Белок Suppressor of Underreplication Drosophila мelanogaster: распределение в хромосомах и взаимодействие с другими белками

Пиндюрин, Алексей Валерьевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Белок Suppressor of Underreplication Drosophila мelanogaster: распределение в хромосомах и взаимодействие с другими белками
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Белок Suppressor of Underreplication Drosophila мelanogaster: распределение в хромосомах и взаимодействие с другими белками"

На правах рукописи

Пиндюрин Алексеи Валерьевич

БЕЛОК SUPPRESSOR OF UNDERREPLICATION DROSOPIULA MELANOGASTER-. РАСПРЕДЕЛЕНИЕ В ХРОМОСОМАХ И ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С ДРУГИМИ БЕЛКАМИ

Генетика - 03.00.15

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

UU3452680

Новосибирск 2008

003452680

Работа выполнена в отделе молекулярной и клеточной биологии Института цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск.

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор, академик Жимулёв Игорь Фёдорович Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Меркулова Татьяна Ивановна

доктор биологических наук, профессор

Стегний Владимир Николаевич

Ведущее учреждение:

Институт биологии гена РАН, г. Москва

Защита диссертации состоится 3 декабря 2008 года на утреннем заседании диссертационного совета Д-003.011.01 в Институте цитологии и генетики СО РАН в конференц-зале Иститута по адресу:

проспект акад. Лаврентьева 10, г. Новосибирск, 630090. тел/факс: (383)3331278, e-mail: dissov@bionet.nsc.ru С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии и генетики СО РАН.

Автореферат разослан 31

2008 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

А.Д. Груздев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Одной из актуальных проблем современной генетики является изучение механизмов, контролирующих процессы репликации, экспрессии и репрессии генов. В последние годы, благодаря расшифровке геномов эукариот и разработке новых экспериментальных подходов, исследования этой проблемы вышли на уровень генома. В частности, активно ведутся работы по изучению времени репликации большого количества генов, а также их транскрипционной активности на разных стадиях развития, в разных тканях и под влиянием различных факторов. Регулярно появляются новые данные по картированию с высокой точностью участков локализации специфических белков и модификаций гистонов в хромосомах клеток разных типов.

Особый интерес представляет исследование гетерохроматина, отличающегося высоким уровнем компактизации ДНК, конденсированным состоянием на протяжении всего клеточного цикла, низким уровнем транскрипционной активности, ассоциацией с ядерной мембраной, поздним временем репликации в S-фазе клеточного цикла, а .также наличием специфических негистоновых белков и особых модификаций гистонов (см. обзор Craig, 2005). Такое репрессированное состояние хроматина устанавливается на ранних этапах развития организма и в дальнейшем наследуется на протяжении многочисленных клеточных делений. (так называемое «эпигенетическое наследование»). У Drosophila melanogaster -одного из модельных объектов для генетических исследований - около 30% генома формирует гетерохроматин, который локализован в прицентромерных областях хромосом (прицентромерный гетерохроматин), в районах теломер (теломерный гетерохроматин), а также в многочисленных сайтах, рассеянных вдоль эухроматиновых плеч хромосом (интеркалярный гетерохроматин). Прицентромерный гетерохроматин содержит относительно мало генов и представлен средне- и высокоповторёнными последовательностями ДНК (см. обзор Wallace and Orr-Weaver, 2005), а районы интеркалярного гетерохроматина соответствуют кластерам уникальных неактивных генов (Belyakin et al., 2005).

Молекулярную основу эпигенетически наследуемого репрессированного состояния гетерохроматина составляет прежде всего особый набор модификаций коровых гистонов, с которыми связываются специфические негистоновые белки-репрессоры.

Отличительной особенностью гетерохроматиновых районов у дрозофилы является недорепликация (недопредставленность) ДНК в политенных хромосомах слюнных желёз. Единственным известным фактором, специфически влияющим на недорепликацию ДНК гетерохроматиновых районов, является ген Suppressor of UnderReplication (SuUR) (Belyaeva et al., 1998). Мутация данного гена приводит к полному подавлению недорепликации ДНК в интеркалярном гегерохроматине и частичному подавлению недорепликации в прицентромерном гетерохроматине, а дополнительные трансгенные копии нормального аллеля гена SuUR, напротив, вызывают усиление недорепликации ДНК (см. обзор Zhimulev and Belyaeva, 2003). Методом флуоресцентного иммуноокрашивания

политенных хромосом белок SUUR был обнаружен в районах прицентромерного, интеркалярного и теломерного гетерохроматина, а также в ядрышке. Однако, механизм его воздействия на процесс политенизации ДНК гетерохроматиновых районов пока не известен.

Цель и задачи

Целью данной работы является построение и последующее изучение профиля связывания белка SUUR с хромосомами культуры клеток эмбрионов Drosophila melanogaster, а также поиск белков, взаимодействующих с белком SUUR. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Выполнить картирование участков локализации белка SUUR на хромосомах культуры клеток эмбрионов дрозофилы посредством процедуры DamID (Dam Identification) в сочетании с технологией кДНК-микрочипов. Построить профиль связывания белка SUUR с хромосомами. Провести сравнительный анализ локализации белка SUUR в хромосомах и определить состояние транскрипционной активности его генов-мишеней с использованием ранее опубликованных данных.

2. Исследовать наличие взаимодействий между белком SUUR и основными негистоновыми белками гетерохроматина (НР1, PC и др.) с помощью метода дрожжевой двугибридной системы.

Научная новизна

В настоящей работе впервые осуществлено картирование участков локализации белка SUUR на хромосомах диплоидных клеток Drosophila melanogaster. Впервые участки локализации этого белка на хромосомах были выявлены в геномном масштабе с высокой степенью точности (порядка 2-5 т.п.н.). Установлена положительная корреляция между распределением белка SUUR и уровнем недорепликации ДНК в политенных хромосомах слюнных желёз. Выявлен первый непосредственный партнёр белка SUUR - белок НР1. Установлено, что для взаимодействия между этими двумя белками необходимы и достаточны средняя заряженная часть белка SUUR и С-концевая часть белка НР1, содержащая хромотеневой домен.

Научно-практическая значимость исследования

Результаты данной работы способствуют расширению фундаментальных знаний о компонентах хроматина, контролирующих процессы репликации и транскрипционной активности генов. Впервые обнаружено и охарактеризовано прямое физическое взаимодействие белка SUUR с другим белком гетерохроматина, а именно белком НР1. Полученные данные важны для понимания особенностей процесса репликации в районах гетерохроматина. Помимо этого, в данной работе выполнено полномасштабное картирование белков SUUR и НР1 и сравнительный анализ распределения этих и ряда других белков хроматина в хромосомах Drosophila melanogaster. В настоящее время эти данные активно используются в биоинформационных исследованиях, посвящённых картированию и предсказанию функционально значимых белковых кластеров в хромосомах Drosophila melanogaster.

Материалы данной диссергационной работы используются в курсах лекций для студентов биологических факультетов ряда вузов.

Апробация работы

Основные результаты данной работы были представлены на: семинаре ВОГиС «Актуальные проблемы генетики и селекции», 30 ноября 2005 г., Новосибирск, Россия; международной конференции «Физико-химическая биология», посвященной 80-летию со дня рождения академика Д.Г. Кнорре, 30 июля - 3 августа 2006 г., Новосибирск, Россия; международной молодежной научно-методической конференции «Проблемы молекулярной и клеточной биологии», 9-12 мая 2007 г., Томск, Россия; 8-ой международной конференции по гетерохроматину, 3-9 июня 2007 г., Губбио, Италия; международной конференции «Развитие эволюционной идеи в биологии, социологии и медицине», посвященной 90-летию со дня рождения академика Д.К. Беляева, 7 -9 августа 2007 г., Новосибирск, Россия; международной конференции «ДНК репликация и поддержание генома у оукариот», 5-9 сентября 2007 г., Колд Спринг Харбор, США; 20-ой европейской конференции по исследованию дрозофилы, 12 - 14 сентября 2007 г., Вена, Австрия; II Съезде Общества клеточной биологии совместно с Юбилейной конференцией, посвященной 50-летию Института цитологии РАН, 16-19 октября 2007 г., Санкт-Петербург, Россия.

Публикации

По теме диссертации опубликовано или находится в печати 5 работ.

Структура и объём диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов и обсуждения, а также выводов и списка цитируемой литературы, в который входит 288 ссылок. Работа изложена на 143 страницах машинописного текста, содержит 4 таблицы, 24 рисунка и приложения на 29 страницах.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы

Штаммы Saccharomyces cerevisiae. В работе были использованы ауксотрофные по гистидину, лейцину, триптофану и урацилу штаммы Saccharomyces cerevisiae EGY48 (МАТа, игаЗ, his3, trpl, LexAopl,6fLEU2), SKY473 (МАТа, игаЗ, his3, trpl, LexAopMfLEU2, cl(,3rLYS2) и SKY191 (МАТа, игаЗ, his3, trpl, LexA,lp(*2)-LEU2, cI(*3)-LYS2).

Культуры клеток Drosophila melanogaster. В работе были использованы культуры клеток Кс167 и S2, полученные из эмбриональных тканей Drosophila melanogaster (Echalier, 1997).

Плазмиды и кДНК-библиотека. В работе были использованы плазмидные векторы pNDamMyc, pCMycDam (van Steensel and Henikoff, 2000),

pEG202, pJK202 и pJG4-5 (Golemis et al, 2002); плазмиды f40 (Makimin et al., 2002), pNDamMycHP 1 a (van Steensel and Henikoff, 2000), pCSu(var)3-9MycDam (Greil et al., 2003), pJG4-5-HPl 6-95, pJG4-5-HPl 6-152, pJG4-5-HPl 95-206, pJG4-5-HP1 152-206, pEG202-SU(VAR)3-7 189-844, pEG202-SU(VAR)3-7 736-1169 (Delattre et al., 2000), pEG202-SU(VAR)3-9 1-569, pEG202-SU(VAR)3-9 81-635 (Schotta et al., 2002) и кДНК-библиотека RPLY1 (Finley et al., 1996).

Антитела. В работе были использованы мышиные моноклональные антитела 9Е10 к эпитопу Мус (Abeam, http://www.abcam.com/) и козьи поликлональные FITC-конъюгированные антитела к IgG мыши (Sigma-Aldrich, http://www.sigmaaldrich.com/).

кДНК-микрочипы. В работе были использованы кДНК-микрочипы, содержащие последовательности 11459 кДНК Drosophila melanogaster (Rubin et al., 2000; Stapleton et al., 2002).

Методики работы с рекомбинантной ДНК. В работе использовали стандартные методы расщепления ДНК эндонуклеазами рестрикции, электрофореза ДНК в агарозных гелях, конструирования рекомбинантных молекул ДНК, подготовки и последующей трансформации компетентных клеток Escherichia coli, наработки и выделения плазмидной ДНК. Нуклеотидные последовательности всех использованных в работе плазмид были проверены посредством секвенирования при помощи соответствующих праймеров и реактива «ABI PRISM Big Dye Terminator v3.0 Ready Reaction Cycle Sequencing Kit» (Applied Biosystems, http://www.appliedbiosystems.com/) в межинститутском центре секвенирования ДНК (ИХБиФМ СО РАН).

Процедура DamID. Процедуру DamLD, состоящую из серии трансфекций клеточной культуры набором плазмид, иммуноокрашивания клеток антителами к эпитопу Мус, выделения и амплификации метилированных фрагментов ДНК, выполняли в соответствии с ранее описанными протоколами (van Steensel and Henikoff, 2000; Greil et al., 2006).

Работа с дрожжевой двугибридной системой «Interaction trap». Трансформацию клеток Saccharomyces cerevisiae плазмидной ДНК, тесты на ДНК-связывающую активность химерных белков, содержащих ДНК-связывающий домен (ДСД) LexA, а также тесты на активацию генов-репортёров LEU2 и LacZ выполняли в соответствии со стандартными протоколами (Becker and Lundblad, 2002; Golemis et al., 2002).

Результаты и обсуждение

Локализация химерных белков Dam-SUUR и SUUR-Dam в клетках дрозофилы. Поскольку присоединение дополнительных аминокислотных остатков (а.о.) к N- или С-концу нативного белка (образование химеры) может привести к нарушению функции последнего, в наших экспериментах по картированию участков локализации белка SUUR в хромосомах клеток дрозофилы мы использовали две плазмидные конструкции: pDamMycSUUR и pSUURMycDam. Первая плазмидная конструкция кодирует химерный белок Dam-Myc-SIJUR (Dam-Мус), а вторая - химерный белок SUUR-Myc-Dam (SUUR-Dam), где Мус - это эпитоп Мус. В каждом случае экспрессия химерного

белка находится под контролем промотора гена теплового шока hsp70 Drosophila melanogaster. •

В отсутствие теплового шока (при температуре 23.5°С) промотор гена hsp70 обеспечивает в клетках дрозофилы очень низкий уровень транскрипции, что является необходим условием для успешного выполнения эксперимента DamID. Как следствие, при таких условиях невозможно детектировать химерные белки ни с помощью Вестерн-блот анализа, ни посредством иммуноокрашивания (van Steensel and Henikoff, 2000; Greil et al., 2006). С целью убедиться, что химерные белки Dam-SUUR и SUUR-Dam могут нарабатываться и локализоваться в ядрах трансфецированных клеток Кс167, мы подвергли клетки кратковременному тепловому шоку (1 час при 37 °С), дали им возможность восстановиться (5 часов при 23.5°С), после чего осуществили иммуноокрашивание антителами к эпитопу Мус.

Оказалось, что оба химерных белка (Dam-SUUR и SUUR-Dam) локализуются в клетках сходным образом. Они обнаруживаются исключительно в ядрах, причём наиболее интенсивные сигналы наблюдаются в районах хромоцентров (прицентромерного гетерохроматина). В то же время химерный белок Dam-Мус (Dam) присутствует как в ядрах, так и в цитоплазме клеток, что хорошо согласуется с литературными данными (van Steensel and Henikoff, 2000).

Картирование участков локализации белка SUUR в хромосомах клеток Кс167. В соответствии с процедурой DamID, мы осуществили трансфекцию клеток культуры Кс167 «контрольной» плазмидой pNDamMyc, а также двумя «экспериментальными» плазмидами pDamMycSUUR и pSUURMycDam. Трансфецированные клетки инкубировали в течение 24 часов при 23.5°С, после чего выделяли геномную ДНК. На следующем этапе выщепляли метилированные фрагменты ДНК из основной массы неметилированной ДНК путём гидролиза эндонуклеазой рестрикции Dprtl и амплифицировали после лигирования к их концам специфического олигонуклеотидного адаптера. «Контрольные» и «экспериментальные» образцы метили разными флуоресцентными красителями и гибридизовали на кДНК-микрочипы, содержащие последовательности 11459-и различных кДНК Drosophila melanogaster. Для каждого химерного белка (Dam-SUUR и SUUR-Dam) было выполнено по 4 независимых эксперимента, начиная со стадии трансфекции клеток. Чтобы учесть ошибку гибридизации, вызванную наличием флуоресцентного красителя в составе пробы, в половине экспериментов для мечения «экспериментального» образца использовали флуорохром СуЗ, а во второй половине - флуорохром Су5. Полученные в результате 8-ми экспериментов данные были нормированы и усреднены. Необработанные результаты гибридизаций на кДНК-микрочипы, а также нормированные данные были помещены в базу данных ArrayExpress (http://www.ebi.ac.uk/arrayexpress/) под идентификационным номером Е-МЕХР-863.

Отношение «экспериментального» сигнала к «контрольному» сигналу (SUUR~Dam:Dam) было использовано в качестве меры связывания белка SUUR с каждой пробой. Используя ранее описанную модель ошибок (Greil et al., 2003), мы обнаружили, что белок SUUR связывается с 3001-й пробой (далее «гены-мишени белка SUUR»). Гены-мишени белка SUUR часто располагаются на

хромосомах рядом друг с другом (Рисунок 1). Это свидетельствует о том, что белок БЦиЛ, вероятно, связан с протяжёнными районами хромосом.

I 2 5 ' 5 6 7 8 Ч 10 II I! 13 14 IS 1» Диша ciucrepa (в шик)

Рисунок 1. Белок SUUR ассоциирован с протяжёнными кластерами генов. Гистограмма отображает распределение генов-мишеней белка SUUR но кластерам генов разной длины.

Гены-мишени белка SUUR являются преимущественно транскрипционно неактивными и реплицируются ближе к концу S-фазы клеточного цикла. Ранее было показано, что в политенных хромосомах слюнных желёз белок SUUR ассоциирован с районами поздней репликации, в которых располагаются преимущественно транскрипционно неактивные гены (см. обзор Zhimulev et ah, 2003а). Чтобы проанализировать транскрипционную активность и время репликации генов-мишеней белка SUUR в клетках культуры Кс167, мы воспользовались соответствующими данными, полученными Шубелером с соавторами (Schubeler et al., 2002). Информация оказалась доступна для примерно одной трети генов-мишеней белка SUUR (для 1034 генов).

Результаты проведённого сравнения показали, что только около 30% генов-мишеней белка SUUR активно транскрибируются в клетках культуры Кс167, в то время как среди генов-не-мишеней активно транскрибируются более 70% (Рисунок 2А). Это указывает на то, что белок SUUR связан, в основном, с транскрипционно неактивными генами (статистическая значимость: Р = 4><10"'6', гипергеометрический тест). Помимо этого, гены-мишени белка SUUR реплицируются в S-фазе клеточного цикла существенно позднее по сравнению с генами-не-мишенями (статистическая значимость: Р = 4x10"56, тест Вилкоксона по ранжированию сумм) (Рисунок 2Б).

Далее мы сравнили распределение белка SUUR в хромосомах клеток культуры Кс167 с ранее изученными распределениями маркёров активного состояния хроматина: H3-di-meK4, H3-tri-meK4, НЗ-Ас, Н4-Ас и H3-di-K79 (Schubeler et al., 2002). Информация оказалась доступна для 1034 генов-мишеней белка SUUR. Оказалось, что гены-мишени белка SUUR существенно обеднены наличием перечисленных модификаций гистонов по сравнению с генами-немишенями (статистическая значимость соответственно: Р = 9х 10'168, Р = 8х10"Ь2,

Р = 2х10'1Ю, Р- 1хЮ"'59 иР = 1хЮ"249, тест Вилкоксона по ранжированию сумм) (Рисунок ЗА,Б).

& 40 6

з 20 и

99 о 2 0

1 1.5

с>

3 1.0

0.5

мишени не мишени

-2 0 -10 0 10

Ьу7(лсрв;|Я Ь'З Я (|шы-последняя 1'3 5 фшы)

Рисунок 2 Гены-мишени белка 81ЛЖ преимущественно транскрипционно неактивны, и реплицируются существенно позднее генов-не-мишеней. (А) Белые прямоугольники отображают доли транскрипционно активных генов, а чёрные - доли транскрипционно неактивных генов. (Б) График плотности распределения времени репликации генов-мишеней (серая линия) и генов-ие-мишеней (чёрная линия) белка 5ШЖ. По оси абсцисс - соотношение количества фрагментов ДНК, реплицированных в первой трети $-фази клеточного цикла, к количеству фрагментов той же ДНК, реплицированных в последней трети Б-фазы, в логарифмическом масштабе. По оси ординат - удельное количество генов в условных еденицах.

А Б В

(о£2(Уровень модификации I кетонд)

Рисунок 3. Гены-мишени белка БШЖ обеднены модификациями гистонов НЗ-с1|-теК4 (Л) и НЗ-с1|-теК79 (Б), характерными для активного состояния хроматина и, напротив, обогащены модификацией Н34п-теК27 (В), характерной для неактивного состояния хроматина. Графики плотностей распределения модификаций гистонов по генам-мишеням (серая линия) и генам-не-мишеням (чёрная линия) белка виия. По оси абсцисс - уровень модификации гистона в логарифмическом масштабе. По оси ординат - удельное количество генов в условных еденицах.

Напротив, гены-мишени белка SUUR оказались специфически обогащены H3-tri-meK27 (статистическая значимость: Р < 2.2x10'16, тест Вилкоксона по ранжированию сумм) (Рисунок ЗВ) - маркйром неактивного состояния хроматина, присутствие которого сопряжено с PcG-зависимой репрессией (Tolhuis et al., 2006). Полученные данные указывают на возможную связь между PcG-зависимой репрессией и присутствием белка SUUR.

Высокая корреляция между распределениями белка SUUR и белков группы Polycomb в хромосомах дрозофилы. Ранее методом иммуноокрашивания политенных хромосом было показано, что белок SUUR и белки группы Polycomb (PcG) имеют высокий процент совместной локализации: 67% сайтов связывания белка SUUR являются одновременно сайтами связывания белков группы Polycomb (Zhimulev et al., 2003b). Это свидетельствует о том, что эти белки могут быть ассоциированы с одними и теми же последовательностями ДНК в геноме дрозофилы. Чтобы проверить эту гипотезу, мы воспользовались недавно опубликованными данными по распределению в хромосомах клеток культуры Кс167 трёх белков группы Polycomb - PC, ESC и SCE (Tolhuis et al., 2006). Проведя сравнительный анализ, мы обнаружили, что профиль связывания белка SUUR с хромосомами действительно положительно коррелирует с таковыми белков PC, ESC и SCE (коэффициент корреляции Спирмана соответственно: р = 0.60, р = 0.62 и р = 0.27). 52% генов-мишеней белка PC (785 генов) и 59% генов-мишеней белка ESC (624 гена) являются также генами-мишенями белка SUUR. С последовательностями 439 генов ассоциированы все три белка (Рисунок 4А).

Умеренная корреляция между распределениями белка SUUR и белков НР1 и SU(VAR)3-9 в хромосомах дрозофилы. Поскольку в политенных хромосомах слюнных желёз значительная доля белка SUUR локализуется в области прицентромерного гетерохроматина, нас интересовало насколько похожими являются профили связывания с хромосомами белка SUUR и белков прицентромерного гетерохроматина в клетках культуры Кс167, Профили связывания белков НР1 и SU(VAR)3-9 были изучены ранее при помощи ДНК-микрочипов, содержащих примерно 6300 проб - кДНК и некодирующие последовательности ДНК (Greil et al., 2003). С целью получить более полную картину связывания белка НР1 с хромосомами клеток Кс167 мы выполнили процедуру DamID, аналогичную описанной выше для белка SUUR, используя «экспериментальную» плазмиду pNDamMycHPla (van Steensel and Henikoff, 2000). Всего было выполнено 3 независимых эксперимента. Необработанные результаты гибридизаций на кДНК-микрочипы, а также нормированные данные были помещены в базу данных ArrayExpress (http://www.ebi.ac.uk/arrayexpress/) под идентификационным номером Е-МЕХР-864. 1094 пробы были идентифицированы как гены-мишени белка НР1.

Сравнительный анализ выявил умеренную положительную корреляцию между профилем связывания белка SUUR с хромосомами и таковыми белков НР1 и SU(VAR)3-9 (коэффициент корреляции Спирмана соответственно: р = 0.31 и р = 0.46). 46% генов-мишеней белка НР1 (504 гена) и 61% генов-мишеней белка SU(VAR)3-9 (69 генов) являются также генами-мишенями белка SUUR (Рисунок 4Б).

В Г

Рисунок 4. Множество генов-мишеней белка SUUR значительно перекрывается со множествами генов-мишеней белков PC, НР1 и LAM, тогда как последние перекрываются незначительно. Диаграммы Венна, отображающие наличие общих генов-мишеней у белков SUUR, PC и ESC (Л), SUUR и НР1 (S), SUUR и LAM (В), PC, 11PI и LAM (Г). В правом нижнем углу каждой диаграммы указано общее число исследованных генов.

Необходимо отметить, что ассоциация белка SUUR с последовательностями ДНК прицентромерного гетерохроматина не исследовалась в данной работе из-за особенностей использованных ДНК-микрочипов. Поэтому полученные нами корреляции распределений белков SUUR и НР1 в хромосомах, равно как и белков SUUR и SU(VAR)3-9-, скорее всего, существенно занижены.

Высокая корреляция мезвду распределениями белков SUUR и LAM в хромосомах дрозофилы. Белок LAM (B-type lamin, Lamín DmO) является важным компонентом внутренней ядерной оболочки. Недавно было изучено его распределение в хромосомах клеток Кс167 (Pickersgill et al., 2006). Это позволило нам провести сравнительный анализ и обнаружить достаточно высокую положительную корреляцию между распределениями белков SUUR и LAM в хромосомах дрозофилы (коэффициент корреляции Спирмана: р = 0.51). 71% генов-мишеней белка LAM (330 генов) одновременно являются генами-мишенями белка SUUR (Рисунок 4В). Мы также обнаружили что 92% (48 из 52) протяжённых кластеров генов-мишеней белка LAM, прокартированных

Пикерсгил с соавторами (Pickersgill et al., 2006), соответствуют ранее картированным районам интеркалярного гетерохроматина в политенных хромосомах слюнных желёз (Zhiraulev et al., 2003b). Более того, мы установили, что 24 кластера генов-мишеней белка LAM располагаются в районах, ДНК которых недопредставлена в политенных хромосомах (Belyakin et al., 2005).

Интересно отметить, что множества генов-мишеней белков PC, НР1 и LAM перекрываются незначительно (Рисунок 4Г). Всего 118 генов являются одновременно мишенями для белков SUUR, PC и LAM и лишь 18 - для белков SUUR, НР1 и LAM.

Таким образом, гены-мишени белка SUUR могут быть условно поделены по меньшей мере на четыре неперекрывающиеся подгруппы. Первая и вторая подгруппы ассоциированы соответственно с хорошо изученными белками-репрессорами PC и НР1. Третья подгруппа образована генами интеркалярного гетерохроматина, располагающимися на периферии ядра. Остальные гены-мишени белка SUUR (четвёртая подгруппа), вероятно, также ассоциированы с белками гетерохроматина. Таким образом, мы полагаем, что белок SUUR является уникальным маркёром всех типов гетерохроматина у дрозофилы.

Профиль связывания белка SUUR с хромосомами клеток Кс167 отрицательно коррелирует с профилем недорепликации ДНК политенных хромосом. Ранее Белякиным с соавторами был построен профиль недорепликации ДНК политенных хромосом слюнных желёз (Belyakin et al., 2005). Использовав эги данные, мы обнаружили умеренную отрицательную корреляцию между уровнем политенизации ДНК политенных хромосом и связыванием белка SUUR с хромосомами клеток Кс167 (Рисунок 5).

ssnasssai н imi * s * к s i ti ss sssi f* н>м#а;юя

Рисунок 5. Отрицательная корреляция между профилем связывания белка 5ииЯ с хромосомами клеток культуры Кс167 и профилем политенизации ДНК политенных хромосом слюнных желёз. Приведен фрагмент хромосомы 2Ь длиной 11.3 м.п.н. Цитологические районы отмечены над графиком, а координаты исследованных последовательностей ДНК в соответствии с третьей версией аннотации генома Огохоркйа melanogaster (Се1шкег й а!., 2002) - под графиком. Для построения графика данные были отсортированы согласно их расположению в хромосомах и обработаны с помощью скользящего окна размером 10 генов с шагом в один ген. Данные по политенизации ДНК отображены чёрными точками, а данные по связыванию белка БииЯ - серыми. Протяжённые районы недорепликации ДНК (Ве1уак'т с1 а)., 2005) ограничены вертикальными пунктирными линиями и отмечены прямоугольниками с надписью «1Ж».

Коэффициенты корреляции Пирсона составили -0.368, -0.478, -0.418, -0.320 и -0.352 соответственно для хромосом X, 2Ь, 211, ЗЬ и ЗЯ. Это первое наблюдение зависимости степени недорепликацией ДНК от количества присутствующего белка 81ЛЛ1 на молекулярном уровне. Оно хорошо согласуется с полученными ранее результатами, демонстрирующими зависимость степени недорепликации ДНК комплекса ВНкогах от дозы гена Биия (МобЫсш е1 а1., 2001; 2Ыши1еу е1 а1., 2003Ь).

Активность генов-мишеней белка виия в онтогенезе дрозофилы. Мы проанализировали транскрипционную активность генов-мишеней белка 81ЛЖ в развитии йгохоркИа melanogaster, используя соответствующие ранее опубликованные данные (ЛгЬсйшап е1 а!., 2002). Информация оказалась доступна для 744 геиов-мишеней белка 8ШЖ. Оказалось, что этн гены-мишени белка виия в среднем транскрипционно неактивны на эмбриональной стадии развития. На последующих стадиях они постепенно активируются и достигают максимального уровня экспрессии у взрослых самцов, в то же время у взрослых самок они снова транскрипционно неактивны (Рисунок 6). Ранее было установлено, что похожим образом экспрессируются гены, которые располагаются в 52-х районах, характеризующихся недорепликацией ДНК в политенных хромосомах слюнных желёз (Ве1уак1п с! а1., 2005).

Рисунок 6. Белок SUUR ассоциирован с генами, репрессированными на эмбриональной стадии развития. Приведены усреднённые значения экспрессии 744 генов-мишеней белка SUUR на протяжении онтогенеза дрозофилы. «Э» - эмбриональная стадия развития, «Л» - личиночная стадия, «К» - стадия куколки, «И<?» - взрослые самцы, «И?» - взрослые самки. Чёрные прямоугольники обозначают этапы развития, на которых обнаруживается существенная разница в экспрессии между генами-мишенями и генами-не-мишенями белка SUUR (статистическая значимость: Р < 0.01, тест Вилкоксона по ранжированию сумм с поправкой Бонферрони).

Поиск партнёров белка SUUR с помощью скрининга кДНК-библиотеки. Чтобы найти партнёров белка SUUR с помощью метода дрожжевой двугибридной системы «Interaction trap», необходимо экспрессировать в клетках Saccharomyces cerevisiae соответствующую «приманку» - химерный белок (ДСД

LexA)-(SUUR 1-962), состоящий из ДСД белка LexA и полноразмерного белка SUUR (а.о. 1-962), и «добычу» - химерный белок, состоящий из АД белка В42 и тестируемого белка-партнёра. С этой целью мы создали плазмидную конструкцию pJK202-SUUR 1-962, позволяющую экспрессировать химерный белок (ДСД LexA)-(SUUR 1-962) под контролем конститутивного промотора гена ADH1 Saccharomyces cerevisiae.

С целью обнаружить партнёры белка SWR мы трансформировали клетки штамма SKY191 плазмидой pJK202-SUUR 1-962 и кДНК-библиотекой RFLY1 (Finley et al., 1996). Последняя представлет собой набор плазмид, кодирующих химерные белки (АД В42)-Х, где X может бьггь любым белком, экспрессирующимся на эмбриональной стадии развития дрозофилы. Всего было получено около 300 тысяч клонов трансформированных дрожжей. Только 96 из них оказались способны расти на селективной среде, лишённой лейцина, и лишь в 12-ти наблюдалась активация транскрипции второго гена-репортёра LacZ.

Из таких клонов мы выделили плазмидные ДНК, произошедшие из кДНК-библиотеки. Определение последовательности нуклеотидов показало, что 11 плазмид кодируют белок НР1 и 1 плазмида - особую изоформу белка eIF3-S9 (eIF3-S9-TIIP23). Одна из плазмид, кодирующих белок НР1 получила название «pJG4-5-HPl 6-206», а плазмида, кодирующая изоформу белка eIF3-S9 - «pJG4-5-eIF3-S9-THP23».

Далее мы подтвердили специфичность взаимодействия между белками SUUR и НР1 при помощи реципрокного геста. Для этого мы создали плазмиды PJK202-HP1 6-206 и pJG4-5-SUUR 1-962. Первая плазмида позволяет экспрессировать химерный белок (ДСД LexA)-(HPl 6-206) под контролем конститутивного промотора гена ADH1 Saccharomyces cerevisiae, а вторая -химерный белок (АД B42)-(SUUR 1-962) под контролем индуцируемого галактозой (и репрессируемого глюкозой) промотора гена GAL1 Saccharomyces cerevisiae. Только сочетание данных химерных белков в клетках дрожжей приводило к активации экспрессии гена-репортёра LEU2 (Рисунок 7).

Следует отметить, что рост дрожжей в реципрокном тесте был заметно слабее, что, по-видимому, обусловлено умеренным токсическим эффектом химерного белка (ДСД LexA)-(HPl 6-206) - дрожжи, эспрессирующие этот химерный белок, растут существенно медленнее остальных использованных культур даже на неселекгивной среде.

Картирование доменов, опосредующих взаимодействие между белками SUUR и НР1. С целью прокартировать участок белка SUUR, вовлечённый во взаимодействие с белком НР1, мы сконструировали плазмидные конструкции pJK202-SUUR 1-672, pJK202-SUUR 1-222, pJK202-SUUR 198-338 и pJK202-SUUR 339-671, позволяющие экспрессировать следующие химерные белки: (ДСД LcxA)-(SUUR 1-672), (ДСД LexA)-(SUUR 1-222), (ДСД LexA)-(SUUR 198-338) и (ДСД LexA)-(SUUR 339-671). Взаимодействие с химерным белком (АД В42)-(НР1 6-206) показали химерные белки (ДСД LexA)-(SUUR 1672) и (ДСД LexA)-(SUUR 339-671). Это позволяет предполагать, что для взаимодействия с белком НР1 необходима и достаточна средняя часть белка SUUR (а.о. 339-671), которая содержит кластеры положительно и отрицательно заряженных а.о., а также сигналы ядерной локализации.

Конструкция с ДСД

Конструкция САД

-Leu

1.1 1 10 1 100 1.1000

SUUR 1-Э62

SUUR 1-962

НР1 6-208

НР1 6-206

SUUR 1-962

НР1 6-206

Рисунок 7. Взаимодействие между белками SUUR и НР1 в дрожжевой двугибридной системе. Взаимодействие было исследовано в прямом тесте (первые три ряда) и реципрокном тесте (последние три ряда). Для этого дрожжи, трансформированные указанными плазмидными конструкциями, были выращены в жидкой среде до плотности 2x10° кл./мл и затем высеяны серией последовательных разведений (1:1, 1:10, 1:100, 1:1000) на селективную среду, лишённую лейцина и содержащую галактозу. Чашки со средой без лейцина инкубировали 7 суток при 30°С, а чашки со средой, содержащей X-Gal - 4 суток при 30°С. Каждый квадрат представляет-собой участок чашки Петри, на который были высеяны дрожжи. При добавлении в селективную среду глюкозы вместо галактозы роста дрожжей обнаружено не было.

С целью прокартировать участок белка НР1, вовлечённый во взаимодействие с белком SUUR, мы использовали полученные ранее плазмидные конструкции pJG4-5-HPl 6-95, pJG4-5-HPl 6-152, pJG4-5-HPl 95206 и pJG4-5-HPl 152-206 (Delattre et al., 2000), позволяющие экспрессировать следующие химерные белки: (АД В42)-(НР1 6-95), (АД В42)-(НР1 6-152), (АД В42)-(НР1 95-206) и (АД В42)-(НР1 152-206). Взаимодействие с химерным белком (ДСД LexA)-(SUUR 1-962) показал только химерный белок (АД В42)-(НР1 95-206). Это свидетельствует о том, что для взаимодействия с белком SUUR необходим целый хромотеневой домен а также, возможно, и часть шарнирного домена белка HP 1.

Полученные нами данные но взаимодействию между белками SUUR и НР1 подтверждают показанное ранее генетическое взаимодействие между генами SuUR и Su(var)2-5 (Болдырева, 2007).

Известно, что белок НР1 способен димеризоваться и непосредственно взаимодействовать с целым рядом белков, среди которых: SU(VAR)3-7, SU(VAR)3-9, НР2, НРЗ, НР4, НР5, НОАР и др. В настоящей работе мы установили, что белок НР1 способен взаимодействовать с белком SUUR. Поскольку один и тот же участок белка НР1 (а.о. 95-206) вовлечён во взаимодействия с белками НР2, НОАР, SU(VAR)3-7, SU(VAR)3-9 и SUUR, то

можно предполагать, что последние конкурируют друг с другом за связывание с белком НР1, например, в процессе формирования структуры гетерохроматина.

Особенности взаимодействия между белками SUUR и eIF3-S9-THP23. Взаимодействие между белками SUUR и eIF3-S9-THP23, обнаруженное в скрининге, характеризовалось рядом особенностей. Во-первых, химерный белок (АД B42)-eIF3-S9-THP23 активировал транскрипцию гена-репортёра LacZ даже в отсутствие химерного белка (ДСД LexA)-(SUUR 1-962). Во-вторых, химерный белок (АД B42)-eIF3-S9-THP23 взаимодействовал с химерными белками (ДСД LexA)-(SUUR 1-962) и (ДСД LexA)-(SUUR 198-338) и не взаимодействовал с промежуточным вариантом - химерным белком (ДСД LexA)-(SUUR 1-672). Эти данные указывают на то, что в одном из экспериментов был получен ложно-положительный результат. Таким образом, данные о физическом взаимодействии между белками SUUR и eIF3-S9-THP23 требуют подтверждения в дальнейших экспериментах по генетическому взаимодействию.

Поиск партнёров белка SUUR среди белков-кандидатов. Поскольку нельзя исключить вероятность того, что скрининг выявил не все партнёры белка SUUR, мы провели несколько дополнительных тестов на взаимодействие между белком SUUR и некоторыми белками-кандидатами. В качестве таковых были выбраны белки, для которых имеются косвенные данные, указывающие на их взаимодействие с белком SUUR: CG18563 (взаимодействие с белком SUUR в дрожжевой двугибридной системе «Clontech MatchMaker»; Giot et al., 2003), PC (совместная локализация с белком SUUR в районах интеркалярного гетерохроматина; Zhimulev et al., 2003b), SU(VAR)3-7, SU(VAR)3-9 (локализация в районах прицентромерного гетерохроматина; Delattre et al., 2000; Schotta et al., 2002) и SUUR (данные по генетическому взаимодействию; Kolesnikova et al., 2005).

Для этого были созданы плазмидные конструкции pJG4-5-CG18563 и pJG4-5-PC, позволяющие экспрессировать химерные белки: (АД B42)-CG 18563 и (АД В42)-РС. В тестах на взаимодействия были использованы следующие сочетания плазмид: pJK202-SUUR 1-962 и pJG4-5-SUUR 1-962 - для проверки взаимодействия SUUR-SUUR; pJK202-SUUR 1-962 и pJG4-5-CG18563 - для проверки взаимодействия SUUR-CG18563; pJK202-SUUR 1-962 и pJG4-5-PC -для проверки взаимодействия SUUR-PC; pEG202-SU(VAR)3-7 189-844, pEG202-SU(VAR)3-7 736-1169 (Delattre et al., 2000) и pJG4-5-SUUR 1-962 - для проверки взаимодействия SUUR-SU(VAR)3-7; pEG202-SU(VAR)3-9 1-569, pEG202-SU(VAR)3-9 81-635 (Schotta et al., 2002) и pJG4-5-SUUR 1-962 - для проверки взаимодействия SUUR-SU(VAR)3-9. Результаты всех этих тестов оказались отрицательными.

Поскольку нам не удалось подтвердить ранее открытое взаимодействие между белками SUUR и CG18563 (Giot et al., 2003), вопрос о взаимодействии этих белков остаётся открытым. Возможно, что полученный нами отрицательный результат обусловлен особенностями использованной дрожжевой двугибридной системы «Interaction trap» (Stanyon et al., 2004).

выводы

1. Построен профиль связывания белка SUUR с хромосомами диплоидных клеток культуры Кс167 Drosophila melanogaster. Точность картирования составила около 2-5 т.п.н.

2. Обнаружена положительная корреляция между распределением белка SUUR в хромосомах диплоидных клеток и уровнем недорешшкации ДНК в политенных хромосомах слюнных желёз.

3. Установлено, что распределение белка SUUR в хромосомах положительно коррелирует с распределениями белков гетерохроматина НР1 и SU(VAR)3-9, белков группы Polycomb и белком внутренней ядерной оболочки LAM.

4. Идентифицированы около 3 тысяч генов-мишеней белка SUUR. Показано, что большинство из них сгруппированы в кластеры длиной до 15 генов и реплицируются ближе к концу S-фазы клеточного цикла.

5. Анализ усреднённого паттерна экспрессии генов-мишеней белка SUUR на протяжении онтогенеза дрозофилы показал, что эти гены репрессированы первые 16 часов эмбрионального развития, после чего постепенно активируются, достигая максимальных уровней экспрессии на стадии куколки и у взрослых самцов, и повторно репрессированы у взрослых самок.

6. Установлено, что белок SUUR способен напрямую взаимодействать с белком НР1. Показано, что для данного взаимодействия необходимы и достаточны средняя часть белка SUUR (а.о. 339-504), обогащенная заряженными а.о., и С-концевая часть белка НР1 (а.о. 95-206), содержащая хромотеневой домен.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Колесникова Т.Д., Андреева Е.Н., Пиндюрин А.В., Ананько Н.Г., Белякин С.Н., Шлома В.В., Юрлова А.А., Макунин И.В., Похолкова Г.В., Волкова Е.И., Заруцкая Е.А., Кокоза Е.Б., Семешин В.Ф., Беляева Е.С., Жимулёв И.Ф. Ген SuUR и его участие в организации эпигенетически репрессированных районов хромосом Drosophila melanogaster // Генетика. 2006. Т.42. № 8. С.1013-1028.

2. Pindyurin А.V., Moorman С., de Wit Е., Belyakin S.N., Belyaeva E.S., Christophides G.K., Kafatos F.C., van Steensel В., Zhimulev, I.F. SUUR joins separate subsets of PcG, HP1 and B-type lamin targets in Drosophila // J. Cell Sci. 2007. V.120(14). P.2344-2351.

3. Pindyurin A.V., Boldyreva L.V., Shloma V.V., Kolesnikova T.D., Pokholkova G.V., Andreyeva E.N., Kozhevnikova E.N., Ivanoschuk I.G., Zarutskaya E.A., Demakov S.A., Gorchakov A.A., Belyaeva E.S., Zhimulev I.F. Interaction between the Drosophila heterochromatin proteins SUUR and HP1 // J. Cell Sci. 2008. V.121(10). P.1693-1703.

4. Жимулёв И.Ф., Беляева E.C., Андреенкова Н.Г., Андреева Е.Н., Белякин С.Н., Болдырева JI.B., Брусенцова И.В., Волкова Е.И., Демаков С.А., Демакова О.В., Заруцкая Е.А., Зыков И.А., Кокоза Е.Б., Колесникова Т.Д., Комор У.А,, Коряков Д.Е, Макунин И.В., Пиндюрин А.В., Похолкова Г.В., Семешин В.Ф., Шлома В.В., Юрлова А.А. Ген SuUR - уникальный инструмент для изучения структуры и организации хромосом и генома дрозофилы // Вестник ВОГиС. 2008. Т.12. № 1/2. С.127-148.

5. Andreyenkova N.G., Kokoza Е.В., Belyaeva E.S., Demakov S.A., Pindyurin A.V., Semeshin V.F., Andreyeva E.N., Volkova E.I., Zhimulev I.F. Molecular and cytogenetic dissection of the 75C intercalary heterochromatin region in Drosophila melanogaster polytene chromosomes // Chromosoma. в печати.

Подписано к печати 15.10.2008

Формат бумаги 60x90 1/16. Печ. л. 1. Уч. изд. л. 07

Тираж 100 экз. Заказ 109

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН 630090, Новосибирск, пр. ак. Лаврентьева, 10.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Пиндюрин, Алексей Валерьевич

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Введение. Эухроматин и гетерохроматин

1.1. Гетерохроматин

1.1.1. Цитогенетические свойства прицентромерного гетерохроматина

1.1.2. Цитогенетические свойства интеркалярного гетерохроматина

1.1.3. Особенности организации гетерохроматина на нуклеосомном уровне 1 б

1.1.4. Специфические негистоновые белки и молекулярные механизмы формирования прицентромерного гетерохроматина

1.1.5. Специфические негистоновые белки и молекулярная организация интеркалярного гетерохроматина

1.2. Современные методы исследования белков хроматина

1.2.1. Картирование участков локализации белков хроматина при помощи метода DamID

1.2.2. Исследования белок-белковых взаимодействий в дрожжевой двугибридной системе

1.3. Белок SUUR 41 Заключение и постановка задач

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы

2.1.1. Штаммы Escherichia coli

2.1.2. Штаммы Saccharomyces cerevisiae

2.1.3. Культуры клеток Drosophila melanogaster

2.1.4. Олигонуклеотиды

2.1.5. Плазмиды и кДНК-библиотека

2.1.6. Антитела

2.1.7. Ферменты

2.1.8. кДНК-микрочипы

2.2. Методы

2.2.1. Работа с культурами клеток Drosophila melanogaster AI

2.2.2. Выделение РНК и ОТ-ПЦР

2.2.3. Методики работы с рекомбинантной ДНК

2.2.4. Создание плазмидных конструкций

2.2.5. Процедура DamID

2.2.6. Подготовка проб, гибридизация и анализ кДНК-микрочипов

2.2.7. Работа с дрожжевой двугибридной системой «Interaction trap»

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Картирование и анализ участков локализации белка SUUR в хромосомах диплоидных клеток Drosophila melanogaster

3.1.1. Анализ транскрипционной активности гена SnUR в эмбриональных культурах Кс167 и S

3.1.2. ДНК-аденин-метилтрансферазная активность химерных белков Dam-SUUR и SUUR-Dam

3.1.3. Локализация химерных белков Dam-SUUR и SUUR-Dam в клетках дрозофилы

3.1.4. Картирование участков локализации белка SUUR в хромосомах клеток Кс

3.1.5. Гены-мишени белка SUUR являются преимущественно транскрипционно неактивными и реплицируются ближе к концу S-фазы клеточного цикла

3.1.6. Высокая корреляция между распределениями белка SUUR и белков группы Polycomb в хромосомах дрозофилы

3.1.7. Умеренная корреляция между распределениями белка SUUR и белков НР1 и SU(VAR)3-9 в хромосомах дрозофилы

3.1.8. Высокая корреляция между распределениями белков SUUR и LAM в хромосомах дрозофилы

3.1.9. Профиль связывания белка SUUR с хромосомами клеток Кс 167 отрицательно коррелирует с профилем недорепликации ДНК политенных хромосом

3.1.10. Активность генов-мишеней белка SUUR в онтогенезе дрозофилы

3.2. Поиск партнёров белка SUUR

3.2.1. Подбор условий для проведения экспериментов в дрожжевой двугибридной системе «Interaction trap»

3.2.2. Поиск партнёров белка SUUR с помощью скрининга кДНК-библиотеки

3.2.3. Картирование доменов, опосредующих взаимодействие между белками SUUR и НР

3.2.4. Особенности взаимодействия между белками SUUR и eIF3-S9-THP

3.2.5. Поиск партнёров белка SUUR среди белков-кандидатов

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. Картирование участков локализации белка SUUR на хромосомах диплоидных клеток

4.2. Выявление физического взаимодействия между белками SUUR и НР

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Белок Suppressor of Underreplication Drosophila мelanogaster: распределение в хромосомах и взаимодействие с другими белками"

Актуальность проблемы

Особый интерес представляет исследование гетерохроматина, отличающегося высоким уровнем компактизации ДНК, конденсированным состоянием на протяжении всего клеточного цикла, низким уровнем транскрипционной активности, ассоциацией с ядерной мембраной, поздним временем репликации в S-фазе клеточного цикла, а также наличием специфических негистоновых белков и особых модификаций гистонов (см. обзор Craig, 2005). Такое репрессированное состояние хроматина устанавливается на ранних этапах развития организма и в дальнейшем наследуется на протяжении многочисленных клеточных делений (так называемое «эпигенетическое наследование»). У Drosophila melanogaster — одного из модельных объектов для генетических исследований - около 30% генома формирует гетерохроматин, который локализован в прицентромерных областях хромосом (прицентромерный гетерохроматин), в районах теломер (теломерный гетерохроматин), а также в многочисленных сайтах, рассеянных вдоль эухроматиновых плеч хромосом (интеркалярный гетерохроматин). Прицентромерный гетерохроматин содержит относительно мало генов и представлен средне- и высокоповторёнными последовательностями ДНК (см. обзор Wallace and Orr-Weaver, 2005), а районы интеркалярного гетерохроматина соответствуют кластерам уникальных неактивных генов (Belyakin et al., 2005).

Отличительной особенностью гетерохроматиновых районов у дрозофилы является недорепликация (недопредставленность) ДНК в политенных хромосомах слюнных желёз.

Единственным известным фактором, специфически влияющим на недорепликацию ДНК гетерохроматиновых районов, является ген Suppressor of UnderReplication (SuUR) (Belyaeva et al., 1998). Мутация данного гена приводит к полному подавлению недорепликации ДНК в интеркалярном гетерохроматине и частичному подавлению недорепликации в прицентромерном гетерохроматине, а дополнительные трансгенные копии нормального аллеля гена SuUR, напротив, вызывают усиление недорепликации ДНК (см. обзор Zhimulev and Belyaeva, 2003). Методом флуоресцентного иммуноокрашивания политенных хромосом белок SUUR был обнаружен в районах прицентромерного, интеркалярного и теломерного гетерохроматина, а также в ядрышке. Однако, механизм его воздействия на процесс политенизации ДНК гетерохроматиновых районов пока не известен.

Цель работы

Научная новизна

Установлена положительная корреляция между распределением белка SUUR и уровнем недорепликации ДНК в политенных хромосомах слюнных желёз.

Выявлен первый непосредственный партнёр белка 8ШЖ - белок НР1. Установлено, что для взаимодействия между этими двумя белками необходимы и достаточны средняя заряженная часть белка 81ЛЖ и С-концевая часть белка НР1, содержащая хромотеневой домен.

Практическая ценность

Результаты данной работы способствуют расширению фундаментальных знаний о компонентах хроматина, контролирующих процессы репликации и транскрипционной активности генов. Впервые обнаружено и охарактеризовано прямое физическое взаимодействие белка 8ШЖ с другим белком гетерохроматина, а именно белком НР1. Полученные данные важны для понимания особенностей процесса репликации в районах гетерохроматина. Помимо этого, в данной работе выполнено полномасштабное картирование белков 81ЛЖ и НР1 и сравнительный анализ распределения этих и ряда других белков хроматина в хромосомах ПгояорИйа melanogaster. В настоящее время эти данные активно используются в биоинформационных исследованиях, посвященных картированию и предсказанию функционально значимых белковых кластеров в хромосомах Г)го5орЫ1а melanogaster.

Материалы данной диссертационной работы используются в курсах лекций для студентов биологических факультетов ряда вузов.

Публикации

Диссертация написана по материалам следующих публикаций:

1. Колесникова Т.Д., Андреева E.H., Пиндюрин A.B., Ананько Н.Г., Белякин С.Н., Шлома В.В., Юрлова A.A., Макунин И.В., Похолкова Г.В., Волкова Е.И., Заруцкая Е.А., Кокоза Е.Б., Семешин В.Ф., Беляева Е.С., Жимулёв И.Ф. Ген SuUR и его участие в организации эпигенетически репрессированных районов хромосом Drosophila melanogaster Н Генетика. 2006. Т.42. № 8. С. 1013-1028.

2. Pindyurin А.V., Moorman С., de Wit E., Belyakin S.N., Belyaeva E.S., Christophides G.K., Kafatos F.C., van Steensel В., Zhimulev, I.F. SUUR joins separate subsets of PcG, HP1 and B-type lamin targets in Drosophila II J. Cell Sei. 2007. V. 120(14). P.2344-2351.

3. Pindyurin A.V., Boldyreva L.V., Shloma V.V., Kolesnikova T.D., Pokholkova G.V., Andreyeva E.N., Kozhevnikova E.N., Ivanoschuk I.G., Zarutskaya E.A., Demakov S.A., Gorchakov A.A., Belyaeva E.S., Zhimulev I.F. Interaction between the Drosophila heterochromatin proteins SUURand HP1 // J. Cell Sei. 2008. V.121(10). P.1693-1703.

4. Жимулёв И.Ф., Беляева E.C., Андреенкова Н.Г., Андреева E.H., Белякин С.H., Болдырева Л.В., Брусенцова И.В., Волкова Е.И., Демаков С.А., Демакова О.В., Заруцкая Е.А., Зыков И.А., Кокоза Е.Б., Колесникова Т.Д., Комор У.А., Коряков Д.Е, Макунин И.В., Пиндюрин A.B., Похолкова Г.В., Семешин В.Ф., Шлома В.В., Юрлова A.A. Ген SuUR - уникальный инструмент для изучения структуры и организации хромосом и генома дрозофилы // Вестник ВОГиС. 2008. Т. 12. № 1/2. С. 127-148.

Апробация работы

Основные результаты данной работы были представлены:

1. В докладе на семинаре ВОГиС «Актуальные проблемы генетики и селекции», 30 ноября 2005 г., Новосибирск, Россия.

2. В докладе на международной конференции «Физико-химическая биология», посвященной 80-летию со дня рождения академика Д.Г. Кнорре, 30 июля - 3 августа 2006 г., Новосибирск, Россия.

3. В докладе и стендовых сообщениях на международной молодежной научно-методической конференции «Проблемы молекулярной и клеточной биологии», 9 — 12 мая 2007 г., Томск, Россия.

4. В стендовом сообщении на 8-ой международной конференции по гетерохроматину, 3-9 июня 2007 г., Губбио, Италия.

5. В докладе на международной конференции «Развитие эволюционной идеи в биологии, социологии и медицине», посвященной 90-летию со дня рождения академика Д.К. Беляева, 7-9 августа 2007 г., Новосибирск, Россия.

6. В докладе на международной конференции «ДНК репликация и поддержание генома у эукариот», 5-9 сентября 2007 г., Колд Спринг Харбор, США.

7. В стендовом сообщении на 20-ой европейской конференции по исследованию дрозофилы, 12-14 сентября 2007 г., Вена, Австрия.

8. В стендовом сообщении на II Съезде Общества клеточной биологии совместно с Юбилейной конференцией, посвященной 50-летию Института цитологии РАН, 16 — 19 октября 2007 г., Санкт-Петербург, Россия.

В материалах этих конференций опубликованы следующие тезисы:

1. Belyakin S.N., Pindyurin A.V., Christophides G.K., de Wit E., Moorman С., Belyaeva E.S., Kafatos F.C., van Steensel В., Zhimulev I. F. Co-regulation of highly specialized gene clusters in Drosophila melanogaster genome // Сборник трудов международной конференции «Физико-химическая биология», посвященной 80-летию со дня рождения академика Д.Г. Кнорре, 30 июля — 3 августа 2006 г. Новосибирск. С.31.

2. Пиндюрин A.B. Геномное картирование генов-мишеней белка SUUR Drosophila melanogaster И Сборник материалов международной молодежной научно-методической конференции «Проблемы молекулярной и клеточной биологии», 9 — 12 мая 2007 г. Томск. С. 139.

3. Пиндюрин A.B., Шлома В.В., Кожевникова E.H., Иванощук И.Г., Заруцкая Е.А. Поиск белков, взаимодействующих с белком SUUR Drosophila melanogaster, в дрожжевой двугибридной системе // Сборник материалов международной молодежной научно-методической конференции «Проблемы молекулярной и клеточной биологии», 9—12 мая 2007 г. Томск. С. 191.

4. Колесникова Т.Д., Андреева E.H., Пиндюрин A.B., Ананько Н.Г., Белякин С.Н., Шлома В.В., Юрлова A.A., Макунин И.В., Похолкова Г.В., Волкова Е.И., Заруцкая Е.А., Кокоза Е. Б., Семешин В.Ф., Беляева Е.С., Жимулёв И.Ф. Организация эпигенетически репрессированных районов хромосом Drosophila melanogaster II

Тезисы докладов международной конференции «Развитие эволюционной идеи в биологии, социологии и медицине», посвященной 90-летию со дня рождения академика Д.К. Беляева, 7-9 августа 2007 г. Новосибирск.

5. Andreyeva Е., Pindyurin A., Kolesnikova Т., Shloma V., Demakova О., Bouldyreva L., Pokholkova G., Belyaeva E., Zhimulev I. The SUUR protein affects late-replicating chromatin domains in Drosophila melanogaster II Abstracts of papers presented at the 2007 meeting on «Eukaryotic DNA replication & genome maintenance», September 5 -9. 2007. Cold Spring Harbor. New York. USA. P.223.

6. Zhimulev Г., Pindyurin A., Shloma V., Belyakin S., Boldyreva L., Kolesnikova Т., Belyaeva E. SUUR (Suppressor of underreplication): specific chromosome protein marking regions of intercalary heterochromatin // Europ. Dros. Res. Conf. 20. 2007. G028.

7. Похолкова Г.В., Болдырева Jl.В., Беляева Е.С., Колесникова Т.Д., Андреева Е.Н., Демаков С.А., Пиндюрин А.В. Взаимодействие гетерохроматиновых белков НР1 и SUUR в клетках слюнных желёз у Drosophila melanogaster II Тезисы докладов и сообщений, представленные на II Съезд Общества клеточной биологии совместно с Юбилейной конференцией, посвященной 50-летию Института цитологии РАН (16 - 19 октября 2007 г., Санкт-Петербург, Россия). Цитология. 2007. Т.49. № 9. С. 786787.

Вклад автора

Основные результаты получены автором самостоятельно. Анализ данных по локализации белка SUUR на хромосомах был выполнен при участии Э. де Вита (Нидерланды) и С.Н. Белякина. Эксперименты по изучению белок-белковых взаимодействий в дрожжевой двугибридной системе проводились как совместно с В.В. Шломой, так и самостоятельно.

Объём работы

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Пиндюрин, Алексей Валерьевич

ВЫВОДЫ

1. Построен профиль связывания белка SUUR с хромосомами диплоидных клеток культуры Кс 167 Drosophila melanogaster. Точность картирования составила около 2-5 т.п.н.

2. Обнаружена положительная корреляция между распределением белка SUUR в хромосомах диплоидных клеток и уровнем недорепликации ДНК в политенных хромосомах слюнных желёз.

5. Анализ усреднённого паттерна экспрессии генов-мишеней белка SUUR на протяжении онтогенеза дрозофилы показал, что эти гены репрессированы первые 6 часов эмбрионального развития, после чего постепенно активируются, достигая максимальных уровней экспрессии на стадии куколки и у взрослых самцов, и повторно репрессированы у взрослых самок.

6. Установлено, что белок SUUR способен напрямую взаимодействать с белком НР1. Показано, что для данного взаимодействия необходимы и достаточны средняя часть белка SUUR (а.о. 339-504), обогащённая заряженными а.о., и С-концевая часть белка НР1 (а.о. 95-206), содержащая хромотеневой домен.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Пиндюрин, Алексей Валерьевич, Новосибирск

1. Болдырева JLВ. Влияние гена SuUR на эффект положения и локализацию белковгетерохроматина в политенных хромосомах Drosophila melanogaster // Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук. Новосибирск. 2007. С.1-124.

2. Жимулёв И.Ф. Гетерохроматин и эффект положения гена // Новосибирск. Наука.1993. С. 1-489.

3. Adainson A.L., Shearn A. Molecular genetic analysis of Drosophila ash2, a member of thetrithorax group required for imaginal disc pattern formation // Genetics. 1996. V.144. P.621-633.

4. Akimaru H., Chen Y., Dai P., Hou D.X., Nonaka M., Smolik S.M., Armstrong S.,

5. Goodman R.H., Ishii S. Drosophila СВР is a co-activator of cubitus interruptus in hedgehog signalling //Nature. 1997a. V.386. P.735-738.

6. Akimaru H„ Hou D.X., Ishii S. Drosophila СВР is required for dorsal-dependent twistgene expression //Nat. Genet. 1997b. V.17. P.211-214.

7. Andreyeva E.N., Belyaeva E.S., Semeshin V.F., Pokholkova G.V., Zhimulev I.F. Threedistinct chromatin domains in telomere ends of polytene chromosomes in Drosophila melanogaster Tel mutants // J. Cell Sci. 2005. V.l 18. P.5465-5477.

8. Arbeitman M.N., Furlong E.E., Imam F., Johnson E., Null B.H., Baker B.S., Krasnow

9. M.A., Scott M.P., Davis R.W., White K.P. Gene expression during the life cycle of Drosophila melanogaster // Science. 2002. V.297. P.2270-2275.

10. Armstrong J.A., Papoulas O., Daubresse G., Sperling A.S., Lis J.T., Scott M.P., Tamkun

11. J.W. The Drosophila BRM complex facilitates global transcription by RNA polymerase II // EMBO J. 2002. V.21. P.5245-5254.

12. Badugu R., Shareef M.M., Kellum R. Novel Drosophila heterochromatin protein 1

13. HPl)/origin recognition complex-associated protein (HOAP) repeat motif in HP1/HOAP interactions and chromocenter associations // J. Biol. Chem. 2003. V.278. P.34491-34498.

14. Bantignies F., Goodman R.H., Smolik S.M. Functional interaction between the coactivator

15. Drosophila CREB-binding protein and ASH1, a member of the trithorax group of chromatin modifiers//Mol. Cell. Biol. 2000. V.20. P.9317-9330.

16. Barras F., Marinus M.G. The great GATC: DNA methylation in E. coli // Trends Genet.1989. V.5. P.139-143.

17. Becker D.M., Lundblad V. Introduction of DNA into Yeast Cells. In Current protocols inmolecular biology (ed. F.M. Ausubel) //New York: John Wiley & Sons, Inc. 2002. Unit 13.7.

18. Beisel C., Imhof A., Greene J., Kremmer E., Sauer F. Histone methylation by the

19. Drosophila epigenetic transcriptional regulator Ashl //Nature. 2002. V.419. P.857-862.

20. Bejarano F., Gonzalez I., Vidal M., Busturia A. The Drosophila RYBP gene functions as a

21. Polycomb-dependenttranscriptional repressor//Mech. Dev. 2005. V.122. P.l 118-1129.

22. Belyaeva E.S., Boldyreva L.V., Volkova E.I., Nanayev R.A., Alekseyenko A.A., Zhimulev

23. F. Effect of the Suppressor of Underreplication (SuUR) gene on position-effect variegation silencing in Drosophila melanogaster // Genetics. 2003. V.165. P. 1209-1220.

24. Belyaeva E.S., Zhimulev I.F., Volkova E.I., Alekseyenko A.A., Moshkin Y.M., Koryakov

25. D.E. Su(UR)ES: a gene suppressing DNA underreplication in intercalary and pericentric heterochromatin of Drosophila melanogaster polytene chromosomes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. V.95. P.7532-7537.

26. Belyakin S.N., Christophides G.K., Alekseyenko A.A., Kriventseva E.V., Belyaeva E.S.,

27. Nanayev R.A., Makunin I.V., Kafatos F.C., Zhimulev I.F. Genomic analysis of Drosophila chromosome underreplication reveals a link between replication control and transcriptional territories // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. V.102. P.8269-8274.

28. Benson M., Pirrotta V. The Drosophila zeste protein binds cooperatively to sites in manygene regulatory regions: implications for transvection and gene regulation // EMBO J. 1988. V.7. P.3907-3915.

29. Benyajati C., Mueller L., Xu N., Pappano M., Gao J., Mosammaparast M., Conklin D.,

30. Granok H., Craig C., Elgin S. Multiple isoforms of GAGA factor, a critical component of chromatin structure //Nucleic Acids Res. 1997. V.25. P.3345-3353.

31. Bernstein B.E., Humphrey E.L., Erlich R.L., Schneider R., Bouman P., Liu J.S.,

32. Kouzarides T., Schreiber S.L. Methylation of histone H3 Lys 4 in coding regions of active genes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. V.99. P.8695-8700.

33. Birve A., Sengupta A.K., Beuchle D., Larsson J., Kennison J.A., Rasmuson-Lestander A.,

34. Muller J. Su(z)12, a novel Drosophila Polycomb group gene that is conserved in vertebrates and plants // Development. 2001. V.128. P.3371-3379.

35. Blastyak A., Mishra R.K., Karch F., Gyurkovics H. Efficient and specific targeting of

36. Polycomb group proteins requires cooperative interaction between Grainyhead and Pleiohomeotic // Mol. Cell. Biol. 2006. V.26. P.1434-1444.

37. Bloch K.D., Grossmann B. Digestion of DNA with Restriction Endonucleases. In Currentprotocols in molecular biology (ed. F.M. Ausubel) //New York: John Wiley & Sons, Inc. 2002. Unit 3.1.

38. Bloyer S., Cavalli G., Brock H.W., Dura J.M. Identification and characterization ofpolyhomeotic PREs and TREs // Dev. Biol. 2003. V.261. P.426-442.

39. Bornemann D., Miller E., Simon J. The Drosophila Polycomb group gene Sex comb onmidleg (Scm) encodes a zinc finger protein with similarity to polyhomeotic protein // Development. 1996. V.122. P.1621-1630.

40. Boube M., Faucher C., Joulia L., Cribbs D.L., Bourbon H.M. Drosophila homologs oftranscriptional mediator complex subunits are required for adult cell and segment identity specification // Genes Dev. 2000. V.14. P.2906-2917.

41. Boube M., Joulia L., Cribbs D.L., Bourbon H.M. Evidence for a mediator of RNApolymerase II transcriptional regulation conserved from yeast to man // Cell. 2002. V.110. P.143-151.

42. Bray S.J., Kafatos F.C. Developmental function of Elf-1: an essential transcription factorduringembryogenesis in Drosophila//Genes Dev. 1991. V.5. P. 1672-1683.

43. Breen T.R., Harte P.J. Molecular characterization of the trithorax gene, a positive regulatorof homeotic gene expression in Drosophila // Mech. Dev. 1991. V.35. P.l 13-127.

44. Brent R., Ptashne M. A eukaryotic transcriptional activator bearing the DNA specificity ofa prokatyotic repressor//Cell. 1985. V.43. P.729-736.

45. Brideau N.J., Flores H.A., Wang J., Maheshwari S., Wang X., Barbash D.A. Two

46. Dobzhansky-Muller genes interact to cause hybrid lethality in Drosophila // Science. 2006. V.314. P. 1292-1295.

47. Brock H.W., Fisher C.L. Maintenance of gene expression patterns // Dev. Dyn. 2005.1. V.232. P.633-655.

48. Brovver-Toland B., Findley S.D., Jiang L., Liu L., Yin H., Dus M., Zhou P., Elgin S.C., Lin

49. H. Drosophila PIWI associates with chromatin and interacts directly with HPla // Genes Dev. 2007. V.21. P.2300-2311.

50. Brown J.L., Fritsch C., Mueller J., Kassis J.A. The Drosophila pho-like gene encodes a

51. YY1-related DNA binding protein that is redundant with pleiohomcotic in homeotic gene silencing // Development. 2003. V.130. P.285-294.

52. Brown J.L., Mucci D., Whiteley M., Dirksen M.L., Kassis J.A. The Drosophila Polycombgroup gene pleiohomeotic encodes a DNA binding protein with homology to the transcription factor YY1 // Mol. Cell. 1998. V.l. P. 1057-1064.

53. Brunk B.P., Martin E.C., Adler P.N. Drosophila genes Posterior Sex Combs and

54. Suppressor two of zeste encode proteins with homology to the murine bmi-1 oncogene // Nature. 1991a. V.353. P.351-353.

55. Busturia A., Lloyd A., Bejarano F., Zavortink M., Xin H., Sakonju S. The MCP silencer ofthe Drosophila Abd-B gene requires both Pleiohomeotic and GAGA factor for the maintenance of repression // Development. 2001. V.I 28. P.2I63-2I73.

56. Busturia A., Wightman C.D., Sakonju S. A silencer is required for maintenance oftranscriptional repression throughout Drosophila development // Development. 1997. V.l24. P.4343-4350.

57. Byrd K.N., Shearn A. ASH1, a Drosophila trithorax group protein, is required formethylation of lysine 4 residues on histone H3 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. V.l00. P.l 1535-11540.

58. Calgaro S., Boube M., Cribbs D.L., Bourbon H.M. The Drosophila gene taranis encodes anovel trithorax group member potentially linked to the cell cycle regulatory apparatus // Genetics. 2002. V. 160. P.547-560.

59. Canaple L., Decoville M., Leng M., Locker D. The Drosophila DSP1 gene encoding an

60. HMG 1-like protein: genomic organization, evolutionary conservation and expression // Gene. 1997. V.l84. P.285-290.

61. Celniker S.E., Wheeler D.A., Kronmiller B., Carlson J.W., Halpern A., Patel S„ Adams M.,

62. Champe M., Dugan S.P., Frise E., Hodgson A., George R.A., Hoskins R.A., Laverty T., Muzny D.M., Nelson C.R., Pacleb J.M., Park S., Pfeiffer B.D., Richards S., Sodergren

63. Chalkley G.E., Verrijzer C.P. Immuno-depletion and purification strategies to studychromatin-remodeling factors in vitro // Methods Enzymol. 2004. V.377. P.421-442.

64. Chan C.S., Rastelli L., Pirrotta V. A Polycomb response element in the Ubx gene thatdetermines an epigenetically inherited state of repression // EMBO J. 1994. V.13. P.2553-2564.

65. Chang Y.L., King B., Lin S.C., Kennison J.A., Huang D.H. A double-bromodomainprotein, FSH-S, activates the homeotic gene ultrabithorax through a critical promoter-proximal region // Mol. Cell. Biol. 2007. V.27. P.5486-5498.

66. Chang Y.L., Peng Y.H., Pan I.C., Sun D.S., King B., Huang D.H. Essential role of

67. Drosophila Hdacl in homeotic gene silencing // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. V.98. P.9730-9735.

68. Chen J.D., Pirrotta V. Multimerization of the Drosophila zeste protein is required forefficient DNA binding // EMBO J. 1993. V.12. P.2075-2083.

69. Chien C.T., Battel P.L., Sternglanz R., Fields S. The two-hybrid system: a method toidentify and clone genes for proteins that interact with a protein of interest // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. V.88. P.9578-9582.

70. Collins R.T., Treisman J.E. Osa-containing Brahma chromatin remodeling complexes arerequired for the repression of wingless target genes // Genes Dev. 2000. V.14. P.3140-3152.

71. Cox D.N., Chao A., Baker J., Chang L., Qiao D., Lin H. A novel class of evolutionarilyconserved genes defined by piwi are essential for stem cell self-renewal // Genes Dev. 1998. V.12. P.3715-3727.

72. Craig E.A., Ingolia T.D., Manseau L.J. Expression of Drosophila heat-shock cognate genesduring heat shock and development // Dev. Biol. 1983. V.99. P.418-426.

73. Craig J.M. Heterochromatin—many flavours, common themes // Bioessays. 2005. V.27.1. P. 17-28.

74. Crosby M.A., Miller C., Alon T., Watson K.L., Verrijzer C.P., Goldman-Levi R., Zak N.B.

75. The trithorax group gene moira encodes a brahma-associated putative chromatin-remodeling factor in Drosophila melanogaster // Mol. Cell. Biol. 1999. V.19. P.1159-1170.

76. Cryderman D.E., Grade S.K., Li Y., Fanti L., Pimpinelli S., Wallrath L.L. Role of

77. Drosophila HP1 in dichromatic gene expression // Dev. Dyn. 2005. V.232. P.767-774.

78. Czermin B., Melfi R., McCabe D., Seitz V., Imhof A., Pirrotta V. Drosophila enhancer of

79. Zeste/ESC complexes have a histone H3 methyltransferase activity that marks chromosomal Polycomb sites // Cell. 2002. V. 111. P. 185-196.

80. Danzer J.R., Wallrath L.L. Mechanisms of HP 1-mediated gene silencing in Drosophila //

81. Development. 2004. V.131. P.3571-3580.

82. Daubresse G., Deuring R., Moore L., Papoulas 0., Zakrajsek I., Waldrip W.R., Scott M.P.,

83. DeCamillis M., Cheng N.S., Pierre D., Brock H.W. The polyhomeotic gene of Drosophilaencodes a chromatin protein that shares polytene chromosome-binding sites with Polycomb//Genes Dev. 1992. V.6. P.223-232.

84. Decoville M., Giacomello E., Leng M., Locker D. DSP1, an HMG-Iike protein, is involvedin the regulation of homeotic genes // Genetics. 2001. V.157. P.237-244.

85. Dejardin J., Rappailles A., Cuvier O., Grimaud C., Decoville M., Locker D., Cavalli G.

86. Recruitment of Drosophila Polycomb group proteins to chromatin by DSP1 // Nature. 2005. V.434. P.533-538.

87. Delattre M., Spierer A., Jaquet Y., Spierer P. Increased expression of Drosophila Su(var)37 triggers Su(var)3-9-dependent heterochromatin formation // J. Cell Sci. 2004. V.117. P.6239-6247.

88. Delattre M., Spierer A., Tonka C.H., Spierer P. The genomic silencing of position-effectvariegation in Drosophila melanogaster: interaction between the heterochromatin-associated proteins Su(var)3-7 and HP1 // J. Cell Sci. 2000. V.l 13. P.4253-4261.

89. Dernburg A.F., Sedat J.W., Hawley R.S. Direct evidence of a role for heterochromatin inmeiotic chromosome segregation // Cell. 1996. V.86. P. 135-146.

90. Dimitri P., Corradini N., Rossi F., Verni F. The paradox of functional heterochromatin //

91. Bioessays. 2005. V.27. P.29-41.

92. Dingwall A.K., Beek S.J., McCallum C.M., Tamkun J.W., Kalpana G.V., Goff S.P., Scott

93. M.P. The Drosophila snrl and brm proteins are related to yeast SWI/SNF proteins and are components of a large protein complex // Mol. Biol. Cell. 1995. V.6. P.777-791.

94. Dura J.M., Brock H.W., Santamaría P. Polyhomeotic: a gene of Drosophila melanogasterrequired for correct expression of segmental identity // Mol. Gen. Genet. 1985. V.l98. P.213-220.

95. Dynlacht B.D., Attardi L.D., Admon A., Freeman M., Tjian R. Functional analysis of NTF1, a developmentally regulated Drosophila transcription factor that binds neuronal cis elements // Genes Dev. 1989. V.3. P. 1677-1688.

96. Echalier G. Drosophila cells in culture. //New York: Academic Press. 1997. P. 1-702.

97. Eissenberg J.C., Elgin S.C. The HP1 protein family: getting a grip on chromatin // Curr.

98. Opin. Genet. Dev. 2000. V.10. P.204-210.

99. Eissenberg J.C., James T.C., Foster-Hartnett D.M., Hartnett T., Ngan V., Elgin S.C.

100. Mutation in a heterochromatin-specific chromosomal protein is associated with suppression of position-effect variegation in Drosophila melanogaster // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. V.87. P.9923-9927.

101. Engebrecht J., Brent R., Kaderbhai M.A. Minipreps of Plasmid DNA. In Current protocolsin molecular biology (ed. F.M. Ausubel) // New York: John Wiley & Sons, Inc. 2002. Unit 1.6.

102. Espinas M.L., Canudas S., Fanti L., Pimpinelli S., Casanova J., Azorin F. The GAGAfactor of Drosophila interacts with SAP18, a Sin3-associated polypeptide // EMBO Rep. 2000. V.l. P.253-259.

103. Espinas M.L., Jimenez-Garcia E., Vaquero A., Canudas S., Bernues J., Azorin F. The Nterminal POZ domain of GAGA mediates the formation of oligomers that bind DNA with high affinity and specificity // J. Biol. Chem. 1999. V.274. P. 16461-16469.

104. Fanti L., Berloco M., Piacentini L., Pimpinelli S. Chromosomal distribution ofheterochromatin protein 1 (HP1) in Drosophila: a cytological map of euchromatic HP1 binding sites // Genetica. 2003. V.l 17. P. 135-147.

105. Farkas G., Gausz J., Galloni M., Reuter G., Gyurkovics H., Karch F. The Trithorax-likegene encodes the Drosophila GAGA factor // Nature. 1994. V.371. P.806-808.

106. Fauvarque M.O., Dura J.M. polyhomeotic regulatory sequences induce developmentalregulator-dependent variegation and targeted P-element insertions in Drosophila // Genes Dev. 1993. V.7. P.1508-1520.

107. Fauvarque M.O., Laurenti P., Boivin A., Bloyer S., Griffin-Shea R., Bourbon H.M., Dura

108. J.M. Dominant modifiers of the polyhomeotic extra-sex-combs phenotype induced by marked P element insertional mutagenesis in Drosophila // Genet. Res. 2001. V.78. P.137-148.

109. Fields S., Song O. A novel genetic system to detect protein-protein interactions // Nature.1989. V.340. P.245-246.

110. Finley R.L. Jr., Thomas B.J., Zipursky S.L., Brent R. Isolation of Drosophila cyclin D, aprotein expressed in the morphogenetic furrow before entry into S phase // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V.93. P.3011-3015.

111. Finney M., Nisson P.E., Rashtchian A. Molecular Cloning of PCR Products. In Currentprotocols in molecular biology (ed. F.M. Ausubel) //New York: John Wiley & Sons, Inc. 2002. Unit 15.4.

112. Fischle W., Wang Y., Jacobs S.A., Kim Y., Allis C.D., Khorasanizadeh S. Molecular basisfor the discrimination of repressive methyl-lysine marks in histone H3 by Polycomb and HP1 chromodomains//Genes Dev. 2003. V.17. P.1870-1881.

113. Francis N.J., Saurín A.J., Shao Z., Kingston R.E. Reconstitution of a functional corepolycomb repressive complex // Mol. Cell. 2001. V.8. P.545-556.

114. Frei E., Baumgartner S., Edstrom J.E., Noll M. Cloning of the extra sex combs gene of

115. Drosophila and its identification by P-element-mediated gene transfer // EMBO J. 1985. V.4. P.979-987.

116. Fritsch C., Beuchle D., Muller J. Molecular and genetic analysis of the Polycomb groupgene Sex combs extra/Ring in Drosophila// Mech. Dev. 2003. V.120. P.949-954.

117. Ghosh D., Gerasimova T.I., Corees V.G. Interactions between the Su(Hvv) and Mod(mdg4)proteins required for gypsy insulator function // EMBO J. 2001. V.20. P.2518-2527.

118. Gildea J.J., Lopez R., Shearn A. A screen for new trithorax group genes identified littleimaginal discs, the Drosophila melanogaster homologue of human retinoblastoma binding protein 2 // Genetics. 2000. V.156. P.645-663.

119. Gindhart J.G. Jr., Kaufman T.C. Identification of Polycomb and trithorax group responsiveelements in the regulatory region of the Drosophila homeotic gene Sex combs reduced // Genetics. 1995. V.139. P.797-8I4.

120. Gingras A.C., Aebersold R., Raught B. Advances in protein complex analysis using massspectrometry//J. Physiol. 2005. V.563. P. 11-21.

121. Giot L., Bader J.S., Brouwer C., Chaudhuri A., Kuang B., Li Y., Hao Y.L., Ooi C.E.,

122. Goodson M.L., Farboud B., Privalsky M.L. An improved high throughput protein-proteininteraction assay for nuclear hormone receptors // Nucl. Recept. Signal. 2007. V.5. e002.

123. Gorfinkiel N., Fanti L., Melgar T., Garcia E., Pimpinelli S., Guerrero I., Vidal M. The

124. Drosophila Polycomb group gene Sex combs extra encodes the ortholog of mammalian Ringl proteins // Mech. Dev. 2004. V.121. P.449-462.

125. Greil F., de Wit E., Bussemaker H.J., van Steensel B. HP1 controls genomic targeting offour novel heterochromatin proteins in Drosophila // EMBO J. 2007. V.26. P.741-751.

126. Greil F., Moorman C., van Steensel B. DamID: mapping of in vivo protein-genomeinteractions using tethered DNA adenine methyltransferase // Methods Enzymol. 2006. V.410. P.342-359.

127. Greil F., van der Kraan I., Delrow J., Smothers J.F., de Wit E., Bussemaker H.J., van Driel

128. R., Henikoff S., van Steensel B. Distinct HP1 and Su(var)3-9 complexes bind to sets of developmentally coexpressed genes depending on chromosomal location // Genes Dev. 2003. V. 17. P.2825-2838.

129. Grewal S.I., Jia S. Heterochromatin revisited //Nat. Rev. Genet. 2007. V.8. P.35-46.

130. Grienenberger A., Miotto B., Sagnier T., Cavalli G., Schramke V., Geli V., Mariol M.C.,

131. Berenger H., Graba Y., Pradel J. The MYST domain acetyltransferase Chameau functions in epigenetic mechanisms of transcriptional repression // Curr. Biol. 2002. V.12. P.762-766.

132. Gu J.Y., Park J.M., Song E.J., Mizuguchi G., Yoon J.H., Kim-Ha J., Lee K.J., Kim Y.J.

133. Novel Mediator proteins of the small Mediator complex in Drosophila SL2 cells // J. Biol. Chem. 2002. V.277. P.27154-27161.

134. Gutierrez L., Zurita M., Kennison J.A., Vazquez M. The Drosophila trithorax group genetonalli (tna) interacts genetically with the Brahma remodeling complex and encodes an SP-RING Finger protein // Development. 2003. V.130. P.343-354.

135. Gyuris J., Golemis E., Chertkov H., Brent R. Cdil, a human G1 and S phase proteinphosphatase that associates with Cdk2 // Cell. 1993. V.75. P.791-803.

136. Hagstrom K., Muller M., Schedl P. A Polycomb and GAGA dependent silencer adjoins the

137. Fab-7 boundary in the Drosophila bithorax complex // Genetics. 1997. V.146. P. 13651380.

138. Hammond M.P., Laird C.D. Chromosome structure and DNA replication in nurse andfollicle cells of Drosophila melanogaster// Chromosoma. 1985. V.91. P.267-278.

139. Haynes S.R., Mozer B.A., Bhatia-Dey N., Dawid I.B. The Drosophila fsh locus, a maternaleffect homeotic gene, encodes apparent membrane proteins // Dev. Biol. 1989. V.134. P.246-257.

140. HeitzE. Das Heterochromatin der Moose //Jb. Wiss. Bot. 1928. V.69. P.762-818.

141. Hilliker A.J., Appels R., Schalet A. The genetic analysis of D. melanogasterheterochromatin// Cell. 1980. V.21. P.607-619.

142. Hiragami K., Festenstein R. Heterochromatin protein 1: a pervasive controlling influence //

143. Cell. Mol. Life Sci. 2005. V.62. P.2711-2726.

144. Hochstrasser M., Sedat J.W. Three-dimensional organization of Drosophila melanogasterinterphase nuclei. II. Chromosome spatial organization and gene regulation // J. Cell Biol. 1987. V.104. P.1471-1483.

145. Hodgson J.W., Cheng N.N., Sinclair D.A., Kyba M., Randsholt N.B., Brock H.W. Thepolyhomeotic locus of Drosophila melanogaster is transcriptionally and post-transcriptionally regulated during embryogenesis // Mech. Dev. 1997. V.66. P.69-81.

146. Horard B., Tatout C., Poux S., Pirrotta V. Structure of a polycomb response element and invitro binding of polycomb group complexes containing GAGA factor // Mol. Cell. Biol. 2000. V.20. P.3187-3197.

147. Horowitz H., Berg C.A. The Drosophila pipsqueak gene encodes a nuclear BTB-domaincontaining protein required early in oogenesis // Development. 1996. V.122. P. 18591871.

148. Hoskins R.A., Carlson J.W., Kennedy C., Acevedo D., Evans-Holm M., Frise E., Wan

149. K.H., Park S., Mendez-Lago M., Rossi F., Villasante A., Dimitri P., Karpen G.H., Celniker S.E. Sequence finishing and mapping of Drosophila melanogaster heterochromatin // Science. 2007. V.316. P. 1625-1628.

150. Hoskins R.A., Smith C.D., Carlson J.W., Carvalho A.B., Halpern A., Kaminker J.S.,

151. Kennedy C., Mungall C.J., Sullivan B.A., Sutton G.G., Yasuhara J.C., Wakimoto B.T., Myers E.W., Celniker S.E., Rubin G.M., Karpen G.H. Heterochromatic sequences in a Drosophila whole-genome shotgun assembly // Genome Biol. 2002. V.3. RESEARCH0085.

152. Huang D.H., Chang Y.L. Isolation and characterization of CHRASCH, a polycombcontaining silencing complex // Methods Enzymol. 2004. V.377. P.267-282.

153. Huang D.H., Chang Y.L., Yang C.C., Pan I.C., King B. pipsqueak encodes a factoressential for sequence-specific targeting of a polycomb group protein complex // Mol. Cell. Biol. 2002. V.22. P.6261-6271.

154. Jacobs S.A., Khorasanizadeh S. Structure of HP1 chromodomain bound to a lysine 9methylated histone H3 tail // Science. 2002. V.295. P.2080-2083.

155. James T.C., Eissenberg J.C., Craig C., Dietrich V., Hobson A., Elgin S.C. Distributionpatterns of HP1, a heterochromatin-associated nonhistone chromosomal protein of Drosophila // Eur. J. Cell Biol. 1989. V.50. P.170-180.

156. James T.C., Elgin S.C. Identification of a nonhistone chromosomal protein associated withheterochromatin in Drosophila melanogaster and its gene // Mol. Cell. Biol. 1986. V.6. P.3862-3872.

157. Janody F., Lee J.D., Jahren N., Hazelett D.J., Benlali A., Miura G.I., Draskovic I.,

158. Treisman J.E. A mosaic genetic screen reveals distinct roles for trithorax and polycomb group genes in Drosophila eye development // Genetics. 2004. V.166. P. 187-200.

159. Janody F., Martirosyan Z., Benlali A., Treisman J.E. Two subunits of the Drosophilamediator complex act together to control cell aifinity // Development. 2003. V.130. P.3 691-3701.

160. Jones C.A., Ng J., Peterson A.J., Morgan K., Simon J., Jones R.S. The Drosophila esc and

161. E(z) proteins are direct partners in polycomb group-mediated repression // Mol. Cell. Biol. 1998. V.18. P.2825-2834.

162. Jones R.S., Gelbart W.M. The Drosophila Polycomb-group gene Enhancer of zestecontains a region with sequence similarity to trithorax // Mol. Cell. Biol. 1993. V.13. P.6357-6366.

163. Kal A.J., Mahmoudi T., Zak N.B., Verrijzer C.P. The Drosophila brahma complex is anessential coactivator for the trithorax group protein zeste // Genes Dev. 2000. V.14. P.1058-1071.

164. Kankel M.W., Duncan D.M., Duncan I. A screen for genes that interact with the

165. Drosophila pair-rule segmentation gene fushi tarazu // Genetics. 2004. V.168. P. 161-180.

166. Kassis J.A. Pairing-sensitive silencing, polycomb group response elements, and transposonhoming in Drosophila // Adv. Genet. 2002. V.46. P.421-438.

167. Kehle J., Beuchle D., Treuheit S., Christen B., Kennison J.A., Bienz M., Muller J. dMi-2, ahunchback-interacting protein that functions in polycomb repression // Science. 1998. V.282. P. 1897-1900.

168. Kennison J.A., Tamkun J.W. Dosage-dependent modifiers of polycomb and antennapediamutations in Drosophila // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. V.85. P.8136-8140.

169. Ketel C.S., Andersen E.F., Vargas M.L., Suh J., Strome S., Simon J.A. Subunitcontributions to histone methyltransferase activities of fly and worm polycomb group complexes//Mol. Cell. Biol. 2005. V.25. P.6857-6868.

170. Kinstrie R., Lochhead P.A., Sibbet G., Morrice N., Cleghon V. dDYRK2 and Minibraininteract with the chromatin remodelling factors SNR1 and TRX // Biochem. J. 2006. V.398. P.45-54.

171. Kladde M.P., Simpson R.T. Chromatin structure mapping in vivo using methyltransferases

172. Methods Enzymol. 1996. V.274. P.214-233.

173. Klymenko T., Papp B., Fischle W., Kocher T., Schelder M., Fritsch C., Wild B., Wilm M„

174. Muller J. A Polycomb group protein complex with sequence-specific DNA-binding and selective methyl-lysine-binding activities // Genes Dev. 2006. V.20. P. 1110-1122.

175. Kodjabachian L., Delaage M., Maurel C., Miassod R., Jacq B., Rosset R. Mutations in ccf,a novel Drosophila gene encoding a chromosomal factor, affect progression through mitosis and interact with Pc-G mutations // EMBO J. 1998. V.17. P. 1063-1075.

176. Kolesnikova T.D., Makunin I.V., Volkova E.T., Pirrotta V., Belyaeva E.S., Zhimulev I.F.

177. Functional dissection of the Suppressor of UnderReplication protein of Drosophila melanogaster: identification of domains influencing chromosome binding and DNA replication // Gcnetica. 2005. V.124. P. 187-200.

178. Kouzarides T. Chromatin modifications and their function // Cell. 2007. V.128. P.693-705.

179. Kramer M.F., Coen D.M. Enzymatic Amplification of DNA by PCR: Standard Proceduresand Optimization. In Current protocols in molecular biology (ed. F.M. Ausubel) // New York: John Wiley & Sons, Inc. 2002. Unit 15.1.

180. Krauss V., Reuter G. Two genes become one: the genes encoding heterochromatin protein

181. Su(var)3-9 and translation initiation factor subunit eIF-2gamma are joined to a dicistronic unit in holometabolic insects // Genetics. 2000. V.156. P. 1157-1167.

182. Kyba M., Brock H.W. The Drosophila polycomb group protein Psc contacts ph and Pcthrough specific conserved domains // Mol. Cell. Biol. 1998a. V.18. P. 2712-2720.

183. Kyba M., Brock H.W. The SAM domain of polyhomeotic, RAE28, and scm mediatesspecific interactions through conserved residues // Dev. Genet. 1998b. V.22. P.74-84.

184. Lall S. Primers on chromatin //Nat. Struct. Mol. Biol. 2007. V.14. P.l 110-1115.

185. Lehmann M., Siegmund T., Lintermann K.G., Korge G. The pipsqueak protein of

186. Drosophila melanogaster binds to GAGA sequences through a novel DNA-binding domain //J. Biol. Chem. 1998. V.273. P.28504-28509.

187. Lewis E.B. A gene complex controlling segmentation in Drosophila //Nature. 1978. V.276.1. P.565-570.

188. Lim J., Lee O.K., Hsu Y.C., Singh A., Choi K.W. Drosophila TRAP230/240 are essentialcoactivators for Atonal in retinal neurogenesis // Dev. Biol. 2007. V.308. P.322-330.

189. Lin H., Spradling A.C. A novel group of pumilio mutations affects the asymmetric divisionof germline stem cells in the Drosophila ovary // Development. 1997. V.124. P.2463-2476.

190. Lonie A., D Andrea R., Paro R., Saint R. Molecular characterisation of the Polycomblikegene of Drosophila melanogaster, a trans-acting negative regulator of homeotic gene expression//Development. 1994. V.120. P.2629-2636.

191. Lopez A., Higuet D., Rosset R., Deutsch J., Peronnet F. corto genetically interacts with Pc

192. G and trx-G genes and maintains the anterior boundary of Ultrabithorax expression in Drosophila larvae // Mol. Genet. Genomics. 2001. V.266. P.572-583.

193. Lu B.Y., Emtage P.C., Duyf B.J., Hilliker A.J., Eissenberg J.C. Heterochromatin protein 1is required for the normal expression of two heterochromatin genes in Drosophila // Genetics. 2000. V.155. P.699-708.

194. Lu B.Y., Ma J., Eissenberg J.C. Developmental regulation of heterochromatin-mediatedgene silencing in Drosophila // Development. 1998. V.125. P.2223-2234.

195. Makunin I.V., Volkova E.I., Belyaeva E.S., Nabirochkina E.N., Pirrotta V., Zhimulev I.F.

196. The Drosophila suppressor of underreplication protein binds to late-replicating regions of polytene chromosomes // Genetics. 2002. V.160. P. 1023-1034.

197. Marenda D.R., Zraly C.B., Dingwall A.K. The Drosophila Brahma (SWI/SNF) chromatinremodeling complex exhibits cell-type specific activation and repression functions // Dev. Biol. 2004. V.267. P.279-293.

198. Mazo A.M., Huang D.H., Mozer B.A., Dawid I.B. The trithorax gene, a trans-actingregulator of the bithorax complex in Drosophila, encodes a protein with zinc-binding domains // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. V.87. P.2112-2116.

199. McNairn A.J., Gilbert D.M. Epigenomic replication: linking epigenetics to DNAreplication // Bioessays. 2003. V.25. P.647-656.

200. Melnikova L., Juge F., Gruzdeva N., Mazur A., Cavalli G., Georgiev P. Interactionbetween the GAGA factor and Mod(mdg4) proteins promotes insulator bypass in Drosophila//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004. V.101. P.l 4806-14811.

201. Mihaly J., Mishra R.K., Karch F. A conserved sequence motif in Polycomb-responseelements//Mol. Cell. 1998. V.l. P.1065-1066.

202. Miotto B., Sagnier T., Berenger H., Bohmann D., Pradel J., Graba Y. Chameau HAT and

203. DRpd3 HDAC function as antagonistic cofactors of JNK/AP-1-dependent transcription during Drosophila metamorphosis // Genes Dev. 2006. V.20. P. 101-112.

204. Mis J., Ner S.S., Grigliatti T.A. Identification of three histone methyltransferases in

205. Drosophila: dG9a is a suppressor of PEV and is required for gene silencing // Mol. Genet. Genomics. 2006. V.275. P.513-526.

206. Mishra K., Chopra V.S., Srinivasan A., Mishra R.K. Trl-GAGA directly interacts with lolalike and both are part of the repressive complex of Polycomb group of genes // Mech. Dev. 2003. V.120. P.681-689.

207. Mishra R.K., Mihaly J., Barges S., Spierer A., Karch F., Hagstrom K., Schweinsberg S.E.,

208. Schedl P. The iab-7 polycomb response element maps to a nucleosome-free region of chromatin and requires both GAGA and pleiohomeotic for silencing activity // Mol. Cell. Biol. 2001. V.21. P.1311-1318.

209. Misteli T. Spatial positioning; a new dimension in genome function // Cell. 2004. V.119.1. P. 153-156.

210. Mohd-Sarip A., Venturini F., Chalkley G.E., Verrijzer C.P. Pleiohomeotic can linkpolycomb to DNA and mediate transcriptional repression // Mol. Cell. Biol. 2002. V.22. P.7473-7483.

211. Mohrmann L., Langenberg K., Krijgsveld J., Kal A.J., Heck A.J., Verrijzer C.P.

212. Differential targeting of two distinct SWI/SNF-related Drosophila chromatin-remodeling complexes //Mol. Cell. Biol. 2004. V.24. P.3077-3088.

213. Mollaaghababa R., Sipos L., Tiong S.Y., Papoulas O., Armstrong J.A., Tamkun J.W.,

214. Bender W. Mutations in Drosophila heat shock cognate 4 are enhancers of Polycomb // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. V.98. P.3958-3963.

215. Moshkin Y.M., Alekseyenko A.A., Semeshin V.F., Spierer A., Spierer P., Makarevich

216. G.F., Belyaeva E.S., Zhimulev I.F. The bithorax complex of Drosophila melanogaster: Underreplication and morphology in polytene chromosomes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. V.98. P.570-574.

217. Mozer B.A., Dawid I.B. Cloning and molecular characterization of the trithorax locus of

218. Drosophila melanogaster // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. V.86. P.3738-3742.

219. Muller J., Hart C.M., Francis N.J., Vargas M.L., Sengupta A., Wild B., Miller E.L.,

220. O'Connor M.B., Kingston R.E., Simon J.A. Histone methyltransferase activity of a Drosophila Polycomb group repressor complex // Cell. 2002. V.l 11. P. 197-208.

221. Muller J., Kassis J.A. Polycomb response elements and targeting of Polycomb groupproteins in Drosophila // Curr. Opin. Genet. Dev. 2006. V.l6. P.476-484.

222. Negre N., Hennetin J., Sun L.V., Lavrov S., Bellis M., White K.P., Cavalli G.

223. Chromosomal distribution of PcG proteins during Drosophila development // PLoS Biol. 2006. V.4. el70.

224. Nekrasov M., Klymenko T., Fraterman S., Papp B., Oktaba K., Kocher T., Cohen A.,

225. Stunnenberg H.G., Wilm M., Muller J. Pcl-PRC2 is needed to generate high levels of H3-K27 trimethylation at Polycomb target genes // EMBO J. 2007. V.26. P.4078-4088.

226. Nekrasov M., Wild B., Muller J. Nucleosome binding and histone methyltransferaseactivity of Drosophila PRC2 // EMBO Rep. 2005. V.6. P.348-353.

227. Nishimura A., Morita M., Nishimura Y., Sugino Y. A rapid and highly efficient method forpreparation of competent Escherichia coli cells //Nucleic Acids Res. 1990. V.18. P.6169.

228. Nishioka K., Chuikov S., Sarma K., Erdjument-Bromage H., Allis C.D., Tempst P.,

229. Reinberg D. Set9, a novel histone H3 methyltransferase that facilitates transcription by precluding histone tail modifications required for heterochromatin formation // Genes Dev. 2002. V.16. P.479-489.

230. Noma K., Allis C.D., Grewal S.I. Transitions in distinct histone H3 methylation patterns atthe heterochromatin domain boundaries // Science. 2001. V.293. P.l 150-1155.

231. O'Connell S., Wang L., Robert S., Jones C.A., Saint R., Jones R.S. Polycomblike PHDfingers mediate conserved interaction with enhancer of zeste protein // J. Biol. Chem. 2001. V.276. P.43065-43073.

232. Pak D.T., Pflumm M., Chesnokov I., Huang D.W., Kellum R., Marr J., Romanowski P.,

233. Botchan M.R. Association of the origin recognition complex with heterochromatin and HP1 in higher eukaryotes//Cell. 1997. V.91. P.311-323.

234. Pal-Bhadra M., Leibovitch B.A., Gandhi S.G., Rao M., Bhadra U„ Birchler J.A., Elgin S.C.

235. Heterochromatic silencing and HP1 localization in Drosophila are dependent on the RNAi machinery // Science. 2004. V.303. P.669-672.

236. Papoulas O., Beek S.J., Moseley S.L., McCallum C.M., Sarte M., Shearn A., Tamkun J.W.

237. The Drosophila trithorax group proteins BRM, ASH1 and ASH2 are subunits of distinct protein complexes // Development. 1998. V.125. P.3955-3966.

238. Parada L., Misteli T. Chromosome positioning in the interphase nucleus // Trends Cell

239. Biol. 2002. V.12. P.425-432.

240. Park J.M., Gim B.S., Kim J.M., Yoon J.H., Kim H.S., Kang J.G., Kim Y.J. Drosophila

241. Mediator complex is broadly utilized by diverse gene-specific transcription factors at different types of core promoters // Mol. Cell. Biol. 2001. V.21. P.2312-2323.

242. Paro R., Hogness D.S. The Polycomb protein shares a homologous domain with aheterochromatin-associated protein of Drosophila // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. V.88. P.263-267.

243. Peterson A.J., Kyba M., Bornemann D., Morgan K., Brock H.W., Simon J. A domainshared by the Polycomb group proteins Scm and ph mediates heterotypic and homotypic interactions//Mol. Cell. Biol. 1997. V.17. P.6683-6692.

244. Petruk S., Sedkov Y., Riley K.M., Hodgson J., Schweisguth F., Hirose S., Jaynes J.B.,

245. Brock H.W., Mazo A. Transcription of bxd noncoding RNAs promoted by trithorax represses Ubx in cis by transcriptional interference // Cell. 2006. V.127. P.1209-1221.

246. Petruk S., Sedkov Y., Smith S., Tillib S., Kraevski V., Nakamura T., Canaani E., Croce

247. C.M., Mazo A. Trithorax and dCBP acting in a complex to maintain expression of a homeotic gene // Science. 2001. V.294. P. 1331-1334.

248. Pickersgill H., Kalverda B., de Wit E., Talhout W., Fornerod M., van Steensel B.

249. Characterization of the Drosophila melanogaster genome at the nuclear lamina // Nat. Genet. 2006. V.38. P.1005-1014.

250. Pirrotta V., Manet E., Hardon E., Bickel S.E., Benson M. Structure and sequence of the

251. Drosophila zeste gene // EMBO J. 1987. V.6. P.791-799.

252. Pirrotta V., Rastelli L. White gene expression, repressive chromatin domains and homeoticgene regulation in Drosophila // Bioessays. 1994. V.16. P.549-556.

253. Pokholkova G.V., Makunin I.V., Belyaeva E.S., Zhimulev I.F. Observations on theinduction of position effect variegation of euchromatic genes in Drosophila melanogaster // Genetics. 1993. V.134. P.231-242.

254. Poux S., Melfi R., Pirrotta V. Establishment of Polycomb silencing requires a transientinteraction between PC and ESC // Genes Dev. 2001. V.15. P.2509-2514.

255. Proutski V., Holmes E.C. Primer Master: a new program for the design and analysis of

256. PCR primers//Comput. Appl. Biosci. 1996. V. 12. P.253-255.

257. Puig O., Caspary F., Rigaut G., Rutz B., Bouveret E., Bragado-Nilsson E., Wilm M.,

258. Seraphin B. The tandem affinity purification (TAP) method: a general procedure of protein complex purification // Methods. 2001. V.24. P.218-229.

259. Rachez C., Freedman L.P. Mediator complexes and transcription // Curr. Opin. Cell Biol.2001. V.13.P.274-280.

260. Rastelli L., Chan C.S., Pirrotta V. Related chromosome binding sites for zeste, suppressorsof zeste and Polycomb group proteins in Drosophila and their dependence on Enhancer of zeste function // EMBO J. 1993. V.12. P. 1513-1522.

261. Reuter G., Giarre M., Farah J., Gausz J., Spiercr A., Spierer P. Dependence of positioneffect variegation in Drosophila on dose of a gene encoding an unusual zinc-finger protein //Nature. 1990. V.344. P.219-223.

262. Ringrose L., Paro R. Epigenetic regulation of cellular memory by the Polycomb and

263. Trithorax group proteins // Annu. Rev. Genet. 2004. V.38. P.413-443.

264. Royzman I., Orr-Weaver T.L. S phase and differential DNA replication during Drosophilaoogenesis // Genes Cells. 1998. V.3. P.767-776.

265. Rozenblatt-Rosen O., Rozovskaia T., Burakov D., Sedkov Y., Tillib S., Blechman J.,

266. Nakamura T., Croce C.M., Mazo A., Canaani E. The C-terminal SET domains of ALL-1 and TRITHORAX interact with the INI1 and SNR1 proteins, components of the SWI/SNF complex// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. V.95. P.4152-4157.

267. Rozovskaia T., Rozenblatt-Rosen O., Sedkov Y., Burakov D., Yano T., Nakamura T.,

268. Petruck S., Ben-Simchon L., Croce C.M., Mazo A., Canaani E. Self-association of the SET domains of human ALL-1 and of Drosophila TRITHORAX and ASH1 proteins // Oncogene. 2000. V.19. P.351-357.

269. Rozovskaia T., Tillib S., Smith S., Sedkov Y., Rozenblatt-Rosen O., Petruk S., Yano T.,

270. Nakamura T., Ben-Simchon L., Gildea J., Croce C.M., Shearn A., Canaani E., Mazo A. Trithorax and ASH1 interact directly and associate with the trithorax group-responsive bxd region ofthe Ultrabithorax promoter// Mol. Cell. Biol. 1999. V.19. P.6441-6447.

271. Rubin G.M., Hong L., Brokstein P., Evans-Holm M., Frise E., Stapleton M., Harvey D.A.

272. A Drosophila complementary DNA resource // Science. 2000. V.287. P.2222-2224.

273. Rudolph T„ Yonezawa M., Lein S., Heidrich K., Kubicek S., Schafer C., Phalke S.,

274. Walther M., Schmidt A., Jenuwein T., Reuter G. Heterochromatin formation in drosophila is initiated through active removal of H3K4 methylation by the LSD1 homolog SU(VAR)3-3 // Mol. Cell. 2007. V.26. P. 103-115.

275. Salvaing J., Decoville M., Mouchel-Vielh E., Bussiere M., Daulny A., Boldyreva L.,

276. Zhimulev I., Locker D., Peronnet F. Corto and DSP1 interact and bind to a maintenance element of the Scr Hox gene: understanding the role of Enhancers of trithorax and Polycomb // BMC Biol. 2006. V.4. 9.

277. Salvaing J., Lopez A., Boivin A., Deutseh J.S., Peronnet F. The Drosophila Corto proteininteracts with Polycomb-group proteins and the GAGA factor // Nucleic Acids Res. 2003. V.31. P.2873-2882.

278. Sanchez-Eisner T., Gou D., Kremmer E., Sauer F. Noncoding RNAs of trithorax responseelements recruit Drosophila Ashl to Ultrabithorax // Science. 2006. V.311. P.l 118-1123.

279. Santamaria P., Randsholt N.B. Characterization of a region of the X chromosome of

280. Drosophila including inulti sex combs (mxc), a Polycomb group gene which also functions as a tumour suppressor // Mol. Gen. Genet. 1995. V.246. P.282-290.

281. Sathe S.S., Harte P.J. The Drosophila extra sex combs protein contains WD motifsessential for its function as a repressor of homeotic genes // Mech. Dev. 1995. V.52. P.77-87.

282. Saurin A.J., Shao Z., Erdjument-Bromage H., Tempst P., Kingston R.E. A Drosophila

283. Polycomb group complex includes Zeste and dTAFII proteins // Nature. 2001. V.412. P.655-660.

284. Schotta G., Ebert A., Krauss V., Fischer A., Hoffmann J., Rea S., Jenuwein T., Dorn R.,

285. Reuter G. Central role of Drosophila SU(VAR)3-9 in histone H3-K9 methylation and heterochromatic gene silencing // EMBO J. 2002. V.21. P.l 121-1131.

286. Schotta G., Ebert A., Reuter G. SU(VAR)3-9 is a conserved key function inheterochromatic gene silencing // Genetica. 2003. V.l 17. P. 149-158.

287. Schotta G., Lachner M., Sarma K., Ebert A., Sengupta R., Reuter G., Reinberg D.,

288. Jenuwein T. A silencing pathway to induce H3-K9 and H4-K20 trimethylation at constitutive heterochromatin // Genes Dev. 2004. V.l8. P. 1251-1262.

289. Schubeler D., MacAlpine D.M., Scalzo D., Wirbelauer C., Kooperberg C., van Leeuwen

290. F., Gottschling D.E., O'Neill L.P., Turner B.M., Delrow J., Bell S.P., Groudine M. The histone modification pattern of active genes revealed through genome-wide chromatin analysis of a higher eukaryote // Genes Dev. 2004. V.l 8. P. 1263-1271.

291. Schubeler D., Scalzo D., Kooperberg C., van Steensel B., Delrow J., Groudine M.

292. Genome-wide DNA replication profile for Drosophila melanogaster: a link between transcription and replication timing // Nat. Genet. 2002. V.32. P.438-442.

293. Schwartz Y.B., Kahn T.G., Nix D.A., Li X.Y., Bourgon R., Biggin M., Pirrotta V.

294. Genome-wide analysis of Polycomb targets in Drosophila melanogaster // Nat. Genet. 2006. V.38. P.700-705.

295. Schwartz Y.B., Pirrotta V. Polycomb silencing mechanisms and the management ofgenomic programmes // Nat. Rev. Genet. 2007. V.8. P.9-22.

296. Schwendemann A., Lehmann M. Pipsqueak and GAGA factor act in concert as partners athomeotic and many other loci // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. V.99. P. 12883-12888.

297. Secombe J., Li L., Carlos L., Eisenman R.N. The Trithorax group protein Lid is a trimethylhistone H3K4 demethylase required for dMyc-induced cell growth // Genes Dev. 2007. V.21. P.537-551.

298. Sedkov Y., Benes J.J., Berger J.R., Riker K.M., Tillib S., Jones R.S., Mazo A. Moleculargenetic analysis of the Drosophila trithorax-related gene which encodes a novel SET domain protein // Mech. Dev. 1999. V.82. P. 171 -179.

299. Shaffer C.D., Cenci G., Thompson B., Stephens G.E., Slawson E.E., Adu-Wusu K., Gatti

300. M., Elgin S.C. The large isoform of Drosophila melanogaster heterochroinatin protein 2 plays a critical role in gene silencing and chromosome structure // Genetics. 2006. V. 174. P. 1189-1204.

301. Shaffer C.D., Stephens G.E., Thompson B.A., Funches L., Bernât J.A., Craig C.A., Elgin

302. S.C. Heterochromatin protein 2 (HP2), a partner of HP1 in Drosophila heterochromatin // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. V.99. P.14332-14337.

303. Shao Z., Raible F., Mollaaghababa R., Guyon J.R., Wu C.T., Bender W., Kingston R.E.

304. Stabilization of chromatin structure by PRC1, a Polycomb complex // Cell. 1999. V.98. P.37-46.

305. Shilatifard A. Chromatin modifications by methylation and ubiquitination: implications inthe regulation of gene expression // Annu. Rev. Biochem. 2006. V.75. P.243-269.

306. Sinclair D.A., Milne T.A., Hodgson J.W., Shellard J., Salinas C.A., Kyba M., Randazzo F.,

307. Brock H.W. The Additional sex combs gene of Drosophila encodes a chromatin protein that binds to shared and unique Polycomb group sites on polytene chromosomes // Development. 1998. V.125. P.1207-1216.

308. Slatko B.E., Albright L.M., Tabor S., Ju J. DNA Sequencing by the Dideoxy Method. In

309. Current protocols in molecular biology (ed. F.M. Ausubel) // New York: John Wiley & Sons, Inc. 2002. Unit 7.4A.

310. Smith S.T., Petruk S., Sedkov Y., Cho E., Tillib S., Canaani E., Mazo A. Modulation ofheat shock gene expression by the TAC1 chromatin-modifying complex // Nat. Cell Biol. 2004. V.6. P. 162-167.

311. Smothers J.F., Henikoff S. The HP1 chromo shadow domain binds a consensus peptidepentamer// Curr. Biol. 2000. V.10. P.27-30.

312. Smothers J.F., Henikoff S. The hinge and chromo shadow domain impart distinct targetingof HPl-like proteins // Mol. Cell. Biol. 2001. V.21. P.2555-2569.

313. Soeller W.C., Oh C.E., Kornberg T.B. Isolation of cDNAs encoding the Drosophila GAGAtranscription factor// Mol. Cell. Biol. 1993. V.13. P.7961-7970.

314. Srinivasan S., Armstrong J.A., Deuring R., Dahlsveen I.K., McNeill II., Tamkun J.W. The

315. Drosophila trithorax group protein Kismet facilitates an early step in transcriptional elongation by RNA Polymerase II // Development. 2005. V.132. P. 1623-1635.

316. Stankunas K., Berger J., Ruse C., Sinclair D.A., Randazzo F., Brock H.W. The enhancer ofpolycomb gene of Drosophila encodes a chromatin protein conserved in yeast and mammals // Development. 1998. V.125. P.4055-4066.

317. Stanyon C.A., Liu G., Mangiola B.A., Patel N., Giot L., Kuang B., Zhang H., Zhong J.,

318. Finley R.L. Jr. A Drosophila protein-interaction map centered on cell-cycle regulators // Genome Biol. 2004. V.5. R96.

319. Stapleton M., Liao G., Brokstein P., Hong L., Carninci P., Shiraki T., Hayashizaki Y.,

320. Champe M., Pacleb J., Wan K., Yu C., Carlson J., George R., Celniker S., Rubin G.M. The Drosophila gene collection: identification of putative full-length cDNAs for 70% of D. melanogaster genes // Genome Res. 2002. V.12. P. 1294-1300.

321. Struhl K. Subcloning of DNA Fragments. In Current protocols in molecular biology (ed.

322. F.M. Ausubel) //New York: John Wiley & Sons, Inc. 2002. Unit 3.16.

323. Sun F.L., Cuaycong M.H., Elgin S.C. Long-range nucleosome ordering is associated withgene silencing in Drosophila melanogaster pericentric heterochromatin // Mol. Cell. Biol. 2001. V.21. P.2867-2879.

324. Sun L.V., Chen L., Greil F., Negre N., Li T.R., Cavalli G., Zhao H., van Steensel B., White

325. K.P. Protein-DNA interaction mapping using genomic tiling path microarrays in Drosophila // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003a. V.100. P.9428-9433.

326. Sun X., Le H.D., Wahlstrom J.M., Karpen G.H. Sequence analysis of a functional

327. Drosophila centromere // Genome Res. 2003b. V.13. P. 182-194.

328. Sun X., Wahlstrom J., Karpen G. Molecular structure of a functional Drosophilacentromere // Cell. 1997. V.91. P. 1007-1019.

329. Swaminathan J., Baxter E.M., Corces V.G. The role of histone H2Av variant replacementand histone H4 acetylation in the establishment of Drosophila heterochromatin // Genes Dev. 2005. V.19. P.65-76.

330. Taddei A., Hediger F., Neumann F.R., Gasser S.M. The function of nuclear architecture: agenetic approach // Annu. Rev. Genet. 2004. V.38. P.305-345.

331. Tamkun J.W., Deuring R., Scott M.P., Kissinger M., Pattatucci A.M., Kaufman T.C.,

332. Kennison J.A. brahma: a regulator of Drosophila homeotic genes structurally related to the yeast transcriptional activator SNF2/SWI2 // Cell. 1992. V.68. P.561-572.

333. Tanaka Y., Katagiri Z., Kawahashi K., Kioussis D., Kitajima S. Trithorax-group protein

334. ASH1 methylates histone H3 lysine 36 // Gene. 2007. V.397. P.161-168.

335. Tchurikov N.A., Kretova O.V., Chernov B.K., Golova Y.B., Zhimulev I.F., Zykov I.A.

336. SuUR protein binds to the boundary regions separating forum domains in Drosophila melanogaster// J. Biol. Chem. 2004. V.279. P.l 1705-11710.

337. Tie F., Furuyama T., Prasad-Sinha J., Jane E., Harte P.J. The Drosophila Polycomb Groupproteins ESC and E(Z) are present in a complex containing the histone-binding protein p55 and the histone deacetylase RPD3 // Development. 2001. V.128. P.275-286:

338. Tie F., Prasad-Sinha J., Birve A., Rasmuson-Lestander A., Harte P.J. A 1-megadalton

339. ESC/E(Z) complex from Drosophila that contains polycomblike and RPD3 // Mol. Cell. Biol. 2003. V.23. P.3352-3362.

340. Toby G.G., Golemis E.A. Using the yeast interaction trap and other two-hybrid-basedapproaches to study protein-protein interactions // Methods. 2001. V.24. P.201-217.

341. Tolhuis B., Muijrers I., de Wit E., Teunissen H., Talhout W., van Steensel B., van1.huizen M. Genome-wide profiling of PRC 1 and PRC2 Polycomb chromatin binding in Drosophila melanogaster//Nat. Genet. 2006. V.38. P.694-699.

342. Treisman J. Drosophila homologues of the transcriptional coactivation complex subunits

343. TRAP240 and TRAP230 are required for identical processes in eye-antennal disc development//Development. 2001. V.128. P.603-615.

344. Triezenberg S.J., LaMarco K.L., McKnight S.L. Evidence of DNA: protein interactionsthat mediate HSV-1 immediate early gene activation by VP16 // Genes Dev. 1988. V.2. P.730-742.

345. Tripoulas N., LaJeunesse D., Gildea J., Shearn A. The Drosophila ashl gene product,which is localized at specific sites on polytene chromosomes, contains a SET domain and a PHD finger//Genetics. 1996. V.143. P.913-928.

346. Tripoulas N.A., Hersperger E., La Jeunesse D., Shearn A. Molecular genetic analysis of the

347. Drosophila melanogaster gene absent, small or homeotic discsl (ashl) // Genetics. 1994. V.137. P. 1027-1038.

348. Tuckfield A., Clouston D.R., Wilanowski T.M., Zhao L.L., Cunningham J.M., Jane S.M.

349. Binding of the RING polycomb proteins to specific target genes in complex with the grainyhead-like family of developmental transcription factors // Mol. Cell. Biol. 2002. V.22. P. 1936-1946.

350. Mol. Biol. Cell. 1992. V.3. P.593-602.263. van Steensel B. Mapping of genetic and epigenetic regulatory networks using microarrays

351. Vazquez M., Moore L., Kennison J.A. The trithorax group gene osa encodes an ARIDdomain protein that genetically interacts with the brahma chromatin-remodeling factor to regulate transcription // Development. 1999. V.126. P.733-742.

352. Vermaak D., Henikoff S., Malik H.S. Positive selection drives the evolution of rhino, amember of the heterochromatin protein 1 family in Drosophila // PLoS Genet. 2005. V.l. P.96-108.

353. Volpe A.M., Horowitz H., Grafer C.M., Jackson S.M., Berg C.A. Drosophila rhino encodesa female-specific chromo-domain protein that affects chromosome structure and egg polarity // Genetics. 2001. V. 159. P. 1117-1134.

354. Vorbruggen G., Onel S., Jackie H. Restricted expression and subnuclear localization of the

355. Drosophila gene Dnop5, a member of the Nop/Sik family of the conserved rRNA processing factors // Mech. Dev. 2000. V.90. P.305-308.

356. Voytas D. Agarose Gel Electrophoresis. In Current protocols in molecular biology (ed.

357. F.M. Ausubel) //New York: John Wiley & Sons, Inc. 2002. Unit 2.5A.

358. Wallace J.A., Orr-Weaver T.L. Replication of heterochromatin: insights into mechanismsof epigenetic inheritance // Chromosoma. 2005. V.l 14. P.389-402.

359. Wallrath L.L. Unfolding the mysteries of heterochromatin // Curr. Opin. Genet. Dev. 1998.1. V.8. P.147-153.

360. Wallrath L.L., Elgin S.C. Position effect variegation in Drosophila is associated with analtered chromatin structure // Genes Dev. 1995. V.9. P.1263-1277.

361. Wang L., Brown J.L., Cao R., Zhang Y., Kassis J.A., Jones R.S. Hierarchical recruitmentof polycomb group silencing complexes // Mol. Cell. 2004. V.l4. P.637-646.

362. Wang L., Ding L., Jones C.A., Jones R.S. Drosophila Enhancer of zeste protein interactswith dSAP18 // Gene. 2002. V.285. P. 119-125.

363. Wang L., Jahren N., Vargas M.L., Andersen E.F., Benes J., Zhang J., Miller E.L., Jones

364. R.S., Simon J.A. Alternative ESC and ESC-like subunits of a polycomb group histone methyltransferase complex are differentially deployed during Drosophila development // Mol. Cell. Biol. 2006. V.26. P.2637-2647.

365. Wang Y.J., Brock H.W. Polyhomeotic stably associates with molecular chaperones Hsc4and Droj2 in Drosophila Kcl cells // Dev. Biol. 2003. V.262. P.350-360.

366. Weinmann A.S., Farnham P.J. Identification of unknown target genes of humantranscription factors using chromatin immunoprecipitation // Methods. 2002. V.26. P.37-47.

367. Wines D.R., Talbert P.B., Clark D.V., Henikoff S. Introduction of a DNAmethyltransferase into Drosophila to probe chromatin structure in vivo // Chromosoma. 1996. V.l04. P.332-340.

368. Yamamoto Y., Girard F., Bello B., Affolter M., Gehring W.J. The cramped gene of

369. Drosophila is a member of the Polycomb-group, and interacts with mus209, the gene encoding Proliferating Cell Nuclear Antigen // Development. 1997. V.124. P.3385-3394.

370. Yasuhara J.C., Wakimoto B.T. Oxymoron no more: the expanding world ofheterochromatic genes //Trends Genet. 2006. V.22. P.330-338.

371. Zhao T., Heyduk T., Allis C.D., Eissenberg J.C. Heterochromatin protein 1 binds tonucleosomes and DNA in vitro // J. Biol. Chem. 2000. V.275. P.28332-28338.

372. Zhimulev I.F. Polytene chromosomes, heterochromatin, and position effect variegation //

373. Adv. Genet. 1998. V.37. P. 1-566.

374. Zhimulev I.F., Belyaeva E.S. Intercalary heterochromatin and genetic silencing //

375. Bioessays. 2003. V.25. P.1040-1051.

376. Zhimulev I.F., Belyaeva E.S., Makunin I.V., Pirrotta V., Semeshin V.F., Alekseyenko

377. Zhimulev I.F., Belyaeva E.S., Makunin I.V., Pirrotta V., Volkova E.I., Alekseyenko A.A.,

378. Andreyeva E.N., Makarevich G.F., Boldyreva L.V., Nanayev R.A., Demakova O.V. Influence of the SuUR gene on intercalary heterochromatin in Drosophila melanogaster polytene chromosomes // Chromosoma. 2003b. V.lll. P.377-398.

379. Zink D., Paro R. Drosophila Polycomb-group regulated chromatin inhibits the accessibilityof a trans-activator to its target DNA // EMBO J. 1995. V.14. P.5660-5671.

Информация о работе

Пиндюрин, Алексей Валерьевич
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2008
ВАК 03.00.15

Диссертация

Белок Suppressor of Underreplication Drosophila мelanogaster: распределение в хромосомах и взаимодействие с другими белками - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Белок Suppressor of Underreplication Drosophila мelanogaster: распределение в хромосомах и взаимодействие с другими белками - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы