Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимические механизмы токсического действия кислорода под повышенным давлением в острый и отдаленные периоды

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимические механизмы токсического действия кислорода под повышенным давлением в острый и отдаленные периоды"

Ч-: г>' 1 <;; г, г ¿с с гю -/ -/ су. 5 ✓

военно-медицинская ордена ленина краснознаменная академия имени с.м.кирова

биохимические механизмы токсического действия кислорода под повышенным давлением в острый и отдаленные периоды

(03.00.04 - БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХИМИЯ)

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ ДОКТОРА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

^ 14 5<с

НА ПРАВАХ РУКОПИСИ

габибов магомед магомедович

УДК: 577.1 612.273 1

ленинград 1939

Работа выполнена в Дагестанском ордена Дружбы народов государственном университете имени В.И.Ленина

Научный консультант - доктор медицинских наук, профессор Кожемякин Д.А.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Медведев Л.Г., доктор биологических наук Антипенко А.Е., доктор медицинских наук-Каплан Е.Я.

Ведущая организация: Институт еволюционной физиологии

и биохимии имени И.М.Сеченова АН СССР

Защита диссертации состоится " " 19 г. в

/

часов на заседании специализированного совета Д 106.03.0? при Военно-медицинокой ордена Ленина Краснознаменной академии имени С.М.Кирова (195175, Ленинград, К-175, ул.Лебедева, 6)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии

Автореферат разослан " " 1989 г.

Ученый секретарь гггециализироынного совета

доктор медицинских наук, профессор Нысонкин Олег Сергеевич

Актуальность проблемы. Повышенное парциальное давление кислорода является необычным и неблагоприятна.? фактора:.: дм ;я:вьи существ. Однако в последние годы гипербарическая атмосфера получила широкое применение в практической деятельности человека. Особенно она широко применяется при проведении подводных л кессонных работ (Ниронкин и др. ,1965; ЪадЪозЛесп. 1966; Икронкин, 1972; Зальцман и др.,1973; Гуляр,Ильин,1937) и внедрении гипербарической оксигенации в клиническую практику (bocro.r.-..,, 1964; Леонов,1971,1976,1985; Петровский,1% ни,1976,1978,1935; Бураков-ский.Бокерия, 1974; Korn е.а., 1977; Ратнер,Г979; Блага,1933). В связи с этим возникает настоятельная необходимость изучить, обдебиологические возможности запиты организмоз от избыточного содержания кислорода и насколько эти сложившиеся механизмы эффективны в условиях повышения его напряжения в среде. Поэтому раскрытие механизмов действия гшсроксии на организм человека и животных является одной из важных медико-биологических проблем.

В процессе эволюции Земли, когда в аткесфере появился свободный кислород, хшвце организмы начали вырабатывать ке только механизмы защиты от его токсического действия., но и стали использовать полезные свойства кислорода - его высокий окислительно-восстановительный потенциал. Исходная недостаточность или истощение эндогенных антиоксидантных механизмов приводило к обшетокси-ческому действию кислорода. Поэтовд для выяснения механизма действие гипероксии на организм представляется важным изучение обде-токсической формы кислородного отравления. Однако до настоящего времени болылинство исследователей сосредоточивали свое внимание прежде 'всего на легочной и нервной формах кислородного отра^зления (ПриКладоЕИЦКИ)'1,1936; Stadls е.а., 1945; Шшр.агс!, 1946,1968; Dickens, 1946а; ГершчновичДричевская, 1954,1960; Войно-Кс^нецгагй, 1958; Кричевскач.1963;'Сорокин,1964; ItOinson е.е,. 1967;

2ирот<1щ,1Э72; Кричевская и др. ДУ80). Это вызвано тем, что при кислородной интоксшсации у высших животных и человека на первый план выступают патологические проявлегам со стороны легких и ЦНС. Литературные сведения, посвященные изучению действия ГБО на другие ткани (общетокспческая форма кислородного отравления), мало-чкелешш. Следует отметить, что литературные данные о состоянии процессов обмена веществ тканей в постгкпероксическом периоде такке очень ограниченны. В то же время важное практическое значение имеют вопросы, связанные с остаточными явлениями метаболических нарушений после воздействия на организм кислорода под давлением.

Це/и-ю рпботн явилось изучение наиболее общих биохимических механизмов общетоксического действия ГБО в острый и отдаленные периоды. Нами исследоЕано влияние ГБО на биохимические процессы, которые являются характерными для разных органов и тканей и определяют функциональную направленность их жизнедеятельности.

Основные задачи исследования.

1. Изучение процессов перекисного окисления липидов в тканях при гипероксии и в постгипероксическом периоде;

2. Исследование активности супероксиддисмутазы тканей белых крыс сразу после действия ГБО (судорожное и терминальное состояния) и в постгипероксическом периоде;'

3. Изучение влияния гомогенного препарата СОД на содержание перекисей липидов в ткянях и их гомогенатах при действии ГБО;

4. Изучение активности протонной АТФазы митохондрий мозга, печени, миокарда и скелетных мышц при воздействии на животных различных режимов ГБО (I и 5 ати) и в постгипероксическом периоде;

5. Исследование активности протонной АТФазы митохондриаль-них препаратов мозга, печени, миокарда и скелетных мышц при их экспозиции в кислородной среде под давлением I ати в течение

60 мин и 5 ати в течение 10 и 60 мяк;

6. Исследование активности АТФазы и её зависимости от присутствия ионов Са2+, да+, К1', трнтоиа Х-100 и уабаина в миелине, обогащенных нейрональной, глиальной и субклеточных фракциях головного мозга в условиях ГБО;

7. Исследование содержания аммиака, глутамина, глутаминовой, аспарагиновой кислот, аланина, активности глутаминази, аспартат-

и аланинаминотрансфераз, количества и фракционного состава белков, белковых сульфгидрильных групп, интенсивности протеслитичес-ких процессов в тканях при гипероксин и в постишероксическом периоде, а также определение содержания ГЛМК и активности ферментов, участвующих в её метаболизме - глутаматдекарбоксилазы и ГАЩ-аминотрансфераз нервной ткани.

■ На защиту выносятся положения:

а) активация процессов пердкисного окисления липидов тканей животных, являющихся инициирующим механизмом патогенеза расстройств при действии кислорода под повышенным давлением;

б) нарушения азотистого обмена и активности ферментов группы траисеминаз, пептид-гидролаз, АТФаз тканей и их клеточных и субклеточных структур, усугубляющих течение патологических процессов при кислородной интоксикации и в постгипероксическом периоде;

в) большая чувствительность биохимических систем нейрогли-альшос клеток к действию гипероксии, что позволяет рассматривать неИроглию и её метаболические системы как иервичное место действий избыточных концентраций кислорода на нервную систему.

Научная новизна. Основным теоретическим положением, развиваемым в работе, является постулирование наличия общих закономерностей изменения метаболизма разных органов под влиянием гипероксии и в постгипороксический период. В работе систематизированы биохн- '

тчеоте механизмы общетоксического действия гипероксии. Важным моментом в этом плане является то, что основные показатели обмена веществ исследованы не только сразу после гипероксии, но и в разные сроки постгипероксического периода. Оригинальность исследования обусловлена комплексным подходом, согласно которому учитывалось не только изменение отдельных компонентов, но и изучалась активность ферментов, регулирующих их метаболизм (СОД, глутамина-зы, аспартат- и аланинаминотрансфе,раз, ГАМК-аминотрансфераз, пептид-гвдролаз, транспортных АТФаз).

На основании выполненных экспериментальных исследований впервые обоснованы:

1. Изменения метаболизма аммиака, глутамина, глутаминовой, аспарагиновой кислот, аланина, активности Асп- и АлАТ, глутамина-зы, протонной АТФазы, белков и их сульфгидрильных групп в мозгу и других органах (печени, почках, миокарде, скелетных мышцах, селезёнке, крови) при гипероксии и в постгипероксическом периоде;

2. Сроки нормализации азотистого обмена и активности ферментов группы аминотрансфюраз, пептид-гидролаз, транспортных АТФаз, которые наступают в основном через 25-40 оуток после действия ГБО;

3. Особенности нормализации лро- и антиоксидантных процессов в тканях в постгипероксическом периоде?

4. Эффекты внутривенновведенной СОД, а также с добавлением гомогенного препарата фермента на тканевые гомогенаты, которые показывают, что в условиях ГБО лимитирующим звеном жизнедеятельности животных выступает повышение уровня перекисей лшшдов в нервной ткани; .

5. Влияние гипероксии на активность протонной АТФазы митохондрий тканей в зависимости от режимов ГБО и времени пребывания в кислородной среде;

6. Большая чувствительность биохимических систем нейроглиаль

них клеток к токсическому действию гипероксии;

7. Последовательность биохимических процессов в соотаге ответной реакции организма на гипероксию.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Исследование биохимии реактивности организма при дейотвии избыточных концентраций кислорода позволяет на фундаментальном уровне раскрыть патогенез кислородной интоксикации, в том чиоле применительно к респираторному стресс-синдром и обосновать новые пути протекания и лечения кислородных отравлений.

В практическом отношении представляет интерес факт принципиальной возможности нормализации даже грубых изменений процесс в обмена веществ в тканях при кислородном отравлении. Этот процесо можно ускорить с применением различных препаратов, нормализующих нарушенные гипероксией процессы обмена веществ.

На основе проведенного исследования в плане прикладного значения предлагаются следующие практические рекомендации:

1. Приводимая нами общая схема последовательных этапов развития кислородной интоксикации указывают на ключевые пункты нарушения метаболизма различных тканей. Она позволяет более целенаправленно осуществлять профилактические и лечебные мероприятия при острых формах интоксикации кислородом;

2. Результаты работы могут быть использованы при разработка режимов гипербарооксигенотерашш и повышении резистентности организма к гипероксии;

3. Полученные данные о длительности последейотвия гипероксии указывают на необходимость осторожного подхода к использованию метода пшербаричеокой оксигенации в медицинской практике;

4. Исследование сроков восстановления нарушенного метаболизма в постгипероксичеоком периоде может помочь при разработке соответствующих лечебно-профилактических мероприятий.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: Всесоюзной конференции "Использование и влияние кислорода под давлением на организм" (Ростов-на-Дону,1969г.), ХУП конференции физиологов Юга РСОСР (Ставрополь,1969 г.), Республиканской научной конференции молодых ученых Дагестана (Махачкала,1970 г.), 2-й и 3-й Северо-Кавказских биохимических конференциях (Махачкала, 1970 г., Ростов-на-Дону,1976 г.), секции биохимии нервной системы Московского отделения Всесоюзного биохимического общества АН СССР (Москва,1971 г.), Всесоюзной конференции "Применение кислорода под повышенны;.! давлением в медицине" (Москва,1971 г.), У1-й и УИ-й Всесоюзных конференциях по нейрохиши (Ленинград, 1972 г., Ростов-на-Дону, 1976 г.), П-й и Ш-й Всесоюзных конференциях по биохимии мышечной системы (Ленинград, 1972 г.,1978 г.), Ш-м Всесоюзном биохимическом съезде (Рига,1974 г.), заседании Дагес--танского отделения ВБО (Махачкала,1975 г.), ежегодных научных конференциях профессорско-преподавательского состава Дагестанского госуниверситета имени В.И.Ленина (Махачкала,1969-1981 г.г.), заседании кафедры биохимии и биофизики Дагестанского госуниверси-те а имени В.И.Ленина (Махачкала,1976 г.), 1-м Всесоюзном совещании "Механизмы адаптации живых организмов к влиянию факторов среды" (Ленинград,1978 г.), научной конференции Лаборатории ги-пербаричес..ой оксигенации Института сердечно-сосуЕистой хирургии имени А.Н.Бакулева АМН СССР (Москва,1979 г.), научном семинаре Лаборатории фармакологической адаптации НИИ по биологическим испытаниям химических соединений АМН СССР (Москва,1979 г.), заседании совета биологического факультета Дагестанского госуниверситета имени В.И.Ленина (Махачкала, 1981 г.), УН—м Международном конгрессе по гипербарической медицине (Москва,1981 г.), 1-м Всесоюзном си.-позиуме "Фармакологическая коррекция кислородзави- •

зимых патологических процессов" (Мос.тзп,1984 г.), Ш-гл Всесоюзном зкмпозиуме по гипербарической оксигенации (Москва, I9Í35 г.), заседали кафедры оощеооразовательных дисциплин Даггосуливерситота клеш; З.И.Ленина (Махачкала,1988 г.), заседании кефядра клешлссеои Оио-симии и лабораторной диагностики 'Военно-медицинской академии имени J.М.Кирова (Ленинград, 1988 г.), межафедральном совещании кафедр ишнической биохимии и лабораторной диагностики, физиологии подвод-гого плавания, патологической физиологии Воеш-ю-гедицкпскои акаде-ши имени С.М.Кирова (Ленинград,1989 г.), 1У-м симпозиуме "Новое в ?еории и практике ГБО" (Москва,1989 г.).

Объём работы. Работа изложена на 381 стр. машинописного текста, состоит из введения, двух глав обзора литературы, постановки экспериментов и методик исследований, 4-х разделоз собственных исследований и их обсуждения, основных зкводов, практических рекомендаций и списка литературы, содержащего 686 источников. Работа иллюстрирована 32 таблицами и 19 рисункам. Постановка экспериментов и методики доследований Опыты поставлены на 1450 половозрелых белых крысах обоего пола массой 150-200 г. Животных ±n vivo в барокамере подвергали действию кислорода под давлением 4, 5, 6 ати и выдерживали до наступления судорожного и терминального состояний. При действии I ати кислорода белых крыс экспонировали в барокамере в течение 60 тги В сериях опытов для исследования последействия ГБО на мета-Золизм организма животных оставляли в условиях вивария на I час, [, 3, 5, 10, 15, 25, "О и 60 суток. Для сравнения брали контрольна крыс, не подвергнутых никакому воздействию. '

Для определения активности супероксиддисмутазы (супероксид: ¡упероксид-оксидоредуктаза, КФ I.I5.I.I) подопытных животных быстро декапитировали, извлекал? мозг, печень, ¡точки, сердце, скелет ше мышцы, собирали кровь. Ткани гомогенизировали на холоду в

0,01 М фосфатном буфере pH 7,4, центрифугировали при 15.10 3 в течение 20 ш в рефрижераторной центрифуге К-24. В качестве источника фермента использовали надосадочную жидкость. Определение активности СОД проводили методом Hishikimi-o.a., (1972).

Определение перекисей липидов проводили в гомогенате тканей, приготовленных на растворе Кребс-Рингера в присутствии аскорбиновой киолоты, по Ю.А.Владимирову и А.И.Арчакову (1972).

Субклеточное фракционирование мозга проводили в градиенте концентрации 0,32 М сахарозы в рефрижераторных центрифугах К-24 и vac —601 по v/nittnKor (1965). Для определения перекисей липидов субклеточные фракции ре суспендировали в растворе Кребс-Рингера.

Для исследования влия!шя гомогенного препарата СОД на с одер-

t t

жшше перекисей липидов животным в яремную вену вводили 10 М препарата фермента, приготовленного на физрастворе. Контрольным животным вводили I мл физраствора. Через 20 мин после инъекции контрольного и подопытного яивотных подвергали дейотвию 5 ати кислорода. После наступления сильного судорожного приступа проводили декомпрессию^ животных декапитировали и определяли оодержа-1ше перекисей липидов в тканях.

Для определения перекисей липидов в опытах in vitro Ч*омоге-

с

наты тканей с добавлением СОД (10" М) и физраствора экспонировали в барокамере под давлением 5 ати кислорода в течение 60 мин. Контрольные пробы за такой же период времени выдерживали в условиях нормального атмосферного давления на воздухе. По истечении времени экспозиция контрольные и опытные пробы инкубировали на качающей водяной бане в течение 60 мин при 374) без предварительной аэрации кислородом. Инкубацию чаоти проб, экспонированных в условиях повышенного давления кислорода без СОД, проводили также

после добавления последней

Определение активности протонной АТОазы (АТ^-фосфогидролаза, Ко 3.6.1.3) проводили в митохондриях мозга, печени, миокарда и скелет1шх мышц белых крыо. Митохондриальную фракцию печени, миокарда и скелетных мышц выделяли с помощью дифференциального центрифугирования в 0,25 М сахарозе согласно прописи, данной в работе А.Д.Виноградова и др.(1977). После выделения митохондрий поверхность осадка ополаскивали 0,25 М сахарозой. Осадок суспендировали в 0,25 М сахарозе и растирали до гомогенного состояния. К суспензии митохондрий скелетных мышц добавляли раствор альбумина до конечной концентрации 0,1$. Полученные таким образом суспензии митохондрий хранили на льду и использовали для определения активности протонной АТФазы. Её активность определяли в инкубационной среде, содержащей 12,5 мкмолей трио-НС1 буфера (рП 7,4), 2 моль динатриевой соли АТ<1/, 7,5 мкмоль и'^зо^.б-Ю-4 моль 2,4-дц-нитрофенола. Реакцию начинали, добавляя 0,2 мл суспензии митохондрий, содержащей 1-Й мг белка. Объём инкубационной смеси 2 мл. Инкубацию проводили в течение 15 мин при 37°С. Реакцию останавливали добавлением I мл 5% ТХУ.

Для изучения влияния ГБО на активность протонной АТФазы ми-тохондриальных препаратов мозга, печени, сердца и скелетных мышц инкубационную смесь экспонировали в барокамере под давлением I • атя в течение I часа и 5 ати в течение 10 и 60 мин. Контрольные пробы за такое же время выдерживали в воздушной среде. По истечении времени экспозиции пробы инкубировали в термостате при 37°С в течение 15 мия. Об активности К^-АТОазы судили по накоплению

^ Исследование содержания перекисей липидов, активности СОД и влияния экзогенной СОД на уровень липидных перекисей при гиперок-оии проведено в 1977 г. в Институте биохимии АН Арм. ССР

неорганического фосфора в инкубационной среде в присутствии 2,4-динитрофенола совместно с í.¡g2+ и при наличии только Mg2+. Определение неорганического фосфора проводили методом Н.А.Верж-бинской (1282). Активность Н^-АТФазы выражали в мкмолях неорганического фосфора на мг белка за I мин.

Исследование активности Са^+-, суммарной Mg2+,Ha+, К1"- и уабаинчувствительной г»"а+,К+-АТ|£аз проводили в миелине, нейрональ-ной, глиальной обогащениях и субклеточных фракциях мозга белых крыс в норме и в судородном состоянии действия ГБО (4 ати). Для определения АТФазной активности субклеточное фракционирование нервной ткани проводили в рефрижераторной центрифуге "mistral 4l" и ультрагянтрифуге kse -75. Выделение миелина, нейрональной и глиальной фракций проводили методом С.Роуза (Rose, 1965,1967; Sinha, Roso, 1972). Об АТ^азной активности судили по нарастанию неорганического фосфора в инкубационной среде. Определение неорганического фосфора проводили в данном случае методом Martin и Doty (1949)^. АТ^азную активность выражали в мк.лолях неорганического фосфора на мг белка. Белок определяли по Ьоу/гу и сотр. (1951).

Определение аммиака проводили в С-ззбелковых трихлоруксусных экстрактах тканей замороженных целиком животных сочетанием фенол-гипохлорктного метода (Rose е.а., 1957) с микродиффузионным (SQii£sor»,Seiigaon, 1951). Глутамин определяли по азоту его амид-ной группы, отщепившееся после 10-минутного гидролиза в I н H2so4 на кипящей водяной бане (Силакова и др.,1962). Разделение глутами-новой, аспарагиновой кислот, аланина, ГАМК осуществляли методом

Определение АТФазной активности миелина, обогащенных нейрональной,. глиальной и субклеточных фракций мозга выполнено в период научной стаж- ровки в Англии в Лаборатории биохимии головного мозга (рук. - проф.С.Роуз) Открытого университета в 1974-75 г.г.

распределительной хроматографии на бумаге (Пасхина,1959). Количественное определение аминокислот проводили методом образогания медных производных аминокислот с нингидрином.

Об активности гдутаминазы (ь~глутаглин-амидогидролаза, К<*> 3.5.1.2) тканей судили по нарастанию уровня аммиака в инкубационной пробе по сравнению с контролем.

Активность глутаминсинтетазы О^глутаматгвммтк-лигаэа, КО 6.3.1.2) мозга определяли по Elliott (1948) в модификации Speck (1949) и Fry (1955).

Активнооть глутаматдекарбоксилазы (Ь-глутаматгкзрбокси-лиа-за, КФ 4.I.I.I5) мозга определяли по накоплению ГАЫК в инкубационной пробе (Robei4n,Franksi, 1950; Чикваидзе,1963). ГАМК в данном случае определяли электрофорезом на бумаге (Done, 1957).

Активность ГАЖ-аминотрансферазы (4-аминобутират:2-оксоглу-тара'х-якинотрансфераза, Ко? 2.6.1.19) определяли методом Sisicun е.а. (1961). Об активности ГАМК-пируват-, ГАИК-ШС- и ГАМК^с*-кетоглутаратаминотрансфераз судили по приросту соответственно аланина, аспартата, глутамата в инкубациошюй ореде. Количественное определение аминокислот проводили методом хроматографии на бумаге (Насхина,1959).

Аспартат- (ь-аопартат:2-оксоглутарат-аминотраисфераза, Ru 2.6.1.I) и аланинаминотрансферазную (1-алснин:2-оксоглутарат-аминотрансферлза, КФ 2.6.1.2) активность тканей определяли методом Heitin'-л И Frnnl'.el (1957).

Активность протеиназ (КО 3.4) определяли в экстрактах, полученных из ацетоновых порошков тканей. В качестве субстрата использовали лиофилизированный яичный альбумин. В олучае автолиза субстратом тканевых протеиназ служили собствешше белки тканей. Активность кислой протеиназы определяли при рН 4,3, нейтральной -при рН 7,4; интенсивность автолиза исследовали при нейтральном jH.

Об активности протеолиза и автолиза судили по приросту небелкового тирозина в опыте по сравнению с контролем, которого определяли методом Ьожгу е.а. (1951). Актит.чость протаминрасщепляющей пептид-гидролазы тканей определяли по А.В.Налладину и Я.В.Белику (РиХ1аЙ1п,ВсХ1к, 1970).

Фракичо! ¡рование белков вели методом диск-электрофореза на полиакриламидюм геле по Мауреру (1971) в системе геля И I. Фрак-'ционмровашио подвергали белки тканей, извлекаемые 0,9% ЛаСЬ.

Определение зн -групп водорастворимых белков тканей проводили методом ампериметрического титрования (ВепезоЬ.ВопозоЬ, 1950; Кедрова,1962). Для освобождения зн -групп' от блокирования ионами тяжёлых металлов при гомогенизировали тканей добавляли 0,5 мл 0,001 н натриевой соли ЭДТА. Конечная концентрация ЭДТА в титруемом объёме составляла 2,5-Ю- н. Для удаления низкомолеКулярных ^ -соединений белковые растворы предварительно подвергали диализу против фосфатного буфера рН 7,2 при +4°С в течение 3 часов. Для ампериметрического титрования зн -групп использовали 0,001 М л^но^.

Полученные данные обработаны вариационно-статистическим методом (Плохинский,1970). Для определения достоверности различий результатов исследований использовали критерий Стьюдента.

Основное содержание работы

Большая часть биохимических исследований при гипероксии посвящена нервной ткани. Обобщение литературных данных дает в змож-кость представить себе объём и глубин!' повреждения метаболизма, структуры й фтункции мозга при кислородном отравлении. Последствием этих нарушений является наступление судорожных приступов, напокинаклдих эпилептические припадки.

Исследования последних лет приводят к заключению, что ведущими в генезе кислородной интоксикации являются надошешт мембранных структур |теток и суОклеточных органелл, изменение переписного

окисления липидов, проницаемости мембран и их ультраструктуры.

Наши исследования по изучению перекисей липидов и активности СОД значительно расширяют знания по нарушению метаболизма мозга под влиянием ГБО. При гипероксии происходило увеличение активности СОД и уровня перекисей липидов в мозгу (табл.1). Опыты о введением гомогенного препарата СОД подтверждают важность накопления лшшдных перекисей в нервной ткани в механизме кислородной

интоксикации. Внутривенное введение препарата СОД в конечной коне

центрации 10" М не оказывало защитного эффекта от кислородного отравления и не снижало повышенный гипероксией уровень липидных перекисей в мозгу. Отсутствие защитного эффекта экзогенной СОД, очевидно, связано с непроницаемостью ГЭБ, т.к. гомогенный препарат фермента приводил к снижению уровня липоперекисей в других тканях и их гомогенатах, включая и гомогенатн мозга.

Исходя из полученных нами данных можно предположить, что уровегь перекисного окисления липидов нервной ткани является одним из лимитирующих факторов жизнеспособности животных в условиях ГБО и делает голове й мозг "критическим'1 органом при острой кислородной интоксикации.

Гипероксия оказывает, существенное влияние на активность протонной АТФазы митохондрий. При действии I ати кислорода в течение 60 мин её активность в митохондриях мозга возрастала на 113,5$. При действии 5 ати кислорода в течение 10 мин она существенно не изменялась по сравнению с контролем. Воздействие 5 ати кислорода до судорожной и терминальной стадий приводило к снижению её активности соответственно на 42,5 и 31,95? (табл.1). Первоначальное активирование протонной АТФазы митохондрий мозга при действии I ати кислорода и начальном действии выоких его давлений, очевидно, тлеет защитно-приспособительный характер. Дальнейшее действие 5 ати кислорода приводит к срыву этих защитных механизмов, что

выражается в существенном снижении её активности.

Интенсификация процессов перекисного окисления липидов может быть одной из причин деполяризационных сдвигов и возникновения судорожных разрядов в нейронах при действии ГБО, что, по-вкдш« му, связано о увеличением проницаемости мембран (Sun, 1972), изменением количества зн -групп белков и низкомолекулярных тиоло . в мембранных образованиях клетки (ivilio, 1971). Повреждающему действию линидных перекисей в первую очередь подвергаются ферменты, ассоциированные с мембраной. Очень важна роль мембранных липидов в обеспечении транспортной функции На+, К*-АТ0азы (Болдырев, 1979, 1981). В наших опытах при гипероксии наблюдалось некоторое изменение активности АТ«аа клеточных и субклеточных фракций мозга. Статистически достоверное увеличение активности АТФазы было найдено только при инкубировании фракции нейронов без добавления экзогенных катионов и Mg2+,Na+, ^-АТФазы, а также Са^-АТ^азы фракции нейропиля. Изменение АТФазноЙ активности клеточных фракций нервной ткани при гипероксии приводило к возрастанию соотношения нейроны/глия для эндогенной, Kg2+-a Ие2+,На+, К^-АТОаз. Возрастание её активности замечено в ядерной, митохондриальной и лизосом-ной фракциях и в меньшей степени в микросомной фракции. В цитоплазме возрастание АТФазной активности при гипероксии было статистически недостоверным по отношению к контролю.

Тритон Х-100 и уабаин, как у контрольных, так и у гиперок-сических животных, оказывали, соответственно, активирующий и ин-гибируюдий эффект на активность Ms2+- и Kg2+,Na+, К^-АТФаз клеточных и оубклэточных фракций мозга. В судорожном состоянии кислородного отравления активность уабак «чувствительной Иа+,К1"-АТвазы клеточных фракций нервной ткани снижалась в нейронах на 29,2%, а в глиальных клетках в 2,9 раза. Таким образом, при действии ГБО до судорожной стадии ответная реакция более выражена

со стороны глиальных клеток по сравнению с нейронами. К гнперок-сии неироглия оказалась более чувствительной. Такой характер изменения метаболизма позволяет рассматривать нейроглия как первичное место действия ГБО на нервную систему.

Другим патогенетическим фактором кислородного отравления может быть изменение белкового компонента тканей. 2 ряде работ установлено изменение структуры и свойств белков мозга при гипер-оксии (Гершенович,Кричевская,19С0; КрлчевскаяДЭбЗ; Синичкин, 1969; Щербина,1972; Шерстнев,1975; Лукап,1975; Древаль.1978; Кричевская и др. ,1983). Наш показано, -сто в судорожюм периоде кислородного отравления содержание водорастворимых белксз мозга увеличивалось на 13,2%, солсрастворшых - снюхалось на . Особенно значительное снижение претерпевала у-глобулиловая фракция белков нервной ткани. Количество эн -групп водорастзоржых бежов мозга при этом существенно не изменялось (табл.2).

О глубине деградации бежовых молекул при гипорокспк можно судать по изменению автивности протеиназ тканей. Ахтшюо'л нейтральной протеиназы мозга при этом не изменялась, кислой и ирота-минрасщйпляющей - возрастала; повышалась и интенсивность автолиза. Следовательно, в деградации бежов мозга при действии ГБО ваднуа роль играют лизосомная кислая и мембранная протаишрасщеплшощая пептид-гидролазы. Активирование протеолитичсских систем под воздействием ГБО может явиться одним из механизмов селективного вывода измененных молекул бежов из клеток и тканей.

Действие ГБО до наступления судорожного приступа не приводило к существенному изменению распределения белков в субклеточна: фракциях мозга, за исключением ядерной, в которой имело место статистически досто?ерное снижение уровня бежов. В миелине не на б-' людалось существенного изменения количества белков при гиие^юксил. В то же время гипероксиа приводила к повышению на содег^ш-

ния белков во франции, обогащенной глиальшш клетками, по сравнению с контролем, тогда как во фракции, обогащенной нейронами, оно практически не изменялось. Это приводило к снижению содержания белка между нейронами и нейропилем с 0,62 до 0,35.

Изменение физико-химических свойств, структуры -и количества белков может быть одной из причин нарушения активности ферментов нервной ткани при гипероксии. При действии 1Б0 наблюдалось увеличение активности АспАТ на 25,5$, АлАТ - всего на 9,4$, активность глутамкназы - на 41,6$ (табл.1). Активность ГАМК-пируват- и ГА1ЛК— об-кетоглутарат-АТ повшалаоь, ДГК и ГАМК4ЦУК-АТ - снижалась.

Найденные наш изменения ферментативной активности обусловливают соответствующие изменения содержания низкомолекулярных азотистых компонентов нервной ткани при гипероксии. При кислородном отравлении количество аммиака, глутамата, аспартата, аланина в мозгу возрастало, а глутамина и ГАМК снижалось. В связи с их иейромедааторными функциями изменение соотношения глутамата, аспартата и ГАМК может быть серьезном причиной нарушения функций нервной системы при кислородной патологии.

Повреждения структуры и метаблизма нервной ткани, безусловно, являются важнейшими в генезе кислородной интоксикации у человека и животных. Однако общетоксическая форма кислородного отравления проявляется в нарушении метаболизма и других тканей. Хотя при гипероксии и наступают судорожные приступы, но табель животного наступает от паралича дыхания и остановки сердца.

При гипероксии происходило нарушение количественных соотношений между отдельными метаболитами азотистого обмена в оердце. При этом имело место некоторое снижение уровня глутамина в миокарде, которое обеспечивалось возрастанием глутаминазной активности. Количество же аммиака, глутамата, аспартата и аланиня возрастало. Увеличение уровня исследованных аминокислот в сердце при гипорок-

Таблица I

Изменение содержания компонентов и активности ферментов (в %% к контролю) тканей белых крыс в судорожном периоде кислородного отравления (4-5 ати)

компоненты : мозг : печень почки :солезёнка ;скелетные; сердас : мышцы : :кровь

Аммиак +420,0- +252,6- +265,4- +161,5- +240,0- +202,4- +250,0-

Глутамин -43,2* -39,0- -16,1- -17,2- -43,5- -17,2- +48,8-

Глутаминовая кислота +43,2- +16,7 +17,1- +38,5- +68,2- +70,7- +200,0-

Аслэрагиноваа кислота +37,1- +51,5- +22,7- -12,3 +123,6- +46,3- +83,3-

Ала юш +45,5- +33,3' -10,7 -21,3- +11,4 +66,7- +133,3-

Глутамкназа +41,8- +40,9- +60,2- +19,3-

Аспартатаминотрансфераза +25,5- +14,0 +7,0 +3,9 -30,2- +55,0-

Аланинаминотрансфераза +9,4 +4,3 -0,6 -30,3- -14,1 +15,8

Перегаси липидов +43,2- +23,3- +28,4- +91,3- +55,0- +149,0- +80,1-

Супероксиддисму та за +119,2- +130,3- +140,3- +15,6- +24,3- +38,I- +238,3-

Протонная АТ»аза -42,5- -25,7- -20,2- -20,0-

Изменение достоверно

сии не было связано с их новообразованием, т.к. активность Асп-и АлЛТ I,кокарда снпхалась (табл.1). Возможно, повышенный уровень глутамата, аспартата и аланина в сердце при гипероксии частично обусловлено торможением ферментативных путей их утилизации.

Содержание водорастворимых и солерастворимых белков в миокарде, гак и в мозгу, при действии ГБО изменялось незначительно. Напротив, количество белковых тиоловых групп снижалось значительно (на 33,8$). 1£ак к в других тканях, распад белков в миокарде представляет равдомический процесс. В состоянии равновесия скорости синтеза и распада равны. При гипероксии это может нарушиться. Как и в мозгу, активность нейтральной протеиназы сердца при гипероксии не изменялась, кислой - возрастала. Интенсивность автолиза также не изменялась. Активность же протаминрасщепляющей протеиназы миокарда снижалась на 22,3$ (табл.2).

При гипероксии нами замечено повышение уровня аммиака и снижение глутамина в скелетных мышцах. Однако убыль амидного дзота глутамина в мышцах при этом не покрывал прирост аммиака. Наряду с г-гутамиком, вероятнш,т источником аммиака в мышцах при гипероксии может быть аденилат, который под действием аденилатдезаминазы превращается в инозиновую кислоту. Аммиак в мышцах образуется и за счет распада амидных групп белков (Козлов,1971). Изменение же количества глутамата в скелетных мышцах при гипероксии сходно с " таковой в миокарде. В то же время увеличение уровня аспартата в мышцах было выражено в большей степени (на 113,6$), чем в миокарде. Изменение содержания аланина в окелетных мышцах при действии ГБО статистически, недостоверно по отношению к контролю (табл.1).

При гипероксигенации организма имело место нарушение метаболизма в печени. При действии 4 ати кислорода активность глута-миназы печени возрастала, активность же Асп- и АлАТ существенно не изменялась. Изменялась активность протеиназ печени. При этом

больше всего снижалась активность протамкнрасщепляющей протсииазы; интенсивность автолиза возрастала на 75,1$ (табл.1,2). Как и в других тканях, при действии ГБО в печени натапливалось значптель-кое количество аммиака при одновременном снижении глутамина. Увеличивалось также количество аспартата и аланина. В отлично от мозга и миокарда, при гипероксии наблюдалось более существенное возраставие уровня водорастворимых белков печени (на 35,2$ выше контроля); содержание белковых зн-групп снижалось (табл.2).

При действии ГБО содержание аммиака в почках возрастало, глутамина - снижалось. В метаболизме аммиака в почтах активное участие принимает аспартат, уровень которого при гипероксии возрастал. Изменение содержания глутаматп и аланкна при этом статистически недостоверно по отношению к контролю. Активность Асп- и АлАТ не изменялась. Основное значение для образования аммиака в почке при гипероксии имеет реакция дезамидирования глутамина, катализируемая глуташшазой, активность которой возрастала на 60,2$ (табл.1). Некоторая часть аммиака в почке может образоваться в результате трансаминирования глутамина и <*-кетокислоти с последующим дезаминированием, катализируемым глутаминазой 2-й.

При действии ГБО имело место некоторое возрастание количества водорастворимых белков почек. Уровень белковых зн_групп снижался. В отличие от мозга, сердца, печени, в почках при гипероксии не изменялась активность нейтральной, кислой и яротаминрао-щепляшцей протеиназ; не изменялась и активность автолиза (таблД).

Полученные нами данные показывают, что при действии ГБО наблюдались определенные изменения в системе азотистого обмена селезёнки. Количество аммиака в ней возрастало, но в меньшей степени, чем в других тканях. С имение уровня глутамина, яланиня и аспартата статистически недостоверно по отношению к контролю. Количество глутамата возрастало. Активность АслАТ селении*!! при

Таблица 2-

Измененке содерхашш белков, белковых сульфгидрильных групп, протеолитической и автолиткческой активности (в к контролю) различных тканей белых крыс в судорожном периоде кислородного отравления (4 ати)

компоненты ; мозг ; печень почки селезёнка сердце : кровь

Водорастворимые белки +13,2- +35,2- +12,4- +17,2- +11,6 +0,5

Сульфгкдрильные гоуппы -7,9 -18,1-. - -13,7- -18,6- -38,8- -12,5*

Нейтральная пептид-гидролаза 0,0 +26,1- +5,6 +37,5- +7,2 0,0

Кислая пептид-гидролаза »■15,0* +18,4- ' +3,7 +41,7- +31,3- +42,9-

Проташнрасдеплякьй -г

пептид-гидролаза +18,1- -40,8- +3,8 +28,4- -22,3- -42,1-

Интенсивность автолиза +21,5- +75,1* +4,5 -0,5 +8,4 +142,3-

' Изменение достоверно

этом не изменялась, АлАТ - снижалась. Имело место достоверное повышение количества водорастворимых белков и снижение уровня 5Н -групп. Активность протеиназ селезёнки при гилероксии возрастала, интенсивность автолиза не менялась (табл.1,2).

При кислородном отравлении имело место ре зкое повышение уровня аммиака, глутамина, глутамата, аспартата и алашша в крови. Возрастала также активность АспАТ. Изменение активности АлАТ статистически недостоверно по отношению к контролю. Наряду о новообразованием аминокислот, изменения аминокислотного состава крови при гилероксии, очевидно, являются вторичными и отражают нарушения обмена аминокислот в других тканях. Содержание белков в сыворотке крови при этом не изменялось. Уровень белковых зн -групп снижался. Активность нейтральной протеиназы возрастала, проташн-расщеплящей - снижалась. Замечено резкое возрастание интенсивности процессов автолиза сыворотки крови при действии ГБО (табл. 1,2). Из проведенных исследований вытекает возможность получения информации об острых формах кислородного отравления, анализируя кровь.

Таким образом, процесс кислородного отравления сопровождается сложными и глубокими изменениями в обмене веществ различных тканей. В этом сложном процессе можно выявить ряд общих закономерностей, характерных для разных тканей. Нами установлено, что действие ГБО вызывает нарушения обмена веществ не только в нервной ткани, но и всех исследованных органах животных.

Изменение количества метаболитов и активности ферментов в тканях при гипероксии является следствием нарушений, происходящих в самих тканях. Изменение в крови количества низкомолекулярных азотистых веществ, белков и активности ферментов, которые синтезируются и осуществляют свои функции непосредственно в клетках, ' обусловлено изменением проницаемости клеточных мембран и усилени-

'ем выхода метаболитов и энзимов из тканей в кровяное русло. Био-' химические сдвиги в крови, в свою очередь, могут влиять на обмен веществ в тканях. В частности, возрастание гемлнового железа в сыворотке крови играет существенную роль в нарушении функций нервной системы и других тканой вследствие накопления в них перекисей липидов при действии ГБО (Кричевская и др.,1980),

Согласно назшм данным, концентрация перекисей липядов в тканях и субклеточных фракциях мозга при гипероксии повышалась. В терминальной стадии имело место значительное накопление липид-ных перекисей в тканях по сравнению с судорожной фазой ГБО.

Повышение концентрации кислорода в тканях может иметь следствием образование супероксидного анион-радикала, обезвреживание которого осуществляет СОД. В настоящее время накоплено много фак-тоз, указывающих на ключевое значение этого фермента для организмов, использующих кислород в своей жизнедеятельности. Проведенные нами исследования показали, что при действии избыточных концентраций кислорода на организм наблюдалось резкое возрастание активности СОД тканей. При одном и том же времени экспозиции животных в кислородной среде её активность в разных тканях изменялась по-разному. Значительное увеличение её активности наблюдалось в терминальной отадии ГБО в сыворотке крови, печени, почках, мозгу. Возрастание активности СОД в тканях при гипероксии свидетельствует о защитной роли от повреждающего действия и соответствует её биологической роли, которую она выполняет в клетке.

Изложенное позволяет предположить, что введение профилактических доз СОД должно привести к дисмутации части или всех супер-оксидних анион-радикалов, образуемых при действии ГБО на организм. Очевидно, благодаря способности дисмутировать и предупреждать образование синглетного кислорода, СОД препятствует • также накоплению перекисей липидов в тканях. Добавление гомоген-

ного препарата СОД вызывало снижение уровня перекисей лштидов ь тканях (кроме мозга) и их гомогенатах в условиях гипероксии. Полученные результаты придают реальность гипотезе о решающей ролл СОД при выживании организмов в условиях ГБО и свидетельствуют о непосредственном участии перекисей липидов в механизме токсичности кислорода. СОД препятствует накоплению перекисей липидов в ткпнах при гипероксии и способствует разрушению части образованных jh-пидных перекисей.

Наряду с нарушением азотистого метаболизма *А активности ферментов его регуляции, перекисного окисления липидов к активности СОД тканей, при гипероксии происходило изменение активности протонной АТФазы наряду с мозгом в митохондриях печени, миокарда и скелетных мь иц. 60-шнутное воздействие I ати кислорода и кратковременное (Ю мин) действие 5 ати приводило к повышению её активности и значительнее всего (на 124,7%) в митохондриях миокарда. В митохондриях печени и скелетных мышц это повышение составило 20,5-43,1$ по сразнешло с контролем. Благодаря повышение актив- ' ности протонной АТОазы митохондрий тканей, по-видимому, достигается энергетическое обеспечение процессов, связанных с реализацией благоприятного эффекта ГБО при её использовании в лечебных целях для устранения общих или локальных гипоксических состояний.

В то же время в опытах In vitro при экспозиции митохонд-риальных препаратов тканей в условиях ГБО I ати в течение 60 win и 5 ати в течение Ю мин её активность снижалась. Полученные' результаты по влиянию ГБО на'активность Н*-А!№аэы митохондрий в опытах in vivo и in vitro свидетельствуют о важной роли регуля-торных систем и защитных структур в интактном организме. Пролонгирование действия 5 ати кислорода до судорожного и терминального состояний сопровождалось снижением активности протонной АТ^азы митохондрий исследованных тканей на IS,3-26,7% (табл.1).

Наши и литературные ( ЬатЪе^зеп, 1966; Ниронкин,19?2) данные показывают, что хотя в клинической картине кислородного отравления наиболее наглядно проявляются поранения органов дыхания и ДНС, развивается кислородное отравление всех других органов -общетоксическая форма. В частности, кроме мозга, нарушение метаболизма происходило в печени, почках, сердае, скелетных мышцах, селезёнке и крови.

Полученные нами дг-шые показывают, что к избытку кислорода чувствительны все ткани и выявить это можно, в частности, по изменению метаболизма. Однако глубина повреждений при одном и том же напряжении кислорода в отдельных тканях, по-видимовд, разная. Более низкая концентрация кислорода в мозге по сравнению с печенью, почками и другими органами при гилероксии, не исключает возможности более глубоких поражений его структуры и функции. Изменения же, возникшие в ЦНС, в силу её регулирующей функции в отношении всего организма в целом, в большей степени могут сказаться на функции других органов и тканей.

При кислородном отравлении отдельные органы испытывают двоякое действие: повышенной концентрации рлслорода в их собственных клетках, с одной стороны, и нарушенной нервной и гормональной регуляции, в другой. При продолжении действия ГЕО нарушение функций и метаболизма отдельных органов может оказать определенное влияние также и на функцию ЦНС, усугубляя действие кислорода на неё. И это сложное взаик влияние нарушений метаболизма и функций разных органов обусловливает возникновение общей картины кислородного отравления всего организма.

Таким образом, нарушения метаболизма в каждой ткани вносят свой вклад в генезе раостройств кислородного отравления и лежат в основе общетоксического действия ГБО. По нашему мнению, нервная и легочная формы - частные проявления общетокоического действия

ГБО. Кроме того, общетоксическая: форга кислородного отравления проявляется не только на тканевом, но и на клеточном, субклеточном и биохимическом уровнях. Наши представления о генезе расстройств при кислородном отравлении можно резюмировать в виде следующей схемы (рис.1).

При повышении парциального давления кислорода в среде увеличивается его содержание в крови и тканях. Повышение концентрации кислорода в начальный период вызывает включение защитных механизмов - физиологических и биохимических. Физиологические защитные механйЕШ - урежение дыхания и сердечных сокращений, сужени-сосудов, уменьшение количества эритроцитов в крови, - направлены на снижение доставки кислорода к тканям.

Известно, что при нормальном парциальном давлении внутриклеточная концентрация кислорода большинства тканей животных ниже, чем величина Кш по кислороду дат большинства оксидаз. Это означает, что повышение парциального давления кислорода при гипероксии может привести к ускорению транспорта электронов по ранее фу.псци-онировавшим редокс-цепям, включению ранее ^Функционировавших' термин^лыых оксидаз, появлению новых центров неферментативного восстановления кислорсда и генерации кислородсодержащих свободных радикалов, активации антиокскдантных систем.

При высоких давлениях кислорода и продолжительных экспозициях происходит еры, и исчерпание защитно-приспособительных механизмов организма. Продолжительное действие ГБО приводит к 100$-му не.оыщешпо кислородом гемоглобина эритроцитов и увеличению физически растворенного кислорода плазме крови.

Повышенное напряжение кислорода в крови облегчает его восстановление ионам*; негеминового желепа, что приводит к появлению активных интермедиа тол кислорода ОН-, Н2О2, которые кши ¡.пируют цепное свободнорадикальное окисление ненасыщенных жирных кислот

ftic. 1

Схема послодопательиых этапов тиксического действии кислорода па организм

в плазме крови и мембранах эритроцитов. Активация перекисного окисления липидов в мембранах эритроцитов приводит к виходу в плазад гемоглобина, который в свою очередь выступает в качестве мощного прооксиданта.

Накопление продуктов перекисного окисления липидов в крови и повышение клеточной проницаемости создают предпосылки для увеличения перехода продуктов перекисного окисления липидов в ткани. Увеличение р0£ в клетке в свою очередь приводит к лавинообразному накоплению свободных радикалов О^", ОН* и ^С^. Взаимопревращение активных форм' кислорода и их взаимодействие с липидншли компонентами мембранных структур клетки приводит к накоплению продуктов перекисного окисления липидов, способных модифицировать свойства мембран, мембранносвязанных белков, ферментов, рецепторов и-кана-лообразователей.

Реакция клеток на острое воздействие повышенных концентраций кислорода опосредована различными биохимическими механизмами: окислением БН-групп белков и ферментов, выходом лизосомяых кислых' гидролаз, изменением скорости переноса ионов через мембраны, нарушением активности мембранных и антиокислительных ферментов, а также различных путей метаболизма. Результатом такого модифицирующего действия ГБО может явитьоя изменение функциональных характер ристик тканей, приводящих в конечном счете к гибели организма.

Для понимания процеосов патохимии кислородной интоксикации, на ваш взгляд, важное значение имеют полученные наш данные о продолжительности и характере восстановления метаболизма ряда компонентов и активности ферментов различных тканей после однократного воздействия на животных этого фактора. Нами ранее было показано, что при действии ГБО 6 ати происходит глубокое изменение азотистого обмена мозга (Габибов,1968). Однако относительно других тканей

до настоящего исследования таких материалов в литературе нет. Наши работы установили, что изменения, наблюдаемые в тканях при гипероксии, не устранялись в некоторых случаях дане через 2 месяца после действия '4 или 5 ати кислорода.

Содержание ашиака в мозгу удерживалось на стабильно высоком уровне в точение 25 суток постгипероксического периода. Как при гипероксии, в постгипероксическом периоде глутамин может быть одним из источников аммиака з мозгу, однако убыль амидкого азота глутамина но покрывал прирост аммиака. Сниженный уровень глутамила в мозгу сохранялся до 25 суток. Напротив, количество глутамата повышено в течение 10 суток после действия ГБО. Активность глутана зы мозга повышена до 15 суток. Уровень аспартата мозга также повышен до 15 суток. Содержание аланина в мозгу в постгипероксическом периоде было повышенным по сравнению с контролем через I и 5 суток, АлАГ - не претерпевала существенных изменений (кроме 25 суток). Очевидно, в новообразовании глутамата и аспартата в мозгу в постгипероксическом периоде большую роль играет АспАТ.

Сниженный действием ГБО уровень ГАМК в мозгу достигал исходного уровня уже через I сутки. В последующие сроки её содержание продолжало возрастать, достигая максимума через 5, 10, 15 суток. Начиная с 25 суток, уровень ГАМК достигал исходных величин. Изменение активности ДГК мозга в постгипероксическом периоде соответствовало динамике содержания ГАМК. Её активность достигала контрольного уровня через 1 сутки и возрастала через 5, 10 и 15 суток (Габибов,1968). В изменении же активность других ферментов метаболизма ГАМК в постгипероксическом периоде такого соответствия не было. Активность ГАМК-пируват-АТ была увеличена через 5, 10 и 25 суток, ГАМК-об-кетоглутарат-АТ - через I, 5, 25 суток, а ГАМК-1№К->АТ - снижалась в течение 40 суток после действия гипероксии.

Водорастворимые белки мозга в псстгипсроксическом периоде не претерпевали существенных количественна изменений. Напротив, содержите их тиоловых групп было стпеено во все исследовании« сроки после действия гипероксии.

Активность СОД мозга в течение 3-х суток постглперокспчос-кого периода сохранялась на очень высоком уровне. Содержание ли-пидных перекисой в мозгу уко через I час достигало исходного уровня, а спустя I сутки снижалась на 44,6$ ¡¡о сравнению с контролем.

Активность протонной А'№азы митохондрий мозга оставалась сниженной в течение 25 суток; её активность нормализовалась спустя 40-60 суток постгипероксического периода.

В миокарде повышенный действием ГБО уровень аммиака не нор > мализовался даже через 60 суток. Изменение количества глутамлиа и глутамкназной активности миокарда при этом недостоверно по отношению к контролю. В отлкчке о? мозга, в постгиперокскческом периоде глутамил в миокарде, по-видимому, не является основным источником аммиака. Содержание глутаниновой кислоты было повышено во все периоды, аспарагиновой кислоты - через I сутки, аланила -до 25 суток. Асп- и АлАТ-активность миокарда снижена через I сутки. В последующие периоды акти ность АспАТ не изменялась, АлАТ-активность возрастала к 40 суткам и нормализовалась через 60 суток. Как и в нервной ткани, уровень водорастворимых белков шокарда во все изученные сроки постгипероксического периода не отличался от контроля. Количество белковых тиоловых групп миокарда при этом было сниженным.

Содержание перекисей лиивдов в сердце было повиданным через I час к нормализовалось спустя I и 3 сутки. Активность СОД миокарда уже через I час достигала контрольного уровня и снижалась через I и 3 сутки постгипероксического периода.

Активность протонной АТФазы митохондрий сердца достигала исходного уровня через I час и существенно не отличалась от контроля во все исследованные сроки после действия ГБО.

Активность протонной АТФазы митохондрий скелетных мышц снижалась в течение 3-х суток и существенно не отличалась от контроля в последующие периоды после действия 5 ати кислорода. Напротив, количество перекисей липидов в скелетных мышцах оставалось повышенным до 3-х суток, в то время как активность СОД при этом резко снижалась. Содержание аммиака в скелетных мышцах было повышенным до 25 суток. Полученные нами результаты показывают, что при гипероксии и в постгипероксическом периоде глутамин скелетных мышц может быть одним из источников аммиака, В этом отношении метаболизм скелетных мышц в постгипероксическом периоде сходен с таковым нервной ткани. Уровеиз глутамата в скелетных мышцах повышен до 25 суток, аспартата - до 10 суток, аланина - в течение I и 5 суток.

Нарушенные действием ГБО взаимоотношения компонентов азотистого обмена сохранялись в печени в течение длительного времени. Уровень аммиака в печени повышен вплоть до 40 суток, глутамина снижен через 10, 15 и 25 суток; глутаминазная активность повышена в течение 40 суток. Количество глутамата в печени существенно не изменялось, аспартата - увеличено через I и 15 суток. Изменение . актшности АспАТ печени в постгипероксическом периоде статистически недостоверно в сравнения с контролем. АлАТ-активность повышена через 15, 25 и 40 оуток. В отличие от мозга и сердаа, количество водорастворимых белков печени в постгипероксотеоком периоде было повышенный. Уровень белковых тиолоьых групп был сниженным в вое изученные сроки после действия ГБО. Содержание перекисей липидов в печени повышалось через I час, снижалось через I оутки (па 37,7$ ниже исходного уровня) и нормализовалось спустя 3-е

за

суток. Активность СОД печени повышена во все изученные сроки постгипероксического периода. Активность К^-АТ^азы митохондрий печени снижена через I час на 17,6$, спустя 1,3,5 оуток - на 8,111,1$. Начиная о Ю оуток, её активность существенно не отличалась от контроля.

В почках количество перекисей лилвдов было повышенным только через I чао (на 30,4$); оно нормализовалось спустя I сутки л снижалооь на 27,4$ по сравнению о контролем через 3-е оуток. Уровень аммиака в почках повышен до 40 суток, глутамина - онижен в течение 15 суток. Глутаминазная активность почек повышена до 25 суток. Количество глутамата увеличено через 5 оуток, аспартата -до 15 суток; алаюш в поотгипероксическом периоде существенно не изменялся. Активность АспАТ почек повышена через 5, 15 ц 40 суток, АлАТ - через 15 и 25 оуток. Таким образом, увеличение количества глутамата, аспартата и аланина в почках в поотгипероксическом периоде может быть обусловлено некоторым их новообразованием за счет возросшей активности Асп- и АлАТ.

Количество водорастворимых белков почек в поотгипероксическом периоде имело тенденцию к повышению, а через I и 25 суток это повышение статистически достоверно по отношению к контролю. Содержание белковых тиоловых групп почек при этом было сниженным.

В селезёнке содержание аммиака увеличено до 25 суток, глутамина снижено до 5 и 10 суток. Уровень глутамата повышен до 25 суток, аспартат и аланин количественно не изменялись. Активность АспАТ снижена через 25 суток, АлАТ - через I сутки. Количество водорастворимых белков селезёнки повышено до 10 суток. Содержание белковых тиоловых групп снижено в течение всех изученных сроков постгипероксического периода. Уровень перекисей липидов в селезёнке сохранялся повышенным через I чао и нормализовался к I суткам. Активность СОД селезёнки снижена через I чао и не отличалась от

контроля в последующие периоды после действия ГБО.

В крови содержание пербкисей липидов такие повышено через I час и постепенно нормализовалось к 3 суткам. Активность СОД крови оставалась повышенной во все изученные сроки (через I час, I и 3 сутки). В крови уровень аммиака сохраняясь повышенным до 40 суток. В отличие от других тканей, количество глутамина крови в постгипероксическом периоде повышено. Уровень глутамата, аспартата и алаюша такта увеличен.Активность АсдАТ крови повышена через 10 к 40 суток, АлАТ-активность существенно не изменялась. Содержание белков сыророткп крови не изменялось, белковых тколовых групп снималось во все изученные срою: постгкпероксического периода.

Итак, однократная гипероксия вызывает патологическую реакцию о резким и довольно стойким изменением метаболизма тканей животных. Глубокое нарушение процессов обмена веществ способствует превраще—' лжо острого кислородного отравления в длительный патологический процесс - "гипероксическую' болезнь". Нормализация метаболизма наступала в основном через 25-40 суток, а в отдельных органах через 60 суток после действия ГБО.

В отличие от азотистых компонентов, содержание перекисей ли-шгдов в тканях после действия ишероксии нормализовалось быстрее. В мозгу уровень липидных перекисей нормализовался через I час, в других тканях - в течение 3-х суток. Быстра^ нормализация уровня липидных перекисей, по-видимому, является существенным условием втгизашга животных в постгипероксическом периоде и обеспечивается наличием мощных неферментативных и ферментативных антиоксидантных закал, направленных на обезвреживание избыточных количеств липид-ны:г перекисей в организме.

Являясь пусковыми механизмами, перекиси липидов усиливают токсическое действие ГБО путем инициации нарушений проницаемости мембран и активности ферментов. В постгипероксическом периоде их

количество в тканях быстро нормализовалось, однако оставляет оа собой длинный "хвост"'метаболических нарушений.

Анализ проведенных наш исследований в постгшюроксичсском периоде показывает, что кислород под повышенным давлением является токсическим агентом, способным вызывать длительные и труднообратимые изменения в метаболизме различных тканей. Глублш и длительность нарушенного метаболизма, изменение оункции бпоменбрзн, а также образование токсических веществ перекисного'характера делают необходимым использование кислорода в практической деятельности человека и медицине с большой осторожностью. Продолл-лелы-юр (особенно частое) пребывание в гипероксической среде приводит к ряду неблагоприятшдх последствий. Однократное воздействие низких ' давлений кислорода не вызывает такого длительного эффекта, последействия. Нужно иметь в виду, что в клиьтческой практике эти низкие давления применяются многократно и здесь не может быть исключен эффект куьулянии. Этим фактом не следует пренебрегать клиницистам при использовании ГБО.

Чем является новый уровень метаболизма тканей для организма? Является ли он результатом повреждения или защитно-приспособительной реакцией организма в ответ на действие патогенетического ¿актора? Возникшие изменения, особенно на начальных стадиях действия ГБО, можно рассматривать как защитно-приспособительные. Однако при продолжительном действии ГБО мы-имеем дело не с физиологической защитой, а с явлениями патологии. Показательным проявлением этого можно рассматривать повышение содержания перекисей липи-дов, аммиака, возрастание активности протеожза и измекдШя 0 белковом компоненте тканей. Изменения, возникашие в судорохлоЯ и терминальной стадия!: кислородного отравления в тканах ¡тавотных, очевидно, также являются не столько защитной реакцией, сколько результатом "полома" и дискоординации процессов обмена вещестз.

В постгкпероксическом периоде происходит постепенная перестройка процессов обмена веществ в тканях на новый стационарный уровень и организм снова приспосабливается к новым (отличным от гипероксии) условиям среды. Этот процесс реадаптации является длительным и сложным. Одновременно происходит и настройка регуляторных сиотем организма. Немаловажное значение здесь играет специфика экстремального фнктора - гипероксии.

Выводы

1. При действии кислорода род повышенным давлением установлена активация процессов перекионого окисления липидов в тканях, выполняющих роль пусков!« механизмов киолородной интоксикации.

В судорожной фазо кислородного отравления содержание перекисей липидов значительно возрастает в миокарде, затем в селезёнке, крови, скелетных мышцах, мозгу, печени и почках. В терминальной стадии по оривнекию с судорожным состоянием гипероксии в ми&сарде, околотных мышцах и в мозгу происходит значительное возрастание количества продуктов перекионого окисления липидов. В постгилер-оксическом периоде содержание перекисей липидов в тканях, особенно в мозгу, быстро нормализуется, что может иметь определенное значение для выживания животных после прекращения действия гипероксии.

2. При действии кислорода под давлением 5 ети происходит резкое возрастание активности супероксиддксмутазы различных тканей животных. При этом наибольшее увеличение её активности имеет место в крови, затем в почтах, печени, мозгу, миокарде, скелетных мышцах и селезёнке, В постгилероксическом периоде (спуотя I, 24, 72 часа) активность суперокоиддисцутазы повышается в мозгу, крови, печени, нормализуется ь сердце и селезёнке и снижается в почках и скелетных мышцах. Возрастание активности супероксиддксмутази при действии кислорода под повышенны;.; давлением отражает состояние

защитной реакции организма на накопление свободных радикалов и перекисных соединений в тканях и соответствует её биологической роли, которую она выполняет в клетках аэробных организмов.

3. Однократное внутривенное введение гомогенного препарата супероксиддисмутазы, хотя и не защищает животное от кислородного поражения, значительно сникает количество продуктов перекисного окисления липидов в тканях (кроме мозга). В опытах с тканевыми гомогенатами добавленная супероксиддисмутаза отчетливо онижает уровень липидных перекисей во всех тканях, включая и мозг, а также способствует разрушению уже образованных липидных перекисей.

4. При действии кислорода под повышенным давлением происходит нарушение азотистого метаболизма и активности ферментов группы трансаминаз и пептид-гидролаз .различных тканей. Изменение активности ферментов свидетельствует о варугсешта регуляторных механизмов метаболизма органов и тканей при кислородном отравлении, выступая в качестве элементов патологического метаболического статуса, формируемого в условиях кислородной интоксикации.

5. Гипероксия оказывает влияние на активность протонной АТФазы митохондрий мозга, печени, миокарда и скелетных мышц. Эффект гипербарической окоигенации зависит от режимов и времени .экспозиции животных в кислородной среде. Воздействие I ати кислорода на животных в течение 60 мин и 5 ати в течение 10 мин сопровождается повышением активности протонной АТФазы исследованных тканей. В судорожном и терминальном состояниях действия 5 ати кислорода происходит снижение её активности и значительнее 'всего в митохондриях мозга. В постгипероксическом периоде имеет место обратное развитие наблюдаемых изменений. Нормализация активности протонной АТФазы наступает в митохондриях мозга к 25 суткам, скелетных

мышц - к 3 суткам; в митохондриях печени её активность существенно

не отличается от контроля через I сутки, миокарда - спустя I чао после воздействия кислорода под давлением 5 ати.

6. При непосредственной экспозиции митохондриальных препаратов мозга, печени, сердца, скелетных мышц в условиях I ати кислорода в течение 60 мин, 5 ати в течение 10 и 60 мин активность протонной АТФазы снижалась и в большей степени при действии 5 ати кислорода в течение 60 мин.

Полученные результаты по влиянию различных режимов гит рбарической окснгенации на активность протонной АТФазы митохондрий тканей в опытах vivo и in vitro свидетельствуют о важной роли регу-лнторних механизмов и целостности тканевых структур интактного организма в защите от токсического действия кислорода.

7. При действии кислорода под повышенным давлением активнооть транспортной АТФазы возрастает в адерной, митохондриальной и лизо-сомной фракциях головного мозга белых крыс. В миелине увеличение АТФазной активности имеет место только без добавления экзогенных катионов, в нейроглиальных клетках - Са^-АТФазы, нейронах - Mg2+-и суммарной Wg2+,Na+, К^-АТФаэ, а таюсе при ижубировашш препаратов фермента без добавления экзогенных катионов. Напротив, доля уабаинчувствительной Ка+,К<"-АТ®азы при кислородном отравлении значительно снижается в нейроглиальных клетках по сравнению о ней-рональной обогащенной фракцией. Изменение активности транспортных АТФаз свидетельствует о нарушении молекулярной организации мембранных структур при действии избыточных концентраций кислорода на организм.

8. При действии кислорода под повышенным давлением до судорожной стадии ответная реакция на биохимическом уровне более выражена со стороны нейроглиальных клеток, по сравнению с нейронами. К гипероксии нейроглия оказалась более чувствительной. Полученные

результаты позволяют рассматривать иейроглию и сё метаболические системы как первичное место действия избыточных концентраций кислорода на нервную систему.

9. В судорожной фазе кислородного отравления содержание сульфгидрлльних групп водорастворимых белков тканей снижается; большее снижение уровня сульфгидрилышх групп белков наблюдается в сердце, селезёнке и в меньшей степени в печени, почках, мозгу и крови белых крыс. Снижение уровня сульфгидрилышх групп указывает на возможность информационных изменений белков тканей при кислородной интоксикации.

Ю. При действии повышенного давления кислорода до судорог -ной стадии биологические возможности организма, которые приводят к реституции метаболизма, не исчерпываются. Нарушения процессов обмана веществ в тканях при кислородном отравлении в значительной степени являются обратимшш. В постгиперокскческом периоде быстрее воего нормализуется содержаще перекисей липидов в тканях (особенно в нервной). Нормализация уровня низкомолекуляркых азотистых компонентов и активности ферментов их обмена наступает в основном спустя 26-40 суток; содержание белков в постгипероксическом перл-оде в печени нормализуется после 40 суток; падение уровня сульф-гидрильных групп водорастворимых белков тканей сохраняется таковым до 60 суток после прекращения действия повышенного давления кислорода.

II. Чувствительность к гипероксии отдельных органов и характер проявления их реакций различны; кислород под повышенным давлением вызывает разнонаправленные изменения содержания одних и тех же биохимических компонентов в разных органах; особенно четко это прослеживается в характере динамики изменений в постгипероксическом периоде.

Полученные материалы свидетельствуют о том, что наряду с общими механизмами токсического действия кислорода на обмен веществ, характер этого действия в зависимости от особенностей метаболической структуры ткгней монет проявляться по-разному.

Список работ, опубликованных по материалам диссертации

1. Габибов М.М. Система аммиак-глутаминовая кислота-глутамин' мозга крыо в разные сроки после действия кислорода при повышенном давлении //Влияние повышенного давления кислорода на организм. -Ростов-н/Д.:ИТ, 1969. -С.15-16.

2. Габибов М.М. Активность глутаминазы мозга, печени, почек и сердца белых крыо //Вопросы физиол., биохим., зоол. и парази-тол. -Махачкала, 1970. -С.68-69.

3.- Габибов М.М. и др. Активность некоторых ферментов азотистого метаболизма при гипотермии зимосптцего и незимоспящего животного и гипероксии /14.М.Габибов, М.И.Мукаилов.Э.З.Эмирбеков //Материалы 11-й Сев.-Кавк. биохим. конфер. -¡Махачкала, 1970. -С.29-31.

4. Габибов М.М. и др. Активность глутаямназы мозга белых крыо в отдаленные периоды после действия кислорода при повышенном давле нии /М. М. Габибов, С. Т. % рсалова, Д. С. Пирма гомедов

/Дам же. -С.31-32.

5. Изменения в азотистом и углеводно-фосфорном обмене головного мозга при общей гипотермии, гипероксии и совместном их действии /Э.З.Эмирбеков, М.М. Габибов, С. II. Львова, М.И.Мукаилов /Дам же. -С. 107-108.

6. Габибов М.М..Галимов С.Д. Содержание гамма-аминомасляной кио-лоты и глутаматдекарбоксилазная активность мозговой ткани крыс в разные сроки иостгиперочоического периода //Вопросы биохимии нервной системы. -Махачкала, 1971." -С.14-15.

7. Габибов М.М. и др. Активность аспартат- и алашшаминотрансфе-раз мозга, печени, почек, сердца, крови и селезёнки крыо в отдаленные периода пооле дейотвия повышенного давления кислорода /М.М.Габибов,Э.З.Эмирбеков.А,Б.Козлов //Применение кислорода

под повышенным давлением в медицине. -М., 1971, -C.2I0-2II.

8. Габибов М.М. Активность глутамшазы мозга, печени, почек и сердца белее крыс при действии кислорода под повышенным давлением //Материалы науч. конфер. физиол., биохим., патофизиол.

и фармакол., посвшц. 50-летию установления Советской власти в Дагестане. -Махачкала, 1970. -С.15.

9. Габибов М.М. Содержание ГАМК и активность ферментов, участвующих в её метаболизме, в головном мозгу крыс в разные сроки после действия повышенного давления кислорода

//У1 конфер. по кейрохимии. -Л., 1972. -С.39.

10.Азотистый метаболизм головного мозга при различных функциональных состояниях /Э.З.Эмирбеков,М.М.Габибов,М.И.Мукаилов, Б.С.Муиаев ///I конфер. по нейрохимии. -Л., 1972. -С.176.

11.Габибов М.М..Эмирбеков Э.З. Изменение некоторых азотистых метаболитов в скелетной и сердечной мышцах при гипероксии //11-а Всес. конфер. по биохимии мышечной системы. -Л., 1972. -С.^0.

12.Габибов М.М..Эмирбеков Э.З. Метаболизм азота мозга крыо в судорожном периоде кислородного отравления //Эпилепсия (клиника, патогенез, лечение). -М., 1972. -С.380-381.

13.Габибов М.М..Эмирбеков Э.З. Активность ферментов азотистого обмена в мозге крыс после действия кислорода под повшенным давлением /Акр. биохим. журн. -1973. -Т.45, Ii 5. -С.577-580.

14..Габибов М.М. Активность аспартат- и аланинаминотрансфераз мозга, печени, почек, сердца, крови и селезёнки крыс при действии кислорода под повышенным давлением //Вопросы биохимии нервной системы. -Махачкала, 1973. Т.Н. -С.36-39.

15.Габибов М.М..Эмирбекова A.A. Сульфгидрильные группы белков и общее содержание белков в водорастворимой фракции мозга при многократных совместных воздействиях гипотермии и гипероксии • //'кр. биохим. журн. -1974. -Т.46, «I. -С.602-605.

16.Метаболизм мозга гомо- и гетеротермннх животных при охлаждении и гиперокоии /Э.З.Эмирбеков.М.М.Габибов.С.П.Львова и др. //Ш-й Всес. биохмм. съезд. Тезисы сеид. докл. -Рига, 1974. -T.I. -С.196.

17.Гэбибов М.М..Эмирбеков Э.З. Динамика сульфгидрильных групп водорастворимых белков тканей крыс при гиперокоии и в постги-перокоическом периоде /Дагестанский госукиверсптет. -Махачкала, 1974. -6 с. -Деп. в ВИНИТИ I.I1.74, Ii 3142-74.

18.Габибов М.М..Эмирбеков Э.З. Интенсивность протеолитических и автолитических процессов тканей при действии кислорода под повышенным давлением //Патол. физиол. и эксперим. терапия; -

1975. -Т.2, в.5. -С.69-72.

19.Габибов М.М. Содержание аммиака, глутагяша, глутаминовой кислоты в тканях крыс при. гиперокоии и после нее /Досмяч.биол. и авиакосмич. мед. -1975. -JS 2. -С.12-16.

20.Сравнительные изменения метаболизма мозга при гипотермии и гиперокоии /Э.3.Эмирбеков,С.Л.Львова.М.М.Габкбов,A.A.Эмирбе-кова //Материалы 3-й Сев.-Кавк. биохлм. колфер. -Ростов iyX,

1976. -С.12?.

21.Габибов М.М. АТФазная активность фраэдий нервной ткани в норме и при гиперокоии /ДН нейрохим. конфер. Тезисы секц. сообщ. -Л., 1976. -C.I20-I2I.

22.Габибов М.М..Эмирбекова A.A. Низкомолекулярные азотистые компоненты мозга крыс при гиперокоии //Механизмы адаптации живых организмов к влиянию факторов среды. Тезисы докл. 1-го Воео. совещ. -Л., 1977. -C.30-3I.

23.Габибов М.М. АТФазная активность нейроналъной и глиальной обогащенных фракций коры головного мозга в норме и при гиперокоии //Укр. биохим. жури. -1978. -Т.50, « 3. -С.275-280.

24.Габибов М.М. Эффект супероксиддисмутазы на содержание перекисей лппидов в миокарде и скелетных митцах при гипероксии //11-я Всес. конфер. по биохимии мышц. -Л., 1978. -С.51.

25.Габибов М.М. Содержание перекисей липидов, активность супер-оксидцисмутазы и эффект экзогенной оупероксиддисмутазы на уровень липоперекисей в тканях при гипероксии /Дагестанский госуниверситет. --Махачкала, 1978. -12 с. -Деп. в ВИНИТИ' 1.08.78, И 2614-78.

26.Габибов М.М..Карагезян К.Г., Влияние экзогенной оупероксиддисмутазы на содержание перекисей липидов в гомогенатах тканей при гипероксии //Вопросы мед.химии. -1980. -if 5. -С.646-650.

27.Габибов М.М. Состояние метаболизма различных тканей животных при гипероксии и в постгипероксичеоком периоде //Тезисы У1 Между :гар. конгресс по гипербарической медицине 2-6 сентября 1981 г., Москва. -М., 1981. -С.178-179.

28. Gabibov М.М. The state с" metabolism of different tissues in animals in hypcroxia and ¿¡oothyperoxic period //Abstracts Y11 Intern. Congress on Hyperbaric Medicine, Moscow, 2-6 September 1981. -M.,1981. -P.411.

29.Габибов М.М. Нептид-гидролазная активность тканей головного мозга крыс при действии различных режимов гипорбарической окскгенации /Дагестанский госуниверситет. -1.1ахачкала, 1981. -13 с. -Деп. в ВИНИТИ 11.06.81, 2833-81.

30.Габибов М.М..Карагезян К.Г. Изучение процессов окисления липидов в различных тканях крыс при гиперокоии и в постгипероксичеоком периоде //Бюлл. эксперим. биол. и мед. -1981. -T.XCI, Я 6. -С.662-684.

31.Габибов М.М. Пептид-гидролазная активность сыворотки крови, миокарда и скелетных мышц крыо при дейотвии различных режимов

гипербарической оксигенации /Акр. биохим. яурн. -1983. -Т.55, 5. -С. 560-563.

32.Габибов М.М. Состояние метаболизма различных тканей животных при гипероксии и в ностгипероксическом периоде /Дипорбарич. оксигенация. Материалы УН Мевдунар. конгресса. -М. :11аука, 1983. -Т.П. -С. 103-106.

33.Габибов М.М. Коррекция процессов перекисного окисления липидов в тканях живо', них под влиянием экзогенной супероксиддисмутазы в условиях воздействия гипербарической оксигенации /Дармакол. коррекция кислородзависимых патол. состояний. Тезисы докл. I Воес. симпозиума. -М., 1984. -С.170-171.

34.Габибов М.М. Влияние лечебных и токсических режимов ГБО на активность протонной АТФазы митохондрий различных тканей белых крыс /Дипербарич. оксигенация (в хирургии и реаниматол.). Тезисы III Всес. симп. по гипербарич, оксигенации. -М. ,,1985. -£.181-182.

35.Габибов М.М. Влияние гипербарической оксигенации: на активность протонной АТФазы митохондрий различных тканей крыс

/Акр. биохим. журн. -1986. -Т.58, й 5. -С.81-83.

Ртп.ГГО. 29.09.89. Ьак. 428. Г-6ЧС016. Бесплатно.