Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Ауторегуляция автолитических процессов и интенсификация автолиза дрожжей

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Карпекина, Татьяна Анатольевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Автолиз и автолитические процессы у микроорганизмов.

1. Ферменты автолитического комплекса. .И

2. Регуляция активности автолитических ферментов.

3. Характеристики процесса автолиза.

Глава 2. Способы стабилизации ферментов.

1. Использование добавок.

2. Химическая модификация.

2.1 Поперечное связывание бифункциональными реагентами.

2.2 Введение новых полярных или поверхностно заряженных групп.

2.3 Гидрофилизация поверхности белка.

2.4 ПЭГ- или углеводородное связывание.

2.5 Другие способы стабилизации ферментов.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

Глава 1. Объекты и методы исследований.

1. Объекты исследования.

2. Общие методы.

3. Биохимические методы.

4. Методы математической обработки данных.

Глава 2. Сравнительная характеристика способов ферментативной деструкции клеток дрожжей.

Глава 3. Модификация ферментов химическими шаперонами.

1. Модификация протеиназ различными гомологами АОБ и ГСЛ.

1.1 Модификация протеиназ молекулами С7-АОБ.

1.2 Модификация протеиназ молекулами тирозола.

1.3 Модификация протеиназ молекулами С12-АОБ.

1.4 Модификация протеиназ молекулами гомосеринлактона.

2. Модификация амилаз.

2.1 Модификация амилаз молекулами С7-АОБ.

2.2 Модификация амилаз молекулами тирозола.

3. Модификация целлюлаз молекулами Су-АОБ.

Глава 4. Стабилизация алкилоксибензолами ферментов автолитического комплекса дрожжей.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Ауторегуляция автолитических процессов и интенсификация автолиза дрожжей"

Актуальность темы Применение автолизатов микроорганизмов в сельском хозяйстве, пищевой промышленности, клинической медицине и косметологии, как источников получения белка, ферментов, нуклеотидов, липидов и витаминов достаточно широко освещалось в научной литературе (Scharf et al., 1983; Неклюдов, 1985; Неклюдов, Купов, 1988; Хазиахметов, 1989; Бравова и др., 1990; Латов и др., 1990). В настоящее время существуют промышленные способы автолиза микроорганизмов, преимущественно дрожжей, направленные на получение биологически активных веществ и их композиций, кормовых и пищевых добавок с высокой питательной ценностью и расширение сферы применения автолизатов (Беликов и др., 1976; Бравова и др., 1996, 1997). Однако, проблема повышения эффективности процессов автолиза по-прежнему актуальна и предусматривает возможности сокращения сроков клеточной деструкции за счет ее интенсификации. Скорость и эффективность автолиза, с одной стороны, зависят от физико-химических условий ведения процесса, селективно оптимальных как для стадии индукции автолиза, так и стадии ферментативного гидролиза клеточных биополимеров. С другой стороны, эффективность второго этапа зависит от количества и активности клеточных гидролаз. Как правило, интенсивная деструкция клеток микроорганизмов заканчивается через 4-6 ч, что обусловлено ингибированием деполимераз конечными продуктами реакций.

В связи с вышеизложенным, наиболее важными в проблеме повышения эффективности автолиза становятся вопросы стабилизации ферментов автолитического комплекса. Это позволило бы пролонгировать время интенсивного гидролиза клетки и расширить диапазоны физико-химических параметров каталитической активности гидролаз. Однако, как известно из литературы (Mozhaev et al., 1992; Wong, 1992 и т.д.), использование применяемых в настоящее время стабилизаторов ферментов сопряжено со снижением ферментативной активности.

Перспективным было бы использование стабилизаторов, не только повышающих устойчивость ферментных белков в условиях денатурации, но и их активность. Ранее было показано (Беспалов и др., 2000; Колпаков др., 2000), что функциями модификаторов структуры ферментов (химических шаперонов) обладают факторы <11 - аутоиндукторы анабиоза микроорганизмов, по своей химической структуре относящиеся к классу алкилоксибензолов (АОБ) и участвующие в развитии стрессового ответа клетки и образовании покоящихся форм. Функции АОБ в регуляции гидролиза клеточных структур, как в физиологических процессах роста и деления клеток, так и при их автолитическом отмирании не изучены. Вместе с тем, их влияние на скорость и интенсивность гидролиза должны быть значительными.

Поэтому разработка новых способов интенсификации процессов клеточной деструкции на основе закономерностей, выявленных в природных процессах, представляется актуальной, особенно для областей применения глубокогидролизованных продуктов, например, в составе питательных сред или для купажирования ординарных вин и др.

Целью работы было выяснение возможных механизмов регуляции клеточного гидролиза, за счет изменения как количества гидролаз (протеиназ), так и их каталитической активности вследствие структурной модификации и стабилизации ферментов автолитического комплекса.

В задачи работы входило:

1. Провести сравнительный анализ эффективности способов деструкции клеток дрожжей Басскаготусея сегел>Ь1ае и БсЫгоБасскаготусез ротЪе -автолиза, ферментолиза, гетеролиза.

2. Изучить влияние химических аналогов ауторегуляторного фактора ё, -алкилоксибензолов, различающихся гидрофобностью и полярностью молекул: С7-АОБ, С12-АОБ, тирозола, а также плотностного ауторегулятора бактерий -гомосеринлактона, на изменение активности и стабильность протеиназ, амилаз и целлюлаз.

3. Изучить возможность стабилизации ферментов автолитического комплекса дрожжей алкилоксибензолами (как химическими шаперонами) в вариантах автолиза, ферментолиза и гетеролиза клеток. Провести сравнительный анализ способов деструкции дрожжей в условиях стабилизации ферментов автолитического комплекса и без стабилизации по параметру глубины гидролиза клеток и биохимическим показателям.

Научная новизна

1. Впервые на моделях дрожжей Saccharomyces cerevisiae и Schizosaccharomyces pombe проведена сравнительная оценка способов ферментативной деструкции нативных клеток - автолиза, ферментолиза, гетеролиза, из которых наиболее эффективным является гетеролиз. Установлено, что фактором, ограничивающим интенсивность гидролиза через 4-5 ч ведения процесса во всех трех вариантах деструкции клеток, является ингибирование активности гидролаз.

2. Впервые в опытах in vitro с промышленными ферментными препаратами протеиназ, амилаз, целлюлаз установлено, что изменение конформации ферментов в комплексах с АОБ как химическими шаперонами обуславливают стабилизацию их молекул, что детектируется повышением устойчивости белков к денатурирующим воздействиям и расширением температурного и рН диапазонов катализа.

3. Обнаружена селективность регуляторного действия индивидуальных АОБ как химических шаперонов при их комплексообразовании с ферментными белками (протеиназами, амилазами, целлюлазами). Вектор изменения каталитической активности - «стимуляция-ингибирование», зависит от полярности и гидрофобности молекул лиганда (АОБ): СуАОБ и тирозол имели стимулирующий эффект, С12-АОБ - ингибирующий.

4. Впервые установлено, что модификация структуры полимерных субстратов (казеин, целлюлоза) в их комплексах с С7-АОБ повышает эффективность катализируемых реакций, а в некоторых случаях (целлюлоза) -в большей степени, чем при изменении конформации ферментов.

5. Впервые показана возможность интенсификации автолиза дрожжей путем структурной модификации клеточных деполимераз под действием АОБ, что обуславливает стабилизацию ферментов и изменение их каталитической активности.

Практическая значимость работы

1. Разработан способ стабилизации и одновременного повышения активности ферментов, заключающийся в использовании в качестве структурных модификаторов ферментов химических аналогов микробных аутоиндукторов анабиоза - алкилоксибензолов: С7-АОБ и тирозола. Стабилизация ферментов с помощью АОБ позволяет вести катализируемые реакции в расширенных температурном- и pH-диапазонах реакций, что повышает эффективность и расширяет области применения ферментных препаратов. На разработанный способ подготовлена патентная документация.

2. Предложен прием повышения интенсивности автолиза клеток дрожжей, заключающийся в гетерогенной индукции автолиза (олеиновая кислота, протеиназа) и повышении количества гидролаз за счет их экзогенного внесения.

3. Разработан способ высокоэффективного получения глубокогидролизованных автолизатов дрожжей, заключающийся в одновременной стабилизации и стимуляции активности ферментов автолитического комплекса химическими аналогами микробных алкилоксибензолов: С7-АОБ и тирозолом и позволяющий за 6 ч ведения процесса перевести в растворимую часть до 75% МСК при содержании в ней белка до 260 мг/гМСК, аминного азота до 115 мг/гМСК, нуклеотидов до 69 мг/гМСК. На разработанный способ подготовлена и заявлена патентная документация.

Апробация работы и публикации Основные результаты исследований по теме диссертации докладывались на 6-ти региональных, всероссийских и международных конференциях. Основные положения диссертации отражены в 12 публикациях, из которых 2 статьи, 8 тезисов. По материалам диссертации подготовлены и заявлены 2 патента.

Структура и объем диссертации Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части и выводов. Материал изложен на 143 страницах машинописного текста, содержит 5 таблиц и 26 рисунков. Список литературы включает 214 источника отечественных и зарубежных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Карпекина, Татьяна Анатольевна

ВЫВОДЫ

1. Получены сравнительные характеристики процессов ферментативной деградации клеток дрожжей & cerevisiae и Бек. ротЪе в условиях: а) действия ферментов собственного автолитического комплекса при индукции процесса олеиновой кислотой - химическим аналогом микробных аутоиндукторов автолиза - факторов ё2 (автолиз); б) действия внеклеточных микробных протеиназ как индукторов и дополнительных гидролаз (ферментолиз); в) гетерогенной индукции и совместного действия ферментов собственного автолитического комплекса и экзогенных протеиназ (гетеролиз). Наиболее эффективным способом клеточной деструкции является гетеролиз как по параметру снижения МСК, так и по нарастанию в инкубационной среде растворимых белка, аминокислот, нуклеотидов.

2. Установлено, что химические аналоги ауторегуляторных факторов с^ микроорганизмов класса алкилоксибензолов - С7-АОБ, Сп-АОБ, тирозол, (но не плотностной ауторегулятор бактерий - ГСЛ), обладают функциями химических шаперонов ферментов. Изменения конформации ферментов в комплексах с АОБ обуславливают стабилизацию белковой глобулы, что детектируется повышением термостабильности белков и расширением температурного и рН диапазонов катализа, а также повышением устойчивости ферментов к ингибирующему действию конечных продуктов реакций.

3. Обнаружено, что изменение каталитической активности ферментов, стабилизированных АОБ, селективно зависит от структуры лиганда: Су АОБ и тирозол обладают стимулирующим эффектом, более гидрофобный С12-АОБ -ингибирующим действием. Показана неспецифичность действия С7-АОБ в отношении различных ферментов (протеиназы, амилазы, целлюлазы).

4. Установлено, что С7-АОБ модифицируют структуру полимерных субстратов (казеин, целлюлоза), что влияет (стимулирует) на интенсивность гидролитических реакций, в некоторых вариантах (целлюлоза) в большей степени, чем модификация фермента.

122

5. Установлено, что применение С7-АОБ для стабилизации ферментов автолитического комплекса клеток дрожжей & сегУ1з1ае и Бек. ротЬе позволяет повысить эффективность процесса во всех вариантах деструкции клеток (автолиз, ферментолиз, гетеролиз): в среднем увеличить глубину гидролиза клеточных биополимеров на 59%; повысить выход в растворимой фракции белка на 68%; аминного азота на 93%; нуклеотидов на 156%.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Карпекина, Татьяна Анатольевна, Москва

1. Бабусенко Е.С., Гаязов P.P., Эль-Регистан Г.И., Градова Н.Б. Динамика ауторегуляторных факторов dj и d2 в периодической культуре Methylococcus capsulatus.// Биотехнология, 1991, № 5, С. 26-28.

2. Батраков С.Г., Эль-Регистан Г.И., ПридачинаH.H., Ненашева В.А., Козлова А.Н., Грязнова М.Н., Золотарева И.Н. Тирозол ауторегуляторный фактор di Saccharomyces serevisiae.// Микробиология, 1993, Т. 62, Вып. 4, С. 633638.

3. Беликов В.М., Латов В.К., Цыряпкин В.А., Сергеев В.А. Биомасса дрожжей как источник аминокислот.// Микробиологическая промышленность, 1976, Вып. 3, с. 1-6.

4. Березин И.В. Действие ферментов в обращенных мицеллах.// Баховские чтения XXXIX, 1985, С. 25-33.

5. Битков В.В., Ненашев В.А., Придачина H.H. Изв. РАН, Сер. Биол., 1991, № 2, С.182.

6. Бравова Г.Б., Иванова Н.Г., Шишкова Э.А., Сухих O.A., Иншутина Н.Б., Фокина С.С. Технология получения осветленного экстракта автолизированных дрожжей для питательных сред.// Тез. конф.

