Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Bacillus subtilus и Bacillus licheniformis как основа пробиотика для гинекологической практики

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Bacillus subtilus и Bacillus licheniformis как основа пробиотика для гинекологической практики"

РГ6 Оа

, , г* Г 1 л

-- u "" ' MIHICTEPCTBO ОХОРОНИ ЗДОРОВ'Я УКРА1НИ

УКРА1НСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УН1ВЕРСИТЕТ iм. О. О. БОГомольця

На правах рукопису

КОСЮК ГРИНА ВШГОДИМИР1ВНА

BACILLUS SUBTILIS ТА BACILLUS LICHEMIFORHIS ЯК ОСНОВА ПРОБЮТНКА ДЛЯ ГПШКОЛОПЧШИ ПРАКТИКИ

-1-4tG2tC5 - м1|фСб1олопк

Автореферат дисертацП на здобуття наукового ступени кандидата б!олоПчнях наук

KH'iB - 1995

Дисертац1ею в рукопио

Роботу виконано в 1нститут1 м1кроб!ологП 1 в1русолог11 HAH Укра'1ни 1м.Д.К.Заболотного

Науковий кер!вник: акадеы!к HAH Украйни, . професор В.В.СМИРНОВ

Оф1ц1йн1 опонеити; доктор б!олог1чних наук, . професор . А.В.РУДЕНКО

доктор медичних наук, старший науковий сп1вроб!тник 1.Г.ЛУКАЧ

Провiдна орган!зац1я: Kn'iвськнн державки» 1нститут

удосконалення л!кар!в MQ3 Украйни

Захист в!дбудеться "-/ip^yftcl 1995 р. оЙ3сгодин1 на зас1дашп спец1ад1зовано'1 ради R.0i.2i.J2S при Украшському державному медичному ушверситет! за ' адресою:

2Б205?, Ки'1 в, пр. Перемоги, 4

В диоертащвю можна ознайомитися в б1бл1отец! Укра'1нського державного медичного ун1верситету.

Автореферат роз!слано "3JfCCeyi^JtcipiLX^b^.

Вчений секретар спец1ал1аовано"1 ради, доктор медичних наук

В..Г.Бордоноа

ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РСБОТИ

АктуальнЮть • теми. Проблема эапальних эахворювэнь стате-В01 сфери ж!нок продовжуе займати одне з перших )'1сць у г1-некологП. Неэважаючи на значний арсенал антим1кробних эасо-б!в, за останн1 роки эросла к1льк!сть захворювань неспеци-ф1чноЧ етЮлогП, особливо п1сляпологового пер!оду. Цьому у значн1й м1р1 сприяло эниження ефективност! Х1м1отерапевтич-них засоб!в лхкування, эм1ни 1муноб1олог1чних властивостей орган!зму.

Бягятг)чир.«лт>н1 доглИдження г^птверпшш, шо в1льш!сть гн1ино-запалъних захьсрйванъ пол1ы1кробн! за своей природе» та спричинявтъся асоц1ац1ями аеробних та анаеробних бакте-р1й.Найчаст1ше в умовзх запалення детектують ентеробактерП, стрептококк, стафиокски, гарднерели, др1жджопод1Сн1 гриби (Степанковекая и др. ,1989; Наш111,1989; 5оЬе1,1990; ЕэсЬеп-Ьас11,1993; Мее(1,1993; Гопг,1994). 1Ц м!кроорган1зми в пред-ставниками ваг1нально'1 м!крофлори 1 стають причиною запалення при порушенн1 балансу-у м1кробЮценоз1 гениального тракту та пригн!ченн1 автохтонних лактобактер1й. Завдяки висх!д-н1й 1нфекц11 м1кроорган1зм1в з1 складу м!крофлори нижн1х в!д-дШв ген1тал!й можлив« запалення порожнини матки (Савельева и др. ,1987; Данилов, 1989; 1_ес1еег,1993).

Намагання подолати ц1 проблеми сприяе пошуку нових ва-соб1в л1кування эапальних ПкеколоПчнкх аахворювань на основ! Юнуючого досв1ду< наприклад, бактерЮтерапп. Б±льш ф1з!олог!чн! за своею д1ею, н!ж антиб1отики, б!опрепарати з жив их м!кробних культур усп!шно застосовують протягом бага-тьох рок1в (Соловьева,1987; Поспелова,1990; Долгуиина, 1991; }'-аь-:эвскал и др. ,1988; Коршунов и др. ,1989; К1ра,1993; Wooa

et al.,1985; Hugher et al.,1990; Hillier et al.,1992).

Серед м1кроорган1зм1в, перслективких для створення но-вих проб1отик!в, особливу защкавлекнють викликають бакте-pil роду Bacillus. Ix адаптивн! мохливостг та б!осиитетична д1яль^1сть а точки гору фармакологи вдало пседнуються а сапротрофною природою (Пйрузян и Др.,1992). Медичи1 препарат, як! складен! а бактер!й роду Bacillus, прнэначен! для л1кування та профилактики не тШки шлунково-кишкових эахво-рювань, а й багатьох !нших, у тому числ1 й х!рург1чних (Ни-китенко,1991; Смирнов и др., 1992,1993; Mazza,l994), тому особливий 1нтерес викликае мсшив!сть аастосовування цих бактер1й у г1некологП.

Мета та эавдання доал1дження.

Метою представлено! роботи було конструювэння бЮпрепз-рату на основ! бзктер1й роду Bacillus для проф!лактики та л!кування гн1йно-септичних захворювань статево'1 сфери xihok.

У BiflnoniflHOOTi а поставденою метою були вианачен! го--HQBHi аавдання доол1дження:

1. Характеристика макрофлор.! п1хви 1 церв скального каналу'ваг! тних та порад!ль в умовах нормального ф!р1олог!чного переб!гу BariTHooTi, пЮляпологового перЮду, а також при аапальшЦ.

2.Вивчення б1олог!чних властивостей бактерзи роду Bacillus, перспективних для отворення Пнеколог!чного препарату

3.Створення аооц!йованого препарату на основ! в!д!бра-них штам1в бактер!й роду Baoillus.

4.Медико-б!олог!чна характеристика створеного гншкола-г!чного препарату на оонов! вивчення впливу на ваг1надьний М1кроб!сценоа та внутр!шн1 органи лабораторию тварин, вота-

- О -

новлення локувального ефекту на опрацьованих експернментэль-них моделях.

Наукова новианз рсботи. . На основ! вивченнл бюлоНчних власти2осг?н бактерий роду ВасШиз 31 окладу колвкцИ в1д-д1оу аих11б1схик.1в 1МВ НАН Укра"1нн знайдено штамп 13 в1дпо-вАдннм певннм вимсгач спектром властнвостен: високсю антэго-Шстичнсю активнхстю стосовно патогеннях та умоано пагсген-ня." м1кросрган1гм1в, толерантнютп до ген1тально"1 нсрмофдори, эдатн1стю до адаптац11 в умовах п!хви 1 церв1кального каналу.

: г ттиштипппи мпж ПИИ 11 угь ( ¡тшлтппя оийи1|шла

ного 01спренарату для д1кування Пнегадс. ишкх аапалень на основ 1 штат в В.эиШПз ЕКМ В-2895,' В.эиШНз ВКМ В-2896 1 В. НсЬеп1Гогт1з ЦМПМ В-2336.

Шляхом всеб1чного внвчення доведено в!дсутн1сть будь-якого еклдливого для орган1эму впливу створеного б1опрепара-ту (легального та эагального).

Роароблено лёгковадтворювачу модель ендомаометриту на тварянах. Продемонстровзно вксоку лакувальну ефективюсть асоц!йованого бащилрного биопрепарату в умовах экспериментально! ген1таль.чо1 1н^экцП.

Практична аначкм1сть та шляхи реал1аацп наукових результатов. Створено новин бхорепарат, який пригначеннй для проф1лактики 1 л1кування гн!йно-септичних эахворювань неопе-циф1чно'1 ет!ологп статево'1 сфери ж!нок.

Матер1али досл1джень покладено в основу проекту методики державних випробувань, техн!чних умов та наотанови по застосуваяню препарату для представления дскументацП у "зр-маколог1чний Ком1тет МОЗ Укра!ни.

Апробащя роботи. Матер1али дисертацП представлено на

VII a'Jsfli Укра!нського м1кроб1олоПчного товарисгва (Черн1в-41,1989), I устан'овчому (VIII) а'1эд1 Укра!нського м1кроб1о-догШного товариотва (Одеса, 1993).

Публ1кац1я MaitipiajiB досл!ржень. За матер!алами диеер-тацЦ опубл1коваио 3 друкован! роботи: 1 стаття республ1кан-ського видавництва, тези доповгдей (2). Отримано авторсък1 i св1доцтва (2).

Структура 1 обсяг роботи._Дисертащя складабться el

ьступу, огляду латератури (3 розд1ла), матер1ал!в га метод1в досл1дхень (1 розд1л), експериментальнсп частини, ¡цо включав 4 роэд!ли реаулътат!в доовджэнь та i'x обговорення,висновк!в та списку л1тератури з1 105 вИчиэняних та 96 эаксрдсних джерел. Обсяг дисертацП а таблидями, малинками, вказ1вником лхтерату'ри становить 169 ctopíhok машинописного тексту. Роботу 1люстровано 28 таблицами та 18 матонками.

Материалы та методи. Основними об'ектами досл1дження Сули штами B.subtilis ВКМ В-2895, B.subtilis ВКМ В-2896, B.lichenifarmís ЦМПМ В-2333. Для вивчення антагонЮтичних 'властквостей дасл1джуваних бактер!й було використано 116 му-вёйних та vuiíhí4hhx eitsmíb тест-м1кроорган1ам1в.

Вивчення м1крофлори Шкви 1 церв!кального какалу ж1нок проводили шляхом бактер1олог1чного аиал1ву магк1в (Еиргер, 1982, Смирнов и др.,1983, Титко,1984). 1дентиф1кац1ю íbo-льованих штам1в бактерш эд1йснювали за морфолог 1чними, культуральними та 01ох1м1чними властивостями у в1дпов1дност1 а класиф1кац1йнши схемами Bergey (1984) а використанням тра-

диц1йних метод1в. Стан 1ндив i дуально! ваг1нально1 м!крофло-

$

ри обстежених жхнок визначали за системою показнюив Солойо-eo'í (1987). Чутлив1сть до антибютикгв Сактер1й, як1 були

- Б -

1эольован1 втд жЛюк э ускладиеиим гестацШшм та п1сляиила-говим пер1одом, вивчали методом дифуэП в агэр ? витсрнстан-ням иапороаих диет в.

Лнпгсшсппн! РхагтиЕ'-у;т1 вттмш п>д\ В?с111IV-; 'щчтта за Егоровны (1Ш5).

Досл^чув-лли г«мол!тичну, иламгкоагудчячу. нугл аг>ну, г^цгт!'!^)?!!'/, йлаотазну (Смирнов и др., №-¿3), лш>цимну !.ИТГ"с. п»»лвт1«1«1яну , зж лм!Ч1ичиу

(Рухладева,1981), протеол1тичну активн1сть (Manactii.ni,19&и).

ИьжЧу аш^ь.!]», У а ч

ФСО'ИТОМ.

Ддг(?аинн1 властное.т 1 бактерП"! роду В за Шиз встансвлю-валн по Ер1л1о (1986). Досл1дд<?ння адт'оаи Сация в умовах гм1шаних бактер1алышх популяц1й проводили эа методом Ленц-Нйр (1939).

Взруж'.тлпозь, токе^гтаетъ та токсигешИсть птатв Вн'Л!1!;б доел1д*увэли Г>1рг»ром (1992). Отри\<д>и дзд1 ана-«яуваш вгдпсв!дю до юттруктивних матер1ял1в, ко виклад»-Н1 у "У-тсди'мскич укггяшях по Т'Нгч»«ич«т<сой оценке микробных средств" (1992).

Стр'-рр»ня г 1н<?келог 1 чнего десап й^вяного б1опрепарату на основх роду ВаоШий зд;йсютапч эа ран1шч розробле-

чею теучочог1рщ (Смирнов и др.,1986).

Еклив Г1 сирепзрату на яагчнапьну -.икрофлору итчали еляхом бзктерюлоггшого анал1эу проб Шхвового секрету тьа-рин. 0ц1нку ззгаяъного впливу бЮпрепарату на макроорган1зм зд1йснг* '1.111 по гематолог 1чнчк покаяптасвс, по гагальяому яш*-л!эу. с°ч1 (Моньшиков, 1587), по лнтитокенчнай фу ню ц 1 печ1н-ки у тест! з гексеналовп" сном (Гадурч, 1574>. Досл1ди яро-

- е -

водили на мишах, ¡дурах га кролях, як1 ваПнально отримували бЮпрепарат протягом 30 fliö. Шсля закхнчення обробки препаратом у сл!вавторств1 з фах1вцями кафедри фармакологи Укра-1ноького державного медичного ун1верситету проводили пато-морфолог!чн1 досл!дження легень, серця, шлунково-кишкового тракту, печ1нки, селезшки, нирок, гпхви макроскоп1чно та шляхом вивчення Пстолог1чиих npenapaiiB.

Л1кувальний ефект асоцпгаваного биопрепарату на основ! бактер1й роду Bacillus вивчади на модел! стаф1лококового ен-дометриту, яку було розроблено у сп1вавторств! а кафедрою акушерства та ПнекологП Укра'шського державного медичного ун1верситету. Статевоэр1л1Ш самицям щур:а нз 6-7 день роэ-витку гострого ендометриту гнтраваганально гдайснювали 1нс-тиляцП 0,1 мл суспенэП препарату у терапевтичних дозах, що перерахован1 на 1г ваги тварин, протягом 6 дн1в. Шсля эа-к!нчення 14-добового спостереження, протягом якого ф!ксували температуру, динамаку маси т1ла тварин, Ix гематологачн! по-казники, м1крофлору п!хви, проводили г1столог1чне досл1джен-Ья матки.

Результата ycix дослав обробляли статистично. IIopiB-няння середн!х значекь проводили аа допомоговд дисперс1йного аналхзу (Лачин,1990).

РЕЗУЛЬТАТА ДОСЛIДЖЕННЯ ТА IX ОВГОВОРЕННЯ 1. Видовий спектр м!крофлори ген1тал1й ■ ваг!тних та пород!ль.

оивченню б!олог1чних влаотивоотей бактерш роду Bacillus та обгрунтуванню доц!льноот1 'ix використання у склад1 л1кувал!но-проф1лактичного Пнеколог1чного препарату передувало дослздження мжрефлори п1хви i дерв1кального ка-

налу тих груп ж1нок, несприятливий бактер1олоПчний прогноз яких особливо занепокстое, а саме ваПтних i пород!ль.

Б1льш1сть м1крофлори niXBit 1 церв!калъного каналу при неускладненИ» BariTHocTi як аа частотою (85,7%), так i эа питомою вагой (5,21±0,86 Iff КУ0/мл) складали лактобактер!\. Друге м1сце эа частотою знах!док пос!даз сгаЦлокок. Серед стаф1локок1в 14,ЭХ складали гемол1тичн1 форми. П'ята частина кл!н!чних проб MicTiuia також стрептококк груп В i D та канд1-дн. Ш * умовн! патогени, а також Gardnerella vaginalis, перевалами за чсстотгя ?яз.».1док при р1ансызя1тшж ваг1тност1 "та широко вар!юваяи за к1льк1стю (2,07±0,33 -б,22Ю,?2 1гКУО/мл).

Заснований на рггультатах бактер!олоПчного анал!эу розрахунок оц1нки стану м1крофлори статевого тракту обстеже-них ж1но.; п1дтвердив не т1льки його низьк! покавники при ускладкеннях BariTHocTi, а такох у кл1н1чно здорсвет. ebtIt-НИХ ж!нок.

Особливо критичний стал щкрофлори гезиталп' спсотер}-гавса у породить. У soix обстежених uie'i групп оЩнка його Сула нзбагато нижча норми, що пронвлялося у мпималыш: к1лькост1 лачтобактер1й (2,Е6±0,07 1?КУ0/мл), наявност! стрептокок1в групп Б п1оля нсрмальних полог1е, зб1льпення грампоэитивних кок1в та E.coli я1сля ускладнених полоПв. В умовах ускладнення ваПтност] i п1сляпологовсго пер!сду встановлено дом1нування серед р1зноман1ття м1крофлори отате-Bo'i сфери саме стаф!лотк1в. Для влпадк1в ендометриту нами встановлено виключно стаф1лококову епологш.

Частими були.знаххдки асоц1ад1й умовно патогенних м1к-poopraHiSMiB, у тому числ! й антиб1отикореэистентних шгатв,

- е -

у- геШталыий м1крофлор1 EariTHiix utiiioK та пород1ль, що в несприятливса прогностичнсю ознакою та служить показчиком для проведения л1кувалыга-проф1лактичпих ваход1в'.

2.Eiojiorl4Hi властивост! штзшв B.subtllis ВКМ В-2895.

' B.subtilis ВКМ В-2896, В. licheniformis ПМПМ В-2335.

Домхнування умовно патогенно! транзиторно! мжрофлори в св!дченням ашмення колоШ аацшно! резистентности резидентно! гениально! лактофлори. .В таких умоЕах л1кувальну та профхлактичну д!ю проб1отнка можуть забезпечити лише мшро-органАэми в бтш вксоким pi ином антагонгстично! активноот1 стосовно патогенних м1кроорган1эм!в при yMOBi також в!дсут-HOCTi пригн1чення т акции, антагонХстами резидентно! >акрсфлори.

АнтагонЮтичну актиЕн1стъ було вибрано критер1ем пер-винного скрин1нгу бактер1й роду Eacillus i подадьшого вив-чення да i в1д!браних штзшв на широкий спектр тест-мжроор-raiiiBMiB. Отршши даШ аа£в!дчили прнгн!чуючу д1ю бацил на TL ль к I на муаейн!, але й на кл!нхч:и штамп патогенних та умовно патогенних MiKpoopranisMiB, резистентннх до антпб.т-тик1в, як! були !зольован1 Ыд oci6 з тягальном та jhiuoo патолог1ею. Встановленг BiflMiiinocTi у ступен1 прояву активности. в!д1браних бацил компенсуються вааемним доповнешшм спектру протмлкробно! дн, що дозволяб 'ix acouiauii двмонс-трувати пом!рну та виоску антагонЮтичну актишисть стосовно умовно патогенних MiKpoopraiiisMiB i св1дчить про синерг!чну д1ю штам1в (табл.1).

НайСильшими з yoix вареестрованих у дослгд! були зоии -ипигнгчення бацилами росту м1кроорган1зм!в роду Candida. Цей

Таблица 1.

АнтагоШсткчна актлви1сть асоц1зци штам1в В.зиЛШз ВКМ В-2Э95, В.зиЫлПэ ВКМВ-2896, В. НСНРГПГОПМЗ ЦМПМ В-233В.

Тест-М1кроорган!эмн

Зони эзтримкн росту, мм

слаОко чут.чив! 15-20

Ста$1;;ско1си п«29

Стрептококи П«7

ЕнтероОактер:.! п=б2

Др!лддоподЮн! гриби

П=7

Лактобактер!1 п=11

18,0±1,2 1(3,447.)

14.lt!.4 3(42,87.)

15.2±2,2

11(17,77.)

лом!рно чутлив1 21-25

24,9±1,8 11(37,97.)

21.8±1.В 1(14,287»)

г2,о±о,б

38(61,37.)

ВИСОКО

чутлив! 2В та в'.пде

'¿ь, 512,3

17(58,67.)

26,7+1,8 3(42,87.)

58,5±1,5 13(20,97.)

32,3±2,1 7(1007.) О

у чисельнику - зона затргажи росту тест-м!кроорган!гм!в; у энаменннку - к1льк!сть штшйз тест-м!кроорган1гм!в. .

факт, на нашу думку, створюе п'-;" ваги для пробхотикз на основ! птаЛв аерг •'>■»,-.х спороутворяючих бзктер1й у пор!внянн1 з кислотоутЕорюючшн препарат,Змн на сснов1 лактобактерп! ! 61-

ф1добактер!й, эдже в!Доы1 випадки вгдсутносп антагон1стич-HO'i д11 осташпх на гриби роду Candida, що робить неефектив-нлм л!кування кандидазних захворювань ген1тад1й (Кашковс-кая,1988).

Поряд а високим piBHeu антагаЦзму бацил стосовно представник1в патогенно! та умовно патогенно! флори нами бу-ло эафгксавано в1дсутн1сть впливу цих штам1в на культури мо-лочнокислих бактер!й, у тому числ1 й тих, що були 1зольован1 з п1хви i церв1кальиого каналу. •

Таким чином, було встановлено внб1рков1сть антагапс-тично! дП доолХджуваних штач1в стосовно умовно патогенних MiKpoopraHisMiB, що активно пригн1чувались бацилзми, та представник1в резидентно! ген!тально! флори - лзктобактер1й, иа як! штамп роду Bacillus не впливали.

Це дозволило вважати В1д1Сран1 штами бактер1й роду Bacillus перспективними для створення проб1отичного легального аасобу та продовжити досл!дження б1олопчних влас-тивостей цих бактер!й, аокрема, можливссП ix адаптацП у гениальному тракт1. TaKi важлив1 характеристики, як здат-HipTb утворювати рпори, витримувати високу кислотнЮть та обмежену аерац1ю середовища, б суттбвими потенЩями цих шта-uiB для ве'гетацП в умовах п!хви i церв!кального каналу.

Вивчення фермектативно"! активносИ э урахуванням потен-ц!йних' оубстрат1в ген1тально! сфери дозволило встановити га-кож значний р!вень синтеау протеаз та ам!лаа (мая.1,2). Прр-дугаЦь цих фермент!в уже в перш1 дн1 освоения субстрат1в по-рожншш проб!отичними штамами сприятиме усп!шн1й Ix адапта-цН та прояву ними специф1чно! дП, що отворить для них перевален: конкурента! умови у м1кроб1оценоз1 статево! сфери

- и -

л ал. 1 Протео л imuu lia aKmuftiiicmb doc.ni9aty6aimx oimajuib. EfubtUli BUi 2095 —t— В.яиЫШя BKU 2808 --*- B.ltcheaUormla233S

лал.2 А-»1лол1п111'1па актибшсшь 0осл1ЭзадЪаних rama-aiö. -в- В.аиЫШа В KU 2805 —ВлиЬШЬ» ВКЫ 2088 --Ж- B.Uchenirormis2333

ланок, при аалаленн! яко'1 зб!лъшення рН в1д 4,5 до нейтраль-них та лужних значень створке несприятлив! умови для вегета-Ц11 молочнокислих бактерп!. Водиочас иейтральне та лужне се-редовищэ б оптималъним для С1 ль каст I бацнлярних фермент1в.

В умовах вапн1ту та церв щиту, викориотсвуючи пов'яза-ний э г1персекрец1ею пол1сахарвдиих речовик слиз як субстрат, пробЮтичн! штамп можуть позитивно впливати шляхом вмеишення в'яекост! ваПнального секрету. Корисний вплив, на нал1у думку, мсжуть справляти ферменти, здиюнюючи обмежений лротео-л1а, який, як в1домо, активуе репаративн! процеси, эаСезпе-чуе очищения в1д дев1тал1эованих дглянок слизово! та гною, токсичних продукт1в некрол1эу та бактер1альних токсин1в, що сприяб зниженшо р!вня сен';яб1л1эац11 макросрган1зму.

При вивченн1 ферментативно! активност! прсОютичних штам1в нами була взята до уваги можлива продукция 1 таких еизим1£, ,чаявн1сть яких у м1кроорган1зм1в е 1нтегральним по-казником. агресП 1 робить внесок у розвиток патолопчних процес1в. Прикладом таких фермент!в е специф^чн! протеази, як1 можуть впливати на колагено- та еластиномЮтк! сполуки х0р10амн10тичних у.°мбран та шийки матки (Мс вгеасзг,1986). Проте в1д1бран1 для пробЮтика штами не проду1?уьали желати-наз та еластаз. У цих культур в!дсутн! тако* 1 иш ферменти патогенност1, так! як гемсииаин, лецитиназа, плазмокоагула-за, нуклеази. лужна фосфатаза.

Таким чином, вивчення ферментативних властивостей д1браних штам!в роду ВасШиз не т1льки п1дтвердшю, можли-в1оть адаптацИ Зх'у'п1хв1 ! церв!кальному канал!, але й дозволило скласти уявлення про значний внесок ферментативно! актг.внсст! у прояв спецпф!чно! д 11 проб!отичши ттагпв, а

також 1нтт ланок потенЩиного комплексного .Икувамнсго ефекту, виюпочити риаик несприлтливсго $*рмонтатипт-го впли-ву.

Триеадють адапт.'.':м Юнуючих оюяропара?!»- у передние 1-макрос р г ак^иу найчзстюе поп'я.т/сп з адгеаир.т«;! ¡.-лйсти ■ ЕОСТЯМИ ПрСбЮТИЧНИХ крОСрГШ!1ЗМ1 8 , ЕЯ IX СКЛЭДЗЯТЬ .

Дэсл1дження лдгезивних гласгпростои Мд^р-шкх ктшпа роду 8ас111из встанормо 1х сор^дип та низьку адгс-гиму лк-ТИВН1СТь", В ТСЙ ЧЯЛ ЯК ЕИроГ>ШШ та Г!6{)С|16К7ИШ|1 ДДЛ сгво-

(табл.2). У пор1внянн1 з остдлн1ми здгрзт «¡апк-ик^и* ».о лочнскисднх бакт»р!й сирокэ Еар1сз, вд св1дчит1> про наяя-н1сть у них 1н™1гх, не менш ва*ливих фактор!в, як1 элб^эпечу-ють 1х колон!зуючу здатШсть (Ленцнер, 1985; Брклио и др. ,1990). Ад&тгивн! исжлквост1 та вив1ркопа антагсн1стична д1я, на налу думку, мслуть слугугати меха.ч1эмяли, яя допаиа-гсп яких бащши здатн! нрнйняти участь у ¿срмувяин1 шкроСю ценоау пгхви 1 церв1кааного каналу. Улпляст ься мсмливим гсворити про перевали-? знач'-ння са».<-? цих к«а<1?м1п 5ак??р:й родУ ЕасШиз в уморах IX итограцП у гешталшкй шн-рзбЮ-ценоа, на противагу процесу едзптац11 ла«тс-бактер1й, то иле характер споциф1чно'1 рецепцП I досить часто в1д1граа внр1-шальну роль у эабегпеченн1 ефективност! препарату на оснсв1 молочнокисл»« Сактер1й (Коршунов и др.,1900).

Реаультати вивчення адгеанвнин властивостей в1д10раи№< аеробних спороутворвючих 0актер1й уэгоджуються з даними л1-тератури про в1дсутн1сть л!ганд-рецепторно! ваавмодП кл1тин бактерш та слизово!, незважаючи на виявлен! в структур! ба-цил лектини, з наявнгстю яких пов'язують адгезивн! власти-

Таблица .

Адгегтш1 вл-»:ткност1 Сактер1й роду Bacillus, як1 1эолъован1 г pia.atx ддс-рел, лаСсраторних итам1в умоено патогеннш: бактер!й та пр1Л1стичннх Е?ам1в Lactobacillus.

М1кросрган1гми : СПА КУЕ,* : 1AM

В.subtil IS ЕКМ Б-2895 : 2,61+1,13 : 70,16 : 3,72+1,32

.В.subtil is ВКМ E-2S9Q : 1,32+0,27 : 59,45 : 3,43+0,22

Е. Jlchenlfcmis ЦМПМ В-2336: 2,03+0,52 : 68,20 : 2,30+0,19

В.subtil IS 61* : 0,74+0,05 : 77,85 : 0,95+0,26

B.subtilis 68» : 1,31+0,34 : 51,21 : 2,55+1,28

Bacillus sp.l** : 1,31+0,25 : 59,46 : 2,22+0,16

Bacillus "p.2** : 0,53+0,11 : 42,02 : 1,33+0,30

Bacillus sp.5** : 3,64+1,42 : 89,70 : 4,10+2,40

S.aureus 203 1,30+0,19 : 76,31 : 2,49+0,28

P. vulgaris 72 : 2,52+0,51 : 65,90 : 2,92+1,19

E.coli Olli : 3,23+1,48 : 96,12 : 3,36+2,36

L.delbrueckil X*** : 5,23+2,33 : 80,09 : 6,53+2,15

L.delbrueckii NCDO Y**» : 6,15+2,62 : 92,06 : 6,68+3,25

Lactobacillus spp. : 4,17+2,56 : 74,06 : 5,63+2,32

(лактобактерин) : :

СТА - середн1й покаэник адгеэП . КУЕ - коефгд1Ент участ1 еритроциИв 1АМ - 1ндекс адгезивноот1 м1кроорган1зы1в

* - грунтов! 1 ЗОЛЯТ!!

** - штами, шр !зольован1 а гениального тракту

*** - штами, як! перспективна для стаорення пробЮтик1в

boctl М1КР00РГШ11ЭМ1В (CWItpHGB ¡{ др. , 10'ЭЗ). Ц1ЛКОМ t'tMOBlp-нс, що лектини бацил валиватимуть из йдгезт licitx Шкроор-raíiiewlB в "умовах М1крсб1оцс-нозу, блокуючи адг*г>ш<л С:.ыто-р1й-эСудник;в нфзкцп' Сам a.) piiu-iu эдгоап порспективних npoSloriwmix ш?ам1в ролу ВзгШиз не «|1нювався мокко у половин! (45*.) эмИгаиих г.опулящи тд впливом таки*. умовнс па-тсгеннич ы1кроорглн1гм1в - збуднити гоШталмад зялалднь, як S.aureus та E.ccl:.

С'зр-лгп р^ау^тчги стосовно псшрного р1ьня ад roa 11

Д0СД1ДЖУ83НИХ ETSrtlb роду С.«rill'JS. Я«ИЙ СПР««ИИМО Ж

таци , поставили питания про здгеэныи властивсст! асотацп цих Сактер1й та тривал!сть Н ¿иаходдокня у nixsl х цорв1-кальному канал1. Вир1аення цих питаиь вимагало створення асоц1йовансго препарату та проведения досл1джоиь ln vivo.

3 • Розробка ас с ц иг. палого препарату для л1кув.я:••'• i пнсК',Л"Г1чниу. эап.-иУ-нь.

Ствсреннс асотйсваного препарату сприяло всталоьлоння вэабмодоповнкючого спектру ачтаготстичних, форментативних та 'адrea ив них властивостей досл1джуваних штам1в бацнл.

Технолоп4hi b¡ü<оги до препарату враховувзли дан1 про особливост1 вид1в B.sabtllls та В.Uchenlformis, що вплинуло на сп1вв1дношення культур у препара?1, адатя1сть итам!в да спороутворекня та йога термхн, а такол 1снуюч1 бютохноло-Г1ЧН1 розробки р1вних л1карняних форм <51опрепарат1в, насам-перед на ochobI бактер1й роду Bacillús, як! в результатом багатср1чно1 роботи колективу автор!в в1дд!лу í>htk6íothkíb IMB МАИ Укра1ни. РозроСлен! методи виготовлення препарату забезпечили эбереження його висско! активност! та неитд-

лиэост!, в» засв1дчия контроль 5 лабораторных ceplit препарату (табл.ЭК

Табдиця 3.

Параметр» стаорексго аеоц1йоваиога препарату на основ1 досл1джуваних штам1в. Сактер1й роду Bacillus для г1неколог1чно'1 практики

Наэвз поклиника

Характеристика cepli'i препарату сер.1 : сер.2 : сер.З : сер.4 : сер. 5

5овн1ая1й внгляд .-пориста крж:тал1эовзна суха св1тло-

:коричнева мзса ВолоПоть : 4,71 J 4,9t : 4.5*. : 4,7Х : 4.8Х

Бактер1а.ьиа :вм1пув т1льки штамп B.subtllls ВКМ

чистота :В-2995,В.subtil is ВКМ В-2896,В.llchenl-

tfarmis ЦМПМ В-2336 К1льк1стъ м1кроСтк: 132 : 120 : 127 : 1ЭО : 140 кл1тнн у доз! : илрд. : млрд. : млрд. : млрд. : илрд. Беэпека :нешю!длнв1сть эастосування доаи, яка

:у тиспчу раг1в перевгодуе терапевтичну

Специф1чна актив- :

HiCTn (вони ег.тринки :

росту тест-куль тур) г :

S.aureus 2D9 : 25мм : 28мм : 24 мм : 23мм 25мм

E.coli 0143 s 23ш : 24мм : 18мм : 20мм 19мм

С.albicans 625 : 31MW : 36мм : 34мм i 36мм 32мм

4. Мвдико^б

препарату из огмк-.Щ штата Ь гл;К1115 ВКМ В.ЯЦЬиНз ЁКМ В-2аа9,В, iicher.lt.цтз 11МПЦ В-2'ЛЯЗ, • Досл1дхення впливу С1ощ>о»:ф.ггу на сенов! трьсх втам1» роду Вас Шиз на ген1та_пыг/ и!кр&^сру твэдше доеводило п1д-твердитн та псяснити досл!ди !п уйг<;.

Но-перп-ё, встаноьлеио, цп, нгзрзлшпчи на ВР.рНчвгшин л1д впливом р1зних пкросрганим1н сгуя-ншл адге-аи окр-:*мих дос-л1лж7паних ттам1в роду ВасШиз, асоцп'юваний препарат уо-п1вн~ лдаптустьтя у 3 гге

випдиваз В1дсутн1сть потреби у стЕсрвшп оптимальных ф1з1о-лоПчних умов у П1хп1 1 ц*рв11ст,н':му канал 1 перед йогз аас-тосуванням для пол!пЕвння адгезивних влзтийостей, щп лракти-кують для прэпарат1в на основ! лактобакторхй (Кира,1093).

По-друге, терм!н адаптацП б!опрепарату на оснсв1 ВасШиа в1дпоы£аб строку його ваг шального ааотооуЕлНкя, тобто часу ¡"юго л!«уаально! ди.

По-трьте, п1дтвердлено виСпрковють актагонЮтичного впливу бацнлярнсго пробютика. Акттшу I-.ротика кре* ну дш препарат проявляв сгасовна умоьно патпгыжих шкрсоргши;ш1в гениального м1кроС!иценэзу(гра>тоаит1ш;и* юю п, ентерсЛак-тергй та дрыдеонидгбинх граОгв), «у -чц п.ига елш1нац11 аОо сутткйо затримуьало педгем.п" в1д!!'!»ллнна !х попул:;ц11. Вод-ночае менга вираэннй вшит бюлр*па| аду и* представим?!? аз то >хтонно1 ваг!нально! флори досить часто рприяв !к росту(мал.3) Таким чином, результати досл1д*эшгя впливу бЮпрепярату на вапналоний м1кроб1оценоа тварин падали моллив1сть прог-ноауаати його ли.увальну ефективнит 1а практичну непшддн-вхсть локального впливу при заотооуванШ.

икиопвохим!

хорцнефодов! --ж--

£»1арЬу1ососсил яр

£>1гер1оеоссиа «рр

Е.соИ ■-А--

ВпсШш» врр.

К 6 10 16

ч«с спостпрсжсшт,до6а

мял.3 ЗжЬт Ьакйтлыкн лисрофлори БеапороЭниж лишей Ысля 6-дешюео эвстосуйания Бюпрлпарату >ш оеноЫ ВасШия

Епвчення вплнву стьсрс-нсго препарату ..•: органам в щ-лоиу' проводили п!сля трльало} вапиально. сС-рсСкв твзрин пробЮтикси як. у терапегтичша: доза:-;, порерахсзашк на здн-ниц» ваги твзрин, так 1 у дсга>:, ¡^о у 100-203 ра?1в к< пере-вгаагвам'.. '»'а ссноы сучгснж крптерПв тскг:!ксм~р*слог1чнк:< дослхджекь -икзрнлн'.о: аа:с51в стгоренкЛ ассигнований препарат вигиано негк1длнвим. Цей £акт гагьйдч;:.";: пскззник;: *ро-к1чного досл!ду, п1д ча: якого не еи1нвгавея склад пер>:£е-ри;ко\ крса!, бус вгдсутн!;*; негатиький еп.т,:в ка и/дгльку систем/, фуккЩв печгнкн та 1ня1 гарен>:1матогн1 сргани.

Для эастосування препарат,• з Лкувальнсп метохз Сулэ створено модель стаф1локскового ендомгсметриту на курах. Еи-б1р для модел! азпаленнк саме того г5удиика псяснвэться по-ширенням йоге у гаЛтаяьшй латологп, у тому чисд! при та-ш тяжких формах захверовання, як ендометрит. На тдетав! резудьтат1в клШчкнх епостередень, Сактер1олог1чного ьнапг-зу, макро- та м:кроскол1чяого досл1дж9ння матки тб зрпн було зроблено висновок про виразний лшвальний ефект (81, IX)

отвореного бЮпрепарагу в умовах гел1тальнего эалалекня ста-

ф1лококово'! eTlDjjorl г.

Таким чилсм, як у дссл1дах In vitro, так 1 на екслс-ри-ментальних тваринах встаиоалено висскнй р1вень актгамсс?! препарату, ягаш складагться в Сактор1й рсду Pimllus, uo эасв1дчуе п<?рспективн1стъ використзиня нааваних птам1в fla".-тер1й як оснсвя г51опропарату для л1куваннл гнИшо-эалдльиих эахЕорювань стлтево1 сф-?ри.

UUf-Mnnifll .

1. Встансвлено дом1нування умовно патогенних MlKpocpranisma при деф1цит1 резидентно! молочнокисло! ген1тально1 м!кро-флори ваг1тких 1 пород!At тз несбх!дн!сть П ксрекцП.

2. Обгрунтовано введения до складу 61 опрвпарату штам1в В.sufctilis ВКМ B-2895,B.subtills ВКМ В-289В та В. licheniforrüs Ц?,ПМ В-2Э36, поеднання яккх заздяки аа-гальним та комплементарии» властивостям забезпечув:

- широкий спектр антагонЮтично'! д1! на р!аноман1тн1 пато-reHHi та умсвно патогенн! м1крооргач!ами;

- вхдсутнЮть пригн1чуючо! дП на регидентну м!крофлору статево! сфери;

- якттбд1яльн!сть культур у р1зних умовах ачрацП та окисно-в1дновного потенц!алу середовища;

- BiflcyTHicTb несприптливого ферментативного впливу;

- корисну ферментативну активн!сть; у в1дповхдноот1 до

/

субстрат1в п1хви 1 церв1кальнаго каналу;

- помзрний римнь адгезП до га 1 тин макроорган!аму.

3. Естановлено пэвну нешк!длив!сть асоц1йованого препарату на ocHosi бактер1й роду Bacillus для теплокровних.

- СО -

4. Посп1дчено Епрагний лис/вальний еф*кт (81.lt) ОЮпрепз-

рзту я уисвах експерпмонтаяьього ендомЮметриту. б. Результат« досл1длеиь ддстъ п!дставу вваялти пров1дними лпикз>'и мехаШэму л1кувальн01 дП препарату :

- вноску ш1т;1гсн 1сти'1ну активн1сть штам1в, ¡до складають препарат, стссовнэ патогенши м1кроорган1гм1в;

- протеста нокротичних uai та 1х тскг.г-ших прсдукт1в;

- трнвал1сть здаптаци прстлгсм л!кувального е^екту;

- отвсреиия yt-'on для в1днсвлення резидентно'! ваг¡нально)

М1>;рОфГ.ОРН.

6. Доведено перспектишисть стнгрс-нйго г .к. колег!чного пре парату, результат!! досл1длень якого використано при скля дшш1 проекту меюдичи дерлдзних випробуванъ, техн1ч1Ш умов та кастанави по эастосувзшш препарату, ср п1дготов-лен1 для представления документацП у Озрмаюлст 1 чний Ко-MiTOT ШЗ Укрзнш.

Список poOlT, як! опубд1ковано аз темою дпсертзцП. 1. Косюк Л.В.,Резник O.P. Адгезивные свойства бактерий рода Baoillus - основ« медицинского биопрепарата для профилактики и лечения пиекологкческих заболеваний.'/Мшробиол-журн.-1994.-66,Н4. - С.65 L Косюк I.B. Досй1Д заотосування ВЮпрепараив у Пнеколо

гП//Пед1атр1я, акушерство i г1неколаг1я.-1995.-МЗ. 3. Клименко А.Н.,Афонская C.B.,Косюк И.В. .Голота В.Я. ЛрИ менение микробного препарата при экспериментальном стафилококковом эндометрите//1/П съезд Укр.микробиол.о-ва: Теа. докл.-Черновну, 19S9. -С.128

4. А.с.1520091 СССР, МКИ С12 Hl/20. Питательная среда для выраадвания сщгсЗрзауодих аерооных Олктерий/ Чаплинский В.Я., Крылоьл J.A., Еьсницкая В.А., Ооадчпл А.И.,Ко-СЕК И.В.-Опубл.07.Ц.89, Сад.N41.

5. А.с. 1708932 CCCP.t.íKM С12 Hl/20. Питательная среди дли ки-рагугааниа аероСных спсрсобрязу»г.;;к бактерий B.suDtilui и В.1ichenííorrnis/Чаплинекий В.Я..Новиков Ю.Ф..Коганов М.М., Чурсинов В. A. ,".ZZTI: К. Е. -СпуЭл..01.Эй.Пил. .'¡4.

АННОТАЦИЯ

YZTT". Я.f. »«Maus bullí!:; :: "гл*.! ¡«тмиш«»» как основа прсбиотика для гинекологической практики.

Диссертации на Отекание учоноí¡ степени кандидата С дологических наук по специальности 03.СО.О?. - микробиология.

Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К.Заболотно-го HAH Украины, Киев, 1995.

Защищается рукопись кандидатской дисертации, ivjiu^u« содеряит результата экспериментальная исследовании и их обсуждение в облает.? анализа биологических свойств бактерий а связи с перспективой их использования в составе медицинского биопрепарата. Разработан биопрепарат для профилактики и лечения воспалительных заболеваний женской половой сферц. Установлено выражением лечебное действие препарата в условиях экспериментального инфекционного эндометрита. Новый пробио-тик на основе бактерий рода Bacillus предложен для акушерс-ко-гинекологической практики.

SUMMARY

.ösyuk I.V. Bacillus subtil is and Bacillus lícheníformís as a base of probiotio for gynecology.

The thesis for obtaining1 a degree of -^cc>r

-'biological soiences), speciality 03.00.07. - microbiology.

Zabolotny Institute Microbiology arid Virology of the HAS of Ukraine, Kiev, 1995.

Т1Ф biological pro; rties of B.subtllis and B.llcheni-formls have been tested in relation to the perspective of their use in gynecology are represented in the Manuscript offered for defending. Froblotffc was created and studed under the experimental lnfectional endometritis conditions. It was identified a high curative effect of this preparation. How preparation iron Bacillus for treatment of genital bacterial infections was proposed as an effective one for medical practice.

Клвчов! слова: б!опрепарати, бацшш, ендоыетрит.

ЗпмоаленннМ.Турлл« 1 СЛ>. B11U 'К» Ibcm«."* у«1версятег*. 25201Т.К*1в-П.Б.Ш,>вчвн»а,1'».