Биохимические механизмы протекторного действия сывороточного альбумина, нитроглицерина и протимозина альфа при гипокинетическом и вестибулярном воздействиях

Сагакянц, Александр Борисович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биохимические механизмы протекторного действия сывороточного альбумина, нитроглицерина и протимозина альфа при гипокинетическом и вестибулярном воздействиях
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимические механизмы протекторного действия сывороточного альбумина, нитроглицерина и протимозина альфа при гипокинетическом и вестибулярном воздействиях"

На правах рукописи

САГАКЯНЦ АЛЕКСАНДР БОРИСОВИЧ

БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ПРОТЕКТОРНОГО ДЕЙСТВИЯ СЫВОРОТОЧНОГО АЛЬБУМИНА, НИТРОГЛИЦЕРИНА И ПРОТИМОЗИНА АЛЬФА ПРИ ГИПОКИНЕТИЧЕСКОМ И ВЕСТИБУЛЯРНОМ ВОЗДЕЙСТВИЯХ

03.00 04 - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Ростов-на-Дону 2003

Работа выполнена на базе кафедры биохимии и микробиологии Ростовского государственного университета и биохимической лаборатории кафедры фармакологии Ростовского государственного медицинского университета.

Научный руководитель: кандидат биологических наук, доцент Синичкин A.A.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор Погорелова Т.Н.

доктор биологических наук, профессор Волжина Н.Г.

Ведущая организация - К> банская государственная медицинская академия

Защита диссертации состоится 26 ноября 2003 года в 13°° часов на заседании диссертационного совета Д.212.208.07 по биологическим наукам Ростовского государственного университета (344006, г. Ростов-на-Дону, Б.Садовая 105, РГУ, ауд. 203)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Ростовского государственного университета (344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Пушкинская, 148).

Автореферат разослан 24 октября 2003 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

В.В Бабенко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность проблемы. В условиях развития современного общества человек все чаще оказывается в ситуациях, которые предъявляют к его организму новые требования, согласно которым развивается новая стратегия существования, определяющая жизнь организма. Проблема изучения роли общих неспецифических адаптационных реакций в регуляции резистентности организма привлекает все большее число исследователей, несмотря на свою более чем пятидесятилетнюю историю (Баженов Ю И., 1981; Панин Л.Е, 1984. Овсянников В Г., 1987. Гаркави, Л.Х, Квакина Е Б. и соавт, 1978, 1990, 2002; Зайчик А Ш . Чурилов Л П, 1999)

Ограничение двигательной активности - гипокинезия, гиподинамия, иммобилизация, а гакже болезнь движения (кинетозы) - своеобразный набор симптомокомплексов, формирующийся при действии различных ускорений, являются ярко выраженными «рессорными факторами, вызывающими различные физиологические и биохимические сдвиги в организме, направленные на приспособление организма (Панферова Н Е., 1977; Федоров И.В., 1984; Шидловская ТЕ.. 1984; Яснецов В В и соавт., 1993; Черешнев В.А, Юшков Б.Г., 2001). Биохимические сдвиги при действии на организм указанных ситуаций уже давно привлекают внимание исследователей, работы которых в большинстве случаев затрагивали последствия действия длительных сроков рассматриваемых стрессовых воздействий, в то время как события, происходящие на ранних эт апах воздействий, особенно в чрезвычайных условиях, оставались за пределами их внимания. Эти изменения, происходящие на ранних этапах формирования ответной реакции организма на любое стрессороное воздействие, имеют чрезвычайное значение, так как именно их характер, направление и соотношение определяет вероятность эффективного приспособления организма, а значит, и его жизнь (Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001).

С этой точки зрения особое значение имеют молекулы сывороточного альбумина, представляющие собой сложную, полифункциональную, коммуникативную структуру, осуществляющую гомеостатическую функцию в организме, способные проникать через различные межгканевые барьеры (Синичкин А.А., 1982, 2000) Выявлено особое значение изменения структурного и функционального состояния молекул альбумина, как для нормальной жизнедеятельности организма, так и при различных видах патологии (Чегер С.П., 1975; Foster J. F., 1992; Титов В.Н , 1999, Лопухин Ю.М. и соавт., 2000). В то же время особенности поведения белка при стрессовых ситуациях практически не исследовались.

Актуальным также является поиск наиболее эффективных средств профилактики и лечения патологических процессов, вызываемых этими стрессовыми воздействиями. Список

фармакологических препаратов, которые используют« для ирифплшпики иоследствий

РОС НАЦИОНАЛЬНАЯ

библиотека

С. Петербург

гипокинезии и вестибулярного воздействия, достаточно широк, но возможность фармакологической коррекции функциональных сдвигов при данных воздействиях по-прежнему ограничивается весьма низкой эффективностью применяемых средств, а также обилием побочных явлений, развивающихся при их использовании ^аполуэку П.Я « а!., 1984; Налетов С.В исоавт., 1998).

С этой точки зрения актуальными являются исследования протмошна альфа, секретируемого тимусом и рядом других клеток и являющийся белком с молекулярной массой 12,6 кДа, проявившим протекторный эффект при некоторых формах стрессового воздействия (Каркишенко В.Н., 2001) Молекулярные механизмы эффектов протимозина альфа до настоящего времени не выяснены

В условиях 01раничения мышечной подвижности определенным образом меняются механизмы действия практически всех фармакологических препаратов С подобной ситуацией (частичная или полная иммобилизация) часто сталкиваются в кардиологической практике при различных формах заболевания сердечно-сосудистой системы. Поэтому актуальным является исследование особенностей действия нитроглицерина в условиях гипокинезии

Исходя из особенностей строения и метаболизма протимозина альфа, а также нитроглицерина, можно предположить возможность их взаимодействия с различными белками крови, в частности с молекулами сывороточного альбумина, характер и шачение которых в условиях действия стрессорных факторов на ранних этапах практически не исследовался Также практически не изучено влияние введения экзогенного сывороточного альбумина при стрессорных воздействиях на организм.

Целью настоящей работы явилось исследование биохимических механизмов протекторного действия сывороточного альбумина, нитроглицерина и протимозина альфа при гипокинетическом и вестибулярном воздействиях.

Задачи исследования:

1. Изучить в сыворотке крови и тканях лабораторных животных крыс динамику выбранных биохимических показателей при гипокинетическом и комбинированном (гипокинезия + укачивание) стрессовых воздействиях;

2. Изучить влияние введения сывороточного альбумина, нитроглицерина, протимозина а на динамику выбранных биохимических показателей сыворотки крови и тканей лабораторных животных на фоне гипокинетического и комбинированного (гипокинезия + укачивание) стрессовых воздействий.

3. Изучить показатели сывороточного альбумина в норме, при гипокинетическом и комбинированном стрессовых воздействиях, а также на фоне введения сывороточного альбумина, нитроглицерина, протимозина а;

4. Изучить спектр цистеин-содержаших белков, общебелковый спектр сыворотки крови (зона альбумина) и гомогенатов тканей при гипокинетическом и комбинированном (гипокинезия+укачивание) стрессовых воздействиях, а также при введении экзогенного альбумина, нитроглицерина, протимозина а;

5. В опытах in vitro исследовать предполагаемые механизмы действия нитроглицерина, сывороточного альбумина и протимозина альфа.

Научная новизна результатов. Впервые изучены биохимические показатели, которые отражают характер изменений на ранних этапах формирования ответной реакции организма животных при гипокинетическом и вестибулярном стрессорных воздействиях Выявлено снижение интенсивности свободнорадикальных реакций в изученных тканях, увеличение проницаемости зритроцитарнмх мембран, а также изменения в спектре цистеин-содержащих белкови общем белковом спектре, снижении функциональной способности сывороточного альбумина.

Впервые установлена возможность фармакологической коррекции изученных форм стрессоа с помощью экзогенного альбумина, нитроглицерина и протимозина альфа.

Впервые изучены структурно-функииональные особенности молекул альбумина как на фоне стрессорных воздействий, так и при их фармакологической коррекции нитроглицерином и протимозином альфа, путем исследования спектра цистеин-содержащих белков и общего белкового спектра, а также исследования «альбуминовых» показателей.

Впервые изучены некоторые стороны биохимических механизмов антистрессорного воздействия альбумина, способного менять свою структуру в условиях действия повреждающих факторов, протимозина альфа, способного ингибировать свободнорадикальные реакции, что проявлялось в снижении концентрации продуктов перекисного окисления липидов, и нитроглицерина, способного взаимодействовать с молекулами альбумина Выявлена способность протимозина альфа и нитроглицерина изменять структуру альбумина и нормализовать тем самым биохимические изменения, вызванные стрессом.

Основные положения, выносимые на защиту:

1) На ранних этапах гипокинетического и вестибулярного воздействий наблюдаются выраженные сдвиги в биохимических показателях крови и тканей, выражающиеся в изменении интенсивности свободнорадикальных реакций, активности антиоксидантной

системы, а также в нарушении структурно-функциональной целостности молекул сывороточного альбумина.

2) Сывороточный альбумин представляет собой сложную, полифункциональную, антиоксиданшо-прооксидантуную систему, реа1ирующую на изменение окружающей ее биохимической среды, что выражается в изменении структуры молекулы, изменении ее транспортных свойств, перераспределении центров связывания для молекул экзо- и эндогенной природы Одной из причин может выступать изменение количества цистеин-содержаших белков в зоне сывороточно! о альбумина в сыворотке крови и тканевых белков

3) Эккменпый сывороточный альбумин способен положительно влиять на организм в условиях гипокинетического и вестибулярного воздействий, нормализуя протекание биохимических процессов Механизм подобного влияния связан с структурно-функциональными особенностями белка, с его антиоксидантными свойствами.

4) Выявлено положительное влияние нитроглицерина и протимозина альфа на биохимические показатели тканей животных в условиях гипокинетического и вестибулярною воздействий, один из механизмов которого связан с изменением структурно-функциональной целостности молекул альбумина.

5) Нитроглицерин и протимозин альфа, взаимодействуя с молекулами сывороточного альбумина, приводят к изменению его структуры и функциональных свойств, увеличению количества свободных сульфгидрильных групп и выделению в среду прежде связанных с альбумином низкомолекулярных серу-содержащих продуктов, оказывающих определенное влияние на интенсивность биохимических реакций

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные в настоящей работе результаты расширяют представления о «биохимической» среде, формирующейся на ранних этапах ответной реакции организма на стрессорное воздействие. Получены новые экспериментальные материалы о предполагаемых биохимических механизмах протекторного действия сывороточного альбумина, нитроглицерина и протимозина альфа при стрессорных воздействиях. Причем антистрессорное действие нитроглицерина и протимозина альфа реализуется через влияние на структуру и функции сывороточного и тканевого альбумина.

Материалы работы используются при чтении лекций и проведении практических занятий в Ростовском государственном университете по курсам: «Биохимия аминокислот и белка», «Биохимия макромолекул».

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на конференции молодых ученых Северного Кавказа по физиологии и валеологии (2000, 2001 г.г.), на XXX, XXXI итоговых научных конференциях Ростовского государственного университета (2002, 2003 г.г.); на IX и X Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», город Москва

(2002-2003 r.r.); на второй межвузовской международной конференции молодых ученых, специалистов и студентов «Обмен веществ при адаптации и повреждении», Ростов-на-Дону, РГМУ, 2003 год.

Публикации материалов диссертации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 182 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, постановки и методов исследования, результатов исследования, их обсуждения, выводов, содержит 31 таблицу и 35 рисунков, 2-х схем. Список литературы включаеп 218 источников, 42 - иностранных авторов

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

В опытах in vivo использованы белые беспородные крысы-самцы, массой 150-200 г, содержащихся в условиях вивария на стандартном пищевом рационе. В ходе работы животные были разделены на следующие группы 1) контрольные животные, содержащиеся в условиях вивария без какого-либо воздействия; 2) животные, подвергнутые двух часовой иммобилизации в клетках-пеналах - моделирование гипокинетического стресса; 3) животные, подвергнутые двух часовому действию комбинированного стресса (иммобилизация + укачивание вращение клеток-пеналов с животным в двух перпендикулярных плоскостях с частотой 0,33 Гц), 4) однократное внутрибрюшинное введение нитроглицерина 10 мкг на животное за 10 минут до гипокинетического стрессового воздействия (условия эксперимента те же, что и в группе № 2), 5) однократное внутрибрюшинное введение нитроглицерина 10 мкг на животное за 10 минут до комбинированного стресса (условия эксперимента те же, что и в группе Ks 3), 6) однократное внутрибрюшинное введение протимозина а 1 мг на животное за 1 час до гипокинетического стресса (условия эксперимента те же, что и в группе № 2), 7) однократное внутрибрюшинное введение 10% сывороточного альбумина человека за 30 минут до гипокинетического воздействия (условия эксперимента те же, что и в группе № 2), 8) однократное внутрибрюшинное введение комплекса 1 мл 10%-ого сывороточного альбумина человека +1 мл нитроглицерина за 30 минут до гипокинетического воздействия (условия эксперимента те же, что и в группе № 2). Гипокинетический стресс моделировали путем помещения животных в клетки-пеналы из органического стехла, размеры которых можно регулировать (Тигранян P.A., 1985; Грицук А.И., Данилова И.Г., 1986). Комбинированное стрессовое воздействие моделировали путем помещения клеток-пеналов с животными на специальное приспособление, вращение которого в двух перпендикулярных плоскостях с частотой 0,33 Гц в течение выбранного промежутка времени создавало серию комплексных ускорений,

приводящих к укачиванию крыс (Fox R.A. et al., 1982). Адекватность данного метода доказана в исследованиях HACA (США) (Crampton G.H. et al, 1985; Haroutunian V. et al, 1976) и в нашей стране (Шашков B.C. и соавт., 1994; Яснецов В.В. и соавт., 1993).

Материалом исследования являлись сыворотки крови, получаемая стандартным методом, эритроциты, выделенные стандартным методом и отмытые трижды физрасвором, гомогенаты тканей (печени, селезенки, мышц, почки, тимус, цельный головной мозг), приготовленные из расчета 1 г ткани на 10 мл дистиллированной воды. Все операции проводили на холоду

Методы исследования. В сыворотке крови и гомогенатах гканей определяли: 1-концентрацию общего белка методом Лоури (Скоупс Р., 1985); 2- общую концентрацию сывороточного альбумина - унифицированным методом по реакции с бромкрезоловым зеленым (по Карпищенко А И , 1999, Меньшиков В В , 1987); 3- эффективную концентрацию сывороточного альбумина по реакции с Конго-красным (Чегер 1975; Мельник И.А. и соавт , 1988); 4- концентрацию ТБК-положительных продуктов (Стальная И.Д., Горишвили "Г.Г., 1975), 5- определяли проницаемость эритроцитарных мембран, по степени гемолиза эритроцитов в растворах мочевины разной концентрации (по Камышникову В С., 2000), 7-проводили диск-электрофоретическое разделение водорастворимых белков с последующим окрашиванием на общий белковый спектр (по Мауреру, 1978) и спектр цистеин-содержащих белков (Синичкин А.А, Сумряков Б.Б, 1989), модифицированный нами (Синичкин А.А., Сагакянц А Б, 2002).

Постановка опытов in vitro: готовится стандартный раствор САЧ - концентрация белка 25 г/л, раствор на основе 10% раствора белка для внутривенных инъекций; 0,1% раствор НГ, раствор РгоТа, содержащий 1 мг вещества в 1 мл. Препараты нитроглицерина и протимозина альфа представлены Институтом Новых медицинских технологий, город Москва.

Эксперимент проводится согласно схеме:

2 мл стандартного САЧ Дистиллированн ая вода, 0,5 мл 0,1% раствор НГ, 0,5 мл РгоТа, 1 мг/мл, 0,5 мл

Контроль 1 + + - -

Контроль 2 - 2 мл + -

Контроль 3 - 2 мл - +

Опыт 1 + - + -

Опыт 2 + - - +

При постановке эксперимента проводится 2 серии опытов по 6 повторов:

1 серия - готовятся реакционные смеси как указано в таблице, инкубируются в термостате при 37°С в течение 1 часа и 2 часов. В пробе определяют общую концентрацию САЧ (ОКА) по реакции с бром-крезоловым зеленым, эффективную концентрацию САЧ по Чегеру (ЭКА).

2 серия - готовятся реакционные смеси как указано в таблице, инкубируются в термостате при 370С в течение 1 часа и 2 часов. После завершения инкубации проводится осаждение белков путем добавления к 1,8 мл 3% водного раствора сульфосапициловой кислоты 0,2 мл пробы. Полученные смеси перемешивали, через 2 минуты проводили центрифугирование при 3000 об/мин в течение 30 минут. После центрифугирования в пробах проводили определение фолин-положительных продуктов методом Лоури (Альперович Д В . 1986), а также определяли концентрацию общих и небелковых сульфгидрильных групп по Фоломееву (Фоломеев В Ф, 1981)

Статистическую обработку данных проводили с использованием ^критерия Стьюдента по методу Стьюдснта-Фишера (Рокицский П Ф . 1967)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Гипокинетическое и вестибулярное воздействия являются ярко выраженными стрессорными воздействиями, приводящим к изменению целого ряда функциональных показателей организма особенно при длительных сроках воздействия Несмотря на это, в работах Сазоновой И В. (1999) и Медведева И.А. (2000) показано, что непродолжительные ГВ и ВВ приводят к стереотипным изменениям биохимической среды организма (появление стресс-гормонов прежде всего, морфологические изменения и тд), характерные ответной реакции организма на другие виды стрессорных воздействий При этом активируются универсальные защитные реакции, способствующие повышению вероятности адаптации организма к действию указанных факторов. Необходимо указать на стадийный характер развития адаптивных реакций: период активации защитных систем (ЗС) сменяется развитием «окислительного» стресса, на смену которому приходит либо повторная активация ЗС и адаптация организма, либо увеличение деструктивных реакций и гибель организма

С этой точки зрения особое значение имеет сердечно-сосудистая система, обеспечивающая сохранение гомеостаза организма Гипокинезия, совместно с вестибулярным стрессовым воздействием приводит к выраженному перераспределению крови в внутренних органах за счет увеличения вазоконстрикции. Результатом подобного явления может являться стимуляция различных физиологических и биохимических реакций, приводящих к изменению биохимических показателей тканей.

Результаты исследования выбранных биохимических показателей гипокинетическом и вестибулярном воздействиях представлены на рисунке 1.

при

200

1 НО

р 100

5 50

1 0

о -S0

гипокинезия

ОБ МДА ОКА ЭКА РСА ИТ

О сыворотка кропи Е2 печень

В селоенка ЕЗ мышцы

S мая" О почки В тич\ с

• 400 f 300

6 200 5

| НИ)

\ о £

■ню

кстнб> 1ярнос юад-с

•, Иг .-.-.„

ОБ

МДА ОКА ЭКА РСА

ИТ

В сыворотка крови В печень В сосенка

Н мышцы В мо)г О ПОЧЫ1

Q тич\с

Рисунок 1. Биохимические показатели тканей животных на ранта этапах гипокинетического и вестибу7ярного воздействий

Из представленных данных видно, что данные виды воздействий приводит к выраженным изменениям в выбранных биохимических показателях. Выявлено статистически достоверное увеличение общего белка в сыворотке крови и гомогенатах тканей как при гипокинетическом, так и при вестибулярном воздействиях, причем более мощное ВВ приводит к более выраженным изменениям данного показателя При двух видах воздействий выявлено снижение данного показателя в ткани мозга. Полученные результаты, вероятно, могут быть объяснены перераспределением крови в результате вазоконстрикции сосудов, что показано в работах Бедненко B.C. и соавт., 1999 при изучении различных сроков стрессорных воздействий.

Изменение гемодинамики в организме приводит к изменениям интенсивности физиологических и биохимических процессов во внутренних органах, в частности может приводить к развитию локальной гипоксии и ищемии. Подобные изменения вызовут, прежде всего, нарушение энергетического обмена в тканях, что приведет, в свою очередь, к активации реакций ПОЛ в следствии нарушения электрохимических свойств мембран и активации ферментов, высвобождающих субстрат данных реакций. В конечном итоге это приведет к увеличению деструктивных процессов и, в крайних случаях, гибели организма.

Общеизвестным фактом является усиление активности антиоксидантных систем (АОС), как части сложной защитной системы организма, в ответ на действие стрессорных факторов, различного происхождения (Зенков Н.К. и соавт., 2001). Результатом активации

АРС на ранних этапах является изменение концентрации продуктов ПОЛ - ТБК-положительных продуктов. Полученные результаты исследования концентрации МДА при ГК и ВС (рисунок 1) указывают на активацию ЗС, что выражается в снижении ТБК-положительных продуктов во всех изученных тканях, причем степень активации АОС зависит от силы стрессорного воздействия.

В условиях действия рассматриваемых факторов первым звеном, контактирующим с воздействием, являются клетки эндотелия сосудов, в которых при изменении скорости кровотока (вазоконстрикция) и 1ипоксии, а также под действие продуктов обмена клеток тканей. развивается характерная совокупность биохимических, структурных и функциональных изменений, получивших название дисфункции эндотечия Нарушение работы эндотелиальных клеток приведет к еще большим изменениям биохимических реакций в тканях, нарастанию интоксикации клеток, болезни организма

Важный вклад в полноценную работу АОС вносят цистеин-содержащие белки, которые активно способны участвовать в регуляции интенсивности ПОЛ. Особое место среди ЦСБ занимает молекула сывороточного альбумина (СА), представляющего собой сложную полифункциональную антиоксидантно-прооксидантную систему, одной из главных функций которой является участие в работе АОС, обеспечение антиинтоксикационных реакций за счет выведения продуктов жизнедеятельности клеток из тканей Все функции данной молекулы определяются структурно-функциональной целостностью СА, которая способно изменяться при действии на организм различных экстремальных факторов и развитии целого ряда патологических процессов (Грызунов Ю А. и соавт., 1994, 1998; Мельник И.А. и соавт., 1988).

В результате ГК и ВС наблюдается выраженные изменения «альбуминовых» показателей (рисунок 1): выявлено снижение ОКА, ЭКА, что приводит к снижению резерва связывания белка и увеличению индекса токсичности, указывающие на нарастание интоксикационных реакций в организме. Подобные изменеия по мнению Грызунова Ю.А. и Добрецова Г.Е. могут быть связаны с изменением структурно-функциональной целостности альбумина

На рисунке 2 представлены результаты исследования относительной концентрации общего белка, ЦСБ и коэффициент К, отражающий степь «цистеинизации» белка, зоны сывороточного альбумина тканей животных после ГК и ВС.

В результате работы выявлено изменение количества общего белка и ЦСБ в зоне сывороточного альбумина, что вероятно связано либо с появлением дополнительного количества белков с молекулярной массой близкой к показателю СА, либо связано с изменением структуры белка под действием изменившихся условий, в которых он

находится. О структурно-функциональных изменениях СА указывают и результаты исследования коэффициента К, отражающего степень «цистеинизации» альбумина

250

200

150

3 100

г 50

| 0

-50

■ 100

сыворотка печень крови

а ОБ □ ЦСБ В коэф К

вестиОуТмрномюзд-с

1«Х1 1400 1200 1000 800 600 400

21Х) 0

-200 --—

сыяоротха печень крови

1цц *

а Об И ЦСБ В коэф К

Рисунок 2 Относительное содержание общего белка, цистеин-содержащих белков в зоне сывороточного альбумина и коэффициент К при гпокинетическом и вестибулярном воздействиях

Выявленные биохимические изменения при ГК и ВС указывают на то, что уже с первых минут воздействия организм активирует ЗС, АОС с целью адаптации к окружающей среде Тем не менее, результаты исследования ПЭМ (рисунок 3) выявили снижение данного показателя, что указывает на сдвиг в антиоксидантно-прооксидантном равновесии организма в сторону преобладания последней составляющей Полученные данные указывают на то, что несмотря на активацию АОС, на ранних этапах действия ГК и ВС начинают формироваться условия для развития реакций «окислительного» стресса.

Рисунок 3. Проницаемость эритроцитарной мембраны при гипокинетическом и вестибулярном воздействиях

Таким образом, ГК и ВС уже на ранних этапах воздействия приводят к выраженным изменениям выбранных биохимических показателей, выражающиеся в изменении структурно-функциональной целостности СА, активации АОС, а также нарастанием накопления прооксидантных молекул Степень выраженности изменений зависит от силы стрессорного воздействия

Влияние сывороточного альбумина, нитроглицерина и протимозина альфа на фоне гипокинезии и вестибулярного стресса.

Результаты исследования влияния предварительного внутрибрюшного введения нитроглицерина (НГ) и протимозина альфа (ПроТа) представлены на рисунке 4

Из представленных результатов видно, что введение НГ на фоне ГК и ВС приводит к дополнительному увеличению ОБ во всех тканях как по сравнению с контролем, так и по сравнению со значением данного показателя при стрессовых воздействиях Подобное явление вероятно вызвано способностью НГ стимулировать дополнитечьный синтет или высвобождение полифункциональных белков, некоторая часть из которых может являться продуктами ранних генов, участвующих в активации защитных систем организма (Гусев Е.И., Скворцова В.И.. 2001), что в свою очередь приводит к дополнительной активации АОС Активация АОС приводит к более выраженному снижению интенсивности ПОЛ, что следует из результатов определения ТБК-положительных прдуктов (рисунок 4).

Кроме этого, введение НГ как при ГК так и при ВС приводит нормализации структурно-функционального состояния молекул СА (рисунок 4), что сопровождается восстановлением его функций Положительный эффект на молекулу альбумина более выражен в случае ВС, что. вероятно, связано с большей стимуляцией ЗС организма более сильного воздействия.

Предварительное введение протимозина альфа на фоне ГК приводило к аналогичным изменениям выявлено увеличение ОБ в тканях по сравнению и с контролем, и с ГК, однако имеющее менее выраженных характер, чем в случае с НГ. В отличие от нитроглицерина, введение протимозина альфа приводит к большему снижению концентрации МДА, что указывает на способность самого соединения выступать в роли активного регулятора реакций ПОЛ, механизм действия которого не вполне ясен. На фоне описанных биохимических изменений, введение ПроТа приводит к восстановлению до контрольных величин ОКА, при сниженных ЭКА и РСА, что приводит к увеличению ИТ на 319% по сравнению с контролем. Данный белок вероятно способен взаимодействовать с СА, что, с

одной стороны, приводит к защите альбумина от действия повреждающих агентов, а с другой стороны, приводит к нарушению способности СА выполнять свои функции.

120 100 «о 60 40 20 (I •20 -40 -60

_________пг+нг

ОБ МДЛ ОКА ЭКА РСА ИТ

Осыворотка крови ■ печень Ясслоснка

О мышцы Ямозг Ппочки

В тимус

МДА ОКА ЭКА РСА ИТ

■ сыворотка крови ■печень ■селезенка

■ мышиы Выоог ■ почки О тми ус

МДА ОКА ЭКА РСА

0) сыворотка кроен печень ■ селезенка

Б) мышцы О \киг □ почки

И ТИМ} с .' '

Рисунок 4. Биохимические показатели тканей животных на ранних этапах гипокинетического и вестибулярного воздействий на фоне предварительного введения нитроглицерина, протимозина альфа.

' Введение НГ на фоне ГК приводит к увеличению количества общего белка и зоне СА, увеличению количества ЦСБ и степени «цистеинизации» молекул альбумина тканей крыс на фоне как ГК, так и ВС, причем более выраженные изменения наблюдались в случае с ВС.

Полученные результаты указывают на способность НГ и ПроТа к дополнительной стимуляции АОС. Вероятнее всего, что подобное действие связано со способностью данных соединений взаимодействовать с СА, о чем свидетельствуют «альбуминовые» показатели, спектр ОБ и ЦСБ зоны СА. При этом выявлено стабилизация атиоксидантно-прооксидантного равновесия в организме, исходя из ПЭМ, представленные на рисунке 5.

120

100

В 80

? 60

£ , * 40

/Л ,

_ — ----

0,81 0,9 о,ОТ- 1,08 1,17 1,8 концентрация мочевины. %

—•— контроль

--»— иммобилизация

—— нммобнлизаци!Н-НГ

-м -- комбинированное воздействие

комбинированное во*гйствие+НГ

0,72 0,81 0 9 0,99 1,08 1,17 1.8 концентрация мочевины, %

—•— контроль ■ •— иммобилизаций —й— иммобилизация +лроти»1оэнн в

Рисунок 5. Проницаемость эритроцитарных мембран при введении нитроглицерина и протиыозина альфа на фоне гипокинетического и вестибулярного воздействия

Влияние сывороточного альбумина на показатели тканей крыс при гипокинезии и вестибулярном стрессе.

При введении сывороточного альбумина самостоятельно и в комплексе с НГ получены следующие результаты, представленные на рисунке 6

Из представленных результатов видно, что введение СА самостоятельно и при инкубации с НГ приводит к увеличению ОБ сыворотки крови, наиболее выраженное в случае введения при ГК. Вероятно, что подобный эффект связан именно с введением экзогенного белка и может косвенно указывать на то, что и при введении НГ и ПроТа наблюдается именно секреция СА или его перераспределение При этом выявлено способность экзогенного СА ингибировать ПОЛ, а НГ, вероятно, способен несколько снижать данное свойство белка в следствии взаимодействия с реакционными группами СА.

Введение СА на фоне ГК приводит к стабилизации ПЭМ, что указывает на стимуляцию АОС и снижение количества прооксидантов в организме, образование которых либо прервано на ранних этапах, либо вследствие повышения скорости их элиминации из органа. Необходимо указать на тот факт, что инкубация НГ с СА перед введением в организм животного на фоне ГК приводит к наиболее выраженному восстановлению ПЭМ, а следовательно и антиоксидантно-прооксидантного равновесия организма

МДА

□ кон +САЧ г а гк

О ГК+НГ аГКчСАЧ

□ ГК+(САЧ+НП

0,81 0,9 0,99

концентрации мочевины, %

- контроль

- иммобилизации

- ичмобнлизацмг+САЧ

— контроА+САЧ -у-- нммобилиэация+НГ

— нммоблнэация-ЦСАЧ+НГ)

Рисунок 6. Некоторые биохимические показатели сыворотки крови (А) и эритроцитов (Б) при введении сывороточного альбумина на фоне гипокинезии

Полученные результаты позволяют сделать вывод, что НГ и ПроТа обладают протекторным эффектов при введении на фоне ГК и ВС, что выражается в увеличении активности АОС, снижению интенсивности ПОЛ, увеличению количества полифункциональных белков, изменению структурно-функционального состояния молекул СА (увеличение «цистеинезации» белка, ОКА и ЭКА, снижению РСА и ИТ), стабилизации мембран эритроцитов.

Для выяснения характера взаимодействия сывороточного альбумина, нитроглицерина и протимозина альфа были проведены опыты in vitro.

Результаты опытов in vitro представлены на рисунке 7.

Инкубация в течение часа. Инкубация пробы с СА (К.тсч,„) приводит к некоторому увеличение ОКА, выраженному снижению ЭКА, сопровождаемые снижением количества белковых сульфгидрильных групп Подобные изменения показателей указывают на то, что

повышенная температура приводит к нарушению структурно-функциональной целостности белка, сопровождаемое снижением количества.БН-групп, нарушением способности белка участвовать в транспорте различных веществ, вызванное перераспределением центров связывания для лигандов.

200 /

Ким. САЧ+НГ САЧ+РгоТ«

□ ОКА О ЭКА □ SH ОБ

* 100 g

! ï

I 50 i!

.50 К

К темп

САЧ+НГ САЧ+РгоТ»

□ ОКА В ЭКА □ SH-rp обш □ SH-rp не бел. В Фоздн пою* гтрад

А Б

Рисунок 7. Биохимические показатели проб noaie одно- (А) и двух (Б) часовой

инкубации при 37°С.

Внесение в инкубационную смесь НГ после экспозиции в течение часа приводит к снижению ОКА, менее выраженному по сравнению с Ктем. снижению количества SH-rpynn, на фоне сохранениа ЭКА.! г\

Добавление в среду инкубации ПроТа приводит к резкому снижению определяемого ОКА, но при этом выявлено увеличение ЭКА и концентрации общих SH-rpynn, что указывает, прежде всего, на взаимодействие СА и протимозина альфа, причем в большей степени, чем взаимодействие СА и НГ. Данный факт также указывает на существенное перераспределение центров связывания на молекуле альбумина для различных соединений, что выражается в снижении ОКА на фоне увеличения ЭКА.

При двух часовой инкубации проб СА (Ктсч ) снижение ОКА относительно контроля и относительно результатов при 1 часовой инкубации, повышение ЭКА по сравнению с 1 часовой инкубацией, более выраженное снижение концентрации белковых сульфгидрильных групп На этом фоне выявлено появление низкомолекулярных серу содержащих соединений (увеличение Фолин положительных продуктов и количества не белковых SH-групп), что указывает на усиление структурной не стабильности альбумина, а также указывает на наличие вышеупомянутых соединений в виде примесей.

Введение в инкубационную смесь НГ и ПроТа приводят к менее выраженному снижению ОКА (НГ) либо к сохранению данного показателя на уровне контроля, увеличению ЭКА (значение выше контрольных для ПроТа), а также менее выраженного снижения количества БН-групп по сравнению с показателями при нагревании без препаратов На фоне данных изменений выявлено увеличение числа серу содержащих Фолин-полОжигсльных продуктов, что приводит к ре жому увеличению определяемого количества не белковых БН-групп (рисунок 6)

Выявленные изменения показателей инкубационных смесей указывают на то, что и нитроглицерин, и прошчозин альфа способны влиять на С1руктурно-ф>нкциональное состояние молекул альбумина, изменяя при этом число и распределение мест связывания для веществ различной природы, а также увеличению числа ИН-групп. что может увеличивать антиоксидантные свойства СА

Исходя из полученных нами результатов, можно привести следующую схему влияния шпокинетического и вестибулярного воздействий на организм животных (схема 1).

Схема 1. Биохимические основы патогенеза гипокинетического и вестибулярного воздействий.

Как видно на схеме, действие на организм ГК и ВС приводят к появлению трех основных механизмов, лежащих в основе патобиохимических изменений: это нарушение функций эндотелия сосудов и реализуемая через него эндотелиальная дисфункция;

запускающая реакции ПОЛ, приводящих к развитию окислительного стресса; это также нарастание вследствие первых двух механизмов интоксикации клеток и организма в целом При этом происходит активация различных механизмов ЗС, в том числе активация АОС.

На ранних этапах формирования данной биохимической среды особое значение имеет структурно-функциональное состояние молекул сывороточного альбумина, участвующих в работе АОС, являющейся важнейшей детоксикационной системой организма, способствующей его адаптации к действию неблагоприятных факторов экзогенной и эндогенной природы. Сывороточный альбумин, вводимый на фоне данных воздействий обладает протекторными свойствами, а нитроглицерин и прогимозин альфа реализуют свой протекторный эффект и через регуляцию структурно-функционального состояния молекул альбумина.

Высказанные гипотезы можно выразить схемой 2, показывающей роль молекул сывороточного альбумина в формировании защитных реакций организма в, о^ве? на повреждающее воздействия на ранних этапах

этапах гипокинетического и вестибулярного воздействий

ВЫВОДЫ

1 В условиях гипокинетического (иммобилизация в течение 2-х часов) и вестибулярного (действие ускорений и иммобилизации в течение 2-х часов) воздействий определяли концентрацию общего белка, концентрацию ТБК-положительных продуктов и суммарную пероксидазную активность, проницаемость эритроцитарных мембран, общую и эффективною концентрацию альбумина, резерв связывания альбумина и индекс токсичности, а также спектр нистеин-содержащих белков и общий белковый спектр сыворо!ки крови и тканей Динамика изученных биохимических показателей свидетельствует о характере воздействия

2. Наиболее информативными покаытелями для оценки ранних этапов изученных стрессорных воздействий являются определение интенсивности свободнорадикальных реакций по изменению концентрации ТБК-положительных продуктов, суммарной пероксидазной активности, проницаемое! и эритроцитарных мембран, а также определение функциональной способности молекул альбумина за счет и ¡учения комплекса «альбуминовых» показателей, общего белкового спектра и спектра цистеин-содержаших белков.

3. Эффективными антистрессорами оказались все три изученных препарата -сывороточный альбумин, нитроглицерин, протимозин альфа Оценку их защитного действия проводили по выбранным нами биохимическим показателям, причем изучение роли альбумина проводилось нами впервые.

4. Изучены некоторые составляющие механизма защитного действия альбумина при стрессорных воздействиях. Выявлена способность молекул альбумина участвовать в поддержании антиоксидантно-прооксидантного равновесия в крови и тканях стрессированных животных за счет изменения своей структуры и функциональной целостности.

5. Основным в механизме действия и нитроглицерина, и протимозина альфа является способность данных соединений влиять на интенсивность свободнорадикальных реакций, результатом чего является активация защитных систем организма Наиболее важным на наш взгляд является способность нитроглицерина и протимозина альфа воздействовать на структуру и функциональное состояние молекул альбумина сыворотки и тканей, выражающееся в защите белка от разрушения под действием продуктов измененного метаболизма и перекисного окисления липидов, а также в активации молекул белка, что сопровождается увеличением «цистеинпзации» альбумина, восстановлением его функций и свойств.

6. Исходя из полученных результатов, можно говорить о формировании молекулами сывороточного альбумина неспецифической антиоксидантно-прооксидаптной буферной системы, имеющей особое значение для существования организма, как в нормальных условиях, так и при стрессорных воздействиях

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Сагакянц А Б., Мирная Е., Синичкин А А. Экспресс метод идентификации цистеин-содержащих белков // В сб «Материалы конференции молодых ученых северного Кавказа по физиологии и валеологии». Ростов-на-Дону, 12-13 октября 2000 - сс 92-93

2. Сагакянц А Б Конформанионное состояние молекул сывороточного альбумина при развитии патологического процесса // Материалы конференции молодых ученых северного Кавказа по физиологии и валеологии 9-10 октября 2001, Ростов-на-Дону - сс 109112

3. Сагакянц А.Б Новый взгляд на функции сывороточного альбумина// Труды аспирантов и соискателей Ростовского государственного университета. Том VII, Ростов-на-Дону: Издательство Рост, ун-та, 2001. - сс. 56-58

4. Сагакянц А Б, Синичкин А А, Каркищенко В Н., Хоронько В В , Соколов О Ю., Макляков Ю С. Влияние стресса и РгоТа на спектр белков сыворотки крови и гомогенатов тканей крыс в эксперименте// В сб. «Актуальные вопросы железнодорожной медицины», Ростов-на-Дону, 2001.- сс 123-124

5 Сагакянц А.Б Структурно-функциональная мегастабильность молекул сывороточного альбумина при стрессовых состояниях и их фармакологической коррекции препаратом нитроглицерина // Труды аспирантов и соискателей Ростовского государственного университета Том VIII, Ростов-на-Дону: Издательство Рост, ун-та, 2002.-сс. 74-77

6. Сагакянц А Б, Макляков Ю.С., Синичкин A.A., Каркищенко В.Н. Влияние протимозина а на некоторые биохимические показатели сыворотки крови крыс в норме и при различных видах стресса //IX Российский национальный конгресс «Человек и лекарство», тез. докладов, 8-12 апреля 2002, Москва. - сс. 689-690

7. Синичкин A.A., Сагакянц А Б.Способ идентификации цистеинсодержагцих белков после разделения методом диск-электрофореза// Клиническая лабораторная диагностика.- № 2,2002.- сс. 14-15

8. Сагакянц А.Б, Евтушенко О. Сывороточный альбумин как анти- и прооксидантная буферная система // Тезисы докладов второй межвузовской международной

конференции молодых ученых, специалистов и студентов «Обмен веществ при адаптации и повреждении», Ростов-на-Дону, 21 марта 2003.- сс. 81 -82

9. Сагакянц А.Б., Макляков Ю.С, Синичкин А А., Каркищенко В.Н., Зайцева А Ю Некоторые механизмы влияния сывороточного альбумина в сочетании с нитроглицерином на антиоксидантно-прооксиданитное равновесие при иммобилизационном стрессе.// X российский национальный конгресс «Человек и пекарст во» Тезисы докладов. Москва, 7-11 апреля 2003 - с 750

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АО -антиоксидант

АОС - антиоксидантная система

БД-болезнь движения

ВС- вестибулярный стресс

ГС- гипокинетический стресс

ГК- гипокинезия

ИТ- индекс токсичности

ЗС- защитные системы

МДА- молоновый диальдегид

НГ- нитроглицерин

ОБ- общий белок

ОКА - общая концентрация альбумина

ПОЛ- перекисное окисление липидов

ПроТальфа - протимозин альфа

ПЭМ- проницаемость эритроцитарных мембран

РСА - резерв связывания альбумина

CA - сывороточный альбумин

САЧ- сывороточный альбумин человека

СПА- суммарная пероксидазная активность

СРР - свободнорадикальные реакции

ТБК-положительный продукт (МДА)

ТФСА - транспортная функция альбумина

ЦСБ - цистеин-содержащие белки

ЭД- эцдотелиальная дисфункция

ЭКА —эффективная концентрация альбумина

РгоТа - протимозин альфа

Издательство ООО «ЦВВР». Лицензия ЛР № 65-36 от 05 08 99 г. Заказ № 422 от 17.10 2003 г. Тираж 100 экземпляров Печ. лист 1,0. Усл.печ л. 1,0. Формат 60*84/16 Компьютерный набор и верстка Издательско-полиграфический комплекс « Биос» РГУ 344091, г. Ростов-на-Дону, ул. Зорге, 28/2, корп 5 «В», 4 этаж. Лицензия на полиграфическую деятельность № 65-125 от 09.02.98 г.

' 17605" * 17 6 0 5 i

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Сагакянц, Александр Борисович

ВВЕДЕНИЕ.

ГАВ А 1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1.1. Биохимические и патофизиологические изменения при гипокинетическом и вестибулярном воздействиях на организм.

Глава 1.2. Фармакологическая коррекция гипокинетического и вестибулярного стрессовых воздействий.

Глава 1.3. Структурно-функциональные особенности молекул сывороточного альбумина в норме и при стрессорных воздействиях.

ГАВА 2. ПОСТАНОВКА И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 2.1. Постановка эксперимента.

2.1.1. Постановка опытов in vivo.

2.1.2. Постановка опытов in vitro.

Глава 2.2. Методы исследования.

2.2.1. Определение концентрации белка методом Лоури.

2.2.2. Определение концентрации сывороточного альбумина.

2.2.3. Определение транспортной функции сывороточного альбумина по Чёгеру.

2.2.4. Метод определения ТБК-положительных продуктов в сыворотке крови и гомогенатах тканей.

2.2.5. Определение суммарной пероксидазной активности.

2.2.6. Определение проницаемости эритроцитарных мембран (осмотической стойкости эритроцитов).

2.2.7. Постановка диск-эликтрофореза.

2.2.7.1. Идентификация цистеин-содержащих белков после их разделения методом ДЭФ.

2.2.7.2. Окрашивание гелей для определения общего белкового спектра.

2.2.8. Определение концентрации общих сульфгидрильных групп белка и небелковых соединений по Фоломееву.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3.1. Влияние кратковременной гипокинезии на биохимии-ческие показатели сыворотки крови и гомогенатов тканей крыс.

Глава 3.2. Влияние кратковременного комбинированного стрессового воздействия на биохимические показатели сыворотки крови и гомогенатов тканей крыс.

Глава 3.3. Влияние нитроглицерина на биохимические показатели сыворотки крови и гомогенатов тканей на фоне кратковременной гипокинезии и комбинированного стрессового воздействий

Глава 3.4. Влияние протимозина а на биохимические показатели сыворотки крови и гомогенатов тканей на фоне кратковременной гипокинезии.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биохимические механизмы протекторного действия сывороточного альбумина, нитроглицерина и протимозина альфа при гипокинетическом и вестибулярном воздействиях"

Актуальность проблемы.

В условиях развития современного общества человек все чаще оказывается в ситуациях, которые предъявляют к его организму новые требования, согласно которым развивается новая стратегия существования, определяющая жизнь организма. Проблема изучения роли общих неспецифических адаптационных реакций в регуляции резистентности организма привлекает все большее число исследователей, несмотря на свою более чем пятидесятилетнюю историю (Баженов Ю.И., 1981; Панин Л.Е., 1984; Овсянников В.Г., 1987; Гаркави, Л.Х., Квакина Е.Б. и соавт., 1978, 1990, 2002; Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П, 1999).

Стресс-реакция является необходимым звеном формирования структурного следа адаптации, без которого невозможно приспособление организма к изменяющимся условиям существования, а также выживание организма в чрезвычайных условиях (Меерсон Ф.З. и соавт., 1987, 1988; Овсянников В.Г., 1987; Пшенникова М.Г., 2001). Чрезмерная реакция на стрессор-ное воздействие приводит не к адаптации, а, наоборот, к развитию заболевания и даже к гибели организма (Пшенникова М.Г., 2001).

В современных условиях человек часто осознанно или не осознанно находится в ситуации ограничения мышечной подвижности различной выраженности, которые могут сочетаться с параллельным действием различных видов ускорений (Шашков B.C., 1994). С подобными ситуациями мы сталкиваемся при длительных перемещениях на различных видах транспорта, а в недалеком будущем - при космических перелетах. Рассматриваемые случаи нередко приобретают характер чрезвычайных, неожиданных событий, приводящих к нежелательному исходу.

Ограничение двигательной активности - гипокинезия, гиподинамия, иммобилизация, а также болезнь движения являются ярко выраженными стрессорными факторами, вызывающими различные физиологические и биохимические сдвиги в организме, направленные на приспособление организма

Яснецов В В. и соавт., 1993; Панферова Н.Е., 1977; Федоров И.В., 1984; Шидловская Т.Е. 1984). .

Биохимические сдвиги при действии на организм указанных ситуаций уже давно привлекают внимание исследователей, работы которых в большинстве случаев затрагивали последствия действия длительных сроков рассматриваемых стрессовых воздействий, в то время как события, происходящие на ранних этапах воздействий, особенно в чрезвычайных условиях, оставались за пределами их внимания.

Согласно современным представлениям биохимические сдвиги, происходящие на ранних этапах формирования ответной реакции организма на любое стрессороное воздействие имеют чрезвычайное значение, так как именно их характер, направление и соотношение определяет вероятность эффективного приспособления организма, а значит и его жизнь (Гусев Е.И., СкворцоваВ.И., 2001).

С этой точки зрения особое значение имеют молекулы сывороточного альбумина, представляющие собой сложную, полифункциональную, коммуникативную систему, осуществляющую гомеостатическую функцию в организме, способные проникать через различные межтканевые барьеры (Синичкин А.А., 2000). Особенности структурно-функционального состояния альбумина определяют его место в жизнедеятельности организма в целом. В настоящее время выявлено особое значение изменение структурно-функционального состояния молекул альбумина как для нормальной жизнедеятельности организма, так и при различных видах патологии (Чегер С.П., 1975; Лопухин Ю.М. и соавт., 2000; Титов В.Н., 1999; Foster J. F., 1992). В то же время особенности «поведения» белка при стрессовых ситуациях практически не исследовались.

Исследование подобного вопроса также является актуальным и по причине выделения в настоящее время новой формы патологии - «конформаци-онных болезней», являющиеся молекулярной основы целого ряда заболеваний центральной нервной системы (Троицкий Г.В., 1991; Иллариошкин С.Н., 2003).

Актуальным также является поиск наиболее эффективных средств профилактики и лечения патологических процессов, вызываемых этими стрессовыми воздействиями. Список фармакологических препаратов, которые используются для профилактики последствий гипокинезии и вестибулярного воздействия достаточно широк, но возможность фармакологической коррекции функциональных сдвигов при данных воздействиях по-прежнему ограничивается весьма низкой эффективностью применяемых средств, а также обилием побочных явлений, развивающихся при их использовании (Ja-nowsky D.S. et al., 1984; Налетов C.B. и соавт., 1998).

С этой точки зрения актуальными являются исследования протимозина альфа, секретируемого тимусом и рядом других клеток живых организмов и являющийся белком с молекулярной массой 12,6 кДа, проявившим протекторный эффект при некоторых формах стрессового воздействия (Каркищенко В.Н., 2001). Молекулярные механизмы эффектов протимозина альфа до настоящего времени не выяснены.

В условиях ограничения мышечной подвижности определенным образом меняются механизмы действия практически всех фармакологических препаратов. С подобной ситуацией (частичная или полная иммобилизация) часто сталкиваются в кардиологической практике при различных формах заболевания сердечно-сосудистой системы. Поэтому актуальным является исследование особенностей действия нитроглицерина в условиях гипокинезии.

Исходя из особенностей строения и метаболизма протимозина альфа, а также нитроглицерина, можно предположить возможность их взаимодействия с различными белками крови, в частности с молекулами сывороточного альбумина, характер и значение которых в условиях действия стрессорных факторов на ранних этапах практически не исследовался. Также практически не изучено влияние введения экзогенного сывороточного альбумина при стрессорных воздействиях на организм.

Задачи исследования:

4. Изучить спектр цистеин-содержащих белков, общебелковый спектр сыворотки крови (зона альбумина) и гомогенатов тканей при гипокинетическом и комбинированном (гипокинезия+укачивание) стрессовых воздействиях, а также при введении экзогенного альбумина, нитроглицерина, протимозина а;

Научная новизна результатов. Впервые изучены биохимические показатели, которые отражают характер изменений на ранних этапах формирования ответной реакции организма животных при гипокинетическом и вестибулярном стрессорных воздействиях. Выявлено снижение интенсивности свободнорадикальных реакций в изученных тканях, увеличение проницаемости эритроцитарных мембран, а также изменения в спектре цистеинсодержащих белков и общем белковом спектре, снижении функциональной способности сывороточного альбумина.

Впервые установлена возможность фармакологической коррекции изученных форм стресса с помощью экзогенного альбумина, нитроглицерина и протимозина альфа.

Впервые изучены структурно-функциональные особенности молекул альбумина как на фоне стрессорных воздействий, так и при их фармакологической коррекции нитроглицерином и протимозином альфа, путем исследования спектра цистеин-содержащих белков и общего белкового спектра, а также исследования «альбуминовых» показателей.

Впервые изучены некоторые стороны биохимических механизмов ан-тистрессорного воздействия альбумина, способного менять свою структуру в условиях действия повреждающих факторов, протимозина альфа, способного ингибировать свободнорадикальные реакции, что проявлялось в снижении концентрации продуктов перекисного окисления липидов, и нитроглицерина, способного взаимодействовать с молекулами альбумина. Выявлена способность протимозина альфа и нитроглицерина изменять структуру альбумина и нормализовать тем самым биохимические изменения, вызванные стрессом.

Основные положения, выносимые на защиту:

2) Сывороточный альбумин представляет собой сложную, полифункциональную, антиоксидантно-прооксидантуную систему, реагирующую на изменение окружающей ее биохимической среды, что выражается в изменении структуры молекулы, изменении её транспортных свойств, перераспределении центров связывания для молекул экзо- и эндогенной природы. Одной из причин может выступать изменение количества цистеин-содержащих белков в зоне сывороточного альбумина в сыворотке крови и тканевых белков.

3) Экзогенный сывороточный альбумин способен положительно влиять на организм в условиях гипокинетического и вестибулярного воздействий, нормализуя протекание биохимических процессов. Механизм подобного влияния связан с структурно-функциональными особенностями белка, с его антиоксидантными свойствами.

4) Выявлено положительное влияние нитроглицерина и протимозина альфа на биохимические показатели тканей животных в условиях гипокинетического и вестибулярного воздействий, один из механизмов которого связан с изменением структурно-функциональной целостности молекул альбумина.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные в настоящей работе результаты расширяют представления о «биохимической» среде, формирующейся на ранних этапах ответной реакции организма на стрессорное воздействие. Получены новые экспериментальные материалы о предполагаемых биохимических механизмах протекторного действия сывороточного альбумина, нитроглицерина и протимозина альфа при стрессор-ных воздействиях. Причем антистрессорное действие нитроглицерина и протимозина альфа реализуется через влияние на структуру и функции сывороточного и тканевого альбумина.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на конференции молодых ученых Северного Кавказа по физиологии и валеологии (2000, 2001 г.г.); на XXX, XXXI итоговых научных конференциях Ростовского государственного университета (2002, 2003 г.г.); на IX и X Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», город Москва (2002-2003 г.г.); на второй межвузовской международной конференции молодых ученых, специалистов и студентов «Обмен веществ при адаптации и повреждении», Ростов-на-Дону, РГМУ, 2003 год.

Публикации материалов диссертации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 182 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, постановки и методов исследования, результатов исследования, их обсуждения, выводов; содержит 31 таблицу и 35 рисунков, 2-х схем. Список литературы включает 218 источников, 42 - иностранных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Сагакянц, Александр Борисович

Результаты исследования влияния предварительного внутри брюшного введения нитроглицерина (НГ) и протимозина альфа (ПроТа) представлены на рисунке 33.

Из представленных результатов видно, что введение НГ на фоне ГК и ВС приводит к дополнительному увеличению ОБ во всех тканях как по сравнению с контролем, так и по сравнению со значением данного показателя при стрессовых воздействиях. Подобное явление вероятно вызвано способностью НГ стимулировать дополнительный синтез или высвобождение полифункциональных белков, некоторая часть из которых может являться продуктами ранних генов, участвующих в активации защитных систем организма (Гусев Е.И., Скворцова В.И., 2001), что в свою очередь приводит к дополнительной активации АОС.

Активация АОС приводит к более выраженному снижению интенсивности ПОЛ, что следует из результатов определения ТБК-положительных продуктов (рисунок 33).

ОБ МДЛ ОКА ЭКА РСА ИТ

ЕЭ сыворотка крови В печень □ селезенка мышцы В мозг ЕЭ почки

В тимус о епс-пг

МДА

ОКА ЭКА

РСА

ИТ

О сыворотка крови В печень □ селезенка мышцы В мозг □ почки

В тимус а н X о

400 300 200 100 0 -100

ГК+ПроТа

1111 9 а

ОБ МДА ОКА ЭКА РСА ИТ

ЕЭ сыворотка крови В печень □ мышцы В мозг

В тимус селезенка ЕЗ почки

Рисунок 33. Биохимические показатели тканей животных на ранних этапах гипокинетического и вестибулярного воздействий на фоне предварительного введения нитроглицерина, протимозина альфа.

Кроме этого, введение НГ как при ГК, так и при ВС приводит к нормализации структурно-функционального состояния молекул С А (рисунок 4), что сопровождается восстановлением его функций. Положительный эффект на молекулу альбумина более выражен в случае ВС, что, вероятно, связано с большей стимуляцией ЗС организма более сильным воздействием.

Предварительное введение протимозина альфа на фоне ГК приводило к аналогичным изменениям выявлено увеличение ОБ в тканях по сравнению и с контролем, и с ГК, однако имеющие менее выраженных характер, чем в случае с НГ. В отличие от нитроглицерина, введение протимозина альфа приводит к большему снижению концентрации МДА, что указывает на способность самого соединения выступать в роли активного регулятора реакций ПОЛ, механизм действия которого не вполне ясен. На фоне описанных биохимических изменений, введение ПроТа приводит к восстановлению до контрольных величин ОКА, при сниженных ЭКА и РСА, что приводит к увеличению ИТ на 319% по сравнению с контролем. Данный белок вероятно способен взаимодействовать с СА, что, с одной стороны, приводит к защите альбумина от действия повреждающих агентов, а с другой стороны, приводит к нарушению способности С А выполнять свои функции.

Введение НГ на фоне ГК приводит к увеличению количества общего белка и зоне СА, увеличению количества ЦСБ и степени «цистеинизации» молекул альбумина тканей крыс на фоне как ГК, так и ВС, причем более выраженные изменения наблюдались в случае с ВС.

Полученные результаты указывают на способность НГ и ПроТа к дополнительной стимуляции АОС. Вероятнее всего, подобное действие связано со способностью данных соединений взаимодействовать с СА, о чем свидетельствуют «альбуминовые» показатели, спектр ОБ и ЦСБ зоны СА. При этом выявлена стабилизация атиоксидантно-прооксидантного равновесия в организме, исходя из ПЭМ, представленные на рисунке 34.

0,72 0,81 0,9 0,99 1,08 1,17 концентрация мочевины, % контроль —«— иммобилизация --<:.:— иммобилизация | НГ ■■-/■■■■ комбинированное воздействие —Ж—комбинированное воздействие+НГ

120 100 80 60 40 20 0 f" L.-'T i /

0,72 0,81 0,9 0,99 1,08 1,17 1,8 концентрация мочевины, % контроль ж— иммобилизация йк—иммобилизация +протимозин а

Рисунок 34. Проницаемость эритроцитарных мембран при введении нитроглицерина и протимозина альфа на фоне гипокинетического и вестибулярного воздействия.

Влияние сывороточного альбумина на показатели тканей крыс при гипокинезии и вестибулярном стрессе.

При введении сывороточного альбумина самостоятельно и в комплексе с НГ получены следующие результаты, представленные на рисунке 35.

Из представленных результатов видно, что введение СА самостоятельно и при инкубации с НГ приводит к увеличению ОБ сыворотки крови, наиболее выраженное в случае введения при ГК. Вероятно, что подобный эффект связан именно с введением экзогенного белка и может косвенно указывать на то, что и при введении НГ и ПроТа наблюдается именно секреция СА или его перераспределение. При этом выявлена способность экзогенного СА ингибировать ПОЛ, а НГ, вероятно, способен несколько снижать данное свойство белка в следствии взаимодействия с реакционными группами СА.

120

60 40

Ь 20 я

I о -j

I -20 s

5 -40 о о

-60 -80

ОБ

МДА

Q кон.+САЧ В ГК □ ГК-+НГ □ IK+САЧ гк | (САЧ-a in

0,72 0,81 0,9 0,99 1,08 1,17 1, концентрация мочевины, % контроль —-А—- иммобилизация -—Ж— иммобилитация+САЧ

Ж.копт роль+СЛЧ

• иммобилизация* ПГ — иммоблизация+(САЧ+НГ)

Рисунок 35. Некоторые биохимические показатели сыворотки крови (А) и эритроцитов (Б) при введении сывороточного альбумина на фоне гипокинезии. повышения скорости их элиминации из органа. Необходимо указать на тот факт, что инкубация НГ с СА перед введением в организм животного на фоне ГК приводит к наиболее выраженному восстановлению ПЭМ, а, следовательно, и антиоксидантно-прооксидантного равновесия организма.

Полученные результаты позволяют сделать вывод, что НГ и ПроТа обладают протекторным эффектом при введении на фоне ГК и ВС, что выражается в увеличении активности АОС, снижению интенсивности ПОЛ, увеличению количества полифункциональных белков, изменению структурнофункционального состояния молекул СА (увеличение «цистеинезации» белка, ОКА и ЭКА, снижению РСА и ИТ), стабилизации мембран эритроцитов.

Результаты опытов in vitro представлены на рисунке 36.

Инкубация в течение часа. Инкубация пробы с СА (К.темп.) приводит к некоторому увеличению ОКА, выраженному снижению ЭКА, сопровождаемая снижением количества белковых сульфгидрильных групп. Подобные изменения показателей указывают на то, что повышенная температура приводит к нарушению структурно-функциональной целостности белка, сопровождаемая снижением количества SH-групп, нарушением способности белка участвовать в транспорте различных веществ, вызванным перераспределением центров связывания для лигандов.

Ктсм.

САЧ+НГ САЧ+РгоТа

200

1 50 s 100 I

-50

1'1'jj т ОКА В ЭКА □ SH-ОБ.

К темп.

САЧ+НГ

САЧ+РгоТа

Ш ОКА В) ЭКА □ SH-rp. общ. □ SH-rp. не бел. ■ Фолин полож. про;

Рисунок 36. Биохимические показатели проб после одно- (Л) и двух (Б) часовой инкубации при 37°С.

Внесение в инкубационную смесь НГ после экспозиции в течение часа приводит к снижению ОКА, менее выраженному по сравнению с Ктем. снижению количества SH-групп, на фоне сохранения ЭКА.

Добавление в среду инкубации ПроТа приводит к резкому снижению определяемой ОКА, но при этом выявлено увеличение ЭКА и концентрации общих SH-групп, что указывает, прежде всего, на взаимодействие СА и протимозина альфа, причем в большей степени, чем взаимодействие С А и НГ. Данный факт также указывает на существенное перераспределение центров связывания на молекуле альбумина для различных соединений, что выражается в снижении ОКА на фоне увеличения ЭКА.

При двух часовой инкубации проб СА (Ктем) выявлено снижение ОКА относительно контроля и относительно результатов при 1 часовой инкубации, повышение ЭКА по сравнению с 1 часовой инкубацией, более выраженное снижение концентрации белковых сульфгидрильных групп. На этом фоне выявлено появление низкомолекулярных серу-содержащих соединений (увеличение Фолин положительных продуктов и количества не белковых SH-групп), что указывает на усиление структурной нестабильности альбумина, а также указывает на наличие вышеупомянутых соединений в виде примесей.

Введение в инкубационную смесь НГ и ПроТа приводит либо к менее выраженному снижению ОКА (НГ), либо к сохранению данного показателя на уровне контроля, увеличению ЭКА (значение выше контрольных для ПроТа), а также менее выраженного снижения количества SH-групп по сравнению с показателями при нагревании без препаратов. На фоне данных изменений выявлено увеличение числа серу содержащих Фолин положительных продуктов, что приводит к резкому увеличению определяемого количества не белковых SH-групп (рисунок 36).

Выявленные изменения показателей инкубационных смесей указывают на то, что и нитроглицерин, и протимозин альфа способны влиять на структурно-функциональное состояние молекул альбумина, изменяя при этом число и распределение мест связывания для веществ различной природы, а также увеличению числа SH-групп, что может увеличивать антиоксидантные свойства СА.

Исходя из полученных нами результатов, можно привести следующую схему влияния гипокинетического и вестибулярного воздействий на организм животных (схема 1).

ГИПОКИНЕЗИЯ / ВЕСТИБУЛЯРНОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ

ВАЗОКОНСТРИК-ЦИЯ/С11АЗМ СОСУДОВ

ЛОКАЛЬНАЯ И11Шмия и гипоксия

НАРУШЕНИЕ КЛЕТОЧНОГО ДЫХАНИЯ

ЭНЕРГЕТИЧЕСКИЙ «ГОЛОД»

СНИЖЕНИЕ СИНТЕТИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ И УСИЛЕНИЕ РЕАКЦИЙ РАСПАДА t

ИЗМЕНЕНИЕ СКОРОСТИ КРОВОТОКА, ПЕРЕРАСПРЕДЕЛЕНИЕ КРОВИ

ЭНДОТЕЛИАЛЬ НАЯ ДИСФУНК-т тия

РЕЦЕПТОРЫ ЭНДОТЕЛИЯ

АКТИВАЦИЯ АОС

СНИЖЕНИЕ АКТИВНОСТИ Ыа'К-АТФазы. УНКЛИЧК1МЕ ВНУТРИКЛЕТОЧНОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ Na'C'L.

ГАМК-. ОПИО-ИД-, ДОФАМИН-, СЕРОТОНИН-ЕРГИЧЕСКАЯ СИСТЕМА

ОБРАЗОВАНИЕ ПРОСТА-ГАЛИДИНОВ, ЛЕЙКОТ-РИЕНОВ. ГИДРОПЕРЕКИСЕЙ ЛИПИДОВ

Н I. i С ВП ВОЖДЕНИЕ СВОБОДНЫХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ

СНИЖЕНИЕ АКТИВНОСТИ АТФаз Оа''АТФ<пы

УВЕЛИЧЕНИЕ ВНУТРИКЛЕТОЧНОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ Са'* И 7л" УВЕЛИЧЕНИЕ КАЛЬМОДУЛИН-ЗАВИСИМЫХ ВНУТРИ*ЛЕТОЧ-НЫХ ФЕРМЕНТОВ (ФОСФОЛИПАЗ. ЭНДОПЕПТИДАЗ, ПРОТЕИНАЗ)

ВЫСВО ВОЖДЕНИЕ АРАХИДОНОВОЙ КИСЛО

МНОЖЕСТВЕННЫЕ ПОВРЕЖДЕНИЯ БИОМАКРОМОЛЕКУЛ

Сема 1. Биохимические основы патогенеза гипокинетического и вестибулярного воздействий.

Как видно на схеме, действие на организм ГК и ВС приводит к появлению трех основных механизмов, лежащих в основе патобиохимических изменений: это нарушение функций эндотелия сосудов и реализуемая через него эндотелиальная дисфункция; запускающая реакции ПОЛ, приводящие к развитию окислительного стресса; это также нарастание вследствие первых двух механизмов интоксикации клеток и организма в целом. При этом происходит активация различных механизмов ЗС, в том числе активация АОС.

На ранних этапах формирования данной биохимической среды особое значение имеет структурно-функциональное состояние молекул сывороточного альбумина, участвующих в работе АОС, являющейся важнейшей детоксикационной системой организма, способствующей его адаптации к действию неблагоприятных факторов экзогенной и эндогенной природы (схема 2). Сывороточный альбумин, вводимый на фоне данных воздействий обладает протекторными свойствами, а нитроглицерин и протимозин альфа реализуют свой протекторный эффект и через регуляцию структурно-функционального состояния молекул альбумина. среды на ранних этапах гипокинетического и вестибулярного воздействий.

163

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Сагакянц, Александр Борисович, Ростов-на-Дону

1. Абрамова Ж.И., Оксенгдлер Г.И. Человек и противоокислительные вещества. М.: Наука, 1985,- 230 с.

2. Авицин А.П., Жаворонков А.А., Риш М.А., Строчкова Л.С. Микроэле-ментозы человека. М.: Медицина, 1991.- 496 С.

3. Агаджанян Н.А., Торшин В.И. Экология человека. М.: ММП «Эко-центр», 1994,- 256 с.

4. Акопян В.П. Гипокинезия и мозговое кровообращение. М.: Медицина, 1999,- 240 с.

5. Акопян В.П., Канонян А.С. Некоторые аспекты метаболических и морфологических нарушений головного мозга в условиях гипокинезии и их фармакологическая коррекция.//Экспериментальная и клиническая фармакология, 1993. № 5. С. 8-11

6. Алексеев В.Н. Количественный анализ. М.: Химия, 1972.-504 с.

7. Алексеев В.Н. Курс качественного химического полумикроанализа. М.: Химия,1973.-584 с.

8. Ю.Альберт А. Избирательная токсичность. Т. 1. М.: Медицина, 1989,- 400 с.

9. Агтьперович Д.В. Взаимосвязь дезаминирования, деструкции и иммунологической активности препаратов иммуноглобулинов. Дисс. на соисккание ученой степени канд. биол. наук. Ростов-на-Дону, 1986,- 24

10. Альперович Д.В., Лысенко А.В., Менджерицкий A.M. Преадаптация организма к действию неблагоприятных факторов путем введения эндогенного адаптогена дельта-сон индуцирующего пептида.// Нейро-химия, 1999,- Т. 16,- № 1,- С. 29-36

11. З.Анохин П.К. Избранные труды. Философские аспекты теории функциональной системы. М.: Медицина, 1978,- С.3-76

12. Аишарин И.П., Данилова Р.А., Федорова И.М. и др. Нейрохимия, 1997.-Т. 14,-Вып. 1.-С. 27-32

13. Бабижаев М.А., Ермакова В.Н., Семилетов Ю.А., Деев А.И. Na-ацетилкарнозин природный гистидин-содержащий дипептид как ан-тиоксидант для офтальмологического применения.// Биохимия,- т. 65, вып. 5, 2000,-с. 691-703

14. Баженов Ю.И. Термогенез и мышечная деятельность при адаптации к холоду. Л.: Наука, 1981,- 105 с.

15. Бакулин А.В., Оганов B.C., Мансурова Л. А. Влияние 1-хлорметилфилатрона на биомеханику костной ткани в условиях гиподинамии.//Жур. «Доклады Академии Наук», 1994. № 6. стр. 831-843

16. Балаболкин М.И. Эндокринология. М.: Универсум паблишин, 1998,540 с.

17. Банин В.В., Каминская Н.А. Клеточный цикл хондроцитов как показатель темпов формирования кости при гипокинезии.//7 Всероссийский симпозиум «Эколого-физиологические проблемы адаптации». М.:, 1994.-С.26

18. Баранов В.М., Котов А.Н., Тихонов М.А. Гипокинезия: Дыхательные мышцы и аэробная работоспособность// Гипокинезия. Медицинские и психологические проблемы,- М., 1997,- с. 6

19. Бедненко B.C., Ступаков Г.П., Нестеров М.А., Мухин В.А. Развитие синдрома застойных паренхиматозных органов в условиях кратковременной гипокинезии// Авиакосм, и экологическая медицина, 1999,- Т. 33, №3.-С. 25-31

20. Бейли Н. Статистические методы в биологии. М.: Мир, 1964,- 210 с.

21. Беленков Ю.Н., Мареев В.Ю., Агеев Ф.Т. Эндотелиальная дисфункция при сердечной недостаточности: возможности терапии ингибиторами ангиотензин-превращающего ферметна.// Кардиология, 2001.- т. 41.- № 5,-сс. 100-104

22. Беленков Ю.Н., Мареев В.Ю., Агеев Ф.Т. Ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента в лечении сердечно-сосудистых заболеваний. М.: 000»инсайт полиграфик», 2002,- 86 с.

23. Березов Т.Т., Коровкин Б.В. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990.- 528 с.

24. Биохимические методы исследований в клинике./ под ред. Покровского А. А. М.: Медицина, 1969,- 652 с.

25. Биохимические основы патологических процессов./ Под ред. Е.С. Северина. М.: Медицина, 2000,- 304 с.

26. Бова А.А., Трисветова E.JT. Роль вазоактивных эндотелиальных факторов в развитии артериальной гипертензии.// Гедеон Рихтер в СНГ,- №4 (8).- 2001,- сс. 13-15

27. Болдырев А.А. Карнозин. Биологическое значение и возможности применения в медицине. М.: Изд-во МГУ, 1998,- 320 с.

28. Вальдман А.В., Александровский Ю.А. Психофармакотерапия невротических расстройств. М.: Медицина, 1987. 450 С.

29. Васильев П.В., Глод Г.Д. Влияние длительной гипокинезии на течение патологических процессов у животных// Авиокосм. и экологическая мед., 1999,-Т. 33, №6,- С. 16-21

30. Вапцаров И., Иолетов М., Савов С., Дюкмеджиев И., Эшпенази М. Диспротеинемии. София.: Медицина и физкультура, 1978,- 336 с.

31. Винк Д.А., Водовоз И., Дж. А. Кук и др. Значение химических свойств оксида азота для лечения онкологических заболеваний //Биохимия, 1998, т. 63, вып.7,- с.948-957.

32. Владимиров Ю.А., Азизова О.А. и др. Свободные радикалы в живых системах //Итоги науки и техники, серия Биофизика, т. 29, 1991.- С. 2635

33. Власов В.В. Реакция организма на внешние воздействия. Иркутск: Изд-во Иркут. Ун-та, 1994,- 344 с.

34. Власов А.П., Тарасова Т.В., Судакова Г.Ю. и др. О влиянии антиокси-дантов на выраженность эндотоксикоза при экспериментальном перитоните.// Эксперем. и клин, фармаколгия, 2000,- т. 63,- № 6,- С. 58-61

35. Волжин А.И. Адаптивно-компенсаторные реакции при приспособлении к космическим полетам.// Авиокосм. и экологическая мед.- 1995 -№2,-С. 6-12

36. Воробьев О.А., Зарицкий В.В. Межсенсорное взаимодействие как основа методов повышения устойчивости к укачиванию.// Вестник Росс. АМН,- 1996,-№7,-С. 48-52

37. Воячек В.И. Современное состояние вопроса о физиологии и клинике вестибулярного аппарата// Журнал ушных, носовых и горловых болезней, 1927,-№3-4,- С. 121-248

38. Гааль Э., Медьеши Г., Верецпеи JI. Электрофорез в разделении биологических макромолекул. М.: Мир, 1982,- 448 с.

39. Гаркави JI.X., Квакина Е.Б., Уколова М.А. Адаптационные реакции и резистентность организма. Ростов -на- Дону.: Изд-во Ростовского университета, 1990,- 224 с.

40. Гаркави J1.X., Квакина Е.Б., Кузьменко Т.С., Шихлярова А.И. Анти-стрессорные реакции и активационная терапия. Реакция активации как путь к здоровью через процессы саморегуляции. Екатеринбург: «Филантроп», 2002 196 с.

41. Герасимов К В., Гофман В.Р. Методологическая основа изучения вестибулярных реакций// Вестник Российской АМН.-1996.-№ 5.-С.54-60

42. Глазников JI.A., Янов Ю.К., Бутко Д.Ю., Щустов Е.Б. О фармакопро-филактике синдрома укачивания.// Ж. ушных, носовых и горловых болезней,- 1992, №2,-С. 31-36

43. Гмуран В.Е. Теория вероятности и математическая статистика. М.: ВШ, 1999,-479 с.

44. Гомазков О.А. Пептиды в кардиологии. Биохимия. Физиология. Патология. Информация. Анализ. М.: МАТЕРИК АЛЬФА, 2000,- 143 с.

45. Горгиладзе Г.И., Брянов И.И. Космическая болезнь движения// Космическая биология 1989,- № 3,- С. 4-14

46. Грицук А.И., Данилова ИГ. Клетка для моделирования длительной гипокинезии у крыс// Косм, биология и авиакосм, медицина, 1986,- Т. 20, №3.-75-78 сс.

47. Грызунов Ю.А., Добрецов Г.Е. (под ред). Альбумин сыворотки крови в клинической медицине. В 2 томах. Т 1. М.: ИРИУС, 1994,- 226 с.

48. Грызунов Ю.А., Добрецов Г.Е. (под ред). Альбумин сыворотки крови в клинической медицине. В 2 томах. Т 2. М.: «ГЭОТАР», 1998,- 440 с.

49. Гусев Е. И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. М.: Медицина, 2001.-328 с.

50. Деева B.C., Подгородниченко В.К., Гончарова А.Я., Скворцов В.Г. со-вязывание катионизированного альбумина очагами патологии и его адсорбция in vitro опухолевыми клетками.// Вопр. биол., мед. и фармацевтической химии, 1999, №5,- сс. 25-30

51. Джафаров A.M., Алиев Л.А. Структура и конформационные особенности сывороточного альбумина. Баку: ЭЛМ, 1990,- 204 с.

52. Дин Р. Процессы распада в клетке. М.: Мир, 1981,- 65 с.

53. Дубинина Е Е. Антиокислительная система плазмы крови.// Укр. био-хим. Журнал, 1992,- т.64, №2,- сс. 3-15

54. Иллариошкин С.Н. Конформационные болезни мозга. М.: «Янус-К», 2003.-248 с.

55. Ингина В.А., Зорькина А.В., Косицин Я.В. Адаптация к физическим нагрузкам после воздействия иммобилизационного стресса// Вестн. Рос. Академии мед. Наук, 1996, № 9,- 18-20 сс.

56. Иржак Л И. состав и функции крови.// Соросовский образовательный журнал, т.7, № 2, 2001.- сс. 11-19

57. Камскова Ю.Г. К вопросу о механизмах, обуславливающих развитие повышенной антигипоксической устойчивости при кратковременной гипокинезии.// Тез. докл. XVIII «Съезда физиологического общества имени И.П. Павлова», Казань, 2001. сс. 256

58. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике. Минск: «Беларусь», 2000,- В 2 томах, т. 2,- сс. 209211

59. Каркищенко В.Н. Фармакологическая коррекция вестибуло-вегетативного синдрома при моделировании болезни движения// Дис. на соискание ученой степени канд. мед. наук, М., 1998,- С. 150

60. Каркищенко Н.Н. О требованиях к «идеальному» лекарственному средству профилактики космической болезни движения.// Косм. биол. и авиакосм, мед.- 1989,- Т. 23, № 6,- С. 33-36

61. Каркищенко Н.Н. Фармакологические основы терапии. М.: IMP-Медицина, 1996,- 560 с.

62. Каркищенко Н.Н. Лекарственная профилактика. М.: Воентехлит, 2001 .752 с.

63. Каркищенко Н.Н., Хоронько В.В., Сергеева С.А., Каркищенко В Н. Фармакокинетика. Ростов-на-Дону: «Феникс», 2001,- 384 с.

64. Кигель Т. Б., Харабаджахьян А.В., Новодержина Ю.Г. Показатели биологической нормы лабораторных животных (крыс). Ростов -на- Дону: РГМИ, 1978.-95 с.

65. Коваленко Е.А., Туровский Н.Н. Гипокинезя. М.: Медицина, 1980 -320 С.

66. Козловский В.Л. Фармакологические свойства блокаторов кальциевых каналов и перспективы их применения в психиатрии и неврологии.// Неврология и психиатрия, 1994. № 2. сс. 104-108

67. Комарова М.Н., Грызунов Ю.А. Строение молекулы альбумина и ее связывающих центров (обзор литературы)./ В кн.: «Альбумин сыворотки крови в клинической медицине», под ред. Грызунова Ю.А, Добре-цова Г.Е. М.: «ГЭОТАР», 1998,- 440 С.

68. Комендантов Г.Л. Воздушная болезнь. М.: Наука, 1965.- 254 С.

69. Комендантов Г.Л. Проблема ускорений в авиационной медицине. М.: Наука, 1989,- 156 С.

70. Комендантов Г.Л., Разсолов Н А. Особенности стрессовых состояний у пилотов// Актуальные проблемы стресса. Кишинев: Штиинца, 1976,- С. 125-132

71. Корнева Е.А. Эволюция рефлекторной регуляции сердечной деятельности. М.: Медицина, 1965,- 253 С.

72. Крапивницкая Т.А., Разсолов Н.А. Проблемы адаптации к профессиональным условиям пилотов с явлениями нейроциркуляторной листании.//7 Всероссийский симпозиум «Эколого-физиологические проблемы адаптации». М.:, 1994. С. 130

73. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник./ Под ред. В.В. Меньшикова. М.: Медицина, 1987,- 386 с. (сс. 176)

74. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: ВШ, 1973,- 343 с.81 .Лекарственные препараты в России: Справочник Видаль. М.: OVPEE-АстраФармСервис, 2000,- 1408 с.(С. Б-355)

75. Ли С.Е., Ситникова И.Г. Изменения тимуса крыс при длительной гипокинезии.// 7 Всес. конф. по физиологии. Ашхабад, 1989,- с. 181-182

76. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистология. М.: Мир, 1969.-645 с.

77. Литвинов А.В., Савченко В.Г., Цепова Е.Л., Челидурова Л.Н. Транспортная функция альбумина сыворотки крови у больных острым и хроническими лейкозами.// Терапевтический архив, 1998,- №7,- с. 72

78. Лобанова B.C. Клиническая нейрофизиология гипокинезии. М.: Медицина, 1986,- 216 С.

79. Лобзин B.C., Михайленко А.А., Панов А.Г. Клиническая нейрофизиология и патология гипокинезии. М.: Медицина, 1978,- 149 С.

80. Лопухин Ю.М., Добрецов Г.Е., Грызунов Ю.А. Конформационные изменения молекулы альбумина: новый тип реакции на патологический процесс.//Бюллетень эксперим. биол. и мед., 2000.-т. 130,- №7,- сс. 4-8

81. Лоуренс Д.Р., Бенитт П.Н. Клиническая фармакология. В 2 т.Т.2. М.: Медицина, 1991.- 704 с.

82. Лукомская Н.Я., Никольская М.И. Изыскание лекарственных средств против укачивания. Л.: Наука, 1971 .-226 с.

83. Лысак В.Ф. Влияние кратковременной гипокинезии на устойчивость организма к воздействию стрессорных факторов. Сборник: «Стресс и адаптация. Тезисы всесоюзного симпозиума по физиологии». Кишинев: Институт зоологии и физиологии, 1978. стр. 128-129

84. Маеда Н., Акаике Т. Оксид азота и кислородные радикалы при инфекции и раке //Биохимия, 1998,- т. 63,- вып.7,- с.1006-1019

85. Манукян А.А., Акопян А.А. Липидная пероксидация и мозговой кровоток при гипокинезии// V Рос. Нац. Конгресс «Человек и лекарство», М., 1998,-С. 133

86. Маркарян С.С. К вопросу взаимодействия анализаторов и выраженности вестибулярных реакций на воздействие экстрараздражителей// Проблемы космической биологии,- 1971. т. 16,- С. 76-93

87. Маркова И.В., Неженцев М.В. Фармакология. С.-П.-1994,- 452 с.

88. Маркосян А.А. Физиология тромбоцитов. Л.: Наука, 1970,- 164 С.

89. Маршалл В.Дж. Клиническая биохимия. М.: Спб: Изд-во "БИНОМ"-"Невский Жиалект", 1999,- 368 с.

90. Маурер Г. Диск-электрофорез. М.: Мир, 1971,- 300 с.

91. Мационис А.Э., Повилайтите П.Е. Количественные параметры аксосо-матических синапсов при воздействии ДСИП и гипоксии.//Бюлл. экс-пер. биол. мед., 1996,- С.9-10

92. Медицинские лабораторные технологии и диагностика: Справочник. Медицинские лабораторные технологии./ Под ред. А.И. Карпи-щенко. Санкт-Петербург: Интермедика, 1999,- 656 с. (сс. 59-60)

93. Меерсон Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика. М.: Наука, 1981.-277 с.

94. Меерсон Ф.З. Адаптация к стрессорным ситуациям и стресс лимитирующие системы//Физиология адаптационных процессов. М.: Наука, 1986. -С. 521-631

95. Меерсон Ф.З. Стресс-лимитирующие системы и проблема защиты от аритмии // Кардиология. 1987,- № 7,- С. 5-12

96. Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам. М.: Медицина, 1988,- 256 с.

97. Меерсон Ф.З., Малышев И.Ю., Замотринский А.В. Двухфазный характер феномена адаптационной стабилизации структур в процессе длительной адаптпции огранизма к стрессу.// Бюл. эксперим. биол. и мед.- 1993,- № 10,-С. 352-355

98. Мельник И.А., Барановский П.В., Нестеренко Л И. Новый способ оценки транспортной функции сывороточного альбумина.// Лаб. дело, 1988, № 4,- с.202-204

99. Мережинский М.Ф., Черкасова Л.С. Основы клинической биохимии. М.: Медицина, 1965,- 359 с.

100. Михайленко В.Г. Неоднозначность резистентности организмов.// Успехи современной биологии, 2002,- т. 122,- №4,- сс. 334-341

101. Михайлов В.В. Основы патологической физиологии: Руководство для врачей. М.: Медицина, 2001.- 704 с.

102. Михайлов В.М. Гипокинезия как фактор риска в экстремальных условиях// Авиакосм, и экологическая медицина, 2001.- Т. 35, № 2,- С. 26-31

103. Николаев А. Я. Биологическая химия. М.:МИА, 1998,- 496 с.

104. Налетов С.В., Белецкий Э.А. Нейрохимические механизмы и фармакологические пути устранения рвоты при морской болезни.//Военно-мед. журнал, 1998,- №9,- С. 74-76

105. Осипов А.Н., Азизова О.А., Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и их роль в организме //Успехи биол. хим.,- т. 311 .-1990.- С. 180-208

106. Островская Р.У., Фирова Ф.А., Трофимов С.С. Стойкое последствие амнестического эффекта скополамина у крыс и его коррекция пираце-тамом// Бюл. эксперим. биол. и мед.- 1995.-№ 4,- С. 372-374

107. Панин Л.Е. Энергетические аспекты адаптации. М.: Медицина, 1978. 192 с.

108. Панфёрова Н.Е. Гиподинамия и сердечно-сосудистая система. М.: Наука, 1977. -259 с.

109. Пентюк А.А., Мусин Р.А., Марченко Г.П. Изучение новых функциональных свойств альбумина.//Вопр. мед. химии, 1995,- с. 11-13

110. Пирс Э. Гистохимия. М.: Наука, 1962,- 623 с.

111. Покровский А.А. (под ред.) Биохимические исследования в клинике. М.: Медицина, 1969,- 652 с.

112. Прайор У. Свободные радикалы в биологии. В 2 т. М.: Медицина, 1979.- Т.1, 254 С.- Т.2, 265 С.

113. Пшенникова М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его рол в патологи. В кн.: «Актуальные проблемы патофизиологии (избранные лекции)»/ под ред. Мороза Б.Б. М.: Медицина, 2001 .-с. 220-353

114. Ракитский П.В. Биологическая статистика. Минск: ВШ, 1967,268 С.

115. Рахманкулова Г.М. Влияние иммобилизации на содержание катехоламинов, аскорбиновой кислоты и глюкозы в крови и органах крыс// «Функции двигательного аппарата человека и животных», Казань, 1986,-109-119 сс.

116. Саакян И.Р., Карапетян Т.Д., Саакян Г.Г. Митохондрии печени в реализации антигенного напряжения организма у крыс// Вопросы мед химии,- 2001,- №2,- с. 69-74

117. Северина И.С. Растворимая гуанилатциклаза в молекулярном механизме физиологических эффектов оксида азота //Биохимия, 1998.-т. 63,- вып. 7.- С. 939-947

118. Сергеев П.В., Галенко-Ярошевский П.А., Шимановский Н.Л. Очерки биохимической фармакологии. М.: РЦ "Фармединфо", 1996 -384 с.

119. Серенко Ю.Г. Профилактика укачивания лиц различных типов соматической конституции с помощью антигипоксантов.// Военно-медицинский журнал, 1992.- №10,- С. 5-6

120. Сидоренко Ю.С., Владимирова Л.Ю., Франциянц Е.М. Влияние химиопрепаратов на структуру и функциональные свойства альбумина сыворотки крови больных раком молочной железы.// Вопросы онкологии, 2001,- т. 47,- № 3,- С. 303-306

121. Синичкин А.А., Эстрин в.В. Сывороточный альбумин как антиокислительная система.// В сб.: «III Всесоюзная конференция «Биоок-сиданты», 1982.- сс. 258-259

122. Синичкин А.А. Сывороточный альбумин как биополиантиокси-дант.// Биоантиоксидант, Томск,- 2000. С.19

123. Скоупс Р. Методы очистки белков. М.: Мир, 1985,- 358 с.

124. Смирнов К.В. Пищеварение и гипокинезия. М., 1990,- 135 С.

125. Созонова И В. Фармакологическая коррекция некоторых нейрохимических механизмов вестибулярного стресса и адаптация к нему// Дис. на соискание ученой степени канд. биол. наук, Ростов-на-Дону, 1999,- С.162

126. Сорохтин Г.Н. Дефицит возбуждения. В кн.: Проблемы космической биологии. М.: Наука, 1969. т. 13,- сс. 24-34

127. Стальная И.Д., Горишвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты// Современные методы в биохимии. М.: Медицина, 1977. сс. 66-68

128. Старк Дж. Гель-электрофоретические приборы и наборы химре-активов. "Медимпекс", Будапешт, Венгрия, 1975 50 с.

129. Стейн Т.Р., Ларина И.М., Лескив М.Дж., Шлутер М.Д. Обмен белка во время и после длительного космического полета// Авиокосм. и экологическая медицина, 2000,- Т. 34,- № 3,- С. 12-16

130. Степуро А.И., Серов В.В. Патологическая анатомия. М.: Медицина, 1993,- 610 с.

131. Судаков К.В. Системная интеграция функций человека: новые подходы к диагностике и коррекции стрессорных состояний.// Вести Росс. АМН, 1996,-№6,-С. 15-25

132. Сурганова JT.A. Вестибуло-мозжечковый контроль механизма адаптивных межорганных рефлекторных реакций при радиальном ускорении у молодых и зрелых животных. Минск, 1989,- 44 с.

133. Тигранян Р.А. Гормонально-метаболический статус организма при экстремальных воздействиях. М.: Наука, 1990,- 288 с.

134. Тигранян Р.А.Метаболические аспекты проблемы стресса в космическом полете// Проблемы космической биологии. М., 1985.-Т. 52,221 с.

135. Тизул А.Я. Основные клинико-неврологические синдромы длительной гипокинезии// Авиакосм, и экологическая медицина, 1999 -Т. 33, №3,- С. 9-12

136. Титов В Н. Альбумин, транспорт насыщенных жирных кислот и метаболический стресс-синдром (обзор литературы).//Клиническая лаб. диагностика, 1999,- № 4,- сс. 3-11

137. Ткаченко Б.И. Основы физиологии человека. В 2 томах, т. 2. М.: Ассоциация преподавателей физиологии высших учебных заведений, 1994,-413 С.

138. Троицкий Г.В. Дефектные белки. Постсинтетические модификации. Киев: Наукова Думка, 1991.- 250 с.

139. Тхостова Э.Б. Новые подходы к лечению сердечно-сосудистых заболеваний.// Гедеон Рихтер в СНГ,- № 4(8).- 2001.- сс. 21-22

140. Тэйлор Б.С., Аларсон Л.Х., Биллимар Т.Р. Индуцибельная синте-таза оксида азота в печени: регуляция и функции //Биохимия, 1998.- т. 63,-вып. 7,-С. 905-923

141. Тюлина О.В., Стволинский с.Л., Каган В.Е., Болдырев А.А. Влияние карнозина и его природных производных на хемштюминис-ценцию лейкоцитов, активированных BaS04. // Нейрохимия, т. 12 -вып. 1, 1995,-С. 46-51

142. Уайт А., Хендлер Р., Смит Э., Леман И. Основы биохимии. 3 т. М.: Мир, 1981,- 726 С.

143. Федоров И В. Биохимические основы патогенеза гипокинезии.// В сб. «Изменение метаболизма у животных при гипокинезии». Ярославль, 1984,-сс. 28-30

144. Федоров И.В. Гиподинамия и гормональная активность.// Косм, биол. и медицина, 1971,- № 4,- с. 59-61

145. Федоров И.В. О динамике изменений белкового обмена у крыс в течение длительной гипокинезии// Жур. «Космическая биология и медицина», 1980. №с 3,- стр. 18-21

146. Фишер А.А. Статистические методы для исследователей. М.: Москва, 1958.-254 С.

147. Фоломеев В.Ф. Фотометрический ультрамикрометод количественного определения сульфгидрильных групп белка и небелковых соединений крови.// Лабораторное дело, 1981,- №1.- С. 33-35

148. Фурдуй Ф.И. Физиологические механизмы стресса и адаптации при остром действии стресс-факторов. Кишинев: «Штиинца», 1986.234 с.

149. Харкевич Д.А. Фармакология. Учебник. М.: Медицина, 1993,544 с.

150. Хасина Э.И., Кириллов О.И. Стрессовые механизмы гипокинезии. Владивосток: ДВНЦАН СССР, 1987,- 124 С.

151. Хилов К.Л. Кора головного мозга в функции вестибулярного анализатора. М.: Медицина, 1952. 83 С.

152. Ходякова А.В. Иммунобиологические свойства рекомбинантного протимозина-альфа человека. //Авт. дисс. к.м.н,- Москва, 2000,- 26 С.

153. Хоронько В.В., Макляков Ю.С. Современные лекарственные средства. Свойства, показания и противопоказания. Ростов-на-Дону: Изд-во «Феникс», 1998,- 608 с.

154. Хоронько В.В., Макляков Ю.С. Современные лекарственные средства. Свойства, показания и противопоказания. Ростов-на-Дону: Изд-во «Феникс», 2003,- 736 с.

155. Чёгер С И. Транспортная функция сывороточного альбумина. Бухарест: Изд.-во Академии Соц.-ой Респ. Румыния, 1975. 183 с.(сс. 6465)

156. Черешнев В.А., Юшков Б.Г. Патофизиология. М.: Вече, 2001. -704 с.

157. Чуконова Е.И. Механизмы формирования спастичности и опыт патогенетической терапии лидокаином.// Гедеон Рихтер в СНГ,- №1 (9).- 2002,- сс. 45-48

158. Шаронов Б.П., Говорова Е.Н., Лызова С. Н. Антиокислительные свойства и деградация белков сыворотки активными формами кислорода (CV, ОСЬ"), генерируемые стимулированными нейтрофилами //Биохимия, 1988,- т. 53.- вып. 5,- С.816-824

159. Шашков B.C. Фармакологические средства профилактики и купирования синдрома укачивания.// 1 Росс. нац. конгресс «Человек и лекарство», Москва, 1992,- С. 361

160. Шашков B.C., Айзиков Г.С., Яснецов В.В. Болезнь движения. М,-1994.-278 с.

161. Шашков B.C., Сабаев В.В., Ильина C.JI., Галле P.P. Проблемы лекарственной профилактики синдрома укачивания (болезни движения).- 1987,- №3,- С. 5-20

162. Шидловская Т.Е. Перекисное окисление липидов при гипокинезии и атерогенной диете. // Сб. научных трудов «Изменение метаболизма у животных при гипокинезии». Ярославль, 1984,- С. 44-55

163. Юргенс И.Л., Кириллов О.И. Морфологические изменения надпочечников крыс при гипокинезии// Журнал «Космическая биология и медицина», 1972. № 4 стр. 46

164. Янецов В.В., Шашков B.C. Нейрохимические и фармакотерапев-тические аспекты болезни движения. М.: ВИНИТИ, 1993.- 164 с.

165. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М.: Медицина, 1999.-608 с.

166. Ярилин А. А., Добротина Н.А. Введение в современную иммунологию. Нижний Новгород: Изд-во Нижегородского университета, 1997,- 238 с.

167. Asayama К., Nakane Т., Uchida N. et all. Serum antioxdant status in streptozotocin-inductd difbetic rat/ Hormon & Metabolic Research 1994 -vol. 26/-P. 313-315

168. Barnes N.M., Costall В., Naylor R.J., Ittersall F.D. Identification of 5-HT3 recognition sites in the ferret area posterma// J. Pharm., Pharmacol.-1988,-v. 40,-P. 586-588

169. Belli C. Antioxidants lipid peroxidation// Progr. Neurobiol., 1998 -V.57.-p. 301-323

170. Beleslin D.B., Strbac M., Jovanovic-Micic et al. Area- posterma: cholinergic and noradrenergic regulation of emesis. A new concept// Arch. Int. Physiol, biochim.- 1989,- v. 97,-P. 107-115

171. Bonnardel-Phu E., Wautier JL., Schmidt AM., Avila C., Vicaut E. Acute modulation of albumin microvascular leakage by advanced glycation and products in microcirculation of diabetic rats in vivo.// Diabetes, 1999 -48(10): 2052-8

172. Brizze K.R. Ordy J.M., Mehler W.R. The central nervous connections involved in the vomiting reflex// Nausea and Vomiting: Mechanisms and Treatment.- 1986 -P. 31-55

173. Burford G.D., Jones C.W., Pickering B.T. Biochem. j. 1971.-124,-809

174. Carpenter D.O., Briggs D.B., Knox A.P., Strominger N. Excitation of area postrema neurons by transmitters, peptides and cyclic nucleotides// J. Neurophysiol.- 1988,- v. 59, № 2,- P. 358-369

175. Cha M.K., Uim J.H. Glutation-lunked thiol peroxidase activity of human serum albumin: a possible antioxidant role of serum albumin in Blood plasma//Biochem. and Biophysical Research. Communicatuons.- 1996,- vol. 222,-№2,-P. 619-625

176. Cowings P.S., Toscano W.B. The relationship of motionsickness sus-pectibility to learned autonomic control for symptom suppression// Aviat. Space Environ. Med.- 1982,- v. 53, № 6,- P. 570-575

177. Crampton G.H., Lucot J.B.// Aviat. Space Environ. Med.- 1985,- v. 56,- P. 462-465

178. Dockal M., Carter DC., Ruker F. The three recombinant domains of human serum albumin. Structural characterization and ligand binding properties.//J. Biol. Chem., 1999.-№ 8.-274 (41): 29303-29310.

179. Fox R.A., Dauton N.G. Conditioned feeding suppression in rats produced by cross-coupled and simple motions// Aviat. Space Environ. Med.-1982.-v. 53, №3.-P.218-220

180. HalliwelB. Albumin important extractllular antioxidant? //Biochemical Pharmacology.- vol. 37,- № 4,- P. 569-571,- 1988

181. Halliwel В., Gutteridge J.M.C. The antioxidants of human extractllular fluids // Archives of biochemistry and biophysics.- vol. 280,- № 1,- P.- 18,- 1990

182. Hashimoto M., Takeda A., Hsu L.J., Takenouchi Т., Maslian E. //J. Biol. Chem. 1999 oct. 8; 274(41): 28849-28852

183. Hauffer R.B., Vincent А.С. Stereospecific binding of raciron (111) N,N-Ethylene-bis((5-bromo-20hydroxyhenye)glycinate) to bilirubin site on human semm albumin.// J. Amer. Chem. Soc.- 1984,- v. 109, № 7,- p. 22162218

184. Holt M.E., Ryall M.E.T., Campbell A. K. Albumin inhibits human po-lymorphonuclesr leucocyte luminol-dependent chemiluminescens: evidence for oxygen radical scavenging// Br. J. exp. Path.- 1984,- v. 65,- p. 231

185. Hovstad B.A. Fatty acid induced hemolysis. Protective action of ceru-loplasmin, albumin, thiole and vitamin C.// Int. J. Biochem.- 1986.-v. 18,-№9,-p. 771-775

186. Iida M., Miyazaki I., Tanaka K., Kabuto H., Iwata-Ichikawa E., Ogava N. Brain Res.-1999. Aug.14. 838(1-2): 51-59

187. Janowsky D.S., Risch S.C. Cholinomimetic and anticholinergic drugs used to investigate and acetylcholine hypothesis of affective of disorders and stress//Drug Dev. Res.- 1984 v. 4,-P. 125-142

188. Kohl R.L., Homick J.L. Motion Sickness: a modulatory role for the central cholinergic nervous system//Neurosci. Biobehav. Rev.- 1983,- v. 7,-P. 73-85

189. Levy R.A., Jones O.R., Carlson H. Biofeedback rehabilitation of airsick aircrew//Aviat. Space Environ. Med.- 1981,- v. 52,- P. 118-121

190. Love S. Oxidative stress in brain ischemia.//Brain pathall. 1999. 9(1). P.- 119-133

191. Lysenko A., Uskova N., Matsionis A., Povilaitite P. The role of DSIP in calpaine activity regulation.// Neurochemistry: cellular, molecular and clinic aspects.-eds. Teelken and Korf.- Plenum Press.-1997.-P.- 419-422

192. Mary E.H., Ryall M.E.T., Campbell A.K. Albumin inhibits human poly morphonuclear leucocute luminol-dependent chemiluminescence: evidence for oxygen radical scavenging //The British jornal of Eperimental Pa-tology.- 1984,-1. 65,- P. 231-241

193. Mendzeritskaya L., Matsionis A., Pavloc Т., Povilaitite P. Comparative analysis of morphological and functional reactions of sensomotor cortex synapses to Hypoxic and Hyperoxic exposures in rats// Hypoxia Medical J. -1997.-N1.-P. 7-10

194. Minghettit P.E. Molecular structure of the humen albumin gene is by nucleotid sequence writhin g.l 1-12 of chromosom 4 // Biol.Chem- 1986,- t. 261,-№ 15,-P. 6747-6717

195. Foster J.F.// Albumin: Structure, Functions and Uses/ Eds. V.M. Rosenour et al.- Oxford, 1992,- P. 53-87

196. Masaco Т., Toshiyki M. Fluoresent substances in mouse and human sera as a parametr of in virolipid peroxidation // Biochem. et Biophys. acta: Lipids and Metab.- 1985.-1. 834,- № 2,- P. 196-204

197. Moens J., Burford J.D. A simple method of neurosecretory products after polyacrylamide gel electrophoresis //Anal. Biochem.- 1973,- 51,- 1 2.-P. 466-469

198. Money K.E. Motion sickness// Physiological Reviews.- 1970.- v. 50, № l.-P. 1-39

199. Mulder G J. Jieb. Ann.- 1838,- 28.-Р,- 73-82

200. Nomura Y., Nishiyama N., Saito H., Matsuki N. Role of cholinergic neurotransmission in the amygdale on performances of passive avoidance learning in mice// Biol, and Pharm. Bull.- 1994,- v. 17, № 4,- P. 490-494

201. Peters Jr. Th. Serum albumin //Advances in protein chemistry.- 1985,-vol. 37,-P. 161-245

202. Shimazu S., Katsuki H., Akaike A. Massive Mitochondrial Degeneration in motor neurons triggers the onest of Amyitrophic Lateral Sclerosis in Mice Expressing a Mutant SODl./The J. of Neurisci, May 1. 1998. 18(19): 3241-3250

203. Soviani M. et all. Antioxidant potential of human plasma: role of serum albumin and thiols as scavengers of carbon radicals //Archives of Biochem. and Biophys.- 1994,-vol. 312,-№ l.-P. 180-189

204. Stehle G., Wunder A., Schrenk HH., Hartung G., Heene DL., Sinn H. Album in-based drug carriers: comparison between serum albumin of different species on pharmacokinetics and tumor uptake of conjugate. // Anticancer Drugs.- 1999,- 10(8): 785-790

205. Tarabayachi K., Amado T. Comling be turen fatty acid bending serum albumin //Fur. J. Biochem.- 1983,- № 2,- P. 291-295

206. Vogt E.B. Comparative tilt table response before and after short tern deconditioning experiments// Aerospace Med., 1966, № 3,- P. 306

207. Wasil M., Halliwell B. et all. The antioxidant action of human extracellular fluids //Biochem. J.- 1987,- 243,- P. 219-223

208. Wood C D., Graybiel A. Evaluation of sixteen antimotion sickness drugs under controlled laboratory conditions// Aerosp. Med.- 1968 v. 39 -P. 1341-1344.

Информация о работе

Сагакянц, Александр Борисович
кандидата биологических наук
Ростов-на-Дону, 2003
ВАК 03.00.04

Диссертация

Биохимические механизмы протекторного действия сывороточного альбумина, нитроглицерина и протимозина альфа при гипокинетическом и вестибулярном воздействиях - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы