Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологические особенности бактерий рода Acinetobacter, выделенных при гнойно-воспалительных заболеваниях

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Биологические особенности бактерий рода Acinetobacter, выделенных при гнойно-воспалительных заболеваниях"

УДК: 579.61:616-002.3-078 На правах рукописи

РГБ ОД

1 з дек гт

Иманбаева Марина Илеуевна

БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ БАКТЕРИЙ РОДА АСШЕТОВАСТЕИ, ВЫДЕЛЕННЫХ ПРИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

03.00.07 - Микробиология

Автореферат

диссертации на соискание ученом степени кандидата биологических наук

Республика Казахстан Астана

2000

Работа выполнена на кафедре микробиологии государственной Медицинской Академии (г.Астана)

Научные руководители

- доктор медицинских наук, профессор Сарбасова Ш.И.

- доктор биологических наук, доцент Бисснова Н.М.

Официальные оппоненты

- доктор биологических наук профессор Никитина Е.Т.

- кандидат биологических наук доцент Музафаров Ф.М

Ведущее учреждение

Казахский государственный медицинский институт им.С.Д.Асфендиярова

Защита состоится «.Я1 » де-каВр.с- 2000 г. в 00 часов на заседании диссертационного совета Д 53.24.01. при Институте микробиологии и вирусологии МоиН РК по адресу: 480100, г.Алматы, ул. Богембай батыра, 103.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института микробиологии и вирусологии МОиН РК.

Автореферат разослан «_»_2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Проблема гнойной инфекции в хирургии была и остается до настоящего времени одной из самых актуальных. Широкое, а порой и бесконтрольное применение антибиотиков привело к изменению состава микробной флоры гнойного очага, изменению реактивности организма. Последние десятилетия характеризуются повышением роли условно-патогенных бактерий в патологии человека. Расширение спектра условно-патогенных микроорганизмов, с одной стороны, усовершенствование методов их идентификации и успехи в исследованиях по таксономии микроорганизмов, с другой, способствовали тому, что за последние 15-20 лет существенное значение стали придавать неферментирующим грамотрицательным бактериям (НФГОБ), представляющим чрезвычайно разнородную в таксономическом отношении группу. НФГОБ выделяются от больных с послеоперационными гнойными осложнениями разнообразной локализации, от больных с инфицированными ожогами, с предметов окружающей среды в клиниках и стационарах. Частота обнаружения НФГОБ в материале от больных составляет, по данным ряда авторов, 5-28% (R. Hanlock, 1998; S. Brown, 1998; В. Mulin, 1995).

К указанной группе микроорганизмов относят представителей родов Pseudomonas, Acinetobacter, Alcaligenes, Flavobacterium, Moraxella и других, являющихся условными патогенами (Н.С. Богомолова, 1990; Х.И.Искакова, 1988; Е.М. Modakkos, 1998). Наиболее известным и изученным видом является синегнойная палочка, доминирующая среди НФГОБ по частоте встречаемости в патологии человека (Т.Г.Габисония с соавт., 1992, И.Е. Колуканов, 1994). Второе место принадлежит представителю семейства Neisseriaceae - Acinetobacter spp. (Т.Я. Пхакадзе, 1991; Р. Pine, 1998). Чрезвычайно широк диапазон заболеваний, возможной причиной которых является ацинетобактер: эндокардиты, менингиты, пневмонии, абсцессы легких, мозга, кожи, внутрибрюшинные абсцессы, раневые инфекции, инфекции мочевого тракта, острые кишечные заболевания и другие (G. Garces, 1990; М.М. Goel, 1990; R. Hancock, 1998). Согласно литературным данным, чаще всего заболевания, вызываемые этими микроорганизмами, возникают у госпитализированных больных с тяжелыми хроническими или острыми гнойными процессами, после различных хирургических вмешательств, длительной антибиотикотерапии (R.. Hancock,

1998; S. Brown, 1998). Имеются сведения о внутрибольничной

гнойной инфекции, обусловленной Acinetobacter spp. (J. Focht, 1998; P. Pine, 1998).

Вместе с тем, биологические особенности клинических изолятов изучены крайне недостаточно. Исследования по выяснению роли указанных микрорганизмов как возможного этиологического фактора при гнойно-воспалительных заболеваниях (ГВЗ) в основном направлены на их обнаружение. Имеются лишь единичные сообщения о возрастающей частоте находок Acinetobactcr spp. в гнойных ранах (С.Б.Ахметова, 2000; Н. Sader, 1996). Мало работ посвящено видовой идентификации штаммов рода Acinetobacter, выделенных из патологического материала, а имеющиеся данные зачастую противоречивы (R. Bugalski, 1987, G. Taylor, 1997, Oksa Ozan et al., 1997).

