Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологические свойства и значение фагов ENTEROBACTER

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Биологические свойства и значение фагов ENTEROBACTER"

ЩМСТЙРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССйЖЖОП ФЕДЕРАЦИИ ГОСТШСКИЙ ОРДЕНА ДРУКЕЫ НАРОДОВ МЕДИЦИНСКИЙ ИШТИТУТ

ЛОГИЕВ КОНСТАНТИН ЮРЬЕВИЧ

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ЗНЛЧЕШЕ а ГШ ЖГЙЮВАСМВ

03.00.07 - Микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени -кандидата биологш эских наук

На правах рукописи

Роатоа-;!а-Дону

1992

Работа выполнена в Кабардино-Балкарском ордйна Дружбы народов государственном университете.

Научный руководитель - доктор биологических наук,

профессор ГАБРИЛОВИЧ И.М.

■ Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор ЭОСВЛЬ A.B.

доктор медицинских наук КЛРНЩКАЯ Н.В.

Ведущая организация - Ростовский научно-исследовательский

противочумный институт.

Защита состоится "..." Л'г .. 199? г. в часов на заседании Специализированного совета Д 084.53.01 при Ростовском ордена Дружбы народов' медицинском институту /344700,-г.Росгов-на-Дону. пер.НахичеванскиЯ,29/.

¿■у У > / «

¿К.» /'■¿'/у ■( Автореферат разослан . .."Н.:/.1992 г.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского ордена Дружбы народов медицинского института,

Ученый секретарь Специализированного совета,

доцент Н.Я.Корганов

,, *; ОБ'^Я ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОШ

•-■■'Актуальность теш.. В современных условиях проблема госпиталь-шх /внутрибольничных/ инфекций приобретает важное значение. Имеется множество сообщений о внутрибольт.чннх заболеваниях /нередко с летальными исходам!/, зарегистрированных в различных странах /R.Lewis и н.Klein ,1979; P.Daschnor ,1981; М. Уринсон и соавт., 1985; и др./. Такие заболевания возникают у госпитализиро-

ванных больных, а у хирургических и урологических больных - в 30-355$ случаев /Л.П.Зуева, 19аЗ; 13.И.Стручков и соавт. ,1Ь83/. Высота заболеваемость и новорожденны)" - 40-60 на 1000 родивпихся, а иногда и вшо /Д,Лоионци,1978; А.А.Сохин и соавт. ,1980/.

Сниженная резистентность оргешзма госпитализированных боль-ннх ведет к тому, что в лечебных учреждениях возможно возникновение заболевания, вызванных не только патогенными паразитами, но и теми, которые относятся к группе условно-патогенных микроорганизмов. Последние вызывают заболевания, кл: правило, лишь при "поражении ослабленных людей, при попадании в обычно стерильные ткани и полости, при необычно большой инфицирующей дозе /Р.Х.Яфаев н Л.П.Зуева, 1909/.

Условно-патогенными являются многие представители семейства Ehterobactorleceao t в том числе и относящиеся к чоду Entого-bacter /В.Д.Беляков и соавт.,1976; В.И.Покровский,1985/, Прячем в последние десятилетия отмечается возрастание роли гршотрица-Тельннх бактерий, включая энтеробактер, как этиологических агентов внутрибольничных заболеваний / P.Histuccia и B.Guima ,1990/. Однако, слабая изученность этих микроорганизмов, трудность их идентификации и дифференциации, отсутствие общепризнанных методов внутривидового типирования создают серьезные проблемы в борьбе с инфекциями, детерминируемыми энтеробактером.

Используемые в настоящее время методы внутривидового титрования бактерий сводятся к традиционным /серотиппроваиие; определение биоваров, патоваров, антибиотикогрэ'<м; бат'териоциготкпирова-ние; фэготипирование/ и нетрадиционным, основании.! на молекуляр-но-биологических исследованиях /оценка ллаз'чщпого профиля JFPK, реотрнщионкнй анализ хромосомной и плазмидной fJ'K, протеин-) nw-ш, профиль г*ирн|fx кислот и др./ /3.П.Бонд-ренко* и соавт. ,1982; л.М.Ш'чт^к I. К.Я.Соколова,19&3; Е.Н.Чернявская к З.П.Засюренко,- '

^984; Ч. Отвел ,1988; А.ДИагйеЪ-БегУегЛ и соавт.,1909; З.Д.Беляков и соавт. ,1990; Т.Е.Ерова и соавт.,1990; у.йгЛтоаЪ ,199С/. Зсе указанные-способы типирования не лишены тех или иных недостатков. Так, новые подходы требуют специального оборудования, реактивов, обученных специалистов, что ведет к значительным материальным затратам, Кроме того, не решен .вопрос относительно их -достоверности •* воспроизводимости. Исходя из этого, представляется рациональной оптимизация традиционных методов типирования путем разработки новых тицирущих систем с удовлетворяющей современным потребностям стандартностью и доступных для практических лабораторий. В этом плане достаточно перспективным является метод фаготилирования, который оправдал себя при изучении стафилококков, сальмонелл и некоторых других бактерий. .

Цель и задачи работы. Целью работы было изучение свойств бактерий рода ЕпЪегоЪас^г , выделение бактериофагов, активных против представителей данного рода, разработка методов фаготипиро-вания этих бактерий. Для достижения поставленной цели необходимо было решить конкретные задачи:

1. Изучить биологические свойств клинических штаммов энтеро-бактера.

2. Едцелить фаги а.теробактера и исследовать их свойства.

3. Исследовать возможность фаготилирования бактерий рода Еа-ЬегоЬасЬег.

Работа проводилась в соответствии со сводным тематическим планом научно-исследовательских работ, курируемым научным советом по микробиологии Академии медицинских наук - направление II.01.06. Теш: "Бактериофаги уолоьно-патогенных микроорганизмов", зарегист-рлровына во ЗШИЦ^нтре, номер государственной регистрации 01. аз. 008-569.

Научная новизна. В результате изучения лизогении штаммов рода ЕаЪегоьасЬег из выявленных лнзогенных культур выделены 20 новых )агов энтеробактера, которые на основании их биологических свойств разделены на 7 групп. Показана возможности разграничения культур энтеробактера с помощью фагов.

Ир:;ктическая ценность. Разработана предварительная схема фаго-типирования кучьтур ¡энтеробактера, выделенных из различных источников, которая испытана при эпидемиологическом изучении внутри-

больничных вспышек в родовспомогательных учреждениях.

Апробация работа. Материалы диссертации опубликованы в II работах; Полученные данные доложены на I Всесоюзной школе-конференции молодых ученых "Эволюцкл и систематика прокариотов"/г.Пу-щино-на-Оке,1988/, на республиканской'научно-пракаической конференции молодых ученых и специалистов "Мояоде;д» - народному хозяйству" /г.Нальчик,1988/, на ХУШ съезде Всесоюзного общества Эпидемиологов, микробиологов и паразитологов им.й.и.Мечникова /г.Лл-т-Ата,1289/, на 2-й всесоюзной конференции "Бактериальные токсины" /г.Юрмала,1939/, на 1У Всероссийском стззде микробиологов, эпидемиологов и паразитологов /г.Нилшй Новгород,1991/.

Положения, выносише на защиту,

1. Среди культур рода ЕгЛегоьасЬег клин"ческого происхождения распространены лизогенные штаммы, из которых выделены 20 фагов.

2. Фаги знтеробактера классифицированы на ряд групп по морфологии, антигенным свойствам, чувствительности к инактивиругчим факторам, параметрам взаимодействия с чувствительной клеткой.

3. Различия фагов по спектру действия позволили отобрать типовые фаги и разработать схеку фаготипирования бактерий рода Еи-teгobacter.

Структура и объем диссертации., Работа изложена на 171 странице машинописного текста, иллюстрирована 13 рисунками и 37 таблицами, состоит из введения, обзора литературы, -гетырех глав собственных исследований, обсуждения полученгах результатов, выводов, указателя литературы /¿¡78 источников, из которых 45 отечественных и 233 - зарубежных/ и приложений.

ОШОЗПОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

I. Мате2иал_и_методика.

¡3 работе использован 131 штамм, отнесению'} по совокупности культуральных и биохимических свойств к роду ЕггЬегоЬасЬег . Большинство штатов /99/ получены из кафедры эпиде'гиологшг }1,онтрлль-ного института усовершенствования врачей /апв. кафедрой - профессор Е.П.Ковалева/ от М.И.Петрухиной. Эти штаммы были выделены при внутрибольничнь'х вспышках п родильтк домах г. Москвы. Они шсеваетсь из й-ерялия дыхательных путей, смывов окружающей среды детских отделений родильных домов и смывов с кожных биотопов

•юворочдешых. 25 шташов получены из лаборатории генетики випу- • лентнос.ти бактерий НИИ эпидемиологии и ь:,кробиологии и.л.Н.ф.Ла- . малеи Ак-эдеши медицинских наук от профессора В.У.Еопдаренно. Как ь I штамм, предоставленный нам бактериологической лабораторией Нальчикской городской санитарю-эпидекиологической станции, они были выделены из испражнений. Наконец, б штампов получены из музея патогенных бактерий ГИИИСК им.Л.А.Тарасевича. Кроме того, некоториз исследования проводились со 152 штаммами знтеро-бактерий различных родов: Klebsiella, Serratia, Hafnia, Escherichia, Salmonelle, Citrobacter, Morgaaella, Yersioia /X.ente-rocolitica/,

В работе использован выделенный U.Milch и Т.Nguyen /1981/ фаг полученный от профессора В, М.Бондаренко. Из лизогенных культур Enterobacter нами выделены Я) фагов. Помимо этого, использованы фаги • Klebsiella/9 фагов/, Serratia /2 фага/, НаХ-uia /2 фага/ из коллекции кафедры микробиологии Кабардино-Балкарского госуниверситета.

Бактерии и фаги культивировались на средах, приготовленных гз концентратов производства Дагестанского научно-производственного объединения "Питательные среды" /г.Махачкала/. Использовались I,5si, 0,7% питательный агар и питательный бульон на основе рыбных, гидролизатов. Инкубация посевов осуществлялась при температуре 37°С в течение 18-24 часов.

Биохимическая активность шташов изучалась о помощью систем индикаторных бумажных /СИЕ/. Чувствительнозть к антибиотикам выявлялась методом диффузии с помощью стандартных дисков.

Для оценки адгезивной способности энтеробактера ставили реак" гчю г„магглютинации с З70 взвесью эритроцитов барана. Способность адсорбировать краситель конго красный изучали на питательном агаре с казаыиновыми кислотами и с 0,01?$ конго красного. Лизо-цимнуь активность бактерий определяли по методике "отороченного чнтагоннзмэ" .i'redericq ,1957/. Для исследования ангшшэоцим-],оЛ активности использовалась методика 0,В.Е!ухарина и соавт. /1934/. Гемолитическую способность бактерий выявляли на питательном агаре с добавлением 3-5Й отмытых эритроцитов кролика. Для | выявления тиолзависиных гешлизиног использовали питательную 1 среду с 0,00-j:^ ь-ф.зтеша и 3-5$ эритроцитов кролика.

Изучение профиля плазмццной ДНК проводили путем.электрофоре-аа в 0,1'Л агарозе по методике т.Eckhai it /1978/.

Для повышения эффективности выделения фагов из лизогенных культур проводилось облучение ультрафиолетом с помощью лампы БУВ-30.

Изучение свойств фагов проводили согласно общепринятых методов, приведенных в' руководствах М.Адамса /1961/, И.М.Габрилоъи-' ча /1968,1973/. Для исследования морфологии фагов фаголиз^ты готовили-ПО модифицированному методу M.ßwanstrom и M.Adams /1951/ с последующей концентрацией и очисткой препаратов методом дифференциального центрифугирования. Препараты для электронной микроскопии готовились путем негативного контрастирования по Е.Brenner и н.Ноше/1959/ и просматривались в электронном микроскопе УЭЖЗ-ЮСВ. Определение литического фермента фагов проводили по методу В.А.Зуева /1969/.

Полученные результаты, подвергались статистической обработке /Н.А.Плохинский, 1970; Г.Ф. Лакин,Г990/.

2. Результаты исследований и их обсуждение.

Биологическая характеристика к/льтур Enterobacter . В морфологическом отношении изученные птаммы энтеробактера представляли собой прямые палочки размерами 1,2-3x0,6-1 мкм, ; рамотри-цательные, подвижные.

Идентификация бактерий до пида проводилась па основании биохимических тестов, имеющих диагностическое значение /в первую очередь, по способности продуцировать лизиндекарбоксилазу, ор-нитиндекарбоксилаэу, аргининдигидролазу, по образованию индола, утилизации цитрата натрия, сахарозы, сорбита, способности к пигментообразованию/. На основании этих признаков использовавшиеся в работе штаим идентифицированы следующим образом: Е.cloacae - 62 штамма, E.agglomerans - 34 птау-а, E.interiao-diun - 23 штамма, S.aerogenes - Vштампов. Видовую принп,меткость 5 штаммов установить не удалось.

Между юташами K.o.^loaioroas и Е.с1о8ссе-Ь!.1пЪ(гпагуИйт обнаружены статистически достоверные 'различия в способности фер-ментировпть инозит / Р<0,01 и Р-< 0,05 соответственно/.

Дня более полной характеристики птаммов изуглл::сь гзкотсгдо •фактор!, ссгзаикые о патогешостьга и япрулентгоеты? 6ikt"d:!:1.

Способность к гемагглютинации отмечена у 39 испытанных культур /29,8%/, адсорбция красителя конго красного наблюдалась у 47 штаммов /35,9%/, гемолитической активностью обладали лишь 18 культур /13,7^/, Значительных различий по этим признакам среди отдельных видов энтеробактера не выявлено.

Антилизоцимная активность отмечена у 69 штаммов /52,7^/. Среднее количество вырабатываемого антилизоцима составляло 3, Омкг/мл.: Рассматриваемое свойство наиболее широко распространено среди" штаммов E.a-glomerans /76,55V и E.aerogenes /85,7íá/. При атом разница между сраьниваешми выборками ' E.agglomerans^ E.cloacae-E.interaiediua была статистически достоверной /Р<0,05/. Количество выделяемого антилизоцима также максимально у культур B.ag-, gloiuwi^ns и E.aerogenec /в среднем 3,3 мкг в I ил/. Среднестатистические штаммы Е.cloacae и Е. intermedium продуцировали соответственно 2,7 и 2,1 ыкг/мл. Из числа культур, обладающие ан-тилиэоцимной активностью, на долю выделящих 2-4 мкг/мл приходит-, ся 72,55«.

Лизоцишая активность среди исследованных штаммов энтеробактера распространена меньше. Она обнаружена у 32 культур /24,4?6/. Межввдовые различ-я по этому-признаку весьма значительны. Так, лизоциг продуцируется 15 штаммами Е. aglomeraos /44,1%/ и 7 -К.intermedium /30,4%/, однако только О культур E.cloacae/I2,fW и I - E.aerogenes /I4,3,V обладают этим признаком. Статистически достоверные различия выявлены лишь между штатами е.agglomeraas И Е. cloacae /Р<0,01/.

13 результате электрофоретического изучения профиля плазмидной ДчК культур энтеробактера у 43 штаммов /32, Ш/ выявлены плазыи-; л. распространение плазмидосодержащих штаммов у разных видов варьировало от 29,0:Л / е.cloacae / ДО 57,/ E.aerogcnes /. Однако, обнаруженные различия статистически не достоверны. У 29 штамгов было выявлено по I плаамиде /65,4$ от всех содержащих плазмидц культур/. По 2 плазмнды обнаружены у 13 штаммов /30,2%/, 3 плазмидц - у одного штам.мд /2,3)5/. Все выявленные плазмиды, за исключением двух, имели молекулярную массу от 30 до 120 !.Щ и относились к категории кпупных. Наиболее обычными были плазмиды с молекулярлой массой 60 и 80 ',!Д. По одиночке и в сочетании с другими ш1азм;ща;ш они зшшленн у 34 шташоы, что составляет 79,1«

от общего числа плазмидосодержащкх культур.

Изучение антибиотической чувствительности пггаммов Enterobacter к 14 препаратам позволило выявить наиболее эффективные из них: мономицин, гентамицин, не-мицин /менее 10Я устойчивых культур/. Пенициллин, оксациллин, метициллин, эритромицин, рирэ'ши-цил подавляли рост менее чем 1% штаммов. Исследованные штаммы проявляли устойчивость к I-I3 антибиотикам или были чувствительными ко всем. Наиболее рзспрэстраненными оказались штаммы с устойчивостью к 7-9 антибиотикам; На их долго приход|Ггся 67 ,Ь% от общего числа испытанных культур. Штаммы, усто'гаивыо к меньшему числу антибиотиков, составляли 13,ЕЙ, а толерантные к 10 и болв^-24,4яз. В среднем штаммы энтеробактера из числа исследованных были устойчивы.>.11 к 8,2 антибиотикам. Мнояествгчно- резистентные культуры /устойчивые не менее чем к 10 препаратам, представляющим разные группы/ составляют 57,1?4 исследованных штаммов к.ае-rogenes , 39,lié - Б. úrtcrinediura , 21,CW - E.cloacae ( IItB;4 -E.aBßlociRrana . величия меяду культуpaíffl E.ciggloiíiei'Gxis и З.з.<э— 'rogenes-E. intemediun статистически достоверны /Р<0,Сб/. Выявлена определенная связь меяду наличием плазмид и устойчивостью бактерий к антибиотикам: штаммы, не игеющио плазмид, проявляют множественную резистентность в 17,0?» случаев, содержащие I плазмйду - в 17,25», а включающий 2-3 плазмида - в 85,7°4 случаев.

Выделение и свойства фагов Baterofraater . Выделить ?аги Э!""е-ргбактера из проб водаГ естественных и искусственных водоемов не удалось. При исследовании 131 штамма энтеробактера на лиэогснию выявлен 31 лизогенннй штамм, причем 4 штамма обнаружить: лишь после индукции ультрафиолетовым излучением. Обнаруженные лизо-генные культуры принадлежали ко всем идентифицированным 4 видам энтеробактера, однако различия в частоте выявления лизогенных культур среди представителей разных видов были несущественными. Из лизогенных культур выделены 20 фагов энтеробактера, которые вместе с фагом Cj^ были подвергнуты дальнеГягему исследованию.

Исследованные фаги образуют достаточно разнообразные по размерам, форме края, наличию и расположению зон неполного лнзип-э и вторичного роста негативные колонии. Наиболее рчспросграпе-шыии были мелкие негативнее колонии с ровными краями, бея зон неполо

юго лизиса и вторичного роста. Такие колонии отмечены у 12 фагов.

Титры изученных фагов варъирвали в широких пределах - от 4,2.10^ до 7«10® и.ц./мл, причем у 7 фагов титры были сравнительно высокими - 1СР-Ю® и.ц./мл.

Для исследования антигенных свойств фагов путем им^низации кроликов бши. получены сыворотки к 7 фагам. В опытах нейтрализации фагов энтеробактера полученными сыворотками установлена антигенная гетерогенность этих фагов /таблица I/.

Таблица I

Нейтрализация фагов ЕаЬегоЪаст;ег антифаговыми сыворотками /в процентах/

Серотип С ы в 0 р 0 т к а

• : 014 : 10/8:33/35:138/121:46/35:121/97: 25/15

1а 99,9 99,9 99,9 99,9 8,2 0 16,5

10/8 1а 99,9 99,9 99,9 99,9 7,4 3,0 0,2

128/121 1а 99,4 99,9- 99,9 99,9 0 25,3 33,8

33/25 1Ъ 99,9 99,9 99,9 99,9 30,7 &3,0 48,5

100/35 Па 3,2 2,1- 4,5 97,5 99,6 99,9 99,9

46/35 ПЪ 38,4 0 3,0 99,7 99,6 99,9 99,9

45/35 Пс 26,1 31,6 29,5 72,6 73,6 96,7 82,4

121/97 па 18,8 1 1,6 47,3 81,9 99,9 99,9 99,9 '

47/35 Пе 9,5 59,6 45,9 93,7 99,8 93,4 99,7

1/35 Ша 1.5 0 0 0 82,3 91,4 94,8

58/35 шъ 29,5 31,7 24,4 67,4 85,1 98,8 94,9 ..

85/35 ШЪ 0 48,5 0 44,6 86,2 95,4 '99,6

98/98 Шо 17,5 39,8 44,0 63,8 93,0 85,4 93,0

68/35 1Уа 28,6 0 0 52,5 85,7 76,8 57,2

25/8 1УЪ 43,3 0 51,0 0 75,5 92,5 45,1

131/68 У 0 0 0 0 86,8 56,6 84,3

25/15 У1 52,7 42,5 66,6 90,5 49,0 64,5 91,0

113/35 УПа 0 0 1,2 0 0 2,3 0

10/35 УПЪ 57,2 0 16,7 0 42,9 47,5 0

Ж/ЗЬ УПс 0 29,4 41,2 53,0 64,7 41,2 58,8

73/35 УПЛ 41,3 34,4 38,8 38,8 18,4 13,4 44,5

Изученные фапг юяно разделить на 7 серотипов, внутри которых выделяются отдельные подтипы. Сле,цует отметить наличие определенной близости антигенного строения у фагов П,Ш,1У,У серотипов.

Фаги обладали различной степенью чувствительности к воздействии температуры, на основании чего разделены на 6 групп. Наименее устойчивые фаги инактивировались ужо при температуре 45°С, наиболее устойчише /фаги 10/35 и 25/15/ в диапазоне температур от 45°С до бСРо практически не инактивировались и лишь при 65°С происходила их инактивация. Степень терполабилыюсти фагов не коррелировала с их антигенными свойствами.

Заги оказались гетерогенными по чувствительности к хлороформу. К чувствительным к этому агенту отнесены 13 фагов, причем к ним принадлеасали все фаги I и Ш серотипов. К устойчивым к хлороформ фагам относились все фаги У и У1 серотипов,

Электрошгомикроскопическому исследованию были подвергнуты 9 фагов, принадлежащих к разным серотипам. Все изученные фаги имели близкую морфологию. Оли представлены головками гексагональной форш диаметром 40-50 нм и прямым отростком с сокращающимся чехлом, на дистальном конце которого имеется базальная пластинка. Длина отростка составляла 83-125 нм, ширина - 4,2-7,2 км. Фаги Enterobacter могут быть отнесены к морфологической группе AI ПО Ii.-W.Ackermannд А.Eisenstark /1974/, D.Heanney и H.-W.Ackermann/1982/. Среди изученных фагов несколько выделяется фаг Cj^ более крупной головкой /65-80 нм/ и более коротким отростком /88 нм/. Установить связь между морфологией фагов и особенностями образуемых ими негативных колоний или их антигенными свойствами не удалось.

Фазы взаимодействия фагов с чувствительными клетками изучали при температуре 37°С. Корреляции между отдельными показателями-, характеризующими рассматриваемый процесс, а также их связь с другими особенностями фагов обнаружить не удалось.

Константы скорости адсорбции фагов энтеробактера колебались в пределах 0,52-2,4«10 мл/мин, длительность латентного периода составляла 35-55 мин. По величине среднего урожая на I зараженную клетку фаги могут быть условно разделены на 3 группы. К первой группе отнесены 8 фагов с урожаем менее 5 и.ц. на клет-

' ку. Вторую группу составили 8 фагоь, имеших средний урожай 5-10 и.ц. на клетку. Наконец, третью группу составили 5 фагов с урожаем более 10 и.ц. на клетку.

Выявить у фагов энтерббактера наличие литического фермента не удалось.

Таким образом, выделенные фаги энгеробактера оказались достаточно гетерогенными по своим свойствам. Их разграничение может быть проведено на основании антигенных свойств, а также по чувствительности к хлорофорьу, величине титра и среднего урожая на I инфицированную iaeTicy.

Спектр действия фагов и фаготипирование культур Enterobacter. Спектр действия фагов энтеробактера исследовали на 131 штамме рода Enterobacter и 152 штаммах Других родов семейства Batero-■bacteriaoeae , Чувствительными к фашм энтеробактера оказались 88 штаммов рода Enterobacter /67,2%/, причем фагочувствитель-ные культуры чаще встречались среди E.cloaoae /88,75о/, E.intej>-medium. /87, Öi/, реже Среди E.aerogeaes /42,95$/ и E.agglomo-' rane /20,6%/. Кроме того, , фаги энтеробактера лидировали 4 из 16 испытанных штаммов Hafüia и 6 из .25 штаммов Klebsiella , т.е. фаги Enterobacter Проявили определенную неспецифичность. Исходя из этого» культура энтеробактера были испытаны на чувствительность к 9 фагам Klebsiella , 2 фашм На£а1а и 2 фа-riM Serratia . Чувствительными к фашм к.лебсидлл 01£азались 38, Э5 испытанных штаммов ентеробакгера, тогда как к фагам На£-nia и Serratia эти бактерии бит нечувствительными.

Спектр действия фагов энтеробактера был различным и в опре-? деланной степени коррелировал о их антигенными свойствами, чаги серотипов 1,У1, а также фаг 121/97 П серотша обладали широким спектром действия, лизируя от 55 до 65,6^ исследованных куль, тур энтеробактера. У остальных фагов отмечался довольно узкий спектр действия.

По чувствительности к фагам штаммы энтеробактера были неоднородными и лиэировались разным количеством фагов в определенных сочетаниях, что позволяет осуществлять их фаготипирование.

На основании результатов изучения антигенных свойств и спектра действия отобраны 10 типовых фагов - 5 основных /таблица 2/ и 4 вспомогательных /таблица 3/.

Характеристика основки типовых фагов энтеробактера

Таблица 2

'1а г К'хч*?-: чеехг..':' группа 1

С14 А1

25/15 А1

121/97

131/58

98/93

25/8 А1

Ларактео негативных - колоний

Предельный титтз

Се-:Группа:Чувствите ль-: ро-:по тер-:ность к хло-: тип: шчув-: реформу : : стви- : ■' :

: тельной :

:сти : . :

К ско-:Длитель- :Сред>- :Индекс таости гность лг-:ний :спектра адсор-:тентного :уро.тлй:дейст-бции. ¡периода, :на I :виа гмин» :клетку:

мл/мин:_: :

I д

Ссзпних разме- Ю 1а реэ, прозрачные

Средних разке- 1(Р У1 ров, с зоной ■« неполного лизиса в центре

Мелкие, с зоной Пй неполного лизиса по периферии

7

Средних разме- 10 У ров, с зоной неполного лизиса по периферии

Ш' Чувствительный

У1 Относительно-устойчивый

У Относительно-у гтойчивый

1У Относительно-устойчивый

Мелкие и сред- 10 Шс ние, с зоной неполного лизиса по по периферии

7

Мелкие, щгзрач-Ю 1УЬ У

•ше

У Чувствительный

Чувствительный

0,7 35-40 10,2 0,96

1,19 40-45 12,0 0,97

0,91 50-55 10,5 0,82

0,96 45-50 3,1 0,19

1,1 40-45 5,8 0,32

1,28 50-55 7,2 0,2

и со

Примечание: "исследование не проводилось.

Характеристика вспомогательных типовых фагов энтеробактера

Таблица 3

Морфо-'-; У i^'i^T^p Ппе-

- ЛОТ'*!-* * Uta ГПТЧТ'Р'^С лель-

: гЛГ цзск.з;-:; колоний НЫЙ

группа; титр

1/35

47/35

53/35

65/35

Се-:Группа:Чувствитель-ро-:по терпкость к хпо-тип;мочув-:реформу -:стви- : : тельнсн : сти :

;К сно-:Длитель- :Ссед- :Индекс ;роста :кость ла-:ний ".спектра ;адсор-:тентного*:урожай:дейст-;бции, : петэиода, :на I :вия :10-9 :мин. . :клетку:

:мл/мин: г :_

Мелкие, с неров ным краем, проз рачные

AI Мелкие, с неровным краем, проз-потные

-10 Ша У Чувствительный

AI Соедние, с ровным краем.и зоной неполного лизиса по периферии

Мелкие, с неровным краем, проз-

- 10' Не ГУ Относительно-устойчивый

п

10 ШЬ ТУ Чувствительный

10° ШЪ I Чувствительный

2,13 40-45 6,6 • 0,199

0,5 35-40 9,3 0,07

2,4 45-50 3,3 0,15

0,6 45-50 8,9 . 0,06

При;.-'.ешш'/.е: "исследование не. пооводияссь.

С использованием этих типовых фагов разработана предварительная схема фаготширозания энтеробактера. По различной чувствительности бактерий д основным типовым фагам выделяются 10 фаго-варов, внутри которых с помощью вспомогательных типовых фагов ■выявляются более частные фаговарианты /таблица 4/.

Таблица 4

Предварительная схема фаготнпирования культур энтеробактеря

Фа-;Ч1яН Чувствительность к типовым фагам

го-гло :-:----------------

вар'.шта!_основным_; вспомогательным

« 4 :мов:г . 25/15:12Г/97:131/68:98/98:25/811/35:47/35:58/35:10/35

I 10 + + _ - - - -

Па 41 + + + - - - -

ПЬ I + + + - + + +

Пс I + , + + - + - -

Пй I + + + - _ - +

Ша 2 + + + + - - - -

Ш.» I' + + + + + + Н +

1Ио 2 + + + + - - - + '

ГУ 2 + + + + + - - +

Уа 4 + + + + + - -

УЬ I + + + + + + + + +

Ус' 2 + + + + + + - +

Уй 3 + + + + ' + + - + .

У1а 2 + + + + + - -

УЬ I + + + + + + + +

У1о I + + + + + + -

ш I + + + + + - +

УПа 2 + + + + - - „ -

УПъ 2 + + + + + - -

УПс 2 + + + + + + ' +

УШа I + + - + - ч - -

ущъ г- + + - + + - +

IX 2 ' - - - + + + - +

X. I + - - - + - -

Во многих случаях фаговары объединяют штата, отнесенные к разным видам рода Eaterobacter. Так,_ к фаговару I принадлежали штаммы всех 4 видов энгеробактера. Большинство типируешх нуль-тур Е.cloacae /69И половина "Е. intermedium включены В фаговары П и Ш, куда также входит I штамм Е. aerogenes . Большинство штаммов E.aggloaerans входят в фаговары I и У.

^агочувствительность исследованных культур была слабо связана о источником их выделения. Штаммы, выделенные из испражнений, относились к фаговарам П,У,УП,УШ, культуры из дыхательных путей -к фаговарам 1,П,У, а штаммы, изолированные из окружающей среда, -к фаговарам 1,П,УШ.

Однако, при анализе результатов фаготипирования культур энте-робактера, выделенных при вспышке внутрибольничной инфекции в родильном доме в .Уэскве, удалось обнаружить доминирование культур энтеробакгера фаговара Па. К этоцу фаговару принадлежали 18 и§ 35 культур. Такие культуры были выделены с объектов окрукающэй среды детских палат, кожных биотопов новорожденных, с рук и из дыхательных путей медицинского персонала. Это позволяет рассматривать обнаруженные штамш как госпитальные, циркулирущие в стационаре.

ВЫВОДЫ

1. Исследование 131 штаг.н.а, принадлежащего к 4 видам рода Eaterobacter , показало их неоднородность го ряду биологических свойств. Выявлены статистически достоверные различия между нуль-турами В.cloacae, Е.intermedium, E.agglouerans, E.aerogenee

по способности ферментировать инозит и салицин, частоте обнаружение штаммов с множественной резистентностью к антибиотикам, ли-зоцимной и антилизоцишой активностями.

2. Среди исследованных культур Eaterobacter выявлен 31 лизо-генный штага /23,'?%/. Большинство лизогепкйх культур откосилось

у виду Е.cloacae . Из лизогенньсс- штаммов изолированы 20 бактериофагов Eaterobacter.

3. Изучение 21 фага Eaterobacter показало их гете'-югенносз'ь по антигенным свойства;', морфологии негативных колоний, чувствительности к инактивирумдим агентам, параметрам взаимодействия с чувствителыюй клеткой. Изученные фаги относились к морфологической группе AI.

4. Ш основании антигенных свойств,- чувствительности к хлороформу, величина титра и среднего урозсая на I инфицированную клетку фаги biiterobacter разделены на 7 групп.

5. 'Зпги Enterobacter различались кевду, собой по спектру действия. Установлена их способность лизировать отдельные штаммы родов Klebsiella и Hafnia.

6. Среди изучении фагов энтеробактера отобраны 10 типовых фагов /6 основных и <t вспомогательных/, с помощью которых проведено типирование 67,2» культур рода Enterobacter , которые бы-, ли разделены на 10 фаговаров. Предложенная'схема использована на практике при анализе внутрибольничных вспышек, вызванных этими бактериями.

Список работ, опубликован;ajx по теме диссертации:

1. Биологическая характеристика бактерий рода Enterobacter /Ковалева Н.Е., Чикков В.В./. - //Актуальные вопросы изучения кишечных инфекций. - Нальчик, 1938. - С.42-45.

2. К вопросу о дифференциации бактерий родов Klebsiella и biterobacter /Солонченко В.В.,Юртова Т.В./, - //Тезисы докладов и сообщений республиканской иаучно-пракп.ческой конференции молодых ученых и специалистов "Молодекь - народному хозяйству".-Нальчик, 1983. - С. 28.

• 3. Тиолзависише гемолизины у условно-патогенных энтеробакте-рий /Габрилович И.-1.!., Возивв В.Б., Гайрабеков Р.Х., Зарочен-цев M.J3., Якушенко О.С./. - //2-я Всесоюзная конференцп "Бакте-риалыше токсины". - Юрмала, Латвия, 1989, - С.24.

4. Лизоцимная и антилизоцишая активности у условно-патогенных энтер)бактерий /Габрилович Л.И., Гайрабеков Р.Х.,. Жугова Т.Ч Якутенко О.С./. - //Тезисы ХУШ съезда..8сесоюзного общества эпидемиологов,'микробиологов и паразитологов им,И.И.Мечникова. -Алма-Ата, 1989. - T.I. - С.163-164,

5. Выделение и антигенные свойства бактериофагов Enterobacter //Бактериофаги условно-патогенных микроорганизмов. -Нальчик, IS90. - С. 55-58.

6. Значение плазмид в тшировании госпитальных штаммов Ento-rpbacter /Петрухкна М. И., Ковалева Е.П., Га б пило в ¡та И. М./. -//Бактериальные плазмиды. - Нальчик, 1990. - С.107-108.

7. Структура бактериофагов ßerre^ia и Enterobacter /Пайpa -беков Р.Х., Похил С.Й., Лисняк Ю.В./. - //Всесоюзна? конференция "Микробиологические и биотехнологические основы интенсификации растениев^ства и кормопроизводства". - Алма-Ата, 1990. - секция П. - С.15.

8. Индикация бактериофагов условно-патогенных энтёробактерий в воде открытых водоемов /ГЬйрабеков Р.Х., Бозиев В.Б., Солон-ченко В.В., Габрилович И.Ч./. - //Всесоюзная конференция "Ишсро-биологические и биотехнологические основы интенсификации растениеводства и кормопроизводства". - Алма-Ата, 1990. - секция П. -С.62.

9. К систематике бактерий родов Klebsiella и* Enterobacter /Солоиченко В.В., Юртова Т.В./. - //Эволюция и систематика прокариотов. * Москва, 1990. - С.27-29. Деп. в ВИНИТИ 25,01.90 г. P5II-B90. .

10. Исследование факторов патогенности некоторых представителей энтеробактерий /Габрилович И.М,, Бозиев В.Б., Шйрабейов Р.Х., Жугова Т.Ч., Зароченцев Н.В., Нагоев B.C., Хакешева Т.А., Яку-шенкч О.С./. - //Актуальные вопросы профилактики инфекционных заболеваний и охраны внешней среда. - Душанбе, I99J. - кн.1, -

С. 56-58.

11. Циовуляция грамотрицательных бактерий в родовспомогательных учреждениях /Петрухина М.И., Еатуро А.П., Габрилович И.М./.-//Тезисы докладов У1 Всероссийского съезда микробиологов, эпидемиологов и паразитологов /г.Нижний. Новгород,1991 г./. -М., 1991. - T.I. - C.II7-II8.

Подписано к печати 25.03.1992 г. Формат 60x30 I/I6. I печ.л. Заказ УЭЧ8 . Тирзл 100 экз. Бесплатно. _______ ________

Ротапринт КЫУ

360031. Нальчик, ул.Чер1:ышевского,173