Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Ауторегуляция выживаемости в процессе голодания культур Escherichia coli M-17

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Ауторегуляция выживаемости в процессе голодания культур Escherichia coli M-17"

F I 0 UH

17 CEli -САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

На прасг.х рукописи

ВАХИТОВ

Тимур Яшэрович

АУТОРЕГУЛЯЦИЯ ВЫЖИВАЕМОСТИ В ПРОЦЕССЕ ГОЛОДАНИЯ КУЛЬТУР ESCHERICHIA COLI М-17

Специальность 03.00.07 — микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ

1903

Работа выполнена в Государственном научно-исследовательском институте особо чистых биопрепаратов.

Научные руководители: доктор биологических паук, профессор Квитко К. В., кандидат химических наук Петров Л. Н.

Официальные оппоненты: доктор, медицинских наук, профессор Тец В. В., кандидат биологических наук, доцент Дмитриева Е. Ю.

Ведущая организация: Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова.

Защита состоится » 1993 г. на заседа-

нии специализированного совета К.063.57.12 по присуждению ученой степени кандидата биологических наук в Санкт-Петербургском университете по адресу: 199164, г." Санкт-Петербург, Университетская набережная, 7/9, бнологопочвенный факультет, аудитория Ботаническая 1. £ /<?.-¿С

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке имени А. М. Горького Санкт-Петербургского государственного университета.

Автареферат разослан « ■М » 1993 г.

Ученый секретарь

специализированного совета

Е. В. Ермилова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы: Ауторегуляция развития живых организмов, клеток или их сообществ является важным общебиологически'м феноменом, роль которого в поддержании численности популяций, я также общего-, экологического равновесия в биосфере остается малоизученной.

Микробные популяции представляют собой уникальную модель для осуществления самых различных экологических экспериментов, выяснения механизмов взаимодействия клеток, а также решения ряда эволюционных проблем, в том числе и проблемы возникновения многоклеточ-ноСти. > .

Многочисленные эксперименты свидетельствуют о том, что процесс роста популяции бактерий является в значительной степени са-мор'егулируемым, то есть зависит от состава и концентраций выделяемых ими в окружающую среду метаболитов. Идентифицированы ауторе-гуляторы, ингибируюшие рост микроорганизмов [Эль-Регистан и др., 1979], имеются свидетельства о наличии аналогичных стимуляторов роста бактерий [ЬапкГогс! е1 а1., 1966; Пшеничное и др., 19?5]. Несмотря на большую значимость и актуальность проблемы ауторегуля-ции, ее механизмы в целом, однако, остаются малоизученными.

Еще.в меньшей степени изучены вопросы ауторегуляции при голодании бактерий, опубликованные к настоящему времени результаты касаются главным образом регуляции метаболизма и изменения состава и физиологических характеристик клеток.

Популяционные аспекты голодания до сих пор не являлись предметом направленного изучения. Имеющиеся литературные данные весьма ограничены и посвящены главным образом исследованию этого процесса при сравнительйо низких плотностях сусйензий бактерий.

Целью настоящей работы являлось изучение популяционных аспектов голодания в культурах высокой плотности. В процессе выполнения работы были поставлены следующие основные задачи:

1.Выяснить характер■зависимости параметров кривых выживаемости от плотности популяции бактерий.

2.Определить последовательность и характер физиологических изменений, при голодании микроорганизмов в культурах ■ различной ълотности.

3. Определить роль выделяемых во внеклеточную среду продуктов

метаболизма н автолиза бактерий в поддержании их жизнеспособности.

4.Осуществить контроль динамики ауторегуляторов роста и гибели бактерий, выяснить ее связь с характером соответствующих кривых выживаемости.

5.Изучить основные свойства ауторегуляторов.

'Для решения этих задач потребовалось проведение ряда дополнительных исследований, результата которых приведены в Приложении.

Основные положения, выносимые на защиту:

1.Определяющее влияние на скорость гибели бактерий при голодании оказывает состав формируемой популяцией внеклеточной среды.

2. Голодающая популяция является саморегулируемой системой, поскольку состав и свойства внеклеточной среды зависят от ее плотности.

3. Ауторегулнция выживаемости осуществляется при участии как минимум двух групп биологически активных соединений - аутостимуля-торов роста и ауторегуляторов, ускоряющих гибель бактерий.

Научная новизна.

Впервые обнаружено, что скорость гибели микроорганизмов в культурах высокой плотности связана с составом формируемой ими внеклеточной среды и определяется концентрацией особых ускоряющих гибель клеток аутометаболитов -' УГ-соединений. Разработаны методы определения биологической активности этих веществ-.

Изучены основные свойства и динамика УГ-метаболитов в. процессе роста и голодания бактерий.

Вперьыь показано, что в процессе голодания во внеклеточную среду выделяются аутостимуляторы роста бактерий (CP). Получены свидетельства, что эти вещества идентичны аутостимуляторам, обнаруженным ранее при изучении процесса роста этого же штамма E.coli.

Проведена частичная хроматографическая очистка УГ- и CP- соединений. Выяснено, что эти вещества являются низкомолекулярными соединениями.

Для описания кривых выживаемости культур голодающих бактерий предложено использовать параметры уравнений линейной регрессии.

.Изучен процесс возникновения колебаний численности микроорганизмов, предложено новое объяснение и математическая модель этого явдедеия.

Показана возможность применения турбидиметрического метода для контроля физиологических изменений при голодании бактерий.

Обнаружено, что, в отличие от других стрессовых воздействии, гибель клеток при голодании может сопровождаться относительным снижением их опрашиваемое™ бромистым этидием. Выдвинуто предположение, что уменьшение интенсивности является следствием деградации связывающих краситель структур.

Получены данные, свидетельствующие о том, что в процессе голодания может осуществляться репарация клеточных структур.

Предложено оценивать физиологическое состояние голодающих бактерия на основании их способности к росту на жидких питательных средах путем определения соответствующего показателя - фактора эффективности роста (ФЭР). Высказано предположение, что увеличение ФЭР при низкой остаточной выживаемости вызвано реактивацией покоящихся форм бактерий.

Практическая значимость.

_ Результаты исследования могут быть использованы для совершенствования технологий приготовления и хранения бактериальных препаратов. На основании полученных данных разработан лабораторный регламент получения высокоактивных стимуляторов роста микроорганизмов, которые могут быть использованы в качестНе добавок к питательным средам, получено два авторских свидетельства. Исследуется возможность использования этих соединений в медицинских и ветеринарных целях.

Апробация работы. По материалам работы сделано 6 докладов на конференциях ГосНИИ ОЧБ, проведен семинар в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов .(Пущино), сделаны пленарные доклады на 1 Отраслевой конференции-конкурсе молодых ученых Министерства медицинской и микробиологической промышленности, Кольцово, 1988 (1 премия), Всесоюзной конференции "Лимитирование и ингибирование роста микроорганизмов", Пущино, 1989, доклад на кафедре микробиологии Санкт-Петербургского университета, ряд стендовых докладов на Всесоюзных и других конференциях.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 ра^от и два изобретения, на одно изобретение подана заявка.

Объем и структура^ диссертации. Работа изложена на 226 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, собственных результатов и их обсуждения, заключения,. выводов и приложений, библиография - 212 наименований, 102 на русском и 110 на иностранных языкам Диссертация содержит 9 таблиц и 19 рисунков, приложения - 3 таблицы и 12 рисунков.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Объектом исследования служили культуры Escherichia coli М-1? (ГИСК им. Л.А.Тарасевича); E.coli К-12, производный от неги штамм E.coli К-165, дефектный по регуляторному гену htpR, необходимому для синтеза ряда белков теплового шока (ЛИЯФ им. Б.П.Константинова), Serratia marcescens В-10-М-1 (Вышневолоцкий завод ферментных препаратов).

Клетки выращивали до стационарной фазы роста, осаждали центрифугированием, промывали и суспендировали в дистиллированной воде или физилогическом растворе до требуемых концентраций. Полученные суспензии хранили в стеклянных емкостях под ватно-марлевыми пробками при г^^С.

При диализном хранении диализные мешки, содержащие по 20 мл-клеточной суспензии, помещали в сосуды с соответствующей средой (HgO, физиологический раствор, растворы солей) и хранили при постоянном перемешивании.

В экспериментах с активированным углем использовали культуры объемом 100 мл с оптической плотностью, равной 30 единицам D^gQ, а суспендированный в физиологическом растворе уголь помещали в диализные мешки.

Выживаемость микроорганизмов определяли по стандартной методике высевов на плотные питательные среды - агар Эндо, МПА, агар КД, рыбокостный агар (завод питательных сред, Махачкала), агаризо-ванную минимальную среду М-1? (модифицированная среда М- 9). Для изучения поврежденности бактерий использовали те же среды с 0,02% дезоксихолата' натрия. •

Параметры кривых выживаемости вычисляли на основании уравнения линейной регрессии: N^^Hg-K't, где N-выживаемость, ^-стандартное отклонение, K-средняя скорость гибели, t-время голодания, ^-параметр, связанный с формой кривой выживаемости. На основании уравнения линейной регрессии вычисляли 'значения времен гибели 50% клеток в популяци (Tgg). В расчет принимали всю совокупность данных в интервале времени голодания от 0 (первые сутки) да te, где tg-время, соответствовавшее снижению выживаемости до 30-50%.

. Для количественной оценки ускоряющей гибель (УГ) активности испытуемые пробы внеклеточной среды, приготовленных растворов метаболитов или фракций, полученных при их очистке, разводили в не-

_ > -

обходимой пропорции и использовали в качества среди голодания бактерий. На основании кривых выживаемости вычисляли соответствующий показатель: ПУГ-(Г/Гмакс)-100%, где ГЧТ/ТЫ. W^T/T^)-!, Тмин-наименьшее из полученных в данном эксперименте Tgg, а Тк и Т-'соответственно значения Т^д контрольной и опытной культур; При оценке активности стимуляторов роста испытуемые растворы смешивали с жидкой -глюкозо-минеральной средой М-17, засевали ее клетками и контролировали рост культур по оптической плотности. На основании полученных данных вычисляли показатель стимуляции роста: ПСР-Р"100Я/Рмакс, где P-D0'C/DK, Рмакс" максимальное из полученных в данном эксперименте значений Р, С-разведение испытуемых сред, DQ и DK -оптическая плотность опытной й контрольной культур в момент определения ПСР.-

• Для определения фактора эффективности роста. (ФЭР) испытуемые (голодающие) клетки засевали в жидкую среду М-17 и инкубировали при 37°. ФЭР определяли как отношение числа жизнеспособных клеток (высев) на 4 и 0 час роста: Í>3P-N^/NQ.

Оптическую плотность бактериальных суспензий регистрировали на длине волны 460 нм на спектрофотометре СФ-46. Для. уменьшения влияния малоуглового рассеяния при определении волнового экспонента окно приемника излучения оборудовали диафрагмой диаметром 4 мм. Спектры мутности регистрировали в диапазоне длин волн 460-620 нм. Вычисления волнового экспонента (п) проводили на основании уравнения линейной регрессий: lgD«B-n'lg*, где *-длина волны излучения.

Результаты и обсуждение. Результаты экспериментов показали, что вид кривых выживаемости микроорганизмов при голодании в жидких средах существенно зависит от плотности их суспензии (рис.1). В качестве основного параметра для сравнения кривых выживаемости было выбрано время гибели 50% клеток культур (Т5д), вычисляемое на основании уравнения линейной регрессии-(рис.1). Величина Tgg зависела от плотности популяции нелинейным образом, что позволило подразделить всю исследуемую область концентраций клеток на ряд.поддиапазонов (табл.1).

Основное внимание было уделено изучению голодания при плотностях суспензий от 2 до 200 единиц оптической плотности (D). Повышение плотности популяции в этой области приводило к ускорению гибели бактерий, то есть к уменьшений соответствующих значений Tgg.