Остаются малоизученными патогенные свойства Acinetobacter spp. Исследованиями Т.Г.Габисония (1992) доказано наличие у этих микрорганизмов адгезивной и энтеротоксигенной активности. Данные о наличии гемолитической активности носят противоречивый характер (И.И. Колкер с соавт., '1983, И.А. Маруашвили, 1995). И.Г.Богатова, (1988) обнаружила у штаммов ацинетобактера такие факторы патогенности как лецитиназную активность и способность образовывать капсулу. LD50 для изученных штаммов составила 106-107, что соответствует уровню большинства условно-патогенных грамотрицательных бактерий. Поэтому весьма важно определить факторы патогенности штаммов бактерий рода Acinetobacter, коррелирующие с этиологической значимостью клинических изолятов при ГВЗ.

По данным Х.И.Исхаковой (1988), Н. Sader (1996), R. Hancock, (1998) культуры Acinetobacter spp. нередко обладают множественной устойчивостью к антибиотикам, что существенным образом осложняет антибиотикотерапию при заболеваниях, вызванных данным видом.

Поэтому поиск других лечебных средств при ГВЗ, вызванных бактериями рода Acinetobacter является весьма актуальным. В связи с этим представляет интерес изучение антимикробной активности и влияния антисептиков на биологические свойства клинических изолятов Acinetobacter spp., включая признаки патогенности и чувствительность к антибиотикам.

Цель работы. Выявление биологических особенностей бактерий рода Acinetobacter, выделенных при гнойно-воспалительных заболеваниях.

Задачи исследования. 1. Исследовать микрофлору и определить частоту встречаемости Acinetobacter spp. при гнойно-воспалительных процессах

хирургических больных. Дать микробиологическую характеристику выделенных штаммов АстешЬас1ег Брр.

2. Определить чувствительность выделенных культур рода ЛстейЬас^ег к антибиотикам.

3. Исследовать штаммы АстеюЬасгег Брр. на наличие факторов патогенности.

4. Выяснить степень антимикробной активности антисептиков димексида и гипохлорита натрия, изучить их воздействие на биологические свойства АстеюЬа^ег зрр..

Научная новизна. Впервые получены данные о наличии у бактерий рода Асте1оЬас1ег фибринолитической, плазмокоагулазной, дермонекротической, гиалуронидазной, антилизоцимной и бактериолитической активности. Сравнительный анализ частоты встречаемости различных факторов патогенности у штаммов, выделенных из гнойного отделяемого и воздуха, выявил более высокую степень патогенности клинических штаммов. Патогенность изолятов связана также с видовой принадлежностью.

Выявление сочетанной продукции факторов патогенности у штаммов АапеюЬайсг Брр., обнаруженных при ГВЗ и выделенных из воздуха показало, что 54,9% культур характеризуются наличием от 2 до 4 признаков патогенности. Среди них ведущими являются антилизоцимная, адгезивная и гиалуронидазная способность. Полученные данные свидетельствуют о том, что бактерии рода АЫпеЮЬайег могут обладать достаточным патогенным потенциалом, позволяющим вызвать гнойную инфекцию.

Изучение чувствительности выделенных штаммов к антибиотикам показало множественную резистентность бактерий рода Аа'псиэЬа^ег к антимикробным препаратам. Проведенные исследования показали различия в чувствительности к антибиотикам видов А.Ьашпапп и АЛлуойи.

Впервые установлено антимикробное действие димексида и электролизного раствора гипохлорита натрия на Асте1оЬасСег эрр.. Показано, что воздействие антисептиков ведет к снижению вирулентности бактерий, связанное с уменьшением гиалуронидазной, адгезивной (димексид) или гиалуронидазной, адгезивной и антилизоцимной (гипохлорит натрия) активности, а также к повышению чувствительности АстеГоЬаЛег эрр. к антибиотикам. Результаты проведенных исследований расширяют существующие представления о биологии бактерий рода АсшеШЬааег.

Практическая значимость. Возросшую роль представителя НФГОБ бактерий рода АстеиЛааег в патологии следует учитывать в лабораторной диагностике гнойно-воспалительных заболеваний хирургических больных. Данные о полирезистентности возбудителей к антимикробным рекомендуются для использования в практике врача-хирурга. Выявленные факторы патогенности АстеюЬааег эрр. предлагается использовать в качестве дополнительных критериев оценки их этиологической значимости в конкретных случаях заболевания.

Дано микробиологическое обоснование применению димексида в комплексном лечении гнойных ран, вызванных Астс(оЬас1ег врр., что позволит расширить возможности способов воздействия на хирургическую инфекцию.

Оформлено рационализаторское предложение, издан информлисток КазгосИНТИ. Разработанная совместно с хирургами методика комплексного лечения гнойных ран внедрена в работу отделения хирургии БСМП г.Астана и хирургического кабинета городской поликлиники №3.

Положения, выносимые на защиту.

1. Бактерии рода АстеК)Ьас[ег могут обладать комплексом факторов патогенности, среди которых ведущими для изолятов, выделенных при ГВЗ, являются гиапуронидазная, антилизоцимная и адгезивная активность.

2. Антисептики димексид и электролизный раствор гипохлорита натрия обладают бактерицидным действием в отношении бактерий рода Асше1оЬас1ег, их воздействие повышает чувствительность к антибиотикам и угнетает гиалуронидазную, адгезивную и антилизоцимную активность.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на заседаниях кафедры микробиологии (1997, 2000), институтской научно-практической конференции (1997), Международной научной конференции «Экология. Радиация. Здоровье» (Семипалатинск, 1998).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ, оформлено 1 рацпредложение, издан информлисток.

Структура и объем диссертации. Материалы диссертации изложены на 100 страницах машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы. Библиографический указатель литературы содержит 194 отечественных и 47 иностранных источников. Диссертация документирована 26 таблицами и иллюстрирована 9 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Бактериологическому исследованию подвергали гнойное отделяемое от хирургических больных с ГВЗ различной локализации, находившихся на лечении в хирургическом отделении больницы скорой медицинской помощи г.Астаны. Взятый материал помещали в стерильный 0,85% раствор хлористого натрия. Материал от больных брали в 1-2 дни болезни до начала антибиотикотерапии и повторно в процессе лечения до 3-4 раз.

Пробу клинического материала засевали на среды Эндо, Плоскирева, Сабуро, кровяной и желточно-солевой агар. Выделение и идентификацию кокков, энтеробактерий и представителей группы НФГОБ проводили в соответствии с методическими рекомендациями «Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых псевдомонадами и другими НФГОБ» (1987), «Методическими указаниями по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями» (1984), справочными материалами (М.О.Биргер, 1982; В.В.Меньшиков, 1987; В.В.Тец, 1994).и в соответствии с классификацией, приведенной в 9-м издании «Определителя бактерий Берги» (1997).

Количественный учет микроорганизмов в исследуемом материале проводили методом секторных посевов по Гоулду (1984).

Антибиотикочувствительность выделенных штаммов определяли методом стандартных дисков в соответствии с «Методическими указаниями по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков» (1983).

Бактерицидную активность антисетиков оценивали по процентному показателю выживших клеток и индексу бактерицидности (ИБ) по Г.К. Палию (1984). Влияние антисептиков на биологические свойства бактерий рода ЛстеГоЬайег определяли по изменениям адгезивной, гиалуронидазной и антилизоцимной активности и антибиотикочувствительности изолятов.

Гемолитическую активность определяли на 5 % кровяном агаре по общепринятой методике. Фибринолитическую активность определяли на агаре с добавлением 12% цитратной плазмы человека. О наличие фибринолизина судили по зоне просветления плазмы вокруг выросших колоний.

Таблица 1

Объем выполненных исследований

Виды исследования Количество опытов (анализов) Количество штаммов

Бактериологический анализ гноя хир. больных 512 431

Бактериологический анализ гноя при заболеваниях ЛОР-органов. 134 95

Определение антибиотикочувствительности - 616

Определение гемолитической активности - 313

Определение плазмокоагулазной активности - 253

Определение лецитиназной активности - 289

Определение фибринолитической активности - 91

Дермонекротическая проба на кроликах 91 91

Определение адгезивной активности - 91

Определение гиалуронидазной активности - 91

Определение антилизоцимной активности - 91

Определение бактериолитической активности - 91

Определение ИБ антисептиков 78 26

Изучение влияния антисептиков на антибиотикочувствительность 168 21

Изучение влияния антисептиков на гиалуронидазную активность 40 20

Изучение влияния антисептиков на антилизоцимную активность 30 15

Изучение влияния антисептиков на адгезивную активность 30 15

ч

Наличие лецитиназы устанавливали по общепринятой методике на желточно-солевом агаре по образованию характерных зон помутнения среды вокруг колоний и радужного венчика на ее поверхности.

Плазмокоагулазную активность определяли по способности штаммов свертывать кроличью плазму. Постановку опыта осуществляли в соответствии с «Наставлением по применению...» (198). Адгезивные свойства культур определяли в реакции гемагглютинации с эритроцитами морской свинки.

АЛА определяли по способу О.В.Бухарина (1974) с использованием эталонной культуры Micrococcus lysodeikticus № 2665. Бактериолитическую активность определяли по J.Hawiger (1968). Результаты оценивали по наличию зон лизиса микрококка вокруг колоний исследуемых штаммов.

Продукцию гиалуронидазы определяли по методике Л.Т.Смирновой (1952). В качестве препарата гиалуроновой кислоты использовали субстрат, приготовленный из пупочных канатиков новорожденных.

Объем выполненных исследований представлен в таблице 1. Полученные результаты подвергали статистической обработке. Для расчетов и оформления статистического материала использовали персональный компьютер типа Pentium, пакет прикладных программ и рекомендации, изложенные в работах Л.С.Векснер, (1992); Ю.Н.Тюрин, (1995).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Для определения роли бактерий рода Acinetobacter при гнойной инфекции проведены посевы гноя и раневого отделяемого у 174 больных, находившихся на лечении в хирургическом отделении по поводу абсцессов, флегмон, маститов, остемиелитов, случайных ран. Из гнойных очагов был изолирован 431 штамм микроорганизмов.

Среди представителей пиогенной микрофлоры преобладали микроорганизмы рода Staphylococcus (S. aureus, S.epidermidis,) и на их долю приходится 46%. На втором месте стоят представители группы НФГОБ, на третьем - семейства Enterobacteriaceae (25,3% и 18,8% соответственно). Представитель семейства Streptococcaceae -S.pyogenes высевался в 5,6% случаев. Редко определялись грибы рода Candida - 2,3% и Micrococcus luteus - 0,9%.

Чаще других микроорганизмов из гноя высевался S. aureus -37,6%. Из числа представителей НФГОБ при ГВЗ определялись

виды P.aeruginosa, A.baumannii и A.lwoffii. По частоте встречаемости в этиологической структуре ГВЗ у обследованных больных бактерии рода Acinetobacter занимают третье место (9,1%) и уступают только золотистому стафилококку и синегнойной палочке.

Выделенные культуры Acinetobacter были типичны по микробиологической характеристике и идентифицированы как A.baumanii и A.lwoffii.

Acinetobacter spp. высевали в монокультуре в 32,9%, в ассоциации — в 67,1% случаев. Наиболее часто A.baumanii и A.lwoffii выделяли с P.aeruginosa и S.aureus. В первичных посевах частота встречаемости бактерий рода Acinetobacter составила 9%, в ходе заболевания она достигла 16%, т.е. увеличилась в 1,8 раза, что может свидетельствовать о внутрибольничном инфицировании.

Анализ чувствительности основных возбудителей ГВЗ показал, что гноеродная флора характеризуется устойчивостью ко многим препаратам. Так, из 24 антибиотиков, активность которых изучалась в отношении стафилококков, только к гентамицину, тобрамицину и препаратам из группы цефалоспоринов обнаружено более 80% чувствительных штаммов. Другие антибиотики были малоэффективны.

Несколько иные антибиотикограммы у представителей семейства Enterobacteriaceae. Наиболее активными антибиотиками были полимиксин, гентамицин и тобрамицин. Из цефалоспоринов наиболее активными оказались препараты 3 поколения -цефтазидим и цефотаксим (77,75-95,2% чувствительных штаммов), активность цефалоспоринов 1 и 2 поколения была ниже (40%-76,2% чувствительных штаммов).

В отличие от представленных выше возбудителей бактерии рода Acinetobacter характеризовались множественной устойчивостью к большинству исследованных препаратов. Наиболее активным антибиотиком в отношении Acinetobacter spp. был цефтазидим, чувствительность к которому проявило 62,5%-72,1% изолятов. Только половина исследованных штаммов сохранила чувствительность к гентамицину, тобрамицину и полимиксину (47,9%-58,1%). Следует отметить сравнительно высокую активность карбенициллина, к которому сохранило чувствительность 41,7%-53,5% культур. Активность остальных изученных антибиотиков не превышала 20%.

Таким образом, сравнительный анализ антибиотикограмм основных возбудителей гнойной инфекции показал более высокую степень устойчивости к антимикробным препаратам Acinetobacter spp. (р<0,05). По спектру устойчивости к антибиотикам

микроорганизмы рода Аст^оЬайег сходны с другим представителем группы НФГОБ- Р.аеги^поБа (р>0,5).

При анализе спектра устойчивости ацинетобактера в зависимости от источника выделения получены следующие данные. Из общего числа культур, выделенных от больных, наибольшее количество (79,3%) является резистентным к свыше 11 изученным антибиотикам и в основном это штаммы А.Ьаигаапн (69,0%) (р<0,001). А.ЬуоПп с такой устойчивостью к антибиотикам встречается в 10,3% случаев. Что касается культур, изолированных из воздуха, то здесь наибольший удельный вес (78,8%) составляют штаммы, устойчивые к 7-8 (39,4%) и 9-10 (39,4%) антибиотикам (р<0,001). Максимальную устойчивость в этой группе - к 11-13 антибиотикам проявляет лишь 12,1% штаммов, представленные А.Ьаитапи.

Наши исследования показали различия в чувствительности к антибиотикам штаммов различной видовой принадлежности. Так, А.Ьаитапи оказался более устойчив к большинству изученных препаратов, чем А.Ьуойп и эта разница для ампициллина, стрептомицина, эритромицина, гентамицина, полимиксина, карбенициллина, канамицина, цефалотина и цефалексина статистически значима (рис.1).

Антибиотикорезистентность видов А.Ьаитапи и А.Куой!

Ат КЬ Кт Ет Бт Ст Рт СП С1к

ША.Ьаитапп 0 А.КуоЯн

Рисунок 1

Нами было проведено исследование выделенных штаммов АстешЬааег на наличие факторов патогенности, выявляемых в настоящее время у патогенных и условно-патогенных бактерий, вызывающих ГВЗ.

Всего был исследован 91 штамм АстеШЬааег эрр., из них 49 изолированы из клинического материала от хирургических больных с гнойными процессами, 9 - от ЛОР-больных. 33 культуры высеяны из воздуха учебных помещений и составили контрольную группу. Изучение культуральных и биохимических свойств позволило отнести 48 штаммов к виду А.Ьаитапи и 43 штамма к А.КуоГГп. В клиническом материале от больных преобладал А.Ьаитапи, составляя 69,0%, в воздухе помещений превалировал вид АЛууоАГп (75,8%).

Нами исследована гемолитическая, фибринолитическая, дермонекротическая, лецитиназная, плазмокоагулазная, гиалуронидазная, адгезивная, антилизоцимная и бактериолитическая активность ацииетобактеров. Данные о наличии у ацинетобактера фибринолитической, плазмокоагулазной, дермонекротической, антилизоцимной, гиалуронидазной и бактериолитической активности получены впервые.

Наши исследования показали, что ведущими факторами патогенности клинических изолятов являются гиалуронидазная, адгезивная и антилизоцимная активность.

ГиаЛуронидаза относится к факторам инвазии, с помощью которой микроорганизм осуществляет функцию проникновения, разрушая гиалуроновую кислоту, входящую в состав соединительной ткани. Изучение показало, что гиалуронидазная активность регистрируется у 75 культур, что составило 82,4%. Из этого числа культур слабой гиалуронидазной активностью обладали 36%, средней - 57,3%, высокой — 6,7% штаммов. Сопоставление гиалуронидазной активности ацинетобактера в зависимости от источника выделения показало, что среди штаммов, выделенных из гнойного отделяемого, значимо преобладают культуры со средней, а среди изолятов из воздуха - со слабой степенью гиалуронидазной активности. Для вида А.Ьаитапи характерна средняя и высокая гиалуронадазная активность, тогда как для другого вида - слабая степень либо отсутствие фермента.

Этап адгезии представляет начальную стадию инфекционного процесса, обеспечивающий колонизацию возбудителем чувствительной ткани, поражение которой приводит к развитию заболевания. По нашим данным адгезивной активностью обладало 49 изолятов (53,8%). Из них 33 штамма были отнесены А.Ьаитапи (36,3%) и 16 штаммов - к А.1шоГШ (17,6%) (табл.2). Д-

маннозорезистентная агглютинация наблюдалась в 46,6% случаев среди штаммов, выделенных из клинического материала и в 18,2% -среди штаммов, изолированных из воздуха. Гемагглютинирующие штаммы среди А.Ьаитапп (68,8%) обнаруживались в 1,8 раз чаще чем среди А.1\уойн (р<0,001). Необходимо отметить, что встречаемость ДМРГА - положительных культур была в 2,5 раза выше у А.Ьаитапп (р<0,001). При этом фимбрии общего типа были в одинаковой степени характерны для изолятов обоих изучаемых видов.

АЛА — способность бактерий инактивировать лизоцим хозяина. Известно, что данный признак имеет важное значение в патогенезе ряда инфекций ( ). Проведенные исследования показали, что бактерии рода АстеюЬа^ег могут обладать антилизоцимной активностью (табл.3). Всего АЛА выявлена у 46 штаммов, что составляет 50,5% от общего числа изученных культур. Результаты исследований показали, что две трети клинических изолятов обладают данным фактором патогенности. Штаммы вида А.Ьаитапп достоверно чаще обладают антилизоцимной активностью, чем изоляты А.Ьуойн (р<0,001). Таблица 3

Антилизоцимная активность бактерий рода Асте{оЬас1ег в зависимости от видовой принадлежности

Вид Число ШТ. Антилизоцимная активность

Из них с положительным результатом

абс. %

А.Ьаитапп 48 36 75,0±6,3

А.ЬУОЯН 43 10 23,3 ±6,4

Р <0,001

Исследования показали, что гемолитической активностью обладало 18 штаммов ацинетобактера, что составило 19,8% от общего числа изученных культур. Чаще всего данный признак встречался среди изолятов, выделенных от больных с ГВЗ - 27,6%, а также у вида А.Ьаитапп (31,3%). Культуры, выделенные из воздуха, обладали слабой гемолитической активностью (6,1%).

Все штаммы контрольной группы были коагулазоотрицательными. Клинические изоляты, выделенные при ГВЗ, имели данный фактор в 10,3% случаев. Среди

Таблица 4

Лецитиназная, плазмокоагулазная, гемолитическая, фибринолитическая активность и дермонекротическая активность бактерий рода Acinetobacter, в зависимости от видовой принадлежности

Вид Кол-во изуч. культур Лецитиназная активность Плазмокоагулазная активность Гемолитическая активность Фибринолит. активность Дермонекрот. активность

абс. % абс. % абс. % абс % абс %

A.baumanii 48 14 29,2±6,6 6 12,5±4,8 15 31,3±6,7 23 47,9±7,2 13 27,1±6,4

A.lwoffii 43 8 18,6+5,9 - - 3 6,9±3,9 5 6,9+3,9 - -

Р <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001

Примечание: р - достоверность различий, рассчитанная при сравнении штаммов различной видовой принадлежности

Таблица 2

Адгезивная активность штаммов рода АстеЮЬа^ег в зависимости от видовой принадлежности

Вид Кол-во изуч. культур Результаты РГА

Всего положительных ДМРГА ДМЧГА

абс. % абс. % абс. %

А.Ьашпапи 48 33 68,8±6,7 24 50,0±7,2 9 18,8±5,6

А.^оГЯ! 43 16 37,2+7,4 9 20,9±6,2 7 16,3±5,6 '

Р <0,001 <0,001 <0,05

Примечание: р - достоверность различий, рассчитанная при сравнении штаммов различной видовой принадлежности

коагулазоположительных культур не было ни одной, относящейся к виду А.Ьуойн.

Способность вырабатывать фермент лецитиназу встречалась в 24,2% случаев. Штаммы, выделенные от больных, обладали этой способностью чаще (29,3%), чем изоляты, полученные из воздуха (15,2%). В целом А.Ьаитапи, проявлял лецитиназную активность в 29,2% случаев, А.К\'оШ1 - в 18,6%.

Фибринолитическая активность встречалась среди видов АстеюЬааег с частотой 28,6%. Данный признак преобладал у культур клинического происхождения (36,2%). У штаммов, высеянных из воздуха, фибринолитическая активность проявлялась в 2 раза реже - 15,2%. Достоверно чаще указанным фактором патогенности обладал А.Ьаитапи, в отличие от А.1\¥оПн (47,9% и 6,9% соответственно).

Дермонекротическая активность регистрировалась только у вида А.Ьаитапи (27,1%) и в два раза чаще у штаммов, выделенных из клинического материала.

Одним из малоизученных факторов патогенности многих возбудителей является бактериолитическая активность или способность к образованию лизоцима, обеспечивающая микробам выживание в микробиоценозах. Оказалось, что штаммы бактерий рода АсшеЮЬааег могут обладать данным фактором патогенности (табл.5). Таблица 5

Бактериолитическая активность бактерий рода АстеЮЬааег в зависимости от видовой принадлежности

Вид Бакте риолитическая активность

Число штаммов Из них с положительным результатом

абс. %

А.Ьаитапи 48 12 25,0±6,3

А.1№о£ГЙ 43 6 14,0±5,3

Р <0,001

Способность к лизоцимобразованию выявлена у 18 штаммов, что составило 19,8% от общего числа изолированных культур. Из числа культур, выделенных от больных с ГВЗ, 24,1% штаммов имеют бактериолитический фактор, тогда как среди изолятов, полученных из воздуха помещений, лишь 12% показали положительный результат. При сопоставлении частоты обнаружения данного

признака патогенности с видовой принадлежностью оказалось, что изоляты А.Ьаитапп в два раза чаще обладают бактериолитическим фактором, чем Л.

Изучение сочетанного носительства признаков патогенности у бактерий рода АстеюЬа^ег показало, что у культур контрольной группы наиболее часто встречался только 1 фактор патогенности. Из клинического материала выделялись в основном штаммы, имеющие 2-4 признака патогенности. А.Ьаитапп достоверно чаще, чем А.1\уо£Ш продуцировал от 2 до 6 признаков патогенности. Вид A.!woffii преобладал среди культур, имеющих только 1 из изученных факторов. Чаще всего у АстеиэЬасгег эрр. наблюдается сочетание гиалуронидазной и антилизоцимной активности с другими факторами патогенности.

Таким образом, проведенные исследования выявили целый комплекс факторов патогенности, которыми могут обладать ацинетобактеры. Большей степенью патогенности обладали клинические изоляты и штаммы, относящиеся к виду А.Ьаитапп, которые превалировали в гнойном отделяемом.

Природная множественная устойчивость бактерий рода Асте1оЬас1ег к антибиотикам осложняет лечение заболеваний, вызванных этими микроорганизмами и диктует необходимость поиска более эффективных методов лечения. В последние годы на фоне широкого распространения внутрибольничных инфекций и множественно устойчивых к антибиотикам вариантов бактерий возродился интерес к антисептическим препаратам. Все больше исследователей считают, что в лечении и профилактике местных инфекций приоритет должен быть отдан антисептикам. Нами изучено действие антисептиков электролизного раствора гипохлорита натрия и димексида на клинические штаммы бактерий Ас1пеЮЬас1ег эрр..

Исследования показали, что ИБ электролизного раствора гипохлорита натрия в отношении А.Ьаитапп оказался в 1,5 раза выше ИБ димексида. После воздействия димексида выживают 40,8% бактериальных клеток, в то же время после обработки гипохлоритом натрия в дозе бОмг/л процент выживших клеток составляет 1,1%.

В результате изучения влияния антисептиков на биологические свойства штаммов ацинетобактера выявлено, что димексид и гипохлорит натрия повышают чувствительность бактерий к антибиотикам, а также способствуют утрате ведущих факторов патогенности, таких как гиалуронидазная, адгезивная и антилизоцимная активность.

Так, после воздействия димексида отмечается значительное снижение гиалуронидазной активности до слабой степени или ее

Изменение степени гиалуронидазной аетивности штаммов А.Ьаштшш после воздействия димексида

Штаммы со средней степенью Штаммы со слабой степенью гиалуронидазной активности гиалуронидазной активности

в средняя степень Ш слабая степень И отсутствие активности

ЕЗ слабая степень И отсутствие активности

Рисунок 2

утрата (рис.2) и частичная потеря адгезивной способности. Влияние на антилизоцимную активность не наблюдается. Воздействие гипохлорита натрия приводит к значительному снижению выработки гиалуронидазы вплоть до утраты данного фактора (табл.3), к потере МР-адгезинов и уменьшению антшшзоцимной активности.

Изменение степени гиалуронидазной активности штаммов А.Ьаитапп после воздействия гипохлорита натрия

Штаммы со средней степенью Штаммы со слабой степенью

гиалуронидазной активности гиалуронидазной активности

10%

ы слабая степень И отсутствие активности

0 слабая степень Ш отсутствие активности

Рисунок 3

Таким образом, проведенные исследования позволили впервые охарактеризовать патогенный потенциал бактерий рода АстйоЬа^ег, изолированных при гнойных процессах различной локализации. Полученные данные расширяют существующие представления о биологии бактерий рода АстеюЬайег. Выявленные биологические особенности клинических штаммов могут быть использованы в качестве критериев для оценки этиологической значимости АстеШЬа^ег Брр. при ГВЗ и послужить теоретическим обоснованием для разработки и совершенствования методов лабораторной диагностики заболеваний, вызванных этими бактериями.

ВЫВОДЫ

1. Для определения роли бактерий рода АЫпе{оЬас1ег изучена микрофлора гнойных ран у 174 хирургических больных и выделен 431 штамм микроорганизмов. По частоте встречаемости в этиологической структуре ГВЗ хирургических больных бактерии рода Ас'теШЬа^ег занимают третье место (9,1%) и уступают только Б.аигеиБ и Р.аеп^тоБа. В клиническом материале от больных преобладает А.Ьаишапп (85%), в воздухе превалирует АЛшоЯн (75,6%).

2. Изученные штаммы АстеШЬаЛег Брр. характеризуются резистентностью к большинству исследованных антибиотиков. Наиболее активными препаратами в отношении бактерий рода АстеЮЬас1ег являются гентамицин, тобрамицин, полимиксин и цефалоспорин 3-го поколения цефтазидим, чувствительность к которым проявило 47,9%-72,1% изолятов. 79,3% штаммов Ас'теюЬасГег, выделенных из клинического материала, характеризовались полирезистентностью (>14 препаратов) к антибиотикам и были представлены в основном А.Ьаишапц (69,0%).

3. Бактерии АстеюЬа^ег Брр. могут обладать адгезивными, плазмокоагулазными, гиалуронидазными, фибринолитическими, гемолитическими, лецитиназными, дермонекротическими, антилизоцимными, бактериолитическими свойствами. Частота встречаемости признаков находится в прямой зависимости от источника выделения и от вида культур (р<0,005). Клинические изоляты характеризуются комплексом факторов патогенности, среди которых доминирует гиалуронидазная, адгезивная и антилизоцимная активность в сочетании с другими признаками.

4. Антисептики димексид и электролизный раствор гипохлорит натрия обладают антимикробным действием на бактерии рода

АстеЮЬасЛег, что свидетельствует о целесообразности использования этих препаратов при ГВЗ, вызванных этими микрорганизмами. Воздействие антисептиков способствует повышению чувствительности бактерий Асте1оЬас1ег врр. к антибиотикам и утрате факторов патогенности.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Иманбаева М.И. Микробный пейзаж гнойных ран // Акмолинский медицинский журнал,-1998.-№3 .-С.75-77.

2. Иманбаева М.И., Жунусова Д.К. Микробиология и факторы колонизации гнойных ран // Экология, радиация, здоровье. 2-я Международная конференция: Тез. докл.-Семипалатинск.-1998.-С.99.

3. Иманбаева М.И., Сарбасова Ш.И. Микробиологическая характеристика и роль в патологии человека неферментирующих грамотрицательных бактерий рода Астс1оЬааег И Акмолинский медицинский журнал.- 2000.-№3.-С.9-13.

4. Иманбаева М.И. Биологическая характеристика и чувствительность к антибиотикам АстаоЬааег сакоасеПсиз // Перспективы развития хирургии в третьем тысячелетии.-Сб.н.тр.-Астана.-2000.-С.293-297.

5. Иманбаева М.И., КоваленкоТ.Ф., Сарбасова Ш.И., Миронюк Н.В. Антибактериальная активность многокомпонентных перевязочных средств при экспериментальном и клиническом исследовании // Перспективы развития хирургии в третьем тысячелетии.-Сб.н.тр,- Астана.-2000.-С.298-3 03.

6. Иманбаева М.И., Калина Н.В., Сарбасова Ш.И., Бисенова Н.М. Этиологическая структура гнойно-воспалительных заболеваний различной локализации // Перспективы развития хирургии в третьем тысячелетии.-Сб.н.тр,- Астана.-2000.-С.319-323.

7. Иманбаева М.И., Сарбасова Ш.И. Биологические свойства и частота обнаружения бактерий АстеиЛайег сакоасеисиБ при гнойной инфекции // Гигиена, эпидемиология и иммунобиология.-Алматы.-2000.-№3-4.-С.133-137.

Мазмуны

lpiwii-кабыиу аурулардьщ башшен Acinetobacier туыстас бактериялардьщ биологиялык ерекшелктер!

Иманбаева М.И.

Ipiiuü-мбыиу аурулардьщ бел! men Acinetobacter туыстас бактериялардьщ биологнялык; ерекшел1ктер1 жете тексериш. Алгашк.ы рет Acinetobacter туыстас бактерияларда фибринолитикалык., плазмакоаугулазалык, дермонекротикалык, гналуронидазалык, антилизошщщк жэне бактериолитикалык, белсендшж барлыгы аныктапды. Ауадан жоне ¡рнад белжтен бел in алынган штамдардыц патогешик факторларыньщ кездесу жшлкен салыстырып талдау нэтнжеанде, клиникалык; штамдардыц натогендж дорежса жогары екеш айкындалды.

Изоляттардыц патогеншп сонымен катар кай турге жатуына байланысты Acinetobacter туыстас бактериялардьщ непзп патогевдж факторлары болып антилизощщщк, адгезивтж жэне гиалуронидазалык касиеп есептеледь

Бел]'ш1н штамдардыц антибиотикке сез1мталдыгын зерттеудщ iraTiDKeci Acinetobacter бактерияларынын антимикробты npenaparrapFa кепшшк барлыгын керсегп pe3HCTeHTTÍri.

Журпзген зерттеулер Acinetobacter baumani жоне Acinetobacter lvvofïl турлердщ антибиотикке ceiiмт;шдыгыiиш айырмашылык; барлыгын KopceTTi.

Алгашкы рет Acinetobacterre натрии гипохлориш жзне димексид антисептиктершщ антимикробты эсерлер1 аныкталды. Антисептиктердщ эссршщ нутижеспще Acinetobacter spp бактерияларынын антибиотикке сез!мталдыга жсларлайтыны жэне штамдардыц вирулентпп томендейтнн аныкталды.

Журпзшген зерттеудщ нэтижеа Acinetobacter туыстас

бактериялардын биологиясы жайль( бурьшгы TyciHiKTi кецейгед].

Imanbaeva Marina Ileyevna

Biological features of bacteria of Acinetobacter type, discharged from purulent-inflammatory deseases

Biological features of Acinetobacter type bacteria discharged from purulent-inflammatory deseases were studied. For the first time, data of presence of Acinetobacter type bacteria of fibrinolitic, plasmacoagulant, dermanecrotic, hyoluronidasire, antilyzomic and bacteriumolitic activity were recieved. Comparative rate analyse of encounting of different pathogenic factors in strains, discharged from pus and air, revealed higher degree of pathogenicity of clinical strains. Pathogenicity of strains is also connected with typed belonging. Antilysozymic, adhesive and hyoluronidasive activities are leading factors of bacteria pathogenicity of Acinetobacter type.

Sensitive studying to antibiotics of discharged strains revealed numerous of Acinetobacter type bacteria to antimicrobic preparations. Carried out researchings showed the difference in sensitiveness to antibiotics of A.baumanii and A.lwoffii types. Carried out results of researchings dialate existing presentation about biology of bacteria type Acinetobacter.

First, antimicrobic antiseptic action of hypochlorhyde sodium and dimexide on Acinetobacter was detirmined. It was shown that the influense of antiseptics had led to the increasing of Acinetobacter spp. bacteria sinsitiveness to antibiotics and decreasing of strains virulent.

Carried out results of researchings dialate exesting presentation about Biology of bacteria type Acinetobacter.