7. Разработка и производство препаратов медицинской биотехнологии", Махачкала, 1992, С. 4-5.

8. Бравова Г.Б, Эль-Регистан Г.И., Иванова Н.Г., Козлова А.Н. Способ автолиза дрожжевой биомассы.// Патент РФ №2065275 от 20.08.96.

9. Бравова Г.Б., Иванова Н.Г., Шишкова Э.А., Эль-Регистан Г.И. и др. Способ получения осветленного экстракта автолизированных дрожжей.// Патент РФ №2084171 от 20.07.97.

10. Бравова Г.Б., Иванова Н.Г., Эль-Регистан Г.И., Козлова А.Н., Баканова Н.В., Конобрий В.Н. Индуцированный автолиз и его применение для повышения эффективности использования микробной биомассы.// Обзор, М., ВНИИСЭНТИ, 1990, Вып. 4, 30 с.

11. Бравова Г.Б., Эль-Регистан Г.И., Иванова Н.Г., Козлова А.Н. и др. Способ автолиза дрожжевой биомассы. // Патент РФ № 2065275 от 20.08.96.

12. Гернет М.В. Культивирование продкцентов целлюлаз и глюкоамилаз. Стабилизация ферментов в растворах.// Биотехнология, 1985, № 3, С. 3642.

13. Грачева И.М., Грачев Ю.П., Мосичев М.С., Борисенко Е.Г., Богатков C.B., Гернет М.В. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов.//М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982, С. 36-57, 186198.

14. Грачева И.М., Кривова А.Ю. Технология ферментных препаратов.// М.: Элевар, 2000, 512 с.

15. Демкина Е.В., Соина B.C., Эль-Регистан Г.И. Образование покоящихся форм Arthrobacter globiformis в автолизирующихся суспензиях.// Микробиология, 2000, Т.69, № 3, С. 383-388.

16. Завильгельский Г.Б., Манухов И.В. «Quorum sensing» или как бактерии «разговаривают» друг с другом.// Молекулярная биология, 2001, Т. 35, № 2, С. 268-377

17. Иванова Н.Г. Индуцированный автолиз дрожжей.// Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 1998. С. 13.

18. Иванова Н.Г., Эль-Регистан Г.И., Козлова А.Н., Крылов И.А. Способы получения биологически активных веществ.// Патент РФ № 2136172 от 10.09.99.

19. Иванова Т., Колева А., Люцканов Н. Получение, характеристика и применение автолизатов пивных дрожжей.// Научн. труды Высш. инст. хранит, и вкус, пром., Пловдив, 1990, Т.37, №3, С.145-157.

20. Коновалова Е.Ю. Ауторегуляция роста и развития дрожжей Rhodosporidium toruloides факторами d.// Дисс. на соиск. уч. ст. к.б.н., Л., 1985, 175 с.

21. Коновалова Е.Ю., Эль-Регистан Г.И., Бабьева И.П. Динамика и накопление ауторегуляторных факторов d! и d2 дрожжами Rhodosporidium toruloides.// Биотехнология, 1985, № 3, С. 71-74.

22. Кубарева О. Г. Выделение ауторегуляторного фактора d2 B.cereus и применение его для индукции автолиза клеток культуры продуцента.// Дисс. на соиск. уч. ст. к.б.н., М., 1980, 188 с.

23. Латов В.К., Бабаян Т.Л., Гордиенко С.В., Коган А.С., Цыряпкин В.А., Беликов В.М. Комплексная переработка дрожжевой биомассы.// Биотехнология, 1990, №3, С. 14-18.

24. Лихтенштейн Г.И. Метод спиновых меток в молекулярной биологии.// М.: Наука, 1974, С. 256.

25. Лойко Н.Г., Козлова А.Н., Осипов Г.А., Эль-Регистан Г.И. Низкомолекулярные аутоиндукторы бактерий Thioalkalivibrio versutus и Thioalkalimicrobium aerophilum.// Микробиология, 2002, Т. 71, №3 (в печати).

26. Мулюкин А.Л., Козлова А.Н., Капрельянц А.С., Эль-Регистан Г.И. Обнаружение и изучение динамики накопления ауторегуляторного фактора dj в культуральной жидкости и клетках Micrococcus luteus.// Микробиология, 1996, Т. 65, № 1, С. 20-25.

27. Мулюкин А.Л., Луста К.А., Грязнова М.Н., Бабусенко Е.С., Козлова А.Н., Дужа М.В., Митюшина Л.А., Дуда В.И., Эль-Регистан Г.И. Образование покоящихся форм в автолизирующихся суспензиях микроорганизмов.// Микробиология, 1997, Т. 66, № 1, С. 42-49.

28. Невольниченко А.Ф., Притульская Н.В., Кравченко М.Ф. Функциональные свойства пищевого белкового концентрата из дрожжей-сахаромицетов.// В сб. "Сохранение качества, оптимизация ассортимента и унижение потерь товаров в торговле", Киев, 1989, С. 121-124.

29. Неклюдов А.Д. Получение аминокислотных смесей на основе автолизатов пекарских дрожжей. IV. Полная схема очистки автолизатов. Хим. Фармац. Журн., 1985, Т. 19, №18, С.998-1001.

30. Неклюдов А.Д., Иванкин А.Н., Бердутина A.B. Свойства и применение белковых гидролизатов (Обзор).// Прикладная биохимия и микробиология, 2000, Т. 36, № 5, С. 525-534.

31. Неклюдов А.Д., Купов Х.А. Дрожжи как источник получения аминокислотных препаратов.// Антибиотики и химиотерапия, 1988, Т.ЗЗ, №9, С.708-713.

32. Ненашев Е.А., Придачина H.H., Элъ-Регистан Г.И., Золотарева И.Н., Батраков С.Г. Действие ауторегуляторов анабиоза некоторых микроорганизмов на дыхание митохондрий печени крысы.// Биохимия, 1994, Т. 59, Вып. 1, С. 1511-1515.

33. Осипов Г.А., Эль-Регистан Г.И., Светличный В.А., Козлова А.Н., Дуда В.И., Капрельянц A.C., Помазанов В.В. О химической природе ауторегуляторного фактора d Pseudomonas carboxydoflava.// Микробиология, 1985, Т. 54, Вып. 2, С. 184-190.

34. Пучкаев A.B., Власов А.П, Метелица Д.И. Стабильность глюкозо-6-фосфат-дегидрогеназы в составе комплексов с кофактором и субстратом в водных и мицеллярных средах.// Прикладная биохимия и микробиология, 2002, Т. 38, № 38, С. 44-52.

