1.-С.62-67.

79. Поликарпов Н.А., Викторов А.Н., Зубков М.Н. Некоторые количественные обсемененности испражнений нуклеазоположительными микроорганизмами у людей с нормальной микрофлорой и при дисбактериозе кишечника. //Ж.микробиол.- 1990.- №4.-С.117-119.

80. Приказ №250 "Об унификации методов определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам". Утв. МЗ СССР 13.03.75.

81. Руднев И.А., Бондаренко В.М. Тиолзависимые гемолизины как факторы патогенности клебсиелл. //Журнал микробиол. 1993.-№6.- С.31-32.

82. Рысс Е. С. Антибиотики в гастроэнтерологии // Материалы научно-практической конференции «Практика современной антибактериальной терапии внебольничных и госпитальных инфекций». 2000. - С. 42-50.

83. Савицкая К.И., Воробьев А.А., Швецова Е.Ф. Современные предствления о роли и составе кишечной микрофлоры у здоровых взрослых людей.//Вестник РАМН.-2002.- №2.-С.50-52.

84. Самсыгина Г.А., Бони Е.Г. Бактериофаги и фаготерапия в педиатрической практике. // Педиатрия.-1984.-№ 4.-С.67-70.

85. Самсыгина Г.А., Бони Е.Г., Черкасская Р.С. Характеристика микробной колонизации новорожденных детей с перинатальной патологией. // Педиатрия. 1988.-№8.-С.18-22.

86. Сиволодский Е.П. Систематика и идентификация энтеробактерий. Методические рекомендации. С.Петербург, 1998.-36с.

87. Субботина М.Д., Тимошенко В.А. и др. Дисбактериоз кишечника у детей и микроэкологические подходы к его коррекции. Учебно-методическое пособие. С.-Петербург. 1997.- 25с.

88. Сурикова Е.В., Леванова Л.А. Диагностическая ценность определения факторов персистенции клебсиелл при дисбактериозах.//Ж.микробиол.-1999.-№4.-С.87-88.

89. Сурикова Е.В. Факторы персистенции клебсиелл. //Журнал микробиол. -1994.- №5 (приложение). С. 104-106.

90. Таболин В.А., Бельме С.В., Гасилина Т.В. и др. Рациональная терапия дисбактериоза кишечника у детей. Методические рекомендации. М., 1998.- 11с.

91. Тиссо-Геррас Ф., Сетр Ж.С., Мелье С.С. и др. Госпитальная инфекция в родильных домах.// Журн. микробиол.- 1995. №4.- С. 35-39. ■

92. Трапезов, Уразбаев Ж.К., Бондаренко В.М., Родинов А.В., Разумовская И.Н. Формирование микробиоценоза кишечника у новорожденных в норме и при антибиотикотерапии.// Ж.микробиол.-1990.-№10.-С.48-53.

93. Туйгунов М.М. Характеристика некоторых биологических свойств бактерий рода Citrobacter, выделенных при инфекционных процессах различной локализации. Автореф. дис. . к.м.н.-Уфа.-1998.

94. Урывчиков Г.А., Морушков В.И. Особенности изменений местного иммунитета кишечника у здоровых и больных пневмонией детей грудного возраста // Вопросы дет. гастроэнтерологии. Горьковский мед. институт., 1984.-№ 5. С.76-79.

95. Фазылова А.А. Клинико-иммунологическифбоснования применения \/ споробактерина и бактиспорина при дисбиозе кишечника у детей раннего возраста: Автореф. дис. .к.м.н.-Уфа.-1998.-24с.

96. Феденко Н.Н., Феденко С.И. Тяжелые формы острой пневмонии с затяжным течением, сопровождающиеся дисфункцией печени, кишечникаи дисбактериозом у детей раннего возраста. // Педиатрия. 1988.- №11.-С.36-41.

97. Федоров Р.В., Федорова Е.Р. Бактериологическая диагностика дисбактериоза. Методические рекомендации для врачей-курсантов. Казань, 1989. -30с.

98. Флуер Ф.С., Шевелева А.Ф., Текутьев С.И. Распространение энтеротоксигенных штаммов S.aureus, выделенных при патологии беременных женщин. // Ж.микробиол.-2000.-№ 6.-С.13-15.

99. Хмелевская Г.В., Девтерова JI.B., Яговкин Э.А., Шепелев А.П., Мартыненко Л.Д. Факторы патогенности некоторых условно-патогенных бактерий, вызывающих диареи.//Ж.микробиол.-1990.-№ 4.-С.97-101.

100. Чучалин А.Г., Черняев А.Л., Антонов Н.С., Васильева О.С. Методологические вопросы постановки диагноза в пульмонологии. Проект. Рабочее совещание по организации пульмонологической помощи в России. Екатеринбург.- 2000.-13с.

101. Шамсиев Ф.М., Хайдарова М.М., Нурматов Б.А., Ша-Ахмедова Л.Р. Микробиоценоз толстой кишки при острой осложненной пневмонии у детей.// Журнал микробиол. -2001.-№1.-С.67-69.

102. Шендеров Б.А. Нормальная микрофлора и её роль в поддержании здоровья человека.// Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1998,том 8.- №1.- С.61-65.

103. Шендеров Б.А. Колонизационная резистентность и антимикробные препараты. В кн.:Антибиотики и колонизационная резистентность / Под ред. Б.А.Шендерова. М., 1990.-С.91-98.

104. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том 1: Микрофлора человека и животных и её функции. М.: 1998.-288с.

105. Шеришорина С.Ш., Савельев В.Н. Изучение клебсиелл, выделенных от больных и здоровых людей. // Журнал микробиологии. 1972.- №9.- С. 134137.

106. Эпштейн-Литвак Р.В., Вильшанская Ф.Л. Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника. Методические рекомендации. Москва, 1977.-20с.

107. Ющук Н.Д., Верткин А.Л. Дисбактериоз кишечника: патогенез и фармакотерапия // Междунар. мед. журн. 1998. - N 4.С.12.

108. Abrams G.D. Microbial effects on mucosal structure and function.// Amer. J Clin. Nutr.- 1977.- Vol.30.P.107-l 15.

109. Anzueto A. Contemporary Diagnosis and Management of Bronchitis. 2nd ed. -Newtown, Pensylvanian.- 1999. - 128p.

110. Appelbaum H.C. Prozecky O.W. Transductional analysis of nonmotile mutans in Proteus mirabilis.//J.of Gen. Microbiology 1973.-Vol.77.- N.1.-P.89-97.

111. Balslev Т., Christens В., Ebbesen F., Schumacher H., Corsair B. Gentamycin resistant Enterobacteriaceae at a neonatal care unit. // Udeskr. Lacger.-1994.-Vol. 156.-N.43.-P. 6378-6380.

112. Barbers L.J., Eraso A J., Pajaro M.C. and Albesa J. Molecular weight determination and partial characterization of Klebsiella pneumonia haemolysins. //Can. J. Microbiol.-1986.-Vol.32.-P.884-885.

113. Bartlett J., Breiman R., Mandell L., File T. Community-acquired pneumonia in adults: guidelness for management.// Clin. Inf. Dis. 1998, 26. P.811-838.

114. Baron E.J., Pfaller M.A., Tenover F.C., Yolken R.H. Manual of Clinical Microbiology.// 7th ed., ed. in chief P.R.Myttay. - Washington: Am.Soc. Microbiol.- 1999. - 1773p.

115. Bell D., Shaprio C.N., Chamberland M.E., Ciesielski C.A. Preventing bloodborne pathogen transmission from health care settings. Morb Mortal Wkly Rep 1988.-Vol.75.-P.203-1189.

116. Benno Y., Mitsuoka T. Effect of diets and aging on human fecal flora.// J. Germfree life Gnotobiol.-1991.- Vol. 21, №l.P.37-45.

117. Beutin L., Prada J., Zamermann S. et.al. Enterohemolysin, new ripe hemolysin produced by some strains of enteropathogenic E.coli EPEC.//Zbl.Bakt.Hyg. A.-1998.-A267.- P.576-588.

118. Bordello S.P. Microbial flora of the gastrointestinal tract. In: Microbial Metabolism in the Digestive Trakt (ed. M.J. Hill),1986.P.143-152.

119. Braun O.H., HeineW.E. Zur physiologischen Bedeutung der Bifidusflora und des faekalen Lysozymes bein Bruskind. Ein Beitrag zur Mikrookologie des Intestinums. // Klin Pediatr.-1995.- Vol.207, N1.- P.64-67.

120. Bruckner D., Colonna P., Bearson B.L. Nomenclature for aerobic and facultative bacteria.// Clin Infect Dis.-1999.-Vol. 29.-P. 713-23.

121. Brunder W., Karch H. Genome plasticiti in Enterobacteriaceae.// Int. J. Med. Microbiol.- 2000.- Vol 290.-P.153-165.

122. Bryan C.S., Dew C.E., Reynolds K.L. Bacterimia associated with decubitus ulcers. Arch Intern Med.- 1983.-Vol.143.-N5.-P.2093.

123. Cenci G., Caldini G., Braganti S., С Isidori. Fluorimetrik Detection of faecal Bacterial Enzymes.//Abstract Book. 19 International Congress on Microbial Ecologi and Disease. Rome, September 18-21, 1994. P. 198-202.

124. Christl S.U., Murgstroyd P.R., Gibson G.R., Cummings J.H. Production, metabolism and excretion of hydrogen in the large intestin.// Gastroenterology.-1992.-Vol. 102.-P. 15 6-161.

125. Clinical Microbiology Procedures Handbook / Ed.in chief H.D. Isenberg. -Washington: Am.Soc. Microbiol., 1992. Vol. 1.-P.312-322.

126. Coconnicr M.H., Lievin V., Bernet-Camarad M.F. et al. Antibakterial Effekt of Adhering Human Laktobacillus acidofilus Strain LB.// Antimikrobial Agents and Chemotherapy. 1997. -Vol.41, №5. - P. 1046-1052.

127. Collins M.D., Gibson G.R. Probiotics, prebiotics, and sinbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut. Am. J. Clin. Nutr. 1999, 69 (5).1. P.1052-1057.

128. Corbella X., Dominguez M.A., Pujol M. et.al. Staphylococcus aureus nasal carriage as marker for subseguent staphylococcal infections in intensive care unit patients.// Eur.J. Clin. Microbiol.Infekt. Dis.-1997.-Vol. 16,№5.- P.351-357.

129. Duffy L.C., Zielezny M.F., Riepenhoff-Talty M. et al. Effectiveness of Bifidobacterium bifidum in mediating the clinical course of murine rotavirus diarrhea. // Pediatr. Res. 1994.- Vol. 35.-P.690-695.

130. Espersen F. Identifying the patient risk for Staphylacoccus aureus bloodstream infections. //J. Chemother.-1995.-№7.-P.l 1-17.

131. Farthing M JG. Bacterial Overgrowth of the Small Jntestine// Gastroenterology, Misiewicg (ed), New Jork.- 1993.-№2.-P.45.

132. Fein Jared E. Screening of uropathogenic Esherichia coli for expression of mannose-sensitive adgesins: impotence of culture conditions. // J. Clin.Microbiol.-1982.-Vol.13.-N6.-P. 1088-1095.

133. Ferrari A., Brusa Т., Rutili A., Canzi E. Human gastrointestinal tract and methanogenic bacteria. // Microecol. Therapy.- 1995.- Vol. 25., P.275-289.

134. Ferrari A., Brusa Т., Rutili A., Canzi E. Methanogenic Bacteria in human Gastrointestinal tract. // Abst. Book. 19 International congress on Microbial Ecology and Disease. Rome, September 18-21, 1994. P.313-315.

135. Finlay B.D., FalkoW S. Common themes in microbial pathogenicity revisited. Microbiol. // Mol. Biol. Rev.-1997.-Vol 61.-P.136-169.

136. FreneyJ., RenaudF., HansenW., Bollet C. Manuel de bacteriologie clinique.

137. Elsevier, Paris, 1992. 439p.

138. Garriguens N., Wittmer A., Duval-Iflah Y. Dissemination of antibiotic resistance genes in the digestive microflora. // Abstr. 21 Intern. CongressШw Microb. Ecol. Disease. Paris, 28-30 October 1996. P.165-171.

139. GibsonG.R., Roberfroid M.B. Dietary modulation of the human colonic microbiota: introducing the concept of prebionics.// J. Nutr. 1995.-Vol 125, -P.1401 -1412.

140. Gilbert D.N., Moellering R.C., Sande M. A., editors. The Sanford guide to antimicrobial therapy. 29 th ed. Hyde Park: Antimicrobial Therapy, Inc.; 1999. -P.38-43.

141. Gilbert D.N., Moellering R.C., Sande M.A. The Sanford Guide to Antimicrobial Therapy. 31st ed. 2001. - 142p.

142. Gillilant S.E. Health and nutritional benefits from lactic acid bacteria. // FEMS Microbiol. Rev.- 1990.- Vol.7. P.256-275,

143. Grys S.J., Furer E., Germanier R. Experimental Klebsiella burn wound sepsis:frrole of capsular polysaccharide.// Infekt. Immun.- 1984.-Vol.43, №l.-P.440-447.

144. Haddy R., Cecil NM.L., Markert R.J. Enterobacter bacteremia in community hospital. // J.Fam. Pract.-1991.-32.-N.6.-P.601-606.

145. Heavey P.M., Rowlandl.R. The qut microflora of developing infant: Microbiology and Metabolism // Microb. Ecol. Health Dis.- 1999.-Vol. 11, №2.-P.75-83.

146. Hentges D.J. The protective function of the indiginous intestinal flora.// Pediatr. Infect. Dis.-1986.- Vol. 5, suppl. 1.

147. Herbert V., Snbar-Sharpe С. I. Tne Mount Sinai school of medicine complete book of Nutrition. USA, 1990. - 24-77.

148. Ho P., Yuen K., Yam W., Saiyuin Wong S., Luk W. Changing patterns of susceptibilities of blood, urinary and respiratory pathogens in Hong Kong.// J.Hosp. .Infect.-1995.-v.31 .-№4.-305-317.

149. Holt J.G., editor. Bergey s manual of systematic bacteriology 1st ed. Baltimor:1. Willians& Wilkins; 1986.

150. Huber Т. W., Thomas J. S. Detection of resistance due to inducible beta -lactamase in Enterobacter aerogenes and EnterobactercloacaeV/J.Clin.Microbiol. 1994.-v.32.-N.10.-p.2481-2486.

151. Human intestinal microflora in Health and Disease D.J.Hentges (ed.). New York, Academic Press, 1983.-P.548-557.

152. Jeffries C.D., Holtman D.F., Gus D.G. Rapid metod for determining the activity of microorganisms on nuclear acids. //J.of Bacteriology-1957.-v.73.N.4-P.590-591.

153. Katouli M., Bark Т., Ljungqvist O. et at. Composition and diversity of intestinal coliform flora influence bacterial translocation in rats after hemorrhagic stress. //Infect. Immun. -1994. Vol.62, № 1 l.-P. 4768 - 4774.

154. Katsanis G.P., Spargo J., Ferraro J., Sutton L., Jacoby G.A. Detection of Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli Strains Producing Extended-Spectrum p-lactamases. J Clin Microbiol.- 1994.-Vol.32, N6.-P691.

155. Kluytmans J., van Belcum A., Verbrugt H. Nasal carriage of Staphylococcus aureus: epidemiology mechanisms and associated risks. // Clin. Microbiol. Rev.-1997.-Vol.10, №3.-P.505-520.

156. Kuhn I., Katouli M., Mollby R. Biochemical Fingerprinting as a tool to study the diversity, stability, and metabolic capacity of intestinal microflora. // Abstr. Ann. meeting SOMED. Boston, USA, 1993, September 10-13.-P.284-289.

157. Lautenschlager S, Hersog C., Zimmerh W. Course and outcome of bacteremia due to Staphylococcus aureus: evaluation of different clinical case definitions.// Clin Infect Dis.-1993.-№16.-P.567-573.

158. Leelarasamee A., Jenyapoon K. Antimicrobial resistance of 100 serial gram -negative isolates in two intensive care units./ Leelarasamee A., Jenyapoon K. //J. Med.Assos. Thai.-1992.-Vol.75.-N. 12.-P. 680-687.

159. LengelerJ.W., Drews G., SchlegelH.G., editors. Biology of the Procaryotes. 1st $ ed. New York: Thieme, 1999.-P.67-75.

160. Leu H.S., Kaiser D.L., Mori M., Woolson R.F., Wenzel R.P. Hospital-acquired pneumonia: attributable mortality and morbidity. // Am J Epidemiol.- 1989.-№129.-P. 1258-1267.

161. Leung D.Y. Molecular basis of allergic diseases.// Mol.Genet. Metab.- 1999.-Vol.63.- №67.-P.157. -P.57-65.

162. Madigan M.T., Martinco J.M., ParkerJ., editors. Biology of microorganisms. 8th Ed. New Jersey: Simon & Schuster; 1997.-P.754-761.

163. McNabb P.C., Tomasi T.B. Host Defence Mechanisms at Mucosal Surfaces. // Ann.Rev. Microbiol. 1981.-№ 35.-P.477-496.

164. Minelli E.B., Benini A., Vicentini L., Muner A. Antibiotics and their interaction with intestinal contents. //Microecol. Therapy. -1995. -Vol.25.P.57-63.

165. Molecular and Cellular Mechanisms.J.L.Dangi (ed.) Berlin Heidelberg -London - Paris, 1994.-P.458-472.

166. Molnar J., Szalay K., Hever A. et al. The effect of phenothiazines on the antibiotic resistant bacteria and multidrug resistant tumor cells.// Abstr.3 rd Scientific meeting Europ. Soc. Chemotherapy. Paris, May 18-20, 1995. -.349358.

167. Murray P.R., Baron E.J., Pfaller M.A., Tenover F.C., Yolken R.H., editors. Manual of clinical microbiology. 6 th ed/ Washington, D.C.: ASM Press; 1995.-P.643-657.

168. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing, NCCLS Ninth Informational Supplement. M 100.-1998.- Vol.18, N1.- S8.

169. Neu H.C. Infection problems for the 1990s-do we have an answer. //Scand. J. Infect. Dis. Supp.- 1993.-Vol.91.-P.7-13.

170. Ramires J. A The choice of empirical antibiotic therapy for nosocomial pneumonia. //J. Chemother.-1994.-Vol.6.-N.2.-P.47-50.

171. Rasic J.M., KurmannJ.A. Bifidobacteria and Their Role //Basel, Birkhauser Verlag.-1983.- P. 51-81.

172. RuschV.C. Das Konzept Symbiose: Eine Ubersicht uber die Terminologie zur Beschreibung von Lebensgemeinschaften ungleichnamiger Organismen.// Microekol. Therapy.- 1989.-Vol. 19.-P.542-549.

173. Saavedra J.A., Bauman N.A., Oung I. Et al. Feeding of Bifidobacterium bifidum and Streptococcus thermophilus to infants in hospital for prevention of diarrhoea and shedding of rotavirus. // Lancet. 1994.- N344. - P.1046-1049.

174. Savage D.C. Overview of the association of mikrobes with epithelial surfaces. // Microecol. Therapy. -1984. -Vol.l4.-P.527-533.

175. Savage D.C. The normal human microflora composition. In regulatory and protective role of thenormal microflora (eds. Grubb R. et al.). M-Stocton Press, New York, 1989.-P.488-497.

176. Schaberg D.R., Culvr D.H., Gaynes R.P. Major trends in the microbial etiology of nosocomial infection. //Am.J.Med.- 1991.-Vol.91.-N3B.-P. 72-75.

177. Schaechter M., Medoff G., Eisenstein B.I. Mechanisms Microbial Disease. 2nd ed. - Baltimore; Philadelphia; Hong Kong; London; Munich; Sydney; Tokyo: Williams& Wilkins. -1993. - 973 p.

178. Schlossberg D. Current therapy of infectious disease. Mosbey-Year Book Inc., Louis, USA, 1996. -68lp.

179. Shenderov B.A., Manvelova M.A., Lyannaya A.M. et al. Microecological aspects of Functional Food and Some Prospects in Russia. //Microecol.Therapy.-1995.-Vol. 25., P.240-246.

180. Shoddy A., Pettis A.M., Schoonmaker D., Shelly M.A. Polymicrobial gramnegative bacteremia associated with saline solution flush used with a needless intravenous system. //Am.J. Infect. Control. -1995. -Vol.26. -N6. -P.357-363.

181. Simon G.L., Gorbach S.L. Intestinal Flora in Health and Disease.// Gastroenterology.- 1984.- Vol. 86.,-P.105-122.

182. Strulens M.J., Byl В., Govaerts D. et al. Modification of antibiotic policy associated with decrease in antibioticresistant gram- negative bacilli in ICU/ // 38-th ICAAC, San Diego, 1998. - Abstract 502.

183. The Quinolones. 2nd ed., ed. V.T. Andriole. - London: Academic Press. -1998.-441 p.

184. Thornton G., O, Sullivan D. et al. Human intestinal probiotic bacteria -production of antimicrobial factors. // J. Med. Sci.- 1993. -Vol.162, №9. -P.366.

185. Tullus K., Burman J. G. Ecological impact of ampicillin and cefuroxime in neonatal inits. // Lancet. -1989. Vol.1, №6852.- P.1401-1405.

186. Ueda M., Funada H. The role of total intestinal decontamination in bone marrow transplantation. // J.Germfree life gnotobiol.- 1995.- Vol.25, №1.-P.612-624.

187. Vincent J.L., Bihari P.M., Suter P.M. et al. The prevalence of nosocomial infection in intersive care units in Europe // JAMA. -1995. Vol. 274. - P.639 -644.

188. Wenzel R., Brewer Т., Butzler J.P. A Guide to Infeection Control in the Hospital. An official publication of the International Society for Infectious Diseases. ВС Decker Inc Hamilton, London, 2002. 272p.

189. Wilson M., Seymour R., Henderson B.Bacterial pertubation of cytokine networks.// Ibid. 1998. -Vol.66, №6.-P. 2401-2409.

190. Wiswell Т.Е. The prepuce, urinari tract infectionis, and the concequencens. Pediatrics. 2000, 105 (4). P.860-862.

191. Yaeshima T. Benefits of Bifidobacteria to human health // Bulletin FIL-IDF (Belgium). Intern. Dairi Federation.- 1996. №.313. - P.36-42.

192. Zach M., Ritshi E. Das chlamydienbedingte Subaktue Pneumonie Sindrom junger Sauglinge // Padiatr Prax. - 1982.-Vol.26, №1,- P.57-63.1. Г? ^^^^1. СУ. <- fa/At^- ф И П С

193. О п т 2QQQ Форма № 01 ИЗ, ПМ -98российское агентство

194. ПО ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ1. РОСПАТЕНТ, ОТДЕЛ №13

195. ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ИНСТИТУТ 5? ПРОМЫШЛЕННОЙ СОБСТВЕННОСТИ СИ74)121858, Москва, Бережковская наб., 30, корп. 1 | 450000« Г. У0JB.,

196. Телефон 240 60 15. Телекс 114818 ПДЧ. Факс 243 33 37 ЛбЬЖШ, 3----=-===== %шгоалвдунивэрситвт,1. На № от Патентны!! отдел

197. Наш № Э9124328/13 (025703) " Г •

198. При переписке просим ссылаться на номер заявки исообщить дату получения данной корреспонденции '

199. РЕШЕНИЕ О ВЫДАЧЕ (! 2>гО ПАТЕНТА НА ИЗОБРЕТЕНИЕ □ СВИДЕТЕЛЬСТВА НА ПОЛЕЗНУЮ МОЛ',. ЛЬ

200. Заявка № jJjV43>oo/lo (02и703 } (22) Дата поступления заявки ; ; ^ ■

201. Заявка №РСТ/ (96) Заявка №ЕА

202. Номер публикации и дата публикации заявки РСТ

203. Заявитель(и) БаШКИрСДИ& ГОСУ Д£Ц>СТВвНИЫуниверситет i (БГМУ),

204. Автор(ы) ^таряева л^СЕЗбаез , Г-Оэддлия >viiii:li'iUUci Г • хЧ . ) ■ ''J Л1'.:К0. « , -.'/Л. ■!.' ;; ; . . r ?. ,

205. J =. • ■ -т 5 J- .-L - . л j ■ .

206. Патентооблааатель(и) . . . ,l^.xj.b . » jl-.iMi :vilik \5ч) Нк",г:!)!чей'^тери. t ./е\'с- .31. Форма № Ola •21. 99X24328/1354. (57) ' ' *1. Штамм бактерий реръям 'й*

207. Описание изобретения направлено на публикацию в редакции заявителя*

Информация о работе

Очилова, Рагна Амирьяновна
кандидата биологических наук
Уфа, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Биологические свойства штаммов K.pneumoniae и S.aureus, выделенных в виде монокультур и ассоциаций, при дисбактериозах кишечника у детей с бронхолегочной патологией - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы