Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Биохимические аспекты и экспериментальная оценка фармакологической активности полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Биохимические аспекты и экспериментальная оценка фармакологической активности полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой"

На правах рукописи

Г Б ОД

Щекина Ирина Анатольевна 2 9 Ш 2П2

БИОХИМИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПОЛИМЕРНОГО ВОДОРАСТВОРИМОГО АНАЛОГА КИСЛОТЫ АЦЕТИЛСАЛИЦИЛОВОЙ

03.00.04 - биохимия 14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Воронеж 2002

Работа выполнена в

Воронежской государственной медицинской академии им. Н.Н. Бурденко

Научный руководитель - доктор медицинских наук,

профессор Николаевский В.А. Научный консультант - доктор фармацевтических наук,

профессор Сливкин А.И.

Официальные оппоненты

заслуженный деятель наук РФ, доктор биологических наук, профессор Бузлама B.C.

Ведущая организация

Воронежская государственная технологическая академия

Защита состоится 21 июня 2002 года в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 212.038.03 при Воронежском государственном университете по адресу: 394006, Воронеж, Университетская пл., 1

С диссертацией можно ознакомиться в зональной научной библиотеке Воронежского государственного университета.

Автореферат разослан 20 мая 2002 года

заслуженный врач РФ доктор медицинских наук, профессор Чернов Ю.Н.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

Грабович М.Ю.

¿4.7.0 /С - / —'ft

I ВВЕДЕНИЕ

[ Актуальность проблемы. Наиболее распространенными заболеваниями XX века стали гипертоническая болезнь (ГБ), ишемическая болезнь сердца (ИБС). Они ограничивают работоспособность, сопровождаются большими экономическими потерями [Бокарев И.Н., 1998, Bruce R.A., 1980, Coch P.F., 1988, Gordon Т., 1978, Hikman, 1980] и составляют 53,5 - 55 % от общей смертности населения России [Брюховицкий А.Р., 1986, Версаладзе A.B., 1984, Иванова Е.Н, 1984, Вихерт A.M., 1976, Чазов Е.И., 1971, Волков B.C., 1982, Руда М.Я., 1999, Машковский М.Д., 1994]. По данным ВОЗ 20 % людей в возрасте старше 40 лет страдают ГБ, которая приводит к ИБС, сердечной недостаточности, мозговому инсульту. На протяжении последних десятилетий в возрастной группе 40 - 50 лет, отмечается устойчивый рост заболеваемости ИБС [Gulledge A.D., 1975, Herd J.А., 1984, Piekermg T.G., 1986]. Распространенность, неблагоприятный прогноз позволяют рассматривать ИБС, как одну из ключевых проблем современной медицины.

Фармакотерапия, основанная на регуляции биохимических механизмов агрегации, является одним из основных методов лечения этих заболеваний [Баркаган З.С., 2001, Тринус Ф.П., 1989, Машковский М.Д., 1993, Метелица В.И., 1987, Кукес В.Г., 1987]. Среди антиагрегантов кислота ацетилсалициловая (АСК) - занимает одно из ведущих мест [Бокарев И.Н., 1998, Руда М.Я, 1999, Машковский М.Д., 1993, Hansson L., 1988, Negver М., 1987, Cairns J.A., 1985]. Накоплен опыт применения АСК с целью профилактики повторных инфарктов и тромбозов [Бокарев И.Н., 1998 Руда М.Я., 1999].

Все НПВП обладают единым известным на сегодняшний день механизмом действия: блокада ферментов циклооксигеназы и снижением синтеза простагландинов. Этот механизм обуславливает не только основные эффекты АСК, но и токсическое действие, которое является прямым продолжением ее фармакологического терапевтического эффекта (кровоточивость, поражение ЖКТ [Астахова A.B., 2000, Bruce R.A., 1980]. С позиций поиска новых антиагрегационных препаратов представляют несомненный интерес лекарственные формы и субстанции на основе АСК с целью уменьшения ее побочных эффектов. Кроме того, применение данного препарата экономически выгодно [Савицкая А.Б., 1998, Давыдов А.Б., 1989, Бичан H.A., 1993, Гмиро В.Е., 1997].

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Целью настоящего исследования явилось экспериментальное изучение биохимических механизмов и оценки эффективности антиагрегантной активности оригинальной субстанции, полученной на основе химической иммобилизации кислоты ацетилсалициловой на низкомолекулярном полимере медицинского назначения.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1.Изучить некоторые биохимические механизмы, лежащие в основе ан-тиагрегантного действия оригинальной субстанции - полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой, синтезированной на основе химической иммобилизации кислоты ацетилсалициловой в сополимер М-винилпирролидона с К-винил-у-аминомасляной кислотой при однократном введении.

2.Изучить состояние свертывающей системы крови при использовании вновь синтезированной субстанции.

3.Провести токсико-фармакологическое и структурно-функциональное исследование синтезированной субстанции и установить особенности влияния субстанции на структуру и функциональное состояние органов и систем.

4.Дать экспериментальную фармакологическую оценку перспективности использования синтезированной субстанции на модели ишемизиро-ванного сердца.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые проведено комплексное биохимическое, морфологическое, токсико-фармакологическое экспериментальное исследование оригинальной субстанции, синтезированной на основе химической иммобилизации кислоты ацетилсалициловой на низкомолекулярном полимере медицинского назначения. Показаны некоторые аспекты биохимических и других сторон механизма действия оригинальной субстанции. Установлена высокая терапевтическая активность и большая широта терапевтического индекса на различных моделях изучения эффективности субстанции, предполагающие возможность ее дальнейшего продвижения в качестве лекарственного препарата антиагрегационного действия.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Полученный материал предполагает его представление в Фармакологический Комитет МЗ РФ для дальнейшей разработки оригинального полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой в качестве нестероидного противовоспалительного средства, обладающего, по сравнению с кислотой ацетилсалициловой, пониженной гастро- и нефротоксич-ностью [приоритетная справка № 2000130527 от 5.12.2000]. Одновременно субстанция обладает антиагрегационными, антиангинальными свойствами, что позволяет использовать субстанцию для внутривенного введения на фоне экспериментальной ишемии.

Показано, что малые дозы АСК (1 мг/кг), обладают гепатопротекторным действием, которое выражается в том, что в гепатоцнтах стимулируются репаративные процессы, что позволяет рекомендовать АСК в дозе 1 мг/кг для профилактики токсических гепатитов [положительное решение на выдачу патента от 25.01.2001 по заявке № 2000128859 от 17.11.2000].

РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

По материалам исследования получены: патент на изобретение № 2000128859 от 17.11.2000 и приоритетная справка на изобретение № 2000130527 от 5.12.2000. Опубликовано 4 печатных работы в центральной печати. Основные положения работы используются в учебном процессе со студентами и курсантами факультета усовершенствования врачей на кафедрах фармакологии, фармакологии и фармдела ФУВ Воронежской медицинской академии им. H.H. Бурденко и на фармфакультете Воронежского государственного университета (6 актов внедрения). Выполнены 4 дипломные работы студентами фармацевтического факультета.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Материалы диссертации докладывались, обсуждались и одобрены на VII и VIII Российских национальных конгрессах "Человек и лекарство" (Москва, 2000-2001 г).

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ

Диссертация написана на русском языке, изложена на 183 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 7 разделов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 177 источника, из них 119 отечественных, 58 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 15 таблицами, 42 рисунками. Работа выполнена без соавторства, из научных трудов, опубликованных в соавторстве, включены экспериментальные данные, полученные лично автором.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1.Изучены некоторые биохимические аспекты, структурно-функциональные и фармако-токсикологические характеристики полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой, синтезированной на основе химической иммобилизации кислоты ацетилсалициловой на сополимер N-винилпирролидона с N-винил-у-аминомасляной кислотой.

2.Оригинальная субстанция обладает разносторонней фармакологической активностью и пониженной гастро- и нефротоксичностью в сравнении с препаратом АСК.

3.Предлагаемая оригинальная субстанция обладает антиагрегационны-ми свойствами и влияет на реологические свойства крови и при внутривенном введении водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой (ИАСК) оказывает антиангинальное действие.

4.Результаты эксперимента расширяют представления о фармакодина-мике НПВП и позволяют выявить потенциальный гепатопротектор - АСК в низких дозах.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В опытах исследована оригинальная субстанция - полимерный водорастворимый аналог кислоты ацетилсалициловой с целью экспериментального изучения некоторых биохимических механизмов и оценки эффективности антиагрегационной активности синтезированной субстанции. Специфическая активность синтезированной субстанции, обозначенной как ИАСК, в сравнении с кислотой ацетилсалициловой (АСК) была изучена согласно требованиям Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. В экспериментальной работе использовались 310 белых беспородных крыс-самцов с исходной массой 200 -250 г и 150 белых мышей обоего пола массой 20±2,0 г, выращенных в виварии ВГМА, прошедших карантин в течение 14 дней. Животные содержались в клетках по 5 - 6 особей в стандартных условиях вивария, доступ к пище и воде ad libitum. Эксперименты по оценке антиишемиче-ского действия субстанции ИАСК проведены на 18 наркотизированных (этаминал-натрия 40 мг/кг) кошках массой 3,4 — 4,2 кг. Реологическая активность оригинальной субстанции исследована на 18 кроликах-самцах породы «Шиншила», массой 4,0 - 4,5 кг. Животные содержались в стандартных условиях вивария на обычном пищевом рационе с естественным световым режимом. Эксперименты и эвтаназию животных проводили в соответствии с приказом МЗ СССР № 735 от 12.08.77.

Выполнение работы было проведено в три этапа.

На первом этапе исследовано влияние полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой на биохимию свертывающей системы крови в хроническом эксперименте, на морфологический состав, физико-химические показатели и биохимические показатели сыворотки крови. В качестве препаратов сравнения использовались АСК, поливинилпирроли-дон (ПВП), смесь АСК и ПВП в той же дозе в пересчете на АСК и в том же объеме и субстанции СПЛ N-винилпирролидона с Н-З-хлор-2-гидрокси-пропил-винил-у-аминомасляной кислотой (ФПВП), которая выполняет роль спейсера после химического присоединения лекарственного комплекса.

Для исследования свертывающей системы крови проводили запись коа-гулограмм.

Регистрация параметров коагулограмм осуществлялась прибором коа-гулограф самопишущий переносной типа Н-334, который широко используется в клинико-диагностических лабораториях медицинских учреждениях. В коагулографе, являющимся электроизмерительным прибором, используется механическое перекатывание пробы крови по ячейке.

Коагулограф измеряет электрическое сопротивление крови (цельной, оксалатной или цитратной), в качающейся ячейке и временные интервалы процесса свертывания крови.

Анализ периферической крови проводился по суткам (1. 10, 30). Кровь бралась из хвостовой вены, путем отсекания кончика хвоста.

Исследование периферической крови животных проводилось по общепринятой схеме. Клинический анализ крови включал в себя: морфологические показатели (Эр, L, лейкоцитарная формула) и физико-химические показатели (Hh, СОЭ) и биохимические показатели сыворотки крови.

Статистическую обработку полученных данных проводили на персональном компьютере Pentium II с помощью пакета программ "Статистика" с использованием t-критерия Стьюдента для оценки достоверности различий между сравниваемыми показателями.

На втором этапе проведено изучение гепатотропных свойств субстанции ИАСК на фоне модельного гепатита и в хроническом эксперименте.

Оценку гепатопротекторного действия препарата ИАСК проводили с помощью теста гексеналового сна у животных в сравнении с АСК в той же дозе. Характеристику гепатопротекторного действия препарата определяли по биохимическим и энзимологическим показателям: аспарагиновую ами-нотрансферазу (АСаТ), аланиновую аминотрансферазу (AJIaT) и бром-сульфалеиновую пробу (БСП).

Препараты ИАСК и АСК в дозе 1,0 мг/кг массы тела по АСК в виде раствора и дистиллированную воду вводили крысам однократно внутрижелу-дочно через зонд, гексенал - в дозе 70 мг/кг внутрибрюшинно, 50 % масляной раствор СС14 - подкожно, однократно, дробно в 2 участка тела (задние конечности) в дозе 5 мг/кг. Исследование с гексеналовым сном проводили в три этапа.

После окончания эксперимента животные контрольной и опытных групп умерщвлялись декапитацией под эфирным наркозом, затем проводилось патологоанатомическое вскрытие трупов и гистологическое исследование внутренних органов.

Для лабороторно-гистологических исследований взяты внутренние органы: желудок, печень, почки, сердце, легкие и селезенка и кусочки их фиксировались в 10 % растворе фармалина. После завершения фиксации тканей было проведено гистологическое исследование с окраской гематоксилин-эозином и по Ван-Гизону и Суданом III, IV.

На третьем этапе изучена агрегация и реологические свойства крови при однократном введении субстанции ИАСК в дозе 1,0 мг/кг по АСК.

Субстанцию ИАСК и препарат сравнения АСК вводили внутрижелу-дочно однократно в эквивалентной дозе 1,0 мг/кг веса по АСК. Кровь забирали из краевой ушной вены кролика самотеком в пластиковые пробирки до введения вещества и через 1, 3, 7 и 12 часов после введения изучаемых веществ. Исследовали влияние ИАСК и АСК на агрегацию тромбоцитов, агрегацию эритроцитов и вязкость крови.

Влияние веществ на агрегацию тромбоцитов исследовали на двухка-нальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов/счётчике (модель 220 LA) научно-произодственной фирмы "Биола" (г. Москва) в модификации Габбасова З.А и соавторов (1989). Метод основан на регистрации степени изменений спетопропускания плазмы, богатой тромбоцитами, при

добавлении к последней веществ, индуцирующих агрегацию, в условиях постоянного перемешивания, а также на анализе флюктуаций светопропус-кания, вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале. Исследования проводили на богатой тромбоцитами плазме, полученной по способу, описанному Люсовым В.А., Белоусовым Ю.Б. (1971). Для этого венозную кровь, получаемую из краевой ушной вены кроликов, стабилизировали 3,8% раствором цитрата натрия в соотношении 9:1. Цитратную кровь центрифугировали при 20(^ в течение 10 минут на центрифуге ОПН-3. Бедную тромбоцитами плазму получали центрифугированием обогащенной тромбоцитами плазмы при 650g в течение 15 минут. В ходе эксперимента в кювету агрегометра вносили 0,3 мл плазмы, инкубировали при температуре 37°С в течение 2 минут. После инкубации добавляли индуктор агрегации динатриевую соль аденозин-5-дифосфорной кислоты (АДФ) (фирмы «11еапа1», Венгрия) в конечной концентрации 5 мкМ. При графической регистрации процесса агрегации кровяных пластинок (в течение 5-ти минут) получали кривые, отражающие падение оптической плотности обогащенной тромбоцитами плазмы. Уровень агрегации оценивали по величине максимальной амплитуды агрегатограммы. Для кривых среднего размера был рассчитан индекс агрегации, равный квадрату степени агрегации минус 1.

Расчёт антиагрегационного действия изучаемых веществ проводили по формуле 1 и измеряли в Д%:

(А-В)Т00%/А (1), где

А - уровень агрегации тромбоцитов у кроликов до введения препаратов",

В - уровень агрегации тромбоцитов плазмы после введения препаратов.

При этом исходную агрегацию тромбоцитов принимали за 100%.

Влияние веществ на агрегацию эритроцитов исследовали на двухка-нальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов (модель 220 ЬА) научно-произодственной фирмы "Биола" (г. Москва) в модификации Габ-басова З.А. и соавт. (1989). Принцип метода заключается в фотометрической регистрации снижения оптической плотности форменных элементов крови вследствие их агрегации. Цитратную кровь центрифугировали для отделения эритроцитов на центрифуге ОПН-3 при 200g в течение 10 минут и трижды отмывали физиологическим раствором для более полного удаления белков плазмы. 0,01 мл осадка отмытых эритроцитов ресуспендирова-ли в 10 мл трис-НС! буфера. Исследования проводили на фоне перемешивания со скоростью 800 об/мин. В качестве индуктора агрегации использовали раствор трипсина кристаллического, растворённого в трис-НС1 буфере в концентрации 0,3 мг/мл. После добавления к 0,275 мл суспензии эритроцитов 0,025 мл индуктора агрегации регистрировали кривые светопропус-камия и относительной дисперсии флюктуации светопропускания. Уровень агрегации оценивали по величине максимальной амплитуды агрегатограм-

мы. Для кривых среднего размера был рассчитан индекс агрегации, равный квадрату степени агрегации минус 1.

Расчёт антиагрегационного действия изучаемых веществ проводили по

формуле 2 и оценивали в Д%:

(А-В)-100%/А (2), где

А - уровень агрегации эритроцитов у кроликов до введения препаратов;

В - уровень агрегации эритроцитов у кроликов после введения препаратов.

Вязкость крови определяли на анализаторе крови реологическом АКР-2. Для этого 0,85 мл цельной крови инкубировали при 37 °С в течение 15 минут, затем стакан с пробой и ротором помещали в стартер и исследовали вязкость крови при различных скоростях сдвига (200, 20 и 5 с"1), моделирующих различную интенсивность кровотока в сосудах. Низкие скорости сдвига характерны для микроциркуляторного русла. Вязкость крови при таких скоростях сдвига зависит в основном от степени агрегации эритроцитов. При больших скоростях сдвига 100-200 обратных секунд вязкостные характеристики крови зависят от способности эритроцитов изменять свою форму, т.е. деформабельности эритроцитов. Вязкость крови измеряли в сантипуазах (сШ), изменение вязкости оценивали в Д%, при этом исходные показатели вязкости крови принимали за 100%. Сравнивали изменение вязкости крови под влиянием АСК и ИАСК.

Влияние соединений на реологические свойства крови оценивалось по изменению параметров от исходных данных, с учетом средних отклонений показателей в контрольной группе животных.

Исследована жаропонижающая, противовоспалительная, анальгетиче-ская активность синтезированной субстанции в сравнении с препаратом АСК в эквивалентных дозах по АСК.

Жаропонижающую активность изучали на модели лихорадочной реакции, которую воспроизводили внутрибрюшинным введением пирогенала в сравнении с АСК в эквивалентной дозе на фоне максимального повышения температуры тела животного, вызванного внутрибрюшинным введением раствора пирогенала в дозе 500 МПД/кг. Динамику изменения температуры регистрировали каждый час в течение 5 часов. Температуру у животного измеряли в прямой кишке электрическим термометром (Электротермометр медицинский ТПЭМ-1).

Влияние ИАСК на экссудативную фазу воспаления изучалось на модели воспалительного отека лапки крысы, вызванного субплантарным введением 2% раствора лидокаина. Для регистрации величины отека лапки измеряли объем жидкости, вытесненной при погружении в нее пораженной конечности в сравнении с контрольной. Сосуд, в который погружалась лапка имел диаметр 15 мм (меньший диаметр может стать препятствием для погружения лапки с выраженным отеком).

Исследования анальгетической активности было проведено на моделях

влияния на болевую реакцию, вызванную химическими агентами, раздражением электрическим током и тест "сдавление хвоста". По всем видам фармакологической активности определена ED50 оригинальной субстанции полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой в сравнении с препаратом АСК. Количественная оценка экспериментального эффекта была проведена при помощи метода нахождения средней эффективной дозы. Установлена максимально возможная доза, не дающая эффекта ни в одном из случаев ED0 и минимальная возможная доза, дающая эффект во всех исследованиях EDioo,. Определена средняя эффективная доза -ED50. Широкое использование этого показателя в практике связано с рядом преимуществ, так как ED5o не испытывает на себе влияние сравнительно высокой или низкой реактивности отдельных объектов эксперимента и по сравнению с другими эффективными дозами поддается более точному определению, т.е. ошибка выборки при ней меньше, чем при любой другой эффективной дозе. Если ожидаемый эффект - смерть, то это средняя эффективная (летальная) доза LD50.

Острая токсичность субстанции ИАСК определена в опытах на 72 белых беспородных мышах обоего пола с массой тела 20,0±2,0 г по тесту "летальной дозы" (LD[6 50.34) и на 10 белых крысах самцах массой тела 200 - 250 г относительно препарата сравнения - АСК при пероральном введении. Число животных в группе при однородных показателях (вес животного) равнялось 6. Каждой группе животных вводили вещество в определенной дозе однократно. Наблюдения за животными проводились в течение 14 дней. Обработка результатов эксперимента проводилась с использованием метода пробит анализа по Прозоровскому В.Б. и по Van der Waerden.

Проведена оценка антиишемического действия при 5 и 30-ти минутной окклюзии нисходящей ветви левой коронарной артерии субстанции ИАСК при однократном введении в дозе 1,0 мг/кг по АСК.

Для выполнения эксперимента по оценке антиишемического действия субстанции ИАСК в сравнении с препаратом АСК в эквивалентных дозах проводилась следующая оперативная подготовка: после интубации и перевода животного на искусственное дыхание (аппарат "Вита") в четвертом межреберье делалась торакотомия, затем перикардотомия. Для измерения внутрижелудочкового давления через верхушку сердца в полость левого желудочка вводился катетер, соединенный с электроманометром. Ишемию моделировали путем окклюзии на 5 и 30 минут нисходящей ветви левой коронарной артерии (OHBJ1KA) в средней трети. После периода стабилизации (30 минут) и регистрации фоновых значений исследуемых параметров (15 минут) заранее подведенная под НВЛКА лигатура перетягивалась, что вызывало прекращение кровотока в области передней стенки левого желудочка, кровоснабжаемого НВЛКА. После заданного периода ишемии (5 или 30-ти минутного) лигатура на НВЛКА ослаблялась, что приводило к восстановлению кровотока в ишемизированной области (реперфузии). Ан-тиангинальную активность вещества оценивали по динамике сегмента ST

эпикардиальной электрограммы, регистрируемой с поверхности сердца (зона параишемии). Артериальное давление регистрировалось электроманометром в левой сонной артерии. С помощью компьютерного гемодина-мического анализатора на базе программы BEAT регистрировались следующие показатели кардио- и гемодинамики: систолическое и диастоличе-ское артериальное давление (АД), максимальное левожелудочковое давление (ЛЖД) и его первая производная, частота сердечных сокращений (ЧСС), конечно-диастолическое давление (КДД), время изгнания. Вещества вводились в наружную яремную вену за 20 минут до окклюзии НВЛКА в дозе 1,0 мг/кг в расчете по АСК.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Опыты по изучению влияния ИАСК в дозе 2,3 мг/кг в сутки, АСК в дозе 1,0 мг/кг в сутки, ПВП в дозе 0,95 мг/кг в сутки, смесь АСК в дозе 1 мг/кг с ПВП в дозе 0,95 мг/кг в сутки и ФПВП в дозе 1,3 мг/кг в сутки на свертывающую систему крови и биохимические показатели сыворотки крови проводили на 108 белых крысах самцах массой тела 200 - 250 г. Результаты оценивались на 30 день эксперимента.

Полученные экспериментальные данные представлены в таблицах 1, 2,

3.

Таблица 1

Влияние АСК, ИАСК, ПВП, ФПВП, смеси ПВП с АСК на показатели свертывающей системы крови крыс при пероральном введении в хроническом эксперименте (п=18, М±ш)

Препарат и субстанция Индекс коагуляции (Ик) Индекс фибринолиза (Иф)

Контроль 0,32±0.06 0,01 ±0.01

АСК 1,0 мг/кг 0,25±0,05* 0,01±0.01

ИАСК 2,3 мг/кг 0,15±0.04* 0,02±0.02*

ПВП 0,95 мг/кг 0,05±0.01 * 0,01 ±0.01

ФПВП 1,3 мг/кг 0,13±0.02* 0,01±0.01

Смесь ПВП 0,95 мг/кг и АСК 1,0 мг/кг 0,21 ±0.05* 0,04±0.01*

* - различия статистических достоверны при р<0,01 в сравнении с контрольной группой

Таблица 2

Влияние АСК, ИАСК, ПВП, ФПВП, смеси ПВП с АСК на биохимические показатели сыворотки крови крыс при пероральном введении в хроническом эксперименте (п=18, М±ш)

Препарат и МСМ МДА, SH-группы,

субстанция нмоль/мл мг%

Контроль 0,56±0,02 1,45±0,86 115,90±6,40

АСК 1,0 мг/кг 0,42±0,03* 3,85±8,40* 120,30±3,30

ИАСК 2,3 мг/кг 0,48±0,01 3,58±0,72* 109,50±7,00

ПВП 0,95 мг/кг 0,48±0,01 3,74±0,65* 110,80±5,20

ФПВП 1,3 мг/кг 0,52±0,02 15,06±2,30* 77,20±2,60*

Смесь ПВП 0,95 мг/кг и 0,53±0,02 16,56±4,60* 69,85±3,60*

АСК 1,0 мг/кг

* - различия статистических достоверны при р<0,01 в сравнении с контрольной группой

Таблица 3

Влияние АСК, ИАСК, ПВП, ФПВП, смеси ПВП с АСК на показатели морфологического состава крови крыс при пероральном введении в хроническом эксперименте (n=18, М±т)

Препарат и субстанция Hh, г/л Тромбоциты, 109 Эритроциты, 1012 Лейкоциты, 109

Контроль 144,0±3.77 568±0,20 5,75±0,02 10,5±0,18

АСК 1,0 мг/кг 137,6±2.30 477±0,22 6,42±0,18 13,4±0,50*

ИАСК 2,3 мг/кг 114,1 ±2.79* 391±0,46* 5,01±0,68 11,8±0,11

ПВП 0,95 мг/кг П7,0±3,00* 383±0.23* 5,06±0.74 12,5±0,17

ФПВП 1,3 мг/кг 119,0±2.40* 440±1,04* 5,36±0.19 10,8i0,40

Смесь ПВП 0,95 мг/кг и АСК 1,0мг/кг 101.0i2.50* 490±0.25 5,33i0.03 9.3±0.50

* - различия статистически достоверны при р<0,01 в сравнении с контрольной группой

Анализ коагулограмм белых крыс, получавших пероралъно препараты АСК и ИАСК показал, что на 30-е сутки эксперимента происходило изменение индекса коагуляции (ИД увеличение времени свертывания крови при приеме АСК на 21,8 % и при приеме ИАСК - на 53,1 % (р<0,01).

Смесь препаратов АСК с ПВП к 30 дню эксперимента вызывала достоверное (р<0,01) уменьшение Ик, по сравнению с контрольной группой животных на 35 %, препарат ФПВП - на 60 %, препарат ПВП - на 84 %. Такой показатель, как Иф, к 30 суткам, соответственно, изменялся для смеси АСК с ПВП - на 400 %, препарат ПВП и ФПВП, так же как и АСК не изменяли значения спонтанного фибринолиза, но ИАСК вызывал повышение Иф в 2 раза, что говорит о фибринолитической активности полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой.

Снижение Ик свидетельствует об угнетении процессов свертывания крови, в то время как сохранение на прежнем уровне Иф свидетельствует об устойчивости процесса спонтанного фибринолиза при введении препаратов АСК, ПВП и ФПВП. Комбинация препаратов АСК с ПВП столь значительно повышает Иф, что может служить фактором риска геморрагических явлений.

Таким образом, исследуемое вещество ИАСК в эквивалентных дозах по АСК в сравнении с АСК в 2 раза увеличивает время свертывания крови, что свидетельствует о влиянии ИАСК на свертывающую систему крови, но сохраняет на прежнем уровне спонтанный фибринолиз, что снижает риск геморрагических осложнений, который связан с применением кислоты ацетилсалициловой в профилактике сердечно-сосудистых заболеваний.

Анализ биохимических показателей сыворотки крови крыс показал, что введение АСК и ИАСК в эквивалентной дозе по АСК вызывает сравнимое повышение уровня МДА в сыворотке крови. Уровень БН-групп коррелирует с количеством белка альбумина в сыворотке крови и сравним с данными контрольных животных. Снижение антиоксидантной активности при воспалительном процессе связывают со снижением концентрации сывороточных альбуминов. Сохранение уровня концентрации БН-групп на уровне контроля при введении ИАСК, возможно, связано с тем, что матрица СПЛ способна образовывать комплексы с белками сыворотки крови.

Показатели молекул средней массы (МСМ) к 30 суткам эксперимента достоверно изменялись (при р<0,01) только в группе животных, получавших АСК в дозе 1,0 мг/кг.

Анализ периферической крови к 30 суткам эксперимента показал, что ИАСК достоверно снижает уровень гемоглобина на 21 %, ПВП - на 19 %, ФПВП - на 18 %, смесь АСК с ПВП - на 31 %. Количество тромбошлгов достоверно снижается в группе животных, получавших ИАСК на 31 %, в группе, получавших ПВП - на 32 %, ФПВП - 23 %. В группах животных, получавших АСК и смесь ПВП с АСК. изменения были недостоверны. В группе животных, получавших препарат АСК, число лейкоцитов достоверно повышалось на 28 %, в других опытных группах изменения были

недостоверны.

Применение АСК и ИАСК вызывает снижение адгезии и агрегации тромбоцитов, но статистически достоверного снижения числа тромбоцитов к 30 суткам эксперимента не происходит.

Исследование гепатопротекторной активности ИАСК проводилось в сравнении с АСК с помощью теста гексеналового сна. Результаты оценивались на 14 день эксперимента по гистологическим, гистоферментохимиче-ским и патоморфологическим показателям.

Результаты эксперимента приведены в таблицах 4, 5, 6.

Таблица 4

Изменение продолжительности гексеналового сна, биохимических показателей в сыворотке крови крыс при однократном введении

АСК и ИАСК

Группа наблюдений, п=6 Показатели

Продолжительность сна (мин) АЛаТ, мккат/л АСаТ, мккат/л БСП, мг%

Контроль 11,8±0,36 0,44±0,09 0,62±0,05 0,0019±4,ЗТ0'5

АСК в дозе 1,0 мг/кг 10,8±0,50 0,43±0,01 0,54±0,03 0,0019±2,810"5

ИАСК в дозе 2,3 мг/кг 10,8±0,30 0,43±0,03 0,62±0,02 0,0018±2,7 10"5

*- различия статистически недостоверны при р>0,05 в сравнении с контрольной группой

Таблица 5

Изменение продолжительности гексеналового сна и основных биохимических показателей в сыворотке крови крыс в хроническом эксперименте (введение АСК и ИАСК) при внутрибрюшинном

введении 70 мг/кг гексенала

Группа наблюдений, п=6 Показатели

Продолжительность сна (мин) АЛаТ, мккат/л АСаТ, мккат/л БСП, мг%

Контроль 22,6±0,44 0,57±0,03 0,69±0.04 0.0014±1.9 104'

АСК в дозе 1,0 мг/кг 20,6±0.40 0.42±0,01* 0.51 ±0.01* 0.0006±1.5 10'6*

ИАСК в дозе 2,3 мг/кг 20,6±0.70 0,54±0,04 0,62±О.04 0.0013±5.8'10"~

* - различия статистически достоверны при р<0,001 в сравнении

с контрольной группой

Таблица 6

Изменение продолжительности гексеналового сна и основных биохимических показателей в сыворотке крови крыс в хроническом эксперименте на фоне модельного гепатита (введение АСК и ИАСК) при внутрибрюшинном введении 70,0 мг/кг гексенала

Группа наблюдений п=6 Показатели

Продолжительность сна (мин) АЛаТ, мккат/л АСаТ, мккат/л БСП, мг%

Контроль 43,0±2,20 0,91±0,03 0,63±0,06 0,0012±2,4-10"6

АСК в дозе 1,0 мг/кг 41,5±0,80 0,71±0,04* 0,55±0,02* 0,0008±2,0-10"6*

ИАСК в дозе 2,3 мг/кг 41,5±0,78 0,82±0,06 0,62±0,05 0,0002±3.0'10"6*

* - различия статистически достоверны при р<0,001 в сравнении

с контрольной группой

При пероральном однократном введении АСК в дозе 1,0 мг/кг продолжительность гексеналового сна, активность ферментов печени и БСП по отношению к контрольной группе не менялась (р>0,05), что свидетельствует об отсутствии влияния АСК на антитоксическую функцию печени у ин-тактных животных. Однако, изучавшийся препарат оказывал гепатозащит-ный эффект в хроническом эксперименте и на фоне дистрофии печени, развившейся в следствие введения СС14. Об этом свидетельствуют изменения основных биохимических показателей в сыворотке крови, продолжительность гексеналового сна и результаты патоморфологического исследования печени.

При токсическом повреждении печени повышается ПОЛ в мембранах. Это отражается и на синтезе простагландинов, так как у этих процессов один субстрат - арахидоновая кислота. ПОЛ способствует снижению содержанию простагландинов, ИАСК, по-видимому, угнетает фермент про-стагландинсинтетазу как аналог АСК. что объясняет отсутствие гепатопро-текторной активности у синтезируемой субстанции. Простагландины стимулируют биохимические процессы в гепатоцитах, следовательно, можно предположить, что оригинальная субстанция ИАСК является более сильным ингибитором синтеза простагландинов в сравнении с препаратом АСК в дозе 1,0 мг/кг. который в этой дозе проявляет гепатопротекторные свойства в хроническом эксперименте и на фоне модельного гепатита.

При анализе микропрепаратов печени крыс получавших АСК в дозе 1,0 мг/кг и ИАСК в эквивалентной дозе по АСК однократно и в той же дозе в хроническом эксперименте патологических изменений печени не обнаружено.

В печени животных с модельным гепатитом обнаружены однотипные изменения, выраженный центролобулярный гепатит, наиболее яркими признаками которого являлись гидропическая и баллонная дистрофия гепато-цитов вокруг центральных вен с лимфомакрофагальной инфильтрацией, а также жировая дистрофия гепатоцитов, которая нарастает от периферии к центру печеночных долек. Особенностью архитектоники печени является образование гепатоцитами ацинусов, которые разделены на три функциональные зоны. Клетки третьей зоны активно участвуют в метаболизме и выведении лекарств, следовательно, гепатотоксичность препаратов проявляется в большей степени у гепатоцитов этой зоны. Кроме того, в печени опытных животных, получавших АСК в дозе 1,0 мг/кг на фоне модельного гепатита, обнаружены многочисленные митозы гепатоцитов, что свидетельствует о стимуляции АСК в низких дозах репаративных процессов, которые проявляются на фоне деструктивных.

В результате воздействия АСК в низких дозах на фоне патогенеза появилась возможность регуляции смены периодов покоя и пролиферации в жизненном цикле клеток. Эти эффекты наряду с ингибированием циклоок-сигеназ связывают со способностью салицилатов ингибировать киназу транскрипционного фактора c-jun, от которого зависит общая транскрипционная активность клеток и скорость их прохождения по клеточному циклу.

После окончания эксперимента животные контрольной и опытных групп умерщвлялись декапитацией под эфирным наркозом, затем проводилось патологоанатомическое вскрытие трупов и гистологическое исследование внутренних органов.

Сравнительные морфологические исследования гистологических препаратов у животных, получавших АСК, ИАСК, смеси препаратов АСК с ПВП, препарата ПВП и ФПВП на 30 сутки эксперимента показали, что микропрепараты желудков опытных крыс, получавших АСК по сравнению с желудками интактных животных, имеют несколько увеличенную зернистость главных клеток и в области тела и шейки зернистость уменьшена и клетки крупнее.

У животных, которые получали ИАСК в дозе 1,0 мг/кг в расчете на АСК в течение 30 дней эпителий желудка не отличался от эпителия желудков контрольных животных. При этом особое внимание обращалось на содержание гемолизированной и свежей крови в желудке, набухание и полнокровие слизистой оболочки, кровоизлияния в нее. выделение слизи.

У животных, получавших смесь ПВП с АСК, в желудках обнаружены признаки раздражения слизистой оболочки, в частности видны следы усиленной секреции слизи, особенно в области шейки фундальных желез и

1 к

отложение слизи на поверхности слизистой оболочки желудка. Местами наблюдается десквамация покровного эпителия.

Таким образом, ИАСК в дозе 1,0 мг/кг в расчете на АСК не вызывает повреждающего действия на слизистую оболочку желудка, тогда как АСК и комбинация ПВП и АСК вызывают раздражение слизистой желудка и усиливают секрецию фундальных желез.

У животных обеих опытных групп, получавших АСК и ИАСК, отмечено расширение полости капсул Шумлянского-Боумена в почечных тельцах, более выраженная васкуляризация миокарда и небольшое увеличение количества лимфоидной ткани в селезенке. Все эти изменения носят физиологический характер и могут быть расценены как признаки некоторого усиления функции исследованных органов.

В почках животных, получавших смесь ПВП с АСК, выражена легкая степень гидропического поражения эпителия канальцев, проявляющихся набуханием клеток, сглаживание границ, смещением ядер, иногда появляются вакуоли в цитоплазме, в некоторых канальцах видны белковые массы, что связано с нефротоксичностью смеси. В селезенках увеличено количество лимфоидной ткани, что указывает на антигенное действие ПВП.

Адекватный характер кровообращения и микроциркуляции в организме находится в прямой зависимости от ряда факторов, взаимно влияющих друг на друга. К этим факторам относятся реологические свойства крови. Их значение велико: практически каждое заболевание сопровождается нарушением реологических свойств крови. Гемореологические изменения вызывают нарушения кровообращения на уровне микроциркуляции, что, в свою очередь, отягощает течение любого патологического процесса.

На реологические свойства крови влияют: вязкость крови, гематокрит, способность к агрегации эритроцитов и тромбоцитов, деформируемость эритроцитов, содержание фибриногена и состояние свёртывающей системы крови. Вязкость крови является наиболее информативным показателем, который отражает суммарное состояние реологических свойств крови. Вязкость крови вычисляется как отношение напряжения сдвига к скорости сдвига, действующей на кровь. Вследствие различия сдвиговых сил, действующих на кровь в различных участках сосудистой системы, то и вязкость крови также значительно изменяется. Повышение процессов агрегации эритроцитов и тромбоцитов ведет к нарушению функционирования вену-лярных отделов микроциркуляторного русла (A.M. Чернух и др., 1975). Действие препаратов с гемореологической активностью и улучшающих микроциркуляцию, должно быть в том числе направлено и на снижение процессов агрегации эритроцитов и тромбоцитов.

Влияние веществ на агрегацию тромбоцитов.

Под действием АСК в дозе 1,0 мг/кг достоверное снижение агрегации тромбоцитов (р<(),05) отмечалось уже через 1 час после введения, процент ингибировання составил 40,56%. затем антиагрегационная активность кислоты ацетилсалициловой до 7 часа исследования находилась практически

на стационарном уровне, а к 12 часу достигла максимального значения 66,64% (р<0,05).

Влияние субстанции ИАСК в дозе 1,0 мг/кг по АСК на агрегацию тромбоцитов также наблюдалось с первого часа введения, но являлось недостоверным и составило всего 2,27%, затем происходило плавное увеличение эффекта и к 7 часу исследования отличия от контроля стали достоверными (34,84%). Максимальный эффект наблюдался на 12 час исследования на 12,74% превышая данный показатель в группе кроликов, получавших кислоту ацетилсалициловую.

Таким образом, для субстанции ИАСК наблюдается более плавное развитие эффекта, которое к 12 часу превышает по ингибирующему влиянию на агрегационную функцию тромбоцитов препарат сравнения АСК.

Влияние субстанции ИАСК и препарата сравнения АСК в эквивалентных дозах по АСК (1,0 мг/кг) на агрегацию эритроцитов.

Под действием препарата АСК в дозе 1,0 мг/кг снижение агрегации эритроцитов отмечалось уже через 1 час после введения, процент ингиби-рования агрегации эритроцитов составил 7,8 %, хотя отличия от контрольной группы являлись недостоверными, затем антиагрегационная активность кислоты ацетилсалициловой до 7 часа эксперимента постепенно увеличивалась, а к 12 часу эксперимента достигла максимального значения и составляла в сравнении с контрольными животными 40,3 %, различия статистически достоверны (р<0,05).

Влияние субстанции ИАСК в дозе 1,0 мг/кг по АСК на агрегацию эритроцитов также наблюдалось с первого часа введения, но являлось недостоверным и составило 8,67%, затем происходило плавное увеличение эффекта и к 12 часу эксперимента отличия от контроля стали достоверными (35,1%). Максимальный эффект наблюдаемый на 12 час эксперимента на 5,2% был ниже данного показателя в группе кроликов, получавших кислоту ацетилсалициловую.

Таким образом, субстанция ИАСК по влиянию на агрегационную функцию эритроцитов не уступает АСК в эквивалентной дозе.

Влияние ИАСК и АСК в дозе 1,0 мг/кг по АСК на вязкость крови.

Вязкость крови при скорости сдвига 200 с*1

На фоне введения как АСК, так и ИАСК в первые часы эксперимента вязкость крови практически не изменялась (наблюдались недостоверные изменения вязкости крови на 3,4% в группе кроликов, получавших АСК и на 9% - ИАСК).

К 7 часу после введения АСК отличия от контрольной группы сохранялись на прежнем уровне, являясь недостоверными. В группе кроликов, получавших субстанцию ИАСК к 7 часу эффект достиг максимального значения 16,5%. Отличия статистически достоверны (р<0,05).

Вязкость крови при скорости сдвига 20 с"1

После введения как АСК, так и ИАСК уже в первые часы эксперимента наблюдались недостоверные изменения вязкости крови на 13,34% в группе

кроликов, получавших АСК и на 15,32% - ИАСК.

К 7 часу после введения АСК отличия от контрольной группы сохранялись на прежнем уровне, являясь недостоверными. В группе кроликов, получавших ИАСК к 7 часу эффект достиг максимального значения 21,75%. Отличия статистически достоверны (р<0,05).

Вязкость крови при скорости сдвига 5 с'1

После введения препарата сравнения АСК в дозе 1,0 мг/кг и субстанции ИАСК в дозе 1,0 мг/кг по АСК уже в первые часы исследования наблюдались изменения вязкости крови на 15 % в группе кроликов, получавших препарат АСК и на 10 % получавших субстанцию ИАСК в эквивалентной дозе. Следует отметить более выраженное влияние на вязкость крови при данной скорости сдвига у препарата АСК, что свидетельствует о более раннем развитии эффекта.

К 7 часу после введения препарата АСК в дозе 1,0 мг/кг отличия от контрольной группы достигли максимального значения - 20,3 %. В группе кроликов, получавших субстанцию ИАСК эффект достиг максимального значения к 12 часу 20,1 %. Отличия статистически достоверны (р<0,05).

На основании полученных результатов исследования, можно сделать вывод, что субстанция ИАСК в дозе 1,0 мг/кг по АСК выраженно подавляет агрегацию тромбоцитов и эритроцитов, но в большей мере влияя на тромбоцитарное звено гемостаза. При этом эффект при введении субстанции ИАСК развивался несколько позднее, хотя был выражен так же как и у препарата сравнения АСК. Субстанция ИАСК на 17 - 20 % снижает вязкость крови кроликов при высоких скоростях сдвига, при этом эффект более выражен, чем у АСК в той же дозе.

В соответствии с целью и задачами нашего исследования первоначальное изучение свойств нового полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой было направлено на выявление спектра свойств характерных для нестероидных противовоспалительных препаратов.

Исследования жаропонижающей активности проводились на 42 белых беспородных крысах-самцах массой тела 200-250 г.

Температура тела в контрольной группе животных при внутрибрюшин-ном введении пирогенала повышалась в пределах 1 - 1,2°С и была повышена в течение 5 часов. Максимум повышения температуры наблюдался ко 2-3 часу эксперимента после введения пирогенала.

При исследовании жаропонижающей активности ИАСК в сравнении с препаратом АСК (ФС 422688-94 Yiliri Pharmaceutical (Китай)) выбор дозы обусловлен литературными данными. Для кислоты ацетилсалициловой значения ED50 по жаропонижающей активности лежат в диапазоне 54,0 -118,0 мг/кг веса при пероральном введении крысам. Экспериментально нами установлено ED50 для АСК 85.0 мг/кг.

Исследуемая субстанция ИАСК и кислота ацетилсалициловая обладают сопоставимой жаропонижающей активностью, так как ED5n АСК и ED50 ИАСК лежат в одном диапазоне до! (54,0 - 118.0 мг/кг). Для ИАСК ED5<>

составляет 90,0±38,9 мг/кг.

Наибольшее распространение для скрининга противовоспалительных средств получила модель воспалительного отека лапки крысы, вызванного субплантарным введением флогогенных агентов.

Опыты были проведены на 42 белых беспородных крысах-самцах массой тела 200 - 250 г. При этом для АСК и ИАСК были взяты дозы, которые вызывают в эксперименте, по литературным данным , выраженное уменьшение воспалительной реакции и соответствует ED50 для крыс при перо-ральном введении в диапазоне 78,0 - 104,0 мг/кг и в диапазоне 75,0 - 125,0 мг/кг веса. ED50 для ИАСК - 60,0±35,4 мг/кг, ED50 для АСК - 86,0 мг/кг, установленные нами экспериментально.

Анализ экспериментальных данных показал, что субплантарное введение 2 % лидокаина вызывает по отношению к контрольным животным, выраженное развитие отека, которое сопровождается увеличением объема задних лап крыс через 1 час на 51 %, через 2 часа - на 65,3 %, через 4 часа - на 19,2 %. Введение АСК в дозе 50,0 мг/кг массы тела в желудок крыс на фоне 2 % раствора лидокаина сопровождалось угнетением воспаления в среднем через 1 час на 30,2 %, через 2 часа - на 45,0 % и через 4 часа объем лапки возвращался к норме. Введение АСК в дозе 100,0 мг/кг массы тела в желудок крыс на фоне 2 % раствора лидокаина сопровождалось угнетением воспаления в среднем через 1 час на 63,2 %, через 2 часа - на 65,5 % и через 4 часа - на 43,7 %. Введение АСК в дозе 200,0 мг/кг массы тела в желудок крыс на фоне 2 % раствора лидокаина сопровождалось угнетением воспаления в среднем через 1 час на 50,5 %, через 2 часа - на 60,5 % и через 4 часа - на 45,3%.

Введение ИАСК в дозе 50,0 мг/кг на фоне субплантарного введения лидокаина сопровождалось через час угнетением воспаления на 1,2 %, через 2 часа на 45,9 % и через четыре часа на 28,0 %. Введение ИАСК в дозе 100,0 мг/кг на фоне субплантарного введения 2 % раствора лидокаина сопровождалось через час угнетением воспаления на 7,6% через 2 часа на 93,6 % и через четыре часа на 67,9 %. Введение ИАСК в дозе 200,0 мг/кг на фоне субплантарного введения 2 % раствора лидокаина сопровождалось через час угнетением воспаления на 20,0 % через 2 часа на 95,0 % и через четыре часа на 80,5 %.

Таким образом, в условиях эксперимента субстанция ИАСК оказывает более сильное и продолжительное противовоспалительное действие, чем препарат сравнения АСК в той же дозе на массу тела животного.

Наряду с противовоспалительным действием ИАСК исследовалась на анальгетическую активность в сравнении с АСК в эквивалентных дозах.

Эксперименты были поставлены на 42 мышах-самцах массой 20,0±2,0 г.

В результате проведенных исследований установлено, что внутрибрю-шинное введение контрольным мышам 3 % раствора уксусной кислоты из расчета 300,0 мг/кг вызывает в течение 20 мин возникновение экстензор-ных приступов судорог в количестве 40,0±3,6, что совпадает с данными

литературы.

Предварительное внутрижелудочное введение АСК в дозе 50,0 мг/кг массы тела на фоне внутрибрюшинного введения 3 % раствора уксусной кислоты сопровождалось возникновением 35,2±4,2 приступов экстензор-ных судорог в течение 20 мин, что по отношению к числу экстензорных судорог в контрольной группе составляет 88,0%. Предварительное внутрижелудочное введение АСК в дозе 100,0 мг/кг массы тела на фоне внутрибрюшинного введения 3 % раствора уксусной кислоты сопровождалось возникновением 19,5±4,4 приступов экстензорных судорог в течение 20 мин, что по отношению к числу экстензорных судорог в контрольной группе составляет 48,8 %. Предварительное внутрижелудочное введение АСК в дозе 200 мг/кг массы тела на фоне внутрибрюшинного введения 3 % раствора уксусной кислоты сопровождалось возникновением 14,0±2,1 приступов экстензорных судорог в течение 20 мин, что составляет по отношению к числу экстензорных судорог в контрольной группе 35,0 %.

Внутрижелудочное введение ИАСК в дозе 50,0 мг/кг (по АСК) за 15 мин до введения уксусной кислоты сопровождалось возникновением 18,6±3,3 экстензорных судорог, что составляет по отношению к контрольной группе 46,5 %, а по отношению к АСК - 52,8 %. Приведенные данные достоверны (р<0,001). Введение ИАСК в дозе 100,0 мг/кг (по АСК) за 15 мин до введения 3 % раствора уксусной кислоты сопровождалось возникновением 8,0±3,2 экстензорных судорог, что составляет по отношению к контрольной группе 20,0 %, а по отношению к АСК - 41,0 %. Приведенные данные достоверны (р<0,001). Введение ИАСК в дозе 200,0 мг/кг (по АСК) за 15 мин до введения уксусной кислоты сопровождалось возникновением 5,2±0,6 экстензорных судорог, что составляет по отношению к контрольной группе 13,0 %, а по отношению к АСК 15,0 %.

Значения ED50 для кислоты ацетилсалициловой по методу "уксусные корчи" лежат в диапазоне 119,0 - 202,0 мг/кг.

Установленные экспериментально значения ED50 по тесту "уксусные корчи" для ИАСК составляет 45,0±25,6 мг/кг, ED5o по тесту "уксусные корчи" для препарата сравнения АСК составляет 140,0 мг/кг. Полученные в эксперименте данные, свидетельствуют о том, что по анальгетической активности ИАСК при внутрижелудочном введении превосходит АСК примерно в два раза.

Влияние на болевую реакцию, вызванную раздражением электрическим током исследовали на 36 белых мышах-самцах массой 20,0±2,0 г.

Увеличение нормы болевой устойчивости для препарата АСК в дозе 50,0 мг/кг составляло 3,0 % через 2 часа после введения и для субстанции ИАСК - 68,4 % (р<0,01), для АСК в дозе 100,0 мг/кг составляло 102,7 % через 2 часа после введения и для ИАСК - 139,0 % (р<0,01), для АСК в дозе 200,0 мг/кг составляло 103,1 % через 2 часа после введения и для ИАСК - 167.5 % (р<0,01).

Значения ED для кислоты ацетилсалициловой по методу рзздрегженис

электрическим током" лежат в диапазоне 89,0 - 175,0 мг/кг. Установленные в нашем эксперименте значения ED50 для ИАСК составляют 30,0±10,0 мг/кг, ED50 для АСК - 90,0 мг/кг

Для оценки аналитического эффекта использовался тест "сдавления хвоста", который широко применяется как скриннинговый метод первичного исследования обезболивающих средств. Отсутствие защитной реакции на сдавление хвоста свидетельствует об анальгетическом действии препарата. Выявление обезболивающей активности оригинальной субстанции полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой уточняет фармакодинамику синтезированной субстанции.

Тест "сдавления хвоста" проводился на 36 беспородных белых крысах-самцах массой 200,0 - 250,0 г.

Препараты вводили перорально за 30 мин до эксперимента с помощью металлического зонда.

В результате сравнительного исследования анальгетической активности ИАСК и АСК в эквивалентных дозах (тест "сдавления хвоста") установлено, что через 30 минут после перорального введения ИАСК в дозе 100,0 мг/кг в расчете на АСК превосходит по этому виду активность АСК на 22 % (р<0,01), при введении ИАСК в дозе 200,0 мг/кг в расчете на АСК превосходит АСК в той же дозе на 45,7 %.

По литературными данными значения ED50 для кислоты ацетилсалициловой по методу "сдавление хвоста" лежат в диапазоне 125,0 (87,0 - 175,0) мг/кг. Установленные нами экспериментально значения для ИАСК EDÍ0 составляет 110,0±19,8 мг/кг, для АСК ED50 составляет 155,0 мг/кг

Обобщая результаты, проведенных исследований, можно придти к заключению о том, что исследуемая субстанция ИАСК и препарат сравнения АСК в эквивалентных дозах по АСК обладают одинаковой жаропонижающей активностью.

Оценка острой токсичности выполнена в опытах на 72 белых беспородных мышах и на 10 белых крысах-самцах по тесту "летальной дозы" (LDI6- 50,84) относительно препарата сравнения - АСК. Число животных в группе при однородных показателях (вес животного) равнялось 6. Каждой группе животных вводили вещество в определенной дозе.

Водный раствор ИАСК вводился через рот с помощью металлического зонда. Срок наблюдения за животными 14 суток. Обработка результатов эксперимента по определению острой токсичности (LD50) проводилось с использованием метода пробит-анализа по Прозоровскому В.Б. и по Van der Waerden.

Таким образом, из экспериментальных данных следует, что острая токсичность АСК по показателю LD50 для мышей составляет 1390,0±119,8 мг/кг, ИАСК по показателю LDj(1 составляет 680,0± 125,0 мг/кг, и для крыс LD50 - 780.0± 144,0 мг/кг, это относит субстанцию к малотоксичным соединениям по ныне действующей классификации.

Широта фармакологического действия (LD50/ED50) определена on тесту

"уксусные корчи", графически вычисленна на основании экспериментальных данных и составляет 15,1, что больше в 2 раза широты фармакологического действия (8,9) препарата сравнения АСК.

Безопасность лекарственного препарата характеризует индекс Брокка-Шнейдера (Ь0ю/Е09о), который является качественным и количественным критерием действия лекарственного препарата, который соответствует диапазону доз между ЬОю - 400,0 мг/кг и ЕО90- 150,0 мг/кг. В этом диапазоне действующих лечебных доз можно пренебречь токсическими эффектами.

В сравнении с препаратом АСК субстанция ИАСК токсичнее, но широта терапевтического действия больше в 2 раза, т.е. диапазон лечебных доз, при которых можно пренебречь токсическими эффектами, делает эту субстанцию более безопасной, чем препарат сравнения АСК.

На основании формулы:

жнвотиого/^Озо человека ~ ^

, где К = 3,1 для белых мышей

токсичность полимерного водорастворимого аналога кислоты

ацетилсалициловой (ИАСК) в перерасчете на 1,0 кг массы человека равняется 219,3 мг/кг.

ВЫВОДЫ

1 .Снтезированный полимерный водорастворимый аналог кислоты ацетилсалициловой (субстанция ИАСК) по влиянию на свертывающую систему крови ИАСК (в дозе 1,0 мг/кг по АСК) превосходит препарат сравнения АСК, так как вызывает увеличение Ик на 53,1 %, а показатель Иф увеличивался в 2 раза по сравнению с кислотой ацетилсалициловой, что свидетельствует о фибринолитической активности полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой.

2.Субстанция ИАСК в дозе 1,0 мг/кг (по АСК) проявляла выраженную антиагрегационную активность, действуя преимущественно на тромбоци-тарное звено гемостаза. Эффект при введении ИАСК развивался несколько позднее, чем у препарата АСК, при этом он более выражен на 17-20 %, чем у АСК в той же дозе. Наибольший эффект влияния субстанции ИАСК на вязкость крови кроликов наблюдался при высоких скоростях сдвига.

3.Сравнительная оценка гепатопротекторного действия субстанции ИАСК и препарата АСК в эквивалентных дозах на фоне патохимического повреждения печени показала, что ИАСК не влияет на гепатотропную функцию печени, тогда как АСК в дозе 1,0 мг/кг в сутки оказывает отчетливый гепатозащитный эффект, который выражается в уменьшении дистрофических явлений гепатоцитов, увеличении числа митозов, нормализации уровня ферментов в сыворотке крови. Положительные результаты экспериментальных исследований лают основание рекомендовать низкие лозы АСК, как потенциальный гепатопротектор, который, возможно, можно использовать для комплексного лечения токсических поражений печени.

4.Анализ микропрепаратов внутренних органов животных, получавших ИАСК в дозе 2,3 мг/кг (эквивалентно 1,0 мг/кг по АСК), показал, что этот препарат обладает пониженной гастро- и нефротоксичностью. Все изменения во внутренних органах носят физиологический характер и могут быть связаны с некоторым усилением функции исследуемых органов.

5.Острая токсичность оригинальной субстанции ИАСК сравнима с препаратом АСК и для белых мышей составляет по показателю LDJ0 680,0±125,0 мг/кг и относится к малотоксичным соединениям. Возможная расчетная летальная доза для человека равняется 219,3 мг/кг.

6. Субстанция ИАСК обладает: жаропонижающей активностью сопоставимой с препаратом сравнения АСК в эквивалентных дозах; оказывает более сильное и продолжительное противовоспалительное действие, чем препарат сравнения АСК в той же дозе на массу тела животного; по всем видам анальгетической активности оригинальная субстанция ИАСК превосходит АСК.

7. Терапевтический индекс по анальгетической активности субстанции ИАСК в 1,7 раза больше, чем у препарата АСК. Возможная расчетная летальная доза для человека равняется 219,3 мг/кг.

8. Предварительное введение ИАСК в дозе 1,0 мг/кг по АСК при 30-ти минутной ОНВЛКА отчетливо предупреждало кардиодепрессию и поддерживало гемодинамические показатели на более высоком уровне по сравнению с контрольной группой. При сравнении кардиопротекторного действия ИАСК и препарата АСК в эквивалентных дозах отмечается сопоставимое действие. Необходимо углубленное изучение субстанции ИАСК как средство профилактики и лечения ишемии миокарда.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ ИЗЛОЖЕНО В СЛЕДУЮЩИХ ПУБЛИКАЦИЯХ:

1.Щекина И.А., Николаевский В.А. Экспериментальная оценка комбинированного действия аспирина-Кардиа и дипиридамола на систему регуляции агрегантного состояния крови// Сб. науч. трудов ВГМА: Прикладные информационные аспекты медицины. - Воронеж. - 1999. - Т. 2. - С. 47 -

2.Щекина И.А., Николаевский В.А., Сливкин А.И., Лапенко В.Л. Исследование гепатопротекторного действия аспирина химически иммобилизованного на поливинилпирролидоне// Межвузовский сборник научных трудов. - Воронеж, - 2000. - вып. № 26. - С. 154-156.

3.Щекина И.А., Николаевский В.А., Сливкин А.И. Экспериментальная оценка комбинированного действия антикоагулянтов и антиагрегантов непрямого типа действия// Тезисы докладов Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва. - 2000. - С. 591.

4.Щекина И.А. Гепатопротекторное свойство кислоты ацетилсалициловой// Тезисы докладов Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва. - 2001. - С. 641.

54.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Щекина, Ирина Анатольевна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Кислота ацетилсалициловая. Биохимизм фармакологического действия и применения.

1.2. Синтетические полимеры медицинского назначения. Обоснование синтеза и исследование физико-химических свойств полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой (ИАСК).

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Методы исследования на биохимические основы свертывающей системы и структурные элементы крови субстанции ИАСК в сравнении с монопрепаратами АСК, поливинилпирролидоном (ПВП), смеси АСК с ПВП и сополимера Ы-винилпирролидона с ]Ч-3-хлор-2-гидрокси-пропил-винил-у-аминомасляной кислотой (ФПВП).

2.2. Методы исследования гепатопротекторной активности ИАСК и АСК

2.3. Патоморфологические исследования.

2.4. Методы исследования антиагрегационной и реологической активности ИАСК в сравнении с АСК.

2.5. Методы исследования жаропонижающей, противовоспалительной, анальгетической активности субстанции ИАСК.

2.6. Методы исследования эффективных доз и острой токсичности ИАСК.

2.7. Методы оценки антиишемического действия соединения ИАСК в сравнении с АСК.

Глава 3. Собственные исследования.

3.1. Исследование влияния ИАСК на биохимию свертывающей системы крови и структурные элементы крови в сравнении с монопрепаратами АСК, поливинилпирролидон (ПВП), смеси АСК с ПВП и сополимера N - винилпирролидона с Ы-3-хлор-2-гидрокси-проггил-винил-у-аминомасляной кислотой (ФПВП) в хроническом эксперименте.

3.2. Исследование гепатопротекторной активности ИАСК и АСК.

3.3. Патоморфологические исследования.

3.4. Исследование антиагрегационной и реологической активности

ИАСК в сравнении с АСК.

3.5. Исследование жаропонижающего, противовоспалительного и анальгетического действия ИАСК.

3.6. Определение острой токсичности ИАСК.

3.7. Исследование антиишемического действия соединения ИАСК в сравнении с АСК.

Обсуждение результатов.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биохимические аспекты и экспериментальная оценка фармакологической активности полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой"

Актуальность проблемы. Наиболее распространенными заболеваниями XX века стали гипертоническая болезнь (ГБ), ишемическая болезнь сердца (ИБС). Они ограничивают работоспособность, сопровождаются большими экономическими потерями [1, 120, 121, 122, 123, 124, 125] и составляют 53,5

- 55 % от общей смертности населения России [2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11]. По данным ВОЗ, 20 % людей в возрасте старше 40 лет страдают ГБ, которая приводит к ИБС, сердечной недостаточности, мозговому инсульту. На протяжении последних десятилетий в возрастной группе 40 - 50 лет отмечается устойчивый рост заболеваемости ИБС [126, 127, 128, 129]. Распространенность, неблагоприятный прогноз позволяют рассматривать ИБС, как одну из ключевых проблем современной медицины.

Фармакотерапия, основанная на регуляции биохимических механизмов агрегации, является одним из основных методов лечения этих заболеваний [12, 13, 14, 15, 16]. Среди антиагрегантов кислота ацетилсалициловая (АСК)

- занимает одно из ведущих мест [1, 10, 11, 130, 131, 132, 133, 134]. Накоплен опыт применения АСК с целью профилактики повторных инфарктов и тромбозов [1, 10]. Все НПВП обладают единым, известным на сегодняшний день, механизмом действия: блокада ферментов циклооксигеназы и снижением синтеза простагландинов. Этот механизм обусловливает не только основные эффекты АСК, но и токсическое действие, которое является прямым продолжением ее фармакологического терапевтического эффекта кровоточивость, поражение ЖКТ [17, 120]. С позиций поиска новых антиагрегационных препаратов представляют несомненный интерес лекарственные формы и субстанции на основе АСК с целью уменьшения ее побочных эффектов. Кроме того, применение данного препарата экономически выгодно [18, 19, 20, 21, 22, 23].

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Целью настоящего исследования явилось изучение биохимических механизмов и оценка эффективности антиагрегантной активности оригинальной субстанции, полученной на основе химической иммобилизации кислоты ацетилсалициловой на низкомолекулярном полимере медицинского назначения.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1.Изучить некоторые биохимические механизмы, лежащие в основе антиагрегантного действия оригинальной субстанции - полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой, синтезированной на основе химической иммобилизации кислоты ацетилсалициловой в сополимер ЭД-винилпирролидона с ЭД-винил-у-аминомасляной кислотой при однократном внутрижелудочном введении.

2.Изучить состояние свертывающей системы крови при использовании вновь синтезированной субстанции.

3.Провести токсико-фармакологическое и структурно-функциональное исследование синтезированной субстанции и установить особенности влияния субстанции на структуру и функциональное состояние внутренних органов.

4.Дать экспериментальную фармакологическую оценку перспективности использования синтезированной субстанции на модели ишемизированного сердца.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые проведено комплексное биохимическое, морфологическое, токсико-фармакологическое экспериментальное исследование оригинальной субстанции, синтезированной на основе химической иммобилизации кислоты ацетилсалициловой на низкомолекулярном полимере медицинского назначения. Показаны некоторые аспекты биохимических и других сторон механизма действия оригинальной субстанции. Установлена высокая терапевтическая активность и большая широта терапевтического индекса на различных моделях изучения эффективности субстанции, предполагающие возможность ее дальнейшего продвижения в качестве внутривенного лекарственного препарата антиагрегационного действия.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ Полученный материал предполагает его представление в Фармакологический Комитет МЗ РФ для дальнейшей разработки оригинального полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой в качестве нестероидного противовоспалительного средства, обладающего, по сравнению с кислотой ацетилсалициловой, пониженной гастро- и нефротоксичностью [приоритетная справка № 2000130527 от 5.12.2000]. Одновременно субстанция обладает антиагрегационными, антиангинальными свойствами, что позволяет использовать субстанцию для внутривенного введения на фоне экспериментальной ишемии.

Показано, что малые дозы АСК (1 мг/кг) обладают гепатопротекторным действием, которое выражается в том, что в гепатоцитах стимулируются репаративные процессы, что позволяет рекомендовать АСК в дозе 1 мг/кг для профилактики токсических гепатитов [положительное решение на выдачу патента от 25.01.2001 по заявке № 2000128859 от 17.11.2000].

РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ По материалам исследования получены: патент на изобретение № 2000128859 от 17.11.2000 и приоритетная справка на изобретение № 2000130527 от 5.12.2000. Опубликовано 4 печатных работы. Основные положения диссертационной работы используются в учебном процессе со студентами кафедры фармакологии и курсантами факультета усовершенствования врачей на кафедре фармакологии и фармдела ФУВ Воронежской медицинской академии им. H.H. Бурденко и на фармфакультете Воронежского государственного университета (6 актов внедрения). Выполнены 4 дипломные работы студентами фармацевтического факультета ВГУ.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ Материалы диссертации докладывались, обсуждались и одобрены на VII и VIII Российских национальных конгрессах "Человек и лекарство" (Москва, 2000-2001 г).

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ Диссертация написана на русском языке, изложена на 183 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 7 разделов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, списка литературы, включающего 177 источников, из них 119 отечественных, 58 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 15 таблицами, 42 рисунками. Работа выполнена без соавторства, в научные труды, опубликованные в соавторстве, включены экспериментальные данные, полученные лично автором.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Щекина, Ирина Анатольевна

ВЫВОДЫ

1 .Впервые синтезированный полимерный водорастворимый аналог кислоты ацетилсалициловой (субстанция ИАСК) по влиянию на свертывающую систему крови ИАСК (в дозе 1 мг/кг по АСК) превосходит препарат сравнения АСК, так как вызывает увеличение индекса коагуляции на 53,1 %, а показатель индекса фибринолиза увеличивался в 2 раза, что свидетельствует о фибринолитической активности полимерного водорастворимого аналога кислоты ацетилсалициловой.

2.Субстанция ИАСК в дозе 1 мг/кг (по АСК) проявляла выраженную антиагрегационную активность, действуя преимущественно на тромбоцитарное звено гемостаза. При этом эффект при введении ИАСК развивался несколько позднее, чем у препарата АСК, но при этом не уступал по выраженности таковому для кислоты ацетилсалициловой. Наибольший эффект влияния субстанции ИАСК на вязкость крови кроликов наблюдался при высоких скоростях сдвига.

3.Сравнительная оценка гепатопротекторного действия субстанции ИАСК и препарата АСК в эквивалентных дозах на фоне патохимического повреждения печени показала, что ИАСК не влияет на гепатотропную функцию печени, тогда как АСК в дозе 1 мг/кг в сутки оказывает отчетливый гепатозащитный эффект, который выражается в уменьшении дистрофических явлений гепатоцитов, увеличении числа митозов, нормализации уровня ферментов в сыворотке крови. Положительные результаты экспериментальных исследований дают основание рекомендовать низкие дозы АСК как потенциальный гепатопротектор, который, возможно, можно использовать для комплексного лечения токсических поражений печени.

4.Анализ микропрепаратов внутренних органов животных, получавших ИАСК в дозе 2,3 мг/кг (эквивалентно 1 мг/кг по АСК), показал, что этот препарат обладает пониженной гастро- и нефротоксичностью. Все изменения во внутренних органах носят физиологический характер и могут быть связаны с некоторым усилением функции исследуемых органов.

5.Острая токсичность оригинальной субстанции ИАСК сравнима с препаратом АСК и для белых мышей составляет по показателю LD50 680±125,0 мг/кг и относится к малотоксичным соединениям. Возможная расчетная летальная доза для человека равняется 219,3 мг/кг.

159

6. Субстанция ИАСК обладает:

- Жаропонижающей активностью, сопоставимой с препаратом сравнения АСК в эквивалентных дозах.

- Оказывает более сильное и продолжительное противовоспалительное действие, чем препарат сравнения АСК в той же дозе на массу тела животного.

- По всем видам анальгетической активности оригинальная субстанция ИАСК превосходит АСК.

7.Широта терапевтического индекса по анальгетической активности субстанции ИАСК в 1,7 раза больше, чем у препарата АСК.

8. Предварительное введение ИАСК в дозе 1 мг/кг по АСК при 30-ти минутной OHBJIKA отчетливо предупреждало кардиодепрессию и поддерживало гемодинамические показатели на более высоком уровне по сравнению с контрольной группой. При сравнении кардиопротекторного действия ИАСК и препарата АСК в эквивалентных дозах отмечается сопоставимое действие.

160

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 .Рекомендовать новую оригинальную субстанцию - полимерный водорастворимый аналог кислоты ацетилсалициловой - к дальнейшему углубленному доклиническому изучению с целью последующего представления в Фармакологический Комитет МЗ РФ в качестве антиагреганта, обладающего пониженной гастро- и нефротоксичностью.

2,Обоснована перспективность дальнейшего углубленного изучения оригинальной субстанции ИАСК как средства профилактики и лечения ишемии миокарда при внутривенном введении.

3.Полученные сведения о гепатопротекторных свойствах кислоты ацетилсалициловой в низких дозах позволили выявить свойства АСК в качестве потенциального гепатопротектора, которые связаны с нормализацией биохимических показателей, отражающих функциональное состояние печени.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Щекина, Ирина Анатольевна, Воронеж

1. Дезагреганты в современной клинической кардиологии/ Бокарев И.Н., Ивлева А.Я., Моисеев B.C. и др.//Кардиология. М., 1989. - С. 84 - 96.

2. Программа борьбы с артериальной гипертонией в СССР/ Бритов А.Н., Оганов Р.Г. //Терапевт, архив. 1985. - № 11. - С. 67 - 71.

3. Вихерт A.M., Чазов Е.И. Инфаркт миокарда /Под ред. Е.И.Чазова. -М.: Медицина, 1971. С. 47 - 66.

4. Вихерт А. М., Жданов В. С. Атеросклероз при различных заболеваниях. М.: Медицина, 1976. - 210 с.

5. Волков B.C., Курсаков Н.К., Кухто Л.М. О длительности жизни и трудоспособности больных, перенесших инфаркт миокарда //Клинич. медицина. -1976. Т. 57, № 2. - С. 25 - 30.

6. Волков B.C. Реабилитация больных, перенесших инфаркт миокарда.

7. М.: Медицина, 1982. 232 с.

8. Мясников А.Л. Гипертоническая болезнь и атеросклероз. М.: Медицина, 1965. - 615с.

9. Тринус Ф.П. Фармако-терапевтический справочник. Киев: Здоровье,- 1989.-640 с.

10. Метелица В.И. Справочник кардиолога по клинической фармакологии (Под ред. Чазова Е.И.), М. 1987. - 250 с.

11. Кукес В.Г., Рудаков А.Г., Цулая В.Р. Клиническая фармакология лекарственных средств, применяемых в кардиологии/Серия "Фармакология",1. Т. 16., М,-1987.-85 с.

12. Астахова A.B. Нестероидные противовоспалительные средства (НПВС): спектр побочных реакций//Безопасность лекарств. 2000. - № 1. -С. 26-30.

13. Способ лечения сосудистых тромбозов и рестеноза ингаляциями оксида азота: A.c. 5904938 США, МКИ 161 К 33/00/Zapol Warren М., Block Kenneth D./Опубл. 18.05.99.; РФ 190. 2000.

14. Составы и способы уменьшения менструальных болей: A.c. 5912006 США, МКИ А 61 F 13/02 /Bockow Barry I,Erlitz Marc D./ Опубл. 15.06.99; РФ 90267П. 2000.

15. Способ получения названия препарата ацетилсалициловой кислоты: A.c. 5046931/14, Россия, МКИ А61К31/79/Савицкая А.Б., Пащенко Л.А. Заявлено 27.02.96, Бюл. №6., ХФЖ№9. 1988.

16. Средства для снижения агрегации тромбоцитов в кровеносной системе: A.c. 4866046, Россия, МКИ А61КЗ1/245 кл. А 61 К 31/60, 1989/ Давыдов А.Б., Кокурина Е.В., Метелица В.И., Румянцев Д.О., Суслина З.А., Хромов Г.Л., Заявлено 10.11.97, Бюл. № 31.

17. Способ профилактики повторного инфаркта миокарда: A.c. 4906822/14, Россия МКИ А61К31/185/ Бичан H.A., Гольдберг Г.А., Заявлено 30.03.93, Бюл. №12.

18. Способ потенцирования действия лекарственных средств: A.c. 94042571/14, Россия МКИ А61К31/60/Гмиро В.Е., Сердюк С.Е., Копейкин

19. B.В., Панарин Е.Ф. Заявлено 28.08.97, Бюл. № 24.

20. Ингибиторы циклооксигеназы-2; современная концепция/Насонов JI.E.// Терапевтический архив. 1999. - № 11. - С. 54 - 57.

21. Актуальные взгляды на токсичность нестероидных противовоспалительных лекарственных средств (НПЛС) и препаратов, контролирующих протекание ревматических заболеваний/Филипович-Сосновска А.//Новости фармации и медицины. 1997. - № 5 - 6. - С. 89 - 94.

22. Терапия основных сосудистых нарушений бета-каратином и витамином Е: А.с.5871766 США, МКЙ 6А61 К 31/07, 6А61 К 31/355/Hennekens, Charles Н./Опубл. 16.02.99; РФ 190. 2000.

23. Информационная мозаика/Голубев А.Г.//Терра мед. 1999. - № 2.1. C. 54-55.

24. Насыбулина Н.М. Нестероидные противовоспалительные препараты и их лекарственные формы (обзор)//ХФЖ. M - № 2. - 1999. - С. 30 - 35.

25. Физиология системы гемостаза/Балуда В.П., Балуда М.В., Деянов И.И., Тлепшуков И.К. М. - 1995. - 243 с.

26. ЗО.О побочном действии препарата аспирин (таблетки по 0,5 г) производства'ЪисЬу Stores INC", Dublin (Ирландия)//Фармакология. 1997. -Вып. 5.-С. 51.

27. Кузник Б.И., Баркаган З.С. Современные представления о процессе свертывания крови, фибринолизе и действии естественных антикоагулянтов//

28. Гематология и трансфузиология. М. 1991. - №. 11. - С. 22 - 25.

29. Аспирин -анти- или протромбогенный препарат?/Балуда В.П., Лукоянова Т.И., Адамчук A.C., Деянов И.//Клин.мед. 1983 - № 9. - С. 27 -29.

30. Лакин К.М./Проблемы фармакологического поиска ингибиторов агрегации тромбоцитов/ЯСардиология. 1988. - № 10 - С. 120 -126.

31. Петровский Б.В., Малиновский H.H. Современные проблемы тромбозов и эмболий. М. - 1978. - 245 с.

32. Люсов В.А., Савенков М.П., Теблоев К.И. Противотромботическая терапия в клинической практике. Новое в теории, диагностике, лечении. М. -1982.-77 с.

33. Чазов Е.И, Лакин K.M. Антикоагулянты и фибринолитические средства. М. - 1977. - 95 с.

34. Актуальные проблемы гемостаза в клинической практике/Тулупов А.Н., Филев Л.В., Вельских А.Н. и др. М. - 1987. - 138 с.

35. Биоантиоксидант/Барсель В.А., Сальников М.И., Олферьева А.М. и др. Черноголовка. - 1986. - 30 с.

36. Дадный А.И., Ефимов В.В. Эпидемиология, профилактика и лечение болезней сердечно-сосудистой системы. Харьков. - 1984. - 62 с.

37. Гацура В.В. Фармакологическая коррекция энергетического обмена ишемизированного миокарда. -М. 1993. 254 с.

38. Петрищев H.H. Тромборезистентность сосудов С.-П. - 1994. - 130 с.

39. Гаврилов O.K. Проблемы и гипотезы в учении о свертывании крови. -М.-1981.-С.63.

40. Высокомолекулярные соединения/Ануфриева Е.В., Некрасова Т.Н., Шевелева Т.В. и др. А. - 1994. - 449 с.

41. Паутов В.Д. Водорастворимые полимеры и их применение (Тез.доьсл. III Всесоюз.конференц.уИркутск. 1987. - С. 133.

42. Кирш Ю.Э. Поли-М-винилпирролидон и др. поли-М-виниламиды: Синтез и физикохимические свойства. М.: Наука. - 1999. - 350 с.

43. Синтетические полимеры медицинского назначения/Кирш Ю.Э., Зажирей Д.В.//Сборник лекций I Всесоюзной школы семинара. Ташкент. -1984.-С. 154.

44. Ландау М.А. Молекулярный механизм действия физиологически активных соединений. М.: Наука. - 1981.

45. Структура и стабильность биологических молекул (Пер. с англ.)/Под ред. ВолькенштейнаМ.В. М.: Мир. - 1973. - 584 с.

46. Растворимая шипучая лекарственная форма ацетилсалициловой кислоты: A.c. 98118742/14, Россия, МКИ 6 А 61 К 31/60/Гараев P.C., Амиров Н.Х., Зиганшина Л.Е. и др.; Опубл. 20.04.99. РЖ 210242П. - 1999.

47. Влияние гидрофильных эксципиентов и давления на физические свойства и характер высвобождения из микрокапсулированных таблеток аспирина (Доклад)/Farid D, Bolourtchian. N., Nokhodchi A/J. Pharm.fyl Pharmacol. -1998.-P. 150.

48. Биологически совместимые анионообменные материалы: A.c. 315696, США, МКИ 6 В 01D15/08/Brian, Ben F., Voorhees et al., Опубл. 15.07.97. РЖ 18Т341П,- 1999.

49. Способ получения биоспецифического адсорбента: A.c. 2808802/26, Россия, МКИ 6 В 01 J 20/04 6 А 61 К 31/0728/Платэ М.А., Валуев Л.И., Гумирова Ф.Х. и др.; Опубл. 20.01.98. РЖ 12Т304П. - 1999.

50. Материал, ингибирующий свертываемость крови и способ его получения: A.c. 19651096/1, Германия, МКИ 6 А 61 К 47/02, 6 А 01 N l/00/Kalles, Karl-Heinz, Böttcher et al.; Опубл. 10.06.98. РЖ 160252П. - 1999.

51. Рудакова Т.Е., Черненко Г.Т. Поражение сосудистой стенки и гемостаз. М. - 1983. - С. 223 - 224.

52. Энциклопедия лекарств/Издание седьмое переработанное. Под редакцией Ю.Ф. Крылова. 2000. - 742 с.5 9.По лучение и свойства гидролизированного поливинилпирролидона /Мусин Р.И., Ли В.А., Туляганов Р.Т. и др.// ХФЖ. М. - 1989. - № 11. - С. 1379 -1381.

53. Государственная Фармакопея. М. - 1968. - С. 756.

54. Руководство по экспериментальному доклиническому изучению новых фармакологических веществ/Под ред. Фисенко В.П.и др. М. - 2000. -С. 234-250.

55. Методы определения токсичности и опасности химических веществ (Токсикометрия)/Под ред. Саноцкого И.В. -М.: Медицина.-1970.-С.96- 100.

56. Прозоровский В.Б. Фармакология и токсикология. 1962. - № 1. - С. 115-119.

57. Иванов Е.П. Диагностика нарушений гемостаза. Минск.: Беларусь. - 1983.-С. 93-97.

58. Сепетлиев Д.А. Статистические методы в научных медицинских исследованиях. М.: Медицина. - 1968. - 419 с.

59. Любина А.Я., Спектор И.С., КатасоноваТ.В. Программированное пособие по методам клинических лабораторных исследований М.: Медицина. - 1971. - 208 с.

60. Методические указания по применению унифицированныхклинических, лабораторных методов исследования/Под ред. Меньшикова B.B. М. - 1973. - С. 55-63.

61. Кассирский И.А., Алексеев Г.А. Клиническая гематология, 1970. -М.: Медицина. 800 с.69 .Беленький М.А. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. Ленинград. - 1963. - 152 с.

62. Ковалевский А.Н., Нифантьев O.E. Замечания по скриннинговому методу определений молекул средней массы./Лабораторное дело-1989. № 10,- С. 34-35.

63. Тугаринова В.Н., Миклашевский В.Е., Скобцева Г.Г. Модификация микрометода бромсульфалеиновой пробы на экскреторную функцию печени//Лабораторное дело. 1967. - №. 4 - С. 218 - 220.

64. Аюшева Л.Б. Полифитохол новый гепатопротектор в клинике туберкулеза (клинико-экспериментальное исследование): Автореф. дис.канд. мед. наук/М. 1998. - 21 с.

65. Исследование гепатопротекторного действия препарата из биомассы культуры ткани радиолы розовой/Крендель Ф.П., Левина Л.В., Козин C.B., Ванюшкин А.Н.//Поиск исслед., эксперим. М. - 1995. - С. 35 - 38.

66. Джозеф М., Хендерсон. Патфизиология органов пищеварения/(Пер.с англ.) Под ред. Наточина B.B. М. - 1997. - 286 с.

67. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники. М. - 1963. - С. 129-142.79.0сновы гистологии и гистологической техники/Под ред. Елисеева Г.В., Субботина М.Е. М. - 1967. - С. 251 - 252.

68. Габбасов З.А., Попов Е.Г., Гаврилов И.Ю. и др. Новый высокочувствительный метод анализа агрегации тромбоцитов./Лабораторное дело. 1989. - № 10. - С. 15-18.

69. Габбасов З.А., Попов Е.Г., Гаврилов И.Ю. и др. Новый методический подход к исследованию агрегации тромбоцитов in vitro./Бюлл.экспер.биол.и мед. 1989. - № Ю. - С. 437 - 439.

70. Баркаган З.С., Молот А.П. Диагностика и контр, терапия нарушений гемостаза. М.: Ньюдиамед - 2001. - 296 с.

71. Тринус Ф.П., Мохорт H.A., Клебанов Б.М. Нестероидные противовоспалительные средства. Киев.: Здоровье. - 1975. - С. 225 - 227.

72. Тринус Ф.П., Мохорт H.A., Клебанов Б.М. Нестероидныепротивовоспалительные средства. Киев.: Здоровье. - 1975. - С. 205 - 207.

73. Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ. М. - 1974. - С.38 - 39.

74. Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ. М. - 1974. - С.43 - 44.

75. Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ. М. - 1974. - С. 44.

76. Методы определения токсичности и опасности химических веществ (Токсикометрия)/Под ред. СаноцкогоИ.В. -М.: Медицина-1970- С. 101.

77. Голдштейн Г.Х., Чичканов Г.Г. Сравнительное изучение влияния этацизина и лидокаина на кровоснабжение и функциональное состояние интактного и ишемизированного миокарда//Бюл.эксперм.биолгии и медицины. 1984. - Т.98. - № 10. - С. 466 - 469.

78. Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ. М. - 1974. - С. 30 - 36.

79. Таспирин растворимая лекарственная форма с повышенным противовоспалительным и анальгезирующим действием/Гумеров Р.Х., Зиганшина Л.Е., Галиуллина Т.Н., Гараев Г.С.//РФ. № 1. - 2001. - С. 619.

80. Монцевичюте-Эрингене. Упрощенные математико-статистические методы в медицинской исследовательской работе//Патол.физиол.и экспер.терапия. М. - 1964. - № 4. - С. 71 - 78.

81. Фред Дж. Шиффман. Патфизиология крови/ (Пер.с англ.) Под ред. Наточина Ю.В. 2000. - 446 с.

82. Леонова М.В., Разумов В.Б. Роль эритроцитов в патогенезе, нарушение функциональной активности тромбоцитов у больных ишемической болезнью сердца и возможности медикаментозной коррекции//Кардиология. 1990. - № 4. - С. 107 - 110.

83. Бурлакова Е.Б., Голощапов А.Н., Керимов Р.Ф. Взаимосвязь между содержанием природных антиоксидантов и вязкостью липидов в мембранах органелл в норме./Бюллетень эксперимент.биол. и мед. М.: Медицина.1986,-№4.-С. 431-432.

84. ЮО.Алексеенко A.B. Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. -М.-1981.-С. 3-16.

85. Дроговоз С.М., Яковлева Л.В., Зупанец И.А. О гепатотропных свойствах нестероидных противовоспалительных средств//Фармакология и токсикология. 1989. - № 6. - С.76 - 79.

86. Буюклинская О.В., Ходасевич Л.С., Крылов И.А. Превентивное действие каротинсодержащих препаратов на модели острого гастрита/ Экспериментальная клиническая фармакология М. - 2001. - Т. 64. - № 1. -С. 53-56.

87. Юб.Полуновский В.А. Генетический контроль размножения клеток и эволюция клеточного цикла//Цитология. Ленинград. - 1982. - Т. 24. - № 12. -С. 1379-1389.

88. Свободнорадикальное окисление липидов в норме и патологии/Рощупкин Д.И., Петренко Ю.М., Кузнецова Г.П., Владимиров Ю.А.-М,-1976.-163 с.

89. Кудряшов Б. А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови и ее свертывания. М.: Медицина. - 1975. - 488 с.

90. Дж. Фэллон. Патфизиология сердечно-сосудистой системы/(Пер.с англ.) Под ред. Наточина Ю.В. 2000. - 440 с.

91. Чернух A.M., Александров П.Н., Алексеев О.В. Микроциркуляция. -М.: Медицина. 1984. - 429 с.

92. Ш.Колла В.Э., Сыропятов Б.Я. Дозы лекарственных средств и химических соединений для лабораторных животных. М.: Медицина. -1998.-263 с.

93. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте/Западнюк И.П., Заладнюк В.И., Захария Е.А. и др. Киев: Вища школа. - 1983. - 384 с.

94. Сидоров К.К., Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии (Справочник). М.: Медицина. - 1977. - 240 с.

95. Арзамасцев Е.В., Любимов Б.И. Современные требования к доклиническому изучению безопасности новых лекарственных препаратов/Токсикол.вестник. М. - 1994. - № 4. - С. 10 - 14.

96. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М. - 1972. - С. 241 - 243.

97. Бурлакова Е.В. Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. М. -1972.-С. 23-24.

98. Баратс С.С., Смоленская О.Г. Перикисное окисление липидов и гиперурикемия у больных ишемической болезнью сердца/Кардиология. М.: Медицина. - 1990. - Т. 30. - № 4. - С. 51 - 53.

99. Bruce R. A., De Rouen Т. A, Hossaek К. F. Value of maximal exercise tests in risk assessment of primary coronary heart disease events in healthy men: five years experience of the Seattle Heart Watch Study //Amer. J. Cardiol.- 1980.

100. Cohn P. F. Silent myocardial ischemia //Ann. Intern. Med.- 1988 Vol. 109.-P. 312-317.

101. Dayton S. Nutrition and atherosclerosis //Prog. Food Nutr. Sci.- 1975.-Vol. 1,№3. P. 191 -206.

102. Gordon T, Thorn Th. The recent disease in CHD mortality //Prev. Med.-1975. Vol. 4, № 2. - P. 115-125.

103. Gordon T. Coronary heart disease in young women incidence and epidemiology //Coronary heart disease in young women /Ed. M.F. OliverEdinburgh, London, New York, 1978,- P. 8-19.

104. Hikman I.I., Une G.S., Cook R. et al. A natural history study of (asymptomatic coronary disease //Amer. J. Cardiol." 1980,- Vol. 45,- P. 422- 427.

105. Gulledge A.D. The psychological aftermath of a myocardial infarction //Psychological aspects of a myocardial infarction and coronary care.- Saint Louis, 1975.-P. 107-122.

106. Herd J. A., Weiss S. M. Overviw of hypertension: its treatment and prevention //Behavioral health /Ed. Matarozzo I. D.- New-York: Wiley, 1984.- P. 789-805.

107. Piekermg T. G„ Harshfild G. G., Blank S. et al. Behavioral determinants of 24 hour blood pressure pattern in borderline hypertension //J. Cardiovasc. Phannac.-1986.- Vol. 8, N 5,- P. 89-92.

108. Weiss E. Psychosomatic Medicine.- Philadelphia, London, 1957,- 557 p.

109. Hansson L. Current and future strategies in the treatment of hypertension //Amer. J. Cardiol.-1988.- Vol. 61,- P. 2-7.

110. Negver M. Organic-chemical Drugs and their Synonyms. Berlin. -1987/ - 345 p.

111. Antipiatelet Trialsts Collaboration. Secondary prevention of vascular disease by prolonged antiplatelet treatment// Brit.med. J 1988. - Vol. 269. -P.320-331.

112. Aspirin Myocardial Infarction Study Research Group. A randomized controlled trial of aspirin in persons recovered from myocardial infarction//J.A.M.A. 1980. - Vol. 243. - P. 661 - 669.

113. Cairns J.A., Gent M. Singer J et al. Aspirin, sulfinpyrazone, or both in unstable angina. Results a Canadian multricenter trial// New Engl. J. Med. 1985. -Vol. 313.-P. 1369-1375.

114. Roquier-Charles Danielle. Vers de nouveaux anti-inflammatoires// Actual.pharm. 1998. - Vol. 365. - P. 42 - 43.

115. Bellosillo Beatriz, Pique Maria, Barragan Mantserrat et all. Aspirin and salicylate induse apoptosis and activation of caspases in B-cell chronic lymphocytic leukemia cells//Blood. 1998. - Vol. 4. - P. 1406 - 1414.

116. Byron C., Mark F. Effects of Very Low Dose Daily, Longterm Aspirin Therapy on Gastric, Duodenal, and Rectal Prostaglandin leveels and on Mucosal Injury in Healthy Humans//Gastroenterology. 1999. - Vol.117 - P. 17 - 25.

117. Cooke Glen E., Bray Paul F., Hamtington Jeanette D. et all PJA2 polymorphism and efficacy of aspirin//Lancet. 1998. - Vol. 9111. - P. 1253.

118. Patrono C., Patrignani P., Panara M. et al.Improved Nonsteroidal Antiinflammatory Drugs. COX-2 Enzyme Inhibitors// Eds J. Vane et al. Boston. -1996.-P. 121-132.

119. Marini M., Gesi A, Masotti G. J primi cento anni dellaspirina//G.Gerontol. 1997. - Vol. 45. - P. 507 - 515.

120. Loperz-Fare A., Caramelo C., Esteban A. et al. Effects of aspirin on platelet-neutrophil interactions. Role of nitric oxide and endofhelin-l//Circulation. 1995. - Vol. 91 - P. 2080 - 2088.

121. Santos m.T., Vallès J., Marcus J.et al. Enhancement of platelet reactivity and modulation of eicosanoid production by intact erythrocytes. A new approad to platelet activation and recruitment.//J.clin. invest. 1991. - Vol. 87. - P. 571 -580.

122. Valles J., Santos M.T., Marcus A.J.et al. Downregulation of human platelet reactivity by neutrophils. Participation of lipoxygenase derivatives and adhesive proteins//!clin. Invest. 1993. - Vol. 92. - P. 1357 - 1356.

123. Wu K.K., Sanduja R., Tsai A.L.et al. Aspirin inhibits interleukin 1-induced prostaglandin H synthase expression in cultured endothelial cells//

124. Proc.nat. Acad. Sci. USA. 1991. - Vol.88. - P. 2384-2387.

125. Silberbauer K., Schernthaner G., Sinzinger H. et al. Decreased vascular prostacylin in juvenile-onset diabetes//New Engl. J. Med. 1979 - Vol. 300. -P. 366.

126. Sinzinger H., Silberbauer K., fiegl W.et al. Prostacyclin activity is diminished in different types of morphologically controlled human atherosclerotic lesions//Trombos.a.Haemostas. 1979. - Vol. 42. - P. 803.

127. Zibon V.A., Maruta H., Lord I.et al. Increased biosynthesis of thromboxane A2 by Diabetic platelets/ZEurop. J.clin. Invest. 1979. - Vol. 9. - P. 223.

128. LakinK.M., Makarov V.A. Thrombosis and Thrombolysis. Consultants Bureau/Ed. E.I. Chazov, V.N. Smirnov//New York. 1986. - P. 311 -363.

129. Lakin K.M., Schipilova S.J., Novikova N.V.et al. Action of nonsteroidal anti-inflammatory agents on fibrinolysis and platelet aggregation/ZFolia haemat. -1986. Vol. 113. - P. 230 - 235.

130. Breddin H.K.Preseribing nonsteroidae antiinflammatory drugs what's new?// Pheumatol. - 1997. - Vol. 2. - P. 243 - 245.

131. Lewis PJ.W., Dollery C.T. Clinical pharmacology and potential of prostacyclin//Brit.med.Bull. 1983. - Vol. 39. - P. 281 -284.

132. De Confo Antonio Alves, dos Santos Continho Devora, Rezende Assaf Joao Alexandre. Terapéutica antitronbotica ñas doencas cardiovasculares

133. Arg.bras.med. 1997. - Vol. 2. - P. 45 - 49.

134. Thastrup 0.,Knudsen J.B., Lemich P., Winter K. Inhibition of human platelet aggregation by dihydropyrano- and dihydrofuranocoumariins, a new class of cAMP-phosphodiesterase inhibitors// Biochem. Pharmacol. 1985. - Vol. 34. -P. 2137-2140.

135. Verstraete M. A pharmacological approach to the inhibition of platelet adhesion and platelet agregation. Wright-Schulte Lecture/ZHaemostasis. 1982. -Vol. 12. P. 317-336.

136. Andrioli Giuseppe, Lussignoli Sabrina, Gaino Stefania et all. Stady on paradoxical effects of NSAIDs on platelet activation//Arzneimittei-Forsch. 1997. -Vol. 5.-P. 519-530.

137. Revell P., Sleter G.P. Antiplatelet therapy in thrombotic thrombocytopenic purpura// Lancet. 1992. - N 8823. - P. 252.

138. Tantcheva L., Stoytchev T., Bangelova D. Influence of hydrocortisone of analgesi effect, toxiby and metabolism of aspirin in mice// Gen. Pharmacol. -1997.-Vol. 28.-P. 123-128.

139. Femadez-Urrusuno R., Fattal E. Eveluation of hepatic antioxidant sistems after intravenous administration of polymeric nanopartices/ZBiometerials. 1997.

140. Vol. 18, Suppl. 6.-P. 511-517.

141. Robinson B.V., Sullivan F.M., Borzelleca J.F., Schwarttz S.L.//PVP: A critical review of the kinetica and toxycology jf polyvinylpyrrolidone (povidone) /Chicago:Lewis publ., 1990. - P. 209.

142. Wessel W., Schoog M., Winker E. Poluvinylpyrrolidone (PVP), its diagnostic, therapeutic and technical application and consequences thereof// Arzneim. Forsch. (Drug., Res.). - 1971. - Vol. 21. - P. 510.

143. Alemany M., Rosell G., Bastida E. Effects of aspirin and indomethacin separetely in red blood cells and platelets modylation of the adhesiae and eohosive fuctions//Platelets. 1996. - Vol. 5, 6. - P. 277 - 282.

144. Kawasaki Yoko, Taceda Juiko, Jshiwata Hajimu. Eisei shikenjo hokoku/ZBull. Nat. Jnst. Hyg. Sei. 1995. - Vol. 113. - P. 77 - 80.

145. Ma Jian-Biao. Gaodend xuexiao huaxun xuebao//Chem J.Clin. 1997. -Vol. 18, Suppl. 7. - P. 1227 - 12235.

146. Moncada S., Vane I.R. Prostacyclin in cardiovascular system//Advanc Prost. Thromb. Res. 1980. - Vol. 6. - P. 43 - 59.

147. Salon K. Serum lipid peroxide in cerebrovascular disorders determinedby a new colometric method/ Clin. Clim. Acta. 1978. - № 90. P. 37-43.

148. Schneider B. Arzneimittelsicherheit und hterapeutischer Index. Prinzipen des pharmakologeschen Screenings und der Ubertragbarkeit tierexperimentelles Ergebnisse auf die Klimik.-Arzneimittej-Forschung. 1982. -№ 32. -P. 471 -474.

149. Lukas Erica R, Bartley Stephanie M., Diar Zoleida M., et all. No effect of loss E2F1 jn liber regeneration or hepatocareinogenesis in C5BL/6J or C3H/HeJ mice/Mol. Carcinogenes. 1999. - Vol. 25. - № 4. - P. 295 - 303.

150. Haupt Karlsten, Mosbach Klaus.Plastic antibodies: Developments and applications/Mycoses. 1998. - Vol. 41. - № 11 - 12. P. 468 - 475.

151. Faiture of antiplatelet effectivness of low-dose ASA in essentialiLthrombocytaemia: Absar. 14 Jnt.Cougr.Fibrinolysis and Proteolysis. 1998. -Vol. 12. - Suppl. - № 1.-P81.183

152. Савченкова JI.B. Гшоксичний синдром: молекулярш мехашзми патогенезу та фармакотератя/Укр. Лши. - 1988. - № 2. - С. 66 - 68.

153. Safo Tatsusuke, Miura Tomisato, Jnone Fumio et all. Relatioahip of DNA ploidy, nuctear area, nuclear numler and cell size of hepatocytes in rats: Abstr. 13ht Congr. Cytol/ Tokyo, May 10 14. - 1998. - № 2. - Suppl. - P. 562.