35. Пучкаев A.B., Гирина Н.В., Метелица Д.И. Влияние температуры на стабильность уреазы в мицеллярных средах.// Прикладная биохимия и микробиология, 1999, Т. 35, № 6, С. 662-670.

36. Рабинович М.Л., Мельник М.С. Прогресс в изучении целлюлолитических ферментов и механизм биодеградации высокоупорядоченных форм целлюлозы.// Успехи биологической химии, 2000, Т. 40, С. 205-266.

37. Родопуло А.К. Биохимия виноделия.// М.: Пищевая промышленность, 1971, С. 323.

38. Рухлядева А.П., Полыгалина Г.В. Методы определения активности гидролитических ферментов.// М.: Легкая и пищевая промышленность, 1981, С. 82-86.

39. Светличный В.А., Эль-Регистан Г.И., Романова А.К., Дуда В.И. Характеристика ауторегуляторного фактора вызывающего автолиз клеток Pseudomonas carboxydoflava и Bacillus cereus.// Микробиология, 1983, Т. 52, С. 33-38.

40. Спирин А.Е. Спектрофотометрическое определение суммарного количества нуклеиновых кислот.// Биохимия, 1958, Т. 23, № 5, С. 656.

41. Тульская Е.М., Шашков А.С., Евтушенко Л.И., Наумова И.Б. Тейхоевыеткислоты клеточной стенки Nacardiopsis prasina ВКМ Ас-1880 .// Микробиология, 2000, Т. 69, № 1, С. 58-61.

42. Филимонова М.Н., Губская В.П., Нуретдинова И.А., Бенедик М. Дж., Богомольная JI.M., Андреева М.А., Лещинская И.Б. Изоформы нуклеазы Serratia marcescens. Роль ионов Mg2+ в механизме гидролиза.// Биохимия, 1997, Т. 62, № 9, С.1148-1154.

43. Хазиахметов Ф.С. Использование белково-витаминно-минеральной добавки (БВМД) с автолизатом паприна в рационах телят.// Автореф. дис. канд. с/х. наук, М., 1989, 16 с.

44. Шлегель Г. Общая микробиология.// М.: Мир, 1972, С.476.

45. Эль-Регистан Г.И. Роль мембранотропных ауторегуляторных факторов в процессах роста и развития микроорганизмов.// Дисс. на соиск. уч. ст. докт.биол.наук., М., 1988.

46. Эль-Регистан Г.И., Бабаян Т.Д. Явление автолиза у микроорганизмов (Обзор).// М.: ЦБНТИ Медбиопрома, 1987, Вып.2, 52с.

47. Abuchowski A., Van Es Т., Palczuk N.C., Davis F.F. Alteration of immunological properties of bovine serum albumin by covalent attachment of polyethylene glycol.// J. Biol. Chem., 1977, T. 252, P. 3578-3581.

48. Arakawa Т., Timasheff S.N. Mechanism of polyethylene glycol interaction with proteins.//Biochemistry, 1985, T. 24, P. 6756-6762.

49. Back J.P., Oakenfull D., Smith M.B. Increased thermal stability of proteins in the presence of sugars and polyols.//Biochemistry, 1979, T. 18, P. 5191-5196.

50. Bailey E. Oilis D.F. Biochemical Engineering Fundamentals. McGraw-Hill, New York, 1986.

51. Barbaric S., Luisi P.L. Micellar Solubilization of biopolymers in organic solvents. Activity and conformation of a-chymotrypsin in isooctane-AOT reverse micelles.//J. Amer.Chem.Soc., 1981, V. 103, P.4239-4244.

52. Bassler B.L., Wright M., Showalter R.E., Silverman M.R. Intercellular signalling in Vibrio harveyi: sequence and function of genes regulating expression of luminescence.// Mol. Microbiol., 1993, V. 9, P. 773-786.

53. Bassler B., Wright M., Silverman M. Sequence and function of LuxO, a negative regulator of luminescence in Vibrio harveyi.// Mol. Microbiol., 1994, V. 13. P, 273-286.

54. Bassler B.L. How bacteria talk to each other: regulation of gene expression by quorum sensing.// Curr. Opin. Microbiol., 1999, V. 2, P. 582-587.

55. Besson C., Favre-Bonvin G., O'Fafain C., Wallach J. Chemical derivatives of Pseudomonas aeruginosa elastase showing increased stability.// Enzyme Microb. Technol., 1995, V. 17, P. 877-881.

56. Bever R.A., Iglewski B.H. Molecular characterization and nucleotide sequence of the Pseudomonas aeruginosa elastase structural gene.// J. Bacterial., 1988, T. 170, P. 4309-4314.

57. Bhosale S.H., Rao M.B., Deshpande V.V., Srinivasan M.C. Thermostability of high-activity alkaline protease from Conidiobolus coronatus (NCL 86.8.20).// Enzyme Microb. Technol., 1995, V. 17, P. 136-139.

58. Bitkov V.V., Nenashev V.A., Pridachina N.N., Batrakov S.G. Membrane-structuring properties of bacterial long-chain alkylresorcinols.// Biochim. Byophys. Acta, 1992, V. 1108, № 2, P. 224.

59. Blow D.M. In: The enzymes/ Ed.P.D.Boyer. 3rd W.Y.; L.: Acad.press., 1971, V. 3,p. 185-285.

60. Braxton S., Wells J.A. Incorporation of a stabilising Ca2+-binding loop into subtilisin BPN'.// Biochemistry, 1992, T. 31, P. 7796-7801.

61. Breddan K., Beenfeldt T. Acceleration autolys of yeast with chemical methods for obtaining intracellular enzimes.// Appl. Microbiol. Biotechnol., 1991,V. 35, № 3, P.323.

62. Carpenter J.F., Crowe J.H. The mechanism of cryoprotection of proteins by solutes.// Cryobiology, 1988, V. 25, P. 244 255.

63. Chatterjee A.N., Mirelman D., Zsinger HJ., Park J.T. Properties of a novel pleiotropic bacteriophage-resistant mutant of Staphylococcus aureus H.// J. Bactreiol., 1969, V.100, P. 846-853.

64. Chien A., Edgar B.B., Trela J.M. Deoxyribonucleic acid polymerasefrom the thermophile Thermus aquaticus.// J. Bacterid., 1976, V. 127, P. 1550 1557.

65. Christensen T.B., Vegarud G., Birkeland A.J. Process Biochem., 1976, V. 11, P. 25-26.

66. Cioci F. Thermostabilization of erithrociyte carbonic anhydrase by polyhydric additives.// Enzyme Microb. Technol., 1995, Y. 17, P. 592-600.

67. Cleveland R.F., Daneo-Moore L., Wicken A.J., Shockman G.D. Effect of lipoteichoic acid and lipids on lysis of intact cells of Streptococcus faecalis.// J. Bacteriol., 1976 a, V. 127, P. 1582-1584.

68. Cleveland R.F., Holtje J.V., Wicken A.J., Tomasz A., Daneo-Moore L., Shockman G.D. Inhibition of bacterial wall lysins by lipoteichoic acids and related compounds.// Biochem. Biophys. Res. Commun., 1975, Y. 67, P. 11281135.

69. Cleveland R.F., Wicken A.J., Daneo-Moore L., Shockman G.D. Inhibition of wall autolysis in Streptococcus faecalis by lipoteichoic acid and lipids.// J. Bacteriol., 1976 b, V. 126, P. 192-197.

70. Climenti F., Palade C.E. Permeability to peroxidase and Ferritin.// J.Cell Biol., 1969, V. 41, P. 33-58.

71. Cupo P., El Deiry, W.S., Whitney P.L., Awad W.M. Stability of acetylated and superguanidinated chymotrypsinogens.// Arch. Biobhem. Biophys., 1982, V. 216, P. 600 604.

72. Cupo P. El Deiry, W.S., Whitney P.L., Awad W.M. Stabilization of proteins by guanidination.//J. Biol. Chem., 1980, V. 255, P. 10828 10833.

73. Dominici P., Tancini B., Voltattroni C.B. J. Biol. Chem., 1985, V. 260, P. 1058310589.

74. Fagain C., O'Kennedy R., Kilty C. Stability of alanine aminotransferase is enhanced by chemical modification.//Enzyme Microb. Technol., 1991, V. 13, P. 234-239.

75. Ferjancic A., Puigserver A., Gaertner H. Unusual specificity of polyethylene glycol-modified thermolysin in peptide synthesis catalyzed in organic solvents.// Biotechnol. Lett., 1988, T. 10, P. 101-106.

76. Fields R. The measurement of amino groups in proteins and peptides.// Biochem. J, 1971, V. 124, P. 581-590.

77. Freeman J.A., Lilley B.N., Bassler B.L. A genetic analysis of the functions of LuxN: a two-component hybrid sensor kinase that regulates quorum sensing in Vibrio harveyi.// Mol. Microbiol., 2000, V. 35, P. 139-149.

78. Fukushima J., Yamamoto S., Morihara K., Atsumi Y., Taken-chi H., Kamamoto S., Okuda K. Structural gene and complete amino acid sequence of Pseudomonas aeruginosa IFO 3455 elastase.// J. Bacteriol., 1988, T. 171, P. 1698-1704.

79. Fuqua W.C., Winans S.C., Greenberg E.P. Quorum sensing in bacteria: the LuxR-LuxI family of cell density-responsive transcriptional regulators.// J. Bacteriol., 1994, V. 176, P. 269-275.

80. Gekko K. Calorimetric study on thermal denaturation of lysozyme in polyol-water mixtures.// J. Biochem. (Tokyo), 1982, V. 91, P. 1197 1204.

81. Gekko K., Timasheif S.N. Mechanism of protein stabilization by glycerol: preferential hydration in glycerol-water mixtures.// Biochemistry, 1981, V. 20, P. 4667-4676.

82. Gerlsma S. Y. Reversible denaturation of ribonuclease in aqueous solutions as influenced by polyhydric alcohols and some other additives.// J. Biol. Chem., 1968, Y. 243, P. 957-961.

83. Ghuysen J.M., Tipper D.J., Strominger J.L. Enzymes that degrade bacterial cell walls.//Methods Enzymol., 1966, V. 8, P. 685-699.

84. Gmeiner J. The ribitol-phosphate-containing lipopolysaccharide from Proteus mirabilis, strain D52.//FEBS Eur. J. Biochem., 1977, V. 74, P. 171-180.

85. Godfrey T., Reichelt J. Industrial Emymology. Macmillan Publishers Ltd., London, 1983, P. 89-96.

86. Gorman L.A., Dordick H.S. Organic solvents strip water off enzymes.// Biotechnol. Bioeng., 1992, T. 39, P. 392-397.

87. Gottschalk N., Jaenicke R. Chemically crosslinked lactate dehydrogenase: stability and reconstitution after glutaraldehyde fixation.// Biotechnol. & Applied Biochem., 1987, V. 9 P. 389 400.

88. Hage R., Hora J., Swarthoff T., Twisker R. Method for enhancing the activity of enzymes.// US 6225275, 2001

89. Herbold D., Glasser L. Bacillus subtilis N-acetylmuramic acid L-alanine amidase.// J. Biol. Chem., 1975,V. 250, P. 1676-1682.

90. Hilt W., Wolf D.H. Stress-induced proteolysis in yeast.// Mol. Microbiol, 1992, V.6, № 17, P.2437-2442.

91. Hinks R.P., Daneo-Moore L., Shockman G.D. Cellular autolytic activity in synchronized populations of Streptococcus faecium.// J. Bacteriol., 1978 a, V.133, P. 822-829.

92. Hinks R.P., Daneo-Moore L., Shockman G.D. Relationship between cellular autolytic activity, peptidoglycan synthesis, septation and the cell cycle in synchronized population of Streptococcus faecium.// J. Bactreiol., 1978 b, V.134, P. 1074-1080.

93. Hirs C.H.W., Timasheff S.N. Meths. Enzymol., Enzyme Structure part B, Academic Press, New York, 1972, Y. 25, P. 387 644.

94. Hu C., Van Huystee R.B. Role of carbohydrate moieties in peanut (Arachis hypogea) peroxidase.// Biochem. J., 1989, T. 263, P. 129-135.

95. Huff E., Silverman C.S. Lysis of Staphilococcus aureus cell walls by a soluble Staphylococcal enzyme.//J. Bacterid., 1968, V. 95, P. 99-106.

96. Husain S., Jafri F., Saleemuddin M. Effects of chemical modification on the stability of invertase before and after immobilization.// Enzyme Microb. Technol., 1999, V. 18, P. 275-280.

97. Imanaka Т., Shibazaki ml, Takagi M. A new way of enhancing the thermostability of proteases.// Nature, 1986, T. 324, P. 695-697.

98. Imoto Т., Yamada H. in Protein Function: A Practical Approach Creighton, Т.Е. (ed.), IRL Press, Oxford, U.K., 1989, P. 247 277.

99. Inada Y., Takahashi K., Yashimoto Т., Ajima A., Matsushima A., Saito Y. Application of polyethylene glycol-modified enzymes in biotechnological processes: Organic solvent-soluble enzymes.// Trends Biotechnol., 1986, T. 4, P. 190-194.

100. Jakubke H.D. Enzymatic peptide synthesis.// In The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, V. 9, Academic Press, New York, 1987, P. 103-165.

101. Ji Т.Н. Bifunctional reagents.// Meth. Enzymol., 1983, T. 91, P. 580-609.

102. Joseph R., Shockman C.DD. Autolytic formation of protoplast (autoplast) of Streptococcus faecalis 9790: release of cell wall, autolysin and formation of stable autoplast.// J. Bacteriol., 1974, V. 118, P. 735-746.

103. Kanegae Y., Sugiyama Y., Minami К. Дрожжевой экстракт, полученный нагреванием в водной суспензии, автолизом при щелочных рН и делением нерастворимой части.// Европ. патент № 0249435 опубл. 16.12.87.

104. Kawagishi S., Araki Y., Ito E. A novel glycosidase, an endoglucosaminidase active on cell wall peptidoglycan with N-unsubstituted glicosamine residues.// FEBS Lett., 1979, V. 97, P. 20-22.

105. Kennedy J.H., Kricka L.J., Wilding P. Protein-protein coupling reactions and the applications of protein conjugates.// Clinica Chimica Acta, 1976, Y. 70, P. 1-31.

106. Khmelnitsky Y.L., Mozhaev V.V., Bolova A.B., Sergeeva M.V., Martinek K. Denaturation capacity: New quantitative criterion for selection of organicsolvents as reaction media in biocatalysis.// Eur. J. Biochem., 1991, T. 198, P. 31-41.

107. Klibanov A.M. Approaches to enzyme stabilization.// Biochem. Soc. Transact., 1983, V. 11, P. 19-20.

108. Klibanov A.M. Enzyme catalysis in anhydrous organic solvents.// Trends Biochem. Sci., 1989, T. 14, P. 141-145.

109. Klibanov A.M. Enzyme stabilization: A review.// Anal. Biochem., 1979, T. 93, P. 1-25.

110. Klibanov A.M., Kaplan, N.O., Kamen N.D. Chelating agents protect hydrogenase against oxygen inactivation.// Biochim. Biophys. Acta, 1979, V. 547, P. 411 -416.

111. Klibanov, A. M. Ahem, T. J, In: Protein Engineering. Alan R. Liss, New York, 1987, V. 1.

112. Koga Y., Kusaka I. Involvement of autolysis of cytoplasmic membrane in the process of autolysis of Bacillus cereus.// J. Gen. Microbiol., 1968, V. 53, P. 253-258.

113. Kollar R., Sturdik E., Sajbidor J., Sandula J., Kremar S., Forshlhoffer J. Frakcionacia a vyuzitie komponentov pekarskeho drozdia.// Bull, potravin. vysk., 1989, V.28, № 1-2, C.45-56.

114. Kozubek A., Tyman J. Resorcinolic lipids, the natural non-isoprenoid phenolic amphiphiles and their biological activity.// Chemical reviews, 1999, V. 99, № 1, P. 1-25.

115. Lambert P.A., Hamcock I.C., Baddiely J. Occurrence and function of membrane teichoic acids.// Biochem. At Biophys. Acta, 1977, V. 472, P. 1-12.

116. Lavecchia R., Zugaro M. Thermal denaturation of erythrocyte carbonic anhydrase.// FEBS Lett. 1991,292, 162-164

117. Lee J.C., Timasheff S.N. The stabilization of proteins by sucrose.// J. Biol. Chem., 1981, V. 256, P. 7193 -7201.

118. Lemm U., Wenzel M. Stabilisierung von enzymen und antiseren durch scheweres wasser.// Eur. J. Biochem., 1981, V. 116, P. 441 445.

119. Lenders J.P., Crichton R.R. Thermal stabilization of Amylolytic enzymes by covalent coupling to soluble polysaccharides.// Biotechnol. Bioeng., 1984, V. 26, P. 1343 -1351.

120. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent.// J. Biol. Chem. 1951. V. 193. P. 265-267.

121. Marek M., Valentova O., Kas J. Invertase immobiblization via its carbohydrate moieties.// Biotechnol. Bioeng., 1984, T. 26, P. 1223-1226.

122. Marshall J.J., Rabinowitz M.L. Enzyme stabilization by covalent attachment of carbohydrate.//Arch. Biocbem. Biophys., 1975, V. 167, P. 777 779.

123. Martinek K., Mozhaev V.V. Immobilization of enzymes, an approach to fundamental studies in biochemistry.// In: Advances in Enzymology, New York, 1985, V. 57, P. 179-249.

124. Masson P., Laurentie M. Stability of butyrylcholinesterase: thermal inactivation in water and deuterium oxide.// Biochim. Biophys. Acta, 1988, V. 957, P. Ill -121.

125. Matile P., Cortat M., Wiemken A., Frey-Wyssling A. Isolation of gluconase-containing particles from budding Saccharomyces cerevisiae.// Proceed of National. Acad. Seien. Of USA, 1971, V. 68, P. 636-640.

126. Means G.E. & Feeney R.E. Chemical modifications of proteins: history and applications.// Bioconjugate Chem., 1990, V.l, P. 2 12.

127. Melik-Nubarov N.S., Mozhaev V.V., Siksnis S., Martinek K. Protein stabilization via hydrophilization: Stabilization of alphachymotrypsin by reductive alkylation with glyoxylic acid.//Biotechnol. Lett., 1987, T. 10, P. 725730.

128. Menger F.M., YamadaK. J.Amer.Chem.Soc, 1979, Y. 101, p. 6731-6734.

129. Mescher M.F., Strominger J.L., Watson S.W. Protein and carbohydrate composition of the cell envelope of Halobacterium salinarium.// J. Bacteriol., 1974, V. 120, P 945-954.r

130. Miland E., Smyth M.R., O Fagain C. Increased thermal and solvent tolerance of acetylated horseradish peroxidase.// Enzyme Microb. Technol., 1996, T. 19, P. 63-67.

131. Mitchell P., Mayle I. Autolytic release and osmolutic properties of "protoplast" from Staphylococcus aureus.// J. Gen. Microbiol., 1957, V. 16, P. 184-194.

132. Montgomery C., Shetty J., Singley E. Thermal stabilization of alpha-amylase.// EP0189838, 1988

133. Morihara K. Using proteases in peptide synthesis.// Trends Biotechnol., 1987, T. 5, P. 164-170

134. Mosbach K. Immobilized enzymes and cells: Parts B, C.// Methods Enzymol, V. 135 and 136, Academic Press, New York, 1987, 120 p.

135. Mosser J.L., Tomasz A. Choline-containing teicholic acid as a structural component of pneumococcal cell wall and its role in sensitiviy to lysis by an autolytic enzyme.// J. Biol. Chem., 1970, V. 245, P. 287-298.

136. Mozhaev V.V., Khmelnitsky Y.L., Sergeeva M.V., Belova A.B., Klyachko N.L., Levashov A.V., Martynek K. Catalytic activity and denaruration of enzymes in water/organic cosolvent mixture.//Eur. J. Biochem., 1989, T. 184, P. 597-602.

137. Mozhaev V.V., Martinek K. Berezin,I. V. Structure-stability relationships in proteins: Fundamental tasks and strategy for the development of stabilized enzyme catalysts for biotechnology.// CRC Cm. Rev. Biochem., 1988, T. 23, P. 235-281.

138. Mozhaev V.V., Melik-Nubarov N.S., Siksnis V., Martinek K. Strategy for stabilizing enzymes. Part two: Increasing enzyme stability by selective chemical modification.// Biocatalysis, 1990, V. 3, P. 189-196.

139. Murao S., Nishino T., Kameda M. Autolysis of stationary phase cells of bacillus subtilis induced by MAPI, a protease inhibitor.// Agric. Biol. Chem., 1979, V. 43, P. 671-673.

140. Murao S., Watenabe T. Isolation and identification of microorganism producing microbial alkaline proteinase inhibitor (MAPI).// Agric. Biol. Chem., 1978, V. 42, P. 2209-2215.

141. Nosoh Y., Sekiguchi T. Protein engineering for thermostability.// Trends Biotechnol., 1990, T. 8, P. 16-20.

142. Nosoh Y., Sekiguchi T. Protein Stability and Stabilization Through Protein Engineering.// Ellis-Horwood, Chichester, UK, 1991 P. 89-102.r1510 Fagain C., O'Kennedy R. Functionally stabilized proteins.// A Review,

143. Biotech. Adv, 1991, V. 9, P. 351-409. 152.6 Fagain C, O'Kennedy R., Kilty C. Catalytic activity of alanine aminoytansferase is stabilized by chemical modification.// Enzyme Microb. Technol., 1991, T. 13, P. 234-239.

144. Ogata S. Autolysis, autolysin, autoplast.// J. Arr. Soc. Jap., 1976, V.50, P.69-77.

145. Perry J.L., Wetzel R. Disulphide bond engineered into T4 lysozyme: Stabilisation of the protein toward thermal inactivation.// Science, 1984, T. 226, P. 555-557.

146. Phadtare S. ., Deshpande Y.V., Srinivasan M.C. High activity alkaline protease from Conidiobolus coronatus (NCL 86.8.20): Enzyme production and compatibility with commercial detergents.// Enzyme Microb. Technol., 1993, V. 15, P. 72-76.

147. Pontremoli S., Melloni E., Salamino F., Sparatore В., Michetti M., Horecker B.L. Endogenous inhibitors of lysosomal proteinases.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983, V.80, № 5, P. 1261-1264.

148. Pro fy A.T., Schimmel P. Complementary use of chemical modification and site-directed mutagenesis to probe structure-activity relationships in enzymes.// Prog. Nucl. Acids Res. Mol. Biol., 1988, T. 35, P. 1-26.

149. Reyes F., Lahoz R., val Moreno A. J. Gen. Microbiol., 1980, V.26, P. 1-120.

150. Rivett A.J. The multicatalytic proteinase of mammalian cells.// Arch. Biochem. Biophys., 1989, V. 268, P. 1-8.

151. Rogers H.J. Bacterial growth and the cell envelope.// Bacteriol. Rev., 1970, V. 34, P. 194-214.

152. Rosenbluh A., Rosenberg E. Role of autocide AMI in development of Myxococcus xanthus.// J. Bacteriol. 1990, V. 172, P. 4307-4314.r

153. Ryan O., Smyth M.R., О Fagain C. Thermostabilized chemical derivatives of horseradish peroxidase.//Enzyme Microb. Technol., 1994, T. 16, P. 501-505.

154. Saheki Т., Holzen H. Comparisons of the tryptophan synthase inactivating enzymes with proteinases from yeast.// Eur. J. Biochem., 1974, V.42, P. 621626.

155. Saulnier J., Rayssiguie A.M., Duclos M.C., Wallach J.M. Hydrolysis of alanyl-containing tetrapeptides by Pseudomonas aerugenosa proteinases.// Biochem. Soc. Trans., 1990, T. 18, P. 900-901.

156. Scharf U., Schlingmann M., Rymon L.W. Функциональный белковый гидролизат, способ его получения и получения продуктов питания,содержащих этот белковый гидролизат.// Акц. заявка ФРГ № 3143947, опубл. 11.05.83.

157. Schein С.Н. Solubility as a function of protein structure and solvent components.//Biotechnology, 1990, V. 8, P. 308 317.

158. Schubert F., Saini S., Turner A. Mediated amperometric enzyme electrode incorporating peroxidase for the determination of hydrogen peroxide in organic solvents.//Anal. Chim. Acta, 1991, T. 245, P. 133-138.

159. Schultz T.W. Relative toxicity of para-substituted phenols: log KOW and pKa-dependent structure-activity relationships.// Bull Environ. Contam. and Toxicol., 1987, V. 38, №6, P. 994-1002.

160. Scopes R.K. in Protein Purification: Principles and Practice, Springer Verlag, 1982, N.Y., P. 194 200.

161. Shaked Z., Wolfe S. Stabilization of pyranose 2-oxidase and catalase by chemical modification./. Methods Enzymol., 1988, T. 137, P. 599-615.

162. Shami E.Y., Ramjeesingh M. Rothstein A., Zywulko M. Stabilization of enzymes by their specific antibodies. Enz. Microb. Technol., 1991, V. 13, P. 424 -429.

163. Sheehan H., O'Kennedy R., Kilty C. Investigation of the properties of bovine heart creatine kinase crosslinked with dimeth-ylsuberimidate.// Biochim. Biophys. Acta, 1990, T. 1041, P. 141-145.

164. Shinto Т., Hiraki C. Enzyme reaction stabilizers and enzyme preservatives.// EP0599652, 1994

165. Shockman G.D. Pooley H.M., Thompson J.S., Cheney M.C. Autolytic enzyme system of Streptococus faecalis. III. Localisation of autolysin at sites of cell wall synthesis.//J. Bacteriol., 1967, V. 94, P. 1525-1530.

166. Souppe J., Urrutigoity M., Levesque G. Application of the reaction of dirhiols with amino groups in lysine to the chemical modification of proteins.// Biochim. Biophys. Acta, 1987, V. 957, P. 254-257.

167. Stolp H., Starr M.P. Bacteriolysis./ Ann. Rev. Microbiol., 1965, V. 19, P. 79105.

168. Sudo S.Z., Dworkin M. Comparative biology of prokaryotic restings cells// Adv. Microbiol. Physiol., 1973, V. 9, P.153-224.

169. Suginaka H., Shimatani M., Ohno Y., Yano Y. Effect of bacterial lipids and lipoteichoic acid on extracellular autolysin activity from Staphylococcus aureus.// FEMS Microbiol. Lett, 1979, V. 5, P. 353-355.

170. Takahashi K, Nishimura H., Yoshimoto T, Saito Y., Inada Y. Polyethylene glycol-modified enzymes trap water on their surface and exert enzymic activity in organic solvents.//Biotechnol. Lett., 1984, V. 6, P. 765-770.

171. Tatzelt J, Prusiner S.B., Welch W.J. Chemical chaperones interfere with the formation of scrapie prion protein // EMBO J., 1996, V. 15, № 23, P. 6363-6373.

172. Timasheff S.N., Arakawa T. In: Protein Structure: A Practical Approach. IRL Press, Oxford, 1990, 33 lp.

173. Timasheff S.N, Arakawa T. in Protein Structure: A Practical Approach, Creighton, T.E., ed„ IRL Press, Oxford, U.K., 1989, P. 331 345.

174. Tomasz A. Biological consequence of the replacement of choline by ethanolamine in the cell wall of pneumococci.// Proc. Natl. Acad. Natl. Sci. USA, 1968, V. 59, P. 86-93.

175. Tomasz A, Waks S. Mechanism of action of penicillin: triggering of the pneumococcal autolytic enzyme by inhibitors of cell wall synthesis.// Proc. Natl. Acad. Natl. Sci. USA, 1975, V. 72, P. 4162-4166.

176. Tombs, M.P. Stability of enzymes.// J. Appl. Biochem, 1985, V. 7, P. 3 24.

177. Tor R, Dror Y. & Freeman A. Enzyme stabilization by bilayer "encagement".// Enz. Microb. Technol, 1989, V. 11, P. 306 -312.

178. Torchilin V.P., Trubetskoy O.S., Omel'Yanenko V.G., Martinek K. J. Holec. Catal., 1983, V. 19, P. 291 301.

179. Trubetskoy V.S., Torchilin V.P. Artificial and natural thermostabilization of subunit enzymes. Do they have similar mechanism?// Int. J. Biochem., 1985,V. 17, P. 661 -663.

180. Tsuji R.F. Enhanced enzymatic activity and stability of trypsin by reductive alkylation in solid phase.// Biotechnol. Bioeng., 1990, V. 36, P. 1002 1005.

181. Tuengler P., Pfleiderer G. Enhanced heat, alkaline and tryptic stability of acetamidinated pig heart lactate dehydrogenase.// Biochim. Biophys. Acta, 1977, V. 484, P. 1-8.

182. Ugarova N.N., Rozhova G.D., Berezin I.V. Chemical modification of amino groups of lysine redidues in HRP and its effect on the catalytic properties.// Biochim. Biophys. Acta, 1979, T. 570, P. 31-42

183. Veera Reddy A. Thermolysin: A peptide forming enzyme.// Indian J. Biochem. Biophys., 1991, T. 28, P. 10-15.

184. Venkatasubbaiah P., Sutton T.B., Chilton W.S. Effect of phytotoxins produced by Botryosphaeria obtuse, the cause of Black Rot.// Phytopatology, 1991, V. 81, № 3, P. 243-247.

185. Volkin D.B., Klibanov A.M. in Protein Function: A Practical Approach, 1989, Creighton, T.E., ed., IRL Press, Oxford, U.K., P. 1 24.

186. Weiss R.L. Subunit cell wall of Sulfolobus acidocaldarius.// J. Bactreiol., 1974, V. 118, P. 275-284.

187. Welinder K.G. Amino acid sequence of horseradish peroxidase.// Eur. J. Biochem., 1979, T. 93, P. 483-502

188. Welinder K.G. Plant peroxidases: Their primary, secondary, and tertiary structures and relation to cytochtome c peroxidase.// Eur. J. Biochem., 1985, T. 151, P. 497-504

189. Wells J.A., Estell D.A. Subtilisin: An enzyme designed to be engineered.// Trends Biochem. Sci., 1987, T. 13, P. 291-297

190. Wirth P., Souppe J., Tritsch D., Biellman J.F. Chemical modification of HRP with ethanol methoxypolyethilene glycol. Sulubility in organic solvents, activity and properties.//Bio. Org. Chem., 1991, V. 19, P. 133-142.

191. Wong S.S. Wong L.C. Chemical crosslinking and the stabilization of proteins and enzymes.// Enzyme Microb. Technol., 1992, V. 14, P. 866-874.

192. Woodward J., Wiseman A./ The involvement of salt in the stabilization of baker's yeast invertase: Evidence from immobilization and chemical modification studies.// Biochim. Biophys. Acta, 1978, T. 527, P. 8-16

193. Yancey P.H, Clark M.E., Hand S.C., Bowlus R.D., Somero G.N. Living with water stress: Evolution of osmolyte systems.// Science, 1982, T. 217, P. 12141222.

194. Ye W.N., Combes D., Monsan P. Influence of additives on the thermostability of glucose oxidase.// Enzyme Microb. Technol., 1988, V. 10, P. 498-501.

195. Yonehara S. Method of stabilizing trypsin.//EP 0926235, 1996.

196. Yoshinaga Y., Ishida H., Hagawa T., Ohkubo K. In: Poly(ethylen Glycol) Chemistry: Biotechnical and Biomedical Applications, 1992, Plenum Press, New York, P. 103-114.

197. Zaks A., Klibanov A.M. The effect of water on enzyme action in organic media.// J. Boil. Chem., 1988, T. 263, P. 8017-8021.