Биологическая активность липидов и фотосинтетических пигментов водорослей дальневосточных морей

Мартыяс, Екатерина Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биологическая активность липидов и фотосинтетических пигментов водорослей дальневосточных морей
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биологическая активность липидов и фотосинтетических пигментов водорослей дальневосточных морей"

На правах рукописи

Мартыяс Екатерина Александровна

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ЛИПИДОВ И ФОТОСИНТЕТИЧЕСКИХ ПИГМЕНТОВ ВОДОРОСЛЕЙ ДАЛЬНЕВОСТОЧНЫХ МОРЕЙ

03.01.04 - биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

,1 4 11 ЮН 2012

Владивосток 2012

005045747

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Тихоокеанском институте биоорганической химии им. Г.Б. Елякова ДВО РАН

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор,

Анисимов Михаил Михайлович

Официальные оппоненты: Звягинцева Татьяна Николаевна

доктор химических наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Тихоокеанский институт биоорганической химии им. Г.Б. Елякова

Дальневосточного отделения РАН, заведующий лаборатории химии ферментов

Санина Нина Михайловна

доктор биологических наук, профессор, Дальневосточный федеральный университет

Ведущая организация:

Федеральное государственное унитарное предприятие «Тихоокеанский научно-исследовательский рыбохозяйственный центр» (ФГУП «ТИНРО-Центр»).

Защита состоится «28» июня 2012 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 005.005.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Тихоокеанском институте биоорганической химии им. Г.Б. Елякова ДВО РАН по адресу: 690022, г. Владивосток, проспект 100 лет Владивостоку, 159, ТИБОХ ДВО РАН. Факс: (423) 231-40-50, e-mail: dissovet@piboc.dvo.ru

С диссертацией можно ознакомиться в филиале Центральной научной библиотеки ДВО РАН (г. Владивосток, проспект 100 лет Владивостоку, 159, ТИБОХ ДВО РАН).

Текст автореферата размещен на сайте www.piboc.dvo.ru

Автореферат разослан «28» мая 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, к.б.н.

Черников О.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Морские водоросли издавна используются в пищевых целях, а также в сельском хозяйстве в качестве удобрений. Это богатый источник разнообразных по структуре и биологической активности веществ. Некоторые из этих веществ могут служить ценным сырьем для производства фармацевтической, косметической продукции, стимуляторов продуктивности сельскохозяйственных животных и урожайности сельскохозяйственных культур.

Моря Дальнего Востока богаты большим разнообразием видов бурых, красных и зеленых водорослей, некоторые из них образуют массовые скопления и заросли. В последние годы внимание исследователей привлекли низкомолекулярные метаболиты морских водорослей, такие как фенольные соединения, отдельные классы глицерогликолипидов, триацилглицеринов, жирных кислот и фотосинтетических пигментов. Пигменты, полиненасыщенные жирные кислоты и свободные аминокислоты бурых водорослей при систематическом употреблении водорослей в пищу принимают активное участие в регуляции обмена веществ. Известно, что аккумулируемые в водорослях фотосинтетические пигменты, а так же глицерогликолипиды, обладают широким спектром биологического действия. Для этих соединений характерен целый ряд свойств: противоопухолевое, противомикробное, антиоксидантное, противовирусное, противовоспалительное и др.

В то же время данные по содержанию биологически активных веществ в водорослях дальневосточных морей носят несистематический характер, отсутствуют сведения об изменении биологической активности низкомолекулярных метаболитов в зависимости от видовой принадлежности, места обитания и сезона сбора морских макрофитов..

Поиск соединений, содержащихся в морских водорослях и обладающих широким спектром биологической активности, а также изучение влияния на активность этих соединений места и сезона сбора водорослей является актуальной задачей. Накопление подобного рода знаний может привести, с одной стороны, к созданию новых перспективных лекарственных средств и биологически активных препаратов, а с другой - к увеличению продуктивности комплексной переработки и более рациональному использованию морских ресурсов.

Цель исследования: изучить биологическую активность низкомолекулярных метаболитов, структуру и биологическую активность глицерогликолипидов морских водорослей дальневосточных морей, относящихся к трем отделам: Clorophyta, Phaeophyta, Rhodophyta. Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1) охарактеризовать биологическую активность экстрактивных веществ, выделенных из морских водорослей Охотского и Японского морей и определить виды водорослей наиболее перспективные для дальнейшего изучения;

2) изучить биологическую активность липофильных экстрактов бурых водорослей, относящихся к порядкам Laminarioides и Fucales, в зависимости от сезона и места сбора водорослевого материала;

3) изучить биологическую активность отдельных классов низкомолекулярных метаболитов, выделенных из липофильных экстрактов 4-х видов бурых водорослей: Saccharina cichorioides, Fkcus evanescens, Eualaria fistulosa и Sargassum pallidum;

4) изучить биологическую активность отдельных классов низкомолекулярных метаболитов бурых водорослей S. cichorioides и S. pallidum в зависимости от сезона сбора;

5) выделить глицерогликолипиды из липофильных экстрактов двух видов красных: Tichocarpus crinitus и Neorhodomela larix, четырех видов бурых водорослей: S. cichorioides, F. evanescens, Е. fistulosa и S. pallidum. Определить структуру гликозидной части глицерогликолипидов каждого класса, охарактеризовать их жирнокислотный состав и биологическую активность.

Научная новизна. Впервые были получены данные о биологической активности суммарных экстрактов и отдельных классов низкомолекулярных метаболитов морских водорослей Охотского и Японского морей. Показаны значимые различия в биологической активности общего, гидрофильного и липофилыюго экстрактов морских водорослей трех отделов: Clorophyta, Phaeophyta, Rhodophyta, и отдельных классов низкомолекулярных метаболитов, выделенных из четырех видов бурых водорослей: S. cichorioides, F. evanescens, Е. fistulosa и S. pallidum. Для липофильных экстрактов из F. evanescens и S. cichorioides и отдельных классов низкомолекулярных метаболитов 5. cichorioides и S. pallidum изучена биологическая активность в зависимости от места и сезона сбора водорослевого материала. Впервые изучена биологическая активность глицерогликолипидов из липофильных экстрактов двух видов красных водорослей: Т. crinitus и N. larix и четырех видов бурых водорослей: 5. cichorioides, F. evanescens, Е. fistulosa и S. pallidum. Определена структура гликозидной части и жирнокислотный состав этих глицерогликолипидов. Установлены сезонные изменения в жирнокислотном составе и биологической активности глицерогликолипидов, выделенных из бурых водорослей S. cichorioides и 5. pallidum.

Практическая значимость. Полученные сведения о противомикробной и цитотоксической активности низкомолекулярных метаболитов морских водорослей в отношении карциномы Эрлиха, при отсутствии цитотоксической активности в отношении нормальных клеток теплокровных животных, могут быть полезны при разработке на их основе различных препаратов медицинского, ветеринарного и сельскохозяйственного назначения. Данные об изменчивости количества накапливаемых низкомолекулярных метаболитов, обладающих биологической активностью в зависимости от места, физиологического состояния и сезона сбора водорослевого материала, могут быть использованы при заготовке сырья для получения биологически активных веществ из бурых водорослей.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены автором на следующих конференциях: XII Всероссийская молодежная школа-конференция по актуальным проблемам химии и биологии (Владивосток, 7-14 сентября 2009); XIII Всероссийская молодежная школа-конференция по актуальным проблемам химии и биологии (Владивосток, 7-14 сентября 2010); Международная конференция «Актуальные проблемы химии природных соединений» (Ташкент, 12-13 октября 2010); Пятый международный симпозиум «Химия и химическое образование» (Владивосток, 12-18 сентября 2011).

Публикации. Автором опубликовано 15 работ, из них по теме диссертации - 8, в том числе 3 статьи в рецензируемых научных журналах из перечня ВАК, 5 тезисов в сборниках материалов научных конференций.

Диссертация обсуждена и одобрена на расширенном заседании лаборатории биоиспытания и механизма действия биологически активных веществ ТИБОХ ДВО РАН 5 мая 2012 года.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 302 цитируемые работы. Диссертационная работа изложена на 152 страницах машинописного текста и содержит 32 таблицы, 6 рисунков и 1 схему.

Сокращения и условные обозначения. ГЛ - глицерогликолипиды, ГЭ -гидрофильные экстракты, ДАГ - диацилглицерины, ДГДГ - дигалактозил-диацилглицсрины, ЖК - жирные кислоты, КССВ - константы спин-спинового взаимодействия, ЛЭ - липофильные экстракты, МГДГ - моногалактозил-диацилглицерины, МГМГ - моногалактозилмоноацилглицерины, МЭЖК -метиловые эфиры ЖК, ОЭ - общие экстракты, СЖК - свободные ЖК, СС -свободные стерины, СХДГ - сульфохиновозилдиацилглицерины, ТАГ -триацилглицерины, ФЛ - фосфолипиды, ФСП - фотосинтетические пигменты, Хл - хлорофиллы, ЭЖК - эфиры ЖК.

Благодарность за научное сотрудничество н помощь в работе. Автор выражает искреннюю благодарность научному руководителю д.б.н., профессору Анисимову Михаилу Михайловичу, к.б.н. Наталье Ивановне Герасименко за неоценимую помощь в работе, а также курировании ее химической части, Наталье Германовне Бусаровой за помощь в проведении жирнокислотного анализа липидов, Степану Викторовичу Логвинову за расшифровку полученных спектров ЯМР, к.б.н. Скрипцовой Анне Владимировне за сбор и идентификацию водорослевого материала, к.ф-м.н. Лихацкой Галине Николаевне за помощь в изучении антиоксидантной активности. Автор выражает свою искреннюю благодарность сотрудникам лаборатории микробиологии за внимательное отношении и предоставление коллекционных штаммов микроорганизмов, оборудования и реактивов для работы по определению противомикробной активности, и сотрудникам лаборатории биоиспытания и механизма действия биологически активных веществ, за помощь в работе. Автор также выражает искреннюю благодарность к.х.н. Денисенко В.А., Моисеенко О.П., Ким Н.Ю., д.х.н. Новиковой О.Д., к.б.н. Портнягиной О.Ю.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования Водорослевый материал. Исследуемые в работе виды водорослей были определены и отнесены к 9-ти видам красных водорослей: Ceramiiun kondoi Yendo, Chondrus pinnulatus (Harv.) Okamura, Mazzaella laminariodes (Bory de Saint -Vincent) Fredericq (43°H'N, 131°54'E), Delesseria serridata Harvey, Neorhodomela larix (Turner) Masuda, Palmaría stenogona Perestenko, Ptilota filicina (Farl.) J.Ag., Tichocarpus crínitus (Gmel.) Rupz. (43°04'N, 13Г57'Е) (сбор водорослей март 2010, бухта Соболь, Японское море), Neorhodomela larix (2) (Turner) Masuda (42°37'N, 13Г07"Е) (сбор водорослей сентябрь 2009, бухта Троицы, Японское море), принадлежащих к 5-и семействам; 2-ум видам зеленых водорослей: Acrosiphonia sonderi (Kütz) Komm, Ulva fenistrata Ruprecht (43°04'N, 131°54'E) (март 2010, бухта Соболь, Японское море) и 11 видам бурых водорослей: Eualaria festulosa Posteis & Ruprecht (50°17,9N, 155°18,0E), Fucus evanescens C. Agardh (1) (50°17,9N,

155°18,0E), F. evanescens С. Agardh (2) (45°58,2N, 150° 11, IE), F. evanescens C. Agardh (3) (43°30,6N, 152°49,0E), F. evanescens C. Agardh (4) (50°18,2N, 155°17,0E) (август 2008, Охотское море), Undaría pinnatifida (Harv.) Wynne, Cystoseira crassipes (Tum) С. Ag., Desmarestia viridis (Müll) Lam., Costaría costata (Turn) Saund, Saccharina japónica (Miyabe) Okamura, Coccophora langsdoifii (Turn) Grev, Sargassum pallidum (Turn) С. Ag., Scytosiphon lomentaria (Lyngb.) Link. (43"04'N, 131*571:), S. cichoriodes (Miyabe) (43°11'N, 131°54'E) (март 2010, бухта Соболь, Японское море), L. bongardiana (Posteis & Ruprecht), L. longipes (Miyabe), L yezoensis (Miyabe), L. bongardiana f bongardiana (Posteis & Ruprecht) (50°17,9N, 155°18,OE) (август 2008, Охотское море), принадлежащих к 7-и семействам. Экстракцию низкомолекулярных метаболитов из водорослевого материала проводили смесью растворителей различной полярности (этанол 96%, этанол : ацетон 1 : 2 (объемные соотношения), этанол : хлороформ 1 : 2 (объемные соотношения) с использованием гомогенизатора MPW-324 (Польша). Все экстракты объединяли и упаривали до Vm¡n с получением ОЭ. ЛЭ и ГЭ извлекали из ОЭ добавлением к последнему хлороформа. Водная фракция содержала преимущественно фенольные соединения - ГЭ, а хлороформная - липофильные -ЛЭ.

Выделение отдельных классов ннзкомолекулярных метаболитов проводили методом колоночной хроматографии, градиентом концентраций этанола в хлороформе. Содержание веществ в элюате контролировали при помощи ТСХ в системе Поля.

Идентификацию глнцерогликолипндов проводили с использованием метода ЯМР. Спектры ЯМР *Н и 13С регистрировали на спектрометре Bruker Avance DPX-500 (Германия) с рабочей частотой 500 МГц для ядер 'Н и 125 МГц для ядер 13С. Взаимодействия первого порядка между ядрами 'Н и 13С определяли в эксперименте HSQC. Взаимодействия второго, третьего и четвертого порядка между ядрами 'Н и 13С определяли в эксперименте НМВС, оптимизированном для КССВ 8 Гц.

Определение жнрнокислотного состава лнпидов проводили по методу Хартмана и Реджино (Hartman, Regino, 1973) переэтерификацией липидов с получением МЭЖК. Жирнокислотный состав МЭЖК определяли, используя методы ГЖХ и ГЖХ/МС. Масс-спектры получали на приборе AMD 604 S («Itektra», Германия) с прямым вводом образца в ионный источник, способ ионизации - электронный удар (70 эВ, 8 квт).

Противомикробпую активность определяли на твердых агаризованных средах измерением ширины зоны ингибирования роста микроорганизмов, измеряемой в мм от края лунки (Анисимов и др., 2010). Противомикробную активность оценивали на микроорганизмах Vibrio alyinolyticiis КММ 644, Staphylococcus aureus АТСС 21027, Escherichia coli АТСС 15034, Candida albicans КММ 453 Aspergillus niger KMM 4634, Fusarium oxysporum KMM 4639, предоставленных из Коллекции морских микроорганизмов ТИБОХ ДВО РАН (КММ 453, Россия). Штаммы фитопатогенных грибов Septoria glycines и Cercospora sojina были предоставлены из коллекции ГНУ Дальневосточного научно-исследовательского института защиты растений (ГНУ ДВНИИЗР, Уссурийск).

Гемолитическую активность определяли на эритроцитах белых мышей при pH 6,0 и pH 7,4, после инкубирования в 96-ти луночных планшетах в течение 3 ч при 37°С. Лизис клеток оценивали по изменению оптической плотности суспензии

эритроцитов на фотометре планшетного формата PowerWave XS, при длине волны 700 нм («Biolek», США).

Цитотоксическую активность определяли на спленоцитах мышей и клетках асцитной карциномы Эрлиха, после инкубирования в течение часа при 37°С, рассчитывая соотношение мертвых клеток к их общему числу. Гибель клеток фиксировали трипановым синим, подсчет вели с помощью светового микроскопа ImagerAl («Carl Zeiss», Германия), используя программу AxioVision (версия 4,7) («Carl Zeiss», Германия).

Эмбрнотоксическую активность определяли на оплодотворенных яйцеклетках морского ежа Strongylocentrotus intermedins (Бузников, Подмарев, 1975). Инкубирование эмбрионов проводили в течение 3 ч при 24°С. Антиоксидантную активность определяли неферментативным железоиндуцированным методом окисления гомогената мозга мышей (Лихацкая, 2002).

Статистическая обработка данных. Все полученные результаты были обработаны при помощи программы STATISTICA 6,0.

Результаты и обсуждение Получение н биологическая активность экстрактивных веществ морских

водорослей

Общий, гидрофильный и липофильный экстракты (ОЭ, ГЭ и ЛЭ, соответственно) были получены в результате экстракции смесью растворителей различной полярности, что позволило максимально полно извлечь низкомолекулярные метаболиты. Среди всех исследованных экстрактов красных водорослей наибольшей противомикробной активностью в отношении S. aureus обладали ЛЭ из С. pinnulatus, L. niponica, М. laminariodes, N. larix и P. filicina. При этом ЛЭ красных водорослей обладали незначительной, за исключением ЛЭ из Р. filicina, гемолитической активностью, что делает их перспективными для дальнейшего использования в качестве источника противомикробных соединений.

ОЭ и ЛЭ зеленых водорослей A. sontarii и U. fenistrata, а так же ГЭ из U. fenistrata обладали высокой противостафилококковой активностью и не показывали значимой гемолитической активностью. Полученные данные свидетельствуют о перспективности поиска противомикробных агентов среди метаболитов зеленых водорослей.

Среди исследованных бурых водорослей наибольшую биологическую активность обнаружили экстракты из видов, принадлежащих к семействам Laminariaceae (S. cichorioides и S. japónica) Costariaceae (С. costatá), Desmarestiaceae (D. virides) и Sargassaceae (S. pallidum). Наиболее высокая противомикробная активность ГЭ среди всех тестируемых бурых водорослей принадлежала представителям из отдела Fucales (F. evanescens). Наиболее значимой гемолитической активностью при слабокислом значении pH обладали ОЭ и ЛЭ из F. evanescens, ЛЭ S. japónica. Данные виды водорослей широко распространены в дальневосточных морских акваториях и образуют массовые заросли, что делает их удобным для исследования объектом. Было определено, что наиболее перспективным и интересным для дальнейшего изучения являются вещества липофильной природы, содержащиеся в хлороформной фракции ОЭ. Было показано, что ЛЭ в основном содержат низкомолекулярные метаболиты, такие как липиды и ФСП, которые обладают значительной гемолитической и

противомикробной активностью в отношении грамположительных бактерий S. aureus.

Биологическая активность липофильиых экстрактов, полученных из бурых водорослей

Показано, что биологическая активность ЛЭ из бурых водорослей Е. fistulosa, L longipes L. bongardiana f. bongardiana, L. bongardiana и L yezoensis, собранных в Охотском море, в значительной степени определяется видовой принадлежностью морских макрофитов. Также было показано, что ЛЭ полученные из стволиков и пластин таллома водорослей, различаются по активности. Так, ЛЭ из пластин L bongardiana f. bongardiana, L. bongardiana и L yezoensis показывали более высокие значения ингибирования роста грамположительных бактерий S. aureus, по сравнению с ЛЭ из стволиков.

Влияние места сбора на биологическую активность липофильиых экстрактов, полученных из Fucus evanescens Противомикробная активность ЛЭ из бурых водорослей F. evanescens варьировала в зависимости от места сбора исследуемого объекта, однако ее показатели были невысоки в отношении используемого ряда микроорганизмов. Самые высокие значения ингибирования роста 5. aureus были отмечены для ЛЭ из F. evanescens, собранных в бухте Кратерной (о. Янкича). ЛЭ из водорослей, собранных в бухте Рудная (зал. Опричник), не показали активности в отношении используемых в работе тестовых штаммов микроорганизмов (табл. 1).

Таблица 1. Противомикробная активность ЛЭ из F. evanescens

Место сбора водоросли Микроорганизмы

S. aureus £ coli С. albicans /'. oxxsportim

зона ингибирования роста, мм

Охотское море

о. Итуруп 2,2 ± 0.2 1,3 ±0.2 0,3 ± 0,2 0.2 ± 0.2

о. Уруп 1,1 ±0.0 н.а. 1,5 ±0.2 1,2 ±0.0

о. Янкича, б. Кратерная 3,0 ± 0.0 2,0 ± 0.0 2,3 ± 0.3 1,8 ±0.2

о. Парамушир

таллом 1,0 ±0,0 0,7 ± 0,2 1,6 ±0,1 н.а.

молодые приростки 0,8 ± 0,2 н.а. н.а. 0,3 ± 0,3

Японское море

зал. Опричник, б. Рудная н.а. н.а. н.а. н.а.

Нитрофунгин 3.8± 0.2 3.8± 0.2 6.0± 0.0 11,0±0.0

н.а. — нет активности

ЛЭ из К evanecsens показали значительную гемолитическую активность с выраженным рН-зависимым эффектом (табл. 2). Гемолиз усиливался в слабокислой среде, что является весьма ценной информацией для дальнейших исследований в области поиска новых противоопухолевых препаратов. Наибольшей гемолитической активностью обладали ЛЭ из К evanecsens, растущих в бухте Рудная, у о. Итуруп и у о. Уруп. Самая высокая зависимость гемолитической активности от рН среды была отмечена у ЛЭ из водорослей, произрастающих в бухте Рудная (табл. 2).

Таблица 2. Гемолитическая активность ЛЭ из F. evanencses

Место сбора водоросли ЭД50, мг/мл

pH 6,0 pH 7,4

о. Итуруп 8,4 15,9

о. Уруп 16,1 52,2

о. Янкича, б. Кратерная 75,0 100,0

о. Парамушир

таллом 36,4 >100,0

молодые приростки 78,7 > 100,0

зал. Опричник, б. Рудная 1,6 59,9

Сапонин 7,5 40,0

Влияние сезона сбора на биологическую активность лнпофнльных экстрактов, полученных нз Басскаппа с1скопо'к1ея

Биологическая активность низкомолекулярных метаболитов морских водорослей меняется не только в зависимости от их вида и места произрастания, но также от сезона сбора водорослевого материала.

Таблица 3. Противомикробная активность ЛЭ из S. clchorioides

Время сбора водоросли Микроорганизмы

V. algiiiolyticus S. aureus /.. coli С. albicans A. niger F. oxysporiun

зона ингибирования роста, мм

март: взрослые ювенильные н.а. 6,8 ± 0,2 4.3 ± 0.2 2,3 ± 0,2 8,8 ± 0.2 0,8 ± 0,2 1,0 ±0,0 2,2 ± 0,2 3,8 ± 0,2

май* н.а. 4.0 ± 0,3 1,3 ±0,2 н.а. 3.0 ± 0.2 0.8 ± 0.2

июнь* н.а. 3.0 ± 0,0 1,0 ±0.0 1,0 ±0,0 4,0 ± 0,0 3.0 ± 0.0

июль* - н.а. 1,0 ±0,0 н.а. н.а. н.а.

сентябрь* 4,0 ± 0.0 6,7 ± 0,3 3,7 ± 0.2 3,0 ± 0,0 4,0 ± 0.0 9,8 ± 0.2

октябрь* 2.0 ± 0,0 5,3 ± 0,2 2,5 ± 0,0 2,0 ± 0,0 4.8 ± 0,2 7.5 ± 0.5

ноябрь* н.а. 3.4 ± 0.2 н.а. н.а. н.а. 2.0 ± 0.0

Нитрофунгин 6,0 ± 0,0 14,0 ±0,0 3,8 ± 0,2 6,0 ± 0,0 12,0 ±0,2 3.8 ± 0,2

н.а. - нет активности; «-» - активность не исследовали; * - взрослые водоросли.

Влияние сезона сбора на биологическую активность оценивали на ЛЭ, полученных из 5. cichorioides, показавших самые высокие значения противомикробного действия среди бурых водорослей (табл. 3). Широкий спектр противомикробного действия в отношении исследуемых микроорганизмов показали ЛЭ из 5. cichorioides, собранных в марте и сентябре месяце. Высокие значения гемолитической и цитотоксической активности были показаны для ЛЭ из водорослей, собранных в марте и ноябре месяце (табл. 4).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о влиянии сезона сбора водоросли на накопление веществ отвечающих за биологическую активность ЛЭ, полученных из 5. cichorioides. Отмечено, что ЛЭ из водорослей, собранных в сентябре месяце (водоросли, находящиеся в фертильном состоянии) и в холодные

месяцы (март и ноябрь), обладают более значительным биологическим потенциалом по сравнению с ЛЭ, полученными из водорослей в другие месяцы.

Таблица 4. Гемолитическая и цитотоксическая активность ЛЭ из S. cichorioides

Время сбора водоросли Гемолитическая активность, ЭД», мкг/мл Цитотоксическая активность, спленоциты мышей, ЭДЯ, мкг/мл Эмбриотоксическая активность, ЭДзд, мкг/мл

рН 6.0 рН 7,4

Март 2,3 3,2 8,6 75,3

Май >100,0 43,2 >100,0 72,8

Июнь 15,2 25,0 >100,0 36,0

Сентябрь 40,6 36,6 >100,0 20,3

Октябрь 26,0 24,0 63,0 68,4

Ноябрь 2,42 5,8 15.8 -

Сапонин 7,5 40,0 - -

«-» - активность не исследовали

Получение суммарных фракций и отдельных классов низкомолекулярных метаболитов из бурых водорослей

С помощью колоночной хроматографии из ЛЭ бурых водорослей были получены следующие классы соединений: ФСП (хлорофиллы, каротиноиды и фукоксантин), ТАГ, ДАГ, СС, СЖК, ЭЖК, ФЛ, ГЛ, МГДГ, ДГДГ и СХДГ. Показано, что содержание и соотношение низкомолекулярных метаболитов, выделенных из ЛЭ, варьирует в зависимости от вида и сезона сбора водорослей.

Биологическая активность липидов и фотосиитетических пигментов, выделенных нз бурой водоросли Eualaria fistulosa Было показано, что СЖК, ФСП и ГЛ, выделенные из ЛЭ Е. fistulosa, обнаружившего отсутствие биологической активности в ходе скрининга, обладают ингибирующим действием в отношении различных тестовых штаммах микроорганизмов. Также было показано, что различные ГЛ (МГДГ, ДГДГ, СХДГ), выделенные из Е. fistulosa, обладают противомикробной, рН-зависимой гемолитической и цитотоксической активностями, что подтверждает наличие антагонистических взаимодействий веществ в экстрактах. Было отмечено несколько классов соединений (МГДГ, ДГДГ, СХДГ и СЖК), перспективных для дальнейшего изучения их биологической активности.

Биологическая активность липидов и фотосинтетических пигментов, выделенных из Fucus evenescens Суммарные фракции некоторых низкомолекулярных метаболитов: ФСП (хлорофиллы, каратиноиды, p-каротин); СС, СЖК; ГЛ (МГДГ, ДГДГ, СХДГ) были получены из ЛЭ F. evenescens с помощью колоночной хроматографии.

Было показано, что все исследуемые метаболиты показали сильное ингибирующее действие в отношении фитопатогенных грибов S. glycines, паразитирующих на сое. Высокой противомикробной активностью в отношении используемого ряда микроорганизмов обладали отдельные классы ГЛ, выделенные из F. evenescens.

Хлорофиллы и каротиноиды, за исключением p-каротина, полученные из F. evenescens, также показали значимую антифунгальную активность в отношении фитопатогенов сои, не ингибируя при этом рост С. albicans, A. niger и фитопатогенных грибов F. oxysporum. Также было обнаружено, что ФСП из F. evenescens обладают антиоксидантной активностью, причем каратиноиды из этого вида водоросли более активны, чем хлорофиллы (рис. 1). Полученные данные об антиоксидантной активности ФСП важны для дальнейшего использования водорослей F. evanescens в качестве сырья для получения природных и недорогих антиоксидантов.

.....дгдг

о схдг

▼ Каротиноиды V Хлорофиллы

Концентрации, мкг/мл Рис. 1. Антиоксидантная активность ГЛ и ФСП бурой водоросли /•". емепезсепз

Влияние сезона сбора на биологическую активность лшшдов и фотосинтетических пигментов, выделенных из Засскаппа с1с!югипйе\

Ранее было описано, что ЛЭ из водорослей, собранных в марте и сентябре, обладают высокой противомикробной активностью, а в марте и ноябре -гемолитической и цитотоксической. В связи с этим, было изучено влияние сезона на биологическую активность липидов и ФСП из ЛЭ 5. с/сЛог/о^ел, собранных в марте и ноябре.

С помощью колоночной хроматографии из ЛЭ 5. с1сИогю1с1е5, собранных в марте месяце, были получены суммарные фракции следующих низкомолекулярных метаболитов: ТАГ, СЖК, Хл, в соотношении 85 : 5 : 10 %, соответственно; ТАГ, СС, Хл, в соотношении 10 : 45 : 45 %, соответственно; СС, Хл, в соотношении 70 : 30 %, соответственно. Кроме того, в составе индивидуальных фракций были получены некоторые метаболиты: (3-каротин; фукоксантин; Хл; ГЛ; МГДГ; ДГДГ и СХДГ. Из 5. ск1гогю1с1е5, собранных в ноябре месяце, были выделены только индивидуальные фракции низкомолекулярных метаболитов: ТАГ; СС; Хл; фукоксантин; МГДГ; ДГДГ и СХДГ.

Было показано, что биологическая активность липидов и пигментов из одного вида водоросли существенно меняется в зависимости от сезона сбора водорослевого материала. Были обнаружены вещества, выделенные из ЛЭ 5. скЛрпснУея, собранных в марте месяце, содержащие ФСП, такие как хлорофиллы и фукоксантин, которые проявили себя как активные противомикробные агенты в отношении всех используемых микроорганизмов, а также как вещества с антиоксидантной активностью, но не показали при этом гемолитического и цитотоксического действия. ТАГ, СЖК и Хл в составе суммарных фракций,

показали довольно значимые результаты в тестах на цитотоксическую и гемолитическую активности, но не обнаружили достаточно высокого противомикробного действия. Липиды и ФСП, выделенные из ЛЭ S. cichorioides, собранных в ноябре месяце, обладали достаточно высокой рН-зависимой гемолитической активностью, но в тоже время не показали значительного противомикробного действия как таковые из водорослей, собранных в марте месяце.

Влияние сезона сбора на биологическую активность липидов и пигментов, выделенных из Sargassum pallidum

Водоросли рода Sargassum sp. богаты биологически активными метаболитами и имеют перспективу для разработки новых лекарственных средств, однако биологические функции и периоды накопления отдельных веществ в этих водорослях требуют изучения. В качестве объекта для более глубокого исследования влияния сезона сбора водоросли на биологическую активность липидов и пигментов морских макрофитов был выбран вид бурых водорослей S. pallidum, широко распространеный в дальневосточных морских акваториях.

Из образцов S. pallidum, собранных в различные месяцы (март, июнь, август, ноябрь), были выделены липиды, отдельных классов и ФСП. Показано, что биологическая активность липидов бурых водорослей зависит от сезона сбора материала. Противомикробная активность в большей степени наблюдалась у ГЛ, выделенных из водорослей, собранных в холодное время года, а выраженной гемолитической активностью обладали липиды из S. pallidum, собранных в ноябре. Было показано, что водоросли рода Sargassum sp., произрастающие в дальневосточных морях, содержат меньшее количество биологически активных метаболитов в сравнении с представителями этого рода в более теплых морях.

Структура глицерогликолипидов, выделенных из морских водорослей

Ticliocarpus crinitus, Neorhodomela larix, Saccharina cichorioides, Fucus evanescens, Eualaria fistulosa и Sargassum pallidum

В предыдущих частях работы были обсуждены результаты исследования отдельных классов липидов и ФСП и их суммарных фракций, выделенных из бурых водорослей принадлежащих к разным семействам (Alariaceae, Fucaceae, Laminariaceae, Sargassaceae). Для дальнейшей работы по изучению взаимосвязи между структурой и биологической активностью наше внимание привлекли ГЛ: МГДГ, ДГДГ и СХДГ, обнаруженные в каждом из исследованных виде водорослей в достаточном количестве и обладающие выраженной биологической активностью. Отдельные классы МГДГ, ДГДГ и СХДГ были получены с помощью колоночной хроматографии.

Идентификация глицерогликолипидов

Анализ липидных экстрактов из морских водорослей Т. crinitus, N. larix, S. cichorioides, F. evanescens, E. fistulosa и S. pallidum с помощью метода TCX в системе растворителей (СНз)2С0-С6Н6-Н20, в соотношении 91 : 30 : 8 (по объему), показал присутствие трех основных по содержанию компонентов (ГЛ-I, ГЛ-Н, ГЛ-III), которые давали положительную реакцию с антроновым реагентом и имели такую же хроматографическую подвижность как МГДГ, ДГДГ и СХДГ из листьев

шпината Spinacia oleracea. Для структурной идентификации ГЛ был использован метод ЯМР.

На основании сравнения данных спектров ЯМР 'Н и 13С ГЛ-I, ГЛ-Н, ГЛ-Ш с литературой (Al-Fadhli et al., 2006; Kim et al., 2007), ГЛ-I идентифицировали как 1,2-диацил-3-0-(Р-Е)-галактопиранозил)-5п-глицерин (МГДГ) (1), ГЛ-II как 1,2-диацил-3-0-(а-0-галактопиранозил-(1,6)-0-Р-0-галактопиранозил)-5п-глицерин (ДГДГ) (2), аГЛ-111 как 1,2-диацил-3-0-(6-дезокси-6-сульфо-а-0-глюкопиранозил)-sn-глицерин (СХДГ) (3).

Из ЛЭ S. cichorioides был выделен не идентифицированный ГЛ-IV, который по данным ТСХ имел меньшую хроматографическую подвижность, чем МГДГ.

В спектре ЯМР 'Н образца ГЛ-IV из S. cichorioides присутствуют сигналы, которые характерны для остатков жирных кислот: 8 0.852-0,902 (т., ЗН) -терминальные СН3-группы, 8 2,341 (м., 2Н) и 8 1,612 (м., 2Н) - СН2-группы в а- и в Р-положениях к карбонилу, 8 1,277-1,362 м.д. фрагмента (CHi)n. В спектрах ЯМР 13С им соответствуют сигналы с 8 35,56 м.д. и 8 26,60 м.д. для СН;-групп в а- и в р-положениях к карбонилу. Атомы углерода карбонильных групп имеют 8 176 м.д:

Дальнейший анализ спектров ЯМР 'Н и 'Н-'Н COSY ГЛ- IV показал наличие в структуре глицеринового фрагмента и гексозы (8, м.д.):

4,161 (1Н, дд„ 7=4,6; 11,3) -Н-la и 4,126 (1Н, дд„ 7=6,1; 11,3)-Н-1Ь, 3.985 (1Н, м.)-Н-2; 3,901 (1Н, дд„ 7=5,2; 10,5) - Н-За и 3,650 (1Н, дд„ 7=4,6; 10,5)-Н-ЗЬ;

4,222 (1Н, д., 7=7,6) - Н-Г, 3,530 (1Н, дд„ 7=7,6; 9,7) - Н-2', 3,459 (1Н, дд„ 7=9,6; 3,3) - Н-3', 3,815 (1Н, дд„ 7=3,3; 1,1) - Н-4\ 3,503 (1Н, м„ 7=1,2; 5,4; 6,8) - Н-5'; 3,710 (1Н, дд„ 7=5,4; 11,4) и 3,751 (1Н, дд., 7=6.8; 11,4) - H-6'a и H-6'b.

Сравнение интегральных интенсивностей сигналов протонов фрагментов ЖК с 8 2,341; 1,612; 0,858-0,902 и протонов сахара показывает, что ГЛ-IV имеет моноацил-глицериновый фрагмент. Сдвиг сигнала С-2 (8 70.26) и связанного с ним протона (8 3,985) глицеринового фрагмента в сильное поле, а сигналов С-1 и С-2 в более слабое поле по сравнению со значением 8 соответствующих атомов С и Н в МГДГ и ДГДГ указывает на то, что в sn-2 положении вместо остатка ЖК, находится гидроксильная группа. Кроме того, в спектре НМВС наблюдаются кросс-пики между протонами при С-1 - глицерина и карбонильным атомом углерода ЖК, что так же указывает на локализацию ЖК в sn-1 положении глицеринового фрагмента. Эти данные позволили идентифицировать ГЛ-IV как 1-0-ацил-3-0-(Р-0-галактопиранозил)-5п-глицерины (МГМГ) (4). Этот же класс ГЛ

был выделен нз СЛ Е. fistulosa и S. pallidum, что было подтверждено данными *Н ЯМР.

Таким образом, из ЛЭ морских водорослей были выделены 1,2-диацил-З-О-(р-0-галактопиранозил)-5П-глицерины (МГДГ) (1), 1,2-диацил-3-0-(а-0-галактопиранозил-(1,6)-0-Р-0-галактопиранозил)-5п-глицерины (ДГДГ) (2), 1,2-диацил-3-0-(6-дезокси-6-сульфо-а-0-глюкопиранозил)-5п-глицерины (СХДГ) (3). В бурых водорослях S. cichorioides, Е. fistulosa и S. pallidum впервые обнаружены ГЛ-IV, которые были идентифицированы как 1-0-ацил-3-0-(Р-Е)-галактопиранозил)-5п-глицерины (МГМГ) (4). Все выделенные ГЛ, принадлежащие к одному классу, имели идентичное строение гликозидной части, но в то же время существенно отличались по составу ЖК.

/Кнрнокнслотнын состав глицерогликолипидов

В представленной работе изучен жирнокислотный состав идентифицированных ГЛ: МГДГ, ДГДГ, СХДГ и МГМГ.

/Кирнокислотный состав моногалоктозилднацнлглицерннов

Во всех исследованных МГДГ наблюдалось высокое содержание пальмитиновой, миристиновая кислоты и суммы олеиновой и а-линоленовой ЖК. Для МГДГ, выделенных из ЛЭ водорослей семейств Laminariaceae и Sargassaceae, было показано высокое содержание стеаридоновой, арахидоновой и эйкозапентаеновой ЖК. Состав ЖК в изученных МГДГ значительно менялся в зависимости от видовой принадлежности водоросли и сезона их сбора. Исследуемые МГДГ были самыми ненасыщенными из всех ГЛ изученных видов морских водорослей.

Жирнокислотный состав дпгалоктозилдиацилглнцеринов

Основной ЖК во всех исследованных ДГДГ являлась пальмитиновая кислота. Кроме того, во всех выделенных ДГДГ наблюдалось высокое содержание суммы олеиновой и а-линоленовой ЖК. Содержание миристиноваой кислоты варьировало от 0 до 30,8 % в зависимости от вида и сезона сбора водорослевого материала. Насыщенность ЖК, входящих в состав исследуемых ДГДГ морских водорослей, была выше, чем в МГДГ. В жирнокислотном составе ДГДГ, так же как и в случае с МГДГ наблюдались изменения в зависимости от вида и сезона сбора водорослей.

Жирнокислотный состав сульфохиновозилдиацилглнцерииов

Нами было показано, что СХДГ - это самые насыщенные из ГЛ морских водорослей, в которых пальмитиновая является основной по содержанию жирной кислотой. Так же как и во всех изученных нами ГЛ морских водорослей, в СХДГ содержались значимые количества миристиновой и суммы олеиновой и а-

линоленовой ЖК. Кроме того, как и для первых двух классов ГЛ, для СХДГ характерны изменения состава ЖК в зависимости от видовой принадлежности водоросли, из которых они были получены, а также от сезона сбора водорослевого материала.

Жирнокислотиый состав моногалактознлмопоацнлглицеринов

Было показано, что ЖК состав МГМГ значительно отличался от состава ЖК изученных МГДГ, хотя содержание пальмитиновой кислоты также было значительным во всех лизо-формах этого класса ГЛ, кроме того, все МГМГ содержали стеариновую кислоту в достаточно больших количествах.

Биологическая активность глнцероглнколиппдов морских водорослей

В работе была определена противомикробная, гемолитическая и цитотоксическая активность ГЛ двух видов красных водорослей (N. larix и Т. crinitus) и четырех видов бурых водорослей (Е. fistulosa, F. evenesctns, S. cichorioides и S. pallidum). Кроме того, была определена активность ГЛ, выделенных из ЛЭ S. cichorioides и 5. pallidum, в зависимости от сезона сбора водорослей.

Биологическая активность моногалоктознлднацплглицеринов

Противомикробная активность МГДГ варьировала в зависимости от вида водорослей, из которых они были получены. Кроме того, нами были обнаружены различия в активности МГДГ, выделенных из ЛЭ одного вида водоросли, собранных в разные сезоны (табл. 5).

Таблица 5. Противомикробная активность МГДГ

Вид водоросли Месяц сбора Микроорганизмы

S. aureus Е. coli С. albicans A. niger F. oxysponim 5. glycines

зона ингибирования роста, мм

N. larix март 1.0 ±0.0 H.a. H.a. н.а. H.a. н.а.

Т. crinitus март н.а. н.а. н.а. - - -

Е. fistulosa август 7.0 ± 0.0 5.7 ± 0.3 2.8 ± 0.2 - - -

F. evenesccns ноябрь 5,7 ± 0,2 2,5 ± 0.0 13,7 ±0.2 5.0 ± 0.0 6.7 ± 0.3 2.0 ±0.0

S. cicharioides март 3.0 ± 0.0 н.а. н.а. н.а. н.а. -

ноябрь 2,0 ± 0.0 н.а. н.а. н.а. 2.5 ± 0.2 ■

S. pallidum март 2.5 ± 0.2 н.а. 3.0 ± 0.0 4.0 ± 0.0 н.а. н.а.

июнь н.а. 2.0 ± 0.0 н.а. н.а. н.а. 4.0 ± 0.0

август н.а. н.а. н.а. н.а. н.а. 2.0 ± 0.0

ноябрь 3,0 ± 0.0 2.2 ± 0.2 1.2 ±0.3 н.а. 1.0 ±0.0 н.а.

Нитрофунгин 14.0 ±0.0 3.8 ± 0.2 6.0 ± 0.0 12.0 ±0.2 3.8 ± 0.2 н.а.

н.а. - нет активности; «-» - активность не определяли

Отмечено, что значительной противомикробной активностью в отношении тестовых культур грибов обладали МГДГ из Р. егепеясепя, а самую высокую противобактериальную активность показали МГДГ из Е. /сИн/оза. МГДГ из красных водорослей были неактивны в отношении использованных тестовых

штаммов микроорганизмов, только МГДГ из N. larix незначительно ингибировали рост S. aureits (табл. 5). Наибольшую активность в отношении S. aureus показали МГДГ из Е. fistulosa и F. evenescens. Противомикробная активность МГДГ из S. cichorioides, незначительно менялась в зависимости от сезона сбора водорослевого материала. МГДГ из S. pallidum, собранных в холодное время года, показали умеренную противостафилококковую активность. В то время как, МГДГ из S. pallidum, собранных в летние месяцы, не показали ингибирующего действия в отношении грамположительных бактерий S. aureus. МГДГ из красных водорослей N. larix незначительно ингибировали рост S. aureus, а МГДГ из красной водоросли Т. crinitus были неактивными в отношении грамположительных бактерий (табл. 5).

Противомикробная активность МГДГ, выделенных из исследуемых видов водорослей, в отношении S. aureus и Е. coli имела линейную зависимость от количественного содержания миристиновой кислоты (рис. 2). Для остальных ГЛ, подобные зависимости выявлены не были.

Содержание ЖК, % Содержание ЖК, %

Рис. 2. Взаимосвязь противобактериальной активности и количественного содержания миристиновой кислоты в МГДГ

В литературе встречаются данные о высокой противомикробной активности МГДГ, содержащего в первом положении пальмитиновую кислоту, а во втором эйкозапентаеновую (Al-Fadhli et al., 2006). Возможно, что в МГДГ изученных нами бурых водорослей активность также усиливалась за счет высокого содержания ПНЖК, однако в этом случае не удалось обнаружить концентрационной зависимости.

Только четыре МГДГ из 10 исследованных ингибировали рост диморфных дрожжевых клеток С. albicans (табл. 5). В большей степени противомикробную активность в отношении С. albicans показали МГДГ из F. evenescens. Умеренную степень ингибирования роста дрожжей показали МГДГ из Е. fistulosa и S. pallidum (сбор водоросли в марте месяце). Анализируя данные по составу ЖК и биологической активности, изучаемых нами МГДГ мы предположили, что за противомикробную активность в отношении диморфных дрожжевых клеток С. albicans отвечает высокое содержание суммы олеиновой и а-линоленовой кислот в этих ГЛ

Широкий спектр ингибирующего действия в отношении грибных культур показали МГДГ из F. evenescens. Эти ГЛ обладали высокой активностью в отношении фитопатогенных грибов. МГДГ из S. cichorioides, собранных в ноябре месяце, показали умеренное ингибирование роста культуры фитопатогенного гриба

F. oxysporum. Все МГДГ из S. pallidum показали разную противомикробную активность в отношении используемых в работе тестовых штаммов грибов. Так, МГДГ из водорослей, собранных в марте месяце, ингибировали A. niger, из водорослей, собранных в июне и августе - рост фитопатогенных грибов сои S. glycines, а МГДГ из водорослей, собранных в ноябре, незначительно ингибировали рост F. oxysporitm (табл. 5).

Гемолитической активностью в значительной степени обладали только 4 МГДГ, выделенных из бурых водорослей (табл. 6). Для МГДГ из F. evenescens, S. cichorioides и S. pallidum было показано цитотоксическое действие на спленоциты мышей. МГДГ из Е. fistulosa были токсичны для клеток карциномы Эрлиха в низкой концентрации, но не проявляли токсичности в отношении нормальных клеток. Скорее всего, эту активность обеспечивает высокое, по сравнению с другими изучаемыми МГДГ, количественное содержание миристиновой кислоты в МГДГ из Е. fistulosa. Гемолитическая активность с выраженным рН-зависимым эффектом была показана для МГДГ, выделенных из бурых водорослей F. evenescens и S. cichorioides, собранных как в летний так и в зимний период. МГДГ из 5. pallidum, собранных в ноябре месяце, вызывал лизис эритроцитов в самых низких концентрациях, при обоих значениях рН среды (табл. 6).

Таблица 6. Гемолитическая и цитотоксическая активность МГДГ

Вид Месяц сбора Гемолитическая активность. Цитотоксическая активность.

водоросли ЭДч|. мкг/мл ЭДч! мкг/мл

рНб.О рН 7,4 спленоциты мышей карцинома Эрлиха

N. larix март > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0

Т. crinitus март > 100.0 > 100.0 - > 100.0

Е. fistulosa август > 100.0 > 100.0 > 100.0 7.3

F. evenescens ноябрь 8.5 20.2 21.7 > 100.0

S. cichorioides март 43.3 > 100.0 32.8 > 100.0

ноябрь 5.8 14,3 > 100.0 -

S. pallidum март > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0

июнь > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0

август 96.4 > 100.0 68.4 > 100.0

ноябрь 1,1 1.8 - > 10.0

Сапонин 7,5 40.0 - -

«-» - активность не определяли

Таким образом, МГДГ, выделенные из ЛЭ бурых водорослей обладают наибольшим биологическим потенциалом, по сравнению с МГДГ из красных водорослей. Самую значительную противомикробную активность, в сочетании с гемолитической и цитотоксической активностью, показали МГДГ из бурой водоросли F. evenescens. МГДГ из Е. fistulosa также значительно ингибировали рост бактерий, вызывали гибель клеток карциномы Эрлиха, не оказывая при этом токсического действия в исследуемых концентрациях на эритроциты и спленоциты мыши. Выраженной гемолитической активностью обладали МГДГ из S. cichorioides и S. pallidum, собранных в ноябре месяце. Была показана зависимость противобактериалыюй активности от содержания миристиновой кислоты в исследуемых МГДГ.

Биологическая активность днгалактознлднацилглицерннов

ДГДГ морских водорослей в значительно меньшей степени ингибировали, по сравнению с МГДГ рост тестовых штаммов микроорганизмов (табл. 7), и в большей степени подавляли рост дрожжеподобных грибов С. albicans. Высокие значения противомикробной активности были отмечены для ДГДГ из N. larix, Е. fistulosa и S. pallidum (август, ноябрь) (табл. 7).

Широкий спектр ингибируюшего действия показали ДГДГ из F. evenescens, которые в разной степени ингибировали рост всех используемых штаммов микроорганизмов за исключением A. niger (табл. 7) и С. sojina (данные не приведены). Самую высокую противомикробную активность ДГДГ показали в отношении фитопатогенов сои S. glycines. Относительно F. oxysporum только два ДГДГ показали ингибирующую рост активность - это дигалактозид из F. evenescens и S. pallidum, собранных в августе месяце. К сожалению, мы не смогли проследить влияние состава ЖК на активность ДГДГ, в связи с чем было выдвинуто предположение, что на противомикробную активность в большей степени оказывает влияние позиционное расположение ЖК в этом ГЛ.

Таблица 7. Противомикробная активность ДГДГ

Вид водоросли Месяц сбора Микроорганизмы

5. aureus Е. coli С. albicans Л. niger F. oxysporum S. glycines

зона ингибирования роста, мм

N. larix март н.а. н.а. 4,0 ± 0,0 н.а. н.а. н.а.

Т. crinitus март 1.0 ±0.0 н.а. н.а. - -

1С. fistulosa август н.а. н.а. 4.0 ± 0,0 - - _

F. evenescens ноябрь 1,5 ±0,0 1,6 ±0,2 1,5 ±0,0 н.а. 2,0 ± 0,0 5,0 ± 0,0

S. cichorioides март н.а. н.а. н.а. н.а. н.а.

нояорь н.а. н.а. н.а. н.а. H.a. -

S. pallidum март н.а. на. н.а. н.а. н.а. H.a.

нюнь н.а. н.а. н.а. н.а. н.а. H.a.

август н.а. н.а. 4.5 ± 0.2 н.а. 2,0 ±0.0 H.a.

ноябрь н.а. н.а. 2,7 ± 0,2 н.а. н.а. н.а.

Ннтрофунгин 14.0 ±0.0 3.8 ± 0.2 6.0 ± 0,0 12.0 ±0,2 3,8 ± 0,2 H.a.

н.а. — нет активности; «-» - активность не определяли

Гемолитическая активность была показана для ДГДГ, выделенных из бурых водорослей Е. fistulosa, собранных в августе, F. evenescens, S. cichorioides и S. pallidum, собранных в ноябре (табл. 8). Все ДГДГ обладали более высокой гемолитической активностью при слабокислом значении рН среды, наибольшую активность обнаружили для ДГДГ из F. evenesctns и S. cichorioides, собранных в ноябре месяце. Показано, что ДГДГ из N. larix и F. evenescens обладают цитотоксическим действием в отношении спленоцитов мыши, а ДГДГ, выделенные из Т. crinitus и Е. fistulosa - в отношении карциномы Эрлиха (табл. 8).

ДГДГ из Е. fistulosa вызывали 50%-ную гибель клеток опухоли в концентрации 8 мкг/мл, при этом не проявляли токсичности в отношении нормальных клеток (табл. 8). Полученные данные весьма перспективны для дальнейшего исследования ГЛ, как противоопухолевых агентов.

Таблица 8. Гемолитическая и цитотоксическая активность ДГДГ

Вид водоросли Месяц сбора Гемолитическая активность. ЭДч>. м кг/мл Цитотоксическая активность. ЭДч1 мкг/мл

рН6.0 рН 7.4 Спленоциты мышей Карцинома Эрлиха

N. larix март > 100.0 > 100.0 48.3 > 100.0

Т. crinitus март > 100.0 > 100.0 - 37.8

Е. fistulosa август 42.3 71,3 > 100.0 8.0

F. evenescens ноябрь 2,3 10.6 69.8 > 100.0

S. cichorioides март > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0

ноябрь 2,3 45,3 > 100.0 -

S. pallidum март > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100,0

июнь > 100,0 > 100.0 > 100.0 > 100.0

август > 100.0 > 100.0 > 100.0 > 100.0

ноябрь 2.4 4,3 - > 10.0

Сапонин 7,5 40.0 - -

«-» - активность не определяли

Биологическая активность сульфохнновозилдпацнлглицерпнов

СХДГ морских водорослей в большей степени ингибировали рост грибов особенно фитопатогенных грибов S. glycines и F. oxysporum, чем бактерий. Значимая гемолитическая активность была отмечена для СХДГ из бурых водорослей S. cichorioides и S. pallidum, собранных в ноябре месяце. Цитотоксической активностью по отношению к спленоцитам мышей обладали только СХДГ из F. evenescens. Вероятнее всего, цитотоксическую активность данного ГЛ обеспечивает высокое содержание миристиновой кислоты. СХДГ из Т. crinitus, содержащие больше всего пальмитиновой кислоты, по сравнению с СХДГ, выделенных из других водорослей, оказывали цитотоксическое действие на клетки карциномы Эрлиха

Биологическая активность моногалактозилмоноацплглицеринов

Противомикробная активность МГМГ, также как и их ЖК состав, существенно отличалась, в зависимости от вида водоросли из которого они были выделены. Только МГМГ из S. cichorioides, собранных в ноябре ингибировали рост грамотрицательных бактерий и дрожжеподобных грибов (табл. 9). Вероятнее всего, эту активность обеспечивает высокое содержание ПНЖК (41%). МГМГ обладали более выраженной противомикробной активностью в отношении грамположительных бактерий, самое значительное ингибирование роста S. aureus было отмечено при действии МГМГ из S. pallidum. Скорее всего, за противомикробную активность отвечает высокое содержание стеариновой кислоты (57,2%), количество которой в МГМГ из S. pallidum было 2,4 - 2,7 раза больше, по сравнению с липидами из других водорослей. Только для МГМГ из 5. pallidum было показано ингибирующее рост действие в отношении фитопатогенов F. oxysporum. Наличие этой активности коррелирует с высоким содержанием миристиновой и пальмитиновой кислот относительно других исследуемых МГМГ. Показано, что все выделенные МГМГ не обладали гемолитической и цитотоксической активностями.

Таблица 9. Противомикробная активность МГМГ

Вид водоросли Месяц соора Микроорганизмы

S. aureus Е. coli С. albicans A. niger F. ox\sporum S. glycines

зона ингибирования, мм от края лунки

Ii fistulosa август 2.0 ± 0,0 н.а. H.a. н.а. н.а. н.а.

S. cichorioides ноябрь 1,0 ±0,0 2,0 ±0,0 3.0 ± 0,0 н.а. н.а. H.a.

S. pallidum август 4.0 ± 0.0 н.а. н.а. н.а. н.а. H.a.

Нитрофунгин 14.0 ±0,0 3.8 ± 0,2 6,0 ± 0,0 12,0 + 0,2 3,8 ± 0,2 H.a.

н.а. - нет активности; «-» - активность не определяли

Таким образом, МГМГ обладали меньшим биологическим потенциалом, чем МГДГ, только МГМГ из S. palUdum в значимой степени ингибировали рост грамположительных бактерий и условно-патогенных грибов, в то время как МГДГ из этой водоросли не показывали такой активности.

При изучении биологической активности липидов морских водорослей нами было показано, что среди ГЛ наибольшей противомикробной активностью обладают МГДГ. Гемолитической активностью в равной степени обладают все классы ГЛ. Вид водоросли, из которых были получены ГЛ, существенно влияет не только на состав ЖК, но и на их биологическую активность. Кроме того, было показано, что на биологическую активность влияет состав ЖК и их позиционное расположение в ГЛ, а так же синергический и антагонистический эффекты при взаимодействии молекулярных видов в пуле ГЛ одного класса.

Выводы

1. Получены общие, липофильные и гидрофильные экстракты из морских водорослей Охотского и Японского морей относящихся к трем отделам: Chlorophyta (2 вида), Phaeophyta (11 видов) и Rhodophyta (9 видов) и охарактеризована их биологическая активность.

2. Показано, что липофильные экстракты, полученные из красных водорослей Chondrus pinnulatus, Laurensla niponica, Mazzaella laminariodes, Neorhodomela larix; Ptilota fiíicina-, зеленых водорослей Acrosiphonia sontarii и Viva fenistrata и бурых водорослей Saccharina cichorioides, S. japónica. Costaría costata и Scytosiphon lementaría обладают противомикробной активностью в отношении грамположительных бактерий S. aureus.

3. Установлено, что липофильные экстракты из S. cichorioides, обладают высокой противомикробной активностью, зависимой от сезона сбора водорослевого материала. Наиболее активными в отношении грамположительных бактерий и патогенных грибов оказались суммарные фракции липидов и пигментов из S. cichorioides, собранных в марте, сентябре и октябре.

4. Показано, что липофильные экстракты из бурых водорослей, собранных в холодное время года: Fitcus evenescens (бухта Рудная, Японское моря), S. cichoriodes (Японское море) и Sargassum pallidum (Японское море) и отдельные классы низкомолекулярных метаболитов из бурой водоросли F. evenescens, обладают высокой гемолитической активностью.

5. Установлено, что хлорофиллы и фукоксантин из 5. cichorioides, собранные в марте, обладают значительным противомикробным действием в отношении всех используемых микроорганизмов, при отсутствии гемолитической и цитотоксической активности. Суммарная фракция, содержащая триглицериды, свободные жирные кислоты, хлорофиллы, напротив, показала высокую цитотоксическую и гемолитическую активности. Низкомолекулярные метаболиты, выделенные из S. cichorioides, собранных в ноябре, не показали высокого противомикробного действия, но обладали достаточно высокой рН-зависимой гемолитической активностью.

6. Из липофильных экстрактов двух видов красных водорослей: Tichocarpus crinitus и N. larix и четырех видов бурых водорослей: S. cichorioides, F. evanescens, Eualaria fistulosa и Sargassum pallidum выделены три характерных для водорослей класса глицерогликолипидов: 1,2-диацил-3-0-(Р-0-галактопиранозил)-8п-глицерин (МГДГ), 1,2-диацил-3-0-(а-0-галактопиранозил-( 1,6)-0-р-0-галактопирапочил)-яп-глицерин (ДГДГ), 1,2-диацил-3-0-(6-дезокси-6-сульфо-а-0-глюкопиранозил)-5П-глицерин (СХДГ). Из бурых водорослей S. cichorioides, Е. fistulosa и S. pallidum были выделены ранее не обнаруженные в этих видах водорослей глицерогликолипиды, которые были идентифицированы как 1-0-ацил-3-0-(Р-0— галактопиранозил)-5П-глицерины (МГМГ). Структуры гликозидной части глицерогликолипидов, принадлежащих к одному классу, имели идентичное строение, в то же время существенно отличались по составу жирных кислот и степени насыщенности в зависимости от вида водоросли и сезона сбора. Наибольшая биологическая активность наблюдалась для глицерогликолипидов, выделенных из водорослей, собранных в холодное время года.

7. Во всех исследованных глицерогликолипидах морских водорослей было обнаружено высокое содержание пальмитиновой и миристиновой жирных кислот. В МГМГ было отмечено высокое содержание пальмитиновой и стеариновой кислот. Жирнокислотный состав глицерогликолипидов варьировал в зависимости от вида и сезона сбора водорослей.

8. Показано, что самая высокая противомикробная активность в отношении S. atireus и С. albicans, была характерна для МГДГ из бурых водорослей F. evanescens и Е. fistulosa.

9. Показано, что МГДГ из Е. fistulosa обладают цитотоксической активностью в отношении клеток карциномы Эрлиха в достаточно низкой концентрации (ЭД5о=7,3 мкг/мл).

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Анисимов М.М., Мартыне Е.А., Чайкина Е.Л., Герасименко Н.И. Противомикробная, гемолитическая и фиторегулирующая активность липидных экстрактов из морских водорослей // Химия растит, сырья. 2010. Т. 4. С. 125-130.

2. Анисимов М.М., Мартыяс Е.А., Герасименко Н.И., Горовой П.Г. Противомикробная активность экстрактов и компонентов морских водорослей // Раст. ресурсы. 2012. Т. 48. С. 139-154.

3. Мартыяс Е.А., Герасименко Н.И., Бусарова Н.Г., Юрченко Е.А., Скрипцова А.В., Анисимов М.М. Биологическая активность липидов и фотосинтетических пигментов Saccharina cichorioides (Miyabe) (сем.

Laminariaceae). Сезонные изменения активности// Химия растит, сырья. 2012. Т. 1. С. (97-105).

4. Мартыне Е. А., Анисимов М. М., Герасименко Н. И. Противомикробная активность экстрактов из бурых водорослей // XII Всерос. Молодеж. Школа-конф. По актуал. Проблемам химии и биологии, МЭС ТИБОХ, Владивосток, 7-14 сент. 2009 г.: сб. тр. г. Владивосток. ДВО РАН, 2009. С. 44.

5. Мартыне Е.А., Анисимов М.М., Скрипцова А.В. Противомикробная и гемолитическая активности экстрактов водорослей Дальневосточных морских акваторий // XIII Всероссийская молодежная школа-конференция по актуальным проблемам химии и биологии. 2010.: сб. тр. г. Владивосток. ДВО РАН, С. 42.

6. Мартыне Е.А., Герасименко Н.И., Юрченко Е.А., Анисимов М.М. Противомикробная, гемолитическая и цитотоксическая активности экстрактивных веществ бурой водоросли Laminaría cichorioides (Miyabe) // Сборник трудов международной конференции «Актуальные проблемы химии природных соединений» г. Ташкент 2010. С. 56.

7. Мартыне Е.А., Лихацкая Г.Н., Герасименко Н.И., Ким Н.Ю., Анисимов М.М. Сравнительное изучение антиоксидантной- активности пигментов и глицерогликолипидов бурых водорослей Fucus evanescens и Saccharina cichorioides II 5-й международный симпозиум «Химия и химическое образование» г. Владивосток 2011. С. 32.

8. Мартыне Е. А., Герасименко Н. И., Бусарова Н. Г., Анисимов М. М. Сравнительное изучение биологической активности гликолипидов бурых водорослей Fucus evanescens и Sargassum pallidum II VII Всероссийская конф. «Химия и технология растительных веществ», г. Сыктывкар, 3-5 окт. 2011 г.: тез. докл. Сыктывкар : Ин-т химии Коми НЦ УрОРАН, 2011. С. 98.

Соискатель

Мартыяс Е.А.

Мартыне Екатерина Александровна

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ЛИПИДОВ И ФОТОСИНТЕТИЧЕСКИХ ПИГМЕНТОВ ВОДОРОСЛЕЙ ДАЛЬНЕВОСТОЧНЫХ МОРЕЙ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Подписано в печать 23.05.12. Формат 60x84/16. Тираж 100 экз. Усл. печ. л. 1.0 Заказ № 666

Отпечатано в печатном салоне «Оперативная полиграфия». ИП Матусевич Ю.И. 690013, г. Владивосток, ул. Трамвайная 14Б, тел. (423)2694987

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мартыяс, Екатерина Александровна

Введение

Оглавление

1. Обзор литературы.

1.1. Химический состав морских водорослей.

1.1.1. Состав липидов морских водорослей.

1.1.2. Нейтральные липиды морских водорослей.

1.1.3. Полярные липиды морских водорослей.

1.1.3.1. Глицерогликолипиды морских водорослей.

1.1.3.2. Жирнокислотный состав глицерогликолипидов морских водорослей

1.1.4. Фотосинтетические пигменты морских водорослей.

1.2. Биологическая активность морских водорослей.

1.2.1. Противомикробная активность морских водорослей.

1.2.1.1. Противомикробная активность экстрактов морских водорослей.

1.2.1.2. Противомикробная активность метаболитов морских водорослей

1.2.1.2.1. Противомикробная активность низкомолекулярных метаболитов красных водорослей.

1.2.1.2.2. Противомикробная активность низкомолекулярных метаболитов зеленых водорослей.

1.2.1.2.3. Противомикробная активность низкомолекулярных метаболитов бурых водорослей.

1.2.1.2.4. Противомикробная активность липидов морских водорослей.

1.2.2. Гемолитическая активность метаболитов морских водорослей.

1.2.3. Цитотоксическая активность метаболитов морских водорослей.

1.2.4. Биологическая активность гликолипидов, жирных кислот и фотосинтетических пигментов морских водорослей.

2. Материалы и методы.

2.1. Приборы и оборудование.

2.2. Реагенты.

2.3. Водорослевый материал.

2.4. Получение экстрактов морских водорослей.

2.5. Выделение низкомолекулярных метаболитов и их суммарных фракций из липофильных экстрактов морских водорослей.

2.6. Определение жирнокислотного состава липидов.

2.7. Определение противомикробной активности.

2.8. Определение гемолитической активности.

2.9. Определение цитотоксической активности.

2.10. Определение эмбриотоксической активности.

2.11. Определение антиоксидантной активности.

3. Результаты и их обсуждение.

3.1. Получение и биологическая активность экстрактивных веществ морских водорослей.

3.1.1. Противомикробная и гемолитическая активности экстрактов красных водорослей (Rhodophyta).

3.1.2. Противомикробная и гемолитическая активности экстрактов зеленых водорослей (Chlorophyta).

3.1.3. Противомикробная и гемолитическая активности экстрактов бурых водорослей (Phaeophyceae).

3.2. Биологическая активность липофильных экстрактов, полученных из бурых водорослей.

3.2.1. Влияние места сбора на биологическую активность липофильных экстрактов, полученных из Fucus evanescens.

3.2.2. Влияние сезона сбора на биологическую активность липофильных экстрактов, полученных из Saccharina cichorioides.

3.3. Получение суммарных фракций и низкомолекулярных метаболитов из бурых водорослей.

3.3.1. Биологическая активность липидов и фотосинтетических пигментов, выделенных из бурой водоросли Eualaria fistulosa.

3.3.2. Биологическая активность липидов и фотосинтетических пигментов, выделенных из Fucus evanescens.

3.3.3. Влияние сезона сбора на биологическую активность липидов и фотосинтетических пигментов, выделенных из Saccharina cichorioides.

3.2.4. Влияние сезона сбора на биологическую активность липидов и пигментов, выделенных из Sargassum pallidum.

3.4. Структура глицерогликолипидов морских водорослей Tichocarpus crinitus, Neorhodomela larix, Saccharina cichorioides, Fucus evanescens, Eualaria fistulosa и Sargassum pallidum.

3.4.1. Идентификация глицерогликолипидов.

3.4.2. Жирнокислотный состав глицерогликолипидов.

3.4.2.1. Жирнокислотный состав моногалактозилдиацилглицеринов.

3.4.2.2. Жирнокислотный состав дигалактозилдиацилглицеринов.

3.4.2.3. Жирнокислотный состав сульфохиновозилдиацилглицеринов.

3.4.2.4. Жирнокислотный состав моногалактозилмоноацилглицеринов.

3.5. Биологическая активность глицерогликолипидов морских водорослей.

3.5.1. Биологическая активность моногалактозилдиацилглицеринов.

3.5.2. Биологическая активность дигалактозилдиацилглицеринов.

3.5.3. Биологическая активность сульфохиновозилдиацилглицеринов.

3.5.4. Биологическая активность моногалактозилмоноацилглицеринов.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологическая активность липидов и фотосинтетических пигментов водорослей дальневосточных морей"

Морские водоросли издавна используется в пищевых целях, а также в сельском хозяйстве в качестве удобрений. Это богатый источник разнообразных по структуре и биологической активности веществ. Среди метаболитов водорослей обнаружены вещества, эффективные при так называемой альготерапии и профилактике различных заболевании. Некоторые из этих веществ могут служить ценным сырьем при производстве фармацевтической и косметической продукции, а также стимуляторов продуктивности сельскохозяйственных животных и урожайности сельскохозяйственных культур.

Для морей Дальнего Востока характерно большое разнообразие видов бурых, красных и зеленых водорослей. Некоторые из них образуют массовые скопления и заросли. Химический состав водорослей, в основном, хорошо изучен. Для бурых водорослей, например, показано высокое содержание альгиновой кислоты, маннита, макро- и микроэлементов и аминокислот. Наиболее интенсивно исследуются полисахариды водорослей. Показан широкий спектр биологического действия полисахаридов, включающий их антиопухолевое, антивирусное, антимикробное, антигоагулянтное, радиопротекторное, гепатозащитное и иммуномодулирующее действия. В последние годы изучаются физиологические свойства низкомолекулярных метаболитов водорослей, таких как фенольные соединения (пластохиноны, флоротаннины), отдельные классы глицерогликолипидов, триацилглицеринов, жирных кислот и фотосинтетических пигментов каротиноидной природы. Пигменты, полиненасыщенные жирные кислоты и свободные аминокислоты бурых водорослей при систематическом употреблении водорослей в пищу способствуют регуляции обмена веществ. Известно, что аккумулируемые в водорослях фотосинтетические пигменты, такие как хлорофиллы и каротиноиды, а также глицерогликолипиды, обладают широким спектром биологического действия. Для этих соединений отмечают противоопухолевое, противомикробное, антиоксидантное, противовирусное, противовоспалительное действие и некоторые другие свойства.

В то же время данные по содержанию биологически активных веществ в водорослях Дальневосточных морей носят несистематический характер. Практически отсутствуют сведения о сезонных изменениях в содержании различных метаболитов; нет систематических данных о качественном и количественном содержании биологически активных веществ в зависимости от видовой принадлежности, места обитания и сбора макрофитов.

В связи с вышесказанным представляется актуальным, поиск биологически активных природных соединений, содержащихся в морских водорослях, а также изучение спектра их действия и взаимосвязи активности с местом и сезоном сбора водорослей. Результатом таких исследований может стать, с одной стороны создание новых перспективных лекарственных средств и биологически активных препаратов, а с другой, увеличение продуктивности комплексной переработки морских ресурсов и более рациональное их использование.

Цель исследования. Цель данной диссертационной работы - изучить биологическую активность низкомолекулярных метаболитов водорослей дальневосточных морей, относящихся к трем отделам: Clorophyta, Phaeophyta, Rhodophyta. Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1) получить экстракты из морских водорослей Охотского и Японского морей и охарактеризовать их биологическую активность, определить виды водорослей наиболее перспективные для дальнейшего изучения;

2) выделить липофильные экстракты из бурых водорослей, относящихся к порядкам Laminariales и Fucales и изучить влияние условий заготовки водорослевого материала на биологическую активность липофильных экстрактов;

3) изучить биологическую активность низкомолекулярных метаболитов, выделенных из липофильных экстрактов 4-х видов бурых водорослей: Saccharina cichorioides, Fucus evanescens, Eualaria fistulosa и Sargassum pallidum;

4) сравнить биологическую активность глицерогликолипидов выделенных из липофильных экстрактов двух видов красных: Tichocarpus crinitus и Neorhodomela larix и четырех видов бурых водорослей: S. cichorioides, F. evanescens, Е. fistulosa и S. pallidum и охарактеризовать их жирнокислотный состав.

Phaeophyta, Rhodophyta, и отдельных классов низкомолекулярных метаболитов, выделенных из четырех видов бурых водорослей: S. cichorioides, F. evanescens, Е. fistulosa и S. pallidum. Для липофильных экстрактов из F. evanescens и S. cichorioides и отдельных классов низкомолекулярных метаболитов S. cichorioides и S. pallidum изучена биологическая активность в зависимости от места и времени сбора водорослевого материала. Впервые изучена противомикробная гемолитическая и цитотоксическая активность глицерогликолипидов из липофильных экстрактов двух видов красных водорослей: Т. crinitus и N. larix и четырех видов бурых водорослей: S. cichorioides, F. evanescens, Е. fistulosa и S. pallidum.

Практическая значимость. Полученные сведения о противомикробной и цитотоксической активности низкомолекулярных метаболитов морских водорослей в отношении карциномы Эрлиха, при отсутствии цитотоксической активности в отношении нормальных клеток теплокровных животных, могут быть полезны при разработке на их основе различных препаратов медицинского, ветеринарного и сельскохозяйственного назначения. Данные о влиянии физиологического состояния морских макрофитов, места и времени сбора водорослевого материала на изменение биологической активности могут быть использованы при заготовке сырья для получения биологически активных веществ из бурых водорослей.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены автором в виде устных докладов на следующих конференциях: XII Всеросийская молодежная школа-конференция по актуальным проблемам химии и биологии (Владивосток, 714 сентября 2009); XIII Всероссийская молодежная школа-конференция по актуальным проблемам химии и биологии (Владивосток, 7-14 сентября 2010); Международная конференция «Актуальные проблемы химии природных соединений» (Ташкент, 12-13 октября 2010); Пятый международный симпозиум «Химия и химическое образование» (Владивосток, 12-18 сентября 2011).

Публикации. Автором опубликовано пятнадцать работ, из них по теме диссертации - семь, в том числе три статьи в рецензирнуемых научных журналах, определенных ВАК, пять тезисов в сборниках материалов научных конференций.

Личный вклад автора. Экспериментальные данные были получены лично автором и совместно с начальником технологического участка ТИБОХ ДВО РАН к.б.н. Натальей Ивановной Герасименко, ведущим инженером лаборатории химии липидов и углеводов ТИБОХ ДВО РАН Натальей Германовной Бусаровой и старшим лаборантом лаборатории химии пептидов Степаном Викторовичем Логвиным, а также совместно с сотрудниками лаборатории биоиспытания и механизма действия БАВ ТИБОХ ДВО РАН. В работу включены только те результаты экспеиментов, в которых роль соискателя была определяющей.

Благодарность за научное сотрудничество и помощь в работе. Автор выражает искреннюю благодарность научному руководителю д.б.н., профессору Анисимову Михаилу Михайловичу, к.б.н. Наталье Ивановне Герасименко за неоценимую помощь в работе, а также курировании ее химической части, Наталье Германовне Бусаровой за помощь в проведении жирнокислотного анализа липидов, Степану Викторовичу Логвинову за расшифровку полученных спектров ЯМР, к.б.н. Скрипцовой Анне Владимировне за сбор и идентификацию водорослевого материала, к.ф-м.н. Лихацкой Галине Николаевне за помощь в изучении антиоксидантной активности. Автор выражает свою искреннюю благодарность сотрудникам лаборатории микробиологии за внимательное отношении и предоставление коллекционных штаммов микроорганизмов, оборудования и реактивов для работы по определению противомикробной активности, и сотрудникам лаборатории биоиспытания и механизма действия биологически активных веществ, за помощь в работе. Автор также выражает искреннюю благодарность к.х.н. Денисенко В.А., Моисеенко О.П., Ким Н.Ю., д.х.н. Новиковой О.Д., к.б.н. Портнягиной О.Ю.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Мартыяс, Екатерина Александровна

i 19 Выводы

2. Показано, что липофильные экстракты, полученные из красных водорослей Chondrus pinnulatus, Laurencia nipponica, Mazzaella laminar iodes, Neorhodomela larix, Ptilota filicina; зеленых водорослей Acrosiphonia sontarii и Ulva fenestrata и бурых водорослей Saccharina cichorioides, S. japónica, Costaría costata и Scytosiphon lomentaria обладают высокой противомикробной активностью в отношении грамположительных бактерий S. aureus.

3. Установлено, что наибольшие значения противомикробной активности в отношении грамположительных бактерий и патогенных грибов показали липофильные экстракты из образцов S. cichorioides, собранных в марте, в сентябре и в октябре. Самая высокая цитотоксическая активность в отношении спленоцитов мышей, показана для липофильных экстрактов из образцов S. cichorioides, собранных в марте и в ноябре, а в отношении эмбрионов морского ежа - для липофильных экстрактов из образцов водорослей собранных в сентябре и в октябре.

4. Показано, что липофильные экстракты из бурых водорослей, собранных в холодное время года (март, ноябрь): Fucus evanescens (бухта Рудная, Японское моря), S. cichoriodes (Японское море) и Sargassum pallidum (Японское море) и низкомолекулярные метаболиты (липиды и пигменты) из бурой водоросли F. evanescens, обладают высокой гемолитической активностью.

5. Установлено, что хлорофиллы и фукоксантин из образцов S. cichorioides, собранных в марте, обладают значительной антиоксидантной и противомикробной активностью, при отсутствии гемолитической и цитотоксической активности. Суммарная фракция, содержащая триглицериды, свободные жирные кислоты, хлорофиллы, напротив, показала высокую цитотоксическую и гемолитическую активности. Низкомолекулярные метаболиты, выделенные из бурых водорослей S. cichorioides, собранных в ноябре месяце, не показали высокого противомикробного действия, но обладали значительной гемолитической активностью.

6. Из липофильных экстрактов двух видов красных водорослей: Tichocarpus crinitus и N. larix и четырех видов бурых водорослей: S. cichorioides, F. evanescens, Eualaria fistulosa и Sargassum pallidum выделены три характерных для растений класса глицерогликолипидов: 1,2-диацил-3-0-(Р-0-галактопиранозил)-8п-глицерин (МГДГ), 1,2-диацил-3-0-(а-0-галактопиранозил-(1,6)-0-Р-0-галактопиранозил)-8п-глицерин (ДГДГ), 1,2-диацил-3-0-(6-дезокси-6-сульфо-а-0-глюкопиранозил)-8п-глицерин (СХДГ). Из бурых водорослей S. cichorioides, Е. fistulosa и S. pallidum были выделены глицерогликолипиды, которые были идентифицированы как 1-0-ацил-3-0-(Р-Б-галактопиранозил)-8п-глицерины (МГМГ). Структуры гликозидной части глицерогликолипидов, принадлежащих к одному классу, имели идентичное строение, в то же время существенно отличались по составу жирных кислот и степени насыщенности в зависимости от вида водоросли и времени сбора.

7. Показано, что самая высокая противомикробная активность в отношении S. aureus и С. albicans, была характерна для МГДГ из бурых водорослей F. evanescens и Е. fistulosa.

8. Показано, что МГДГ из Е. fistulosa обладают цитотоксической активностью в отношении клеток карциномы Эрлиха в достаточно низкой концентрации (ЭД50=7,3 мкг/мл).

Заключение

Морские водоросли, относящиеся к трем отделам: Chlorophyta, Phaeophyta и Rhodophyta, широко распространены в дальневосточных морях. Некоторые виды образуют массовые заросли вдоль побережья Японского и Охотского морей. Исследование, направленное на поиск биологически активных метаболитов морских водорослей, является актуальной задачей в силу того, что сырье для получения биологически активных веществ доступно, а выделенные соединения перспективны для разработки на их основе новых лекарственных и профилактических средств для медицины, ветеринарии и сельского хозяйства.

В данной работе был проведен анализ биологической активности общих, липофильных и гидрофильных экстрактов морских водорослей трех отделов Chlorophyta, Phaeophyta и Rhodophyta, липидов, фотосинтетических пигментов и их суммарных фракций, выделенных из двух видов красных водорослей (N. larix и Т. crinitus) и четырех видов бурых водорослей (Е. fistulosa, F. evanescens, S. cichorioides и S. pallidum). Установлено, что липофильные экстракты (ЛЭ) полученные из всех видов исследованных водорослей обладают высокой ингибирующей активностью в отношении грамположительных бактерий S. aureus.

Показано, что вещества, содержащиеся в ЛЭ из S. cichorioides, F. evanescens и S. pallidum обладают противомикробной активностью, которая меняется в зависимости от места и сезона сбора водорослевого материала. Показано, что ЛЭ из F. evanescens, собранные в бухте Кратерной (о. Янкича), обладали самой высокой противомикробной активностью относительно тестовых штаммов микроорганизмов в сравнении с липофильными экстрактами из водорослей, собранных в прибрежной зоне островов Курильской гряды (Итуруп, Уруп и Парамушир) и бухте Рудная (Японское море). Широкий спектр противомикробного действия на исследуемые микроорганизмы показали ЛЭ из образцов S. cichorioides, собранных в марте, в сентябре и в октябре, в прибрежных зонах Японского моря. Установлено, что липиды, обладающие противомикробной активностью, в бурых водорослях S. pallidum накапливаются в холодное время года.

Обнаружено, что ЛЭ из S. cichoriodes и F. evanescens обладают выраженной рН-зависимой гемолитической активностью, которая также зависит от места и сезона сбора водорослевого сырья. Так, самые высокие показатели гемолитической активности установлены для ЛЭ, полученных из образцов F. evanescens, собранных в бухте Рудная (Японское море), а также для липидов, выделенных из бурых водорослей S. cichoriodes и S. pallidum, собранных в ноябре месяце. Таким образом, можно утверждать, что процесс накопления липофильных веществ, обладающих противомикробной и гемолитической активностями в бурых водорослях S. cichoriodes и S. pallidum, подвержен сезонным колебаниям, а в бурых водорослях F. evanescens зависит, в большей степени, от места произрастания водорослей.

Было показано, что фотосинтетические пигменты, хлорофиллы и каротиноиды из бурых водорослей S. cichorioides и F. evanescens проявляют себя как вещества с антиоксидантной активностью. Кроме того, ФСП из S. cichorioides обладают высокой антиоксидантной и противомикробной активностью в отношении всех тестовых штаммов микроорганизмов, использованных в данной работе. В то же время, эти пигменты не обладали гемолитической и цитотоксической активностью в отличие от суммарной фракции, содержащей кроме хлорофилла, триацилглицерины и свободные жирные кислоты.

Установлено, что наибольшей биологической активностью обладают глицерогликолипиды (Г Л) бурых водорослей. Три характерных класса глицерогликолипидов: 1,2-диацил-3-0-(Р-0-галактопиранозил)-зп-глицерин

МГДГ), 1,2-диацил-3-0-(а-0-галактопиранозил-(1,6)-0-Р-0-галактопиранозил)-зп-глицерин (ДГДГ), 1,2-диацил-3-0-(6-дезокси-6-сульфо-а-0-глюкопиранозил)-8п-глицерин (СХДГ) были выделены из липофильных экстрактов двух видов красных водорослей: Т. crinitus и N. larix и четырех видов бурых водорослей: S. cichorioides, F. evanescens, Е. fistulosa и S. pallidum. Из бурых водорослей S. cichorioides, Е. fistulosa и S. pallidum были выделены глицерогликолипиды, которые были идентифицированы как 1 -0-ацил-3-0-(Р-0-галактопиранозил)-зп-глицерины (МГМГ). Структуры гликозидной части ГЛ, принадлежащие к одному классу, имели идентичное строение, в то же время существенно отличались по составу жирных кислот в зависимости от вида водоросли и времени сбора.

Для каждого класса выделенных гликолипидов морских водорослей был определен состав жирных кислот (ЖК). Проведенное исследование показало, что во всех выделенных МГДГ наблюдалось высокое содержание пальмитиновой кислоты, миристиновой и суммы олеиновой и а-линоленовой кислот. Основной по содержанию ЖК во всех исследованных ДГДГ была пальмитиновая кислота. Кроме того, во всех выделенных ДГДГ наблюдалось высокое содержание суммы олеиновой и а-линоленовой кислот. Степень насыщенности ЖК в исследуемых ДГДГ морских водорослей была выше, чем в МГДГ. Показано, что СХДГ - это самые насыщенные ГЛ морских водорослей, в которых пальмитиновая кислота является превалирующей. Также как и во всех изученных нами ГЛ морских водорослей в СХДГ содержались значимые количества миристиновой и суммы олеиновой и а-линоленовой кислот.

Установлено, что МГДГ обладают самым высоким биологическим потенциалом по сравнению с остальными исследуемыми ГЛ. МГДГ из бурых водорослей Е. fistulosa и F. evanescens обладают высокой противомикробной активностью. МГДГ из Е. fistulosa хотя и показывают несколько меньшую активность в отношении патогенных микроорганизмов, но в отличие от МГДГ из F. evanescens не токсичны для клеток теплокровных животных. Кроме того, только МГДГ из Е. fistulosa оказывали цитотоксическое действие в отношении клеток карциномы Эрлиха в достаточно низкой концентрации ЭД5о 7,3 мкг/мл. Эти данные свидетельствуют о том, что МГДГ из Е. fistulosa могут быть в дальнейшем использованы для разработки противоопухолевых и противомикробных препаратов широкого спектра действия.

Показано, что ДГДГ из морских водорослей в большей степени ингибировали рост дрожжеподобных грибов С. albicans. Наибольшие значения противомикробной активности относительно этого штамма грибов показали ДГДГ из липофильных экстрактов водорослей: N. larix, Е. fistulosa, S. pallidum собранных в августе. Исследованные ДГДГ из морских водорослей не обладали гемолитической активностью за исключением ДГДГ из Е. fistulosa, которые при незначительном гемолизе обладали цитотоксичностью относительно опухолевых клеток карциномы Эрлиха. Высокой гемолитической активностью обладали ДГДГ из бурых водорослей F. evanescens, S. cichorioides и S. pallidum собранных в ноябре месяце.

Обнаружено, что СХДГ, выделенные из ЛЭ двух видов красных водорослей: Т. crinitus и N. larix и четырех видов бурых водорослей: S. cichorioides, F. evanescens, E. fistulosa и S. pallidum в большей степени ингибировали рост грибов, чем бактерий, наибольшая ингибирующая активность была показана в отношении фитопатогенных грибов S. glycines и F. oxysporum. Значимая гемолитическая активность была отмечена для СХДГ из бурых водорослей S. cichorioides и S. pallidum, собранных в ноябре месяце.

В работе было отмечено, что МГМГ обладали меньшим биологическим потенциалом, чем МГДГ, только МГМГ из S. pallidum в значимой степени ингибировали рост грамположительных бактерий и условно-патогенных грибов, в то время как МГДГ из этой водоросли не показывали такой активности. Среди всех исследованных МГМГ самой высокой противомикробной активностью обладали МГМГ из S. cichorioides.

Таким образом, показано, что биологическая активность ГЛ в значительной степени зависит от ЖК состава. Так, для МГДГ была отмечена высокая противомикробная активность в отношении S. aureus и Е. coli, связанная с накоплением миристиновой кислоты. Отмечена высокая противомикробная активность МГДГ морских водорослей в сравнении с другими классами ГЛ. Обнаружено, что гемолитической активностью обладают все ГЛ, выделенные из липофильных экстрактов двух видов красных водорослей: Т. crinitus и N. larix и четырех видов бурых водорослей: S. cichorioides, F. evanescens, Е. fistulosa и S. pallidum. Установлено, что биологическая активность ГЛ зависит не только от сруктуры гликозидной части, но и от состава ЖК в ГЛ.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мартыяс, Екатерина Александровна, Владивосток

1. Анисимов М.М., Герасименко Н.И., Чайкина Е.Л., Серебряков Ю.М. Биологическая активность метаболитов лекарственного растения Kalanchoe daigremontiana II Изв. РАН. Сер. биол. 2009. № 6. С. 669-676.

2. Бузников Г.А., Подмарев В.И. Морские ежи Strongylocentrotus droebachiensis, S. nudus, S. intermedius II Объекты биологии развития. M.: Наука, 1975. Гл.10. С. 188-216.

3. Васьковский В.Е. Морские макрофиты. Систематика, биохимия, использование / В.Е. Васьковский // Соросовский образовательный журнал. 1998. № 7. С. 5157.

4. Герасименко Н.И., Бусарова Н.Г., Моисеенко О.П. Возрастные изменения в содержании липидов, жирных кислот и пигментов у бурой водоросли Costaría costata II Физиология растений. 2010а. Т. 57, № 1. С. 68-75.

5. Герасименко Н.И., Чайкина Е.Л., Бусарова Н.Г., Анисимов М.М. Противомикробная и гемолитическая активности низкомолекулярных метаболитов бурой водоросли Laminaria cichorioides Miyabe // Прикл. биохим. микробиол. 20106. Т. 46, № 4. С. 467^171.

6. Гусарова И.С. Перспективная промысловая водоросль Alaría fistulosa в морях Дальнего Востока СССР // 6-ой Сов. Яп. Симпоз. по вопросам аквакультуры и повышения биопридуктивности Мирового океана. Москва-Батуми: Наук думка. 1977. С. 43^14.

7. Кизеветгер И.В., Суховеева М.В., Шмелькова Л.П. Промысловые морские водоросли и травы дальневосточных морей. М.: Легкая и пищевая промышленность. 1981. С. 112.

8. Клочкова Н.Г., Березовская В.А. Водоросли камчатского шельфа. Распространение, биология, химический состав. Владивосток, Петропавловск-Камчатский: Дальнаука. 1997. 155 с.

9. Клочкова Н.Г., Березовская В.А. Макрофитобентос Авачинской губы и его антропогенная деструкция. Владивосток: Дальнаука. 2001. С. 205.

10. Куликова И.В., Хотимченко C.B. Липиды разных частей таллома бурой водоросли Sargassum miyabei из Японского моря // Биология моря. 2000. Т. 26, № 1. С. 55-57.

11. Левин С.Л. О применении морской капусты // Наука и жизнь. 1945. № 4. С. 16-18.

12. Лукьянчук И.Н. Морская капуста ценный корм для животных // Социалистическое животноводство. 1950. № 12. С. 16-20.

13. Петров Ю.Е. // Жизнь растений. Отдел бурые водоросли (Phaeophyta). M.: Просвещение, 1977. Т. 3. С. 114-192 .

14. Прокофьева Н.Г., Лихацкая Г.Н., Волкова О.В., Анисимов М.М., Киселева М.И., Ильин С.Г., Будина Т.А., Похило Н.Д. Действие бетулафолиентетраола на эритроцитарные и модельные мембраны // Биологические мембраны. 1992. Т. 9, №. 9. С. 954-960.

15. Хотимченко C.B. Липиды морских водорослей-макрофитов и трав. Структура, распределение, анализ. Дальнаука. Владивосток. 2003. 234. с.

16. Щербаков, В.Г. Биохимия: под редакцией В.Г. Щербакова/ В.Г. Щербаков, В.Г. Лобанов, Т.Н. Прудникова, А.Д. Минакова. Санкт-Петербург. Колос. 2003. 440. с.

17. Albuquerque M.R., Takaki C., Koening M.L. Detection of antimicrobial activity in marine seaweeds // Rev. Inst. Antibiot. Univ. Fed. Pernambuco Recife. 1983. Vol. 21. P. 127-138.

18. Al-Fadhli A., Wahidulla S., D'Souza L. Glycolipids from the red alga Chondria armata

19. Ara J., Sultana V., Qasim R., Ehteshamul-Haque S., Ahmad V.U. Biological activity of Spatoglossum asperum: a brown alga // Phytother. Res. (England). 2005. Vol. 19. N. 7. P. 618-623.

20. Araki S., Eichenberger W., Sakurai T., Sato N. Distribution of diacylglycerylhydroxymethyltrimethyl-p-alanine (DGTA) andphosphatidylcholine in brown algae II Plant Cell Physiol. 1991. Vol. 32. N. 5. P. 623-628.

21. Araki S., Nisizawa K. Notes on the lipids classes and fatty acids composition of Porphyra perforata II Fish. Sci. 1996. Vol. 62. N. 4. P. 656-657.

22. Araki S., Sakurai T., Kawaguchi A., Murata N. Positional distribution of fatty acids in glycerolipids of the marine red algae, Porphyra yezoensis II Plant Cell Physiol. 1987. Vol. 28. N. 5. P. 7761-7766.

23. Araki S., Sakurai T., Oohusa T., Kayama M. Components fatty acids of lipid from Gracilaria verrucosa II Bull. Jpn. Soc. Sci. Fish. 1986. Vol. 52. N. 10. P. 1871.

24. Arunkumar K., Selvapalam N., Rengasamy R. The antibacterial compound sulphoglycerolipid 1 -0 palmitoyl-3 -0(6 '-sulpho-a-quinovopyranosyl)-glycerol from Sargassum wightii Greville (Phaeophyceae) // Bot. Mar. 2005. Vol. 48. N. 5. P.441-445.

25. Arunkumar K., Sivakumar S.R., Rengasamy R. Review on bioactive potential in seaweeds (marine macroalgae): A special emphasis on bioactivity of seaweeds against plant pathogens // Asian J. Plant Sci. 2010. Vol. 9. P. 227-240.

26. Berge, J.P. Debiton E., Dumay J., Durand P., Barthomeuf C. In vitro anti-inflammatory and anti-proliferative activity of sulfolipids from the red alga Porphiridium cruentum II J. Agric. Food Chem. 2002. Vol. 50. P. 6227-6232.

27. Bhakuni D.S., Dhawan B.N., Garg H.S., Goel A.K., Mehrotra B.N., Srimal R.C., Srivastava M.N. Bioactivity of marine organisms: Part Vl-Screening of some marine flora from Indian coasts // Indian J. Exp. Biol. 1992. Vol. 30. P. 512-517.

28. Bhargava A., Srivastava A., Kumbhare V.C. Antifungal activity of poliphenolic complex of Acacia nilotica bark // Ind. Forest. 1998. Vol. 124. P. 292-298.

29. Bigogno C., Khozin-Goldberg I., Boussiba S., Vonshak A., Cohen Z. Lipid and fatty acid composition of the green oleaginous alga Parietochloris incisa, the richest plant source of arachidonic acid // Phytochemistry. 2002. Vol. 60. N 5. P. 497-503.

30. Bruno A., Rossi C., Marcolongo G., Di Lena A., Venzo A., Berrio C.P., Corda D. Selective in vivo fnti-inflammatory action of the galactolipid monogalactosyldiacylglycerol // Eur. J. Pharmacol. 2005. Vol. 524. N. 1-3. P. 159-168.

31. Brush P., Percival E. Chlorophita: Chlorophyceae: glycolipids present in eight gena of the Chlorophyceae // Phytochemistry. 1972. Vol. 11. N. 5. P. 1847-1849.

32. Caccamese S., Azzolina R. Screening for antimicrobial activities in marine algae from Eastern Sicily // Planta Med. 1979. Vol. 37. P. 333-339.

33. Cantillo-Ciau Z., Moo-Puc R., Quijano L., Freile-Pelegrin Y. The Tropical Brown Alga Lobophora variegata: A Source of Antiprotozoal Compounds // Mar. Drugs. 2010. Vol. 8. P. 1292-1304.

34. Carreau J.P, Dubacq J.P. A daptation of macro-scale method to the micro-scale for fatty acid methyl transesterification of biological lipid extracts // J. Chromatogr. 1978. Vol. 151. P. 384-390.

35. Carte B.K. Biomedical potential of marine natural productsm // Bioscience. 1996. Vol. 46. N. 4. P. 271-286.

36. Chang H.W., Jang K.H., Lee D., Kang H.R., Kim T-Y., Lee B.H., Choi B.W., Kim S., Shin J. Monoglycerides from the brown alga Sargassum sagamianum: Isolation, synthesis, and biological activity // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2008. Vol. 18. P. 3589-3592.

37. Chenieux J.C., Verbist J.F., Biard J.F., Clement E., Le Boterff, J., Maupas, P., Lecocq M. Seaweeds of French atlantic coast with antimitotic activity // Planta Med. 1980. Vol. 40. P. 152-162.

38. Choudhary M.I., Majeed A., Shabbir M., Ghani U., Shameel M. A succinylanthranilic acid ester and other bioactive constituents of Jolyna laminarioides II Phytochemistry. 1997. Vol. 46. N 7. P. 1215-1218.