Таблица 1. Средние значения параметров кривых выживаемости

N Плотность Оптическая КОЕ . T50±S^, "о Число

суспензии плотность, D млрд/мл сутки % % опытов

1 субкритичеокая 0,1-1,0 0,04-0,6 llil 16" 106 16

2 критическая 2-5 • 0,6-2,0 14*1,7 10 . 103 9

3 сверхкритическая 9-13 3 - И 11*1 18 ИЗ • 10

4 высокая 18-40 7 - 20 7*1 12 105 И

5 | сверхвысокая 50-200 20-150 5*0,7 10 98 16

При голодании культур высокой плотности в присутствии активированного угля скорость гибели бактерий уменьшалась. Близкие результаты были получены и При хранении бактерий в диализных культу- ' pax с различными степенями разбавления (d) выделяемых клетками низкомолекулярных метаболитов (d-V/V^, где Ук-объем клеточной сус-. пензии, а V^pacTEopa, против которого осуществлялся диализ). Как видно из данных табл.2, диализ культур низкой плотности приводил к уменьшению T^q,'что хорошо'согласовалось с литературными данными. В культурах высокой плотности аналогичное явление наблюдалось лишь при высоких степенях разбавления, в том случае, если величина d превышала некоторое критическое значение (d^b При меньших значе-

лр

ниях d увеличение степени разбавления приводило к увеличению T^q. .

Результаты этих экспериментов позволили предположить, что внеклеточные среды (ВС) культур высокой плотности содержат как минимум два вида биологически активных соединений с альтернативнным характером действия - веществ, ускоряющих гибель бактерий (УГ) и, напротив, повышающих их выживаемость (ПВ). Удаление первых из них (при d<dkp) приводило к возрастанию T^q, а слишком значительное падение концентрации вторых (при d>dKp) - к его уменьшению.

Для проверки этого предположения в последующих экспериментах в качестве сред для суспендирования бактерий наряду с физиологиче-ским1'раетвором (контрольная культура) использовали ВС культур высокой и низкой плотности или растворы выделенных из этих ВС мета-

Рис.1. Кривые выживаемости E.coll М-17 при различной плотности культур (кд/мл): 1 - 5' 1010; 2 - З'Ю9; 3 - 6'10е. Показаны линии регрессии и соответствующие значения Tgg Т2» Т3).

время (сутки) время(сутки)

Рис.2. Динамика гибели бактерий во внеклеточных средах (ВС) культур различной плотности (а): 1-24СШ, 2-1200, З-ЗСЮ, '4-контроль и ВС культуры плотностью 751), разведенной в 2 (кривая 5), 8 (6) и 32 (7) раза, 8-контроль (б).

болитов. Как видно из приведенных на рис.2 кривых выживаемости, скорость гибели суспендированных бактерий была выше при использовании ВС более плотных культур (а) и падала при их разведении (б).

Таблица 2. Значения T5q диализных культур.

D Степень разбавления, d

0 5 25 100 200 500 >1000

2 10 50 i 13 10 5 8 6 13 6 17 15 13 20 12 1 1,5 2

Одновременно с УГ-соединениями в составе ВС были обнаружены вещества, стимулирующие рост микроорганизмов (CP). Хроматографи-ческое разделение компонентов .ВС (рис.За) показало, что УГт и СР-метаболиты имели различную хроматографическую подвижность (рис. 36,в). Способностью ускорять гибель бактерий обладали как минимум два различающиеся по временам удерживания компонента ВС (рис. Зв). УГ-метаболиты являлись нестойкими соединениями и теряли свою активность при длительном хранении в водных растворах или повторном замораживании-оттаивании. CP-вещества. оказались более стойкими и были подвергнуты дальнейшей хроматографической очистке (рис.,3г,д). Сравнение хроматографических свойств CP-метаболитов и аналогичных соединений, активность которых ранее была' выявлена при изучении роста Е.col i М-17 [Пшеничнов и др, 1975], позволило сделать предварительный вывод об их идентичности.

Для выяснения физиологической роли УГ- и CP-метаболитов представлялось целесообразным изучить их динамику при голодании бактерий. Как видно из данных рис.4 в процессе гибели культур высокой плотности имело место монотонное возрастание CP- активности, в то время -как УГ-активность возрастала лишь на начальном•этапе голодания, а после снижения выживаемости приблизительно до 50% начина-

и!

СЧ

£ 50

100

2 50

0

Время э юции

б

(к

бремя Э/1ЮЦии

в

ш а <ч

бремя а л юци и

100

о: и с

л

время а люции

время ал юции

Рис.3. Хроматографическое разделение ауторегуляторов: а,г-профили элюции, б,в,д,-показатели стимуляции роста (ПСР) и ускорения гибели (ПУТ) бактерий; а.б.в-хроматографическое разделение компонентов внеклеточной среды (ТБК-гель Н1-40, 0.01М трис-НС1, рН 7,4). Г,д-третья стадия очистки аутостимуляторов роста (ТБКггель Н11М0, 0,1/2 ТФУ).

ла падать. Величина УГ-активности, таким образом, зависела от концентрации жизнеспособных бактерий, ее падение, по-видимому, являлось следствием двух причин: нестойкости соответствующих соединении и уменьшения скорости их выделения в среду в результате сокращения численности популяции.

Процесс гибели в суспензиях высокой и сверхвысокой плотности имел сравнительно монотонный характер, о чем свидетельствовали приведенные в таблице 1 низкие значения о*^. В суспензиях сверхкритической плотности как правило возникали колебания численности (рис.1) и величины ^ были значительно выше.

В целях выяснения механизма возникновения колебаний народу с рядом других экспериментов было проведено изучение динамики УГ- и СР-факторов в процессе роста и последующего голодания культуры в той же среде при 3?°.

Как видно из представленных на рис.5 данных, на начальном этапе роста культуры наблюдалось быстрое увеличение СР-активности. Высокая концентрация этих соединений способствовала сокращению лаг-периода и переходу клеток к вегетативному росту. Далее концентрация СР-метаболитов уменьшалась и вновь увеличивалась перед стационарной фазой.

На стадии голодания динамика УГ-соединений носила периодический характер. Аналогичным образом изменялась и СР-активность, при-че". каждое ее возрастание предшествовало соответствующему увеличению , выживаемости и УГ-активности. Вполне возможно поэтому, что стимуляторы роста принимали определенное участие в регуляции синтеза и выделения ускоряющих гибель факторов.

Результаты этих и ряда других экспериментов легли в основу построения математической модели роста и гибели бактерий. Полученные с ее помощью данные хорошо согласовались с экспериментальными кривыми' (рис.6), Что подтвердило непосредственную связь динамики . ауторегуляторных факторов с характером кривых выживаемости бактерий.

Анализ физиологических изменений при голодании бактерий в культурах различной плотности позволил разделить весь процесс на ряд последовательных стадий. На первой из них, лаг-периоде, выживаемость оставалась практически неизменной, при этом, однако, существенно снижался мембранный потенциал, увеличивалась проницаемость цитоплазматической мембраны для флуоресцентного красителя бромистого этидия. Одновременно происходило уменьшение интенсив-

10 12 И 16 Время(сутки)

Рис.4. Показатели стимуляции роста (1) и ускорения гибели (2) бактерий в процессе голодания культуры высокой плотности; 3-кривая выживаемости.

120

01 234567В9 10 Время(часы)

В 12 1В 20 24 28 32 36 40 44 4В . Время(часы)

Рис.5. Показатели стимуляции роста (1) и ускорения гибели (2) в процессе роста (а) и последующей инкубации бактерий при 37°С (б); 3-число жизнеспособных клеток. ■

ности плазмолитической реакции, причем в первую очередь переставали обнаруживаться сопровождавшие плазмолиз изменения волнового экспонента, снижалось значение фактора эффективности' роста (ФЭР) бактерий, что свидетельствовало о падении их общей функциональной активности На заключительной фазе лаг-периода наблюдалось значительное увеличение числа бактерий, чувствительных к действию дезо-ксихолата.

Стадия линейной гибели характеризовалась быстрым снижением' выживаемости бактерий и дальнейшим снижением ФЭР. Падение выживаемости прежде всего обнаруживалось при использовании бедных сред, агара Эндо, а затем и богатых сред. В процессе гибели снижалась доля клеток, чувствительных к действию дезоксихолата. Одной из возможных причин этого явления была преимущественная гибель чувствительных клеток, другой - репарация соответствующих сублетальных повреждений.

Данные микроскопических наблюдений показали, что наблюдаемые при голодании культур сверхкричической плотности колебания выживаемости также были связаны не не только с размножением бактерий, но и с восстановлением их колониеобразующей способности, то есть с репарацией поврежденных клеточных структур.

В популяциях критической плотности вслед за увеличением числа чувствительных к действию дезоксихолата клеток могло следовать не падение выживаемости, а востановление устойчивости бактерий, причем этому вос^ановлению предшествовало увеличение концентрации СР-соединений. На основании подобных наблюдений было выдвинуто ■предположение о том, что- отдельные стадии деградации клеточных ■ структур могут быть обратимыми, причем дальнейшее протекание процесса (деградация или. восстановление) определяется соотношением ауторегуляторных факторов (УГ- и СР-. соединений).

На- заключительной стадии голодания активизировались автолити-ческие процессы, о чем свидетельствовало увеличение концентрации .растворимых органических соединений и изменение спектральных характеристик сред. При снижении выживаемости вплоть до 3-0,\% наблюдалось резкое.возрастание ФЭР, связанное; по-видимому, с образованием покоящихся форм бактерий, реактивировавшихся при инкубации в жидких питательных средах. ■

Увеличение скорости гибели при повышении плотности популяции было обнаружено и в экспериментах на других бактериях (E.coll К-12, К-165, S.marcescens). Вполне возможно поэтому, что аналогичные

1Р0

/ » I \

50

2 \

Время( у с л а в . е д .)

0 2 4 6 В

время(сутки)

Рис.6'. Кривые выживаемости бактерий в культурах высокой (1) и сверхкритической (2) плотности; б-экспериментальные, а-расчетныэ данные, полученные с'использованием модели:'

сШ Л-численность жизнеспособных клеток,.

—- И-й-(у - У) у-концентрация ростового субстрата, сИ;

. ^-критическая концентрацйя клеток,

сШ И-показатель активности среды, зави-

—- N-(Н - Н) сящий от соотношения концентраций

(11 к стимулирующих рост и'ускоряющих ги-

бель метаболитов

ауторегуляторные системы достаточно широко распространены среди микроорганизмов. Биологическая роль УГ-соединений и им подобных веществ по-видимому связана с необходимостью ограничения численности популяций в естественных местах обитания.

. Интересно отметить, что скорости гибели E.coli К-12 и производного от него штамма E.coli К-165, дефектного по ряду белков теплового шока (БТШ), в суспензиях критической плотности были приблизительно равны, тогда как в суспензиях высокой плотности клетки E.coli К-165 гибли значительно быстрее. Вполне возможно поэтому, что БТШ способны каким-то образом защищать клетку от действия УГ-факторов, способствовать замедлению их синтеза- или ускорению деградации.

ВЫВОДЫ

1. Гибель микроорганизмов в процессе голодания является саш-регулируемым процессом.

2.Основное влияние на скорость гибели оказываЬт состав и концентрация выделяемых клетками низкомолекулярных продуктов метаболизма.

3.По характеру действия на клетки все метаболиты могут быть разделены на 3 группы. К первой группе относятся вещества, не влияющие на скорость гибели или замедляющие ее, действие этих веществ неспецифично. Вещества двух других групп обладают регуляторнымн функциями. Ко второй группе относятся соединения, ускоряющие гибель бактерий (УГ), а к третьей - стимулирующие их рост (CP).

4.В популяциях низкой плотности во внеклеточную среду выделя-•ются лишь вещества первой группы, в своей совокупности они способствуют более длительному выживанию клеток. В суспензиях сверхкритической плотности попеременное действие ускоряющих гибель и стимулирующих рост веществ приводит к колебаниям численности бактерий. В более плотных культурах определяющим является действие ускоряющих гибель соединений, в его результате происходит быстрое снижение выживаемости бактерий.

Б.В процессе голодания может иметь место репарация поврежденных клеточных структур и восстановление их колониеобразующей способности, причем регуляция этих процессов осуществляется при участии УГ- и CP-соединений. Возможно также образование покоящихся клеток. По приблизительным оценкам в это состояние переходит не более 0,1-ЗЯ бактерий.

СПИСОК РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Вахитов Т.Я., Шалаева О.Н., Андреев 0.А. Определение копий-ности плазмид в клетках // V Всес, конф. по спектроскопии биополимеров. -Харьков, 1984.-С.36-3?. '

2.Вахитов Т.Я., Шалаева О.Н. Флуориметрическое определение содержания различных видов ДНК в клетках бацилл // Люминесцентный анализ в медицине и биологии и его аппаратурное обеспечение.-Рига,

.1985.-С52-53.

3.Вахитов.Т.Я., Алексин Л. 1.1., Ососкова Л. И. Роль внутрипопу-ляшюшшх факторов на стадии отмирания Escherichia coli // IV Всес. конф. "Управляемое культивирование микроорганизмов".-Пущино, 1986.-С.55-56.

4.Вахитов Т.Я., Огородников О.Н., Алексин Л.М. Спектрофото-метрическиЯ анализ развития бактериальных популяций // Биофизика микробных популяций.-Красноярск, 198?.-С.101.

Б.Вахитов Т.Я., Куликов С.В., Яшина 0.Ю., Морозова Э.Н., Ососкова Л.И. Принцип Олли в популяциях микроорганизмов // В сб.: Отечественный производственный опыт. Микробиологическая промышленность. -М: ВНИИ СЭНТИ, 1988.-Вып.4.-С.9-12.

б.Вахитов Т.Я., Яшина О.Ю., Куликов С.В. Ауторегуляция численности в популяциях Escherichia col i // Всес. конф. "Лимитирование и ингибнрование роста микроорганизмов".-Пущино, 1989.-С.14.

?.Стефаненко Л.И., Куликов С.В., Морозова Э.Н., Яшина О.Ю., Вахигов Т.Я. Хроматографическое разделение компонентов бактериальных культуралышх жидкостей // В сб.: Передовой производственный ■ опыт в медицинской и микробиологической промышленности, рекомендуемый для внедрения.-М:ВНИИ СЭНТИ, 1989. -Вып.3.-С.25-26. •

б.Вахитов Т.Я., Ососкова Л.И., Яшина.О.Ю., Морозова Э.Н., Куликов С.В. Ауторегуляторы развития бактериальных популяций // Актуальные проблемы биотехнологии. Материалы 1 Отраслевой конференции молодых ученых (Кольцово,1988).-М.,1989.-С.27-28.

Э.Вахитон Т.Я..Яшина О.Ю. Динамика хромосомной к внеклеточной ДНК в хранящихся культурах Escherichia coli // Актуальные проблемы биотехнологии. Материалы Второй отраслевой конференции-конкурса молодых ученых. Кольцово, 1990.-С.18-20.

Ю.Вахитов Т.Я. .Яшина О.Ю. Способ получения аутоактива'тора

■

роста для культивирования Escherichia coli // А.с. СССР N 1638156, 1990. Опубл. 30.03.91.-Бюл. N 12.-С. 74.

П.Вахитов Т.Я:, Яшина О.Ю. Описание кинетики роста и выживания микробной популяции с учетом ауторегулирувдих ее развитие факторов // В сб.: Передовой производственный опыт в медицинской промышленности, рекомендуемый для внедрения.-М: ВНИИ СЭНТИ.1990.-Вып. 2.-С.24-26.

12.Вахитов Т.Я: и др. //А.с. СССР N 322771, 1991.

13.Вахитов Т.Я;, Петров Л.Н. Выживаемость клеток Escherichia coll при хранении в суспензиях различной концентрации // Микробиология. -1992.-Т.61.-ВЫП.6.-С.1087-1095. ' .