Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биологические, физико-химические и антигенные свойства энтеровирусов - возбудителей энтеровирусного гастроэнтерита свиней

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Биологические, физико-химические и антигенные свойства энтеровирусов - возбудителей энтеровирусного гастроэнтерита свиней"

НАДЮНАЛЬНА АКАДЕН1Я HAVE VKPAIIffl IHCTHTVT Н1КР0ВЮ.Я0Г11 I В1РУС0Л0Г11 1H. ДК. ЗАБОЛОТНОГО

°o

О

CO

a.

.^J vas. 619:616.988/616.34-002/636.4

П0ЛЕВ1К 0ЛЕНА IBAHIBHA

Б10Л0Г1ЧН1. Ф13ИК0-Х1Н1ЧН1 ТА АИТНГЕНН1 ВЛАСТИВОСТ1 EHTEPOBIPVCIB - ЗБУЛНИК1В ЕНТЕР0В1РУСН0Г0 ГАСТРОЕНТЕРИТУ СВИНЕЙ

03. 00. 06 - в1русолог1я

АВТОРЕФЕРАТ

дисертади на здобуття наткового сгупеня кандидата бЮлогччних наук

Ки1в - 199в

дисерташею е рукопис.

Робота виконана в лаборатори в1русолог11 тварш 1нститут

с1льськогосподарсько1 шкробЮлоги УААН

натковий кер1вник - Доктор ветеринарних наук. акадеШк УААН РОНАНЕНКО вододииир шшипович. зав1дувач лаборатори В1русодог11 тварин 1вституту с1льськогосподарсько1 н1кробюлог11 УААН

оф1шйн1 опоненти - Доктор недичних наук РИБАЛКО Св1тлана ЛеонПвна. головний вауковий сп1вро61тник Ки1вського НД1 еп1ден1олог11 та 1нФекд1йв хвороб Л. В. Гронашевського ноз Укра1ни

- Доктор ветеринарних наук. проФесор скибииькии володинир гур1й0вич. зав1дувач каФедри н1кроб1олог11 та в1рус0л0г11 Нашовального аграрного ун1верситету. н. Ки1в

Пров1дна установа - 1нститут ветеринарно1 нешпшни УААН. и. Ки1в

захист дисертапи В1дбудеться "17" червня 1998р. о 10 год. на зас1данн1 спед1ап1зовано1 вченог ради Д 26.233.01. 1нститут: И1кроб1олог11 та В1РУСОЛОШ 1н. д. к. Заболотного HAH УкраШ (252143, KHiB-143. вул. Заболотного, ist).

3 дисерташею ложна ознайонитись в б1бл1отеп1 1нституту Н1КР06ЮЛ0Г11 та В1РУС0Л0П1 1н. д. к. заболотного нан Украгни.

Автореферат роз1сланий "//" травня 1996 року.

вчешш секретар спетал1зовано1 ради , /

кандидат бюлопчних наук ^fifa^'— л. н. пур

загальна характеристика роботи

Актуальн1сть тени. одн1ею з наяважлив1ших дроблен ветеринарнох науки 1 практики е своечасне виявлення та 1дентиФ1каи1я збудшлав 1н4>ектйних хвороб тварин. в останн1й час особливого значения набу-ли ентер0в1русн1 хвороби свиней, зокреиа. ентеров1РУсний гастроэнтерит, який теоретично обгрунтований 1 практично Шдтвердхений ро-маненко В. П. (1974) 1 визначений в якост1 ново1 нозолопчно! одини-Ш В 1978 Р.

Ентеров1русний гастроентерит свиней - 1нФектйна хвороба, яка врахае всг в1ков1 групи тварин, особливо чутлнв1 поросята Е-н1сяч-ного в1ку. урахен1сть ентер0в1руснин гастроентеритон у вогниш1 за-хворювання досягае во-юох погол1в*я. В1дх1д серед захвор1лих поросят в середньону становить ю-зох, що завдае суттевих еконон1чних втрат (Бакулов Ш. а.. юрков г. г., 1980; Вабишевич Ф. С. .1986; Лабут1-нас а., Серейка в.. 1981; Лисенко н. в., 1982; притул1н п. i. та 1н.. 1967; Ронаненко В. п., 1974, 1975; собко а. I. та 1н.. 1983. 1988; веггз, 1970; вгавыс1. 1974; вигвезз, 1977; Буигег. 1960). Еконо-И1чн1 збитки наносить також в1дставання в рост1 1 розвитку молодняка та знихення прив1с1в у в!дгод1вельний перюд перехвор1лих тварин (Павлов в.г., 1989).

За кл1н1чними ознакани ентер0в1русний гастроентерит схохий на 1нш1 хвороби, як1 супроводхуються розладани пшунково-кишкового тракту, в зв'язку з гош часто ставиться понилковий д1агноз. шо ус-кладнюе проведения заход1в боротьби з шею хворобою.

Для постановки д1агнозу захворювання найб1льш достов1рнин явля-еться вшилення в1рус1в та 1х 1дентиФ1катя на Р1вн1 родини. роду та серотипу. 1дентиФ1каи1я збудник1в ентеров1русного гастроентериту свиней ускладнюеться за рахтвок того, шо р1д ентеров1РУС1в нарахо-вуе багато серотин1в. зпдно класиФ1каии шипе з сшвавт. (1971). ентеров1руси свиней нараховують 8 серотитв. ця класиФ1кашя допов-нена ронаненко В. п. з сшвавт. (1987. 1990. 1991) дев'ятьна новини серотипани. в зв'язку з тин, шо у вогнишах захворювання свиней гастроентеритон вид1ляються штани ентвРов1РУс1в Р1зннх серотшив, ви-никае необх1дн1сть визначення 1х етюлог1чно1 рол1 в 1нФекп1йпону продес1.

1дентиф1катя ентеров1рус1в свиней потребуе простих 1 доступних нетод1в та спештчних засоб1в д1агностики. однини з доступних тес-т1в для точно1 д1агностики та експрес-д1агностики в1русних 1нФекд1й та 1ндикацц збудник1в е реакшя в1руснейтрал1зад11 в культур1 кл1-тин 1 нетод 1нун0флу0ресденд11 з використанням набору д!агности-

г

кун1в.

Мета 1 эадач1 досл1дхень. кетою досл1дження було вставовлення нових серотип1в ентеров1рус1в свиней, вивчення рол1 ентеров1рус1в Р13НИХ серотшив в захворюванн1 свиней гастроентеритои 1 створення набору д1агиостикУН1в ентвРов1РУсного гастроентериту свиней.

Для досягнення niel нети поставлен! так1 завдання:

- ВИД1ЛИТИ в1руси в1д свиней, хворих з кл1н1кок» гастроентериту;

- 1дентиФ1кувати 1золяти BlpyclB та визначити lx родову та типо-ву валехн1сть;

- одерхати чист1 популяпи вшилених штаи1в ентеров1РУС1в свиней;

- визначити роль ентер0в1рус1в Р1зних серотшив в захворюваня1 свиней гастроэнтеритом;

- В1д1брати виробнич1 штани ентеров1рус1в свиней для створення набору д1агностикун1в:

- створити наб1Р д1агностикун1в ентеров1русного гастроентериту свиней.

наукова новизна та практичне значения одерханих результата, в nponeci виконання роботи виявлено 5 нових серотшив ентеров1РУС1в свиней (10. 18. 19. го. гз) та визначено lx типов1 штани (нгзгз, 4184. Д227. И249. И393). захишен1 авторськини св1донтвани. РОЗРОб-лено прискорений метод д1агаостики ентеров1русних хвороб свиней, захишений авторськин св1доцтвон. внерше встановдена роль ентеров1-pyciB 13-ти серотшив в захворюванн1 свиней гастроентеритои. створено наб1р д1агностикун1в. якия дозволяе в 2-4 рази скоротити час та зб1льшити достов1РН1сть д1агностики ентеров1РУСИого гастроентериту. розроблена 1 затвердхена норнативно-техн1чна докуиенташя на наб1р д1агностикун1в: Техн1чн1 унови (ту ю-09-8в-90). 1нстрлш1я но виготовленню та контролю набору д1агностикун1в ентеров1русного гастроентериту свиней 1 настанова по застосуванню набору д1агности-КУИ1В (Носква. 1990). наб1р запатентовано, впровадхено у виробнид-тво 1 використовуеться в районних. обласних. реснубл1канських лабо-ратор1ях ветеринарнох иедишши Укра1ни та 1нших крахн снд.

особистий внесок здобувача. особиста участь дисертанта полягала у ш>оведенн1 лабораторних досл1дхень. анал1зу. узагальнення одержа-них експеринентальних даних. сп1вставленн1 lx з л1тературнини дани-ни. впровадхення розробленого набору д1агностикук1в та його вироб-нинтво зд1йсн»валось за безпосередньою участо автора.

Апробашя та публ!кад1я резудьтат!в досл!джень. ochobhi натеР1а-ли дисертад1йно1 робота допов1дались на Р1чних наукових конФерент-ях та зас1даннях вчено! Ради 1нституту с1льськогоснодарсько1 hikpo-

6юл0ги vaah (1987-1998 p.p.). на науково-виробнич1й республпсан-ськ1й конферении "Повышение эффективности ветеринарного обеспечения промышленного свиноводства" (и.ки1в. 1987 р.). на YII з'1зд1 укра1нського м1кроб1олончного товариства си. черн1вш. 1989 р. ). на Республ1канськ1й конФеренди з бютехнологи (н. льв1в. 1990 р.). на Республ1канськ1й конФеренди "Ветеринарная недидина: экономические, социальные и экологические проблены" (н.Харк1в. 1990 р.), на I ус-тановчону (Yiii) з'1зд1 ую>а1нського н1кробюлопчного товариства (н. одеса. 1993 pik). на тхнародн1й науков1й конФеренди "Общая эпизоотология: иинунологические. экологические и методологические проблены" (м. xaPKiB, 1995 р.). на й1жнародн1й науково-практичн1й конФерендп "Сучасн1 проблеми ветмедишши. зоо1нхенери та техноло-Г1й продукт1в твариннидтва" (н. льв1в. 1997 р. ). на м1жнародн1й на-уков1й конФеренди "Проблемы инфекционной патологии с.-х. животных", (м. володимир, 1997).

публ1каяи. по теи1 дисертапи опубл1ковано 29 наукових прадь. структура та обсяг дисертадн. Дисерташша робота складаеться з вступу. огляду Л1тератури. викладення результат1в власних досл1д-жень. обговорення результата досл1джень. bhchobkib та практичних пропозишй. списку використаних Л1тературних джерел 1 додатку. Робота викладена на но стоР1нках машинописного тексту.1люстрована 16 табличяки та 15 рисунками, список використаних л1тературних джерел складаеться з 353 найменувань. в тону числ1 гоо на 1нозенних новах. в додатку наведено 39 докУмент1в.

ОСНОЕНИИ 3HICT РОБОТИ Р03Д1Л 1. ОГЛЯД Л1ТЕРАТУРИ приведено огляд л1тератури по виченню норфолопчних. Ф1зико-х1-м1чних та бюлопчних властивостей ентеров1рус1в свиней, lx сероло-г1чн1й класиФ1кацц. показано, шо Л1тературн1 дан1 не дають повного уявлення про ентер0в1руси Р1зних серотишв як збудник1в ентеР0В1РУ-сного гастроентериту свиней. В1дсутн1сть задов1льних засоб1в лабо-раторнох шагностики усклашгоють lx 1дентиФ1каШю. на п1дстав1 ана-л1зу л1тературних даних обгрунтована актуальн1сть проблеми. нета та завдання дослгджень.

Р03Д1Л г. ВЛАСН1 ДОСЛ1ДХЕЕНЯ

Натер1али та методы.

вид1лення 130лят1в BipyclB проводили 13 248 проб патолопчного матер1алу. в1д1браного в1д хворих гастроентеритон свиней. СуспензН з патолопчного натер1алу обробляли хлороформом по нетодиш Bosel i Hasr (1961). для культивування BipyclB використовували культуру

кл1тин перешешювавох л1ни нирки енбрюну свин1 (СНЕВ).

для вид1лення та 1дентиФ1кат1 1золят1в BipyclB в культур1 кл1-тин застосовували розроблений нами прискорений нетод, який полягае в одночаснону 1х вид1ленн1. титруванн1 та типуванн1. типову налех-н1сть BipyclB встановлювали в реакцц В1руснейтрал1зад11 спепиФ1ч-ними сироватками проти реФерентних штан1в ентеров1рус1в свиней 1б-ти серотшив: ре®ерентн1 штани ö-ни серотишв (Konratice. F59. F34. FT8. Fia. ft, f43. V13). зпдно класиФ1каШ1 Dunne з сшвавт. (1971), одержано з лабораторц дерб1шира (Англ1я), 9 реФерентних штан1в ЕВС (К9. К22. Л90. Н116. 473. Г95, Bill. П142. В151). В1ДПО-в1дно 11-17. 21-22 серотшив. вид1лено 1 класиФ1ковано Ронаненко В. П. 3 СП1ВЭВТ. (1967. 1990. 1991).

норфолопю BipyclB вивчали иетодои електронно! hikpockobii негативно контрастованих препаратгв (Eneland. Reed. i960).

для одержання чистих клон1в BipyclB 1эоляти BipyclB були попе-редньо трич1 клонован1 нетодон крайн1х розведень з посл1дуючим три-разовин клонуванняи нетодон бляшок з вид1леннян поодиноких негатив-них колон1й (бляшок) за методикою Hsiune i HelnlcK (1955).

тип нукле1ново1 кислота визначали непрямим нетодон, запропонова-нии науг з сшвавт. (1977). Ф1зико-х1м1чн1 властивост1 BipyclB вив-чади за иетодикаии натт. Bösel (1961). rovozzo. витке (1973). На-theKa. Harr (1962), Wallis 1 HelnlcK (1961). Науг з сп1вавт. (1977).

Г1пер1нунн1 сироватки до штан1в ентеров1РУС1в свиней одержували на кролях за схемою Романенка в. п. (1975). титрування снроваток кро-в1. типуваяня вид1лених BipyclB. вивчення ix антигенних властивос-тей проводили в реакди в1руснейтрал1заШ1 в культур1 кп1тин снев по загальноприйоят1й нетодиш.

для класиФ1каки BipyclB за серотипаии визначали lx антигенну спор1днен1сть за методом Arcbettl i Horsfall (1950).

патогенн1 властивост1 визначали шляхом конб1нованого (орального та 1нтраназального) введения поросятам 2-2. 5-н1сячного в1ку патоло-пчного натер1алу за розробленою в лабораторц методикою.

1МУН0ГЛ06УЛ1НИ одержували 13 спедиФ1чних кродячих сироваток до 13 штам1в ентер0в1рус1в свиней за методикою Broch (1967). застосовували загальноприйнятий метод пряно1 хмунофлуоресценци.

Для математично! обробки результата в1русолопчних досл1джень застосовували методику Reed 1 Huench (193б).статистичну обробку ре-зультаив виконували зпдно Ашмар1на н.п. та вороб'йова A.A. (1965).

РЕЗУЛЬТАТЫ ДОСЛГДХЕНЬ ТА IX ОБГОВОРЕННЯ

вид!дення 130ЯЯТ1В BipyciB та ix 1дентиФ1катя.

для визначення рол1 eHTepoBipyciB Р1зних серотишв в захворюван-Н1 свиней гастроентеритон проведено обстехення гз господарств. неблагополучиях по п1й хвороб1. черн1Пвсько1. хитонирсько1. В1ннидь~ ко1, дн1ПРонетровсько1. никола1всько! та одесько1 областей. В1д хворих. загаблих та винушено забитих свиней з кл1н1кою гастроенте-риту в1д1брано 248 проб патолопчного натер1алу (ctihkh шлунку. тонкого та товстого в1дд1л1в кишечнику, паренх1натозн1 органи), ректальн1 1 назальн1 зниви.

3 патолопчного натеР1алу вид1лено 65 1золят1в bipycib з харак-тернин для ентеров1рус1в дитопатичнии еФектон в культур1 кл1тин свиного походження. найчаст1ше питопатогенна д1я BipyciB проявлялась в 2-3 пасахах (51 лзолят). 1 тхльки у 14 1золят1в дитопатоген-ний еФект проявлявся в 4-т пасахах. теля адаптади до культури кл1тин снев шляхои проведения 2-3 послхдовних пасахгв в1руси нали

титри 4. 5 - 8. 5 18 тдд /сн .

50

вид1лення. встановлення дитопатогекнох активност1 1 попередне ти-пування 1золят1в BipyciB проводили розробленин нами прискоренин методой. внасл1док типування 1з 65 1золят1в BipyciB 46 в1днесено до шести в1д0мих за класиФ1каихею Dunne l Wane (1971) серолопчних ти-niB (2-6,8) 1 до чотирьох (11-14) встановлених Романенко в. п. з сп1вавт. (1967). дев'ятнадпять 1золят1в BipyciB виявились серолоп-чно неспорютениии хснуючим серотипам eHTepoBipyclB свиней. По результатах типування для подальшого вивчення в1д1брано 5 1золят1в BipyciB (табл.1).

Таблидя 1. характеристика в!д1браних BipyciB

номер

130ляту

ч 184 Д 227 И 249 Н 393 Н 2323

титр в1русу

18 ТОД /СМ 50

б. 5

6. 3

7. 5 б. 2 б. 8

О. 5 О. 4 О. 5 О. 4 О. 4

ПРИМ1ТКИ 1.

2.

х

х х

- середньостатистичн розраховували при !

- Зворотн! значения.

титр вн антипл в сироватш кров!

223 4 1

239 4 1

256 1 1

256 J 0

256 J 1

да

результат!в

1золяти BipyciB иали хнФеюийну активнхсть б. 2-7.5 is тид, 1 стинулювали утворення в1руснейтрал1зуючих антипл в

/сн

50

сироватках

■ х

кров1 в титрах 1:223-1:256.

для 1дентиФ1кади вшилених В1РУС1В визначали 1х родинну налех-Н1сть по норфологи та типу нуклехново1 кислота Родову налехн1сть встановлювали по 1х бюлопчним. Ф1зико-х1н1чнин та антигеннин властивостяи.

Результата електроннон1кроскоп1чних дослхдхень показали, шо в1-рюни вид1лених в1рус1в однор1дн1 за рози1рон 1 мають сферичну форму. шо св1дчить про орган1зашо капсиду у вигляд1 шосаедру. В1рю-ни з характерною для ентвРов1РУС1в иорфолопею спостер1гали безпо-середньо в зразках урахекох слизово1 оболонки кишечнику, в знивах з 1вФ1ковано1 в1русом культури клгтин снев 1 в препаратах конпентро-ваного в1русу. Середн1й Д1анетр в1русних часток дорхввюе 27. -

28.47±0.01 НИ. В УСIX ДОСЛ1ДХеНИХ штан1в В1РУС1В В1Р10НИ являють собою нуклеокапсиди без зовн1шньо1 л1п1допроте1ново1 оболонки. тов-шина капсидного шару становить з. зю. 2 ни. зовн1шн1й вигляд в1рю-н1в В1РУС1В характерний для родини П1К0Рнав1РУС1в. за рози1рон час-ток вид1лен1 в1руси в1дносяться до роду Ентеров1рус1в.

одн1ею 1з бюлопчних властивостей В1РУС1В е здатн1сть утворюва-ти негативн1 колонн (бляшки) п1д агаровим покриттян в культур1 юитин. 1золяти в1рус1в утворювали колонн з характерною для енте-ров1рус1в свиней иорфолопею бляшок: кругл 1. прозор1 з Ч1ткини рхв-ними краями (табл. 2).

ТабЛИДЯ 2. ЕПЯЩКОУТВОРЮЮЧХ ВЛаСТИВОСТ! 130ЛЯТ1В В1РУС1В

Втан в1русу Час появи бляшок (год. ) к1льк1сть бляшок Середн1й бляшок 5 д1аметр (мм)

Ч 184 48 192 0. 74 1 0. 03*

Д 227 120 17 1. 0 4 0. 0

И 249 72 280 0. 76 4 0. 01

И 393 96 158 0. 33 0. 01

Н 2323 48 495 0. 70 ♦ 0.01

Прюатка. « - середньостатистичн1 похибки результат1в розра-ховували при р ч< о. 01.

Бляшки заявлялись через 48-120 годин п1сля 1нкубад11 в1рус1в 1 мали середн1й Д1аметр колон1й (Б) 0.33-1.00 ни. В1русн1 популяпн однор1дн1 за розм1ром бляшок 1 в1днесен1 до др1бнобляшкових (Б -по-пулядН). одночасно з вивченням бляшкоутворюючих властивостей вид1-лених В1РУС1В одерхували 1х чист1 клони, доя подальшого вивчення генетичних. Ф1зико-х1н1чних та антигенних властивостей в1рус1в выбирали популядн з д1анетром бляшок 1 мм. якии в1дпов1дав 1х серед-ньостатистичнону значению, кохний клон був накопичений з одн1е1

бляшки при високону Р0зведенн1 в1русу» шо виключало зливання близь-ко розташованих колон1й 1 забезпечувало одерхання потонства в1рус1в з одн1£1 в1русно1 частки.

визначення типу нукле1ново1 кислота в1рус1в показало, шо дитопа-тична активн1сть у б1льшост1 штан1в в1рус1в п1сля ди 1иг161тор1в нукле1вового обн1ну - актинонтину д 1 5-бРон-г-дезоксиуридину (БОТЕ) - залишалась в нехах контрольних значень 1 тгльки у двох штаи1в ^4184. И249) в1дбувалось зпихення титру на 0.5-1.0 1я тпд /сн (табл. 3).

з

таблипя з. нитопатична активн1сть в1рус1в (1н тпд /сн )

50

ш т а н КОНТРОЛЬ В ПРИСУТН0СТ1

В1РУСУ АКТИН0М1ШШУ Д I ВОЮЙ

Ч 184 б. 5 б. 5 б. 0

Д 227 6. 5 7.0 7. 0

И 249 8. 5 7. 5 7. 5

И 393 7.0 7. 5 7.0

Н 2323 8.0 8. 0 8. 0

зпдно результат1в досл1ду в1руси належать до РНК-геномних 1 В1днесен1 до родини Р1согпау1Пйае.

для встановлення родовог налехност1 В1д1браних в1рус1в вивчали чутлив1сть 1х до д11 л1П1дорозчинник1в (хлороформу та еФ1ру). про-теол1тичного Ферменту (трипсину), визначали 1х терностгшисть пшя-хон пР0ГР1вання в присутност1 катюн1в нагнио та без нього. а такох встановлювали в1дношення в1рус1в до середовиш з р1зним значении рн (табл. 4-5.).

Таблидя 4. нитопатична актива1сть в1рус1в (1в тшз /сн )

50

жтан В1РУСУ КОНТРОЛЬ П1сля обробки л1п1дорозчннникани 1 протеол1тичнии Ферментом

ХЛОРОФОРМОН еФ1Рои ТРИПСИНОМ

Ч 184 б. 0 5. 5 6. 5 7. 5

Д 227 б. 0 5. 5 б. 3 б. 5

И 249 7.8 7. 0 8.0 7.5

И 393 5. 5 б. 0 б. 0 б. 0

Н 2323 8.0 8. 0 7. 5 8. 0

репродуктивна активн1сть В1д1браних в1рус1в Н1сля Д11 л1п1дороз-чинник1в та протеол1тичного Ферненту залишалась незн1нною або не-

значно поливалась (на 0.5-0.8 хв тдд /сн ). стхйкхсть вхрусхв до

__50

хлороформу та еФЛРУ свхдчить про в1дсутн1сть зовнхшьох лхпхдопро-техновох ободонки. а стхйк1сть до трипсину вказуе. шо нхсдем хх ие-шкання е пшунково-кишковий тракт.

таблидя 5. цитопатична активнхсть вхрус!в (1в тцд/сн3)

Итан вхрусу контроль ПХсля прогрхвання про-о тягон 1 год. при 50 с в середовишах з рн

3 н8с1 2 без hbci^ 2 . тг (контроль) 2. 2 12. 0

ч 184 б. 5 б. 5 4. 5 7. 5 7. 5 8. 0

д 227 б. 5 б. 0 б. 0 б. 5 б. 0 б. 0

и 249 7. 5 6. 5 5. 0 7. 5 7. 0 7. 0

н 393 5. 5 б. 0 5. 0 б. 5 б. 5 б. 5

н 2323 т. 5 7. 5 5. 5 8. 0 8. 5 8. 5

о

жтани хзольованих вхрус1в вхдносно стхйкх до прогрхвання при 50 с

протягон 1 ^одини: хх дитонатогенна активнхсть знизилась на о. 5-2.о

lg тцд /сн . катхони нагнхю дхють на штаии вхрусхв стабхл1зуюче. 50

на шо в^азус пхдвишення хх шггопатичнох активностх на l.o - 2.0 18

тцд „/сн пхсля прогрхвання в лрисутностх одноиолярного хлористого 50

нагнхю в порхвняннх з прогрхванням без катхон1в. шо характерно для ентеровхрусхв. вхруси. шо нешкають в шлунково-кишковону трактх не-чутливх до кислого та лухного середовиш. Так. при рн середовиша в дхапазонх вхд г, г до 12 дитопатична активнхсть вхрусхв практично не змхнювалась.

отхе. по результатах вивчення норфологхчних. бхологхчних х фхзи-ко-ххнхчних властивостей штами вхрусхв. якх вхдрхзняються в антигенному вхдношенн1 вХд вхдоиих серотипхв ентеровхрусхв. вхднесено до родини PXcornavirXdae роду Enterovxru3.

Серологхчне порхвняння антигенних характеристик штанхв видхлених вхрусхв е посиланнян для остаточного встановлення хх таксононхчного положения, такою характеристикою е типова спедифхчнхсть вхрусу в мехах того чи хншого роду, в якостх стандартно! X чутливох систени для 1дентиФХкапХ1 видхлених вхрусхв використовували перехресну ре-

акдхю в1руснеитралхзадхх юоо тцд або ю-разових розведень вхрусу

.__50

двадцятьиа иейтралхзуючини дозами сироватки. визначали антигеннх

взаенозв'язки дослхдних штанхв вхрусхв з реФерентнини штанами ентеровхрусхв 1б-ти серотипхв та нхх собою, серотип встановлювали по здатностх ноноспедифхчнох антисироватки нейтралхзувати хнфекдхи-нхсть вхрусу (табл. б).

табличя 6. Антигенн! властивост! ентеров1рус1в свиней

Коп-се

f59 f34 f78 f1 р. f7 vi3 к9 к?.?. л90 h 473 г95 h 1?е 2^23 ч Д.

110 111 151 184 227 24у

393

Konratlce-i

F59 - 2

F34 - 3

F78 - 4

F12 - 5

F7 - б

V13 - 8

К9 -И

К22 -12

Л90 -13

H11Ö -14

473 -15

Г95 -16

Б111 -17

П142 -21

В151 -22

Н2323 -10

4184 -18

Д227 -19

И249 -20

И393 -23

Прин1тка. « - В1дсутн1сть нейтрал!зап11 в1русу сироваткою не в1дн1чено.

нов1 штани ентеРов1рус1в не нають антигенних зв'язк1в з штана! вс 1х В1Д0МИХ серо-иш1в 1 антигенно в1др1зняються Н1* собою, зпш даних табл. б., пггаии в1рус1в розпод1ляються на н'ять окрених сер< лопчних груп. як1 в1днесен1 до нових серотшив ентеров1рус1в св! ней 10. 18. 19. 20 1 23.

таким чином, на шдстав1 вивчення норфолоНчних. бюлопчнк ф13ик0-х1м1чних 1 антигенних властивостей 5 пгган1в в1русхв (Н232; 4184. Д227. И249. И393) В1ШШСеН0 ДО РОДИНИ Р1С0ГП.аУ1Г1йае РОДУ И 1егоу1гиз. серолопчно класиФ1кован1 як ентеР0В1РУси 5-ти нових с< ротип1в 1 захишен1 авторськини св1доатвами як тинов1.

Роль ентеров1РУС1в Р1зних серотид!в в захворрванн! свиней гастроентеритом.

для визначення рол1 ентеров1РУС1в Р1зних серотшив в захворюваз н1 свиней гастроентеритом проведено аналог1чн1 досл1дження 1 з и шими вид1леними штанами в1рус1в. встановлено, шо 65 вид1лених шт< Н1в в1рус1в за сво1ни морфолопчннни. бюлопчними. Ф1зико-х1н1чш ми та антигенними властивостями в1дносяться до роду ентеров1рус: 15-ти серотип1в (рис. и.

2

РИС.

10 И 12 Серотипи

20 23

1.

Розпод1л вид1лених ентеР0в1РУс1в свиней по серотипах.

У вогнишах захворювання свиней гастроентеритом найчастипе вши лялись ентер0в1руси 2. 5. б. 8. ю. 12 1 20 серотшив.

для П1дтвердхення етюлопчно1 рол1 ентеров1РУС1в Р1зних серотг П1в в захворюванн1 свиней гастроентеритон визначали патогенн1сч для поросят 15-ти штам1в ентеров1рус1в - представшпив кожного с£ ротину (табл. 7).

П1сля заражения захворглн з кл1н1кок> гастроентериту норосяте 1нокульован1 штанами 13-ти серотип1в (Е-б. 8. 10-14. 19. 20). } них штани 3-го. б-го 1 12-го серотип1в зумовили загибель поросят.

отже. експериментальнини досл1дженняни встановлена роль в захвс рюванн! свиней гастроентеритом ентеров1РУС1в 13-ти серотишв.

Таблипя 7. патогенн1сть для поросят ентеров1рус1в Р1зних серотип1в

птан в1русу Серотип К1ЛЬК1СТЬ ПОРОСЯТ В1рулентн1сть

захвор1яо-—-Зарахено запшудо^" ^"Эарахено

К 419 2 4/4 0/4 В1рулентний

Е 2373 3 4/4 1/4

К 423 4 4/4 0/4

Б 547 5 4/4 0/4

В 620 6 4/4 4/4 -•-

Д 2600 8 4/4 0/4

Р 100 11 4/4 0/4

Н 2603 12 4/4 2/4

Н 602 13 4/4 0/4

Н 2607 14 4/4 0/4

Н 2323 10 4/4 0/4

Д 227 19 4/4 0/4

И 249 20 4/4 0/4

Ч 184 18 0/4 0/4 Ав1рулентнии

И 393 23 0/4 0/4

створення набору д1агностшсун1в ентеровхрусного гастроентериту свиней.

для постановки д1агнозу на ентеР0В1РУСний гастроентерит свиней нани розроблено наб1Р д1агностикун1в. який дозволяе виявити збудни-К1в гастроентериту 13-ти серотип1в ентеР0в1РУС1в. наб1Р складаеться з лЮФ1льно висушених антиген1в. спепиячних сироваток до них та Флуоресшюючих 1иуноглобул1н1в. тест-препарата призначен1 для прис-корено1 1дента«1каш1 збудника ентеровлрусного гастроентериту свиней шляхом одночасного видглення. титрування 1 типування в реакдн нейтрал1задн в1русу в культур1 кл1тин. виявлення в1руснейтрал1зую-чих антипл в сироватках кров1 хворих 1 перехвор1лих тварин та 1н-дикадн в1русу в патнатер1ал1 методом 1нуноФлуоресденд11. в якост1 виробничих штан1в до набору включено 13 прототипних штан1в ентеро-В1РУС1В свиней В1ДП0В1ДНИХ серотшив (табл. в). В1д1бран1 штани в^-

рус1в мають дитопатогенну активн1сть в нехах б. 4-8.1 1и ТДД / сн .

50_

високо1нуногенн1 (стинулюють утворення В1руснейтрал1зуючих антипл в титрах 1:256 - 1:1670). антигенно 1дентичн1 типовим штанам енте-ров1рус1в свиней на юои. виробнич! штани ептеР0В1РУС1В депонован!

Таблиня 8. характеристика виробничих штам1в ентеров1рус1в свиней

виробничиа нгган Серо-тип титр в1русу 3 18 тод /см 50 « титр вн антит1л в сироватш кров1

к419 2 7. 6 362

в617 3 7. 6 256

к423 4 7. 3 1670

б547 5 б. 8 256

в620 6 8. 1 256

д2600 8 7. 7 256

п2115 10 8. 1 362

р100 11 7. 8 512

н2603 12 7. 7 362

н602 13 7.4 362

н2607 14 7.7 512

д229 19 7. 1 835

р144 20 6.4 256

примпжа. * - зворотн! значения

у всесоюзному науково-контрольнону 1нститут1 ветнрепарат1в 1 зарее строван1 в дерхавному науково-контрольнону 1нститут1 бютехнолоп 1 штан1в м1кроорган1зм1в (н. ки1в).

випробування тест-препарат1в набору д1агностикун1в проводили 27 господарствах укрэ1ни зпдно наказу головного управл1ння ветери нарц И1н1стерства с1льського господарства срср кон1с1йно за участ представник1в всесоюзного державного налсово-контрольного 1нститут ветпрепарат1в та центрально1 ветеринарно1 лаборатори. досл1дхен во проб сироваток кров1. В1д1браних вгд хворих та перехвор1лих ен тер0в1русним гастроентеритом свиней. Хз них в 26 пробах виявлен В1руснейтрал1зуюч1 антипла в д1агностичних титрах до штам1в ЕВ 13-ти серотшпв. за сопомогою спештчних сироваток 1дентиФ1кован 23 1золяти В1РУС1В. вид1лених 1з 65 проб патматер1алу. досл1дхення ми патолопчного матер1алу методом 1иун0ФЛУ0Респентн01 н1кроскоп1 виявлено ентеР0В1РУеи у 25 13 42 обстехених тварин.

наб1р д1агностикум1в дозволяе достов1рно встановити д1агноз про тягом 1-7 д1б. Иого застосування тдвишуе точн1сть 1 скорочуб тер м1н д1агнозу в 2-4 рази.

на наб1р д1агностикум1в ентеров1русного гастроентериту свине розроблена науково-техн1чна документатя (Техн1чн1 умови. 1нструк цхя но виготовленню 1 контролю та настанова по його застосуванню)

а також нетодичн1 рекомендади по лабораторн1й дгагностиш в1ру-сних гастроентерипв свиней, вид1ленню та 1дентиФ1кади 1х збудни-

к1в.

випробування дослютих сер1й д1агностикун1в проводили в Респуб-л1канських ветеринарних лаборатоР1ях Украхни 1 ноддови. на наб1Р д1агностикун1в одержано нозитивне Р1шення на патент.

зпдно рознарядок союзголовзооветпронпостач 1 Укрзооветпроипос-тач з 1990 року виготовлено 1 реал1зовано в обласн1 1 республ1кан-ськ! ветеринарн1 лабораторИ УКРахни та 1нших крахн снд 328 набор1в д1агностикун1в. одержано позитивн1 вютуки.

Такин чином, створено наб1Р д!агностикум1в. за допоногою якого за 1-7 д1б дхапностують збудник1в ентеров1русного гастроентериту свиней 13-ти серотип1в.

висновки

1. Вид1лено в1д хворих гастроентеритои свиней 65 пгган1в вхрусхв. як1 за сво1ни морфологхчнини. бЮлоПчними. Ф1зико-хХнХчнини та ан-тигенними властавостями хдентифхковано як ентеров1руси 15-ти серо-тип1в. Розроблено "Нетодичн1 рекомендапи по лабораторн1й дхагнос-тид1 в1русних гастроентерит1в свиней, вид1ленню та 1дентиФ1кац11 1х 36удник1в".

2. Встановлено 5 нових, ранхше нев1доних, серотипхв ентеров1ру-с1в свилей, в1д!брано для кожного серотипу типов1 пггани Н2323,4184, Д227, И249. И393 1 захишено 1х авторськини св1додтвами.

3. Доказана роль ентеров1рус1в 13-ти серотип1в в захворюванн1 свиней гастроентеритои.

4. Запропоновано нетод прискорено! 1дентиф1кац11 вид1лених 1зо-лят1в в1рус1в, який дозволяе скоротити в 2-4 рази терм1н лаборатор-но1 д1агностики в1русних хвороб. Не досягаеться шляхом одночасного проведению вид1лення в1русу. визначення цитопатично! активност1 та встановлення його типово1 належност1. Нетод захишено авторсысим

св1додтвом.

5. для експрес-д1агностики ентеров1русного гастроентериту свиней впроваджено 1муноФлуоресдентний метод, який дозволяе встановити по-передн1й д1агноз хвороби за дек1лька годин.

6. Розроблено 1 впроваджено у виробниптво наб1р д1агностикун1в ентеров1русного гастроентериту свиней, який забезпечуе швидку 1 точну 1дентиФ1кац1ю етюлопчного агента. В якост1 виробничих шта-н1в використовуеться 13 високо1муногенних прототипних штанЛв. На наб1Р д1агностикум!в одержано нозитивне Р1шення на патент.

список опу6л1ковэние poölt.

1. Ронанеико в. Ф.. бокун а. а. , сорока в. и., полевик Е. и.. пинчу и.н.. Иванов с. н., гераськин а. с. этиологическая роль энтеровирусо: при болезнях свиней // Ветеринария. - Н.» 1992. - Н 1. - С. 25-26.

2. Романенко в. Ф.. полевик Е. и. этиология энтеровирусного гаст роэнтерита свиней // ветеринария. - н.. 1992. - я з. - с. 29-30.

3. Романенко в. с.. прусс о. г. , Полевик е. и. > вабич н. в.. боку н. в.. Пинчук и. н. таксономия энтеровирусов свиней // Ветеринария. Н. . 1993. - Н 5. - С. 26-29.

4. Ронаненко в. п.. Полев1к О. I. Застосування 1нунно1 сироватк для д1агностики. проФ1лактики 1 л1кування ензоотичного ендеФаяон1е л1ту (хвороби тешена) свиней // В1сник аграрно1 науки. - К.. 1991. Н 2. - С. 38-39.

5. Романенко в. 4>.. прусс О. Г.. Бабич Н. в.. Полевик Е. и., Боку а. а.. пинчук и. н. классификация энтеровирусов свиней // В1сник аг рарно1 науки. - к.. 1993. - Hl. - с. 29-31.

6. Романенко в. п.. полев1к о. I. 1золяшя ентеров1РУС1в нових серотип1в - збудник1в гастроентериту свиней // Инфорн. бюлл. инсти тута экспериментальной и клинической ветмедшшны. - Харьков. 1995. С. 89.

7. романенко в. Ф.. Полевик Е. и. патогенн1сть ентеров1рус1в сви ней Р1зних сероттив // информ. бюлл. института экспериментальной : клинической ветиедидины. - Харьков. 1995. - с. 91.

8. ронаненко в. Ф.. полевик Е. и. Антигенная характеристика выде ленных энтеровирусов свиней // инфорн. бюлл. института эксперинен тальной и клинической ветиедидины. - Харьков. 1995. - С. 93.

9. А. С. Н 1007226 СССР. ШШ А 61 В 10/00. С 12 Н 1/04. СПОСО диагностики энтеровирусных болезней свиней / в. Ф. Ронаненко. О. Г ПРУСС. Н.В. БЭбИЧ. Л В. КУПНеВСКаЯ. Е. И. ПОЛеВИК (СССР). - Н2873644 30-15: заявлено 25.01. 80; ОПУбЛ. 23.11.82 - 4 с.

Ю. А. с. н 1586182 СССР. ЮШ С 12 н 7/оо. Штамн Enterovirus suls-10 для диагностики энтеровирусного гастроэнтерита свиней /в. Ф Ронаненко. Е.и. Полевик (СССР). - н 4622622: Заявлено 20.12.88; опубл. 15.04.90 - 3 с.

11. А. с. н 1586184 СССР, нки с 12 н 7/оо. итанн Enterovirus suis-18 для диагностики энтеровирусного гастроэнтерита свиней /в. ф Ронаненко. е.и. Полевик (СССР). - н 4623030; заявлено 20.12.88; ОПУбЛ. 15.04.90 - 3 С.

12. А. с. н 1586186 СССР, нки с 12 н 7/оо. штамм Enterovirus 3uis-l9 для диагностики энтеровирусного гастроэнтерита свиней /в. Ф

Ронаненко. е.и. полевик (СССР). - н 4623034: заявлено 20.i2.ee; Опубл. 15. 04. 90 - 3 С.

13. A.c. н 1506185 ссср. нет с 12 н т/со. штанм Enterovirus SU13-20 для диагностики энтеровирусного гастроэнтерита свиней /в. Ф. ронаненко, e.h. полевик (СССР). - н 4623031; Заявлено 20.12.88; ОПУбЛ. 15. 04. 90 - 3 С.

14. А. с. ы 1706210 ссср, нкн с 12 н 7/00. атанм Enterovirus SU13-23 для диагностики энтеровирусного гастроэнтерита свиней /в. Ф. ронаненко. Е. и. полевик (ссср). - н 4814074: заявлено 16.04.90; опубл. 15.09.91 - 3 С.

15. Пат. РФ. нки с 12 н 7/00. А 61 к 39/00. положительное решение. Набор диагностикунов энтеровирусного гастроэнтерита свиней / в.Ф. Ронаненко. е.и. Полевик (Украина). - н 5002810/13/069677: за-явл. 10.09.91.

16. Нетодические рекомендации по лабораторной диагностике вирусных гастроэнтеритов свиней, виделению и идентификации их возбудителей / Ронаненко в. Ф.. Прусс О. Г.. Бабич h. в., Купневская л. в.. Полевик е. и. и др. / васхнил. отделение ветеринарии. - н., 1986. -с. 1-32.

17. Ронаненко в.Ф..полевик Е. и. технические условия изготовления набора диагностикунов энтеровирусного гастроэнтерита свиней: ту 10-09-88-90: Утв. гл. упр. ветеринарии ю. 11.90 / гос. конитет сов. нин. ссср по продовольствию и закупкан. - н.. 1990. - 16 с.

18. Ронаненко в. ф.. полевик Е. и. инструкция по изготовлению и контролю набора диагностикунов энтеровирусного гастроэнтерита свиней / гос. конитет сов. нин. СССР по продовольствию и закупкам. - н.. 1990. - 16 С.

19. Ронаненко в. Ф.. полевик Е. и. наставление по применению набора диагностикунов энтеровирусного гастроэнтерита свиней: утв. Гл. упр. ветеринарии 10.11.90 / гос. конитет сов. Нин. СССР по продовольствию и закупкам. - н.. 1990. - 6 с.

20. Ронаненко в. п.. полев1к о. I. Експериментальн1 досл1яхення ентеров1РУС1в свиней // Натер1али I устан. (VIII) з'1зду УНТ. Оде-са. 1993 - Н1КР0610Л. ЖУРН. - К. , 1993. - Т. 56. - Н 5. - С. 100.

21. ронаненко в. Ф., полевик Е. и. зпизоотологические наблюдения энтеровирусного гастроэнтерита свиней // Труды неждунар. науч. конф. "Обшая эпизоотология: иммунологические, экологические и методологические проблены". - Харьков. 1995. - с. 89-92.

22. Ронаненко в, Ф.. купневская л. в,. полевик Е. и. патогенные свойства энтеровирусов, выделенных от больных гастроэнтеритом сви-

ней // Труды конф. "Повышение эффективности ветеринарного обеспечения промышленного свиноводства". - киев. 1967. - с. 58-59.

23. Романенко в. п.. Полев1к о. I. Створення набору д1агностикуми ентеров1русного гастроентериту свиней // 36. натер1ал1в конФ. э 61-отехнологП. - льв1в. 1990. - с. 135-136.

24. Романенко В. ф.. Полевик Е. Н. Экологическое значение энтеро-вирусного гастроэнтерита свиней // труды конф. "Ветеринарная медицина: экономические, социальные и экологические проблены", - Харьков. 1990. - С. 48.

25. Романенко В. Ф.. Полевик Е. И. Бляшкообразуюшие свойства энте-ровирусов. выделенных в очагах заболевания свиней гастроэнтеритом/* труды конф. "Ветеринарная медицина: экономические, социальные и экологические проблемы". - Харьков. 1990. - с. 224.

26. Ронаненко в. п.. прусс о. г. ,полев1к о. I. створення банку шта-М1в ентеров1рус1в свиней // Зб. матер1ал1в М1*нар. наук, -практ. конф. *сучасн1 проблеми ветмедидини. зоо1нхенер11 та технолоПй про-дукт1в твариннидтва" . - льв1в, 1997.- с. 231-232.

27. Романенко в. ф.. Деревянко с. В.. Полевик е. и. Антигенные свойства клонированных штанмов энтеровирусов свиней, полученных из рш // труды мехдунар. научн. конф. "Проблемы инфекционной патологии с. -х. животных". - Владимир. 1997. - с. 132.

А Н О 7 А I I Я

Полев1к О. I. БЮЛОГ1ЧН1. Ф1зико-х1и1чн1 та антигенн1 властивостЗ ентеров1рус1в - збудник1в ентеров1русного гастроентериту свиней.

Дисерташя на здобуття наукового ступеня кандидата бюлопчннз наук за спеи1альн1сто 03. 00. Об. - в1русолог1я. 1нститут н1кроб1оло-Г11 та в1русолоп1 1и. Д. К. Заболотного НАН УкраХни. Ки1в. 1998.

Дисерташя присвячена вивченню морФолоПчних. бЮлоПчних. Ф1зи-ко-х1н1чних та антигенних властивостей 65 ентеров1рус1в. вид1лешп в1д хворих гастроентеритом свиней. Встановлено 5 нових серотипи ентеров!рус1в (10. 18. 19. 20. 23) та 1х типов1 штами (Н2323. 4184. Д227. И249. И393). Показано, шо збудниками ентеров1русного гастроентериту свиней е ентер0в1руси 13-ти серотшив. розроблено 1 впро-вадхено в ветеринарну практику наб1р д1агностикум1в ентеров1РУсногс гастроентериту свиней.

Ключов1 слова: ентеров1рус. ентеров1русний гастроентерит свиней, штан, антигенн1сть. серо тип. реактя нейтрал1зад11. наб1р д1агнос-

тикум1в.