39. Christie W.W. Equivalent chain-lengths of methyl ester derivatives of fatty acids on gas chromatography // J. Chromatogr. 1988. Vol. 447. P. 305-314.

40. Colombo M.L., Rise P., Giavarini F., de Angeles L., Galli C., Bolis C.L. Marine macroalgae as sources of polyunsaturated fatty acids // Plant foods for human nutrition. 2006. Vol. 61. N. 2. P. 64-69.

41. Coombe D.R., Parish C.R., Ramshaw I.A., Snowden J.M. Analysis of the inhibition of tumour metastasis by sulphated polysaccharides // Int. J. Cancer. 1987. Vol. 39. N. l.P. 82-88.

42. Cox S., Abu-Ghannam N., Gupta S. An assessment of the antioxidant and antimicrobial activity of six species of edible Irish seaweeds // Asean Food Journal. 2010. Vol. 17. N. LP. 205-220.

43. Cui Z., Li Y.S., Liu H.B., Yuan D., Lu B.R. Sulfoglycolipid from the marine brown alga Sargassum hemiphyllum II J. Asian Natur. Prod. Res. 2001. Vol. 3. N. 2. P. 117122.

44. Culioli G., Daoudi M., Ortalo-Magne A., Vails R., Piovetti L. (S)-12-Hydroxygeranylgeraniol-derived diterpenes from the brown alga Bifurcaría bifurcata II Phytochemistry. 2001. Vol. 57. N 4. P. 529-535.

45. D'Orazio N., Gemello E., Gammone M.A., de Girolamo M., Ficoneri C., Riccioni G. Fucoxantin: A Treasure from the Sea // Mar. Drugs. 2012. Vol. 10. P. 604-616.

46. Dembitsky V.M., Rozentsvet O.A., Pechenkina E.E. Glycolipids, phospholipids and fatty acids of brown algal species //Phytochemistry. 1990. Vol. 29. P. 3417-3423.

47. Denis G.V., Nikolajezyk B.S., Schnitzler G.R. An emerging role for bromodomain -containing proteins in chromatin regulation ang transcriptional control of adipogenesis // FEBS Lett. 2010. Vol. 15. P. 3260-3268.

48. Desbois A.P., Lebl T., Yan L., Smith V.J. Isolation and structural characterisation of two antibacterial free fatty acids from the marine diatom, Phaeodactylum tricornutum II Appl. Microbiol. Biotechnol. 2008. Vol. 81. N. 4. P. 755-764.

49. Desbois A.P., Mearns-Spragg A., Smith V.J. A fatty acid from the diatom Phaeodactylum tricornutum is antibacterial against diverse bacteria including multi-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) // Mar. Biotechnol. 2009. Vol. 11. P. 45-52.

50. Desbois A.P., Smith V.J. Antibacterial free fatty acids: activities, mechanisms of action and biotechnological potential // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2010. Vol. 85. N. 5. P.1629-1642.

51. Fenical W., Sims J.J. Cycloeudesmol, an antibiotic cyclopropane conatinnin sequiterpene from the marine alga, Chondria oppositiclada Dawson // Tetrahedron Lett. 1974. Vol. 13. P. 1137-1140.

52. Folmer F., Jaspars M., Dicato M., Diederich M. Photosynthetic marine organisms as a source of anticancer compounds // Phytochem. Rev. 2010. Vol. 9. P. 557-579.

53. Freile-Pelegnn Y. Algas en la «botica» // Avance Perspective. 2001. Vol. 20. N. l.P. 110.

54. Freile-Pelegrin Y., Morales J.L. Antibacterial activity in marine algae from the coast of Yucatan, Mexico // Bot. Mar. 2004. Vol. 47. N. 2. P. 140-146.

55. Furusawa E., Furusawa S. Anticancer activity of a natural product, viva-natural, extracted from Undaria pinnantifida on intraperitoneal^ implanted Lewis lung carcinoma // Oncology. 1985. Vol. 42, N. 6. P. 364-369.

56. Gad M., Awai K., Shimojima M., Yamaryo Y., Shimada H., Masuda T., Takamiya K., Ikai A., Ohta H. Accumulation of plant galactolipid affects cell morphology of Escherichia coli II Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. Vol. 286. P. 114-118.

57. Georg Th., Jayanthi Bal N., Krishna-Murthy S. Studies on hemolysis of human erythrocytes by linoleic acid // J. Biosci. 1979. Vol. 1. P. 385-392.

58. Gerwick W.H., Fenical W. Ichthyotoxic and cytotoxic metabolites of the tropical brown alga Stypopodium zonale (Lamouroux) papenfuss // J. Org. Chem. 1981. Vol. 46. N. l.P. 22-27.

59. Gerwick W.H., Tan L.T., «Sitachitta N. Nitrogencontaining metabolites from marine cyanobacteria» in The Alkaloids, G. Cordell, Ed., Academic Press, San Diego, Calif, USA. 2001. P. 75-184.

60. Giner J.L., Li X., Boyer G.L. Sterol composition of Aureoumbra lagunensis, the Texas brown tide alga // Phytochemistry. 2001. Vol. 57. N. 5. P. 787-789.

61. Glickman M. Utilisation of seaweed hydrocolloids in the food industry // Hydrobiology. 1987. N. 151/152. P. 31^17.

62. Glombitza K.W. Marine Algae in Pharmaceutical Science; Hoppe, H.A., Levring, T., Eds.; Walter de Gruyter: New York, NY, USA. 1979. Vol. 1. P. 303-342.

63. Goncharova S.N., Sanina N.M., Kostetsky E.Y. Role of lipids in molecular thermoadaptation mechanisms of seagrass Zoster a marina II Biochem. Soc. Trans. 2000. Vol. 28, N 6. P. 887-890.

64. Gordon D.M. Danishefsky S.J. Synthesis of a cyanobacterial sulfolipid: confirmation of its structure, stereochemistry, and anti-HIV-1 activity // J. Am. Chem. Soc. 1992. Vol. 114. P. 659-663.

65. Gunstone F.D., Herslof B.G. Lipid Glossary. 2. Bridgwater: The Oily Press, 2000. 249 p.

66. Guschina I.A., Harwood J.L. Algal lipids and effect of the environment on their biochemistry // Lipids in Aquatic Ecosystems / Eds. Arts M.T., Brett M.T., Kainz M.J. Springer Science: Business Media LLC. 2009. P. 1-24.

67. Gustafson K.R., Cardellina J.H., Fuller R.W., Weilow O.S., Kiser R.F., Snader K.M., Patterson G.M., Boyd M.R. AIDS-antiviral sulpholipids from cyanobacteria (blue-green algae) // J. Natl. Cancer Inst. 1989. Vol. 81. P. 1254-1258.

68. Ham Y.M., Kim K-N., Lee W.J., Lee N.H., Hyun C-G. Chemical constituents from Sargassum micracanthum and antioxidant activity // Int. J. Pharmacol. 2010. Vol. 6, N. 2. P. 147-151.

69. Hartman L.L., Redino C.A. Lab. Practicum. 1973. Vol. 22. N. 6. P. 475^176.

70. Harwood J.L. Effect of the environment on the acyl lipids of algae and higher plants // Structure, Functions and Metabolism of Plant Lipids / Eds P.-A. Siegenthaler, W. Eichenberger. Amsterdam edc.: Elsevier Science Publishers. 1984. P. 543-550.

71. Harwood J.L. Membrane lipids in algae // Lipids in Photosynthesis: Structure, Function and Gentics / Eds P.-A. Siegenthaler, N. Murata. Dordrecht. The Netherlands: Kluwer Academic Publishers. 1998. P. 53-64.

72. Harwood J.L. Plant acyl lipids: structure, distribution and analysis // The Biochemistry of Plants/ Eds. P.K. Stumpf, E.E. Conn. New York: Academic press 1980. Vol. 4. P. 1-55.

73. Hay M.E. Marine chemical ecology: what's known and what next? // J. Exp. Mar. Biol. Eco. 1996. Vol. 200, N. 1-2. P. 103-134.

74. Hellio C., Bremer G., Pons A.M., Le Gal Y., Bourgougnon N. Inhibition of the development of microorganisms (bacteria and fungi) by extracts of marine algae from Brittany, France // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2000. Vol. 54, N. 4. P. 543549.

75. Hennequart F. Seaweed applications in human health/nutrition: the example of algal extracts as functional ingredients in novel beverages. 4th International Symposium Health and Sea, Granville France. 2007.

76. Herrero M., Ibanez E., Cifuentes A., Reglero G., Santoyo S. Dunaliella salina microalga pressurized liquid extracts as potential antimicrobials // J. Food. Prot. 2006. Vol. 69. N. 10. P. 2471-2477.

77. Hiraga Y., Shikano T., Widianti T., Ohkata K., Three new glycolipids with cytolytic activity from cultured marine dinoflagellate Heterocapsa circularisquama. Nat. Prod. Res. 2008. Vol. 22. N. 8. P. 649-657.

78. Hofmann M., Eichenberger W. Lipids and fatty acid composition of the marine brown algae Dictyopteris membranaceae II Plant Cell Physiol. 1997. Vol. 38. N. 9. P. 1046-1052.

79. Holdt S.L., Kraan S. Bioactive compounds in seaweed: functional food applications and legislation // J. Appl. Phycol. 2011. Vol. 23. P. 543-597.

80. Jones A.L., Harwood J.L. Lipid composition of the brown algae Fucus vesiculosus and

81. Kamenarska Z., Stefanov K., Dimitrova-Konaklieva S., Najdenski H., Tsvetkova I., Popov S. Chemical composition and biological activity of the brackishwater green alga Cladophora rivularis (L.) Hoek // Bot. Mar. 2004. Vol. 47. N. 3. P. 215-221.

82. Karabay-Yavasoglu N., Sukatar A., Ozdemir G., Horzum Z. Antimicrobial activity of volatile components and various extracts of the red algae Jania rubens II Phytother. Res. 2007. Vol. 21. P. 153-156.

83. Kayama M., Araki S., Sato S. Lipids of marine plants // Marine Biogenic Lipids, Fats and Oils / Ed. R.G. Ackman. Florida: CRC Press Inc. Boca Raton. 1989. Vol. 2. P. 348.

84. Khotimchenko S.V. Fatty acids of green macrophytic algae from the Sea of Japan // Phytocnemistry. 1993. Vol. 32. N. 5. P. 1203-1207.

85. Kim M. C., Kwon H.C., Kim S.N., Kim H.S., Um B.H. Plastoquinones from Sargassum yezoense; chemical structures and effects on the activation of peroxisome proliferator-activated receptor gamma // Chem. Pharm. Bull. 2011. Vol. 59. N. 7. P. 834-838.

86. Kim Y.C., An R.B., Yoon N.Y., Nam T.J., Choi J.S. Hepatoprotective constituents of the edible brown alga Ecklonia stolonifera on tacrine-induced cytotoxicity in Hep G2 cells // Arch. Pharm. Res. 2005. Vol. 28. N. 12. P. 1376-1380.

87. Kim Y.H., Kim E.-H., Lee Ch., Kim M.-H., Rho J.-R. Two new monogalactosyl diacylglycerols from brown alga Sargassum thunbergii II Lipids. 2007. Vol. 42. N. 4. P. 395-399.

88. Kim Y.S., Linton J.R., Mertin D.F. Hemolysis of rabbit and mullet red cells by Gymnodinium breve toxin // Toxicon. 1974. Vol. 12. P. 439^141.

89. Kim Y.S., Padilla G.M. Hemolytically active components from P. parvum and G. breve toxins // Life Sci. 1976. Vol. 21. P. 1287-1292.

90. Kojima M., Shiraki H., Ohnishi M., Ito S. Two diglycosyldiacylglycerol isomers in plant leaves, ferns, mosses and seaweeds // Phytochemistry. 1990. Vol. 29. N. 4. P. 1161-1163.

91. Kolanjinathan K., Ganesh P., Govindarajan M. Antibacterial activity of ethanol extracts of seaweeds against fish bacterial pathogens // Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci. 2009. Vol. 13. N. 3. P. 173-177.

92. Kubanek J., Jensen P.R., Keifer P.A., Sullards M.C., Collins D.O., Fenical W. Seaweed resistance to microbial attack: A targeted chemical defense against marine fungi // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. Vol. 100. N. 12. P. 6916-6921.

93. Kubo S., Mimaki Y., Terao M., Sashida Y., Nikaido T., Ohmoto T. Acylated cholestane glycosides from the bulbs of Ornithogalum saundersiae II Phytochemistry. 1992. Vol. 31. P. 3969-3973.

94. Kurata K., Taniguchi K., Suzuki M. Cyclozonarone, a sesquiterpene-substituted benzoquinone derivative from the brown alga Dictyopteris undulata II Phytochemistry. 1996. Vol. 41. N. 3. P. 749-752.

95. Kurata K., Taniguchii K., Takashima K., Hayashi I., Suzuki M. Feeding-deterrent bromophenols from Odonthalia corymbifera II Phytochemistry. 1997. Vol. 45. N. 3.P. 485-487.

96. Mabeau S., Fleurence J. Seaweed in food products: biochemical and nutritional aspects // Trends Food Sci. Technol. 1993. Vol. 4. P. 103-107.

97. Maeda H., Hosokawa M., Sashima Т., Funayama K., Miyashita K. Effect of medium-chain triacylglycerols on anti-obesity effect of fucoxantin // J. Oleo Sci. 2007. Vol. 56. N. 12. P. 615-621.

98. Maeda H., Hosokawa M., Sashima Т., Funayama K., Miyashita K. Fucoxanthin from edible seaweed, Undaria pinnatifida, shows antiobesity effect through UCP1 expression in white adipose tissues // Biochem. Biophys. Res. Com. 2005. Vol. 332. P. 392-397.

99. Mahasneh I., Jamal M., Kashashneh M. Zibdeh M. Antibiotic-activity of marine-algae against multi-antibiotic resistant-bacteria // Microbios. 1995. Vol. 83. P. 23-26.

100. Manilal A., Sujith S., Sabarathnam В., Kiran G.S., Selvin J., Shakir C., Lipton A.P. Biological activity of the red alga Laurencia brandenii II Acta Bot. Croat. 2011. Vol. 70. N. l.P. 81-90.

101. Meldahla A.-S., Edvardsenb B., Fonnumc F. Toxicity of four potentially ichthyotoxic marine phytoflagellates determined by four different test methods // J. Toxicol. Environment. Health. 1994. Vol. 42. N. 3. P. 289-301.

102. Meyer K.D., Paul V.J. Intraplant variation in secondary metabolite concentration in three species of Caulerpa (Chlorophyta: Caulerpales) and its effects on herbivorous fishes // Mar. Ecol. Prog. Ser. 1992. Vol. 82. N. 3. P. 249-257.

103. Miyashita K., Nishikawa Sh., Beppu F., Tsukui T., Abe M., Hosokawa M. The allenic carotenoid fucoxanthin, a novel marine nutraceutical from brown seaweeds // J. Sci. Food Agricult. 2011. Vol. 91. N. 7. P. 1166-1174.

104. Moo-Puc R., Robledo D., Freile-Pelegrin Y. Improved antitumoral activity of extracts derived from cultured Penicillus dumetosus II Tropical J. Pharm. Res. 2011. Vol. 10. N. 2. P. 177-185.

105. Moore R.E. Cyclic peptides and depsipeptides from cyanobacteria: a review // J. Ind. Microbiol. 1996. Vol. 16. N. 2. P. 134-143.

106. Morales J.L., Cantillo-Ciau Z.O., Sanchez-Molina I., Mena-Rejon G.J. Screening of antibacterial and antifungal activities of six marine macroalgae from coasts of Yucatan Peninsula // Pharmaceut. Biol. 2006. Vol. 44. N. 8. P. 632-635.

107. Mtolera M.S.P., Semes A.K. Antimicrobial activity of extracts from six green algae from Tanzania // Current Trends in Marine Botanical Research in East African. 1996. P. 211-218.

108. Oh K.-B., Lee J.H., Chung S.-C., Shin J., Shin H.J., Kim H.-K., Lee H.-S. Antimicrobial activities of the bromophenols from the red alga Odonthalia corymbifera and some synthetic derivatives // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2008. Vol. 18. N. 1. P. 104-108.

109. Oh K.B., Lee J.H., Lee J.W., Yoon K.M., Chung S.C., Jeon H.B., Shin J., Lee H.S. Synthesis and antimicrobial activities of halogenated bis(hydroxyphenyl)methanes // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2009. Vol. 19. N. 3. P. 945-948.

110. Okai Y., Higashi-Okai K. Potent anti-inflammatory activity of pheophytin A derived from edible green alga, Enteromorpha prolifera (Sujiao-Nori) // Int. J. Immunopharmacol. 1997. Vol. 19. P. 355-358.

111. Osman M.E.H., Abushady A.M., Elshobary M.E. In vitro screening of antimicrobial activity of extracts of some macroalgae collected from Abu-Qir bay Alexandria, Egypt // Afr. J. Biotechnol. 2010. Vol. 9. N. 12. P. 7203-7208.

112. Padmakumar K., Ayyakkannu K. Seasonal variation of antibacterial and antifungal activities of the extracts of marine algae from southern coasts of India // Bot. Mar. 1997. Vol. 40. N. 1-6. P. 507-516.

113. Palermo J.A., Flower P.B., Seldes A.M. Chondriamides A and B, new indolic metabolites from the red alga Chondria sp. // Tetrahedron Lett. 1992. Vol. 33. N. 22. P. 30973100.

114. Parrish C.C., Bodennec G., Gentien P. Haemolytic glycoglycerolipids from Gymnodinium species // Phytochemistry. 1998. Vol. 47. N. 5. P. 783-787.

115. Paster Z., Abbott B.C. Hemolysis of rabbit erytrocytes by Gymnodinium breve toxin // Toxicon. 1969. Vol. 7. P. 245.

116. Paul V.J. Seaweed chemical defenses on coral reefs. In: Paul V.J. (ed) Ecological Roles of Marine Natural Products // Cornell University Press, USA. 1992. P. 24-50.

117. Paul V.J., Cruz-Rivera E., Thacker R.W. Chemical mediation of macroalgal-herbivore interactions: ecological and evolutionary perspectives // Marine Chemical Ecology. Boca Raton, FL. 2001. P. 227-265.

118. Pham Quang L., Laur M.N. Les lipides polaires de: Pelvetia canaliculata (L.) Dech. et Thür., Fucus vesiculosus L. et Fucus serratus L. // Biochimie. 1974. Vol. 56. N. 6-7. P. 925-935.

119. Pham Quang L., Laur M.N. Structures, teneurs et compositions des esters sulfuriques, sulfoniques, phosphoriques des glycosyldiglycerides de trios Fucacees // Biochemie. 1976. Vol. 58. N. 11. P. 1367-1380.

120. Plaza M., Santoyo S., Jaime L., GarcHa-Blairsy Reina G., Herrero M., Senorâns F. J., Ibânez E. Screening for bioactive compounds from algae // J. Pharm. Biomed. Anal. 2010. Vol. 51. N. 2. P. 450^155.

121. Pratt R., Daniels T.C., Eiler J.J., Gunnison J.B., Kumler W.D., Oneto J.F., Strait LA., Spoehr H.A., Hardin G.J., Milner H.W., Smith J.H. S., Strain H.H. Chlorellin, an antibacterial substance from Chlorella //Science. 1944. Vol. 99. N. 2574. P. 351352.

122. Priyadharshini S., Bragadeeswaran S., Prabhu K., Sophia Rani S. Antimicrobial and hemolytic activity of seaweed extracts Ulva fasciata (Delile 1813) from Mandaparm, Southeast coast of India // Asian Pac. J. Tropic. Biomedicine. 2012. P. 38-39.

123. Puglisi M.P., Engel S., Jensen P.R., Fenical W. Antimicrobial activities of extracts from Indo-Pacific marine plants against marine pathogens and saprophytes // Mar. Biol. 2007. Vol. 150. N. 4. P. 531-540.

124. Puglisi M.P., Tan L.T., Jensen P.R., Fenical W. Capisterones A and B from the tropical green alga Penicillus capitatus: unexpected anti-fungal defenses targeting the marine pathogen Lindra thallasiae // Tetrahedron. 2004. Vol. 60. P. 7035-7039.

125. Ragan M.A., Glombitza K.W. Phlorotannins, brown algal polyphenols // Prog. Phycol. Res. 1986. Vol.4. P. 145-154.

126. Rebbolloso Fuentes M.M., Acien Fernandez G.G., Sanchez Perez J.A., Guil Guerrero J.L. Biomass nutrient profiles of the microalga Porphyridium cruentum II Food Chem. 2000. Vol. 70. P. 345-353.

127. Reddy P., Urban S. Meroditerpenoids from the southern Australian marine brown alga Sargassumfallax II Phytochemistry. 2009. Vol. 70. P. 250-255.

128. Religa P., Kazi M., Thyberg J., Gaciong Z., Swedenborg J., Hedin U. Fucoidan inhibits smooth muscle cell proliferation and reduces mitogen-activated protein kinase activity // Europ. J. Vascular and Endovascular Surgery. 2000. Vol. 20. N. 5. P. 419^126.

129. Renaud S.M., Luong-Van J.T. Seasonal variation in the chemical composition of tropical Australian marine macroalgae // J. Appl. Phycol. 2006. Vol. 18. N. 3-5. P. 381— 387.

130. Rezanka T., Vyhnalek O., Podojil M. Separation and identification of lipids and fatty acids of the marine algae Fucus vesiculosus by TLC and GC-MS // Folia Microbiol. 1988. Vol. 33. N. 2. P. 309-313.

131. Rioux L-E., Turgeon S.L., Beaulieu M. Effect of season on the composition of bioactive polysaccharides from the brown seaweed Saccharina longicruris II Phytochemistry. 2009. Vol. 70. P. 1069-1075.

132. Robles-Centeno P.O., Ballantine D.L. Effects of culture conditions on production of antibiotically active metabolites by the marine alga Spyridia filamentosa (Ceramiaceae, Rhodophyta). I. Light // J. Appl. Phycol. 1999. Vol. 11. P. 217-224.

133. Robles-Centeno P.O., Ballantine D.L., Gerwick W.H. Dynamics of antibacterial activity in three species of Caribbean marine algae as a function of habitat and life history //Hydrobiologia. 1996. Vol. 326/327. N. 1. P. 457^162.

134. Rocha F.D., Soares A.R., Houghton P.J., Pereira R.C., Kaplan M.A.C., Teixeira V.L. Potential cytotoxic activity of some brazilian seaweeds on human melanoma cells // Phytother. Res. 2007. Vol. 21. P. 170-175.

135. Sabina H., Aliya R. Seaweed as a new source of flavone, scutellarein 4'-methyl ether // Pak. J. Bot. 2009. Vol. 41. N. 4. P. 1927-1930.

136. Sahar W., Mary G. Studies on the bioactivity of different solvents extracts of selected marine macroalgae against fish pathogens // Research J. Microbiol. 2008. Vol. 3. N. 12. P. 673-682.

137. Saito H., Xue C., Yamashiro R., Moromizato S., Itabashi Y. High polyunsaturated fatty acid levels in two subtropical macroalgae, Cladosiphon okamuranus and Caulerpa lentillifera 11 J. Phycol. 2010. Vol. 46. N. 4. P. 665-673.

138. Sanina N.M., Goncharova S.N., Kostetsky E.Y. Fatty acid composition of individual polar lipid classes from marine macrophytes // Phytochemistry. 2004. Vol. 65. P. 721-730.

139. Sanina N.M., Goncharova S.N., Kostetsky E.Y. Seasonal changes of fatty acid composition and thermotrophic behavior of polar lipids from marine macrophytes // Phytochemistry. 2008. Vol. 69. P. 1517-1527.

140. Sanina N.M., Kostetsky E.Y., Goncharova N.V. Thermotropic behaviour of membrane lipids from brown marine alga Laminaria japónica II Biochem. Soc. Trans. 2000. Vol. 28. N. 6. P. 894-897.

141. Saravanakumar D.E.M., Folb P.I., Campbell B.W., Smith P. Antimycobacterial activity of the red alga Polysiphonia virgata II Pharmaceut. Biol. 2008. Vol. 46. N. 4. P. 254-260.

142. Sasidharan S., Darah I., Noordin M.K.M.J. In vitro antimicrobial activity against Pseudomonas aeruginosa and acute oral toxicity of marine algae Gracilaria changii II New Biotechnology. 2010. Vol. 27. N. 4. P. 390-396.

143. Sasidharan S, Darah I, Noordin M.K.M.J. Preliminary isolation and in vitro antiyeast activity of active fraction from crude extract of Gracilaria changii II Indian J. Pharmacol. 2008. Vol. 40. N. 5. P. 227-229.

144. Sato S. Studies on glycolipids in marine algae. I. Fractionation of galactolipids and composition of galactolipids in a red algae, Porphyra tenera II Bull. Jpn. Soc. Sci. Fish. 1971. Vol. 37. N. 4. P. 326-332.

145. Schmidt-Schultz T, Althaus H.H. Monogalactosyldiglyceride, a marker for myelination, activates oligodendroglial protein kinase for myelination, activates oligodendroglial protein kinase C // J. Neurochem. 1994. Vol. 62. P. 1578-1585.

146. Schubert N, Garcia-Mendoza E. Photoinhibition in red algal species with different carotenoid profiles // J. Phycol. 2008. Vol. 44. P. 1437-1446.

147. Selim S.A, Antimicrobial, antiplasmid and cytotoxicity potentials of marine algae Halimeda opuntia and Sarconema filiforme collected from Red sea coast // World Academy of Science, Engineering and Technology. 2012. Vol. 61. P. 1154-1159.

148. Seo Y, Park K.E, Nam T.J. Isolation of a new chromene from the brown alga Sargassum thunbergii II Bull. Korean Chem. Soc. 2007. Vol. 28. N. 10. P. 1831— 1835.

149. Shanmugama S.K, Kumara Y, Yarb K.M.S, Guptac V, De Clercqd E. Antimicrobial and cytotoxic activities of Turbinaria conoides (J.Agardh) Kuetz // Iran. J. Pharm. Res. 2010. Vol. 9. N. 4. P. 411^116.

150. Shanmughapriya S, Manilal A, Sujith S, Selvin J, Kiran G.S, Natarajaseenivasan K. Antimicrobial activity of seaweeds extracts against multiresistant pathogens // Ann. Microbiol. 2008. Vol. 58. N. 3. P. 535-541.

151. Shibata T, Fujimoto K, Nagayama K, Yamaguchi K, Nakamura T. Inhibitory activity of brown algal phlorotannins against hyaluronidase // Int. J. Food Sci. Technol. 2002. Vol. 37. N. 6. P. 703-709.

152. Shilo M, Rosenbergerr F. Studies on the toxic principles formed by the Chrysomonad Prymnesiumparvum Carter. Ann. N . Y. // Acad. Sci. 1960. Vol. 90. P. 866.

153. Simonsen S, Moestrup O. Toxicity tests in eight species of Chrysochromulina (Haptophyta) // Can. J. Bot. 1997. Vol. 75. P. 129-136.

154. Singh, R.P, Kaur G. Hemolytic activity of aqueous extract of Livistona chinensis fruits // Food and Chem. Toxicol. 2008. Vol. 46. P. 553-556.

155. Sithranga Boopathy N., K. Kathiresan, Anticancer Drugs from Marine Flora: An

156. Overview // J. Oncol. 2010. Vol. Article ID 214186. 18 pages. Smit A.J. Medicinal and pharmaceutical uses of seaweed natural products: A review // J.

157. Appl. Phycol. 2004. Vol. 16. N. 4. P. 245-262. Son B.W. Glicolipid from Gracilaria verrucosa II Phytochemistry. 1990. Vol. 28. N. 1. P. 307-309.

158. Son B.W. Glicolipid from Korean marine red algae Gracilaria verrucosa II Bull. Korean

159. Suzgec-Selcuk S., Mericli A.H., Guven K.C., Kaiser M., Casey R., Hingley-Wilson S., Lalvani A., Tasdemir D. Evaluation of Turkish seaweeds for antiprotozoal,antimycobacterial and cytotoxic activities // Phytother. Res. 2011. Vol. 25. P. 778783.

160. Takaichi Sh. Carotenoids in Algae: Distributions, Biosyntheses and Functions // Mar. Drugs. 2011. Vol. 9. P. 1101-1118.

161. Takaichi Sh., Mimuro M. Distribution and geometric isomerism of neoxanthin in oxygenic phototrophs: 9-cis, a sole molecular form // Plant Cell Physiol. 1998. Vol. 39. P. 968-977.

162. Targett N.M., Mitsui A. Toxicity of subtropical marine algae using fish mortality and red blood cell hemolysis for bioassays // J. Phycol. 2009. Vol. 15. N. 2. P. 181-185.

163. Taskin E., Ozturk M., Taskin E., Kurt O. Antibacterial activities of some marine algae from the Aegean Sea (Turkey) // Afr. J. Biotechnol. 2007. Vol. 6. N. 24. P. 2746-2751.

164. Tatters A.O., Muhlstein H.I., Tomas C.R. The hemolytic activity of Karenia selliformis and two clones of Karenia brevis throughout a growth cycle // J. Appl. Phycol. 2010. Vol. 22. N. 4. P. 435^142.

165. Thajuddin N., Subramanian G. Cyanobacterial biodiversity and potential applications in biotechnology // Curr. Sci. 2005. Vol. 89. N. 1. P. 47-57.

166. Thibane V.S., Kock J.L.F., Ells R., van Wyk P.W.J., Pohl C.H. Effect of marine polyunsaturated fatty acids on biofilm formation of Candida albicans and Candida dubliniensis II Mar. Drugs. 2010. Vol. 8. N. 10. P. 2597-2604.

167. Vidyavathi N., Sridhar K.R. Seasonal and geographical variations in the antimicrobial activity of seaweeds from the mangalore coast of India // Bot. Mar. 1991. Vol. 34. N. 4. P. 279-284.

168. Yoshie Y., Wang W., Hsieh Y.P., Suzuki T. Compositional difference of phenolic compounds between two seaweeds, Halimeda spp. // J. Tokyo Univer. Fish. 2002. Vol. 88. P. 21-24.

169. Yotsu-yamashita M., Haddock R.L., Yasumoto T. Polycavernoside A: A novel glycosidic macrolide from the red alga Polycavernosa tsudai (Gracilaria edulis) // J. Am. Chem. Soc. 1993. Vol. 115. P. 1147-1148.

170. Yuan Y.V., Carrington M.F., Walsh N.A. Extracts from dulse (Palmaria palmata) are effective antioxidants and inhibitors of cell proliferation in vitro // Food and Chemical Toxicology. 2005. Vol. 43. N. 7. P. 1073-1081.

171. Zandi K, Tajbakhsh S., Nabipour I., Rastian Z., Yousefi F., Sharafian S., Sartavi K. In vitro antitumor activity of Gracilaria corticata (a red alga) against Jurkat and molt-4 human cancer cell lines // Af. J. Biotech. 2010. Vol. 9. N. 40. P. 67876790.

172. Zheng Y., Yin-shan Ch., Hai-sheng L. Screening for antibacterial and antifungal activities in some marine algae from the Fujian coast of China with three different solvents // Chin. J. Oceanol. Limnol. 2001. Vol. 19. P. 327-331.

173. Zou Y., Li Y., Kim M.-M., Lee S.-H., Kim S.-K. Ishigoside, a new glyceroglycolipid isolated from the brown alga Ishige okamurae II Biotechnol. Bioprocess Eng. 2009. Vol.14. P. 20-26.

Информация о работе

Мартыяс, Екатерина Александровна
кандидата биологических наук
Владивосток, 2012
ВАК 03.01.04

Диссертация

Биологическая активность липидов и фотосинтетических пигментов водорослей дальневосточных морей - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы